FI113775B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 3beta-alkenyyli-penaami-johdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

113775

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 3/J-alkenyyli-penaami-johdannaisten valmistamiseksi

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää penaami-5 johdannaisten valmistamiseksi, erityisesti se koskee menetelmää 3/3-aikenyyli-penaami-johdannaisten valmistamiseksi, joilla on yleinen kaava (0)n Rl

Il O : COOR3 jossa 10 toinen R^stä ja R2:sta on -COR4, -CN, -CH2R5, halo geeni, -CH=CHR6 tai Q ja toinen on vety tai Ci-7-alkyyli tai molemmat merkitsevät yhdessä γ-laktaamirengasta, R3 on vety tai bentshydryyli, R4 on vety, Ci_7-alkyyli, CV7-alkoksi, bentsyyliok-15 si, amino, Ci-7-alkyylianu.no tai Ci_7-alkyyli-Ci.7-alkoksi- amino, ! | R5 on hydroksi, -OCONHR7, -OCONH2, 2-pyridyyli, 1- : metyylipyridin-2-ylio, 1,3-tiatsol-2-yyli tai 1,2,4-oksa- diatsol-3-yyli, ·. 2 0 Rs on -CN tai -CHO, R7 on -C0CH2C1, * Q on 2-pyridyyli, l-metyylipyridin-2-ylio, 1,3- • tiatsol-2-yyli tai l,2,4-oksadiatsol-3-yyli, ja n on 0, 1 tai 2, : 25 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti käytettävien suo- .* lojen valmistamiseksi.

,· Nämä yhdisteet ovat uusia ja niillä on terapeutti- sesti arvokkaita ominaisuuksia. Erityisesti niillä on selvä /3-laktamaasia estävä vaikutus ja ne ovat näin ollen “ 30 hyödyllisiä yhdistelmänä β-laktaamiantibioottien, kuten * penisilliinien ja kef alosporiinien kanssa /3-laktamaasia muodostavien taudinaiheuttajien torjunnassa.

2 113775

Edelleen niillä on antibakteerinen aktiviteetti yksittäisiä bakteerikantoja vastaan, esimerkkinä Acineto-bacter spp.

Ilmaisu "alempi alkyyli" yksinään tai yhdistelmä-5 nä, kuten "alempi alkoksi" tai "alempi alkyyliamino" tarkoittaa suoraketjuisia tai haarautuneita, tyydyttyneitä hiilivetyryhmiä, joissa on korkeintaan 7, edullisesti korkeintaan 4 hiiliatomia, kuten metyyliä, etyyliä, isopro-pyyliä tai t-butyyliä.

10 Ilmaisu "aryyli-alkyyli" käsittää bentsyylin, bentshydryylin, p-metoksibentsyylin tai p-nitrobentsyylin.

Ilmaisu "halogeeni" käsittää fluorin, kloorin, bromin tai jodin.

Ilmaisu "viisi- tai kuusijäseninen, typen, rikin 15 ja/tai hapen sisältävä heteroaromaattinen rengas" tarkoittaa edullisesti 2-pyridyyliä, l-metyyli-pyridin-2-yliota, 1,3-tiatsol-2-yyliä, 1,2,4-oksadiatsol-3-yyliä ja vastaavia .

In vivo lohkaistava ryhmä tarkoittaa suun kautta 20 tapahtuvaan käyttöön soveltuvaa ryhmää, joka sisältää edullisesti esteriryhmän, kuten esimerkiksi -CH2OOCC(CH3) 3, : : tai -ch(ch3)oco-ch3.

Me : > -CH(CH3)OOCO-^> , -CH(CH3)0-C0 -|-OMe

O

· 1 ! Esillä olevan keksinnön kohteena on edellä olevan » · * 25 yleisen kaavan I mukaisten 3β-alkenyyli-penaami-johdannai set ja niiden farmaseuttisesti käytettävien suolojen val-: mistus. Yhdisteitä voidaan käyttää lääkeaineissa, jotka ,,· sisältävät yleisen kaavan I mukaista yhdistettä tai sen . j farmaseuttisesti käytettäviä suoloja ja mahdollisesti li- ··. 30 säksi β-laktaamiantibioottia. Yleisen kaavan I mukaisia ·’ yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti käytettäviä suoloja “ voidaan käyttää sairauksien, erityisesti bakteeri-infek- ’* tioiden hoidossa tai ennalta ehkäisyssä tai vastaavien lääkeaineiden valmistamisessa.

3 113775

Edelleen keksinnön kohteena ovat yhdisteet, joilla on yleinen kaava -/=0

fOC

O : COOR3 jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä.

5 Nämä kaavan II mukaiset yhdisteet ovat tärkeitä välituotteita yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistuksessa .

Erityisen edullisina pidetään sellaisia yleisen kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R' on CN, halogeeni 10 tai COR4 ja R4 on amino, metyyli, alempi alkoksi tai bent-syylioksi ja R2 on vety, esimerkiksi seuraavia yhdisteitä: (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihap-po-bentshydryyliesteri, 15 (E)-(2S,3S,5R)-3 -(2-syanoetenyyli)-3-metyyli- 4.4.7- triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar-boksyylihappo-bentshydryyliesteri, \ (Z)- (2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyyli- ·. 4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo{3,2,0]heptaani-2-kar- • 20 boksyylihappo-bentshydryyliesteri, ; (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyyli- ;* 4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- ·“ boksyylihappo-natriumsuola, (Z)-(2S,3S,5R)-3 -(2-syanoetenyyli)-3-metyyli-25 4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- :* boksyylihappo-natriumsuola, (Z) - (2S, 3S, 5R) -3- (2-kloori-vinyyli) -3-metyyli-/ . 4,4,7-triokso-4-1ia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- v · boksyylihappo-natriumsuola, ;·’ 3 0 (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(3-okso-but-l-enyyli)- 4.4.7- triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- ,*·· boksyylihappo-natriumsuola.

4 113775

Edelleen erityisen edullisena pidettyihin yhdisteisiin kuuluvat: (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-me-tyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karbok-5 syylihappo-bentshydryyliesteri, (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-metyyli -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri, (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-metyy-10 li-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2 - karboksyylihappo-bentshydryyliesteri, (E)-(2S,3S,5R)-3 -(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-metyyli-4 , 4 , 7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2 -karboksyylihappo-natriumsuola, 15 (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)- 3-metyy li-4 , 4 , 7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2 -karboksyylihappo-natriumsuola, (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-etoksikarbonyyli-vinyyli)-3-metyyli - 7-okso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar-2 0 boksyylihappo-bentshydryyliesteri, (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-etoksikarbonyyli-vinyyli)-3-: metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani- ,· 2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri, (E) - (2S,3S,5R) -3- (2-etoksikarbonyyli-vinyyli) -3-: 25 metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani- • · 2-karboksyylihappo-natriumsuola, (E) - (2S,3S,5R) - 3- (2- bentsyyhioksikarbonyyli- vinyyli) -3-metyyli-7-okso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri, ! 30 (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-bentsyylioksikarbonyyli-vinyy- ; ‘ li)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]- heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri, (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-bentsyylioksikarbonyyli-vinyy-’ li)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]- i » . 35 heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola.

5 113775

Yleisen kaavan I mukaisia 3/S-alkenyyli-penaami-johdannaisia sekä niiden farmaseuttisesti käytettäviä suoloja valmistetaan keksinnön mukaisesti siten, että a) yhdiste, jolla on yleinen kaava II

£ÖC

O : COOK3 5 jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on yleinen kaava s*' g (pi>3 m,

R Hai® K

10 jossa R1 ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä, Ph on fenyyli ja Hai on halogeeni, aktivointiaineen läsnä ollessa, tai b) yhdiste, jolla on yleinen kaava

_/=CH-CH2OH

fOC

0 ί 3 COOR3 » ^ jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan ! 15 3,4-dihydropyraanin, klooriasetyyli-isosyanaatin tai pyri- t ; diinin kanssa, tai • c) yhdisteestä, jolla on yleinen kaava

_y=CH-CH2OCONH-COCH2CI

// N'v^/\ 0 ' 3

COOR

» ' . jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä, lohkaistaan ryhmä- 2 0 C0CH2C1, tai d) yleisen kaavan I mukainen yhdiste, jossa n on 0, hapetetaan tai ;·*: e) yleisen kaavan I mukainen yhdiste, jossa R3 ei ole vety, muutetaan vastaavaksi vapaaksi hapoksi ja , 113775 6 f) mahdollisesti kaavan I mukainen happoyhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Kaavio 1 osoittaa kaksi tunnettua menetelmää mene-telmävaihtoehdon a) suorittamiseksi (Wittig-reaktio tai 5 Horner-reaktio).

Kaavio I

jX)C° -&*— CT : V : , COOR3 COOR3 Y_^R Ia

π V

III R

Substituentit R1, R2 ja R3 vastaavat edellä olevia merkityksiä.

10 Kaavan II mukainen aldehydi muutetaan antamalla reagoida suoraan alkylideeni-trifenyylifosforaanin kanssa (III; Y on P4(aryyli)3, Wittig-reaktio) tai alkyylifos-fonaatin kanssa (III; Y on (alkyylio)2PO, Horner-reaktio) aktivointiaineen, esimerkiksi emäksen, kuten trietyyli-15 amiinin, natriummetylaatin, litiumdi-isopropyyliamiinin i i tai DBU:n (1,5-diatsa-bisyklo[4,3,0]non-5-eenin) läsnä ol- lessa alkenyyli-substituoiduiksi kaavan Ia mukaisiksi pe-: naameiksi. Liuottimiksi soveltuvat esim. tetrahydrofuraa- ni, tolueeni, dikloorimetaani, asetonitriili tai bentsee-j. 20 ni. Reaktiolämpötila voi vaihdella kulloinkin aina käytetyn liuottimen mukaan -30 °C:n ja 80 °C:n välillä.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa va-, linnan mukaan myös antamalla vastaavasti substituoitujen ;; trifenyylifosfoniumhalogenidien reagoida 1,2-butyleeniok- ’ 25 sidin kanssa sen toimiessa emäksenä ja liuottimena. Edul- lisena pidetty reaktiolämpötila on tällöin 50 °C:n ja 70 °C:n välillä. Tällöin saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa n on 0.

» * i · » 7 113775

Muita mahdollisuuksia menetelmävaihtoehdon a) suorittamiseksi ovat Peterson-olefiniointi sekä Reformatsky-synteesi. Peterson-olefinioinnissa tetra-alkyylisilaanien litiumsuolojen annetaan reagoida kaavan II mukaisten yh-5 disteiden kanssa. Kaavio 2 osoittaa reaktion vastaavasti substituoidun kaavan IV mukaisen litium-trimetyylisilyyli-metyyli-johdannaisen kanssa, jolloin R1 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä.

Kaavio 2 10 R1 Γ-r V30 * __

i-lj\ + KHASi-CH-U J-N^A°H

CT · I CT : , _ COOR3 R CCX)R3

15 V

n IV V

.RÖO

20 ° \ CCX)R3 . , Ib » * · ' ► ·

Kaavan Ib mukaiset 38-alkenyyli-penaami-johdannai-’ ! 25 set muodostuvat kaavan V mukaisista yhdisteistä spontaa- nilla veden poistumisella. Tällöin saadaan kaavan I mukai- • · ; ; siä yhdisteitä, joissa n on 0 ja R2 on vety. Reformatsky- • ’ synteesissä kaavan II mukaiset yhdisteet kondensoidaan α-halogeeniesterien organo-sinkki-johdannaisten kanssa 30 vastaaviksi kaavan VI mukaisiksi β-hydroksyyliestereiksi, , jolloin veden lohjetessa muodostuu kaavion 3 mukaisesti ; kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa n on 0, R1 on COR4, R4 on alempi alkyyli ja R2 on vety.

\ I »

Kaavio 3 β 113775 _/=o Zn _cH-CH2-COOAlk

nj\ + nj\iH

5 o' : σ ': COOR3 COOR3

n VI

._K y=*—COOAlk COOR3

Ie 15 R3:lla on edellä ilmoitettu merkitys.

Sulfidiryhmän hapetus sulfoksidi- tai sulfoniryh- mäksi tapahtuu sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti.

Erityisen edulliseksi on osoittautunut yleisen kaavan I

mukaisten yhdisteiden, joissa n on 0, reaktio kaksifaasi- 20 systeemissä ruteniumtetroksidin tai vesipitoisen kalium- permanganaattiliuoksen kanssa sekä vetyperoksidiliuoksen : ’. kanssa.

> »

Penaami-sulfonien valmistamiseksi voidaan käyttää myös muita hapetusreagensseja, kuten Na2W04:ää tai perhap- * » 25 poa. Liuottimeksi soveltuu erityisen edullisesti dikloori- * · ' ; metaani.

• : Yleisen kaavan I mukainen yhdiste, jossa n on 0, 1 * liuotetaan tarkoituksenmukaisesti dikloorimetaaniin ja li sätään vesipitoiseen suspensioon, joka koostuu natrium- , ’ 30 (meta)perjodaatista, natriumbikarbonaatista sekä rutenium- : (IV)-oksidista. Reaktion päätyttyä orgaaninen faasi erote- ; taan, puhdistetaan ja kuivataan.

* · · .* Hapettimen luonteesta ja/tai määrästä riippuu, muo- » * dostuuko tässä hapetuksessa sulfoksidi vaiko sulfoni.

-· * # 1 * * * • · 9 113775

Kaavan I mukaisen yhdisteen, jossa R3 ei ole vety, muuttaminen vapaaksi hapoksi ja vapaan hapon muuttaminen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi voi tapahtua sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti yhdellä ainoalla 5 työskentelykerralla.

Esteriryhmät, esimerkiksi bentsyyli, p-nitrobent-syyli, bentshydryyli, p-metoksibentsyyli tai allyyli voidaan lohkaista seuraavasti:

Bentsyyli ja p-nitrobentsyyli lohkaistaan hydraa-10 maila palladiumhiilellä noin 0 °C:ssa - 80 eC:ssa orgaanisessa liuottimessa, kuten etyyliasetaatissa, metanolissa tai vedessä tai suorittamalla hydrolyysi natriumsulfidin läsnä ollessa noin 0 °C:ssa - huoneenlämpötilassa liuottimessa, kuten esimerkiksi DMFrssä. Allyyli lohkaistaan pal-15 ladium-(0)-katalysoidulla transallyloinnilla 2-etyylikap- ronihapon natrium- tai kaliumsuolan läsnä ollessa, bentshydryyli lohkaistaan m-kresolilla noin 50 °C:ssa 4-5 tunnin kuluessa.

Lähtöyhdisteinä käytettyjä yleisen kaavan II mukai-20 siä yhdisteitä voidaan saada julkaisussa: "Tetrahedron 43, nro 5, sivu 1003 - 1012 (1987)" kuvattujen menetelmien mu- . kaisesti vastaavista alkoholeista.

• · ‘ Kaavio 4 ’· : 25 q _ F ;·· rrV0H γτ8\Γ n/-NsA DMSO, (COCl)2f CH2C12 ° COOR3 NEt3 COOR3 30 VIII 11 : Tällöin R3:lla on edellä ilmoitettu merkitys.

Edulliseksi osoittautuu reaktio oksalyylikloridin 35 kanssa dikloorimetaanissa, jolloin menetellään tarkoituk- 10 113775 senmukaisesti seuraavasti: dikloorimetaani ja hapetin jäähdytetään noin -60 °C:seen, sitten lisätään DMS0:ta ja kaavan VIII mukaista yhdistettä ja sen jälkeen, kun reaktio on kestänyt noin 3 tuntia ja on lisätty trietyyliamii-5 nia, poistetaan jäähdytyshaude. Näin muodostunut kaavan II mukainen aldehydi voidaan puhdistaa tavanomaisten menetelmien mukaisesti.

Vastaavasti saadaan yleisen kaavan II mukaisia yhdisteitä hapettamalla PCCrllä (pyridiini-kloorikromaatil-10 la), Dess-Martin-reagenssilla, Mn02:lla m.m.

Kuten jo aluksi mainittiin keksinnönmukaisilla, yleisen kaavan I mukaisilla yhdisteillä ja niiden emästen kanssa muodostetuilla farmaseuttisesti käytettävillä suoloilla on selvä β-laktamaasia estävä aktiviteetti eri bak-15 teerikantojen β-laktamaaseja kohtaan. Nämä terapeuttisesti arvokkaat ominaisuudet voidaan määrittää eristetyillä β-laktamaaseilla in vitro, kuten seuraavassa on selvennetty.

A. β-laktamaasien eristäminen

Eri β-laktamaasit voidaan eristää penisilliineille 20 tai kefalosporiineille resistenteistä bakteerikannoista, esimerkkinä Klebsiella pneumoniae NCTC 418, Proteus vulgaris 1028, Bacillus licheniformis 749/C, Escherichia coli SN01 ja Citrobacter freundii 1203. Tätä tarkoitusta varten vastaavia kantoja viljellään "Tryptic Soy Brothissa" (Dif-25 co) ja otetaan talteen sentrifugoimalla myöhäisessä loga-ritmisessa kasvuvaiheessa (tarvittaessa väliaineeseen li- • * sätään log-vaiheen loppua kohti 50 - 100 mg/1 ampisillii- \ : nia, β-laktamaasin indusoimiseksi). Näin saatuun bakteeri- massaan lisätään 20 mM Tris-HCl-puskuria (pH 7,0); solura-30 kenne rikotaan French-puristimella samalla jäähdyttäen.

: Sentrifugoidaan (20 000 rpm) 20 - 30 minuutin ajan ja saa- . , daan kirkas raakauute. Proteiinien puhdistus tapahtuu jul- kaisuissa: "Cartwright, S.J. & Waley, S.G. [Biochem. J.

; ’ 221, 505 - 512 (1980)]" ja "B. licheniformis, Ellerby, 11 113775 L.M. et al. [Biochemistry 29, 5797 - 5806 (1990)]" kuvatun menetelmän mukaisesti.

B. 6-laktamaasi-aktiviteetin määritys Eristettyjen β-laktamaasien aktiviteettien määritys 5 voidaan suorittaa julkaisussa: "O'-Callaghan, C.H. et. ai. [Antimicr. AG. Chemother. 1, 283 - 288 (1972)]" kuvatun menetelmän mukaisesti käyttäen väriä muodostavaa kefalo-sporiinia Nitrocefiniä (87/312 Glaxo). Tarvittava koeseos sisältää ml vettä kohti: 50 mM fosfaattipuskuria (pH 7,0), 10 0,1 mM Nitrocefiniä ja riittävästi entsyymiä (β-laktamaa- sia), jotta saavutettaisiin arvo: ΔΑ/min = noin 0,1. Substraatin pilkkoutuminen ja siihen liittyvä värinmuutos tapahtuvat 37 °C:ssa ja seuranta tapahtuu kvantitatiivisesti spektraalifotometrillä aallonpituudella 482 nm.

15 C. Yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden 6-lakta- maasia estävän vaikutuksen määritys Kromogeenisen eli väriä muodostavan substraatin edellä kuvattu pilkkoutuminen β-laktamaasien vaikutuksesta (koe B) voidaan estää lisäämällä yleisen kaavan I mukaisia 20 yhdisteitä (inhibiittoreita). Koska ilmeni, että inhibiittorit inaktivoivat β-laktamaasia ajasta riippuvaisessa re-; ·. aktiossa irreversiibelisti, aloitetaan reaktio (substraa- tin pilkkominen) lisäämällä substraattia kulloinkin sen ; jälkeen, kun β-laktamaasia on esi-inkuboitu inhibiittorin 25 kanssa 15 minuutin ajan. Kulloinkin testatun inhibiittorin β-laktamaasiin kohdistuvan affiniteetin mittana, joka kuvaa inhibiittorin voimakkuuden määrää, käytetään konsent-• raatiota, joka edellä olevissa koeolosuhteissa (koe B) es tää ilman inhibiittoria tapahtuvan substraatin (Nitroce-30 fin) pilkkoutumisen 50 %:sesti (IC50 nM:ssa). IC50:n mää-: rittämiseksi suoritettiin 4-6 koetta käyttäen eri inhi- , , biittori-konsentraatioita. IC50:n tutkimus tapahtui graafi- / sesti.

;·' Edellä olevassa kokeessa (koe C) saadut tulokset 35 ovat esitettyinä seuraavissa taulukoissa 1-3.

12 113775

Taulukko 1

Mittana β-laktamaasin estymiselle on IC50-arvo, joka on ilmoitettu pM:na. Merkitsevänä pidetään IC50-arvoa, joka on 5 μΜ tai sen alle.

5 Kaavan I mukaisten yhdisteiden β-laktamaasia estävä vaikutus

Kaavan I mukaisen IC50[pM] IC50[pM] yhdisteen esimerkit 10 + vertailuaine C.freundii 1982 E.coli CF102

Tazobactam (vertailu) 0,900 0,015 6c (cis-amidi) 4,340 0,130 15 6c (trans-amidi) 2,250 0,054 5c (trans-nitriili) 0,696 0,681 5c (cis-nitriili) 0,210 0,126 2c (trans-etyyliesteri) 0,370 0,456 4c (trans-bentsyyliesteri) 0,478 0,444 20 8c (cis-kloori) 0,590 0,055 9c (trans-COCH3) 0,147 0,417 11c (trans-1,2,4- 0,490 0,217 ·. oksadiatsol-3-yyli) ! 12c (trans-2-tiatsolyyli) 0,410 0,054 25 12c (cis-2-tiatsolyyli) 1,270 0,160 ; 13c (trans-2-pyridinyyli) 1,010 0,092 ·; ·’ 14c (trans - CONMe (OMe)) 2,490 0,181 ‘ 15 (trans-2-pyridinylio) 3,100 0,087 17b (trans-CH=CH-CN(Z)) 3,300 0,420 30 18c (gamma-laktaami) 14,250 0,320 20c (trans-CH2OH) 6,92 0,590 22c (trans-CH,0C0NH,) 0,479 0,763

1(1 C A

23c (trans-CH2-pyridinium) 15,700 0,142 * i * * 13 1 13775

Taulukko 2 β-laktamaasia estävä vaikutus kombinoimalla kaavan 1 mukaiset yhdisteet keftriaksonin kanssa.

(1 osa keftriaksonia + 4 osaa estäjää) 5 _

Kaavan I mukaisen MIC [pg/ml] MIC [yg/ml] yhdisteen esimerkit + vertailuaine C.freundii 1982 E.coli CF102 10 ___ keftriaksoni 128 8 keftriaksoni + 8 0,25

Tazobactam (vertailu) keftriaksoni + 6c 4 0,12 15 (cis-amidi) keftriaksoni + 6c NA 0,12 (trans-amidi) keftriaksoni + 5c 2 0,25 (trans-nitriili) 20 keftriaksoni + 5c 1 0,25 (cis-nitriili) keftriaksoni + 2c 4 0,25 (trans-etyyliesteri) < · I keftriaksoni + 4c 16 2,00 1 i r • « I 25 (trans-bentsyyliesteri) < · ;* keftriaksoni + 8c 4 0,25 (cis-kloori) v * keftriaksoni + 9c 1 0,25 (trans-COCH3) , 30 keftriaksoni + 11c 4 0,5 : : (trans-1,2,4-oksa- / . diatsol-3-yyli) keftriaksoni + 12c 8 1 (trans-2-tiatsolyyli) 35 keftriaksoni + 12c 16 0,5 14 113775 (cis-2-tiatsolyyli) keftriaksoni + 13c 8 1 (trans-2-pyridinyyli) keftriaksoni + 14c 8 0,5 5 (trans-CONMe(OMe)) keftriaksoni + 15c 4 0,25 (trans-2-pyridinylio) keftriaksoni + 17b 8 0,5 (trans-CH=CH-CN(Z) 10 keftriaksoni + 18c 16 1 (gamma-laktaami) keftriaksoni + 20c 8 0,5 (CH20H) keftriaksoni + 22c 2 1 15 (trans-CH2OCONH2) keftriaksoni + 23c 8 0,25 (trans-CH2-pyridinium) MIC tarkoittaa pienintä estävää konsentraatiota 20 ♦ t 15 113775

Taulukko 3

Penaami-suIfoni-johdannaisen 5c ja valittujen antibioottien kombinaatioiden in vitro-aktiviteetti β-laktamaasia ylituottavia kantoja vastaan 5 (Estäjän vakio-konsentraatio: 4 mg/ml)

MIC MIC MIC MIC

E.cloacae C.freundii Ps.aeru- E.coli P99 1982 ginosa CF-102

10 18SH

keftriaksoni >64 64 >64 16 keftriaksoni +5c 4 2 16 >0,12 (cis-nitriili) 15 keftriaksoni + 64 32 >64 >_0,12

Tazobactam keftatsidiimi >64 >64 32 32,00 keftatsidiimi + 5c 4 8 2 0,5 (cis-nitriili) 20 keftatsidiimi + 64 64 8 0,5

Tazobactam ; piperasilliini >128 >128 >64 >64 [ piperasilliini + 5c 8 8 16 4 (cis-nitriili) ,; ; 25 piperasilliini + 128 64 64 4 1 9 t • ; ‘ Tazobactam ···* apalsilliini >128 >128 64 >64 ', · apalsilliini + 5c 16 8 4 2 (cis-nitriili) ' 30 apalsilliini + >128 64 NA 2

Tazobactam t - > f » ft > * 16 113775

Keksinnön mukaisia tuotteita voidaan käyttää lääkeaineina, esimerkiksi farmaseuttisina valmisteina, jotka sisältävät niitä tai niiden suoloja seoksena parenteraali-seen tai enteraaliseen käyttöön soveltuvien, farmaseut-5 tisten, orgaanisten tai epäorgaanisten inerttien kantaja-aineiden kanssa, kuten esim. veden, gelatiinien, arabiku-min, maitosokerin, tärkkelyksen, magnesiumstearaatin, talkin, kasvisöljyjen, polyalkyleeniglykolien, vaseliinin jne. kanssa. Farmaseuttiset valmisteet voivat olla kiinte-10 ässä muodossa, esim. tabletteina, lääkerakeina, peräpuikkoina, kapseleina tai nestemäisessä muodossa, esim. liuoksina, suspensioina tai emulsioina. Mahdollisesti ne ovat steriloituja ja/tai sisältävät apuaineita, kuten säilöntä-, stabiloimis-, kostutus- tai emulgointiaineita, suo-15 loja osmoottisen paineen muuttamiseksi, anestesia-aineita tai puskuria. Kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden suolat tulevat kyseeseen edullisesti parenteraalisessa käytössä ja ne valmistetaan tätä tarkoitusta varten edullisesti lyofilisaatteina tai kuivajauheena ja laimennetaan tavan-20 omaisilla aineilla, kuten vedellä tai isotonisella keitto- suolaliuoksella .

r . Kuten jo alussa mainittiin, yleisen kaavan I mukai- * · _· | siä yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti käytettäviä suo- * · loja voidaan käyttää keksinnönmukaisesti sairauksien hoi- 25 dossa tai ennalta ehkäisyssä, erityisesti β-laktamaasia

f I

’ ’ muodostavien taudinaiheuttajien torjunnassa, yhdistelmänä ·' β-laktaamiantibioottien kanssa, s.o. antibioottien, jotka v ’ sisältävät β-laktaamirenkaan, esimerkiksi penisilliinien, kuten piperasilliinin, metslosilliinin, atslosilliinin, ' 30 apalsilliinin, bentsyylipenisilliinin, fenoksimetyylipeni- : silliinin, karpenisilliinin, metisilliinin, propisillii- , nin, tikarsilliinin, ampisilliinin, amoksisilliinin tai t * mesillinaamin, ja kefalosporiinien, kuten keftriaksonin, keftatsidiimin, kefetametin, kefetamet-pivoksiilin, kefo-35 taksiimin, kefmenoksiimin, keftitsoksiimin, kefuroksiimin, » 17 113775 kefaloridiinin, kefalotiinin, kefatsoliinin, kefaleksii-nin, kefoksitiinin, kefasetriilin, kefamandolin, kefapi-riinin, kefradiinin, kefaloglysiinin, kefpiromin tai ke-fepimin, sekä peneemien ja karbapeneemien kuten imipenee-5 min tai meropeneemin kanssa. Tällöin yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet tai niiden emästen kanssa muodostetut farmaseuttisesti käytettävät suolat voidaan antaa ennen β-laktaamiantibioottien antoa, samanaikaisesti niiden kanssa tai niiden annon jälkeen. Jos keksinnönmukaiset 10 tuotteet annetaan samanaikaisesti β-laktaamiantibioottien kanssa, niin silloin tämä voi tapahtua antamalla ne tätä varten yhdistelmänä tai farmaseuttisena kombinaationa, joka sisältää yleisen kaavan I mukaista yhdistettä tai sen emäksen kanssa muodostettua farmaseuttisesti käytettävää 15 suolaa ja β-laktaamiantibioottia; tällaiset farmaseuttiset kombinaatiot ovat samoin esillä olevan keksinnön kohteena. Yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden ja niiden emästen kanssa muodostettujen farmaseuttisesti käytettävien suolojen annostus voi vaihdella suuresti ja on luonnol-20 lisesti jokaisessa yksittäisessä tapauksessa sovitettava yksilöllisten vallitsevien tilanteiden ja k.o. β-laktamaa-; ·, siä tuottavan taudinaiheuttajan mukaan. Yleensä päivit- l » / täinen annos lienee noin 0,1 - noin 2,0 g. β-laktamaasi- inhibiittorin (kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen emäksen ’ 25 kanssa muodostetun farmaseuttisesti käytettävän suolan) suhde β-laktaamiantibioottiin voi samoin vaihdella suu-: resti ja jokaisessa yksittäisessä tapauksessa sovitettava : yksilöllisten vallitsevien tilanteiden mukaan. Yleensä sopiva suhde lienee noin: 1 : 20 - noin 1:1.

30 Kuten jo alussa mainittiin, esillä olevan keksinnön kohteena ovat samoin lääkeaineet, jotka sisältävät yleisen , kaavan I mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti käy- t ‘ tettävää suolaa, edelleen myös menetelmä tällaisten lääke aineiden valmistamiseksi, ja menetelmä on tunnettu siitä, 35 että yksi tai useampi yleisen kaavan I mukainen yhdiste 18 113775 tai sen farmaseuttisesti käytettävä suola ja mahdollisesti yksi tai useampi muu terapeuttisesti arvokas aine saatetaan galeeniseen antomuotoon; tässä yhteydessä viitattakoon vielä kerran edellä aikaisemmin mainittuihin farma-5 seuttisiin kombinaatioihin, jotka ovat samoin esillä olevan keksinnön kohteena. Erityisesti esillä olevan keksinnön kohteena ovat farmaseuttiset kombinaatiot, jotka sisältävät yleisen kaavan I mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti käytettävää suolaa ja /3-laktaamiantibioot-10 tia, kuten esim. penisilliiniä, kuten piperasilliiniä, metslosilliiniä, atsiosilliiniä, apalsilliiniä, bentsyyli-penisilliiniä, fenoksimetyylipenisilliiniä, karpenisillii-niä, metisilliiniä, propisilliinia, tikarsilliinia, ampi-silliinia, amoksisilliinia tai mesillinaamia, ja kefalo-15 sporiinia, kuten keftriaksonia, keftatsidiimiä, kefetamet-tia, kefetamet-pivoksiiliä, kefotaksiimia, kefmenoksiimia, keftitsoksiimia, kefuroksiimia, kefaloridiinia, kefalotii-nia, kefatsoliinia, kefaleksiinia, kefoksitiinia, kefaset-riiliä, kefamandolia, kefapiriiniä, kefradiiniä, kefalo-20 glysiiniä, kefpiromia tai kefepimiä, sekä peneemejä ja karbapeneemejä kuten imipeneemiä tai meropeneemiä. Tällai-i set kombinaatiot soveltuvat /?-laktamaasia muodostavien : j· taudinaiheuttaj ien torjuntaan.

; : Seuraavien esimerkkien on tarkoitus selventää lä- ; 25 hemmin esillä olevaa keksintöä.

Esimerkki 1 ·. (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-at- sabisyklo[3,2,0]heptaani-2 -karboksyylihappo-bents-• hydryyliesteri 30 100 ml:aan dikioorimetaania lisätään argonatmos- ;·’ fäärissä 0,84 ml (9,60 mmol) oksalyylikioridia ja jäähdy- ‘,j tetään -60 °C:seen. Tähän tiputetaan 0,73 ml (10,25 mmol) DMSO-.ta, ja tämän jälkeen 2,50 g (6,52 mmol) (2S,3R,5R)-hydroksimetyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-1-atsa-bisyklo- 1 · 19 113775 [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä, 100 ml:aan dikloorimetaania liuotettuna. Sekoitetaan edelleen samassa lämpötilassa 3 tuntia ja sitten tähän lisätään 3,2 ml (23,0 mmol) trietyyliamiinia. Jäähdytyshaude 5 poistetaan ja annetaan lämmetä huoneenlämpötilaan. Oranssin värinen liuos kaadetaan 1000 ml:aan 0,2H suolahappoa ja vesipitoinen faasi uutetaan vielä kaksi kertaa dikloo-rimetaanilla. Orgaaniset faasit pestään vedellä ja kyllästetyllä, vesipitoisella natriumkloridiliuoksella, kuiva-10 taan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan ro- taatiohaihduttimessa. Näin saatua tuotetta (2,50 g, 100 %) voidaan käsitellä edelleen ilman eri puhdistusta tai se voidaan kiteyttää dietyylieetteristä.

Saanto: 2,00 g (80 %) valkoista kidejauhetta; sp.: 111,8 -15 112,8 °C

IR (KBr): 2720, 1788, 1743, 1718 cm-1 MS(M-CH2CO) 339 1H-NMR (250 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,26 (s, 3H), 3,06 (dd, 1H, J = 16,2 Hz, 2 Hz, 6-H), 3,54 (dd, 1H, J = 16,2 Hz, 4 20 Hz, 6-H), 5,34 (s, 1H, 2-H), 5,42 (dd, 1H, J = 2 Hz, 4 Hz, 5-H), 6,95 (s, 1H, CHPh2), 7,30 - 7,38 (m, 10 H, Ph), 9,20 : (s, 1 H).

Esimerkki 2 ! (a) (E) (2S,3S,5R)-3-(2-etoksikarbonyyli-vinyyli)- 25 3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa- ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri >. : 500 mg (1,30 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli- • 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli- happo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäärissä 30 20 ml:aan THF:ää ja tähän lisätään 500 mg (1,40 mmol) : etoksikarbonyylimetyleeni-trifenyylifosforaania.Keltaista , liuosta sekoitetaan 75 minuuttia 50 °C:ssa ja tämän jäl- ’ keen haihdutetaan. Jäljelle jäävä jäännös kromatografioi- daan silikageelillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen 35 etikkaesteri : heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

20 113775

Saanto: 520 mg (88 %) kelta-oranssin väristä hartsia; IR (kalvo): 1783, 1747, 1717, 1650 cm'1 MS(M-CONH) 406, (M-CHPh2) 284 ^-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,31 (t, 3H, J = 7 Hz), 5 1,34 (s, 3H), 3,13 (dd, 1H, J = 2 Hz, 16 Hz, 6-H), 3,57 (dd, 1H, J = 4 Hz, 16 Hz, 6-H), 4,22 (q, 2H, J = 7 Hz), 4,78 (s, 1H, 2-H), 5,30 (dd, 1H, J = 4,2 Hz, 5-H), 5,97 (d, 1H, J = 15 Hz, =CH), 6,94 (s, 1H, CHPh2), 7,07 (d, 1H, J = 15 Hz, =CH), 7,30 - 7,38 (m, 10 H, Ph).

10 (b) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-etoksikarbonyyli-vinyyli)- 3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3,2,0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylies-teri 250 mg (0,55 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-etoksikar-15 bonyyli-vinyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 10 ml:aan dikloorimetaania ja tähän lisätään 6,5 ml jääetikkaa. Keltaiseen liuokseen tiputetaan 260 mg (1,66 mmol) kaliumpermanganaattia 25 ml:ssa vettä. Lisäyk-20 sen päätyttyä sekoitetaan edelleen vielä 30 minuuttia ja sitten ruskeaan reaktioseokseen lisätään 30 %:ista vety-: ·. peroksidiliuosta niin kauan, kunnes on muodostunut väritön kaksifaasiseos. Faasit erotetaan erotussuppilossa ja vesi-!! faasi uutetaan vielä kaksi kertaa dikloorimetaanilla. Or- ,! * 25 gaaninen faasi pestään vedellä, kyllästetyllä natriumvety- * karbonaattiliuoksella sekä kyllästetyllä natriumkloridi- • liuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja *, : haihdutetaan. Jäljelle jäävä öljy kromatografioidaan sili- kageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaes- 30 teri : heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

: Saanto: 170 mg (60 %) väritöntä vaahtoa.

. IR (KBr): 1802, 1757, 1721, 1653, 1331, 960 cm'1 / MS (M-H) 482,4 « 1H-NMR (250 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,26 (s, 3H), 1,35 (t, 35 3H, J = 7 Hz), 3,44 - 3,59 (pseudo-m, 2H, 6-H), 4,29 (q, i 21 113775 2H, J = 7 Hz), 4,60 (dd, 1H, J = 4 Hz, 2 Hz, 5-H), 4,61 (S, 1H, 2-H), 5,99 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH), 6,94 (s, 1H, CHPh2), 7,07 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH), 7,23 - 7,40 (m, 10 10H, Ph).

5 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-etoksikarbonyyli-vinyyli)- 3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola 170 mg (0,35 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-etoksikar-bonyyli-vinyyli)-3-metyyll-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bi-10 syklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylieste- riä liuotetaan argonatmosfäärissä 3 ml:aan m-kresolia ja sekoitetaan 4,5 tunnin ajan 50 °C:ssa. Tämän jälkeen lisätään 12,5 ml isobutyylimetyyliketonia ja kelta-oranssi liuos uutetaan kulloinkin 3 kertaa kyllästetyllä, vesipi-15 toisella natriumvetykarbonaattiliuoksella. Vesipitoinen faasi pestään kaksi kertaa kulloinkin 5 ml:11a isobutyyli-metyyliketonia, suodatetaan poimusuodattimella ja tämän jälkeen pH saatetaan konsentroidulla suolahapolla arvoon 1. Uutetaan etikkaesterillä, orgaaninen faasi pestään kyl-20 lästetyllä, vesipitoisella natriumkloridiliuoksella, kui vataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan : rotaatiohaihduttimessa. Jäljelle jäävä keltainen hartsi liuotetaan 0,5 ml:aan etikkaesteriä ja tähän lisätään « > · . 108 μΐ 2-etyylikapronihappo-natriumsuolaa (2N liuos etik-

« · I

! 25 kaesterissä). Sitten haihdutetaan, jäännökseen lisätään • t < • * ‘ ; 1,5 ml vettä ja uutetaan kerran n-heksaanilla. Tämän jäl keen vesipitoinen faasi kromatografioidaan polymeerisellä, • ’ hydrofobisella geelillä käyttäen eluointiaineena vettä.

Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistetään ja lyofilisoi-30 daan.

Saanto: 60 mg (50 %) väritöntä lyofilisaattia.

; ; IR (KBr): 1782, 1715, 1627, 1396, 1192 cm-1 MS: (M-Na)' 316,1.

;·* 1H-NMR (250 MHz, D20): δ [ppm] = 1,31 (t, 3H, J = 7 Hz), 35 1,66 (s, 3H), 3,46 (dd, 1H, J = 16 Hz, 2 Hz, 6-H), 3,71 22 113775 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4 Hz, 6-H), 4,28 (q, 2H, J = 7 Hz), 4,62 (s, 1H, 2-H), 5,15 (dd, 1H, J = 2 Hz, 4 Hz, 5-H), 6,35 (d, 1H, J=16 Hz,=CH), 7,10 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH). Esimerkki 3 5 (a)(E)-(2S,3S,5R)-3-(2-metoksikarbonyyli-vinyyli)- 3 -metyyl i - 7 -okso- 4 -1 ia-1 -at sa-bisyklo [3,2,0] heptaa-ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri

Esimerkin 2 mukaisesti 200 mg (0,52 mmol) (2S,3R,~ 5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo-10 [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä muutetaan antamalla reagoida 193 mg:n kanssa (0,58 mmol) metoksikarbonyylimetyleeni-trifenyylifosforaania (E )-(2S,3S,5R)-3-(2-metoksikarbonyyli-vinyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli-15 happo-bentshydryyliesteriksi.

Saanto: 209 mg (91 %) väritöntä vaahtoa.

IR (kalvo): 1782, 1745, 1724, 1651 cm'1 MS: (M-MH/) 455,3.

Esimerkki 4 20 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-bentsyylioksikarbonyyli- vinyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo-[ 3,2,0 ] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylies-teri ! 763 mg (2,0 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli- 25 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli- * happo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäärissä ·* 15 ml:aan THF:ää, lisätään 821 mg (2,0 mmol) bentsyyliok- * sikarbonyylimetyleeni-trifenyylifosforaania ja oranssin väristä liuosta sekoitetaan 2 tuntia 50 °C:ssa. Annetaan 30 jäähtyä huoneenlämpötilaan, liuotin poistetaan rotaatio- : haihduttimessa ja punaisen ruskea öljy kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm ) käyttäen etik- • « kaesteri : heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

;·’ Saanto: 800 mg (78 %) oranssin väristä vaahtoa.

35 IR (kalvo): 1782, 1746, 1721, 1649, 985 cm'1 23 113775 MS: (Μ+ΗΓ 514,3 ^-NMR (250 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,33 (s, 3H), 3,11 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,6 Hz, 6-H), 3,56 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,2 Hz, 6-H), 4,78 (S, 1H, 2-H), 5,20 (s, 2H), 5,36 (dd, 1H, 5 J = 1,6 Hz, 4,2 Hz, 5-H), 6,01 (d, 1H, J = 15 Hz,=CH), 6,93 (s, 1H, CHPh2), 7,12 (d, 1H, J = 15 Hz, =CH), 7,30 - 7,43 (m, 15 H, Ph).

(b) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-bentsyylioksikarbonyyli- vinyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bi-10 syklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd- ryyliesteri

Esimerkin 2 mukaisesti hapetetaan 800 mg (1,56 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-bentsyylioksikarbonyyli-vinyy- li)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-15 2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

Saanto: 255 mg (30 %) väritöntä vaahtoa.

IR (KBr): 1802, 1757, 1723, 1650, 1332 cm'1 MS: (M-H)' 544,2 1H-NMR (250 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,25 (s, 3H), 3,47 (dd, 20 1H, J = 16 Hz, 2 Hz, 6-H), 3,55 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4 Hz, 6-H), 4,66 (dd, 1H, J = 2 Hz, 4 Hz, 5-H), 4,81 (s, 1H, 2-: H), 5,26 (s, 2H), 6,02 (d, 1H, J - 16 Hz, =CH), 6,93 (s, ! .'! 1H, CHPh2), 7,22 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH), 7,13 - 7,14 (m, 15 H, Ph).

25 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-bentsyylioksikarbonyyli- vinyyli) -3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bi- * · syklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-natrium-• ’ suola

Esimerkin 2 mukaisesti poistetaan suojaus 30 250 mg:sta (0,46 mmol) (E)-(2S, 3S, 5R)-3-( 2-bentsyylioksi- : karbonyyli-vinyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa- ’ ; bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylies- teriä.

Saanto: 54 mg (30 %) beigen väristä lyofilisaattia.

35 IR (KBr): 1781, 1719, 1626, 1322, 1189, 979 cm-1 24 113 7 7 5 MS: (M-H)' 378,2.

Hi-NMR (250 MHz, D20): 6 [ppm] = 1,61 (s, 3H), 3,45 (dd, 1H, J = 17 Hz, 2 Hz, 6-H), 3,71 (dd, 1H, J = 17 Hz, 4 Hz, 6-H), 4,63 (s, 1H, 2-H), 5,14 (dd, 1H, J = 4 Hz, 2 Hz, 5 5-H), 5,29 (s,2H), 6,42 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH), 7,13 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH), 7,42 - 7,55 (m, 5H, Ph).

Esimerkki 5 (a) (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyy- li-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-10 karboksyylihappo-bentshydryyliesteri

Menetelmä A: 946 mg:aan (3,14 mmol) syanometyleeni-trifenyyli-fosforaania lisätään argonatmosfäärissä 1,0 g (2,62 mmol) (2S, 3R, 5R) -3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyk-15 lo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä ja 30 ml tolueenia. Ruskeaa suspensiota sekoitetaan 1 tunti, haihdutetaan ja puhdistetaan kromatografisesti silika-geelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm ) käyttäen etikkaeste-ri : n-heksaania 3 : 1 eluointiaineena.

20 Saanto: 1,0 g (94 %) isomeeriseosta, E:Z 3:1.

Seoksen spektroskooppiset arvot: IR (kalvo): 2224, 1781, 1744 cm-1 .! MS: (M+Na*) 427,2 1H-NMR (250 MHz, CDC13): (E-isomeeri) 6 [ppm] = 1,32 (s, : 25 3H), 3,13 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,6 Hz, 6-H), 3,63 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,4 Hz, 6-H), 4,74 (s, 1H, 2-H), 5,41 (dd, 1H, J = 4,4 Hz, 1,6 Hz, 5-H), 5,54 (d, 1H, J - 15 Hz,=CH), V : 6,82 (d, 1H, J = 15 Hz,=CH), 6,95 (s, 1H, CHPh2), 7,30 - 7,44 (m, 10 H, Ph).

30 1H-NMR (250 MHz, CDC13): (Z-isomeeri) δ [ppm] = 1,61 (s, : 3H), 3,18 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,5 Hz, 6-H), 3,64 (dd, 1H, ; j = 16 Hz, 4,6 Hz, 6-H), 4,86 (s, 1H, 2-H), 5,41 (d, 1H, ; J = 12 Hz, =CH), 5,44 (dd, 1H, J = 1,5 Hz,4,6 Hz, 5-H), ’ 6,63 (d, 1H, J = 12 Hz,=CH), 6,95 (s, 1H, CHPh2), 7,30 - 35 7,44 (m, 10 H, Ph).

• » 25 113775

Menetelmä B:

Suspensio, jossa on 2,88 g (9,56 mmol) syanomety-leeni-trifenyylifosforaania 24 ml:ssa litiumperkloraatti-liuosta (0,4 M asetonitriilissä), jäähdytetään argonatmos-5 fäärissä -20 eC:seen. Tähän tiputetaan liuos, jossa on 3,32 g (8,70 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-ok-so-4-tia-1 -at sa-bisyklo [3,2,0] hept aani - 2 -karboksyy 1 ihappo-bentshydryyliesteriä 30 ml:ssa asetonitriiliä, sekoitetaan edelleen 4 tuntia samassa lämpötilassa ja liuotin poiste-10 taan rotaatiohaihduttimessa. Jäljelle jäävä jäännös liuotetaan 100 ml:aan etikkaesteriä, ravistellaan kolme kertaa veden kanssa ja kerran kyllästetyn keittosuolaliuoksen kanssa, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan. Jäljelle jäävä öljy puhdistetaan silikagee-15 Iillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm ) käyttäen metyleeniklori-dia eluointiaineena.

Saanto: 3,34 g (94 %) isomeeriseosta, E:Z 1 : 4.

(b) (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyy- li-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa-20 ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyyli- 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar-boksyylihappo-bentshydryyliesteriä valmistetaan vastaaval-I la tavalla, kuin esimerkissä 2 kuvattiin, hapettamalla 25 1,02 g (2,51 mmol) (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)- 3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri. Molemmat isomeerit • voidaan tällöin erottaa kromatografisesti silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm ) käyttäen eluointiaineena etik-30 kaesteri : n-heksaania 9 : 16. Ensimmäisenä komponenttina ; eluoidaan Z-isomeeri.

, Saanto: Z: 76 mg (7 %) väritöntä öljyä E: 253 mg (23 %) väritöntä vaahtoa

Spektroskooppiset arvot: E-isomeeri: 35 MS: (M+NH4)+ 454,2 ·- * * 26 113775 IR (KBr): 2228, 1802, 1758, 1334, 1192, 990 cm'1 ^-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,24 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H, J = 16 Hz, 2,2 Hz, 6-H), 3,60 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4

Hz, 6-H), 4,65 (dd, 1H, J = 2 Hz, 4 Hz, 5-H), 4,75 (s, 1H, 5 2-H), 5,37 (d, 1H, J = 16 Hz,=CH), 6,85 (d, 1H, J = 16Hz, =CH), 6,98 (s, 1H, CHPh2), 7,25 - 7,45 (m, 10 H, Ph). Spektroskooppiset arvot: Z-isomeeri: MS: (M-H)' 435,3 IR (KBr): 2220, 1801, 1757, 1333, 1190 cm'1 10 1H-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,67 (s, 3H), 3,48 (dd, 1H, J = 16 Hz, 2,4 Hz, 6-H), 3,64 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,6

Hz, 6-H), 4,72 (dd, 1H, J = 2,4 Hz, 4,6 Hz, 5-H), 4,85 (s, 1H, 3-H), 5,90 (d, 1H, J = 12 Hz,=CH), 6,41 (d, 1H, J = 12 Hz,=CH), 6,97 (s, 1H, CHPh2), 7,26 - 7,44 (m, 10 H, Ph).

15 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyyli- 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani- 2-karboksyy1ihappo-natriumsuola

Esimerkin 2 mukaisesti poistetaan suojaus 215 mg:sta (0,5 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-20 3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa- ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

: ·, Saanto: 110 mg (82 %) valkoista lyofilisaattia.

t « lvi IR (KBr): 2240, 1782, 1629, 1397, 1141 cm'1 MS: (M-Na)' 269,0.

25 1H-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,64 (s, 3H), 3,47 (dd, t 1H, J = 16 Hz, 2 Hz, 6-H), 3,72 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4 Hz, • i‘ 6-H), 4,62 (s, 1H, 2-H), 5,15 (dd, 1H, J = 2 Hz, 4 Hz, 5- : H), 6,07 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH), 7,08 (d, 1H, J = 16 Hz, =CH) .

* 30 (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli)-3-metyyli-4,4,7- : triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- , boksyylihappo-natriumsuola i 95 mg (0,2 mmol) (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syanoetenyyli )-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-35 heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuote- - » 27 113775 taan 3 ml:aan m-kresolia ja sekoitetaan 45 minuutin ajan 50 °C:ssa. Reaktioseokseen lisätään 10 ml isobutyylimetyy-liketonia ja 120 μΐ 2-etyylikapronihappo-natriumsuolaa (2N etikkaesterissä, 1,1 ekviv.). Sitten uutetaan kaksi kertaa 5 kulloinkin 3 ml:11a vettä, yhdistetyt vesipitoiset faasit pestään 10 ml:11a isobutyylimetyyliketonia ja lyofilisoi-daan. Keltainen lyofilisaatti liuotetaan 1,3 ml:aan vettä ja kromatografioidaan polymeerisellä, hydrofobisella geelillä.

10 Saanto: 50 mg (80 %) väritöntä lyofilisaattia.

IR (KBr): 2222, 1782, 1626, 1395, 1323, 1141 cm'1 ^-NMR (250 MHz, D20): δ [ppm] = 1,94 (s, 3H), 3,47 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,6 Hz, 6-H), 3,73 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,4 Hz, 6-H), 4,80 (s, 1H, 2-H), 5,19 (dd, 1H, J = 1,6 Hz, 4,4 15 Hz, 5-H), 6,15 (d, 1H, J = 12 Hz, =CH), 6,68 (d, 1H, J = 12 Hz, =CH).

Esimerkki 6 (a) (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3- metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa-20 ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri 2,60 g (6,86 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyy- : \ li-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karbok- • * , , syylihappo-bentshydryyliesteriä ja 2,15 g (6,86 mmol) kar- ! bamoyylimetyleeni-trifenyylifosforaania suspendoidaan ar-

‘ I

25 gonatmosfäärissä 60 ml:aan THF:ää ja sekoitetaan 45 minuuttia 50 °C:ssa. Sitten imusuodatetaan erilleen liukene- ; mattomista aineosista ja suodos haihdutetaan rotaatiohaih- 1 * > * duttimessa. Ruskea öljy kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen eluointiaineena etik-’ 30 kaesteri : n-heksaania 1 : 1 ja molemmat isomeerit erote- : taan. Z-isomeeri eluoidaan tällöin ennen E-isomeeriä, mo- I lemmat voidaan saada CH2Cl2/n-heksaanista kiteisinä kiin teinä aineina.

Z-isomeeri: 35 Saanto: 217 mg (7,5 %) väritöntä kiinteätä ainetta » » » 28 113775 IR (KBr): 3441, 1777, 1743, 1678, 986 cm'1 MS: (M+CHPh2) 255

Sulamispiste: 188 - 189 °C.

1H-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,58 (s, 3H), 3,11 (dd, 5 1H, J = 16 Hz, 1,60 Hz, 6-H), 3,57 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,40 Hz, 6-H), 5,23 (s, 1H, 2-H), 5,36 (dd, 1H, J = 4,40 Hz, 1,60 Hz 5-H), 5,58 (pseudo-d, 2H, NH2), 5,75 (d, 1H, J = 12 Hz, = CH), 6,24 (d, 1H, J = 12 Hz, = CH), 6,92 (s, 1H, CHPh2), 7,29 - 7,43 (m, 10 H, Ph).

10 E-isomeeri:

Saanto: 347 mg (12 %) kiteistä kiinteätä ainetta IR (KBr): 3444, 1775, 1728, 1671 cm'1 MS: (M+H)+ 423,4

Sulamispiste: 142 °C (hajoten) 15 XH-NMR (250 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,36 (s, 3H), 3,11 (dd, 1H, J = 16 Hz, 2,0 Hz, 6-H), 3,56 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,2

Hz, 6-H), 4,83 (s, 1H, 2-H), 5,37 (dd, 1H, J = 2,0 Hz, 4,2 Hz 5-H), 5,55 (s, leveä, 2H NH2), 5,97 (d, 1H, J = 15

Hz, = CH), 6,94 (s, 1H, CHPh2), 6,95 (d, 1H, J = 15 Hz, 20 =CH), 7,28 - 7,40 (m, 10 H, Ph).

(b) (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-me- : \ tyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep- , , taani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri ! Esimerkin 2 mukaisesti hapetetaan 370 mg (0,875 ,; ! 25 mmol) (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-metyyli- • ; 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli- = * ;;; happo-bentshydryyliesteriä. Eluointiaineena käytetään *·* ‘ etikkaesteri : n-heksaanin 1 :1 seosta.

Saanto: 225 mg (57 %) väritöntä vaahtoa 30 IR (KBr): 1799, 1750, 1678, 1326, 1188, 1140 cm'1 : MS: (M+H)+ 455,2 ^-NMR (250 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,50 (s, 3H), 3,45 (dd, , ; 1H, J = 16 Hz, 2 Hz, 6-H), 3,56 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4 Hz, 6-H), 4,67 (dd, 1H, J = 4 Hz, 2 Hz, 5-H), 5,28 (s, 1H, 2-35 H), 5,63 (s, leveä, 1H, NH2), 5,84 (d, 1H, J = 13 Hz,=CH), 29 113775 6,69 (s, leveä, 1H, NH2), 6,39 (d, 1H, J = 13 Hz,=CH), 6,93 (s, 1H, CHPh2), 7,29 - 7,41 (m, 10 H, Ph).

(E) (2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-metyy- li-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa-5 ni-2-karboksyy1ihappo-bentshydryy1iesteri 0,64 g (1,51 mmol) (E)-(2S,3R,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli )-3-metyyli- 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo [3, 2, 0]hep-taani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 30 ml:aan metyleenikloridia ja jäähdytetään 0 °C:seen. 10 Sitten tähän tiputetaan 1,86 g (7,55 mmol) meta-klooriper-bentsoehappoa (pitoisuus: 70 - 75 %, 5 ekviv.) 30 ml:ssa metyleenikloridia, ja lisäyksen päätyttyä poistetaan jäähdytyshaude ja sekoitetaan 6 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioliuosta ravistellaan natriumsulfiittiliuoksen 15 kanssa (3 % kyllästetyssä, vesipitoisessa natriumbikar-bonaattiliuoksessa) ja pestään kyllästetyllä, vesipitoisella natriumkloridiliuoksella. Kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan, liuotin poistetaan rotaatiohaihdutti-messa ja jäljelle jäävä jäännös kiteytetään uudelleen me-20 tyleenikloridi/n-heksaanista.

Saanto: 210 mg (30 %) väritöntä kiinteätä ainetta.

; , IR (KBr): 1799, 1756, 1686, 1329, 1188, 1143, 1191 cm'1 j -* MS: (M+H+) 455,3

Sulamispiste: 186 - 188 °C

’ 25 1H-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,30 (s, 3H), 3,47 (dd, : 1H, J = 16 Hz, 3,0 Hz, 6-H), 3,61 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,4 • ’ Hz, 6-H), 4,67 (dd, 1H, J = 3,0 Hz, 4,4 Hz, 5-H), 4,82 (s, : : 1H, 2-H), 5,53 (s, leveä, 1H, NH2), 6,03 (d, 1H, J * 16

Hz,=CH), 6,98 (d, 1H, J = 16 Hz,=CH), 6,94 (s, 1H, CHPh2), 30 7,26 - 7,40 (m, 10 H, Ph).

(c) (Z) (2S,3S,5R)-3-(2-karbamoyyli-vinyyli)-3-me-tyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep-taani-2-karboksyy1ihappo-natriumsuola Esimerkin 2 mukaisesti poistetaan suojaus 35 135 mg:sta (0,30 mmol) (Z)-(2S,3R,5R)-3-(2-karbamoyyli- 30 113775 vinyyli )-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Saanto: 67 mg (70 %) väritöntä lyofilisaattia.

IR (KBr): 3434, 1781, 1668, 1626, 1397, 1317, 1139 cm’1 5 MS: (M-Na)' 287,2 1H-NMR (250 MHz, D20): δ [ppm] = 1,76 (s, 3H), 3,44 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,2 Hz, 6-H), 3,69 (s, 1H, J = 16 Hz, 4 Hz, 6-H), 4,68 (s, 1H, 2-H), 5,10 (dd, 1H, J = 4 Hz, 1,2 Hz, 5-H), 5,94 (d, 1H, J = 13 Hz,=CH), 6,53 (d, 1H, J = 13 10 Hz, =CH).

(E) - (2S,3S, 5R) -3- (2-karbamoyyli-vinyyli) -3-metyy-li-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa-ni-2-karboksyy1ihappo-natriumsuola

Esimerkin 2 mukaisesti poistetaan suojaus 15 350 mg:sta (0,78 mmol) (E)-(2S,3R,5R)-3-(2-karbamoyyli- vinyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Saanto: 190 mg (80 %) IR (KBr): 1782, 1684, 1622, 1398, 1318, 1140 cm'1 20 MS: (M-Na)' 287,1 1H-NMR (250 MHz, D20): δ [ppm] = 1,66 (s, 3H), 3,46 (dd, 1H, J = 17 Hz, 1,4 Hz, 6-H), 3,71 (dd, 1H, J = 17 Hz, 4,0 ’ Hz, 6-H), 4,62 (s, 1H, 2-H), 5,14 (dd, 1H, J = 1,4 Hz, 4,0

Hz, 5-H), 6,46 (d, 1H, J = 16 Hz,=CH), 6,88 (d, 1H, J = 16 : 25 Hz, =CH).

9 ' *’ Esimerkki 7 (a) (E) (2S,3S,5R)-3-(2-etoksikarbonyyli-propenyy-li) -3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0] -heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri 30 286 mg (0,75 mmol) (2S,3R, 5R)-3-formyyli-3-metyyli- : : 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli- . happo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäärissä 12 ml:aan THF:ää ja tähän lisätään 271 mg (0,75 mmol) '; ’ (1-etoksikarbonyylietylideeni)-trifenyylifosforaania.Kel- .. 35 täistä liuosta sekoitetaan 6 tuntia 70 °C:ssa ja tämän 31 113775 jälkeen haihdutetaan. Jäljelle jäävä jäännös kromatografi-oidaan silikageelillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen etikkaesteri : heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

Saanto: 157 mg (45 %) vaaleankeltaista kiinteätä ainetta 5 IR (kalvo): 1788, 1754, 1704, 1642 cm'1 MS(M+NH4+) 483,4 1H-NMR (400 MHz, CDC13): 6 [ppm] = 1,32 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,38 (s, 3H), 2,03 (d, 3H, J = 1,5 Hz), 3,05 (dd, 1H, J = 1,8 Hz, 16 Hz, 6-H), 3,57 (dd, 1H, J = 4,3 Hz, 16 Hz, 10 6-H), 4,23 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 4,89 (s, 1H, 2-H), 5,29 (dd, 1H, J = 4,3, 1,8 Hz, 5-H), 6,94 (s, 1H, CHPh2), 7,20 (d, 1H, J = 1,5 Hz, =CH), 7,30 - 7,36 (m, 10 H, Ph). Esimerkki 8 (a) (E,Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vinyyli)-3-metyy-15 li-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2- karboksyylihappo-bentshydryyliesteri

Suspensio, jossa on 1,37 g (4,40 mmol) kloorimety-leeni-trifenyylifosforaania 25 ml:ssa dietyylieetteriä, jäähdytetään 0 °C:seen ja tähän lisätään 1,60 g (4,20 20 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-at-sa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryy-liesteriä. Jäähdytyshaude poistetaan ja sekoitetaan edel-leen huoneenlämpötilassa vielä 3 tuntia. Oranssin värinen ! suspensio suodatetaan ja tämän jälkeen haihdutetaan. Jäi- ;; 25 jelle jäävä jäännös kromatografioidaan silikageelillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen etikkaesteri : hek-··- saania 1 : 2 eluointiaineena.

·.’ * Saanto: 1,20 g (69 %) keltaista isomeeriseosta, E:Z 7 : 9.

Seoksen spektroskooppiset arvot: :· 30 IR (kalvo): 1782, 1747, 1590, 1496, 1251 cm’1 MS(M+NH4+) 413.

s · 32 1 13 7 7 5 (b) (E,Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vinyyli)-3-metyy-li-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0] hep taa-ni-2-karboksyylihappo-bentshydryy1iesteri 298 g (14,05 mmol) natrium-metaperjodaattia liuote-5 taan argonatmosfäärissä 30 ml:aan vettä ja jäähdytetään 0 °C:seen. Tähän lisätään 0,93 g (11,17 mmol) natriumbikarbonaattia ja sen jälkeen 45 ml asetonitriiliä sekä 60 ml metyleenikloridia. Kaksifaasiseokseen lisätään 9 mg (0,070 mmol) ruteniumdioksidia, ja tämän jälkeen liuos, 10 jossa on 1,20 g (2,90 mmol) (E,Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vinyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep-taani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Jäähdytys-haude poistetaan ja reaktioseosta sekoitetaan, kunnes reaktio on täydellinen (DC-kontrolli). Tämän jälkeen lisä-15 tään 2 g aktiivihiiltä ja 20 ml kyllästettyä keittosuola-liuosta, sekoitetaan edelleen 5 minuuttia ja reaktioseos imusuodatetaan Dikaliitin läpi. Faasit erotetaan erotus-suppilossa, vesipitoinen faasi uutetaan kaksi kertaa mety-leenikloridilla ja yhdistetyt orgaaniset uutteet pestään 20 vedellä ja kyllästetyllä keittosuolaliuoksella. Kuivataan magnesiumsulfaatti/bentoniitilla, suodatetaan ja haihdute-: ·. taan rotaatiohaihduttimessa. Jäljelle jäävä öljy kromato- grafioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) 1 . käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 1 : 2 eluointiaineena.

25 Tällöin molemmat isomeerit erotetaan. Ensimmäisenä kompo- * * ' ;* nenttina eluoidaan Z-isomeeri.

Saanto: Z: 495 mg (38 %) väritöntä vaahtoa V * E: 385 mg (30 %) väritöntä vaahtoa

Spektroskooppiset arvot E-isomeeri: :· 30 MS(M+NH4)+ 463,4 IR (KBr): 1800, 1756, 1612, 1331, 1143, 700 cm’1 Spektroskooppiset arvot Z-isomeeri: MS(M+NH4)+ 463,4 ;·’ IR (KBr): 1800, 1755, 1630, 1330, 1143, 700 cm'1.

t » 33 113775 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vinyyli)-3-metyyli- 4,4,7-triokso-4-tia-1-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani- 2-karboksyylihappo-natriumsuola 385 mg (0,86 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vi-5 nyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäärissä 2,3 ml:aan m-kresolia ja sekoitetaan 4 tunnin ajan 50 °C:ssa. Tämän jälkeen laimennetaan 15 ml:lla isobutyylimetyyliketonia, tähän lisätään 10 0,50 ml 2-etyylikapronihappo-natriumsuolaa (2N liuos etikkaesterissä) ja uutetaan kolme kertaa kulloinkin 8 ml:11a vettä. Yhdistetyt vesifaasit pestään vielä kerran 10 ml:11a isobutyylimetyyliketonia, lyofilisoidaan ja saatu lyofilisaatti kromatografioidaan polymeerisellä, hydro-15 fobisella geelillä käyttäen eluointlaineena vettä.

Saanto: 57 mg (32 %) MS: (M-Na)' 278,2 IR (KBr): 1780, 1626, 1564, 1417, 1329, 1145 cm'1 (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vinyyli)-3-metyyli-20 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani- 2-karboksyylihappo-natriumsuola ; \ Esimerkin 8 mukaisesti poistetaan suojaus 400 mg:sta (0,90 mmol) (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-kloori-vinyy-. li )-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0] - ! 25 heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

; Saanto: 176 mg (65 %) väritöntä lyofilisaattia ; MS: (M-Na)" 278,2 IR (KBr): 1779, 1626, 1398, 1321, 1142 cm'1 Alkuaineanalyysi: C9H9ClN05SNa (301,676) 30 Laskettu: C 35,83 H 3,01 N 4,64 : Löydetty *): C 35,72 H 3,04 N 4,65 . *) vedetön, laskettu 5,53 %:lla vettä 34 113775

Esimerkki 9 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-7-okso-3-(3-okso-but- 1-enyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri 5 381 mg (1,00 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-mety- yli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karbok-syylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäär-issä 12 ml:aan THF:ää ja tähän lisätään 350 mg (1,10 mmol) asetyylimetyleeni-trifenyylifosforaania. Sitten sekoite-10 taan 6 päivää 50 °C:ssa ja tämän jälkeen haihdutetaan. Jäljelle jäävä jäännös kromatografioidaan silikageelillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen etikkaesteri : mety-leenikloridia 95 : 5 eluointiaineena.

Saanto: 221 mg (52 %) valkoista hartsia 15 IR (kalvo): 1782, 1681, 1627, 1319, 1141, 980 cm'1 MS: (M-Na)' 286,1 (b) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(3-okso-but-l-enyy-li ) -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep-taani-2-karboksyy1ihappo-bentshydryy1iesteri 20 Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 221 mg (0,49 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-7-okso-3-(3-okso-but-l- : enyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy- . ·. lihappo-bentshydryyliesteriä. Sitten kromatografioidaan kerran silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen ! 25 etikkaesteri : n-heksaania 9 : 16 eluointiaineena ja ki- ; teytetään metyleenikloridi/n-heksaanista.

Saanto: 95 mg (40 %) värittömiä kiteitä : MS: (M+MH4)+ 471,2 IR (KBr): 1798, 1760, 1682, 1627, 1330, 1193, 1142, , 30 976 cm'1 : Sulamispiste: 183 - 184 °C.

» * > 35 113775 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(3-okso-but-l-enyy-li)-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep-taani-2-karboksyylihappo-natriumsuola

Esimerkin 8 mukaisesti poistetaan suojaus 5 250 mg:sta (0,55 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(3-okso- but-l-enyyli )-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0] -heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

Saanto: 47 mg (27 %) väritöntä lyofilisaattia MS: (M-Na)* 286,1 10 IR (KBr): 1782, 1681, 1627, 1394, 1319, 1141, 980 cm'1 Esimerkki 10 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-formyyli-vinyyli)-3-metyy-li-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri 15 3,81 g (10,0 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli- 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani^-karboksyyli-happo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäärissä 40 ml:aan metyleenikloridia ja tähän lisätään 3,34 g (11,0 mmol) formyylimetyleeni-trifenyylifosforaania. Keltaista 20 liuosta sekoitetaan 3 päivää huoneenlämpötilassa ja tämän jälkeen haihdutetaan. Jäljelle jäävä jäännös kromatografi-’ oidaan silikageelillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen tert.-butyylimetyylieetteri : n-heksaania 2 : 3 eluointi-aineena.

! 25 Saanto: 528 mg (13 %) väritöntä hartsia » f IR (kalvo): 2738, 1781, 1744, 1717, 1690, 1496, 1178, * ; 986 cm*1 : : MS: (M+MH4+) 425,6

Esimerkki 11 30 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-(l,2,4-oksadiat- sol-3-yyli)-vinyyli]-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo-; [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylies- ' . * teri , 1,14 g (3,0 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli- 35 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli- * » 36 113775 happo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 15 ml:aan 1,2-buty-leenioksidia ja tähän lisätään 1,38 g (3,6 mmol) (1,2,4-oksadiatsol-3-yyli)metyyli-trifenyylifosfoniumkloridia,ja kuumennetaan paluujäähdyttäen 10 tunnin ajan. Tämän jäl-5 keen suodatetaan, haihdutetaan rotaatiohaihduttimessa ja jäljelle jäävä ruskea öljy kromatografioidaan silikagee-lillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen metyleeniklori-dia eluointiaineena.

Saanto: 280 mg (21 %) värittömiä kiteitä 10 MS: (M+MH4) + 465,3 IR (KBr): 1792, 1753, 1658, 1492, 1200, 991 cm'1 (b) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-(1,2,4-oksadiat-sol-3-yyli)-vinyyli]-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd- 15 ryyliesteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 280 mg (0,63 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-(1,2,4-oksadiatsol-3-yyli)-vinyyli] -7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa-ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Sitten kroma-20 tografioidaan kerran silikageelillä (raekoko 0,040 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 9 : 16 elu- | ointiaineena ja kiteytetään metyleenikloridi/n-heksaanis- * · , . ta.

* » , Saanto: 95 mg (40 %) värittömiä kiteitä f 25 MS: (M-H)' 478,3 » : IR (KBr): 1805, 1758, 1650, 1334, 1196 cm*1 < ·

• ; Sulamispiste: 157 °C

Alkuaineanalyysi: C24H21N306S (479,507)

Laskettu: C 60,12 H 4,41 N 8,76 , ,* 30 Löydetty: C 59,94 H 4,26 N 8,55 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-(1,2,4-oksadiat- ; sol-3-yyli)-vinyyli]-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa- » , ‘ bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo 355 mg (0,74 mmol) ( E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-35 (1,2,4-oksadiatsol-3-yyli )-vinyyli]-4,4,7-triokso-4-tia- 37 1 13775 l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd-ryyliesteriä liuotetaan 3 ml:aan m-kresolia ja sekoitetaan 4 tuntia 50 °C:ssa. Vaaleanruskeaan liuokseen lisätään 20 ml n-heksaania, muodostuneet kiteet imusuodatetaan ja 5 pestään n-heksaanilla. Raakakiteet kiteytetään uudelleen etikkaesteri/n-heksaanista.

Saanto: 170 mg (73 %) värittömiä kiteitä MS: (M-H)' 312,2 IR (KBr): 2900 (leveä), 1811, 1714, 1660, 1331, 1194, 10 980 cm'1

Sulamispiste: 161 °C (hajoten)

Alkuaineanalyysi: C11H11N306S (313,284)

Laskettu: C 42,17 H 3,54 N 13,41 Löydetty: C 42,41 H 3,64 N 13,18 15 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-(l,2,4-oksadiat- sol-3-yyli)-vinyyli]-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-natrium-suola

Kirkkaaseen liuokseen, jossa on 23 mg (0,27 mmol) 20 natriumvetykarbonaattia 10 ml:ssa vettä, lisätään yhtenä annoksena 85 mg (0,27 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-' [2-( 1,2,4-oksadiatsol-3-yyli)-vinyyli]-4,4,7-triokso-4- tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappoa, ·, sekoitetaan edellen noin 10 minuutin ajan, suodatetaan ja 25 lyofilisoidaan.

Saanto: 90 mg (91 %) väritöntä lyofilisaattia : MS: (M-Na)' 312,2 '· 1 IR (KBr): 1787, 1627, 1395, 1321, 1192, 970 cm'1

Alkuaineanalyysi: CuH10N3O6SNa (335,266) ,, ’ 30 Laskettu: C 39,41 H 3,01 N 12,53 : Löydetty *): C 39,86 H 3,04 N 12,51 ,·, ; *) vedetön, laskettu 5,82 %:lla vettä.

> » 38 1 13 7 7 5

Esimerkki 12 (a) (E) ja (Z)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-tiatsol- 2-yyli)-vinyyli)-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,- O]heptaani-2-karboksyy1ihappo-bentshydryy1iesteri 5 1/14 g (3,0 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli- 7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyyli-happo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 50 ml:aan 1,2-buty-leenioksidia ja tähän lisätään 1,53 g (3,86 mmol) (tiat-sol-2-yyli)metyyli-trifenyylifosfoniumkloridia, ja kuumen-10 netaan paluujäähdyttäen 40 tunnin ajan. Tämän jälkeen suodatetaan, haihdutetaan rotaatiohaihduttimessa ja jäljelle jäävä ruskea suodos kromatografioidaan silikageelillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen metyleenikloridi : etikkaesteriä 95 : 5 eluointiaineena. Tällöin molemmat 15 isomeerit erotetaan", ja ensimmäisenä komponenttina eluoi-daan Z-isomeeri.

Z-isomeeri:

Saanto: 240 mg (17 %) keltaista öljyä IR (kalvo): 1778, 1743, 1493, 1197, 986 cm'1 20 MS: (M+H+) 463,5 E-isomeeri: : Saanto: 855 mg (62 %) keltaista hartsia ‘ IR (KBr): 1779, 1746, 1492, 1292, 988 cm'1 MS: (M+H)+ 463,5 25 (b) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-4,4,7-triokso-3-(2- tiatsol-2-yyli)-vinyyli)-4-tia-1-atsa-bisyklo-* [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyli- i esteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 200 mg (0,43 30 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-tiatsol-2-yyli-vinyy- li )-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karbok-. syylihappo-bentshydryyliesteriä. Sitten kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen metyleenikloridi : etikkaesteriä 95 : 5 eluointiaineena.

35 Saanto: 72 mg (33 %) väritöntä vaahtoa 39 113775 MS: (M+H) + 495,4 IR (KBr): 1799, 1756, 1329, 1192, 1142, 963 cm-1 (Z) - (2S, 3S, 5R) -3-metyyll-4,4,7-triokso-3- (2-tiat-sol-2-yyli-vinyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-5 heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 210 mg (0,45 mmol) (Z)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-4,4,7-triokso-3-(2-tiat- sol-2-yyli-vinyyli) -4-tia-l-atsa-bisyklo [3,2,0]heptaani- 2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Sitten kromato-10 grafioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen metyleenikloridi : etikkaesteriä 95 : 5 eluoin-tiaineena.

Saanto: 72 mg (33 %) väritöntä vaahtoa MS: (M+H)+ 495,4 15 IR (KBr): 1793, 1754, 1490, 1328, 1184, 1142, 963 cm-1 (E) - (2S, 3S, 5R) -3-metyyli-4,4,7-triokso-3- (2-tiat-sol-2-yyli-vinyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-heptaani-2-karboksyy1ihappo

Esimerkin 11 mukaisesti poistetaan suojaus 20 200 mg:sta (0,40 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-tiat- sol-2-yyli-vinyyli)-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- j [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

, . Saanto: 53 mg (40 %) värittömiä kiteitä * · MS: (M+H) + 329,4 : 25 IR (KBr): 2800 (leveä), 1791, 1740, 1634, 1321, 1142, * ; 965 cm-1 - * (E) - (2S, 3S, 5R) -3-metyyli-4,4,7-triokso-3- (2-tiat-sol-2-yyli-vinyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-heptaani-2-karboksyy1ihappo-natriumsuola . 30 Esimerkin 11 mukaisesti 53 mg (0,16 mmol) (E)- : (2S,3S,5R)-3-metyyli-4,4,7-triokso-3-(2-tiatsol-2-yyli- vinyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy-lihappoa muutetaan vastaavaksi natriumsuolaksi. i Saanto: 55 mg (98 %) väritöntä lyofilisaattia 35 IR (KBr): 1778, 1627, 1392, 1318, 1192, 1141, 955 cm'1 40 113775

Alkuaineanalyysi: C12H11N205S2Na (350,339)

Laskettu: C 41,14 H 3,16 N 8,00 Löydetty *): C 40,73 H 3,51 N 7,92 *) vedetön, laskettu 5,9 %:lla vettä.

5 (Z) - (2S, 3S, 5R) -3-metyyli-4,4,7-triokso-3- (2-tiat- sol-2-yyli-vinyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola Esimerkin 8 mukaisesti 160 mg (0,32 mmol) (Z)-(2S, 3S,5R)-3-metyyli-4,4,7-triokso-3-(2-tiatsol-2-yyli-10 vinyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy-lihappo-bentshydryyliesteriä muutetaan vastaavaksi nat-riumsuolaksi.

Saanto: 60 mg (57 %) väritöntä lyofilisaattia IR (KBr): 1781, 1623, 1398, 1320, 1193, 1140, 950 cm'1 15 ^-NMR (250 MHz, CDC13): δ [ppm] = 1,52 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,2 Hz, 6-H), 3,58 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,1 Hz, 6-H), 5,04 (dd, 1H, J = 1,2 Hz, 4,1 Hz 5-H), 5,19 (s, 1H 2-H), 6,06 (d, 1H, J = 12,5 Hz, = CH), 7,14 (d, 1H, J = 12,5 Hz, = CH), 7,75 (AB-systeemi, 2H, J = 3,5 Hz, tiatso-20 li-H).

Esimerkki 13 : , (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyridin-2-yyli- ’ ’ vinyyli)-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa- ni-2-karboksyy1ihappo-bentshydryyliesteri ; 25 Suspensiota, jossa on 353 mg (1,0 mmol) (2-pikolyy- • t : ' li)metyleeni-trifenyylifosforaania ja 381 mg (1,00 mmol) (2S,3R, 5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bis-V ‘ yklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylieste- riä 10 ml:ssa dietyylieetteriä, sekoitetaan huoneenlämpö-30 tilassa argonatmosfäärissä 2 tunnin ajan. Sitten tähän ' : lisätään 10 ml metyleenikloridia, imusuodatetaan liukene- , , mattomista aineosista erilleen ja haihdutetaan. Jäljelle ,* jäävä jäännös kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käytäen metyleenikloridi : etikkaesteriä 35 95:5 eluointiaineena.

41 113775

Saanto: 128 mg (28 %) väritöntä vaahtoa MS: (M ) 456 IR (KBr): 1779, 1747, 1634, 1291, 988 cm'1 (b) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyridin-2-yyli- 5 vinyyli) -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2, - 0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 196 mg (0,43 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyridin-2-yyli-vinyyli )-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3, 2, 0]heptaani-2-karbok-10 syylihappo-bentshydryyliesteriä. Sitten kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käytäen metylee-nikloridi : etikkaesteriä 95:5 eluointiaineena.

Saanto: 130 mg (62 %) väritöntä vaahtoa MS: (M+H) + 489,4 15 IR (KBr): 1779, 1756, 1580, 1490, 1327, 1184, 1141, 969 cm-1 (c) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyridin-2-yyli-vinyyli) -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0] -heptaani-2-karboksyy1ihappo 20 Esimerkin 10 mukaisesti poistetaan suojaus 200 mg:sta (0,41 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyri-; , din-2-yyli-vinyyli)-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- " * [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

Saanto: 85 mg (65 %) vaalean beigen väristä kidejauhetta I; ' 25 MS: (M+H) + 323,3 : : IR (KBr): 2700 (leveä), 1790, 1720, 1621, 1318, 1140, 978 cm·1 (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyridin-2-yyli-vi-nyyli) -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-30 heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola

Esimerkin 10 mukaisesti muutetaan 83 mg (0,17 mmol) ( E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-pyridin-2-yyli-vinyyli)-* 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- boksyylihappoa vastaavaksi natriumsuolaksi.

35 Saanto: 89 mg (100 %) väritöntä lyofilisaattia 42 113775 IR (KBr): 1784, 1629, 1587, 1478, 1396, 1320, 1187, 1141, 980 cm-1

Alkuaineanalyysi: C14H13N205SNa (344,317)

Laskettu: C 48,84 H 3,81 N 8,14 5 Löydetty *): C 49,18 H 4,23 N 8,17 *) vedetön, laskettu 6,86 %:lla vettä.

Esimerkki 14 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-[2-(metoksi-metyyli-karbamoyy-li) -vinyyli] -3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyk- 10 lo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyli- esteri

Oranssin väristä liuosta, jossa on 1,14 g (3,0 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-at- s a-bi syklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy1ihappo-bentshydryy-15 liesteriä ja 1,14 g (3,15 mmol) (N-metoksimetyyliaminokar-bonyylimetyleeni)-trifenyylifosforaania, sekoitetaan 3 päivän ajan argonatmosfäärissä huoneenlämpötilassa. Liuotin poistetaan rotaatiohaihduttimessa ja kromatografioi-daan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen 20 etikkaesteri : n-heksaania eluointiaineena.

Saanto: 1,12 g (80 %) väritöntä vaahtoa : ·. MS: (M+H)+ 467,4 " * IR (KBr): 1781, 1744, 1662, 1629, 995 cm'1 (b) (E)-(2S,3S,5R)-3-[2-(metoksi-metyyli-karbamoyy- 25 li)-vinyyli]-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa- bisyklo [3,2,0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd-ryyliesteri * 0,69 g (1,48 mmol) (E)-(2S,3S, 5R)-3-[2-(metoksi- metyyli-karbamoyyli)-vinyyli]-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-30 atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd- ryyliesteriä hapetetaan esimerkin 8 mukaisesti. Sitten kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 3:2 eluointiaineena.

35 Saanto: 405 mg (55 %) väritöntä vaahtoa 43 113 7 7 5 MS: (Μ+ΗΓ 499,4 IR (KBr): 1807, 1753, 1662, 1624, 1318, 1140, 1000 cm'1.

(c)(E)-(2S,3S,5R)-3-[2-(metoksi-metyyli-karbamoyy-li)-vinyyli]-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-5 bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy1ihappo-natrium- suola

Esimerkin 8 mukaisesti poistetaan suojaus 200 mg:sta (0,40 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-[2-(metoksi-metyyli -karbamoyy li )-vinyyli]-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-10 atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd- ryyliesteriä.

Saanto: 95 mg (67 %) väritöntä lyofilisaattia MS: (Μ+ΗΓ 355,3 IR (KBr): 1785, 1650, 1626, 1390, 1322, 1191, 1141, 15 980 cm1

Alkuaineanalyysi: C12H15N207SNa (354,309 )

Laskettu: C 40,68 H 4,27 N 7,91 Löydetty *): C 40,37 H 4,35 N 7,84 *) vedetön, laskettu 2,74 %:lla vettä.

20 Esimerkki 15 (E) - (2S, 3S, 5R) -3-metyyli-3- [2 - (l-Inetyyli-pyridin- 2-ylio)-vinyyli]-4,4, 7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyk-[ lo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo 150 mg (0,31 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-(2-; 25 pyridin-2-yyli )-vinyyli]-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyk- ; ’ lo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 3 ml:aan metyleenikloridia, jäähdytetään , : 0 °C:seen ja tähän lisätään 56 μΐ (0,51 mmol) trifluori- metyylisulfonihappometyyliesteriä. Jäähdytyshaude pois-• 30 tetaan ja sitten sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 päivää.

;" ; Liuotin poistetaan rotaatiohaihduttimessa ja jäännös kui- . vataan korkeavakuumissa. Saatua tuotetta (200 mg, 100 %) käsitellään edelleen ilman eri puhdistusta. Ruskea hartsi liuotetaan 2 ml:aan m-kresolia ja sekoitetaan 2 tuntia 35 50 °C:ssa. Tämän jälkeen lisätään 10 ml isobutyylimetyyli- 44 113775 ketonia sekä 5 ml vettä, ravistellaan, faasit erotetaan ja orgaaninen faasi uutetaan vielä kaksi kertaa 5 ml:11a vettä. Vesifaasit pestään kaksi kertaa kulloinkin 10 ml:11a isobutyylimetyyliketonia, suodatetaan ja lyofilisoidaan. 5 Kellertävä lyofilisaatti kromatografioidaan polymeerisellä, hydrofobisella geelillä käyttäen vettä eluointiainee-na.

Saanto: 105 mg (72 %) oranssin väristä lyofilisaattia IR (KBr): 1778, 1627, 1377, 1185, 970 cm'1 10 MS: (M+) 337,4

Esimerkki 16 (a) (IE,3E)-(2S,3S,5R)-3-(4-formyyli-buta-1,3-di- enyyli) -3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyli-15 esteri (IE, 3E)-(2S, 3S, 5R)-3-(4-f ormyyli-buta-1,3-dienyy-li)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,OJheptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä valmistetaan vastaavasti kuten esimerkissä 10 3,81 g:sta (10,0 mmol) (2S, 20 3R,5R)-3-(2-formyylivinyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-at- sa-bisyklo[3,2,0]heptaaani-2-karboksyylihappo-bentshydryy-: ·. liesteriä ja 4,55 g:sta (15,0 mmol) formyylimetyleeni-tri- fenyylifosforaania. Sitten kromatografioidaan silikagee-! Iillä (0,040 - 0,063 mm raekoko) käyttäen metyleenikloridi 25 : etikkaesteriä 98 : 2 eluointiaineena.

; Saanto: 347 mg (8 %) kellertävää hartsia ; MS: (M+NH4)+ 451,4 : IR (KBr): 1779, 1745, 1680, 1637, 1201, 988 cm'1.

Esimerkki 17 , 30 (a) (1E,3E) ja (lE,3Z)-(2S,3S,5R)-3-(4-syano-buta- : : 1,3-dienyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyk- ‘ . lo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyli- !,. ‘ esteri (1E,3E) ja (IE,3Z )-(2S, 3S, 5R)-3-(4-syano-buta-l,3-• '·· 35 dienyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]- 45 113775 heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä valmistetaan vastaavasti, kuten esimerkissä 4, menetelmässä B, 815 mg:sta (2,14 mmol) (IE,3E)-(2S,3S,5R)-3-(2-formyylivi-nyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa-5 ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä ja 678 mg:sta (2,25 mmol) syanometyleenitrifenyylifosforaania. Jäljelle jäävä öljy kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 1 : 2 eluointiaineena.

10 Seoksen spektroskooppiset arvot: IR (kalvo): 2215, 1780, 1745, 1202, 989 cm"1 MS: (M+NH/) 448,5 (b) (IE,3E) ja (lE,3Z)-(2S,3S,5R)-3-(4-syano-buta- 1,3-dienyyli) -3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-at-15 sa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bents- hydryyliesteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 770 mg (1,79 mmol) (IE,3E) ja (1E,3Z)-(2S,3S,5R)-3-(4-syano-buta-1,3- dienyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]- 20 heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä.Molemmat isomeerit voidaan erottaa kromatografisesti silikageelil- : ·, lä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : « ♦ n-heksaania 9 : 16 eluointiaineena. Ensimmäisenä komponenttina eluoidaan Z-isomeeri.

25 Saanto: Z: 430 mg (52 %) väritöntä öljyä ·’ E: 280 mg (34 %) väritöntä vaahtoa .. . Spektroskooppiset arvot: E-isomeeri: •\ ; MS: (M+NH4)+ 480,5 IR (KBr): 2219, 1800, 1756, 1329, 1191, 994 cm"1 • 30 Spektroskooppiset arvot: Z-isomeeri: MS: (M+NH4)+ 480,5 IR (KBr): 2210, 1800, 1756, 1330, 1192, 993 cm"1 » · » * 46 113775 (c) (IE,3E)-(2S,3S,5R)-3-(4-syano-buta-l,3-dienyy-li)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola

Esimerkin 8 mukaisesti poistetaan suojaus 5 250 mg:sta (0,54 mmol) (IE,3E)-(2S,3S,5R)-3-(4-syano-buta- 1.3- dienyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Saanto: 55 mg (41 %) kellertävää lyofilisaattia IR (KBr): 2221, 1781, 1631, 1397, 1319, 992 cm'1 10 MS: (M+Na)+ 341,2.

(1E,3Z) - (2S,3S, 5R) -3- ( 4-syano-buta-l, 3-dienyyli) - 3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola

Esimerkin 8 mukaisesti poistetaan suojaus 15 230 mg:sta (0,49 mmol) (IE,3E)-(2S,3S,5R)-3-(4-syano-buta- 1.3- dienyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. Saanto: 84 mg (58 %) kellertävää lyofilisaattia IR (KBr): 2219, 1780, 1625, 1396, 1316, 1138, 951 cm-1 20 MS: (Μ+ΗΓ 319,3

Alkuaineanalyysi: C12HuN205SNa (318,279)

Laskettu: C 45,28 H 3,48 N 8,80 ' [ Löydetty *): C 45,29 H 3,63 N 8,82 *) vedetön, laskettu 6,93 %:lla vettä.

25 Esimerkki 18 (a) (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-7-okso-3-[2-okso-l-(2,2,2-trifluori-etyyli) -pyrrolidin-3-ylideenime-‘ * tyyli] -4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- boksyylihappo-bentshydryyliesteri 30 Esimerkin 12 mukaisesti 762 mg:n (2,0 mmol) : (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyk- . lo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä annetaan reagoida 1,02 g:n kanssa (2,0 mmol) rac-[2-okso- l-( 2,2,2-trif luorietyyli )-2-pyrrolidinyyli] -trifenyylifos-.· 35 foniumbromidia. Sitten kromatografioidaan silikageelillä 47 113775 (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-hek-saania 9 : 16 eluointiaineena.

Saanto: 763 mg (71 %) isomeeriseosta, E:Z 5:1 Seoksen spektroskooppiset arvot: 5 IR (kalvo): 1782, 1748, 1702, 1664, 1158 cm'1 MS: (M-CPh2) + 363.

(b) (E) ja (Z)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-okso-l-(2,2,2-trif luori-etyyli) -pyrrolidin-3-ylideenime-tyyli] -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]- 10 heptaani - 2 -karboksyyl ihappo-bent shydryy 1 ies ter i

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 763 mg (1,42 mmol) (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-7-okso-3-[2-okso-l- (2,2,2-trifluori-etyyli)-pyrrolidin-3-ylideenimetyyli]-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-15 bentshydryyliesteriä. Molemmat isomeerit voidaan tällöin erottaa kromatografisesti silikageelillä (raekoko 0,040 -0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 1 : 2 eluointiaineena.

Saanto: E: 192 mg (24 %) väritöntä vaahtoa 20 Z: 32 mg (4 %) väritöntä vaahtoa

Spektroskooppiset arvot: E-isomeeri: : ·. MS: (M+NHJ+ 580,4 IR (KBr): 1801, 1759, 1706, 1667, 1329, 1144 cm"1 Spektroskooppiset arvot: Z-isomeeri: 25 MS: (M+NH4)+ 580,4 ;* IR (KBr): 1798, 1755, 1694, 1327, 1142 cm'1.

(c) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-okso-l-(2,2,2-trifluori-etyyli)-pyrrolidin-3-ylideenimetyyli]- 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani- 30 2-karboksyyl ihappo : Esimerkin 11 mukaisesti poistetaan suojaus . 192 mg:sta (0,34 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-okso- l-(2,2,2-trifluori-etyyli)-pyrrolidin-3-ylideenimetyyli]-'* 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar- «. 35 boksyylihappo-bentshydryyliesteriä.

: * » 48 113775

Saanto: 78 mg (59 %) väritöntä kidejauhetta MS: (M+NH4)+ 414,4 IR (KBr): 2800 (leveä), 1790, 1729, 1674, 1646, 1321, 1166 cm'1.

5 (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-3-[2-okso-l-(2,2,2-tri- f luori-etyyli) -pyrrolidin-3-ylideenimetyyli] -4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-kar-boksyylihappo-natriumsuola

Esimerkin 11 mukaisesti 50 mg (0,13 mmol) (E)-10 (2S,3S, 5R)-3-metyyli-3-[2-okso-l-( 2,2,2-trif luori-etyyli )- pyrrolidin-3-ylideenimetyyli]-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappoa muutetaan vastaavaksi natriumsuolaksi.

Saanto: 52 mg (98 %) väritöntä lyofilisaattia 15 IR (KBr): 1780, 1699, 1628, 1478, 1396, 1323, 1140 cm'1 Alkuaineanalyysi: C14H14N206F3SNa (418,318)

Laskettu: C 40,20 H 3,37 N 6,70 Löydetty *): C 39,80 H 3,28 N 6,62 *) vedetön, laskettu 7,24 %:lla vettä.

20 Esimerkki 19 (a)(E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(l-syklopropyyli-2-okso-pyr-; rolidin-3-ylideenimetyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia- * t » · 1-atsa-bisyklo [ 3,2,0] heptaani-2-karboksyy 1 ihappo- * · bentshydryyliesteri ; 25 Esimerkin 18 mukaisesti annetaan 381 mg: n « (1,0 mmol) (2S,3R,5R)-3-formyyli-3-metyyli-7-okso-4-tia- l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshyd- • ryyliesteriä reagoida 495 mg:n kanssa (1,1 mmol) rac-[l- syklopropyyli-2-okso-3-pyrrolidinyyli]-trifenyylifosfo-30 niumbromidia. Sitten kromatografioidaan silikageelillä : (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-hek- .* . saania 9 : 16 eluointiaineena.

Saanto: 362 mg (74 %) isomeeriseosta, E:Z 5:1 ;·* Seoksen spektroskooppiset arvot: I · 49 113775 IR (kalvo): 1780, 1750, 1692, 1661, 1195, 1118 cm'1; MS: (M+H)+ 489,4.

Esimerkki 20 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-(3-hydroksi-propen-1-yyli)-3-5 metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaa~ ni-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri 5,80 g (14,2 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-formyyli-vinyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep-taani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 10 argonatmosfäärissä 240 ml:aan tolueenia ja jäähdytetään 0 °C:seen. Sitten tähän tiputetaan 14,2 ml (21,3 mmol) 20 %:ista di-isobutyylialumiinihydridi-liuosta (toluee-nissa) ja jäähdytyshaude poistetaan. Sekoitetaan edelleen 6 tuntia huoneenlämpötilassa, sitten reaktioseos kaadetaan 15 150 ml:aan kyllästettyä ammoniumkloridiliuosta ja uutetaan kolme kertaa kulloinkin 200 ml:11a metyleenikloridia. Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestään kerran 300 ml:11a vettä sekä kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja liuotin poistetaan 20 rotaatiohaihduttimessa. Jäljelle jäävä öljy kromatografi-oidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen *. etikkaesteri : n-heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

Saanto: 1,90 g (32 %) väritöntä hartsia IR (kalvo): 3480 (leveä), 1778, 1750, 1202, 1080, 988 cm"1 25 MS: (M+NH4)+ 427,6.

(c) (E)-(2S,3S,5R)-3-(3-hydroksi-propen-l-yyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola

Esimerkin 8 mukaisesti poistetaan suojaus 30 500 mg:sta (0,95 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-4,4,7-tri- okso-3-[3-[(R)-ja (S)-tetrahydro-pyran-2-yylioksi]-prope-nyyli]-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy-lihappo-bentshydryyliesteriä.

Saanto: 165 mg (62 %) väritöntä lyofilisaattia 35 MS: (M-Na)' 274,3 » 50 113775 IR (KBr): 3428, 1780, 1622, 1398, 1311, 1192, 1139, 1082 cm*1

Alkuaineanalyysi: C10H12NO6SNa (297,257)

Laskettu: C 40,41 H 4,07 N 4,71 5 Löydetty *): C 40,44 H 4,48 N 4,79 *) vedetön, laskettu 8,73 %:lla vettä.

(E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-7-okso-3-[3-[(R)- ja (S)-tetrahydro-pyran-2-yylioksi] -propenyyli] -4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-lO bentshydryyliesteri 620 mg (1,50 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(3-hydroksi-propenyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]-heptaani-2-karboksyylihappo-bentsyyliesteriä liuotetaan 30 ml metyleenikloridia ja tähän lisätään 4,5 mg (0,024 15 mmol) p-tolueenisulfonihappo-monohydraattia. Tämän jälkeen lisätään 0,25 ml (2,70 mmol) 3,4-dihydro-2H-pyraania ja sekoitetaan edelleen 1 tunnin ajan. Liuotin poistetaan rotaatiohaihduttimessa ja sitten kromatografioidaan si-likageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etik-20 kaesteri : n-heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

Saanto: 700 mg (93 %) väritöntä öljyä, diastereomeeriseos : ·. (1:1) i ^ IR (kalvo): 3031, 1782, 1749, 1257, 1134, 967 cm"1 MS: (M+NH4)+ 511,6.

25 (E) - (2S, 3S, 5R)-3-metyyli-4,4,7-triokso-3-[3-[ (R) - ja (S)-tetrahydro-pyran-2-yylioksi]-propenyyli]-4-tia-l-atsa-bisyklo [ 3,2,0] heptaani-2-karboksyy lihap-' * po-bentshydryyliesteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 585 mg 30 (1,18 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-7-okso-3-[3-[(R)- ja (S)-tetrahydro-pyran-2-yylioksi]-propenyyli]-4-tia-1-at-sa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryy-liesteriä. Sitten kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 35 9 : 16 eluointiaineena.

51 113775

Saanto: 525 mg (84 %) väritöntä vaahtoa, diastereomeeri-seos (1:1) IR (KBr): 1800, 1756, 1327, 1189, 1141, 969 cm’1 MS: (M+NH4)+ 543,5.

5 Esimerkki 21 (a) (E)-(2S,3S,5R)-3-[3-(2-kloori-asetyyliaminokar-bonyylioksi)-propenyyli]-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri 10 300 mg (073 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(3-hydroksi-pro penyyli )-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep-taani-2-karboksyylihappo-bentsyyliesteriä liuotetaan ar-gonatmosfäärissä 10 ml:aan tetrahydrofuraania ja tähän lisätään 90 μΐ (1,05 mmol) klooriasetyyli-isosyanaattia. 15 Sekoitetaan edelleen 3 tuntia, haihdutetaan rotaatiohaih-duttimessa ja kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 9 : 16 eluointiaineena.

Saanto: 300 mg (77 %) väritöntä vaahtoa 20 IR (KBr): 3300 (leveä), 1779, 1753, 1730, 1495, 1203 cm'1 MS: (M+NH4)+ 546,4.

(b) (E)-(2S,3S,5R)-3-[3-(2-kloori-asetyyliaminokar-bonyylioksi)-propenyyli]-3-metyyli-4,4,7-triokso- 4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy- f · 25 lihappo-bentshydryyliesteri

Esimerkin 8 mukaisesti hapetetaan 295 mg (0,57 mmol)(E)-(2S,3S,5R)-3-[3-(2-kloori-asetyyliaminokarbonyy- » lioksi) -propenyyli] -3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo- [3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä. 30 Sitten kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 -: 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 9 : 16 elu ointiaineena. Saanto: 216 mg (68 %) väritöntä vaahtoa.

IR (KBr): 3413 (leveä), 1798, 1758, 1730, 1705, 1326, % 1198, 991 cm'1 35 MS: (M+NH4)+ 578,4.

52 113775 (c)(E)-(2S,3S,5R)-3-[3-(2-kloori-asetyyliaminokar-bonyy 1 ioks i) -pr openyy 1 i]-3-metyy1i-4,4,7-triokso- 4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyy-lihappo-natriumsuola 5 195 mg:sta (0,35 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-[3-(2-kloo- ri-asetyyliaminokarbonyylioksi)-propenyyli]-3-metyyli- 4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-blsyklo[3,2,0]heptaani-2-kar-boksyylihappo-bentshydryyHesteriä poistetaan suojaus vastaavasti, kuten esimerkissä 8 ja muutetaan vastaavaksi 10 natriumsuolaksi.

Saanto: 60 mg (49 %) väritöntä lyofilisaattia MS: (M-C0CH2C1-Na )" 317,3 IR (KBr): 3435, 1781, 1721, 1622, 1533, 1396, 1314, 1192, 1139 cm'1 15 1H-NMR (250 MHz, D20): δ [ppm] = 1,61 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J = 16 Hz, 1,6 Hz, 6-H), 3,69 (dd, 1H, J = 16 Hz, 4,0 Hz, 6-H), 4,43 (s, 2H, CH2C1), 4,49 (s, 1H, 2-H), 4,84 (d, 2H, J = 4,4 Hz, CH20), 5,08 (dd, J = 16 Hz, 4,0 Hz, 5-H), 6,08 (d (leveä), 1H, J = 16 Hz,=CH), 6,22 (dt, 1H, J = 16 20 Hz, 4,4 Hz =CH).

Esimerkki 22 ’ (E)-(2S,3S,5R)-3-(karbamoyylioksi-propenyyli)-3- ,· ·. metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]- < » heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri ’ 25 450 mg (0,80 mmol) (E)-( 2S, 3S, 5R)- 3-[3-( 2-kloori- « asetyyliaminokarbonyylioksi)-propenyyli]-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0] heptaani-2-karboksyy- t ' lihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan argonatmosfäärissä 5 ml:aan tetrahydrofuraania ja tähän lisätään 1,7 ml meta-30 nolia. Tähän liuokseen lisätään 135 mg (1,61 mmol) nat-i riumvetykarbonaattia 2,8 mlrssa vettä. Reaktion päätyttyä : (DC-kontrolli), liuotinseos poistetaan rotaatiohaihdutti- messa, jäljelle jäävä keltainen öljy liuotetaan 15 ml:aan etikkaesteriä sekä 15 ml:aan kyllästettyä keittosuolaliu-35 osta, ravistellaan ja faasit erotetaan. Vesifaasi uutetaan t t 53 113775 vielä kaksi kertaa kulloinkin 15 ml:11a etikkaesteriä ja yhdistetyt orgaaniset uutteet pestään kerran 15 ml:11a kyllästettyä keittosuolaliuosta. Kuivataan magnesiumsulfaatilla, haihdutetaan rotaatiohaihduttimessa ja jäljelle 5 jäävä öljy kromatografioidaan silikageelillä (raekoko 0,040 - 0,063 mm) käyttäen etikkaesteri : n-heksaania 2 : 1 eluointiaineena.

Saanto: 200 mg (78 %) väritöntä vaahtoa IR (KBr): 3481, 1799, 1749, 1731, 1601, 1329, 1191, 10 996 cm'1 MS: (M+NH4)+ 484.

(c) (E)-(2S,3S,5R)-3-(karbamoyylioksi-propenyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo-[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola 15 190 mg:sta (0,60 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(karbamoyy- lioksipropenyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryylies-teriä poistetaan suojaus vastaavasti, kuten esimerkissä 8. Saanto: 82 mg (62 %) väritöntä luofilisaattia 20 ^-NMR (250 MHz, D20): 6 [ppm] = 1,61 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J = 17 Hz, 1,6 Hz, 6-H), 3,69 (dd, 1H, J = 17 Hz, 4 ; Hz, 6-H), 4,48 (s, 1H, 2-H), 4,70 (d, 2H, J=4,6 Hz, CH2), ] 5,08 (dd, 1H, J = 4 Hz, 1,6 Hz, 5-H), 5,97 (d, 1H, J = 16

Hz, =CH), 6,19 (dt, 1H, J = 16 Hz, 4,6 Hz =CH).

25 Esimerkki 23 t * (a) (2S,3S,5R)-l-[3-(2-bentshydryylioksikarbonyy-· li-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]- V ’ heptan-3-yyli)-allyyli]-pyridinium-trifluorimetaa- nisulfonaatti , 1 30 410 mg (1,0 mmol) (E)-(2S,3S,5R)-3-(3-hydroksi-pro- : : penyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]hep- ; taani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteriä liuotetaan 6 ml:aan metyleenikloridia, jäähdytetään -40 °C:seen ja ; tähän lisätään 250 μΐ (1,5 mmol) trifluorimetaani-sulfoni- 35 happoanhydridiä. metanolia. 5 minuutin kuluttua tähän li- 54 113775 sätään 200 μΐ (2,50 mmol) pyridiiniä, sekoitetaan edelleen toinen tunti samassa lämpötilassa ja tämän jälkeen jäähdy-tyshaude poistetaan. Liuotin poistetaan rotaatiohaihdut-timessa huoneenlämpötilassa, reaktioseos liuotetaan 5 20 ml:aan metyleenikloridia ja pestään kaksi kertaa 10 ml:11a kyllästettyä keittosuolaliuosta. Kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan rotaatio-haihduttimessa. Jäljelle jäävä punainen hartsi hapetetaan ilman eri puhdistusta.

10 Saanto: 600 mg (97 %) punaista hartsia MS: (M+) 471,6 IR (KBr): 1777, 1743, 1630, 1160, 987 cm'1 (b) (2S,3S,5R)-l-[3-(2-bentshydryylioksikarbonyy- li-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsa-bisyklo-15 [3,2,0]heptan-3-yyli)-allyyli]-pyridinium-trifluo- rimetaanisulfonaatti

Vastaavasti, kuten esimerkissä 8 hapetetaan 600 mg (0,97 mmol) (2S,3S,5R)-1-[3-(2-bentshydryylioksikarbonyy-li-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptan-3-20 yyli)-allyyli]-pyridinium-trifluorimetaanisulfonaattia.

Saanto: 440 mg (70 %) vihreätä hartsia : , , MS: (M+) 503,3 ’v] IR (KBr): 1797, 1753, 1632, 1167 cm-1.

! (E)-(2S,3S,5R)-3-metyyli-4,4,7-triokso-3-(3-pyri- 25 din-l-ylio-propenyyli)-4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]- heptaani-2-karboksylaatti .* Liuosta, jossa on 440 mg (0,67 mmol) (2S,3S,5R)-1- v ’ [3-(2-bentshydryylioksikarbonyyli-3-metyyli-4,4,7-triokso- 4-tia-l-atsa-bisyklo[3,2,0]heptan-3-yyli )-allyyli] -pyridi-30 nium-trifluorimetaanisulfonaattia 3 ml:ssa m-kresolia, se koitetaan 1,5 tunnin ajan 50 °C:ssa. Sitten laimennetaan ’, huoneenlämpötilassa 10 ml:11a isobutyylimetyyliketonia ja uutetaan kolme kertaa kulloinkin 8 ml:11a vettä. Yhdistetyt vesipitoiset uutteet pestään vielä kaksi kertaa kul-35 loinkin 10 ml:11a isobutyylimetyyliketonia, suodatetaan 55 113775 paperisuodattimen lävitse ja lyofilisoidaan. Ruskea lyofi-lisaatti kromatografioidaan tämän jälkeen polymeerisellä, hydrofobisella geelillä käyttäen vettä eluointiaineena. Saanto: 125 mg (55 %) beigen väristä lyofilisaattia.

5 IR (KBr): 1780, 1625, 1485, 1372, 1312, 980 cm'1 MS:M+H* 337, 4.

» * * i • ♦

Claims (11)

56 113775

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 3/3-alkenyyli-penaami-johdannaisten valmistamiseksi, joilla on 5 yleinen kaava I (0)" Rl O : COOR3 j ossa toinen R1:stä ja R2:sta on -COR4, -CN, -CH2R5, halogeeni, -CH=CHR6 tai Q ja toinen on vety tai Ci-7-alkyyli tai 10 molemmat merkitsevät yhdessä γ-laktaamirengasta, R3 on vety tai bentshydryyli, R4 on vety, Ci-7-alkyyli, Ci-7-alkoksi, bentsyyliok-si, amino, Ci-7-alkyyliamino tai Ci-7-alkyyli-Ci-7-alkoksi-amino,

15 R5 on hydroksi, -OCONHR7, -OCONH2, 2-pyridyyli, 1- metyylipyridin-2-ylio, 1,3-tiatsol-2-yyli tai 1,2,4-oksa-·' · diatsol-3-yyli, V R6 on -CN tai -CHO, V R7 on -COCH2CI, 20. on 2-pyridyyli, l-metyylipyridin-2-ylio, 1,3- ;· tiatsol-2-yyli tai 1,2,4-oksadiatsol-3-yyli, ja n on 0, 1 tai 2, sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti käytettävien suo- lojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että • ^ 25 a) yhdiste, jolla on yleinen kaava II * * I —s=0 O fOC O : cooR3 jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä, 57 113775 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on yleinen kaava 0 > (Ph)3 p=c <™>3 R HaP M jossa R1 ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä, Ph on fenyyli 5 ja Hai on halogeeni, aktivointiaineen läsnä ollessa, tai b) yhdiste, jolla on yleinen kaava —S /=CH-CH2OH fOC 0 3 COOR3 jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan 3,4-dihydropyraanin, klooriasetyyli-isosyanaatin tai pyri-10 diinin kanssa, tai c) yhdisteestä, jolla on yleinen kaava _/=CH-CH2OCONH-COCH2CI COOR3 : : jossa R3 merkitsee samaa kuin edellä, lohkaistaan ryhmä- COCH2Cl, tai 15 d) yleisen kaavan I mukainen yhdiste, jossa n on 0, hapetetaan tai ,! e) yleisen kaavan I mukainen yhdiste, jossa R3 ei ' ole vety, muutetaan vastaavaksi vapaaksi hapoksi ja f) mahdollisesti kaavan I mukainen happoyhdiste * * 20 muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun-I nettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava I, jossa *’ toinen R1:stä ja R2:sta on -COR4, -CN tai -CH2R5 ja 25 toinen on vety tai Ci-7-alkyyli, R3 on vety tai bentshydryyli, 58 113775 R4 on vety, Ci-7-alkyyli, Ci-7-alkoksi, bentsyyli' oksi, amino tai Ci-7-alkyyliamino, R5 on hydroksi tai -OCONH2 ja n on 0, 1 tai 2.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan (E/Z)- (2S,3S,5R)-3-(2-sya-noetenyyli)-3-metyyli-7-okso-4-tia-l-atsabisyklo-[3.2.0]-heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri.

4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun-10 nettu siitä, että valmistetaan (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-syano- etenyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsabisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-bentshydryyliesteri.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (E)- (2S,3S,5R)-3-(2-kloo- 15 ri-vinyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsabisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola.

6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun- i nettu siitä, että valmistetaan (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syano- etenyyli)-3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-l-atsabisyklo-20 [3.2.0]heptaani-2-karboksyylihappobentshydryyliesteri.

7. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun- nettu siitä, että valmistetaan (E) - (2 S, 3S, 5R)-3 - (2-syano- etenyyli) -3 -metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsabisyklo- ,1. [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola. »

8. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun- nettu siitä, että valmistetaan (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-syano-‘1’. etenyyli) -3-metyyli-4,4,7-triokso-4-tia-1-atsabisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihappo-natriumsuola.

9. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun- • d 30 nettu siitä, että valmistetaan (E) - (2S, 3S, 5R)-3-metyyli- ',,,· 3- (3-okso-but-l-enyyli) -4,4,7-triokso-4-tia-1-atsabisyklo- [3.2.0] heptaani-2-karboksyylihapponatriumsuola. • · I · t 59 113775

10. Yhdisteet, joilla on yleinen kaava II -rs>r0

11 COOR3 jossa R3:11a on patenttivaatimuksessa 1 ilmoitettu merkitys, 5 edullisesti yhdiste (2S,3R,5R)-3 - formyyli-3-metyy li -7-okso-4-tia-1-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksyyli-happobentshydryyliesteri. * • · 60 113775