ES2927194T3 - Dinucleótidos cíclicos como agonistas de STING - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades, síndromes o trastornos que se ven afectados por la modulación de STING. Dichos compuestos están representados por la fórmula (I) como sigue: en la que B2, X2, R2a, R2b, R2c, ZMY, Y1-M1Z1, B1, X1, R1a, R1b, R1c son como se definen aquí. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Dinucleótidos cíclicos como agonistas de STING

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos N° 62/599.111, presentada el 15 de diciembre de 2017.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a nuevos compuestos que son agonistas de STING (Estimulados de Genes de Interferón) y son útiles para el tratamiento de trastornos que se ven afectados por la modulación de la proteína STING. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más de tales compuestos, procesos para preparar tales compuestos y composiciones y el uso de tales compuestos o composiciones farmacéuticas para el tratamiento de varias enfermedades, síndromes y trastornos. La invención puede estar implicada en la activación de la vía de señalización en sentido descendente, lo que da como resultado además la activación de segundos mensajeros y factores de crecimiento, y la producción de interferón implicado en la inmunidad innata y adaptativa. Más particularmente, la presente invención se refiere al uso de tales compuestos o composiciones farmacéuticas para el tratamiento de varias infecciones, enfermedades, síndromes y trastornos que incluyen, pero no se limitan a, melanoma, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, fibrosarcoma, y terapia antiviral.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

STING (estimulador de genes de interferón), también conocido como TMEM173, MITA, MPYS y EMS, es un receptor transmembrana localizado dentro de la célula y un sensor clave de los ácidos nucleicos citosólicos (Zhong B, et al. "The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation". Immunity. 2008. vol. 29: 538-550). Estudios recientes han revelado la biología de STING y su papel en la movilización de una respuesta inmunitaria innata que da como resultado una actividad antitumoral robusta en modelos de ratón. La activación de la vía STING da como resultado la producción de interferones Tipo I (principalmente IFN-a e IFN-p) inducida a través de la vía IRF3 (factor regulador de interferón 3). Se piensa que la activación de IRF3 está mediada por TBK1 que recluta y fosforila a IRF3 formando de este modo un homodímero de IRF3 capaz de introducirse en el núcleo para transcribir interferón tipo I y otros genes (Liu S, et al. "Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAVS, STING, and TRIF induces iRf3 activation" Science. 2015: 2630-2637). TBK1 también activa el potenciador de la cadena ligera kappa del factor nuclear de la vía de las células B activadas que lleva la producción de citoquinas proinflamatorias (IL-1 a, IL-1 p, IL-2, IL-6, TNF-a, etc.), a través del factor de transcripción oncogénico NF-^kB. Además, STING activa STAT6 (transductor de señal y activador de la transcripción 6) para inducir (tipo Th2), aumentar (IL-12) o disminuir (IL-10) la producción de varias citoquinas, incluyendo las quimiocinas CCL2, CCL20 y CCL26 (Chen H, et al. "Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity" Cell. 2011, vol.14: 433-446). También se ha informado que la fosforilación directa de STING en Ser366 después de la activación se produce a través de TBK1 o ULK1 (Corrales, L. et al "Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity" Cell Reports, 2015, vol.11: 1­ 13; Konno, H. et al. "Cyclic dinucleotides trigger ULK1 (ATG1) phosphorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling" Cell, 2013, vol. 155: 688-698).

El ligando natural que se une y activa STING guanosina monofosfato-adenosina monofosfato (2',3')cíclico (2',3'-cGAMP) y la enzima responsable de su síntesis (cGAS, también conocida como C6orf150 o MB21D1) han sido elucidados proporcionando una oportunidad para modular esta vía. cGAMP es un ligando de alta afinidad para STING producido en células de mamíferos que sirve como segundo mensajero endógeno para activar la vía STING. Es un dinucleótido cíclico con un enlace 2',3' único producido por cGAS en presencia de ADN exógeno de cadena doble (por ejemplo, el liberado por bacterias, virus o protozoos invasores) o de ADN propio en mamíferos (Wu et al., 2013; Sun, L. et al. "Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway" Science, 2013, vol. 339: 786-791; Bhat N y Fitzgerald KA. "Recognition of Cytosolic DnA by cGAS and other STING-dependent sensors". Eur J Immunol. marzo 2014; 44(3):634-40). La activación de STING también puede producirse a través de la unión de dinucleótidos cíclicos exógenos (3',3) (c-di-GMP, c-di-AMP y 3'3'-cGAMP) que son liberados por bacterias invasoras (Zhang X, et al. "Cyclic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING" Molecular Cell, 2013, vol. 51: 226-235; Danilchanka, O y Mekalanos, JJ. "Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response" Cell. 2013. vol. 154: 962-970).

La activación de la vía STING desencadena una respuesta inmunitaria que da como resultado la generación de células T asesinas específicas que pueden encoger los tumores y proporcionar una inmunidad duradera para que no vuelvan a aparecer. La sorprendente actividad antitumoral obtenida con los agonistas de STING en modelos preclínicos ha generado un alto nivel de entusiasmo por este objetivo y los compuestos de molécula pequeña que pueden modular la vía de STING tienen potencial tanto para tratar el cáncer como reducir las enfermedades autoinmunes.

La activación de la vía STING también contribuye a una respuesta antiviral. La pérdida de respuesta funcional, ya sea a nivel celular o del organismo, demuestra una incapacidad para controlar la carga viral en ausencia de STING. La activación de la vía STING desencadena una respuesta inmunitaria que da como resultado citoquinas antivirales y proinflamatorias que combaten el virus y movilizan los brazos innatos y adaptativos del sistema inmunitario. En última instancia, se desarrolla una inmunidad duradera contra el virus patógeno. La sorprendente actividad antiviral obtenida con los agonistas de STING en modelos preclínicos ha generado un alto nivel de entusiasmo por este objetivo y los compuestos de molécula pequeña que pueden modular la vía de STING tienen potencial para tratar infecciones virales crónicas, como la hepatitis B.

La infección crónica por el virus de la hepatitis B (VHB) es un importante problema de salud mundial que afecta a más del 5% de la población mundial (más de 350 millones de personas en todo el mundo y 1,25 millones de individuos en los Estados Unidos). A pesar de la disponibilidad de ciertas vacunas y terapias contra el VHB, la carga de la infección crónica por VHB continúa siendo un importante problema médico mundial no resuelto debido a las opciones de tratamiento subóptimas y las tasas sostenidas de nuevas infecciones en la mayor parte del mundo en desarrollo. Los tratamientos actuales se limitan a sólo dos clases de agentes: interferón alfa y análogos de nucleósidos que actúan como inhibidores de la polimerasa viral. Sin embargo, ninguna de estas terapias ofrece una cura para la enfermedad, y la resistencia a los fármacos, la baja eficacia y los problemas de tolerabilidad limitan su impacto. Las bajas tasas de curación del VHB se atribuyen, por lo menos en parte, al hecho de que es difícil lograr la supresión completa de la producción del virus con un único agente antiviral. Sin embargo, la supresión persistente del ADN del VHB retrasa la progresión de la enfermedad hepática y ayuda a prevenir el carcinoma hepatocelular. Los objetivos de la terapia actuales para los pacientes infectados por el VHB están dirigidos a reducir el ADN del VHB en suero a niveles bajos o indetectables y, en última instancia, a reducir o prevenir el desarrollo de cirrosis y carcinoma hepatocelular. Hay, por tanto, una necesidad en la técnica de agentes terapéuticos que puedan aumentar la supresión de la producción de virus y que puedan tratar, mejorar o prevenir la infección por VHB. La administración de dichos agentes terapéuticos a un paciente infectado por el VHB, ya sea como monoterapia o en combinación con otros tratamientos contra el VHB o tratamientos complementarios, puede llevar a una carga viral significativamente reducida, un pronóstico mejorado, una progresión disminuida de la enfermedad y unas tasas de seroconversión mejoradas.

Los potenciales beneficios terapéuticos de mejorar tanto la inmunidad innata como la adaptativa hacen de STING un objetivo terapéutico atractivo que demuestra una actividad impresionante por sí mismo y que también puede combinarse con otras inmunoterapias.

La WO 2017/161349 y la WO 2020/016782 A1 se refieren a compuestos de dinucleótidos cíclicos y métodos de uso

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está proporciona un compuesto de Fórmula (I)

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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Las realizaciones de la invención incluyen una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y por lo menos uno de un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable.

En realizaciones de la invención, la composición es una forma de dosificación oral sólida.

En realizaciones de la invención, la composición es un jarabe, un elixir o una suspensión.

Las realizaciones de la invención incluyen el compuesto de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad, síndrome o afección modulada por STING.

Las realización de la invención incluyen el compuesto de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad, síndrome o afección, en donde dicha enfermedad, síndrome o afección se ve afectada por el agonismo de STING.

En realizaciones de la invención, la enfermedad, síndrome o afección es cáncer.

En realizaciones de la invención, el cáncer es melanoma, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón o fibrosarcoma.

En realizaciones de la invención, la enfermedad, síndrome o afección es una infección viral.

En realizaciones de la invención, la infección viral es hepatitis B.

Las realizaciones de la invención incluyen el compuesto de la invención, y un virus oncolítico o vacuna anticancerosa para su uso en el tratamiento de una enfermedad, síndrome, afección o trastorno, en donde dicha contra el cáncer, síndrome, afección o trastorno se ve afectada por el agonismo de STING.

En realizaciones de la invención, la vacuna contra el cáncer es una vacuna antigénica, vacuna de células completas, vacuna de activación de células dendríticas, vacuna de ADN, vacuna Bacillus Calmette-Guérin (BCG), Sipuleucel-T (Provenge), Talimogene laherparepvec (T-Vec; Imlygic™), vacuna basada en virus oncolíticos, vacuna basada en adenovirus.

La invención se define en las reivindicaciones. La divulgación adicional se proporciona por información. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Con referencia a los sustituyentes, el término "independientemente" se refiere a la situación en la que cuando es posible más de un sustituyente, los sustituyentes pueden ser iguales o diferentes entre sí.

El término "alquilo", ya sea usado solo o como parte de un grupo sustituyente, se refiere a cadenas de carbono lineales y ramificadas que tienen de 1 a 8 átomos de carbono. Por lo tanto, los números designados de átomos de carbono (por ejemplo, C¹-⁸) se refieren independientemente al número de átomos de carbono en una fracción de alquilo o a la porción alquilo de un sustituyente que contiene alquilo superior. En grupos sustituyentes con múltiples grupos alquilo como (alquilo C¹-⁶)²amino-, los grupos alquilo C^1-6 del dialquilamino pueden ser iguales o diferentes.

El término "alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo, en donde el término "alquilo" es como se ha definido anteriormente.

Los términos "alquenilo" y "alquinilo" se refieren a cadenas de carbono lineales y ramificadas que tienen de 2 a 8 átomos de carbono, en donde una cadena de alquenilo contiene por lo menos un enlace doble y una cadena de alquinilo contiene por lo menos un enlace triple.

El término "cicloalquilo" se refiere a anillos hidrocarbonados monocíclicos o policíclicos, saturados o parcialmente saturados, de 3 a 14 átomos de carbono. Los ejemplos de tales anillos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y adamantilo.

El término "heterociclilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclico o bicíclico no aromático que tiene de 3 a 10 miembros en el anillo que incluyen por lo menos 1 átomo de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S. Incluido dentro del término heterociclilo está un anillo cíclico no aromático de 5 a 7 miembros en el que de 1 a 2 miembros son N, o un anillo cíclico no aromático de 5 a 7 miembros en el que 0, 1 o 2 miembros son N y hasta 2 miembros son O o S y por lo menos uno el miembro debe ser N, O o S; en donde, opcionalmente, el anillo contiene de 0 a 1 enlaces insaturados, y, opcionalmente, cuando el anillo tiene de 6 o 7 miembros, contiene hasta 2 enlaces insaturados. Los miembros del anillo de átomos de carbono que forman un anillo de heterociclo pueden estar completamente saturados o parcialmente saturados.

El término "heterociclilo" también incluye dos grupos heterocicloalquilo monocíclicos de 5 miembros unidos mediante puente para formar un anillo bicíclico. Tales grupos no se consideran completamente aromáticos y no se refieren como grupos heteroarilo. Cuando un heterociclo es bicíclico, ambos anillos del heterociclo son no aromáticos y por lo menos uno de los anillos contiene un miembro del anillo de heteroátomo. Los ejemplos de grupos heterociclo incluyen, pero no se limitan a, pirrolinilo (incluyendo 2H-pirrol, 2-pirrolinilo o 3-pirrolinilo), pirrolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo y piperazinilo. A menos que se indique lo contrario, el heterociclo está unido a su grupo colgante en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que dé como resultado una estructura estable.

El término "arilo" se refiere a un anillo monocíclico o bicíclico aromático insaturado de 6 a 10 miembros de carbono. Los ejemplos de anillos arilo incluyen fenilo y naftalenilo.

El término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos aromático monocíclico o bicíclico aromático que tiene de 5 a 10 miembros en el anillo, que contiene átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste de N, O y S. Incluidos dentro del término heteroarilo están los anillos aromáticos de 5 o 6 miembros en los que el anillo consiste de átomos de carbono y tiene por lo menos un miembro de heteroátomo. Los heteroátomos adecuados incluyen nitrógeno, oxígeno y azufre. En el caso de anillos de 5 miembros, el anillo de heteroarilo contiene preferiblemente un miembro de nitrógeno, oxígeno o azufre y, además, hasta 3 nitrógenos adicionales. En el caso de anillos de 6 miembros, el anillo de heteroarilo contiene preferiblemente de 1 a 3 átomos de nitrógeno. Para el caso en el que el anillo de 6 miembros tiene 3 nitrógenos, como máximo 2 átomos de nitrógeno son adyacentes. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolilo, isoindolilo, benzofurilo, benzotienilo, indolazolilo, bencimidazolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo y quinazolinilo. A menos que se indique lo contrario, el heteroarilo está unido a su grupo colgante en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que dé como resultado una estructura estable.

El término “halógeno” o “halo” se refiere a átomos de flúor, cloro, bromo y yodo.

Siempre que el término "alquilo" o "arilo" o cualquiera de sus prefijos raíz aparezca en el nombre de un sustituyente (por ejemplo, arilalquilo, alquilamino), debe interpretarse que el nombre incluye las limitaciones dadas anteriormente para "alquilo" y "arilo". Los números designados de átomos de carbono (por ejemplo, C¹-C⁶) se refieren independientemente al número de átomos de carbono en una fracción alquilo, una fracción arilo o en la porción alquilo de un sustituyente superior en el que alquilo aparece como su prefijo raíz. Para los sustituyentes alquilo y alcoxi, el número designado de átomos de carbono incluye todos los miembros independientes incluidos dentro de un intervalo dado especificado. Por ejemplo, alquilo C^1-6 incluiría metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo individualmente, así como subcombinaciones de los mismos (por ejemplo, C^1-2, C^1-3, C^1-4, C^1-5, C^2-6, C^3-6, C^4-6, C^5-6, C^2-5, etc.).

En general, según las reglas de nomenclatura estándar usadas a lo largo de esta divulgación, la parte terminal de la cadena lateral designada se describe primero seguida por la funcionalidad adyacente hacia el punto de unión. Así, por ejemplo, un sustituyente “alquilcarbonilo C¹-C⁶” se refiere a un grupo de fórmula:

El término “R” en un estereocentro indica que el estereocentro es puramente de configuración R como se define en la técnica; de igual manera, el término "S" significa que el estereocentro es puramente de configuración S. Como se usan en la presente, los términos "*R" o "*S" en un estereocentro se usan para designar que el estereocentro es de configuración pura pero desconocida. Como se usa en la presente, el término "RS" se refiere a un estereocentro que existe como una mezcla de las configuraciones R- y S-. De manera similar, los términos "*RS" o "*SR" se refieren a un estereocentro que existe como una mezcla de las configuraciones R- y S- y tiene una configuración desconocida con respecto a otro estereocentro dentro de la molécula.

Como se usa en la presente, el término "*" se usa para designar un estereocentro que pueden existir como una configuración pura pero desconocida o mezcla de las configuraciones R- y S-.

Los compuestos que contienen un estereocentro dibujado sin una designación de enlace estéreo son una mezcla de dos enantiómeros. Los compuestos que contienen dos estereocentros, dibujados ambos sin designaciones de enlaces estéreo, son una mezcla de cuatro diastereómeros. Los compuestos con dos estereocentros, ambos marcados como "RS" y dibujados con designaciones de enlace estéreo, son una mezcla de dos componentes con estereoquímica relativa tal como se dibuja. Los compuestos con dos estereocentros, ambos marcados como "*RS" y dibujados con designaciones de enlaces estéreo, son una mezcla de dos componentes con una estereoquímica relativa desconocida. Los estereocentros no marcados dibujados sin designaciones de enlace estéreo son una mezcla de las configuraciones R- y S-. Para los estereocentros no marcados dibujados con designaciones de enlaces estéreo, la estereoquímica absoluta es la que se representa.

A menos que se indique lo contrario, se pretende que la definición de cualquier sustituyente o variable en una localización particular en una molécula sea independiente de sus definiciones en cualquier otra parte de esa molécula. Se entiende que los sustituyentes y los patrones de sustitución de los compuestos de la presente divulgación pueden ser seleccionados por un experto en la técnica para proporcionar compuestos que sean químicamente estables y que puedan sintetizarse fácilmente mediante técnicas conocidas en la técnica, así como aquellos métodos expuestos en la presente.

El término "sujeto" se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un humano, que ha sido objeto de tratamiento, observación o experimento.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto activo o agente farmacéutico, incluyendo un compuesto de la presente invención, que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sistema tisular, animal o humano, que está siendo buscada por un investigador, veterinario, médico u otro practicante clínico, que incluye el alivio total o parcial de los síntomas de la enfermedad, síndrome, afección o trastorno que se está tratando.

El término "composición" se refiere a un producto que incluye los ingredientes especificados en cantidades terapéuticamente eficaces, así como a cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

Se pretende que el término "agonista de STING" abarque un compuesto que interactúa con STING uniéndose a él e induciendo una transducción de señales en sentido descendente caracterizada por la activación de las moléculas asociadas con la función de STING. Esto incluye la fosforilación directa de STING, IRF3 y/o NF-^kB y también podría incluir STAT6. La activación de la vía de STING da como resultado una producción aumentada de interferones tipo I (principalmente IFN-a e IFN-p) y expresión de genes estimulados por interferón (Chen H, et al. "Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity". Cell. 2011, vol.14: 433-446; y Liu S-Y, et al. "Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviral factors". Proc. Natl. Acad. Sci. 2012:vol. 109 4239-4244).

El término "modulado por STING" se usa para referirse a una afección afectada por STING directamente o a través de la vía de STING, incluyendo pero no limitadas a, infecciones virales, enfermedades o afecciones como melanoma, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, fibrosarcoma e infección por hepatitis B.

Como se usa en la presente, a menos que se indique lo contrario, el término "trastorno modulado por STING" significará cualquier infección viral, enfermedad, trastorno o afección caracterizada porque por lo menos uno de sus síntomas característicos se alivia o elimina tras el tratamiento con un agonista de STING. Los ejemplos adecuados incluyen, pero no se limitan a, melanoma, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, fibrosarcoma y hepatitis B.

Como se usa en la presente, a menos que se indique lo contrario, el término "afectar" o "afectado" (cuando se hace referencia a una infección viral, enfermedad, síndrome, afección o trastorno que se ve afectado por el agonismo de STING) incluye una reducción en la frecuencia y/o gravedad de uno o más síntomas o manifestaciones de dicha infección viral, enfermedad, síndrome, afección o trastorno; y/o incluyen la prevención del desarrollo de uno o más síntomas o manifestaciones de dicha infección viral, enfermedad, síndrome, afección o trastorno o el desarrollo de la infección viral, enfermedad, afección, síndrome o trastorno.

Los compuestos de la presente invención son útiles para tratar o mejorar una infección viral, enfermedad, síndrome, afección o trastorno que se ve afectado por el agonismo de STING. Tales métodos comprenden, consisten y/o consisten esencialmente en administrar a un sujeto, incluyendo un animal, un mamífero y un humano con necesidad de dicho tratamiento, mejora y/o prevención, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o un enantiómero, diastereómero, solvato o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En particular, los compuestos de Fórmula (I) o un enantiómero, diastereómero, solvato o forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos son útiles para tratar o mejorar enfermedades, síndromes, afecciones o trastornos como melanoma, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata., cáncer de pulmón, fibrosarcoma y hepatitis B.

Más particularmente, los compuestos de Fórmula (I), o un enantiómero, diastereómero, solvato o forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, son útiles para tratar o mejorar el melanoma, el cáncer de colon, el cáncer de mama, el cáncer de próstata, el cáncer de pulmón, el fibrosarcoma y la hepatitis B, que comprende administrar a un sujeto con necesidad de ello una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o un enantiómero, diastereómero, solvato o forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se define en la presente.

Algunas realizaciones divulgadas en la presente se refieren a compuestos para su uso en métodos para mejorar y/o tratar una infección viral, incluyendo las infecciones provocadas por Hepadnaviridae, como el virus de la hepatitis B o VHB. Los métodos pueden incluir administrar a un sujeto identificado como que padece una infección viral una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otras realizaciones divulgadas en la presente se refieren a un compuesto para su uso en un método para mejorar y/o tratar una infección viral que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos descritos en la presente (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo), o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos descritos en la presente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otras realizaciones más descritas en la presente se refieren al uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección viral.

Otras realizaciones más descritas en la presente se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que puede usarse para mejorar y/o tratar una infección viral. Algunas realizaciones divulgadas en la presente se refieren a un compuesto para su uso en un método para inhibir la replicación de un virus que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos descritos en la presente, o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otras realizaciones descritas en la presente se refieren al uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus. Otras realizaciones más descritas en la presente se refieren a uno o más compuestos descritos en la presente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo), o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos descritos en la presente, o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que pueden usarse para inhibir la replicación de un virus.

En algunas realizaciones, la infección viral puede ser una infección viral por hepatitis B. Los métodos pueden incluir administrar a un sujeto que se ha identificado que padece VHB una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otras realizaciones divulgadas en la presente se refieren a un compuesto para su uso en un método para mejorar y/o tratar una infección viral que puede incluir poner en contacto una célula infectada con VHB con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otras realizaciones más descritas en la presente se refieren al uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar el VHB.

Otras realizaciones más descritas en la presente se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos que pueden usarse para mejorar y/o tratar el VHB. Algunas realizaciones divulgadas en la presente se refieren a un método para inhibir la replicación del VHB que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otras realizaciones descritas en la presente se refieren al uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación del VHB. Otras realizaciones más descritas en la presente se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que puede usarse para inhibir la replicación del VHB.

Las realizaciones de la presente invención incluyen un compuesto de Fórmula (I) como se define en la presente, o un enantiómero, diastereómero, solvato o una forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde los sustituyentes seleccionados de una o más de las variables definidas en la presente (por ejemplo, B² , X², R²a, R²b, R²c, Z-M-Y, Y¹-M¹-Z¹, B¹, X¹, R¹a, R¹b, R¹c) se seleccionan independientemente para ser cualquier sustituyente individual o cualquier subconjunto de sustituyentes de los ejemplificados en el listado de la Tabla 1, a continuación.

T l 1

continuación

continuación

*= no parte de la invención

A continuación se representan adicionalmente los compuestos de la Tabla 1 (incluyendo aquellos que no forman parte de la invención):

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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Para uso en medicina, las sales de compuestos de Fórmula (I) se refieren a “sales farmacéuticamente aceptables” no tóxicas. Sin embargo, otras sales pueden ser útiles en la preparación de compuestos de fórmula (I) o de sus formas de sal farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de compuestos de Fórmula (I) incluyen sales de adición de ácido que pueden, por ejemplo, formarse mezclando una solución del compuesto con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. Además, cuando los compuestos de fórmula (I) portan una fracción ácida, las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los mismos pueden incluir sales de metales alcalinos como sales de sodio o potasio; sales de metales alcalinotérreos como sales de calcio o magnesio; y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados como sales de amonio cuaternario. Por tanto, las sales farmacéuticamente aceptables representativas incluyen acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, bromuro de metilo, nitrato de metilo, sulfato de metilo, mucato, napsilato, nitrato, sal amónica N-metilglucamina, oleato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro y valerato.

Los ácidos y bases representativos que pueden usarse en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos, incluyendo ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, aminoácidos acilados, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido (+)-canfórico, ácido canforsulfónico, ácido (+)-(1S)-alcanfor-10-sulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido dodecilsulfúrico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroxi-etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido D-glucónico , ácido D-glucorónico, ácido L-glutámico, ácido a-oxoglutárico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido (+)-L-láctico, ácido (±)-DL-láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido (-)-L-málico, ácido malónico, ácido (±)-DL-mandélico, ácido metanosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, ácido naftaleno-1,5-disulfónico, ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L-piroglutámico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicílico, ácido sebaico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tánico, ácido (+)-L-tartárico, ácido tiociánico, ácido p-toluenosulfónico y ácido undecilénico; y bases incluyendo amoníaco, L-arginina, benetamina, benzatina, hidróxido de calcio, colina, deanol, dietanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)-etanol, etanolamina, etilendiamina, N-metilglucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, L-lisina, hidróxido de magnesio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido de potasio, 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina, hidróxido de sodio, trietanolamina, trometamina e hidróxido de zinc.

Cuando los compuestos de acuerdo con las realizaciones de esta invención tienen por lo menos un centro quiral, en consecuencia pueden existir como enantiómeros. Cuando los compuestos poseen dos o más centros quirales, pueden existir adicionalmente como diastereoisómeros. Debe entenderse que todos estos isómeros y mezclas de los mismos están incluidos dentro del alcance de la presente invención. Además, algunas de las formas cristalinas de los compuestos pueden existir como polimorfos y, como tal, se pretende que se incluyan en la presente divulgación. Además, algunos de los compuestos pueden formar solvatos con agua (es decir, hidratos) o solventes orgánicos comunes, y también se pretende que tales solvatos estén incluidos dentro del alcance de esta invención. El experto en la técnica entenderá que se pretende que el término compuesto, como se usa en la presente, incluya compuestos solvatados de Fórmula (I).

Cuando los procesos para la preparación de los compuestos de acuerdo con ciertas realizaciones de la invención dan lugar a una mezcla de estereoisómeros, estos isómeros pueden separarse mediante técnicas convencionales como cromatografía preparativa. Los compuestos pueden prepararse en forma racémica, o los enantiómeros individuales pueden prepararse o mediante síntesis enantioespecífica o mediante resolución. Los compuestos pueden, por ejemplo, resolverse en sus enantiómeros componentes mediante técnicas estándar como la formación de parejas des diastereoisómeros mediante la formación de sales con un ácido ópticamente activo como el ácido (-)-di-p-toluoil-d-tartárico y/o el ácido (+)-di-p-toluoil-1-tartárico seguido de cristalización fraccionada y regeneración de la base libre. Los compuestos también pueden resolverse mediante la formación de ésteres diastereoméricos o amidas, seguido de separación cromatográfica y eliminación del auxiliar quiral. Alternativamente, los compuestos pueden resolverse usando una columna de HPLC quiral.

Una realización de la presente invención está dirigida a una composición, incluyendo una composición farmacéutica, que comprende, consiste de y/o consiste esencialmente del enantiómero (+) de un compuesto de Fórmula (I) en donde dicha composición está sustancialmente libre del isómero (-) de dicho compuesto. En el presente contexto, sustancialmente libre significa menos de aproximadamente el 25%, preferiblemente menos de aproximadamente el 10%, más preferiblemente menos de aproximadamente el 5%, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente el 2% e incluso más preferiblemente menos de aproximadamente el 1% del isómero (-) calculado como

(masa (+)- enantiómero) , ^

% (+) - enantiómero ------------ =------------- ------ =----------—-------- .-------- -x 100

(masa (+) - enantiómero) (masa(-) - enantiómero)

Otra realización de la presente invención es una composición, incluyendo una composición farmacéutica, que comprende, consiste de y consiste esencialmente del enantiómero (-) de un compuesto de Fórmula (I) en donde dicha composición está sustancialmente libre del isómero (+) de dicho compuesto. En el presente contexto, sustancialmente libre de significa menos de aproximadamente el 25%, preferiblemente menos de aproximadamente el 10%, más preferiblemente menos de aproximadamente el 5%, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente el 2% e incluso más preferiblemente menos de aproximadamente el 1% del isómero (+) calculado como

% (- ) - enantiómero = (masa ( - ) - enantiómero)

-x 100

(masa (+) - enantiómero) (masa(~) - enantiómero)

Durante cualquiera de los procesos para la preparación de los compuestos de las varias realizaciones de la presente invención, puede ser necesario y/o deseable proteger los grupos sensibles o reactivos en cualquiera de las moléculas implicadas. Esto puede lograrse por medio de grupos protectores convencionales como los descritos en Protective Groups in Organic Chemistry, Segunda Edición, J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991; y T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Tercera Edición, John Wiley & Sons, 1999. Los grupos protectores pueden eliminarse en una etapa posterior conveniente usando métodos conocidos en la técnica.

Incluso aunque los compuestos de las realizaciones de la presente invención (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables y solvatos farmacéuticamente aceptables) pueden administrarse solos, generalmente se administrarán mezclados con un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable seleccionados con respecto a la vía de administración pretendida y la práctica farmacéutica o veterinaria estándar. Por tanto, las realizaciones particulares de la presente invención están dirigidas a composiciones farmacéuticas y veterinarias que comprenden compuestos de Fórmula (I) y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable.

A modo de ejemplo, en las composiciones farmacéuticas de las realizaciones de la presente invención, los compuestos de Fórmula (I) pueden mezclarse con cualquier aglutinante, lubricante, agente de suspensión, agente de recubrimiento, agente solubilizante y combinaciones de los mismos adecuado.

Las formas de dosificación orales sólidas como comprimidos o cápsulas que contienen los compuestos de la presente invención pueden administrarse en por lo menos una forma de dosificación a la vez, según sea apropiado. También es posible administrar los compuestos en formulaciones de liberación sostenida.

Alternativamente, los compuestos de Fórmula (I) pueden administrarse por inhalación (intratraqueal o intranasal) o en forma de supositorio o pesario, o pueden aplicarse tópicamente en forma de loción, solución, crema, pomada o polvo para espolvorear. Por ejemplo, pueden incorporarse en una crema que comprende, consiste de, y/o consiste esencialmente de una emulsión acuosa de polietilenglicoles o parafina líquida. También pueden incorporarse, a una concentración de entre aproximadamente el 1% y aproximadamente el 10% en peso de la crema, en una pomada que comprende, consiste de, y/o consiste esencialmente de una base de cera o parafina blanda junto con cualquier estabilizante y conservantes según se requiera. Un medio alternativo de administración incluye la administración transdérmica usando un parche para la piel o transdérmico.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención (así como los compuestos de la presente invención solos) también pueden inyectarse por vía parenteral, por ejemplo, por vía intracavernosa, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica o intratecal. En este caso, las composiciones también incluirán por lo menos uno de un portador adecuado, un excipiente adecuado y un diluyente adecuado.

Para la administración parenteral, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se usan mejor en forma de una solución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo, suficientes sales y monosacáridos para hacer que la solución sea isotónica con la sangre.

Además de las vías de administración descritas anteriormente para el tratamiento del cáncer, las composiciones farmacéuticas pueden adaptarse para la administración mediante inyección intratumoral o peritumoral. La activación del sistema inmunitario de esta manera para matar tumores en un sitio remoto se conoce comúnmente como efecto abscopal y se ha demostrado en animales con múltiples modalidades terapéuticas (van der Jeught, et al., Oncotarget, 2015, 6(3), 1359-1381). Una ventaja adicional de la administración local o intratumoral o peritumoral es la capacidad de lograr una eficacia equivalente a dosis mucho más bajas, minimizando o eliminando por tanto los eventos adversos que pueden observarse con dosis mucho más altas (Marabelle, A., et al., Clinical Cancer Research, 2014, 20(7), 1747-1756).

Para la administración bucal o sublingual, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse en forma de comprimidos o pastillas para chupar, que pueden formularse de manera convencional.

A modo de ejemplo adicional, las composiciones farmacéuticas que contienen por lo menos uno de los compuestos de Fórmula (I) como ingrediente activo pueden prepararse mezclando el o los compuestos con un portador farmacéuticamente aceptable, un diluyente farmacéuticamente aceptable y/o un excipiente farmacéuticamente aceptable de acuerdo con las técnicas convencionales de preparación de compuestos farmacéuticos. El portador, el excipiente y el diluyente pueden adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la vía de administración deseada (por ejemplo, oral, parenteral, etc.). Por tanto, para preparaciones orales líquidas como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones los portadores, excipientes y diluyentes adecuados incluyen agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, estabilizantes, agentes colorantes y similares; para preparaciones orales sólidas como polvos, cápsulas y comprimidos los portadores, excipientes y diluyentes adecuados incluyen almidones, azúcares, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares. Las preparaciones orales sólidas también pueden recubrirse opcionalmente con sustancias como azúcares, o recubrirse entéricamente para modular el sitio principal de absorción y disgregación. Para la administración parenteral, el portador, el excipiente y el diluyente habitualmente incluirán agua estéril, y pueden añadirse otros ingredientes para aumentar la solubilidad y la conservación de la composición. También pueden prepararse suspensiones o soluciones inyectables utilizando portadores acuosos junto con aditivos apropiados como solubilizantes y conservantes.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) o una composición farmacéutica del mismo incluye un intervalo de dosificación de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 3000 mg, o cualquier cantidad particular o intervalo de la misma, en particular de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 1000 mg, o cualquier cantidad particular o intervalo de la misma, o, más particularmente, de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 250 mg, o cualquier cantidad particular o intervalo de la misma, de ingrediente activo en un régimen de aproximadamente 1 a aproximadamente 4 veces al día para un humano medio (70 kg); aunque es evidente para un experto en la técnica que la cantidad terapéuticamente eficaz para un compuesto de Fórmula (I) variará según las enfermedades, síndromes, afecciones y trastornos que se estén tratando.

Para la administración oral, una composición farmacéutica se proporciona preferiblemente en forma de comprimidos que contienen aproximadamente 1,0, aproximadamente 10, aproximadamente 50, aproximadamente 100, aproximadamente 150, aproximadamente 200, aproximadamente 250 y aproximadamente 500 miligramos de un compuesto de Fórmula (I).

Ventajosamente, un compuesto de Fórmula (I) puede administrarse en una única dosis diaria, o la dosificación diaria total puede administrarse en dosis divididas de dos, tres y cuatro veces al día.

Las dosificaciones óptimas de un compuesto de Fórmula (I) a administrar pueden determinarse fácilmente y variarán con el compuesto particular usado, el modo de administración, la concentración de la preparación y el avance de la infección viral, enfermedad, síndrome, afección o trastorno. Además, los factores asociados con el sujeto particular que se está tratando, incluyendo el sexo, la edad, el peso, la dieta y el momento de la administración del sujeto, darán como resultado la necesidad de ajustar la dosis para lograr un nivel terapéutico apropiado y el efecto terapéutico deseado. Las dosificaciones anteriores son, por tanto, ejemplares del caso medio. Puede haber, por supuesto, casos individuales en los que se requieran intervalos de dosificación más altos o más bajos.

Los compuestos de Fórmula (I) pueden administrarse en cualquiera de las composiciones y regímenes de dosificación anteriores o por medio de las composiciones y regímenes de dosificación establecidos en la técnica siempre que se requiera el uso de un compuesto de Fórmula (I) para un sujeto con necesidad de ello.

Como agonistas de la proteína STING, los compuestos de Fórmula (I) son útiles en métodos para tratar o prevenir una infección viral, enfermedad, un síndrome, una afección o trastorno en un sujeto, incluyendo un animal, un mamífero y un humano en el que el la infección viral, la enfermedad, el síndrome, la afección o el trastorno se ven afectados por la modulación, incluyendo el agonismo, de la proteína STING. Tales métodos comprenden, consisten y/o consisten esencialmente en administrar a un sujeto, incluyendo un animal, un mamífero y un humano, con necesidad de dicho tratamiento o prevención, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, sal o solvato de Fórmula (I).

En una realización, la presente invención está dirigida a un compuesto de Fórmula (I), o una forma de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el uso en el tratamiento del cáncer y enfermedades y afecciones del cáncer, o una infección viral.

Los ejemplos de enfermedades y afecciones cancerosas para las que los compuestos de Fórmula (I), o sales farmacéuticamente aceptables o solvatos de los mismos, pueden tener efectos antitumorales potencialmente beneficiosos incluyen, pero no se limitan a, cánceres de pulmón, hueso, páncreas, piel, cabeza, cuello, útero, ovarios, estómago, colon, mama, esófago, intestino delgado, intestino, sistema endocrino, glándula tiroides, glándula paratiroides, glándula suprarrenal, uretra, próstata, pene, testículos, uréter, vejiga, riñón o hígado; cáncer de recto; cáncer de la región anal; carcinomas de las trompas de Falopio, endometrio, cuello uterino, vagina, vulva, pelvis renal, célula renal; sarcoma de tejido blando; mixoma; rabdomioma; fibroma; lipoma; teratoma; colangiocarcinoma; hepatoblastoma; angiosarcoma; hemagioma; hepatoma; fibrosarcoma; condrosarcoma; mieloma; leucemia crónica o aguda; linfomas linfocíticos; linfoma primario del SNC; neoplasias del SNC; tumores del eje espinal; carcinomas de células escamosas; sarcoma sinovial; mesoteliomas pleurales malignos; glioma de tronco encefálico; adenoma pituitario; adenoma bronquial; hanlartoma condromatoso; inesotelioma; enfermedad de Hodgkin o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores. Adecuadamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de cánceres seleccionados del grupo que consiste de cerebro (gliomas), glioblastomas, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, tumor de Wilm, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, ependimoma, meduloblastoma, cabeza y cuello, riñón, hígado, melanoma, ovario, páncreas, adenocarcinoma, madenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células acinares, glucagonoma, insulinoma, próstata, sarcoma, osteosarcoma, tumor de células gigantes del hueso, tiroides, leucemia linfoblástica de células T, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia neutrofílica crónica, leucemia linfoblástica aguda de células T, plasmocitoma, leucemia inmunoblástica de células grandes, leucemia de células del manto, mieloma múltiple, leucemia megacarioblástica, mieloma múltiple, leucemia megacariocítica aguda, leucemia promielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células T linfoblásticas, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, cáncer de vejiga, cáncer urotelial, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, cáncer de endometrio, cáncer renal, mesotelioma, cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer nasofarángico, cáncer bucal, cáncer de boca, GIST (tumor del estroma gastrointestinal) y cáncer testicular.

En otra realización, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de un trastorno afectado por el agonismo de STING seleccionado del grupo que consiste de melanoma, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, fibrosarcoma y hepatitis B.

Los compuestos divulgados de Fórmula (I) pueden ser útiles en combinación con uno o más compuestos adicionales útiles para tratar la infección por VHB. Estos compuestos adicionales pueden comprender otros compuestos divulgados y/o compuestos que se sabe que tratan, previenen o reducen los síntomas o efectos de la infección por VHB. Tales compuestos incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la polimerasa del VHB, interferones, inhibidores de la entrada viral, inhibidores de la maduración viral, moduladores del ensamblaje de la cápside descritos en la bibliografía, inhibidores de la transcriptasa inversa, agentes inmunomoduladores, agonistas de TLR y otros agentes con mecanismos distintos o desconocidos que afectan al ciclo de vida del VHB o que afectan a las consecuencias de la infección por VHB.

En ejemplos no limitativos, los compuestos divulgados pueden usarse en combinación con uno o más fármacos (o una sal de los mismos) seleccionados del grupo que comprende:

Inhibidores de la transcriptasa inversa del VHB e inhibidores de la ADN y la ARN polimerasa incluyendo, pero no limitados a, lamivudina (3TC, Zeffix, Heptovir, Epivir y Epivir-VHB), entecavir (Baraclude, Entavir), adefovir dipivoxil (Hepsara, Preveon, bis-POM PME^a ), tenofovir disoproxil fumarato (Viread, TDF o PMPA); interferones que incluyen, pero no se limitan a, interferón alfa (IFN-a), interferón beta (IFN-p), interferón lambda (IFN-A) e interferón gamma (IFN-y );

inhibidores de la entrada viral;

inhibidores de la maduración viral;

moduladores de ensamblaje de la cápside como, pero no limitados a, BAY 41 -4109;

inhibidores de la transcriptasa inversa;

agentes inmunomoduladores como agonistas de TLR; y

agentes de mecanismos distintos o desconocidos, como, pero no limitados a, AT-61 ((E)-N-(1-cloro-3-oxo-1-fenil-3-(piperidin-1 -il)prop-1 -en-2-il)benzamida), AT-130 ((E)-N-(1 -bromo-1 -(2-metoxifenil)-3-oxo-3-(piperidin-1 -il)prop-1- en-2-il)-4-nitrobenzamida), y análogos de los mismos.

En una realización, el agente terapéutico adicional es un interferón. El término "interferón" o "IFN" se refiere a cualquier miembro de la familia de proteínas específicas de especies altamente homólogas que inhiben la replicación viral y la proliferación celular y modulan la respuesta inmunitaria. Por ejemplo, los interferones humanos se agrupan en tres clases: Tipo I, que incluye interferón-alfa (IFN-a), interferón-beta (IFN-p) e interferón-omega (IFN-w), Tipo II, que incluye interferón-gamma (IFN-y ), y Tipo III, que incluye interferón-lambda (IFN-A). Las formas recombinantes de interferones que se han desarrollado y están comercialmente disponibles están abarcadas por el término "interferón" como se usa en la presente. Los subtipos de interferones, como los interferones mutados o modificados químicamente, también están abarcados por el término "interferón" como se usa en la presente. Los interferones químicamente modificados pueden incluir interferones pegilados e interferones glicosilados. Los ejemplos de interferones también incluyen, pero no se limitan a, interferón-alfa-2a, interferón-alfa-2b, interferón-alfan1, interferón-beta-1a, interferón-beta-1b, interferón-lamda-1, interferón-lamda-2 e interferón-lamda-3. Los ejemplos de interferones pegilados incluyen interferón-alfa-2a pegilado e interferón alfa-2b pegilado.

Por consiguiente, en una realización, los compuestos de Fórmula (I) pueden administrarse en combinación con un interferón seleccionado del grupo que consiste de interferón alfa (IFN-a), interferón beta (IFN-p), interferón lambda (IFN-A), e interferón gamma (IFN-y ). En una realización específica, el interferón es interferón-alfa-2a, interferón-alfa-2b o interferón-alfa-n1. En otra realización específica, el interferón-alfa-2a o interferón-alfa-2b está pegilado. En una realización preferida, el interferón-alfa-2a es interferón-alfa-2a pegilado (PEGASYS). En otra realización, el agente terapéutico adicional se selecciona de terapias inmunomoduladoras o inmunoestimuladoras, que incluyen agentes biológicos que pertenecen a la clase de interferón.

Además, el agente terapéutico adicional puede ser un agente que altera la función de otra u otras proteínas virales esenciales o proteínas huésped requeridas para la replicación o persistencia del VHB.

En otra realización, el agente terapéutico adicional es un agente antiviral que bloquea la entrada o maduración viral o se dirige a la polimerasa del VHB como inhibidores de polimerasa nucleosídica o nucleotídica o no nucleos(t)ídica. En una realización adicional de la terapia de combinación, el inhibidor de la transcriptasa inversa o el inhibidor de la ADN o ARN polimerasa es zidovudina, didanosina, zalcitabina, ddA, estavudina, lamivudina, abacavir, emtricitabina, entecavir, apricitabina, atevirapina, ribavirina, aciclovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, tenofovir, adefovir, PMPA, cidofovir, efavirenz, nevirapina, delavirdina o etravirina.

En una realización, el agente terapéutico adicional es un agente inmunomodulador que induce una respuesta inmunitaria natural limitada que lleva a la inducción de respuestas inmunitarias contra virus no relacionados. En otras palabras, el agente inmunomodulador puede efectuar la maduración de las células presentadoras de antígenos, la proliferación de células T y la liberación de citoquinas (por ejemplo, IL-12, IL-18, IFN-alfa, -beta y -gamma y TNF-alfa, entre otros).

En una realización adicional, el agente terapéutico adicional es un modulador de TLR o un agonista de TLR, como un agonista de TLR-7 o un agonista de TLR-9. En una realización adicional de la terapia de combinación, el agonista de TLR-7 se selecciona del grupo que consiste de SM360320 (9-bencil-8-hidroxi-2-(2-metoxi-etoxi)adenina) y AZD 8848 ([3-({[3-(6-amino-2-butoxi-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)propil][3-(4-morfolinil)propil]amino}metil)fenil]acetato de metilo).

En cualquiera de los métodos proporcionados en la presente, el método puede comprender además administrar al individuo por lo menos una vacuna contra el VHB, un inhibidor nucleósido del VHB, un interferón o cualquier combinación de los mismos. En una realización, la vacuna contra el VHB es por lo menos una de RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GENEVAC-B o SHANVAC B.

En una realización, los métodos descritos en la presente comprenden además administrar por lo menos un agente terapéutico adicional seleccionado del grupo que consiste de análogos de nucleótidos/nucleósidos, inhibidores de entrada, inhibidores de fusión y cualquier combinación de estos u otros mecanismos antivirales.

En otro aspecto, en la presente se proporciona un método para tratar una infección por VHB en un individuo con necesidad de ello, que comprende reducir la carga viral del VHB administrando al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto divulgado solo o en combinación con un inhibidor de la transcriptasa inversa; y administrar además al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de una vacuna contra el VHB. El inhibidor de la transcriptasa inversa puede ser por lo menos uno de zidovudina, didanosina, zalcitabina, ddA, estavudina, lamivudina, abacavir, emtricitabina, entecavir, apricitabina, atevirapina, ribavirina, aciclovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, tenofovir, adefovir, PMPA, cidofovir, efavirenz, nevirapina, delavirdina o etravirina.

En otro aspecto, en la presente se proporciona un método para tratar una infección por VHB en un individuo con necesidad de ello, que comprende reducir la carga viral del VHB administrando al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto divulgado solo o en combinación con un oligonucleótido o agente de interferencia del ARN que se dirige a los ácidos nucleicos del VHB; y administrar además al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de vacuna contra el VHB. El oligonucleótido antisentido o el agente de interferencia de ARN posee suficiente complementariedad con los ácidos nucleicos objetivo del VHB para inhibir la replicación del genoma viral, la transcripción de los ARN virales o la traducción de proteínas virales.

En otra realización, el compuesto divulgado y el por lo menos un agente terapéutico adicional se formulan conjuntamente. En otra realización más, el compuesto divulgado y el por lo menos un agente terapéutico adicional se administran conjuntamente. Para cualquier terapia de combinación descrita en la presente, puede calcularse el efecto sinérgico, por ejemplo, usando métodos adecuados como la ecuación sigmoidea-Emax (Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453), la ecuación de aditividad de Loewe (Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326) y la ecuación del efecto mediano (Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55). Cada ecuación mencionada anteriormente puede aplicarse a datos experimentales para generar un gráfico correspondiente para ayudar a evaluar los efectos de la combinación de fármacos. Los gráficos correspondientes asociados con las ecuaciones mencionadas anteriormente son la curva de concentración-efecto, la curva de isobolograma y la curva de índice de combinación, respectivamente.

En una realización de cualquiera de los métodos de administración de terapias de combinación proporcionadas en la presente, el método puede comprender además monitorizar o detectar la carga viral del VHB del sujeto, en donde el método se lleva a cabo durante un período de tiempo que incluye hasta el momento en que el virus VHB es indetectable

Los compuestos de Fórmula (I) divulgados pueden ser útiles en combinación con uno o más compuestos adicionales útiles para tratar el cáncer. Estos compuestos adicionales pueden comprender otros compuestos divulgados y/o compuestos que se sabe que tratan, previenen o reducen los síntomas o efectos de dicho cáncer.

En una realización, dirigirse a STING con agentes de activación o inhibición puede ser un enfoque prometedor para tratar enfermedades y afecciones en las que la modulación de la vía de IFN tipo I es beneficiosa, incluyendo enfermedades inflamatorias, alérgicas y autoinmunes, enfermedades infecciosas, cáncer, síndromes precancerosos y como adyuvantes de vacunas (Dubensky et al., Therapeutic Advances in Vaccines 1(2013)131-143).

En una realización, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles como adyuvantes en una estrategia terapéutica que emplea vacunas contra el cáncer. En una realización, una vacuna contra el cáncer incluye bacterias o virus inactivados o atenuados que comprenden los antígenos de interés, antígenos purificados, vectores de administración de virus vivos manipulados para expresar y secretar el antígeno de interés. Los vectores de administración también pueden incluir vectores de administración bacterianos atenuados que expresan los antígenos.

Una realización adicional de la presente invención incluye un método para tratar o disminuir la gravedad de los cánceres mediante la activación del sistema inmunitario con una vacuna contra el cáncer, incluyendo pero no limitada a, vacunas antigénicas, vacunas de células completas, vacunas activadoras de células dendríticas, vacunas de ADN, vacuna Bacillus Calmette-Guérin (BCG), Sipuleucel-T (Provenge), Talimogene laherparepvec (T-Vec; Imlygic™), vacunas basadas en virus oncolíticos y vacunas basadas en adenovirus.

Los antígenos y adyuvantes que pueden usarse en combinación con los compuestos de Fórmula general (I), o las formas de sal farmacéuticamente aceptables de los mismos, incluyen la molécula coestimuladora B7, interleucina-2, interferón-y, GM-CSF, antagonistas de CTLA-4, Ligando OX-40/0X-40, ligando CD40/CD40, sargramostim, levamisol, virus vaccinia, bacille Calmette-Guerin (BCG), liposomas, alumbre, adyuvante completo o incompleto de Freund, endotoxinas desintoxicadas, aceites minerales, sustancias activas de superficie como la lipolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos y emulsiones de aceite o hidrocarburo. Pueden añadirse adyuvantes, como hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio, para aumentar la capacidad de la vacuna para desencadenar, mejorar o prolongar una respuesta inmunitaria. Materiales adicionales, como citoquinas, quimioquinas y secuencias de ácidos nucleicos bacterianos, como CpG, un agonista del receptor tipo toll (TLR) 9, así como agonistas adicionales para TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR9, incluyendo lipoproteína, LPS, monofosforillípido A, ácido lipoteicoico, imiquimod, resiquimod y, además, agonistas del gen I inducible por ácido retinoico (RIG-I) como poli I:C, usados por separado o en combinación con las composiciones descritas también son potenciales adyuvantes

Las vías de CLTA-4 y PD-1 son importantes reguladores negativos de la respuesta inmunitaria. Las células T activadas regulan por incremento CTLA-4, que se une a las células presentadoras de antígenos e inhibe la estimulación de las células T, la expresión génica de IL-2 y la proliferación de células T; estos efectos antitumorales se han observado en modelos de ratón de carcinoma de colon, cáncer de próstata metastásico y melanoma metastásico. PD-1 se une a las células T activas y suprime la activación de las células T; los antagonistas de PD-1 también han demostrado efectos antitumorales.

Los antagonistas de las vías de CTLA-4 y PD-1 que pueden usarse en combinación con los compuestos de Fórmula (I) o Fórmula (Ia), o las formas de sal farmacéuticamente aceptables de los mismos, divulgados en la presente, incluyen ipilimumab, tremelimumab, nivolumab, pembrolizumab, CT-OII, AMP-224 y MDX-II06.

“Antagonista de PD-1” o “antagonista de la vía de PD-1” significa cualquier compuesto químico o molécula biológica que bloquea la unión de PD-L1 expresado en una célula cancerosa a PD-1 expresado en una célula inmunitaria (células T, células B, o célula NKT) y preferiblemente también bloquea la unión de PD-L2 expresado en una célula cancerosa al PD-1 expresado en células inmunitarias. Los nombres alternativos o sinónimos de PD-1 y sus ligandos incluyen: PDCD I, PD 1, CD279 y SLEB2 para PD-1; PDCDILI, PDL 1, B7HI, B7-4, CD274 y B7-H para PD-L1; y PDCD IL2, PDL2, B7-DC, Btdc y CD273 para PD-L2. En cualquiera de los métodos de tratamiento, medicamentos y usos de la presente divulgación en los que se trata a un individuo humano, el antagonista de PD-1 bloquea la unión de PD-L1 humana a PD-1 humana y, preferiblemente, bloquea la unión de tanto PD-L1 como PD-L2 humana a PD-1 humana. Las secuencias de aminoácidos de PD-1 humana pueden encontrarse en NCBI Locus N°: NP_005009. Las secuencias de aminoácidos de PD-L1 y PD-L2 humanas pueden encontrarse en NCBI Locus N°: NP_054862 y NP_079515, respectivamente.

Las secuencias de aminoácidos de PD-1 humana pueden encontrarse en NCBI Locus N°: NP_005009. Las secuencias de aminoácidos de PD-L1 y PD-L2 humanas pueden encontrarse en NCBI Locus N°: NP_054862 y NP_0795 I5, respectivamente.

Los antagonistas de PD-1 útiles en cualquiera de los métodos de tratamiento, medicamentos y usos de la presente divulgación incluyen un anticuerpo monoclonal (mAb) o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente a PD-1 o PD-L1, y preferiblemente se une específicamente a PD-1 humana o PD-L1 humana. El mAb puede ser un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico y puede incluir una región constante humana. En algunas realizaciones, la región constante humana se selecciona del grupo que consiste de regiones constantes de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 y, en realizaciones preferidas, la región constante humana es una región constante de IgG1 o IgG4. En algunas realizaciones, el fragmento de unión al antígeno se selecciona del grupo que consiste de fragmentos Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv y Fv.

Los ejemplos de mAbs que se unen a PD-L1 humana, y son útiles en el método de tratamiento, medicamentos y usos de la presente divulgación, se describen en las Solicitudes de Patente Internacional de PCT N° WO2013/019906 y WO2010/077634 A1 y en la Patente de Estados Unidos N° 8.383.796. Los mAbs anti-PD-L1 humana específicos útiles como antagonistas de PD-1 en el método de tratamiento, los medicamentos y los usos de la presente divulgación incluyen MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C, y un anticuerpo que comprende las regiones variables de cadena pesada y cadena ligera de la SEQ ID NO:24 y la SEQ ID NO:21, respectivamente, de la WO2013/019906.

Otros antagonistas de PD-1 útiles en cualquiera de los métodos de tratamiento, medicamentos y usos de la presente divulgación incluyen una inmunoadhesión que se une específicamente a PD-1 o PD-L1, y preferiblemente se une específicamente a PD-1 o humana o PD-L1 humana, por ejemplo, una proteína de fusión que contiene la porción extracelular o de unión a PD-1 de PD-L1 o PD-L2 fusionada a una región constante como una región Fe de una molécula de inmunoglobulina. En las Publicaciones de Solicitud de Patente Internacional de PCT N° WO2010/027827 y WO2011/066342 se describen ejemplos de moléculas de inmunoadhesión que se unen específicamente a PD-1. Las proteínas de fusión específicas útiles como antagonista de PD-1 en el método de tratamiento, los medicamentos y los usos de la presente divulgación incluyen AMP-224 (también conocido como B7-DCig), que es una proteína de fusión de PD-L2-FC y se une a PD-1 humana.

Los ejemplos de agentes citotóxicos que pueden usarse en combinación con los compuestos de fórmula general (I), o las sales farmacéuticamente aceptables de los anteriores, incluyen, pero no se limitan a, trióxido de arsénico (vendido con el nombre comercial TRISENox®), asparaginasa (también conocida como L-asparaginasa, y Erwinia L-asparaginasa, vendida con los nombres comerciales ELSPAR® y KIDROLASE®).

Los agentes quimioterapéuticos que pueden usarse en combinación con los compuestos de Fórmula (I), o las sales farmacéuticamente aceptables de los anteriores, divulgados en la presente incluyen acetato de abiraterona, altretamina, anhidrovinblastina, auristatina, bexaroteno, bicalutamida, BMS 184476, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)benceno sulfonamida, bleomicina, N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-1 -Lprolina-1 -butilamida, caquectina, cemadotina, clorambucilo, ciclofosfamida, 3',4'-didehidro-4'desoxi-8'-norvin-caleucoblastina, docetaxol, doxetaxel, ciclofosfamida, carboplatino, carmustina, cisplatino, criptoficina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina (DTIC), dactinomicina, daunorrubicina, decitabina dolastatina, doxorrubicina (adriamicina), etopósido, 5-fluorouracilo, finasterida, flutamida, hidroxiurea y andraxanos de hidroxiurea, ifosfamida, liarozol, lonidamina, lomustina (CCNU), MDV3100, mecloretamina (mostaza nitrogenada), melfalán, isetionato de mivobulina, rizoxina, sertenef, estreptozocina, mitomicina, metotrexato, taxanos, nilutanude, nivolumab, onapristone, paclitaxel, pembrolizumab, prednimustina, procarbazina, RPR109881, fosfato de stramustina, tamoxifeno, tasonermina, taxol, tretinoína, vinblastina, vincristina, sulfato de vindesina y vinflunina.

Los ejemplos de inhibidores del receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) incluyen, pero no se limitan a, bevacizumab (vendido con la marca registrada AVASTIN), axitinib (descrito en la Publicación de Patente Internacional de PCT N° WOO1/002369), Brivanib Alaninate ((S)-((R)-1 -(4-(4-Fluoro-2-metil-1 H-indol-5-iloxi)-5-metilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-iloxi)propan-2-il)2-aminopropanoato, también conocido como BMS-582664), motesanib (N-(2,3-dihidro-3,3-dimetil-1H-indol-6-il)-2-[(4-piridinilmetil)amino]-3-piridincarboxamida y descrito en la Publicación de Solicitud de Patente internacional de PCT N° WO02/068470), pasireotida (también conocida como SO 230 y descrita en la Publicación de Patente Internacional de PCT N° WO02/010192) y sorafenib (vendido con el nombre comercial NEXAVAR).

Los ejemplos de inhibidores de la topoisomerasa II incluyen, pero no se limitan a, etopósido (también conocido como VP-16 y fosfato de etopósido, vendido con los nombres comerciales TOPOSAR, VEPESID y ETOPOPHOS) y tenipósido (también conocido como VM-26, vendido con el nombre comercial VUMON).

Los ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero no se limitan a, 5-azacitidina (vendida con el nombre comercial VIDAZA), decitabina (vendida con el nombre comercial de DACOGEN), temozolomida (vendida con los nombres comerciales TEMCAD, TEMODAR y TEMODAL), dactinomicina (también conocida como actinomicina-D y vendida con el nombre comercial COSMEGEN), melfalán (también conocida como L-PAM, L-sarcolisina y mostaza de fenilalanina, vendida con el nombre comercial ALKERAN), altretamina (también conocida como hexametilmelamina (HMM), vendida con el nombre comercial HEXALEN), carmustina (vendida con el nombre comercial BCNU), bendamustina (vendida con el nombre comercial TREANDA), busulfán (vendido cono los nombres comerciales BuSu LFEx® y m Yl ERAN®), carboplatino (vendido con el nombre comercial PARAPLATIN®), lomustina (también conocido como CCNU, vendido con el nombre comercial CEENU®), cisplatino (también conocido como CDDP, vendido con los nombres comerciales PLATINOL® y PLATINOL®-AQ), clorambucilo (vendido con el nombre comercial LEUKERAN®), ciclofosfamida (vendido con los nombres comerciales CYTOXAN® y NEOSAR®), dacarbazina (también conocido como DTIC, DIC e imidazol carboxamida, vendido con el nombre comercial DTIC-DoME®), altretamina (también conocida como hexametilmelamina (HMM) vendida con el nombre comercial HEXALEN®), ifosfamida (vendida con el nombre comercial IFEx®), procarbazina (vendida con el nombre comercial MATULANE®), mecloretamina (también conocida como mostaza nitrogenada, mostina y clorhidrato de mecloroetamina, vendida con el nombre comercial MUSTARGEN®), estreptozocina (vendida con el nombre comercial ZANOSAR®), tiotepa (también conocida como tiofosfoamida, TESPA y TSPA, y vendida con el nombre comercial THIOPLEx®.

Los ejemplos de antibióticos antitumorales incluyen, pero no se limitan a, doxubicina (vendida con los nombres comerciales ADRIAMYCIN® y RUBEx®), bleomicina (vendida con el nombre comercial LENOXANE®), daunorrubicina (también conocida como clorhidrato de dauorrubicina, daunomicina y clorhidrato de rubidomicina, vendida con el nombre comercial CERUBIDINE®), daunorrubicina liposomal (daunorrubicina liposomal con citrato, vendida con el nombre comercial DAUNOXoME®), mitoxantrona (también conocida como DHAD, vendida con el nombre comercial NOVANIRONE®), epirrubicina (vendida con el nombre comercial ELLENCE™), idarrubicina (vendida con los nombres comerciales IDAMYCIN®, IDAMYCIN PFS®), y mitomicina C (vendida con el nombre comercial MUTAMYCIN®).

Los ejemplos de antimetabolitos incluyen, pero no se limitan a, claribina (2-clorodesoxiadenosina, vendida con el nombre comercial LEUSTATIN®), 5-fluorouracilo (vendida con el nombre comercial ADRUCIL®), 6-tioguanina (vendida con el nombre comercial PURINETHOL®), pemetrexed (vendido con el nombre comercial ALIMTA®), citarabina (también conocida como arabinosilcitosina (Ara-C), vendida con el nombre comercial CYTOSAR-U®), citarabina liposomal (también conocida como Liposomal Ara-C, vendida con el nombre comercial DEPOCYT™), decitabina (vendida con el nombre comercial DACOGEN®), hidroxiurea y (vendida con los nombres comerciales HYDREA®, DROXIA™ y MYLOCEL™), fludarabina (vendida con el nombre comercial FLUDARA®), floxuridina (vendida con el nombre comercial FUDR®), cladribina (también conocida como 2-clorodesoxiadenosina (2-CdA) vendida con el nombre comercial LEUSTATIN™), metotrexato (también conocido como ametopterina, metotrexato sódico (MTX),vendido con los nombres comerciales RHEUMAIREX® y TREXALL™), y pentostatina (vendida con el nombre comercial NIPENT®).

Los ejemplos de retinoides incluyen, pero no se limitan a, alitretinoína (vendida con el nombre comercial PANRETIN®), tretinoína (ácido retinoico todo trans, también conocido como ATRA, vendido con el nombre comercial VESANom®), isotretinoína (13-c/s-ácido retinoico, vendida con los nombres comerciales ACCUTANE®, AMNESTEEM®, CLARAvis®, CLARus®, DECUTAN®, ISOTANE®, IzoTEcH®, ORATANE®, ISOTRET® y SOTRET®), y bexaroteno (vendido con el nombre comercial TARGRETIN®).

Las abreviaturas usadas en la presente memoria descriptiva, particularmente los esquemas y ejemplos, son las siguientes:

ACN acetonitrilo

AcOH ácido acético glacial

ADDP dipiperidida azodicarboxílica

ac. acuoso

Ar. argón

Bn o Bzl bencilo

Bz benzoilo

BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1 '-binaftilo

Boc terc-butiloxicarbonilo

CH3CN acetonitrilo

conc. concentrado

CV volumen de columna

dba dibencilidenacetona

DBU 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno

DCA ácido dicloroacético

DCC N,N'-diciclohexil-carbodiimida

DCE 1,2-dicloroetano

DCM diclorometano

DTT 3- [(dimetilaminometileno)amino]-3H-1,2,4-ditiazol-5-tiona

DEAD azodicarboxilato de dietilo

DIBAL hidruro de diisobutilaluminio

DIPEA o DIEA diisopropil-etilamina

DMA dimetilanilina

DMAP 4- dimetilaminopiridina

DME dimetoxietano

DMF N,N-dimetilformamida

DMSO dimetilsulfóxido

DMTr 4,4'-dimetoxitritilo

DPPA difenilfosforilazida

dppf 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno

EA acetato de etilo

EDCI 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida

ESI ionización por electropulverización

EtOAc o EA acetato de etilo

EtOH etanol

GCMS cromatografía de gases-espectrometría de masas

h o h(s) hora u horas

HEK riñón embrionario humano

HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

LAH hidruro de litio y aluminio

LDA diisopropilamida de litio

LHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio

Me metilo

MEK metiletilcetona

MeOH metanol

MeCN acetonitrilo

MHz megahercios

min minuto o minutos

MS espectrometría de masas

Ms metanosulfonilo

NBS N-bromosuccinimida

NIS N-yodosuccinimida

NMM N-metilmorfolina

NMP N-metilpirrolidona

NMR resonancia magnética nuclear

PADS disulfuro de fenilacetilo

PCC clorocromato de piridinio

PE éter de petróleo

RP fase inversa

ta o TA temperatura ambiente

Rt tiempo de retención

Seg segundo o segundos

SEM-Cl cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo

TBAF fluoruro de tetrabutilamonio

TBSo TBDMS t-butildimetilsililo

TBP fosfato de tributilo

TEA o Et³N trietilamina

TEAA trietilamonioacetato

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

TIPS triisopropilsililo

TLC cromatografía de capa fina

TMS tetrametilsilano

Ts 4-toluenosulfonilo

Ciertos compuestos 1-55 (incluyendo algunos que no son parte de la invención) de acuerdo con la Fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con el proceso descrito en el Esquema 1, a continuación.

Por consiguiente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (II) en el que PG¹ y PG² son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, en donde PG¹ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, tercbutildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² puede seleccionarse de acilo, benzoílo, isobutililo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, azida de sodio, en presencia de yoduro de tetrabutilamonio y tetrabromuro de carbono, en una solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía dee aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el correspondiente compuesto de fórmula (III). Alternativamente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (II), un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con cloruro de metanosulfonilo, cloruro de trifluorometilsulfonilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3 N, DIPEA, DMAP, y similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl², THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el análogo de mesilo o triflilo correspondiente, que puede hacerse reaccionar adicionalmente con azida de sodio en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (III).

Otro método más puede implicar tratar un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (II), con una combinación de yodo, trifenilfosfina e imidazol, en un solvente adecuado como piridina. DMF, o similar: a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 30° C, para proporcionar el análogo de yodo correspondiente, que puede hacerse reaccionar adicionalmente con azida de sodio en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (III).

Luego, el compuesto de fórmula (III) puede hacerse reaccionar con una fuente de hidrógeno, en condiciones de hidrogenación, en presencia de un catalizador o sistema de catalizadores adecuadamente seleccionado, como Pd/C, Pt y similares, en un solvente como MeOH, EtOH, EtOAc y similares, para proporcionar el compuesto de fórmula (IV) correspondiente. Alternativamente, el compuesto de fórmula (III) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, en un solvente adecuado como THF, DMF o similar, a una temperatura que varía de aproximadamente 20° C a aproximadamente 60° C, seguido de tratamiento con agua a la misma temperatura para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (IV).

El compuesto de fórmula (IV) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (V) como cloruro de sulfurilo, clorosulfato de 4-nitrofenilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et³N, DIPEA y similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCh, CH²Cl², THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 50° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (VI).

Luego, el compuesto de fórmula (VI) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (VII) adecuadamente sustituido en el que PG³ y PG⁴ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, en los que PG³ podría seleccionarse entre acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² podría seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado por métodos conocidos, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CO3 o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl² , THF, MeCN, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (VIII).

Los grupos protectores de alcohol PG¹ y PG3 de un compuesto de fórmula (VIII) pueden luego escindirse mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (IX).

Luego, el compuesto de fórmula (IX) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (X) adecuadamente sustituido en el que R8 es halógeno, diisopropilamino o similar, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1 H-tetrazol, o similar, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH²Cl² , THF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el compuesto de fosfito correspondiente de fórmula (XI).

Luego, el compuesto de fórmula (XI) puede hacerse reaccionar con un oxidante como yodo, peróxido de hidrógeno, peróxido de terc-butilo, reactivo de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS y similares, o un complejo BH³. SMeC². BH³.THF, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCh, CH²Cl² , THF, MeCN, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para generar el compuesto de fórmula (XII) en donde R⁴ es O, S o BH3.

Luego, el compuesto de fórmula (XII) puede desprotegerse usando condiciones básicas como MeNH², tBuNH², hidróxido de amonio, Et3N.3HF y similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como EtOH, agua, iPrOH, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 120° C, o mediante métodos dentro de las capacidades de los expertos en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (I-a).

Alternativamente, los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con el proceso descrito en el Esquema General 2, a continuación.

Por consiguiente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XIII) en el que PGi y PG⁴ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, PG¹ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, tercbutildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo, o similares, y PG⁴ podría seleccionarse de acilo, benzoílo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, azida de sodio, en presencia de yoduro de tetrabutilamonio y tetrabromuro de carbono en un solvente adecuadamente seleccionado o una mezcla de solventes como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XIV).

Alternativamente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XIII), un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con cloruro de metanosulfonilo, cloruro de trifluorometilsulfonilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA, DMAP o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCl3, CH²Cl² , THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el análogo de mesilo o triflilo correspondiente, que luego puede hacerse reaccionar adicionalmente con azida de sodio, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XIV). Otro método más puede implicar el tratamiento de un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XIII), con una combinación de yodo, trifenilfosfina e imidazol, en un solvente adecuado como piridina, DMF o similar, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 30° C, para proporcionar el análogo de yodo correspondiente, que puede hacerse reaccionar adicionalmente con azida de sodio en un solvente adecuadamente seleccionado o una mezcla de solventes como DMF, THF, tolueno, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XIV).

Luego, el compuesto de fórmula (XIV) puede hacerse reaccionar con una fuente de hidrógeno, en condiciones de hidrogenación, en presencia de un catalizador o sistema de catalizadores adecuadamente seleccionado, como Pd/C, Pt, y similares, en un solvente como MeOH, EtOH, EtOAc y similares, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XV). Alternativamente, el compuesto de fórmula (XIV) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, en un solvente adecuado como THF, DMF o similar, a una temperatura que varía de aproximadamente 20° C a aproximadamente 60° C, seguido de un tratamiento con agua a la misma temperatura para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XV).

El compuesto de fórmula (XV) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (V) como cloruro de sulfurilo, clorosulfato de 4-nitrofenilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA o el similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCI³, CH²CI³ , THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 50° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XVI).

Luego, el compuesto de fórmula (XVI) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (XVII) adecuadamente sustituido en el que PG² y PG³ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica en los que PG³ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² puede seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutililo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et³N, DIPEA, DMAP, Cs²CO³ o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl² , THF, MeCN, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XVIII). Los grupos protectores de alcohol PG¹ y PG³ en el compuesto de fórmula (XVIII) pueden luego escindirse mediante métodos bien conocidos por personas versadas en la técnica en presencia de condiciones básicas o ácidas para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XIX).

Luego, el compuesto de fórmula (XIX) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (X) adecuadamente sustituido en el que R³ es halógeno, diisopropilamino y similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1 H-tetrazol, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH2Cl3, THF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el compuesto de fosfito correspondiente de fórmula (XX).

Luego, el compuesto de fórmula (XX) puede hacerse reaccionar con un oxidante como yodo, peróxido de hidrógeno, peróxido de terc-butilo, reactivo de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS y similares, o un complejo BH3.SMe2, BH³.THF, o similares, en un solvente o mezcla de solventes como CHCh, CH²Cl², THF, MeCN, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para generar el compuesto de fórmula (XXI) en donde R⁴ es O, S o BH³.

Luego, el compuesto de fórmula (XXI) puede desprotegerse usando condiciones básicas como MeNH², tBuNH², hidróxido de amonio, Et3N.3HF y similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como EtOH, agua, iPrOH, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 120° C, o mediante métodos dentro de las capacidades de los expertos en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (Ib).

Alternativamente, los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con el proceso descrito en el Esquema General 3, a continuación.

Por consiguiente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XXII) en el que PGi y PG⁴ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, PG¹ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, tercbutildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG⁴ puede seleccionarse de acilo, benzoílo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con una fuente de hidrógeno, en condiciones de hidrogenación, en presencia de un catalizador o sistema de catalizador adecuadamente seleccionados, como Pd/C, Pt y similares, en un solvente como MeOH, EtOH, EtOAc y similares, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXIII). Alternativamente, el compuesto de fórmula (XXII) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, en un solvente adecuado como THF, DMF o similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 20° C a aproximadamente 60° C, seguido de tratamiento con agua a la misma temperatura para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXIII).

El compuesto de fórmula (XXIII) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (V) como cloruro de sulfurilo, clorosulfato de 4-nitrofenilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCl3, CH²Cl² , THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 50° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXIV).

Luego, el compuesto de fórmula (XXIV) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (XXV) adecuadamente sustituido en el que PG² y PG³ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, en el que PG³ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² puede seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, en presencia de una base adecuadamente. seleccionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CÜ3, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl² , THF, MeCN, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXVI).

Los grupos protectores de alcohol PG¹ y PG³ en un compuesto de fórmula (XXVI) pueden luego escindirse mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXVIII).

Luego, el compuesto de fórmula (XXVII) puede hacerse reaccionar con un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (X) en el que R8 es halógeno, diisopropilamino o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1 H-tetrazol, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH²Cl² , THF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el compuesto de fosfito correspondiente de fórmula (XXVIH).

Luego, el compuesto de fórmula (XXVIII) puede hacerse reaccionar con un oxidante como yodo, peróxido de hidrógeno, peróxido de terc-butilo, reactivo de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS o similares, o un complejo BH³.SMe² , BH³.THF o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl², THF, MeCN, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para generar el compuesto de fórmula (XXIX) en donde R⁴ es O, S o BH³.

Luego, el compuesto de fórmula (XXIX) puede desprotegerse usando condiciones básicas como MeNH² , tBuNH², hidróxido de amonio, Et3N.3HF o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como EtOH, agua, iPrOH, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 120° C, o mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (I-c).

Alternativamente, los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con el proceso descrito en el Esquema General 4, a continuación.

Esquema General 4

Por consiguiente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XXX) en el que PG¹ y PG² son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, PG¹ podría seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, tercbutildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² podría seleccionarse de acilo, benzoílo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con una fuente de hidrógeno, en condiciones de hidrogenación, en presencia de un catalizador o sistema de catalizador adecuadamente seleccionado, como como Pd/C, Pt y similares, en un solvente como MOH, EtOH, EtOAc y similares, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXI). Alternativamente, el compuesto de fórmula (XXX) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, en un solvente adecuado como THF, DMF o similar, a una temperatura que varía de aproximadamente 20° C a aproximadamente 60° C, seguido de tratamiento con agua a la misma temperatura para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXI).

El compuesto de fórmula (XXXI) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (V) como cloruro de sulfurilo, clorosulfato de 4-nitrofenilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCl3, CH²CL, THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 50° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXII).

Luego, el compuesto de fórmula (XXXII) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (XXXIII) adecuadamente sustituido en el que PG³ y PG⁴ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, en el que PG³ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² puede seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado por métodos conocidos, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et³N, DIPEA, DMAP, Cs²CO³ , o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl³ , CH²Cl² , THF, MeCN, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXIV).

Los grupos protectores de alcohol PG¹ y PG³ en un compuesto de fórmula (XXXIV) pueden luego escindirse mediante métodos dentro de las capacidades de personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXIV).

Luego, el compuesto de fórmula (XXXV) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (X) adecuadamente sustituido en el que R8 es halógeno, diisopropilamino y similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1 H-tetrazol, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH²Cl² , THF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el compuesto de fosfito correspondiente de fórmula (XXXVI).

Luego, el compuesto de fórmula (XXXVI) puede hacerse reaccionar con un oxidante como yodo, peróxido de hidrógeno, peróxido de terc-butilo, reactivo de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS o similares, o un complejo BH3.SMe2, BH³.THF, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl³ , CH²Cl² , THF, MeCN, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para generar el compuesto de fórmula (XXXVII) en donde R⁴ es O, S o BH³.

Luego, el compuesto de fórmula (XXXVII) puede desprotegerse usando condiciones básicas como MeNH² , tBuNH², hidróxido de amonio, Et3N.3HF o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como EtOH, AGUA, iPrOH, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 120° C, o mediante métodos dentro de las capacidades los expertos en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (I-d).

PG³ y PG⁴ son grupos protectores conocidos por los expertos en técnica, PG¹ y PG³ pueden seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² y PG⁴ pueden seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado por métodos conocidos, puede ser escindido selectivamente en presencia del grupo protector de alcohol PG¹ por métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXVMI).

El compuesto de fórmula (XXXVIII) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, azida sódica, en presencia de yoduro de tetrabutilamonio y tetrabromuro de carbono, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXIX). Alternativamente, un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XVIII), un compuesto conocido o un compuesto preparado por métodos conocidos, puede hacerse reaccionar con cloruro de metanosulfonilo, cloruro de trifluorometilsulfonilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA, DMAP, o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCh, CH²Cl² , THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el análogo de mesilo o triflilo correspondiente, que puede hacerse reaccionar adicionalmente con azida sódica en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXIX).

Otro método más puede implicar tratar un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (XVIII), con una combinación de yodo, trifenilfosfina e imidazol, en un solvente adecuado como piridina o DMF, o similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 30° C, para proporcionar el análogo de yodo correspondiente, que puede hacerse reaccionar adicionalmente con azida de sodio en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como DMF, THF, tolueno y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente 0° C a aproximadamente 130° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXIX).

Luego, el compuesto de fórmula (XXXIX) puede hacerse reaccionar con una fuente de hidrógeno, en condiciones de hidrogenación, en presencia de un catalizador o sistema de catalizador adecuadamente seleccionados como Pd/C, Pt y similares, en un solvente como MeOH, EtOH, EtOAc o similares, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXX). Alternativamente, el compuesto de fórmula (XXXIX) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, en un solvente adecuado como THF, DMF o similar, a una temperatura que varía de aproximadamente 20° C a aproximadamente 60° C, seguido de tratamiento con agua a la misma temperatura para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXX).

El compuesto de fórmula (XXXX) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (V) como cloruro de sulfurilo, clorosulfato de 4-nitrofenilo o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA o similares en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl² , THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 50° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXI). El grupo protector de alcohol PG¹ en un compuesto de fórmula (XXXIV) puede luego escindirse mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXII).

El compuesto de fórmula (XXXXII) puede hacerse reaccionar en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CO3 o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCh, CH²Cl² , THF, MeCN, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXII).

Luego, el compuesto de fórmula (XXXXI) puede desprotegerse usando condiciones básicas como MeNH², tBuNH², hidróxido de amonio, Et3N.3HF y similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como EtOH, agua, iPrOH, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 120° C, o mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (I-e).

seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetil sililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² y PG⁴ pueden seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado mediante métodos conocidos, pueden escindirse selectivamente en presencia de los grupos protectores de alcohol PG¹ y PG³ mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXIV).

El compuesto de fórmula (XXXXIV) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (XXXXV) como yodometano o bromoetano en donde R⁹ es alquilo C^1-3 opcionalmente sustituido, o similares, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como NaHCO³ , K²CO³ , Et³N, DIPEA o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCl³ , CH²Cl² , THF, DMF y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXVI) . Luego los grupos protectores PG² y PG⁴ se vuelven a introducir en (XXXXVI) usando grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, seleccionados de acilo, benzoílo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CÜ3, o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl3, CH²Cl², THF, MeCN, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXVII) .

Los grupos protectores de alcohol PG¹ y PG³ en un compuesto de fórmula (XXXXVII) pueden luego escindirse selectivamente en presencia de los grupos protectores PG² y PG⁴ mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XXXXVIII). Luego, el compuesto de fórmula (XXXXVIII) puede hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (X) adecuadamente sustituido en el que R8 es halógeno, diisopropilamino o similar, un compuesto conocido o compuesto preparado por métodos conocidos, en presencia de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1 H-tetrazol o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH²Cl² , THF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el compuesto de fosfito correspondiente de fórmula (XXXXIX).

Luego el compuesto de fórmula (XXXXIX) puede hacerse reaccionar con un oxidante como yodo, peróxido de hidrógeno, peróxido de terc-butilo, reactivo de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADs o similares, o un complejo BH³.SMe² , BH³.THF, o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHCl³ , CH²Cl² , THF, MeCN, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para generar el compuesto de fórmula (L) en donde R⁴ es O, S o BH³.

Luego, el compuesto de fórmula (L) puede desprotegerse usando condiciones básicas como MeNH² , tBuNH², hidróxido de amonio, Et3N.3HF o similares, en un solvente o una mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como EtOH, agua, iPrOH, y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 120° C, o mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (I-f).

Alternativamente, los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con el proceso descrito en el Esquema General 7, a continuación.

Por consiguiente, los grupos protectores de alcohol PG¹ en un compuesto de fórmula (III) en el que PG¹ y PG² son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, PG¹ puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG² puede seleccionarse de acilo, benzoilo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado mediante métodos conocidos, pueden escindirse selectivamente en presencia de los grupos protectores de alcohol PG² mediante métodos dentro de laa capacidades de los expertos en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (L1).

El compuesto de fórmula (XIII) en el que PG¹ y PG⁴ son grupos protectores conocidos por los expertos en la técnica, PGi puede seleccionarse de acetilo, trimetilsililo, terc-butildimetilsililo, bencilo, tritilo, dimetoxitritilo o similares, y PG⁴ puede seleccionarse de acilo, benzoílo, isobutirilo o similares, un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, puede luego hacerse reaccionar con un compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (X) en el que R8 es halógeno, diisopropilamino, o similares, un compuesto conocido o compuesto preparado mediante métodos conocidos, en presencia de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH²Cl² , THF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fosfito de fórmula (LII).

Luego, el compuesto de fórmula (LI) puede hacerse reaccionar con el compuesto de fórmula (LII) en presencia o no de un activador adecuado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1 H-tetrazol o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como MeCN, CH²Cl² , THF, DMF, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 60° C, para proporcionar el fosfito correspondiente que se oxida in situ con un oxidante como yodo, peróxido de hidrógeno, peróxido de terc-butilo, reactivo de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS o similares, o un complejo BH3.SMe2, BH³.THF, o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados como CHC³, CH²Cl² , THF, MeCN, dioxano y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -10° C a aproximadamente 80° C, para generar el compuesto de fórmula (LIII) en donde R⁴ es O, S o BH ³.

El grupo protector de alcohol PG¹ en el compuesto de fórmula (LIII) se escinde selectivamente en presencia de los grupos protectores de alcohol PG² y PG4 mediante métodos dentro de las capacidades de las personas versadas en la técnica, en presencia de condiciones básicas o ácidas, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (LIV).

Luego, el compuesto de fórmula (LIV) puede hacerse reaccionar con una fuente de hidrógeno, en condiciones de hidrogenación, en presencia de un catalizador o sistema de catalizador adecuadamente seleccionado, como Pd/C, Pt y similares, en un solvente como MeOH, EtOH, EtOAc o similares, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (LV). Alternativamente, el compuesto de fórmula (LIV) puede hacerse reaccionar con trifenilfosfina, en un solvente adecuado como THF, DMF o similares, seguido de agua a una temperatura que varía de aproximadamente 20° C a aproximadamente 60° C, seguido de tratamiento con agua a la misma temperatura para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (LV).

El compuesto de fórmula (LV) puede hacerse reaccionar con un reactivo o reactivo conocido como cloruro de sulfurilo, 1,1 '-sulfonildiimidazol, clorosulfato de 4-nitrofenilo, o similares, en presencia o no de una base adecuadamente seleccionada como Et3N, DIPEA o similares, en un solvente o mezcla de solventes adecuadamente seleccionados, como CHCl3, CH²Cl² , THF, piridina y similares, a una temperatura que varía de aproximadamente -78° C a aproximadamente 50° C, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (XII).

Luego, el compuesto de fórmula (XII) puede desprotegerse usando condiciones ácidas o básicas o mediante métodos dentro de las capacidades de los expertos en la técnica, para proporcionar el compuesto correspondiente de fórmula (I-a).

Ejemplos específicos

Ejemplo 1

Compuesto 1

El compuesto 1a (5,48 g, 14,7 mmol, coevaporado con tolueno anhidro (2x)) se disolvió en DMF anhidro (87 ml). Se añadieron trifenilfosfina (5,77 g, 22,0 mmol), azida sódica (3,06 g, 47,1 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (1,08 g, 2,94 mmol) y tetrabromuro de carbono (7,30 g, 22,0 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, seguido de concentración a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0-10 % en DCM) para dar el compuesto 1b como un polvo sólido blanco (5,09 g, rendimiento: 87 %). ESI-EM: m/z 399.0 [M+H]+.

Paso 2: Preparación del Compuesto 1c

Se añadieron imidazol (0,51 g, 7,5 mmol) y TBSCl (0,76 g, 5,0 mmol) a una solución del compuesto 1b (1,0 g, 2,5 mmol) en DMF (15 ml), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na²SO⁴ anhidro y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de elución: EtOAc al 0-50 % en éter de petróleo) para dar el compuesto 1c como un sólido blanco (1,2 g, rendimiento: 93 %). 1H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó ppm 0.18 (s, 6H), 0.95 (s, 9H), 3.52 (dd, J=13.6, 4.3 Hz, 1H), 3.78 (dd, J=13.6, 3.0 Hz, 1H), 4.25 (m, J=7.2, 3.5, 3.5 Hz, 1H), 4.85 (ddd, J=18.8, 7.5, 4.5 Hz, 1H), 5.53 (ddd, J=53.0, 4.5, 1.8 Hz, 1H), 6.24 (dd, J=18.2, 1.9 Hz, 1H), 7.50-7.58 (m, 2H), 7.59-7.67 (m, 1H), 7.99-8.08 (m, 2H), 8.23 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 9.04 (br s, 1H); ESI-MS: m/z 513.1 [M+H]+ Paso 3: Preparación del Compuesto 1d

Se hidrogenó una solución del compuesto 1c (1,15 g, 2,24 mmol) en EtOAc (50 ml) a presión atmosférica a temperatura ambiente con Pd/C (20% sobre carbono, 132 mg, 0,224 mmol) como catalizador. Después de la absorción de hidrógeno, el catalizador se eliminó por filtración y el filtrado se evaporó para dar el compuesto 1d (1,1 g) como un sólido blanco. El producto bruto se usó inmediatamente como tal en el paso siguiente. ESI-EM: m/z 509.1 [M+Na]+.

Paso 4: Preparación del Compuesto 1e

Se disolvieron el compuesto 1d (710 mg, 1,16 mmol), 4-nitrofenol (485 mg, 3,49 mmol) y Et3N (965 pl, 6,98 mmol) en DCM (30 ml) seguido de la adición de tamices moleculares de 4Á (500 mg). La mezcla resultante se enfrió a -78° C, seguido de la adición de clorosulfato de 4-nitrofenilo (830 mg, 3,49 mmol) en DCM (4 ml). La mezcla de la reacción se agitó durante 2,5 h a -78° C. Se añadió NaHCO³ acuoso, la capa acuosa se separó y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (elución en gradiente: 0-50% de EtOAc en éter de petróleo) para dar el compuesto 1e como un sólido blanco (546 mg, pureza: 89%, rendimiento: 56% a partir del compuesto 1d). H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 0.17 (s, 3H), 0.18 (s, 3H), 0.96 (s, 9H), 3.64-3.75 (m, 2H), 4.43 (br s, 1H), 4.67-4.74 (m, 1H), 5.51 (dt, J=51.8, 5.4 Hz, 1H), 6.14 (dd, J=13.1, 5.5 Hz, 1H), 7.41 (m, J=9.0 Hz, 2H), 7.56 (t, J=7.8 Hz, 2H), 7.65 (t, J=7.5 Hz, 1H), 8.05 (d, J=7.3 Hz, 2H), 8.09 (s, 1H), 8.15 (m, J=9.0 Hz, 2H), 8.54 (s, 1H), 8.99 (br s, 1H), 9.40 (br dd, J=6.5, 2.5 Hz, 1H); 19F NMR (376 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm -207.51 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z 688.1 [M+^h ]+.

Paso 5: Preparación del Compuesto 1f

Se agitó una mezcla del compuesto 1e (546 mg (pureza 92%), 0,73 mmol), 5'-O-(4,4'-Dimetoxitritil)-N2>-isobutiril-3'-O-metil-D-guanosina ([103285- 33-2], 753 mg (pureza 97%), 1,09 mmol) y tamices moleculares de 4Á (500 mg) en DCM (8 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h en atmósfera de nitrógeno. Se añadió Et3N (503 pl, 3,64 mmol) y se continuó agitando durante la noche. La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice (elución en gradiente: 0-90% de EtOAc en éter de petróleo) para dar el compuesto 1f que se usó tal cual en el paso siguiente. 1H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 0.14 (s, 3H), 0.15 (s, 3H), 0.75 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.89 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H), 1.94 (spt, J=6.8 Hz, 1H), 3.15 (dd, J=10.9, 3.4 Hz, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.48-3.63 (m, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 4.12-4.21 (m, 1H), 4.28 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.36 (br s, 1H), 4.63-4.72 (m, 1H), 5.49 (dt, J=52.0, 5.1 Hz, 1H), 5.75 (t, J=4.8 Hz, 1H), 6.07 (d, J=4.5 Hz, 1H), 6.12 (dd, J=13.4, 5.1 Hz, 1H), 6.79 (m, J=8.4, 8.4 Hz, 4H), 7.15-7.22 (m, 1H), 7.25 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.34 (m, J=8.3 Hz, 4H), 7.43-7.55 (m, 4H), 7.61 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.3 Hz, 2H), 8.09 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 9.14 (m, J=8.3 Hz, 2H), 9.54 (br s, 1H), 12.06 (br s, 1H); 19F NMR (376 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm -207.07 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z 1240.6 [M+Na]+.

Paso 6: Preparación del Compuesto 1g

A una solución del compuesto 1f bruto en MeCN (20 ml) se le añadió ácido acético al 80% (20 ml, 279,5 mmol) y trietilsilano (2 ml, 12,5 mmol), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron EtOAc y Na2CO3 acuoso, la fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en piridina (10 ml) a la que se añadieron trietilamina (1,0 g, 10,0 mmol) y Et3N.3HF (807 mg, 5,0 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La concentración posterior a presión reducida dio como resultado un producto bruto que se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (fase estacionaria: Phenomenex Gemini C18, 10 pm, 250 x 50 mm; fase móvil: bicarbonato de amoníaco acuoso 10 mM (A)-MeCN (B); gradiente de elución 22-52% de B en A durante 11,2 min; caudal: 22 ml/min) para dar el compuesto 1g (rendimiento: 27% a partir del compuesto 1f). 1H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 1.11 (d, J=6.5 Hz, 6H), 2.75 (spt, J=6.8 Hz, 1H), 3.11-3.24 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.51-3.59 (m, 1H), 3.59-3.69 (m, 1H), 3.95 (m, J=3.7 Hz, 1H), 4.09 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.17 (dd, J=4.9, 3.3 Hz, 1H), 4.57 (ddd, J=19.5, 7.3, 4.5 Hz, 1H), 5.22 (br s, 1H), 5.37 (t, J=5.5 Hz, 1H), 5.57 (ddd, J=52.5, 4.5, 2.4 Hz, 1H), 6.07 (d, J=6.5 Hz, 1H), 6.33 (dd, J=19.3, 2.2 Hz, 1H), 7.50-7.60 (m, 2H), 7.61-7.70 (m, 1H), 7.99-8.10 (m, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.73 (s, 1H) (NH y OH se intercambiaron por D²O); 19F NMR (376 MHz, METANOL-d4) 5 ppm -205.32 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z 802.2 [M+H]+

Paso 7: Preparación del Compuesto 1h

Se trató una solución del compuesto 1g (100 mg, 0,12 mmol) y 1H-tetrazol (2,2 ml de 0,45 M en MeCN, 0,93 mmol) en 1:1 MeCN/THF (14 ml) con tamices moleculares de 4Á durante 30 min antes la adición de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (70 mg, 0,23 mmol) en MeCN (6 ml). La mezcla de la reacción resultante se agitó durante 2 h, después de lo cual se añadió una cantidad adicional de tetrazol (0,55 ml de 0,45 M en MCN, 0,25 mmol) seguido de 30 min adicionales de agitación. Se añadió I² (0,5 M en una mezcla 8:1:1 de THF/piridina/AGUA, 695 gl, 0,357 mmol) y se continuó agitando durante la noche. La mezcla de la reacción se inactivó mediante la adición de Na2S2O3 acuoso saturado y se filtró, el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (fase estacionaria: Phenomenex Gemini C18, 10 gm, 250 x 50 mm; fase móvil: bicarbonato amónico acuoso 10 mM (A)-MeCN (B); gradiente de elución 20-50% de B en A durante 11,2 min; caudal: 22 ml/min) para proporcionar el compuesto 1h que se usó tal cual en el paso de desprotección posterior. ESI-MS: m/z 917.4 [M+H]+.

Paso 8: Preparación del Compuesto 1, sal de sodio

Se agitó una solución del compuesto 1h en una mezcla de amoníaco acuoso (25%, 9 ml) y EtOH (3 ml) a 50° C durante la noche. El producto bruto obtenido tras la concentración a presión reducida se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (fase estacionaria: Syneri Polar-RP, 5 gm, 100x30 mm; fase móvil: bicarbonato amónico acuoso 10 mM (A) - MeCN (B); elución en gradiente 0-25% de B en A durante 12 min; caudal: 25 ml/min) para dar el compuesto 1 como la sal de amonio. El compuesto 1 se convirtió en la sal de sodio por elución de una solución acuosa en una columna compactada con una resina de intercambio de iones de sodio catiónico que proporcionó 12,9 mg del compuesto 1, sal de sodio como un sólido blanco después de la liofilización (rendimiento: 13% a partir del compuesto 1g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, spectrum recorded at 80° C.) ó ppm 3.31 (dd, J=13.2, 2.2 Hz, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.60 (dd, J=13.5, 3.6 Hz, 1H), 3.91-3.98 (m, 1H), 4.20 (d, J=4.2 Hz, 1H), 4.23-4.28 (m, 1H), 4.28-4.31 (m, 1H), 4.31-4.37 (m, 1H), 5.22-5.34 (m, 1H), 5.43 (dd, J=51.7, 4.4 Hz, 1 H), 5.99 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.19 (br s, 1H), 6.33 (d, J=19.5 Hz, 1H), 6.58 (br s, 2H), 7.08 (s, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 8.34 (br s, 1H), 9.70 (br s, 1H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) ó ppm 56.05 (s, 1 P), 94.05 (br s, 1 P); ES-MS: m/z 690.2 [M+H]+.

Ejemplo 2

Compuesto (*R) 2A

Compuesto (*R) 2A, sal de sodio

Paso 1: Preparación del Compuesto 2a

Se trató una solución del compuesto 1g (230 mg, 0,28 mmol) y 1H-tetrazol (1,67 ml de MeCN al 3-4%) en 1:1 MeCN/THF (12 ml) con tamices moleculares de 4Á durante 2 horas antes la adición de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (78 mg, 0,26 mmol). La mezcla de la reacción resultante se agitó durante 30 minutos, después de lo cual se añadió una cantidad adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (8,6 mg, 0,03 mmol) seguido de agitación durante 15 minutos adicionales. Se añadieron piridina (15 ml) y disulfuro de fenilacetilo (PADS, 217 mg, 0,72 mmol) y se continuó agitando durante 40 min. Tras la eliminación de los tamices moleculares por filtración, se añadió EtOAc a la mezcla de la reacción seguido de lavados extensos con salmuera y NaHCO³ acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre MgSO⁴ anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto bruto se usó tal cual en el paso de desprotección posterior. ESI-MS: m/z 933.2 [M+H]+.

Paso 2: preparación del compuesto (*R) 2A, sal de sodio

El compuesto bruto 2a se agitó en una solución de metilamina al 33% en etanol (20 ml) a 50° C durante 4 h. La mezcla de la reacción se concentró a baja presión. El producto bruto resultante se disolvió en agua, se lavó con EtOAc, se liofilizó y se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (fase estacionaria: XBridge C18 OBD, 5 gm, 250 x 30 mm; fase móvil: bicarbonato de amoníaco acuoso al 0,25% (A) - MeCN (B); gradiente de elución: 0-15% de B en A durante 29 min, caudal: 30 ml/min) para dar el compuesto (*R) 2A como un único diastereoisómero. La conversión en la sal de sodio se realizó como se describe en el Ejemplo 1, Paso 8 (23 mg, rendimiento: 10% a partir del compuesto 1g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-da, spectrum recorded at 80° C.) ó ppm 3.31-3.43 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.62-3.75 (m, 1H), 3.92-4.00 (m, 1H), 4.00-4.09 (m, 1H), 4.20 (br s, 1H), 4.31 (br s, 2H), 5.33-5.50 (m, 2H), 5.64 (br d, J=52.0 Hz, 1H), 5.68 (dd, J=8.7, 4.1 Hz, 1H), 6.03 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.26 (s, 2H), 6.33 (d, J=18.4 Hz, 1H), 7.07 (s, 2H), 7.88 (br s, 1H), 8.29 (br s, 2H), 8.66 (br s, 1H), 10.30 (br s, 1H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) ó ppm 52.18 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 706.0 [M+H]+.

Ejemplo 3

Compuesto (*R) 4A y Compuesto (*S) 4B

1. BSA, DCE, reflujo

Compuesto ( *R ) 4A Compuesto ( *S) 4B

Compuesto ( *R ) 4A Compuesto ( *R ) 4A, sal de sodio

_{Compuesto (*S) 4B} Compuesto (*S) 4B, sal de sodio Paso 1: Preparación del Compuesto 3c

A una solución del compuesto 3b (2,0 g, 4,99 mmol, CAS N° 153186-10-8) en piridina (8 ml) se le añadió lentamente MsCl (1,14 g, 9,99 mmol) a 0° C bajo N² ; después de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, la mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y se lavó con agua (3 x 20 ml). La fase acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sucesivamente sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el compuesto 3c como un aceite amarillo (3,1 g).

1H NMR (400 MHz, CDCla) 5 ppm 7.38-7.31 (m, 7H), 7.21-7.14 (m, 3H), 5.79 (d, J=3.8 Hz, 1H), 4.87 (d, J=11.8 Hz, 1H), 4.74 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 4.57-4.38 (m, 4H), 4.30 (d, J=5.3 Hz, 1H), 3.63-3.58 (m, 1H), 3.53-3.48 (m, 1H), 3.63-3.47 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.71-1.67 (m, 3H), 1.35 (s, 3H); ESI-MS: m/z=501.2 [M+Na]+.

Paso 2. Preparación del Compuesto 3d

Se agitó a temperatura ambiente una solución de 3c (1,0 g, 2,1 mmol) en ácido trifluoroacético acuoso al 80% (10 ml) durante 1 hora. Después de eliminar el solvente a presión reducida, el residuo se disolvió en DCM (20 ml) y se lavó con NaHCO³ acuoso saturado (2 x 20 ml). La capa orgánica se secó sucesivamente sobre Na²SO⁴ anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un aceite incoloro (876 mg). El aceite se coevaporó con piridina anhidra (2 x 15 ml), se disolvió en piridina anhidra (15 ml) y se trató con Ac²O (815,8 mg, 7,99 mmol). Después de agitar durante la noche a 50° C, la mezcla de la reacción se inactivó con NaHCO3 acuoso saturado (25 ml) y se repartió con EtOAc (2 x 20 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron sucesivamente con salmuera (15 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc al 0-30% en éter de petróleo) para proporcionar 3d como un jarabe incoloro (786 mg).

1H NMR (400 MHz, CDCla) 5 ppm 7.42-7.18 (m, 12H), 6.38 (d, J=4.5 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.36 (d, J=5.0 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.17 (dd, J=4.8, 6.3 Hz, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.96 (s, 1H), 2.19-2.10 (m, 4H), 2.06 (d, J=7.8 Hz, 1H), 1.90 (s, 3H). ESI-MS: m/z=545 [M+Na]+.

Paso 3: Preparación del Compuesto 3f

A una suspensión del compuesto 3d (200 mg, 0,38 mmol) y 6-N-benzoiladenina (3e, 109,8 mg, 0,46 mmol) en 1,2-dicloroetano anhidro (5 ml) se le añadió bis(trimetilsilil)acetamida (BSA, 202,4 mg, 0,99 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 1 h y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió TMSOTf (170 mg, 0,76 mmol) y la solución se calentó a 110° C durante 16 h. La mezcla de la reacción se diluyó con DCM (15 ml), luego se vertió en NaHCO3 acuoso saturado enfriado con hielo (20 ml), se agitó durante 0,5 h y se filtró. Después de la separación de las dos capas, la capa orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado (3 x 15 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un residuo. La purificación del residuo mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (1-1,5% v/v de MeOH/CH2Cl2) dio el compuesto 3f (208 mg) como un sólido amarillo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 8.80 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.87 (br d, J=7.3 Hz, 2H), 7.54-7.44 (m, 1H), 7.44-7.34 (m, 2H), 7.29-7.03 (m, 10H), 6.18 (br d, J=4.4 Hz, 1H), 5.96-5.84 (m, 1H), 4.70 (br d, J=5.6 Hz, 1H), 4.56-4.29 (m, 1H), 4.55-4.22 (m, 4H), 4.21 (s, 1H), 3.63-3.53 (m, 1H), 3.46 (br d, J=10.0 Hz, 1H), 2.84-2.75 (m, 1H), 2.86-2.75 (m, 1H), 2.87-2.71 (m, 1H), 1.99-1.92 (m, 1H), 1.91 (br s, 1H); ESI-MS: m/z=702 [M+H]+

Paso 4: Preparación del Compuesto 3g

A una solución del compuesto 3f (5,86 g, 8,35 mmol) en una mezcla de THF (50 ml) y agua (35 ml) se le añadió LiOH.H²O (1,75 g, 41,8 mmol) a 0° C. Después de agitar el mezcla durante 5 h a temperatura ambiente, la mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera (30 ml x 2) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado (3 x 15 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc:PE = 0~70%) para dar el compuesto 3g (4,25 g) como un sólido amarillo pálido. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 9.00 (br s, 2H), 8.74 (s, 2H), 8.23 (s, 2H), 8.02 (br d, J=7.3 Hz, 3H), 7.60 (br d, J=7.3 Hz, 2H), 7.52 (br t, J=7.5 Hz, 3H), 7.38-7.16 (m, 15H), 6.09 (s, 2H), 4.79 (s, 2H), 4.66-4.49 (m, 6H), 4.24 (s, 2H), 4.18-4.05 (m, 3H), 3.99 (br d, J=7.8 Hz, 2H), 3.90-3.70 (m, 3H), 2.03 (s, 2H), 1.75 (br s, 3H), 1.24 (br t, J=7.1 Hz, 2H); ESI-MS: m/z=564.1 [M+H]+. Paso 5: Preparación del Compuesto 3h

A una solución agitada del compuesto 3g (3,3 g, 5,85 mmol) en DCM (50 ml) se le añadió a 0° C ácido metanosulfónico (28,9 g, 0,3 mol). Después de agitar a 0° C durante 2,5 h, la reacción se combinó con un lote anterior y se añadió una suspensión de NaHCO3 (75 g, 0,90 mol) en DCM (180 ml) usando un embudo de goteo igualador de presión. Después de agitar la mezcla de la reacción durante 1,5 h, se añadió MeOH (10 ml) y la mezcla se agitó durante otras 0,5 h (pH ~7-8). La mezcla de la reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un sólido de color amarillo claro, se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0-10% de MeOH en DCM, 25 ml/min) para dar el compuesto 3h como un sólido blanquecino (3,75 g). 1H NMR (400 MHz, CDaOD) 5 ppm 8.73 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.13-8.06 (m, 2H), 7.71-7.62 (m, 1H), 7.61-7.53 (m, 2H), 6.14 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.09 (d, J=7.8 Hz, 1H), 3.97 (s, 2H), 3.92 (d, J=7.8 Hz, 1H).

Paso 6. Preparación del Compuesto 3i

A una mezcla del compuesto 3h (4,3 g, 11,2 mmol) en piridina (50 ml) se le añadió gota a gota una solución de DMTrCl (4,56 g, 13,4 mmol) en piridina (20 ml) a 0° C. Después de agitar a TA durante 2 h, la mezcla de la reacción se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y luego se lavó sucesivamente con NaHCÜ3 acuoso saturado (80 ml x 3) y salmuera (80 ml x 2). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sucesivamente sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100% en éter de petróleo) para dar el compuesto 3i como un sólido blanco (7,8 g). 1H NMR (400 MHz, CD³OD) 5 ppm 8.74 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.09 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.70-7.62 (m, 1H), 7.60-7.53 (m, 2H), 7.48 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.36 (dd, J=3.0, 9.0 Hz, 4H), 7.33-7.27 (m, 1H), 7.26-7.18 (m, 1H), 6.87 (d, J=8.8 Hz, 4H), 6.17 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.10 (q, J=7.3 Hz, 1H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.77 (s, 6H), 3.65-3.58 (m, 1H), 3.54-3.48 (m, 1H); ESI-MS: m/z=686 [M+H]+.

Paso 7. Preparación del Compuesto 3k

A una suspensión agitada del compuesto 3j (5,0 g, 13,61 mmol, CAS #160107-07-3), trifenilfosfina (4,28 g, 16,33 mmol), TBAI (502 mg, 1,36 mmol) y NaN3 (3,3 g, 50,76 mmol) en DMF (60 ml) se le añadió CBr4 (5,41 g, 16,33 mmol) en una porción. Después de agitar a 20° C durante 12 h, la mezcla de la reacción se repartió con 80 ml de NaHCO3 acuoso saturado y DCM (100 ml x 3). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sucesivamente sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100% en éter de petróleo para enjuagar el Ph3PO, luego se cambió a MeOH al 0-10% en DCM) para dar 3k como un sólido blanco (4,26 g). 1H NMR (400 MHz, CD³OD) 5 ppm 8.16 (s, 1H), 5.96 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.82 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.27-4.21 (m, 1H), 3.97 (t, J=4.9 Hz, 1H), 3.66 (d, J=4.4 Hz, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.78-2.69 (m, 1H), 1.24 (d, J=6.8 Hz, 6H), ESI-MS: m/z=393.1 [M+H]+

Paso 8: Preparación del Compuesto 3l

A una solución de 3k (4,07 g, 10,37 mmol), 2,4,6-trimetilpiridina (1,63 g, 13,48 mmol) y AgNO3 (2,29 g, 13,48 mmol) en DCM (40 ml) se le añadió DMTrCl (4,57 g, 13,48 mmol) a 0° C. Después de agitar a 25° C durante 3 h, la suspensión roja se diluyó con DCM (50 ml) y se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas. El filtrado se repartió entre DCM/agua (50/30 ml) y se lavó con salmuera (30 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sucesivamente sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (MeOH al 0-5% en DCM) para dar 3l como un sólido blanco (7,0 g). 1H NMR (400 MHz, CD³OD) 57.94 (s, 1H), 7.35-7.28 (m, 1H), 7.22 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.18-7.12 (m, 2H), 7.09 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.72 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.61 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.03 (d, J=7.7 Hz, 1H), 4.94 (br dd, J=5.2, 7.2 Hz, 1H), 4.87 (s, 7H), 4.16 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.07 (q, J=7.1 Hz, 1H), 3.71 (d, J=13.7 Hz, 4H), 3.61 (dd, J=6.6, 12.8 Hz, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.21 (s, 2H), 2.75 (quin, J=6.8 Hz, 1H), 2.68 (d, J=4.6 Hz, 1H), 1.99 (s, 2H), 1.28-1.17 (m, 6H), ESI-MS: m/z=695.3 [M+H]+.

Paso 9. Preparación del Compuesto 3m

Una suspensión de 3l (1,2 g, 1,72 mmol) y Pd húmedo al 10%/C (1,0 g, 0,49 mmol) en acetato de etilo (100 ml) se hidrogenó a 20° C bajo 15 psi durante 4 h. La mezcla de la reacción se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un residuo purificado por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (MeOH al 0-10% en DCM) para dar 3m como un sólido blanco (682 mg). 1H NMR (400 MHz, CD³OD) 57.89 (s, 1H), 7.33 (dd, J=1.5, 7.8 Hz, 1H), 7.30-7.29 (m, 1H), 7.36-7.29 (m, 1H), 7.21 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.18-7.10 (m, 3H), 7.08 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.71 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.59 (d, J=8.8 Hz, 2H), 5.98 (d, J=7.5 Hz, 1H), 5.03 (dd, J=4.8, 7.5 Hz, 1H), 4.21 (dd, J=3.4, 9.9 Hz, 1H), 3.69 (d, J=16.3 Hz, 6H), 3.26 (s, 3H), 3.16 (dd, J=10.0, 13.1 Hz, 1H), 2.88-2.75 (m, 3H), 1.31 -1.21 (m, 8H); ESI-MS: m/z=669.3 [M+H]+.

Paso 10. Preparación del Compuesto 3o

Se añadió rápidamente una solución de clorosulfato de 4-nitrofenilo 3n (2,45 g, 10,31 mmol, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2002, 485-495) en DCM seco (5 ml) a una mezcla de 3m (2,3 g, 3,44 mmol), 4-nitrofenol (1,43 g, 10,31 mmol), Et3N (2,09 g, 20,63 mmol) y tamices moleculares de 4Á activados (=4 g) en DCM seco (50 ml) en N² a-78° C. Después de calentar a temperatura ambiente (12° C) y agitar durante 2 h, la mezcla de la reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas. El filtrado se combinó con otros dos lotes anteriores y se repartió entre DCM/NaHCO3 acuoso saturado (100, 3 x 70 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sucesivamente sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0-100% de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar 3o como un sólido amarillo (4,8 g). 1H NMR (400 MHz, CDCh) 5 12.18 (br s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.32-8.26 (m, 3H), 7.74 (s, 1H), 7.37-7.28 (m, 4H), 7.25-7.11 (m, 6H), 7.08 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J=9.0 Hz, 2H), 6.63 (d, J=8.8 Hz, 2H), 5.89 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.99 (dd, J=5.0, 8.5 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.80-3.74 (m, 4H), 3.72 (s, 1H), 3.50-3.44 (m, 1H), 3.38-3.29 (m, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.77 (d, J=5.0 Hz, 1H), 2.55­ 2.43 (m, 1H), 1.31-1.27 (m, 4H), 1.15 (d, J=6.8 Hz, 3H).

ESI-MS: m/z=870 [M+H]+.

Paso 11: Preparación del Compuesto 3p

La mezcla de 3o y 3i se coevaporó con THF (30 ml x 3) antes de su uso. Se agitó una mezcla de 3o (4,12 g, 4,74 mmol), 3i (2,5 g, 3,64 mmol) y tamices moleculares de 4Á activados (~2 g) en THF seco (50 ml) en N² a TA durante 1 h. Se añadió DMAP (2,22 g, 18,22 mmol) en una porción y la mezcla de la reacción se agitó a 40° C durante 12 h. La mezcla se diluyó con DCM (40 ml), se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y se concentró a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (MeOH al 0-2% en DCM) para dar 3p como un sólido amarillo claro (4,6 g). 1H NMR (400 MHz, CDCla 512.31 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 9.11 (brs, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.52-8.29 (m, 2H), 8.16-8.01 (m, 5H), 7.77 (s, 1H), 6.69 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.60 (d, J=9.0 Hz, 2H), 6.21 (s, 1H), 5.84 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.86 (dd, J=4.9, 8.7 Hz, 1H), 4.06-3.93 (m, 2H), 3.73 (d, J=2.8 Hz, 9H), 3.70 (s, 3H), 3.67-3.58 (m, 1H), 3.34 (d, J=11.0 Hz, 1H), 3.15 (s, 3H), 3.06 (dd, J=2.3, 12.5 Hz, 1H), 2.%-2.84 (m, 1H), 2.62-2.49 (m, 2H), 1.28-1.24 (m, 5H), 1.18 (d, J=6.8 Hz, 3H); ESI-MS: m/z=1417 [M+H]+.

Paso 12: Preparación del Compuesto 3q

A una solución agitada de 3p (4,6 g, 3,25 mmol) en DCM (84 ml) se le añadió DCA al 6% en DCM (44 ml, 32,3 mmol, 10,0 eq.) a temperatura ambiente en N². Después de agitar a TA durante 30 min, la mezcla de la reacción se inactivó con piridina (2,8 g, 11 eq.) y la solución incolora resultante se concentró a presión reducida para dar un residuo incoloro purificado por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (MeOH al 0-7% en DCM) para dar 3q como un sólido blanco (1,9 g). El sólido anterior se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa de fase inversa (Columna: Phenomenex Synergi Max-RP 250 x 50 mm x 10 jm ; fase móvil agua (NH⁴HCO³10 mM)-MeCN, B de Inicio 15, B Final 45, Caudal: 90 ml/min Tiempo de gradiente: 18 min seguido de B 100 durante 3 min) para generar 2 fracciones de 3q como un sólido blanco después de la liofilización. Fracción 1: 876 mg y fracción 2: 743 mg. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 58.52 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.01 (d, J=7.1 Hz, 2H), 7.86 (s, 1H), 7.65 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.60-7.54 (m, 2H), 6.20 (s, 1H), 5.71 (d, J=4.9 Hz, 1H), 5.22 (d, J=14.4 Hz, 2H), 4.67­ 4.59 (m, 1H), 4.06 (d, J=3.7 Hz, 2H), 4.02 (br d, J=4.6 Hz, 3H), 4.10-3.99 (m, 1H), 3.99-3.93 (m, 1H), 3.51-3.44 (m, 4H), 3.40 (d, J=4.6 Hz, 1H), 2.73-2.65 (m, 1H), 1.21 (dd, J=5.4, 6.6 Hz, 6H); ESI-MS: m/z=812.2 [M+H]+.

Paso 13. Preparación del Compuesto 3r

El THF fue recién destilado sobre Na/benzofenona y el CH³CN fue recién destilado sobre CaH².

El diol secado al vacío 3q (300 mg, 0,37 mmol) se coevaporó con una mezcla de CH³CN/THF (10/6 ml x 3) y se disolvió en una mezcla de CH³CN/THF (10/6 ml). Se añadieron 800 mg de tamiz molecular 4Á activado y una solución de 1H-tetrazol en CH³CN (6,56 ml, 0,45 M, preparada disolviendo 945 mg de tetrazol en 30 ml de CH³CN seco, seguido de la adición de 800 mg de tamices moleculares de 4Á y luego se agitó durante 1 h en argón antes de su uso) y la mezcla se burbujeó con argón durante 15 min. Después de agitar la suspensión blanca durante 1 h a 8° C en una atmósfera de argón, se añadió gota a gota una solución de N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita de 2-cianoetilo en CH³CN (5,62 ml, 0,59 mmol, 0,105 M en CH³CN preparada disolviendo 759 mg de reactivo de fosforodiamidita en 24 ml de CH³CN, seguido de la adición de 800 mg de tamices moleculares de 4Á y luego agitado durante 1 h bajo argón antes de su uso) durante 60 min. La suspensión blanca resultante se agitó durante 1 h a 8° C bajo argón. Se añadió más CH³CN (6 ml) y después de agitar durante 1 h a 30° C, se añadió tetrazol adicional (1,64 ml, 0,74 mmol, 0,45 M en CH³CN). Después de agitar durante 2 h adicionales, se añadió rápidamente una solución de DDTT (380 mg, 1,84 mmol) en piridina (10 ml). Después de agitar durante 30 min, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas; el filtrado se combinó con otro lote y se concentró a presión reducida para dar un residuo disuelto en DCM (8 ml) y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (12 g, MeOH al 0-6% en DCM, 25 ml/min) para producir 3r (275 mg) como un sólido amarillo claro que se usó directamente en el paso siguiente sin purificación adicional ESI-MS: m/z=943.5 [M+H]+.

Paso 14. Preparación de los Compuestos (*R) 4A y (*S) 4B

Se agitó una solución del compuesto 3r (275 mg, 0,292 mmol) en MeNH² (27-30% en EtOH, 5 ml) a 80° C durante 4 horas. La mezcla de la reacción se combinó con otro lote y se concentró a presión reducida para dar un residuo; el residuo se disolvió en una mezcla de CH³CN/H²O (1/8 ml) y se lavó con DCM (8 ml x 3). La capa acuosa se liofilizó para dar una goma amarilla (382 mg) y luego se disolvió adicionalmente en una mezcla de CH³CN/H²O (4/1). Purificación por HPLC preparativa de fase inversa (Columna. Agela Durashell C18 150x25x5 jm ; fase móvil agua (0,04% NH³ AGUA+NH⁴HCO³ 10 mM) - CH³CN, B de Inicio 12, B Final 25; Caudal; 25 ml/min Tiempo de gradiente: 12 min seguido de B 100 durante 3 min), las fracciones deseadas se recogieron y liofilizaron para generar el compuesto (*R) 4A, sal de amonio (39,8 mg, primer isómero de elución) como un sólido blanco y el compuesto (*S) 4B, sal de amonio (65,9 mg, segundo isómero de elución) como un sólido blanco.

La conversión final en la sal de sodio se realizó mediante la elución de una solución acuosa sobre una columna compactada con resina de intercambio iónico Dowex 50WX8 Na para dar el compuesto (*R) 4A, sal de sodio y el compuesto (*S) 4B, sal de sodio como un sólido esponjoso blanco después de la liofilización.

Compuesto (*R) 4A.1H NMR (400 MHz, 60° C., DMSO-da) ó ppm 3.34-3.44 (m, 1H), 3.45-3.56 (m, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.83 (dd, J=10.7, 2.0 Hz, 1H), 3.98 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.09 (br s, 1H), 4.16 (br s, 1H), 4.23 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.67 (dd, J=11.1, 7.8 Hz, 1H), 4.98 (br s, 1H), 5.14 (br s, 1H), 5.31 (ddd, J=13.4, 9.0, 4.4 Hz, 1H), 5.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 6.13 (br s, 2H), 7.15 (br s, 2H), 7.92 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.17 (s, 1H) 31P NMR (162 MHz, DMSO-da) ó 55.83 (s, 1 P); ESI-MS: m/z=716.2 [M+H]

Compuesto (*S) 4B. 1H NMR (400 MHz, 80° C., DMSO-d6) ó ppm 3.21-3.39 (m, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.87 (dd, J=11.5, 4.3 Hz, 1H), 3.92 (d, J=8.1 Hz, 1H), 3.99 (br s, 1H), 4.14 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.30 (br s, 1H), 4.37 (dd, J=11.6, 5.0 Hz, 1H), 4.84 (br s, 1H), 5.06 (br s, 1H), 5.31 (ddd, J=12.3, 9.0, 4.2 Hz, 1H), 5.79 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 6.12 (br s, 2H), 6.99 (br s, 2H), 7.99 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.20 (s, 1H); 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) ó 52.88 (s, 1 P); ESI-MS: m/z=716.2 [M+h]+.

Ejemplo 4

Compuesto 52

A una solución del compuesto 3j (9,6 g, 26,13 mmol, CAS N° 160107-07-3) en DMF (80 ml) se le añadió imidazol (3,56 g, 52,26 mmol) y TbSCI (4,73 g, 31,36 mmol) a 0° C. Después de agitar la mezcla a 25° C durante 2 h, la reacción se diluyó con EtOAc (200 ml) y H²O (100 ml); la capa orgánica se secó sucesivamente sobre Na²SO⁴ anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0-5% en DCM) para dar el compuesto 4a (9,7 g, 76%) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6=12.12 (br s, 1H), 9.48 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.89 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.56 (t, J=4.9 Hz, 1H), 4.21 (q, J=3.4 Hz, 1H), 3.98 (t, J=4.6 Hz, 1H), 3.93 (dd, J=3.5, 11.5 Hz, 1H), 3.79 (dd, J=2.8, 11.5 Hz, 1H), 3.47 (s, 3H), 2.75 (td, J=6.9, 13.6 Hz, 1H), 1.27 (s, 3H), 1.25 (s, 3H), 0.91 (s, 9H), 0.10 (s, 6H); ESI-MS: m/z=482.3 [M+H]+

Paso 2. Preparación del Compuesto 4b

A una solución del compuesto 4a (10 g, 20,76 mmol) en DCM (200 ml) se le añadió peryodinano de Dess Martin (14,97 g, 35,29 mmol) a 0° C. Después de agitar la mezcla a 30° C durante 12 horas. La mezcla de la reacción se diluyó con DCM (300 ml); la capa orgánica se lavó con Na2S2O3 acuoso saturado (100 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se concentró bajo presión para dar un residuo. El residuo (combinado con gel de sílice: 15 g) se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (elución en gradiente: EtOAc al 0-100% en éter de petróleo) para dar el compuesto 4b (9,0 g, 80%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z=498.3 [M+H7]+

Paso 3: Preparación del Compuesto 4c

A una solución del compuesto 4b (9 g, 18,77 mmol) en EtOH (200 ml) se le añadió NaBH4 (1,06 g, 28,15 mmol) a 0° C. Después de agitar la solución a 0° C durante 0,5 horas, la mezcla se diluyó con EtOAc (500 ml) y NH4Cl acuoso saturado (100 ml). La capa orgánica se concentró a presión reducida para dar un residuo (9,0 g). El residuo (combinado con gel de sílice: 15 g) se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (elución en gradiente: MeOH al 0-2% en DCM, v/v) para dar el compuesto 4c (4,8 g, 53%) como un sólido blanco y compuesto 4a (1,5 g, 17%) como un sólido blanco. Compuesto 4d: 1H NMR (400 MHz, DMsO-d6) 5=12.06

(s, 1H), 11.70 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.05 (d, J=4.6 Hz, 1H), 5.85 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.31-4.26 (m, 1H), 3.91-3.77 (m, 4H), 3.39 (s, 3H), 2.80-2.70 (m, 1H), 1.11 (d, J=6.8 Hz, 6H), 0.89 (s, 9H), 0.07 (s, 6H)

ESI-MS: m/z=482.3 [M+H]+.

Paso 4: Preparación del Compuesto 4d

A una solución del compuesto 4c (1,8 g, 3,74 mmol) en piridina (20 ml) se le añadió DIEA (1,45 g, 11,21) y cloruro de difenilcarbámico (1,12 g, 4,86 mmol) a 25° C. La mezcla se agitó a 25° C durante 3 h. La mezcla de la reacción se combinó con otros 2 lotes y se elaboró. La mezcla se repartió entre acetato de etilo (150 ml) y H²O (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (100 ml) y se evaporó a presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0% a 100% EA/PE, V/V) para dar el compuesto 4d (6 g, 70% a partir de 4,8 g del compuesto 4c) como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5=8.34 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.44 (br d, J=7.3 Hz, 4H), 7.37 (t, J=7.8 Hz, 4H), 7.25 (br s, 2H), 6.22 (d, J=3.0 Hz, 1H), 4.38 (br s, 1H), 4.16-4.12 (m, 1H), 4.00-3.93 (m, 2H), 3.83 (dd, J=2.5, 11.0 Hz, 1H), 3.51 (s, 3H), 2.94 (br s, 1H), 1.27 (dd, J=1.0, 6.8 Hz, 6H), 0.94 (s, 9H), 0.14 (s, 6H); ESI-MS: m/z=677.4 [M+H]+

Paso 5: Preparación del Compuesto 4e

A una solución del compuesto 4d (5 g, 7,39 mmol) en piridina (100 ml) se le añadió Tf²O (16,67 g, 59,1 mmol) a 0° C. Después de agitar la mezcla a 0° C durante 1,5 h, la reacción se repartió entre DCM (200 ml) y H²O

(100 ml). La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con DCM (100 ml).Luego, las capas orgánicas se combinaron y se secaron sucesivamente con Na²SO⁴ anhidro, se filtraron y evaporaron a presión reducida para dar un residuo. El residuo se combinó con otro lote y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (del 0% al 30% de EtOAc/éter de petróleo, V/V) para dar el compuesto 4e (4,0 g, como un sólido blanco.

ESI-MS: m/z=809.5 [M+H]+

Paso 6. Preparación del Compuesto 4f

A una solución del compuesto 4e (4,0 g, 4,94 mmol) en DMF (40 ml) se le añadió NaN3 (3,5 g, 54,15 mmol) a 25° C. Después de agitar la reacción a 25° C durante 12 horas, la mezcla se diluyó con NaHCO3 acuoso saturado

(30 ml) para ajustar el pH>9 y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron sucesivamente con salmuera (100 ml), se secaron con Na2SO4 anhidro, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para dar un sólido amarillo. El residuo (combinado con gel de sílice: 10 g) se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (elución en gradiente: 0-100% de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto 4f (1,8 g, 67%) como un sólido amarillo.

1H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5=11.99 (br s, 1H), 8.20 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.96 (br d, J=4.4 Hz, 1H), 4.25-4.11 (m, 3H), 3.99 (br d, J=1.7 Hz, 1H), 3.82 (br d, J=11.7 Hz, 1H), 3.53 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.70-2.58

(m, 1H), 1.30 (br d, J=6.8 Hz, 6H), 0.94 (s, 9H), 0.13 (s, 6H); ESI-MS: m/z=507.3 [M+H]+

Paso 7: Preparación del Compuesto 4g

A una solución del compuesto 4f (1,8 g, 3,55 mmol) en THF (20 ml) se le añadió trifenilfosfina (1,3 g, 4,97 mmol) a 25° C. Después de agitar la reacción a 40° C durante 2 horas, se añadió agua (10 ml) a la solución a 40° C y la mezcla se agitó durante 12 horas. Luego, la mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con salmuera (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se concentraron bajo presión para dar un sólido amarillo (2,0 g). El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0%-10% en DCM) para dar el compuesto 4g (1,5 g, 81%) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5=8.15 (s, 1H), 5.57 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.07-4.00 (m, 1H), 3.91 (dd, J=5.3, 8.0 Hz, 1H), 3.75-3.63 (m, 3H), 3.37 (s, 3H), 2.77-2.69 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.8 Hz, 6H), 0.86 (s, 9H), 0.04 (s, 6H); ESI-MS: m/z=481.3 [M+H]+

Paso 8: Preparación del Compuesto 4h

A una solución del compuesto 4g (1,5 g, 2,81 mmol) en DCM (100 ml) se le añadió 4-nitrofenol (3,12 g, 22,47 mmol), trietilamina (1,7 g, 16,8 mmol) y tamices moleculares de 4Á (2,0 g). Después de agitar la mezcla a -78°

C durante 0,5 h se añadió clorosulfato de 4-nitrofenilo 3n (2 g, 8,42 mmol) en DCM (20 ml) a la solución a -78° C.

Después de agitar a -78° C durante 15 min y se agitó a 0° C durante 1 hora, la mezcla se filtró y se diluyó con DCM (100 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCÜ3 acuoso saturado (3 x 50 ml) y se concentró a presión para dar un sólido amarillo (2,5 g). El residuo se combinó con otro lote (combinado con gel de sílice: 6 g) y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (elución en gradiente: acetato de etilo al 0-100% en DCM) para dar el compuesto 4h (1,68 g, 75% de 2.4 g compuesto 74) como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, CD³CN) 5=11.89 (br s, 1H), 9.27 (br s, 1H), 8.15 (br d, J=9.3 Hz, 2H), 7.94-7.90 (m, 1H), 7.23 (br d, J=9.0 Hz, 2H), 5.80 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 4.81 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.97 (br d, J=4.5 Hz, 1H), 3.83 (br s, 2H), 3.48-3.39 (m, 3H), 2.73-2.58 (m, 1H), 1.19 (br dd, 7=3.3, 6.0 Hz, 6H), 0.94 (s, 9H), 0.12 (s, 6H); ESI-MS: m/z=682.3 [M+H]+

Paso 9: Preparación del Compuesto 4j

Se agitó una solución del compuesto 4h (1,68 g, 2,47 mmol), compuesto 4i (731 mg, 1,9 mmol) y tamices moleculares de 4Á (2,0 g) en DCE (135 ml) en N² durante 30 min a 25° C, seguido de la adición de DmAP (1,16 g, 9,49 mmol). Después de agitar a 55° C (temperatura del aceite) durante 12 horas, la mezcla se filtró y la solución se repartió con DCM (100 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCÜ3 acuoso saturado (3 x 100 ml); la capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida para dar el producto bruto (2,5 g). El producto bruto (2,5 g, bruto) (combinado con gel de sílice: 5 g) se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0-10% en DCM) para dar el compuesto 4j (1,2 g, 52%) como un sólido amarillo claro. ESI-MS: m/z=927.4 [M+H]+

Paso 10. Preparación del Compuesto 4k

A una solución del compuesto 4j (1,2 g, 1,29 mmol) en piridina (24 ml) se le añadió TFA (1,31 g, 12,94 mmol) y Et3N-3HF (1,0, 6,47 mmol) a 15° C. Después de agitar la solución a 35° C durante 12 horas, se añadieron THF (20 ml) y trimetil(propoxi)silano (3,4 g, 25,89 mmol) a 25° C y la mezcla de la reacción se agitó durante otras 3 horas. La mezcla de la reacción se concentró bajo presión para dar un residuo (2 g). El residuo (combinado con gel de sílice: 4 g) se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (elución en gradiente: MeOH al 0-10% en DCM) para dar el compuesto bruto 4k (900 mg). El producto bruto se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (Método: Columna. Waters Xbridge Prep OBD 5 gm C18 150x30, Condición: agua (NH⁴HCO³10 mM)-ACN B: 5, B Inicial 35, Tiempo de Gradiente (min): 7, 100% de B Tiempo de Retención (min): 1, Caudal (ml/min): 25) para dar el compuesto puro 4k (0,57 g, 70%) como un sólido blanco. H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5=8.17 (d, J=4.4 Hz, 2H), 8.08 (s, 1H), 6.21 (d, J=19.6 Hz, 1H), 5.84 (d, J=8.6 Hz, 1H), 5.51-5.26 (m, 1H), 5.13 (br s, 1H), 4.72 (dd, J=5.4, 8.8 Hz, 1H), 4.53-4.38 (m, 1H), 4.22-4.16 (m, 1H), 4.14-4.10 (m, 1H), 4.09-4.00 (m, 2H), 3.86 (d, J=5.4 Hz, 1H), 3.63-3.46 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 2.75 (td, J=6.8, 13.6 Hz, 1H), 1.11 (dd, J=2.1, 6.7 Hz, 6H) 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) -201.424 (s, 1 F); ESI-MS: m/z=699.3 [M+H]+

Paso 11: Preparación del Compuesto 4l

El CH³CN fue recién destilado CaH² antes de su uso. El compuesto 4l (152 mg, 0,218 mmol) se disolvió en DMF (2 ml) y CH³CN (6 ml), a los que se añadieron 0,3 g de MS 4Á (polvo) y una solución de 1H-tetrazol (3,87 ml, 0,45 M, preparado disolviendo 472,5 mg de tetrazol en 15 ml de CH³CN seco, seguido de la adición de 1 g de MS 4Á y luego se agitó durante 0,5 h en N² antes de su uso). Se añadió gota a gota una solución de N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita de 2-cianoetilo (131,15 mg, 0,43 mmol) en CH³CN (0,8 ml) durante 20 min a un vial con una jeringuilla. La suspensión blanca resultante se agitó adicionalmente durante 2 horas a 25° C bajo N². Luego, a la solución anterior se le añadió TBHP (0,218 ml, 1,09 mmol, 5 M en decano) a 25° C. Después de agitar la reacción a 25° C durante 1 h, la mezcla se diluyó con DCM (20 ml) y CH³OH (3 ml), se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y se concentró al vacío para dar un aceite incoloro; el aceite se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (4 g, MeOH al 0-11,5% en DCM) para dar el compuesto 4l (151 mg, 68%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z=814.3 [M+H]+.

Paso 12. Preparación del Compuesto 52, sal de sodio

Se trató una solución del compuesto 4l (150 mg, 0,18 mmol) en EtOH (2 ml) con MeNH² (5 ml, 30% en EtOH). Después de agitar la reacción a 25° C durante 2 h y a 35° C durante 1 h, el solvente se concentró a presión reducida para dar un aceite incoloro. El residuo se disolvió en H²O (20 ml) y CH³CN (5 ml), luego se lavó con DCM (20 ml x 2). Luego, la fase acuosa se liofilizó para dar el producto bruto (80 mg, bruto) como un sólido amarillo claro. El producto bruto (80 mg, bruto) se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (método: columna, Waters Xbridge Prep OBD 5 gm C18150x30; agua de acondicionamiento (NH⁴HCO³10 mM) (A)-Ac N (B) B Inicial 0 B Final 25; Tiempo de gradiente (min) 7; 100% de B Tiempo de retención (min) 1 Caudal (ml/min) 25 Inyecciones 12) para dar el compuesto 52, sal de amonio (35 mg, 26%) como un sólido blanco. 1H N^m R (400 MHz, D²O) 5=8.29 (s, 1H), 8.19 (br d, J=9.5 Hz, 2H), 6.61 (br d, J=18.6 Hz, 1H), 6.08 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 5.90-5.72 (m, 1H), 5.39 (br d, J=19.6 Hz, 1H), 5.20 (br s, 1H), 4.76 (br s, 1H), 4.72 (br s, 1H), 4.49 (br d, J=10.3 Hz, 3H), 4.35 (br d, J=4.3 Hz, 1H), 4.17 (q, J=6.2 Hz, 1H), 3.67 (s, 3H); 19F NMR (376.5 MHz, D²O) -199.859; 31P NMR (162 MHz, D²O) -1.639; ESI-MS: m/z=691.1 [M+H]+.

Conversión a sal de sodio

Se añadió Dowex 50Wx8, 200-400 (5 ml, forma H) a un vaso de precipitados y se lavó con H²O desionizada (20 ml). Luego, se añadió a la resina H²SO⁴ al 15% en H²O desionizada (20 ml), la mezcla se agitó suavemente durante 15 min y se decantó (15 ml). La resina se transfirió a una columna con H²SO⁴ al 15% en H²O desionizada y se lavó con H²SO⁴ al 15% (por lo menos 4 CV), y luego con H²O desionizada hasta que se volvió neutra. La resina se volvió a transferir al vaso de precipitados, se añadió una solución de NaOH al 15% en H²O desionizada (20 ml) y la mezcla se agitó suavemente durante 15 min y se decantó (1x). La resina se transfirió a la columna y se lavó con NaOH al 15% en H²O (por lo menos 4 CV), y luego con H²O desionizada hasta que se volvió neutra. El CDN (compuesto 52,35 mg, 0,049 mmol)) se disolvió en H²O desionizada (8 ml), se añadió a la parte superior de la columna y se eluyó con H²O desionizada. Las fracciones apropiadas se agruparon y liofilizaron para obtener la forma de sal de sodio (30 mg, pureza: 91%) como un sólido blanco. La forma de sal (30 mg) se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (Método: columna, Waters Xbridge Prep OBD 5 pm C¹⁸ 150x30; agua de acondicionamiento (10 mM NH⁴HCO³) (A)-ACN (B) B Inicial 0 B Final 30; Tiempo de gradiente (min) 7; 100% de B Tiempo de retención (min) 1 Caudal (ml/min) 25) para dar el producto (25 mg) como un sólido blanco. El producto (25 mg, pureza: 97,07%) se purificó por segunda vez mediante HPLC preparativa de fase inversa (método: columna, Waters Xbridge Prep OBD 5 pm C18150x30, agua de acondicionamiento (NH⁴HCO³10 mM) (A)-ACN (B) B de Inicio 0 B Final 30; Tiempo de gradiente (min) 7; 100% de B Tiempo de retención (min) 1 Caudal (ml/min) 25) para dar el compuesto 52, sal de amonio que se trató con el resina de intercambio iónico DOWEX 50Wx8, 200-400 para dar el compuesto 52, sal de sodio (16,1 mg, 65%) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, D²O) 8=8.01 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 6.37 (br d, J=17.3 Hz, 1H), 5.83 (d, J=9.0 Hz, 1H), 5.59 (br d, J=3.5 Hz, 0.5H), 5.46 (br d, J=3.5 Hz, 0.5H), 5.15-5.02 (m, 1H), 4.97 (br d, J=4.5 Hz, 1H), 4.62-4.52 (m, 2H), 4.49 (br s, 1H), 4.29-4.19 (m, 3H), 4.10 (br d, J=4.5 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H); 19F NMR (376.5 MHz, D²O) -200.863; 31P NMR (162 MHz, D²O) -1.676 ESI-MS: m/z=691.2 [M+H]+.

Ejemplo 5

Compuesto 6

Se agitó una solución de 5,-O-(4,4,-dimetoxitritil)-N2-isobutiril-3,-O-metil-D-guanosina [CAS 103285-33-2] (5,2 g, 7,76 mmol) en DMF (50 ml), a la que se añadieron imidazol (2,38 g, 34,94 mmol) y t Bs CI (3,51 g, 23,29 mmol), durante 6 h a 35° C. La mezcla de la reacción se inactivó con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0-15% en DCM) para dar el compuesto 5a que se usó tal cual en el paso siguiente. ESI-MS: m/z 784.4 [M+H]+.

Paso 2: Preparación del Compuesto 5b

Se añadieron TFA (2 ml, 26,12 mmol) y Et3SiH (8 ml, 50,03 mmol) a una solución del compuesto 5a anterior en DCM (160 ml) a 0° C. La mezcla resultante se agitó a 0° C. durante 30 min, después de lo cual se continuó agitando a temperatura ambiente durante 4 h. La solución de la reacción se inactivó con NaHCO3 acuoso y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na²SO⁴ , se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0-5% en DCM) para dar el compuesto 5b como un sólido blanco (2,9 g). 1H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó ppm 12.12 (br s, 1H), 8.36 (br s, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.72 (d, J=7.5 Hz, 1H), 5.41 (br s, 1H), 4.78 (dd, J= 7.5 , 5.1 Hz, 1H), 4.30 (b r s, 1H), 3.98 (dd, J = 12.6, 2.2 Hz, 1H), 3.84 (d, J=5.1 Hz, 1H), 3.71 (b r s, 1H), 3.54 (s, 3H ), 2.68 (spt, J= 6.9 Hz, 1H), 1.28 (d, J= 6.8 Hz, 3H ), 1.29 (d, J= 6.8 Hz, 3H ), 0.81 (s, 9H ), -0.07 (s, 3H ), -0.29 (s, 3H ), E S I-M S : m iz 482.1 [M+H]+.

^{P aso 3. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 5d

^{S e ag itó u n a so luc ió n de} 5c ^{[C A S 2241580 -02 -7 ] (2 g, 5 ,02 m m o l) en D M F (10 m l), a la que se le añ ad ie ro n} im idazo l (1 ,02 g, 15 ,06 m m o l) y T B S C l (1,51 g, 10 ,04 m m o l) d u ra n te 2 ho ras a te m p e ra tu ra am b ie n te . La m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con E tO A c y se lavó con agua. La c a p a a cu o sa se e x tra jo con E tO A c. Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se lava ron con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o y sa lm ue ra , se seca ron sob re Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de ^{e lu c ió n : M eO H al 0 -15 % en D C M ) p a ra p ro p o rc io n a r el co m p u e s to} 5d ^{co m o un só lido am a rillo (2 ,57 g, ren d im ien to :} 100% ). E S I-M S : m /z 513.2 [M+H]+.

^{P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 5e

^{S e h id ro gen ó un a so luc ió n de l c o m p u e s to} 5d ^{(1 ,285 g, 2,51 m m ol) en E tO A c (150 m l) a te m p e ra tu ra} a m b ie n te ba jo p re s ió n a tm o s fé rica d u ra n te 2 h u sa n d o P d/C al 10% (2 ,95 g) co m o c a ta liza d o r. La m ezc la de la reacc ión se filtró y e l f iltra d o se co n ce n tró a p res ión reduc ida . La reacc ión se rep itió a la m ism a esca la , e l p ro du c to b ru to de am b as rea cc io nes se co m b in ó pa ra su pu rifica c ió n m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice ^{(e luc ió n en g ra d ie n te : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra p ro p o rc io n a r e l co m p u e s to} 5e ^{(1,69 , ren d im ien to : 69% ) co m o un} só lid o b lanco . E S I-M S : m /z 487.1 [M H]+

^{P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 5f

^{S e ag itó u n a so luc ió n de l co m p u e s to} 5e ^{(1 ,05 g, 2 ,16 m m o l) en DCM (40 ml), a la que se a ñ ad ie ro n 4-}n itro fe no l (900 mg, 6 ,47 m m ol), Et³ N (1 ,79 m l, 12 ,95 m m o l) y ta m ice s m o lecu la re s a c tiva do s , a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m in . La m e zc la se en frió a -78° C, d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (1 ,54 g, 6 ,47 m m o l) en DCM (10 m l), se co n tin u ó a g ita n d o d u ra n te 2 ,5 h a -78° C. La m e zc la de la reacc ión se filtró y se lavó con N aH C O 3 acuoso , las ca p a s de l la vad o acuosas se e x tra je ro n con DC M . Las ca p a s o rg án icas c o m b in a d a s se seca ron con Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -100 % en é te r de pe tró le o ) ^{p a ra d a r el co m p u e s to} 5f ^{com o un só lido b lan co (1 ,24 g, ren d im ien to : 83 ,5% ). E S I-M S : m /z 688.2 [M+H]+.}

^{P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 5g

^{S e a ñ ad ie ro n ta m ice s m o le cu la re s ac tiva do s a una so luc ió n de l c o m p u e s to} 5b ^{(105 mg, 0 ,218 m m o l) y su lfa m a to} 5f ^{(180 m g, 0 ,262 m m o l) en T H F seco (2 m l), la m ezc la resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te} d u ra n te 1 h en N ². Luego, se añ ad ió D M A P (133 mg, 1,09 m m o l) pa ra in ic ia r la reacc ión , la m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 18 h. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y el f iltra d o se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de ^{e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra p ro p o rc io n a r e l co m p u e s to} 5g ^{co m o un só lido a m a rillo (157 mg, ren d im ien to :} 70% ). 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 ppm 12.18 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.66 -7.59 (m, 1H), 7.58 -7.49 (m, 3H ), 7.19 (b r s, 1H), 6.32 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.60 -5.42 (m, 2H ), 5.60 -5.42 (m, 1H), 4.80 -4.63 (m, 2H ), 4.49 (dd, J= 3.8 , 11.0 Hz, 1H), 4.36 -4.27 (m, 2H ), 4.17 -4.02 (m, 2H ), 3.80 (dd, J= 2.3 , 4.8 Hz, 1H), 3.51 (s, 3H ), 2.75 -2.63 (m, 1H), 1.33 (d, J= 6.8 Hz, 3H ), 1.27 (d, J= 6.8 Hz, 3H ), 0.91 (s, 9H ), 0.77 (s, 9H ), 0.89 (s, 3H ), 0.91 (s, 3H ), -0.08 (s, 3H ), -0.28 (s, 3H ). E S I-M S : m is 1030.5 [M H ]

^{P aso 7. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 5h

S e a ñ ad ie ro n Et3N (2 ,62 g, 25 ,92 m m o l) y tr ih id ro flu o ru ro de tr ie t ila m in a (6 ,28 g, 51 ,83 m m o l) a la so luc ió n ^{de l c o m p u e s to} 5g ^{(890 m g, 0 ,864 m m o l) en p ir id in a (10 m l), la m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó ba jo N 2 a} te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 18 h. La m ezc la se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) se g u id o de pu rifica c ió n m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : P h e n o m e n e x S yne rg i M ax-R P , 10 |^j M, ^{250 x 50 m m ; fa se m óvil: a g u a (A ) -M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r el co m p u e s to} 5h ^{co m o un só lido} b lan co (397 mg, ren d im ien to : 57% ). 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.07 (s, 1H), 11.60 (s, 1H), 11.20 (s, 1H), 8.89 (b r d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.71 (d, > 22.8 Hz, 2H ), 8.14 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.60 -7.72 (m, 1H), 7.47 -7.60 (m, 2H ), 6.46 (d, J= 19.9 Hz, 1H), 5.84 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 0.00 (d, J=6.1 Hz, 1H), 5.66 (dd, > 52.1 ,4.5 Hz, 1H), 5.22 (br t, J=5.1 Hz, 1H), 4.50 -4.69 (m, 2H ), 4.22 -4.42 (m, 3H ), 4.05 -4.16 (m, 1H), 3.93 (t, J=4.1 Hz, 1H), 3.82 (b r dd, J = 12.2, 4.4 Hz, 1H), 3.54 -3.68 (m , 1H), 3.42 (s, 3H ), 2.75 (spt, > 6.9 Hz, 1H), 1.12 (d, J= 6.9 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 802.3 [M H ]+.

^{P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 5i

Se trató una solución del compuesto 5h (200 mg, 0,25 mmol) y IH-tetrazol (1,82 ml de MeCN al 3-4%, secado en tamices moleculares de 3Á antes de su uso) en THF/MeCN seco (1:1, 12 ml, secado en tamices moleculares de 3Á antes de su uso) con tamices moleculares de 3Á activados durante 2 h en N² después de lo cual se añadió en una porción 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (75 mg, 0,25 mmol). La mezcla de la reacción se agitó durante la noche. Se añadió una cantidad adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (22,5+mg, 0,075+0,05 mmol) en dos porciones con un intervalo de tiempo de 2 h, después de lo cual se continuó la agitación durante 90 min. Se añadió una solución de tBuOOH (68 gl de una solución 5,5 M en decano, 0,37 mmol), la mezcla de la reacción se agitó durante 30 min. Los tamices moleculares se eliminaron por filtración y se lavaron con diclorometano. El filtrado se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (gradiente de elución: MeOH al 0-10% en DCM) para dar el compuesto 5i (30 mg, rendimiento: 13%). ESI-MS: m/z 917.5 [M+H].

Paso 9: Preparación del Compuesto 6, sal de sodio

El compuesto 5i anterior (30 mg, 0,033 mmol) se agitó en una solución de metilamina al 33% en etanol (1 ml) a temperatura ambiente hasta la conversión completa (aprox. 2 h). El producto bruto, obtenido tras concentración a presión reducida, se trituró en MeCN. La conversión final en la sal de sodio se realizó mediante elución de una solución acuosa sobre una columna compactada con una resina de intercambio de iones de Na catiónica, proporcionando el compuesto 6, sal de sodio como un sólido blanco esponjoso (14 mg, rendimiento: 60%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 612 C.) 5 ppm 10.39 (br s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.07 (br s, 2H), 6.31 (br s, 2H), 6.24 (dd, J=15.7, 2.7 Hz, 1H), 5.78 (d, J=9.0 Hz, 1H), 5.44 (br d, J=53.9 Hz, 1H), 5.11 (td, J=9.3, 4.0 Hz, 1H), 4.42-4.57 (m, 1H), 4.13-4.25 (m, 4H), 4.11 (d, J=3.9 Hz, 1H), 3.90-4.03 (m, 1H), 3.79-3.88 (m, 1H), 3.53 (s, 3H);

Ejemplo 6

Compuesto 9

.

Compuesto 9, sal de sodio

P aso 1: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 6a

El co m p u e s to 3 h (1,0 g, 2,61 m m o l) se c o e va p o ró con to lu e n o a n h id ro : C H ³CN (v :v=1 :1 , 6 ml x 2) y luego se d iso lv ió en D M F a n h id ro (18 ,8 m l). Luego se añ ad ió tr ife n ilfo s fin a (1 ,02 g, 3,91 m m ol), NaN3 (0 ,63 g, 9 ,73 m m ol), y o d u ro de te tra b u tila m o n io (192 ,7 m g, 0 ,52 m m ol) y CBr4 (1 ,3 g, 3,91 m m o l) a te m p e ra tu ra am b ie n te . D espués de a g ita r la reacc ión a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 12 h, la rea cc ió n se in ac tivó con s a lm u e ra (10 m l) y se repa rtió con E tO A c (20 m l). S e añ ad ió so luc ió n a cu o sa sa tu ra d a de N aH C O 3 (20 m l) a la m ezc la se g u id o de ex tra cc ió n con E tO A c (20 ml x 3). Luego, las ca p a s o rg á n ica s se co m b in a ro n y se seca ron su ce s iva m e n te sob re Na2SO4 anh id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n red u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c: é te r de p e tró le o = 0 a 100% , se g u id o de M eO H :D C M = de l 0 al 5% ) pa ra d a r 6a co m o un po lvo am a rillo . E S I-M S : m /z 408.9 [M+H]+.

P aso 2. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 6 b

A u n a so luc ión de 6a (1 ,24 g, 3 ,04 m m o l) en DCM (16 m l) se le añ ad ió 2 ,4 ,6 -co lid in a (1,4 g, 11 ,56 m m ol), A gN O 3 (1 ,96 g, 11 ,56 m m o l) y D M T rC l (1 ,54 g, 4 ,56 m m o l) a 15° C. D espués de a g ita r a 15° C d u ra n te 5 ho ras, la m e zc la de la reacc ión se in ac tivó con M eO H (20 m l) y se d ilu yó con DC M (40 m l). La c a p a o rg á n ic a se lavó su ce s iva m e n te con s a lm u e ra (20 m l x 2), se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c: é te r de pe tró le o = de l 0 al 100% ) pa ra d a r 6 b (1 ,99 g) co m o un só lid o b lanco . 1H N ^m R (400 M H z, CDCta) 5 1.17 -7.00 (m , 6H ), 6.93 (s, 4H ), 6.73 -6.49 (m , 4H ), 5.28 (s, 2H ), 4.10 (d, J= 7.3 Hz, 3H ), 3.79 -3.56 (m, 5H ), 3.47 (b r d, J= 4.6 Hz, 1H), 3.37-3.11 (m, 2H ), 2.94 (s, 1H), 2.87 (s, 1H), 2.61 (s, 6H ), 2.31 (s, 3H ), 2.03 (s, 1H), 1.72 -1.56 (m, 5H ), 1.53 -1.35 (m, 2H ), 1.24 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 0.99 (t, J= 7.3 Hz, 3H ). E S I-M S : m /z 711.2 [M+H]+.

P aso 3. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 6 c

U na susp en s ión de 6 b (1 ,99 g, 2 ,8 m m o l) con P d/C al 10% h ú m ed o (3 ,3 g, 2 ,8 m m o l) co m o c a ta liz a d o r en E tO A c (100 m l) se h id ro gen ó (15 ps i) a T A (15° C) d u ra n te 5 H. El c a ta liz a d o r se filtró y el f iltra d o se eva p o ró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r 6 c b ru to (1,31 g) co m o un só lido b lanco , usa do d ire c ta m e n te en e l pa so s ig u ie n te sin pu rifica c ió n ad ic io na l E S I-M S : m /z= 685.2 [M+H]+.

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 6d

El c o m p u e s to ⁶ c (213 mg, 0,31 m m o l) se c o e va p o ró con to lu e n o an h id ro : C H ³CN (v :v=1 :1 , 3 x 2 m l) y se d iso lv ió en DCM a n h id ro ^{( 8} m l); luego se añ ad ió 4 -n itro fe n o l (129 ,8 m g, 0 ,93 m m ol), Et³ N (188 ,8 m g, 1,86 m m o l) y ta m ic e s m o lecu la re s de 4 Á a c tiva d o s (~3 g) ba jo N ² a te m p e ra tu ra am b ie n te (^{1 0} ° C); la m ezc la se en frió a -78° C se g u id o de la ad ic ió n ráp id a de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo 3 n (221 ,74 mg, 0 ,93 m m o l) ba jo N ² a -78° C. D e spués de a g ita r a -78° C d u ra n te 3 h, la m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con DC M (30 m l) y se filtró a tra v é s de u n a a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s . El f iltra d o se rep a rtió e n tre D C M /N a H C O ³ a cu o so sa tu ra d o (30 /45 m l) y la ca p a a cu o sa se e x tra jo con DC M (15 ml x 3). Las ca p a s o rg á n ica s se c o m b in a ro n y se lava ron su ce s iva m e n te con s a lm u e ra (20 ml x 2), se seca ron sob re N a ²S O ⁴ an h id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c :é te r de pe tró le o = del 0 al 90% ) p a ra d a r ⁶ d (142 m g) co m o un só lido am arillo . 1H N M R (400 M H z, C D C h) 59.25 -9.05 (m, 2 ^h ), 8.35 -8.26 (m, 1H), 8.05 -7.94 (m , 4H ), 7.76 -7.64 (m , 1H), 7.58 (b r t, J= 6.7 Hz, 1H), 7.50 (t, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.38 -7.27 (m, 4H ), 7.24 (s, 1H), 7.20 -7.10 (m, 7H ), 6.65 (b r d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.62 (b r d, J= 7.9 Hz, 2H ), 5.86 (s, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.41 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.09 (q, J= 7.3 Hz, 2H ), 4.02 -3.93 (m, 2H ), 3.79 (b r d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H ), 3.70 (s, 3H), 2.88 (s, 1H), 2.01 (s, 3H ), 1.22 (t, J= 7.2 Hz, 3H ). E S I-M S : m /z= 886.2 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 6 f

El co m p u e s to 6 d se c o e va p o ró con to lu e n o a n h id ro : C H ³CN (1 :1,6 ml x 2) an tes de su uso . S e ag itó una m e zc la de 6 d (699 mg, 0 ,79 m m ol), 6e (739,81 mg, 1,1 m m ol, C A S N° 103285 -33 -2 ) y ta m ic e s m o lecu la re s de 4Á a c tiva d o s (~5 g) en T H F seco (20 m l) a T A d u ra n te 1 h ba jo N ². S e añ ad ió D M A P (481 ,97 mg, 3 ,94 m m o l) en una po rc ió n y la m ezc la de la reacc ión se ag itó a 40° C (te m p e ra tu ra de l ace ite ) d u ra n te 5 h en N ². La m ezc la de la rea cc ió n se d ilu yó con DC M (15 m l) y se filtró a tra v é s de u n a a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s . El f iltra d o se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo am arillo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H : DC M = de l 0 al 10% ) pa ra p ro p o rc io n a r 6 f (969 m g) co m o un só lido am arillo pá lido . E S I-M S : m /z= 1416.2 [M+H]+.

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 6g

S e añ ad ió D C A (6% en D C M , 10,8 m l) ba jo N ² a u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 6 f (1,1 g, 0 ,78 m m o l) en DCM (22 m l), la so luc ió n ro ja resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m in y luego se in ac tivó con p irid ina . (12 m l). La m ezc la de la reacc ión tra sp a re n te se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo in co lo ro que se p u rif icó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H : DC M = de l 0 al 10% ) pa ra d a r el ^{co m p u e s to} 6g ^{(740 m g) com o un só lido b lan co . 1H N M R (400 M H z, C D 3O D ) 58.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.14 -8.09} (m, 3H ), 7.71 -7.65 (m, 1H), 7.62 -7.56 (m, 2H ), 6.19 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.53 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.84 (b r s, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.32 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.14 (b r d, J= 3.8 Hz, 1H), 3.99 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.83 -3.77 (m, 1H), 3.73 -3.66 (m, 2H ), 3.60 (s, 3H ), 3.54 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.30 -3.23 (m, 2H ), 2.67 (td, J= 6.7 , 13.7 Hz, 1H), 1.17 (dd, J= 2.4 , 6.9 Hz, 6H ). E S I-M S : m /z= 812.2 [M+H]+.

^{P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 6i

^{El c o m p u e s to} 6g ^{(105 mg, 0 ,129 m m o l) se c o e va p o ró con una m ezc la de to lu e n o an h id ro : a ce to n itr ilo (1 :1,} v /v , 3 x 30 m l) y luego se d iso lv ió en T H F an h id ro (12 m l). S e añ ad ie ro n ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á en po lvo (0 ,3 g) y te tra zo l 0 ,45 M en C H ³CN (2 ,3 ml, 1 ,03 m m o l) y la m ezc la h e te ro g é n e a resu ltan te se b u rb u je ó con a rgón d u ra n te 4 m in . D espués de a g ita r es ta m ezc la a T A d u ra n te 10 m in , se p re p a ró un a so luc ión de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra (is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita en C H ³CN (59 m g, 0 ,19 m m ol), se a ñ ad ie ro n 3 ,0 ml de C H ³CN d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . D espués de a g ita r la reacc ión d u ra n te 1,5 ho ras, la m ezc la se filtró y luego se lavó con T H F ^{(15 m l). (C o m p u e s to} 6h ^{. M S: m /z 911 [M H]+). La m ezc la resu ltan te se usó d ire c ta m e n te en e l paso s ig u ie n te . Se} añ ad ió so luc ió n de yo d o 0 ,5 M (en T H F :a g u a :P y 8 :1 :1 , v /v /v ) ha s ta q u e p e rs is te e l co lo r. D e spués de a g ita r la m e zc la de la reacc ión a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m in , la m ezc la se d ilu yó con E tO A c (30 m l) y e l e xce so de yo d o se in ac tivó con Na2S2O3 a cu oso sa tu ra d o (ha s ta la de co lo ra c ió n ). S e sep a ra ron las cap as ; la c a p a o rg á n ica se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (1 x 20 m l) y sa lm u e ra (1 x 20 m l). La ca p a a cu o sa se v o lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 20 m l). Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se eva p o ra ro n ha s ta la se q ue da d , el m a te ria l b ru to resu ltan te se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H en D C M : de l 0 al 15% , v /v ) pa ra ^{g e n e ra r e l co m p u e s to} 6i ^{(75 m g); E S I-M S : m /z 927 [M+H]+.}

^{P aso 8. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9

^{S e ag itó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to} 6i ^{(75 m g, 0 ,08 m m o l) en M e N H 2 (33% en E tO H , 6 m l) a 40° C} d u ra n te 2 h y 30 m in y se c o n ce n tró a p res ión reduc ida .

El só lido b ru to resu ltan te se lavó con DC M (15 m l) y el p re c ip ita d o se filtró y pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (co lum na : S yne rg i 4 g, H yd ro RP, 250 m m x 30 m m x 10 gM , fa s e m óvil: ta m p ó n A : 50 A ce ta to de tr ie tila m o n io m M en A G U A , ta m p ó n B: a ce ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en C H ³CN , g ra d ie n te : 0 -40 % de B ^{d u ra n te 30 m in , ca u d a l: 24 m l/m in ) pa ra p ro p o rc io n a r e l c o m p u e s to} 9 ^{(18 ,2 m g) co m o la sa l de T E A A . La con ve rs ión} fin a l en la sa l de sod io se rea lizó p o r e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re u n a co lu m n a c o m p a c ta d a con un a res ina ^{de in te rca m b io ió n ico de sod io c a tió n ica p a ra d a r el} compuesto 9, sal de sodio ^{(17 ,3 m g). 1H N M R (400 M H z, D2O ):} 5 7.96 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.90 -6.12 (m, 3H ), 4.97 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.41 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.25 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.90-4.01 (m, 1H), 3.85 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.55 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.41 (s, 3H ), 3.31 (d, J= 12.8 H z). 31P N M R (162 M H z, D²O ): 5 -1.46 (s, 1P). E S l-M S s : m /z: 698 [M -1 ]-.

E je m p lo 7

Com uesto *R 14A

Compuesto (*R) 14A, sal de sodio

^{P aso 1. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 7b

^{El co m p u e s to} 1g ^{(80 m g, 0 ,099 m m ol) se co e va p o ró con una m ezc la de to lu e n o an h id ro : a ce ton itr ilo (1:1,} v /v , 3 x 15 m l) y lu eg o se d iso lv ió en T H F an h id ro (10 m l). S e a ñ a d ie ro n ta m ic e s m o le cu la re s d e 4 Á en po lvo (0 ,3 g) y te tra zo l 0 ,45 M en C H ³CN (1,3 m l, 0 ,598 m m ol) y la m ezc la h e te ro g é n e a re su lta n te se b u rbu jeó con a rgón d u ra n te 4 m in . D e spu és d e a g ita r e s ta m ezc la a T A d u ra n te 10 m in , se ex tra jo una so luc ió n d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita en C H ³ CN (48 m g, 0 ,16 m m ol, en 3 ,0 ml de C H ³C N ) se añ a d ió d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra a m b ie n te . D e spu és d e a g ita r la rea cc ió n d u ra n te 1,5 h, la m ezc la se filtró y se lavó con T H F (15 ml). ^{(C o m p u e s to} 7a^{. M S: m /z 901 [M H]+). La m ezc la resu ltan te se usó d ire c ta m e n te en el paso s ig u ie n te .}

S e añ a d ió m uy le n ta m e n te una so lu c ió n de co m p le jo d e su lfu ro d e d im e tilb o ra n o (2,0 M en TH F , B H ³-D M S , 180 |jl, 0 ,35 m m ol) d u ra n te 5 m in a 0° C. D e spu és de a g ita r la rea cc ió n d u ra n te 20 m in a te m p e ra tu ra a m b ie n te , la m ezc la de la reacc ión se filtró ráp id am en te , se d ilu yó con E tO A c (50 ml) y se inac tivó con agua (20 m l). Se se p a ra ro n las cap as ; la ca p a o rg á n ic a se lavó con agua (1 x 20 m l) y sa lm u e ra (1 x 20 m l); la ca p a a cu o sa se vo lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 20 m l). Luego, las ca p a s o rg á n ic a s se co m b in a ro n y e va p o ra ro n ha s ta la se q ue da d . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re gel d e s ílice (M eO H al 0 -15 % en D C M , v /v) ^{pa ra d a r} 7b ^{(48 m g). E S I-M S : m /z 915 [M+H]+.}

^{P aso 2. P re p a ra c ió n del} Compuesto (*R) 14A

^{S e ag itó una so luc ió n de l co m p u e s to} 7b ^{(48 m g) en M e N H 2 (33% en E tO H , 6 m l) a 40° C d u ra n te 2 ho ras y} se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El só lido b ru to re su lta n te se lavó con D C M (15 m l) y el p re c ip ita d o se filtró y pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva d e fa se in ve rsa (co lum na : S yne rg i 4 jm , H yd ro RP, 250 m m x 4 ,6 m m , fa se m óvil: ta m p ó n A: a ce ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en agua ; ta m p ó n B: a ce ta to d e tr ie tila m o n io 50 m M en C H ³ C N , g ra d ien te : ^{0 -40 % de B d u ra n te 30 m in, ca u d a l 24 m l/m in ) pa ra d a r el} compuesto 14 ^{(20 ,2 m g) co m o una sal de T E A A . La} co n ve rs ió n fina l en la sa l de sod io se rea lizó p o r e lu c ió n de un a so luc ió n acu o sa sob re una co lu m n a c o m p a c ta d a con ^{una res ina d e in te rcam b io ió n ico de sod io c a tió n ica pa ra d a r el} compuesto (*R) 14A, sal de sodio ^{(18 ,8 m g). 1H} N M R (400 M H z, D ²O) 6.7.92 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.17 -6.24 (d, J= 20.8 Hz, 1H), 5.95 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.45 (s, 1 H), 5.29 (s, 0.5H ), 5.16 (s, 0.5H ), 4.70 -4.85 (m, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.33 (d, J= 8 Hz, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.05 ­ 4.15 (m, 1 H), 3.96 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 3.64 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 3.44 (s, 1H), 3.30 -3.44 (m, 2H ), 0.3 (br.s , 3H ); 31P N M R (162 M H z, D ²O) ó 95.57 ppm (s, 1 P) 19F N M R (379 M H z, D ² O)s p ico am p lio -196.84 ppm (s, 1F); E S -M S : m /z: 686.8 [M -H ]-:

E je m p lo 8

Compuesto 41

^{S e añ ad ió N aH (60% en ace ite m ine ra l, 4 ,864 g, 121,61 m m ol) a un a so luc ió n de a d e n o s in a} 8a ^{(25 g,} 93 ,549 m m ol) en D M F (800 ml) a -5° C. D e spu és de a g ita r la m ezc la d u ra n te 1,5 h a -5° C, se añ ad ió g o ta a go ta d u ra n te 2 h una so luc ió n de c lo ru ro d e 4 -m e to x ib e n c ilo (15 ,15 g, 112 ,26 m m ol) en D M F (50 m l). U na ve z se hubo co m p le ta d o la ad ic ió n , la reacc ión se ca le n tó a T A y se ag itó d u ra n te 18 h. S e añad ió a g ua (15 ml) a la rea cc ió n y la m ezc la se ag itó a 15° C d u ra n te 10 m in . La m e zc la resu ltan te se co m b in ó con o tra s rea cc io nes y el D M F se e va po ró a v a c ío a lto . La su sp e n s ió n se d ilu yó con M eO H , se filtró y e l f iltra d o se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M : M eO H = 100 :0~ 20 :1 ) pa ra d a r 8 b y 8 c ; la m ezc la se sep a ró p o r H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (C o lum n a : P he no m en ex S yne rg i M ax-R P 250 x 50 mm x 10 pm ; C o nd ic ió n : W a te r-M e C N B de In ic io 2% B Final 36% ; T ie m p o de g ra d ien te : 18 m in ; 100% de B T ie m p o de re ten c ió n : 14 m in , C a ud a l: 100 m l/m in ) pa ra d a r 8 b (75 g) y 8 c (15 ,5 g), am b os com o só lido s b lan cos (66% de ren d im ie n to to ta l).

C o m p u e s to 8 b . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 8.31 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.36 (s, 2H ), 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 6.72 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.03 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.51 (dd, J= 4.4 , 7.2 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.71 -4.46 (m, 2H ), 4.43 -4.30 (m, 2H ), 4.03 (b r d, J= 2.8 Hz, 1H), 3.74-3.61 (m, 4H ), 3.61 -3.49 (m, 1H ); E S I-M S : m /z=388.1 [M+H]+.

C o m p u e s to 8 c : 1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 8.35 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.49 -7.30 (m, 4H ), 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 5.92 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.57 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.51 (dd, J= 4.4 , 7.3 Hz, 1H), 5.64 -5.40 (m, 1H), 5.56 -5.37 (m, 1H), 4.89 -4.73 (m, 1H), 4.72 -4.62 (m , 1H), 4.62 -4.49 (m, 1H), 4.60 -4.48 (m, 1H), 4.15 -3.98 (m, 2H ), 3.75 (s, 3H ), 3.70 - 3.60 (m, 1H), 3.53 (ddd, J= 3.6 , 7.6, 11.8 Hz, 1H); E S I-M S : m /z=388.1 [M+H]+.

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 8d

A un a so luc ió n de l co m p u e s to 8 c (10 g, 25,81 m m o l) en p ir id in a (200 m l) se le añ ad ió g o ta a g o ta c lo ro tr im e tils ila n o (14 ,74 m l, 116 ,162 m m o l) a 0° C. D e spués de a g ita r la m ezc la de la reacc ión d u ra n te 2 h, se en frió a 0° C y se añ ad ió g o ta a g o ta c lo ru ro de be n zo ílo (6 m l) a 0° C d u ra n te 30 m in . La m ezc la de la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te la no che y se in ac tivó c u id a d o s a m e n te con a g u a (30 m l) a 0° C, luego se añ ad ió am o n ía co a cu oso (60 m l) g o ta a g o ta a 0° C. D espués de a g ita r la m ezc la d u ra n te 1,5 h, la reacc ión se d iluyó . con DC M (800 m l). La cap a o rg á n ic a se lavó s u ce s iva m e n te con s a lm u e ra (200 ml x 3), se secó so b re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red u c id a pa ra d a r un res iduo . El res idu o se tr itu ró en E tO A c (100 m l) pa ra p ro p o rc io n a r e l c o m p u e s to 8 d (9,8 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 11.21 (s, 1H), 8.72 (d, J = 13.2 Hz, 2H ), 8.06 -7.89 (m, 2H ), 7.71 - 7.58 (m, 1H), 7.57 -7.46 (m, 2H ), 7.31 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.90 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.05 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.67 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.18 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.91 -4.76 (m , 1H), 4.73 -4.59 (m, 1H), 4.53 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.17 -4.04 (m, 2H ), 3.72 (s, 3H ), 3.66 (td, J= 4.4 , 12.0 Hz, 1H), 3.53 (ddd, J= 3.6 , 6.0, 12.0 Hz, 1H ); E S I-M S : m /z=388.1 [M H]+ P aso 3. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 8e

A u n a su sp e n s ió n ag ita d a de l c o m p u e s to 8 d (7 g, 14 ,24 m m ol), tr ife n ilfo s fin a (5,6 g, 21 ,36 m m ol), TB A I (1 ,05 g, 2 ,85 m m o l) y NaN3 (6 ,67 g, 102 ,54 m m o l) en D M F (90 m l) se le añ ad ió C B r4 (7 ,085 g, 21 ,363 m m o l) en p o rc io n e s a 0° C d a n d o co m o resu ltad o una su sp e n s ió n am arilla . D espués de a g ita r a 35° C, la m ezc la se v e rtió en so luc ió n a cu o sa sa tu ra d a de N aH C O 3 (500 m l) en c o n d ic io n e s de ag itac ión . La m ezc la se e x tra jo con DC M (200 ml x 3). Luego, las ca p a s o rg á n ica s se c o m b in a ro n y se seca ron s u ce s iva m e n te sob re Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión red u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r 8 e (6 ,4 g) co m o un só lido b lanco . E S I-M S : m /z= 517.2 [M+H]+

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 8 f

A u n a so luc ió n de 8 e (6,0 g, 11,61 m m ol, c o e v a p o ra d a con p ir id in a dos v e c e s an tes de su uso) en p ir id ina (100 m l) se le añ ad ió D M TrC l (7 ,87 g, 23 ,23 m m ol). D espués de a g ita r la m ezc la de la reacc ión a 80° C d u ra n te la noche , se d ilu yó con EA (800 m l) y se lavó con N aH C O 3 sa tu ra d o (200 ml x 2) y sa lm u e ra (200 m l x 2). La cap a o rg á n ica se secó so b re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (é te r de p e tró le o /E tO A c ) pa ra d a r 8 f co m o un só lido a m a rillo (6 ,8 g).

1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 11.21 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.58 -8.45 (m, 1H), 8.04 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.74 -7.59 (m, 1H), 7.58 -7.47 (m, 2H ), 7.28 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 7.22 (dd, J= 2.8 , 6.8 Hz, 2H ), 7.15 -7.07 (m, 5H ), 6.98 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.91 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.72 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.60 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.27 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.24 (dd, J= 4.4 , 7.6 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 4.8 , 7.8 Hz, 1H), 4.05 -3.99 (m, 1H), 3.80 -3.58 (m , 10H ), 3.21 (dd, J= 4.8 , 12.8 Hz, 1H), 2.56 (d, J= 4.4 Hz, 1H); E S I-M S : m /z= 819.4 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 8g

A u n a m ezc la de 8 f (6 ,8 g, 8 ,3 m m o l) en T H F (80 m l) se le añ ad ió PPh3 (3 ,27 g, 12 ,46 m m o l) en una po rc ió n ; la m ezc la se ag itó a 40° C d u ra n te 2 h en N ² , seg u ido de la ad ic ió n de ag ua (30 m l), luego se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te o tras 12 h d a n d o co m o resu ltad o u n a so luc ió n in co lo ra . La m ezc la se co m b in ó con otro a u m e n to a esca la . La m ayo r pa rte de los v o lá tile s se e lim in a ro n a p res ión re d u c id a y la c a p a a cu o sa res idua l se rep a rtió e n tre D C M /agua . La c a p a se reco g ió y se e x tra jo con DC M (200 ml x 3). Luego se c o m b in a ro n las ca p a s o rg á n ica s , se seca ron sob re Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p re s ió n re d u c id a p a ra d a r un res iduo .

El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : ^{M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r} 8g ^{(6 ,4 g, ren d im ie n to to ta l de l 89% ) co m o un só lido b lan co . 1H N M R (400 M Hz,} DM SO -d6) 5 ppm 8.74 -8.65 (m, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.13-8.01 (m, 2H ), 7.74 -7.63 (m, 1H), 7.62-7.51 (m, 2H ), 7.31 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 7.24 (dd, J= 3.2 , 6.4 Hz, 2H ), 7.19 -7.07 (m, 5H ), 6.97 (dd, J= 8.8 , 18.0 Hz, 4H ), 6.73 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.62 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 6.25 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.16 (dd, J= 4.4 , 7.6 Hz, 1H), 4.30 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 4.16 -4.04 (m, 2H ), 4.01 -3.95 (m , 1H), 3.84 -3.59 (m, 9H ), 2.72 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 2.67 -2.58 (m, 1H), 2.67 -2.58 (m, 1H ); E S I-M S : m /z= 794.4 [M+H]+.

^{P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 8h

S e añ ad ió rá p id a m e n te u n a so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (5 ,57 g, 23 ,46 m m o l) en DC M seco (5 ^{m l) a una m ezc la de} 8g ^{(6,2 g, 7 ,82 m m ol), 4 -n itro fe n o l (3 ,26 g, 23 ,46 m m ol), Et3N (4 ,75 g, 46 ,92 m m o l) en DCM} seco (20 m l) en N ² a -78° C, luego se c a le n tó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1,5 ho ras. La m ezc la se tra n s fir ió a un e m b u d o de d e ca n ta c ió n , se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (200 m l x 4). La ca p a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ian te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : E tO A c al 0 -100 % en é te r de ^{p e tró le o ) pa ra d a r} 8h ^{(6,2 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 511.32 (b r s, 1H), 9.29 (b r t,} J= 5.6 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.33 -8.24 (m , 2H ), 8.13 (s, 1H), 8.07 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.72 -7.63 (m, 1H), 7.60 -7.46 (m, 4H ), 7.31 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 7.27 -7.19 (m, 2H ), 7.18 -7.06 (m, 5H ), 6.95 (d, J= 8.0 Hz, 4H ), 6.73 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 6.60 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 6.30 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.11 (dd, J= 4.8 , 7.8 Hz, 1H), 4.39 -4.22 (m, 2H ), 4.10 -3.93 (m, 2H ), 3.83 -3.59 (m, 10H), 2.84 (d, J= 4.8 Hz, 1H); E S I-M S : m /z= 994.2 [M+H]+.

^{P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 8j

^{S e ag itó un a su sp e n s ió n de} 39h ^{(1,3 g, 1,92 m m ol),} 8h ^{(2 ,48 g, 2 ,5 m m o l) y ta m ic e s m o le cu la re s (1,5 g) en} T H F seco (20 m l) ba jo N ² d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te , seg u ido de la ad ic ió n de D M A P (0 ,94 g, 7,7 m m ol). D espués de a g ita r d u ra n te la noche a 45° C ba jo N ² , la m ezc la de la reacc ión se filtró a tra vé s de una a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y e l f iltra d o se co n ce n tró a p res ión red u c id a pa ra d a r un res idu o am a rillo ; se d iso lv ió en DC M (300 m l) y se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (100 ml x 3). La ca p a o rg á n ic a se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te ^{c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -70 % en PE) p a ra d a r} 8j (2 ,7 g) co m o un só lido b lanco . E S I-M S : m /z= 766.2 [M+H]+.

^{P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 8k

^{A u n a m ezc la de} 8j ^{(2,7 g, 1,76 m m o l) en DC M (80 m l) se le añ ad ió a g u a (318 m g, 17 ,64 m m o l) y D C A (335} m g, 4 ,06 m m o l) da nd o co m o resu lta d o u n a so luc ió n am arilla . D e spués de a g ita r la m ezc la a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 1,5 ho ras, se le añ ad ió M eO H (2 ml), se g u id o de la ad ic ió n de p ir id in a (558,1 m g), lo q u e d io co m o resu ltad o u n a so luc ió n inco lo ra , que se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te 15 m in . El s o lve n te se co n ce n tró a p res ión re d u c id a y el res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H ^{al 0 -2 % en D C M ) p a ra d a r e l c o m p u e s to} 8k ^{(1 ,28 g) co m o un só lid o b lan co . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 511.26} (b r d, J = 10.8 Hz, 2H ), 9.02 -8.50 (m, 5H ), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 4H ), 7.79 -7.62 (m, 2H ), 7.61 -7.48 (m, 4H ), 7.36 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 6.50 (dd, J= 2.4 , 16.8 Hz, 1H), 6.09 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 5.99 -5.83 (m, 1H), 5.79 (b r d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.53 -5.27 (m, 2H ), 5.11 -4.93 (m, 1H), 4.79 -4.53 (m, 2H ), 4.42 -4.29 (m, 1H), 4.27 -4.03 (m, 2H ), 3.89 ­ 3.71 (m, 4H ), 3.68 -3.56 (m, 1H), 3.55 -3.38 (m, 2H ); 19F N M R (376 M H z, D M S O -ds)= -202.67 (s, 1F); E S I-M S : m /z= 926.3 [M H]+

^{P aso 9: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 8l

El T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re s o d io /b e n z o fe n o n a y el C H ³CN fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso.

A u n a so luc ió n de 8k (200 mg, 0,21 m m ol, seca do p o r lio filiza c ió n ) en T H F (6 m l), se le añ ad ie ro n ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á (800 m g, po lvo ) y se ag itó una so luc ió n de 1 H -te tra zo l (4 ,8 ml, 0 ,45 M, 945 m g de te tra zo l (seca do po r lio filiza c ió n ) en 30 ml de C H ³CN seco , se g u id o de la ad ic ió n de M S 4 Á (1 g, po lvo ), d u ra n te 1 hora en N ² an tes de l uso ). D espués de p u rg a r e l m a traz con N ². S e añ ad ió g o ta a g o ta u n a so luc ión de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (117 m g, 0 ,39 m m ol) en T H F (0 ,8 m l) d u ra n te 25 m in a un v ia l con una je rin g u illa ; d e s p u é s de a g ita r la m ezc la de la reacc ión a T A d u ra n te 1,5 h, una so luc ió n de T B H P (0 ,34 m l, 1,73 m m ol, 5 M), d e s p u é s de a g ita r la m e zc la d u ra n te 30 m in ad ic io na le s , la m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a y el res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : 0 -5 % de ^{D C M en M eO H ) pa ra d a r} 8l ^{co m o un só lido b lan co (153 m g, 0 ,14 m m ol). 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 9.85 (b r s,} 1H), 9.79 -9.72 (m, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.87 -8.84 (m, 1H), 8.64 -8.59 (m, 1H), 8.20 -8.14 (m, 1H), 8.10 -8.04 (m, 4H ), 8.02 -7.95 (m, 3H ), 7.65 -7.56 (m, 3H ), 7.55 -7.45 (m, 6H ), 6.05 -5.94 (m, 1H), 4.81-4.71 (m, 2H ), 4.66 (b r d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.52 -4.47 (m, 1H), 4.36-4.21 (m, 4H ), 4.01 (b r dd, J= 4.4 , 8.8 Hz, 1H), 3.92 -3.80 (m, 6H ), 2.67 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 2.43 -2.28 (m, 2H ); 19F N M R (376 M H z, CDCla) 5 -196.54 --197.10 (m , 1F); 31P N M R (162 M H z, CDCla) 5 -2.49 (s, 1P), -4.38 (s, 1 P); E S I-M S : m /z= 780.2 [M /2 H ]+

^{P aso 10. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 8m

^{S e ag itó una so luc ió n de} 8l ^{(153 m g, 0 ,14 m m o l) en M e N H 2/E tO H (5 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2} ho ras. El v o lá til se e va p o ró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r un só lido b lan co d isu e lto en a g u a (20 m l); la c a p a a cu o sa se ^{lavó con DC M (10 ml x 3). La c a p a a cu o sa se lio filizó pa ra d a r 114 mg de} 8m ^{co m o un só lido b lanco .}

^{P aso 11. P rep a ra c ión de l} Compuesto 41, sal de amonio

S e en frió a 0° C u n a so luc ió n de an iso l (158 m g, 1,46 m m o l) en T F A (1 ,57 ml, 20 ,47 m m o l) y se añ ad ió a 8m ^{(114 m g). D e spués de a g ita r la m ezc la de la reacc ión a 0° C d u ra n te 2 ,5 h, se e lim in ó e l T F A s o p la n d o con un} flu jo de ga s n itró g e n o a 0° C. El res to de la m ezc la de la reacc ión se in ac tivó con M e N H ² (so luc ión al 33 % en E tO H , 1,6 m l) a 0° C y se e va p o ró ha s ta la seq ue da d a p res ión reduc ida . El res iduo se rep a rtió e n tre D C M /a gu a (15 m l x 3 /15 m l). La c a p a a cu o sa se lio filizó pa ra d a r un res idu o b lan co pu rifica do a d ic io n a lm e n te p o r H P LC p re p a ra tiv a de fa s e in ve rsa (co lum na : X b rid g e 150 x 30 mm x 10 qm , C o n d ic ió n : A : ag ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M )- A C N : M eC N , B de ^{in ic io 5% , B fin a l: 35% , cau da l (m l/m in ) 25) pa ra p ro p o rc io n a r la} sal de amonio del compuesto 41 ^{co m o un só lido} b lan co (45 m g). 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 10.63 (b r s, 1H), 8.44 -8.37 (m, 1H), 8.25 (b r s, 1H), 8.04 (b r s, 2H ), 7.38 -6.89 (m, 2H ), 6.41 (b r d, J = 19.6 Hz, 1H), 6.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.01 -5.83 (m, 1H), 5.60 (b r s, 1H), 5.31 (b r s, 1H), 4.45 (b r d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.28 (b r s, 2H ), 4.12 -4.04 (m, 1H), 3.99 (b r d, J = 11.2 Hz, 1H); 19F N M R (376 M Hz, DM SO -da) 5 -198.36 --200.33 (m, 1F); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) 5 ppm -3.40 (b r s, 1P), E S I-M S : m /z=659.9 [M H ]+

^{P aso 12; P rep a ra c ión de l} Compuesto 41, sal de sodio

^{S e añ ad ió D ow ex 50 W x8 , 200 -400 (9 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s (pa ra 45 mg de} sal de amonio del compuesto 41^{) y se lavó con a g u a d e s io n iz a d a (50 m l). Luego a la re s in a se le añ ad ió H 2S O 4 al 15%} en ag ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (50 m l). La res ina se tra n s fir ió a u n a c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en a g u a d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V [V o lu m e n de co lu m n a ]), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta que se v o lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip ita d o s , se añ ad ió u n a so luc ió n de N aO H al 15% en a g u a d e s io n iz a d a (20 m l), la m ezc la se ag itó sua ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en ag ua (p o r lo ^{m enos 4 C V ), y luego con A G U A d e s io n iz a d a hasta q u e se v o lv ió neu tra , se d iso lv ió la} sal de amonio del compuesto 41 ^{(45 m g) en u n a ca n tid a d m ín im a de ag ua d e s io n iza d a , se añ ad ió ha s ta la pa rte s u p e rio r de la} co lu m n a y se e luyó con a g u a d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s d e se a d a s se ag rup a ron y lio filiza ro n pa ra d a r el compuesto 41, sal de sodio ^{(31 ,4 m g) co m o un só lid o b lan co . 1H N M R (D 2O, 400 M H z) 5 8.06 (s, 1H), 8.00 (s, 1H),} 7.62 -7.87 (m, 1H), 7.28 (b r s, 1H), 6.24 (b r d, J = 12.8 Hz, 1H), 6.03 (b r d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.49 -5.74 (m, 1H), 5.22-5.31 (m, 1H), 5.11 (b r d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.53 (b r s, 1H), 4.44 (b r d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.39 (brs, 1H), 4.34 (b r d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.98 (b r d, J= 8.8 Hz, 1H), 3.71 -3.79 (m, 1H), 3.60 -3.70 (m, 1H ); 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 -201.23 (b r s, 1 F), 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 -2.76 (b r s, 1P); E S I-M S : m /z=660.1 [M H]+

Ejemplo 9

Compuesto 8

Compuesto 8, sal de sodio

Paso 1: Preparación del Compuesto 9b

^{S e ag itó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to} 9a ^{(8 ,3 g, 27 ,27 m m ol, C A S N° 2086765 -82 -2 ) en p ir id in a seca (160} m l) a 0° C a la q u e se le añ ad ió g o ta a g o ta c lo ro tr im e tils ila n o (14 ,8 g, 136 ,36 m m ol), a 0° C d u ra n te 1,5 h. S e añad ió g o ta a g o ta c lo ru ro de be n zo ílo (19 ,2 g, 136 ,36 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 3 h. La so luc ió n de la reacc ión , que se en frió en un ba ño de h ie lo , se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de ag ua (50 m l) y se ag itó d u ra n te la no che a te m p e ra tu ra am b ie n te . S e añ ad ió a m o n ía co a cu oso (70 ml de un a so luc ió n al 25% ) y se c o n tin u ó ag ita n d o d u ra n te una ho ra m ás. La so luc ió n de la reacc ión se e x tra jo con E tO Ac, las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se la va ron con sa lm ue ra , se seca ron con Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . La pu rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -90% ^{en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r el c o m p u e s to} 9b ^{co m o un só lido am a rillo (9,1 g, ren d im ien to : 80% ). 1H N M R (400 M Hz,} D M S O -ds) 5 ppm 11.11 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.07 (d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.69 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.66-7.61 (m, 1H), 7.57 ­ 7.51 (m, 2H ), 6.68 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.13 (td, J= 6.3 , 12.0 Hz, 1H), 4.92 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 4.80 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 (dd, J= 4.4 , 7.2 Hz, 1H), 3.59 -3.46 (m, 2H ), 2.32 -2.20 (m, 2H ), 2.16 -2.03 (m, 1H), 1.49 (s, 3H ), 1.23 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 409.1 [M+H]+.

^{P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9c

S e a ñ ad ie ro n D M A P (448 m g, 3 ,76 m m o l) y c lo ru ro de to s ilo (2 ,80 g, 14 ,69 m m o l) a un a so luc ió n de l ^{co m p u e s to} 9b ^{(3,0 g, 7 ,35 m m o l) y Et3 N (2 ,33 g, 22 ,04 m m o l) en DCM (60 m l) ba jo e n fria m ie n to con h ie lo . La} m e zc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 4 h. La m ezc la se in ac tivó con ag ua y se e x tra jo con DC M . La ca p a o rg á n ica se lavó con sa lm ue ra , se secó con Na2SO4 a n h id ro y se e va p o ró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r el c o m p u e s to to s ila d o . El p ro d u c to b ru to se d iso lv ió en D M F (30 m l), se añ ad ió a z id a sód ica (2 ,34 g, 36 ,00 m m ol) y la m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó a 30° C d u ra n te la noche . La so luc ió n de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te , se d ilu yó con Na2CO3 a cu oso sa tu ra do y se e x tra jo con E tO A c. La c a p a o rg á n ic a se separó , se lavó con sa lm ue ra , se secó con Na2SO4 an h id ro y se eva p o ró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -40% en é te r de pe tró le o ) p a ra d a r el ^{co m p u e s to} 9c ^{co m o un só lido a m a rillo (2,1 g, ren d im ien to : 62% ). 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.13 (s, 1H),} 8.60 (s, 1H), 8.10 -8.03 (m , 2H ), 7.69 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.57-7.51 (m , 2H ), 6.69 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 5.16 (td, J= 6.3 , 12.0 Hz, 1H), 4.99 -4.89 (m, 1H), 4.55 (dd, J= 5.1 , 7.2 Hz, 1H), 3.63 -3.46 (m, 2H ), 2.41 -2.27 (m, 2H), 2.20 -2.07 (m, 1H), 1.50 (s, 3H ), 1.24 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 434.1 [M+H]+

^{P aso 3. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9d

^{S e añ ad ió T F A (40 m l) a una so luc ió n de l c o m p u e s to} 9c ^{(5,4 g, 12 ,46 m m o l) en DC M (100 m l). La m ezc la} de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te la noche . El res iduo o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p re s ió n re d u c id a se v o lv ió a d is o lv e r en M eO H (20 m l) seg u ido de la ad ic ió n de K²C O ³ a cu o so sa tu ra d o (40 m l). La m ezc la resu ltan te se ag itó d u ra n te 20 m in, d e sp u é s de lo cua l se e x tra jo con D C M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se lavaron con sa lm ue ra , se seca ron con Na2SO4 an h id ro y se eva p o ra ro n a p res ión re d u c id a pa ra d a r e l co m p u e s to 9d ^{que se usó ta l cua l en e l pa so s ig u ie n te . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.08 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.07 (br} d, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.67-7.61 (m, 2H ), 7.57-7.51 (m, 2H ), 6.66 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.10-5.01 (m, 1H), 4.97 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.27 (td, J = 6.1 , 8.1 Hz, 1H), 3.84 -3.80 (m, 1H), 3.60 -3.48 (m , 2H ), 2.34 -2.25 (m, 1H), 2.23 -2.12 (m, 1H), 1.67 -1.55 (m, 1H); E S I-M S : m /z 394.0 [M+H]+.

^{P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9e

^{El co m p u e s to} 9d ^{a n te r io r se d iso lv ió en DCM (90 m l), se g u id o de la ad ic ió n de im idazo l (2 ,42 g, 35 ,52} m m ol) y T B S C l (2 ,68 g, 17 ,76 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te la noche, d e sp u é s de lo cua l se ve rtió en a g u a y se e x tra jo con DC M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se lavaron con ^{sa lm ue ra , se seca ron con Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión re d u c id a pa ra d a r} 9e ^{y su} re g io isó m e ro 3'. La se p a ra c ió n se rea lizó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase es ta c io n a ria : P h e n o m e n e x S yne rg i, 10 pm M ax-R P , 250 x 50 m m ; fa se m óvil: A G U A (A )-M eC N (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ) p a ra d a r ^{el co m p u e s to} 9e ^{(2 ,3 g, ren d im ien to : 50 % a p a rtir de} 9c^{) co m o p r im e r isó m ero e lu id o . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6)} 5 ppm 11.05 (brs, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.07 (d, J= 7.8 Hz, 2H ), 7.60 -7.68 (m, 2H ), 7.47 -7.59 (m , 2H ), 6.68 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.10 -5.23 (m, 1H), 4.63 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.37 (dd, J= 8.0 , 5.8 Hz, 1H), 3.74 -3.84 (m, 1H), 3.48 -3.62 (m, 2H ), 2.10 -2.30 (m, 2H ), 1.66 -1.85 (m, 1H), 0.64 (s, 9H ), -0.16 (s, 3H ), -0.37 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 508.1 [M+H]+.

^{P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9f

S e a ñ a d ie ro n D M TrC l (3 ,87 g, 11 ,43 m m ol), A g N O 3 (4 ,85 g, 28 ,56 m m o l) y 2 ,4 ,6 -co lid in a (3 ,46 g, 28 ,56 ^{m m o l) a u n a so luc ió n de l c o m p u e s to} 9e ^{(2,9 g, 5,71 m m o l) en DC M (50 m l), la m ezc la resu ltan te se ag itó a 35° C} d u ra n te la noche . La so luc ión de la reacc ión se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : E tO A c al 0 -20 % en é te r de pe tró le o ), se g u id o de p u rifica c ió n m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria . P h e n o m e n e x S yne rg i M ax-R P , 10 pm , ^{250 x 50 m m , fa se m óvil: T F A a cu o so al 0 ,1 % (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r el c o m p u e s to} 9f ^{(3 ,6 g,} ren d im ien to , 78% ).

1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.04 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.08 (d, J= 7.4 Hz, 2H ), 7.66 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.61 -7.65 (m, 1H), 7.55 (q, J= 7.3 Hz, 4H ), 7.40 (t, J= 8.6 Hz, 4H ), 7.27 -7.35 (m, 2H ), 7.18 -7.26 (m, 1H), 6.85 ­ 6.96 (m, 4H ), 6.68 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.50 (q, J=9.1 Hz, 1H), 4.42 (dd, J= 9.1 , 4.1 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H ), 3.73 (s, 3H ), 3.64 (b r d, J= 3.9 Hz, 1H), 3.27 -3.37 (m , 1H), 3.20 (dd, J = 12.3, 5.5 Hz, 1H), 2.26 -2.37 (m, 1H), 1.71 -1.84 (m, 1H), 1.59-1.71 (m, 1H), 0.60 -0.78 (m, 9H ), -0.27 --0.18 (m, 3H ), -0.59 --0.51 (m, 3H );

E S I-M S : m /z 810.1 [M+H]+.

^{P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9g

^{S e ag itó un a so luc ió n de l c o m p u e s to} 9f ^{(2,3 g, 2 ,84 m m o l) en E tO A c (80 m l) en H 2 (50 ps i) a 35° C d u ran te} la no che en p re se n c ia de P d/C (10% sob re ca rb on o , 2 ,0 g). El c a ta liz a d o r se e lim in ó p o r f iltra c ió n sob re t ie rra de d ia to m e a s y la to r ta de l f iltro se lavó con E tO A c. El f iltra d o se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r el co m p u e s to a m in a que se usó in m e d ia ta m e n te co m o ta l en el paso s ig u ie n te . El p ro d u c to b ru to se d iso lv ió en DC M (90 ml), se g u id o de la ad ic ió n de 4 -n itro fe n o l (2,81 g, 20,21 m m ol), Et3N (1 ,23 g, 12 ,12 m m o l) y ta m ic e s m o lecu la re s a c tiva do s . La m ezc la resu ltan te se en frió a -78° C ba jo N ² d e s p u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta c lo ro su lfa to de 4-n itro fe n ilo (2 ,88 g, 12 ,12 m m o l) en DC M (10 m l), la so luc ió n de la reacc ión se de jó c a le n ta r a te m p e ra tu ra am b ie n te y se ag itó d u ra n te la noche . Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r filtra c ió n . El f iltra d o se lavó co n NaHCO 3 a cu o so sa tu ra do , se secó con Na2SO4 y se co n ce n tró . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -20 % en é te r de p e tró le o ) p a ra d a r e l c o m p u e s to 9g (1 ,4 g, ren d im ien to : 80% (pu reza LC U V : 76% )).

E S I-M S : m /z 986.6 [M+H]+.

^{P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9h

S e ca rg ó un m a traz de reacc ión con D M A P (0 ,55 g, 4 ,47 m m ol), T H F seco (6 m l) y ta m ice s m o le cu la re s de 3Á a c tiva do s . La m ezc la resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te ba jo a tm ó s fe ra ine rte d u ra n te 2 h. S im u ltá n e a m e n te , se seca ron en ta m ice s m o lecu la re s de 3Á ac tiva d o s (ap rox. 2 h) u n a so luc ió n de 5 '-O -(4 ,4 '-D im e to x itr it il) -N 2 -is o b u tir il-3 '-O -m e til-D -g u a n o s in a [103285 -33 -2 ], (0 ,33 g, 0 ,46 m m ol) y u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 9g ^{(1 ,16 g, 0 ,89 m m ol), c a d a uno en T H F seco (2 x 6 m l)s. A m b a s so lu c io n e s (5 '-O -(4 ,4 '-D im e to x itr it il) -N 2 -iso b u tir il-2 '-O -m e tilg u a n o s in a y e l c o m p u e s to} 9g ^{re sp e c tiva m e n te ) se tra n s fir ie ro n su ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión . La} m ezc la de la reacc ión se ag itó a 50° C d u ra n te 18 h, de sp u é s de lo cua l se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te y se d iluyó con DC M . Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n m in u c io sa m e n te con D C M . El filtrad o se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o y sa lm ue ra , se secó con M gSO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -10% en ^{D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to} 9h ^{(1 ,17 g, ren d im ien to : 86% ). E S I-M S : m /z 1515.9 [M+H]+.}

^{P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9i

^{S e tra tó una so luc ió n de l c o m p u e s to} 9h ^{(1 ,13 g, 0 ,75 m m ol) en DC M (20 m l) con D C A (250 gl, 2 ,98 m m ol)} en p re se n c ia de ag ua (67 gl, 3 ,73 m m o l) d u ra n te 2 ,5 h. La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (360 gl, 4 ,47 m m ol). El res iduo de la so luc ió n resu lta n te se llevó co m o ta l a u n a c o lu m n a de s ílice pa ra su pu rifica c ió n (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 9i ^{co m o un só lid o b lan co (595} m g, ren d im ien to : 87% ).1

1H N M R (400 M H z, C L O R O F O R M O -d ) 5 ppm 12.01 (b r s, 1H), 9.70 (b r s, 1H), 8.71 (b r s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.02 -8.07 (m, 2H ), 7.87 (s, 1H), 7.57 -7.63 (m, 1H), 7.49 -7.57 (m, 2H ), 7.13 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.00 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.12 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.49 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 4.74 -4.83 (m , 2H ), 4.39 (b r t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.12 -4.27 (m, 1H), 4.04 ­ 4.10 (m, 1H), 3.97 -4.04 (m, 1H), 3.74 -3.82 (m, 1H), 3.57 (s, 3H ), 3.37 -3.46 (m, 1H), 3.17 -3.26 (m , 1H), 2.65 (spt, J= 7.0 Hz, 1H), 2.45 -2.54 (m , 1H), 2.39 -2.49 (m, 1H), 1.96 -2.03 (m, 1H), 1.17 (d, J= 6.6 Hz, 3H ), 1.18 (d, J= 6.6 Hz, 3H ), 0.75 (s, 9H ), -0.23 (s, 3H ), -0.44 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 911.6 [M+H]+.

^{P aso 9: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 9j

^{S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to} 9i ^{(530 m g, 0 ,58 m m o l) en T H F /M e C N seco (1 :1, 108 m l, seca do en} ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á ac tiva do s an tes de su uso ) con ta m ice s m o lecu la re s de 3Á ac tiva d o s en una a tm ó s fe ra in e rte (ap rox. 2 ho ras de ag itac ión ). S e añ ad ió 1H -te tra zo l (5 ,0 m l de M eC N al 3-4% , 1 ,73 m m ol, seca do en ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva do s an tes de su uso) y la m ezc la se ag itó d u ra n te 1 h a te m p e ra tu ra a m b ie n te . Luego, se añ ad ió de una v e z 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (180 gl, 0 ,58 m m o l) y se co n tin u ó ag itan do d u ra n te 18 h. F ina lm en te , se a ñ a d ie ro n do s p o rc io n e s ig ua les de tB u O O H (2 x 120 gl de u n a so luc ió n 5 ,5 M en d e ca n o , 2 x 0 ,63 m m o l) con un in te rva lo de t ie m p o de 30 m in , de sp u é s de lo cua l la m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 2 h m ás. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r filtra c ió n y se en ju a g a ro n con D C M . El f iltra d o se lavó con una m ezc la d e Na2S2Ü3 acu oso sa tu ra do y N aHCO 3 acu oso sa tu ra do y sa lm ue ra , se secó con M gSO4, se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro du c to b ru to se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice ^{(g ra d ie n te d e e luc ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to} 9j ^{(130 m g, ren d im ien to : 21 % ). 1H N M R (400} M H z, C L O R O F O R M O -d ) ó ppm -0.04 (b r s, 3H ) 0.11 (s, 3H ) 0.85 (s, 9H ) 0.93 (br d, J= 6.9 Hz, 3H ) 1.10 (d, J= 6.9 Hz, 3H ) 2.42 -2.52 (m, 1H) 2.52 -2.69 (m, 2H ) 2.89 (td, J= 5.9 , 2.8 Hz, 2H ) 2.93 (br d, J = 5.7 Hz, 1H) 3.37 -3.50 (m, 1H) 3.56 -3.67 (m , 4H ) 4.35 (d, J= 2.8 Hz, 1H) 4.37 -4.48 (m , 4H ) 4.53 (dt, J= 5.3 , 3.7 Hz, 1H) 4.80 (br s, 1H) 4.99 (ddd, J = 11.0, 5.3 , 3.7 Hz, 1H) 5.27 -5.32 (m, 1H) 5.95 -6.02 (m , 2H ) 7.03 (d, J = 3.7 Hz, 1H) 7.12 (d, J = 3.7 Hz, 1H) 7.52 -7.58 (m, 2H ) 7.58 -7.65 (m , 1H) 7.59 -7.67 (m, 1H) 8.04 (s, 1H) 8.12 (d, J= 7.3 Hz, 2H ) 8.93 (b r s, 1H) 9.10 (b r s, 1H) 10.66 (br s, 1H) 12.10 (br s, 1H), 31P N M R (162 M H z, C L O R O F O R M O -d ) ó ppm -3.52 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 1026.6 [M+H]+.

^{P aso 10. P rep a ra c ión del} Compuesto 8, sal de sodio

^{S e a g itó el co m p u e s to} 9j ^{(118 m g, 0,11 m m o l) en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (5,9 m l) a} 40° C has ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 3 h), d e sp u é s de lo cua l la so luc ió n de la rea cc ió n se en frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El res iduo se d iso lv ió en p ir id in a (6 m l), seg u ido de la a d ic ió n de Et3N (460 pl, 3,31 m m o l) y tr ih id ro flu o ru ro d e tr ie tila m in a (280 pl, 1 ,66 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 45° C d u ra n te 18 h. S e añ ad ió iso p ro p o x itr im e tils ila n o (1 ,17 m l, 6 ,62 m m ol) y se co n tin u ó ag ita n d o a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 d ías . El res iduo o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p re s ió n red uc ida se tr itu ró en ace to n itr ilo anh id ro , el p re c ip itado ob te n id o se pu rificó a d ic io n a lm e n te m e d ia n te H P LC de fase in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : RP x B r id g e C 18 O B D , 10 pm , 150 x 50 m m , fa se m óvil: b ica rb o n a to de a m o n íaco acu oso al ^{0 ,25% ) (A) - M eO H (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r el} compuesto 8^{. La co n ve rs ió n fina l en la sal de sod io se} rea lizó p o r e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa sob re un a c o lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io ió n ico de ^{sod io ca tió n ico qu e p ro po rc ion ó el} compuesto 8, sal de sodio ^{co m o un só lido e sp o n jo so b lan co (32 mg,} ren d im ien to : 41% ). 1H N M R (400 M H z, DM SO -da) ó ppm 10.31 (b r s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.76 (b r s, 1H), 7.21 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 6.74 (d, J=3.1 Hz, 1H), 6.48 -6.60 (m, 5H ), 6.02 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.92 (dd, J= 8.4 , 4.3 Hz, 1H), 4.80 -4.93 (m, 1H), 4.63 (br s, 1 H), 4.34 -4.43 (m, 1 H), 4.30 (d, J= 3.8 Hz, 2H ), 4.18 (dd, J= 12.2 , 3.6 Hz, 1 H), 4.08 (dd, J = 12.5 , 2.8 Hz, 1H), 3.50 (s, 3H ), 3.16 (b r d, J=6.1 Hz, 2H ), 2.25 -2.37 (m, 2H ), 1.45 -1.57 (m, 1H); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) ó ppm 1.42 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 685.3 [M+H]+.

E je m p lo 10

Compuesto 48

^{A un a so luc ió n de l co m p u e s to} 10a ^{(0 ,8 g, 2 ,15 m m ol) en D M F (6 m l) se le añ ad ió im idazo l (439 ,98 mg, 6 ,46} m m ol) y T B S C l (616 ,94 mg, 4 ,09 m m ol). D e spu és de a g ita r a T A d u ra n te 1,5 h, la m ezc la se m ezc ló con o tro lo te y se d ilu yó con E A (800 m l). L a fa s e o rg á n ic a se lavó s u ce s iva m e n te con N a H C O ³ acu oso sa tu ra d o (200 ml x 2), sa lm u e ra (200 ml x 2), se secó sob re N a ² S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . E l res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l d e s ílice (e lu id a con E A al ^{0 -70 % en PE) pa ra d a r el co m p u e s to} 10b ^{(5 ,5 g) com o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) ó 11.44 (br} s, 1 H), 8.66 (b r s, 1H), 8.17 -7.92 (m, 2H ), 7.85 (b r s, 1H), 7.69 -7.59 (m, 1H), 7.57 -7.33 (m , 2H ), 5.44 -5.09 (m, 2H ), 5.02 (b r d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.30 (brs, 1 H), 4.01 (b r d, J= 4.0 Hz, 1 H), 3.87 (brd , J = 3.6 Hz, 1 H), 3.80-3.61 (m, 2H ), 0.84 (s, 9H ), 0.01 (d, J= 4.4 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z= 486.2 [M+H]+.

^{P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 10c1 ^y 10c2

^{El co m p u e s to} 10b ^{se co e va p o ró con p ir id in a (10 ml) do s ve ce s an tes de su uso . A un a so luc ió n del co m p u e s to} 10b ^{(1 ,7 g, 0 ,88 m m ol) en p ir id in a (15 ml) se le añ ad ió D M T rC l (41 ,78 g, 5 ,25 m m o l). D e spu és de a g ita r a} te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h, la m ezc la se co m b in ó con o tro lo te y se d ilu yó con E tO A c (500 m l). L a cap a o rg á n ica se lavó su ce s iva m e n te con N aHCO 3 acu oso sa tu ra d o (150 ml x 2), sa lm u e ra (150 ml x 2), se secó sob re Na² S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (e luye ndo con E tO A c al 0 -70% en PE) pa ra d a r un a m ezc la ^de 10c1 ^y 10c2 ^{(3,9 g). E S I-M S : m /z= 788.4 [M+H]+.}

Paso 3: Preparación del Compuesto 10d1 y 10d2

^{A u n a so luc ió n de} 10c1 ^y 10c2 ^{(2 ,5 g, 3 ,17 m m o l) en D M F (25 m l) se añ ad ió N aH (60% en ace ite m inera l,} 482 ,3 m g, 12 ,05 m m o l) a 0° C. La m ezc la se ag itó d u ra n te 1 h a 0° C y se añ ad ió g o ta a g o ta d u ra n te 10 m in una so luc ió n de c lo ru ro de 4 -m e to x ib e n c ilo (745,31 m g, 4 ,76 m m o l) en D M F (5 m l). D espués de a g ita r a T A d u ra n te 2 h, la m ezc la se in ac tivó con A G U A (5 m l) g o ta a g o ta y se d ilu yó con EA (500 m l). La c a p a o rg á n ic a se lavó s u ce s iva m e n te con N aH C Ü 3 a cu oso sa tu ra d o (150 ml x 2), s a lm u e ra (150 ml x 2), se secó so b re Na2SÜ4 anh id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en ^{co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (e lu id a con EA al 0 -40 % en PE) pa ra d a r un a m ezc la de} 10d1 ^y 10d2 ^{(1,9 g).} E S I-M S : m /z= 908.4 [M+H]+.

^{P aso 3: P rep a ra c ión de los C o m p u e s to s} 10e1 ^y 10e2

^{Se tra tó u n a so luc ió n de} 10e1 ^y 10e2 ^{(1 ,9 g, 2 ,09 m m o l) en DC M (30 m l) con a g u a (0 ,38 m l, 20 ,92 m m o l) y} D C A (0 ,69 m l, 8 ,37 m m ol). La so luc ió n a m a rilla resu ltan te se ag itó a T A d u ra n te 2 h. Luego se añ ad ió a M eO H (0 ,15 m l), se g u id o de la ad ic ió n de p ir id in a (662 m g), da n d o co m o resu lta d o una so luc ió n inco lo ra , q u e se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te 15 m in . La m e zc la se e va p o ró a p re s ió n red uc ida p a ra d a r un res idu o p u rif ica d o po r ^{c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en co lu m n a sob re ge l de s ílice pa ra d a r u n a m ezc la de los co m p u e s to s} 10e1 ^y 10e2 ^{(1 ,05} g) co m o un só lido am arillo . E S I-M S : m /z=606.1 [M+H]+.

^{P aso 4: P rep a ra c ión de los C o m p u e s to s} 10f1 ^y 10f2

^{S e tra tó una m ezc la de los co m p u e s to s} 10e1 ^y 10e2 ^{(1 ,2 g, 1,98 m m o l) en T H F (12 m l) con T B A F (3 m l, 1} M ) en u n a po rc ión . La m ezc la se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 3 ho ras y se in ac tivó con N aH C O 3 acuoso sa tu ra d o (150 m l). La ca p a o rg á n ica se secó (Na2SO4 an h id ro ), se filtró y se e va p o ró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r un res idu o , que se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 5% en D C M ) pa ra ^{d a r u n a m e zc la de los co m p u e s to s} 10f1 ^y 10f2^{. La m ezc la de} 10f1 ^y 10f2 ^{se co m b in ó con o tro lo te y se tr itu ró con} M eO H ; se fo rm ó un p re c ip ita d o a p a rtir de M eO H , d e sp u é s de la filtra c ió n y el la vad o con u n a p e q u e ñ a ca n tid a d de ^{M eO H frío , se iden tificó co m o el c o m p u e s to isó m ero pu ro p rin c ip a l} 10f2 ^{(659 m g); los lico res m ad re se co n ce n tra ro n} y pu rifica ro n m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum na . W a te rs X b rid g e P rep O B D 10 pm C 18 150x30, C o n d ic ió n : A : a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : M eC N , in ic io : B 25% , B fin a l: 45 % ; C a ud a l (m l/m in ) 25) pa ra d a r m ás ^{co m p u e s to} 10f2 ^{(97 m g) y e l co m p u e s to isó m ero m in o rita rio} 10f1 ^{(200 m g) c a d a uno co m o un só lido b lanco .}

^{C o m p u e s to} 10f1^{: 1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 8.51 (s, 1H), 8.03 (b r d, J= 8.0 Hz, 2H ), 7.81 (s, 1H), 7.67 ­} 7.63 (m, 1H), 7.57 -7.53 (m, 2H), 7.17 (d, J= 8.0 Hz, 2H ), 6.80 (d, J= 8.0 Hz, 2H ), 5.28 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.09 (b r d, J= 4.0 Hz, 1H), 4.83 (b r t, J= 4.0 Hz, 1H), 4.64 (d, J= 12 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 12 Hz, 1H), 4.28 (t, J= 4.0 Hz, 1H), 4.20 (q, J= 4.0 Hz, 1H), 3.91 (q, J= 4.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H ), 3.61 -3.58 (m, 1H), 3.51 -3.47 (m, 1H); E S I-M S : m /z= 492.2 [M+H]+.

^{C o m p u e s to} 10f2^{: 1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 8.61 (b r s, 1H), 8.03 (b r d, J= 8.0 Hz, 2H ), 7.92 (b r s, 1H),} 7.69 -7.65 (m, 1H), 7.58 -7.54 (m, 2H ), 7.33 (d, J= 8.0 Hz, 2H ), 6.92 (d, J= 8.0 Hz, 2H ), 5.33 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.21 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.87 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.66 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.57 -4.49 (m , 2H ), 4.01 (q, J= 4.0 Hz, 1H), 3.95 (t, J= 4.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H ), 3.60 -3.55 (m, 1H), 3.50 -3.45 (m, 1H) E S I-M S : m /z= 492.3 [M+H]+.

^{P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 10g

A u n a so luc ión de N -(7 -((2 S ,3 S ,4 S ,5 R )-3 -h id ro x i-5 -(h id ro x im e til) -4 -((4 -m e to x ib e n c il)o x i) te tra h id ro fu ra n -2 -^{il) im id a zo [2 ,1 -f][1 ,2 ,4 ]tr ia z in -4 - il)b e n za m id a , co m p u e s to} 10f2 ^{(400 mg, 0,81 m m o l) en p ir id in a (6 m l) se le añad ió} D M T rC l (4% m g, 1,46 m m o l) a TA . D e spu és de a g ita r a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te la noche , la m ezc la se c o m b in ó con o tro lo te b ru to y se d ilu yó con DC M (50 m l). La c a p a o rg á n ic a se lavó su ce s iva m e n te con N a H C O ³ a cu oso sa tu ra d o (50 ml x 3), se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró p a ra d a r un res iduo . El res idu o se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c al 0100 % en é te r de pe tró le o y ^{M eO H al 0 ,0 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to} 10g ^{(450 m g) co m o un só lido b lanco . El c o m p u e s to} 10f2 ^sin re a cc io n a r (160 m g) se recu pe ró com o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 11.50 (b r s, 1H), 8.67 (b r s, 1H), 7.99 (b r d, J= 6.0 Hz, 1H), 7.86 (b r s, 1H), 7.65 (b r d, J= 6.4 Hz, 1H), 7.54 (b r t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.29 -7.35 (m, 2H ), 7.23 -7.29 (m, 2H ), 7.17 -7.23 (m, 7H ), 6.83 (td, J= 6.0 , 3.2 Hz, 6H ), 5.45 (b r d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.30 (b r s, 1H), 4.63 (b r d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.43 (b r d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.12 (b r s, 1H), 4.07 (b r s, 1H), 3.72 (s, 9H ), 3.20 (b r d, J= 7.6 Hz, 1H), 3.01 (b r d, J= 5.6 Hz, 1H); E S I-M S : m /z= 794.2 [M+H]+.

^{P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 10h

^U na su sp e n s ió n a g ita d a de l c o m p u e s to 10g (450 m g, 0 ,56 m m ol), su lfa m a to 17a (744 ,735 mg, 0 ,850 m m ol) y M S Á (1 g) en T H F seco (6 m l) se tra tó a 25° C con D ^m A ^p (277 mg, 2 ,27 m ilim o les). D espués de a g ita r la su sp e n s ió n a m a rilla a 45° C d u ra n te 18 h ba jo N ² , la m ezc la de la reacc ión se filtró a tra vé s de un a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y el f iltra d o se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo am a rillo ; e l res iduo se d iso lv ió en DC M (100 m l) y se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (100 ml x 4). La c a p a o rg á n ica se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a ^{u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -100 % en PE) pa ra d a r e l co m p u e s to} 10h ^{(604 m g)} co m o un só lido am a rillo . E S I-^m S: m /z= 766.8 [M+H]+.

^{P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 10i

^{U na so luc ió n de l co m p u e s to} 10h ^{(704 m g, 0 ,46 m m o l) en a g u a (0 ,08 m l) y DC M (15 m l) se tra tó con DCA} (118 ,6 mg, 0 ,92 m m o l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 4 h, luego se in ac tivó con p ir id in a (0 ,5 m l). D e spués de a g ita r a T A d u ra n te 10 m in , la m ezc la se co n ce n tró al v a c ío pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -100 % en PE) p a ra d a r el ^{co m p u e s to} 10i ^{(370 m g) co m o un só lido . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 11.46 (b r s, 1H), 11.24 (s, 1 H), 8.70 (s,} 1H), 8.62 (s, 1H), 8.45 (b r t, J= 4.0 Hz, 1H), 8.03 (b r t, J= 8.0 Hz, 6H ), 7.67 -7.63 (m, 2H ), 7.57 -7.53 (m, 4H ), 7.30 (b r d, J= 8.0 Hz, 2H ), 6.91 (b r d, J= 8.0 Hz, 2H ), 6.38 -6.33 (m, 1H), 5.89 (b r d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.65 (b r s, 1H), 5.51 (b r s, 1H), 5.38 (b r s, 1H), 4.95 (b r s, 1H), 4.63 -4.50 (m, 4H ), 4.32 (b r t, J= 4.0 Hz, 1H), 4.04 -3.99 (m, 3H ), 3.74 (s, 3H ), 3.59 (br d, J = 12.0 Hz, 2H ), 3.29 -3.22 (m , 1H); 19F N M R (376 M H z, D M S O -ds) 5 -202.69 (td, J= 18.8 , 52.6 Hz, 1F); E S I-M S : m /z= 926.5 [M+H]+.

^{P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 10j

N O T A : T H F rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y C H ³CN rec ién d e s tila d o so b re C a H ² an tes de su uso. ^{A u n a so luc ió n de l co m p u e s to} 10i ^{(220 mg, 0 ,24 m m ol, seca do p o r lio filiza c ió n ) d isu e lto en T H F (4 m l) se le añ ad ió} M S 4 A (po lvo , 800 m g) y una so luc ión de 1 H -te tra zo l (5 ,28 m l, 0 ,45 M, p re p a ra d o p o r d iso lu c ió n de 945 m g de te tra zo l (seca do p o r lio filizac ió n ) en 30 ml de C H ³CN seco , se g u id o de la ad ic ió n de 1 g d e M S 4 A y luego po r ag itac ión d u ra n te 1 h en N² an tes de su uso). El m a traz de l rec ip ie n te se pu rg ó va ria s ve ce s con N². S e añ ad ió go ta a g o ta u n a so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (129 m g, 0 ,43 m m o l) en T H F (2 ml) d u ra n te 20 m in a un v ia l con u n a je rin g u illa . D e spu és de a g ita r a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1,5 h, se añ ad ió una so luc ió n de T B H P (0 ,38 ml, 1,9 m m ol, 5 M ) y la m ezc la se ag itó d u ra n te o tros 30 m in y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a p a ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de ^{s ílice ((g ra d ie n te de e lu c ió n : DC M al 0 -10 % en M eO H , Rf = 0,6 ) p a ra d a r e l c o m p u e s to} 10j ^{co m o un só lido b lanco} (308 m g). E S I-M S : m /z = 1041.4 [M H ].

^{P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 10k

^{El co m p u e s to} 10j ^{(308 m g) se tra tó con M e N H 2/E tO H (2 m l) y se ag itó a T A d u ra n te 2 ,5 ho ras. La m ezc la} de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión red u c id a y e l res iduo se pu rificó p o r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : W a te rs X b rid g e P rep O ^b D 5 gm C 18 150x30, C o n d ic ió n : A : a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : M eC N , In ic io : ^{B 5% , B g ina l: 35% , ca u d a l (m l/m in ) 25) pa ra d a r e l c o m p u e s to} 10k ^{(32 m g) co m o un só lido b lanco .}

E S I-M S : m /z= 780.3 [M+H]+.

^{P aso 9. P rep a ra c ión de l} Compuesto 48, sal de sodio

Se e n frió a 0° C u n a so luc ió n de an iso l (43 ,43 m g, 0 ,4 m ilim o les ) en T F A (0,31 m l, 4 ,02 m ilim o les). La ^{so luc ió n se añ ad ió al co m p u e s to} 10k ^{(32 mg, 0 ,04 m ilim o les). D e spués de a g ita r la m ezc la a 0° C d u ra n te 2 ,5 h, la} m a yo r pa rte de l T F A se e lim in ó s o p la n d o con un f lu jo de gas n itró ge no a 0° C. La m ezc la de la reacc ión res tan te se in ac tivó con M eN H ² , una so luc ió n al 33 % en E tO H m l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se e va p o ró a p res ión re d u c id a y e l res iduo se rep a rtió e n tre D C M /a g u a (30 m l x 3 /15 m l) y la c a p a a cu o sa se lavó con DC M (30 ml x 2). La c a p a a cu o sa se lio filizó pa ra d a r un res iduo . El res iduo se p u rif icó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (W ate rs X b rid g e P rep O B D C 18 5 gm C 18 150x30, C o n d ic ió n : A : ag ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : A C N , in ic io : B 5% , ^{B fin a l: 35% ; C a ud a l (m l/m in ) 25) pa ra d a r el} compuesto 48, sal de amonio ^{(19 ,2 m g) co m o un só lid o b lanco . 1H} N M R (400 M H z, D²O) 5 8.32 (s, 1H), 8.00 (d, J= 3.2 Hz, 2H ), 7.49 (s, 1H), 6.57 -6.50 (m, 1H), 5.81 -5.75 (m, 1H), 5.73 ­ 5.65 (m , 2H ), 5.54 (b r d, J= 4.4 Hz, 1H), 5.39 -5.27 (m , 1H), 4.80 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 4.46 (b r s, 1H), 4.42 -4.34 (m, 1H), 4.24 -4.17 (m, 1H), 3.82 (b r dd, J= 3.2 , 13.4 Hz, 1H), 3.61 (br d, J = 13.2 Hz, 1H); 19F N M R (376 M H z, D²O ) 5 -197.15 ­ 197.29 (m, 1 F); 31P N M R (162 M H z, D²O ) 5 -1.83 (s, 1P ); E S I-M S : m /z=660.1 [M+H]+.

Conversión de la sal de sodio

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (5 ml, fo rm a H) a un va s o de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (25 m l). Luego a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g u a d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ran te 5 m in y se d e ca n tó (25 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a co lu m n a con H²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (p o r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a hasta que se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió u n a so luc ió n de N aO H al 15% en ag ua d e s io n iz a d a y la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g u a (p o r lo m en os 4 C V), y luego con ag ua d e s io n iz a d a ha s ta que se v o lv ió ne u tra . El compuesto 48, sal de amonio ^{(19 ,2 m g) se d iso lv ió en a g u a DI (2 m l) y se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e lu yó con a g ua de s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se a g ru p a ro n y lio filiza ro n pa ra d a r el} compuesto 48, sal de sodio ^{(16 m g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, D 2O) 5 8.04 (b r s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.56 (s, 1H),} 6.83 (br s, 1H), 6.33 -6.25 (m, 1H), 5.68 -5.60 (m, 1H), 5.46 (br d, J= 9.6 Hz, 1 H), 5.32 (b r d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.20 (br d, J= 4.4 Hz, 1H), 5.06 -4.90 (m, 1H), 4.38 (br d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.30 (br s, 1H), 4.17 (br dd, J= 6.0 , 10.4 Hz, 1H), 4.02 (brd , J = 11.6 Hz, 1H), 3.67 (br d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.41 (br d, J= 13.2 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D ² O) 5 -2.02 (s, 1P); 19F N M R (376 M H z, D ² O) 5 -196 74 (br s, 1F); E S I-M S : m /z=660.1 [M+H]+.

E je m p lo 11

Compuesto 11

NHBz NH,

11d

Compuesto 11, sal de sodio

^{P aso 1. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 11a

^{S e añ a d ió T IP D S C l2 (6 ,70 g, 21 ,23 m m o l) a una so luc ió n de} SM 11^{, N - iso b u tir ilg u a n o s in a (5 ,0 g, 14 ,15} m m ol) en p ir id in a (50 m l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 12 h a te m p e ra tu ra am b ie n te , d e sp u é s d e lo cua l se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El p ro d u c to res idua l se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice ^{(g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to} 11a ^{co m o un a e sp u m a b lan ca (5 ,5 g,} ren d im ien to : 65% ). 1H N M R (400 M H z, DM SO -da) 5 ppm 12.12 (s, 1H), 11.76 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.71 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.28 -4.39 (m, 2H ), 4.13 (br dd, J= 12.9 , 2.6 Hz, 1H), 4.00 -4.07 (m, 1H), 3.94 (br dd, J= 12.9 , 2.7 Hz, 1H), 2.78 (spt, J= 68 Hz, 1 H), 1.11 (d, J = 6.6 Hz, 6H ), 0.93 -1.08 (m, 28H ); E S I-M S : m /z 596.2 [M+H]+.

^{P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 11b

^{S e añ ad ie ro n ta m ice s m o le cu la re s ac tiva d o s a u n a so luc ió n de l c o m p u e s to} 11a ^{(1 ,28 g, 1 ,92 m m o l) y el co m p u e s to} 1e ^{(1,0 g, 1 ,28 m m o l) en T H F seco (60 m l); la m e zc la resu lta n te se ag itó d u ra n te 1 h ba jo N 2. Luego, se} añ ad ió D M A P (783 m g, 6,41 m m o l) p a ra in ic ia r la reacc ión . La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 50° C d u ra n te la noche . Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n con D C M , e l f iltra d o se lavó con N aH C Ü 3 a cu oso sa tu ra do . La fa se a cu o sa se e x tra jo con DC M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con ^{Na2SÜ4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . El c o m p u e s to} 11b ^{(520 m g, ren d im ien to : 36% ) se o b tuvo} co m o un só lido am a rillo d e sp u é s de la p u rifica c ió n m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : E tO A c al 0 -100 % en é te r de pe tró le o seg u ido de M eO H al 0 -2 % en D C M ). 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ^{ppm 12.08 (b r s, 1H), 11.56 (b r s, 1H), 11.28 (b r s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.54 (b r s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.04} (s, 2H ), 7.61 -7.73 (m, 1H), 7.49 -7.59 (m, 2H ), 6.31 -6.44 (m , 1H), 6.06 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.73 (b r d, J= 53.5 Hz, 1H), 5.31 (b r d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.79 -4.95 (m, 1H), 4.64 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 3.84 -4.10 (m, 4H ), 3.41 (m, J = 13.3 Hz, 1H), 3.11­ 3.25 (m, 1H), 2.75 (spt J= 6.5 Hz, 1H), 0.85 -1.15 (m, 43H ), 0.15 (s, 3H ), 0.14 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 1144.4 [M+H]+.

^{P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 11c

^{S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to} 11b ^{(1 ,3 g, 0 ,98 m m o l) en M eO H seco (55 m l, seca do so b re ta m ice s} m o le cu la re s ) con HC l (0 ,19 ml de 2M en Et²O, 13,7 m m o l) d u ra n te 4 h. La m ezc la de la reacc ión se inactivó m ed ia n te la ad ic ió n de NaHCO 3 a cu o so sa tu ra d o se g u id o de ex tra cc ió n con DC M . La fa se o rg á n ica se secó con M gSO 4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en ^{co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r e l c o m p u e s to} 11c ^{(670 m g, ren d im ien to : 65% ). 1H N M R (400 M H z, D M S O -ds)} 5 ^{ppm 1.01 -1.08 (m, 28H ), 1.12 (d, J> 6.8 Hz, 3H ), 1.67 -1.75 (m, 1H), 2.20 -2.32} (m, 1H), 2.43 -2.54 (m, 1H), 2.62 (b r d, J= 14.3 Hz, 1H), 2.79 (spt, J= 6.9 Hz, 1H), 2.85 -2.96 (m, 1H), 3.51 (s, 3H ), 3.52 ­ 3.57 (m, 2H ), 3.75 -3.83 (m, 1H), 4.39 -4.48 (m, 1H), 4.50 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.02 (q, J= 9.6 Hz, 1H), 5.09 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 5.25 (dd, J= 9.8 , 4.1 Hz, 1H), 5.52 (ddd, J= 52.4 , 4.4 , 2.6 Hz, 1H), 5.68 (b r d, J= 5.9 Hz, 1H), 6.30 (dd, J = 18.5, 2.6 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.7 Hz, 2H ), 7.61 -7.69 (m , 1H), 8.02 -8.07 (m, 2H ), 8.11 (b r s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 11.22 (b r s, 1H), 11.33 (b r s, 1H), 12.09 (b r s, 1H); E S I-M S : m /z 1060.7 [M ^h ]+.

^{P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 11d

^{S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to} 11c ^{(340 m g, 0 ,32 m m o l) y 1H -te tra zo l (4 ,48 m l de M eC N al 3-4% ,} se ca d o en ta m ic e s m o le cu la re s de 3A an tes de su uso ) en T H F /M e C N seco (1:1, 11 m l, seca do en ta m ice s m o le cu la re s de 3A an tes de su uso) con ta m ice s m o le cu la re s de 3A ac tiva d o s d u ra n te 2 h en N ² d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió en una po rc ión 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (96 m g, 0 ,32 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 2 h. S e añ ad ió un a ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (19 m g, 0 ,064 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te 2 h. S e añ ad ió u n a so luc ió n de ^{fB uO O H (93} g^{l de so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 0,51 m m ol), la m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 30 m in . Los} ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se lavaron con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con s a lm u e ra y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de sílice ^{(g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to} 11d ^{(100 mg, re n d im ie n to : 26 ,5% ). E S I-M S :} m /z 1177.6 [M+H]+.

^{P aso 5. P rep a ra c ión de l} Compuesto 11, sal de sodio

^{El co m p u e s to a n te r io r} 11d ^{(100 m g, 0 ,085 m m o l) se ag itó en una so luc ió n de m e tila m in a al 33% en e ta no l} (2 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la c o n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 3 h), d e sp u é s de lo cua l la so luc ió n de la rea cc ió n se co n ce n tró a p res ión re d u c id a y se tr itu ró en M eC N . El p re c ip ita d o se d iso lv ió en una m ezc la de p ir id ina ⁽⁶⁸⁴ g^{l m l) y Et3N (590 l). S e añ ad ió tr ih id ro flu o ru ro de tr ie tila m in a (57 mg, 0 ,34 m m ol), la m ezc la de la reacc ión} resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la c o n ve rs ió n co m p le ta (no ta : se o b se rvó p re c ip ita c ió n de l p roduc to d e sea do . El res iduo , o b te n id o d e sp u é s de la c o n ce n tra c ió n a p res ión reduc ida , se tr itu ró en M eC N , e l p re c ip itado o b te n id o se pu rificó a d ic io n a lm e n te m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria . X B rid g e C18 ^{O B D , 5} g^{m, 250 x 30 m m , fa se m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico al 0 ,25% (A) - M eC N (B); e luc ió n en g ra d ie n te ) pa ra d a r el} compuesto 11^{. La co n ve rs ió n fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te la e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re un a c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina de in te rca m b io ió n ico de sod io c a tió n ico que p ro p o rc io n ó el} compuesto 11, sal de sodio ^{co m o un só lido b lan co e sp o n jo so (24 ,5 m g, ren d im ien to : 41% ). 1H n M r (600 M H z, DM SO -d6)} 5 ppm 10.03 (b r s, 1H), 9.49 (b r s, 1H), 8.27 (b r s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.60 (b r s, 1H), 7.25 (b r s, 2H ), 6.41 -6.79 (m, 2H ), 6.36 (b r d, J= 20.0 Hz, 1H), 6.08 -6.22 (m, 1H), 6.04 (b r d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.72 (b r s, 1H), 5.43 (b r dd, J = 51.7, 4.3 Hz, 1H), 5.25 -5.34 (m, 1H), 4.54 (b r t, J= 4.0 Hz, 1H), 4.33 -4.43 (m , 1H), 4.29 -4.33 (m, 1H), 4.11 (b r t, J= 3.9 Hz, 1H), ^{3.85 -3.94 (m , 1H), 3.56 (b r dd, J = 13.0, 2.6 Hz, 1H), 3.34 (b r d, J = 12.6 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D M S O -ds)} 5 ^ppm -2.34 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 675.1 [M+H]+.

Ejemplo 12

Compuesto 29

^{S e d iso lv ió el co m p u e s to} 12a ^{(300 mg, 0 ,38 m m ol) en una m ezc la de A C N an h id ro (33 m l) y T H F anh id ro} (33 m l). S e a ñ ad ie ro n 1H -te tra zo l (3,3 ml, 1,13 m m ol) y ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á . La m ezc la se ag itó d u ra n te 2 h a T A y luego se añ ad ió d e una v e z m e d ia n te un a je r in g u illa 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,16 ml, 0 ,49 m m ol). La m ezc la d e la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 4 ho ras. S e añ ad ió una ca n tid a d ad ic io na l d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,078 ml, 0 ,25 m m ol). La m ezc la d e la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 1 ho ra y luego se añ ad ió so lu c ió n de h id ro p e ró x id o de te rc -b u tilo 5 ,5 M en de ca n o (0 ,075 ml, 0,41 m m o l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m in u tos y luego se filtró . Los ta m ic e s m o le cu la re s se lava ron tre s v e c e s con d ic lo ro m e ta n o . El filtra d o co m b in a d o se lavó con un a m ezc la d e so luc ió n de Na2S2Ü3 sa tu ra do y una so luc ió n sa tu ra d a d e NaH C Ü 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gSÜ 4, se filtró y se e va p o ra ro n los so lve n te s del filtrad o . El res iduo se pu rificó en un a co lu m n a de S iÜ ² usa nd o un g ra d ie n te de D C M al 100% a M eO H al 10% en ^{D C M . Las fra c c io n e s qu e co n te n ía n el p ro d u c to se co m b in a ro n y lo s so lve n te s se e va p o ra ro n pa ra d a r} 12b ^{(47 mg,} 12% de ren d im ien to ). E S I-M S : m /z 905.4 [M+H]+.

^{P aso 2. P rep a ra c ió n del} Compuesto 29, sal de sodio

^{S e ag itó el co m p u e s to} 12b ^{(47 m g, 0 ,045 m m ol) en m e tilam in a , so lu c ió n al 33 % en e ta no l (2 ,5 m l, 20 ,2} m m ol) a 40° C d u ra n te 3 h. La m ezc la de la reacc ión se e va p o ró hasta la se q u e d a d a p re s ió n red uc ida . El res iduo se tr itu ró en 10 ml d e a ce to n itr ilo an h id ro . El p re c ip ita d o se recog ió p o r filtra c ió n y se lavó con a ce to n itr ilo anh id ro . El res iduo se pu rificó con H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria . RP X B rid g e P rep C IS O B D -10 gm , 50 x150 m m , fase m óvil: so luc ió n de N H ⁴ H C O ³ al 0 ,25 % en agua , M eO H ). Los so lve n te s d e la fra cc ió n pu ra se e lim in a ro n p o r lio filizac ió n . El res idu o se d iso lv ió en a g ua y se pu rificó en un a c o lu m n a p re la va d a (de agua) re llena con una res ina de res ina de in te rca m b io ión ico . Los so lve n te s de la so luc ió n resu ltan te se e lim in a ro n p o r lio filizac ió n ^{pa ra d a r el} compuesto 29, sal de sodio ^{co m o un só lido b lan co (27 m g, 87 % de ren d im ien to ). 1H N M R (400 M H z,} DM SO -d6) ó ppm 3.18 -3.28 (m, 1H) 3.29 -3.40 (m , 1H) 4.02 -4.10 (m , 2H ) 4.17 -4.25 (m, 1H) 4.29 -4.48 (m, 1H) 4.36 (br s, 1H) 5.09 (b r dd , J= 13.6 , 7.1 Hz, 1H) 5.23 -5.49 (m, 2H ) 5.86 -6.00 (m , 2H ) 6.34 -6.42 (m, 1H) 6.61 (br s, 2H ) 6.96 (br s, 2H ) 7.92 (s, 1H) 8.11 (d, J= 2.4 Hz, 1H) 8.15 (s, 1H); E S I-M S : m /z 678.2 [M H]+.

Ejemplo 13

Compuesto 15

^{S e d iso lv ió el co m p u e s to} 13a ^{(355 mg, 0 ,46 m m ol) en una m ezc la de A C N anh id ro (40 m l) y T H F anh id ro} (40 m l). S e a ñ ad ie ro n 1H -te tra zo l (4,1 ml, 1 ,4 m m ol) y ta m ice s m o le cu la re s de 3Á . La m e zc la se ag itó d u ra n te 2 ho ras a T A y luego se añ ad ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,19 ml, 0,61 m m ol) de un a ve z m e d ia n te una je rin g u illa . La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 4 ho ras. S e añ a d ió una ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,18 ml, 0 ,57 m m ol). La m ezc la d e la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 1 ho ra y lu eg o se añ ad ió so lu c ió n de h id ro p e ró x id o de te rc -b u tilo 5 ,5 M en de can o (0 ,093 m l, 0,51 m m o l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m inu tos . La m ezc la de la reacc ión se filtró . Los ta m ic e s m o le cu la re s se la va ro n tre s ve c e s con d ic lo ro m e ta n o . El filtra d o co m b in a d o se lavó con un a m ezc la d e so luc ió n sa tu ra d a de Na2S2Ü3 y so luc ió n a cu o sa sa tu ra d a d e NaH C Ü 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gSÜ 4, se filtró y se e va p o ra ro n los so lve n te s del filtra d o . El res iduo se pu rificó en un a co lu m n a de S iÜ ² usa nd o un g ra d ie n te de D C M al 100% a M eO H al 10% en D C M . Las fra cc io n e s q u e co n te n ía n el p ro du c to se ^{co m b in a ro n y los so lve n te s se e va p o ra ro n pa ra d a r} 13b ^{(34 mg, 5% d e ren d im ien to ). E S I-M S : m /z 888.4 [M+H]+.}

^{P aso 2: P re p a ra c ió n del} Compuesto 15, sal de sodio

^{S e ag itó a 40° C d u ra n te 3 ho ras el co m p u e s to} 13b ^{(34 m g, 0 ,023 m m ol) en m e tilam in a , so lu c ió n al 33 % en} e ta no l (2 m l, 16 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se eva p o ró ha s ta la se q u e d a d a p res ión red uc ida . El res iduo se tr itu ró en 10 ml de a ce ton itr ilo an h id ro . El p re c ip itado se filtró y se lavó con a ce ton itr ilo an h id ro . S e rea lizó una p u rif ica c ió n con H P LC p re p a ra tiva en fase in ve rsa (F ase e s ta c io n a ria . RP X B rid g e P rep C 18 O B D -10 gm , 50x150 m m , Fase m óvil: so luc ió n de NH4HCO3 al 0 ,25 % en agua , M eO H ). Los so lve n te s d e la fra cc ió n pu ra se e lim in a ro n po r lio filizac ió n . El res iduo se d iso lv ió en a g ua y se filtró so b re una co lu m n a p re la va d a (de agua) c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io ió n ico de sod io ca tió n ica . Los so lve n te s de la so luc ió n resu ltan te se e lim in a ro n m e d ia n te ^{lio filiza c ió n pa ra d a r el c}ompuesto 15, sal de sodio ^{(23 mg, 100% d e ren d im ien to ) co m o un só lido b lanco . 1H NM R} (400 M H z, DM SO -d6) ó ppm 2.00 -2.13 (m, 1H) 2.49 (m , J= 3.9 , 1.7, 1.7 Hz, 1H) 3.29 -3.37 (m , 1H) 3.57 (dd, J= 13.6 , 2.6 Hz, 1H) 3.85 -3.97 (m, 1H) 4.03 -4.17 (m, 1H) 4.27 (br d, J= 9.0 Hz, 1H) 4.45 -4.55 (m , 1H) 4.73 -4.88 (m, 1H) 5.10 (br d, J= 22.4 Hz, 1H) 5.42 (dd, J= 51.1 , 4.1 Hz, 1H) 6.11 (br d, J=4.1 Hz, 1H) 6.32 (d, J= 18.7 Hz, 1H) 6.86 -7.03 (m, 2H ) 7.07 (br s, 2H ) 7.85 (br s, 1H) 8.15 (s, 1H) 8.35 (s, 1H) 8.40 -8.87 (m, 1H); E S I-M S : m /z 661.3 [M+H]+.

Ejemplo 14

Compuesto 30

14c sal de metilamonio Compuesto 30, sal de sodio ^{P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 14b

^{S e d iso lv ió el co m p u e s to} 14a ^{( 2 7 5 mg, 0 ,26 m m ol) en A C N an h id ro (40 m l). S e a ñ ad ie ro n 1H -te tra zo l (2,3} ml, 1,8 m m o l) y ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á . La m ezc la se ag itó d u ra n te 1 hora a T A y lu eg o se añ ad ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,084 m l, 0 ,26 m m ol) d e una ve z m e d ia n te una je rin g u illa . La m ezc la d e la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 4 ho ras. S e añ ad ió una ca n tid a d ad ic io na l d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,084 m l, 0 ,26 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1 hora y luego se añ ad ió so luc ió n de h id ro p e ró x id o de te rc -b u tilo 5 ,5 M en de ca n o (0 ,062 ml, 0 ,34 m m o l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 18 ho ras. La m ezc la de la reacc ión se filtró . Los ta m ic e s m o le cu la re s se la va ro n tre s ve c e s con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o c o m b in a d o se lavó con una m ezc la de so luc ió n sa tu ra d a de Na2S2Ü3 y so luc ió n a cu o sa sa tu ra d a de N aH C Ü 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gSÜ 4, se filtró y se e va p o ra ro n lo s so lve n te s del filtrad o . El res iduo se pu rificó en un a co lu m n a de S iÜ ² usa nd o un g ra d ie n te de D C M al 100% a M eO H al 10% en D C M . Las fra c c io n e s q u e co n te n ía n el p ro du c to se c o m b in a ro n y los so lve n te s se ^{e va p o ra ro n pa ra d a r} 14b ^{(30 m g, 5% de ren d im ien to ). E S I-M S : m /z 1159.6 [M H]+.}

^{P aso 2. P re p a ra c ió n del} Compuesto 14c, sal de metilamonio

^{S e ag itó a 45° C d u ra n te 1 ho ra el co m p u e s to} 14b ^{(30 mg, 0 ,014 m m o l) en m e tilam in a , so lu c ió n al 33 % en} e ta no l (3 m l, 24 ,3 m m ol). La m e zc la de la reacc ión se eva p o ró hasta la se q ue da d a p re s ió n red uc ida . El res iduo se tr itu ró en 10 ml de a ce to n itr ilo an h id ro . El p re c ip ita d o se sep a ró p o r filtra c ió n y se lavó con A C N an h id ro pa ra d a r el compuesto 14c, sal de metilamonio ^{co m o un só lido b lan co (11 mg, 71% d e ren d im ien to ). E S I-M S : m /z 898.5} [M H ]+.

^{P aso 3. P re p a ra c ió n del} Compuesto 210, sal de sodio

S e e n frió a 0° C una so lu c ió n de an iso l (0,011 m l, 0,1 m m o l) en T F A (0 ,076 m l, 1 m m ol). La so luc ió n fría se ^{añ ad ió al co m p u e s to} 14c ^{(11 m g, 0,01 m m ol). La m ezc la d e la rea cc ió n se ag itó a 0° C d u ra n te 75 m inu tos. La} m a yo r pa rte de l T F A se e lim in ó so p la n d o con un flu jo de n itró ge no g a se o so a 0° C. La m ezc la de la reacc ión res tan te se in ac tivó m e d ia n te la a d ic ió n de m e tilam in a , so lu c ió n al 33 % en e ta no l (0 ,12 m l, 1 m m o l) a 0° C. La m ezc la de la rea cc ió n se eva p o ró has ta la se q u e d a d . El res iduo se p u rificó con H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : RP X B rid g e P rep C 18 O B D -10 |jm , 50 x250 m m , fa se m óvil: so lu c ió n d e N H ⁴ H C O ³ al 0 ,25 % en agua , C H ³ C N ). Los so lve n te s d e la fra cc ió n pu ra se e lim in a ro n po r lio filizac ió n . El res iduo se d iso lv ió en a g ua y se filtró sob re un a co lu m n a p re la va d a (de agua) re llen a con una res ina d e in te rca m b io ió n ico de sod io ca tió n ica . Las fra c c io n e s q u e co n te n ía n el p ro du c to se co m b in a ro n . Los so lve n te s de la so luc ió n resu ltan te se e lim in a ro n po r ^{lio filiza c ió n pa ra d a r el} compuesto 30, sal de sodio ^{com o un só lido b lan co (3 mg, 45 % de ren d im ien to ). 31P NM R} (162 M H z, D 2O ) ó ppm -1.27 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 658.3 [M+H]+.

E je m p lo 15

Compuesto 38

^{El d io l} 15a ^{(210 m g, 0 ,272 m m ol) se co e va p o ró con una m ezc la de to lu e n o an h id ro : a ce to n itr ilo (1:1, v /v , 3 x} 30 m l) y luego se d iso lv ió en T H F an h id ro (20 m l). Se añ ad ió po lvo de ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á (0 ,8 g) y te trazo l 0 ,45 M en M eC N (4 ,8 ml, 2 ,17 m m ol). La m ezc la h e te ro g é n e a resu ltan te se b u rb u je ó con a rgón d u ra n te 4 m in. D e spu és d e a g ita r e s ta m ezc la a T A d u ra n te 10 m in, se le añ ad ió una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (131 m g, 0 ,43 m m ol) en M eC N (3 ml) d u ra n te 30 m in u tos a TA . D e spu és de ag ita r d u ra n te 90 m in, la rea cc ió n se filtró y luego se lavó con T H F (15 m l). S e añad ió yod o 0 ,5 M (en T H F : agua : Py 8 :1 :1 , v /v /v ) hasta qu e p e rs is te el co lo r. D e spu és d e a g ita r la reacc ión a T A d u ra n te 30 m in , la m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con E tO A c (30 m l), el e xce so de yod o se in ac tivó con Na² S² O ³ acu oso sa tu ra d o de (ha s ta la d e co lo ra c ió n ). Se se p a ra ro n las fase s ; la fa se o rg á n ica se lavó con N aHCO 3 a cu o so sa tu ra do (1 x 20 m l), N aC l acu oso sa tu ra do (1 x 20 m l). La fa se a cu o sa se vo lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 20 m l). La fa se o rg á n ic a c o m b in a d a se eva p o ró ha s ta la se q ue da d , el m a te ria l b ru to resu ltan te se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re gel d e s ílice ^{(M eO H al 0 -15 % en d ic lo ro m e ta n o ) pa ra d a r} 15b ^{(120 m g). E S I-M S : m /z 873 [M+H]+.}

^{P rep a ra c ió n d e la} sal de sodio del Compuesto 38

^{S e som e tió el co m p u e s to} 15b ^{(120 m g) a una so lu c ió n de m e tilam in a al 33 % en e ta no l (15 m l) a TA .} D e spu és d e a g ita r la reacc ión a 40 ° C d u ra n te 2 h, la m ezc la se co n ce n tró a p res ión red uc ida . El só lido bru to resu ltan te se lavó con D C M (15 m l) y el p re c ip itado se recog ió p o r filtra c ió n y se pu rificó p o r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (co lum na : S yne rg i 4 |jm , H yd ro RP, 250 m m x 30 m m , F ase m óvil: T a m p ó n A : 50 m M A ce ta to de tr ie tila m o n io en agua , T a m p ó n B: A ce ta to de tr ie tila m o n io [T E A A ] 50 m M en C H ³ CN , g ra d ie n te : 0 -40 % de B d u ra n te ^{30 m in, cau da l 24 m l/m in ) pa ra d a r el} Compuesto 38 ^{(7,1 mg) co m o una sal d e T E A A . E S I-M S : m /z: 658 [M -1 ]-.}

C o n ve rs ió n de sal. S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (5 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con a g ua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego , a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g ua d e s io n iza d a , la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a co lu m n a con H ² S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V ), y luego con a g ua d e s io n iz a d a hasta q u e se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió una so luc ió n de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g ua (po r lo m enos 4 C V ), y luego con a g ua d e s io n iz a d a has ta qu e se v o lv ió neu tra . La sal de TEAA del compuesto 38 ^{(24 ,2 m g) se d iso lv ió en una ca n tid a d m ín im a de a g ua d e s io n iz a d a y C H 3C N (1:1,} v /v ), añ ad ido a la pa rte s u p e rio r de la co lu m n a y se e luyó con agua de s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se ^{a g ru p a ro n y lio filiza ro n a la} sal sódica del Compuesto 38 ^{(6 ,3 m g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, D2 O)} S 7.98 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.37 (dd, J= 5.2 Hz, 11.6 Hz, 1H), 5.75 -5.90 (m, 2H ), 5.49 (t, J= 4.8 Hz, 0.5H ), 5.37 (t, J = 4.8 Hz, 0.5H ), 5.01 -5.15 (m , 1H), 4.51 (s, 1H), 4.26 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.00 -4.10 (m, 2H ), 3.35 -3.50 (m, 2H ), 2.45 -2.70 (m , 2H ). 31P N M R (162 M H z, D ² O) 6 -1.416 ppm (s, 1P); 19F N M R (379 M H z, D ² O) d -196 ppm (p ico am p lio , 1F); E S I-M S : m /z: 658.4 [M -1 ]-.

E je m p lo 16

Compuesto 28

^{P rep a ra c ió n del C o m p u e s to} 16b

^{S e co e va p o ró el co m p u e s to} 16a ^{(140 m g, 0 ,174 m m ol) con un a m e zc la de to lu e n o anh id ro : a ce ton itr ilo (1:1,} v /v , 3 x 30 m l) y lu eg o se d iso lv ió en T H F an h id ro (15 m l). S e a ñ ad ie ro n po lvo de ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á (0 ,5 g) y te tra zo l 0 ,45 M en a ce ton itr ilo (2 ,32 ml, 1 ,04 m m ol). La m ezc la h e te ro g é n e a re su lta n te se b u rb u je ó con A r d u ra n te 4 m in. D e spu és de a g ita r la m e zc la a T A d u ra n te 10 m in , se añ ad ió a es to una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (84 mg, 0 ,28 m m ol, 1,6 eq) en C H ³CN (3 ,0 m l) d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra a m b ie n te . D e spu és de a g ita r la reacc ión d u ra n te 90 m in , la m ezc la se filtró y lu eg o se lavó con T H F (15 m l). El co m p u e s to re su lta n te fo s fito (M S: m /z 901 [M H ) se usó d ire c ta m e n te en el paso s ig u ie n te . A esto se añ a d ió yodo 0 ,5 M (en T H F :a g u a :P y 8 :1 :1 , vv /v ) ha s ta qu e el c o lo r pe rs is te . D e spu és de a g ita r la m ezc la a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m in, la reacc ión se d iluyó con E tO A c (30 m l); e l e xce so d e yodo se in ac tivó con Na2S2O3 acuoso sa tu ra do (has ta la d e co lo ra c ió n ). Las fa se s se sep a ra ron ; la fa se o rg á n ica se lavó con N aHCO 3 acu oso sa tu ra do (1 x 20 m l) y sa lm u e ra (1 x 20 m l). La ca p a a cu o sa se v o lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 20 m l). Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se e va p o ra ro n has ta la se q u e d a d pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en ^{co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (M eO H al 0 -15 % en d ic lo ro m e ta n o , v /v ) pa ra d a r el co m p u e s to} 16b ^{(80 m g).} E S I-M S : m /z 917 [M H]+.

^{P rep a ra c ió n del} Compuesto 28, sal de sodio

^{El co m p u e s to} 16b ^{(80 mg) se so m e tió a un a so luc ió n de m e tilam in a al 33 % en e ta no l (6 m l) a te m p e ra tu ra} am b ie n te . D e spu és de a g ita r la m ezc la a 40° C d u ra n te 2 h, la rea cc ió n se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un só lido . El só lido b ru to resu ltan te se lavó con D C M (15 ml) y el p re c ip ita d o se recog ió p o r filtra c ió n y se pu rificó po r H P LC p re p a ra tiva d e fase in ve rsa (co lum na : S yne rg i 4g , H ydro RP, 250 m m x 30 m m , fase m óvil: ta m p ó n A: 50 m M ace ta to de tr ie tila m o n io en a g ua T a m p ó n B: ace ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en C H ³ CN , g ra d ie n te : 0 -40 % d e B ^{d u ra n te 30 m in , ca u d a l 24 m l/m in ) pa ra d a r el} compuesto 28 ^{(22 ,4 m g) co m o un a sal de T E A A . La co n ve rs ió n fina l} en la sal de sod io se rea lizó m e d ia n te e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa so b re una co lu m n a c o m p a c ta d a con res ina de ^{in te rca m b io ió n ico de sod io c a tió n ico pa ra p ro p o rc io n a r el} compuesto 28, sal de sodio ^{co m o un só lido b lanco} e sp o n jo so d e sp u é s de la lio filiza c ió n (21 ,9 mg).

1H N M R (400 M H z, D ²O) ó ppm 7.87 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.32 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 5.97 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.91 (s, 1 H), 5.50 (s, 0.5H ), 5.37 (s, 0.5H ), 4.98 -5.10 (m, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.10 -4.30 (m, 4H ), 3.52 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H ), 3.34 (d, J= 12.4 Hz); 19F N M R (379 M H z, D ²O) d p ico am p lio -196.61 ppm ; 31P NM R (162 M H z, D ² O) 6 -1.38 ppm ; E S I-M S : m /z: 688.8 [M-1]+.

E je m p lo 17

Compuesto 33

Tamices Mo _17a

^{N O TA : el co m p u e s to} 1b ^{se co e va p o ró con p ir id in a (60 m l) d o s ve c e s a n tes de su uso . A un a so luc ió n del co m p u e s to} 1b ^{(6 g, 15 ,06 m m o l) en p ir id in a (60 ml) se le añ ad ió D M T rC l (10 ,2 g, 30 ,12 m m o l) y D M A P (920 mg,} 7 ,53 m m ol) a 5° C. La m e zc la de la reacc ión se ag itó a 80° C d u ra n te 18 h da n d o co m o resu ltad o una so luc ió n am arilla . La m ezc la d e la reacc ión se co m b in ó con o tro lo te y se p ro cesó . Los v o lá tile s se e lim in a ro n al va c ío y el res iduo se d iso lv ió en D C M (150 m l), luego se ve rtió le n ta m e n te en N aHCO 3 acu oso sa tu ra d o (100 m l) con a g itac ión v ig o ro sa . La cap a acu o sa se e x tra jo con D C M (100 ml x 2). Las ca p a s o rg á n ica s se c o m b in a ro n , se seca ron sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo am arillo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c al 0 -100 % en é te r d e p e tró le o ) pa ra d a r el co m p u e s to 17-1 ^{(12 ,6 g, 88 % a p a rtir de 7,9 g de l co m p u e s to} 1b^{) co m o un só lido am a rillo . E S I-M S : m /z = 701.1 [M H]+.}

^{P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 17-2

^{S e añ a d ió PPh3 (6 ,6 g, 25,1 m m o l) a un a so luc ió n de l co m p u e s to} 17-1 ^{(12 ,6 g, 17 ,98 m m ol) en T H F (100} ml) en una po rc ión , la m ezc la se ag itó a 40 ° C d u ra n te 2 h en a tm ó s fe ra de N ² , se g u id o de la a d ic ió n d e H ²O (50 ml); la m ezc la se ag itó d u ra n te 12 h da n d o com o resu ltad o una so luc ió n in co lo ra . El so lve n te se co n ce n tró a p res ión red uc ida y la cap a a cu o sa res idua l se repartió e n tre D C M /H 2 O (80 /30 m l). La ca p a a cu o sa se ex tra jo con D C M (40 ml x 2). Luego se c o m b in a ro n la s ca p a s o rg án icas , se seca ron sob re Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un só lido b lanco pu rif ica d o p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice ^{(M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to} 17-2 ^{(11 ,6 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, C D C L) ó} 8.93 (br s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.01 (br d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.33 -7.19 (m , 4H ), 6.82 (dd, J= 6.9 , 8.9 Hz, 4H ), 6.17 (dd, J = 1.5, 17.6 Hz, 1H), 4.64 (ddd, J= 4.4 , 7.6 , 19.4 Hz, 1H), 4.57 -4.36 (m , 1H), 4.18 -4.08 (m, 1H), 3.77 (d, J= 5.3 Hz, 6H ), 2.94 (dd, J= 2.4 , 14.2 Hz, 1H), 2.64 (dd, J= 4.3 , 14.3 Hz, 1H); 19F N M R (376 M H z, CDCla) ó -197.03 (br s, 1 F); E S I-M S : m /z=675.1 [M+H]+.

^{P aso 3. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 17a^:

S e añ a d ió rá p id a m e n te un a so lu c ió n d e c lo ro su lfa to d e 4 -n itro fe n ilo (768 m g, 3 ,23 m m ol) en C H ² C L seco (5 ^{m l) a una m ezc la de l co m p u e s to} 17-2 ^{(727 m g, 1 ,07 m m ol), 4 -n itro fe n o l (449 m g, 3 ,23 m m o l), Et3N (654 mg, 6 ,46} m m ol) y ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á a c tiva d o s (-1 g) en C H ²C L seco (15 m l) en N ² a -78° C. La m ezc la se ca le n tó a T A g ra d u a lm e n te d u ra n te 1,5 h. La m ezc la de la reacc ión se co m b in ó con o tro s lo te s y se filtró a tra vé s de una a lm o h a d illa de tie rra d e d ia to m e a s . El filtra d o se tra n s fir ió a un e m b u d o de d e ca n ta c ió n , se lavó con N aHCO 3 acuoso sa tu ra do (200 ml x 4). La ca p a o rg á n ica se secó so b re Na2SO4 anh id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida p a ra d a r un res idu o am a rillo p u rif ica d o p o r c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (E tO A c al 0-^{100% en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r el co m p u e s to} 17a ^{(16 g) co m o un só lido am a rillo c la ro . 1H N M R (400 M Hz,} CDCl3) 5 8.93-8.81 (m, 2H ), 8.41 (s, 1H), 8.11 -7.92 (m, 5H ), 7.67 -7.58 (m, 1H), 6.86 (b r t, J= 7.7 Hz, 4H ), 6.20 (b r dd, J = 5.1 , 13.7 Hz, 1H), 5.34 -5.23 (m , 2H ), 5.16 (b r t, J=5.1 Hz, 1H), 4.73 (b r s, 1H), 3.90 (b r s, 1H), 3.79 (d, J= 6.4 Hz, 6H ), 3.23 (b r d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.89 (b r dd , J= 8.7 , 12.6 Hz, 1H ); 19F N M R (376 M H z, CDCla) 5 -199.28 --205.90 (m, 1 F); E S I-M S : m /z=876.1 [M+H]+.

^{P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 17c

^{S e ag itó u n a so luc ió n de} 17a ^{(2053 m g, 2 ,34 m m ol), c o m p u e s to} 17b ^{(1000 mg, 1,56 m m o l) y ta m ice s} m o le cu la re s (6 g) en T H F (30 m l) ba jo N ² d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te ; se añ ad ió D M A P (954 ,8 mg, 7,81 m m o l) y la m ezc la se ag itó a 45° C (te m p e ra tu ra de l ace ite ) d u ra n te 12 h. La m ezc la de la reacc ión se filtró y se le añ ad ió DC M (50 m l) y s a lm u e ra (20 m l). La ca p a o rg á n ica se lavó con N aH C O 3 a cu o so sa tu ra d o (3 x 50 m l), se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se eva p o ró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se co m b in ó con ge l de s ílice (6 g) y se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (P E /E A de l 10% al ^{100% y D C M /M e O H = de l 0% al 5% ) pa ra d a r} 17c ^{(1 ,8 g) co m o só lido a m a rillo c la ro . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6)} 5 12.10 (s, 1H), 11.46 (s, 1H), 11.23 (s, 1H), 11.05 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.13 -8.10 (m , 1H), 8.02 (d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.68 -7.63 (m, 1H), 7.58 -7.46 (m, 4H ), 7.41-7.31 (m, 6H ), 7.29 -7.23 (m, 3H ), 7.20-7.11 (m, 7H ), 6.91 (dd, J= 6.4 , 8.3 Hz, 4H ), 6.75 (dd, J= 8.9 , 12.3 Hz, 4H ), 6.39 -6.30 (m, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.34 (br, d, J= 5.9 Hz, 1H), 4.91 (br, s, 1H), 4.86 -4.73 (m, 2H ), 4.45 (br, d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.69 (s, 12H ), 3.21 -3.08 (m, 2H ), 2.96 -2.88 (m, 1H), 2.73 (m, 2H ), 2.07 (m, 1H), 1.02 (m, 6H ); 19F N M R (376 M H z, D M S O -ds) 5 -197.64 (s, 1F); E S I-M S : m /z=689.1 [M /2 H ]+.

^{P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 17d

^{A u n a so luc ió n de} 17c ^{(1 ,8 g, 1,31 m m o l) en DC M (30 m l) se le añ ad ió a g u a (235 ,5 mg, 13 ,08 m m o l) y D C A} (337 ,233 m g, 2 ,615 m m o l) d a n d o co m o resu ltad o un a so luc ió n roja. La so luc ió n se ag itó a 25° C d u ra n te 12 ho ras a TA . Luego se añ ad ió M eO H (5 m l) ha s ta q u e la so luc ió n se v o lv ió tra n s p a re n te seg u ido de p ir id in a (1034 ,4 mg, 13 ,08 m m ol). D e spués de a g ita r la m e zc la a 25° C d u ra n te 2 ho ras, la so luc ió n se co n ce n tró ba jo p res ión pa ra d a r un res idu o (3 ,0 g). El res iduo se co m b in ó con ge l de s ílice (6 ,0 g) y se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a ^{u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M al 0 -8 % en M eO H ) pa ra d a r} 17d ^{(0 ,9 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400} M H z, D M S O -ds) 5 12.12 (s, 1H), 11.57 (s, 1H), 11.26 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.47 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 -8.02 (m, 2H ), 7.69 -7.63 (m, 1H), 7.60 -7.52 (m, 2H ), 6.33 (dd, J= 2.0 , 19.3 Hz, 1H), 6.08 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.70 -5.50 (m, 1H), 5.30 (br, d, J=6.1 Hz, 1H), 5.02 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.67 -4.53 (m, 1H), 4.27 (br, d, J= 3.9 Hz, 1H), 4.11 (q, J=5.1 Hz, 1H), 4.05 -3.99 (m, 1H), 3.66 -3.55 (m , 1H), 3.46 (td, J= 4.9 , 12.2 Hz, 1H), 2.78 (td, 1H), 2.24 (td, 1H), 1.12 (d, 6H );

19F N M R (376 M H z, D M S O -d ^ 6 -202.156 (s, 1F); E S I-M S : m /z=772.1 [M+H]+.

^{P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 17e

El T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y e l C H ³CN fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² a n te s de su uso.

^{A u n a so luc ió n de} 17e ^{(100 m g, 0 ,130 m m o l) en te tra h id ro fu ra n o (3 m l) se le añ ad ió M S 4 Á (po lvo , 1 g) y la} m e zc la se ag itó d u ra n te 20 m in . D espués de 20 m in , se añ ad ió u n a so luc ió n de 1H -te tra zo l (0 ,45 M en ace ton itr ilo , 2 ,3 m l) a 25° C, se g u id o de u n a so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (78,1 m g, 0 ,26 m m ol, d ilu id a en 1 ml de T H F ) a 25° C. D e spu és de a g ita r d u ra n te 1,5 ho ras a TA , se añ ad ió h id ro p e ró x id o de te rc -bu tilo (0 ,12 m l, 0 ,65 m m ol) a 25° C y la so luc ió n se ag itó d u ra n te 1,5 h. La m ezc la de la rea cc ió n se co n ce n tró ba jo p re s ió n pa ra d a r un res iduo am a rillo . El res iduo se co m b in ó con ge l de s ílice (2 g) y se pu rificó m ed ian te ^{c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 0 -15 % en D C M ) pa ra d a r} 17e ^{(80 m g) co m o un} só lid o am a rillo c la ro . E S I-M S : m /z= 887.5 [M+H]+.

^{P aso 4. P rep a ra c ión de l} Compuesto 33, sal de sodio

^{S e tra tó el co m p u e s to} 17e ^{(80 m g, 0 ,090 m m o l) con M eN H 2 (50 % en E tO H , 5 ,0 m l). D espués de a g ita r a} 25° C d u ra n te 4 ho ras, la so luc ió n se co n ce n tró ba jo p res ión pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a . A g e la D u rashe ll 5 pm C 18 150x25, C o n d ic ió n : ag ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - C H ³CN B de in ic io : 5, B F inal 35, T ie m p o de G ra d ie n te (m in ): 9, 100% de B T ie m p o de re tenc ión (m in ): 0, C a ud a l ^{(m l/m in ): 25) pa ra d a r e l} compuesto 33, sal de amonio ^{(15 m g) co m o un só lido b lanco . La co n ve rs ió n fina l en la sal} de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re u n a c o lu m n a co m p a c ta d a con u n a res ina de ^{in te rca m b io de iones de so lio c a tió n ica p a ra p ro p o rc io n a r e l} compuesto 33, sal de sodio ^{co m o un só lido esp o n jo so} b lan co d e sp u é s de la lio filizac ió n (25 ,5 m g).

1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.16 (br, s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.15 (br, s, 1H), 6.45 (br, d, J = 19.8 Hz, 1H), 6.19 (br, d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.00 (br, d, J=7.1 Hz, 1H), 5.43 -5.29 (m, 1H), 5.28 -5.18 (m, 1H), 4.63-4.51 (m, 2H ), 4.31 4.22 (m , 1H), 4.16 -4.04 (m, 1H), 3.78 (br d, J= 13.2 Hz, 1H), 3.45 (br, d, J= 13.2 Hz, 1H), 2.80 -2.60 (m, 2H ); 19F NM R (376 M H z, D ² O ^{) < 6} ppm -196.95 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D ² O ^{) < 6} ppm -1.422 (s, 1P); E S I-M S : m /z=660.2 [M+H]+. E je m p lo 18

Compuesto 34

El T H F fue rec ién d e s tila d o so b re N a /b e n zo fe n o n a y el C H ³CN fu e rec ién d e s tila d o sob re so b re C a H ² an tes de su uso.

^{A un a so lu c ió n de} 18a ^{(100 m g, 0 ,127 m m ol) en T H F (2 m l), se le añ ad ió M S 4 A (po lvo , 0 ,5 g) y una} so luc ió n de 1H -te trazo l (2 ,25 m l, 0 ,45 M, p re p a ra d a d iso lv ie n d o 945 m g d e te tra zo l en 30 ml de C H ³ CN seco, seg u ido d e la a d ic ió n de 1 g de M S 4 A y luego se ag itó d u ra n te 1 h en N ² an tes de su uso ); luego se pu rgó con N² va ria s ve ce s . S e añ ad ió g o ta a g o ta una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (61 mg, 0 ,203 m m ol) en T H F (0 ,6 m l) d u ra n te 5 m in . D e spu és de a g ita r d u ra n te 4 h a te m p e ra tu ra a m b ie n te , se añ ad ió una so luc ió n de T B H P (124 pl, 0 ,62 m m ol, 5 M en d e can o ) ba jo N ². D e sp u é s de a g ita r d u ra n te 30 m in, la m ezc la de la reacc ión se co m b in ó con un lo te a n te rio r y se filtró a tra v é s de una a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y el filtra d o se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un ace ite in co lo ro . El ace ite se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (12 g, 35 m l/m in , p rim e ro e lu id a con ^t H ^f al 50 -80 % en é te r de p e tró le o , lu eg o se ^{ca m b ió a M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r} 18b ^{co m o un só lid o b lanco (89 m g). 1H N M R (400 M H z,} C L O R O F O R M O -d ) ⁶ 8.82 (s, 2H ), 8.60 (s, 1H), 8.08 (s, 1 H), 7.95 (br d, J = 7.5 Hz, 2H ), 7.81 (br s, 2H ), 7.60 -7.50 (m, 1H), 7.47 -7.37 (m, 3H ), 7.37 -7.28 (m , 2H ), 6.95 (s, 1H), 6.36 (br d, J= 17.6 Hz, 2H ), 6.23 -5.80 (m , 2H ), 5.67 -5.39 (m, 1H), 4.87 -4.56 (m , 3H ), 4.53 -4.37 (m, 3H ), 3.84 -3.67 (m, 2H ), 3.48 -3.32 (m, 1H), 2.87 (br t, J= 5.9 Hz, 4H ); 31P NM R (162 M H z, C L O R O F O R M O -d ) ⁶ -5.30 (s, 1P), E S I-M S : m /z= 923.4 [M+H]+.

^{P aso 2: P re p a ra c ió n del} Compuesto 34, sal de sodio

^El compuesto 18b ^{(98 m g, 0 ,096 m m ol) se tra tó con un a so lu c ió n d e m e tila m in a en E tO H (30% en E tO H , 5} m l). D e spu és de a g ita r a 40° C d u ra n te 1 h, lo s so lve n te s v o lá tile s se e va p o ra ro n a p re s ió n red uc ida . El só lido b lanco resu ltan te se d iso lv ió en un a m ezc la de agua /C H 3C N (15 /4 m l), lu eg o se lavó con D C M (10 ml x 3). La ca p a a cu o sa ^{se lio filizó pa ra d a r el} compuesto 34 ^{(61 m g) co m o un só lido b lan co . E S I-M S : m /z= 662.2 [M+H]+.}

El só lido se pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (C o lum n a : X b rid g e 10 pm 150 x 30 m m , C o n d ic ió n : a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - C H ³CN B de In ic io : 8, B F ina l 38, T ie m p o de g ra d ie n te (m in ): 7 ,100 % de B ^{T ie m p o de re tenc ión (m in ): 0, C a ud a l (m l/m in ): 25) pa ra d a r el} compuesto 34, sal de amonio ^{co m o un só lido b lan co . E S I-M S : m /z= 662.3 [M H]+; 1H N M R (400 M H z, D2O )} 5^{8.50-8.11 (m, 1H), 8.08 -7.86 (m , 1H), 7.81 -7.56 (m,} 1H), 6.95 -6.58 (m, 1H), 6.41-6.01 (m, 2H ), 5.76 -5.05 (m, 4H ), 5.01 -4.76 (m, 1H), 4.45 -3.93 (m, 3H ), 3.81 -3.23 (m, ^{2H ); 19F N M R (376 M H z, D 2O )} 5 ^{-196.50 -197.49 , -197.63 , -198.85 ; 31P N M R (162 M H z, D 2O )} 5^{-2.25 (1s, 1P)}

^{P rep a ra c ión de l} Compuesto 34, sal de sodio

C o n ve rs ió n de sa l: se añ ad ió D o w ex 50 W x 8, 200 -400 (6 m l, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con ag ua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g u a d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó s u a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a hasta que se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió u n a so luc ión de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g u a (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta q u e se v o lv ió neu tra . La sal de TEAA del compuesto 34 ^{(44 m g) se d iso lv ió en una m ezc la de ag ua d e s io n iza d a . C H 3CN (4 :1 ), a ñ a d id o a la} pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e lu yó con a g u a d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s ap ro p ia d a s se a g rup a ron y lio filiza ron ^{ha s ta la} sal de sodio del Compuesto 34 ^{(43 ,5 m g) co m o un só lido b lanco . 1H} Nm R ^{(400 M H z, D2O )} 5 ^{ppm 8.29 (s,} 1H), 7.98 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.75 (b r s, 1H), 6.31 -6.17 (m, 2H ), 5.73 -5.58 (m, 1H), 5.57 -5.39 (m , 1H), 5.31 -5.12 (m, 1H), 4.96 -4.82 (m, 1H), 4.68 (b r d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.33 (b r d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.25 -4.06 (m, 2H ), 3.62 (dd, J= 2.4 , 13.4 ^{Hz, 1H), 3.43 (b r d, J = 13.0 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D 2O )} 5 ^{ppm -2.15 (s, 1P ); 19F N M R (376 M H z, D2O )} 5 ^ppm -196.86 (s, 1 F), -198.50 (s, 1F); E S I-M S : m /z= 662.2 [M+H]+.

^{P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 19b

S e a ñ ad ie ro n su ce s iva m e n te im idazo l (31 g, 456,1 m m ol) y T B S C l (45 ,8 g, 304 ,0 m m ol) a un a so luc ió n de ^{N 6 -B e n z o il-5 -O -(4 ,4 ,-d im e to x itr it il) -2 '-d e s o x ia d e n o s in a (}19a^{, [64325 -78 -6 ], 50 ,0 g, 76 ,0 m m ol) en D M F seca (750} m l). L a m ezc la se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te h a s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (a p ro x im a d a m e n te 3 h), d e sp u é s de lo cua l la so luc ió n de la reacc ión se d ilu yó con E tO A c y se lavó con a g u a . L a ca p a o rg á n ica se secó sob re N a ² S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo b ru to ob te n id o se vo lv ió a p re c ip ita r con D C M y ^{hexano pa ra o b te n e r el co m p u e s to} 19b ^{co m o una e sp u m a b la n ca (68 g, b ru to ). E S I-M S : m /z 771.0 [M H]+.}

^{P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 19c

^{S e d iso lv ió el co m p u e s to} 19b ^{(68 ,0 g, 88 ,3 m m ol) en CHCl3 (1564 ml) y se en frió a 0° C. S e añ a d ió una} so luc ió n de m o n o h id ra to d e p T S A (20,1 g, 105,9 m m ol) en m e tano l. La m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 30 m in , d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió N aHCO 3 acu oso sa tu ra do pa ra in ac tiva r. La cap a a cu o sa se ex tra jo con D C M . Las fa se s o rg á n ic a s c o m b in a d a s se seca ron so b re Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p res ión red uc ida . La pu rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ión : ^{M eO H al 0 -1% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to} 19c ^{co m o una e sp u m a b la n q u e c in a (27 g). 1H N M R (500 M H z,} DM SO -d6) 5 ppm : 11.20 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 6.47 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 5.06 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.65 (m, 1H), 3.90 (q, J=4.1 Hz, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.53 (m , 1H), 2.92 (m , 1H), 2.36 (qd, J= 6.4 , 2.8 Hz, 1H), 0.92 (s, 9H ), 0.13 (s, 6H ); E S I-M S : m /z 470.0 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 19d

S e añ ad ió g o ta a g o ta c lo ru ro de m esilo (5,1 m l, 66 ,7 m m o l) a un a so luc ió n de l co m p u e s to 19 c (27 ,0 g, 57 ,5 m m o l) en p ir id in a seca (135 m l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 0° C ha s ta q u e se c o m p le tó la co n ve rs ió n . (ap rox. 3 h), d e sp u é s de lo cua l se in ac tivó con m e tan o l y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo o b te n id o se d iso lv ió en E tO A c y se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra do . La ca p a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r el p ro d u c to m es ilado . El p ro d u c to b ru to se d iso lv ió en D M F se ca (256 m l) se g u id o de la ad ic ió n de a z id a de sod io (30 ,5 g, 468 ,0 m m ol). La m e zc la de la reacc ión se ag itó a 60° C d u ra n te 5 h, d e sp u é s de lo cua l se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te , se d ilu yó con E tO A c y se lavó con N aH C O 3 a cu o so sa tu ra d o y agua . La c a p a o rg á n ic a se secó so b re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . La p u rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -1 % en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 19d co m o un a e sp u m a (24 g, ren d im ien to : 84% ). 1H N M R (500 M Hz, D M S O -ds) 5 ppm : 11.19 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.05 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 6.51 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 4.71 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.65 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 13.1, 4.8 Hz, 1H), 3.06 (m , 1H), 2.41 (qd, J= 6.7 , 4.0 Hz, 1H), 0.92 (s, 9H ), 0.14 (s, 6H ); E S I-M S : m /z 495.0 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 19e

S e h id ro gen ó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 19d (10 ,0 g, 20 ,2 m m o l) en M eO H (100 m l) a p res ión a tm o s fé rica a te m p e ra tu ra a m b ie n te sob re P d/C (20% sob re ca rb on o , 1 g). La m e zc la de la reacc ión se filtró so b re t ie rra de d ia to m e a s , la tie rra de d ia to m e a s se e n ju a g ó con M eO H . El f iltra d o se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r el co m p u e s to a m in a co m o un a e sp u m a b lan ca (9,4 g, b ru to ). El p ro d u c to b ru to (9,4 g) se d iso lv ió en DC M (395 ml), se g u id o de la ad ic ió n de 4 -n itro fe n o l (8 ,38 g, 60 ,2 m m ol), Et³ N (16 ,9 m l, 120 ,4 m m o l) y ta m ice s m o lecu la re s a c tiva do s . La m ezc la resu ltan te se en frió a -78° C ba jo N ² d e s p u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta u n a so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (14 ,28 g, 60 ,2 m m o l) en DC M (45 m l), y se c o n tin u ó ag ita n d o ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 2 h). La m ezc la de la reacc ión se c a le n tó a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se lavó con N aH C O 3 acu oso sa tu ra d o y agua . La fa se o rg á n ic a se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -50 % en he xano) p a ra d a r e l c o m p u e s to 19e co m o u n a e sp u m a (6,4 g, ren d im ien to : 47 % ). 1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) 5 ppm : 11.20 (s, 1H), 9.09 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.70 (d, J=2.1 Hz, 2H ), 8.29 (td, J= 6.2 , 3.9 Hz, 2H), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.54 (m, 4H ), 6.50 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.01 (m , 1H), 3.51 (dt, J= 14.2 , 5.7 Hz, 1H), 3.39 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2.38 (qd, J= 6.7 , 2.8 Hz, 1H), 0.91 (s, 9H ), 0.13 (s, 6H ); E S I-M S : m /z 670.0 [M+H]+ P aso 5. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 19 f

S e d iso lv ie ro n p o r s e p a ra d o 5 '-O -(4 ,4 '-D im e to x itr it il) -N 2 -is o b u tir il-3 '-O -m e til-D -g u a n o s in a ([103285 -33 -2 ], 2,5 g, 3 ,73 m m ol), co m p u e s to 19e (2 ,9 g, 4 ,48 m m o l) y D M A P (2 ,27 g, 18 ,6 m m o l) en DC M seco (3 x 10,0 m l) y se seca ron en ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á ac tiva do s d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra inerte . Luego, las so lu c io n e s de 5 '-O -(4 ,4 '-d im e to x itr it il)-N 2 -is o b u tir il-3 '-O -m e til-D -g u a n o s in a y c o m p u e s to 22 c se tra n s fir ie ro n s u ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión q u e c o n te n ía la so luc ió n de D M A P . La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó d u ran te 22 h. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y se lavaron a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N aH C O 3 acu oso sa tu ra do , s a lm u e ra y NH4Cl a cu oso sa tu ra do . Las fa se s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron so b re Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -1 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 19 f (2 ,04 g, ren d im ien to : 45 ,5% ). 1H N M R (500 M H z, D M S O -ds) 5 ppm : 12.10 (s, 1H), 11.54 (s, 1H), 11.20 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.05 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.29 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.24 (t, j= 7.6 Hz, 2H ), 7.18 (t, J= 9.6 Hz, 5H ), 6.81 (dd, J= 8.3 , 6.2 Hz, 4H ), 6.46 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 6.16 (d, J=4.1 Hz, 1H), 5.55 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.38 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.12 (q, J= 4.6 Hz, 1H), 3.86 (dd, J= 9.0 , 6.2 Hz, 1H), 3.71 (s, 6H ), 3.37 (s, 3H ), 3.23 (m , 5H ), 2.97 (m, 1H), 2.74 (m, 1H), 1.09 (m, 6H ), 0.88 (s, 9H ), 0.11 (s, 6H ); E S I-M S : m /z 1201.0 [M+H]+. P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 19g

S e a ñ ad ie ro n Et3N (11,61 m l, 83 ,3 m m o l) y E t3N .3H F (1 ,35 m l, 8 ,33 m m o l) a un a so luc ió n de l co m p u e s to 19 f (2,5 g, 2 ,08 m m o l) en p ir id in a (16 ,5 m l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 45° C hasta la c o n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 5 h) y luego se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te . S e añ ad ió is o p ro p o x itr im e tils ila n o (5 ,9 m l, 33 ,28 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . La c o n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a d io e l c o m p u e s to b ru to 5 '-d e sp ro te g id o que se v o lv ió a d is o lv e r en DC M (59 ,0 m l). S e a ñ ad ie ro n ag ua (0 ,17 ml, 9 ,65 m m o l) y ác ido d ic lo ro a cé tico (6 ,3 m l de D C M al 10% , 7 ,72 m m ol), la m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 1 h (con ve rs ió n to ta l), d e sp u é s de lo cua l se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0 ,77 ml, 9 ,65 m m o l) y unas go tas de m e tano l. El res idu o ob ten ido tra s la co n ce n tra c ió n a p re s ió n re d u c id a se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g rad ien te de e lu c ió n : M eO H al 0 -9 % en D C M ) p a ra d a r el c o m p u e s to 19g (1 ,4 g, ren d im ien to : 86% ). 1H N M R (500 M H z D M SO -da) 5 ppm : 12.08 (s, 1H), 11.62 (s, 1H), 11.19 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 6.42 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 6.08 (d, J= 6.2 Hz, 1 ^h ), 5.45 (d, J=4.1 Hz, 1 ^h ), 5.38 (dd, J= 6.5 , 5.2 Hz, 1H), 5.26 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.36 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 2.5 Hz, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.79 (td. J= 5.9 , 3.2 Hz, 1H), 3.61 (dtd, 37.3 , 8.3 , 3.8 Hz, 2H ), 3.41 (s, 3H ), 3.09 (d, J=15.1 Hz, 3H ), 2.83 (m , 1H), 2.74 (td, J= 13.4 , 6.7 Hz, 1H), 2.33 (qd, J= 6.7 , 3.6 Hz, 1H), 1.11 (q, J= 3.4 Hz, 6H ), E S I-M S : m s 784.0 [M+H]+.

^{P aso 7. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to} 19h

^{S e tra tó un a so luc ió n de l co m p u e s to} 19g ^{(500 mg, 0 ,638 m m ol) y 1 H -te trazo l (5 ,59 m l de M eC N al 3 -4% ) en} T H F seco (26 m l) con ta m ice s m o le cu la re s de 3 A d u ra n te 2 h en a tm ó s fe ra inerte . S e a ñ a d ió en un a po rc ió n 2-c ia n o e til-N ,N ,N ,,N f- te tra ( iso p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (250 m g, 0 ,829 m m ol) y la m ezc la d e la rea cc ió n se ag itó du ran te la noche . S e añ ad ió t-B u O O H (174 pl de so luc ió n 5 ,5 M en d e can o , 0 ,96 m m ol) y se c o n tin u ó a g ita n d o d u ra n te 1 h. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n e x h a u s tiv a m e n te con D C M . El f iltra d o se ^{co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r el co m p u e s to b ru to} 19h ^{qu e se usó d ire c ta m e n te en el pa so s ig u ie n te . E S I-}M S: m /z 899.5 [M+H]+.

^{P aso 8: P rep a ra c ión de l} Compuesto 12, sal de sodio

^{El co m p u e s to b ru to} 19h ^{se ag itó en un a so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta no l (10 m l) a te m p e ra tu ra} a m b ie n te d u ra n te 2 h. La rea cc ió n de la m ezc la se c o n ce n tró a ba ja p res ión . El p ro d u c to b ru to se tr itu ró en M eC N s e g u id o d e un a p u rifica c ió n p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 250 x 30 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to de a m o n io a cu o so al 0 ,25 % (A) - M eO H (B); g ra d ie n te d e e luc ió n ) pa ra d a r el compuesto 12, sal de amonio^{. La c o n ve rs ió n en la sa l de sod io se rea lizó p o r e luc ió n de una so luc ió n acu osa sob re un a co lu m n a c o m p a c ta d a con res ina de in te rca m b io ió n ico IR Na pa ra d a r el} compuesto 12, sal de sodio c o m o un s ó lid o e sp o n jo so b la n co d e sp u é s de la lio filizac ió n (43 mg, rend im ien to : 10% ). 1H N M R (600 M H z, D M S O -da, 60° C.) 5 ppm 10.36 (b r s, 1H), 8.54 (b r s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.11 (s, 2H ), 6.76 (b r s, 2H ), 6.35 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 5.98 (b r s, 2H ), 5.14 (b r s, 1H), 4.28 (b r s, 2H ), 4.19 (s, 1H), 4.09 (s, 1H), 3.86 -3.95 (m, 1 ^h ), 3.48 (s, 3H ), 3.34 -3.46 (m, 1H), 3.09 -3.26 (m, 1H), 2.87 -2.99 (m, 1H), 2.56 -2.65 (m, 1H); 31P N M R (162 M Hz, D M SO -d6) 5 ppm -1.88 (s, 1 P);

E S I-M S : m /z 670.2 [M -H]+.

E je m p lo 20

Compuesto 36

S e ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te ha s ta la co n ve rs ió n c o m p le ta (5 h) una so lu c ió n de N -b e n zo il-3 '-d e so x i-3 '-f lu o ro -a d e n o s in a 20 a [C A S 129054 -67 -7 ] (7 ,4 g, 18 ,5 m m ol) en p ir id in a seca (138 m l), a la qu e se a ñ a d ie ro n D M A P (1 ,13 g, 9 ,2 m m ol) y D M T rC l (10 g, 29 ,7 m m ol) (en po rc io nes ). La m ezc la d e la reacc ión se in ac tivó con m etano l (15 ml) y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo o b te n id o se d iso lv ió en ace ta to de e tilo y se lavó con agua . La cap a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . La p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l d e s ílice (g ra d ie n te d e e luc ió n : M eO H al 0 -2% en D C M ) pa ra d a r el ^{co m p u e s to} 20b ^{co m o un a e sp u m a b la n ca (9 ,8 g, ren d im ien to : 78% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 3.31 (q,} J= 5.0 Hz, 1H), 3.36 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H ), 4.41 (dt, J= 26.4 , 4.6 Hz, 1H), 5.19 (m , 1H), 5.28 (dd, J = 11.7, 7.6 Hz, 1H), 6.09 (dd, J= 6.9 , 4.8 Hz, 2H ), 6.87 (m, 4H ), 7.24 (m, 7H ), 7.39 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H ), 7.65 (m, 1H), 8.06 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 8.62 (d, J = 3.4 Hz, 2H ), 11.27 (s, 1H); E S I-M S : m /z 676.1 [M+H]+.

^{P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to} 20c

S e ca rg ó un m a traz d e reacc ión con D M A P (2 ,62 g, 21 ,4 m m o l), D C M seco (50 m l) y ta m ic e s m o lecu la re s de 3 Á a c tiva do s . La m ezc la resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra ine rte . S im u ltá n e a m e n te , se seca ron una so luc ió n de l co m p u e s to 20 b (2 ,9 g, 4 ,29 m m o l) y u n a so luc ió n de l co m p u e s to 19e (3 ,4 g, 5 ,15 m m ol), c a d a uno en DC M seco (2 x 50 m l), en ta m ice s m o lecu la re s ac tiva do s de 3Á (ap rox. 2 ho ras). A m ba s so lu c io n e s (co m p u e s to 20 b y c o m p u e s to 19c re sp e c tiva m e n te ) se tra n s fir ie ro n s u ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 24 h. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N aH C Ü 3 a cu o so sa tu ra do , s a lm u e ra y NH4Cl a cu oso sa tu ra do , se secó sob re Na2SÜ4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -1% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 20 c (4 ,2 g, ren d im ien to : 81% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 11.23 (d, J= 36.5 Hz, 2H ), 8.70 (s, 1H), 8.63 (d, J = 20.0 Hz, 2H ), 8.53 (s, 1H), 8.04 (q, J= 3.4 Hz, 4H ), 7.65 (m, 2H ), 7.55 (td, J= 7.6 , 4.8 Hz, 4H ), 7.35 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.22 (m, 7H ), 6.83 (m, 4H ), 6.43 (q, J=7.1 Hz, 2H ), 6.05 (td, J = 11.0, 6.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 54.4 Hz, 1H), 4.53 (m, 2H ), 3.88 (t, J=3.1 Hz, 1H), 3.70 (s, 6H ), 3.37 (m, 2H ), 3.20 (m, 2H ), 2.97 (m, 1H), 0.88 (s, 9H ), 0.09 (d, J=2.1 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 1206 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 20 d

S e a ñ a d ie ro n Et³ N (19, 4 ml, 139, 4 m m ol) y E t3N .3H F (2, 2 m l, 13, 9 m m o l) a una so luc ió n de l c o m p u e s to 20 d (4, 2 g, 3, 4 m m ol) en p ir id in a (70 m l). La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó a 45° C ha s ta la c o n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 5 h) y luego se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te . S e añ ad ió iso p ro p o x itr im e tils ila n o (9 ,9 m l, 55 ,7 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . F ina lm en te , la m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión re d u c id a y se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -4 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 20d co m o una e sp u m a (3,0 g, ren d im ien to : 78% ).

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm : 11.21 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.62 (d, J= 9.6 Hz, 2H ), 8.53 (s, 1H), 8.04 (m, 4H ), 7.65 (m, 2H ), 7.55 (td, J= 7.7 , 3.7 Hz, 4H ), 7.36 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.21 (m, 7H ), 6.83 (m, 4H ), 6.43 (dd, J = 16.2, 6.5 Hz, 2H ), 6.04 (td, J = 11.0, 6.2 Hz, 1H), 5.66 (dt, J= 53.5 , 3.4 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.49 (dd, J= 24.1 , 2.8 Hz, 1H), 4.39 (s, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.71 (s, 6H ), 3.40 (q, J= 5.3 Hz, 2H ), 3.20 (m , 2H ), 2.85 (q, J= 6.9 Hz, 1H ); ESI-M S : m /z 1090 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 20 e

S e d iso lv ió e l co m p u e s to 20 d (3 ,0 g, 2 ,7 m m o l) en DC M (84 m l), se añ ad ie ro n a g u a (250 gl, 13,7 m m o l) y ác ido d ic lo ro a cé tico (9,1 ml de 10% en DC M , 10 ,9 m m ol). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 1 h (con ve rs ió n co m p le ta ), d e sp u é s de lo cua l se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (1,1 m l, 13,7 m m o l) y a lgu nas g o ta s de m e tano l. El res iduo o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de ge l de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -6 % en D C M ) p a ra d a r el co m p u e s to 20 e (1 ,9 g, ren d im ien to : 87% ). 1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm : 11.28 (s, 1H), 11.21 (s, 1H), 8.72 (d, J=4.1 Hz, 3H), 8.62 (s, 1H), 8.04 (d, J= 8.3 Hz, 4H ), 7.64 (m, 2H ), 7.55 (q, J= 6.9 Hz, 4H ), 6.40 (m, 2H ), 5.53 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 5.42 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.45 (dt, J= 26.9 , 3.4 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.79 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 3.68 (d, J = 20.0 Hz, 2H ), 3.10 (m, 3H ), 2.84 (m, 1H), 2.32 (q, J= 3.4 Hz, 1H); E S I-M S : m /z 790 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 20 f

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 20 e (500 m g, 0 ,63 m m o l) y 1 H -te tra zo l (5 ,54 ml de un a so luc ió n al 3-4 % en M eC N ) en T H F seco (31 m l) con ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva d o s d u ran te 2 h en a tm ó s fe ra inerte . d e s p u é s de lo cua l se añ ad ió en u n a po rc ión 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (210 m g, 0 ,70 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 2 h de sp u é s . S e añ ad ió un a ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (95 mg, 0 ,32 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . S e añ ad ió tB u O O H (196 gl de so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 1,08 m m o l) y la m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te un a ho ra m ás. Los ta m ice s m o lecu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n e x h a u s tiv a m e n te con DC M . El f iltra d o se lavó con sa lm u e ra y N aHCO 3 acu oso sa tu ra do , se secó con M gSO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te d e e lu c ió n : M eO H al 0 -10% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 20 f (56 mg, ren d im ien to : 10% ). E S I-M S : m /z 905.5 [M+H]+.

P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 , s a l d e s o d io

S e ag itó e l c o m p u e s to 20 f (56 mg, 0 ,062 m m o l) en u n a so lu c ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h. La reacc ión de la m ezc la se co n ce n tró a ba ja p res ión . El p ro d u c to b ru to se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a pu rifica c ión p o r H P LC de fase in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 5 gm , 250 x 30 m m , fa se m óvil, b ica rb o n a to de am o n ía co a cu oso al 0 ,25% (A) - M eC N (B), e lu c ió n en g ra d ie n te ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 36 , s a l d e a m o n io . La c o n ve rs ió n en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de u n a so luc ión a cu o sa sob re una co lu m n a c o m p a c ta d a con res ina de in te rca m b io ión ico IR N a p a ra p ro p o rc io n a r el c o m p u e s to 36, s a l d e s o d io co m o un só lido e s p o n jo s o b lan co de sp u é s de la lio filizac ió n (17 ,5 m g, ren d im ien to : 42 % ). 1H N M R (600 M H z, DM SO -d6, 81° C .) 5 ppm 8.71 (b r s, 1H), 8.34 (b r s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 6.94 (b r s, 2H ), 6.90 (b r s, 2H ), 6.32 (t, J=7.1 Hz, 1H), 6.22 (b r s, 1H), 5.68 (b r d, J = 26.8 Hz, 1H), 5.42 (b r d, J = 51.9 Hz, 1H), 5.10 (b r s, 1H), 4.46 (b r d, J = 25.5 Hz, 1H), 4.10 -4.19 (m, 1H), 4.04 (b r s, 1H), 3.79 (b r s, 1H), 3.18 (m, J = 11.4 Hz, 1H), 2.92 (s, 1H), 2.53 (br s, 1H); 31P N M R (162 M H z, D M S O -t/e ) 5 ppm -1.74 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 644.4 [M H ]+.

E je m p lo 21

C o m p u e s to 29

S e ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox . 2 ,5 h) un a so luc ió n d e 3 '-d e so x i-3 '-f lu o ro in o s in a 21 a [C A S 117517 -20 -1 ] (2,2 g, 8 ,14 m m o l) en p irid ina seca (33 m l), a la qu e se le a ñ ad ie ro n D M A P (0 ,49 g, 4 ,0 m m o l) y D M T rC l (4 ,4 g, 13 m m ol) (en po rc io nes ). La m e zc la de la rea cc ió n se in ac tivó con m etano l (10 ml) y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo o b te n id o se d iso lv ió en ace ta to de e tilo y se lavó con agua . La cap a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . La p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l d e s ílice (g ra d ie n te d e e luc ió n : M eO H al 0 -2% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 21 b co m o un a e sp u m a b la n q u e c in a (3,3 g, ren d im ien to : 71% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 8.22 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 8.3 Hz, 2H ), 7.28 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.23 (m, 5H ), 6.86 (dd, J= 8.3 , 6.2 Hz, 4H ), 5.92 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.14 (dd, J= 54.1 , 4.5 Hz, 1H), 5.02 (dq, J= 23.2 , 3.9 Hz, 1H), 4.35 (dt, J= 25.9 , 4.3 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H ), 3.29 (dq, J= 37.5 , 5.2 Hz, 2H ); E S I-M S : m /z 572.0 [M+H]+.

P aso 2. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 21 c

El c o m p u e s to 21 b (0 ,66 g, 1,15 m m ol), el su lfa m a to 17a (1,21 g, 1 ,38 m m o l) y D M A P (0 ,704 g, 5 ,76 m m ol) se d iso lv ie ro n ca d a uno p o r s e p a ra d o en DC M seco (3 x 20 ,0 m l) y se seca ron en ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva d o s d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra ine rte . Luego, las so lu c io n e s de co m p u e s to 21 b y su lfa m a to 17a se tra n s fir ie ro n s u ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión qu e c o n te n ía la so luc ió n de D M A P . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 24 h. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r filtra c ió n y se en ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó su ce s iva m e n te con N aH C Ü 3 a cu o so sa tu ra d o y NH4Cl a cu oso sa tu ra do , se secó sob re Na2SÜ4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 21 c co m o un a e sp u m a b la n q u e c in a (0 ,475 g, ren d im ien to : 31% ).

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 pp m : 12.47 (s, 1H), 11.23 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.03 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.84 (s, 1H), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.48 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.36 (q, J= 4.8 Hz, 4H ), 7.32 (m, 4H ), 7.23 (t, J= 7.6 Hz, 4H ), 7.19 (t, J= 7.9 Hz, 5H ), 6.90 (dd, J= 9.0 , 6.9 Hz, 4H ), 6.81 (dd, J= 9.0 , 6.2 Hz, 4H ), 6.34 (m, 1H), 6.23 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.78 (m, 2H ), 5.50 (d, J = 53.7 Hz, 1H), 4.72 (m, 2H ), 4.43 (d, J=24.1 Hz, 1H), 4.01 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.70 (t, J= 2.4 Hz, 12H ), 3.25 (dd, J= 10.7 , 3.8 Hz, 1H), 2.99 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.70 (dd, J= 14.5 , 9.0 Hz, 1H ); E S I-M S : m /z 1310.0 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 21 d

S e ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te u n a so luc ió n de l co m p u e s to 21 c (0 ,453 g, 0 ,34 m m o l) en DC M (12 ,6 m l), a la que se a ñ ad ie ro n D C A (1 ,14 m l de DCM al 10% , 1,38 m m o l) y a g u a (31 pl, 1,72 m m o l) ha s ta la d e sp ro te cc ió n co m p le ta (ap rox. 2 h). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0 ,14 m l, 1,72 m m o l) y a lg u n a s go tas de m e tano l. La su sp e n s ió n resu lta n te se ag itó d u ra n te 20 m in , se filtró y se secó pa ra o b te n e r el co m p u e s to 21 d (0,21 g, ren d im ien to : 86% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 12.5 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 11.25 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.69 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.09 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 8.05 (d, 7.6 Hz, 2H ), 7.66 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 6.32 (dd, J= 20.0 , 2.1 Hz, 1H), 6.21 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.85 (d, J= 62 Hz, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.49 (m, 3H ), 5.34 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.40 (dt, J= 26.9 , 3.4 Hz, 1H), 3.92 (q, J= 6.0 Hz, 1H), 3.65 (t, J=4.1 Hz, 2H ), 3.17 (t, J= 6.2 Hz, 2H ), E S I-M S : m /z 706.0 [M+H]+.

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 21 e

S e tra tó con ta m ice s m o le cu la re s de 3Á d u ra n te 2 h en una a tm ó s fe ra ine rte u n a so luc ió n de l co m p u e s to 21 d (260 m g, 0 ,37 m m o l) y 1 H -te tra zo l (2 ,15 ml de M eC N al 3 -4% , se ca d o sob re ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á a c tiva d o s ) en D M F /T H F (1:2, 30 m l, seca do sob re ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva do s), d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (129 pl, 0,41 m m o l) en una po rc ió n . La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te la noche . S e añ ad ió una ca n tid a d ad ic io n a l de 2-c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo rd ia m id ita (23 pl, 0 ,074 m m ol) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te un d ía m ás pa ra o b te n e r un a co n ve rs ió n co m p le ta . S e añ ad ió tB u O O H (134 pl de so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 0 ,74 m m o l) y la m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te u n a ho ra m ás. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y se la va ro n con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó e x te n sa m e n te con agua, se secó con M gSO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) p a ra d a r el c o m p u e s to 21 e (20 m g, ren d im ien to : 7% ).

E S I-M S : m /z 820.4 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 , s a l d e s o d io

S e ag itó e l c o m p u e s to 21 e (20 m g, 0 ,024 m m ol) en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te ha s ta la c o n ve rs ió n co m p le ta (~1 h). La reacc ión de la m ezc la se co n ce n tró a ba ja p res ión . El p ro d u c to b ru to resu ltan te se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a pu rifica c ió n p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 250 x 30 m m ; fase m óvil: b ica rb o n a to de a m o n íaco a cu oso al 0 ,25% (A) -M eC N (B); g ra d ie n te de e luc ió n ) p a ra d a r el c o m p u e s to 29 , s a l d e a m o n io . La c o n ve rs ió n fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re una c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina de in te rcam b io ió n ico de sod io c a tió n ico pa ra p ro p o rc io n a r el c o m p u e s to 29 , s a l d e s o d io co m o un só lid o e sp o n jo so b lanco d e s p u é s de la lio filizac ió n (13 ,5 mg, ren d im ien to : 80% ). 31P N M R (162 M H z, DM SO -d6) 5 ppm -2.06 (s, 1 P), ESI-M S: m /z 663.3 [M+H]+.

E jem p lo 22

p u e s to 49

Compuesto 49, sal de sodio P aso 1: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 22 b

S e h id ro gen ó una so luc ió n de rib ós id o de 6 -c lo ro p u rin a 22a (10 ,0 g, 34 ,88 m m ol, C A S N° 5399 -87 -1 ) en T H F (200 m l) a p res ión a tm o s fé rica a te m p e ra tu ra am b ie n te en P d/C (10 % sob re ca rb on o , 8 g) en p re se n c ia de K ² C O ³ (9 ,64 g, 69 ,77 m m o l). L a m e zc la de la reacc ión se filtró sob re tie rra de d ia to m e a s , la t ie rra de d ia to m e a s se e n ju a g ó s u ce s iva m e n te con T H F y 5:1 de T H F /M e O H . Los filtra d o s c o m b in a d o s se co n ce n tra ro n a p re s ió n red uc ida pa ra d a r el co m p u e s to b ru to 22 b (6 ,3 g) q u e se usó ta l cua l en e l paso s ig u ie n te . E S I-M S : m /z 253.1 [M+H]+.

P aso 2. P rep a ra c ión de l co m p u e s to 22 c

S e ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la c o n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 2 h) u n a so luc ió n de l c o m p u e s to b ru to 22 b (6,1 g) y D M T rC l (11 ,93 g, 35 ,20 m m o l) en p ir id in a se ca (300 m l). La m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con DC M y se lavó con sa lm ue ra . La c a p a a cu o sa se v o lv ió a e x tra e r con D C M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron sob re Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . La p u rifica c ió n se rea lizó m ed ian te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 1-5% en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 22 c co m o un só lido b lan co (11 ,7 g). 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 9.21 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.33 (d, J= 6.8 Hz, 2H ), 7.15 -7.26 (m, 7H ), 6.80 (t, J= 9.3 Hz, 4H ), 6.07 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.62 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 5.29 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.78 (q, J=5.1 Hz, 1H), 4.34 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 4.11 (q, J= 4.8 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H ), 3.71 (s, 3H), 3.21 -3.25 (m, 2H ), E S I-M S : m /z 555.1 [M+H]+.

P aso 3. P rep a ra c ión de los C o m p u e s to s 22 d y 22 e

S e ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te la no che un a so luc ió n de l co m p u e s to 22 c (6,7 g, 12,1 m m o l) en D M F (70 m l) a la q u e se añ ad ie ro n im idazo l (2 ,47 g, 14,5 m m o l) y T B S C l (2 ,19 g, 2 ,39 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con E tO A c y se lavó con sa lm ue ra . La fa se o rg á n ica se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró al vac ío . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (e luc ió n en g ra d ien te : E tO A c al 10 -33% en é te r de pe tró le o ) p a ra d a r e l c o m p u e s to 22 d (3 ,3 g, ren d im ien to : 40 % ) co m o el p r im e r isóm ero en e lu ir y el c o m p u e s to 22 e (3 ,5 g, ren d im ien to : 43 % ) co m o se g u n d o isó m ero en e lu ir. C o m p u e s to 22 d : 1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 9.22 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.38 (d, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.16 -7.29 (m, 7H ), 6.83 (dd, J=8.5 , 4.9 Hz, 4H ), 6.09 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.23 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.89 (t, J= A .9 Hz, 1H), 4.27 (q, J= 5.2 Hz, 1H), 4.14 (q, J= 4.5 Hz, 1H), 3.72 (s, 6H ), 3.29 (b r d, J= 4.6 Hz, 2H ), 0.72 (s, 10H), -0.05 (s, 3H ), -0.17 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 669.2 [M H ]+.

C o m p u e s to 22 e : 1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 9.20 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.29 -7.40 (m, 2H ), 7.12 -7.27 (m, 7H ), 6.82 (m, J= 8.8 , 6.8 Hz, 4H ), 6.04 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.92 (q, J= 5.2 Hz, 1H), 4.52 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 4.05 -4.13 (m, 1H), 3.72 (s, 6H ), 3.36 (dd, J = 10.5, 4.5 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 10.5 , 5.0 Hz, 1H), 0.84 (s, 9H ), 0.09 (s, 3H ), 0.05 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 669.2 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 22 f

S e a ñ a d ie ro n ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva d o s a un m a traz de reacc ión c a rg a d o con el c o m p u e s to 22e (1,31 g, 1 ,96 m m o l) y su lfa m a to 17a (1 ,88 g, 2 ,14 m m o l) en T H F seco (85 m l). La m ezc la resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra inerte . S im u ltá n e a m e n te , se secó en ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva do s un a so luc ió n de D M A P (1 ,2 g, 9 ,82 m m o l) en T H F seco (15 m l), d e sp u é s de lo cua l se tra n s fir ió al m a traz de reacc ión . La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó a 50° C d u ra n te la noche . Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y se en ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con ag ua y N aH C O 3 a cu oso sa tu ra do , se secó sob re Na2SO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) p a ra d a r el c o m p u e s to 22 f. P aso 5. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 22 g

S e ag itó una so luc ió n de l co m p u e s to 22 f (2 ,4 g, 1,71 m m o l) en DCM (80 m l), a la q u e se a ñ a d ie ro n D C A (0 ,563 m l, 6 ,83 m m o l) y a g u a (154 pl, 8 ,54 m m ol), a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta su co m p le ta d e sp ro te cc ió n (a p ro x im a d a m e n te 1 h). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (688 pl, 8 ,54 m m o l) en m e tan o l (1 m l) y se lavó con agua . La c a p a o rg á n ic a se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -10% en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 22 g . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.26 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.57 (s, 1 H), 8.44 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.00 -8.08 (m, 2H ), 7.61 -7.75 (m, 1H), 7.49 -7.59 (m, 2H ), 6.34 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 6.28 (dd, J= 19.2 , 2.1 Hz, 1H), 5.79 (d, J=6.1 Hz, 1H), 5.39-5.61 (m, 2H ), 5.21 -5.32 (m, 1H), 4.69 (dd, < /= 4.8 , 2.8 Hz, 1H), 4.39 -4.55 (m, 1H), 4.02 (q, j= 3.5 Hz, 1H), 3.78 -3.87 (m, 1H), 3.66 -3.76 (m, 1H), 3.54 -3.62 (m, 1H), 2.95 -3.14 (m, 2H ), 0.91 (s, 9H ), 0.13 (s, 3H ), 0.13 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 801.3 [M+H]+.

P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 22 h

S e tra tó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 22 g (100 m g, 0 ,129 m m o l) y 1 H -te tra zo l (2 ,22 ml de u n a so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 0 ,99 m m o l) en T H F seco (3 m l) con ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á d u ra n te 5 m in en N ² d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (75 m g, 0 ,25 m m o l) en T H F seco (1 m l) d u ra n te 10 m in a tra vé s de u n a je r in g u illa (no ta : e l T H F e ra rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y M eC N era rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso). La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 1 h a te m p e ra tu ra am b ie n te . S e añ ad ió u n a so luc ió n de tB u O O H (114 pl de so luc ió n 5~ 6 M en de can o , 0 ,624 m m o l) m ed ia n te una je r in g u illa y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te o tros 30 m in . La m ezc la se d ilu yó con D C M (20 m l), se filtró a tra v é s de un a a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -6 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 22 h (66 mg, 57 % de ren d im ien to ) co m o un só lido b lanco . E S I-M S : m /z= 916.3 [M+H]+.

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 22 i

S e ag itó e l co m p u e s to 22 h (66 m g, 0 ,072 m m o l) en u n a so luc ió n de m e tila m in a al 30% en e ta n o l (5 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 4 h. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El res iduo se d iso lv ió en agua , se lavó con DC M y se lio filizó . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : A g e la D u rashe ll C 18, 5 pm , 150 x 25 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico a cu o so 10 mM (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r e l co m p u e s to 22 i (11 ,6 mg, ren d im ien to : 14 ,5% ). 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 9.57 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.35 (dd, J = 1.5, 9.5 Hz, 2H ), 8.71 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.86 (br, d, J = 19.6 Hz, 1H), 6.18-5.91 (m, 2H ), 5.84 -5.65 (m, 1H), 5.24 (br, s, 1H), 4.88 -4.80 (m, 3H ), 4.74 -4.59 (m, 1H), 4.05 (br, dd, J= 5.4 , 14.4 Hz, 1H), 3.96-3.81 (m, 1H), 1.44 (d, J = 1.3 Hz, 9H ), 0.73 -0.60 (m , 6H ); 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 ppm -198.4 % (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -198.496 (s, 1F); E S I-M S : m /z=759.2 [M H ]+.

P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 49 , s a l d e s o d io

S e ag itó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 22 i (40 mg, 0 ,053 m m o l) en p ir id in a (3 m l), a la q u e se le añ ad ie ro n E t³ N (320 m g, 3 ,16 m m o l) y tr ih id ro flu o ru ro de tr ie tila m in a (254 m g, 1,58 m m ol), a 50° C d u ra n te 4 h. La m ezc la de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra y se d ilu yó con T H F (2 m l). S e añ ad ió is o p ro p o x itr ie tils ila n o (697 m g, 5 ,27 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 1,5 h. El res iduo , o b te n id o tras la co n ce n tra c ió n a p res ión reduc ida , se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (F ase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 150x25 m m ; Fase m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico a cu oso 10 mM (A) - M eC N (B); e luc ió n en g ra d ie n te ) pa ra d a r el c o m p u e s to 49 , s a l d e a m o n io . La c o n ve rs ió n fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de u n a so luc ión a cu o sa sob re u n a c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina de in te rca m b io ión ico de sod io c a tió n ica p a ra p ro p o rc io n a r el c o m p u e s to 49 , s a l d e s o d io co m o un só lido b lan co d e sp u é s de la lio filizac ió n (22 ,5 m g, ren d im ien to : 58% ).

1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.95 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 6.73 -6.58 (m, 1H), 6.53 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.42 -6.33 (m, 1H), 5.93 (br, dd, J= 4.3 , 7.8 Hz, 1H), 5.50 -5.30 (m , 1H), 5.19 -5.04 (m, 1H), 4.88-4.81 (m, 1H), 4.55 -4.44 (m, 2H ), 4.39 -4.32 (m, 1H), 4.25 (ddd, J= 2.3 , 4.9 , 12.2 Hz, 1H), 3.71 (br, d, J = 13.1 Hz, aH ), 3.46 (br, d, J = 12.8 Hz, 1H), 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 ppm -197.119 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -1.984 (s, 1 P), E S I-M S : m /z= 645.2 [M+H]+.

E je m p lo 23

C o m p u e s to (*R ) 16 A y C o m p u e s to (*S ) 16B

S e d iso lv ió el co m p u e s to 13a (900 m g, 1 ,16 m m ol) en un a m e zc la d e A C N an h id ro (103 m l) y T H F an h id ro (103 m l). S e a ñ ad ie ro n 1H -te tra zo l (10 ,2 ml, 3 -4 % en M eC N , seca do en ta m ic e s m o le cu la re s de 3 Á an tes de su uso) y ta m ic e s m o lecu la re s d e 3Á . La m ezc la se ag itó d u ra n te 2 ho ras a te m p e ra tu ra a m b ie n te y luego se añ ad ió 2-c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,48 m l, 1,51 m m ol) de una ve z m e d ia n te un a je rin g u illa . La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 4 ho ras. S e añad ió una ca n tid a d ad ic io na l d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,48 m l, 1,51 m m ol). La m e zc la de la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 1 hora y luego se añad ió d isu lfu ro de fe n ila ce tilo (0 ,7 g, 2 ,33 m m ol). La m ezc la d e la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m inu tos . La m ezc la d e la rea cc ió n se filtró . Los ta m ic e s m o le cu la re s se la va ro n tre s ve c e s con d ic lo ro m e ta n o . El filtrad o co m b in a d o se lavo con un a m ezc la de so luc ió n sa tu ra d a de Na2S2Ü3 y una so luc ión sa tu ra d a de N aH C Ü 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gSÜ 4, se filtró y se e va p o ra ro n los so lve n te s de l filtrado . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a so b re s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -100 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 23 a (152 m g, ren d im ien to : 11% ). E S I-M S : m /z 904.3 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ) 16 A y el C o m p u e s to (*S ) 16B

S e ag itó el co m p u e s to 23 a (152 m g, 0 ,12 m m ol) en m e tilam in a , so lu c ió n al 33 % en e tano l (7 ml, 56 m m ol) a 40° C d u ra n te 3 ho ras. La m ezc la d e la reacc ión se eva p o ró ha s ta la se q u e d a d a p res ión reduc ida . El res iduo se tr itu ró en 10 ml de a ce to n itr ilo an h id ro . El p re c ip ita d o se recog ió po r filtra c ió n y se lavó con a ce to n itr ilo a n h id ro . Se rea lizó una p u rif ica c ió n /se p a ra c ió n de los do s e p ím e ro s con H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (F ase es ta c io n a ria : RP X B rid g e P rep C 18 O B D -10 gm , 50 x150 m m , Fase m óvil: so lu c ió n d e N H ⁴ H C O ³ al 0 ,25 % en agua , M eO H ). Los so lve n te s de la s do s fra cc io n e s pu ras se e lim in a ro n po r lio filiza c ió n . Los res idu os se d iso lv ie ro n en agua y se filtra ro n so b re un a co lu m n a p re la va d a (de agua) c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io ió n ico d e sod io c a tió n ico pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 16 A , s a l d e s o d io (37 m g, 29 % de ren d im ien to ) y el c o m p u e s to (*S ) 16 B , s a l d e s o d io (5 m g, 6% d e ren d im ien to ), am b os com o só lid o s b lancos .

C o m p u e s to (*R ) 16 A , s a l d e s o d io : 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) ó ppm 2.58 -2.69 (m, 1H) 2.95 -3.07 (m, 1H) 3.41 (dd, J= 13.2 , 2.6 Hz, 1H) 3.58 -3.68 (m, 1H) 4.01 (td, J = 11.8, 6.5 Hz, 1H) 4.18 (ddd, J= 13.5 , 11.3, 4.1 Hz, 1H) 4.36 (b r d, J=8.1 Hz, 1H) 4.47 -4.56 (m, 1H) 5.18 -5.29 (m, 1H) 5.75 -5.94 (m , 1H) 5.79 (m, J= 9.0 , 4.1 Hz, 1H) 6.13 (d, 1=3.7 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=19.1 Hz, 1H) 6.78 (br s, 2H ) 7.15 (br s, 2H ) 7.99 (s, 1H) 8.38 (s, 1H) 9.65 (br s, 1H); ESI-M S: m /z 677.0 [M H ]+.

C o m p u e s to (*S ) 16 B , s a l d e s o d io : 31P N M R (162 M H z, D 2O ) ó ppm 55.80 (s, 1 P). E S I-M S : m /z 677.3 [M+H]+.

E je m p lo 24

C o m p u e s to (*R ) 13 A

S e d iso lv ió el co m p u e s to 19g (0 ,6 g, 0 ,77 m m ol) en un a m ezc la de A C N an h id ro (55 iml) y T H F an h id ro (55 m l). S e a ñ a d ie ro n 1H -te tra zo l (8 ,94 ml, 3 -4 % en M eC N , seca do en ta m ic e s m o le cu la re s d e 3 Á a n tes de su uso) y ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á . La m ezc la se ag itó d u ra n te 1 ho ra a T A y lu eg o se añad ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra is o p ro p il- fo s fo ro d ia m id ita (0 ,24 m l, 0 ,77 m m ol) d e una v e z m e d ia n te un a je rin g u illa . La m ezc la de la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 2 ,5 h y lu eg o se añ a d ió d isu lfu ro de fe n ila ce tilo (P A D S , 0 ,46 g, 1,53 m m o l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 18 h. Los ta m ic e s m o lecu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se la va ro n con d ic lo ro m e ta n o . El filtra d o co m b in a d o se lavó con un a m ezc la de un a so luc ió n sa tu ra d a d e Na2S2Ü3 y una so luc ió n sa tu ra d a de NaH C Ü 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gSÜ 4, se filtró y se e va p o ra ro n los so lve n te s de l filtra d o . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a s o b re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -100 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 24 a (184 m g, ren d im ien to : 26 % ). 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) ó ppm 1.13 (dd, J= 6.7 , 1.4 Hz, 6H ) 2.69 -2.87 (m, 2H ) 3.07 (t, J= 5.9 Hz, 2H ) 3.25 -3.30 (m, 1H) 3.35 -3.47 (m, 2H ) 3.53 (s, 3H ) 3.55 -3.65 (m, 1H) 4.31 -4.48 (m, 4H ) 4.51-4.61 (m , 2H ) 5.14 (dd, J= 8.5 , 4.1 Hz, 1H) 5.38 -5.52 (m, 1H) 6.20 (d, J = 8.5 Hz, 1H) 6.60 (dd, J= 8.5 , 6.1 Hz, 1H) 7.56 (t, J= 7.4 Hz, 2H ) 7.65 (t, J= 7.0 Hz, 1H) 8.05 (d, J= 7.5 Hz, 2H ) 8.35 (s, 1H) 8.44 (br s, 1H) 8.73 (s, 1H) 8.76 (s, 1H) 11.22 (br s, 1H) 11.73 (s, 1H) 12.11 (br s, 1H); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) ó ppm 65.02 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 915.5 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ) 13 A , s a l d e s o d io

S e ag itó el co m p u e s to 24 a (184 m g, 0,2 m m o l) en m e tilam in a , so luc ió n al 33 % en e ta n o l (10 ml, 81 m m ol) a 45° C d u ra n te 1 h. La m ezc la de la rea cc ió n se eva p o ró ha s ta la se q u e d a d ba jo p re s ió n reduc ida . El res iduo se tr itu ró en 3 ml de a ce to n itr ilo an h id ro . El p re c ip ita d o se recog ió p o r filtra c ió n y se lavó con a ce to n itr ilo an h id ro . Se rea lizó una pu rifica c ió n con H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (F ase e s ta c io n a ria : RP X B rid g e P rep C 18 O B D -10 gm , 50 x150 m m , F ase m óvil: so luc ió n d e N H ⁴ H C O ³ al 0 ,25% en agua , M eO H ). Los so lve n te s de las fra cc io n e s pu ras se e lim in a ro n po r lio filiza c ió n . El res iduo se d iso lv ió en a g ua y se filtró so b re un a c o lu m n a p re la va d a (de agua) c o m p a c ta d a con res ina de in te rcam b io ió n ico IR 120 fo rm a d e Na+. Los so lve n te s de la so lu c ió n re su lta n te se e lim in a ro n m ed ia n te lio filiza c ió n pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 13 A , s a l d e s o d io (93 m g, 66% de ren d im ien to ) com o un só lido b la n co e sp o n jo so . 1H N M R (400 M H z, D M SO -d6) ó ppm 10.59 (br s, 1 H), 8.42 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.23 -7.33 (m, 2H ), 7.28 (br s, 2H ), 6.52 (br s, 2H ), 6.35 (dd, J= 8.4 , 6.0 Hz, 1H), 6.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.48 (br dd, J= 8.6 , 4.0 Hz, 1H), 5.17 (br s, 1H), 4.36 (br s, 1H), 4.12 (s, 2H ), 3.95 -4.04 (m , 1H), 3.88 -3.95 (m , 1H), 3.48 -3.59 (m, 1H), 3.47 (s, 3H ), 3.18 (dd, J= 14.0 , 4.3 Hz, 1H), 3.06 (ddd, J= 13.9 , 8.2 , 5.9 Hz, 1H), 2.53 -2.68 (m , 1H); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) ó ppm 52.21 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 688.3 [M+H]+.

E je m p lo 25

C o m p u e s to (*R ) 31 A y C o m p u e s to (*S ) 31 B

S e d iso lv ió el co m p u e s to 12a (300 mg, 0 ,38 m m ol) en una m ezc la de A C N anh id ro ^{( 3 3} m l) y T H F anh id ro (33 m l). S e a ñ a d ie ro n 1H -te tra zo l (4 ,4 m l, 3 -4 % en M eC N , seca do en ta m ic e s m o le cu la re s d e 3 Á a n tes de su uso) y ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á . La m ezc la se ag itó d u ra n te 1 ho ra a T A y lu eg o se añad ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,12 m l, 0 ,38 m m ol) de un a ve z m e d ia n te una je rin g u illa . La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 4 ,5 ho ras. S e añ a d ió un a ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,06 m l, 0 ,19 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 18 ho ras y luego se añad ió d isu lfu ro de fe n ila ce tilo (0 ,23 g, 0 ,75 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 ho ras. La m ezc la de la reacc ión se filtró . Los ta m ic e s m o lecu la re s se la va ro n tre s ve c e s con d ic lo ro m e ta n o . El filtra d o co m b in a d o se lavó con so luc ió n sa tu ra d a de Na2S2O3 y una so luc ió n sa tu ra d a de NaHCO 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gS O ⁴ , se filtró y se e va p o ra ro n los so lve n te s de l filtrad o . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a s o b re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r 25a (103 mg, ren d im ie n to de l 27 % ). E S I-M S : m /z 921.4 [M+H]+.

P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ) 31 A , s a l d e s o d io y el C o m p u e s to (*5) 31 B , s a l d e s o d io

S e co lo có el co m p u e s to 25 a (103 m g, 0,1 m m ol) en m e tilam in a , so luc ió n al 33 % en e ta no l (6 ml, 58 ,4 m m ol) se ag itó a 45 ° C d u ra n te 1 hora. La m ezc la de la rea cc ió n se e va p o ró ha s ta la se q u e d a d ba jo p res ión red uc ida . El res iduo se tr itu ró en 10 ml d e a ce ton itr ilo anh id ro . El p re c ip ita d o se recog ió po r filtra c ió n y se lavó con a ce to n itr ilo an h id ro . S e rea lizó una p u rif ica c ió n /se p a ra c ió n de los d o s e p ím e ro s con H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (F ase e s ta c io n a ria : RP X B rid g e P rep C 18 O B D -10 gm , 50 x150 m m , F ase m óvil: so lu c ió n de N H ⁴ H C O ³ al 0 ,25 % en agua , M eO H ). Los so lve n te s d e las d o s fra cc io n e s pu ra s se e lim in a ro n po r lio filiza c ió n . Los res idu os se d iso lv ie ro n en agua y se filtra ro n sob re una co lu m n a p re la va d a (de agua) c o m p a c ta d a con una res ina ca tió n ica de in te rca m b io ió n ico d e sod io . Los so lve n te s de las so lu c io n e s re su lta n te s se lio filiza ro n pa ra d a r los co m p u e s to s 31 A y 31 B , ca d a uno co m o un só lido b lanco .

C o m p u e s to (*R ) 31 A , s a l d e s o d io (42 m g, 57% de ren d im ien to ). 1H N M R (400 M H z, D M S O -d6) ó ppm 3.36-3.51 (m, 2H ) 3.88 (m, J = 9.8 Hz, 1H) 4.12 -4.23 (m , 2H ) 4.55 (d, J= 1.0 Hz, 1H) 5.19 (br t, J= 13.0 Hz, 1H) 5.26 ­ 5.61 (m, 3H ) 6.04 (br d, J=8.1 Hz, 1H) 6.37 -6.48 (m, 1H) 6.53 (br s, 2H ) 7.35 (br s, 2H ) 8.16 (s, 1H) 8.22 (d, J = 2.8 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H). 31P N M R (162 M H z, D M S O -d6) ó ppm 52.43 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 694.3 [M+H]+.

C o m p u e s to (*S ) 31 B , s a l d e s o d io (3 m g, 4% de ren d im ien to ). 31P N M R (162 M H z, D 2O ) ó ppm 55.20 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 694.3 [M+H]+.

E je m p lo 26

C o m p u e s to (*R ) 7 A y C o m p u e s to (*S ) 7B

28d

S e añ ad ió g o ta a g o ta c lo ro tr im e tils ila n o (5 ,53 ml, 43 ,7 m m ol) a una so lu c ió n d e 26 a [C A S 847648 -20 -8 ] (2 ,6 g, 8 ,74 m m ol) en p ir id in a se ca (26 ml) a 0° C. La so lu c ió n d e la rea cc ió n se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 30 m in , d e s p u é s de lo cua l se en frió d e nuevo a 0° C. S e añ ad ió g o ta a g o ta c lo ru ro de iso b u tir ilo (4 ,58 ml, 43 ,7 m m o l) d u ra n te un p e río do de 15 m in y se co n tin u ó a g itan do a te m p e ra tu ra a m b ie n te has ta la con ve rs ión co m p le ta . La reacc ión se en frió a 0° C, se añ ad ió agua se g u id o de la ad ic ió n d e a m o n íaco acu oso (26% , 18 ml) d e sp u é s de 20 m in , se co n tin u ó ag ita n d o a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h. La so luc ió n d e la rea cc ió n se ne u tra lizó con ác ido a cé tico y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . La p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a so b re ge l de s ílice (g ra d ie n te d e e luc ió n : M eO H al 0 -7 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 26 b co m o un só lido b lan que c in o (1 ,3 g, ren d im ien to : 40 % ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) ó ppm : 12.10 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 7.96 (s, 1 H), 5.93 (d, J=4.1 Hz, 1H), 4.80 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.50 (t, J=2.1 Hz, 1H), 4.23 (q, J= 5.0 Hz, 1H), 3.78 (q, J=2.1 Hz, 1H), 3.71 (m , 1H), 3.63 (m , 1H), 3.37 (s, 3H ), 2.78 (m , 1H), 1.23 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 1.12 (d, J= 6.9 Hz, 6H ); ES I-M S: m /z 367.9 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 26 c

S e a g itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te una so luc ió n de l co m p u e s to 26 b (1 ,75 g, 4 ,76 m m ol) en p ir id in a seca (35 m l), a la q u e se añ a d ie ro n D M A P (0 ,29 g, 2 ,38 m m ol) y D M TrC l (2,41 g, 7 ,14 m m ol) (en po rc io nes ) hasta co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 1,5 h). La m ezc la d e la reacc ión se inac tivó con m e tano l (15 ml) y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo o b te n id o se d iso lv ió en ace ta to de e tilo y se lavó con agua . La ca p a o rg á n ica se secó sob re Na² S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . La pu rifica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a so b re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -2 ,5 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 26 c co m o un a e sp u m a de c o lo r m arrón pá lid o (3,1 g, ren d im ien to : 96% ).

1H N M R (500 M H z, DM SO -da) ó ppm : 11.89 (d, J= 177.0 Hz, 2H ), 7.75 (s, 1H), 7.39 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.25 (m, 7H ), 6.86 (m, 4H ), 5.98 (d, J=4.1 Hz, 1H), 5.83 (d, 7=2.1 Hz, 1H), 4.49 (m , 2H ), 3.82 (q, J=2.1 Hz, 1H), 3.73 (d, J= 2.8 Hz, 6H ), 3.27 (s, 3H ), 3.22 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 1.12 (dd, J= 6.9 , 2.1 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 669 [M+H]+.

P aso 3: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 26 d

S e ca rg ó un m a traz de reacc ión con D M A P (0 ,35 g, 2 ,9 m m ol), DC M seco (10 m l) y ta m ice s m o le cu la re s de 3Á a c tiva do s . La m ezc la resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra inerte . S im u ltá n e a m e n te , u n a so luc ión de l c o m p u e s to 26 c (0 ,38 g, 0 ,57 m m o l) y un a so luc ió n de su lfa m a to 17a (0 ,6 g, 0 ,69 m m o l) c a d a u n a en DC M seco (2 x 10 m l), se seca ron en ta m ice s m o lecu la re s de Á a c tiva d o s (ap rox. 2 h). A m bas so lu c io n e s (co m p u e s to 26 c y su lfa m a to 17a re sp e c tiva m e n te ) se tra n s fir ie ro n su ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 24 h. Los ta m ice s m o lecu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N aH C Ü 3 a cu o so sa tu ra do , sa lm u e ra y NhUCl acuoso sa tu ra do , se secó sob re Na2SÜ4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -1 % en D C M ) p a ra d a r e l co m p u e s to 26 d co m o una e s p u m a (0 ,44 g, ren d im ien to : 55% ). 1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) 5 ppm : 12.12 (s, 1H), 11.69 (s, 1H), 11.22 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.02 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 7.64 (q, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.49 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.36 (m, 8H ), 7.23 (m, 8H ), 6.92 (t, J= 9.6 Hz, 4H ), 6.84 (dd, J = 13.8, 9.0 Hz, 4H ), 6.28 (d, J = 19.3 Hz, 1H), 6.05 (d, 1.0 Hz, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.85 (d, J= 22.0 Hz, 1H), 4.40 (q, J= 5.0 Hz, 1H), 3.98 (m, 2H ), 3.70 (t, J=3.1 Hz, 12H), 3.23 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 3.13 (s, 3H ), 2.79 (m, 2H ), 2.65 (m , 2H ), 1.10 (d, J= 5.5 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 1406 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 26 e

S e ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te un a so luc ió n de l c o m p u e s to 26 d (430 m g, 0 ,3 m m o l) en DC M (12 m l), a la q u e se añ ad ie ro n D C A (1 ,0 m l de DC M al 10% , 1,2 m m o l) y a g u a (27 gl, 1,5 m m o l) hasta la co m p le ta d e sp ro te cc ió n (ap rox. 1 h). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (120 gl, 1,5 m m o l) y a lgu nas go tas de m e tano l. El res idu o o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -8 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 26 e co m o un po lvo b lanco (225 mg, ren d im ien to : 92% ). 1H N M R (500 M H z, D M S O -ds) 5 ppm : 12.11 (s, 1H), 11.67 (s, 1H), 11.25 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.04 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 7.87 (s, 1H), 7.65 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.9 Hz, 2H ), 6.29 (dd, J = 19.6, 1.7 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.58 (m, 1H), 5.22 (s, 1H), 4.92 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.17 (q, J= 5.0 Hz, 1H), 4.10 (t, J=2.1 Hz, 1H), 4.02 (td, J= 7.2 , 2.5 Hz, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.61 (m , 1H), 3.45 (m, 1H), 3.37 (s, 3H ), 3.06 (q, J= 7.3 Hz, 1H), 2.77 (m, 1H), 1.12 (dd, J= 6.9 , 2.1 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 801.0 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 26 f

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 26 e (220 m g, 0 ,27 m m ol) y 1H -te tra zo l (3 ,2 m l, 3 -4 % en M eC N , se ca d o en ta m ice s m o le cu la re s de 3Á an tes de su uso ) en 1:1 M e C N /T H F (48 m l, p re se ca d o en ta m ice s m o le cu la re s de 3 Á a c tiva do s , p re se ca d o en ta m ice s m o le cu la re s de 3 Á a c tiva d o s ) con ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á a c tiva d o s d u ra n te 1 h, d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (87 gl, 0 ,27 m m o l) de una vez. La m e zc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 22 h. S e añ ad ió d isu lfu ro de fe n ila ce tilo (P A D S , 0 ,45 g, 1,5 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te u n a ho ra m ás. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se lava ron con d ic lo ro m e ta n o . Los filtra d o s c o m b in a d o s se lavaron p o s te rio rm e n te con u n a m ezc la 1 :1 de Na2S2O3 a cu o so sa tu ra d o y N aH C O 3 a cu o so sa tu ra d o y sa lm ue ra , se seca ron con M gSO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) p a ra d a r el co m p u e s to 26 f (55 m g, ren d im ien to : 21% ). E S I-M S : m /z 933.5 [M H]+

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to (*R ) 7 A , s a l d e s o d io y C o m p u e s to (*S ) 7 B , s a l d e s o d io

S e ag itó e l co m p u e s to 26 e (55 m g, 0 ,059 m m o l) en u n a so luc ió n d e m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (4 m l) a 45° C ha s ta la c o n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 1 h), d e sp u é s de lo cua l la so luc ió n de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro d u c to b ru to se tr itu ró en M eC N , e l p re c ip ita d o o b te n id o se pu rificó a d ic io n a lm e n te m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C18 O B D , 5 gm , 250 x 30 m m ; fa se m óvil, b ica rb o n a to de a m o n io a cu oso al 0 ,25 % (A) - M eO H (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ) d a n d o co m o resu ltad o la se p a ra c ió n de am b os e p ím e ro s P: c o m p u e s to (*R ) 7 A , s a l d e a m o n io co m o p r im e r isó m ero en e lu ir y c o m p u e s to (*S ) 7 B , s a l d e a m o n io com o se g u n d o isó m ero en e lu ir. La c o n ve rs ió n fin a l en la sal de sod io se rea lizó m ed ia n te la e luc ió n de un a so luc ió n a cu o sa so b re u n a c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina de in te rca m b io ión ico de sod io ca tió n ic a p a ra p ro p o rc io n a r e l c o m p u e s to (*R ) 7 A , s a l d e s o d io (re n d im ie n to : 7 mg, 16% ) co m o un só lido b lan co y c o m p u e s to (*S ) 7 b , s a l d e s o d io (ren d im ien to : 4 mg, 9% ) co m o un só lido b lanco .

C o m p u e s to (*) 7 A , s a l d e s o d io . 1H N M R (400 M H z, D ²O) 5 ppm 3.31 (b r d, J = 12.2 Hz, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.52 -3.57 (m, 1H), 4.28 -4.50 (m , 4H ), 4.74 (s, 1H), 4.97 -5.08 (m , 1H), 5.29 (s, 1H), 5.72 (dd, J= 50.5 , 3.7 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 6.30 (d, J = 18.7 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.21 (s, 1H ); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm 55.05 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 706.0 [M+H]+.

C o m p u e s to (*S ) 7 B , s a l d e s o d io . 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.43 (b r s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 6.37 (d, J = 19.1 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.52 (dd, J= 50.7 , 4.3 Hz, 1H), 5.26 (b r s, 1H), 4.87 -4.99 (m, 2H ), 4.64 -4.70 (m, 1H), 4.49 (ddd, J = 10.5, 4.9 , 2.7 Hz, 1H), 4.39 (b r d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.23 (dt, J= 23.8 , 10.7 Hz, 1H), 3.57 (b r dd, J = 14.1 , 3.5 Hz, 1H), 3.47 (s, 3H ), 3.33 (b r d, J = 13.9 Hz, 1H), 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm 56.94 (s, 1 P); ES I MS: m/z 706.1 [M+H]+.

E je m p lo 27

C o m p u e s to s (*R ) 44 A y (S *) 44 B

Compuesto ( *R ) 44A, sal de sodio Compuesto ( *S) 44B, sal de sodio

P aso 1. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 27a

N ota : El T H F fue rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el C H ³CN fue rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso.

A un a so lu c ió n d e 17 d (400 mg, 0 ,518 m m o l) en te tra h id ro fu ra n o (14 m l) se le añ a d ie ro n ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á (po lvo , 2 g) y la m ezc la se ag itó d u ra n te 20 m in . D e spu és de 20 m in , se añ a d ió una so luc ió n de 1H -te tra zo l (0 ,45 M en ace to n itr ilo , 9 ,2 m l) a 25° C, seg u ido d e la a d ic ió n de una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( iso p ro p il)fo s fo ro d ia m id ita (0,31 g, 1 ,037 m m ol, d ilu id a en 2 ml d e T H F ) a 25 ° C. D e sp u é s de a g ita r d u ra n te 1,5 h a T ^a , se añ ad ió (E )-N ,N -d im e til-N '-(3 -tio x o -3 H -1 ,2 ,4 -d itia z o l-5 - il) fo rm im id a m id a (D D TT , 0 ,453 g, 2 ,205 m m ol, d ilu id o en 10 ml de Py) a 25 ° C y la so lu c ió n se ag itó d u ra n te 1,5 h. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (M eO H al 0 -15 % en D C M ) pa ra d a r 27 a (80 m g) com o un só lido de c o lo r am a rillo c la ro . E S I-M S : m /z= 902.9 [M+H]+.

P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ) 44 A , s a l d e s o d io y el C o m p u e s to (*S ) 44 B , s a l d e s o d io

S e ag itó un a so lu c ió n de l co m p u e s to 27 a (80 m g, 0 ,09 m m ol) en m e tila m in a (50% en E tO H , 5,0 m l) a 25 ° C d u ra n te 4 ho ras. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p re s ió n . S ep a ra c ió n p o r H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (C o lum na . X b rid g e 150 x 30 m m x 10 pm , C o nd ic ió n : agua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - C H ³ CN B d e In ic io : 5, B F ina l 20, T ie m p o d e g ra d ie n te (m in ): 7, 100% de B T ie m p o de re ten c ió n (m in ): 0, C a ud a l (m l/m in ): 25) p ro po rc ion ó c o m p u e s to (*R ) 44 A , s a l d e a m o n io (19 m g) y c o m p u e s to (*S ) 44 B , s a l d e a m o n io (1 ,5 m g), a m b o s com o un só lido b lanco . La co n ve rs ió n fina l d e am b o s c o m p u e s to s en su co rre sp o n d ie n te sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa sob re un a c o lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina c a tió n ica de in te rca m b io ión ico de sod io .

C o m p u e s to (*R ) 44 A , s a l d e s o d io (27 mg).

1H N M R (400 M H z, D ²O) 6 ppm 8.22 (br, s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.29 (br, s, 1H), 6.57 -6.50 (m , 1H), 6.05 -5.98 (m, 2H ), 5.94 -5.78 (m, 1H), 5.31 -5.13 (m, 1H), 4.70 (br, d, J= 7.5 Hz, 1H), 4.60 (br, d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.26 (br, dd, J= 4.3 , 11.5 Hz, 1H), 4.19-4.11 (m , 1H), 3.85 (br, d, J= 13.3 Hz, 1H), 3.56 (br, d, J= 13.3 Hz, 1H), 2.81 -2.63 (m, 2H ); 19F N M R (376 M H z, D ²O) 8 -195.872 (s, 1F) ppm , 31P N M R (162 M H z, D ² O) 6 52.528 (s, 1P) ppm ; E S I-M S : m/z=676.0 [M+H]+.

C o m p u e s to (*S ), 44 B , s a l d e s o d io (1 ,8 m g).

1H N M R (400 M H z, D ² O) 5 ppm 8.20 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.59 -6.46 (m, 1H), 6.22 -6.14 (m, 1H), 5.97 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.53 -5.34 (m, 2H ), 4.66 -4.54 (m , 2H ), 4.34 (br, t, J = 11.5 Hz, 1H), 4.11 (br, dd, J=4.6 , 11.9 Hz, 1H), 3.77 (br, d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.45 (br, d, J= 13.3 Hz, 1H), 3.02 (q, J= 7.3 Hz, 1H), 2.76 -2.66 (m, 1H), 2.78 ­ 2.65 (m, 1 H), 2.58 (br, dd, 7.8, 12.5 Hz, 1H), 1.26 -1.18 (m, 1H), 1.27 -1.17 (m , 1H), 1.22 (b r t, J= 7.3 Hz, 1H), 1.32 ­ 1.10 (m, 1 H); 19F N M R (376 M H z, D2O)<5 ppm -195.902 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D ²O) 5 ppm 56.151 (s, 1P); E S I-M S ; m /z=677.0 [M H ]+.

E je m p lo 28

C o m p u e s to s (*R ) 42 A y (*S ) 42 B

Compuesto ( *R ) 42A, sal de sodio Compuesto ( *S) 42B, sal de sodio

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 28a

N ota : El T H F fue rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el C H ³CN fue rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso.

A u n a so luc ió n de 18a (430 m g, 0 ,532 m m ol, s e ca d a p o r lio filiza c ió n ) en te tra h id ro fu ra n o (9 m l) se le a ñ a d ie ro n ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á (po lvo , 2 g) y la m ezc la se ag itó d u ra n te 20 m in . D espués de 20 m in , se añ ad ió una so luc ió n de 1H - te tra z o l (0 ,45 M en ace ton itr ilo , 9 ,46 m l), p re p a ra d a d is o lv ie n d o 945 m g de te trazo l (seca do p o r lio filiza c ió n ) en 30 m l de C H ³C N seco , se g u id o de la ad ic ió n de 1,5 g de 4 Á M S y lu eg o se ag itó du ran te 1 h ba jo N ² an tes de su uso ) a 25° C, se pu rgó va ria s ve ce s con N ² , se g u id o de la ad ic ió n de u n a so luc ió n de 3-( (b is (d iis o p ro p ila m in o )fo s fin o )o x i)p ro p a n o n itr ilo (0288 m g, 0 ,958 m m ol, d ilu id o en 2 ml de T H F ) g o ta a g o ta d u ran te 30 m in a 25° C pa ra g e n e ra r u n a su sp e n s ió n b lanca . D espués de a g ita r d u ra n te 1,5 h a TA , se añ ad ió u n a so luc ió n de D D TT (655 m g, 3 ,19 m m o l) en p ir id in a (10 m l) a 25° C y la so luc ió n se ag itó d u ra n te 30 m in . La m e zc la de la rea cc ió n se co m b in ó con o tro lote, se filtró a tra vé s de una a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a p a ra d a r un res iduo am arillo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r 28a (260 m g) co m o un só lido b lanco . E S I-M S : m /z=939.1 [M+H]+.

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to (*R ) 42 A , s a l d e a m o n io y e l C o m p u e s to (*S ) 42 B , s a l d e a m o n io

S e ag itó a T A d u ra n te 2 ho ras u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 28 a (130 mg, 0 ,138 m m o l) en m e tila m in a (de l 27 al 32% en E tO H , 5 ,0 m l). La m ezc la de la reacc ión se co m b in ó con o tro lo te y la m ezc la se e va p o ró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un só lido b lan co ; e l só lido se d iso lv ió en a g u a (30 m l), luego se lavó con DC M (20 ml x 4). La ca p a a cu o sa se lio filizó pa ra d a r un só lid o b lan co (190 m g). El só lid o b lan co se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa s e in ve rsa (C o lum n a : X b rid g e 150 x 30 m m x 5 gm , C o nd ic ió n : ag ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - C H ³CN B de In ic io : 5, B F ina l 35, T ie m p o de G ra d ie n te (m in ): 7, 100% B T ie m p o de re tenc ión (m in ): 0, C a ud a l (m l/m in ): 25) pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 42 A , s a l d e a m o n io (70 m g) co m o un só lido b lan co y el c o m p u e s to (*S ) 42 B , s a l d e a m o n io (12 m g) co m o un só lid o b lanco .

C o m p u e s to (*R ) 42 A , s a l d e a m o n io . 1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 8.96 (s, 1H), 8.23 (d, J=7.1 Hz, 2H ), 7.25 (s, 1H), 6.58-6.41 (m, 2H ), 5.90 -5.58 (m, 3H ), 5.33 -5.12 (m, 1H), 4.93 -4.77 (m, 1H), 4.41 -4.24 (m, 2H ), 3.86 (b r dd, J= 2.8 , 13.1 Hz, 1H), 3.66 (b r d, J = 13.2 Hz, 1H ); 19F N M R (376 M H z, D 2O ) 5 ppm -196.52 (s, 1F), -198.72 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm 54.24 (s, 1P); E S I-M S : m /z= 678.2 [M+H]+.

C o m p u e s to (*S ) 42 B , s a l d e a m o n io . 1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 8.54 (b r s, 1H), 8.15 (b r s, 1H), 7.97 (b r s, 1H), 7.14 (b r s, 1H), 6.40 (b r s, 2H ), 5.95-5.71 (m, 1H), 5.94 -5.69 (m , 1H), 5.68 -5.33 (m, 1H), 5.70 -5.32 (m, 1H), 5.19 (b r s, 1H), 4.13 (b r s, 2H ), 3.72 (b r s, 1H), 3.57 (b r d, J = 12.7 Hz, 1H ); 19F N M R (376 M H z, D2O ) 5 ppm -195.66 (s, 1 F), -198.44 (s, 1 F); 31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm 55.09 (s, 1P ); E S I-M S : m /z=678.1 [M+H]+.

C o n v e rs ió n d e s a l d e s o d io

S e añ ad ió D ow ex 50W x8 , 200 -400 (12 ml, fo rm a H) a un v a so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g u a d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó s u a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V ), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta pH neu tro . La re s in a se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió una so luc ió n de N aO H al 15% en a g u a d e s io n iz a d a y la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g u a (po r lo m en os 4 C V), y luego con ag ua d e s io n iz a d a ha s ta pH neu tro . El c o m p u e s to (*R ) 42 A , s a l d e a m o n io (92 mg en 20 m l/9 m l) se d iso lv ió en una ca n tid a d m ín im a de a g u a d e s io n iz a d a y se añ ad ió C H ³CN (1:1, v /v ), a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e lu yó con a g u a d e s io n iza d a . Las fra c c io n e s a p ro p ia d a s se a g ru p a ro n y lio filiza ro n p a ra d a r e l c o m p u e s to (*R ) 42 A , s a l d e s o d io (72 ,4 m g) com o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 ppm 8.96 (b r s, 1H), 8.24 (b r d, J = 13.2 Hz, 2H ), 7.13 (s, 1H), 6.62-6.41 (m, 2H ), 5.95 - 5.64 (m , 3H ), 5.27 -5.06 (m, 1H), 5.02 -4.89 (m, 1H), 4.63 (b r d, J= 8.3 Hz, 1H), 4.39 (br s, 2H ), 3.92 (b r d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.72 (b r d, J= 13.2 Hz, 1H); 19F N M R (376 M H z, D2O ) 5 ppm -196.32 (s, 1F), -198.94 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm 54.05 (s, 1P)

E S I-M S : m /z=678.1 [M+H]+.

U sa nd o el p ro ce d im ie n to a n te r io r pa ra la c o n ve rs ió n de sa l de sod io , se o b tu vo e l c o m p u e s to (*S ) 42 B , s a l d e s o d io (6,9 m g) co m o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 ppm 8.63 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.56 -6.39 (m, 2H), 5.95 - 5.77 (m, 1H), 5.73 -5.58 (m, 1H), 5.58 -5.45 (m, 1H), 5.58 -5.44 (m, 1H), 5.36 -5.22 (m, 1H), 4.91 -4.78 (m, 1H), 4.53 (b r dd, J= 6.1 , 11.0 Hz, 1H), 4.19 (b r d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.25 -4.13 (m, 1H), 3.79 (dd, J= 4.0 , 13.6 Hz, 1H), 3.71 -3.70 (m, 1H), 3.66 -3.66 (m, 1H), 3.68 -3.59 (m, 1H), 19F N M R (376 M H z, D 2O ) 5 ppm -195.10 -196.43 (m, 1F), -198.17 (td, J= 25.9 , 52.5 Hz, 1F); 31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 55.26 (s, 1P ); E S I-M S : m /z=678.1 [M+H]+.

E je m p lo 29

C o m p u e s to 45

A un a so lu c ió n del c o m p u e s to 29 a (13 g, 49 ,94 m m ol) en p ir id in a (10 ,06 m l, 124 ,86 m m ol) y d ic lo ro m e ta n o (300 ml) se le añ ad ió g o ta a g o ta an h íd rid o tríflico (10 ,92 ml, 64 ,93 m m ol) a 0° C. D e sp u é s de a g ita r la reacc ión a 0° C d u ra n te a p ro x im a d a m e n te 1 h, la m ezc la se d ilu yó con D C M (100 m l), se lavó con agua (200 m l), sa lm u e ra (200 m l), se secó con M gSO 4 an h id ro , se filtró y se e va p o ró has ta la se q ue da d pa ra d a r 29 b (20 ,4 g) co m o un ace ite am arillo , usa do en el paso s ig u ie n te s in n ing una pu rifica c ió n ad ic io na l. 1H ⁿ M ^r (400 M H z, C D C h) 5 6.07 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.32 -4.19 (m , 3H ), 4.06 (dd, J= 3.90 , 8.8 Hz, 1H), 1.61 (s, 3H ), 1.51 (s, 3H ), 1.42 (d, J= 2.6 Hz, 6H ).

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 29 c

A un a so lu c ió n de l co m p u e s to 29 b (20 ,4 g, 51 ,99 m m ol) en to lu e n o (500 ml) se le añ ad ió go ta a go ta n-B U ⁴ N B H ⁴ (40 ,13 g, 155 ,98 m m ol) a 25 ° C. D e sp u é s de a g ita r a 80° C d u ra n te 6 h, la m ezc la d e la reacc ión se lavó con ag ua (200 m l), sa lm u e ra (200 m l), se secó con MgSCU anh id ro , se filtró y se e va p o ró ha s ta la se q ue da d pa ra d a r un ace ite am arillo . El ace ite resu lta n te se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de sílice (E A al 0 -20 % en PE) pa ra d a r el c o m p u e s to 29 c (6 ,4 g) com o un ace ite inco lo ro . 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 5.83 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 4.77 (t, J=4.1 Hz, 1H), 4.23 -4.08 (m, 3H ), 3.89 -3.76 (m, 1H), 2.19 (dd, J= 3.9 , 13.4 Hz, 1H), 1.82 ­ 1.73 (m, 1H), 1.52 (s, 3H ), 1.43 (s, 3H ), 1.35 (d, J = 15.3 Hz, 6H ).

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 d

S e ag itó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 29 c (13 ,4 g, 54 ,85 m m o l) en A cO H /a g u a (v/v, 1 :1, 200 m l) d u ra n te 12 h a 25° C. La so luc ió n de la reacc ión se co n ce n tró y se co e va p o ró con to lu e n o (2 x 40 m l) pa ra d a r e l co m p u e s to 29 d (11 ,4 g) co m o un ace ite inco lo ro , usa do d ire c ta m e n te pa ra e l paso s ig u ie n te sin pu rifica c ión ad ic iona l.

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 e

A un a so luc ión de l co m p u e s to 29 d (11 ,4 g, 8,81 m m o l) en M eC H (200 m l) y a g u a (100 m l) se le añ ad ió p e ryo d a to de sod io (17,91 g, 83 ,73 m m ol). D e spu és de a g ita r d u ra n te 2 ho ras a 25° C, la m e zc la de la rea cc ió n se filtró y el f iltra d o se d ilu yó con Na2S2O3 a cu oso sa tu ra d o (50 m l), luego la m ezc la se co n ce n tró pa ra e lim in a r el M eO H . El res iduo se rep a rtió con 2 -M e -T H F (200 m l), la c a p a a cu o sa se e x tra jo con 2 -M e -T H F (5 x 100 m l). Luego se c o m b in a ro n las ca p a s o rg án icas , se lava ron con sa lm ue ra , se seca ron (Na2SO4 an h id ro ), se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión red uc ida pa ra d a r el co m p u e s to 29 e (11 g) co m o un ace ite am arillo , usa d o d ire c ta m e n te para el pa so s ig u ie n te s in pu rifica c ión ad ic iona l.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 f

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 29 e (11 g, 9 ,29 m m o l) en M eC H (200 m l) se le añ ad ió b o ro h id ru ro de sod io (2 ,9 g, 76 ,66 m m ol). D espués de a g ita r d u ra n te 1 h a 0° C, la m ezc la de la reacc ión se in ac tivó con NH4Cl acu oso sa tu ra d o (60 m l) y la m ezc la se co n ce n tró pa ra e lim in a r el M eC H . El res idu o se lio filizó pa ra d a r 29 f b ru to . El p ro d u c to b ru to se m ezc ló con M eC H /D C M (v/v, 10 :1 ,200 m l), luego se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a da nd o un res iduo pu rifica do p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (PE al 0 -60 % en EA) pa ra p ro p o rc io n a r el co m p u e s to 29 f (5 ,3 g) co m o un só lido am arillo . 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 5.83 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 4.77 (t, J= 4.2 Hz, 1H), 4.41 -4.30 (m, 1H), 3.90 (b r d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.57 (b r d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.01 (dd, J= 4.5 , 13.3 Hz, 1H), 1.89-1.81 (m, 2H ), 1.33 (s, 3H ).

P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 g

S e a ñ ad ie ro n a n h íd rid o acé tico (6,51 m l, 68 ,9 m m o l) y ác ido su lfú rico co n ce n tra d o (36,91 pl, 0 ,69 m m o l) a un a so luc ión a g ita d a de l co m p u e s to 29 f (1 ,2 g, 6 ,89 m m o l) en ác ido acé tico (39 ,4 ml, 688 ,89 m m o l) a 0° C D espués de a g ita r d u ra n te 1 ho ra a te m p e ra tu ra a m b ie n te , la m ezc la de la reacc ión se in ac tivó con a g u a fr ía (100 m l), se ag itó d u ra n te 30 m in u tos a ta y se e x tra jo con a ce ta to de e tilo (3 x 60 m l). La ca p a o rg á n ica se lavó s u ce s iva m e n te con so luc ió n a cu o sa sa tu ra d a de b ica rb o n a to de sod io (3 x 90 m l), so luc ió n de s a lm u e ra (2 x 90 m l), se secó sob re su lfa to de sod io an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 4 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (E A al 0 % -40 % en PE, v /v ) p a ra d a r el c o m p u e s to 29 g (870 m g) co m o un ace ite inco lo ro . 1H N M R (400 M H z, C D ³C N ) 5 6.03 (s, 1H), 5.11 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.49 (dtd, J= 3.3 , 6.5, 9.6 Hz, 1H), 4.19 (dd, J= 3.3 , 11.9 Hz, 1H), 4.00 (dd, J= 6.6 , 12.0 Hz, 1H), 2.03 ­ 1.99 (m, 11H). S e rep itió la m ism a reacc ión va r ia s ve ce s y se c o m b in a ro n to d o s los lo tes.

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 i

S e ag itó una so luc ió n de l co m p u e s to 29 h (0 ,672 g, 4 ,42 m m o l) y B S A (3 ,13 g, 15 ,37 m m o l) en C H ³CN a n h id ro (12 m l) a 85° C d u ra n te 1 h y luego se en frió a 0° C. Lueg o se añ ad ió g o ta a g o ta a 0° C al c o m p u e s to 29 g (1 g, 3 ,84 m m o l) y SnC l4 (3 ,003 g, 11 ,53 m m o l) con a g itac ión ; d e sp u é s de a g ita r la m ezc la a 26° C d u ra n te 24 h, la m ezc la b ru ta se co m b in ó con o tro lo te , se en frió y se d ilu yó con EA (300 m l). La ca p a o rg á n ic a se lavó s u ce s iva m e n te con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o de (4 x 200 ml), s a lm u e ra (2 x 150 ml), se secó sob re su lfa to de sod io an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a so b re s ílice : 20 g) (M eC H al 0% -10 % en D C M , v /v) p a ra d a r el co m p u e s to 29 i (3 ,52 g) co m o u n a e sp u m a b lanca . 1H N M R (400 M H z, CD3OD-d4) 5 6.22 (s, 1H), 5.75 (br, d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.65 (b r dd, J= 3.6 , 9.7 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 3.3 , 12.0 Hz, 1H), 4.12 (dd, J= 5.6 , 11.9 Hz, 1H), 3.35 (s, 3H ), 2.80 (ddd, J= 5.8 , 10.0, 14.1 Hz, 1H), 2.33 (br, dd, J= 6.0 , 13.8 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H ), 1.97 -1.93 (m, 3H ); ESI-M S: m /z= 352.9 [M+H]+.

P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 j

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 29 i (2 g, 5 ,677 m m o l) en DCM (20 m l) se le añ ad ió g o ta a g o ta Et3N (1 ,72 g, 17 ,03 m m o l) y c lo ru ro de iso b u tir ilo (1,21 g, 11 ,35 m m o l) a ta . D e spu és de a g ita r a 25° C d u ra n te 2 h, la reacc ión se in ac tivó con a g u a (50 m l), se lavó con s a lm u e ra (2 x 50 m l), se secó sob re Na2SC4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r el c o m p u e s to 29 j (2 ,39 g), usa do d ire c ta m e n te pa ra el pa so s ig u ie n te sin p u rifica c ió n ad ic iona l. P aso 9. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 k

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 29 j (2 ,39 g, 5 ,67 m m o l) en T H F (25 m l) se le añ ad ió g o ta a g o ta m e tan o la to de sod io (1 ,23 g, 22,71 m m o l) a 0° C. D e spu és de a g ita r a 25° C d u ra n te 2 h se añ ad ió g o ta a g o ta m ás m e tan o la to de sod io (1 ,23 g, 22,71 m m ol). D e spués de a g ita r a 25° C d u ra n te 0 ,5 h, la m ezc la se d ilu yó con agua /C H 3C O O H s a tu ra d a (1 :1 ,4 m l) pa ra a ju s ta r a pH 7, luego se c o n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo (c o m b in a d o con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en c o lu m n a so b re s ílice (M eO H al 0% -10% en DC M V /V ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 29 k (770 m g) com o un a e sp u m a b lanca . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 12.09 (b r s, 2H ), 5.99 (s, 1H), 5.75 (b r d, J= 2.9 Hz, 1H), 4.80 -4.70 (m, 2H ), 4.49 -4.36 (m, 1H), 3.51 -3.40 (m, 2H ), 2.79 (td, J= 6.8 , 13.6 Hz, 1H), 2.43 -2.30 (m, 1H), 2.07 (dd, J= 6.7 , 12.6 Hz, 1H), 1.13 (d, J= 6.6 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z=339.1 [M+H]+.

P aso 10: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 l

S e añ ad ió D M T rC l (1 ,20 g, 3 ,54 m m o l) a u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 29 k (1 g, 2 ,95 m m o l) en Py (10 ml). D espués de a g ita r a 25° C d u ra n te 12 h, la m ezc la se rep a rtió e n tre EA (150 m l) y a g u a (100 m l). La m ezc la se filtró y la c a p a o rg á n ica se lavó s u ce s iva m e n te con s a lm u e ra (100 m l), se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró ha s ta la seq ue da d pa ra o b te n e r el res iduo b ru to (ace ite ). El res iduo (com b ina do con ge l de s ílice , 5 g) se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (M eO H al 0 % -10 % en DC M v /v ) pa ra d a r el co m p u e s to 29 l (1 ,52 g) co m o u n a e sp u m a am arilla . 1H N M R (400 M H z, C D 3C N ) 5 7.32 (dd, J = 1.6, 7.9 Hz, 2H ), 7.22 ­ 7.10 (m, 7H ), 6.73 (dd, J= 8.8 , 13.9 Hz, 4H ), 6.13 (s, 1H), 4.93 (b r s, 1H), 4.77 -4.57 (m, 1H), 3.77 (b r s, 1H), 3.73 (d, J= 3.9 Hz, 6H ), 3.23 -3.04 (m, 2H ), 2.70 (spt, J= 6.9 Hz, 1H), 2.57 (ddd, J= 5.3 , 9.8, 13.3 Hz, 1H), 2.08 (dd, J= 6.4 , 13.4 Hz, 1H), 1.19 (d, J= 6.8 Hz, 6H).

E S I-M S : m /z=663.3 [M N a]+ .

P aso 11. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29n

Se añ ad ie ro n y o d u ro de te tra b u tila m o n io (0 ,89 g, 2,41 m m ol), tr ife n ilfo s fin a (4 ,74 g, 18 ,08 m m ol), te tra b ro m u ro de ca rb o n o (5 ,996 g, 18 ,080 m m ol), NaN3 (3 ,330 g, 51 ,223 m m o l) a una so luc ió n de l c o m p u e s to 29 m (4 ,5 g, 12 ,05 m m ol, C A S N° 144924 -99 -2 cb ) en D M F (70 m l) a 30° C. D e spués de a g ita r a 30° C d u ra n te 24 h, se añ ad ie ro n m ás y o d u ro de te tra b u tila m o n io (0 ,89 g, 2,41 m m ol), tr ife n ilfo s fin a (4 ,74 g, 18 ,00 m m o l) y te tra b ro m u ro de c a rb o n o (5 ,99 g, 18 ,08 m m o l) a la so luc ió n . D espués de a g ita r d u ra n te o tra s 24 h, la m ezc la se d ilu yó con N a ²C O ³ a cu oso sa tu ra d o (150 m l) pa ra a ju s ta r la m ezc la a pH 9 y la m e zc la se e x tra jo con a ce ta to de e tilo (200 ml x 3). Luego, las ca p a s o rg á n ica s se c o m b in a ro n y se la va ro n su ce s iva m e n te con s a lm u e ra (100 m l), se seca ron con Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se e va p o ra ro n a p res ión re d u c id a pa ra d a r un só lid o am arillo . La reacc ión se rep itió va ria s ve ce s y se c o m b in a ro n to d o s los lo tes. El res iduo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 30 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (gel de s ílice : 120 g) (g ra d ie n te de e lu c ió n : 0 -100 % de a ce ta to de e tilo en pe tró le o a 0 -20 % de m e tan o l en a ce ta to de e tilo ) pa ra d a r e l co m p u e s to 29 n (9 ,5 g) co m o un só lid o am a rillo . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.28 (br, s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.54 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.08 ­ 8.02 (m, 2H ), 7.68 -7.62 (m, 1H), 7.58 -7.52 (m, 2H ), 6.66 -6.58 (m , 1H), 6.18 (b r s, 1H), 5.46 -5.24 (m, 1H), 4.56 (td, J= 4.4 , 19.1 Hz, 1H), 4.08 -4.04 (m, 1H), 3.72 -3.68 (m, 1H); 19F N M R (376 M H z, D M S O -ds) 5 ppm -197.05 (s, 1H); E S I-M S : m /z 398.9 [M+H]+.

P aso 12: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 o

A u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 29 n (8 ,5 g, 21 ,33 m m o l) y D M A P (1 ,3 g, 10 ,67 m m o l) en p ir id in a (90 m l) se le añ ad ió D M TrC l (14 ,46 g, 42 ,67 m m o l) a 25° C. D espués de a g ita r a 80° C d u ra n te 14 h, la m ezc la se rep a rtió en tre DC M (200 m l) y ag ua (50 m l). La ca p a o rg á n ic a se lavó con s a lm u e ra (100 m l), se secó so b re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y e l so lven te se eva p o ró a p re s ió n re d u c id a p a ra d a r e l 29 o b ru to . S e co m b in ó con o tro lo te y se pu rificó ; el res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (P E /(E A /D C M = 1 /1 ) de l 10% al 100% ) pa ra p ro p o rc io n a r el co m p u e s to 29 o (9,5 g) co m o un só lid o am a rillo c la ro . 1H N M R (400 M H z, CDCl3) 5 9.00 (br, s, 1H), 8.84 (br, s, 1H), 8.20 (br, s, 1H), 8.02 (br, d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.64 -7.58 (m, 1H), 7.54 (br, t, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.46 (br, d, J=7.1 Hz, 2H ), 7.40 -7.34 (m, 5H ), 7.30 (br, d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.94 -6.84 (m, 4H ), 6.58 -6.48 (m, 1H), 4.48 ­ 4.34 (m, 2H ), 4.18 -4.06 (m, 1H), 3.38 (b r d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.18 (br, dd, J= 5.9 , 13.9 Hz, 1H ); 19F N M R (376 M H z, CDCl3) 5 -196.176 (s, 1F); E S I-M S : m /z 701.2 [M+H]+.

P aso 13: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 p

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 29 o (10 ,0 g, 14 ,27 m m o l) en T H F (100 m l) se le añ ad ió tr ife n ilfo s fin a (5 ,24 g, 1 ,99 m m o l) a 25° C. D espués de a g ita r la so luc ió n a 40° C d u ra n te 2 h, se añ ad ió ag ua (50 m l) a la so luc ió n a 40° C y la m ezc la se ag itó d u ra n te 12 h. La m ezc la de la reacc ión se rep a rtió e n tre DC M (200 m l) y s a lm u e ra (2 x 50 ml). La c a p a o rg á n ica se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un só lido a m a rillo (10 ,0 g). El só lid o a m a rillo (com b ina do con ge l de s ílice : 20 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (D C M /M e O H = de l 0% al 20 % ) pa ra d a r e l co m p u e s to 29 p (6 ,6 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 8.74 (s, 1H), 8.46 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 8.06 -7.98 (m, 2H ), 7.64 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.58 -7.50 (m, 2H ), 7.48 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.38 -7.32 (m, 6H ), 7.30 -7.26 (m , 1H), 6.94 (dd, J= 3.4 , 8.8 Hz, 4H ), 6.50 -6.40 (m, 1H), 4.38 -4.32 (m , 1H), 4.24 -4.08 (m , 2H ), 3.74 (d, J= 2.9 Hz, 6H ), 2.68 -2.54 (m, 2H ); 19F N M R (376 M H z, D M S O -ds) 5 ppm -195.79 (s, 1F); E S I-M S : m /z 675.3 [M+H]+.

P aso 14. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 q

S e añ ad ió 4 -n itro fe n o l (0 ,92 g, 6 ,67 m m o l) y tr ie t ila m in a (1,35 , 13 ,34 m m o l) a la so luc ió n de l co m p u e s to 29 p (1 ,5 g, 2 ,22 m m o l) en DC M (40 m l). La so luc ió n re su lta n te se ag itó a -78° C y se añ ad ió una so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (1 ,58 g, 6 ,67 m m o l) en DC M (5 m l) a -78° C. D espués de a g ita r a -78° C d u ra n te 1 h, la m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión red u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 4 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (PE al 0 -100 % en EA) pa ra p ro p o rc io n a r el co m p u e s to 29 q (1,4 g) co m o un só lido a m a rillo c la ro , a lm a ce n a d o a -20° C. 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 ppm 8.94 (br, s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.48 (br, s, 1H), 8.18 -8.08 (m, 2H ), 8.00 (br, d, J= 7.8 Hz, 2H ), 7.% (s, 1H), 7.66 -7.60 (m , 1H), 7.58 -7.52 (m, 2H ), 7.44 (br, 6, J= 7.8 Hz, 2H ), 7.38 -7.28 (m , 7H ), 6.92 -6.84 (m, 4H ), 6.40 -6.26 (m, 1H), 4.48 -4.42 (m, 2H ), 4.28 (br, s, 1H), 3.86 -3.76 (m, 6H ), 3.56 (br, d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.32 (br, d, J = 13.7 Hz, 1H); 19F N M R (376 M H z, CDCla) 5 ppm -193.08 (s, 1F); E S I-M S : m /z 876.6 [M+H]+.

P aso 15: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 r

S e ag itó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 29 l (800 m g, 1,25 m m ol), co m p u e s to 29 q (1 ,64 g, 1 ,87 m m o l) y ta m ice s m o lecu la re s de 4 Á ac tiva do s (3 g) en T H F (24 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 0 ,5 h en N ². Lueg o se añ ad ió D M A P (762 ,73 m g, 6 ,24 m m ol) en un a po rc ión . D e spués de a g ita r a T A d u ra n te 2 h en N ² , luego a 45° C d u ra n te 12 h en N² , la m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con EA (100 m l) y luego se filtró a tra v é s de una a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s . El f iltra d o se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (6 x 50 m l). La ca p a o rg á n ica se lavó su ce s iva m e n te con s a lm u e ra (50 m l), se secó sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 5 g) se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (M eO H al 0 % -10 % en DC M , v /v ) pa ra d a r el co m p u e s to 29 r (1,4 g) co m o un só lido b lanco . E S I-M S : m /z=1377.1 [M+H]+.

P aso 16: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 s

A u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 29 r (1 ,4 g, 1,01 m m ol) en DC M (24 m l) se le añ ad ió ác ido d ic lo ro a cé tico (262 m g, 2 ,03 m m o l) y a g u a (0 ,183 m l) a ta . D espués de a g ita r a ta d u ra n te 3 h en N ² , se añ ad ió p ir id in a (0,8 g, 10 ,16 m m o l) a la so luc ión . D espués de a g ita r d u ra n te 2 h, la m ezc la se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo. El res idu o (co m b in a d o con ge l de s ílice : 6 g) se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (M eO H /D C M = de l 0 al 10% ) pa ra d a r el c o m p u e s to 29 s (570 m g) co m o un só lido b lanco . 1H N ^m R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 12.15 -11.97 (m, 2H ), 11.22 (s, 1H), 8.78 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.41 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.09 -8.00 (m, 2H ), 7.69-7.61 (m , 1H), 7.60-7.51 (m, 2H ), 6.51 (dd, J= 3.8 , 17.6 Hz, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.23 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.33 -5.13 (m, 1H), 4.76 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.51 -4.33 (m, 2H ), 4.18 -4.02 (m, 2H ), 3.54 -3.36 (m, 3H ), 2.90 -2.73 (m, 1H), 2.69 -2.56 (m, 1H), 2.40 (br, dd, J= 6.0 , 14.3 Hz, 1H), 1.13 (dd, J= 6.9 , 10.2 Hz, 6H ); 19F N M R (376 M H z, D M S O -d6 ) 5 ppm -197.57 (s, 1 F); E S I-M S : m /z= 773.3 [M+H]+.

P aso 17. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 29 t

El T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y e l C H ³CN fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² a n te s de su uso.

El c o m p u e s to 29 s seca do al v a c ío (100 m g, 0 ,13 m m o l) se c o e va p o ró con u n a m ezc la de C H ³CN y T H F (2 /2 ml x 3), luego se d iso lv ió en una m ezc la de T H F (5 m l). Lueg o se añ ad ió M S 4 Á (500 m g) y un a so luc ió n de 1H-te tra zo l (2,301 m l, 0 ,45 M, p re p a ra d a d iso lv ie n d o 315 m g de te tra zo l en 10 ml de C H ³CN seco , se g u id o de la ad ic ión de 500 mg de M S 4 Á y luego se ag itó d u ra n te 1 h ba jo N ² an tes de su uso ). La su sp e n s ió n b la n ca resu ltan te se ag itó d u ra n te 5 m in a T A ba jo N². Luego, se añ ad ió g o ta a g o ta un a so luc ió n de 2 -c ia n o e tilte tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (78,01 mg, 0 ,26 m m ol) en T H F (1 m l) d u ra n te 5 m in a un v ia l con un a je rin g u illa . La su sp e n s ió n b la n ca resu lta n te se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te 1 ho ra a 35° C ba jo N ². S e añ ad ió una so luc ió n de T B H P (0 ,118 m l, 0 ,65 m m ol, 56 M en d e ca n o ) m ed ia n te u n a je r in g u illa y se ag itó d u ra n te o tros 30 m in. L a m e zc la se d ilu yó con DC M (20 m l), luego se filtró a tra vé s de u n a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró p a ra d a r e l p ro d u c to b ru to co m o un ace ite in co lo ro . El p ro d u c to b ru to (co m b in a d o con ge l de s ílice : 2 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re s ílice (M eO H al 0 % -6 % en DC M , v /v ) pa ra d a r e l co m p u e s to 29 t (72 m g) co m o un só lid o b lanco . E S I-M S : m /z= 887.9 [M+H]+.

P aso 18. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 45 , s a l d e s o d io

S e co m b in ó e l co m p u e s to 29 t (72 m g, 0 ,082 m m o l) con m e tila m in a (5 ,0 m l); d e sp u é s de a g ita r a T A d u ra n te 4 h, la m ezc la d e la rea cc ió n se co n ce n tró ba jo p re s ió n pa ra d a r un p ro d u c to bru to . El p ro du c to b ru to se pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : X b rid g e 10 pm 150 x 30 m m , C o nd ic ió n : a g ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N B: 0, F inal B 25, T ie m p o de g ra d ie n te (m in ): 7, 100% B T ie m p o de re ten c ió n (m in ): 0, C a ud a l (m l/m in ): 25) pa ra d a r la sal de am o n io de l c o m p u e s to 45 (6 ,9 m g) com o un só lido b lan co . 1H N M R (400 M H z, D² O) ó ppm 8.12 (s, 1 H), 7.67 (br, s, 1H), 6.52 (br, dd , J= 4.9 , 11.7 Hz, 1H), 6.31 (br, d, J= 7.0 Hz, 1H), 6.18 -6.04 (m, 1H), 5.64 ­ 5.43 (m, 1H), 5.32 -5.20 (m, 1H), 4.37 (br, d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.15 -4.03 (m , 2H ), 3.57 -3.46 (m, 2H ), 2.83-2.71 (m, 1H), 2.67 -2.56 (m, 1H); 19F N M R (376 M H z, D ²O) ó ppm -195.88 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D ² O) ó ppm -1.513 (s, 1P); E S I-M S : m /z = 661.1101 [M+H]+.

C o n v e rs ió n d e s a l d e s o d io : se añad ió D o w ex 50 W x8 , 200 -400 (8 ml, fo rm a H) a un va so d e p re c ip ita d o s y se lavó con a g ua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego , a la res ina se le añad ió H ²S O ⁴ al 15% en agua de s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una co lu m n a con H ² S O ⁴ al 15% en a g ua d e s io n iz a d a y se lavó con H ² S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g ua d e s io n iza d a hasta pH neu tro . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió una so luc ió n de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en A G U A (po r lo m e n o s 4 C V ), y lu eg o con a g ua d e s io n iz a d a ha s ta qu e tuvo pH neu tro . El c o m p u e s to 45 , s a l d e a m o n io (6 ,9 m g) se d iso lv ió en un a ca n tid a d m ín im a de agua d e s io n iz a d a y se añad ió C H ³ CN (1:1, v /v , 5 m l), a la pa rte s u p e rio r d e la c o lu m n a y se e luyó con a g ua d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se a g ru p a ro n y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to 45 , s a l d e s o d io (2 mg) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, D ² O) ó ppm 8.20 (s, 1H), 7.74 (br, s, 1H), 6.58 (dd, J= 5.1 , 11.7 Hz, 1H), 6.37 (d, J=7.1 Hz, 1H), 6.24 -6.13 (m, 1H), 5.69-5.51 (m, 1H), 5.42 -5.29 (m , 1H), 4.85 -4.83 (m, 1H), 4.70 (br, dd, J= 2.3 , 6.2 Hz, 1H), 4.43 (br, d, J = 3.4 Hz, 1H), 4.23 -4.10 (m, 2H ), 3.64 -3.50 (m , 2H ), 2.91 -2.78 (m, 1H), 2.73 -2.64 (m, 1H); 19F N M R (376 M Hz, D ²O) ó ppm -195.902 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D ² O) ó ppm -1.54 (s, 1P); E S I-M S : m /z= 661.2 [M+H]+.

E je m p lo 30

C o m p u e s to (*R ) 50 A

Compuesto ( *R ) 50A, sal de sodio

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 30a

N ota : El T H F fue rec ién d e s tila d o so b re N a /b e n zo fe n o n a y C H ³CN fue rec ién d e s tila d o sob re C a H ² a n tes de su uso.

S e d iso lv ió el co m p u e s to 29 s (200 mg, 0 ,26 m m ol) en T H F (6 m l) y C H ³ CN (10 m l), al q u e se a ñ ad ie ro n 0,3 g d e M S 4 Á (po lvo ) y una so luc ió n d e 1H -te tra zo l (4 ,6 m l, 0 ,45 M, se ca d o sob re ta m ice s m o le cu la re s a c tiva d o s an tes de su uso ). S e añ a d ió g o ta a g o ta un a so lu c ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (156 mg, 0 ,52 m m ol) en T H F (0 ,9 m l) d u ra n te 10 m in a un v ia l con una je rin g u illa . La su sp e n s ió n b la n ca re su lta n te se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te 2 ho ras a 35° C ba jo a rgón . Luego, se añ ad ió a la so lu c ió n a n te rio r una so lu c ió n de D D T T (264 ,9 mg, 1,29 m m ol) en p ir id in a (10 ml) a 35 ° C. D e spu és de a g ita r la reacc ión a 35 ° C d u ra n te 1 h, la m ezc la se d ilu yó con E tO A c (20 m l), se filtró a tra v é s d e un a a lm o h a d illa de tie rra d e d ia to m e a s , la cap a se lavó con E tO A c y el filtra d o se e va p o ró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r el p ro du c to b ru to . El res iduo se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de gel de s ílice (M eO H en D C M = de l 0% al 7% ) pa ra d a r el co m p u e s to 30 a (80 m g) co m o un só lid o b lanco . E S I-M S : m /z=904.2 [M+H]+.

P aso 2: p re p a ra c ió n de l c o m p u e s to (*R ) 50 A , s a l d e s o d io

S e tra tó el co m p u e s to 30 a (80 m g) con M eN H ² (5 ml, en E tO H , 30% ) a 25° C. D e sp u é s de a g ita r la reacc ión a 25° C d u ra n te 3 h, el so lve n te se e va p o ró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se d iso lv ió en una m ezc la de H ² O /C H ³CN (30 ml) y se lavó con D C M (3 x 15 m l). La fa se a cu o sa se lio filizó pa ra d a r el p ro du c to b ru to (71 m g) co m o un só lid o am a rillo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva in ve rsa (m é todo : co lum n a , W a te rs X b rid g e P re p O B D 5 pm C 18 150 x 30 ; agua d e co n d ic ió n (N H 4 H C O 3 10 m M ) (A) - A C N (B) B d e In ic io 0 B F ina l 23; T iem p o de G ra d ie n te (m in ) 7; 100% B T ie m p o de re ten c ió n (m in ) 0 C a ud a l (m l/m in ) 25) pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 50 A , s a l d e a m o n io (8 mg, 9% ) co m o un só lid o b lanco . 1H ⁿ M ^r (400 M H z, D 2O ) ó 8.63 (b r s, 1 H), 8.51 (d, J = 1.7 Hz, 1 H), 6.94 (br d, J= 18.8 Hz, 1H), 6.65 (br d, J= 3.4 Hz, 1H), 6.39 (br d, J= 2.9 Hz, 1H), 6.20 -6.00 (m, 1H), 5.71 (br t, J = 11.4 Hz, 1H), 5.06 (brs, 1H), 4.70 -4.60 (m, 1 H), 4.56 -4.47 (m, 1 H), 4.04 -3.96 (m, 1H), 3.94 -3.85 (m, 1H), 3.27 -3.17 (m, 1H), 3.16 -3.03 (m, 1H); 19F N M R (376 M H z, D 2O ) ó ppm -195.682

31P N M R (162 M H z, D 2O ) ó ppm 54.318 ; E S I-M S : m /z 677.2 [M H]+.

C o n v e rs ió n a s a l d e s o d io

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (2 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (10 m l). Luego a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (15 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a co lu m n a con H ² S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V ), y luego con a g ua d e s io n iza d a has ta qu e el pH fue neu tro . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió un a so luc ió n de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g ua (po r lo m en os 4 C V), y luego con agua d e s io n iz a d a hasta pH neu tro . El c o m p u e s to (*R ) 50 A , s a l d e a m o n io (4 m g) se d iso lv ió en una ca n tid a d m ín im a d e agua d e s io n iza d a : se añ ad ió C H ³ CN (3:1, v /v , 8 m l), a la pa rte s u p e rio r d e la c o lu m n a y se e luyó con a g ua d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se a g ru p a ro n y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 50 A , s a l d e s o d io (2 ,4 m g, 58% ) co m o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D 2O ) ó ppm 8.25 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 6.59 (dd, J= 4.3 , 15.5 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.15-6.01 (m, 1H), 5.86 -5.66 (m, 1H), 5.54-5.41 (m , 1H), 4.47 (hr d, J= 3.9 Hz, 1H), 4.29 -4.12 (m, 2H ), 3.65 -3.54 (m, 2H ), 2.88 -2.79 (m , 1H), 2.76 -2.69 (m, 1 H); 19F N M R (376 M H z, D 2O ) ó ppm -194.41

31P N M R (162 M H z, D 2O ) ó ppm 53.83 ; E S I-M S : m /z=677.1 [M+H]+.

E je m p lo 31

C o m p u e s to 51

S e añ ad ió go ta a g o ta b is (tr im e tils ilil)a c e ta m id a (BSA, 93 ,95 g, 461 ,9 m m ol) a una su sp e n s ió n de 8-a za g u a n in a (11,71 g, 77 ,0 m m ol) en M eC N an h id ro (340 m l) a 25 ° C. La m ezc la d e la reacc ión se ag itó a 80° C d u ra n te 3 h y lu eg o se e n frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te . S e añ ad ió una so lu c ió n de 1 ,2 -d i-O -a ce til-5 -b e n zo il-3 -O -m e til-D -rib o fu ra n o sa 31 a [C A S 10300 -21 -7 ](13 ,56 g, 38 ,5 m m ol) en M eC N an h id ro (65 ml) seg u ido de la a d ic ió n g o ta a g o ta de SnCU (80,21 g, 307 ,9 m m ol). La so luc ió n h o m og éne a se ag itó a 80° C d u ra n te 30 m in , lu eg o se en frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se ve rtió en un a so luc ió n a cu o sa de N aH C O 3 al 5% e n fria d a con h ie lo (800 m l). S e añad ió E tO A c (800 m l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te 10 m in . La m ezc la de la reacc ión se filtró y el filtra d o se tra n s fir ió a un e m b u d o de d e ca n ta c ió n . Las d o s ca p a s se se p a ra ro n y la ca p a de a g ua se ex tra jo con E tO A c (200 ml x 2). Las ca p a s o rg á n ic a s c o m b in a d a s se la va ro n con N aHCO 3 acu oso al 5% (600 ml x 2), se seca ron sob re Na2SO4 y se e va p o ra ro n has ta la se q ue da d al va c ío pa ra d a r el co m p u e s to b ru to 31 b (11 ,50 g). El p ro d u c to b ru to se usó d ire c ta m e n te en la s ig u ie n te reacc ión s in p u rif ica c ió n ad ic io na l. 1H N M R (600 M H z, DM SO -d6) ó ppm 11.09 (br s, 1H), 7.88 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.61 -7.68 (m , 1H), 7.44 -7.52 (m, 2H ), 7.04 (b r s, 2H ), 6.17 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 5.90 (dd, J= 5.0 , 2.1 Hz, 1 H), 4.66 (dd, J = 7.1 ,4.9 Hz, 1H), 4.53 -4.58 (m, 1H), 4.35 -4.42 (m, 2H ), 3.41 (s, 3H ), 2.14 (s, 3H ); ESI-M S: m /z 445.5 [M+H]+.

P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 31 c

A un a so luc ió n de l co m p u e s to b ru to a n te rio r 31 b (11 ,50 g) en d im e tila c e ta m id a an h id ra (57 ,5 m l) se le añ ad ió go ta a g o ta an h íd rid o iso bu tír ico (6 ,14 g, 38 ,8 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 140° C du ra n te 2 h, lu eg o se en frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se d ilu yó con E tO A c (300 m l). La so luc ión resu lta n te se lavó con N H ⁴ CI a cu oso al 10% (300 ml x 3) y sa lm u e ra (300 m l). La c a p a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 y se co n ce n tró ha s ta la se q u e d a d al v a c ío p a ra d a r e l c o m p u e s to b ru to 31 c (13 ,30 g). El p ro d u c to b ru to se usó d ire c ta m e n te en la s ig u ie n te rea cc ió n sin p u rifica c ió n ad ic iona l.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 31 d

A u n a so luc ió n de l c o m p u e s to b ru to 31 c (11 ,98 g, de l P aso 2) en T H F (42 m l), M eO H (35 m l) y H ²O (11 ml), se le añ ad ió N aO H 5N (11 ml, 55 m m o l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 0° C d u ra n te 4 h. El pH de la m e zc la de la reacc ión se a jus tó a 6 ,5 con ác ido fó rm ico . La so luc ió n resu lta n te se co n ce n tró al v a c ío ha s ta la se q u e d a d y el res iduo se tr itu ró con M eC N y H ²O va ria s ve ce s pa ra d a r e l c o m p u e s to 31 d (1 ,55 g, ren d im ien to : 14% a p a rtir de 31 b ). 1H N M R (600 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.07 (b r s, 2H ), 5.97 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 5.68 (b r s, 1H), 4.92 (b r s, 1H), 4.84 (b r s, 1H), 4.01 -4.08 (m, 2H ), 3.52 -3.59 (m, 1H), 3.44 -3.50 (m, 1H), 3.43 (s, 3H ), 2.79 (spt, J= 6.8 Hz, 1H), 1.13 (d, J= 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 369.5 [M+H]+.

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 31 e

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 31 d (1 ,10 g, 3 ,0 m m ol) en p ir id in a a n h id ra (20 ,0 m l) se le añ ad ió una so luc ió n de D M TrC l (1 ,32 g, 3 ,9 m m o l) en p ir id in a (3 ,0 m l) a 0° C. La m ezc la resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 12 h, d e sp u é s de lo cua l se d ilu yó con E tO A c y se lavó con N aH C O 3 sa tu ra do , a g u a y sa lm ue ra . La cap a o rg á n ica se secó sob re N a ²S O ⁴ , se filtró y se c o n ce n tró ha s ta la seq ue da d a 40° C. El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de ge l de s ílice (e luc ió n en g ra d ie n te : E tO A c al 20 -50 % en he p tan o ) pa ra d a r el co m p u e s to 31 e co m o un só lido b lan co (1 ,52 g, ren d im ien to : 76% ). 1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.87 (b r s, 1H), 7.24 -7.28 (m, 2H ), 7.10 -7.24 (m, 7H ), 6.76 -6.82 (m, 4H ), 6.06 (d, J=2.1 Hz, 1H), 5.79 (b r d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.01 (b r s, 1H), 4.18 -4.24 (m, 2H ), 3.71 (s, 6H ), 3.36 (s, 3H ), 3.15 -3.20 (m, 1H), 3.05 (b r dd, J = 10.0, 3.9 Hz, 1H), 2.80 (spt, 0.7 = 6.8 Hz, 1H), 1.13 (d, J= 6.9 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 671.4 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 31 f

S e d iso lv ie ro n e l co m p u e s to 31 e (1 ,30 g, 1 ,94 m m ol), D M A P (546 mg, 4 ,47 m m o l) y su lfa m a to 17a (1 ,18 g, 1 ,33 m m o l) p o r s e p a ra d o en D C E seco (3 x 3 m l). C a d a so luc ió n se secó con ta m ic e s m o le cu la re s a c tiva d o s de 3Á a g ita n d o ba jo N ² d u ra n te la noche . A la so luc ió n de su lfa m a to 17a en DC E, se le añ ad ie ro n re sp e c tiva m e n te la so luc ió n de D M A P en D C E y la so luc ió n de l co m p u e s to 31 e en D C E (a ñ a d id a m ed ia n te u n a je rin g u illa ). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 60° C ba jo N² d u ra n te 4 h. E sta m ezc la se d ilu yó con DC M y se filtró , e l f iltra d o se lavó con ác ido acé tico a cu oso al 2% , N aH C O 3 a cu o so al 5% y so luc ió n de s a lm u e ra co n se cu tiva m e n te , y luego se eva po ró ha s ta la seq ue da d a p res ión reduc ida . El res iduo se d iso lv ió en DCM y se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO H al 0 ,6 -1 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 31 f co m o un só lido a m a rillo (0 ,53 g, ren d im ien to : 28% ). E S I-S M : m /z 1407.6 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 31 g

S e ag itó d u ra n te 4 h a te m p e ra tu ra am b ie n te u n a so luc ión de l c o m p u e s to 31 f (480 m g, 0 ,34 m m o l) en DCM (5 m l) a la q u e se añ ad ie ro n ag ua (30 ,8 mg, 1,71 m m o l) y D C A (220 m g, 1,71 m m ol). Luego, la m ezc la de la rea cc ió n se lavó con N aH C O 3 a cu oso al 5% y sa lm ue ra . La fa se o rg á n ica se secó sob re N a²S O ⁴ y se con cen tró ha s ta la seq ue da d a p re s ió n reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO H al 1-5% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 31 g co m o un só lido b lan co (150 m g, re n d im ie n to : 55% ). 1H N M R (500 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 11.90 (b r s, 1H), 11.27 (b r s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.04 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.61 -7.70 (m, 1H), 7.51 -7.59 (m, 2H ), 6.38 (d, J = 19.5 Hz, 1H), 6.29 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 5.51 -5.69 (m, 2H ), 4.90 (b r s, 1H), 4.63 (ddd, J= 20.4 , 7.6, 4.6 Hz, 1H), 4.47 (b r t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.00 -4.12 (m, 2H ), 3.55 ­ 3.61 (m, 1H), 3.42 -3.47 (m, 2H ), 3.39 (s, 3H ), 3.21 -3.29 (m, 1H), 2.77 (spt, J= 6.7 Hz, 1H), 1.11 (d, J= 6.9 Hz, 6H ); E S I-M S : m s 803.7 [M H ]+.

P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 31 h

Se tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 31 g (100 mg, 0 ,125 m m o l) y 1H -te tra zo l (2 ,22 ml, so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 0 ,998 m m o l) en T H F seco (2 m l) con ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á d u ra n te 1 h en N ² d e s p u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta d u ra n te 15 m in 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il)- fo s fo ro d ia m id ita (67 ,5 m g, 0 ,22 m m o l) en M eC N seco (0 ,6 m l) (no ta : e l T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el M eC N rec ién d e s tila d o s sob re C a H ² an tes de su uso). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 90 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . Se añ ad ió u n a so luc ió n de tB u O O H (199 pl, 0 ,99 m m o l) y se c o n tin u ó ag ita n d o d u ra n te o tros 30 m in . La m ezc la de la rea cc ió n se filtró a tra vé s de u n a a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y se con cen tró . El res idu o se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 31 h co m o un só lido b lanco (32 mg, ren d im ien to : 30% ). E S I-M S : m /z 918 ,4 [M+H]+.

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 51 , s a l d e s o d io

S e ag itó el co m p u e s to 31 h (32 m g, 0 ,035 m m o l) en una so luc ió n d e m e tila m in a al 33 % en e ta no l (12 ml) a 40° C d u ra n te 2 ,5 h. La rea cc ió n de la m ezc la se co n ce n tró a ba ja p res ión . El res iduo se d iso lv ió en agua , se lavó con D C M y se lio filizó . El p ro du c to b ru to se pu rificó m ed ia n te H P L C p re p a ra tiva de fa s e in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : X b rid g e O B D C 18, 5 gm , 150 x 30 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico acu oso 10 m M (A) - M eC N (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ). La co n ve rs ió n fina l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa so b re una co lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io d e io ne s de sod io ca tió n ico pa ra d a r el c o m p u e s to 51 , s a l d e s o d io co m o un só lido esp o n jo so b lanco d e sp u é s de la lio filiza c ió n (14 m g, ren d im ien to : 55 % ). 1H N M R (400 M H z, D ²O) ó ppm 8.15 (b r s, 1H), 7.10 (br s, 1H), 6.51 -6.45 (m , 1H), 6.41 (b r s, 1H), 6.16 (b r s, 1H), 5.36 -5.12 (m, 2H ), 4.61 (br d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.52 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.38 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.23 (dd, J= 2.4 , 4.8 Hz, 2H ), 3.77 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.57 (s, 3H ), 3.42 (br d, J = 12.8 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D ² O) ó ppm -1.81 (s, 1P); 19F NM R (376 M H z, D ² O) ó ppm -196.87 -197.38 (m , 1F); E S I-M S : m /z 691.0 [M+H]+.

E je m p lo 32

C o m p u e s to 25

El T H F fue rec ién d e s tila d o so b re N a /b e n zo fe n o n a y el C H ³CN fue rec ién de s tila d o so b re C aH 2.

S e co e va p o ró el d io l 3 q seca do al va c ío (250 mg, 0 ,307 m m ol) con una m ezc la d e C H ³C N /T H F (8 /5 ml x 3) y se d iso lv ió en una m ezc la de C H ³ C N /T H F (7 ,5 /5 m l). S e a ñ ad ie ro n 600 m g d e ta m ice s m o le cu la re s 4 Á a c tiva d o a y una so lu c ió n de 1H -te tra zo l en C H ³ CN (5 ,47 m l, 0 ,45 M, p re p a ra d a d is o lv ie n d o 630 m g de te tra zo l en 20 ml de CH3CN seco , se g u id o de la a d ic ió n de 600 m g de ta m ice s m o le cu la re s d e 4 Á y lu eg o ag ita n d o d u ra n te 1 h ba jo a rg ón a n tes de l uso ). D e spu és d e a g ita r la su sp e n s ió n b la n ca d u ra n te 1 h a 8° C en una a tm ó s fe ra de a rg ón , se añ ad ió g o ta a g o ta una so luc ió n de 2 -c ia n o e til N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita en C H ³ CN (4 ,69 ml, 0 ,49 m m ol, 0 ,105 M en C H ³ CN , p re p a ra d a d is o lv ie n d o 506 mg de a m id ita en 16 ml de C H ³C N , se g u id o de la ad ic ió n de 600 m g de ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á y luego se ag itó d u ra n te 1 h en a rg ó n a n tes de su uso) d u ra n te 60 m in . La su sp e n s ió n b lan ca resu ltan te se ag itó d u ra n te 1 h a 8° C ba jo a rgón . S e añ ad ió m ás C H ³ CN (5 m l) y d e sp u é s de a g ita r d u ra n te 1 h a 30 ° C, se añ ad ió te tra zo l ad ic io na l (1 ,36 m l, 0,61 m m ol). D e spu és d e a g ita r d u ra n te 2 h m ás, se añ ad ió rá p id a m e n te T B H P (0 ,5 m l, 2 ,5 m m ol, 5 M en d e can o ). D e spu és de a g ita r d u ra n te 30 m in , la m ezc la se filtró a tra v é s de un a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s ; el filtra d o se co m b in ó con o tro lo te y se co n ce n tró a p res ión red uc ida pa ra d a r un res iduo d isu e lto en D C M (8 ml) y se p u rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (M eO H al 0 -6% en D C M , 25 m l/m in ) pa ra p ro p o rc io n a r 32 a (136 mg) co m o un só lido b lanco . ES I-M S: m /z= 927 [M+H]+.

El só lido a n te r io r se co m b in ó con o tro lo te y se pu rificó a d ic io n a lm e n te m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (C o lum n a : X tim a te 5 pm C 18 150x25; fase m óvil agua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N . B de In ic io 23, B F ina l 53; C a ud a l: 25 m l/m in T iem p o de g ra d ie n te : 9 m in se g u id o de B 100 d u ra n te 3 m in ), se reco g ie ro n las fra cc io n e s d e se a d a s y se lio filiza ro n pa ra g e n e ra r 36 a co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, C D ³C N ) ó 9.36 (td, J= 3.7 , 7.2 Hz, 2H ), 8.72 -8.60 (m , 1H), 8.73 -8.56 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.12 -7.96 (m , 3H ), 7.86 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.71 -7.62 (m, 1H), 7.62-7.51 (m, 2H ), 6.21 (s, 1H), 6.06 -5.94 (m , 1H), 5.46 -5.37 (m , 1H), 5.37 -5.29 (m, 1H), 5.28-5.21 (m, 1H), 4.82 (dd, J= 6.2 , 11.1 Hz, 1H), 4.63 (dd, J= 3.9 , 11.2 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 2.8 , 11.4 Hz, 1H), 4.45 -4.38 (m, 1 H), 4.35 ­ 4.19 (m, 2H ), 4.17 -4.07 (m , 2H ), 4.03 -3.93 (m , 1H), 3.89 -3.79 (m , 1H), 3.68 -3.58 (m, 2H ), 3.59 -3.50 (m, 1H), 2.80 (t, J= 5.9 Hz, 1 H), 2.54 (td, J=5.2 , 17.2 Hz, 1H), 2.42 -2.27 (m , 1H), 1.10 -1.02 (m, 3H ), 0.88 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 0.83 (d, J= 6.8 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, C D sC N )= 3.07 (s, 1P), 3.15 (s, 1P); E S I-M S : m /z= 927.3 [M H]+.

P rep a ra c ió n del C o m p u e s to 25 , s a l d e s o d io

S e ag itó un a so luc ió n de l co m p u e s to 32 a (30 ,5 m g, 0 ,033 m m ol) en M e N H ² (27 -30 % en E tO H , 5 m l) a 5° C d u ra n te 4 h. La m ezc la de la rea cc ió n se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo ; el res iduo se repartió e n tre D C M /a g u a (10 /15 m l). La ca p a a cu o sa se lavó con D C M (8 ml x 3) y se lio filizó . El c o m p u e s to b ru to se su sp e n d ió en 6 ml de ace ta to d e e tilo , se son icó (3 m in) y se ce n trifu g ó (5 m in ). Se recog ió el so b re n a d a n te an te rio r y se rep itió el p ro ce d im ie n to a n te r io r d o s vece s . El p re c ip ita d o se repa rtió en tre D C M /a g u a (10 /15 m l). La capa a cu o sa se ex tra jo con D C M (10 ml x 2) y se lio filizó pa ra d a r un só lido . La co n ve rs ió n fina l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa sob re una c o lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io de io ne s de sod io c a tió n ic a pa ra d a r el c o m p u e s to 25 , s a l d e s o d io co m o un só lido e sp o n jo so b lanco d e s p u é s de la lio filiza c ió n (60,1 m g). 1H N M R (400 M H z, D 2O )< 58.15-7.90 (m , 1H), 7.83 (b r s, 2H ), 7.69 (b r s, 1H), 6.90 -6.72 (m, 1H), 6.08 -5.82 (m, 1H), 4.45 -4.15 (m, 3H ), 4.16 -3.88 (m, 1H), 3.28 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 2.87 (t, J= 6.7 Hz, 1H), 2.68 -2.59 (m, 1H), 2.46 (s, 4H ); 31P N M R (162 M H z, D ² O) ó -2.4 (s, 1P); E S I-M S : m /z=700 [M+H]+.

E je m p lo 33

C o m p u e s to s (*R ) 23 A y (*S ) 23 B

Compuesto ( R *) 23A, Compuesto ( S *) 23B, sal de sodio sal de sodio

P aso 1: P re p a ra c ió n de lo s C o m p u e s to s 33 b y 33 c

S e tra tó un a so lu c ió n del co m p u e s to 33 a (600 m g, 0 ,75 m m ol) y 1H -te tra zo l (8 ,97 ml de M eC N al 3 -4% , seca do en ta m ice s m o le cu la re s d e 3 Á a n tes de su uso) en M eC N /T H F 1:1 (110 ml, seca do en ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á an tes de su uso) con ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á ac tiva d o s ba jo N ² d u ra n te 1 h, d e sp u é s de lo cua l se añad ió de una ve z 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (240 pl, 0 ,75 m m ol). La m e zc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 3 ,5 h. S e añ ad ió u n a ca n tid a d ad ic io n a l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,12 m l, 0 ,37 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . Luego, se añ ad ió d isu lfu ro de fe n ila c e tilo (P A D S , 0 ,45 g, 1,5 m m ol), la m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 18 ho ras m ás. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r filtra c ió n y se lava ron con d ic lo ro m e ta n o . Los filtra d o s c o m b in a d o s se lavaron p o s te r io rm e n te con u n a m e zc la 1:1 de N a ²S²O ³ a cu oso sa tu ra d o y N a H C O ³ a cu oso sa tu ra d o y sa lm ue ra , se seca ron con M g S O 4 , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . E l res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 33 b (122 mg, ren d im ien to : 17% ) co m o el p r im e r isó m ero en e lu ir y e l c o m p u e s to 33c (39 m g, ren d im ien to : 5% ) co m o seg un do isó m ero en e lu ir. C o m p u e s to 33 b E S I-M S : m /z 933.5 [M H]+; C o m p u e s to 33 c E S I-M S : m /z 933.6 [M+H]+.

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to (R *) 23 A , s a l d e s o d io y C o m p u e s to (S *) 23 B , s a l d e s o d io

S e ag itó e l co m p u e s to 33 b (122 mg, 0 ,13 m m o l) en u n a so luc ió n de m e tila m in a al 33% en e ta n o l (7 m l) a 45° C ha s ta la co n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 1 h). La m ezc la de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to resu lta n te se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a pu rifica c ión p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 150 x 50 m m ; fa s e m óvil, b ica rb o n a to de am o n ía co a cu oso al 0 ,25% (A) - M eO H (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r el c o m p u e s to (R *) 23 A . La con ve rs ión fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te la e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re u n a c o lu m n a co m p a c ta d a con un a re s in a de in te rca m b io de iones de sod io c a tió n ica pa ra d a r e l c o m p u e s to (R *) 23 A , s a l d e s o d io co m o un só lid o e s p o n jo s o b lan co d e sp u é s de la lio filizac ió n (13 m g, re n d im ie n to : 14% ). H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.23 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.82 (b r s, 1H), 6.44 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 5.65 (dd, J= 50.6 , 3.4 Hz, 1H), 5.42 (brs, 1H), 5.17 (ddd, J= 21.8 , 9.2, 3.4 Hz, 1H), 4.66-4.71 (m, 1H), 4.46 -4.58 (m , 2H ), 4.15 (b r s, 1H), 4.00 (b r dd, 0.7 = 12.2 , 4.1 Hz, 1H), 3.69 -3.90 (m, 2H ), 3.60 (s, 3H ); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm 52.18 (s, 1 P), E S I-M S : m /z 706.4 [M+H]+.

S e ag itó e l co m p u e s to 33 c (39 m g, 0 ,035 m m o l) en u n a so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (2 m l) a 45° C ha s ta la co n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 1 h). La m ezc la de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to resu lta n te se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a pu rifica c ión p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 10 pm , 150 x 50 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to de am o n ía co a cu oso al 0 ,25 % (A) - M eO H (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) p a ra d a r el c o m p u e s to (S *) 23 B . La con ve rs ión fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te la e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re u n a c o lu m n a co m p a c ta d a con un a res ina de in te rca m b io de iones de sod io c a tió n ica pa ra d a r e l c o m p u e s to (S *) 23 B , s a l d e s o d io co m o un só lido e s p o n jo s o b lan co d e sp u é s de la lio filizac ió n (18 m g, ren d im ien to : 70% ). 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.43 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.88 (b r s, 1H), 6.52 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 5.97 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 5.81 (dd, J= 50.5 , 3.7 Hz, 1H), 5.45 -5.60 (m , 1H), 5.33 -5.44 (m, 1H), 4.67 -4.73 (m, 1H), 4.49 -4.53 (m, 1H), 4.43 (dt, J = 11.7, 3.7 Hz, 1H), 4.17 (b r s, 1H), 4.05 ­ 4.11 (m, 1H), 3.78 (m, J= 9.8 Hz, 2H ), 3.62 (s, 3H ); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm 56.24 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 706.4 [M+H]+.

o m p u e s to (*R ) 32 A y C o m p u e s to (*S ) 32 B

C o m p u e s to ( * R ) 32 A , s a l d e s o d io C o m p u e s to (*S) 32 b , s a l d e s o d io

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 34 b y el C o m p u e s to 34 c

S e d iso lv ió el co m p u e s to 34 a (0 ,8 g, 0 ,99 m m o l) en un a m ezc la d e A C N an h id ro (85 m l) y T H F an h id ro (85 m l). S e añ a d ie ro n 1H - te tra z o l (11 ,5 m l, 3 ,96 m m ol) y ta m ice s m o le cu la re s de 3Á . La m ezc la se ag itó d u ra n te 1 hora a T A y lu eg o se añ a d ió 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0,31 ml, 0 ,99 m m ol) de una ve z m e d ia n te una je rin g u illa . La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 4 ,5 ho ras. S e añ ad ió una ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (0 ,16 ml, 0 ,5 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a T A d u ra n te 2 d ía s y lu eg o se añ ad ió d isu lfu ro de fe n ila ce tilo (P A D S , 0 ,6 g, 1 ,98 m m o l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 18 ho ras. La m ezc la de la reacc ión se filtró . Los ta m ice s m o le cu la re s se la va ro n tre s ve c e s con d ic lo ro m e ta n o . E l filtra d o co m b in a d o se lavó con un a m ezc la de so luc ió n sa tu ra d a d e Na2S2Ü3 y una so lu c ió n sa tu ra d a d e NaH C Ü 3, se lavó con sa lm ue ra , se secó con M gSÜ4, se filtró y se e va p o ra ro n los so lve n te s del filtrad o . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 34 b (224 m g, ren d im ien to : 16% ) co m o el p rim e r isó m ero en e lu ir y el co m p u e s to 34 c (265 mg, ren d im ien to : 11% ) com o seg un do isó m ero en e lu ir.

C o m p u e s to 34 a E S I-M S : m /z 939.5 [M+H]+;

C o m p u e s to 34 b E S I-M S : m /z 939.5 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ), s a l d e s o d io 33 A y C o m p u e s to 33 b , s a l d e s o d io

S e ag itó el co m p u e s to 34 a (224 m g, 0 ,16 m m o l) en una so luc ió n d e m e tila m in a al 33 % en e ta no l (6 ,5 m l) a 45° C ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 1 h). La m ezc la d e la rea cc ió n se e n frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro du c to b ru to re su lta n te se tr itu ró en M eC N se g u id o de un a pu rifica c ió n po r H P LC de fase in ve rsa p re p a ra tiva (fase es ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 150 x 50 m m ; fa se m óvil, b ica rb o n a to de a m o n íaco acu oso al 0 ,25% (A) - M eO H (B); g ra d ie n te de e luc ió n ) pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ), s a l d e a m o n io 32A . La co n ve rs ió n fina l en la sal de sod io se rea lizó m e d ia n te la e lu c ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re un a co lu m n a c o m p a c ta d a con res ina de in te rca m b io ió n ico de sod io c a tió n ic a pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ), s a l d e s o d io 32 A co m o un só lido b lan co e sp o n jo so d e sp u é s d e la lio filiza c ió n (31 m g, ren d im ien to : 27 % ). 1H N M R (400 M H z, D M S O -d6) ó ppm 8.77 (br s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H ), 7.18 (br s, 2H ), 6.22 (dd, J= 15.3 , 2.4 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.70 -5.84 (m, 1 H), 5.59 (b r d, J = 51.7 Hz, 1 H), 5.30 (dd, J= 54.9 , 3.3 Hz, 1 H), 5.03 (br d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.15 -4.29 (m, 3H ), 3.70 -3.79 (m, 1H), 3.20 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.00-3.11 (m, 1H); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) ó ppm 52.83 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 678.4 [M ^h ]+.

S e ag itó el co m p u e s to 34 b (265 m g, 0,11 m m ol) en un a so lu c ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta no l (2 m l) a 45° C ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 1 h). La m ezc la d e la rea cc ió n se e n frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro du c to b ru to re su lta n te se tr itu ró en M eC N se g u id o de un a pu rifica c ió n po r H P LC de fase in ve rsa p re p a ra tiva (fase es ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 150 x 50 m m ; fa se m óvil, b ica rb o n a to de a m o n íaco acu oso al 0 ,25% (A) - M eO H (B); g ra d ie n te de e luc ió n ) pa ra d a r el c o m p u e s to (*S ) 32 b , s a l d e a m o n io . La co n ve rs ió n fina l en la sal de sod io se rea lizó m e d ia n te la e lu c ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re un a co lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io ió n ico d e sod io ca tió n ico pa ra d a r el c o m p u e s to (*S ) 32 b , s a l d e s o d io com o un só lido e sp o n jo so b lan co d e sp u é s de la lio filiza c ió n (20 m g, ren d im ien to : 25% ).

1H N M R (400 M H z, D ² O) ó ppm 8.22 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 6.45 (br d, J= 15.7 Hz, 1H), 6.27 (br d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.91 (br d, J= 51.3 Hz, 1H), 5.52 -5.74 (m, 1H), 5.23-5.51 (m, 2H ), 4.50 -4.80 (su p e rp o s ic ió n d e p icos de so lven te , 4H ), 4.00 -4.43 (m, 1H), 3.59 -3.98 (m, 1H); 31P N M R (162 M H z, D ² O) ó ppm 56.05 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 678.1 [M+H]+.

E je m p lo 35

C o m p u e s to 26

El co m p u e s to 35 a se co e va p o ró con p ir id in a (30 m l) do s ve c e s a n tes d e su uso. A una su sp e n s ió n ag itad a de l co m p u e s to 35 a (3 g, 11,22 m m o l) en p ir id in a (50 m l) se le añ ad ió g o ta a g o ta m e d ia n te un em b u d o de go teo ig u a la d o r de p re s ió n a 0° C T M S C l (7,2 m l, 56 ,73 m m ol) d u ra n te 30 m in da n d o co m o resu ltad o una susp e n s ió n b lanca , luego se ag itó a d ic io n a lm e n te a T A d u ra n te 1 ha. Luego, se añ ad ió c lo ru ro de iso bu tir ilo (2 ,4 g, 22 ,52 m m ol) a la m ezc la de la rea cc ió n m ed ia n te una je r in g u illa a 0° C ba jo N ² d u ra n te 15 m in . La su sp e n s ió n resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te la no ch e ba jo a tm ó s fe ra d e N ². S e añ ad ió a g ua (15 m l) a la m ezc la d e la rea cc ió n a 0° C, luego se añ ad ió h id ró x ido de am o n io (17 ,3 m l, 25% ) m e d ia n te un em b u d o de g o teo ig u a la d o r d e p re s ió n a 0° C d u ra n te 10 m in . La so luc ió n tra s p a re n te re su lta n te se ag itó a d ic io n a lm e n te a T A d u ra n te 1 h. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (del 0% al 20 % d e M eO H en D C M ) pa ra d a r 35 b co m o un só lido am a rillo . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) ó ppm 12.12 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 5.79 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.46 -4.50 (m, 1H), 4.30 -4.38 (m , 1H), 3.68 (br dd, J= 12.0 , 3.2 Hz, 3H ), 3.52 (br dd, J= 12.0 , 3.6 Hz, 1H), 2.73 -2.84 (m, 1H), 2.18 ­ 2.28 (m, 1H), 1.90 (ddd, J= 13.2 , 6.0 , 2.0 Hz, 1H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 338.1 [M H]+.

P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 35 c

A una so luc ió n ag ita d a de l co m p u e s to 35 b (3 ,4 g, b ru to ), tr ife n ilfo s fin a (7 ,93 g, 30 ,23 m m ol) e im idazo l (2 ,75 g, 40 ,4 m m ol) en T H F (35 ml) se le añ a d ió a 0° C una so luc ió n de I² (7 ,68 g, 30 ,26 m m ol) en T H F (20 m l). D e spu és de a g ita r la reacc ión du ra n te la no che a 35 ° C, la m ezc la se filtró y el filtra d o se con cen tró , luego se d iluyó con D C M (150 m l) y se lavó con Na2SO3 a cu o so sa tu ra do (100 ml x 2). La ca p a o rg á n ica se secó con Na2SO 4, se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :0 -10:1 ) pa ra d a r el co m p u e s to 35 c (1 ,55 g) co m o un só lido am arillo .

1H N M R (DM SO -da, 400 M H z) ó ppm 12.11 (s, 1H), 11.66 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 5.82 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.74 -5.76 (m, 1H), 4.65 -4.70 (m , 1H), 4.30 -4.39 (m , 1H), 3.43 -3.55 (m, 2H ), 2.78 (qu in , J= 6.8 Hz, 1H), 2.12 -2.25 (m, 2H ), 1.12 (d, J= 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 447.9 [M+H]+.

P aso 3: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 35 d

S e añ ad ió NaN3 (800 mg, 12,3 m m o l) a una so luc ió n ag ita d a de l co m p u e s to 35 c (1 ,73 g, 3 ,87 m m o l) en D M F (25 m l) en N ². D e spu és de a g ita r la reacc ión a 80° C d u ra n te 3 h, la m ezc la se d ilu yó con D C M (100 m l) y se lavó con sa lm u e ra (50 ml x 2). La ca p a o rg á n ica se secó con Na2SO4 an h id ro y se eva p o ró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r el res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :0 -10:1 ) pa ra d a r el co m p u e s to 35 d (1 ,27 g) co m o un só lido am a rillo . E S I-M S : m /z 363.1 [M+H]+.

P aso 4: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 35e

S e co e va p o ró e l c o m p u e s to 35 d con p ir id in a (20 m l) do s ve ce s an tes de su uso.

A u n a so luc ión de l co m p u e s to 35 d (1 ,27 g) en p ir id in a (15 m l) se le añ ad ió D M A P (215 m g, 1 ,76 m m ol) y D M TrC I (1,781 g, 5 ,257 m m ol) a 0° C. D e spu és de a g ita r la reacc ión a T A d u ra n te la noche , la m ezc la se d ilu yó con C H ²C l² (80 m l), luego se lavó su ce s iva m e n te con N aH C Ü 3 a cu oso sa tu ra d o (50 m l x 3). La c a p a o rg á n ic a se recog ió , se secó con Na2SÜ4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión red u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ian te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c al 0 -85 % en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r el c o m p u e s to 35 e (1,61 g) co m o un só lido am a rillo . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 5 12.05 (s, ¹ H), 11.59 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.36 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.22 -7.29 (m, 2H ), 7.12 -7.22 (m, 5H ), 6.76 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.69 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 5.55 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.72 (b r d, J= 6.4 Hz, 1H), 4.42-4.51 (m, 1H), 3.64 (d, J = 12.4 Hz, 6H ), 3.47 -3.54 (m , 1H), 3.37 (b r d, J= 6.4 Hz, 1H), 2.79 (qu in , J= 6.8 Hz, 1H), 2.03 -2.14 (m , 1H), 1.85 -1.94 (m, 1H), 1.13 (t, J= 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 665.2 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 35 f

A un a so luc ió n de l co m p u e s to 35 e (1,61 g, 2 ,42 m m o l) en T H F (16 m l) se le añ ad ió Ph3P (889 m g, 3 ,39 m m o l) en u n a po rc ión , luego la m ezc la se ag itó a 40° C d u ra n te 2 h ba jo N² , se añ ad ió ag ua (8 m l) a la m ezc la , lu eg o se ag itó a d ic io n a lm e n te a 40° C d u ra n te la noche . La m ezc la se co m b in ó con o tro lo te b ru to y se d ilu yó con C H ²C l² (100 m l), a g u a (80 m l) y se e x tra jo con C H ²C L (100 m l x 2). Las ca p a s o rg á n ica s se co m b in a ro n , se seca ron con Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n red u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 0 -8 % en D C M ) p a ra d a r e l c o m p u e s to 35 f (1 ,5 g, 2 ,34 m m o l) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (D M S O -d6, 400 M H z) 5 1.91 (s, 1H), 7.36 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.13 -7.28 (m , 7H ), 6.76 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.70 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 5.59 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 4.56 -4.87 (m, 5H ), 4.26 (dq, J = 10.0, 5.2 Hz, 1H), 3.65 (d, J = 11.6 Hz, 6H ), 2.78 (spt, J= 6.8 Hz, 1H), 2.58 -2.72 (m, 2H ), 1.99-2.11 (m , 1H), 1.73 (b r dd, J = 13.2, 5.6 Hz, 1H), 1.13 (t, J= 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 639.2 [M+H]+.

P aso 6. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 35 g

Se añ ad ió rá p id a m e n te u n a so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo 3 n (1 ,67 g, 7 ,04 m m ol) en CH2Cl3 seco (3 m l) a u n a m ezc la de l co m p u e s to 35 f (1 ,5 g, 2 ,35 m m ol), 4 -n itro fe n o l (980,1 m g, 7 ,04 m m ol), Et3N (1 ,96 m l, 14 ,14 m m o l) en C H ²C l² seco (27 m l) en N ² a -78° C, luego se c a le n tó a T A de m an e ra na tu ra l d u ra n te 2 ho ras. La m ezc la se co m b in ó con o tro lo te b ru to , se d ilu yó con C H ²C l² (100 m l) y se lavó con N aH C O 3 a cu o so sa tu ra d o (100 ml x 5). La ca p a o rg á n ic a se recog ió , se secó con N a²S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión red u c id a pa ra d a r un res idu o . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c al 0 -90% en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r el co m p u e s to 35 g (1 ,6 g) co m o un só lido am a rillo . 1H N M R (D M S O -d6, 400 M H z) 5 12.05 (s, 1H), 11.55 (s, 1H), 8.91 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.20 -8.27 (m, 2H ), 7.93 (s, 1H), 7.43-7.51 (m, 2H ), 7.34 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.21 -7.28 (m, 2H ), 7.11-7.21 (m, 5H ), 7.11-7.21 (m , 1H), 6.75 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.68 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 5.55 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 4.67 (b r d, J= 6.4 Hz, 1H), 4.34 -4.44 (m, 1H), 3.64 (d, J = 12.4 Hz, 6H ), 3.30 -3.37 (m, 1H), 3.18 -3.27 (m, 1H), 2.78 (spt, J= 6.8 Hz, 1H), 1.99 -2.10 (m, 1H), 1.89 (b r dd, J = 12.4, 5.6 Hz, 1H), 1.10 -1.15 (m, 6H ); ES I-M S : m /z 840.3 [M+H]+.

P aso 7. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 35 i

S e ag itó u n a su sp e n s ió n de l co m p u e s to 35 h (910 m g, 1 ,347 m m ol), e l c o m p u e s to 35 g (1 ,6 g, 1 ,905 m m ol) y ta m ice s m o le cu la re s (3 g) en T H F (40 m l) en N ² d u ra n te 30 m in a TA , seg u ido de la ad ic ió n de D M A P (659 mg, 5 ,39 m m ol), luego se ag itó a 45° C d u ra n te la no che ba jo N ². La m ezc la de la reacc ión se filtró a tra vé s de una a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y e l f iltra d o se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo am a rillo , qu e se d iso lv ió en DC M (60 m l), luego se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (40 ml x 3). La ca p a o rg á n ica se recog ió , se secó con N a ²S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo am arillo . El res iduo se p u rif icó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (é te r de p e tró le o :E tO A c= 1 :0 -1 :4 ) pa ra d a r el co m p u e s to 35 i (1 ,13 g) co m o un só lido b lanco , que se c o n firm ó po r LC M S . E S I-M S : m /z 1377.3 [M+H]+.

P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 35 j

A u n a so luc ió n a g ita d a de l c o m p u e s to 35 i (1 ,13 g, 0 ,77 m m ol) en DC M (30 m l) se le añ ad ió a g u a (140 mg, 7 ,77 m m o l) y D C A (220 m g, 1,7 m m ol). La m e zc la a m a rilla se ag itó a T A d u ra n te la noche . Lu ego se añ ad ió M eO H (5 m l), seg u ido de la ad ic ión de p ir id in a (244 ,5 m g, 4 eq ) da nd o co m o resu lta d o u n a so luc ió n am a rilla , q u e se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te 15 m in ; la so luc ió n se tra tó con o tro lo te de b ru to y se c o n ce n tró a p res ión red u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :0 ~ 10:1 ) p a ra d a r el c o m p u e s to 35 j (630 m g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 512.11 (s, 1H), 11.64 (s, 1H), 11.28 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.62 (b r t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.04 (d, J= 7.2 Hz, 2H ), 7.62 -7.69 (m , 1H), 7.52 -7.59 (m, 2H ), 6.48 (dd, J = 16.8 , 2.8 Hz, 1H), 5.76 -5.96 (m , 2H ), 5.72 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.30 -5.43 (m, 2H ), 4.60 (b r s, 1H), 4.36 -4.45 (m, 1H), 4.28 -4.34 (m, 1H), 3.74 -3.84 (m, 1H), 3.58 -3.68 (m, 1H), 3.23 -3.35 (m, 2H ), 2.71 -2.83 (m, 1H), 2.17 -2.28 (m, 1H), 2.00 -2.09 (m, 1H), 1.11 (dd, J= 6.8 , 1.6 Hz, 6H ); 19F N M R (D M S O -ds, 376 M H z) 5 -202.81 (dt, J= 52.1 , 16.5 Hz, 1F); E S I-M S : m /z 772.3 [M H ]+.

P aso 9; P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 35 k

El T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y e l C H ³CN fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² a n te s de su uso . A u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 35 j (120 mg, 0 ,15 m m o l) en T H F (3 m l), se le añ ad ie ro n 800 mg de M S 4Á (po lvo ) y u n a so luc ió n de 1 H -te tra zo l (3 ,45 ml, 0 ,45 M, p re p a ra d a d iso lv ie n d o 945 mg de te tra zo l (seca do po r lio filiza c ió n ) en 30 ml de C H ³CN seco , se g u id o de la ad ic ió n de 1 g de M S 4 Á y luego se ag itó d u ra n te 1 ho ra en N² an tes de su uso ); la m ezc la se pu rgó con N². S e añ ad ió g o ta a g o ta una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra is o p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (84 ,36 m g, 0 ,28 m m o l) en T H F (0 ,8 m l) d u ra n te 25 m in a un v ia l con u n a je ring u illa , lu eg o se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1,5 h. S e añ ad ió u n a so luc ión de T B H P (0 ,25 m l, 1,24 m m ol, 5 M) y se ag itó d u ra n te o tro s 30 m in. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :0 -10 ; 1) pa ra d a r 39 k , un só lido b lanco . (68 m g). E S I-M s: m /z 887.4 [M+H]+.

P aso 10: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 26 , s a l d e a m o n io

S e ag itó u n a so luc ión de l c o m p u e s to 35 k (68 m g, 0 ,077 m m o l) en M eN H ²/E tO H (5 m l) a ta d u ra n te 2 h. D espués de a g ita r la m ezc la de la reacc ión a 40° C d u ra n te 1 h, se e va p o ró e l vo lá til y se d iso lv ió el só lido b lanco o b te n id o en u n a m ezc la de A G U A (20 m l), luego se e x tra jo con DC M (10 ml x 4). La c a p a a cu o sa se lio filizó y p u rif icó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : X b rid g e 150x30 m m x 10 gm , C o nd ic ió n : A : agua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : M eC N , c o m ie n zo : B 0% , B F ina l: 30% ; cau da l 25 m l/m in .) pa ra d a r e l c o m p u e s to 26 , s a l d e a m o n io com o un só lido b lan co (18 ,8 m g).

1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 5 ppm 10.78 (b r s, 1H), 8.84 (b r d, J= 6.8 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 6.67 (brs, 1H), 6.44 (brd, J = 18.0 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.62 (brs, 1H), 5.49 (b r d, J= 3.2 Hz, 1H), 5.30 ­ 5.16 (m, 2H ), 4.72 (b r s, 1H), 4.44 (b r d, J= 9.4 Hz, 1H), 4.48 -4.40 (m, 1H), 4.29 (b r d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.21 (b r t, J = 10.8 Hz, 1H), 3.89 (brd , J = 12.0 Hz, 1H), 3.45 -3.33 (m, 1H), 2.92 (brd , J = 11.2 Hz, 1H), 1.94 (b r t, J = 10.8 Hz, 1H); 19F N M R (376 M H z, D M S O -ds) 5 ppm -198.95 (b r s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D M S O -ds) 5 ppm -4.86 (b r s, 1P); E S I-M S : m /z 660.3 [M+H]+.

C o n v e rs ió n a s a l d e s o d io

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (5 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en ag ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó s u a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a hasta que se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió u n a so luc ión de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g u a (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta q u e se v o lv ió neu tra . La s a l d e a m o n io d e l c o m p u e s to 26 (10 m g) se d iso lv ió en un a ca n tid a d m ín im a de ag ua d e s io n iz a d a y se añad ió C H ³CN (1:1, v /v , 3 m l), a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e lu yó con a g u a d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s ap ro p ia d a s se a g rup a ron y lio filiza ron pa ra d a r e l c o m p u e s to 26 , s a l d e s o d io (6,1 m g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.22 (b r s, 1H), 8.11 (b r s, 1H), 7.75 (s, 1H), 6.40 (b r d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.88 (b r s, 1H), 5.73 (b r s, 1H), 5.60 (b r s, 1H), 5.24 -5.04 (m, 1H), 4.59 (b r d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.49 (b r s, 1H), 4.42 (b r d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.13 (b r d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.69 (b r d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.41 (b r d, J= 8.0 Hz, 1H), 2.76 (brs, 1H), 2.26 -2.19 (m, 1H), 2.22 (b r d, J= 6.8 Hz, 1H); 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 ppm -200.45 (b r s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -2.84 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 660.0 [M+H]+.

E je m p lo 36

C o m p u e s to 37

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 36 b

A un a so luc ió n de l co m p u e s to 36 a (4 ,2 g, 24,11 m m ol) en D C M (40 ml) se le añ ad ió g o ta a g o ta T F A (4 ,88 g, 48 ,22 m m ol) y M sC l (4 ,97 g, 43 ,4 m m ol) d u ra n te 10 m in . D e sp u é s de a g ita r a 25° C d u ra n te 2 ho ras, la m ezc la se repa rtió en tre D C M (100 ml) y a g ua (50 m l). La ca p a o rg á n ic a se lavó con sa lm u e ra (3 x 50 m l), se secó sob re Na2SÜ4 an h id ro , se filtró y el so lve n te se eva p o ró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo (com b ina do con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (P E /E A de l 10% al 100% y D C M /M e O H = de l 0% al 5% ) pa ra d a r el co m p u e s to 36 b (5 ,6 g) co m o un só lido am a rillo c la ro . 1H N M R (400 M H z, CDCl3) 5 ppm 5.84 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.78 (t, J= 3.4 Hz, 1H), 4.51 -4.40 (m, 2H ), 4.29 -4.22 (m , 1H), 3.09 -3.05 (m , 3H ), 2.18 -2.09 (m , 1H), 1.84 -1.73 (m , 1H), 1.52 (s, 3H ), 1.33 (s, 3H ).

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 c

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 36 b (5 ,6 g, 22 ,19 m m o l) en D M F (55 m l) se le añ ad ió NaN3 (4 ,25 g, 65 ,37 m m o l) a 25° C. D e spués de a g ita r a 100° C d u ra n te 3 horas, la m ezc la se d ilu yó con NaHCCfe a cu oso sa tu ra d o (100 m l) y se e x tra jo con ace ta to de e tilo (3 x 100 m l). La c a p a o rg á n ic a se lavó con s a lm u e ra (100 m l), se secó sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se e va p o ró a p res ión red uc ida pa ra d a r un só lido am a rillo . El só lido (co m b in a d o con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (gel de s ílice : 20 g) (g ra d ie n te de e lu c ió n : a ce ta to de e tilo al 0 -100 % en pe tró le o y luego m e tan o l al 0 -20 % en ace ta to de e tilo ) pa ra d a r el co m p u e s to 36 c (3,8 g) co m o un só lid o am a rillo . 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 ppm 5.85 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 4.77 (t, J= 4.2 Hz, 1H), 4.45 -4.35 (m, 1H), 3.59 (dd, J= 3.7 , 13.2 Hz, 1H), 3.28 (dd, J= 4.6 , 13.2 Hz, 1H), 2.09 (dd, J= 4.4 , 13.4 Hz, 1H), 1.79 (ddd, J= 4.8 , 10.7, 13.4 Hz, 1H), 1.52 (s, 3H ), 1.33 (s, 3H).

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 d

S e a ñ ad ie ro n a n h íd rid o acé tico (18 ,03 m l, 190 ,75 m m o l) y ác ido su lfú rico c o n ce n tra d o (0 ,104 m l, 1,91 m m o l) a una so luc ión a g ita d a de l co m p u e s to 36 c (3,8 g, 19 ,08 m m o l) en ác ido acé tico (109,1 ml, 1907 ,56 m m o l) a 0° C D e spu és de a g ita r d u ra n te 2 h a 25° C, la m ezc la de la rea cc ió n se in ac tivó con a g u a fr ía (100 m l) y se ag itó d u ra n te 30 m in a 25° C. La m ezc la se e x tra jo con a ce ta to de e tilo (3 x 200 m l). Las ca p a s o rg á n ica s se c o m b in a ro n y se la va ron s u ce s iva m e n te con so luc ió n a cu o sa sa tu ra d a de b ica rb o n a to de sod io (3 x 300 m l), s a lm u e ra (2 x 200 m l), se seca ron so b re Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión red uc ida p a ra d a r un res iduo . El res idu o (co m b in a d o con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (P E al 0 -100 % en EA) p a ra d a r el co m p u e s to 36 d (3 ,2 g) co m o un ace ite am arillo . 1H N M R (400 M H z, C D C h) 5 ppm 6.21 -6.14 (m , 1H), 5.22 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.58 -4.50 (m, 1H), 3.57 (dd, J= 4.0 , 13.1 Hz, 1H), 3.25 (dd, J= 4.6 , 13.2 Hz, 1H), 2.29 -2.19 (m, 1H), 2.12 -2.10 (m, 1H), 2.09 (s, 6H).

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 e

S e ag itó u n a so luc ió n de 5 -a m in o -3 H -[1 ,2 ,3 ]tr ia z o lo [4 ,5 -d ]p ir im id in -7 (6 H )-o n a (2 ,37 g, 15,6 m m o l) y B S A (11,041 g, 54 ,273 m m o l) en C H ³CN a n h id ro (200 m l) a 80° C d u ra n te 1 h y luego se en frió a 0° C. Lu ego se añad ió u n a so luc ión de l c o m p u e s to 36 d (3,3 g, 13 ,57 m m o l) en C H ³CN a n h id ro (80 m l) seg u ido de SnCl4 (10 ,6 g, 40 ,7 m m ol). D e spués de a g ita r a 26° C d u ra n te 48 horas, la m ezc la se en frió y se d ilu yó con E tO A c (100 m l), luego se añ ad ió g o ta a g o ta a 0° C en N aH C O 3 a cu o so sa tu ra do (500 m l). La c a p a o rg á n ica se lavó con sa lm u e ra (2 x100 m l), se secó sob re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró ba jo p res ión pa ra d a r un res iduo . El res iduo (com b ina do con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eC H al 2% -10% en DC M , V /V ) pa ra d a r el c o m p u e s to 36 e (6 ,4 g) co m o un a e s p u m a am arilla . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.08 (br, s, 1H), 7.28 (br, s, 1H), 6.68 (br, s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.68 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.61 -4.50 (m, 1H), 3.58 (dd, J = 3.1 , 13.4 Hz, 1H), 3.34 -3.29 (m, 1H), 2.71 -2.59 (m, 1H), 2.33 -2.24 (m, 1H), 2.09 (s, 3H ); E S I-M S : m /z=336.1 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 f

A un a so luc ió n de l co m p u e s to 36 e (4,8 g, 14 ,32 m m o l) en DC M (48 m l) se le añ ad ió tr ie tila m in a (4 ,34 g, 42 ,95 m m o l) y D M A P (504 ,37 m g, 4 ,13 m m ol) a 25° C. D e spués de a g ita r d u ra n te 5 m in , la m ezc la se en frió a 0° C y se añ ad ió c lo ru ro de iso bu tirilo (3 ,05 g, 28 ,63 m m o l) a la so luc ió n en 10 m in . D espués de a g ita r a 25° C d u ra n te 2 ho ras, la m ezc la se d ilu yó con E tO A c (100 m l), se lavó con sa lm u e ra (3 x 100 m l), se secó so b re Na2SO4 anh id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión pa ra d a r el c o m p u e s to 36 f (4 ,8 g) co m o un só lido a m a rillo que se usó d ire c ta m e n te en el paso s ig u ie n te sin p u rifica c ió n ad ic iona l.

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 g

A u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 36 f (6 ,5 g) en T H F /M e O H /a g u a (240 /150 /45 m l) se le a ñ a d ió N a C H (0 ,5 M en agua, 64 ,14 m l) a 0° C. Luego la so luc ió n se ag itó a 0° C d u ra n te 1 hora. La so luc ión se a c id ificó con ác ido acé tico (2 m l) a pH 7. La so luc ió n se co n ce n tró ba jo p res ión p a ra d a r un só lido am a rillo (6 g). El res idu o (com b ina do con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (ge l de s ílice : 40 g) (D C M /M e O H = 1/0 a 5 /1 ) pa ra d a r el co m p u e s to 36 g (4,5 g) co m o un só lido a m a rillo c la ro .

1H N M R (400 M H z, C D ³O D ) 5 ppm 6.20 (s, 1H), 4.94 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.73 -4.65 (m, 1H), 3.52 -3.46 (m, 1H), 3.38 -3.33 (m, 1H), 2.78-2.61 (m, 2H), 2.20 (ddd, J = 1.3, 6.0, 13.3 Hz, 1H), 1.23 (d, J= 7.0 Hz, 6H ), ES I-M S : m /z= 364.2 [M H]+

P aso 7. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 h

S e tra tó una so luc ió n de l c o m p u e s to 36 g (5 g, 13 ,76 m m ol) en Py (50 m l) con D M A P (841 m g, 6 ,88 m m o l) a 0° C d u ra n te 10 m in. D espués de 10 m in , se añ ad ió D M TrC I (9,3 g, 27 ,52 m m ol) y luego la so luc ió n se ag itó a 80° C d u ra n te 12 ho ras. La m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con EA (50 m l) y se lavó con sa lm u e ra (3 x 80 m l). La ca p a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión pa ra d a r un só lid o a m a rillo (10 g). El só lido a m a rillo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 15 g) se pu rificó po r c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en co lu m n a so b re ge l de s ílice (P E al 0 -100 % en EA) pa ra d a r el co m p u e s to 36 h (8,0 g) co m o un só lido a m a rillo c la ro . 1H N M R (400 M H z, C D C h ) 5 ppm 12.01 (br, s, 1H), 8.35 (br, s, 1H), 7.45 -7.42 (m , 2H ), 7.28 -7.24 (m, 7H ), 6.73 -6.66 (m, 4H ), 5.10 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.84 -4.74 (m, 1H), 3.83 -3.77 (m, 1H), 3.71 (d, J= 6.3 Hz, 6H ), 3.43 -3.35 (m, 1H), 3.29 -3.23 (m, 1H), 2.68 -2.56 (m , 2H ), 2.40 (dd, J= 5.9 , 13.2 Hz, 1H), 1.31 (dd, J= 6.9 , 11.7 Hz, 6H ). E S I-M S : m /z= 640.4 [M+H]+.

E S I-M S : m /z=688.1 [M Na]+.

P aso 8. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 i

S e tra tó u n a so luc ión de l co m p u e s to 36 h (8 ,0 g, 12 ,02 m m o l) en E A /E tO H (1/1, 350 m l) con P d/C (4 ,5 g); d e s p u é s de a g ita r la m ezc la en a tm ó s fe ra de H ² (15 ps i) d u ra n te 2 h, la so luc ió n se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo (co m b in a d o con ge l de s ílice : 10 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (ge l de s ílice : 40 g) (D C M /M e O H = 1/0 a 5/1 ) pa ra d a r el c o m p u e s to 36 i (6,0 g) co m o un só lido am a rillo c la ro .

P aso 9: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 j

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 36 i (6 ,0 g, 8 ,44 m m o l) en DC M (130 m l) con 4 -n itro fe n o l (3 ,52 g, 25 ,32 m m o l) y tr ie tila m in a (5 ,12 g, 50 ,65 m m ol). D espués de e n fria r a -78° C, se añ ad ió u n a so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4-n itro fe n ilo (6 ,02 g, 25 ,32 m m ol) en DC M (20 m l) a -78° C. D espués de a g ita r a -78° C d u ra n te 1 h, la m e zc la se filtró y e l f iltra d o se d ilu yó con DCM (300 m l). La ca p a o rg á n ica se lavó con N aH C O 3 a cu o so sa tu ra d o (3 x 150 m l) y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a p a ra d a r un res iduo (10 g). El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : a ce ta to de e tilo al 0 -100 % en pe tró le o ) pa ra d a r el co m p u e s to 36 j (5 ,9 g) co m o un só lido am arillo . 1H N M R (400 M H z, C D ³C N ) 5 ppm 12.07 (br, s, 1H), 9.39 (br, s, 1H), 8.22 -8.17 (m, 2H ), 7.40 -7.36 (m, 4H ), 7.24 -7.14 (m, 7H ), 6.76 -6.66 (m, 4H ), 5.76 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 4.97 -4.90 (m , 1H), 4.68 ­ 4.60 (m, 1H), 3.68 (d, J= 8.3 Hz, 6H ), 3.46 -3.39 (m , 1H), 3.32 -3.25 (m, 1H), 2.65 (td, J= 7.0 , 13.7 Hz, 1H), 2.40 -2.32 (m, 1H), 2.22 -2.19 (m , 1H), 1.22 (d, J= 7.0 Hz, 3H ), 1.21 -1.18 (m, 3H).

E S I-M S : m /z= 863.2 [M N a]+

P aso 10: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 k

S e ag itó en N ² d u ra n te 30 m in a T A una so luc ió n de l c o m p u e s to 36 j (1 ,18 g, 1,40 m m ol), e l co m p u e s to 35h (0 ,73 g, 1,08 m m ol) y M S 4Á (1 g) en D C E (21 m l), se g u id o de la ad ic ión de D ^m A ^p (660,41 m g, 5,41 m m ol). D espués de a g ita r la reacc ión a 45° C (te m p e ra tu ra del ace ite ) d u ra n te 12 h, la m ezc la se filtró y el f iltra d o se rep a rtió e n tre DC M (100 m l) y s a lm u e ra (100 m l). La ca p a o rg á n ic a se lavó s u ce s iva m e n te con N aHCO 3 acu oso sa tu ra d o (3 x 100 m l), se secó sob re Na2SO4 anh idro ., se filtró y se e va p o ró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo (4 g). El res idu o (co m b in a d o con ge l de s ílice : 6 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (P E /E A de l 10% al 100% y D C M /M e O H = de l 0% al 5% ) pa ra d a r el c o m p u e s to 36 k (1 ,2 g) co m o un só lido am a rillo c la ro .

1H N M R (400 M H z, C D ³C N ) 5 11.88 (br, s, 1H), 9.42 (br, s, 1H), 9.09 (br, s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.98 -7.85 (m, 1H), 7.76 (br, d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.47 -7.39 (m, 1H), 7.35 -7.27 (m, 2H ), 7.12 (br, d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.07 (br, d, J= 6.4 Hz, 2H ), 7.02 -6.86 (m , 11H), 6.72 (br, d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.59 -6.40 (m , 8H ), 6.13 -6.03 (m , 1H), 5.83 (br, s, 0.5H ), 5.73 -5.62 (m, 1H), 5.46 (br, s, 1H), 4.67 (br, s, 1H), 4.33 (br, s, 1H), 3.99 (br, s, 1H), 3.67 -3.38 (m, 11 H), 3.25 (br, d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.10 (br, d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.00 (br, d, J=8.1 Hz, 1H), 2.89 (br, d, J=6.1 Hz, 1H), 2.51-2.41 (m , 1H), 2.14 -2.05 (m, 1H), 1.75 -1.72 (m, 6H ), 19F N M R (376 M H z, C D ³C N ) 5 ppm -200.072 (s, 1F); E S I-M S : m /z = 1377.8 [M H]+

P aso 11: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 l

Se tra tó un a so luc ió n de l co m p u e s to 36 k (1,2 g, 0 ,78 m m ol) en DC M (30 m l) con a g u a (141 ,25 m g, 7 ,84 m m o l) y D C A (202 ,19 m g, 1,57 m m o l) d a n d o co m o resu ltad o una so luc ió n roja. D e spués de a g ita r a 25° C d u ran te 12 h, se añ ad ió M eO H (5 m l) a la m ezc la ha s ta qu e se v o lv ió tra n sp a re n te , seg u ido de la ad ic ió n de p ir id in a (620 ,19 m g, 7 ,84 m m ol). La m e zc la se ag itó a T A d u ra n te 2 h, luego se co n ce n tró ba jo p res ión pa ra d a r un res iduo . El res idu o (com b ina do con ge l de s ílice : 2 g) se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a en c o lu m n a sob re ge l de sílice (D C M al 0 -8 % en M eO H ) p a ra d a r e l c o m p u e s to 36 l (0 ,54 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 12.26 (s, 1H), 11.92 (s, 1H), 11.27 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.53 (br, t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.05 (br, d, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.69 -7.63 (m, 1H), 7.60 -7.53 (m, 2H ), 6.46 (dd, J= 2.6 , 16.7 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.92 (br, s, 0.5H ), 5.86 (br, d, J= 3.8 Hz, 1H), 5.79 (br, d, J= 3.3 Hz, 0.5H ), 5.37 -5.26 (m, 2H ), 4.75 (br, s, 1H), 4.60 -4.49 (m, 1H), 4.27 (br, s, 1H), 4.10 (br, s, 1H), 3.77 (br, d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.60 (br, dd, J= 4.8 , 8.0 Hz, 1H), 2.79 (td, J= 6.7 , 13.7 Hz, 1H), 2.19 (br, dd, J= 6.3 , 12.5 Hz, 1H), 1.13 (d, J= 6.8 Hz, 6H ). 19F N M R (376 M H z, D M S O -d6 ) 5 ppm -202.787 (s, 1F), E S I-M S : m /z= 773.3 [M H ]+

P aso 12. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 36 m

N o ta : El T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el C H ³CN fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso.

S e tra tó u n a so luc ión de l co m p u e s to 36 l (100 m g, 0 ,13 m m o l) en T H F (2 m l) con M S 4 Á (po lvo ) (1 g); d e s p u é s de 20 m in de ag itac ión , se añ ad ió una so luc ió n de 1H -te tra zo l (0 ,45 M) en C H ³CN (2 ,3 m l) a 25° C. Luego se añ ad ió una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (0 ,078 g, 0 ,26 m m ol, d ilu id a en 2 ml de T H F ) a 25° C y la m ezc la se ag itó d u ra n te 1,5 h, seg u ido de la ad ic ió n de h id ro p e ró x id o de te rc -b u tilo (0 ,12 ml, 0 ,65 m m o l) a 25° C. D e spu és de a g ita r d u ra n te 1,5 ho ras, la m e zc la se d ilu yó con DC M (20 m l), se filtró a tra vé s de un a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró pa ra d a r e l p ro d u c to b ru to co m o un só lid o a m a rillo (1,0 g). El b ru to (co m b in a d o con ge l de s ílice : 2 g) se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 0 -15 % en C H ²C l² ) p a ra d a r el co m p u e s to 36 m (50 m g) co m o un só lido am a rillo c la ro . E S I-M S : m /z= 888.3 [M H]+

P aso 13: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 , s a l d e s o d io

S e tra tó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 36 m (50 m g, 0 ,056 m m o l) en E tO H (2 ,5 m l) con m e tila m in a (2,5 ml, 33 % en E tO H ). D espués de a g ita r a 25° C d u ra n te 3 ho ras, la so luc ión se co n ce n tró a p res ión re d u c id a p a ra d a r un res idu o . El res iduo se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : W a te rs X b rid g e P rep O B D C 18 5 gm 150x30, C o n d ic ió n : ag ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M )-A C N B: 0, B F ina l 30, T ie m p o de G ra d ie n te (m in ): 7, 100% B T ie m p o de re tenc ión (m in ): 1, C a ud a l (m l/m in ): 25) pa ra d a r la s a l d e a m o n io d e l c o m p u e s to 37 (12 ,2 m g) co m o un só lido b lan co . 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 8.58 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 6.66 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.94 -5.75 (m , 1H), 5.51-5.41 (m, 1H), 5.37 (br, s, 1H), 4.63 (br, d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.35 (br, d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.92 (br, dd, J= 3.7 , 14.4 Hz, 1H), 3.50 -3.36 (m, 1H), 3.16 (br, d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.65 -2.55 (m, 1H), 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 ppm -199.359 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -3.307 (s, 1P); E S I-M S : m /z= 661.3 [M H]+

C o n v e rs ió n a s a l d e s o d io

S e añ ad ió D ow ex 50W x8 , 200 -400 (10 ml, fo rm a H) a un v a so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en ag ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a hasta que se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió u n a so luc ión de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en ag ua (po r lo m en os 4 C V ), y luego con H ²² O d e s io n iz a d a ha s ta qu e fu e neu tra . El c o m p u e s to 37 , s a l d e a m o n io (28 m g) se d iso lv ió en ag ua de s io n iza d a /M e C N (20 m l/5 m l), se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e lu yó con ag ua d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s ap ro p ia d a s se a g rup a ron y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to 37 , s a l d e s o d io (24 ,5 m g) co m o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D2O )=8.63 (br, s, 1H), 8.48 (br, s, 1H), 6.71 (br, d, J= 17.6 Hz, 1H), 6.51 (br, s, 1H), 5.97 ­ 5.79 (m, 1H), 5.54 -5.40 (m, 2H ), 4.69 (br, d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.41 (br, d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.97 (br, d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.54-3.41 (m, 1H), 3.22 (br, d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.66 (br, s, 1H); 19F N M R (376 M H z, D²O) ppm -199.443 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D²O) ppm -3.283 (s, 1P ); E S I-M S : m /z 661.2 [M H]+

E je m p lo 37

ı33

A un a so luc ió n ag ita d a de l co m p u e s to 37 a (10 g, 28 ,3 m m ol), tr ife n ilfo s fin a (22 ,27 g, 84,91 m m ol), im idazo l (7,71 g, 113 ,25 m m ol) en T H F (100 m l), se le añ ad ió un a so luc ió n de yodo (21 ,55 g, 84,91 m m o l) en T H F (100 m l) a 0° C. D e spu és de a g ita r a 35 ° C d u ra n te la noche , la m ezc la d e la reacc ión se filtró , se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida y se d ilu yó con D C M (400 m l). La ca p a o rg á n ic a se lavó con Na2SÜ3 acu oso sa tu ra d o (200 ml x 2), se secó con Na2SÜ4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :010 :1 ) pa ra d a r el co m p u e s to 37 b (6 g) co m o un só lid o b lanco . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 612.10 (s, 1H), 11.65 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 5.83 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.66 (brd, J= 5.6 Hz, 1H), 5.45 (br d, J= 4.4 Hz, 1H), 4.68 (q, J= 5.6 Hz, 1H), 4.11 (br d, J= 3.2 Hz, 1 H), 3.92 -4.02 (m, 1H), 3.58 (b r dd , J= 10.4 , 6.0 Hz, 1H), 3.43 (br dd, J= 10.4 , 6.8 Hz, 1H), 2.76 (dt, J= 13.6 , 6.8 Hz, 1H), 1.12 (br d, J= 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 463.9 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 37 c

S e tra tó un a so luc ió n de l co m p u e s to 37 b (6 g, 12 ,95 m m o l) en D M F (100 m l) con NaN3 (2 ,47 g, 37 ,99 m m ol) en N². D e spu és de a g ita r a 80 ° C d u ra n te 3 ho ras, la m e zc la se d iluyó con D C M (400 m l) y se lavó con sa lm u e ra (300 ml x 2). La ca p a o rg á n ica se secó con Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :010 :1 ) pa ra d a r el co m p u e s to 37 c (4 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 612.10 (s, 1H), 11.64 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 5.84 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.65 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.60 (q, J = 5.6 Hz, 1H), 4.09-4.11 (m, 1H), 4.02 (dt, J= 7.2 , 3.6 Hz, 1H), 3.62 -3.72 (m , 1H), 3.52 -3.60 (m, 1H), 2.77 (sep t, J = 6.8 Hz, 1H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z= 379.0 [M H]+

P aso 3. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 37 d

S e co e va p o ró el co m p u e s to 37 c con p ir id in a (80 m l) do s ve ce s a n tes d e su uso. A un a so luc ió n del co m p u e s to 37 c (4 g, 10 ,57 m m o l) en p ir id in a (40 m l) se le añ ad ió D M A P (646 m g, 5 ,29 m m ol) y D M T rC l (5 ,38 g, 15 ,88 m m o l) a 0° C. D e sp u é s de a g ita r a T A d u ra n te la noche , la m ezc la d e la rea cc ió n se d ilu yó con C H ² Q ² (200 m l). La ca p a o rg á n ica se lavó s u c e s iva m e n te con NaHCO 3 a cu o so sa tu ra do (150 ml x 3), se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (E tO A c al 0 -90 % en é te r de p e tró le o ) pa ra d a r el p ro du c to b ru to de c o lo r am arillo . El p ro du c to b ru to se pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (P h e n o m e n e x S yne rg i M ax-R P 10 gm 250 x 50 m m , fa se m óvil: agua - A C N de l 30 % al 70% ; cau da l: 100 m l/m in ) pa ra d a r el co m p u e s to 37 d (4 ,15 g) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (D M SO -da, 400 M H z) 6 12.02 (s, 1H), 11.43 (b r s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.42 (d, J= 6.8 Hz, 2H ), 7.28 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 7.11 -7.22 (m, 5H ), 6.71 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 6.63 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 5.66 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.80 (b r t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.05 (dt, J= 7.2 , 4.0 Hz, 1H), 3.65 (d, J = 11.6 Hz, 6H ), 3.56 (b r dd, J = 13.2 , 7.2 Hz, 1H), 3.44-3.51 (m , 1H), 3.39 (dd, J= 13.2 , 4.0 Hz, 1H), 2.79 (qu in , J= 6.8 Hz, 1H), 1.14 (dd, J= 6.8 , 2.3 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z= 681.4 [M+H]+

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 e

S e añ ad ió N aH (60% en ace ite m ine ra l, 189 ,5 m g, 4 ,74 m m ol) a u n a su sp e n s ió n de l co m p u e s to 37 d (2 ,15 g, 3 ,16 m m o l) en D M F (20 m l) a 0° C. D e spués de a g ita r a 0° C d u ra n te 0 ,5 h, se añ ad ió g o ta a g o ta una so luc ió n de c lo ru ro de 4 -m e to x ib e n c ilo (0 ,512 m l, 3 ,8 m m o l) en D M F (10 m l). U na v e z c o m p le ta d a la ad ic ión , la m e zc la de la rea cc ió n se ag itó a 0° C d u ra n te 1 h y se in ac tivó con ag ua (80 m l) y se e x tra jo con E tO A c (100 ml x 2). La cap a o rg á n ic a se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se e va p o ró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res iduo se c o m b in ó con o tro lo te y se pu rificó po r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (Y M C T ria rt C 18, 7 |jm 250x50 m m ; fase m óvil: a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - ^a C ⁿ de l 55 % al 90% ; ca u d a l: 90 m l/m in ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 37 e (1 ,5 g, 1,83 m m o l) co m o un só lido b lan co y el co m p u e s to 37 d (2 ,16 g, 3 ,09 m m o l) co m o un só lid o am arillo . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 5 12.04 (s, 1H), 11.42 (b r s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.32 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 7.22 -7.28 (m, 2H ), 7.14 -7.20 (m , 5H), 7.05 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 6.96 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.74 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.66 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.02 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.87 (b r s, 1H), 4.34 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 7.2 , 5.2 Hz, 1H), 4.00 (b r d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H ), 3.69 (d, J= 9.6 Hz, 7H ), 3.27 (dd, J = 12.8, 4.8 Hz, 1H), 2.76 (spt, J 20 = 6.8 Hz, 1H), 2.61 (b r d, J= 3.6 Hz, 1H), 1.09 -1.17 (m, 6H ); E S I-M S : m /z= 801.4 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 f

S e añ ad ió Ph3P (673 m g, 2 ,566 m m o l) a u n a so luc ió n de l co m p u e s to 37 e (1,5 g, 1 ,83 m m ol) en T H F (15 m l) en u n a po rc ió n . La m e zc la se ag itó a 40° C d u ra n te 2 h en N ² se g u id o de la ad ic ió n de a g u a (7,5 m l). D espués de a g ita r a 40° C O N , la m ezc la se d ilu yó con DC M (50 m l), a g u a (40 m l) y se e x tra jo con DC M (50 ml x 2). Luego, las ca p a s o rg á n ica s se co m b in a ro n , se seca ron con N a ²S O ⁴ a n h id ro , se filtra ro n y se e va p o ra ro n a p re s ió n red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 0~ 8% en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 37 f (1 ,27 g) co m o un só lido b lanco .

1H N M R (D M S O -ds, 400 M H z) 5 8.06 (s, 1H), 7.31 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 7.22 -7.27 (m, 2H ), 7.13 -7.22 (m, 5H ), 7.04 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.96 (d, J= 8.4 Hz, 2H ), 6.74 (d, J= 9.2 Hz, 2H ), 6.66 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 5.99 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.78 (b r s, 1H), 4.30 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 4.04 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.% (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.75 -3.80 (m , 3H ), 3.69 (d, J= 8.4 Hz, 6H ), 2.73 -2.85 (m, 1H), 2.66 (b r d, J= 4.4 Hz, 1H), 2.62 (b r d, J= 6.0 Hz, 2H ), 1.12 (t, J= 6.4 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z= 775.3 [M H ]+

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 g

S e añ ad ió u n a so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (1 ,17 g, 4 ,92 m m ol) en DC M seco (3 m l) a una m e zc la de l co m p u e s to 37 f (1 ,27 g, 1 ,64 m m ol), 4 -n itro fe n o l (685 m g, 4 ,92 m m ol), Et3N (1 ,37 ml, 9 ,88 m m o l) en DCM seco (27 m l) ba jo N ² a -78° C, luego se c a le n tó a te m p e ra tu ra a m b ie n te de fo rm a na tu ra l d u ra n te 2 h. La m ezc la de la reacc ión se tra tó con o tro lo te, se d ilu yó con DC M (100 m l) y se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o (100 m l x 5). La c a p a o rg á n ic a se recog ió , se secó con Na2SO 4 anh id ro , se filtró y se e va p o ró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res idu o . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (E tO A c al 0 -90% en PE) pa ra d a r e l c o m p u e s to 37 g (1 ,55 g, 1 ,59 m m o l) co m o un só lid o am a rillo . 1H N M R (D M SO -d6, 400 M H z) 12.05 (s, 1H), 11.49 (brs, 1H), 8.88 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.26-8.31 (m, 2H ), 8.13 (s, 1H), 7.47 -7.53 (m, 2H ), 7.29 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 7.20 -7.25 (m, 2H ), 7.14 -7.20 (m, 5H ), 7.03 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 6.95 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.74 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.67 (d, J= 8.8 Hz, 2H ), 5.95 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.72 (b r s, 1H), 4.25 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 4.18 (b r t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.96 (b r d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H ), 3.69 (d, J= 6.8 Hz, 6H ), 3.24 -3.44 (m, 2H ), 2.91 (b r d, J= 3.6 Hz, 1H), 2.69 -2.79 (m, 1H), 1.12 (t, J= 6.4 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z= 976.3 [M H]+

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 h

S e ag itó en N ² d u ra n te 30 m in a T A un a su sp e n s ió n de l c o m p u e s to 37 g (766 m g, 1,13 m m ol), e l co m p u e s to 35h (1 ,55 g, 1 ,59 m m ol) y M S (3 g) en T H F (40 m l), se g u id o de la ad ic ió n de D M A P (554 m g, 4 ,53 m m ol), luego se ag itó a 45° C ba jo N ². La m ezc la de la reacc ión se filtró a tra vé s de un a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y el f iltra d o se co n ce n tró a p res ión red u c id a p a ra d a r un res iduo am a rillo ; e l res iduo se d iso lv ió en 60 m l de D C M y se lavó con N aH C O 3 acu oso sa tu ra d o (40 m l x 3). La ca p a o rg á n ica se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se eva p o ró a p res ión re d u c id a pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (P E :E tO A c= 1 :0 -0 :1 ) pa ra d a r el c o m p u e s to 37 h (360 m g) co m o un só lid o am a rillo . E S I-M S : m /z=757.4 [M /2 H ]+

P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 i

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 37 h (360 m g, 0 ,24 m m o l) en DC M (10 m l) con a g u a (43 mg, 2 ,39 m m o l) y D C A (67 ,5 m g, 0 ,52 m m o l) da nd o co m o resu lta d o u n a so luc ió n am arilla . D espués de a g ita r a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 6 h, se añ ad ió M eO H (2 m l) a la m ezc la , se g u id o de la ad ic ió n de p ir id in a (75 ,5 m g, 4 eq ); la so luc ió n resu lta n te se ag itó d u ra n te 15 m in y se co n ce n tró p a ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ian te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1:0 10:1) pa ra d a r el co m p u e s to 37 i (130 m g) co m o un só lid o b lanco . E S I-M S : m /z= 908.4 [M H]+

P aso 9. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 j

N O T A : T H F rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y C H ³CN rec ién d e s tila d o so b re C a H ² an tes de su uso. A u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 37 i (130 mg, 0 ,14 m m ol, se ca d o p o r lio filizac ió n ) en T H F (3 m l) se le añ ad ió M S 4A (po lvo , 800 m g) se g u id o de un a so luc ió n de 1 H -te tra zo l (3 ,18 m l, 0 ,45 M, p re p a ra d a d iso lv ie n d o 945 m g de te tra zo l (seca do p o r lio filizac ió n ) en 30 m l de C H ³CN seco , se g u id o de la ad ic ió n de 1 g de M S 4 A y luego a g itad o d u ra n te 1 ho ra en N ²an tes de su uso ); d e sp u é s de p u rg a r va ria s ve c e s el rec ip ie n te con N² , se añ ad ió g o ta a g o ta u n a so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia rm d ita (77 ,69 m g, 0 ,26 m m o l) en T H F (0,8 m l) d u ra n te 25 m in en un v ia l con u n a je rin g u illa , luego se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1,5 h, se g u id o de la ad ic ió n de h id ro p e ró x id o de te rc -b u tilo (0 ,23 m l, 1,13 m m ol, 5 M). D espués d e a g ita r d u ra n te o tro s 30 m in, la m e zc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :0~10:1, Rf = 0 ,4 ) pa ra d a r el co m p u e s to 37 j (46 m g) co m o un só lido b lan co . E S I-M S : m /z= 1023.5 y 1023.4 [M+H]+

P aso 10: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 37 k

S e tra tó una so luc ió n de l co m p u e s to 37 j (46 m g, 0 ,045 m m o l) con M eN H 2 /E tO H (5 m l) a 40° C d u ra n te 2,5 h. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión re d u c id a p a ra d a r un res iduo . El res iduo se pu rificó m ed ian te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : W a te rs X b rid g e P re p O B D C 18 5 gm 150x30, C o n d ic ió n : A : ag ua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : M eC N , In ic io : B 5% , B F ina l: 25% , C a ud a l (m l/m in ) 25) pa ra d a r el c o m p u e s to 37k (12 m g) co m o un só lido b lanco .

E S I-M S : m /z= 796.3 [M H]+

P aso 11: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 48 , s a l d e s o d io

S e e n frió a 0° C u n a so luc ió n de an iso l (15 ,9 mg, 0 ,14 m m o l) en T F A (0 ,113 m l, 57 ,3 m m o l) y se añ ad ió al co m p u e s to 37 k (12 mg, 0 ,015 m m ol). D espués de a g ita r a 0° C d u ra n te 2 ,5 h, se e lim in ó el T F A m ed ia n te un f lu jo de n itró g e n o g a se o so a 0° C. La m ezc la de la reacc ión res tan te se in ac tivó con m e tilam in a , so luc ió n al 33 % en E tOH (0 ,113 m l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se e va p o ró hasta la seq ue da d y se rep a rtió e n tre DC M y A G U A (20 ml x 3 /10 m l). La ca p a a cu o sa se lio filizó pa ra d a r un res idu o b lan co pu rifica do p o r H P LC p re p a ra tiva in ve rsa (C o lum n a : W a te rs X b rid g e P rep O B D 5 gm C 18 150x30, C o n d ic ió n : A: a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : M eC N , in ic io : B 5% , B F ina l: 35% , cau da l (m l/m in ) 25) p a ra d a r e l c o m p u e s to 47 , s a l d e a m o n io (7,1 m g, 0 ,010 m m o l) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 8.59 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 6.76 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.07 (b r d, J= 3.6 Hz, 1H), 5.94 (b r d, J= 4.4 Hz, 1H), 5.63 (b r dd , J=3.2 , 8.8 Hz, 1H), 5.58 (b r dd, J= 4.4 , 8.8 Hz, 1H), 5.49 (b r d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.93 (b r d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.67 (b r s, 1H), 4.39 (b r d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.13 -4.07 (m, 1H), 3.96 (brd , J = 14.4 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -2.21 (s, 1P); 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 200.3 ­ 200.4 (m , 1 F); E S I-M S : m /z= 676.0 [M+H]+.

C o n v e rs ió n a s a l d e s o d io

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (3 ml, fo rm a H) a un va s o de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g u a d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó s u a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a hasta que se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió u n a so luc ió n de N aO H al 15% en ag ua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g u a (p o r lo m en os 4 C V), y luego con ag ua d e s io n iz a d a ha s ta que se v o lv ió ne u tra . El c o m p u e s to 47 , s a l d e a m o n io (7,1 m g) se d iso lv ió en ag ua d e s io n iza d a /M e C N (3 m l/3 m l), se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e luyó con a g u a d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s ap ro p ia d a s se a g rup a ron y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to 47 , s a l d e s o d io (3 ,4 m g) co m o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.57 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 6.73 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 6.25 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.04 (b r d, J= 3.6 Hz, 1H), 5.91 (b r d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.60 (b r dd, J= 3.6 , 9.2 Hz, 1H), 5.55 (b r dd, J=4.0 , 9.2 Hz, 1H), 5.49 -5.42 (m, 1H), 4.90 (b r d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.67 -4.64 (m, 1H), 4.39 -4.33 (m, 1H), 4.08 (b r d, J= 14.4 Hz, 1H), 3.93 (b r d, J = 14.8 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -2.26 (s, 1P); 19F N M R (376 M H z, D²O ) 5 ppm -200.34 -200.47 (m, 1F), E S I-M S : m /z=676.1 [M H]+

E jem p lo 38

N O TA : El T H F fue rec ién d e s tila d o so b re N a /b e n zo fe n o n a y el C H ³ CN fu e rec ién de s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso . A una so luc ió n de l c o m p u e s to 35 j (300 m g, 0 ,39 m m ol, seca do p o r lio filiza c ió n ) en T H F (6 m l) se le añ ad ió M S 4 A (po lvo , 800 mg) y un a so luc ió n de 1H -te tra zo l (8 ,64 ml, 0 ,45 M, p re p a ra d a p o r d iso lu c ió n de 945 m g de te tra zo l (secado p o r lio filiza c ió n ) en 30 ml de C H ³ C N seco , se g u id o de la ad ic ió n de 1 g de M S 4 A y luego ag itado d u ra n te 1 h o ra en N² a n tes d e su u so ); d e sp u é s de p u rg a r va r ia s ve c e s el m a traz de reacc ión con N² , se añ ad ió g o ta a g o ta un a so luc ió n d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (210 ,9 mg, 0 ,7 m m ol) en v ia l d e T H F (2 m l) d u ra n te 20 m in con una je rin g u illa , lu eg o se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1 ,5 h . L u e g o se añ ad ió D D T T (638 ,53 mg, 3,11 m m ol) y la m ezc la se ag itó d u ra n te o tro s 30 m in. La m ezc la de la rea cc ió n se co n ce n tró a p res ión red uc ida pa ra d a r un res iduo . El res idu o se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (D C M :M e O H = 1 :0 ~ 10 :1 ) pa ra d a r el co m p u e s to 38 a co m o un só lido b la n co (372 m g). E S I-M S : m /z= 903.2 y 903.4 [^m +H]+

P aso 2. P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ) 46 A , s a l d e s o d io y C o m p u e s to 46 B (*5 ), s a l d e s o d io

S e tra tó el C o m p u e s to 38 a (372 mg) con M e N H ²/E tO H (15 m l) a 40° C d u ra n te 2 ,5 h. D e spu és de a g ita r a 40° C d u ra n te 1 h, la m ezc la de la rea cc ió n se co n ce n tró pa ra d a r un só lido b lanco co m b in a d o con o tro lo te . El só lido se d iso lv ió en agua (40 m l) y se lavó con D C M (20 ml x 4). La ca p a a cu o sa se lio filizó y se pu rificó m ed ia n te H PLC p re p a ra tiva d e fase in ve rsa (X tim a te C 18 5 |jm 150 x 25 m m , C o nd ic ió n : A: agua (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - A C N : M eC N , B in ic ia l: 12% , B fina l: 42% , C auda l (m l/m in ) 25) pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 46 A , s a l d e a m o n io só lid o b lanco com o un só lido b lan co (18 ,5 m g) y el c o m p u e s to (*S ), s a l d e a m o n io 46 B co m o un só lido b lanco (35 ,2 mg).

C o m p u e s to (*R ) 46 A , s a l d e a m o n io : 1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 6 ppm 8.69 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 6.46 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.48 (brd , J = 2.8 Hz, 1H), 5.35 (b r d, J= 2.8 Hz, 1H), 5.10 (b r dd, J= 3.2 , 9.4 Hz, 1H), 5.04 (br dd, J= 3.2 , 9.2 Hz, 1H), 4.67 (br s, 1H), 4.47 (br d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.36 (b r d, J= 12.8 Hz, 1H), 4.19 (br t, J = 10.8 Hz, 1H), 3.85 (brd , J= 13.6 Hz, 1H), 3.62 (br d, J= 3.6 Hz, 1H), 3.02 (b r d, J= 10.4 Hz, 1H), 1.89 (br t, J = 10.8 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) 6 ppm 50.5 (brs, 1P), 19F N M R (376 M H z, DM SO -da) 6 p p m -199.86 (td, J = 19.6 , 49.6 Hz, 1F)

C o m p u e s to (*S ) 46 B , s a l d e a m o n io : 1H N M R (400 M H z, DM SO -da) 6 ppm 8.48 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 6.45 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.58 (br d, J= 3.2 Hz, 1H), 5.45 (brd, J= 3.2 Hz, 1H), 5.17 (b r d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.12 (brd , J= 9.2 Hz, 1H), 4.75 (b r s, 1H), 4.54 -4.45 (m , 2H ), 4.25 -4.16 (m, 1H), 3.78 (b r d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.38 (b r dd , J = 11.2, 13.6 Hz, 1H), 3.01 (brd, J= 10.4 Hz, 1H), 1.93 (br t, J= 10.8 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D M S O -d6) 6 ppm 52.02 (b r s, 1P); 19F N M R (376 M H z, D M S O -d6) 6 ppm -199.30 -199.90 (m , 1F).

C o n v e rs ió n a C o m p u e s to (*R ) 46 A , s a l d e s o d io

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (4 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (15 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a co lu m n a con H ² S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V ), y luego con a g ua d e s io n iz a d a hasta q u e se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió un a so luc ió n de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g ua (po r lo m en os 4 C V ), y lu eg o con agua d e s io n iz a d a ha s ta q u e se vo lv ió neu tra . El c o m p u e s to (*R ) 46 A , s a l d e a m o n io (18 ,5 mg) se d iso lv ió en a g ua d e s io n iza d a /M e C N (8 m l/2 m l), se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r d e la co lu m n a y se e lu yó con a g ua de s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se ag rup a ron y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 46 A , s a l d e s o d io (13 ,7 mg) co m o un só lido b lanco . 1H N M R (400 M H z, D ² O) ó ppm 8.27 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.72 (br s, 1H), 6.35 (b r d, J= 16.4 Hz, 1H), 5.77 (br s, 1H), 5.70 -5.49 (m , 1H), 5.26 (br s, 2H ), 4.59 -4.44 (m, 2H ), 4.36 (b r d, J = 11.2 Hz, 1 H), 4.05 (b r s, 1H), 3.60 -3.38 (m , 2H ), 2.71 (b r s, 1H), 2.28 (b r s, 1H); 31P N M R (162 M Hz, D ² O) ó 54.42 (br s, 1P); 19F N M R (376 M H z, D ²O) 5 -200.41 (br s, 1F); E S I-M S : m /z= 676.0 [M H]+

C o n v e rs ió n a C o m p u e s to (*S ) 46 B , s a l d e s o d io

S e añ ad ió D ow ex 50W x8 , 200 -400 (10 ml, fo rm a H) a un vaso de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (25 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a co lu m n a con H ² S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V ), y luego con a g ua d e s io n iz a d a hasta q u e se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió un a so luc ió n de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g ua (po r lo m en os 4 C V ), y lu eg o con agua d e s io n iz a d a ha s ta q u e se vo lv ió neu tra . El c o m p u e s to (*S ) 46 B , s a l d e a m o n io (35 ,2 mg) se d iso lv ió en a g ua d e s io n iza d a /M e C N (10 m l/8 m l), se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r d e la co lu m n a y se e lu yó con a g ua de s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se ag rup a ron y lio filiza ro n hasta el c o m p u e s to (*S ) 46 B , s a l d e s o d io (33,1 m g) co m o un só lido b lan co . 1H N M R (400 M H z, D ² O) ó ppm 8.72 (hr s, 1H), 8.73 -8.68 (m, 1H), 8.58 (brs, 1H), 8.14 (h r s, 1H), 6.81 (brd , J = 17.6 Hz, 1H), 6.26 (b r s, 1H), 6.07 -5.89 (m, 1H), 5.67 -5.53 (m , 2H ), 4.94 (br d, J = 6.8 Hz, 2H ), 4.82 (br s, 1H), 4.42 (brd, J= 12.4 Hz, 1H), 4.09 (brd , J= 14.4 Hz, 1H), 4.14 -4.04 (m, 1H), 3.82 -3.69 (m, 1H), 3.23 (br s, 1H), 2.58 (b r s, 1H), 2.37 (br s, 1H); 31P N M R (162 M H z, D ²O) 8 ppm 53.58 (b r s, 1P); 19F N M R (376 M H z, D ² O) ó ppm -199.69 (br s, 1F); E S I-M S : m /z= 676.0 [M H]+

E je m p lo 39

C o m p u e s to 35

S e a ñ ad ie ro n s u ce s iva m e n te im idazo l (2 ,36 g, 34 ,6 m m o l) y T B S C I (3 ,48 g, 23,1 m m o l) a un a so luc ió n del co m p u e s to 20 b [C A S 170871 -87 -1 ] (7 ,8 g, 11 ,5 m m ol) en D C M seco (101 m l). La m ezc la d e la rea cc ió n se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te hasta la co n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 3 h), d e sp u é s d e lo cua l la so luc ió n de la reacc ión se d ilu yó con D C M y se lavó con agua . La ca p a o rg á n ica se secó so b re N a ² S O ⁴ anh id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida pa ra d a r el co m p u e s to b ru to 39 b co m o un a e sp u m a b la n ca (9,2 g, bru to ).1

1H N M R (500 M H z D M S (M6) ó ppm : 0.20 (s, 3H ), 0.24 (s, 3H ), 0.96 (s, 9H ), 3.60 (d, J= 5.5 Hz, 2H ), 3.97 (d, J=2.1 Hz, 6H ), 4.69 (m , 1H), 5.4 (dd, J= 54.4 , 4.1 Hz, 1H), 5.63 (dq, J= 21.3 , 3.9 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.10 (m, 4H ), 7.47 (q, J= 7.3 Hz, 1H), 7.52 (m, 6H ), 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 2H ), 7.80 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.89 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 8.83 (s, 1 H) 8.89 (s, 1H), 11.49 (s, 1H); E S I-M S : m /z 790.4 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 39 c

S e ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te una so luc ió n de l co m p u e s to b ru to 39 b (9 ,2 g) en D C M (250 m l), a la qu e se a ñ a d ie ro n agua (1 m l, 57 ,6 m m o l) y D C A (38 ml de un a so lu c ió n al 10% en D C M , 46,1 m m ol) has ta co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 1 h). La m ezc la d e la rea cc ió n se inac tivó con p ir id in a (4 ,6 m l, 57 ,6 m m o l) y m e tano l (5 m l) y p o s te rio rm e n te se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 39 c co m o una e sp u m a b lan ca (4 ,4 g).

1H N M R (500 M H z DM SO -da) ó ppm : -0.26 (s, 3H ), -0.06 (s, 3H ), 0.72 (s, 9H ), 3.72 (m , 2H ), 4.36 (dt, J= 26.6 , 4.0 Hz, 1H), 5.10 (m, 2H ), 5.22 (d, J=4.1 Hz, 1H), 5.39 (s, 1H), 6.13 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 8.77 (d, J= 9.6 Hz, 2H ), 11.24 (s, 1 H); E S I-M S : m /z 488.2 [M H ]+ .

P aso 3: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 39 d

S e añ a d ió g o ta a g o ta c lo ru ro d e m es ilo (1 ,04 m l, 13 ,55 m m o l) a una so luc ió n de l co m p u e s to 39 c (4 ,4 g, 9 ,03 m m ol) en p ir id in a seca (44 m l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 0° C has ta la co n ve rs ió n com p le ta . (ap rox. 3 h), d e s p u é s de lo cua l se in a c tivó con m e tano l y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo ob te n id o se d iso lv ió en E tO A c y se lavó con N aHCO 3 a cu o so sa tu ra do . La ca p a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4 anh id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r el p ro d u c to m es ilad o . El p ro du c to b ru to se d iso lv ió en D M F seca (50 ml) seg u ido d e la a d ic ió n de a z ida só d ica (4,51 g, 69 ,38 m m ol). La m ezc la d e la rea cc ió n se ag itó a 60° C d u ra n te 5 h, d e sp u é s de lo cua l se en frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te , se d ilu yó con E tO A c y se lavó con N aHCO 3 a cu o so sa tu ra do y agua . La ca p a o rg á n ica se secó s o b re Na2SO 4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . La pu rif ica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 39 d com o una e sp u m a b lan ca (4 g, ren d im ien to : 86 ,5% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : -0.25 (s, 3H ), -0.02 (s, 3H ), 0.72 (s, 9H ), 3.65 (dd, J = 13.1, 4.1 Hz, 1H), 3.92 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 4.50 (dq, J= 25.3 , 3.7 Hz, 1H), 5.20 (dd, J= 53.7 , 4.8 Hz, 1H), 5.35 (dq, J= 22.0 , 3.9 Hz, 1H), 6.15 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.9 Hz, 2H), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 8.80 (d, J = 2 A Hz, 2H ), 11.24 (s, 1H ); E S I-M S : m /z 513.2 [M+H]+. P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 39 e

S e h id ro gen ó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 39 d (4 g, 7 ,8 m m o l) en M eO H (40 m l) a p res ión a tm o s fé rica a te m p e ra tu ra am b ie n te sob re P d/C (20 % sob re ca rb on o , 0 ,4 g). La m ezc la de la reacc ión se filtró sob re t ie rra de d ia to m e a s , la t ie rra de d ia to m e a s se en ju a g ó con M eO H . El f iltra d o se e va p o ró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r la am ina c o m p u e s ta co m o u n a e sp u m a b lan ca . El p ro d u c to b ru to (seca do po r co e va p o ra c ió n con to lu e n o a n h id ro ) se d iso lv ió en DC M (59 m l) se g u id o de la ad ic ió n de 4 -n itro fe n o l (3 ,2 g, 24 m m ol), Et3N (6 ,5 ml, 46 ,8 m m o l) y ta m ice s m o le cu la re s ac tiva do s . La m ezc la resu lta n te se en frió a -78° C ba jo N ² d e s p u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta una so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (5 ,5 g, 23 ,4 m m o l) en DC M (20 m l), se co n tin u ó ag ita n d o ha s ta la con ve rs ión co m p le ta (ap rox. 3 h). La m ezc la de la reacc ión se c a le n tó a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se lavó con N a H C O ³ acu oso sa tu ra d o y agua . La fa se o rg á n ic a se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -50 % en he xano) p a ra d a r e l co m p u e s to 39 e co m o u n a e sp u m a a m a rilla (3 ,5 g, ren d im ien to : 65% ). 1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm : -0.28 (d, J = 15.8 Hz, 3H ), -0.05 (d, J= 6.2 Hz, 3H ), 0.71 (s, 9H ), 3.66 (t, J= 5.9 Hz, 2H ), 4.42 (d, J= 26.2 Hz, 1H), 5.29 (m, 2H ), 6.14 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.55 (m, 4H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 8.30 (m, 2H ), 8.69 (s, 1H), 8.76 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 9.22 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 11.27 (s, 1H); E S I-M S : m /z 688.29 [M+H]+. P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 39 g

S e ca rg ó un m a traz de reacc ión con D M A P (2 ,59 g, 21 ,2 m m ol), DC M seco (60 m l) y ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á a c tiva do s . La m e zc la resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra inerte . S im u ltá n e a m e n te , se seca ron en ta m ice s m o le cu la re s de 3 Á ac tiva d o s (ap rox. 2 h) u n a so luc ió n de l co m p u e s to 39 f (2 ,05 g, 4 ,2 m m o l) y u n a so luc ió n de su lfa m a to 39 e (3 ,5 g, 5,1 m m ol) ca d a un a en DC M seco (2 x 60 m l). A m b a s so lu c io n e s (com p ue s to 39 f y su lfa m a to 39 e re sp e c tiva m e n te ) se tra n s fir ie ro n su ce s iva m e n te al m atraz de reacc ión . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 24 h. Los ta m ic e s m o lecu la re s se e lim in a ro n po r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N aHCO 3 a cu oso sa tu ra d o y NH4Cl a cu o so sa tu ra do . Las fa se s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron sob re Na2SO4, se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -2 % en D C M ) p a ra d a r el co m p u e s to 39 g co m o un a e sp u m a b la n q u e c in a (2,9 g, ren d im ien to : 66% ).1

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm : -0.26 (s, 3H ), -0.05 (t, J = 11.0 Hz, 9H ), 0.71 (s, 9H ), 0.77 (s, 9H ), 3.56 (m , 2H ), 3.85 (dd, J = 12.4, 3.4 Hz, 1H), 3.98 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 4.33 (t, J= 3.4 Hz, 1H), 4.46 (dt, J= 25.2 , 6.0 Hz, 1H), 5.18 (d, J=4.1 Hz, 1H), 5.31 (m , 2H ), 5.55 (dq, J = 17.9, 4.1 Hz, 1H), 5.98 (dd, J= 51.0 , 2.8 Hz, 1H), 6.15 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 18.9, 1.7 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 4H ), 7.65 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 8.04 (dd, J= 7.9 , 1.7 Hz, 4H ), 8.59 (s, 1H), 8.75 (d, J= 8.3 Hz, 3H ), 8.86 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 11.26 (d, J=4.1 Hz, 2H ); E S I-M S : m /z 1036.5 [M+H]+.

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 34a

S e ag itó a 45° C u n a so luc ió n de l co m p u e s to 39 g (2 ,9 g, 2 ,8 m m o l) en p ir id in a (55 m l) a la q u e se añ ad ie ro n Et3N (19 ,5 m l, 140 m m o l) y E t3N .3H F (4 ,5 m l, 28 m m o l) ha s ta c o n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 5 h). La m ezc la de la rea cc ió n se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te , se añ ad ió is o p ro p o x itr im e tils ila n o (19 ,8 m l, 112 m m o l) y se co n tin u ó a g ita n d o d u ra n te la noche . El res iduo o b te n id o tras la co n ce n tra c ió n a p res ión red u c id a se su sp e n d ió en DC M , se a ñ a d ie ro n unas g o ta s de m etano l. La su sp e n s ió n se ag itó d u ra n te 20 m in, d e sp u é s de lo cua l e l p re c ip ita d o se reco g ió po r f iltra c ió n y se secó a a lto v a c ío pa ra d a r el co m p u e s to 34 a co m o un po lvo b la n q u e c in o (1,8 g, re n d im ie n to : 79% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 3.51 (dd, J= 46.1 , 13.8 Hz, 2H ), 3.65 (td, J= 9.0 , 3.4 Hz, 1H), 3.81 (q, J=4.1 Hz, 1H), 4.34 (t, J = 3.12 Hz, 1H), 4.41 (dt, J= 25.9 , 6.0 Hz, 1H), 5.21 (m, 2H ), 5.40 (m, 2H ), 5.92 (dt, J = 51.2, 3.8 Hz, 1H), 6.11 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.15 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 17.2, 2.8 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 4H ), 7.65 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 8.04 (dd, J= 7.6 , 2.1 Hz, 4H ), 8.70 (s, 1H), 8.76 (d, J= 7.6 Hz, 3H ), 8.85 (s, 1H), 11.27 (s, 2H ); E S I-M S : m /z 808.3 [M+H]+.

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 39 h

S e tra tó p re v ia m e n te con ta m ice s m o le cu la re s ac tiva do s de 3Á d u ra n te 2 h ba jo N ² u n a so luc ió n de l co m p u e s to 34 a (890 m g, 1,10 m m o l) y 1H -te tra zo l (12 ,86 ml de u n a 3 -4 % en M eC N , seca do en ta m ice s m o lecu la re s de 3Á an tes de su uso) en T H F seco (50 m l). S e añ ad ió de un a v e z 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (365 mg, 1,21 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 1 h, d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió una po rc ión ad ic io n a l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (166 m g, 0 ,55 m m ol). Se c o n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche , Fue ne cesa rio a ñ a d ir una ca n tid a d ad ic io n a l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (33 m g, 0,11 m m o l) seg u ido de ag itac ión d u ra n te un d ía ad ic io n a l pa ra o b te n e r una co n ve rs ió n co m p le ta . S e añ ad ió tB u O O H (341 pl d e so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 1 ,87 m m ol) y se co n tin u ó a g itan do d u ra n te 1 h. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n e xh a u s tiva m e n te con D C M . El filtra d o se lavó con sa lm ue ra , N a H C O ³ sa tu ra do y sa lm u e ra re sp e c tiva m e n te , se secó con M gS O ⁴ , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en co lu m n a d e s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 39 h (168 mg, ren d im ien to : 16 ,5% ). E S I-M S : m /z 923.4 [M+H]+.

P aso 8: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 35 , s a l d e s o d io

S e ag itó el co m p u e s to 39 h (168 m g, 0 ,182 m m ol) en un a so lu c ió n d e m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h. La reacc ión d e la m ezc la se co n ce n tró a b a ja p res ión . El p ro du c to b ru to se tr itu ró en M eC N seg u ido d e una p u rif ica c ió n p o r H P LC de fase in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 250 x 30 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to de a m o n íaco acu oso al 0 ,25 % (A) - M eC N (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ) pa ra d a r el c o m p u e s to 35 , s a l d e a m o n io . La co n ve rs ió n en la sa l d e sod io se rea lizó m ed ia n te e lu c ió n de un a so luc ión a cu o sa sob re un a co lu m n a co m p a c ta d a con un a res ina de in te rca m b io ió n ico de sod io ca tió n ica pa ra d a r el c o m p u e s to 35 , s a l d e s o d io co m o un só lido b lanco e sp o n jo so d e sp u é s d e la lio filiza c ió n (25 m g, ren d im ien to : 20 % ). 1H N M R (600 M H z, D M S O -t/e , 67° C.) ó ppm 10.60 (br s, 1H), 8.32 (b r s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.32 (br s, 2H ), 7.14 (br s, 2H ), 6.29 (dd, J= 15.4 , 4.4 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.00 -6.14 (m, 1H), 5.48 ­ 5.59 (m, 2H ), 5.27 (dd, J= 53.0 , 3.6 Hz, 1H), 4.46 -4.53 (m, 1H), 4.42 -4.46 (m, 1H), 4.08 (dt, J = 11.7, 7.5 Hz, 1H), 3.73 (ddd, J = 11.7, 6.0 , 3.3 Hz, 1H), 3.69 (b r d, J= 14.7 Hz, 1H), 3.49 (br d, J= 14.4 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, DM SO -da) ó ppm -1.33 (s, 1 P); E S I-M S : M /z 660.3 [M -H ]-.

E je m p lo 40

P aso 1: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 40 b

S e c a rg ó un m a traz d e reacc ión con D M A P (1 ,43 g, 11 ,7 m m ol), D C M seco (9 m l) y ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á ac tiva do s . La m ezc la resu ltan te se a g itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 3 h ba jo a tm ó s fe ra inerte . S im u ltá n e a m e n te , se seca ron en ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á ac tiva d o s (ap rox. 3 h) una so luc ió n de 5 '-O -D M T r-2 -F -d e so x iin o s in a [C A S 1951424 -83 -1 ] (1 ,47 g, 2 ,57 m m ol) y una so luc ió n de su lfa m a to 40 a (2 ,0 g, 2 ,34 m m ol), cad a una en D C M seco (2 x 9 m l),. A m b a s so lu c io n e s se tra n s fir ie ro n s u ce s iva m e n te al m a traz d e rea cc ió n . La m ezc la de la rea cc ió n re su lta n te se a g itó a 40° C d u ra n te la noche . Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con D C M . El f iltra d o se lavó con NaHCO 3 a cu oso sa tu ra do , luego la fa se a cu osa se e x tra jo con D C M . Las fa s e s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron sob re Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a d e s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 1 -3% en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 40 b pu ro (2,01 g, 65 ,9% ). E S I-M S : m /z 1303 ,8 [M+H]+.

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 40 c

S e d iso lv ió el c o m p u e s to 40 b (2 ,0 g, 1,53 m ol) en D C M (77 ml) al q u e se añ a d ie ro n agua (140 pl, 7 ,65 m m ol) y D C A (490 pl, 5 ,98 m m ol). La m ezc la d e la rea cc ió n se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h, d e sp u é s de lo cua l se añ a d ie ro n p ir id in a (620 pl, 7 ,65 m m ol) y a lgo de M eO H . La m ezc la re su lta n te se co n ce n tró p a rc ia lm e n te a p re s ió n red uc ida y se tra n s fir ió a una co lu m n a de s ílice pa ra su p u rifica c ió n (g ra d ie n te de e luc ión : M eO H al 0 -18 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 40 c (0 ,92 g, 86% ).

1H N M R (300 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.48 (b r s, 1H), 12.08 (b r s, 1H), 11.60 (b r s, 1H), 8.63 (b r t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.34 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.31 (dd, J = 16.4, 2.9 Hz, 1H), 5.58 -5.88 (m, 3H ), 5.37 (b r t, J = 5.0 Hz, 1 H), 5.18 -5.30 (m, 1H), 4.65 (q, J= 5.9 Hz, 1H), 4.23 -4.33 (m, 1H), 4.05 (q, J= 5.0 Hz, 1H), 3.84 (t, J=4.1 Hz, 1H), 3.70-3.81 (m , 1H), 3.54 -3.68 (m, 1H), 3.42 (s, 3H ), 3.20 -3.40 (m, 2H ), 2.75 (spt, J= 6.9 Hz, 1H), 1.12 (b r d, J= 7.0 Hz, 3H ), 1.11 (b r d, J= 1.0 Hz, 3 H ); E S I-M S : m /z 699.4 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 40 d

S e tra tó una so luc ió n de l c o m p u e s to 40 c (200 m g, 0 ,286 m m ol) y 1H -te tra zo l (5 ,09 ml de u n a so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 2 ,29 m m ol) en M eC N seco (8 m l) co n ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á d u ra n te 1 h ba jo N² d e sp u é s de lo cua l se a ñ ad ió g o ta a g o ta 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il)- fo s fo ro d ia m id ita (173 mg, 0 ,57 m m ol) en M eC N seco (1 ,0 m l) d u ra n te un m inu to (no ta : e l T H F fu e rec ién de s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el M eC N fue rec ién d e s tila do sob re C a H ² a n tes d e su uso). La m ezc la de la rea cc ió n resu ltan te se a g itó d u ra n te 2 h a te m p e ra tu ra a m b ie n te . Se a ñ ad ió un a so luc ió n de tB u O O H (300 pl, 1,5 m m ol) y se co n tin u ó a g ita n d o d u ra n te o tros 30 m in. La m ezc la de la rea cc ió n se filtró a tra vé s d e u n a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró . El res idu o se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 40d co m o un só lido b lan co (206 m g, 71% ). E S I-M S : m /z 814.4 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 , s a l d e s o d io

S e a g itó e l c o m p u e s to 40 d (206 m g, 0 ,253 m m ol) en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta no l (10 ml) a 40° C d u ra n te 3 h. La m ezc la de la rea cc ió n se c o n c e n tró a ba ja p re s ió n . El res idu o se d iso lv ió en agua , se lavó con D C M y se lio filizó . El p ro du c to b ru to se pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase es ta c io n a ria : X b rid g e O B D C 18, 5 pm , 150 x 30 m m ; fa s e m óvil: b ica rb o n a to a m ó n ico a cu oso 10 m M (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e luc ió n ). La co n ve rs ió n fin a l en la sal de sod io se rea lizó p o r e lu c ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re una co lu m n a co m p a c ta d a con res ina de in te rca m b io ió n ico D ow ex 50 W x8 Na pa ra d a r el c o m p u e s to 53 , s a l d e s o d io c o m o un só lido b lan co e s p o n jo so d e sp u é s de la lio filizac ió n (13 m g, 8% ). 1H N M R (400 M H z, D ²O) 5 ppm 8.39 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.63 (d, J=19.1 Hz, 1H), 6.12 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.01 -5.84 (m, 1H), 5.66 (ddd, J= 4.1 , 8.7, 19.1 Hz, 1 H), 5.54 -5.44 (m , 1 H), 4.75 -4.69 (m, 1H), 4.66 (s, 1 H), 4.51 (b r d, J = 11.5 Hz, 1 H), 4.26 (d, J= 4.8 Hz, 1 H), 4.24 ­ 4.17 (m, 1H), 4.03 -3.94 (m , 1H), 3.91-3.81 (m, 1H), 3.77 (s, 3H ); 31P N M R (162 M H z, D ² O) 5 ppm -2.020 (s, 1P); 19F N M R (376.5 M H z, D ² O) 5 ppm -198.634 (s, 1F); E S I-M S : m /z= 691.2 [M+H]+.

E je m p lo 41

C o m p u e s to 54

S e añ a d ie ro n S e le c tflu o r (34 ,6 g, 97 ,7 m m ol) y A cO H (100 m l) a un a so luc ió n d e 4 -c lo ro -7 H -p irro lo [2 ,3 -d jp ir im id in a [C A S 3680 -69 -1 ] (41a, 10,0 g, 65,1 m m ol) en M eC N seco (500 m l), la m ezc la se ag itó a 70° C ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (a p ro x . 16 h). D e s p u é s de e n fria r a te m p e ra tu ra a m b ie n te , la m ezc la de la rea cc ió n se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida y se co e va p o ró con to lu e n o a n h id ro . El só lid o resu ltan te se d iso lv ió en una m ezc la de so lve n te s D C M /E tO A c (1:1), la so lu c ió n o b te n id a se filtró a tra v é s d e una a lm o h a d illa d e tie rra d e d ia to m e a s q u e se lavó a fon do . L o s f iltra d o s c o m b in a d o s se c o n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . L a pu rifica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -1% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 41 b com o un só lido b la n q u e c in o (5 ,2 g, ren d im ien to : 47 % ). 1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) ó ppm 12.49 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.73 (t, J= 2.8 Hz, 1H); E S I-M S : m /z 169.8 [M -H ]-.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 41 c

S e añ ad ió b is (tr im e tils ilil)a c e ta m id a (B S A , 3 ,15 ml, 12,8 m m ol) a la su sp e n s ió n de l co m p u e s to 41 b (2,0 g, 11 ,6 m m ol) en M eC N seco (80 m l). D e spu és de a g ita r d u ra n te 10 m in , se añ a d ie ro n s u ce s iva m e n te 1 ,2 -d i-O -a ce til-3 -O -m e til-5 -O -b e n z o il-D -r ib o fu ra n o s a ([10300 -21 -7 ], 4 ,53 g, 12 ,8 m m ol) y tr if lu o ro m e ta n o s u lfo n a to de tr im e tils ililo (T M S O T f, 2 ,34 m l, 12 ,8 m m ol). La m e zc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 15 m in a te m p e ra tu ra a m b ie n te y luego se tra n s fir ió a un baño d e ace ite p re ca le n ta d o a 80 ° C, la ag ita c ió n se co n tin u ó d u ra n te 90 m in . D e spu és de e n fria r a te m p e ra tu ra a m b ie n te , la m ezc la de la rea cc ió n se d ilu yó con E tO A c y se lavó s e cu e n c ia lm e n te con so lu c ió n acu osa sa tu ra d a d e N aHCO 3 y sa lm ue ra . La ca p a o rg á n ica se secó so b re Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . La p u rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : E tO A c al 0 -10 % en he xano) p a ra d a r e l co m p u e s to 41 c co m o un po lvo b la n q u e c in o (1,6 g, ren d im ien to : 30% ). 1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 8.66 (s, 1H), 7.99 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.95 (d, 7.6 Hz, 2H ), 7.65-7.71 (m, 1H), 7.47 ­ 7.56 (m, 2H ), 6.42 (d, J=4.1 Hz, 1H), 5.78 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 12.2 , 3.5 Hz, 1H), 4.51 (dd, J= 12.2 , 5.1 Hz, 1H), 4.41 -4.45 (m, 1H), 4.35 -4.40 (m, 1H), 3.41 (s, 3H ), 2.09 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 464.0 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 41 d

S e añ ad ió N aO H a cu o so 2 M (16 m l) a u n a so luc ió n de l co m p u e s to 41 c (1,6 g, 3 ,4 m m ol) en d io xa n o (16 m l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 110° C h a s ta la co n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 3 h), d e sp u é s de lo cua l se e n frió a te m p e ra tu ra am b ie n te y se n e u tra lizó con H C l a cu oso 1M. El res iduo o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0-7% en D C M ) p a ra d a r el co m p u e s to 41 d co m o un po lvo b la n q u e c in o (0 ,32 g, ren d im ien to : 45 % ). 1H N M R (500 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 12.11 (b r s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.34 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.04 (dd, J= 6.2 , 1.4 Hz, 1H), 5.42 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.08 (b r t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.33 -4.43 (m , 1H), 3.96 (q, 0.7 = 3.8 Hz, 1H), 3.77 (dd, J= 5.0 , 3.4 Hz, 1H), 3.56 -3.65 (m , 1H), 3.49 -3.55 (m , 1H), 3.39 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 299.9 [ ^m +H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 41 e

S e ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 41 d (0,51 g, 1,7 m m o l) en p ir id in a seca (8 m l), a la qu e se añ ad ie ro n D M A P (0,1 g, 0 ,8 m m o l) y D M T rC l (0 ,92 g, 2 ,7 m m ol) (en po rc io nes ) d u ra n te 16 h. La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó con m e tan o l (5 m l) y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res iduo o b te n id o se d iso lv ió en E tO A c y se lavó con agua . La ca p a o rg á n ic a se secó sob re Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . La p u rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 41 e co m o una e s p u m a b la n q u e c in a (0 ,75 g, ren d im ien to : 74% ). 1H N M R (500 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 12.13 (b r s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.35-7.41 (m, 2H ), 7.26 -7.32 (m, 2H ), 7.22 ­ 7.26 (m , 5H ), 7.18 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.83 -6.90 (m , 4H ), 6.06 (dd, J= 4.8 , 1.4 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.47 (q, J= 5.4 Hz, 1H), 4.05 (q, J= 4.4 Hz, 1H), 3.87 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H ), 3.33 (s, 3H ), 3.20 (d, J=4.1 Hz, 2H ); ESI-M S: m /z 602.3 [M+H]+.

P aso 5. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 41 f

S e d iso lv ie ro n c a d a uno po r sep a ra do e l co m p u e s to 41 e (1 ,2 g, 2 ,03 m m ol), e l su lfa m a to 17a (2,1 g, 2 ,43 m m o l) y D M A P (1 ,2 g, 10 ,14 m m o l) en DC M seco (3 x 30 ,0 m l). C a da so luc ió n se secó con ta m ic e s m o lecu la re s a c tiva d o s de 3Á ag ita n d o ba jo N ² d u ra n te p o r lo m en os 2 h. A la so luc ió n de D M A P se le a ñ ad ie ro n resp ec tiva m en te la so lu c ió n de l c o m p u e s to 41 e en DC M y la so luc ió n de su lfa m a to 17a en D C M . La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 36 h. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra do , s a lm u e ra y NH4Cl a cu o so sa tu rado . Las fa se s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron sob re Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . El res iduo se p u rif icó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -1 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 41 f (1 ,3 g, ren d im ien to : 49 % ). E S I-M S : m /z 1338.77 [M+H]+.

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 41 g

S e ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te ha s ta la co m p le ta d e s p ro te c c ió n un a so luc ió n de l co m p u e s to 41 f (1 ,3 g, 0 ,9 m m o l) en DC M (36 ,5 m l), a la que se a ñ ad ie ro n D C A (3 ,2 m l de DC M al 10% , 3 ,8 m m o l) y ag ua (90 pl, 4 ,8 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0 ,4 m l, 4 ,8 m m o l) y a lgu nas g o ta s de m e tano l. El res iduo o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a se su sp e n d ió en d ic lo ro m e ta n o , se filtró y se secó pa ra o b te n e r e l c o m p u e s to 41 g co m o un po lvo b la n q u e c in o (0 ,56 g, ren d im ien to : 78% ).

1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.18 (b r s, 1H), 11.26 (b r s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.49 (b r t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.06 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.93 (b r d, J=2.1 Hz, 1H), 7.63 -7.70 (m , 1H), 7.53 -7.60 (m, 2H ), 7.34 (s, 1H), 6.37 (b r d, J = 19.3 Hz, 1H), 6.31 (b r d, J= 5.5 Hz, 1H), 5.86 (b r s, 1H), 5.59 (b r d, J= 53.7 Hz, 1H), 5.25 (b r s, 1H), 5.20 (b r t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.59 (b r d, J = 18.6 Hz, 1H), 4.03 -4.15 (m, 2H ), 3.98 (m, J=2.1 Hz, 1H), 3.60 -3.67 (m , 1H), 3.53 ­ 3.59 (m, 1H), 3.38 (s, 3H ), 3.11 -3.27 (m, 2H ); E S I-M S : m /z 734.2 [M+H]+.

P aso 7. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 41 h

S e tra tó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 41 g (100 mg, 0 ,136 m m o l) en M eC N /D M F seca (4 m l, 1 :3) con ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á d u ra n te 20 m in en N ² , d e sp u é s de lo cua l se m ezc ló con 1H -te tra zo l (2 ,42 ml de un so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 1,09 m m o l) y 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il)- fo s fo ro d ia m id ita (82 m g, 0 ,27 m m o l) en M eC N seco (1 ,0 m l) (no ta : e l M eC N fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 1,5 h a te m p e ra tu ra am b ie n te . S e añ ad ió una so luc ió n de tB u O O H (126 pl, 0 ,69 m m o l) y se co n tin u ó a g ita n d o d u ra n te o tro s 30 m in. La m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con DC M , luego se filtró a tra v é s de una a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y se con cen tró . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (g ra d ie n te d e e lu c ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 41 h (50 mg, pu reza de l 77% ).

E S I-M S : m /z 849.3 [M H ] .

P aso 8: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 54 , s a l d e s o d io

El c o m p u e s to a n te r io r 41 h se ag itó en una so luc ió n d e m e tila m in a al 30 % en e ta no l (5 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 3 h. La m ezc la de la reacc ión se c o n c e n tró a ba ja p res ión . El res iduo se d iso lv ió en agua , se lavó con D C M y se lio filizó . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m e d ia n te H P L ^c p re p a ra tiva d e fa se in ve rsa (fase es ta c ion a ria : X b rid g e O B D C 18, 5 pm , 150 x 30 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to a m ó n ico acu oso 10 m M (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ). La c o n ve rs ió n fina l en la sa l de so d io se rea lizó m ed ia n te la e lu c ió n de una so luc ió n acu o sa en una co lu m n a co m p a c ta d a con res ina de in te rca m b io ió n ico N a D o w ex 50 W X 8 pa ra d a r el c o m p u e s to 54 , s a l d e s o d io co m o un só lid o e sp o n jo so b lan co d e sp u é s d e la lio filizac ió n (24 m g, ren d im ien to : 25 % a p a rtir de 41 g ). 1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 ppm 8.22 (b r s, 1H), 7.94 (s, 1H ), 7.40 (s, 1H), 7.30 (b r s, 1H), 6.46 -6.34 (m, 2H ), 5.39 (b r dd , J=4.6 , 8.1 Hz, 2H ), 5.23 (b r s, 1 H), 5.08 -4.93 (m , 1 H), 4.63 (b r s, 1H), 4.48 (b r d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.41 (b r d, J= 3.9 Hz, 1H), 4.32 -4.25 (m, 1H), 4.25 -4.18 (m, 1H), 3.77 (b r d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H ), 3.54 (b r d, J= 13.0 Hz, 1H ); 19F N M R (376 M H z, D 2O ) 5 p p m -164.506 (s, 1F), -197.262 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm -1.850 (s, 1P); E S I-M S : m /z=692.1 [M H ]+.

E je m p lo 42

C o m p u e s to 5

P aso 1: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 42 b

S e ag itó un a m ezc la de c o m p u e s to 4 h (520 mg, 0 ,76 m m ol), co m p u e s to 42a (372 mg, 0 ,76 m m o l) y M S 4Á (1 g) en T H F (20 m l) a 20° C d u ra n te 1 h en N². Lueg o se añ ad ió D M A P (466 m g, 3,81 m m ol). La susp en s ión a m a rilla resu ltan te se ag itó a 20° C d u ra n te 17 h ba jo N ². La m ezc la de la reacc ión se filtró y se co n ce n tró a p res ión re d u c id a (<40° C) pa ra d a r un res idu o p u rif ica d o p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (e luye n te en g ra d ie n te : é te r de p e tró le o /a ce ta to de e tilo de 100 /0 a 0 /100 y luego d ic lo ro m e ta n o /m e ta n o l de 100 /0 a 100 /10 ) pa ra d a r el co m p u e s to 42 b (460 m g) co m o un só lido am a rillo pá lido .

1H N M R (400 M H z, C D ³O D ) 5 ppm 8.69 (s, 1H) 8.40 (s, 1H) 8.08 -8.13 (m , 3H ) 7.64-7.71 (m, 1H) 7.54 -7.62 (m , 2H ) 6.28 (dd, J= 19.07 , 1.47 Hz, 1H) 5.94 (d, J= 8.07 Hz, 1H) 5.57 (d, J= 4.40 Hz, 1H) 5.44 (d, J= 2.93 Hz, 1H) 4.92 -5.00 (m, 1H) 4.61 (dd, J= 8.07 , 5.38 Hz, 1H) 4.22 (b r dd, J= 8.19 , 2.81 Hz, 2H ) 4.13 -4.17 (m, 1H) 4.06 (b r dd, J= 7.09 , 3.18 Hz, 1H) 3.84-3.91 (m, 2H ) 3.77 -3.82 (m, 1H) 3.37 (s, 3H ) 2.69 (dt, J= 13.69 , 6.85 Hz, 1H) 1.20 (t, J= 6.60 Hz, 6H ) 0.87 -0.% (m, 17H ) 0.17-0.21 (m, 6H ) 0.08 (d, J = 11.00 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z= 1031.2 [M H]+

P aso 2. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 42 c

S e ag itó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 42 b (660 mg, 0 ,64 m m ol), tr ie tila m in a (648 ,2 m g, 6 ,4 m m o l) y tr ih id ro flu o ru ro de tr it ila m in a (516 ,3 m g, 3 ,20 m m o l) en p ir id in a (20 m l) a 10° C d u ra n te 17 ho ras. La m ezc la de la rea cc ió n se filtró y se c o n ce n tró a p re s ió n red u c id a a 30° C pa ra d a r un ace ite b ru to p u rif ica d o p o r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : A g e la D u raS he ll 5 pm , 150 m m x 25 m m ; fa se m óvil: A : a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) - B: M eC N , g ra d ie n te de e lu c ió n : A (93 % ): B (7% ) a A (63% ) y B (37% ) d u ra n te 9 m in, cau da l 25 m l/m in ). Las fra cc io n e s pu ras se reco g ie ron y lio filiza ro n ha s ta la seq ue da d pa ra d a r el co m p u e s to 42 c (230 m g) co m o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D M S O -d6 ) 5 ppm 12.08 (s, 1H) 11.63 (s, 1H) 11.26 (s, 1H) 8.69-8.81 (m, 2H ) 8.56 (s, 1H) 8.18 (s, 1H) 8.05 (d, J = 7.28 Hz, 2H ) 7.62-7.71 (m, 1H) 7.50-7.61 (m, 2H ) 6.38 (d, J= 19.83 Hz, 1H) 5.99 (d, J= 6.53 Hz, 1H) 5.84 (d, J= 8.78 Hz, 1H) 5.46 -5.68 (m, 1H) 5.15 (t, J = 5.27 Hz, 1H) 4.59 -4.79 (m, 2H ) 4.21 -4.32 (m, 1H) 4.13 -4.19 (m, 1H) 4.03-4.11 (m, 2H ) 3.85 (d, J = 5.52 Hz, 1H) 3.55 -3.63 (m, 1H) 3.45 -3.53 (m , 1H) 3.19 (s, 3H ) 2.75 (qu in , J=6.71 Hz, 1H) 1.11 (dd, J= 6.78 , 2.76 Hz, 5H ) 1.08 -1.14 (m, 1H); E S I-M S : m /z=801.9 [M H ]+

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 42 d

A u n a so luc ió n de l co m p u e s to 42 c (310 m g, 0 ,38 m m ol) en C H ³C N /T H F (1 :1, v /v , 18 m l) se le añ ad ió tam iz m o le cu la r de 4 Á (1 g) y 1 H -te trazo l en C H ³CN (7 m l, 3 ,15 m m ol, 0 ,45 M en C H ³CN ). D espués de a g ita r la m ezc la a 25° C d u ra n te 0 ,5 h, se añ ad ió a la m ezc la 2 -c ia n o e tilo N ,N ,N ',N '- te tra iso p ro p ilfo s fo ro d ia m id ita (190 m g, 0 ,63 m m ol) en C H 3C N . D e spués de a g ita r la m ezc la a 30° C d u ra n te 2 h, se añ ad ió a la m ezc la 1H -te tra zo l en C H ³CN (1, 8 ml, 0, 81 m m ol, 0, 45 M en C H ³C N ). D e spués de a g ita r la m e zc la a 30° C d u ra n te 0 ,5 h, se añ ad ió a la reacc ión T B H P (0 ,4 m l, 2 m m ol, 5 M en de can o ). D espués de a g ita r la m e zc la a 30° C d u ra n te 2 h, la reacc ión se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida p a ra d a r el c o m p u e s to b ru to 42 d (850 m g); E S I-M S : m /z 917.1 [M H ]

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 5, s a l d e a m o n io

S e tra tó el co m p u e s to 42 d (1000 mg, b ru to ) con m e ta n a m in a en E tO H (33% ) (10 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te . D e spu és de a g ita r la m e zc la de la reacc ión a 20° C d u ra n te 2 h, la m e zc la se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res iduo se d iso lv ió en a g u a (30 m l) y se e x tra jo con a ce ta to de e tilo (10 ml x 2). La fa se a cu osa se lio filizó hasta la seq ue da d p a ra d a r un res iduo p u rif ica d o p o r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (C o lum n a : A g e la D u raS h e ll 5 pm , 150 m m x 25 m m ; fa se m óvil: A : a g u a (NH3-H2O al 0 ,04% N H 4H C O 3 10 m M ) - B: M eC N , g ra d ien te de e lu c ió n : A (100% ): B (0% ) a A (90% ) y B (10% ) d u ra n te 10 m in, cau da l 25 m l/m in ). Las fra cc io n e s pu ras se reco g ie ron y lio filiza ro n ha s ta la seq ue da d pa ra d a r e l c o m p u e s to 5, s a l d e a m o n io (111 m g).1

1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 7.98 (s, 1H) 7.56 -7.70 (m, 2H ) 6.20 (b r d, J = 14.92 Hz, 1H) 5.71 (b r d, J= 9.05 Hz, 1H) 5.18 -5.40 (m, 2H ) 4.98 (b r s, 1H) 4.85 (b r d, J= 4.89 Hz, 1H) 4.55 (b r d, J = 10.27 Hz, 1H) 4.44 -4.52 (m, 1H) 4.39 (b r s, 1H) 4.19 (b r d, J = 11.25 Hz, 1H) 4.05 -4.16 (m , 2H ) 4.01 (b r d, J= 4.40 Hz, 1H) 3.34 -3.43 (m, 1H) 3.35 (s, 3H ); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -2.37 --0.06 (m, 1 P); 19F N M R (376 M H z, D²O) 5 ppm -202.54 (b r s, 1 F), E S I-M S : m /z= 689.9 [M H ]+

E je m p lo 43

C o m p u e s to 20

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 43 c

S e añ ad ió 5 -[3 ,5 -b is (tr if lu o ro m e til) fe n il]te tra zo l (9 ,65 ml de un a so lu c ió n 0 ,25 M en M eC N , 2,41 m m ol, so luc ió n se ca d a en ta m ic e s m o le cu la re s a n tes de su uso) a una so luc ió n de N -b e n z o il-2 ,,3 f-d id e s o x i-3 f-[( tr ife n ilm e til)a m in o ]-a d e n o s in a 43 a [C A S 195375 -63 -4 ] (720 mg, 1,21 m m ol) en M eC N (8 m l). S e a ñ ad ie ro n ta m ice s m o le cu la re s a c tiva d o s y la m ezc la resu ltan te se ag itó d u ra n te 1 h ba jo N². L u e g o , se tra n s fir ió a la m ezc la a n te rio r una so luc ió n d e 5 ,-O -(4 ,4 -d im e to x itr it il) -N 2 -is o b u tir il-3 ,-O -m e tilg u a n o s in a -2 '-(2 -c ia n o e til-N ,N -d iis o p ro p il- fo s fo ra m id ita ) 43 b [C A S 179479 - 04 -0 ] (2201 m g, 2 ,53 m m ol) en M eC N (25 m l), se ca d a s o b re ta m ic e s m o le cu la re s a c tiva do s . La so luc ió n de la reacc ión re su lta n te se ag itó d u ra n te 1 h a te m p e ra tu ra a m b ie n te , d e s p u é s de lo cua l se añad ió tB u O O H (1 ,10 ml de un a so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 6 ,03 m m ol), y se co n tin u ó a g itan do d u ra n te una ho ra m ás. La m ezc la de la reacc ión se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . S e a ñ a d ie ro n a g ua y ace ta to de e tilo , la fase a cu o sa se sep a ró y se ex tra jo con ace ta to de e tilo . Las fase s o rg á n ic a s c o m b in a d a s se seca ron con Na² S O ⁴ a n h id ro y se c o n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . La p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a so b re ge l de s ílice (g ra d ie n te d e e luc ió n : E tO A c al 0 -100 % en é te r d e pe tró le o , se g u id o de M eO H al 0 -10 % en E tO A c) pa ra d a r el co m p u e s to 43 c (2,3 g).

E S I-M S : m /z 1381.4 [M H ]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 43 d

U na so lu c ió n de l co m p u e s to a n te rio r 43 c (1,3 g, im puro ) en M eC N (15 m l), a la qu e se a ñ a d ie ro n A cO H (80% en agua , 15 m l) y tr ie tils ila n o (4 ,8 m l, 30 ,22 m m ol), se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te la noche . La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El res iduo se pu rificó m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva d e fa se in ve rsa (fase es ta c io n a ria . X tim a te C 18, 5 pm , 150 x 25 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to a m ó n ico a cu o so 10 m M (A) - M eC N (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ) pa ra d a r una m ezc la de p ro d u c to s (260 mg) de l co m p u e s to 43 d y su an á logo d e sp ro te g id o con c ia n o e tilo . E S I-M S : m /z 838.2 [M H ]+ y 784.2 [M H ]+ (co m p u e s to d e sp ro te g id o de c ia no e tilo ).

P aso 3: P rep a ra c ió n del C o m p u e s to 43 e

S e d iso lv ió un a m ezc la del co m p u e s to 43 d y su a n á logo d e sp ro te g id o con c ia n o e tilo (400 m g, - 0 ,49 m m ol) se d iso lv ió en p ir id in a /D C M (1:1, rnl), seg u ido de la a d ic ió n de Et3N (403 m g, 3 ,98 m m ol), 4 -n itro fe n o l (346 mg, 2 ,49 m m ol) y ta m ic e s m o le cu la re s d e 4 Á a c tiva do s . La so luc ió n resu ltan te se e n frió a -78 ° C y se ag itó d u ra n te 1 h en una a tm ó s fe ra ine rte . A es to , se añ a d ió un a so luc ió n de c lo ro su lfa to d e 4 -n itro fe n ilo (592 mg, 2 ,49 m m ol) en D C M (5 ml), se ca d a en ta m ic e s m o le cu la re s d e 4 Á a c tiva d o s (1 h) a n tes de su uso . La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó a -78 ° C d u ra n te 2 h, d e sp u é s de lo cua l se ca le n tó a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se ag itó d u ra n te 1,5 h ad ic io n a le s . El so lve n te se e lim in ó a p re s ió n reduc ida . S e a ñ ad ie ro n a g ua y ace ta to d e e tilo , la fase a cu o sa se se p a ró y se e x tra jo con ace ta to de e tilo . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SÜ4 an h id ro y se c o n c e n ta ró n a p res ión red uc ida . La pu rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : E tO A c al 0 -100 % en é te r de p e tró le o , se g u id o de M eO H al 0 -10 % en E tO A c) pa ra d a r el co m p u e s to 43 e im p u ro qu e se usó ta l cua l sin n ing una pu rifica c ió n a d ic io na l. E S I-M S : m /z 899.3 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ió n del C o m p u e s to 43 f

S e añ ad ió te rc -b u tila m in a (200 pl, 1 ,88 m m ol) a un a so luc ió n de l co m p u e s to 43 e (100 m g, im puro ) en e ta no l (1 m l). La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida y el p ro du c to b ru to se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : A g e la D u rashe ll C 18, 5 pm , 150 x 25 m m , fa se m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico acu oso 10 m M (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e luc ió n ) pa ra d a r el co m p u e s to pu ro 43 f (7 m g). E S I-M S : m /z 846.2 [M H ]+.

P aso 5: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 20

S e ag itó el co m p u e s to 43 f (6 m g, 7 ,09 pm o l) en un a so lu c ió n de m e tilam in a al 33 % en e ta no l (1 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1 hora. La m e zc la de la reacc ión se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida y el res iduo se tr itu ró en M eC N pa ra d a r el c o m p u e s to 20 (2 mg, ren d im ien to : 33% ).1

1H N M R (600 M H z, DM SO -d6) ó ppm 8.37 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.29 (br s, 2H ), 6.53 (b r s, 2H ), 6.36 (dd, J= 9.7 , 5.4 Hz, 1H), 5.76 (d, J=9.1 Hz, 1H), 5.08 (td, J= 9.7 , 4.3 Hz, 1H), 4.73 (br d, J=5.1 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.16 -4.22 (m, 2H ), 4.15 (b r dd, J = 11.8, 2.1 Hz, 1H), 3.94 (d, J=4.1 Hz, 1H), 3.52 -3.57 (m, 1H), 3.50 (s, 3H ), 3.12 -3.19 (m , 1H), 2.44 -2.49 (m , 1H), 31P N M R (162 M H z, DM SO -d6) ó ppm 0.97 (s, 1 P), ES I-M S: m /z 672.3 [M H ]+.

E je m p lo 44

C o m p u e s to (*R ) 10 A

P aso 1: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 44a

S e c o e va p o ró e l co m p u e s to 6 g (95 m g, 0 ,117 m m o l) con una m ezc la de to lu e n o a n h id ro : a ce to n itn lo (1:1, v /v , 3 x 30 m l) y luego se d iso lv ió en T H F an h id ro (10 m l). S e añ ad ie ro n po lvo de ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á (0,3 g) y te tra zo l 0 ,45 M en C H ³CN (2,0 ml, 0 ,936 m m o l) y la m ezc la h e te ro g é n e a resu lta n te se bu rb u je ó con a rgón d u ra n te 4 m in . D e spu és de a g ita r e s ta m ezc la a T A d u ra n te 10 m in, se añ ad ió una so luc ió n de 2 -c ia n o e til N ,N -d iiso p ro p ilc lo ro fo s fo ra m id ita en C H ³CN (57 mg, 0 ,18 m m ol, en 3 ,0 ml de C H ³C N ) d u ra n te 30 m in a TA . D espués de a g ita r la reacc ión d u ra n te 1,5 ho ras, los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se lavaron con T H F (15 m l). El f iltra d o se usó d ire c ta m e n te en e l paso s ig u ie n te . S e añ ad ió u n a so luc ión de D D TT (119 m g, 0 ,585 m m o l d isu e lto s en 5 ml de p irid ina ). D e spués de a g ita r la m ezc la de la reacc ión a T A d u ra n te 30 m in , la m e zc la se d ilu yó con E tO A c (30 m l) y se lavó con N aHCO 3 a cu oso sa tu ra d o (1 x 20 m l) y s a lm u e ra (1 x 20 m l). La c a p a a cu o sa se v o lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 40 m l). Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se e va p o ra ro n ha s ta la se q ue da d , e l m a te ria l b ru to resu lta n te se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H en D C M : de l 0 al 15% , v /v ) pa ra g e n e ra r e l co m p u e s to 44 a (58 m g); E S I-M S : m /z 943 [M+H]+.

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to (*R ) 10 A , s a l d e s o d io

S e ag itó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 44 a (58 m g, 0 ,06 m m o l) en M e N H ² (33% en E tO H , 10 m l) a 40° C d u ra n te 2 h y 30 m in y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El só lido b ru to resu lta n te se lavó con DC M (15 m l) y el p re c ip ita d o se filtró y pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (co lum na : co lu m n a : S yne rg i 4 pm , H ydro RP, 250 m m x 4 ,6 m m , fa se m óvil: ta m p ó n A : 50 A ce ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en A G U A ; T a m p ó n B: a ce ta to de tr ie tila m o n io 50 mM en C H ³C N ; g ra d ie n te : 0 -40 % de B d u ra n te 30 m in , ca u d a l: 24 m l/m in ) p a ra p ro p o rc io n a r el c o m p u e s to (*R ) 10 A (15 ,9 m g) co m o una sa l de T E A A . La c o n ve rs ió n fina l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re una c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina c a tió n ica de in te rca m b io ió n ica de sod io ca tió n ica , pa ra p ro p o rc io n a r

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to (*R ) 10 A , s a l d e s o d io

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (5 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). S e añ ad ió a la res ina H ²S O ⁴ al 15% en a g u a d e s io n iza d a ; la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en ag ua d e s io n iz a d a y se lavó con H²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V [V o lu m e n de co lu m n a ]), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta pH ne u tro (pH de pape l). La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió u n a so luc ió n de N aO H al 15% en a g u a d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en ag ua (po r lo m enos 4 C V ), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta pH neutro . S e d iso lv ió e l co m p u e s to 16 (15 ,9 m g) en u n a ca n tid a d m ín im a de a g u a d e s io n iza d a , se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e lu yó con a g u a de s io n iza d a . Las fra cc io n e s a p ro p ia d a s se a g rup a ron (U V ) y se lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 10 A , s a l d e s o d io (15,1 m g).1

1H N M R (400 M H z, D²O ): 5 8.33 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.30 -6.42 (m , 2H ), 6.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.27 (s, 1H), 4.84 -4.98 (m, 1H), 4.60 -4.70 (m, 1H), 4.56 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.32 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.12 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.01-4.11 (m, 1H), 3.81 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H ), 3.55 (d, J = 11.6 Hz, 1H ); 31P N M R (162 M H z, D²O ): 5 54.07 (s, 1P); E S I-M S : m /z: 714.7 [M -1 ]-.

S e co e va p o ró el co m p u e s to 45 a (200 m g, 0 ,216 m m ol) con un a m ezc la d e to lu e n o an h id ro :M e C N (1 :1, v /v , 3 x 30 m l) y luego se d iso lv ió en T H F an h id ro (20 m l). S e a ñ a d ie ro n po lvo de ta m ice s m o le cu la re s d e 4 Á (0 ,8 g) y te tra zo l 0 ,45 M en M eC N (3 ,8 ml, 1,72 m m ol). La m ezc la h e te ro g é n e a resu ltan te se b u rbu jeó con a rg ón d u ra n te 4 m in . D e spu és de a g ita r e s ta m e zc la a T A d u ra n te 10 m in , se añ ad ió a e s ta so lu c ió n una so luc ió n d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra -( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (105 m g, 0 ,345 m m ol) en M eC N (3 m l) d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . D e spu és d e a g ita r la rea cc ió n d u ra n te 90 m in, se filtró y lu eg o se lavó con T H F (15 m l). La m ezc la resu ltan te (M S: m /z 1007 [M H]+) se usó d ire c ta m e n te en el paso s ig u ie n te . A e s to se añ ad ió yodo 0 ,5 M (en T H F :a g u a :P y 8 :1 :1 , v /v /v ) ha s ta q u e el co lo r pe rs is te . D e spu és de a g ita r a T A d u ra n te 30 m in, la m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con E tO A c (30 m l), el e xce so de yodo se inac tivó con Na2S2Ü3 acu oso sa tu ra do (ha s ta la d e co lo ra c ió n ). S e sep a ra ron las fases ; la fa se o rg á n ica se lavó con N aHCO 3 acu oso sa tu ra do (1 x 20 m l), NaC l acu oso sa tu ra do (1 x 20 m l). La fa se a cu o sa se vo lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 20 m l). La fa se o rg á n ic a co m b in a d a se eva p o ró has ta la se q ue da d , el m ateria l b ru to resu ltan te se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a u ltra rrá p id a so b re ge l de s ílice (0 -15 % de M eO H en D C M , v /v) pa ra d a r 45 b (135 m g). E S I-M S : m /z 1023 [M H]+.

P rep a ra c ió n del C o m p u e s to 45 c

S e som e tió al co m p u e s to 45 b (135 m g) a una so lu c ió n de m e tilam in a al 33 % en e ta no l (10 m l) a TA . D e spu és de a g ita r a 40 ° C d u ra n te 2 h, la m ezc la de la rea cc ió n se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El só lido b ru to resu ltan te se lavó con D C M (15 ml) y e l p re c ip itado se sep a ró p o r filtra c ió n pa ra d a r 45 c (98 mg) co m o un só lido . E S I-M S : m /z 796 [M H ]+.

P rep a ra c ió n d e la s a l d e s o d io d e l c o m p u e s to 17

S e som e tió al co m p u e s to 45 c (98 m g) a T F A acu oso al 80 % (4 m l) a 0 C. D e sp u é s de ag ita r d u ra n te 1 h a 0 C, la m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró al va c ío pa ra d a r el p ro du c to b ru to co m o un ace ite in co lo ro . El b ru to se pu rificó p o r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (co lum na : S yne rg i 4 gm , H yd ro RP, 250 m m x 30 m m , F ase m óvil: T a m p ó n A: A ce ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en A G U A ; T a m p ó n B: A ce ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en C H ³ CN, g ra d ie n te : 0 -40 % de B d u ra n te 30 m in , cauda l 24 m l/m in ) pa ra d a r el c o m p u e s to 17 (24 ,2 mg) co m o un a sal de T E A A . E S I-M S : m /z: 674 [M -1 ]-.

P re p a ra c ió n d e s a l d e s o d io

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (5 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego , a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en a g ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a un a co lu m n a con H ² S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V ), y luego con a g ua d e s io n iz a d a hasta q u e se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va so de p re c ip ita d o s , se añ ad ió una so luc ió n de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g ua po r lo m en os 4 C V), y luego con a g ua d e s io n iz a d a has ta qu e se vo lv ió neu tra . La sal de T E A A del c o m p u e s to 17 (1:1, v /v ) se d iso lv ió en una ca n tid a d m ín im a de a g ua d e s io n iz a d a y M eC N (1:1, v /v ), se añ ad ió a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e luyó con a g ua de s io n iza d a . Las fra c c io n e s a p ro p ia d a s se ju n ta ro n y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to 17, s a l d e s o d io (22 ,9 m g).

1H N M R (400 M H z, D ²O) ó ppm 8.31 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.15 -6.25 (m, 2H ), 5.45 -5.55 (m, 1H), 5.25 (d, J = 4.8 Hz, 0.5H ), 5.13 (d, J = 4.8 Hz, 0.5H ), 4.75 -4.90 (m , 1H), 4.65 (s, 1H), 4.35 -4.45 (m, 1H), 4.33 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 4.10 -4.25 (m , 2H ), 3.55 -3.70 (dd, J= 3.2 , 13.2 Hz, 1H), 3.38 (d, J= 12 Hz, 1H).

31P N M R (162 M H z, D ² O) ó -1.895 ppm (s, 1P), 19F N M R (379 M H z, D ² O) ó -196.91 ppm (p ico am p lio , 1F); E S I-M S : m /z: 658.5 [M -1 ]-.

E je m p lo 46

C o m p u e s to 18

C o m p u e s t o 18 , s a l d e s o d io

P rep a ra c ió n del C o m p u e s to 46 b

S e co e va p o ró el co m p u e s to 46 a (110 m g, 0 ,123 m m ol) con un a m ezc la de to lu e n o a n h id ro :a ce to n itr ilo (1:1, v /v , 3 x 30 ml) y lu eg o se d iso lv ió en T H F an h id ro (14 m l). A es to se a ñ a d ie ro n po lvo de ta m ic e s m o le cu la re s de 4Á (0 ,5 g) y te tra zo l 0 ,45 M en M eC N (2,1 ml, 0 ,989 m m ol). La m ezc la h e te ro g é n e a resu ltan te se b u rb u je ó con A r d u ra n te 4 m in. D e spu és de a g ita r es ta m ezc la a T A d u ra n te 10 m in, se añ ad ió un a so luc ió n d e 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (60 m g, 0 ,197 m m o l) en M eC N (3 ,0 m l) a m ás de 30 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . D e spu és de a g ita r d u ra n te 90 m in a TA , la m ezc la de la rea cc ió n se filtró y luego se lavó con T H F (15 m l). La m ezc la resu ltan te (M S: m /z 989 [M+H]+) se usó d ire c ta m e n te en el paso s ig u ie n te . A e s to se le añad ió yodo 0 ,5 M (en T H F :a g u a :P y 8 :1 :1 , v /v /v ) ha s ta q u e p e rs is te el co lo r. D e spu és de a g ita r a T A d u ra n te 30 m in, la m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con E tO A c (30 m l), el e xce so de yodo se inac tivó con N a ²S ²O ³ acu oso sa tu ra do (ha s ta la d e co lo ra c ió n ). S e se p a ra ro n las fases; la fase o rg á n ica se lavó con N a ²S ²O ³ acu oso sa tu ra do (ha s ta la d e co lo ra c ió n ). S e sep a ra ron las fa se s ; la fa se o rg á n ic a se lavó con N a H C O 3 a cu oso sa tu ra d o (1 x 20 m l), NaCI a cu o so sa tu ra d o (1 x 20 m l). La fa se a cu o sa se vo lv ió a e x tra e r con E tO A c (1 x 20 m l). La fa s e o rg á n ica co m b in a d a se e va p o ró ha s ta la seq ue da d , el m a te ria l b ru to resu ltan te se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (M eO H al 0 -15 % en d ic lo ro m e ta n o , v /v ) pa ra d a r el c o m p u e s to 46 b (77 m g). E S I-M S : m /z 1005.8 [M+H]+.

P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 46 c

S e so m e tió al co m p u e s to 46 b (77 m g) a una so luc ió n de m e tila m in a al 33% en e ta n o l (6 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te . D espués de a g ita r a 40° C d u ra n te 2 h, la m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El só lido b ru to resu lta n te se lavó con DCM (15 m l) y e l p re c ip ita d o se sep a ró p o r f iltra c ió n p a ra d a r e l c o m p u e s to 46 c (43 m g). E S I-M S : m /z 778 [M+H]+.

P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 18, s a l d e s o d io

S e so m e tió al co m p u e s to 46 c (43 m g) a T F A a cu oso al 80 % (2 m l). D espués de a g ita r a T A d u ra n te 1 h, la m e zc la de la reacc ión se co n ce n tró al v a c ío pa ra d a r un res iduo co m o un ace ite inco lo ro . El res iduo se pu rificó po r H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (co lum na : S yne rg i 4 gm , H yd ro RP, 250 m m x 30 m m , Fase m óvil: T a m p ó n A: ace ta to de tr ie tila m o n io 50 m M en agua ; T a m p ó n B: a ce ta to de tr ie tila m o n io 50 mM en C H ³CN , g ra d ie n te : 0 -40 % de B d u ra n te 30 m in , ca u d a l 24 m l/m in ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 18 (6 ,4 m g) co m o u n a sal de TE A A .

S e añ ad ió D o w ex 50W x8 , 200 -400 (5 ml, fo rm a H) a un va so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, a la res ina se le añ ad ió H ²S O ⁴ al 15% en ag ua d e s io n iza d a , la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una c o lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en agua d e s io n iz a d a y se lavó con H ²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a hasta que se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió u n a so luc ión de N aO H al 15% en agua d e s io n iz a d a y la m e zc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 5 m in y se d e ca n tó (1x). La re s in a se tra n s fir ió a la c o lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en a g u a (po r lo m en os 4 C V), y luego con a g u a d e s io n iz a d a ha s ta q u e se v o lv ió neu tra . La sa l de T E A A de l c o m p u e s to 18 (6,4 m g) se d iso lv ió en la ca n tid a d m ín im a de a g u a d e s io n iz a d a y M eC N (1 :1, v /v ), añ a d id o a la pa rte s u p e rio r de la c o lu m n a y se e luyó con a g u a d e s io n iza d a . Las fra cc io n e s ap ro p ia d a s se ag rup a ron y lio filiza ro n pa ra d a r e l c o m p u e s to 18, s a l d e s o d io (5 ,9 mg).1

1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 7.93 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.32 (dd, J= 2.8 ; 4.8 Hz, 1H), 6.05 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.92-6.01 (m, 1H), 5.15 -5.25 (m, 1H), 4.61 (d, J= 12 Hz, 1H), 4.30 -4.36 (m, 1H), 3.90 -4.20 (m, 3H), 3.50 -3.58 (dd, J= 3.2 , 13.2 Hz, 1H), 3.20 -3.33 (dd, J=2 , 13.2 Hz, 1H), 2.60 -2.75 (m, 2H ). 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 ppm -0.838 (s, 1 P); E S I-M S : m /z: 656.8 [M-1]+.

E je m p lo 47

C o m p u e s to (*R ) 21 A

Compuesto (*R) 21A, sal de sodio P aso 1: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 b

S e añ ad ió g o ta a g o ta c lo ro tr im e tils ila n o (2 ,08 m l, 16 ,38 m m ol) a u n a so luc ió n de l co m p u e s to 47 a [C A S 174171 -97 -2 ] (1 g, 3 ,28 m m o l) en p ir id ina se ca (60 m l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 0° C d u ra n te 2 h, d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta c lo ru ro de be n zo ílo (1 ,89 m l, 16 ,38 m m ol). S e c o n tin u ó a g ita n d o a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 3 h. La so luc ió n de la reacc ión se en frió a 0° C, se añ ad ió a g u a (30 m l) se g u id o de la ad ic ió n de am o n ía co a cu oso (30 m l de so luc ió n al 25% ), se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te 90 m in a 0° C. La so luc ió n de la reacc ión se e x tra jo con E tO A c, las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SÜ4, se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . La pu rifica c ión se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 50 -100 % en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 47 b co m o un só lid o b lanco (1,1 g, ren d im ien to : 82% ).

1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.17 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.05 (d, 7.3 Hz, 2H ), 7.61 -7.68 (m, 1H), 7.46 -7.59 (m , 2H ), 5.02 -5.09 (m, 1H), 4.90-5.01 (m, 1H), 4.83 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.59 (dd, J= 7.2 , 3.9 Hz, 1H), 3.53 (b r t, J= 5.0 Hz, 2H ), 2.17-2.41 (m, 3H ), 1.50 (s, 3H ), 1.25 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 410.2 [M+H]+.

P aso 2. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 c

S e a ñ ad ie ro n D M A P (448 m g, 3 ,66 m m o l) y c lo ru ro de to s ilo (2 ,79 g, 14 ,65 m m o l) a un a so luc ió n de l co m p u e s to 47 b (3 g, 7 ,32 m m o l) y Et3N (3 ,07 ml, 21 ,98 m m ol) en DC M (6 m l) ba jo e n fria m ie n to con h ie lo . La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 4 h. La m ezc la se in ac tivó con a g u a y se e x tra jo con DCM . La c a p a o rg á n ica se lavó con sa lm ue ra , se secó con Na2SO4 a n h id ro y se e va p o ró a p res ión red uc ida pa ra d a r el p ro d u c to tos ilad o . El p ro d u c to b ru to se d iso lv ió en D M F (15 m l) seg u ido de la ad ic ió n de a z id a de sod io (1 ,88 g, 28,91 m m ol), la m ezc la de la rea cc ió n resu lta n te se ag itó a 35° C d u ra n te 16 h. Luego, la m e zc la de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te , se d ilu yó con so lu c ió n a cu o sa sa tu ra d a de Na2CO3 y se e x tra jo con E tO A c. La cap a o rg á n ic a se separó , se lavó con sa lm ue ra , se secó con Na2SO4 a n h id ro y se e va p o ró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : E tO A c al 0 -25 % en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r e l co m p u e s to 47 c co m o un só lido am a rillo (2,1 g, ren d im ien to : 61% ).

1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 1.25 (s, 3H ), 1.51 (s, 3H ), 2.24 -2.48 (m, 3H ), 3.53 (dd, J= 12.3 , 6.3 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 12.3, 5.3 Hz, 1H), 4.02 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 4.58 (dd, J= 7.2 , 4.6 Hz, 1H), 4.93 -5.03 (m, 1H), 5.03-5.11 (m , 1H), 7.51 -7.59 (m , 2H ), 7.60-7.71 (m , 1H), 8.04 (d, J= 7.5 Hz, 2H ), 8.64 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 11.19 (b r s, 1H), E S I-M S : m /z 435.1 [M+H]+.

P aso 3. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 d

S e añ ad ió T F A (100 m l, 75 % en agua ) a una so luc ió n de l co m p u e s to 47 c (3 ,47 g, 7 ,99 m m o l) en DC M (20 m l), la m ezc la resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 1 h. La reacc ión se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida , e l res iduo o b te n id o se d iso lv ió en E tO A c y se lavó con K ²C O ³ a cu oso sa tu ra do , la ca p a a cu o sa se sep a ró y se e x tra jo con E tO A c. Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SO4 a n h id ro y se e va p o ra ro n al v a c ío pa ra d a r el co m p u e s to 47 d co m o un só lido b lan co (3 ,25 g, bru to ) q u e se usó ta l cua l en e l paso s ig u ie n te .

E S I-M S : m /z 395.0 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 e

S e d iso lv ió e l c o m p u e s to 47 d (3 ,25 g) en D M F (22 m l), se g u id o de la ad ic ió n de im idazo l (1 ,57 g, 23 ,0 m m o l) y T B S C l (1 ,39 g, 9 ,20 m m ol). S e rea lizó una s e g u n d a reacc ión en pa ra le lo a la m ism a esca la . A m b a s m ezc las de la reacc ión se ag ita ron a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te la noche , d e sp u é s de lo cua l se a ñ ad ie ro n E tO A c y sa lm ue ra . La fa se o rg á n ic a se sep a ró y la ca p a de a g u a se e x tra jo con E tO A c. Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SO4 an h id ro , se filtra ro n y se e v a p o ra ro n a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r la m ezc la re g io isó m e ra bru ta . La sep a ra c ión se rea lizó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : P h e n o m e n e x S yne rg i, 10 pm M ax-R P , 250 x 50 m m , fa se m óvil: A G U A (A) - M eC N (B); e luc ió n en g ra d ie n te ) p a ra d a r el co m p u e s to 47 e (2,0 g, ren d im ien to : 24% ) co m o p r im e r isó m ero en e lu ir y e l re g io isó m e ro p ro te g id o con 3 '-T B S (47ea , e s tru c tu ra no m ostrad a , 2 ,5 g, ren d im ien to : 31 % ) co m o se g u n d o isó m ero en e lu ir.

1H N M R (400 M H z, D M S O -d6 ) 5 ppm 11.13 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.04 (b r d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.61 -7.68 (m, 1H), 7.51 -7.58 (m, 2H ), 4.91-5.01 (m, 1H), 4.78 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.52 (dd, J= 8.5 , 5.5 Hz, 1H), 3.79 ­ 3.86 (m, 1H), 3.54 -3.64 (m, 2H ), 2.34 (dt, 0.7 -12.6 , 8.5 Hz, 1H), 2.16 -2.28 (m, 1H), 1.94 -2.04 (m, 1H), 0.64 (s, 9H ), -0.16 (s, 3H ), -0.38 (s, 3H );

E S I-M S : m /z 509.2 [M+H]+.

Paso 5: Preparación del Compuesto 47f

S e añ ad ie ro n D M TrC I (394 m g, 1,16 m m ol), A gN Ü 3 (492 mg, 2 ,90 m m o l) y 2 ,4 ,6 -co lid in a (351 mg, 2 ,90 m m o l) a una so luc ió n de l co m p u e s to 47 e (300 m g, 0 ,59 m m o l) en DC M (6 m l), la m ezc la resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te la n o che . L a reacc ión se in ac tivó con sa lm ue ra , la ca p a de ag ua se sep a ró y se e x tra jo con D C M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SÜ4 an h id ro , se filtra ro n y se e va p o ra ro n al vac ío . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ió n en g ra d ie n te : E tO A c al 0-100% en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r el co m p u e s to 47 f (430 mg, ren d im ien to : 90% ) co m o un só lido am arillo .

1H N M R (400 M H z, D M S O -Je) 5 ppm -0.68 (s, 3H ), -0.22 (s, 3H ), 0.67 -0.75 (m , 9H ), 0.80 -0.89 (m , 1H), 1.54 -1.66 (m, 1H), 2.00 -2.08 (m, 1H), 2.29 -2.39 (m, 1H), 3.21 (dd, J = 12.0, 5.9 Hz, 1H), 0.00 (b r dd, J= 3.9 , 1.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H ), 3.75 (s, 3H ), 4.58 (dd, J= 9.3 , 3.9 Hz, 1H), 5.37 (q, J= 9.3 Hz, 1H), 6.83 -6.96 (m, 4H ), 7.20 -7.27 (m, 1H), 7.28 -7.35 (m, 2H ), 7.36 -7.44 (m , 4H ), 7.50 -7.60 (m, 4H ), 7.61 -7.67 (m , 1H), 8.05 (b r d, J= 7.6 Hz, 2H ), 8.62 -8.69 (m , 1H), 8.71 (s, 1H), 11.12 (br s, 1H);

E S I-M S : m /z 811.3 [M+H]+.

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 g

S e ag itó una su sp e n s ió n de l c o m p u e s to 47 f (3 ,23 g, 3 ,98 m m o l) en E tO A c (150 m l) en H ² (15 ps i) a 30° C d u ra n te la no che en p re se n c ia de P d/C (10% so b re ca rb ón , 3 ,0 g). El c a ta liz a d o r se e lim in ó p o r filtra c ió n sob re tie rra de d ia to m e a s , e l f iltra d o se co n ce n tró a p re s ió n re d u c id a pa ra d a r la am in a de l c o m p u e s to qu e se usó in m e d ia ta m e n te co m o ta l en el paso s ig u ie n te . El p ro d u c to b ru to se d iso lv ió en DC M (110 m l), seg u ido de la ad ic ión de 4 -n itro fe n o l (3 ,53 g, 25 ,38 m m ol), Et3N (2 ,12 ml, 15 ,23 m m o l) y ta m ice s m o le cu la re s ac tiva do s . La m ezc la resu lta n te se en frió a -78° C ba jo N ² d e sp u é s de lo cua l se a ñ a d ió g o ta a g o ta c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (3 ,62 g, 15 ,23 m m o l) en DC M (20 m l), la so luc ió n de la reacc ión se d e jó c a le n ta r a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se ag itó d u ra n te la noche . La m ezc la se d ilu yó con DC M y se filtró a tra vé s de u n a a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s . El f iltra d o se lavó con N a H C O ³ acu oso sa tu ra do , se secó con Na2SO4 y se co n ce n tró . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ian te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -50 % en é te r de pe tró le o ) pa ra d a r el co m p u e s to 47 g (2,6 g, ren d im ien to : 67% ).

1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm -0.62 (s, 3H ), -0.30 (s, 3H ), 0.65 (s, 9H ), 1.92-2.11 (m, 2H ), 2.44 (b r dd, J= 9.9 , 3.5 Hz, 1H), 2.85-3.01 (m, 1H), 3.04 -3.15 (m, 1H), 3.45 (b r d, J= 3.9 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H ), 3.72 (s, 3H ), 4.68 (b r dd, J= 9.5 , 3.9 Hz, 1H), 5.47 (q, J= 9.5 Hz, 1H), 6.87 (s, 3H ), 7.19 -7.25 (m, 1H), 7.26 -7.34 (m, 2H ), 7.35 -7.48 (m , 5H ), 7.51 -7.60 (m, 3H ), 7.62 -7.70 (m , 1H), 8.05 (b r d, J= 7.3 Hz, 2H ), 8.33 (d, J= 9.0 Hz, 2H ), 8.67 (d, J=7.1 Hz, 1H), 8.80 (b r t, J= 5.7 Hz, 1H), 11.15 (s, 1H ); E S I-M S : m /z 986.6 [M+H]+.

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 h

S e añ ad ie ro n ta m ice s m o lecu la re s ac tiva do s a u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 47 g (1 g, 1,07 m m o l) y 5 '-O -(4 ,4 '-D im e to x itr it il) -N 2 -is o b u tir il-3 '-O -m e til-D -g u a n o s in a [C A S 103285 -33 -2 ] (717 m g, 1,01 m m o l) en T H F seco (25 m l), la m ezc la resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h ba jo n itrógeno . Luego, se añ ad ió u n a so luc ión de D M A P (619 mg, 5 ,07 m m o l) en T H F (10 m l), se ca d a p re v ia m e n te con ag itac ión d u ra n te 2 h en p re se n c ia de ta m ic e s m o le cu la re s ac tiva do s , pa ra in ic ia r la reacc ión . La m e zc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó a 50° C d u ra n te la noche . Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y el f iltra d o se lavó con N aH C O 3 a cu o so sa tu ra do . La fa s e a cu o sa se e x tra jo con DCM . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SO4, se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 47 h (875 m g, ren d im ien to : 54% ). E S I-M S : m /z 759.2 [M 2H ]/2+.

P aso 8. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 47 i

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 47 h (875 m g, 0 ,56 m m o l) en DC M (40 m l) con D C A (0 ,19 m l, 2 ,25 m m o l) en p re se n c ia de ag ua (0 ,05 m l, 2,81 m m o l) d u ra n te 1 h. La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0 ,23 m l, 2,81 m m o l) en m e tan o l (2 m l), se g u id o de co n ce n tra c ió n a p res ión reduc ida . El res iduo resu lta n te se d iso lv ió en DC M , la so luc ió n o b te n id a se lavó con a g u a y sa lm ue ra , se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de sílice (e luc ió n en g ra d ie n te : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 47 i co m o un só lid o b lan co (465 mg, ren d im ien to : 91% ).1

1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 12.11 (b r s, 1H), 11.58 (b r s, 1H), 11.09 (b r s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.44 (b r s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.3 Hz, 2H ), 7.59 -7.70 (m, 1H), 7.47 -7.58 (m, 2H ), 6.10 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 5.41 (dd, J= 6.5 , 5.3 Hz, 1H), 5.29 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.91 (q, J= 9.3 Hz, 1H), 4.54 (b r d, J= 3.7 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 8.7 , 5.5 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 4.9 , 2.4 Hz, 1H), 4.15 (q, J= 3.3 Hz, 1H), 3.76 (b r s, 1H), 3.54 -3.73 (m, 2H ), 3.49 (s, 3H ), 2.97 (dd, J = 13.4, 7.7 Hz, 1H), 2.81 -2.90 (m, 1H), 2.75 (spt, J= 6.8 Hz, 1H), 2.18 -2.29 (m, 1H), 2.02 -2.15 (m, 1H), 1.74 -1.87 (m, 1H), 1.11 (d, J= 6.5 Hz, 3H ), 1.08 (d, J= 6.9 Hz, 3H ), 0.63 (s, 9H ), -0.17 (s, 3H ), -0.41 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 912.7 [M+H]+.

P aso 9: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 47 j

S e tra tó un a so luc ió n de l co m p u e s to 47 i (280 m g, 0,31 m m o l) y 1H -te tra zo l (3 ,58 ml de un 3 -4 % en M eC N seca do p re v ia m e n te en ta m ic e s m o le cu la re s de3 Á a c tiva do s ) en M eC N /T H F (1:1, 44 m l, seca do p re v ia m e n te en ta m ic e s m o le cu la re s de 3 Á a c tiva do s ) con ta m ice s m o le cu la re s d e 3 Á a c tiva d o s d u ra n te 2 h en N ² , d e sp u é s de lo cua l se s añ ad ió de un a v e z 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (97 pl, 0,31 m m ol). La m ezc la de la rea cc ió n resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 3 h. S e añ ad ió P A D S (0 ,19 g, 0,61 m m o l) y se co n tin u ó a g itan do d u ra n te un a ho ra m ás. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r filtra c ió n y se la va ro n con d ic lo ro m e ta n o . Los f iltra d o s c o m b in a d o s se la va ro n con N aH C Ü 3 acu oso sa tu ra d o y sa lm ue ra , se se ca ro n con M gSÜ 4, se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a d e s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -10% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 47 j (91 m g, ren d im ien to : 26% ) com o un d ia s te re o isó m e ro in d iv idu a l.

31P N M R (162 M H z, DM SO -d6) ó ppm 66.65 (s, 1 P);

E S I-M S : m /z 1043.7 [M+H]+.

P aso 10: P rep a ra c ión del C o m p u e s to (*R ) 21 A , s a l d e s o d io

S e ag itó el co m p u e s to 47 j (86 mg, 0 ,077 m m ol) en una so luc ió n de m e tilam in a al 33 % en e ta no l (4 m l) a 45° C has ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 1 h), d e sp u é s de lo cua l la so luc ió n de la rea cc ió n se en frió a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El res iduo se d iso lv ió en p ir id in a (4 m l), seg u ido de la a d ic ió n de Et3N (320 pl, 2 ,32 m m o l) y tr ih id ro flu o ru ro d e tr ie tila m in a (200 pl, 1 ,16 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 45° C d u ra n te 18 h. S e añ ad ió iso p ro p o x itr im e tils ila n o (0 ,82 m l, 4 ,65 m m ol) y se co n tin u ó ag ita n d o a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 18 h. El res iduo ob te n id o d e s p u é s de la c o n ce n tra c ió n a p re s ió n red uc ida se tr itu ró en a ce to n itr ilo an h id ro , e l p re c ip ita d o ob te n id o se pu rificó a d ic io n a lm e n te m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva d e fa se in ve rsa (fase es ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 10 pm , 150x50 m m , fase m óvil: b ica rb o n a to a m ó n ico acu oso al 0 ,25 % (A) -M eO H (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 21 A com o un d ia s te re o isó m e ro in d iv idu a l. La co n ve rs ió n fina l en la sal d e so d io se rea lizó m e d ia n te la e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa so b re un a co lu m n a c o m p a c ta d a con un a res ina de in te rca m b io ión ico de sod io ca tió n ica qu e p ro p o rc io n ó el c o m p u e s to (*R ) 21 A , s a l d e s o d io co m o un só lido e sp o n jo so b lan co (27 m g, ren d im ien to : 46% ).

1H N M R (400 M H z, D ² O) ó ppm 8.36 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 6.10 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.68 (dd, J= 8.3 , 4.3 Hz, 1 H), 4.83 -4.95 (m , 2H ), 4.67 -4.72 (m , 1H), 4.61 (m, J= 2.0 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.27 (ddd, J = 11.8, 6.5 , 2.4 Hz, 1H), 4.18 (ddd, J= 12.2 , 4.5 , 1.6 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H ), 3.36 (br d, J = 4.8 Hz, 2H ), 2.55 -2.65 (m, 2H ), 1.92 -2.03 (m, 1H);

31P N M R (162 M H z, D ² O) ó ppm 54.55 (s, 1 P);

E S I-M S : m /z 702.4 [M H ]+.

E je m p lo 48

C o m p u e s to (*R ) 43 A

S e añ ad ió T IP D S C I² (765 |jl, 2 ,39 m m ol) a una so luc ió n de l co m p u e s to 48 a [C A S 1834500 -50 -3 ] (0 ,6 g, 1,71 m m ol) en p ir id in a (25 m l). La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó d u ra n te 2 h, d e s p u é s de lo cua l se ve rtió en N aHCO 3 acu oso sa tu ra do y se ex tra jo con E tO A c. Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SO4 an h id ro y se co n ce n tra ro n a p re s ió n red uc ida . El p ro du c to res idua l se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : E tO A c al 0 -100 % en é te r de pe tró le o se g u id o de M eO H al 0 -10% en E tO A c) pa ra d a r el co m p u e s to 48 b com o un só lido b lan co (550 mg, ren d im ien to : 54% ).1

1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.06 (br s, 1H), 11.56 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 4.85 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 4.51 -4.64 (m , 1H), 4.29 (q, J= 12 Hz, 1H), 4.14 -4.23 (m, 1H), 3.90 (dd, J = 1.5, 3.0 Hz, 1H), 3.76 (dd, J = 11.6, 8.1 Hz, 1H), 2.78 (spt, J = 6.7 Hz, 1H), 2.10 -2.29 (m , 2H ), 1.42 -1.58 (m, 1H), 1.13 (d, J= 7.0 Hz, 6H ), 0.99 -1.10 (m, 28 H ); ESI-M S: m /z 594.4 [M H ]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 48 c

S e a ñ ad ie ro n ta m ic e s m o le cu la re s a c tiva d o s a una so luc ió n de l co m p u e s to 48 b (350 m g, 0 ,59 m m o l) y su lfa m a to 17a (745 m g, 0 ,85 m m ol) en T H F seco (20 m l), la m e zc la re su lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h ba jo n itró ge no . Luego, se añ a d ió pa ra in ic ia r la reacc ión una so lu c ió n de D M A P (347 m g, 2 ,84 m m o l) en T H F (5 m l), se ca d a p re v ia m e n te m e d ia n te a g itac ión en p re se n c ia de ta m ic e s m o le cu la re s a c tiva d o s . La m e zc la de la rea cc ió n se ag itó a 50° C d u ra n te la noche . Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y e l f iltra d o se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra do . La fa se a cu o sa se e x tra jo con DC M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SO4, se filtra ro n y se c o n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . El c o m p u e s to 48 c (401 mg, ren d im ien to : 51 % ) se o b tu vo co m o un só lido am a rillo d e sp u é s de dos rondas de p u rifica c ió n po r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (ron da 1: g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en DC M , ron da 2: E tO A c al 0 -100 % en é te r de pe tró le o se g u id o de M eO H al 0 -10 % en E tO Ac).

1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.00 (s, 1H), 11.44 (s, 1H), 11.25 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.20 (b r t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 7.3 Hz, 2H ), 8.00 (s, 1H), 7.62 -7.70 (m, 1H), 7.55 (t, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.46 (d, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.28 -7.39 (m, 6H ), 7.18 -7.26 (m, 1H), 6.84 -6.92 (m , 4H ), 6.30 (dd, J= 17.9 , 3.0 Hz, 1H), 4.98 -5.04 (m, 1H), 4.84 -4.95 (m, 1H), 4.56 -4.72 (m, 1H), 4.55 (b r s, 1H), 4.39 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 3.73 -3.93 (m, 3H ), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H ), 2.88 -3.00 (m , 1H), 2.73 (spt, J= 6.8 Hz, 1H), 2.57 -2.68 (m, 1H), 2.20 -2.34 (m, 2H ), 1.54 -1.66 (m, 1H), 1.09 (d, J= 6.8 Hz, 6H ), 0.86 -1.07 (m, 28H ); E S I-M S : m /z 1329.8 [M 2H ]/2+

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 48 d

S e tra tó u n a so luc ión de l co m p u e s to 48 c (1,3 g, 0 ,98 m m ol) en M eO H seco (55 m l, seca do so b re ta m ice s m o lecu la re s ) con HC l (0 ,19 ml de 2 M en Et²O, 13,7 m m o l) d u ra n te 4 h. La m ezc la de la reacc ión se inactivó m ed ia n te la ad ic ió n de N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o se g u id o de ex tra cc ió n con DC M . La fa s e o rg á n ic a se secó con M gSO 4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 48 d (670 mg, ren d im ien to : 65% ).

1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 1.01 -1.08 (m, 28H ), 1.12 (d, J = 7 = 6.8 Hz, 3H ), 1.67 -1.75 (m, 1H), 2.20 ­ 2.32 (m , 1H), 2.43 -2.54 (m, 1H), 2.62 (b r d, J= 14.3 Hz, 1H), 2.79 (spt, J= 6.9 Hz, 1H), 2.85 -2.96 (m, 1H), 3.51 (s, 3H ), 3.52 -3.57 (m , 2H ), 3.75 -3.83 (m, 1H), 4.39 -4.48 (m, 1H), 4.50 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.02 (q, J= 9.6 Hz, 1H), 5.09 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 5.25 (dd, J= 9.8 , 4.1 Hz, 1H), 5.52 (ddd, J= 52.4 , 4.4 , 2.6 Hz, 1H), 5.68 (b r d, J= 5.9 Hz, 1H), 6.30 (dd, J = 18.5, 2.6 Hz, 1H), 7.56 (t, J=7.1 Hz, 2H ), 7.61 -7.69 (m, 1H), 8.02 -8.07 (m, 2H ), 8.11 (b r s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 11.22 (b r s, 1H), 11.33 (b r s, 1H), 12.09 (b r s, 1H); E S I-M S : m /z 1060.7 [M+H]+

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 48 e

S e tra tó una so luc ión de l c o m p u e s to 48 d (640 m g, 0 ,60 m m ol) y 1H -te tra zo l (7 ,05 ml de un 3 -4 % en M eC N se ca d o en ta m ice s m o lecu la re s de 3Á an tes de su uso ) en T H F seco (47 ,5 ml, se ca d o en ta m ice s m o lecu la re s de 3 Á ) an tes de su uso ) con ta m ic e s m o lecu la re s de 3 Á ac tiva d o s d u ra n te 2 h en N ² d e sp u é s d e lo cua l se añ ad ió en un a po rc ió n 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (200 mg, 0 ,66 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te 3 h. Se añ ad ió u n a ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (73 mg, 0 ,24 m m ol) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . S e añ ad ie ro n p ir id in a (19 ,5 m l) y P A D S (456 m g, 1,53 m m ol), la m e zc la de la reacc ión se ag itó d u ra n te un a ho ra m ás. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con sa lm u e ra y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro d u c to bru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -15 % en D C M ) d a n d o el co m p u e s to 48 e (250 m g, ren d im ien to : 35% ). E S I-M S : m /z 1138 ,7 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to (*R ) 43 A , s a l d e s o d io

S e ag itó e l c o m p u e s to 48 e (250 m g, 0,21 m m ol) en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te hasta la c o n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 4 h), d e sp u é s de lo cua l la so luc ió n de la reacc ión se co n ce n tró a p res ión re d u c id a y se tr itu ró en M eC N . El p re c ip ita d o se d iso lv ió en u n a m ezc la de p ir id in a (1,7 m l) y Et3N (1 ,5 m l). S e añ ad ió tr ih id ro flu o ru ro de tr ie t ila m in a (141 pl, 0 ,84 m m ol), la m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (no ta : se o b se rvó p re c ip itac ió n de l p ro d u c to de sea do ). S e añ ad ió is o p ro p o x itr im e tils ila n o (596 pl, 3 ,36 m m o l) y se ag itó d u ra n te la noche . El res iduo , o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p re s ió n reduc ida , se tr itu ró en M eC N , e l p re c ip ita d o o b te n id o se pu rificó a d ic io n a lm e n te m ed ian te H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase es ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 10 pm , 150x50 m m , fa se m óvil: b ica rb o n a to a m ó n ico al 0 ,25% (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) al c o m p u e s to (*R ) 43 A , s a l d e a m o n io co m o un ún ico e p ím e ro P. La co n ve rs ió n fina l en la sal de sod io se rea lizó p o r e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re una c o lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io ión ico de sod io c a tió n ico que p ro p o rc io n ó el c o m p u e s to (*R ) 43 A , s a l d e s o d io co m o un só lido e sp o n jo so c a tió n ico (56 m g, ren d im ien to : 37 ,5% ). 1H N M R (600 M H z, DM SO -d6, 61° C .) 5 ppm 10.24 (b r s, 1H), 8.34 (b r s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.26 (s, 3H ), 6.34 (dd, J= 18.6 , 2.2 Hz, 1H), 6.23 (b r s, 2H ), 5.69 (d, J = 51.8 Hz, 1H), 5.44 -5.54 (m, 1H), 5.39 (dddd, J = 17.3, 9.8, 7.2, 4.7 Hz, 1H), 5.18 (b r s, 1H), 5.06 (q, J= 9.8 Hz, 1H), 4.30 -4.38 (m, 1H), 4.29 (brs, 1H), 3.99 -4.10 (m, 1H), 3.86 (dt, J = 11.0, 4.0 Hz, 1H), 3.63 (dd, J = 13.2, 4.5 Hz, 1H), 3.36 (dd, J = 13.6, 3.7 Hz, 1H), 2.45 (dt, J = 13.5, 10.2 Hz, 1H), 2.20 (m, J= 7 = 9.1 , 4.5 Hz, 1H), 1.80-1.91 (m, 1H); 31P N M R (162 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 51.63 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 690.1 [M+H]+.

E je m p lo 49

C o m p u e s to 24

Paso 1: Preparación del Compuesto 49a

A u n a so luc ió n de N 2 -iso b u tir il-3 '-O -m e til-g u a n o s in a 3 j (50 g, 136 m m o l) en p ir id in a a n h id ra (500 m l), se le a ñ a d ie ro n im idazo l (18 ,52 g, 272 m m ol), tr ife n ilfo s fin a (53,51 g, 204 m m o l) y yo d o (51 ,78 g, 204 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó ba jo N2 a 0~5° C d u ra n te 3 h. Luego, la so luc ió n se e va p o ró ha s ta la seq ue da d y el res iduo se d iso lv ió en DC M (500 m l). S e añ ad ió N aH C O 3 a cu oso sa tu ra d o y la m ezc la se ag itó d u ra n te 30 m in . El p re c ip ita d o se filtró y se secó al v a c ío pa ra d a r el co m p u e s to 49 a co m o un po lvo b lan co (56 g, ren d im ien to : 86% ).

1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 11.94 (h r s, 2H ), 8.24 (s, 1H), 5.82 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 5.69 (h r s, 1H), 4.84 (dd, J= 5.0 , 6.5 Hz, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.83 (dd, 3.0, 4.5 Hz, 1H), 3.58 (dd, J= 7.0 , 10.5 Hz, 1H), 3.47 (dd, J=7.0 , 10.5 Hz, 1H), 3.46 (s, 3H ), 2.74 (spt, J= 6.5 Hz, 1H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 477.8 [M+H]+.

P aso 2: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 3 k

S e añ ad ió az ida de sod io (22 ,48 g, 345 ,8 m m ol) a u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 49a (55 g, 115 ,2 m m o l) en D M F a n h id ra (100 m l) y se ag itó a 85° C d u ra n te 4 h en N ². Luego, la so lu c ió n de la reacc ión se en frió a 25° C, se v e rtió en a g u a (2 l) y se ag itó d u ra n te 30 m in. El p re c ip ita d o se recog ió po r filtra c ió n y se secó pa ra d a r e l co m p u e s to 3 k (41 g, ren d im ien to : 91% ).

1H N M R (400 M H z, D M S O -ds) 5 ppm 12.09 (b r s, 1H), 11.63 (b r s, 1H), 8.26 (s, 1H), 5.84 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.68 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.14 (m , 1H), 3.84 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 3.69 (dd, J= 8.0 , 13.0 Hz, 1H), 3.57 (dd, J= 4.0 , 13.0 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H ), 2.77 (spt, J= 7.0 Hz, 1H), 1.13 (d, J= 7.0 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 393.0 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 49 b

S e ag itó u n a m ezc la de l c o m p u e s to 3 k (40 ,00 g, 101 ,94 m m ol), im idazo l (10,41 g, 152 ,9 m m o l) y T B S C l (18 ,44 g, 122 ,4 m m o l) en D M F a n h id ro (100 m l) a 25° C d u ra n te 17 h en N ². La so luc ió n de la reacc ión se eva po ró ha s ta la seq ue da d a 55° C ba jo p res ión reduc ida . El res iduo se d iso lv ió en E tO A c y se lavó con agua . La fase o rg á n ica se secó con Na2SO4, se filtró y el f iltra d o se eva po ró . El p ro d u c to b ru to se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 20 -40 % en he p tan o ) pa ra d a r el c o m p u e s to 49 b (45 g, ren d im ien to : 87% ).

1H N M R (500 M H z, D M S O -d6 ) 5 ppm 12.08 (b r s, 1H), 11.59 (b r s, 1H), 8.29 (s, 1H), 5.87 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 4.86 (dd, J= 4.5 , 7.5 Hz, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.84 -3.79 (m, 2H ), 3.56 (dd, J= 4.5 , 13.0 Hz, 1H), 3.45 (s, 3H ), 2.77 (spt, J= 7.0 Hz 1H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, 6H ), 0.74 (s, 9H ), -0.02 (s, 3H ), -0.23 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 507.6 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 49 c

S e añ ad ió tr ife n ilfo s fin a (31 ,06 g, 118 ,4 m m o l) a u n a so luc ió n de l co m p u e s to 49 b (40 g, 78 ,95 m m o l) en T H F (400 m l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a 25° C d u ra n te 10 m in , d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a go ta a g u a (5 ,68 g, 315 ,2 m m o l) d u ra n te 30 m in. S e añ ad ió TsO H (27 ,19 g, 157 ,9 m m o l) y se c o n tin u ó ag ita n d o d u ra n te 10 m in . La so luc ió n de la reacc ión se e va p o ró a p res ión reduc ida . El res iduo se d iso lv ió en DC M (400 m l) y se lavó con a g u a (3 x 400 m l). La fa se o rg á n ica se secó con Na2SO4, se filtró y se e va po ró . El m a te ria l b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de ge l de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 1% -5% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 49 c co m o la sal de to s ila to (35 g, ren d im ien to : 68% ).

1H N M R (400 M H z, D M S O -d6 ) 5 ppm 9.38 (b r s, 5H ), 8.33 (s, 1H), 7.49 (d, J= 8.5 Hz, 2H ), 7.12 (d, J= 8.5 Hz, 2H ), 5.88 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.85 (dd, J= 5.0 and 7.0 Hz, 1H), 4.20 (m , 1H), 3.92 (dd, J= 2.0 and 4.5 Hz, 1H), 3.46 (s, 3H ), 3.31 -3.17 (m, 2H ), 2.77 (spt, J= 7.0 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H ), 1.12 (d, J= 7.0 Hz, 6H ), 0.74 (s, 9H ), -0.01 (s, 3H ), -0.25 (s, 3H ), E S I-M S : m /z 481.6 [M+H]+.

P aso 5. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 49 d

S e d iso lv ie ro n el co m p u e s to 49 c (sa l de T sO H , 34 g, 52,1 m m ol), 4 -n itro fe n o l (72 ,48 g, 521 m m o l) y Et3N (63,21 g, 625 m m o l) en DC M (800 m l) y se e n fria ro n a -78° C. S e añ ad ió g o ta a g o ta una so luc ió n de c lo ro su lfa to de 4 -n itro fe n ilo (24 ,76 g, 104 ,2 m m o l) en DC M (50 m l) d u ra n te 30 m in. La m ezc la de la reacc ión se c a le n tó a 0° C, se d ilu yó con DC M (800 m l) y se lavó con NaH2PO4 a cu oso 1 M (3 x 800 m l). La fa se o rg á n ica se secó con Na2SO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El m a te ria l b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de ge l de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : DCM al 1 -5% en M T B E ) p a ra d a r el co m p u e s to 49 d (19 g, ren d im ien to : 53 ,5% ).1

1H N M R (500 M H z, C D C l3 ) 5 ppm 9.49 (b r s, 1H), 8.32 (d, J= 9.0 Hz, 2H ), 7.63 (s, 1H), 7.47 (d, J= 9.0 Hz, 2H ), 5.64 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.95 (dd, J= 5.5 , 8.0 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.84 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 3.64 (s, 2H ), 3.55 (s, 3H ), 2.51 (spt, J= 7.0 Hz, 1H), 1.18 (d, J= 7.0 Hz, 3H ), 1.12 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 0.77 (s, 9H ), -0.10 (s, 3H ), -0.31 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 682.7 [M+H]+.

Paso 6: Preparación del Compuesto 49e

S e d iso lv ie ro n p o r s e p a ra d o el co m p u e s to 49 d (18 g, 26 ,4 m m ol), N 6 -b e n zo il-5 '-O -(4 ,4 '-d im e to x itr it il)-2 '-d e so x ia d e n o s in a (34 ,56 g, 52 ,55 m m o l) y Et³ N (13 ,32 g, 131 ,6 m m o l) en ^d C ^m seco (3 x 72 m l). C a d a so luc ió n se secó en ta m ice s m o lecu la re s a c tiva d o s de 3Á ag ita n d o ba jo N2 d u ra n te 4 h. Luego, se añ ad ió la so luc ió n de Et³ N a la so luc ió n de N 6 -b e n z o il-5 '-O -(4 ,4 '-d im e to x itr it il)-2 '-d e s o x ia d e n o s in a (49 d l), se g u id o de la ad ic ió n de la so luc ió n de su lfa m a to 49 d (tra n s fe rid a a tra vé s de una je rin g u illa ). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó a 25° C d u ran te 17 h. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtrac ión , e l f iltra d o se eva p o ró a p re s ió n reduc ida . El p ro d u c to bru to 49 e se usó ta l cua l en el paso s igu ien te .

P aso 7: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 49 f

El p ro d u c to b ru to a n te r io r 49 e se d iso lv ió en T H F (190 m l) y se tra tó con T B A F (14 ,57 g, 55 ,73 m m o l) a 25° C d u ra n te 16 h. La m ezc la de la reacc ión se e va p o ró ha s ta la seq ue da d a p re s ió n reduc ida . El res iduo se d iso lv ió en D C M , se lavó con ác ido acé tico a cu oso al 2% (3 x 190 m l) y se e va po ró . El p ro d u c to b ru to se d iso lv ió en DC M (190 m l) y se tra tó con D C A (17 ,97 g, 139 ,4 m m o l) y a g u a (2 ,5 m l, 138 ,7 m m ol). La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó a 25° C ha s ta la d e sp ro te cc ió n co m p le ta y luego se lavó con N a H C O ³ a cu oso al 5% . El res iduo o b te n id o d e sp u é s de la e va p o ra c ió n a p res ión re d u c id a se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía de fa se in ve rsa u sa nd o M eO H y a g u a co m o e lu ye n te p a ra d a r el co m p u e s to 49 f (4 g) co m o un só lido b lan que c in o .

¹H -N M R (500 M H z, D M S O -d6 ) 5 (ppm ) 12.07 (s, 1H), 11.59 (s, 1H), 11.19 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.47 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.5 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.5 Hz, 2H ), 6.51 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 5.83 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.64 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.27 -5.23 (m, 2H ), 4.67 (q, J= 5.5 Hz, 1H), 4.24 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 3.60 (m, 2H ), 3.44 (s, 3H ), 3.44 -3.28 (m, 2H ), 3.10 (m, 1H), 2.76 (m, 2H ), 1.12 (d, J= 3.0 Hz, 6H ); E S I-M S : m /z 784.1 [M+H]+.

P aso 8. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 49 g

S e tra tó una so luc ió n de l c o m p u e s to 49 f (387 mg, 0 ,49 m m o l) en M eC N /T H F seco (1 :1, 24 m l, se ca d o en ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á an tes de su uso) con ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á d u ra n te 2 h, d e sp u é s de lo cua l se tra n s fir ió a un m a traz de reacc ión . S e añ ad ió 1 H -te tra zo l (4 ,32 ml de u n a so luc ió n al 3 -4 % en M eC N , se ca d a en ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á an tes de su uso), se g u id o de la ad ic ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (172 pl, 0 ,54 m m ol). La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 2 h, d e s p u é s de lo cua l se añ ad ió u n a ca n tid a d ad ic io n a l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (78 pl, 0 ,25 m m ol), se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche , se añ ad ió tB u O O H (161 pl de so luc ión 5 ,5 M en de can o , 0 ,89 m m ol), la so luc ió n de la reacc ión se ag itó d u ra n te 90 m in m ás, d e sp u é s de lo cua l se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . La p u rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0-7 ,5 % en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 49 g (158 m g, ren d im ien to : 31% ). E S I-M S : m /z 899.5 [M+H]+.

P aso 9: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 24 , s a l d e s o d io

S e ag itó e l c o m p u e s to 49 g (158 mg, 0 ,155 m m o l) en u n a so luc ión de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (2 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 2 h). La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p re s ió n . El p ro d u c to b ru to resu lta n te se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a p u rifica c ió n p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria : X B rid g e C 18 O B D , 10 pm , 150 x 50 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to de am o n ía co acu oso al 0 ,25 % (A) - M eO H (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ). La co n ve rs ió n fina l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de un a so luc ió n a cu o sa sob re una c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina de in te rca m b io ión ico de N a ca tió n ic a pa ra d a r el c o m p u e s to 24, s a l d e s o d io co m o un só lido b lan co e sp o n jo so d e sp u é s de la lio filizac ión .1

¹H N M R (400 M H z, DM SO -ds, 81° C .) 5 ppm 10.19 (b r s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.19 (b r s, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.33 (dd, J= 9.4 , 5.6 Hz, 1H), 6.19 (b r s, 2H ), 5.74 (d, J= S .& Hz, 1H), 5.36 -5.60 (m, 2H ), 4.05 -4.24 (m, 3H ), 3.82 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 3.53 -3.63 (m, 1H), 3.50 (s, 3H ), 3.26 (b r s, 2H ), 3.01-3.11 (m , 1H, s ig na l u n d e r w a te r peak), 2.87 (dd, J= 14.1 ,5.5 Hz, 1H);

³¹ P N M R (126 M H z, D M SO -ds) 5 ppm 0.84 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 672.3 [M H]+

S e p re tra tó un a so luc ió n d e 49 f (1 g, 1,3 m m ol) y 1H -te tra z o l (0,2 g, 3,1 m m ol) en D C M seco (40 ml) con ta m ic e s m o le cu la re s d e 3 Á d u ra n te 3 h an tes de añ a d ir 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (0 ,4 g, 1.3 m m ol) en un a po rc ión . La m ezc la d e la rea cc ió n resu ltan te se ag itó a 35° C d u ra n te 1 h. S e añad ió h id ru ro de xa n ta n o (0 ,22 g, 1,43 m m ol) y se co n tin u ó a g itan do d u ra n te 30 m in. La so luc ió n de la rea cc ió n se d iluyó con D C M y se lavó con sa lm ue ra , N a H C Ü ³ a cu o so al 5% y agua . La fase o rg á n ica se secó con N a ²S Ü ⁴ y se filtró . El filtrad o se e va p o ró hasta la se q ue da d a p re s ió n reduc ida . El p ro du c to b ru to se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a so b re ge l de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 5 -10 % en D C M ) pa ra d a r 600 m g de una m ezc la de l co m p u e s to 50 a y su p ro du c to d e d e sp ro te cc ió n de c ia n o e tilo . E S I-M S : m /z 916 ,0 [M+H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to (*R ) 19 A , s a l d e s o d io y C o m p u e s to (*5 ) 19B , s a l d e s o d io

El p ro du c to a n te rio r 50 a se ag itó en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta no l (13 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te hasta la co n ve rs ió n co m p le ta . La m ezc la d e la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El p ro du c to b ru to se pu rificó m e d ia n te una c o lu m n a C 18 de fase in ve rsa usa nd o M eO H y a g ua com o fa se m óvil pa ra d a r la m ezc la d e P-e p im é rica (60 m g, ren d im ien to : 7% a p a rtir de l co m p u e s to 50a). A m b o s isó m e ro s se sep a ra ron m e d ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 10 gm , 250 x50 m m ; F ase m óvil, b ica rb o n a to am ó n ico acu oso al 0 ,25% (A) - M eO H (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ) pa ra d a r el c o m p u e s to (*R ) 19 A , s a l d e a m o n io com o p r im e r isó m ero e lu ye n te y el c o m p u e s to (*S ) 19 B , s a l d e a m o n io co m o se g u n d o isó m ero e luye n te . La co n ve rs ió n fina l en la sa l de sod io se rea lizó p o r e lu c ió n de un a so luc ió n acu o sa sob re una co lu m n a c o m p a c ta d a con una res ina de in te rca m b io de io ne s d e sod io ca tió n ica .

C o m p u e s to (*R ) 19 A , s a l d e s o d io .

¹ H N M R (600 M H z, D M S O -d ⁶ , 81 ° C .) ó ppm 9.17 (br s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.96 (br s, 1H), 6.97 (s, 2H ), 6.38 (dd, J= 9.1 , 5.4 Hz, 1H), 6.20 (br s, 2H ), 5.77 (d, J= 8.9 Hz, 2H ), 5.51 (b r s, 1H), 4.44-4.51 (m , 1H), 4.26 (br s, 1 H), 4.18 (b r s, 1H), 3.78 (d, j= 4.6 Hz, 1H), 3.56 -3.62 (m, 1H), 3.53 (s, 3H ), 3.20 -3.50 (m , 3H ), 2.90 (dd, J= 14.5 , 5.4 Hz, 1 H); E S I-M S : m /z 687.1 [M+H]+.

C o m p u e s to (*S ) 19 B , s a l d e s o d io .

¹ H N M R (600 M H z, DM SO -da, 81 ° C.) ó ppm 10.03 (b r s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.00 (br s, 1H), 6.97 (br s, 2H ), 6.38 (dd, J= 9.4 , 5.4 Hz, 1 H), 6.26 (br s, 2H ), 5.78 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 5.50 (br s, 1H), 5.48 (br s, 1 H), 4.22 -4.34 (m , 1H), 4.15 (br s, 1H), 4.09 (q, J = 11.2 Hz, 1H), 3.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 3.60-3.71 (m, 1H), 3.55 (s, 3H ), 3.41 -3.48 (m, 1H), 3.34 -3.40 (m, 1H), 3.23 -3.34 (m, 1H), 2.87 (dd, J= 14.5 , 5.4 Hz, 1H); 31P N M R (162 M H z, D M S O -J ⁶ ) 5 ppm 55.50 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 678.1.1 [M+H]+.

E je m p lo 51

C o m p u e s to 22

S e a ñ ad ie ro n im idazo l (3 ,94 g, 57 m m ol) y T B S C l (7 ,18 g, 470 m m ol) a un a so luc ió n d e N /6-benzoil-2 '-d e s o x i-2 '- flu o ro a d e n o s in a 1a [C A S 136834 -20 -3 ] (12 ,7 g, 34 ,0 m m ol) en D M F (105 m l) a 0° C. La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te has ta su co m p le ta co n ve rs ió n (2 h). La m ezc la de la rea cc ió n se d iluyó con E tO A c y se lavó con N H ⁴Cl a cu o so sa tu ra do y agua . La fa se o rg á n ica se secó con N a ²S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . La p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a s o b re ge l d e s ílice (g ra d ie n te d e e lu c ió n : M eO H al 0 -1% en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 51 a com o un só lido b la n co (12 g, ren d im ien to : 71% ). 1H N M R (500 M H z D M S O -d ⁶) 5 ppm -0.04 (s, 3H ), -0.02 (s, 3H ), 0.82 (s, 9H ), 3.81 (dd, J = 11.7, 4.1 Hz, 1H), 3.99 (m, 2H ), 4.62 (ddd, J= 21.7 , 11.7, 6.9 Hz, 1H), 5.54 (dq, J= 52.8 , 2.0 Hz, 1H), 5.77 (m, 1H), 6.38 (dd, J= 18.6 , 1.4 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.9 Hz, 2H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 8.57 (s, 1H), 8.75 (s 1H); E S I-M S : m /z 488.0 [M H]+.

Paso 2: Preparación del Compuesto 51c

S e ca rg ó un m a traz de reacc ión con D M A P (2 ,03 g, 16,6 m m ol), DC M seco (40 m l) y ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á a c tiva do s . La m e zc la resu ltan te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra inerte . S im u ltá n e a m e n te , se seca ron en ta m ice s m o le cu la re s de 3 Á ac tiva d o s (ap rox. 2 h) u n a so luc ió n de l co m p u e s to 51a (1,6 g, 3 ,3 m m o l) y u n a so luc ió n de su lfa m a to 51 b (2,5 g, 3 ,66 m m o l) c a d a u n a en DC M seco (2 x 40 m l). A m ba s so lu c io n e s (co m p u e s to 51 a y su lfa m a to 51 b resp e c tiva m e n te ) se tra n s fir ie ro n su ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 36 h. Los ta m ic e s m o lecu la re s se e lim in a ro n po r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N a H C Ü ³ a cu oso sa tu ra do , sa lm u e ra y N hLC l a cu oso sa tu rado , se secó sob re N a²S Ü ⁴ , se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ió n en g ra d ie n te : M eO H al 0 -1 % en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 51 c com o u n a e s p u m a b la n q u e c in a (1 ^{, 8} g, ren d im ien to : 53% ).

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm -0.25 (s, 3H ), -0.050 (s, 3H ), -0.015 (d, J= 2.8 Hz, ⁶ H), 0.73 (s, 9H), 0.79 (s, 9H ), 1.11 (dd, J= 6.9 , 1.4 Hz, ⁶ H), 2.75 (m, 1H), 3.40 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 3.45 (s, 3H ), 3.48 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 11.7, 3.4 Hz, 2H ), 3.98 (dd, J = 12.4, 2.1 Hz, 1H), 4.13 (m, 1H), 4.33 (t, J= 3.4 Hz, 1H), 4.71 (dd, J= 6.9 , 4.8 Hz, 1H), 5.49 (dq, J = 17.6, 3.9 Hz, 1H), 5.86 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 18.6, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.66 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 8.30 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.71 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 11.26 (s, 1H), 11.65 (s, 1H), 12.08 (s, 1H); E S I-M S : m /z 1030.4 [M+H]+.

P aso 3. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 33a

S e a ñ ad ie ro n Et³ N (12,1 m l, 87 ,37 m m o l) y Et³ N .³ H F (2 ,84 m l, 17,4 m m ol) a un a so luc ió n de l c o m p u e s to 51 c (1 ,8 g, 1,74 m m o l) en p ir id in a (34 m l). La m ezc la de la rea cc ió n se ag itó a 45° C hasta la c o n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 5 h) y luego se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te . S e añ ad ió is o p ro p o x itr im e tils ila n o (12 ,4 ml, 69 ,9 m m o l) y se c o n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . El p ro d u c to b ru to o b te n id o d e sp u é s de la co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a se p u rif icó p o r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -7 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 33 a com o una e sp u m a b la n q u e c in a (1 ,2 g, ren d im ien to : ^{8 6} % ).

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm 1.11 (q, J= 3.2 Hz, ⁶ H), 2.75 (m, 1H), 3.40 (s, 1H), 3.43 (s, 3H ), 3.64 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.80 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 3.86 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 4.07 (m, 1H), 4.32 (t, J=3.1 Hz, 1H), 4.67 (q, J= 5.7 Hz, 1H), 5.36 (td, J = 10.7, 4.6 Hz, 2H ), 5.66 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.88 (m, 2H ), 6.49 (dd, J = 16.5, 2.8 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.9 Hz, 2H ), 7.66 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 8.25 (s, 1H), ^{8 .6 6} (s, 1H), 8.74 (d, J = 32.4 Hz, 2H ), 11.27 (s, 1H), 11.62 (s, 1H), 12.08 (s, 1H ); E S I-M S : m /z 802.1 [M+H]+.

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 51 d

S e tra tó una so luc ió n de l c o m p u e s to 33 a (500 mg, 0 ,624 m m o l) y 1H -te tra zo l (5 ,46 ml de un 3 -4 % en M eC N , seca do en ta m ice s m o le cu la re s de 3Á a n te s de^ su uso) en T H F seco (25 ml, seca do en ta m ice s m o lecu la re s de 3Á ) an tes de su uso) con ta m ice s m o lecu la re s de 3Á d u ra n te 2 h, d e sp u é s de lo cua l se a ñ a d ió en un a po rc ió n 2-c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (206 mg, 0 ,686 m m ol). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te la noche . S e añ ad ió un a ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (94 m g+ 38 m g, 0 ,312 m m o l+ 0 ,125 m m o l) en dos p o rc io n e s con un in te rva lo de t ie m p o de 5 h, se co n tin u ó ag itan do d u ra n te un d ía m ás pa ra o b te n e r la c o n ve rs ió n co m p le ta . Se añ ad ió tB u O O H (227 pl de so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 1 ,25 m m ol) y la m ezc la de la rea cc ió n se ag itó d u ra n te una ho ra m ás. Los ta m ice s m o lecu la re s se e lim in a ro n po r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n e xh a u s tiva m e n te con DC M . El f iltra d o se co n ce n tró y e l res iduo o b te n id o se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -7 ,5 % en D C M ) pa ra p ro p o rc io n a r e l co m p u e s to 51 d (110 m g, ren d im ien to : 19% ). E S I-M S : m /z 917.5 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 22 , s a l d e s o d io

S e ag itó e l c o m p u e s to 51 d (110 m g, 0 ,12 m m o l) en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (ap rox. 2 h). La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p re s ió n . El p ro d u c to b ru to resu lta n te se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a p u rifica c ió n p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase es ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 250 x 30 m m ; fa se m óvil, b ica rb o n a to de a m o n ía co acu oso al 0 ,25% (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) p a ra d a r e l c o m p u e s to 22 , s a l d e a m o n io . La c o n ve rs ió n en la sal de sod io se rea lizó m ed ia n te e lu c ió n de un a so luc ió n a cu o sa sob re u n a c o lu m n a co m p a c ta d a con u n a res ina de in te rca m b io ión ico de sod io c a tió n ica pa ra d a r e l c o m p u e s to 22, s a l d e s o d io co m o un só lido b lan co esp o n jo so d e sp u é s de la lio filizac ió n (52 m g, ren d im ien to : 60% ).

1H N M R (600 M H z, D M S O -d ⁶ , 60° C .) 5 ppm 10.67 (b r s, 1H), 9.13 (b r s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.99 (b r s, 1H), 7.24 (b r s, 2H ), 6.33 (dd, J = 15.9, 3.3 Hz, 1H), 6.29 (b r s, 2H ), 5.95 (b r d, J = 50.9 Hz, 1H), 5.76 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 5.59 (b r s, 1H), 5.18 -5.25 (m, 1H), 4.47 (b r s, 1H), 4.20 (dt, J = 11.9, 6.1 Hz, 1H), 4.14 (b r s, 1H), 3.94 (b r d, J= 4.4 Hz, 1H), 3.75-3.81 (m , 1H), 3.52 (s, 3H ), 3.47 -3.55 (m, 1H), 3.42 (s, 1H); 31P N M R (162 M H z, D M S O -d ⁶ ) 5 ppm -1.28 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 690.3 [M+H]+.

E jem p lo 52

C o m p u e s to 55

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 52a

S e añ a d ió c a rb o n a to d e po tas io (0 ,32 g, 2 ,3 m m ol) a un a so luc ió n de l co m p u e s to 41 d (0 ,55 g, 1,8 m m ol) en D M F se ca (6 m l). La su sp e n s ió n re su lta n te se e n frió a 0° C, d e sp u é s de lo cua l se añad ió yo d o m e ta n o (0 ,15 ml, 2 ,3 m m ol). La m e zc la d e la reacc ión se ca le n tó a te m p e ra tu ra a m b ie n te y se ag itó has ta la co n ve rs ió n co m p le ta (aprox.

2 ,5 h). El res iduo ob te n id o d e sp u é s de la c o n ce n tra c ió n a p re s ió n red uc ida se pu rificó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a so b re gel d e s ílice (e luc ió n en g ra d ie n te : M eO H al 0 -4 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 52 a co m o un po lvo b lan co (0 ,45 g, ren d im ien to : 79% ).1

¹ H N M R (500 M H z, D M S O -d ⁶) ó ppm 8.25 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.02 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 5.43 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 5.09 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.39 (q, J= 6.0 Hz, 1H), 3.97 (q, J = 3.4 Hz, 1H), 3.73 -3.80 (m, 1H), 3.57 -3.64 (m, 1H), 3.50 -3.55 (m, 1H), 3.45 (s, 3H ), 3.40 (s, 3H ); E S I-M S : m /z 314 [M H]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 52 b

S e ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te un a so luc ió n de l co m p u e s to 52 a (0 ,85 g, 2 ,7 m m ol) en p ir id in a se ca (12 ,7 m l), a la qu e se a ñ ad ie ro n D M A P (0 ,16 g, 1,3 m m ol) y D M T rC l (1 ,46 g, 4 ,3 m m o l) (en po rc io nes ) d u ra n te 4 h. La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó con m e tano l (9 m l) y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El res iduo ob te n id o se d iso lv ió en E tO A c y se lavó con agua . La ca p a o rg á n ica se secó sob re N a 2 S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . La pu rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -0 ,2 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 52 b co m o una e sp u m a b la n q u e c in a (1 ,4 g, ren d im ien to : 85% ).

1H N M R (500 M H z, D M S O -ds) 5 ppm : 8.24 (s, 1H), 7.37 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.29 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.22 (m, ⁶ H), 6.87 (dd, J= 9.0 , 2.1 Hz, 4H ), 6.04 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.47 (q, J= 5.5 Hz, 1H), 4.05 (q, J= 4.4 Hz, 1H), 3.85 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 3.72 (d, J= 9.6 Hz, ⁶ H), 3.45 (s, 3H ), 3.35 (s, 3H ), 3.20 (d, J= 4.8 Hz, 2H ); ESI-M S : m /z 638.2 [M Na]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 52 c

El co m p u e s to 52 b (0 ,9 g, 1,46 m m ol), e l su lfa m a to 17a (1 ,53 g, 1 ,75 m m o l) y D M A P (0,9 g, 7,31 m m o l) se d iso lv ie ro n ca d a uno p o r s e p a ra d o en DC M seco (3 x 25 ,0 m l). C a da so luc ió n se secó con ta m ice s m o lecu la re s a c tiva d o s de 3Á ag ita n d o ba jo N ² d u ra n te p o r lo m en os 2 h. A la so luc ió n de D M A P , se le a ñ ad ie ro n re sp e c tiva m e n te la so lu c ió n de l co m p u e s to 52 b en DC M y la so luc ió n de su lfa m a to 17a en DC M . La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 36 h. Los ta m ic e s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r f iltra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N a H C O ³ a cu oso sa tu ra do , s a lm u e ra y N H ⁴Cl a cu o so sa tu ra do . Las fa se s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron sob re N a ²S O ⁴ , se filtra ro n y se co n ce n tra ro n a p re s ió n reduc ida . El res iduo se p u rif icó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -0 ,4 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 52 c (0 ,38 g, ren d im ien to : 19% ) y un a fra cc ió n m ás p o la r (0,8 g) q u e c o n te n ía el p ro d u c to de sp ro te g id o con m ono y di DM Tr.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 52 d

S e ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te ha s ta la c o m p le ta d e sp ro te cc ió n una so luc ió n de l co m p u e s to 52 c (0 ,38 g, 0 ,28 m m o l) en DC M (10 ,6 m l), a la q u e se a ñ ad ie ro n D C A (0 ,9 ml de DC M al 10% , 1,1 m m o l) y ag ua (30 pl, 1,4 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0,1 m l, 1,4 m m o l) y a lgu nas g o ta s de m e tan o l y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . S e a p licó un p ro to co lo de reacc ión s im ila r a la fra cc ió n p o la r de 0 ,8 g an te rio r. El res iduo de am b as re a cc io n e s se co m b in ó pa ra su pu rifica c ión m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -6 % en D C M ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 52 d co m o un po lvo b lan co (0,4 g, ren d im ien to : 62% ).

1H N M R (500 M H z, DM SO -da) 5 ppm 11.27 (b r s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.54 (b r t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.06 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.64 -7.70 (m, 1H), 7.52 -7.59 (m, 2H ), 7.36 (b r s, 1H), 6.36 (dd, J = 19.3, 2.1 Hz, 1H), 6.28 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.90 (b r s, 1H), 5.58 (b r d, J= 52.7 Hz, 1H), 5.22 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.52 -4.64 (m, 1H), 4.07 -4.14 (m, 2H ), 3.95-4.01 (m, 1H), 3.64 (dd, J = 12.4, 3.4 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 11.7, 2.8 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H ), 3.38 (s, 3H ), 3.12 ­ 3.24 (m, 2H ); E S I-M S : m /z 748.5 [M+H]+

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 52 e

S e tra tó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 52 d (100 m g, 0 ,134 m m o l) y 1 H -te tra zo l (2 ,38 ml de u n a so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 1,14 m m o l) en una m ezc la se ca de M e C N /D M F (5 m l, 4 :1 ) con ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á d u ra n te 10 m in ba jo N ² , d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió una so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (80 m g, 0 ,27 m m o l) en M eC N seco (1 ,0 m l) (no ta : e l M eC N fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de su uso). La m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 1,5 h a te m p e ra tu ra am b ie n te . Luego, se añ ad ió u n a so luc ió n de tB uO O H (126 pl de 5~6 M en de can o , 0 ,67 m m ol) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te o tro s 30 m in . La m ezc la de la reacc ión se d ilu yó con DC M , se filtró a tra vé s de un a a lm o h a d illa de t ie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -7 % en DC M ) pa ra d a r el co m p u e s to 52e.

E S I-M S : m /z 863.1 [M+H]+.

P aso ⁶ : P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 55 , s a l d e s o d io

S e ag itó e l co m p u e s to 52 e a n te r io r en una so luc ió n de m e tila m in a al 30 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 ,5 h. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El res idu o se d iso lv ió en u n a m ezc la de ag u a /M e C N (4 :1), se lavó con DC M y se co n ce n tró . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa s e in ve rsa (fase es ta c io n a ria . X b rid g e O B D C 18, 5 pm , 150 x 30 m m , fa se m óvil: b ica rb o n a to a m ó n ico a cu oso 10 m M (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) p a ra d a r el c o m p u e s to 55 , s a l d e a m o n io (25 m g, ren d im ien to : 26% a p a rtir de 52 d ). La c o n ve rs ió n fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de u n a so luc ió n a cu o sa sob re una co lu m n a c o m p a c ta d a con res ina de in te rca m b io ión ico D o w ex 50 W X 8 Na.

1H N M R (400 M H z, D²O) 5 8.13 (b r s, 1H), 8.00 (b r d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.42 (b r s, 1H), 7.06 (brs, 1H), 6.42 ­ 6.33 (m, 2H ), 5.41 (brs, 1H), 5.35 -5.16 (m, 1H), 5.05 -4.88 (m, 1H), 4.65 (b r s, 1H), 4.53 -4.40 (m, 2H ), 4.33 -4.20 (m, 2H ), 3.88 -3.76 (m, 1H), 3.60 (s, 4H ), 3.48 (s, 3H )

19F N M R (376 M H z, D²O) 5 -165.090 (s, 1F), -196.605 (s, 1F); 31P N M R (162 M H z, D²O) 5 -1.899 (s, 1P); E S I-M S : m /z 706.0 [M+H]+.

E je m p lo 53

C o m p u e s to 27

Tamices Mol. 53d 53e

D M irO —*

F ODMTr y -O - jf F OH Tetrazol T mi Mol.

---------3»

Compuesto 27, sal de sodio

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 53 b

S e e n frió un m a traz de reacc ión ca rg a d o con 5 -(d ie to x im e til) -1 H -im id a z o l-4 -c a rb o x ila to de m e tilo 53 a [C A S 85109 -99 -5 ] (3 ,24 g, 14,1 m m o l) y M eC N seco (120 ml) en un baño de h ie lo . S e añad ió h id ru ro de sod io (1 ,23 g de un a d isp e rs ió n al 55% en ace ite m inera l, 28 ,5 m m ol), la m ezc la resu ltan te se ag itó a ta d u ra n te 45 m in.

En un m a traz sep a ra do , se añ ad ió y o d o tr im e tils ila n o (3 ,23 m l, 22 ,6 m m o l) a u n a so luc ió n de 1 ,2 -d i-O -a ce til-3 -O -m e til-5 -O -b e n z o il-D -r ib o fu ra n o s a ([10300 -21 - 7], 5 g, 14,1 m m o l) en to lu e n o seco (50 m l). La so luc ió n resu ltan te se ag itó d u ra n te 20 m in a ta , d e s p u é s de lo cua l se tra n s fir ió le n tam e n te al m a traz de reacc ión a n te r io r e n fria d o en un baño de h ie lo . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó a 50° C ha s ta la c o n ve rs ió n to ta l (ap rox. 3 ,5 h). D e spu és de e n fria r a ta , se añ ad ió E tO A c. La fa se o rg á n ic a se lavó con ag ua y sa lm ue ra , se secó con N a ²S O ⁴ an h id ro , se filtró y se c o n ce n tró a p res ión reduc ida . La p u rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -40 % en hexano) pa ra d a r e l co m p u e s to 53 b co m o g o m a in co lo ra (4,3 g, ren d im ien to : 58% ).

¹H N M R (500 M H z D M S O -d ⁶ ) 5 ppm 8.0 (m , 3H ), 7.70 (t, < /= 7.6 Hz, 1H), 7.56 (m, 2H ), 6.36 (m, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.49 (dd, J= 4.1 , 2.8 Hz, 1H), 4.63 (m , 2H ), 4.26 (m, 2H ), 3.78 (s, 3H ), 3.68 (m , 1H), 3.47 (m, 1H) 2.11 (s, 2H ) 1.11 (m, 6H );

E S I-M S : m /z 521.2 [M+H]+.

P aso 2. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 c

S e ag itó una so luc ión de l co m p u e s to 53 b (4 ,3 g, 8 ,25 m m o l) en A cO H a cu oso al 80% (50 m l) a ta d u ran te 16 h. Luego, la so luc ió n de la rea cc ió n se ve rtió en a g u a e n fria d a con h ie lo y se e x tra jo con DC M . La ca p a o rg á n ica se lavó con agua, se secó sob re N a ²S O ⁴ anh id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . La pu rifica c ió n se rea lizó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : E tO A c al 0 -30 % en he xano) pa ra d a r el co m p u e s to 58 c co m o un só lido b lanco (1,7 g, ren d im ien to : 52% ).

¹H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm -10.27 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.00 (m, 2H ), 7.70 (m, 1H), 7.55 (t, J= 7.9 Hz, 2H ), 6.40 (d, 2.1 Hz, 1H), 5.54 (q, J= 2.3 Hz, 1H), 4.65 (t, J=4.1 Hz, 2H ), 4.34 (m, 1H), 4.19 (dd, J= 7.9 , 5.2 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H).

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 d

S e añ ad ió h id ra z in a (1 M en T H F , 362 m l, 362 m m o l) a u n a so luc ió n de l co m p u e s to 53 c (8,1 g, 18 ,12 m m ol) en E tO H a n h id ro (200 m l). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra de re flu jo p e rm itie n d o q u e el T H F se e va p o ra se c o m p le ta m e n te (la reacc ión fu e m uy len ta en p re se n c ia de T H F ). U na vez c o m p le ta d a la reacc ión (aprox.

72 h), e l so lve n te se e lim in ó a p re s ió n reduc ida . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a sob re s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -10 % en D C M ). El p ro d u c to o b te n id o se d iso lv ió en a g u a y e l pH se a ju s tó a 5 m ed ia n te la ad ic ió n de A m b e rlite ® IR 120 en fo rm a de h id ró gen o . La res ina se e lim in ó p o r filtra c ió n y se e n ju a g ó con agua , el f iltra d o se e va p o ró y se secó a a lto v a c ío pa ra d a r el c o m p u e s to 53 d co m o un só lido am a rillo pá lid o (3,5 g, 68% ).

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm 12.75 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 5.92 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H) 4.39 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 4.11 (q, J= 3.0 Hz, 1H), 3.83 (q, J= 2.8 Hz, 2H ), 3.69 (dd, J = 12.1 ,3.1 Hz, 2H ), 3.64 (dd, J = 12.1 ,3.1 Hz, 2H ), 3.42 (s, 3H ), 3.16 (s, 1H); E S I-M S : m /z 283.1 [M+H]+.

P aso 4. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 e

S e añ ad ie ro n D M A P (0 ,75 g, 6 ,18 m m o l) y D M T rC l (6 ,6 g, 19 ,7 m m o l) (en po rc io n e s ) a un a so luc ió n de l c o m p u e s to 53 d (3,5 g, 12,3 m m ol, seca do p o r c o e va p o ra c ió n con to lu e n o an h id ro y p ir id in a seca ) en p ir id in a seca . (52 m l). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 4 h, d e sp u é s de lo cua l se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ión de m e tan o l (10 m l) y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a so b re s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 53 e co m o u n a e sp u m a de co lo r rosa pá lid o (4 ,8 g, ren d im ien to : 67% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 12.76 (s, 1H), 8.50 (d, J = 16.5 Hz, 2H ), 7.28 (m, 4H ), 7.20 (m, 5H ) 6.84 (d, J= 9.0 Hz, 4H ), 5.99 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.82 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.67 (d, J= 5.5 Hz, 1H) 4.19 (q, J=4.1 Hz, 1H), 3.94 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H ), 3.37 (s, 3H ), 3.23 (q, J= 3.4 Hz, 2H ); E S I-M S : m /z 585.3 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 f

El co m p u e s to 53 e (0 ,53 g, 0 ,9 m m ol), e l su lfa m a to 17a (0 ,876 g, 1,08 m m o l) y D M A P (0 ,55 g, 4 ,5 m m ol) se d iso lv ie ro n p o r s e p a ra d o en DC M seco (3 x 20 m l). C a d a so luc ió n se secó con ta m ice s m o le cu la re s ac tiva do s de 3Á a g ita n d o ba jo N ² d u ra n te p o r lo m en os 2 h. A la so luc ió n de D M A P , se le a ñ ad ie ro n re sp e c tiva m e n te la so luc ió n de l co m p u e s to 53 e y la so luc ión de su lfa m a to 17a. La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 36 h. Los ta m ic e s m o lecu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n m in u c io sa m e n te con DC M . El f iltra d o se lavó con N a H C O ³ a cu o so sa tu ra d o y NH4Cl a cu oso sa tu ra do , se secó sob re Na2SO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión red uc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 53 f co m o una e sp u m a de c o lo r a m a rillo pá lid o (0 ,45 g, ren d im ien to : 38% ).

E S I-M S : m /z 1321.5 [M H ]+.

P aso 5. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 g

Se ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te u n a so luc ió n de l co m p u e s to 53 f (0 ,75 g, 0 ,52 m m o l) en DC M (20 m l), a la q u e se a ñ ad ie ro n D C A (1 ,75 ml de DC M al 10% , 2,1 m m o l) y ag ua (47 pl, 2 ,6 m m o l) ha s ta la d e sp ro te cc ió n co m p le ta (ap rox. 2 h). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0 ,2 ml, 2 ,6 m m o l) y a lg u n a s g o ta s de m e tan o l y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a de s ílice (e luc ió n en g ra d ie n te : M eO H al 0 -7 % en D C M ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 53 g com o un po lvo b la n q u e c in o (0 ,33 g, ren d im ien to : 82% ).

1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.77 (s, 1H), 11.24 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.60 -8.64 (m, 3H ), 8.60 (s, 1H), 8.04 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.63 -7.67 (m, 1H), 7.53 -7.58 (m, 2H ), 6.34 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 6.37 (dd, J= 20.0 , 2.1 Hz, 1H), 5.89 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.59 (ddd, J= 52.3 , 4.8 , 2.1 Hz, 1H), 5.46 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 5.18 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.56 ­ 4.65 (m, 1H), 4.13 -4.18 (m, 2H ), 4.00 (td, J= 7.4 , 3.1 Hz, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.60 -3.69 (m, 1H), 3.36 (s, 3H ), 3.26-3.31 (m , 1H), 3.15 -3.23 (m , 1H); E S I-M S : m /z 717.3 [M+H]+.

P aso 6: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 53 h

N o ta : El T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el M eC N fu e rec ién d e s tila d o so b re C a H ² an tes de su uso.

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 53 g (100 mg, 0 ,14 m m o l) y 1H -te tra zo l (2 ,48 ml de u n a so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 1,12 m m o l) en D M F seca (7 m l) con ta m ice s m o le cu la re s de 4 Á d u ra n te 30 m in ba jo N ². Luego se añ ad ió g o ta a g o ta u n a so luc ió n de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (75 m g, 0 ,25 m m o l) en T H F seco (1 ,0 m l). D espués de a g ita r la m ezc la a ta d u ra n te 3 h, se añ ad ió u n a so luc ión ad ic io n a l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (21 m g, 0 ,07 m m o l) en T H F seco (0,5 m l). La su sp e n s ió n resu ltan te se ag itó a d ic io n a lm e n te d u ra n te 16 h. S e añ ad ió tB u O O H (140 pl de 5~ 6 M en de can o , 0 ,70 m m o l) y la reacc ión se ag itó d u ra n te 30 m in m ás. La m ezc la se co n ce n tró p a rc ia lm e n te a p res ión reduc ida . El res iduo se filtró y e l f iltra d o se ve rtió ba jo ag itac ión en H ²O (20 m l) pa ra d a r una susp en s ión . El só lido se recog ió , se d iso lv ió en D C M /M e O H (3 ml/1 m l) y se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en ca p a f in a p re p a ra tiva (D C M :M e O H = 8 :1 ). Las fra cc io n e s d e sea da s se reco g ie ron y tr itu ra ro n en M e C N /D M S O (10 m l/2 m l) d u ra n te 2 h pa ra d a r una susp en s ión . D e spués de la filtra c ió n , el f iltra d o se e va p o ró ha s ta la seq ue da d pa ra d a r el c o m p u e s to b ru to 53 h co m o un a so luc ió n en D M S O (2 m l) q u e se usó d ire c ta m e n te en el paso s igu ien te .

E S I-M S : m /z=832.1 [M H]+

P aso 7. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 27 , s a l d e s o d io

S e tra tó la so luc ió n a n te rio r de l c o m p u e s to 53 h en D M S O (2 m l) con M e N H ² (30% en E tO H , 3 m l) y se ag itó a ta d u ra n te 2 h. La m ezc la se e va p o ró ha s ta la se q u e d a d , se co m b in ó con o tro lo te y se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (C o lum n W a te rs X b rid g e P rep O B D 5 pm C 18 150x30; C o nd ic ió n a g u a (N H ⁴ H C O ³ 10 m M ) (A) - A C N (B) B de In ic io 0, B fina l 30; T ie m p o de g ra d ie n te (m in ) 7, 100% B T ie m p o de re tenc ión (m in ) 1 C a ud a l (m l/m in ) 25) pa ra d a r d e sp u é s de la lio filizac ió n e l c o m p u e s to 27 , s a l d e a m o n io (5 m g) co m o un só lido b lanco .1

1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 ppm 8.63 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.24 -6.33 (m, 2H), 5.11 -5.34 (m, 3H ), 4.55 (b r s, 1H), 4.28 -4.42 (m, 2H ), 4.23 (b r s, 1H), 4.08 -4.20 (m, 1H), 3.61 (b r d, J = 12.96 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H ), 3.33 (b r d, J= 13.69 Hz, 1H)

19F N M R (376 M H z, D 2O ) 5 ppm -198.29 --197.44 (m, 1 F)

31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm -2.34 (s, 1 P)

E S I-M S : m /z= 675.3 [M H]+

C o n v e rs ió n a s a l d e s o d io

S e añ ad ió D ow ex 50W x8 , 200 -400 (10 ml, fo rm a H) a un v a so de p re c ip ita d o s y se lavó con agua d e s io n iz a d a (30 m l). Luego, se añ ad ió a la res ina H ²S O ⁴ al 15% en H22 d e s io n iz a d a (30 m l), la m ezc la se ag itó s u a ve m e n te d u ra n te 15 m in y se d e ca n tó (30 m l). La res ina se tra n s fir ió a una co lu m n a con H ²S O ⁴ al 15% en H ² O d e s io n iz a d a y se lavó con H²S O ⁴ al 15% (po r lo m en os 4 C V), y luego con H ²O d e s io n iz a d a ha s ta q u e se vo lv ió neu tra . La res ina se v o lv ió a tra n s fe r ir al va s o de p re c ip itado s , se añ ad ió so luc ió n de N aO H al 15% en H ²O d e s io n iz a d a O (30 m l) y la m ezc la se ag itó su a ve m e n te d u ra n te 15 m in y se d e ca n tó (1x). La res ina se tra n s fir ió a la co lu m n a y se lavó con N aO H al 15% en H ²O (p o r lo m en os 4 C V ), y luego con H ²O d e s io n iz a d a ha s ta q u e se vo lv ió neutra , se d iso lv ió el c o m p u e s to 27 , s a l d e a m o n io (5 m g) en H ² O d e s io n iz a d a (3 m l), se añ a d ió a la pa rte su p e rio r de la co lu m n a y se e luyó con H ² O de s io n iza d a . Las fra cc io n e s d e s e a d a s se co m b in a ro n y lio filiza ro n pa ra d a r el c o m p u e s to 27 , s a l d e s o d io (2,1 mg) com o un só lido b lanco .

1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 ppm 8.75 (s, 1H), 8.52 (br s, 1H), 7.84 -8.36 (m, 1H), 6.65 -7.24 (m , 1H), 6.38 (br d, J = 19.07 Hz, 2H ), 5.28 -5.46 (m , 1H), 5.26 (b r dd, J= 8.53 , 4.77 Hz, 1H), 4.81 -4.93 (m, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.42 (br dd, J= 10.54 , 7.78 Hz, 2H ), 4.19 -4.34 (m, 2H ), 3.58 -3.75 (m, 1H), 3.54 (s, 3H ), 3.30 -3.48 (m, 1H)

19F N M R (377 M H z, D 2O ) 5 ppm -197.75 (b r s, 1 F)

31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm -2.15 (b r s, 1 P)

E S I-M S : m /z=675.2 [M H]+

E je m p lo 54

C o m p u e s to 3

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 54 b

S e d iso lv ie ro n el co m p u e s to 54 a (1 g, 1 ,5 m m o l) y e l su lfa m a to 3o (1 ,3 g, 1,5 m m ol) en D C E (10 m l). Se a ñ a d ie ro n ta m ic e s m o le cu la re s de 4 Á (po lvo ) y la m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h en N ². S e ag itó u n a m ezc la de D M A P (913 m g, 7 ,5 m m o l) y po lvo de ta m ice s m o lecu la re s de 4 Á (0,5 g) en D C E (2 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 6 h ba jo N ² y luego se añ ad ió a la m ezc la an te rio r. (N o ta : e l D C E se secó en ta m ice s m o le cu la re s de 3Á ac tiva do s an tes de su uso ). La m e zc la de la reacc ión se ag itó a 50° C d u ra n te la noche. Los ta m ice s m o lecu la re s se e lim in a ro n p o r f iltra c ió n y se lavaron con DC M . El f iltra d o se lavó con N aH C Ü 3 acu oso sa tu ra do , la fa se a cu o sa se e x tra jo con DC M . Las ca p a s o rg á n ica s c o m b in a d a s se seca ron con Na2SÜ4, se filtra ro n y se e v a p o ra ro n al vac ío . El res iduo se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 1-2% en D C M ) pa ra d a r 1,8 g (ren d im ien to : 83% ) de u n a m ezc la de l co m p u e s to 54 b y su reg io isóm e ro aco p la d o en 2' (no se m u e s tra la es tru c tu ra ), e s te ú ltim o s ie nd o uno el resu ltad o de que e l co m p u e s to 54a e xp e rim e n tó p a rc ia lm e n te un d e s p la z a m ie n to de T B S 2 '^ 3 ' .

E S I-M S : m /z 1097 ,5 [M -D M Tr+H ]+ .

P aso 2. P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 54 c

S e d iso lv ió la m ezc la de p ro d u c to s a n te r io r (2 ,6 g, 1,84 m m ol) en DC M (30 m l), a la q u e se añ ad ie ro n D C A (610 pl, 7 ,40 m m o l) y ag ua (330 pl, 1 ,84 m m ol). La m ezc la de la reacc ión se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te ha s ta la d e sp ro te cc ió n c o m p le ta (ap rox. 1 h), d e sp u é s de lo cua l se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ión de p ir id in a (1 ,5 m l, 18,4 m m o l) en m e tan o l (4 m l) y p o s te r io rm e n te se lavó con agua. La c a p a o rg á n ica se secó con Na2SO4 an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 150 x 30 m m , fa se m óvil: H ²O (A) - M eC N (B); g ra d ie n te de e lu c ió n ) pa ra d a r el c o m p u e s to 54 c pu ro co m o un só lido b lan co (600 m g, ren d im ien to : 40% ).

1H N M R (400 M H z, DM SO -d6) 5 ppm 12.09 (b r s, 1H), 11.62 (b r s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.45 (b r s, 1H), 8.24 (s, 1H), 6.10 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.82 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.71 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 5.48 (b r s, 1H), 4.91 -5.00 (m, 2H ), 4.72 (q, J= 5.8 Hz, 1H), 4.29 -4.40 (m, 1H), 4.03 -4.12 (m, 1H), 3.87 (b r t, J= 4.3 Hz, 1H), 3.60 ­ 3.74 (m, 2H ), 3.44 (s, 3H ), 3.35 -3.42 (m, 1H), 3.29 (dd, J= 14.1 , 7.8 Hz, 1H), 2.75 (spt, J= 6.8 Hz, 1H), 1.11 (d, J= 6.8 Hz, 3H ), 1.09 (d, J= 6.9 Hz, 3H ), 0.63 (s, 9H ), -0.08 (s, 3H ), -0.34 (s, 3H );

E S I-M S : m /z 795.4 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 54 d

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 54 c (400 m g, 0 ,5 m m o l) y 1 H -te tra zo l (8 ,9 m l de una so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 4 ,03 m m o l) en un a m ezc la de T H F seco (48 m l) y D M F seca (4 m l) con ta m ice s m o le cu la re s de 4Á d u ra n te 30 m in ba jo N ² , d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (273 m g, 0,91 m m ol) en T H F seco (4 m l) d u ra n te 10 m ín. (N o ta : el T H F fu e rec ién d e s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y el M eC N fu e rec ién d e s tila d o sob re C a H ² an tes de l uso). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 3 h a te m p e ra tu ra am b ie n te . Luego, se añ ad ió u n a so luc ió n de tB u O O H (500 pl de so luc ió n 56 M en de can o , 2 ,5 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te o tro s 30 m in. La m ezc la de la reacc ión se filtró a tra vé s de u n a ca p a de C e lite y se co n ce n tró . El res iduo se d iso lv ió en DC M y se lavó con agua . La c a p a o rg á n ica se secó sob re Na2SO4, se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía u ltra rrá p id a sob re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 1 -10% en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 54 d (130 mg, 23 % de ren d im ien to ) co m o un só lido b lanco.

E S I-M S : m /z 910.5 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 3, s a l d e a m o n io

S e ag itó el c o m p u e s to 54 d (58 m g) en u n a so luc ió n de m e tila m in a al 30 % en e ta n o l (2 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 2 h. La m e zc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El res iduo se d iso lv ió en p ir id in a (2 m l), d e s p u é s de lo cua l se añ ad ie ro n Et3N (30 m g, 0 ,27 m m o l) y tr ih id ro flu o ru ro de tr ie tila m in a (21 ,7 m g, 0 ,13 m m ol), la m ezc la resu ltan te se ag itó a 50° C d u ra n te 1 día . La so luc ió n de la reacc ión se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te , se añ ad ió is o p ro p o x itr ie tils ila n o (0,1 m l, 0 ,54 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . El res iduo , o b te n id o tras la co n ce n tra c ió n a p res ión reduc ida , se p u rif icó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fa se in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : X B rid ge C 18 O B D , 5 pm , 150x25 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico a cu oso 10 m M (A) - M eC N (B); e lu c ió n en g ra d ie n te ) p a ra d a r el c o m p u e s to 3, s a l d e a m o n io (4 mg).1

1H N M R (400 M H z, D 2O ) 5 ppm 9.26 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 6.40 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.01 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 5.39 (td, J = 9.1 ,5.3 Hz, 1H), 5.25 (dd, J= 7.9 , 4.5 Hz, 1H), 5.06-5.11 (m, 1H), 4.55 (s, 1H), 4.48 (b r d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.09 -4.18 (m, 2H ), 3.86 (b r d, J= 14.6 Hz, 1H), 3.72 (b r d, J= 14.3 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H );

31P N M R (162 M H z, D 2O ) 5 ppm -2.22 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 673.2 [M+H]+.

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 55 b

S e ag itó un a so luc ió n de 3 -d e s o x i-3 '- f lu o ro in o s in a 55 a [C A S 117517 -20 -1 ] (2 ,2 g, 8 ,14 m m ol) en p irid ina seca (33 m l), a la qu e se le a ñ a d ie ro n D M A P (0 ,49 g, 4 ,0 m m o l) y D M T rC l (4 ,4 g, 13 m m ol) (en po rc io nes ), a te m p e ra tu ra a m b ie n te h a s ta la co n ve rs ió n co m p le ta (a p ro x . 2 ,5 h ) . L a m ezc la d e la reacc ión se in ac tivó con m etano l (10 ml) y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El res iduo ob te n id o se d iso lv ió en ace ta to de e tilo y se lavó con agua . La ca p a o rg á n ic a se secó so b re N a ² S O ⁴ an h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n reduc ida . L a p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en co lu m n a sob re ge l d e s ílice (g ra d ie n te d e e luc ió n : M e O H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 55 b com o una e sp u m a b la n q u e c in a (3,3 g, ren d im ien to : 71% ).1

1H N M R (500 M H z DM SO -d6) ó ppm : 8.22 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 8.3 Hz, 2H ), 7.28 (t, J = 7.6 Hz, 2H ), 7.23 (m, 5H ), 6.86 (dd, J= 8.3 , 6.2 Hz, 4H ), 5.92 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.14 (dd, J= 54.1 , 4.5 Hz, 1H), 5.02 (dq, J= 23.2 , 3.9 Hz, 1H), 4.35 (dt, J= 25.9 , 4.3 Hz, 1H), 3.74 (s, 6H ), 3.29 (dq, J= 37.5 , 5.2 Hz, 2H ); ESI-M S :m /z 572.0 [M H ]+.

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 55 c

El co m p u e s to 55 b (0 ,66 g, 1,15 m m ol), el su lfa m a to 17a (1,21 g, 1,38 m m ol) y D M A P (0 ,704 g, 5 ,76 m m ol) se d iso lv ie ro n ca d a uno po r sep a ra do en D C M seco (3 x 20 ,0 m l) y se se ca ro n en ta m ic e s m o le cu la re s de 3A a c tiva d o s d u ra n te p o r lo m enos 2 h en a tm ó s fe ra ine rte . Luego, las s o lu c io n e s de co m p u e s to 55 b y su lfa m a to 17a se tra n s fir ie ro n s u c e s iva m e n te al m a traz de reacc ión q u e co n te n ía la so luc ió n de D M A ^p . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 24 h. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se e n ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó su ce s iva m e n te con N aHCO 3 a cu o so sa tu ra d o y NH4Cl a cu oso sa tu ra do , se secó sob re Na2SO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r el c o m p u e s to 55 c co m o u n a e sp u m a b la n q u e c in a (0 ,475 g, ren d im ien to : 31% ).

1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 pp m : 12.47 (s, 1H), 11.23 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.03 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.84 (s, 1H), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.55 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.48 (d, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.36 (q, J= 4.8 Hz, 4H ), 7.32 (m , 4H ), 7.23 (t, J= 7.6 Hz, 4H ), 7.19 (t, J= 7.9 Hz, 5H ), 6.90 (dd, J= 9.0 , 6.9 Hz, 4H ), 6.81 (dd, J= 9.0 , 6.2 Hz, 4H ), 6.34 (m, 1H), 6.23 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.78 (m, 2H ), 5.50 (d, J = 53.7 Hz, 1H), 4.72 (m, 2H ), 4.43 (d, J=24.1 Hz, 1H), 4.01 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.70 (t, J= 2.4 Hz, 12H ), 3.25 (dd, J= 10.7 , 3.8 Hz, 1H), 2.99 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.70 (dd, J= 14.5 , 9.0 Hz, 1H), E S I-M S : m /z 1310.0 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 55 d

S e ag itó a te m p e ra tu ra am b ie n te u n a so luc ió n de l co m p u e s to 55 c (0 ,453 g, 0 ,34 m m o l) en DC M (12 ,6 m l), a la q u e se a ñ ad ie ro n D C A (1 ,14 m l de DC M al 10% , 1,38 m m o l) y a g u a (31 pl, 1 ,72 m m ol), ha s ta la c o m p le ta d e sp ro te cc ió n (ap rox. 2 h). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (0 ,14 m l, 1,72 m m ol) y a lgu nas g o ta s de m e tano l. La susp en s ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 20 m in, se filtró y se secó p a ra o b te n e r el co m p u e s to 55 d (0,21 g, ren d im ien to : 86% ).

1H N M R (500 M H z D M S O -ds) 5 ppm : 12.5 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 11.25 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.69 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.09 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 8.05 (d, 7.6 Hz, 2H ), 7.66 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.56 (t J= 7.6 Hz, 2H ), 6.32 (dd, J= 20.0 , 2.1 Hz, 1H), 6.21 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.85 (d. J= 6.2 Hz, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.49 (m, 3H ), 5.34 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.40 (dt, J= 26.9 , 3.4 Hz, 1H), 3.92 (q, J= 6.0 Hz, 1H), 3.65 (t, J=4.1 Hz, 2H ), 3.17 (t, J= 6.2 Hz, 2H ); E S I-M S : m /z 706.0 [M+H]+.

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 55 e

S e tra tó u n a so luc ió n de l co m p u e s to 55 d (260 mg, 0 ,37 m m o l) y 1H -te tra zo l (2 ,15 m l de un 3 -4 % en M eC N , se ca d o sob re ta m ic e s m o lecu la re s de 3Á a c tiva d o s ) en D M F /T H F (1 :2, 30 m l, seca do sob re ta m ice s m o le cu la re s de 3Á a c tiva d o s ) con ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á d u ra n te 2 h en un a a tm ó s fe ra inerte , d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió 2-c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (129 pl, 0,41 m m o l) en u n a po rc ión . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te la noche . S e añ ad ió una ca n tid a d ad ic io na l de 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '- te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (23 pl, 0 ,074 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te un d ía m ás p a ra o b te n e r un a c o n ve rs ió n com p le ta . S e añ ad ió tB u O O H (134 pl de so luc ió n 5 ,5 M en de can o , 0 ,74 m m o l) y la m ezc la de la rea cc ió n se ag itó d u ra n te u n a ho ra m ás. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n p o r filtra c ió n y se la va ron con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó a b u n d a n te m e n te con agua , se secó con M gSO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res iduo se pu rificó p o r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -5 % en D C M ) p a ra d a r el c o m p u e s to 55 e (20 m g, ren d im ien to : 7% ). E S I-M s: m /z 820.4 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 39 , s a l d e s o d io

S e ag itó e l c o m p u e s to 55 e (20 m g, 0 ,024 m m ol) en una so luc ió n de m e tila m in a al 33 % en e ta n o l (10 m l) a te m p e ra tu ra a m b ie n te ha s ta la c o n ve rs ió n co m p le ta (~1 h). La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El p ro d u c to b ru to resu ltan te se tr itu ró en M eC N se g u id o de u n a pu rifica c ió n p o r H P LC de fa se in ve rsa p re p a ra tiva (fase e s ta c io n a ria . X B rid g e C 18 O B D , 5 pm , 250 x 30 m m , fase m óvil, b ica rb o n a to de a m o n íaco a cu oso al 0 ,25% (A) -M eC N (B), e luc ió n en g ra d ie n te ) p a ra d a r el c o m p u e s to 39 , s a l d e a m o n io . La c o n ve rs ió n fin a l en la sa l de sod io se rea lizó m ed ia n te e luc ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re una c o lu m n a c o m p a c ta d a con u n a res ina de in te rcam b io ió n ico de N a c a tió n ica p a ra p ro p o rc io n a r el c o m p u e s to 39, s a l d e s o d io co m o un só lido b lan co e sp o n jo so de spu és de la lio filizac ió n (13 ,5 m g, ren d im ien to : 80% ).

31P N M R (162 M H z, D M SO -ds) 5 ppm -2.06 (s, 1 P); E S I-M S : m /z 663.3 [M+H]+.

C o m p u e s t o 40 , s a l d e s o d io

P aso 1: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 56 b

S e a g itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te has ta la co n ve rs ió n c o m p le ta un a so lu c ió n de 3 '-(O -m e til) in o s in a (56a, 1,5 g, 5,31 m m ol, C A S N° 75479 -64 -0 ) en p ir id in a seca (30 m l), a la qu e se le añ a d e D M A P (0 ,32 g, 2 ,65 m m ol) y D M T rC l (2 ,69 g, 7 ,97 m m ol) (en po rc io nes ). La m ezc la de la reacc ión se in ac tivó con m etano l (15 m l) y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . El res iduo o b te n id o se d iso lv ió en ace ta to d e e tilo y se lavó con agua . La ca p a o rg á n ic a se lavó con agua , se secó con Na2SO4 a n h id ro , se filtró y se co n ce n tró a p re s ió n red uc ida . La p u rif ica c ió n se rea lizó m e d ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a so b re ge l de s ílice (g ra d ie n te de e luc ió n : M eO H al 0 -2 ,5 % en D C M ) pa ra d a r el co m p u e s to 56 b co m o un a e sp u m a de c o lo r m arrón pá lid o (2 ,19 g, ren d im ien to : 71% ). 1H N M R (500 M H z, DM SO -d6) ó ppm : 12.35 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 2H ), 7.27 (t, J = 7.6 Hz, 2H ), 7.21 (m, 5H ), 6.84 (m, 4H ), 5.89 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.62 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.78 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 4.13 (q, J = 4.6 Hz, 1H), 3.99 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 3.73 (s, 6H ), 3.37 (s, 3H ), 3.22 (d, J=4.1 Hz, 2H ); E S I-M S : m /z 585 [M H]+

P aso 2: P re p a ra c ió n del C o m p u e s to 56 d

S e ca rg ó un m a traz d e reacc ión con D M A P (0 ,76 g, 6 ,2 m m ol), D C M seco (25 m l) y ta m ic e s m o le cu la re s de 3Á a c tiva do s . La m ezc la resu lta n te se ag itó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te p o r lo m en os 2 h en a tm ó s fe ra inerte . S im u ltá n e a m e n te , se seca ron en ta m ic e s m o le cu la re s a c tiva d o s de 3Á (ap rox. 2 ho ras) una so luc ió n de l co m p u e s to 56 b (0 ,73 g, 1 ,24 m m o l) y una so luc ió n de l co m p u e s to 56 c (1 ,0 g, 1,49 m m ol), c a d a u n a en DC M seco (2 x 25 ml). A m b a s so lu c io n e s (com p ue s to 56 b y c o m p u e s to 56 c resp e c tiva m e n te ) se tra n s fir ie ro n su ce s iva m e n te al m a traz de reacc ión . La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 24 h. Los ta m ice s m o le cu la re s se e lim in a ro n po r f iltra c ió n y se en ju a g a ro n a fo n d o con d ic lo ro m e ta n o . El f iltra d o se lavó con N aH C O 3 a cu oso sa tu ra do , sa lm u e ra y N H ⁴Cl a cu oso sa tu rado , se secó sob re Na2SO4, se filtró y se co n ce n tró a p res ión reduc ida . El res idu o se pu rificó po r c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (g ra d ie n te de e lu c ió n : M eO H al 0 -2 % en D C M ) pa ra d a r e l c o m p u e s to 56 d (0 ,54 g, ren d im ien to : 39% ). 1H N M R (500 M H z DM SO -d6) 5 ppm : 8.72 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.09 (m, 1H), 8.05 (m , 2H ), 7.99 (s, 1H), 7.65 (m , 1H), 7.56 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.29 (d, J= 6.9 Hz, 2H ), 7.24 (t, J= 7.6 Hz, 2H ), 7.18 (m, 5H ), 6.87 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.81 (dd, J= 9.0 , 4.1 Hz, 4H ), 6.46 (m, 1H), 6.24 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 5.66 (m, 1H), 4.63 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 4.54 (m, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.71 (s, 6H ), 3.32 (d, J= 8.3 Hz, 12H), 3.26 (m, 3H ), 3.19 (m, 3H ), 2.99 (m , 1H), 2.58 (m, 4H ), 2.35 (m, 1H), 0.89 (s, 9H ), 0.11 (s, 6H ); E S I-M S : m /z 1116 [M+H]+.

P aso 3: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 56 e

S e a ñ ad ie ro n Et3N (2 ,65 m l, 19,0 m m o l) y E t3N .3H F (0,31 m l, 1,9 m m o l) a un a so luc ió n de l c o m p u e s to 56 d (0 ,53 g, 0 ,47 m m o l) en p ir id in a (9 ,5 m l). La m e zc la de la reacc ión se ag itó a 45 ° C ha s ta la co n ve rs ió n c o m p le ta (ap rox. 5 h) y luego se en frió a te m p e ra tu ra am b ie n te . Se añ ad ió is o p ro p o x itr im e tils ila n o (1 ,34 m l, 7 ,6 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te la noche . La co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a d io e l c o m p u e s to 5 '-d e sp ro te g id o b ru to que se v o lv ió a d is o lv e r en DC M (13 ,3 m l). S e añ ad ie ro n a g u a (40 pl, 2 ,37 m m o l) y ác ido d ic lo ro a cé tico (1 ,57 ml de DCM al 10% , 1,9 m m ol), la m ezc la de la reacc ión resu ltan te se ag itó d u ra n te 1 h (con ve rs ió n to ta l), d e sp u é s de lo cua l se in ac tivó m ed ia n te la ad ic ió n de p ir id in a (200 pl, 2 ,37 m m o l) y un as g o ta s de m e tano l. El res idu o o b te n id o tras la co n ce n tra c ió n a p res ión re d u c id a se pu rificó m ed ia n te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -9 % en D C M ) pa ra d a r e l co m p u e s to 56 e (220 m g, re n d im ie n to 66 ,6% do s pasos). 1H N M R (500 M H z D M S o-ds) 5 ppm : 12.43 (b r s, 1H), 11.20 (brs, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.57 (b r t, 5.5 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.04 (m, 3H ), 7.65 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.56 (t, J= 7.9 Hz, 2H ), 6.43 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 6.17 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 5.45 (m, 2H ), 5.26 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.23 (t, J=4.1 Hz, 1H), 4.12 (q, J= 3.7 Hz, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.40 (s, 3H ), 3.12 (m , 2H ), 2.84 (m, 1H), 2.33 (m, 1H ); E S I-M S : m /z 699 [M H ]

P aso 4: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 56 f

S e tra tó u n a so luc ió n de l c o m p u e s to 56 e (200 mg, 0 ,286 m m o l) y 1 H -te tra zo l (5 ,09 ml de u n a so luc ió n 0 ,45 M en M eC N , 0 ,99 m m ol, se ca d a en ta m ic e s m o lecu la re s de 4 Á an tes de su uso) en M e C N /T H F seco (1 :2, 9 m l) con ta m ic e s m o lecu la re s de 4 Á d u ra n te 30 m in en N ² , d e sp u é s de lo cua l se añ ad ió g o ta a g o ta 2 -c ia n o e til-N ,N ,N ',N '-te tra ( is o p ro p il) fo s fo ro d ia m id ita (155 m g, 0 ,52 m m o l) en M eC N seco (2 m l) d u ra n te 10 m in (no ta : T H F rec ién de s tila d o sob re N a /b e n zo fe n o n a y M eC N rec ién d e s tila d o sob re C a H ² a n te s de su uso). La m ezc la de la reacc ión resu lta n te se ag itó d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra a m b ie n te . S e añ ad ió u n a so luc ió n de tB u O O H (286 pl de so luc ió n 5~ 6 M en de can o , 1,43 m m o l) y se co n tin u ó ag ita n d o d u ra n te o tros 30 m in . La m ezc la se d ilu yó con DC M (20 m l), se filtró a tra vé s de una a lm o h a d illa de tie rra de d ia to m e a s y se co n ce n tró . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ian te c ro m a to g ra fía en c o lu m n a de s ílice (e luc ión en g ra d ie n te : M eO H al 0 -8 % en D C M ) p a ra d a r e l co m p u e s to 56 f (130 m g, ren d im ien to : 44 % (pu reza : 80 % LC U V )) co m o un só lido b lan co . E S I-M S : m /z= 814 ,3 [M+H]+.

P aso 5: P rep a ra c ión de l C o m p u e s to 40 , s a l d e s o d io

El co m p u e s to 22 f a n te rio r (130 m g, 0 ,072 m m o l) se ag itó en u n a so lu c ió n de m e tila m in a al 30 % en e ta no l (15 m l) a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 2 h. La m ezc la de la reacc ión se co n ce n tró a ba ja p res ión . El res iduo se d iso lv ió en agua, se lavó con DC M y se lio filizó . El p ro d u c to b ru to se pu rificó m ed ia n te H P LC p re p a ra tiva de fase in ve rsa (fase e s ta c io n a ria : X b rid g e O B D C 18, 5 pm , 150 x 30 m m ; fa se m óvil: b ica rb o n a to am ó n ico a cu oso 10 mM (A) - M eC N (B); e luc ió n en g ra d ie n te ). La c o n ve rs ió n fina l en la sal de sod io se rea lizó m ed ia n te la e luc ió n de una so luc ió n a cu o sa sob re u n a c o lu m n a co m p a c ta d a con u n a res ina de in te rca m b io de iones de sod io c a tió n ica pa ra d a r el c o m p u e s to 40 , s a l d e s o d io co m o un só lido e sp o n jo so b lan co d e sp u é s de la lio filizac ió n (5 ,8 mg, ren d im ien to : 3% a p a rtir de 22 f). 1H N M R (400 M H z, D²O) 5 ppm 8.39 (s, 1H), 7.91 (b r d, J = 13.2 Hz, 2H ), 7.24 (b r s, 1H), 6.26 (br s, 1H), 6.18 (b r d, J= 8.3 Hz, 1H), 5.49 (b r s, 1H), 4.87 -5.06 (m, 1H), 4.51 (b r s, 1H), 4.30 (b r d, J= 3.7 Hz, 1H), 4.10 (b r s, 3H ), 3.42 (s, 3H ), 3.38 (b r s, 2H ), 2.53 -2.75 (m, 2H ),

31P N M R (162 M H z, D²O ) 5 ppm -1.23 (s, 1 P); E S I-M S : m /z= 657.0 [M+H]+.

E je m p lo s b io ló g icos

E nsa yos in v itro

E je m p lo 1

E nsa yo de un ión S T IN G S P A

El e n sa yo de un ión S T IN G S P A h u m an o m ide e l d e s p la z a m ie n to de 2 ',3 'cG A M P m arca do con tr it io (c íc lico (g u a n o s in a -(2 '-> 5 ')-m o n o fo s fa to -a d e n o s in a -(3 '-> 5 ')-m o n o fo s fa to ) a la p ro te ín a S T IN G b io tin ila d a S e e xp re só una ve rs ió n so lub le de S T IN G re co m b in a n te en E. coli q u e c a re ce de los cu a tro d o m in io s tra n s m e m b ra n a y co n tie n e los re s id u o s 139-379 de Q 86 W V 6 con u n a R en la po s ic ió n 232 (H 232R ). En base a la fre c u e n c ia a lé lica de l 58 % de la p o b lac ió n , se c o n s id e ra q u e e l H 232R es de t ip o sa lva je (Yi, et. a l., "S ing le N u c leo tide P o lym o rp h ism s o f H um an S T IN G can a ffe c t in na te im m u ne resp on se to cyc lic d in u c le o tid e s " PLO S O N E . 2013 , 8(10), e77846 ). El co n s tru c to de S T IN G tie n e una e tiq u e ta H IS N -te rm ina l, se g u id a de un s itio de esc is ión de p ro te a sa T E V y una e tiq u e ta AVI p a ra p e rm itir la b io tin ila c ió n d ir ig id a p o r b io tin a lig a sa B irA (B ecke tt et al., A m in im a l p e p tid e su s tra to in b io tin h o lo e n zym e s yn th e ta se -ca ta lyze d b io tin ila tion . (1999 )) P ro te in S c ie nce 8, 921 -929 ). La e tiq u e ta H IS se e sc in d e d e sp u é s de la pu rifica c ió n y an tes de la b io tin ila c ión .

El e n sa yo se llevó a ca b o en p laca s de 1536 po c illo s en un v o lu m e n to ta l de 8 gl p o r po c illo m ed ia n te la ad ic ió n de [3H ]-2 '3 '-C G A M P 8 nM y b io tin a -p ro te ín a S T ⁱN ^g 40 nM en ta m p ó n de e n sa yo [H E P E S 25 m M (C o rn ing 25 -060 -C 1 ) pH 7,5, N aC l 150 m M (S ig m a S 5150 ), 0 ,5 m g /m l de B S A (G ibco 15260 -037 ), T w e e n -20 al 0 ,001 % (S ig m a P 7949), a g u a de g ra d o m o le cu la r (C o rn ing 46 -000 -C M )]. Los c o m p u e s to s de p ru e b a (80 nl) se a g reg a ron con un d is p e n s a d o r acú s tico (E D C B io sys te m s) en D M S O al 100% p a ra u n a c o n ce n tra c ió n de e n sa yo fina l de D M S O al 1%. Las p laca s se c e n trifu g a ro n d u ra n te 1 m in y se in cubaron d u ra n te 60 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . F ina lm en te , se a ñ a d ie ro n pe rla s de p o lie s tire n o e s tre p ta v id in a S P A (2 gl) (P e rk in E lm e r R P N Q 0306 ) y las p laca s se se lla ro n y ce n trifu g a ro n d u ra n te 1 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . Las p laca s se a d a p ta ro n a la o scu rid a d d u ra n te 2 h y se le ye ro n en un V ie w L u x (P erk in E lm e r) d u ra n te 12 m in po r p laca . U na cu rv a de un ión de sa tu ra c ió n pa ra [3H ]-2 '3 '-cG A M P m ostró una K ^d de 3 ,6 ± 0 ,3 nM pa ra la un ión a S T IN G , co m p a ra b le a los va lo re s in fo rm a d o s pa ra e l ligando na tu ra l (Zhang e t a l., G M P -A M P c íc lico qu e co n tie n e e n la ce s fo s fo d ié s te r m ix tos es un ligan do de a lta a fin id ad pa ra S T IN G .

O tro s ligandos na tu ra les , in c luye nd o el d i-G M P c íc lico , ta m b ié n a rro ja ro n v a lo re s en es te e n sa yo d e n tro de l in te rva lo e sp e ra d o . El co m p u e s to de re fe re n c ia es cG A M P y los resu ltad os se in fo rm an co m o p o rce n ta je de inh ib ic ión y va lo re s de IC⁵⁰. La un ión a S T IN G de ra tón usó un co n s tru c to s im ila r al d e sc rito a n te rio rm e n te que c o n te n ía los res idu os 138-378 de Q 3T B T3.

E nsa yo de un ión a S T IN G h u m an o de long itud c o m p le ta

S e e xp re só de m an e ra re co m b in a n te El S T IN G h u m an o de los res idu os 1-379 de Q 86 W V 6 con u n a R en la po s ic ió n 232 (H 232R ) con u n a e tiq u e ta 6H IS N -te rm ina l se g u id a de u n a e tiq u e ta FLAG , un s itio de esc is ión de p ro te a s a T E V y u n a e tiq u e ta A V I pa ra b io tin ila c ió n en cé lu la s H E K 293 -E X P I. S e p re pa ra ron m e m b ra n a s p u rifica d a s a p a rtir de e s ta s cé lu la s y se c o n firm ó y cu a n tif icó la exp re s ió n de S T IN G m ed ia n te in m u n o tra n s fe re n c ia . Las m e m b ra n a s que co n te n ía n S T IN G se co m b in a ro n con e l co m p u e s to de p ru e b a en u n a p la ca de e n sa yo G re in e r de 384 po c illo s y se in cub a ron a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te un a ho ra en el m ism o ta m p ó n de e n sa yo usa do p a ra el e n sa yo de un ión de S T IN G S P A . Luego, se añ ad ió [3H ]-2 '3 '-cG A M P y las p laca s se in cub a ron d u ra n te 30 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te . Las rea cc io nes se tra n s fir ie ro n a u n a p la ca de filtro Pall 5073 p re la va d a y c a d a po c illo se lavó 3 ve c e s con 50 gl de ta m p ó n de en sayo . Las p laca s de filtro se seca ron a 50° C d u ra n te 1 h. A ca d a po c illo , se a ñ a d ie ro n 10 gl de flu id o de c e n te lle o M ic ro sc in t y las p laca s se se lla ro n y leyeron en un T o p C o u n t (P e rk in E lm er) d u ra n te 1 m in p o r poc illo .

E nsayo de un ión a S T IN G S PR

Los co m p u e s to s se a n a liza ro n en un in s tru m e n to S 200 b iaco re S P R (G E H e a lth ca re ). La p ro te ín a S T IN G tru n c a d a p ro d u c id a po r E. co li se in m o v ilizó en un ch ip de e s tre p ta v id in a se rie S a tra vé s de la ca p tu ra de b io tin a (G E H e a lth ca re N° B R 100531 ) con . Los c o m p u e s to s se s e le cc io n a ro n a d ilu c io n e s 1:2 d e sd e 100 uM ha s ta 0 ,195 uM en ta m p ó n de p ro ce sa m ie n to (H E P E S 10 m M , pH 7,4, N aC l 150 m M , P20 al 0 ,005% , T E C E P 1m M ). Las e v a lu a c io n e s c in é tica s y de a fin id ad en e s ta d o e s ta c io n a rio se lleva ron a ca b o u sa nd o un m od e lo de un ión 1 :1 (S T IN G se tra tó co m o un d ím ero ). Los p a rá m e tro s de e je cu c ió n fu e ro n los s ig u ie n te s : 60 s e n ce n d id o , 300 s ap a g a d o pa ra los c o m p u e s to s IFM, d i-G M P c íc lico (60 s e n ce n d id o /60 s apag ad o ), isó m ero de tio l 1 (60 s e n ce n d id o /300 s ap ag ad o ) y cG A M P (60 s e n ce n d id o /1200 seg . ap ag ad o ) con un cau da l de 50 g l/m in y reco p ilac ión de d a to s a 40 Hz a 25° C.

E nsa yo in fo rm a d o r de cé lu la s hu m a n a s de S T IN G

El ag on ism o de la v ía S T IN G hu m a n a se e v a lú a en cé lu la s T H P 1 -IS G (Inv ivo ge n , N° de cat. th p -isg ) d e riva d a s de la línea c e lu la r de m o n o c ito s THP1 hu m an os m ed ia n te la in te g ra c ión e s ta b le de un co n s tru c to in fo rm a d o r S E A P indu c ib le po r e l fa c to r re g u la d o r de in te rfe rón (IR F ). Las cé lu la s T H P 1 -B lu e ISG e xp re sa n un gen in fo rm a d o r de fo s fa ta s a a lca lin a e m b rio n a ria (S E A P ) s e c re ta d o ba jo e l con tro l de un p ro m o to r m ín im o IS G 54 ju n to con c in co e le m e n to s de re sp u e s ta e s tim u la d o s p o r in te rfe rón (IFN ). C o m o resu ltado , las cé lu la s T H P 1 -B lu e ISG p e rm iten la m o n ito riza c ió n de la a c tiva c ió n de IR F d e te rm in a n d o la ac tiv ida d de S E A P . Los n ive le s de S E A P in du c ido s p o r IR F en el so b re n a d a n te de l c u ltivo c e lu la r se e va lú a n fá c ilm e n te con m ed io de de te cc ió n de fo s fa ta s a a lca lina , un rea c tivo de d e tecc ió n de S E A P . E stas cé lu la s son re s is te n te s a Z eoc in . Se usó 2 '3 'cG A M P co m o con tro l po s itivo en es te en sayo . P a ra e je c u ta r e l en sayo , se d isp e n sa ro n 60.000 cé lu la s en 30 p l/p o c illo de u n a p laca de 384 po c ilio s tra ta d o con c u ltivo de te jid o s de fo n d o o p a co b lanco .

Los c o m p u e s to s de p ru e b a se a ñ ad ie ro n en un v o lu m e n de 10 pl (1% de co n ce n tra c ió n fina l de D M S O ). Los c o m p u e s to s se p re pa ran in ic ia lm e n te en D M S O al 100% , se co lo ca ro n en u n a p la ca de d iluc ión de co m p u e s to s y luego se d ilu ye ro n en m ed io s an tes de la tra n s fe re n c ia . El e n sa yo se in cub ó d u ra n te 24 ho ras a 37° C, C O ² al 5% , luego las p laca s se ce n trifu g a ro n a 1200 rpm (120 x g) d u ra n te 5 m inu tos . D e spués de la in cub ac ió n fina l, se añ ad ie ro n 90 pl de sus tra to de m ed io de d e te cc ió n de fo s fa ta s a a lca lin a a c a d a po c illo de un a nu e va p laca tra n s p a re n te de 384 po c illo s y se tra n s fir ie ro n 10 pl de l so b re n a d a n te c e lu la r de la p la ca de e n sa yo a la nu eva p laca de m ed io de d e te cc ió n de fo s fa ta s a a lca lin a u sa nd o un B io m ek FX y se m ezc ló 4 vece s . Las p laca s se in cub a ron a T A d u ra n te 20 m in y luego se d e te rm in ó la a b so rb a n c ia a 655 nm en e l T ecan S a fire2.

E nsa yo in fo rm a d o r de cé lu la s de ra tón de S T IN G

El a g o n ism o de la v ía S T IN G de ra tón se e va lú a en c é lu la s R A W Lu c ia (Inv ivo ge n , N° de ca t raw l-isg ) d e riva d a s de la línea c e lu la r de m a cró fa g o s R A W -264.7 de ra tón m ed ia n te la in te g ra c ión e s ta b le de un co n s tru c to in fo rm a d o r de lu c ife ra sa Luc ia in du c ib le p o r in te rfe rón . Las cé lu la s R A W Lu c ia exp re sa n un gen in fo rm a d o r de lu c ife ra sa se c re ta d o ba jo el con tro l de un p ro m o to r m ín im o IS G 54 ju n to con c in co e le m e n to s de resp ue s ta e s tim u la d o s p o r in te rfe rón (IFN ). C o m o resu ltado , las cé lu la s R A W Lu c ia pe rm ite n la m o n ito riza c ió n de la a c tiva c ió n de IR F d e te rm in a n d o la ac tiv ida d de la luc ife rasa . Los n ive les de lu c ife ra sa in d u c id a p o r IRF en e l s o b re n a d a n te de l c u ltivo c e lu la r se eva lú an fá c ilm e n te con Q U A N T I-L u c™ , un rea c tivo de de te cc ió n de lu c ife ra sa . E stas cé lu la s son re s is te n te s a Z eoc in . En es te e n sa yo se u sa 2 '3 'cG A M P co m o con tro l pos itivo . P ara e je c u ta r e l en sayo , se d isp e n sa ro n 100.000 cé lu la s en 90 p l/p o c illo de u n a p la ca de 96 po c illo s tra ta d a con cu ltivo de te jid o de fo n d o p lano tra sp a re n te . Los co m p u e s to s de p ru e b a se a ñ ad ie ro n en un v o lu m e n de 10 pl. El e n sa yo se in cub ó d u ra n te 24 y 48 ho ras a 37° C, C O ² al 5% . D espués de la in cub ac ió n , se tra n s fir ie ro n 20 pl de l s o b re n a d a n te c e lu la r de la p laca de e n sa yo a u n a nu eva p la ca b la n ca de 96 po c illo s y se a ñ ad ie ro n 50 pl de sus tra to Q U A N T I-Luc . La p la ca se incubó, con ag itac ión , a te m p e ra tu ra am b ie n te d u ra n te 5 m inu tos, luego se leyó la lu m in isce n c ia en un E nV is ion 2104 con un t ie m p o de in te g ra c ión de 0,1 s.

E nsa yo de indu cc ión de in te rfe ró n -p hu m ano

S e usan cé lu la s T H P 1 -B lu e ISG p a ra m e d ir la sec re c ió n de IFN -p en el so b re n a d a n te de l cu ltivo de sp u é s de la a c tiva c ió n de la v ía S T IN G . P ara e je c u ta r e l en sayo , los a n ticu e rp o s de ca p tu ra a n ti-IF N -p se recu b rie ron en p laca s M u ltiA rra y de 96 po c illo s (M e so sca le D iscove ry ). D espués de una ho ra de in cub ac ió n , las p laca s se la va ron y se m ezc la ron 50 pl de so b re n a d a n te de las p laca s de e n sa yo de in fo rm a d o r de cé lu la s hu m an as de S T IN G o e s tá n d a re s de IFN -p con 20 pl de a n ticu e rp o de de tecc ió n co n ju g a d o con S u lfo tag en las p laca s recu b ie rtas . Las p laca s se in cub a ron , se ag ita ro n d u ra n te 2 h, se lavaron y se ap licó ta m p ó n de lec tu ra . La e le c tro q u im io lu m in is c e n c ia se m id ió en el S e c to rIm a ge r.

E va lua c ión de la v ía de se ñ a lizac ión c e lu la r de S T IN G

S e m id ió el a g o n ism o de la v ía S T IN G en cé lu la s THP1 B LU E ISG m ed ia n te tra n s fe re n c ia W e s te rn de fo s fo -S T IN G (S 366), fos fo -T B K 1 (S 172) y fo s fo -IR F 3 (S 396). B reve m en te , se m ezc la ron 5 m illon es de cé lu la s en 90 pl de tam pó n de n u c le o fecc ió n con 10 pl de c o m p u e s to s de p ru eb a . E stas m ezc las se so m e tie ro n a e le c tro p o ra c ió n u sa n d o el p ro g ra m a V-001 en un A m a x a N u c le o fe c to r (Lonza ). Las cé lu la s se tra n s fir ie ro n a p laca s de 12 po c illos con m ed io fre sco y se de ja ron re c u p e ra r d u ra n te u n a ho ra a 37° C, C O ² al 5% . Luego, las cé lu la s se lavaron en H B S S fr ío y se lisa ron en ta m p ó n R IP A . Las m ue s tra s se no rm a liza ro n con p ro te ín a to ta l y se d ilu ye ro n en tam pó n de m ue s tra P ro te inS im p le o ta m p ó n de ca rg a LD S. Las m u e s tra s se d e sn a tu ra liza ro n con c a lo r a 95° C d u ra n te 5 m in , luego se usó P eg gyS u e (P ro te in S im p le ) p a ra m e d ir e l fo s fo - y S T IN G to ta l e IR F3 m ie n tras que se usó el s is te m a N u P A G E (Inv itrog en ) p a ra m e d ir T B K 1. Los d a to s se a n a liza ro n u sa nd o e l so ftw a re C o m p a ss o L ico r O dysse y , re sp e c tiva m e n te .

A c tiv id a d en v ivo de S T IN G

P ara to d o s los es tu d io s , se ob tu v ie ro n ra tones B a lb /c h e m bra de C h a rle s R ive r Labs (W ilm in g ton , M A) y se usa ron cu a n d o ten ía n 6-8 sem a na s de edad y pe sab an a p ro x im a d a m e n te 20 g. A to d o s los an im a le s se les pe rm itió a c lim a ta rse y re cu p e ra rse de c u a lq u ie r e s tré s re la c io n a d o con e l tra n sp o rte d u ra n te un m ín im o de 5 d ía s an tes de l uso exp e rim e n ta l. S e p ro p o rc io n ó a g u a c lo ra d a p o r ó sm o s is in ve rsa y a lim e n to irra d ia do (L a b o ra to ry A u to c la va b le R o de n t D iet 5010 , Lab D iet) a v o lu n ta d , y los a n im a le s se m an tu v ie ro n en un c ic lo de luz y o scu rid a d de 12 h. Las ja u la s y las cam a s se e s te riliza ro n en a u toc la ve an tes de su uso y se ca m b ia ro n se m a n a lm e n te . T o d o s los e x p e rim e n to s se lleva ron a cab o de a cu e rd o con la G u ía pa ra el cu id a d o y uso de an im a le s de la b o ra to rio y fue ro n a p ro b a d o s p o r e l C o m ité in s titu c io n a l de cu id a d o y uso de an im a le s de Ja n sse n R & D, S p ring H ouse , PA. C a da g ru p o e xp e rim e n ta l c o n te n ía 8 ra tones. La e fica c ia in v ivo en un m ode lo de tu m o r C T 26 de ra tón se d e te rm in ó im p la n ta n d o su b cu tá n e a m e n te 500.000 cé lu la s tu m o ra le s de ca rc in o m a de co lon C T 26 en ra ton es B a lb /c y p e rm itie n d o que los tu m o re s se e s ta b le c ie ra n a 100 -300 m m 3. Los co m p u e s to s se in yec ta ro n in tra tu m o ra lm e n te fo rm u la d o s en so luc ió n sa lin a ta m p o n a d a con fo s fa to en un v o lu m e n de 0,1 ml p o r in yecc ió n . A los ra ton es se les a d m in is tra ro n 0 ,05 m g c a d a tre s d ía s pa ra un to ta l de tres do s is . La e fic a c ia se m id ió co m o el p o rce n ta je de inh ib ic ión de l c re c im ie n to tu m o ra l (TG I) c a lcu la d o p o r la red ucc ión de l ta m a ñ o de l v o lu m e n de l tu m o r tra ta d o (T) so b re el v o lu m e n de l tu m o r de co n tro l (C) de acu e rd o con la s ig u ie n te fó rm u la . ((C -T )/(C ))*100 cu a n d o to d o s los a n im a le s de con tro l to d a v ía e s ta ban en es tu d io . Las c u ra c io n e s se d e fin ie ro n co m o el n ú m ero de an im a le s sin tu m o r m ed ib le d e te c ta d o 10 ve c e s de d u p lica c ió n de l v o lu m e n de l tu m o r (T V D T ) de sp u é s de que se hubo a d m in is tra d o la ú ltim a dos is .

Los d a to s resu ltan te s se p re sen ta n en la T a b la 2.

T l 2.

E je m p lo b io ló g ico 2

E nsa yo de indu cc ión de c ito q u in a s de P B M C hu m an as p rim a ria s de S T IN G

El a g o n ism o de la v ía S T IN G h u m a n a se e v a lú a en cé lu la s m o n o n u c le a re s de san g re p e rifé r ica (P B M C ) hu m a n a s p rim a ria s d e riva d a s de san g re co m p le ta hum ana . S e e s tra tif ic a 1 p in ta (a p ro x im a d a m e n te 420 m l) de san g re fre s c a de d o n a n te (A llC e lls Inc., A la m ed a , C A ) sob re m ed io de se p a ra c ió n de lin foc ito s (1 ,077 -1 ,080 g /m l, C o rn in g , M an assa s , V A ), luego se ce n trifu g a a 500 g d u ra n te 20 m in a te m p e ra tu ra am b ie n te sin a p lic a r de scan so . L a s P B M C reco g idas en la in te rfase e n tre el sue ro y e l m ed io de se p a ra c ió n de lin foc ito s se recogen , se lavan y lu eg o se cue n tan . L a s P B M C es tá n co m p u e s ta s p o r sub tipo s de lin foc ito s y m on oc ito s , co m o cé lu la s B, cé lu la s T, e tc ., y e s to s su b tip o s se han ca ra c te r iza d o en la b ib lio g ra fía p a ra e x p re s a r d ife re n te s n ive le s de la p ro te ín a S T IN G . En re sp u e s ta a los a g o n is ta s de S T IN G , co m o 2 '3 '-cG A M P , e s ta s cé lu la s se ac tiva n y son in du c ida s a e x p re s a r una va rie d a d de c ito q u in a s p ro in fla m a to ria s y an tiv ira les . A de m ás , tra s la e s tim u la c ió n con ag o n is ta s de S T IN G , es ta s cé lu la s regu lan p o r in c rem en to los m a rca d o re s de a c tiva c ió n . Los n ive le s de in du cc ión de c ito q u in a s pu ed en m ed irse m ed ia n te u n a va rie d a d de m é tod os q u e in c luyen E LIS A , Lu m in e x y M S D . Los n ive les de reg u lac ió n p o r in c rem en to de l m a rca d o r de ac tiva c ió n se pu ed en m e d ir m ed ia n te c ito m e tría de flu jo .

P ara e je c u ta r e l en sayo , pu ed en d is p e n s a rs e 1.000.000 de cé lu la s en 225 |jl/p o c illo de p laca s de 96 po c illo s de fo n d o p lan o tra ta d a s con c u ltivo de te jid o s . Los co m p u e s to s de p ru e b a pu ed en añ a d irse en un vo lu m e n de 25 j l a u n a c o n ce n tra c ió n de 10x. A lg u n o s co m p u e s to s p u ed en so lu b iliza rse en D M S O al 100% y la co n ce n tra c ió n fin a l de D M S O en los cu ltivo s que rec iben e s to s co m p u e s to s pu ede s e r de l 1% . El e n sa yo puede in cu b a rse d u ra n te 48 h a 37° C, 5% de C O ². P ueden reco ge rse 200 j l de so b re n a d a n te s sin a lte ra r las cé lu la s en el fo n d o de la p laca , luego p u ed en c o n g e la rse a -20° C ha s ta e l m o m e n to de la m ed ic ió n con Lum inex . Los e n sayo s Lu m in e x p u ed en re a liza rse u sa nd o G -C S F , IFN a2, IFN ^y , IL-1 b, IL-6, IL-10 , IL -12 (p40), IL -12 (p70), T N F a de l k it de e n sa yo M u ltip le x de in m u n o lo g ía -pa n les de pe rla s m a g n é tica s de c ito q u in a /q u im io c in a M IL L IP L E X M A P y ana lito I FNp1 de l k it de pe rla s m a g n é tica s de c ito q u in a s /q u im io c in a s M IL L IP L E X M A P Panel IV (E M D M illipo re , B ille rica , M A), s ig u ie nd o e l p ro to co lo de l fa b rica n te . La in ducc ión de c ito q u in a s pu e d e m ed irse u sa nd o un in s tru m e n to L u m in e x F lexM A P 3 D ® (L u m in e x C o rpo ra tion , R adnor, Pa.). El a n á lis is de los da tos de Lu m in e x reco p ilad os puede rea liza rse u sa nd o e l so ftw a re M IL L IP L E X A n a lys t (E M D M illipo re ).

S u p re s ió n de l v iru s V H B en cé lu la s PHH u sa n d o m ed io s a c o n d ic io n a d o s de P B M C hu m an as p rim a ria s ac tiva d a s po r S T IN G

Los he p a to c ito s hu m a n o s p rim a rio s p u ed en in fe c ta rse con e l v iru s de la he pa titis B y, d u ra n te u n a in fecc ión e s ta b le c id a , p ro d u c irá n p ro te ín a s v ira le s co m o H B sA g y H B eA g q u e pu eden d e te c ta rse m ed ia n te E LIS A . El tra ta m ie n to te ra p é u tic o con c o m p u e s to s co m o e n te c a v ir pued e su p rim ir la rep rod ucc ió n de l V H B , lo q u e puede m ed irse p o r la d ism in u c ió n de la p ro d u cc ió n de p ro te ín a s v ira le s . (N° de cé lu la s ) pu ed en d isp e n sa rse 4 x 105 c é lu la s /p o c illo de h e p a to c ito s hu m an os p rim a rio s (B io R e c la m a tio n , W es tbu ry , NY) en 500 jl /p o c il lo de p laca s de 24 po c illo s tra ta d a s con cu ltivo de te jid o s de fo n d o p lano . 24 h m ás ta rd e , las cé lu la s pu ed en in fe c ta rse con 30 -75 m oi de V H B . A l d ía s ig u ie n te , e l PHH pu e d e la va rse 3 v e c e s y pu ed en añ a d irse m ed io s de m a n te n im ie n to nu evo s a las cé lu la s . C o n cu rre n te m e n te las P B M C p u ed en a is la rse co m o se ha d e sc rito an te rio rm e n te . P a ra e s tim u la r las P BM C , p u ed en d is p e n s a rs e 10.000.000 de cé lu la s en 400 j l /p o c il lo de p laca s de 24 po c illo s tra ta d a s con c u ltivo de te jid o s de fo n d o p lano . Los co m p u e s to s de p ru e b a p u ed en añ a d irse en un v o lu m e n de 100 j l , lu eg o los c u ltivo s pueden in cub a rse d u ra n te 48 h a 37° C, 5% d e C O ². P ueden reco ge rse los so b re n a d a n te s . Las cé lu la s pu ed en m ed irse pa ra la reg u lac ió n p o r in c re m e n to de l m a rca d o r de ac tiva c ió n u sa nd o c ito m e tría de flu jo . B reve m en te , las cé lu la s pueden te ñ irs e con a n ticu e rp o s m arca do s con flu o re s c e n c ia d ir ig id o s a C D 56, C D 19 , C D 3, C D 8a, C D 14, C D 69, C D 54, C D 161 , C D 4 y C D 80. Las m u e s tra s p u ed en a n a liza rse en un c itó m e tro de flu jo A ttu n e N xT (T herm o F isher, C a rlsba d , CA)

De los c u ltivo s de P B M C es tim u la d o s , pu e d e rese rva rse una pa rte de l so b re n a d a n te pa ra la de tecc ió n de c ito q u in a s p o r Lum inex , co m o se ha d e sc rito an te rio rm e n te . El res to de l so b re n a d a n te pu e d e d iv id irse p o r la m itad y pu ed e a lm a ce n a rse una a lícu o ta a 4° C pa ra su uso en e l d ía 8 de l en sayo . La o tra a lícu o ta de so b re n a d a n te pu ede d ilu irse 1 :1 con m ed io PHH 2x, lu eg o pued e añ a d irse a las cé lu la s PHH in fe c ta d a s con d4. D e spu és de 96 h, puede c a m b ia rs e e l m ed io g a s ta d o y pu ed e añ a d irse el s o b re n a d a n te a una d iluc ión de 1:1 con m ed io 2x PHH . En este pun to , pued e rea liza rse u n a m ed ic ió n in te rm e d ia de H B sA g u sa nd o un kit E L IS A de H B sA g (W an ta i B io -pharm , B e ijing , C h ina ). D e spu és de 96 h, pu eden reco ge rse los m ed io s y pued e m ed irse el H B sA g .

A u n q u e la m e m o ria d e sc r ip tiva a n te r io r e n s e ñ a los p rin c ip io s de la p re se n te invenc ión , con e je m p lo s p ro p o rc io n a d o s con p ro p ó s ito s de ilu s trac ió n , se e n te n d e rá q u e la p u e s ta en p rá c tica de la inven c ión a b a rca las v a ria c io n e s , a d a p ta c io n e s y /o m o d ifica c io n e s h a b itu a le s qu e en tra n d e n tro de l a lca n ce de las s ig u ie n tes re iv ind ica c ion es .

Claims (13)

R E IV IN D IC A C IO N E S

1. Un co m p u e s to de F ó rm u la (I)

q u e es un c o m p u e s to s e le cc io n a d o de l g ru p o q u e co n s is te de los s ig u ie n te s c o m p u e s to s :

ı82

ı83

ı84

ı85

y

o u n a sal fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le de los m ism os

2. El co m p u e s to de la re iv ind ica c ión 1 se le cc io n a d o de l g ru p o qu e co n s is te de

ı88



o u n a sal fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le de los m ism os.

3. U na c o m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a que co m p re n d e un co m p u e s te de la re iv ind ica c ión 1 o la re iv in d ica c ió n 2 y p o r lo m enos uno de un p o rta d o r fa rm a c é u tic a m e n te ace p tab le , un e xc ip ie n te fa rm a c é u tic a m e n te ace p tab le , y un d ilu ye n te fa rm a c é u tic a m e n te acep tab le .

4. La c o m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a de la re iv in d ica c ió n 3, en d o n d e la c o m p o s ic ió n es una fo rm a de d o s ifica c ió n o ra l só lida .

5. La c o m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a de la re iv ind ica c ión 3, en d o n d e la c o m p o s ic ió n es un ja ra b e , un e lix ir o una susp en s ión .

6. El co m p u e s to de la re iv ind ica c ión 1 o 2 pa ra su uso en e l tra ta m ie n to de un a e n fe rm e d a d , s ín d ro m e o a fe cc ión m o d u la d a p o r S T IN G .

7. El c o m p u e s to de la re iv ind ica c ión 1 o 2 pa ra su uso en e l tra ta m ie n to de una en fe rm e d a d , s ín d ro m e o a fe cc ión , en do n d e d ic h a e n fe rm e d a d , s ín d ro m e o a fe cc ión se ve a fe c ta d a po r e l a g o n ism o de S T IN G .

8. El co m p u e s to pa ra e l uso de acu e rd o con la re iv in d ica c ió n 6 o la re iv in d ica c ió n 7, en d o n d e la en fe rm e d a d , s ín d ro m e o a fe cc ión es cáncer.

9. El co m p u e s to pa ra e l uso de acu e rd o con la re iv in d ica c ió n 8, en d o n d e d icho c á n c e r es m e lan om a , c á n c e r de co lon , c á n c e r de m am a, cá n c e r de p ró s ta ta , c á n c e r de pu lm ón , o fib ro sa rco m a .

10. El co m p u e s to p a ra e l uso de acu e rd o con la re iv in d ica c ió n 7, en do n d e d ich a e n fe rm e d a d , s ín d ro m e o a fe cc ión es una in fecc ión v ira l.

11. El co m p u e s to pa ra e l uso de acu e rd o con la re iv ind ica c ión 10, en d o n d e la in fecc ión v ira l es h e pa titis B.

12. El co m p u e s to de la re iv ind ica c ión 1 o la re iv ind ica c ión 2, y un v iru s o n co lít ico o v a cu n a co n tra e l c á n c e r pa ra su uso en el tra ta m ie n to de u n a e n fe rm e d a d , a fe cc ión o tra s to rn o , en do nd e d ic h a en fe rm e d a d , a fe cc ión o tra s to rn o se ve a fe c ta d a p o r el a g o n ism o de S T IN G .

13. El co m p u e s to p a ra el uso de acu e rd o con la re iv ind ica c ión 12, en d o n d e la v a c u n a co n tra e l c á n c e r es una v a c u n a de a n tíg eno s , v a c u n a de cé lu la s co m p le ta s , va c u n a de a c tiva c ió n de cé lu la s de n d rítica s , v a c u n a de B ac illu s C a lm e tte -G u é rin (B C G ), S ip u le u ce l-T (P rove ng e ), T a lim o g e n e la h e rp a re p ve c (T -V ec; Im lyg ic™ ), v a c u n a b a sa d a en v iru s o n co lítico s , o v a c u n a b a sa d a den ad en ov iru s .