FI92487B - Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten 2-(heterosyklyylitio)karbapeneemijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

y^HöV

Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten 2 -(heterosyklyylitio)-karbapeneemijohdannaisten valmistamiseksi Förfarande för framställning av 2-(heterocyklyltio)karbapenem-derivat användbara som läkemedel 5

Keksinnön kohteena on menetelmä sellaisten lääkeaineina käyttökelpoisten yhdisteiden, jotka voidaan esittää kaavalla (I): 10 HO H CH3

\ / I

C C-H

/ \ / \ 15 H3c CH_CH C-S-R* I I II (I)

C_N_C

/ \ O COOR5 20 [jossa

Ra tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava 1-8 tai 1-9: 25 CH„— CH, ^ l — CH N — R3 \ /

C

30 I (1-8) o 35 o CH2— (1-9)

I I

— CH N — R3 \ / ch2 » 2 92487 ja jossa: R3 on vetyatomi tai C^-C^-alkyyliryhmä; 5 R5 on vetyatomi tai karboksia suojaavat ryhmä, joka on valittu ryhmästä, joka käsittää seuraavat: alkoksikarbonyylioksialkyyliryhmät, sykloalkyylialkoksikarbonyylioksialkyyliryhmät, sykloalkyylioksikarbonyylioksialkyyliryhmät, 10 sykloalkyylikarbonyylioksialkyyliryhmät, jotka on valinnaisesti subs-tituoitu yhdellä alemmalla alkyyliryhmällä, alifaattiset asyylioksi-metyyliryhmät, ylemmät alifaattiset asyylioksialkyyliryhmät, ter-penyylioksikarbonyylioksialkyyliryhmät ja 5-alkyylisubstituoidut (2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)alkyyliryhmät; 15 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden valmistamiseksi.

Penisilliinit muodostavat antibioottien hyvin tunnetun luokan, jonka 20 jäseniä on käytetty laajasti jo useiden vuosien ajan ihmis- ja eläinlääketieteessä. Kemiallisesti tarkastellen penisilliineillä on yhteinen β-laktaamirakenne, jota nimitetään yleisesti "penaamiksi", ja joka voidaan esittää seuraavalla kaavalla: 25

S

/ \ • _ · · III (A) • -N_· 30 </

Vaikka penisilliineillä on edelleenkin tärkeä asema farmaseutiikassa, 35 niin kuitenkin uusien patogeenisten, penisilliinille usein vastustus-

II

92487 3 kykyisten bakteerikantojen kehittyminen on tehnyt yhä suuremmassa määrin välttämättömäksi uusien antibioottityyppien etsimisen.

Viime vuosina huomattavasti mielenkiintoa on kohdistettu yhdistei-5 siin, joilla on karbapeneemirakenne, toisin sanoen sellaisiin yhdisteisiin, joiden 1-asemassa on hiiliatomi rikkiatomin paikalla, ja joissa on kaksoissidos alkuperäisessä penaamirakenteessa 2- ja 3-asemissa sijaitsevien hiiliatomien välissä. Tämä karbapeneemirakenne voidaan esittää seuraavalla kaavalla: 10 / \ *5.

15 I I H (B) 7*-N-·! // 4

O

20 Nämä penaami- ja karbapeneemirakenteet muodostavat perustan puolisynteettisten penisilliinijohdannaisten nimityksille, jotka noudattavat IUPAC-järjestön (International Union of Pure and Applied Chemistry) suosituksia. Alan asiantuntijat kautta maailman ovat yleisesti hyväksyneet nämä nimitykset, joita käytetään myös ohessa. Ohessa käy-25 tetty numerointijärjestelmä on edellä esitetyn kaavan (B) mukainen.

Tunnetuista karbapeneemijohdannaisista tunnetuin on "tienamysiiniksi" nimitetty yhdiste, jonka puolisynteettinen nimi on 2-(2-aminoetyyli-tio)-6-(l-hydroksietyyli)karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo. Vaikka 30 tienamysiinillä tiedetäänkin olevan huomattavan voimakasta ja laajaa bakteereja tappavaa aktiivisuutta, niin sen kemiallinen stabiilisuus ihmiselimistössä on kuitenkin huono, mikä rajoittaa sen käytännön sovellutuksia. Näin ollen alalla ollaan tehty lukuisia yrityksiä tie-namysiinin kemiallisen rakenteen muokkaamiseksi, jotta sen stabii-35 lisuus saataisiin paremmaksi sen erinomainen aktiivisuus kuitenkin säilyttäen tai sitä parantaen. Alalla vallitsee kuitenkin edelleen 92487 4 jatkuva tarve kehittää uusia, ominaisuuksiltaan parantuneita karbape-neemiantibioottej a.

Oheisessa keksinnössä saadaan aikaan uusi ryhmä karbapeneemijohdan-5 naisia, joiden imeytyminen ja aineenvaihdunnallinen stabiilisuus ovat erinomaiset (mikä todetaan suuremmista virtsasta talteensaaduista määristä), ja jotka ovat lisäksi laajaspektrisiä bakteerien tappamista ajatellen ja hyvin vähän myrkyllisiä. Keksinnön avulla voidaan tehdä mainittuja johdannaisia sisältäviä farmaseuttisia valmisteita, 10 joita voidaan antaa ihmisille ja eläimille.

Tekniikan nykytasoa kuvaavista, hakijoiden tiedossa olevista julkaisuista seuraavien uskotan olevan lähimpänä oheista keksintöä: 15 US-patenttijulkaisuissa 4 640 799 ja 4 665 170 kuvataan karbapeneemi-yhdisteet, joiden 2-asemassa on ryhmä -S-A-N+. "A" voi tarkoittaa erilaisia ryhmiä ja N+ tarkoittaa kvaternisoidun typen sisältävää heterosyklistä ryhmää, joka on kiinnittynyt ryhmään A kvaternäärisen typpiatominsa välityksellä. Nämä yhdisteet eroavat oheisen keksinnön 20 mukaisista yhdisteistä siinä suhteessa, että mikäli oheisen keksinnön mukaisissa yhdisteissä on kvaternisoidun typen käsittävä heterosyk-linen ryhmä, jossa on kvaternäärinen typpiatomi, niin tämä ryhmä ei ole kiinnittynyt molekyylin loppuosaan tämän kvaternäärisen typpiato-min välityksellä vaan se on kiinnittynyt molekyylin loppuosaan hete-. 25 rosykliseen ryhmään kuuluvan hiiliatomin välityksellä.

Eurooppalaisessa patenttijulkaisussa 126 587 kuvataan joukko karba-peneemiyhdisteitä, joiden 2-asemassa on pyrrolidinyylitioryhmä. Nämä yhdisteet eroavat keksinnön mukaisista, kvaternäärisen typen käsittä-30 vistä yhdisteistä siinä suhteessa, että nämä alalla jo tunnetut yhdisteet eivät ole kvaternäärisen typen käsittäviä yhdisteitä, ja ne eroavat niistä oheisen keksinnön mukaisista yhdisteistä, joissa ei ole kvaternääristä typpeä, heterosyklisessä renkaassa olevien substi-tuenttien luonteen suhteen. Tiettyjen, näissä tekniikan nykytasoa 35 kuvaavissa julkaisuissa kuvattujen yhdisteiden aktiivisuus voi olla

Si Π ' Π *7 ( I H O / 5 hyvä, mutta niiden uskotaan imeytyvän huonommin in vivo oheisen keksinnön mukaisiin yhdisteisiin verrattuna.

Muuta tekniikan tasoa käsitellään seuraavassa.

5 EP-170073 asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannaisilla on heteroaryylialkyylitiosubstituentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaiseen heteroaryyliryhmään sisältyy kvaterneerinen typpiatomi. Esillä olevissa yhdisteissä on heterosyklyylitioryhmiä ilman kvater-10 neeristä typpiatomia tässä asemassa ja siten nämä keksinnöt eroavat toisistaan.

EP-242134 asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannaisilla on heteroaryylialkyylitiosubstituentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa 15 ja jokaiseen heteroaryyliryhmään sisältyy kvaterneerinen typpiatomi, joka on substituoitu amino- tai alkyyliaminoryhmällä. Esillä olevissa yhdisteissä on heterosyklyylitioryhmiä ilman kvaterneeristä typpiatomia tässä asemassa ja siten nämä keksinnöt eroavat toisistaan.

20 EP-184844 asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannaisilla on heteroaryylialkyylitiosubstituentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaiseen heteroaryyliryhmään sisältyy kvaterneerinen typpiatomi. Esillä olevissa yhdisteissä on heterosyklyylitioryhmiä ilman kvaterneeristä typpiatomia tässä asemassa ja siten nämä keksinnöt eroavat , 25 toisistaan.

EP-186057 asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannaisilla on heteroaryylialkyylitiosubstituentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaiseen heteroaryyliryhmään sisältyy kvaterneerinen typpiatomi. 30 Esillä olevissa yhdisteissä on heterosyklyylitioryhmiä ilman kvater-·_ neeristä typpiatomia tässä asemassa ja siten nämä keksinnöt eroavat toisistaan.

EP-184843 asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannaisilla on 35 heteroaryylialkyylitiosubstituentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaiseen heteroaryyliryhmään sisältyy kvaterneerinen typpiatomi.

6 c tl o 7 y l. Lt u /

Esillä olevissa yhdisteissä on heterosyklyylitioryhmiä ilman kvater-neeristä typpiatomia tässä asemassa ja siten nämä keksinnöt eroavat toisistaan.

5 Joillakin EP-126587-julkaisun karbapeneemijohdannaisilla on pyrroli-dinyylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaisella pyrrolidinyyliryhmällä on karbamoyyli- tai alkyylikarbamoyyliryhmä pyrrolidiiniytimen 5-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä on 5-pyr-rolidon-3- tai 4-yylitioryhmä tässä asemassa. Esillä oleva keksintö 10 eroaa tästä viitejulkaisusta.

Joillakin EP-182213-julkaisun karbapeneemijohdannaisilla on pyrroli-dinyylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaisella pyrrolidinyyliryhmällä on karbamoyyli- tai alkyylikarbamoyylialkyyli-15 ryhmä pyrrolidiiniytimen 5-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä tässä asemassa. Esillä oleva keksintö eroaa tästä viitejulkaisusta.

Joillakin EP-160876 -asiakirjan vaatimuksen 7 karbapeneemijohdannai-20 silla on 5-pyrrolidon-2-yylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2- asemassa ja kloori- tai fluorisubstituentti karbapeneemiytimen 1-asemassa. Joillakin karbapeneemijohdannaisilla, esim. niillä, jotka on esitetty tämän asiakirjan esimerkissä 85, on 5-pyrrolidon-(2,3 tai 4)-yylialkyylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa ja kloo-25 risubstituentti karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevilla yhdis-teillä on 5-pyrrolidon-3 tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevat yhdisteet eroavat tästä viitejulkaisusta.

30 Joillakin EP-167139 asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannai-silla (yhdistelista) on heteroaryylitiosubstituentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaiseen heteroaryyliryhmään sisältyy kvater-neerinen typpiatomi, jolla on alkyyliryhmä ja mitään substituenttia ei ole karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä on 35 heterosyklyylitioryhmä ilman kvaterneeristä typpiatomia karbapenee-

II

miytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä 1-asemassa ja eroavat tästä vii- tejulkaisusta.

7 92467

Joillakin GB-2128187 (FI-78094) asiakirjassa esitetyillä karbapenee-5 mijohdannaisilla (Esimerkit 2-25) on heteroaryylialkyylitiosubsti- tuentteja karbapeneemiytimen 2-asemassa ja jokaiseen heteroaryyliryh-mään sisältyy kvaterneerinen typpi-atomi, jolla on alkyyliryhmä ja substituoitu alkyyliryhmä. Esillä olevilla yhdisteillä on heterosyk-lyylitioryhmä ilman kvaterneeristä typpiatomia karbapeneemiytimen 2-10 asemassa ja eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

Joillakin EP-72710 (FI-76339) asiakirjassa esitetyillä karbapeneemi-johdannaisilla (esimerkit 2,7,8,9,11,12,16,17,18 ja 20) on pyrroli-din-3-yylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa mutta ei 15 mitään substituenttia karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä 1-asemassa ja eroaa tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

20 Joillakin EP-160391 (FI-83419) asiakirjassa esitetyillä karbapeneemi-johdannaisilla on pyrrolidin-3-yylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa ja erilaisia substituentteja karbapeneemiytimen 1-asemassa. Karbapeneemijohdannaisella (1) esimerkissä 8 on pyrrolidin-S-yylitiosubsituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä . 25 sen 1-asemassa. Luulemme, että esillä olevat yhdisteet, joilla on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä 1-asemassa eroaa yhdisteestä (1).

Rakenteellisesti lähin yhdiste esillä olevan keksinnön mukaisille 30 yhdisteille edellä olevista ja seuraavista tekniikan asiakirjoista on FI-83419 patentin yhdiste (1). Vaikka tämän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat lähellä yhdistettä (1), edustuskelpoisilla esillä olevilla yhdisteillä, esimerkiksi tämän hakemuksen yhdisteet esimerkeissä 36,39, 40 ja 41, on vahvempi bakteerivastainen vaikutus erilaisia 35 kliinisesti tärkeitä mikro-organismeja vastaan kuin FI-patentin 83419 yhdisteillä (1).

8 92487

Joillakin EP-102239 (FI-80887) asiakirjassa esitetyillä karbapeneemi-johdannaisilla (esimerkki 9c, 10c, 12b, 13d, 16e ja 19b) on pyrroli-din-3-yylitiosubsituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa mutta ei 5 substituenttia karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä 1-asemassa ja eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

10 Joillakin EP-186525 (FI-81576) asiakirjassa esitetyillä karbapeneemi-johdannaisilla (esimerkit 1-8) on pyrrolidin-3-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja siinä on substituentteja pyrrolidiiniyti-men asemissa 1 ja 5 mutta ei substituentteja karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevat yhdisteet, joilla on 5-pyrrolidon-3- tai 4-15 yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyli 1-asemassa, eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

Joillakin EP-165384 (FI-84826) asiakirjassa esitetyillä karbapeneemi j ohdannaisilla (esimerkit 2,7,8,9,11,12,16,17,18 ja 20) on pyrroli-20 din-3-yylitiosubsituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa eikä subsi- tuentteja karbapeneemiytimen 1-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä, joilla on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja metyyliryhmä 1-asemassa, eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

. 25

Joillakin EP-202048 (FI-81577) asiakirjassa esitetyillä karbapenee-mijohdannaisilla (esimerkit 1,4,5,10,11,12 ja 14) on pyrrolidin-1-yyli-1-iminoetyylitiosubstituentti karbapeneemiytimen 2-asemassa ja pyrrolidinirenkaalla on substituentti 3-asemassa. Esillä olevilla 30 yhdisteillä on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

Joillakin EP-235823 (FI-843446 ja 861721) asiakirjassa esitetyillä karbapeneemijohdannaisilla (esimerkki 2 ja 3) on heterosyklyylial-35 kyylitiosubstituentti, jolla on kvaternerisoitu typpiatomi karbapeneemiytimen 2-asemassa. Esillä olevilla yhdisteillä, joilla on 5- il 9 92407 pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

Joillakin EP-280771 (FI-875135) asiakirjassa esitetyillä karbapenee-5 mijohdannaisilla (esimerkit 3,4,7,8,12,13,14,20,21,22,23,24,25,31, 32,33,34,35,37,39,42,43 ja 45) on pyrrolidin-3-yylitioryhmä, jossa on substituentti asemassa 5 tai pyrrolidiydin karbapeneemiytimen 2-asemassa. Esillä olevat yhdisteet, joilla on 5-pyrrolidon-3- tai 4-yylitioryhmä karbapeneemiytimen 2-asemassa ja ovat ilman substituenttia 10 pyrrolidinytimen 5-asemassa, eroavat tämän viitejulkaisun yhdisteistä.

Keksinnön avulla voidaan saada aikaan farmaseuttinen valmiste, joka käsittää tehokkaan määrän antibioottia sekoitettuna farmaseuttisesti 15 hyväksyttävään kantajaan tai laimentimeen, mainitun antibiootin ollessa vähintään jokin kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden joukosta valittu yhdiste.

20 Edelleen, keksinnön avulla voidaan saada aikaan menetelmä mikrobi- infektion käsittelemiseksi tai estämiseksi nisäkkäässä, joka voi olla ihminen, antamalla sille tehokas määrä antibioottia, joka antibiootti on vähintään jokin kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden joukos-. 25 ta valittu yhdiste.

Oheisen keksinnön mukaisissa yhdisteissä, joissa R3 tarkoittaa alkyy-liryhmää, tämä alkyyliryhmä voi olla 1-4 hiiliatomia käsittävä suora-tai haaraketjuinen alkyyliryhmä, ja esimerkkeinä niistä voidaan mai-30 nita metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, butyyli, isobutyyli, sek.-butyyli, t-butyyli, joista metyyli, etyyli, propyyli ja butyyli ovat edullisia, metyyliryhmän ollessa yleensä kaikkein edullisin.

R5 tarkoittaa vetyatomia tai suojaavaa ryhmää, joka voidaan poistaa 35 kemiallisesti kohtuullisissa olosuhteissa, esimerkiksi kemiallisen pelkistävän reagenssin avulla tai katalyyttisellä pelkistyksellä, tai 10 f) f r- n y ά H O ! joka voidaan poistaa biologisella reaktiolla, esim. in vivo, karbok-siryhmän tuottamiseksi. Tämän suojaavan ryhmän luonteelle ei aseteta mitään rajoituksia, kunhan vain siinä tapauksessa, että tuloksena olevaa yhdistettä käytetään lääkinnällisiin tarkoituksiin, yhdiste on 5 farmaseuttisesti hyväksyttävä, mikä tarkoittaa alalla hyvin tunnetul la taalla sitä, ettei yhdisteen aktiivisuus ole pienentynyt (tai ettei aktiivisuus ole pienentynyt sopimattomalla tavalla) tai ettei sen toksisuus ole suurentunut (tai ettei toksisuus ole suurentunut sopimattomalla tavalla) verrattuna kaavan (I) mukaiseen vastaavaan 10 yhdisteeseen, jonka tapauksessa R5 on vetyatomi. Mikäli yhdistettä on kuitenkin tarkoitus käyttää muissa kuin lääkinnällisissä sovellutuksissa, esimerkiksi välituotteena muita yhdisteitä valmistettaessa, niin tällöin tämäkään rajoitus ei ole voimassa, vaan suojaava ryhmä voidaan valita yksinomaan prosessiin liittyvien kriteereiden perus-15 teella.

Oheisen keksinnön mukaiset yhdisteet voivat sisältää emäksisen ryhmän ja näin ollen ne voivat muodostaa happoadditiosuoloja. Näiden suolojen ja happojen luonne ei ole kriittinen keksinnölle, edellyttäen, 20 että mikäli yhdistettä käytetään lääkinnällisiin tarkoituksiin, niin suolan on oltava farmaseuttisesti hyväksyttävä, mikä alalla hyvin tunnetusti tarkoittaa sitä, ettei sen aktiivisuus ole pienempi (tai merkittävästi pienempi) tai ettei sen toksisuus ole suurempi (tai merkittävästi suurempi) kuin vapaan emäksen aktiivisuus tai toksi-25 suus. Mikäli yhdistettä on kuitenkin tarkoitus käyttää muissa sovellutuksissa, esimerkiksi välituotteena muita yhdisteitä valmistettaessa, niin tällöin tämäkään rajoitus ei päde.

Esimerkkeinä hapoista, jotka voivat muodostaa tällaisia suoloja tai 30 joilla voidaan saada aikaan tasapainottava anioni, mainittakoon epäorgaaniset hapot kuten kloorivetyhappo, bromivetyhappo, jodivetyhap-po, fosforihappo, rikkihappo tai typpihappo; orgaaniset sulfonihapot kuten metaanisulfonihappo, etaanisulfonihappo, bentseenisulfonihappo tai p-tolueenisulfonihappo; sekä organiset karboksyylihapot kuten 35 oksaalihappo, viinihappo, sitruunahappo, maleiinihappo, meripihkahap- 11 Ο >Λ· / n ·-> y <L Li 6 / po, etikkahappo, bentsoehappo, mantelihappo, askorbiinihappo, maitohappo, glukonihappo ja maliinihappo.

Esimerkkeinä symbolin M esittämistä, oheisen keksinnön mukaisissa 5 yhdisteissä läsnäolevista kationeista voidaan mainita metalliatomit, erityisesti alkalimetalliatomit kuten natrium- ja kaliumatomit ja aikalisien maametallien atomit kuten kalsiumatomi; ammoniumryhmä; sekä trialkyyliamiinista, kuten trietyyliamiinista tai muusta orgaanisesta emäksestä kuten prokaiinista, dibentsyyliamiinista tai fenet-10 yyliamiinista, peräisin olevat kationit.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat esiintyä erilaisina isomeereinä asymmetristen hiiliatomien läsnäolosta johtuen. Oheinen keksintö kattaa sekä yksittäiset isomeerit että kahden tai useamman isomeerin 15 seokset. Tällaisia seoksia voidaan valmistaa synteesireaktioilla tai sekoittamalla. Mikäli erillinen isomeeri on toivottu tuote, se voidaan valmistaa stereospesifisellä synteesimenetelmällä tai se voidaan valmistaa erottamalla isomeerien seos alalla hyvin tunnettuja erotus-tekniikoita käyttäen. Edullisina pidetään erityisesti niitä yhdistei-20 tä, joissa 6-peneemiasemassa oleva 1-hydroksietyyliryhmä on samassa konfiguraatiossa kuin tienamysiini, eli se on 1(R)-hydroksietyyli.

(1R, 5S,6S)-konfiguraatiota pidetään edullisena.

Seuraavat keksinnön mukaiset yhdisteet ovat kaikkein edullisimpia: 25 «

Pivaloyylioksimetyyli-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-(1-hydroksietyyli) -1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti sen pivaloyylioksimetyyli (1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2 -eemi- 3-karboksylaatti-30 isomeeri; % (l-metyylisykloheksan-l-yyli)karbonyylioksimetyyli-2-(2-okso-4-pyrro-lidinyylitio)-6-(1-hydroksietyyli)-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti sen (l-metyylisykloheksan-l-yyli)karbo-35 nyylioksimetyyli (1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-1- 12 f; r, / n «-» 7 ά H O i hydroksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti-isomeeri; 1-(syklopentyylioksikarbonyylioksi)etyyli-2 -(2-okso-4-pyrrolidinyyli-5 tio)-6-(1-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaat- ti, erityisesti sen 1-(syklopentyylioksikarbonyylioksi)etyyli (1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti-isomeeri; 10 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Keksinnön mukainen menetelmä on pääasiassa tunnettu siitä, että (a) kaavan (IV): 15 HO H CH3

\ / I

C C-H

H3C CH CH C-R27 I I II (IV)

C_M_C

20 / \ ..

O COOR28 [jossa R1 on edellä esitetyn määritelmän mukainen, R27 tarkoittaa kaavan -OR29 mukaista ryhmää, jossa kaavassa 25 R29 tarkoittaa difenyylifosforyyliryhmää; ja R28 tarkoittaa 4-nitrobentsyyliryhmää]; 30 mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan: « kaavan (Vb): HS -(Ra) (Vb) 35 92487 13 [jossa Ra on määritelty edellä, jossa tarvittaessa mitkä vain aktiiviset ryhmät on suojattuja], mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava 5 (VI): HO H CH3

\ / I

C C-H

/ \ / \ 10 H3C CH_CH C-S-Rb I I II (VI)

C_N_C

O COOR2 8 15 [jossa R1, R28 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia ja Rb tarkoittaa mainittua kaavan 1-8 tai 1-9 mukaista ryhmää, jossa tarvittaessa mikä tahansa aktiivinen ryhmä voi olla suojattu], 20 (b) minkä jälkeen tarvittaessa suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai tuloksena oleva yhdiste esteröidään ja/tai muutetaan suolakseen, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

25 Yksityiskohtaisemmin esittäen nämä yhdisteet voidaan valmistaa seu-raavissa menetelmissä A ja B kuvatuilla tavoilla.

14 O O /· P 1-1 y Iho /

Menetelmä A

Tätä menetelmää voidaan havainnollistaa seuraavana reaktiokaaviona A: CO / ο n y L· h o / REAKTIOKAAVIO A: 15 OH H1

Vaihe A 1

Cl*3 I ™ "

J-»-k 28 M °HI

0 COOR28 (VII) OH R1 k\^0R29 CHj · | f | Vaiha A2 - „__K-L [* (Va) . (Vb)] ^ " \ nai 0 COOR28

(VIHI

OH R1 ^k^,S-(CH2)g-Rb CH 3 j Vaihe A3 : o coor28 (VI) OH R1 ^i^^S-ICHjl^-R3 CHo | [ | ^ H koOR5 (Il 16 ο η. · ^ ^ 7 i-Η O /

Edellä esitetyissä kaavioissa R1, R5, Ra, Rb, R28, R29 ja 1 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Kaavan (Va) mukaisessa yhdisteessä X" tarkoittaa tasapainottavaa 5 anionia, joka on edullisesti halogeeniatomi (esim. kloori, bromi tai jodi) tai alkyylisulfonyylioksi-, aryylisulfonyylioksi- tai halogee-nisulfonyylioksiryhmä (esim. metaanisulfonyylioksi, p-tolueenisulfon-yylioksi, trifluorimetaanisulfonyylioksi tai fluorisulfonyylioksi).

10 Tämän reaktiokaavion vaiheessa Ai lähtömateriaalina toimiva kaavan (VII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan emäksen läsnäollessa al-kaanisulfonihapon, aryylisulfonihapon, dialkyylifosforihapon tai dia-ryylifosforihapon R290H aktiivisen johdannaisen, esimerkiksi alkaani-sulfonihappo- tai aryylisulfonihappoanhydridin tai dialkyylifosforyy-15 li- tai diaryylfosforyylihalogenidin kanssa. Vaiheessa A2 tuloksena oleva kaavan (VIII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan sitä eristämättä kaavan (Va) tai (Vb) mukaisen merkaptaanijohdannaisen kanssa emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan (VI) mukainen yhdiste. Sitten toivottu, kaavan (I) mukainen yhdiste voidaan valmistaa pois-20 tamalla tarvittaessa suojaava ryhmä R28 kaavan (VI) mukaisen yhdisteen karboksyyliryhmästä.

Esimerkkeinä vaiheessa Ai käyttökelpoisista, kaavan R290H mukaisen reagenssin reaktiivisista johdannaisista voidaan mainita: aikaani-25 sulfonihappoanhydridit kuten metaanisulfoni- tai etaanisulfonihappo-anhydridi; aryylisulfonihappoanhydridit kuten bentseenisulfoni- tai £-tolueenisulfonihappoanhydridi; dialkyylifosforyylihalogenidit kuten dimetyylifosforyyli- tai dietyylifosforyylikloridi; diaryylifosforyy-lihalogenidit kuten difenyylifosforyylikloridi tai difenyylifosforyy-30 libromidi. Näistä reagensseista edullisia ovat p-tolueenisulfonihap-. poanhydridi tai difenyylifosforyylikloridi. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon eikä siinä käytettyihin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista voidaan mainita halogenoidut 35 hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten metyleenikloridi, 1,2-dikloorietaani tai kloroformi; nitriilit kuten li ς* Γ*. t r* r- 11H '0 / 17 asetonitriili; amidit kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidi tai N,N-dimetyyli-asetamidi. Myöskään käytettävän emäksen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti molekyylin muihin osiin, erityisesti /?-laktaamirenkaaseen. Edullisia 5 emäksiä, joita voidaan käyttää tässä reaktiossa, ovat sellaiset orgaaniset emäkset kuten trietyyliamiini, diisopropyylietyyliamiini tai 4-dimetyyliaminopyridiini.

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen 10 reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituksenmukaisena pidetään reaktion toteuttamista suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi, tavallisesti -20 -+40°C:n lämpötilassa. Samoin reaktion tarvitsema aika voi vaihdella suuresti riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta 15 ja reagenssien luonteesta. Kuitenkin edellyttäen, että reaktio toteutetaan edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 5 tuntiin, on tavallisesti riittävä.

Tuloksena olevaa kaavan (VIII) mukaista yhdistettä ei tarvitse eris-20 tää ennen reaktiokaavion seuraavaa vaihetta. Täten vaiheessa A2 reak-tioseos voidaan käsitellä kaavan (Va) tai (Vb) mukaisella merkap-taanijohdannaisella emäksen läsnäollessa. Reaktiossa käytettävän emäksen luonne ei ole kriittinen, mutta edullisia emäksiä ovat kuitenkin orgaaniset emäkset kuten trietyyliamiini tai diisopropyy-25 liamiini sekä epäorgaaniset emäkset kuten kaliumkarbonaatti tai natriumkarbonaatti .

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Kuitenkin yleensä 30 pidetään parhaana toteuttaa reaktio suhteellisen alhaisessa lämpötilassa, joka on esimerkiksi -20 e:sta huoneen lämpötilaan. Samoin reaktioon tarvittava aika voi vaihdella laaajasti riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta. Mikäli kuitenkin reaktio toteutetaan edellä kuvatuissa edullisis-35 sa olosuhteissa, niin tällöin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 5 vuorokauteen.

18

Ci f': ! H

s il H O /

Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt täydellisesti loppuun, toivottu kaavan (VI) mukainen yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta perinteisellä tavalla. Esimerkiksi eräs sopiva tapa tuotteen talteen-ottamiseksi käsittää yksinkertaisesti liuottimen poistamisen tislaa-5 maila reaktioseoksesta. Tuloksena oleva yhdiste voidaan puhdistaa tarvittaessa edelleen tavanomaisella tavalla, esimerkiksi uudestaan-kiteyttämällä, uudestaansaostamalla tai lukuisalla erilaisella kromatografisella tekniikalla, kuten pylväskromatografiällä tai prepara-tiivisella ohutkerroskromatografiällä.

10

Ennen tällaista lisäpuhdistusta tai sen jälkeen karboksia suojaava ryhmä voidaan poistaa toivottaessa. Tämä toteutetaan edullisesti siten, ettei kaavan (VI) mukaista yhdistettä eristetä.

15 Menetelmän A viimeinen reaktiovaihe käsittää karboksia suojaavan ryhmän R28 poistamisen kaavan (VI) mukaisesta yhdisteestä, jolloin saadaan vastaava kaavan (I) mukainen karboksyylihappo, sekä toivottaessa tuloksena olevan vapaan hapon muuntamisen toiseksi suolaksi tai esteriksi. Tämä vaihe on valinnainen, ja on selvää, ettei karboksia suo-20 jaavan ryhmän poistaminen ole aina välttämätöntä tai toivottavaa, esimerkiksi mikäli kaavan (VI) mukainen yhdiste on oheisen keksinnön puitteisiin kuuluva, farmaseuttisesti hyväksyttävä esteri. Mikäli on toivottavaa poistaa karboksia suojaava ryhmä, niin se voi tapahtua perinteisillä menetelmillä, joiden valinta riippuu käytetyn suojaavan 25 ryhmän luonteesta.

Mikäli suojaava ryhmä voidaan poistaa pelkistämällä, esimerkiksi mikäli se on halogeenialkyyliryhmä, aralkyyliryhmä tai bentshydryyli-ryhmä, niin se voidaan poistaa saattamalla se kosketukseen pelkistä-30 vän aineen kanssa. Halogeenialkyyliryhmien kuten 2,2-dibromietyylin . tai 2,2,2-trikloorietyylin tapauksessa edullinen pelkistävä aine on sinkin ja etikkahapon yhdistelmä. Mikäli suojaava ryhmä on aralkyyli-ryhmä (kuten bentsyyli- tai p-nitrobentsyyliryhmä) tai bentshydryyli-ryhmä, niin se poistetaan edullisesti joko katalyyttisesti pelkistä-35 mällä käyttäen vetyä ja sopivaa katalyyttiä kuten platinaa tai hiileen sidottua palladiumia; tai pelkistämällä alkalimetallisulfidillä li ♦ 0 0 A Η,η s ZHu 1 19 kuten natriumsulfidillä tai kaliumsulfidillä. Olipa pelkistämistek-niikka mikä tahansa, pelkistäminen toteutetaan edullisesti liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat 5 esimerkiksi alkoholit (kuten metanoli tai etanoli), eetterit (kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani), alifaattiset karboksyylihapot (kuten etikkahappo) tai yhden tai useamman tällaisen orgaanisen liuottimen seos veden kanssa. Reaktiolämpötila ei ole kriittinen, mutta se on normaalisti 0 eC:sta huoneen lämpötilaan. Reaktioon tarvittava 10 aika vaihtelee riippuen lähtömateriaalien ja pelkistävien aineiden luonteesta sekä reaktiolämpötilasta, mutta normaalisti riittää ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 12 tuntiin.

Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt loppuun, toivottu, vapaan karb-15 oksiryhmän sisältävä yhdiste voidaan ottaa talteen perinteisin menetelmin reaktioseoksesta. Sopivissa tekniikoissa tuotteen talteenotta-miseksi esimerkiksi: mahdollinen liukenematon materiaali erotetaan, minkä jälkeen liuotin poistetaan tislaamalla, jolloin saadaan toivottua tuotetta. Tuote voidaan tarvittaessa puhdistaa edelleen perintei-20 sillä menetelmillä, esimerkiksi uudestaankiteyttämällä tai erilaisilla kromatografisilla tekniikoilla, kuten preparatiivisella ohutker-roskromatografiällä tai pylväskromatografiällä.

Edellä kuvatulla tavalla valmistetussa yhdisteessä oleva karboksi-25 ryhmä voidaan muuntaa toivottaessa esteriryhmäksi, joka hydrolysoituu fysikaalisissa olosuhteissa. Tämä voidaan toteuttaa perinteisillä menetelmillä. Mikäli R5 tarkoittaa esteriä, joka hydrolysoituu fysiologisissa olosuhteissa, esimerkiksi pivaloyylioksimetyyliä, asetoksi-metyyliä, ftalidyyliä, indanyyliä, metoksimetyyliä tai 2-okso-5-me-30 tyyli-1,3-dioksolen-4-yylimetyyliä, niin kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan hydrolysoida in vivo fysiologisissa olosuhteissa. Näin ollen tällaista yhdistettä voidaan antaa suoraan potilaalle ilman, että suojaava ryhmä olisi poistettu.

35 20 G O / - 7 - L· *t O /

Menetelmä B

Tätä menetelmää voidaan havainnollistaa seuraavalla reaktiokaaviolla B: 5 REAKTIOKAAVIO B: 1 0 OH R' .

A A J-1' C H] I | | Vaihe B \ J-N-L [+(Yal (Yb|] 0^ ^COOR28 tai (IX) OH R1 CH3 I Vaihe Θ2 J-N-V ~ 0 COOR2® (VI) OH R1

CHj | | I

J-N-k , 0 COOR5 m 21 O r'· ' ·' r~7 > ΔΗ <,.> /

Edellä esitetyissä kaavoissa R1, Ra, Rb, R2S, R30 ja 1 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Tässä reaktiokaaviossa lähtömateriaaleina käytettävät, kaavan (IX) 5 mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai No. Sho 62-30781 kuvatulla tavalla.

Vaiheessa B1 kaavan (VI) mukainen yhdiste voidaan valmistaa siten, että kaavan (IX) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (Va) 10 tai (Vb) mukaisen merkaptaaniyhdisteen kanssa emäksen läsnäollessa inertissä liuottimessa. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon eikä siinä käytettäviin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista voidaan mainita eetterit kuten tetrahydrofuraani; 15 nitriilit kuten asetonitriili; rasvahappoamidit kuten dimetyyliform-amidi; sulfoksidit kuten dimetyylisulfoksidi; vesi; tai minkä tahansa kahden tai useamman tällaisen liuottimen seos. Reaktiossa käytettävä emäs ei ole myöskään kriittinen, kunhan se vain ei vaikuta molekyylin muihin osiin, erityisesti ei /3-laktaamirenkaaseen. Esimerkkeinä sopi-20 vista emäksistä voidaan mainita orgaaniset emäkset kuten diisopropyy-lietyyliamiini, trietyyliamiini, N-metyylipiperidiini tai 4-(N,N-dimetyyliamino)pyridiini; sekä epäorgaaniset emäkset, erityisesti alkalimetallikarbonaatit kuten kaliumkarbonaatti tai natriumbikarbo-natti. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja * 25 täsmällinen lämpötila ei ole kriittinen keksinnölle, vaikka edullise na pidetäänkin reaktion toteuttamista suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden estämiseksi. Yleisesti, reaktio toteutetaan tarkoituksenmukaisesti alueella -20 - +40 eC olevassa lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monis-30 ta tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta. Mikäli kuitenkin reaktio toteutetaan edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tällöin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 5 vuorokauteen.

35 Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt loppuun, kaavan (VI) mukainen toivottu yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta perinteisillä 22 92487 menetelmillä. Samoin kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa toivottaessa poistamalla suojaava ryhmä kaavan (VI) mukaisesta yhdisteestä käyttäen menetelmässä A kuvattua toimenpidettä. Tuloksena oleva yhdiste voidaan edelleen erottaa ja puhdistaa menetelmässä A 5 kuvatulla tavalla.

Kaavan (Va) ja (Vb) mukaisia yhdisteitä, joita käytetään myös lähtö-materiaaleina edellä esitetyissä reaktiokaavioissa, voidaan myös saada perinteisillä ja hyvin tunnetuilla tavoilla tämän tyyppisen 10 yhdisteen valmistamiseksi. Niiden kaavan (Vb) mukaisten yhdisteiden tapauksessa, joita ei ole muutoin saatavilla, ne voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Ensiksi yhdiste, jolla on kaava (X): 15 L-Rc (X) [missä L tarkoittaa irtoavaa ryhmää kuten hydroksiryhmää, halogeeni-atomia (kuten klooria, bromia tai jodia) tai sulfonyylioksiryhmää 20 (esim. metaanisulfonyylioksi-, propaanisulfonyylioksi-, trifluorime-taanisulfonyylioksi- tai tolueenisulfonyylioksiryhmää) ja Rc tarkoittaa kaavan (III) mukaisen ryhmän yhteydessä määriteltyä 2-oksopyrrol-i d inyy1i ryhmää] ’ 25 muunnetaan vastaavaksi suojatuksi tioyhdisteeksi, jolla on kaava (XI):

Rd-Rc (XI) 30 [missä Rd tarkoittaa tioryhmää suojaavaa ryhmää kuten alkanoyyliryh-mää (esim. asetyyli- tai propionyyliryhmää) tai aralkyyliryhmää (esim. 4-metoksibentsyyli-, 3,4-dimetoksibentsyyli-, bentshydryyli-, trifenyylimetyyli- tai di(4-metoksifenyyli)metyyliryhmää)].

35 Mikäli L tarkoittaa hydroksiryhmää, niin se on voitu saada aikaan

Mitsunobu-reaktiolla, joka voidaan toteuttaa sinänsä tunnetuissa olo-

II

92487 23 suhteissa dietyyliatsodikarboksylaatin, trifenyylifosfiinin ja tio-etikkahapon läsnäollessa.

Mikäli L tarkoittaa halogeeniatoraia tai sulfonyylioksiryhmää, niin 5 reaktio voidaan toteuttaa saattamalla kaavan (X) mukainen yhdiste reagoimaan yhdisteen Rd-SH natrium- tai kaliumsuolan kanssa.

Toisena vaiheena on tavanomainen hydrolyysireaktio ja se voidaan toteuttaa sinänsä tunnetuissa tavanomaisissa olosuhteissa. Esimerkiksi 10 mikäli Rd on alkanoyyliryhmä, niin se voidaan poistaa aikalisissä tai happamissa olosuhteissa esimerkiksi natriumhydroksidilla vesipitoisessa metanolissa. Mikäli Rd on aralkyyliryhmä, se voidaan poistaa esimerkiksi trifluorimetaanisulfonihapolla trifluorietikkahapon ja anisolin läsnäollessa.

15

Kaavan (Va) mukainen merkaptaaniyhdiste voidaan valmistaa seuraavassa reaktiokaaviossa C kuvatulla tavalla: 24 92487 REAKTIOKAAVIO C: R2 -1-(CH7)m 71 Vaihe C1 R31-S-(CH2)#-- -r---

11 R3-L KHO

(CH2)n-NH

(XII) R2 v-1-(CH2)m rt Vaihe C2 lk-l— -

(CH2ln-N

X 3 (XIII) R R2 Y-1-(CH2)m R31-S-!CH2)t-- Vaii2—:-L.

(¾—V3 n ' / (XIV) R*1 R2 : V I (^2)m HS-S-(CH2)£-- (CH2I„--H—R3 _ I, X® (Va)

II

25 92487

Edellä olevissa kaavoissa R31 tarkoittaa merkaptoa suojaavaa ryhmää kuten aralkyyliryhmää [joista esimerkkeinä voidaan mainita 4-metoksi-bentsyyli, trifenyylimetyyli, bentshydryyli, 3,4-dimetoksibentsyyli tai di(4-metoksifenyyli)metyyli], alkanoyyliryhmää (esim. asetyyli, 5 propionyyli tai pivaloyyli) tai aromaattista asyyliryhmää (esim. o- tai 2-toluoyyliryhmä tai bentsoyyliryhmä); L tarkoittaa irtoavaa ryhmää kuten halogeeniatomia (esim. kloori, fluori tai jodi) tai sulfo-nyylioksiryhmää (esim. metaanisulfonyylioksi, tolueenisulfonyylioksi, trifluorimetaanisulfonyylioksi tai fluorisulfonyylioksi); ja R2, R3, 10 R\ i, m, n ja X* ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Tässä reaktiokaaviossa lähtömateriaalina käytetty, kaavan (XII) mukainen yhdiste voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä, joista esimerkki on kuvattu japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai No.

15 Sho 60-233076.

Vaiheessa Cl kaavan (XIII) mukainen yhdiste valmistetaan saattamalla kaavan (XII) mukainen yhdiste reagoimaan kaavan R3-L (XV) mukaisen yhdisteen kanssa emäksen läsnäollessa. Vaihtoehtoisesti, mikäli R3 on 20 metyyliryhmä, kaavan (XII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan formaldehydin (joka on tavallisesti formaliinina tai paraformaldehydinä) ja sitten natriumsyanoboorihydridin kanssa; tai se voidaan saattaa reagoimaan formaldehydin kanssa ja tämän jälkeen reaktiotuote hydra-taan katalyyttisesti hiileen sidotulla palladiumilla; tai se voidaan . 25 saattaa reagoimaan formaldehydin ja muurahaishapon kanssa reak-tioseosta kuumentaen.

Reaktio toteutetaan edullisesti inertin liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta erityisiä rajoituksia, 30 edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon tai siihen ·. osallistuviin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista mainittakoon amidit, erityisesti rasvahappoamidit kuten N,N-dimetyy-liformamidi tai Ν,Ν-dimetyyliasetamidi; halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt kuten metyleeniklo-35 ridi, 1,2-dikloorietaani tai kloroformi; eetterit kuten tetrahydro-furaani, dioksaani tai dietyylieetteri; nitriilit kuten asetonitrii- 26 92487 li; sekä minkä tahansa yhden tai useamman tällaisen liuottimen seos veden kanssa.

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen 5 reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituksenmukaisena pidetään reaktion toteuttamista alueella -20 - +100 °C olevassa lämpötilassa, mutta reaktio toteutetaan edullisesti suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti monista tekijöistä, 10 erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta, riippuen. Mikäli reaktio toteutetaan kuitenkin edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 2 vuorokauteen.

15 Tämän reaktiokaavion vaiheessa 2 kaavan (XIII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan R*-X (XVI) mukaisen yhdisteen kanssa. Tämä reaktio toteutetaan edullisesti inertin liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon tai siinä käy-20 tettyihin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista voidaan mainita aromaattiset hiilivedyt kuten bentseeni, tolueeni tai ksylee-ni; halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt kuten metyleenikloridi, 1,2-dikloorietaani tai kloroformi; amidit, erityisesti rasvahappoamidit kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidi tai • 25 Ν,Ν-dimetyyliasetamidi; eetterit kuten tetrahydrofuraani, dioksaani tai dietyylieetteri; nitriilit kuten asetonitriili; sekä yhden tai useamman tällaisen liuottimen seos veden kanssa.

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen 30 reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituk-. senmukaisena pidetään reaktion toteuttamista alueella -20 - +180 °C

olevassa lämpötilassa, mutta reaktio toteutetaan edullisesti suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti monista tekijöistä, 35 erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta, riippuen. Mikäli reaktio toteutetaan kuitenkin edellä kuvatuissa edullisissa li 92487 27 olosuhteissa, niin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 3 vuorokauteen.

Tämän reaktiokaavion vaiheessa C3 kaavan (XIV) mukaisesta yhdistees-5 tä, joka on valmistettu vaiheessa C2 kuvatulla tavalla, poistetaan suojaava ryhmä, jolloin saadaan kaavan (Va) mukainen yhdiste.

Menetelmä suojaavan ryhmän poistamiseksi vaihtelee riippuen suojaavan ryhmän R31 luonteesta. Täten mikäli R31 on aralkyyliryhmä, niin suo-10 jaavan ryhmän poistaminen voidaan toteuttaa tarkoituksenmukaisesti saattamalla kaavan (XIV) mukainen yhdiste reagoimaan trifluorimetaa-nisulfonihapon kanssa trifluorietikkahapon ja anisolin läsnäollessa.

Toisaalta, mikäli R31 on alkanoyyliryhmä tai aromaattinen asyyliryh-15 mä, niin suojaava ryhmä voidaan poistaa tarkoituksenmukaisesti käsittelemällä kaavan (XIV) mukaista yhdistettä kloorivedyllä tai bromive-dyllä sopivassa liuottimessa kuten alkoholissa (esim. metanolissa tai etanolissa), vedessä tai vesipitoisessa eetterissä (esim. vesipitoisessa tetrahydrofuraanissa tai vesipitoisessa dietyylieetterissä).

20

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituksenmukaisena pidetään reaktion toteuttamista alueella -20 - +200 °C olevassa lämpötilassa, mutta reaktio toteutetaan edullisesti suhteel-. 25 lisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta, riippuen. Mikäli reaktio toteutetaan kuitenkin edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 10 30 minuutista 24 tuntiin.

Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt loppuun, kaavan (Va) mukainen toivottu yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisella tavalla, esimerkiksi poistamalla liuotin reaktioseoksesta yk-35 sinkertaisesti tislaamalla. Toivottu yhdiste voidaan puhdistaa tarvittaessa edelleen tavanomaisella tavalla kuten uudestaansaostamalla 92487 28 tai monella erilaisella kromatografisella menetelmällä kuten pylväs -kromatografiällä tai preparatiivisella ohutkerroskromatografiällä.

Kaavan (Va) mukaisessa yhdisteessä vastaioni X" vaihtelee riippuen 5 vaiheessa C3 käytetyn reagenssin luonteesta.

Oheisen keksinnön mukaisilla yhdisteillä on bakteereja erinomaisesti torjuvaa aktiivisuutta ja niiden aktiivisuusspektri on laaja. Samoin ne kykenevät vastustamaan β-laktamaasia. Agarmaljalla toteutetulla 10 laimennosmenetelmällä määritettynä nämä yhdisteet on voitu osoittaa aktiivisiksi monia erilaisia patogeenisiä mikro-organismeja vastaan, joihin mikro-organismeihin kuuluu sekä Gram-positiivisia bakteereita (kuten Staphylococcus aureus ja Bacillus subtlis) että Gram-negatii-visia bakteereita (kuten Escherichia coli. Shigella flexneri.

15 Klebsiella pneuminiae. Proteus vulgaris . Serratia-lai it. esim.

Serratia marcescens. Enterobacter-laj it. esim. Enterobacter cloacae. Salmonella enteritidis ja Pseudomonas aeruginosa') , ja näin ollen niitä voidaan käyttää tällaisten mikro-organismien aiheuttamien sairauksien hoitamiseen ihmisissä ja muissa eläimissä. Dehydropeptidaasi I 20 inaktivoi tienamysiinin ja sen analogit in vivo nisäkkäissä, kun taas oheisen keksinnön mukaiset yhdisteet ovat paljon stabiilimpia tämän entsyymin läsnäollessa ja niiden tapauksessa virtsasta talteensaadut määrät ovat suuria, joten niiden biologinen aktiivisuus on hyvä. Samoin niiden toksisuus on pieni laboratorioeläimissä testattuna.

: 25

Taulukossa 10 esitetään erään keksinnön mukaisen yhdisteen aktiivisuus pienimpänä inhiboivana pitoisuutena (Mg/ml) erilaisia bakteereita vastaan.

30 φ 92487 29

Taulukko 10

Yhdiste Mikro-organismi

esimerkistä AB C

5 _ 4 0,01 0,01* 25

A: Staphylococcus aureus 209 10 B: Escherichia coli NIHJ

C: Pseudomonas aeruginosa 1001 0,01*: korkeintaan 0,01.

Edellä esitetyt tulokset osoittavat, että oheisen keksinnön mukaisia 15 yhdisteitä voidaan käyttää lukuisten erilaisten patogeenisten baktee-reiden aiheuttamien sairauksien hoitamiseen tai torjumiseen.

Esimerkeissä 7,8 ja 9 kuvatulla tavalla tuotettuja estereitä inku-boitiin 37 °C:ssa 1 tunnin ajan hevosen seerumin kanssa, minkä jäl-20 keen määritettiin MC-arvot (pienin inhiboiva pitoisuus). Nämä arvot olivat täsmälleen samat kuin esimerkissä 4 saadut ja edellä esitetyt arvot. Tämä tarkoittaa sitä, että nämä esterit pilkkoutuvat helposti esteraasin vaikutuksesta ohutsuolessa suun kautta tapahtuneen antamisen jälkeen, ne imeytyvät hyvin ruuansulatuskanavan läpi, ja että • 25 niillä saavutetaan täydellisesti vapaan hapon aktiivisuus.

Seuraavassa on vertailutietoja keksinnön mukaisten yhdisteiden vaikutuksen osoittamiseksi.

> 30 92487

Mikrobi Yhd. A Yhd. B Yhd. C Yhd. D Vert.yhd.

a <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 b <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 5 C <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 0,02 d <0,01 <0,01 <0,01 <0,01 0,05 e 0,02 <0,01 <0,01 <0,01 0,4 f 0,1 0,1 0,2 0,05 0,4 10

Edellä olevissa taulukoissa, lyhennykset tarkoittavat seuraavaa:

Yhd. A: Esimerkin 4 yhdiste:

Natrium-(1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R) -15 1-hydroksietyyli]-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti

Yhd. B: Esimerkin 7 yhdiste:

Pivaloyylioksimetyyli -(1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyy-litio)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]l-metyyli-l-karbapen-2-20 eemi-3-karboksylaatti

Yhd. C: Esimerkin 8 yhdiste: (1-Metyylisykloheksan-l-yyli)karbonyylioksimetyyli-(1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitiö)-6-[(1R)-1-hyd-; 25 roksietyyli-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti

Yhd. D: Esimerkin 9 yhdiste: 1-(Sykloheksyylioksikarbonyylioksi)etyyli-(1R, 5S,6S) -2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-me-30 tyyli -1-karbapen-2 -eemi- 3-karboksylaatti

Vert.Yhd.: FI-patentin 83419 Sugimura esimerkin 8 vertailuyhdiste: (lR,5R,6S)-6-[l(R)-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-[(3S)-pyr-rolidin-3-yylitio]-karbapen-2 -eemi- 3-karboksyylihappo 35

II

92487 31 a: Staphylococcus aureus 209P JC-1 b: Escherichia colt NIHJ JC-2 c: Klebsiella pneumoniae 806 d: Serratia marcescens IAM1184 5 e: Proteus vulgaris 1420 f: Moreanella morganii 1510

Bakteerinvastainen vaikutus mitattiin agaariliuoksen avulla ravinto-agaarilla tasolla 107 cfu/ml 8 tunnin ajan istutuksen jälkeen lämpö-10 tilassa 37°C. Bakteerinvastainen vaikutus mitattiin, mitattuna MICS0, s.o. minimi inhiboiva konsentraatio, joka tarvitaan, jotta puolet mikrobin kasvusta ehkäistäisiin.

Mitä tulee tämän hakemuksen esimerkkien 7, 8 ja 9 esteriyhdisteisiin, 15 niitä oli käsitelty ennen kuin niitä testattiin tässä testissä, hevos -seerumilla vapaan karboksihapon vapauttamiseksi ja hautomisaika oli 1 tunti lämpötilassa 37°C. Näistä tuloksista nähdään, että esillä olevilla yhdisteillä oli odottamattoman vahva bakteerinvastainen vaikutus verrattuna rakenteellisesti lähimpään tekniikan tason FI-20 julkaisun 83419 yhdisteeseen (1), kuten on esitetty seuraavassa tau-' lukossa.

Oheisen keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa joko suun kautta tai ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta hoidettaessa patogeenisten ; 25 mikro-organismien aiheuttamia sairauksia ihmisissä ja muissa eläimis-sä. Yhdisteestä voidaan muodostaa mitä tahansa perinteisiä käyttömuotoja. Sopivia, suun kautta annettavia käyttömuotoja ovat esimerkiksi tabletit, rakeet, kapselit, jauheet ja siirapit, kun taas ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta annettavia käyttömuotoja ovat esimerkiksi 30 lihaksen sisään tai edullisemmin suonen sisään injektoitavat liuok-. set.

Oheisen keksinnön mukaisia yhdisteitä annetaan edullisesti ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta, erityisesti suonen sisään injektoimalla.

35 32 92487

Keksinnön mukaisen yhdisteen annos vaihtelee riippuen potilaan iästä, ruumiin painosta ja tilasta sekä antotavasta ja antokertojen tiheydestä. Aikuisen vuorokausiannos on kuitenkin yleensä 100-3000 mg yhdistettä ja se voidaan antaa yhtenä annoksena tai osiin jaettuna.

5

Esimerkki 1

Natrium-(1R.5S.6S)-2-(2-okso-3-pvrrolidinvvlitio)-6-f QR)-1-hvdroksi-etvvlil-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 10 126 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 150 μΐ difenyylifosforyyliklori-dia lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 250 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 5 ml.ssa kuivaa ase-15 tonitriiliä, ja sitten tätä seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn tähän reaktioseokseen lisättiin 288 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 222 mg 3-merkapto-2-pyrrolidinonin (valmistettu kohdassa "valmistus 19" kuvatun kaltaisella menetelmällä) ja trifluorimetaani-20 sulfonihapon seosta (painosuhteessa 1:1) 2 ml:ssa asetonitriiliä.

Sitten koko seoksen annettiin seisoa 3 vuorokautta jääkaapissa. Tämän ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin etyyliasetaatilla, se pestiin peräkkäin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin sitten vedettömällä magnesiumsulfaatil- ; 25 la. Sitten liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa, jolloin ·> · saatiin raakatuote, joka liuotettiin seokseen, joka sisälsi 20 ml tetrahydrofuraania ja 20 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia siten, että läsnä oli 331 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä 30 liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuk-• sen apuaineena Celite-tuotetta ja suodos pestiin dietyylieetterillä.

Vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen Diaion HP-20AG-ko-lonnia, jota eluoitiin vedellä. Eluaatti väkevöitiin haihduttamalla 35 alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin raakatuote.

Tätä raakatuotetta puhdistettiin edelleen kromatografisesti käyttäen tl 92487 33

Lobar-kolonnia (Merck Co., LiChroprep RP-8, koko B), jota eluoitiin metanolin 3 til.-% vesiliuoksella. Eluaatti väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 35 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

5

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 302.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 5 ppm: 10 1,00 (3H, dupletti, J = 7,33 Hz); 1,11 (3H, dupletti, J ** 6,60 Hz); 1,86-1,98 (1H, multipletti); 2,40-2,55 (1H, multipletti); 3,18-3,39 (4H, multipletti); 15 3,71 (1H, duplettien dupletti, J — 9,16 & 6,60 Hz); 4,02-4,12 (2H, multipletti).

Esimerkki 2 20 Natrium- (1R. 5S , 651) - 2- (2-okso-4-pvrrolidinvvlitio) - 6 - f (1R) -1-hvdroksi-etvvin-l-metvvlikarbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 126 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 150 μΐ difenyylifosforyyliklori-dia lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka si-25 sälsi 250 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 5 ml:ssa kuivaa ase-tonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä tähän jäissä jäähdytettyyn reaktio-seokseen lisättiin 144 pl diisopropyylietyyliamiinia ja 97 mg 4-mer-30 kapto-2-pyrrolidinonia (valmistettu kohdassa "valmistus 20" kuvatulla tavalla). Tämän jälkeen koko seosta sekoitettiin 7 tuntia 0-5 °C:n lämpötilassa ja sitten sen annettiin seisoa yön yli jääkaapissa. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin kahdesti natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin sitten vedettömällä mag-35 nesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuotetta, joka liuotettiin seokseen, 92487 34 joka sisälsi 20 ml tetrahydrofuraania ja 20 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, että läsnä oli 331 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia.

Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali poistettiin suo-5 dattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite- tuotetta ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromato-grafisesti käyttäen Diaion HP-20AG-kolonnia, jota eluoitiin vedellä. Eluaatti väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofi-10 lisoitiin, jolloin saatiin raakatuotetta. Tätä raakatuotetta puhdistettiin edelleen kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck Co., LiChroprep RP-8, koko B), jota eluoitiin metanolin 5 til.-% vesiliuoksella. Eluaatti väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 91 mg otsikon mu-15 kaista yhdistettä värittömänä jauheena. Se on kahden isomeerin (pyr-rolidiinirenkaan 4-asemassa sijaitsevan hiiliatomin suhteen) seos noin suhteessa 1:1.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 20 300.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,02 & 1,03 (3H, dupletti x 2, J « 7,33 & 6,96 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J = 6,60 Hz); 25 2,12 & 2,22 (1H, duplettien dupletti x 2, J = 17,59 & 4,40 Hz ja 17,59 & 4,03 Hz); 2,74 & 2,77 (1H, duplettien dupletti x 2, J =» 17,59 & 9,16 Hz ja 17,59 & 9,16 Hz); 3,07-3,29 (3H, multipletti); 30 3,64-3,73 (1H, multipletti); 3,84-3,96 (1H, multipletti); 4,00-4,12 (2H, multipletti).

n 35 92487

Esimerkki 3 5-metwli-2-okso-l.3-dioksolen-4-vvlimetvvli-(lR.5S.6S)-2-(2-okso-3-pyrrolidinvvlitio) -6- f (1R) -1-hvdroksietvvli 1 -l-metvvli-l-karbapen-2-5 eemi-3-karboksvlaatti

Liuos, joka sisälsi 66 mg 5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yylimetyy-lijodidia (valmistettu kuumentamalla 5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yylimetyylibromidia ja natriumjodidia asetonissa palautusjäähdyttä-10 en) kloroformissa, lisättiin seokseen, joka sisälsi natrium- (1R,5 S,6S)-2 -(2-okso-3-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia 0,4 ml:ssa kuivaa dime-tyyliformamidia. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 80 minuuttia ja sitten 30-45 °C:n lämpötilassa 4,5 tuntia. Tämän ajanjakson 15 päätyttyä reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla ja se pestiin neljä kertaa natriumkloridin vesiliuoksella. Uute kuivattiin ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti Lobar-kolonnilla (Merck, LiChroprep Si60, koko A), se laimennettiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tila-20 vuussuhde 10:1), jolloin saatiin 27,4 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Xmax nm: 322.

• 25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisul-foksidi, 270 MHz) δ ppm: 1,13 (3H, dupletti, J - 7,32 Hz); 1,15 (3H, dupletti, J - 6,35 Hz); 30 1,84-1,98 (1H, multipletti); 2,17 (3H, singletti); 2,50-2,65 (1H, multipletti); 3,12-3,45 (4H, multipletti); 3,77-4,06 (2H, multipletti); 35 4,14 (1H, duplettien dupletti, J = 9,27 & 2,44 Hz); 5,08 (2H, singletti).

36 92487

Esimerkki 4

Natrium-(lR.5S.6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinvvlitio)- 6-f(1R)-1-hvdroksi-etvvlil-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 5 1,45 ml diisopropyylietyyliamiinia ja 1,70 ml difenyylifosforyyli-kloridia lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,93 g 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 50 mlrssa kuivaa 10 asetonitriiliä, ja sitten tätä seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Sitten tähän seokseen, joka oli jäähdytetty -20 °C:n lämpötilaan, lisättiin 1,45 ml diisopropyylietyyliamiinia sekä liuos, joka sisälsi 1,35 g 4-merkapto-2-pyrrolidinonia (valmistettu kohdassa "valmistus 20" kuvatulla tavalla) 5 ml:ssa asetonit-15 rilliä, ja sitten koko seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 3 tuntia, minkä jälkeen sen annettiin seisoa samassa lämpötilassa yön yli. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin kahdesti nat-riumkloridin vesiliuoksella ja suodatettiin. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois alen-20 netussa paineessa, jolloin saatiin otsikon mukaisen yhdisteen 4-nit-robentsyyliesteriä vaahtona. Se liuotettiin 150 mitään tetrahydrofu-raania ja liuos suodatettiin liukenemattoman materiaalin poistamiseksi. Suodokseen lisättiin 150 ml 0,1 M fosfaattipuskuriliuosta (pH 7,1) ja katalyyttinen pelkistäminen toteutettiin huoneen lämpötilassa * 25 2,5 tunnin aikana siten, että läsnä oli 1,5 g 10 % w/w hiileen sidot- tua palladiumia. Tämän jälkeen reaktioseos jatkokäsiteltiin esimerkissä 34 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 1,05 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena. Se on kahden isomeerin (pyrroli-diinirenkaan 4-asemassa sijaitsevan hiiliatomin suhteen) seos noin 30 suhteessa 9:1.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 299.

35 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1748, 1689, 1597, 1393, 1296.

I! 92487 37

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,03 (3H, dupletti, J - 7,3 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,2 Hz); 2,12 (0,9 H, duplettien dupletti, J = 17,9 & 4,4 Hz); 5 2,22 (0,1 H, duplettien dupletti, J = 17,9 & 4,4 Hz); 2,74, 2,77 (1H, 2 x duplettien dupletti, J - 17,9 & 8,4 Hz); 3,08-3,24 (2H, multipletti); 3,26 (1H, duplettien dupletti, J = 5,9 & 2,6 Hz); 10 3,69 (1H, duplettien dupletti, J = 11,4 & 6,6 Hz); 3,84-3,93 (1H, multipletti); 4,02-4,11 (2H, multipletti).

Esimerkki 5 15

Natrium- (1R .55.65)-2 - (2-okso-4-pvrrolidinvvlitio') - 6- f (1R) -1-hvdroksi-etwlil -l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti

Otsikon mukaisen yhdisteen p-nitrobentsyyli valmistettiin raakatuot-20 teenä noudattaen olennaisesti edellä esimerkissä 36 esitettyä menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 330 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia. Tämä esteri käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen kolonnia, joka sisälsi 50 g silikageeliä, ja jota eluoitiin 25 etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 4:1). Eluentti väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 260 mg väritöntä jauhetta, joka sekoitettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia. Tämä seos jäähdytettiin jäissä ja se suodatettiin liukenemattoman materiaalin poistamiseksi. Suodos väkevöitiin haihduttamalla alenne-30 tussa paineessa ja jäännökseen lisättiin di-isopropyylieetteriä, jolloin saatiin sakka. Se otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 150 mg otsikon mukaisen yhdisteen p-nitrobents-yyliesteriä jauheena. Tämä esteri on joko R- tai S-isomeeri pyrroli-diinirenkaan 4-asemassa olevan hiiliatomin suhteen.

35 38 92487

Ydirunagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisul-foksidi, 270 MHz) S ppm: 1,16 (3H, dupletti, J — 6,0 Hz); 1,18 (3H, dupletti, J = 7,3 Hz); 5 2,02 (1H, duplettien dupletti, J - 17,1 & 4,9 Hz); 2,72 (1H, duplettien dupletti, J - 17,1 & 8,3 Hz); 3,12-3,48 (3H, multipletti); 3.74 (1H, duplettien dupletti, J - 10,7 & 6,3 Hz); 3,94-4,05 (2H, multipletti); 10 4,24 (1H, duplettien dupletti, J — 9,8 & 2,9 Hz); 5,06 (1H, dupletti, J — 4,9 Hz); 5,30, 5,46 (2H, AB, J - 14,2 Hz); 7,71 (2H, dupletti, J = 8,8 Hz); 8,23 (2H, dupletti, J - 8,8 Hz).

15 100 mg edellä esitetyssä vaiheessa saatua p-nitrobentsyyliesteriä hydrattiin katalyyttisesti esimerkissä 34 esitetyllä tavalla, jolloin saatiin 55 mg otsikon mukaista yhdistettä, jolla on joko R- tai S-konfiguraatio pyrrolidiinirenkaan 4-asemassa sijaitsevan hiiliatomin 20 suhteen, puhtaana jauheena.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 299.

25 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,03 (3H, dupletti, J - 7,3 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J = 6,2 Hz); 2,12 (1H, duplettien dupletti, J = 17,9 & 4,4 Hz); 2.74 (1H, duplettien dupletti, J - 17,9 & 8,4 Hz); 30 3,08-3,24 (2H, multipletti); 3,26 (1H, duplettien dupletti, J = 5,9 & 2,6 Hz); 3,69 (1H, duplettien dupletti, J - 11,4 & 6,6 Hz); 3,84-3,93 (1H, multipletti); 4,02-4,11 (2H, multipletti).

35

II

Natrium- (1R. 5S . 6S) -2- <'2-okso-4-pvrrolidinvvlitio) -6- f (1R) -1-hvdroksi- etwlil -1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 39 92487

Esimerkki 6 5

Otsikon mukaisen yhdisteen p-nitrobentsyyli valmistettiin raakatuot-teena noudattaen olennaisesti edellä esimerkissä 34 esitettyä menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 300 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-1-karbapenaami-10 3-karboksylaattia. Tämä esteri käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen kolonnia, joka sisälsi 50 g silikageeliä, ja jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 4:1). Eluentti väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 270 mg väritöntä jauhetta. Tämä tuote on kahden isomeerin (pyrrolidiini-15 renkaan 4-asemassa sijaitsevan hiiliatomin suhteen) seos noin suhteessa 1:1. 100 mg tätä tuotetta sekoitettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia. Tämä seos suodatettiin liukenemattoman materiaalin ottamiseksi talteen, ja sitten tämä materiaali kiteytettiin uudestaan metanolin ja isopropanolin seoksesta, jolloin saatiin 30 mg otsikon 20 mukaisen tuotteen p-nitrobentsyyliesteriä värittöminä neulasina. Tämä esteri on joko R- tai S-isomeeri pyrrolidiinirenkaan 4-asemassa olevan hiiliatomin suhteen ja se on toinen isomeeri, jolla on vastakkainen konfiguraatio esimerkin 37 ensimmäisessä vaiheessa saatuun yhdisteeseen verrattuna.

; 25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisul-foksidi, 270 MHz) 8 ppm: 1.16 (3H, dupletti, J = 6,3 Hz); 1.17 (3H, dupletti, J - 7,3 Hz); 30 2,13 (1H, duplettien dupletti, J - 17,1 & 4,4 Hz); . 2,79 (1H, duplettien dupletti, J - 17,1 & 7,8 Hz); 3,10 (1H, duplettien dupletti, J - 10,8, 3,4 Hz); 3,16-3,35 (1H, multipletti); 3,40-3,51 (1H, multipletti); 35 3,70 (1H, duplettien dupletti, J - 10,7 & 7,3 Hz); 3,95-4,12 (2H, multipletti); ) 40 92487 4,25 (1H, duplettien dupletti, J = 9,3 & 2,5 Hz); 5,07 (1H, dupletti, J = 5,4 Hz); 5,30, 5,46 (2H, AB, J = 14,2 Hz); 7,71 (2H, dupletti, J = 8,8 Hz); 5 8,23 (2H, dupletti, J = 8,8 Hz).

20 mg edellä esitetyssä vaiheessa saatua p-nitrobentsyyliesteriä hyd-rattiin katalyyttisesti esimerkissä 34 esitetyllä tavalla, jolloin saatiin puhtaana jauheena 11 mg otsikon mukaista yhdistettä, jolla on 10 joko R- tai S-konfiguraatio pyrrolidiinirenkaan 4-asemassa sijaitsevan hiiliatomin suhteen, ja jolla on vastakkainen konfiguraatio kuin esimerkissä 37 saadulla yhdisteellä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 15 1,02 (3H, dupletti, J = 7,3 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J = 6,6 Hz); 2,22 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 4,4 Hz); 2,77 (1H, duplettien dupletti, J — 17,6 & 8,4 Hz); 3,08-3,25 (2H, multipletti); 20 3,25 (1H, duplettien dupletti, J = 5,9 & 2,6 Hz); 3,68 (1H, duplettien dupletti, J = 11,4 & 6,4 Hz); 3,84-3,,96 (1H, multipletti); 4,00-4,12 (2H, multipletti).

25 Esimerkki 7

Pivalovvlioksimetvvli- CIR. 5S . 6S) -2- ('2-okso-4-pvrrolidinvvlitio) -6 - f CIR") -1-hvdroks ie tyyli 11-me tyyli - l-karbapen-2 -eemi-3-karboksvlaatti 30 100 mg esimerkissä 36 kuvatulla tavalla saatua natrium-2-(2-okso-4- , pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksylaattia suspendoitiin 3 ml:aan kuivaa N,N-dimetyyli-asetamidia. Tähän suspensioon lisättiin jäissä jäähdyttäen 80 μΐ pivaloyylioksimetyylijodidia ja sitten tätä seosta sekoitettiin 15 35 minuuttia, jona aikana seos muuttui liuokseksi. Sitten reaktioseos laimennettiin 50 ml:11a etyyliasetaattia ja se pestiin kahdesti nat- li 41 92487 riumkloridin vesiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti Lobar-kolonnilla (Merck, LiChroprep RP-8, koko B), jota eluoitiin metanolin 60 til.-% 5 vesiliuoksella. Eluentti haihdutettiin alennetussa paineessa me tanolin poistamiseksi, jolloin jäljejje jäi vesifaasi, joka sekoitettiin natriumkloridiin ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja se väkevöitiin haihduttamalla alennetusa paineessa, jolloin saatiin 110 mg otsikon mukaista 10 yhdistettä värittömänä jauheena.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Ämax nm: 323 (€ = 10760).

15 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) vmax cm’1: 1778, 1756, 1699.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) 6 ppm: 1,23 (9H, singletti); 20 1,29 (3H, dupletti, J - 7,3 Hz); 1,35 (3H, dupletti, J - 6,2 Hz); 1,95 (1H, leveä singletti); 2,33 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 6,2 Hz); 2.79 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 8,8 Hz); 25 3,22-3,34 (2H, multipletti); 3,38 (1H, duplettien duletti, J *= 9,9 & 4,8 Hz); 3.80 (1H, duplettien dupletti, J - 10,3 & 7,0 Hz); 3,95-4,05 (1H, multipletti); 4,20-4,27 (2H, multipletti); 30 5,79 (1H, leveä singletti); 5,83, 5,97 (2H, AB, J - 5,5 Hz).

(l-metwlisvkloheksan-l-vvli’tkarbonvvlioksimetvvli- (1R. 5S . 6S) -2- (2-okso-4-pvrrolidinvvlitio) -6-f(1R)-l-hvdroksietvvli-1-metwli-l- 5 karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 42 92487

Esimerkki 8 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin (l-metyylisykloheksan-l-yyli)kar-bonyylioksimetyylijodidia pivaloyylioksimetyylijodidin sijasta, jol-10 loin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323 (e - 9655).

15 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1777, 1753, 1700.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) 5 ppm: 1,18 (3H, singletti); 20 1,29 (3H, dupletti, J = 7,3 Hz); 1,35 (3H, dupletti, J = 6,2 Hz); 1,25-1,75 (9H, multipletti); 2,00-2,08 (2H, multipletti); 2,33 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 6,2 Hz); 25 2,79 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 8,8 Hz); 3,21-3,33 (2H, multipletti); 3,38 (1H, duplettien dupletti, J = 9,9 & 4,8 Hz); 3,79 (1H, duplettien dupletti, J = 9,9 & 7,0 Hz); 3,95-4,05 (1H, multipletti); 30 4,21-4,30 (2H, multipletti); 5,78 (1H, leveä singletti); 5,87, 5,96 (2H, AB, J = 5,5 Hz).

IJ

l-(svkloheksvvlioksikarbonvvljoksiMetyyli -(lR.5S.6S)-2-(2-okso-4- pvrrolidinvvlitio)-6-f(1R)-1-hvdroksietyyli 1-l-metvvli-l-karbapen-2- 5 eemi-3-karboksvlaatti 43 92487

Esimerkki 9 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin 54 g esimerkissä 36 kuvatun kaltaisella menetelmällä saatua natrium-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-[(1R)-Ι-ΙΟ hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia sekä 50 μΐ 1-(sykloheksyylioksikarbonyylioksi)etyylijodidia, jolloin saatiin 62 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Ämax nm: 15 323 (e - 10766).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm’1: 1759, 1701.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) 8 ppm: 1,28 (3H, dupletti, J - 7,0 Hz); 1,33, 1,36 (3H, kaksi duplettia, J = 6,2 Hz); 1,59, 1,61 (3H, kaksi duplettia, J = 5,5 Hz); 1,2-1,6 (6H, multipletti); 25 1,7-2,0 (5H, multipletti); 2,33 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 6,2 Hz); 2,79 (1H, duplettien dupletti, J - 17,6 & 8,8 Hz); 3,24-3,33 (2H, multipletti); 3,35-3,42 (1H, multipletti); 30 3,75-3,85 (1H, multipletti); * 3,94-4,05 (1H, multipletti); 4,19-4,27 (2H, multipletti); 4,59-4,70 (1H, multipletti); 5,69 (1H, leveä singletti); 35 6,88 (1H, kvartetti, J = 5,5 Hz).

Esimerkki 10 44 92487 1-(svklopentvvlioksikarbonvvlioksi)etyyli -C1R,5S.6S)-2 - (2-okso-4-pvrrolidinvvlitio) -6- f (1R) -1-hvdroksietvvlil -1-metyyli-1-karbapen-2-5 eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 1-(syklopentyylioksikarbonyyliok-si)etyylijodidia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

10

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323 (e - 10651).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 15 1760, 1701.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) δ ppm: 1,28, 1,29 (3H, kaksi duplettia. J = 7,3 Hz); 1,33, 1,35 (3H, kaksi duplettia, J = 6,2 Hz); 20 1,58, 1,60 (3H, kaksi duplettia, J = 5,5 Hz); 1,65-1,95 (8H, multipletti); 2,33 (1H, duplettien dupletti, J - 17,6 & 6,2 Hz); 2,79 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 8,8 Hz); 3,23-3,32 (2H, multipletti); •j 25 3,38, 3,39 (1H, kaksi duplettien duplettia, J - 9,9 & 4,8

Hz); 3,68-3,87 (1H, multipletti); 3,96-4,07 (1H, multipletti); 4,19-4,27 (2H, multipletti); 30 5,08-5,16 (1H, multipletti); 5,66 (1H, leveä singletti); 6,87 (1H, kvartetti, J = 5,5 Hz).

Il 1- (svkloheksvylimetvvlioksikarbonvvl joksi Metyyli - (1R. 5S .6S~) - 2- (?- okso-4-pvrrolidinvvlitio') -6- [ (ΙΕΠ -1-hvdroksietvvlil -1-metvvli-l- 5 karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 45 92487

Esimerkki 11 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 1-(sykloheksyylimetyylioksikar-bonyylioksi)etyylijodidia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdis- 10 tettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Ämax nm: 323 (e - 10975) .

15 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1766, 1700, 1269.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) 6 ppm: 0,95-1,26 (5H, multipletti); 20 1.28, 1,29 (3H, kaksi duplettia. J = 7,3 Hz); 1,33, 1,35 (3H, kaksi duplettia, J = 6,2 Hz); 1,59, 1,61 (3H, kaksi duplettia, J = 5,9 & 5,5 Hz); 1,64-1,76 (6H, multipletti); 1,87 (1H, leveä singletti); • 25 2,33 (1H, duplettien dupletti, J - 17,6 & 6,2 Hz); 2,79 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 8,8 Hz); 3,24-3,35 (2H, multipletti); 3,37-3,42 (1H, multipletti); 3,75-3,87 (1H, multipletti); 30 3,95-4,06 (3H, multipletti); 4,20-4,28 (2H, multipletti); 5,73 (1H, leveä singletti); 6,86, 6,87 (1H, kvartetti, J = 5,5 Hz).

35 1-(isopropoksikarbonwljoksiMetyyli -(1R.55.63)-2-(2-okso-4-pvrolidi- nvvlitio) -6- Γ (1R) -1-hvdroksietvvlil -l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3- 5 karboksvlaatti 46 92487

Esimerkki 12 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 1-(isopropoksikarbonyylioksi)-etyylijodidia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

10

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323 (e - 10961).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) vmax cm’1: 15 1762, 1701, 1272.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,26-1,36 (12H, multipletti); 1,39, 1,61 (3H, kaksi duplettia, J - 5,5 Hz); 20 1,80 (1H, leveä tripletti, J = 3,7 Hz); 2,33 (1H, duplettien dupletti, J = 17,6 & 6,2 Hz); 2,79 (1H, duplettien dupletti, J *= 17,6 & 8,8 Hz); 3,24-3,34 (2H, multipletti); 3,35-3,42 (1H, multipletti); ·· 25 3,76-3,87 (1H, multipletti); 3,95-4,07 (1H, multipletti); 4,19-4,28 (2H, multipletti); 4,82-4,99 (1H, multipletti); 5,63 (1H, leveä singletti); 30 6,88 (1H, kvartetti, J = 5,5 Hz).

Il » 47 92487

Esimerkki 13 flR.5S.6S)-(1)-metvvlioksikarbonvvlioksimetvvli-(1R.5S.6S)-2 -(2-okso-4-ovrrol idinvvl itiö1) -6-f(1R) -1-hvdroks ie tyyli 11 -metyyli -l-karbapen-2-5 eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin (1R,2S,5R)-(1)-metyylioksikarbo-nyylioksimetyylijodidia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

10

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 324 (e = 10801).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 15 1763, 1695, 1266.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 0,78 (3H, dupletti, J = 7,0 Hz); 0,89 (3H, dupletti, J = 7,0 Hz); 20 0,92 (3H, dupletti, J -= 7,3 Hz); 1,29 (3H, dupletti, J - 7,3 Hz); 1,35 (3H, dupletti, J - 6,2 Hz); 0,95-1,55 (5H, multipletti); 1,63-1,73 (2H, multipletti); i 25 1,88-2,03 (1H, multipletti); 2,08-2,17 (1H, multipletti); 2,34 (1H, duplettien dupletti, J = 17,2 & 6,2 Hz); 2,79 (1H, duplettien dupletti, J = 17,2 & 8,8 Hz); 3,22-3,34 (2H, multipletti); 30 3,39 (1H, duplettien dupletti, J = 9,5 & 4,8 Hz); 3,74-3,86 (1H, multipletti); 3,96-4,06 (1H, multipletti); 4,18-4,28 (2H, multipletti); 4,56 (1H, triplettien dupletti, J = 10,6 & 4,4 Hz); 35 5,70 (1H, leveä singletti); 5,89, 5,91 (2H, AB, J = 5,9 Hz) .

5-metwli-2-okso-l.3-dioksolen-4-vvlimetvvli-(lR.5S.6S)-2-(2-okso-4- pyrrolidinvvlitio') -6- f (1R) -l-hvdroksietvvli-l-metvvli-l-karbapen-2- 5 eemi-3-karboksvlaatti 48 92487

Esimerkki 14 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 39 kuvatun kaltaista menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 50 mg natrium-2-(2-okso-4-pyrroli-dinyylitio)- 6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-10 karboksylaattia ja 55 mg 5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yylimetyy- libromidia, jolloin saatiin 50 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 15 321,1 (f - 8982).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm*1: 1820, 1772, 1701, 1627.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDCl3, 270 MHz) δ ppm: 1,30 (3H, dupletti, J = 7,33 Hz); 1,36 (3H, dupletti, J = 6,22 Hz); 1.80 (1H, leveä singletti); 2,21 (3H, singletti); : 25 2,35 (1H, duplettien dupletti, J = 17,58 & 6,04 Hz); 2.81 (1H, duplettien dupletti, J - 17,58 & 8,80 Hz); 3,25-3,43 (3H, multipletti); 3,73-4,05 (2H, multipletti); 4,17-4,32 (2H, multipletti); 30 4,96, 5,05 (2H, AB, J - 13,93 Hz); 5,59 (1H, leveä singletti.

92487 49

Esimerkit 15-24

Esimerkki 15 5 1- (isobutvrvvl joksi)etvvli- (1R. 5S . 6S) -2- (2-okso-4-pvrrolidinvvlitio') - 6-f f1R)-1-hvdroksietyyli 1 -1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksv-laatti

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 10 323.

Esimerkki 16 1- (svkloheksaanikarbonvvl joksi') etvvli - (lR.5S.6S)-2- (2-okso-4-pvrro-15 lidinvvlitio)-6-f(1R)-hvdroksietvvli1-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323.

20

Esimerkki 17 1- (pivalovvl ioksi '»etvvli - (lR.5S.6S~)-2- (2-okso-4-pvrrolidinvvlitio) - 6-i(1R)-1-hvdroksietvvli1-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti : 25

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323.

Esimerkki 18 30 1-asetoksietvvli-(1R.55.65)-2-(2-okso-4-pvrrolidinvvlitio)-6- f(1R)-1-hvdroksietvvli1-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 35 323.

50 92487

Esimerkki 19

Svkloheksaanikarbonvvlioksinietyyli- (1R. 5S - GSi'i -2- (2-okso-4-pyrrolidi-nvvlitio') -6- f (lR) -1-hvdroksietyvli 1 -1-metvyl i -l-karbapen-2-eemi-3-5 karboksvlaatti

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323.

10 Esimerkki 20

Svkloheksvvlioksikarbonvvlioksimetyvli-(lR.5S.6S)-2-(2-okso-4-pvrro-lidinyvlitio') - 6 - f f 1R) - 1-hydroks ie tyyli 1 -1 - metyyli -1-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 15

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323.

Esimerkki 21 20

Svklopentvvlioksikarbonvvlioksimetyyli-(1R,5S.SS)-2 -(2-okso-4-pvrro-lidinwlitio') - 6- [ (lR) -1-hvdroksietvvli 1 -1 -metyyli -1 -karbanen-2 -eemi-3-karboksvlaatti : 25 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323.

Esimerkki 22 30 Natrium- (1R, 5S . 6S) -2 - (l·-metvvl·i-2-okso-4-pvrrol·idinvvlitio,) -6 - f (1R) - 1-hvdroks ietvvli1 -1-metvvli-1-karbapen- 2 -eemi- 3 -karboksvlaatti

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 300.

35 li

Esimerkki 23 51 92487 P ival owl ioks ime tyyli - (lR.5S.6S)-2-( 1 - metyyli - 2 -okso-4-pyrrolidinvv-litio') -6- [ (lR) -l-hydroksietwli-l-metyvli-l-karbapen^-eemi^-karbok-5 svlaatti

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Amax nm: 323.

10 Esimerkki 24 1- (isoporpoksikarbonwlioksDetvvli- QR. 53.63)-2- (l-metvvli-2-okso-4-pvrrolidinvvlitio^-6-f(lR)-1-hvdroksietvvliT-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 15

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (CH3CN) Ämax nm: 323.

Valmistus 1 20 (2S.451-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1.1-dimetvvlipvrro-lidinium-fluorisulfonaatti 1-(1) (2S.4R)-l-t-butoksikarbonwli)-4-hvdroksi-2-pvrrolidiinikar- *: 25 bokswl ihappo 27,3 g natriumhydroksidia liuotettiin 380 ml:aan vettä ja tähän liuokseen lisättiin 3-5 °C:n lämpötilassa 85 g (2S,4R)-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa, ja sitten samassa lämpötilassa 570 ml 30 tetrahydrofuraania. Reaktioseokseen lisättiin 3-5 °C:n lämpötilassa liuos, joka sisälsi 141,5 g di-t-butoksikarbonaattia 190 ml:ssa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin 50-55 °C:n lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos jäähdytettiin ja sitten sen pH asetettiin alueella 3-4 olevaan arvoon lisäämällä väkevää 35 kloorivetyhappoa ja sitten ammoniumkloridia. Sitten seos uutettiin tetrahydrofuraanilla ja uute kuivattiin. Sitten liuotin poistettiin 52 92487 uutteesta tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 128 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 5 1,44 (9H, singletti); 1,96-2,45 (2H, multipletti); 2,36-2,72 (2H, multipletti); 4,24-4,66 (2H, multipletti); 5,04-5,60 (2H, leveä singletti).

10 1-(2) (2S.4R)-l-t-butoksikarbonvvli-2-karbamovvli-4-hvdroksipvrro- lidiini 58 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarbok-15 syylihappoa [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettiin 850 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania ja sitten tähän seokseen lisättiin -15 - -20 °C:n lämpötilassa 38,2 ml trietyyliamii-nia. Sitten tähän seokseen lisättiin -15 - -20 °C:ssa pisaroittain liuos, joka sisälsi 26,3 ml etyylikloroformaattia 240 ml:ssa kuivaa 20 tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 35 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seokseen lisättiin -15 - -20 °C:n lämpötilassa 258 ml ammoniumhydroksidin 28 w/v-% vesi-liuosta ja seoksen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa.

Sitten reaktioseokseen lisättiin ammoniumkloridia ja se uutettiin : 25 tämän jälkeen tetrahydrofuraanilla. Uute kuivattiin ja liuotin pois tettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena ollutta jäännöstä hierottiin dietyylieetterin kanssa kiteytymisen käynnistämiseksi. Kiteet otettiin talteen suodattamalla ja ne pestiin dietyylieetteril-lä, jolloin saatiin 49,7 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä 30 kiteinä, joiden sulamispiste oli 146-148 °C.

Il 92487 53

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisul-foksidi, 60 MHz) S ppm: 1,38 (9H, singletti); 1,65-2,24 (2H, multipletti); 5 3,00-3,66 (2H, multipletti); 3,76-4,49 (3H, multipletti); 6,78 (1H, leveä singletti); 7,23 (1H, leveä singletti).

10 1- (3) (2S.4R)-l-(t-butoksikarbonvvli)-2-karbamovvli-4-metaanisul- fonvvlioksipvrrolidiini 1,85 ml metaanisulfonyylikloridia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 5,0 g (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-karba-15 moyyli-4-hydroksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla] 250 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, minkä jälkeen siihen lisättiin 3,31 ml trietyyliamiinia. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin ajan, minkä jälkeen se kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla.

20 Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömäl lä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 9:1), jolloin saatiin 5,5 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä • 25 kiteinä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,43 (9H, singletti); 2.10- 2,68 (2H, multipletti); 30 3,12 (3H, singletti); 3.10- 3,40 (1H, leveä singletti); 3,73 (2H, dupletti, J = 4,0 Hz); 4,32 (1H, tripletti, J - 7,0 Hz); 5,26 (1H, tripletti, J - 4,0 Hz); 35 6,68 (1H, leveä singletti); 7,30 (1H, leveä singletti).

54 92487 1-(41) (2S,4R) -1-(t-butoksikarbonvvli) -2- karbamovvli-4 - (4-metoksi- bentsvvlitio)pyrrolidiini 330 mg natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-5 öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 1,18 g p-metoksibentsyylimerkaptaania 25 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia.

Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin 2,14 g (2S,4R)-1-(t-butoksi-karbonyyli)-2-karbamoyyli-4-metaanisulfonyylioksipyrrolidiinia [val-10 mistettu edellä vaiheessa (3) kuvatulla tavalla], ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla 15 alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti sili-kageelillä, jota eluoitiin sykloheksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 2:3), jolloin saatiin 1,94 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) & ppm: 1,43 (9H, singletti); 1,80-3,42 (5H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 25 4,18 (1H, tripletti, J = 7,0 Hz); 5,96 (1H, leveä singletti); 6,35 (1H, leveä singletti); 6,79, 7,21 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

30 1-(5) (2S,4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)pvrrolidiini 1,92 g (2S,4S)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksi-bentsyylitio)pyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettiin 25 ml:aan etyyliasetaattia ja tähän liuok-35 seen, jota jäähdytettiin jäissä, lisättiin 26,2 ml kloorivedyn 4N dioksaaniliuosta. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa I! 55 92487 2 tuntia ja huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen sen tekemiseksi heikosti happamaksi ja sitten se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivat-5 tiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,36 g otsikon mukaista yhdistettä jauheena, jonka sulamispiste oli 120-121 °C.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisul- 10 foksidi, 60 MHz) S ppm: 1,58-3,40 (7H, multipletti); 1,67 (2H, singletti); 1,78 (3H, singletti); 6,43 (1H, leveä singletti); 15 6,78 (7,22 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,31 (1H, leveä singletti).

1-(5a) (2S,4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)pvrrolidiini- hvdrokloridi 20 620 ml kloorivedyn 4N liuosta etyyliasetaatissa lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 91 g (2S,4S)-1-t-butoksikarbo-nyyli-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitiö)pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] 2 litrassa etyyliase-; 25 taattia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4,5 tuntia. Saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, ne pestiin dietyylieetterillä ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 63 g otsikon mukaista yhdistettä, jonka sulamispiste oli 192-195 °C.

30 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm-1: 1706, 1584, 1512.

56 92487

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,75-1,90 (1H, multipletti); 2,54-2,62 (1H, multipletti); 3,04-3,11 (1H, multipletti); 5 3,28-3,41 (2H, multipletti); 3.64 (2H, singletti); 3.65 (3H, singletti); 4,22 (1H, tripletti, J = 8,06 Hz); 6,80, 7,15 (4H;, A2B2, J = 8,79 Hz).

10 1-(6a) (2S,4S)- 2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-metyyli- pvrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 0,29 g natriumbikarbonaattia 3 ml:ssa vettä, ja 15 0,34 ml 35 % formaliinia, lisättiin pisaroittain tässä järjestyksessä jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 1 g edellä vaiheessa l-(5a) saatua yhdistettä 20 ml:ssa asetonitriiliä, ja tämän jälkeen seosta sekoitettiin 10 °C:n lämpötilassa 20 minuuttia. Sitten tähän seokseen, jota jäähdytettiin jäissä, lisättiin 0,25 g natriumsyano-20 boorihydridiä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Tähän seokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 0,5 ml etikkahapoa ja sitten sitä sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin 100 ml;11a etyyliasetaattia ja se pestiin peräkkäin natriumhydroksidin IN vesiliuoksen ja nat-. 25 riumkloridin kylläisen vesiliuoksen seoksella (tilavuussuhde 1:1) ja sitten natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella. Sitten orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pyl-väskromatografisesti silikageelillä (Wakogel C-100, Wako Junyaku), 30 jota eluoitiin kloroformin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde •# 95:5), jolloin saatiin 0,92 g otsikon mukaista yhdistettä. Tämän yh disteen sulamispiste, infrapunasäteilyn absorptiospektri ja ydinmagneettisen resonanssin spektri olivat samat kuin seuraavassa kohdassa l-(6) kuvatulla tavalla saadun yhdisteen tapauksessa.

II

35 92487 57 1-(6) (2S.45)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-metyyli - pyrrolidiini 0,07 ml metyylijodidia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka 5 sisälsi 0,6 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrro-lidiinia (valmistettu edellä vaiheessa (5) kuvatulla tavalla] liuotettuna 4,5 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia. Sitten tätä seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 5 minuuttia ja huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin 10 natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja sitten jäännös käsiteltiin pylväs-kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck, LiChroprep Si60, 15 koko B), jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 9:1), jolloin saatiin 252 mg otsikon mukaista yhdistettä kiteinä, joiden sulamispiste oli 113-114 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) uraax cm-1: 20 1636, 1609, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13> 60 MHz) S ppm: 1,58-3,36 (6H, multipletti); 2,35 (3H, singletti); . 25 3,68 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 5,95 (1H, leveä singletti); 6,84, 7,23 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,20 (1H, leveä singletti).

30 . 1-(7) (2S.4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1.l-dimetw- lipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 0,123 ml metyylisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuok-35 seen, joka sisälsi 320 mg (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyy-litio)-1-metyylipyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (6) tai 58 92487 (6a) kuvatulla tavalla] liuotettuna 7 ml:aan kuivaa metyleeniklori-dia. Sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 20 minuuttia ja huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös 5 pestiin useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja sitten se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 525 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 10 2,01-3,68 (5H, multipletti); 3.02 (3H, singletti); 3.03 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 15 4,07 (1H, duplettien dupletti, J = 8,43 & 7,70 Hz); 6,81, 7,16 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz).

Valmistus 2 20 (2S,4S)- 2-karbamovvli-4-(4 -metoksibentsvvlitio)-1-(2-fluorietvvli)-1- metvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 2- Q) (2S.4S) - 2 - karbamovvli - 4- (4-metoksibentsvvlitio) -1- (2-fluori- e twli) pyrrol idiini : 25 '« 0,4 ml l-bromi-2-fluorietaania, 3,83 g natriumjodidia ja 0,38 g natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,2 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrro-lidiiniä liuotettuna 12 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja tätä 30 seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia ja sitten • 40 eC:n lämpötilassa 20 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reak- tioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaa-35 tiliä. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti silikageelillä (Ka- 92487 59 tayma Chemicals Industries Co., Silikageeli 60K070). Etyyliasetaatilla eluoiduista fraktioista saatiin 838 mg otsikon mukaista yhdistettä jauheena, jonka sulamispiste oli 122-123 °C, 5 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1636, 1610, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,55-3,40 (8H, multipletti); 10 3,69 (2H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 4,47 (2H, triplettien dupletti, J - 47,0 & 6,0 Hz); 4,78 (1H, leveä singletti); 7,02 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 15 6,95-7,50 (1H, leveä singletti).

2- (2) (2S.4S)-2-karbamowli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-(2-fluori- etvvli)-1-metvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 20 0,17 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li uokseen, joka sisälsi 630 mg (2S.4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibent-syylitio)-1-(2-fluorietyyli)-pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettuna 12 ml:aan kuivaa metyleeni-kloridia. Seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 30 minuuttia ; 25 ja sitten huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 850 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

30 . Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,84-4,73 (10 H, multipletti); 3,18 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 35 3,68 (2H, singletti); 6,79-7,19 (4H, multipletti).

60 92487

Valmistus 3 (2S .4S) -1. l-dimetvvli-2-metvvlikarbaniovvli-4- (A-metoksibentswlitiol -pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 3 - (1) (2S . 4R) -1 - (t-butoksikarbonvvli) - 2-metvvlikarbamovvli-4-hvdr- oksipvrrolidiini 9,91 ml trietyyliamiinia lisättiin -40 °C:n läämpötilassa liuokseen, 10 joka sisälsi 15,03 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksi-2- pyrrolidiinikarboksyylihappoa liuotettuna 250 ml:aan kuivaa tetrahyd-rofuraania, ja tämän jälkeen saatuun liuokseen lisättiin -30 --40 °C:n lämpötilassa liuos, joka sisälsi 6,81 ml etyylikloroformaat-tia 30 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania. Sitten reaktioseosta sekoi-15 tettiin tässä samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Reaktioseokseen lisättiin sitten -20 °C:n lämpötilassa 16,82 ml metyyliamiinin 40 til.-%:sta vesiliuosta, ja sitten sen lämpötilan annettiin nousta huoneen lämpötilaan; reaktion annettiin jatkua vielä tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseokseen sekoitettiin pieni määrä 20 natriumkloridin vesiliuosta ja se uutettiin kolmasti etyyliasetaatilla. Yhdistetyt uutteet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 12,76 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

: 25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,44 (9H, singletti); 1,89-2,45 (2H, multipletti); 2,81 (3H, dupletti, J = 5,0 Hz); 30 3,23-3,71 (3H, multipletti); : 4,12-4,68 (2H, multipletti); 6,70 (1H, leveä singletti).

Il 92487 61 3-(2) (2S.4R)-l-( t-butoksikarbonvvli) -4-metaanisulfonvvlioksi-2 - metvvlikarbamovvllpvrrolidiint 7,11 ml trietyyliamiinia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, 5 joka sisälsi 11,29 g (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)- 2-metyylikarba-moyyli-4-hydroksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettuna 120 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja täten saatuun seokseen lisättiin 3,93 ml metaanisulfonyylikloridia ja sitä sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten 10 15 eC:n lämpötilassa 30 minuuttia. Sitten seos kaadettiin natrium- kloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, .jolloin saatiin 11,58 g otsikon mukaista yhdistettä värit-15 töminä kiteinä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,46 (9H, singletti); 2,00-2,85 (2H, multipletti); 20 2,81 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,03 (3H, singletti); 3,41-5,42 (4H, multipletti); 6,75 (1H, leveä singletti).

. 25 3-(3) (2S.4S)-1-(t-butoksikarbonvvli)-4-(4-metoksibentsvvlitio)- 2- metwlikarbamovvlipvrrolidiini 1,80 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 30 5,70 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 100 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 11,00 g (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-metaanisulfonyyli-oksi-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa 35 (2) kuvatulla tavalla] 80 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, ja sit ten seosta sekoitettiin 34 °C:n lämpötilassa 4,5 tuntia. Sitten reak- 62 92487 tioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatogra-5 fisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 4,35 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 10 1,42 (9H, singletti); 1,80-4,40 (6H, multipletti); 2,81 (3H, dupletti, J = 5,0 Hz); 3,70 (2H, singletti); 15 3,79 (3H, singletti); 6,39 (1H, leveä singletti); 6,87, 7,26 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

3- (4) (2S.4S)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-metvvlikarbamovvlipvrro- 20 lidiini 52,5 ml kloorivedyn 4N dioksaaniliuosta lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 4,00 g (2S ,45>)-1-(t-butoksikarbonyyli) - 4- (4-metoksibentsyylitio)-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia [valmis- : 25 tettu edellä vaiheessa (3) kuvatulla tavalla] liuotettuna 50 ml:aan • » etyyliasetaattia. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 2 tuntia ja huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen sen tekemiseksi heikosti happamaksi ja sitten se uutettiin etyyliasetaa- 30 tiliä. Vesikerros kyllästettiin ammoniumkloridilla ja uutettiin sit- ten tetrahydrofuraanilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaa-35 tin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 2,34

II

92487 63 g otsikon raukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 53-54 °C.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 5 1,42-3,89 (6H, multipletti); 2,74 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,66 (2H, singletti); 3,76 (3H, singletti); 6,79, 7,17 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 10 7,03-7,75 (2H, multipletti).

3 - (5) (2S,4S)-4 - ^-metoksibentsvvlitio^l-metvvli^-metvvlikarbamo- vvlipyrrolidiini 15 244 μΐ metyylijodidia ja 300 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäis sä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettuna 6 ml:aan kuivaa dimetyy-liformamidia. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin 20 ajan ja sen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jään-! 25 nös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoi- tiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1), jolloin saatiin 222 mg otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 82-84 °C.

30 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) vmax cm’1: ; 1655, 1512, 1251.

64 92487

Ydininagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5ppm: 1,45-3,91 (6H, multipletti); 2,31 (3H, singletti); 2,80 (3H, dupletti, J = 5,0 Hz); 5 3,66 (2H, singletti); 3,77 (3H, singletti); 6,81, 7,20 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz); 6,85-7,60 (1H, multipletti).

10 3 - (6) (2S .4S) -1, l-dimetyvli^-metyvlikarbamovvli^- (4-metoksibent- svvl itiö’) pyrrol idinium-f luorisulfaatti 280 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 210 mg (2S..4S)-4-(4-metoksibentsyylitio) - 1-metyy-15 li-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (5) kuvatulla tavalla] liuotettuna 30 ml:aan metyleenikloridia. Seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin 20 useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 281 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: : 25 1681, 1512, 1248.

Ydininagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,95-2,43 (2H, multipletti); 2,62 (3H, singletti); 30 2,61-3,88 (3H, multipletti); : 3,03 (3H, singletti); 3,10 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 35 4,12 (1H, tripletti, J - 8,06 Hz); 6,83, 7,12 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

II

» M 92487 οΓ)

Valmistus 4 i2S,451-1.l-dimetvvli-2-(N-N-dimetyvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibent-syvlitio)ovrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 A - (1) (2S.4R)-1- (t-butoksikarbonvvli) - 2 - (N. N-dimetvvlikarbamovvll^ - 4-hvdroksipvrrolidiini 3,84 ml trietyyliamiinia lisättiin -15 - -20 °C:n lämpötilassa liuok-10 seen, joka sisälsi 5,8 g (2S,4R)-1-(t-butolsikarbonyyli)-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa liuotettuna 85 ml:aan kuivaa tetra-hydrofuraania, ja sitten tuloksena olleeseen seokseen lisättiin tässä samassa lämpötilassa liuos, joka sisälsi 2,63 ml etyylikloroformaat-tia 25 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania. Sitten reaktioseosta sekoi-15 tettiin 2 tuntia, minkä jälkeen siihen lisättiin -20 - -25 °C:n lämpötilassa 19,75 ml dimetyyliamiinin 50 til.-%:sta vesiliuosta. Sitten seosta sekoitettiin 3 tuntia jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen sen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän ajanjakson kuluttua seos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 30 ml väkevää kloori-20 vetyhappoa ja jäätä, ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin pyl-väskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 9:1), jolloin saatiin 429 mg : 25 otsikon mukaista yhdistettä.

• 4

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,42 (9H, singletti); 1,86-2,34 (2H, multipletti); 30 2,58-2,95 (1H, multipletti); ''· 2,97 (3H, multipletti); 3,10 (3H, singletti); 3,43-3,74 (2H, multipletti); 4,36-5,00 (2H, multipletti).

35 66 92487 4-(2) f2S.4R)-l-(t-butoksikarbonvvli)- 2 -(N.N-dimetvvlikarbamovvli)- metaanisulfonvvlioksipvrrolidiini 297 μΐ metaanisulfonyylikloridia ja sitten 537 μΐ trietyyliamiinia 5 lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 993 mg (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-4-hyd-roksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettuna 20 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania. Seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa tunnin ajan ja sitten huoneen lämpötilassa 10 tunnin ajan. Tämän ajan päätyttyä seos jatkokäsiteltiin kohdassa "valmistus l-(3>" kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 1,05 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 8 ppm: 15 1,43 (9H, singletti); 2.15- 2,60 (2H, multipletti); 2,97 (3H, singletti); 3,07 (3H, singletti); 3,10, 3,13 (yhdessä 3H, kukin singletti); 20 3,83 (2H, dupletti, J = 4,0 Hz); 4,63-5,03 (1H, multipletti); 5.15- 5,46 (1H, multipletti).

4-(3) (2S,4S)-l-(t-butoksikarbamovvli)-2 -(N.N-dimetvvlikarbamovv- • 25 li)-4-(4-metoksibentsvvlitio)pyrrolidiini 151 mg natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 532 mg 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 10 ml:aan kuivaa dimetyy-30 liformamidia. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, minkä jälkeen seokseen lisättiin 1,05 g (2i>,4R)-1-(t-bu-toksikarbonyyli)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-4-metaanisulfonyyli-oksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla] . Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja 35 sitten 40 °C:ssa 6 tuntia. Tämän ajanjakson kuluttua reaktioseos

II

92487 67 käsiteltiin ja puhdistettiin kohdassa "valmistus l-(4)" kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 385 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 5 1690, 1660, 1605, 1585, 1515.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,35 ja 1,38 (9H, singletti); 1,55-3,37 (5H, multipletti); 10 2,93 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 3,77 (3H, singletti); 4,30-4,75 (1H, multipletti); 15 6,85, 7,25 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

4- (4) (2S.4S)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibentsvvli- tio)pvrrolidiini 20 1 ml kloorivedyn 4N dioksaaniliuosta lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 385 mg (2S,4S)-l-(t-butoksikarbonyyli)-2-(N,N-dimetyylikarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitiö)pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (3) kuvatulla tavalla] liuotettuna 1 ml:aan etyyliasetaattia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen läm-25 pötilassa 1,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen sen tekemiseksi heikosti happamaksi ja sitten se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa pai-30 neessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, . jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 1:2), jolloin saatiin 163 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 35 3300, 1640, 1605, 1590, 1510.

» 68 92487

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,21-1,78 (2H, multipletti); 2,09-3,98 (5H, multipletti); 2,94 (6H, singletti); 5 3,64 (2H, singletti); 3,74 (3H, singletti); 6,81, 7,21 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

4-(5) (2S.4S)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibentsvvli- 10 tio)-1-metvvlipvrrolidiini 41 μΐ metyylijodidia ja 84 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 163 mg (2S..4S.)-2-(N,N-dimetyy-likarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiiniä [valmistettu 15 edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettuna 1,5 mlraan kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläisen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja 20 kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kro-matografisesti Lobar-kolonnilla (Merck, LiChroprep Si60, koko A). Fraktioista, jotka oli eluoitu etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 3:1), saatiin 45 mg otsikon mukaista yhdistettä öljy- 25 nä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm-1: 1640, 1607, 1580, 1510.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,56-2,18 (2H, multipletti); 2,20-3,60 (4H, multipletti); 2,34 (3H, singletti); 2,96 (3H, singletti); 35 3,10 (3H, singletti); 3,70 (2H, singletti); 11 92487 69 3,78 (3H, singletti); 6,82, 7,22 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

4- (6) Metwli-1- (t-butoksikarbonvvlioksi) -4-hvdroksiprolinaatti 5 2.2 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraaliöljyssä) lisättiin 0-5 °C:n lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 1,15 g 1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksiproliinia liuotettuna 100 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpö- 10 tilassa 1,5 tuntia, minkä jälkeen se jäähdytettiin 0-5 °C:n lämpötilaan ja siihen lisättiin 3,42 ml metyylijodidia. Sitten reaktioseok-sen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos kaadettiin natriumkloridin kylläiseen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuok-15 sella ja kuivattiin, ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikagee-lillä, jota eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 1:1), jolloin saatiin 6,1 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

20

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm'1: 3430, 1750, 1700, 1670.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 25 1,41 (9H, singletti); 1,78-2,84 (3H, multipletti); 3,58 (2H, dupletti, J - 4,0 Hz); 3,71 (3H, singletti); 4,18-4,62 (2H, multipletti).

30 4-(7) (2S.4R)-1- ft-butoksikarbonwli-) - 4-metaanisulfonvvlioksi -2- metoksikarbonvvlipvrrolidiini 2.02 ml metaanisulfonyylikloridia ja sitten 3,65 ml trietyyliamiinia 35 lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 6,1 g l-(t- butoksikarbonyyli)-4-hydroksiprolinaattia [valmistettu edellä vai- 70 92487 heessa (6) kuvatulla tavalla] liuotettuna 120 ml:aan kuivaa tetrahyd-rofuraania. Sitten seosta sekoitettiin ensin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin ajan ja tämän jälkeen huoneen lämpötilassa tunnin ajan, minkä jälkeen se kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin 5 etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 8,13 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,47 (9H, singletti); 1,74-2,85 (2H, multipletti); 3,08 (3H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 15 3,81 (2H, dupletti, J - 4,0 Hz); 4,15-4,65 (1H, multipletti); 5,12-5,41 (1H, multipletti).

4-(8) (25.45^-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-^-metoksibentsvylitio)-2- 20 metoksikarbonvvlipvrrolidiini 1,11 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 3,51 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 60 millilitraan 25 kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin huoneen läm pötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin pisa-roittain liuos, joka sisälsi 8,13 g (2S,4S)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-metaanisulfonyylioksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (7) kuvatulla tavalla] 20 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, ja sit-30 ten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia ja sen , jälkeen 40 eC:n lämpötilassa 4 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä, kuivattiin ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikagee-35 Iillä, jota eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (tila-

II

92487 71 vuussuhde 15:1), jolloin saatiin 6,89 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm"1: 5 1745, 1690, 1605, 1580, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,40 (9H, singletti); 1,71-3,48 (5H, multipletti); 10 3,71 (3H, singletti); 3,78 (2H, singletti); 4,01-4,45 (1H, multipletti); 6,85, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

15 4- (9) (2S .4S1) -4- (ä-metoksibentsyylitio') -2-metoksikarbonvvliPvrro- lidiini 27,3 ml kloorivedyn 4N etyyliasetaattiliuosta lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 5,22 g (2S,4S)-1-(t-butoksikarbo-20 nyyli)-4-(4 -metoksibentsyylitio)- 2-metoksikarbonyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (8) kuvatulla tavalla] liuotettuna 14 ml:aan etyyliasetaattia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 tunti. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliase-25 taatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 3,3 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

30 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm"1: 3250, 1735, 1610, 1580, 1510.

92487 72

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDCl3, 60 MHz) S ppm: 1,56-3,32 (6H, multipletti); 3,67 (2H, singletti); 3,72 (3H, singletti); 5 3,78 (3H, singletti); 3,70-3,99 (1H, multipletti).

4-f10) (2S.4S)-4- (4-metoksibentsvvlitio) - 2-metoksikarbonvvli-1- metwlipvrrolidiini 10 1,18 g natriumbikarbonaattia ja 0,876 ml metyylijodidia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 3,3 g (2S,4S)-4-(4-me-toksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyylipyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (9) kuvatulla tavalla] liuotettuna 30 ml:aan kuivaa 15 dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläisen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistet-20 tiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväs-kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja bentseenin seoksella (tilavuussuhde 1:2), jolloin saatiin 968 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

25 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) t>max cm'1: 1740, 1730, 1605, 1580, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5 ppm: 1,64-3,34 (6H, multipletti; 30 2,37 (3H, singletti); . 3,70 (2H, singletti); 3,81 (3H, singletti); 3,88 (3H, singletti); 6,83, 7,23 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

35 4-(11) (2S.4S)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibentsvvli- tio)-1-metvvlipvrrolidiini 73 92487 1,92 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta lisättiin liuokseen, joka 5 sisälsi 378 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)- 2-metoksikarbonyyli-1-metyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä kohdassa (10) kuvatulla tavalla] liuotettuna 3,84 ml:aan metanolia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos neutraloitiin lisäämällä siihen 1,92 ml kloorivedyn IN vesiliuosta. Sit-10 ten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös kuivattiin, jolloin raakatuotteena saatiin (2S.4S)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia.

Tämä raakayhdiste suspendoitiin kokonaisuudessaan 7,3 ml:aan aseto-15 nitriiliä ja tähän suspensioon lisättiin 318 mg N,N'-karbonyylidi-imidatsolia, minkä jälkeen tuloksena ollutta seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa 1 tunti. Tämän ajanjakson päätyttyä seoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan ja sitten seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 559 mg dimetyyliamiinia 3,7 ml:ssa tetrahydrofuraa-20 nia. Seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa yön yli. Liuotin ja liiallinen dimetyyliamiini poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös 25 puhdistettiin Viite-esimerkissä 4-(5) kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 382 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

4-(12) (2S.4S)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibentsvvli- tio)-1.1-dimetvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 30 . 139 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li uokseen, joka sisälsi 190 mg (2S,4S)-2-(N,N-dimetyylikarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (5) tai (11) kuvatulla tavalla] liuotettuna 3,8 ml:aan 35 metyleenikloridia, ja tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 92487 74 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös pestiin moneen kertaan heksaanilla välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 356 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 60 MHz) δ ppm: 1,58-4,58 (12H, multipletti); 3,07 (6H, singletti); 3,84 (3H, singletti); 10 3,90 (2H, singletti); 6,90, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

Valmistus 5 15 (3S)-1.1-dimetyyli - 3-(4-metoksibentsvvlitio)pvrrolidiniuro-fluorisul- fonaatti 5-(11 (3R)-l·-t-butoksikarbonγvli-3-metaanisul·fonvvl·ioksipvrrol·i- diini 20 16,91 ml trietyyliamiinia ja 9,36 ml metaanisulfonyylikloridia lisättiin tässä järjestyksessä jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 25 g (3R)-l-t-butoksikarbonyyli-3-hydroksipyrrolidiinia liuotettuna 250 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitet-. 25 tiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen 15 °C:ssa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, 30 jolloin saatiin 3,10 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljy-• nä.

» 75 92487

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,48 (9H, singletti); 1,91-2,45 (2H, multipletti); 3,04 (3H, singletti); 5 3,26-3,82 (4H, multipletti); 6,1-6,44 (1H, multipletti).

5-(2) OS') -l-t-butoksikarbonvvli-3- (4-metoksibentsvvlitio)pvrro-lidiini 10 5,32 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 316,86 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 200 millilitraan kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin huoneen läm-15 pötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 31,0 g (3R)-l-t-butoksikarbonyyli-3-metaanisulfo-nyylioksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] 50 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia. Sitten seosta sekoitettiin 30 minuuttia jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen sen annettiin 20 seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, 25 jota eluoitiin heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 28,0 g otsikon mukaista yhdistettä vaalean ruskeana öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 30 1,46 (9H, singletti); . 1,50-2,35 (2H, multipletti); 2,81-3,88 (5H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 35 6,83, 7,27 (4H, A2BZ, J - 9,0 Hz.

5-(3) (3S)-3-(4-metoksibentsvvlitio)pyrrolidiini-hvdrokloridi 76 92487 106 ml kloorivedyn 4N etyyliasetaattiliuosta lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 27,50 g (3R)-1-t-butoksikarbonyyli-5 3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla] liuotettuna 100 ml:aan etyyliasetaattia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten 25 °C:ssa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin 200 ml:11a di-isopropyylieetteriä ja saostuneet kiteet otettiin tal-10 teen suodattamalla, jolloin saatiin 20,84 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 125-126 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm’1: 1510, 1246, 1174.

15

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDCl3, 60 MHz) S ppm: 1,52-2,53 (2H, multipletti); 2,91-3,70 (5H, multipletti); 3,63 (2H, singletti); 20 3,67 (3H, singletti); 6,80, 7,16 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

5- (4) (3S)-3-(4-metoksibetnsvvlitio)-1-metvvlipvrrolidiini . 25 750 mg (3S)-3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu neut- raloimalla 900 mg edellä kohdassa (3) kuvatulla tavalla valmistettua (3S)-3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiini-hydrokloridia natriumbikarbonaatilla] liuotettiin 15 ml:aan kuivaa asetonitriiliä ja tähän liuokseen lisättiin 1,44 ml formaldehydin 35 til.-% vesiliuosta.

30 Reaktioseosta sekoitettiin sitten 15 minuuttia, minkä jälkeen se neutraloitiin lisäämällä etikkahappoa; sitä sekoitettiin edelleen 2,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin 200 ml:aan etyyliasetaattia ja seos pestiin kaiiumhydroksidin 2N vesiluoksella ja natriumkloridin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin ka-35 liumkarbonaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikagee-

II

92487 77

Iillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 3:1), jolloin saatiin 349 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

5 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,40-3,49 (7H, multipletti); 2,33 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 10 6,86, 7,25 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

5 - (5) (3S)-1.1-dimetyyli - 3 -(4-metoksibentsvvlitio)pvrrolidinium- fluorisulfonaatti 15 118 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li uokseen, joka sisälsi 340 mg (3S)-3-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyy-lipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettuna 20 ml:aan metyleenikloridia. Sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpö-20 tilassa 3,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 500 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä j auheena.

. 25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,86-2,05 (1H, multipletti); 2,34-2,56 (1H, multipletti); 2,90 (3H, singletti); 30 3,01 (3H, singletti); ·, 2,98-3,73 (5H, multipletti); 3,65 (3H, singletti); 3,67 (2H, singletti); 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,62 Hz).

35 1.1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)piperidinium-fluorisulfonaatti 78 92487

Valmistus 6 5 6- (1) 4-metaanisulfonvvlioksi-l-metvvlipiperidiini 13,3 ml trietyyliamiinia ja sitten 7,4 ml metaanisulfonyyliklorisia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 10 g 4-hydrok-si-l-metyylipiperidiiniä liuotettuna 100 ml:aan kuivaa tetrahydrofu-10 raania. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 2 tuntia ja sitten huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia, minkä jälkeen se kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alenne-15 tussa paineessa, jolloin saatiin 12,74 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,74-2,90 (8H, multipletti); 20 2,28 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 4,73 (1H, multipletti).

6-(2) 4-(4-metoksibentsvvlitio)-l-metvvlipiperidiini . 25 10,9 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettiin 55 ml;aan kuivaa dimetyyliformamidia ja tähän liuokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 3,4 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttinen suspensio mineraaliöljyssä). Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia.

30 Tämän ajanjakson päätyttyä seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi : 12,6 mg 4-metaanisulfonyylioksi-l-metyylipiperidiiniä 63 ml:ssa kui vaa dimetyyliformamidia, ja sitten sen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natrium-35 kloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa

II

92487 79 ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota elu-oitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 1:4), jolloin saatiin 9,01 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

5 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,40-3,05 (9H, multipletti); 2,23 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 3.78 (3H, singletti); 10 6,82, 7,23 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

6-(3) 1.1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)piperidinium-fluori- sulfonaatti 15 2,9 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li uokseen, joka sisälsi 8,95 g 4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipipe-ridiiniä liuotettuna 300 ml:aan kuivaa metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 20 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä 20 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 12,76 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

; 25 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,75-1,93 (2H, multipletti); 2,02-2,15 (2H, multipletti); 2,70-2,84 (2H, multipletti); 3,05 (3H, singletti); 30 3,06 (3H, singletti); • 3,24-3,97 (4H, multipletti); 3,74 (3H, singletti); 3.78 (2H, singletti); 6,88, 7,26 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

35 80 92487

Valmistus 7 (2S.4S)-2- (N.N-dimetvvlikarbamovvli) -1-etvvli-l-metyyli-4- (4-metoksi-bentsvvlitiö)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 7-(1) (2S.4S)-1-etvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)- 2-metoksikarbon- vvljpvrro1idinium·fluorisulfonaatti 1,2 g (2S,4S)-l-etyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyyli-10 pyrrolidiinia [valmistettu kohdassa "valmistus 4-(9)" kuvatulla tavalla] liuotettiin 12 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja tuloksena saatuun liuokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 358 mg natriumbikarbonaattia ja 0,4 ml etyylijodidia. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 6 tuntia ja sen jälkeen 45-50 °C:n lämpötilassa 3 tun-15 tia. Sitten se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla.

Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoi-20 tiin etyyliasetaatin ja bentseenin seoksella (tilavuussuhde 1:4), jolloin saatiin 904 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm"1: 1740, 1615, 1590, 1515.

: 25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 8 ppm: 1,03 (3H, tripletti, J « 7,0 Hz); 2,72-3,43 (8H, multipletti); 3,70 (5H, singletti); 30 3,78 (3H, singletti); : 6,84, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

Il 92487 81 7-(2) (2S.4S)-2- (N.N-dimetyvlikarbamovvli) -1-etvvli- 4- (4-metoksi- bentswli tio') pyrrol idi ini 883 mg (2S,4]>)-l-etyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbon-5 yylipyrrolidiinia liuotettiin 8,6 ml:aan metanolia ja tällä tavalla saatuun liuokseen lisättiin 4,3 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 2 tuntia, minkä jälkeen se neutraloitiin lisäämällä 4,3 ml kloorivetyhapon IN vesiliuosta. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa, jolloin 10 saatiin raakatuote.

Tämä raakayhdiste suspendoitiin 18 ml.aan kuivaa asetonitriiliä ja tähän suspensioon lisättiin 694 mg N,N'-karbodi-imidatsolia. Sitten tuloksena ollutta seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa 1 tunti, 15 minkä jälkeen seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 1,89 ml dimetyy-liamiinia 10 ml:ssa tetrahydrofuraania. Seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa yön yli, minkä jälkeen se väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesi-liuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin sitten vedet-20 tömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck, LiChroprep Si60, koko B) . Otsikon mukaista yhdistettä saatiin öljynä fraktioista, jotka oli eluoitu etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1).

25

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm’1: 1640, 1610, 1585, 1515.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 30 1,01 (3H, tripletti, J = 7,0 Hz); : 1,57-3,73 (8H, multipletti); 2,91 (3H, singletti); 3,16 (3H, singletti); 3,70 (2H, singletti); 35 3,78 (3H, singletti); 6,83, 7,27 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

92487 82 7-(3) (2S.4S)-2-fN.N-dimetvvlikarbamovvli) -1-etvvli-1-metvvli-4-(4- metoksibentsvvlitiö)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 128 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 5 438 mg (2S,4S)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-l-etyyli-4-(4-metoksi- bentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 10 ml:aan metyleenikloridia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia.

Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä 10 välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,12 (3H, tripletti, J = 7,15 Hz); 15 1,96-2,08 (1H, multipletti); 2,62-3,51 (6H, multipletti); 2,79 (3H, singletti); 2,93 (3H, singletti); 2,95 (3H, singletti); 20 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 4,55-4,60 (1H, multipletti).

Valmistus 8 : 25 (25.45) -1,1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2 -(4-morfolinokar-bonwli)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 8 - (1) (2S ,4S) - 4- (4-metoksibentsvvlitio) -2-metoksikarbonvvli-l-me- 30 tvvlipvrrolidiini 3,43 ml 35 % formaliinia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,25 g (25.45) -4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyylipyrrolidiinia liuotettuna 42 ml:aan asetonitriiliä. Tämän jälkeen 804 mg natrium- 35 syanoboorihydridiä jaettiin kolmeen osaan ja lisättiin tähän seokseen 5 minuutin aikana. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 92487 83 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos jäähdytettiin, siihen lisättiin 1,3 ml etikkahappoa ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Sitten reaktioseokseen lisättiin 40 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta ja natriumkloridin vesiliuosta, 5 minkä jälkeen se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natrium-kloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kohdassa "valmistus 4-(10)" kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 1,31 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

10 Tämän yhdisteen infrapunasäteilyn spektri, ydinmagneettisen resonanssin spektri ja ohutkerroskromatogrammi olivat samanlaiset kuin kohdassa "Valmistus 4-(10)" valmistetun yhdisteen tapauksessa.

8-(2) C2S.4S)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-metyyli-2-(4-morfolino- 15 karbonvvli)pyrrolidiini 5,32 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,31 g (2S.4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyyli-1-metyylipyrrolidiinia liuotettuna 11 ml:aan metanolia, ja seosta 20 sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos neutraloitiin 1,92 ml:11a kloorivetyhapon IN vesiliuosta. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös kuivattiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 1,5 g (2S,4S)-2-karboksi-4-(4-metok-. 25 sibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia.

500 mg tätä raakaa (2S.4S)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia suspendoitiin 10 ml:aan asetonitriiliä ja tähän suspensioon lisättiin 278 mg N,N'-karbonyylidi-imidatsolia, minkä 30 jälkeen tuloksena ollutta seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa : 1 tunti. Tämän ajanjakson päätyttyä seoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan, minkä jälkeen lisättiin 187 μΐ morfoliinia. Sitten reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja sen annettiin tämän jälkeen seisoa yön yli. Liuotin ja liiallinen morfoliini pois-35 tettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute 92487 84 kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskromatografi-sesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck, LiChroprep Si60, koko B), ja otsikon mukaista yhdistettä saatiin öljynä fraktioista, jotka oli 5 eluoitu sykloheksaanin, etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuus suhde 3:1:1).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1639, 1610, 1511.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,50-3,33 (6H, multipletti); 2,31 (3H, singletti); 3.64 (8H, leveä singletti); 15 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,82, 7,21 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

8-(3) (2S,4S)-1,1-dimetvvli-(4-metoksibentsvvlitio)-2-(4-morfolino- 20 karbonvvli)Dvrrolidinium-fluorisulfonaatti 106 μ\ metyylifluorisulfonaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 392 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-(4-morfolino-karbonyyli)pyrrolidiinia liuotettuna 8 ml:aan metyleenikloridia, ja : 25 tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajan jakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä välillä de-kantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 446 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

30 • Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,80-2,03 (1H, multipletti); 2,67-3,90 (12H, multipletti); 2,98 (3H, singletti); 35 3,07 (3H, singletti); 3.65 (3H, singletti); 92487 85 3,68 (2H, singletti); 4,61 (1H, duplettien dupletti, J = 8,06, 6,23 Hz); 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

5 Valmistus 9 (2S.4S)-1. l-dimetvvli-4- (4-metoksibentsvvlitio) -2 - (1-pvrrolidinokar-bonvvli)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 10 9-(1) (25.481-4 - (4-metoksibentsvvlitio") -1 -metvvli- 2- (1-pyrrolidino- karbonvvli)pyrrolidiini

Edellä kohdassa "valmistus 8-(2)" kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 500 mg raakaa (2S,4S)-2-karbooksi-4-(4-metoksibentsyy-15 litio)-1-metyylipyrrolidiinia [valmistettu kohdassa "valmistus 8-(2)" kuvatulla tavalla], 278 mg N,N'-karbonyylidi-imidatsolia ja 178 μΐ pyrrolidiinia morfoliinin sijasta, jolloin saatiin 440 mg otsikon mukaista yhdistettä.

20 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) Ämax cm'1: 1640, 1611, 1511, 1444.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,58-2,78 (6H, multipletti); 25 2,30 (3H, singletti); 2,90-3,80 (8H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,84, 7,24 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

30 ·' 9-(2) (2S.4S1-1.1-dimetvvli-4- (4-metoksibentsvvlitio) -2 - (1-pvrro- lidinokarbonwl i) pyrrol idinium - f luorisul f onaatti

Kohdassa "valmistus 8-(3)" kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen 35 kuitenkin 418 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-(1- » 86 92487 pyrrolidinokarbonyyli)pyrrolidiinia ja 118 μΐ metyylifluorisulfonaat-tia, jolloin saatiin 472 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 5 1,68-1,85 (4H, multipletti); 1,94-2,10 (1H, multipletti); 2,69-3,85 (7H, multipletti); 2,99 (3H, singletti); 3,03 (3H, singletti); 10 3,65 (3H, singletti); 3,67 (2H, singletti); 4,41 (1H, duplettien dupletti, J - 8,06, 6,60 Hz); 6,81, 7,17 (4H, A2B2, J = 8,62 Hz).

15 Valmistus 10 (2S,4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-etvvli-l-metvvli-pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 20 10-(1) (2S,4S)-2-karbamovvli-l-etvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)- pvrrolidiini 0,362 ml etyylijodidia ja 315 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1000 mg (2S,4S)-2-karba-25 moyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 10 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätytttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin 30 vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja sitten liuotin poistettiin tis-• laamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskromato- grafisesti silikageelillä (Katayama Chemicals Co., Silica Gel 60K070). 560 mg otsikon mukaista yhdistettä saatiin kiteinä, joiden sulamispiste oli 124-125 °C:n lämpötilassa, etyyliasetaatilla eluoi-35 duista fraktioista.

li 92487 87

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm-1: 1632, 1509.

Ydirunagneettisen resonanssin spektri (CDC13 + D20, 270 MHz) S ppm: 5 1,08 (3H, tripletti, J = 7,33 Hz); 1,86-1,96 (1H, multipletti); 2,38-2,76 (4H, multipletti); 2,99-3,18 (3H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 10 3,80 (3H, singletti); 6,84, 7,21 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz).

10-(2) (2S.4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-etvvli-1- metvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 15 0,43 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,44 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibent-syylitio)-1-etyylipyrrolidiinia liuotettuna 30 ml;aan kuivaa mety-leenikloridia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilas-20 sa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyy-lieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,0 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

25 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm"1: 1698, 1610, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 8 ppm: 1,12 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 30 2,06-2,18 (1H, multipletti); • 2,63-3,83 (6H, multipletti); 2,92 (3H, singletti); 3.64 (3H, singletti); 3.65 (2H, singletti); 35 4,02-4,09 (1H, multipletti); 6,82, 7,16 (4H, A2B2, J - 8,42 Hz).

88 92487

Valmistus 11 (2S,4S) - 2-etvvlikarbamovvli-1-etyyli -1-metyyli-4-(4-metoksibentsvvli-tio)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 11-(11) C2S.4S)-l-tbutoksikarbonvvli-2-etvvlikarbamovvli-l-etvvli- 4-hvdroksipvrrolidiini 15,25 ml trietyyliamiinia ja sitten liuos, joka sisälsi 10,48 ml 10 etyylikloroformaattia 50 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin -25 °C:n lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 23,13 g (2S,4S)-l-t-butoksikarbonyyli-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa liuotettuna 350 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja seosta sekoitettiin sitten samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä 15 seokseen lisättiin -22 °C:n lämpötilassa etyyliamiinin 70 til.-% vesiliuosta, reaktiolämpötilan annettiin nousta vähitellen ja reaktio päätettiin, kun lämpötila oli noussut arvoon 10 °C. Sitten reak-tioseos sekoitettiin pieneen määrään natriumkloridin vesiliuosta, minkä jälkeen se uutettiin kolmeen kertaan etyyliasetaatilla. Yhdis-20 tetyt uutteet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 23,60 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

25 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,10 (3H, tripletti, J = 7,5 Hz); 1,44 (9H, singletti); 1,80-4,65 (10H, multipletti); 6,64 (1H, leveä singletti).

30 * 11- (2) (2S,4S)-l-t-butoksikarbonvvli-2-etvvlikarbamovvli-4-metaani- sulfonvvlioksipvrrolidiini 13,81 ml trietyyliamiinia ja sitten 7,65 ml metaanisulfonyylikloridia 35 lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 23,20 g (2S..4S)-1-t-butoksikarbonyyli-2-etyylilarbamoyyli-4-hydroksipyrroli- li 92487 89 diinia liuotettuna 250 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 30 minuuttia. Reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin ve-5 dettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 26,54 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 138-140 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 10 1675, 1548, 1348.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,12 (3H, tripletti, J = 7,5 Hz); 1,48 (9H, singletti); 15 2,05-4,59 (7H, multipletti); 3,03 (3H, singletti); 5,07-5,43 (1H, multipletti); 6,58 (1H, leveä singletti).

20 11-(3) (2S,4S)-l-t-butoksikarbonvvli-2-etvvlikarbamovvli-4-(4-me- toksibentsvvlitio)ovrrolidiini 3,57 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali -öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 25 11,31 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 150 millilitraan kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Sitten seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 26,0 g (2S.4S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-etyylikarbamoyyli-4-me-taanisulfonyylioksipyrrolidiinia 100 ml:ssa kuivaa dimetyyliformami-30 dia, ja tämän jälkeen koko seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa t * 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natrium kloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alenne-35 tussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikagee-lillä, jota eluoitiin heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (tila- 90 92487 vuussuhde 1:1), jolloin saatiin 17,0 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 92-94 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) Amax cm'1: 5 1700, 1655, 1406.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,10 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,43 (9H, singletti); 10 1,85-3,96 (7H, multipletti); 3,69 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 4,18 (1H, tripletti, J = 7,5 Hz); 6,35 (1H, leveä singletti); 15 6,86, 7,24 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

11-(4) (2S ,48) -2-etvvlikarbamovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio)pvrro- lidiini 20 41,19 ml kloorivedyn 4N etyyliasetaattiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 13,00 g (2S,4S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-etyylikarbamoyy-li-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 100 ml:aan etyyliasetaattia, ja tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natrium-25 bikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatil-la. Vesikerros kyllästettiin ammoniumkloridilla ja uutettiin tetra-hydrofuraanilla. Yhdistetyt uutteet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsi-30 teltiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 87:13), jolloin saatiin 8,00 g otsikon mukaista yhdistettä vaalean ruskeina kiteinä, joiden sulamispiste oli 67-68 °C.

n 35 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1649, 1512, 1240.

92487 91

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,10 (3H, tripletti, J = 7,5 Hz); 1,50-2,20 (1H, raultipletti); 2,16 (1H, singletti); 5 2,23-3,96 (7H, multipletti); 3.69 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,86, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,53 (1H, leveä singletti).

10 11-(5) (2S ,4S) -2-etvvlikarbamovvli-1 - etyyli-4- (4-metoksibentswli- tio)pvrrolidiini 301 μΐ etyylijodidia ja 314 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä 15 jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,00 g (2S,4S)-2-etyylikarba-moyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 8 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla.

20 Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, minkä jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 982 mg otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sula-25 mispiste oli 60-61 °C.

♦

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm’1: 1651, 1512, 1252.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 30 1,06 (3H, tripletti, J = 7,5 Hz); ' 1,14 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,56-3,90 (10H, multipletti); 3.69 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 35 6,82, 7,20 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz); 7,30 (1H, leveä singletti).

92487 92 11- (6) (25.451) -2-etvvlikarbaniovvli- 1-etvvli- 1-netvvli-4- (4-metoksi-bentswlitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 233 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li-5 uokseen, joka sisälsi 910 mg (2S.4S)-2-etyylikarbamoyyli-l-etyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 35 ml:aan kuivaa metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamal-10 la alennetussa paineessa ja jäännös pestiin dietyylieetterillä dekan-toiden ja kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,20 g otsikon mukaista yhdistettä vaalean ruskeana öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 15 1680, 1513, 1250.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 60 MHz) δ ppm: 0,93 (3H, tripletti, J = 7,33 Hz); 1,12 (3H, tripletti, J = 7,33 Hz); 20 1,95-2,26 (1H, multipletti); 2,56-4,50 (9H, multipletti); 2,88 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 25 6,83, 7,18 (4H, A2B2, J = 8,80 Hz).

Valmistus 12 (2S.4S)-1-etvvli-1-metyyli - 2-metvvlikarbamovvli-1-etvvli-4-(4-metok-30 sibentsvvlitiö)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 12- (1) (2S.4S)-l-etvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)- 2-metvvlikarbamo-vvlipvrrolidiini 35 0,71 g etyylijodidia ja 742 mg natriumbikarbonaattia lisättiin liuok seen, joka sisälsi 2,25 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metyy- 93 t 92487 likarbamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 20 ml:aan kuivaa dimetyylifor-mamidia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 1 tunnin ajan ja sitten huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutet-5 tiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, minkä jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti etyyliasetaatilla eluoiden, jolloin saatiin 1,87 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joi-10 den sulamispiste oli 68-70 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm’1: 1657, 1511, 1252.

15 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,02 (3H, tripletti, J - 7,0 Hz); 1,58-3,91 (8H, multipletti); 2,80 (3H, dupletti, J = 5,0 Hz); 3,67 (2H, singletti); 20 3,78 (3H, singletti); 6,85, 7,21 (AH, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,10-7,60 (1H, leveä singletti).

12-(2) (2S.4S)-1-etvvli-l-metyyli-2-metvvlikarbamovvli-A-(A-metok- · 25 sibentsvvlitio)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 187 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 700 mg (2S,AS)-1-etyyli-A-(A-metoksibentsyy-litio)-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 30 ml:aan kuivaa 30 metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieet-terillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 950 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljy-35 nä.

94 92487

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm"1: 1683, 1565, 1280.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 60 MHz) S ppm: 5 1,12 (3H, tripletti, J = 7,33 Hz); 2,20-2,20 (1H, multipletti); 2,58-4,50 (7H, multipletti); 2,60 (3H, singletti); 2,87 (3H, singletti); 10 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J = 8,80 Hz).

Valmistus 13 15 (2S,4S)-1,1-dimetvvli-2-etvvlikarbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 13-(1) (2S.4S)-2-etYvlikarbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1- 20 metvvlipvrrolidiini 3,43 ml 35 % formaliinia ja 804 mg natriumsyanoboorihydridiä lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,36 g (2S,4S)-2-etyylikarbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 42 ml:aan asetonitrii-• 25 liä, ja sitten reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseokseen lisättiin nat-riumhydroksidin IN vesiliuosta ja seos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaa-30 tiliä ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jään nös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoi-tiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 1,93 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä.

i 35 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) uraax cm'1: 1655, 1513, 1252.

11 92487 95

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5 ppm: 1,12 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,50-2,20 (1H, multipletti); 2,31 (3H, singletti); 5 2,36-3,88 (7H, multipletti); 3.67 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,83, 7,21 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,20 (1H, leveä singletti).

10 13-(2) (2S,4S)-1,l-dimetvvli-2-etvvlikarbamovvli-4-(4-metoksibents- vvlitiö)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 264 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liu-15 okseen, joka sisälsi 987 mg (2S,4S)-2-etyylikarbamoyyli-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia liuotettuna 40 ml:aan kuivaa me-tyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieet-20 terillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,332 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (CHC13) umax cm-1: •j 25 1680, 1510, 1240.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) & ppm: 0,94 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 1,95-2,20 (1H, multipletti); 2,60-2,98 (1H, multipletti); 30 2,96 (3H, singletti); * 3,00 (3H, singletti); 3,02-3,70 (5H, multipletti); 3,64 (3H, singletti); 3.67 (2H, singletti); 35 3,97 (1H, tripletti, J = 7,88 Hz); 6,81, 7,01 (4H, A2B2, J = 8,80 Hz).

» 96 92487

Valmistus 14 (2S)-1.l-dimetyyli-4-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 14-(1) (2S) -1-t-butoksikarbonvvli- 2 -(4-metoksibentsvvlitiometvvli)- pvrrolidiini

Esimerkissä 5-(2) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 10 12,16 g (2S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-metaanisulfonyylioksimetyyli- pyrrolidiinia [valmistettu metaanisulfonyloimalla (2S)-1-t-butoksi-karbonyyli-2-hydroksimetyylipyrrolidiinia], 7,3 ml 4-metoksibents-yylimerkaptaania ja 2,3 g natriumhydridiä (55 w/w-% suspensio mineraaliöljyssä) 100 ml:ssa kuivaa dimetyyyliformamidia, jolloin saatiin 15 13,93 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1690, 1615, 1590, 1518.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,20-4,15 (9H, multipletti); 1,45 (9H, singletti); 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); •i 25 6,82, 7,25 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

14-(2) (2S) -2- (4-metoksibentswlitiometvvli)pvrrolidiini

Esimerkissä 5-(3) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 30 5 g (2S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-(4-metoksibentsyylitiometyyli)pyrro- lidiinia , jolloin saatiin 2,51 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 124-126,5 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (Nujol- tavaramerkki) cm'1: 35 1615, 1585, 1520.

97 92487

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 8 ppm: 1,45-2,20 (4H, multipletti); 2,25-3,96 (6H, multipletti); 3,76 (5H, singletti); 5 6,85 & 7,32 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz).

14-(3) (2S)-2-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)-l-metwlipyrrolidiini

Esimerkissä 5-(4) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 10 2 g (2S)-2-(4-metoksibentsyylitiometyyli)pyrrolidiinia, 35 % forma liinia ja 848 mg natriumsyanoboorihydridiä siten, että läsnä oli myös 44 ml asetonitriiliä, jolloin saatiin 883 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

15

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm’1: 1610, 1585, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 20 1,40-3,22 (9H, multipletti); 2,26 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,83, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

25 14- (4) (2S) -1. l-dimetvvli-2- (4-metoksibentsvvlitiometvvli’)Dvrro- lidinium-fluorisulfonaatti

Esimerkissä 5-(5) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 30 740 mg (2S)-2-(4-metoksibentsyylitiometyyli)-1-metyylipyrrolidiinia ja 243 μΐ metyylifluorisulfonaattia siten, että läsnä on myös 22 ml metyleenikloridia, jolloin saatiin 1,0 g otsikon mukaista yhdistettä kiteinä, joiden sulamispiste oli 150-153 °C.

35 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (Nujol) umax cm’1: 1610, 1585, 1518.

98 92487

Ydiranagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,60-2,02 (3H, multipletti); 2,26-3,51 (6H, multipletti); 2.64 (3H, singletti); 5 2,85 (3H, singletti); 3.64 (5H, singletti); 6,82, 7,19 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz).

Valmistus 15 10 (2R)-1. l-dimetvvli-4- (4-metoksibentsvvlitiometvvli)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 15-(1) Esimerkeissä 14-(1), (2), (3) ja (4) kuvatut menetelmät 15 toistettiin käyttäen kuitenkin lähtömateriaalina (2R)-1-t-butoksi-karbonyyli-2-hydroksimetyylipyrrolidiinia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) uraax cm'1: 20 1610, 1585, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,64-2,00 (3H, multipletti); 2,25-3,48 (6H, multipletti); • 25 2,64 (3H, singletti); 2,85 (3H, singletti); 3,,64 (5H, singletti); 6,28, 7,18 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz).

30

II

92487 99

Valmistus 16 (25.451) - 2 -karbamovvli-1- (2-hvdroksietvvli) - 4- (4-metoksibentsvvlitio) -1-metvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 16-(1) (2S,4S) -2-karbamovvli-1- (2-hvdroksietvvli1) - 4- (4-metoksibent- swlitio)Dvrrolidiini 0,175 ml 2-jodietanolia ja 0,16 g natriumbikarbonaattia lisättiin 10 jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 0,5 g (2S,4S)-2-karbamo-yyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu esimerkissä l-(5) kuvatulla tavalla] liuotettuna 5 ml:aan kuivaa dimetyyliforma-midia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa tunnin ajan, huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia ja 40 °C:n lämpötilassa 15 19 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläi seen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin nat-riumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti silikageelillä 20 (Wako Pure Chemicals, Ltd.; Wako Gel C-100). 0,465 g otsikon mukaista yhdistettä saatiin kiteinä fraktioista, jotka eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 95:5).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: • 25 1625, 1510, 1243.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,69 (1H, leveä singletti); 1,92-1,99 (1H, multipletti); 30 2,55-2,72 (3H, multipletti); 2,82-2,92 (1H, multipletti); 3,12-3,18 (3H, multipletti); 3,67 (2H, tripletti, J = 4,03 Hz); 3,71 (2H, singletti); 35 3,80 (3H, singletti); 5,42 (1H, leveä singletti); 92487 100 6.85, 7,21 (4H, A2B2, J = 8,8 Hz); 7,35 (1H, leveä singletti) .

16-(2) (2S.4S)-2-karbamovvli-1-(2-hvdroksietvvli)-4-(4-metoksibent- 5 swlitio) -1-metvvlipvrrolidiniuni-fluorisulfonaatti 0,108 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin pisaroittain huoneen lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 0,38 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-l-(2-hydroksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 10 7,5 ml:aan kuivaa metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin die-tyylieetterillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,396 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

15

Valmistus 17 3-(4-metoksibentsvvlitio)-l-metvvlikinuklidinium-fluorisulfonaatti 20 17-(1) 3-(4-metoksibentsvvlitio)kinuklidiini

Esimerkissä 6-(2) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 3,7 g 3-metaanisulfonyylioksikinuklidiinia (valmistettu metaanisul-fonyloimalla 3-kinuklidinolia), 3,0 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania i 25 ja 0,942 g natriumhydridiä (55 w/w-% suspensio mineraaliöljyssä), jolloin saatiin 1,74 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm"1: 1620, 1590, 1510, 1247.

30

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,02-2,31 (5H, multipletti); 2,33-3,41 (7J, multipletti); 3,67 (2H, singletti); 35 3,82 (3H, singletti); 6.86, 7,26 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

92487 101 17- (2)_3-(4-metoksibentsyylitio)-l-metwlikinuklidinium-fluorisul- fonaatti

Esimerkissä 6-(3) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 5 756 mg 3-(4-metoksibentsyylitio)kinuklidiinia ja 271 μΐ metyylifluo- risulfonaattia site, että läsnä oli myös 5 ml metyleenikloridia, jolloin saatiin 1,078 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 10 1609, 1590, 1512, 1490, 1467,

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,63-2,16 (5H, multipletti); 2,70 (3H, singletti); 15 2,76-3,77 (7H, multipletti); 3,63 (5H, singletti); 6,80, 7,15 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

Valmistus 18 20 (6S . 8S) -1.4-dimetvvli-8 - (4-metoksibentsvvlitio) -5 - okso-4-atsa-1-as-toniabisvkloi4.3.Olnonaani-fluorisulfonaatti 18- (1) (2S,4S)-1-(2-hvdroksietvvli)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-·: 25 metvylikarbamoyvlipvrrolidiini 934 μΐ 2-jodietanolia ja 1,01 g natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,80 g (2S,4S)-4-(4-metok-sibentsyylitio)-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 18 30 ml :aan kuivaa dimetyyliforrnamidia, ja sitten seosta sekoitettiin 40 « eC:n lämpötilassa 24 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaa-35 maila alennetussa paineessa, ja jäännös puhdistettiin kromatografi-sesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin 102 92487 seoksella (tilavuussuhde 15:1), jolloin saatiin 2,22 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 88- 89,5 "C.

5 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm *: 1637, 1510, 1240.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) 6 ppm: 1,66-2,05 (2H, multipletti); 10 2,50-2,91 (4H, multipletti); 2,82 (3H, dupletti, J = 4,77 Hz); 3,07-3,21 (3H, multipletti); 3,56-3,75 (2H, multipletti); 3,69 (2H, singletti); 15 3,80 (3H, singletti); 6,84, 7,20 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz); 7,42 (1H, leveä singletti).

18-(2) (2S.4S)-1-^-metaanisulfonyvlioksietyvli)-4-(4-metoksibents- 20 vvlitio)-2-metvvlikarbamovvlipvrrolidiini 1,06 ml trietyyliamiinia ja sitten 584 μΐ metaanisulfonyylikloridia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,13 g (2S,4S)-1-(2-hydroksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)- 2-metyylikar-: 25 bamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 45 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraa- nia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja ne pestiin tetrahydrofuraanilla. Suodos ja pesuli-uokset yhdistettiin ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla 30 ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,50 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1664, 1510, 1350.

35 » 103 92487

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,55-4,10 (8H, multipletti); 2,81 (3H, dupletti, J = 5,0 Hz); 3,05 (3H, singletti); 5 3,70 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 4,18-4,49 (2H, multipletti); 6,87, 7,26 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,55 (1H, leveä singletti).

10 18-(3) (6S.8S)-8-f4-metoksibentsvvlitio)-4-metyyli -5-okso-l,4-diat- sabisvklo Γ 4.3.01nonaani 347 mg natriumhydridiä (55 w/w-% suspensio mineraaliöljyssä) lisät-15 tiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,64 g (2S,4S)-1-(2-metaanisulfonyylioksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metyy-likarbamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 30 ml:aan kuivaa dimetyylifor-mamidia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten 30 °C:n lämpötilassa 2 tuntia. Sitten reaktioseos 20 kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja siitä poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin asetonitriilin ja metanolin seoksella : 25 (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 1,75 g otsikon mukaista yhdis tettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (CHC13) umax cm"1: 1637, 1508, 1240.

30

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,88-2,01 (1H, multipletti); 2,59 (1H, triplettien dupletti, J = 13,18, 8,06 Hz); 2,75-2,98 (3H, multipletti); 35 2,94 (3H, singletti); 3,00-3,24 (3H, multipletti); 92487 104 3,30 (1H, tripletti, J = 8,06 Hz); 3,48-3,62 (1H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 3.80 (3H, singletti); 5 6,84, 7,33 (4H, A2B2, J = 8,80 Hz).

18-(4) (6S,8S)-1.4-dimetvvli-8-(4-metoksibentsvvlitio)-5-okso-4- atsa-1-astoniabisvklo f 4.3.0lnonaani-fluorisulfonaatti 10 461 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li uokseen, joka sisälsi 1,71 g (6S,8S)-8-(4-metoksibentsyylitio)-4-metyyli-5-okso-1,4-diatsabisyklo[4.3.0]nonaania liuotettuna 60 ral;aan metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin dietyylieet-15 terillä ja tuloksena olleet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja ne kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,09 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 208-210 °C.

20 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1651, 1512, 1295.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisul-foksidi, 270 MHz) S ppm: • 25 2,16-2,33 (1H, multipletti); 2,79-2,95 (1H, multipletti); 2,89 (3H, singletti); 3,23 (3H, singletti); 3,38 (1H, leveä singletti); 30 3,56-4,02 (6H, multipletti); * 3,74 (3H, singletti); 3.80 (2H, singletti); 4,37 (1H, tripletti, J = 8,30 Hz); 6,90, 7,26 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz).

li 35 105

Valmistus 19 92487 3- merkapto-2-pyrrolidinoni-trifluorimetaanisulfonaatti 5 20 ml trifluorietikkahappoa ja 0,41 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 949 mg 3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidin-2-onia 4 ml:ssa anisolia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alenne-10 tussa paineessa, jolloin saatiin jäännös, joka puhdistettiin pylväs-kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1), jolloin saatiin 728 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

15 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (60 MHz, CDC13) S ppm: 1,75-3,05 (3H, multipletti); 3,30-4,04 (3H, multipletti); 8,12 (1H, leveä singletti); 9,32 (1H, leveä singletti).

20

Valmistus 20 4- merkapto-2-pyrrolidinoni i 25 20-(1) 15,6 g trifenyylifosfiinia lisättiin suspensioon, joka si sälsi 3 g 4-hydroksi-2-pyrrolidinonia 200 ml:ssa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 minuuttia, minkä jälkeen se jäähdytettiin -20 °C:n lämpötilaan. Tähän liuokseen lisättiin -12 - -20 eC:n lämpötilassa jäähdyttäen pisaroittain liuos, joka 30 sisälsi 9,3 ml dietyyliatsodikarboksylaattia 9 ml:ssa tetrahydrofu-• raania. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 5 minuuttia, minkä jälkeen se jäähdytettiin jälleen -20 °C:n lämpötilaan. Seokseen lisättiin sitten pisaroittain 4,2 ml tioetikkahappoa -18 - -20 °C:n lämpötilassa jäähdyttäen. Seos lämmitettiin 0-5 °C:n lämpötilaan, 35 jossa sitä sekoitettiin 2 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin 106 92487 ensin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1), ja sitten pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin asetonitrii-lin ja bentseenin seoksella (tilavuussuhde 2:1), jolloin saatiin 2,45 5 g 4-asetyylitio-2-pyrrolidinonia värittöminä kiteinä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 90 MHz) δ ppm: 2,00-4,44 (5H, multipletti); 2,31 (3H, singletti); 10 7,13 (1H, leveä singletti).

20-(2) 1,82 vaiheessa (1) saatua tuotetta liuotettiin 30 ml:aan metanolia. Tähän liuokseen, jota jäähdytettiin jäissä, lisättiin pisaroittain 2,3 ml natriummetoksidin 28 % (w/v) metanoliliuosta ja 15 sitten seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Jäissä jäähdytettyyn reak- tioseokseen lisättiin sitten 12 ml IN kloorivetyhappoa, minkä jälkeen seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jauhemainen jäännös. Jäännös uutettiin 50 ml :11a etyyliasetaattia ja uute kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, Uute väkevöi-20 tiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,35 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1687, 1681, 1250.

: 25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) δ ppm: 1,95 (1H, dupletti, J = 7,0 Hz); 2,30 (1H, duplettien dupletti, J = 17,2 & 6,6 Hz); 2.80 (1H, duplettien dupletti, J = 17,2 & 7,1 Hz); 30 3,31 (1H, duplettien duplettien dupletti, J = 9,9, 5,2 & ; 0,8 Hz); 3,59-3,73 (1H, multipletti); 3.80 (1H, duplettien duplettien dupletti, J - 9,9, 7,3 & 0,7 Hz); 35 6,13 (1H, leveä singletti).

Il

Valmistukset 21-25 107 92487

Seuraavat yhdisteet valmistettiin noudattaen edellä kohdissa "valmistukset 1-4" kuvattujen kaltaisia menetelmiä.

5

Valmistus 21 (2S,4S)-1.1-dimetyyli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-metoksikarbonvvli-pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 10

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) uma]C cm"1: 1747, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 15 2,16-2,29 (1H, multipletti); 2,74-2,92 (1H, multipletti); 3,05 (3H, singletti); 3,12 (3H, singletti); 3,38-3,73 (3H, multipletti); 20 3,65 (3H, singletti); 3,66 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 4,32 (1H, duplettien dupletti, J = 10,99 & 7,69 Hz); 7,16, 7,82 (4H, A2B2, J = 8,61 Hz).

: 25

Valmistus 22 (2R.4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvl i ti o)-1,1-dimetvvlipvrro-lidinium-fluorisulfonaatti 30

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1698, 1512.

35 92487 108

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 5 ppm: 2,19-2,30 (1H, multipletti); 2,57-2,70 (1H, multipletti); 2.93 (3H, singletti); 5 3,15 (3H, singletti); 3,30 (1H, duplettien dupletti, J = 12,09 & 7,51 Hz); 3,47-3,60 (1H, multipletti); 3,66 (3H, singletti); 3.69 (2H, singletti); 10 3,77 (1H, duplettien dupletti, J = 12,09 & 8,06 Hz); 4.26 (1H, tripletti, J = 8,43 Hz); 6,82, 7,18 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

Valmistus 23 15 C2R.4S)-1,l-dimetvvli-2-(N.N-dimetyylikarbamovvli)-4-(4-metoksibents-vvlitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm"1: 20 1652, 1511.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 2,17-2,29 (1H, multipletti); 2,46-2,58 (1H, multipletti); 25 2,78 (1H, singletti); 2.94 (3H, singletti); 2,98 (3H, singletti); 3,10 (3H, singletti); 3.26 (1H, duplettien dupletti, J = 12,09 & 6,96 Hz); 30 3,51-3,63 (1H, multipletti); 3,65 (3H, singletti); 3.69 (2H, singletti); 3,84 (1H, duplettien dupletti, J = 12,09 & 8,62 Hz); 4,75 (1H duplettien dupletti, J = 7,69 & 6,96 Hz); 35 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J = 8,78 Hz).

Valmistus 24 109 92487 (2S.45)-2-svkloDroDvvlikarbamovvli-l.l-dimetvvli-4-(4-metoksibents-wlitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 5

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm'1: 1685, 1532, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) S ppm: 10 0,26-2,66 (4H, multipletti); 2,00-3,65 (6H, multipletti); 2,96 (3H, singletti); 2,98 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 15 3,68 (2H, singletti); 3,92 (1H, tripletti, J = 7,86 Hz); 6,81, 3,17 (4H, A2B2, J « 8,80 Hz).

20 Valmistus 25 (6S,8S)-5-okso-8-f4-metoksibentsvvlitio)-l-metvvli-4-atsa-l-atsoni-abisvklo f 4.3.0lnonaani-fluorisulfonaatti : 25 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) vmax cm'1: 1680, 1609, 1512, 1246.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) S ppm: 2,10-2,24 (1H, multipletti); 30 2,73-2,90 (1H, multipletti); • 3,65 (3H, singletti); 3,67 (2H, singletti); 3,36-3,85 7H, multipletti); 4,18 (1H, tripletti, J = 8,43 Hz); 35 6,82, 7,17 (4H, AZBZ, J = 8,79 Hz).

Claims (4)

92487 110

1. Menetelmä sellaisten lääkeaineina käyttökelpoisten 2-(heterosyk-lyylitio)karbapeneemijohdannaisten valmistamiseksi, jotka voidaan 5 esittää kaavalla (I): HO H CH3 \ / I

10. C'H / \ / \ H3C CH_CH C-S-Ra I I II (i) C_N_C / \ -O COOR5 15 [jossa Ra tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava 1-8 tai 1-9: 20 ch7— ch2 — CH N — R3 \ / ; 25 c I (1-8) 0 30 .o CH_ — CX (1-9) I I — CH N — R3 \ / CH 92487 111 ja jossa: R3 on vetyatomi tai C:-CA-alkyyliryhmä;

5 R5 on vetyatomi tai karboksia suojaavat ryhmä, joka on valittu ryhmästä, joka käsittää seuraavat: alkoks ikarbonyy1ioks ialkyy1iryhmä t, sykloalkyylialkoksikarbonyylioksialkyyliryhmät, sykloalkyylioksikarbonyylioksialkyy1iryhmät, 10 sykloalkyylikarbonyylioksialkyyliryhmät, jotka on valinnaisesti subs-tituoitu yhdellä alemmalla alkyyliryhmällä, alifaattiset asyylioksi-metyyliryhmät, ylemmät alifaattiset asyylioksialkyyliryhmät, ter-penyylioksikarbonyylioksialkyyliryhmät ja 5-alkyylisubstituoidut (2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)alkyyliryhmät; 15 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 20 (a) kaavan (IV): HO H CH3 ; 25 \ / I • C C-H / \ / \ 27 H3C CH_CH C-R27 I I II (IV) C_N_C / \ O COOR28 30 [jossa R1 on edellä esitetyn määritelmän mukainen, R27 tarkoittaa kaavan -OR29 mukaista ryhmää, jossa kaavassa R29 tarkoittaa difenyylifosforyyliryhmää; ja 35 112 92487 R28 tarkoittaa 4-nitrobentsyyliryhmää]; mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan: 5 kaavan (Vb): HS-(Ra) (Vb) [jossa Ra on määritelty edellä, jossa tarvittaessa mitkä vain aktii-10 viset ryhmät on suojattuja], mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (VI): 15 HO H CH3 \ / I C C-H / \ / \ . H3C CH_CH C-S-R"'

90. I II (VI)

20. M r. Q COOR28 25 [jossa R1, R28 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia ja Rb tarkoittaa mainittua kaavan 1-8 tai 1-9 mukaista ryhmää, jossa tarvittaessa mikä tahansa aktiivinen ryhmä voi olla suojattu], (b) minkä jälkeen tarvittaessa suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai 30 tuloksena oleva yhdiste esteröidään ja/tai muutetaan suolakseen, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä pivaloyylioksimetyyli-2-35 (2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-(1-hydroksietyyli)-1-metyyli-l-karba-pen-2-eemi-3-karboksylaatin; erityisesti II 92487 113 pivaloyylioksimetyyli-(1R,5S,6S)- 2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai esterin valmistami-5 seksi, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan valmistetuksi haluttu yhdiste.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä (1-metyylisykloheksan-l-yyli)karbonyylioksimetyyli-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-(1-hyd- 10 roksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin, erityisesti (l-metyylisykloheksan-l-yyli)karbonyylioksimetyyli-(1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-l-kar-15 bapen-2-eemi-3-karboksylaatin; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai esterin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan valmistetuksi haluttu yhdiste. 20

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1-(syklopentyylioksikar-bonyylioksi)etyyli-2-(2-okso-4-pyrrolidinyylitio)-6-(1-hydroksietyyli) -1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin, erityisesti : 25 1-(syklopentyylioksikarbonyylioksi)-(1R,5S,6S)-2-(2-okso-4-pyrrolidi- nyylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatin; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai esterin valmistami-30 seksi, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan valmistetuksi haluttu yhdiste. 35 114 92487