ES2983333T3 - Procedimiento para la preparación de muestras biológicas y composición para montar portaobjetos de microscopio - Google Patents
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Abstract
El objeto de la presente invención es un método para la preparación de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autopsias y una composición para el montaje de portaobjetos de microscopio. Son también objeto de la invención las muestras montadas con las composiciones descritas en la presente memoria. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Procedimiento para la preparación de muestras biológicas y composición para montar portaobjetos de microscopio Sumario de la invención
El contenido de la presente invención es un procedimiento para la preparación de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas y una composición para montar portaobjetos de microscopio.
Antecedentes de la invención
En el diagnóstico histo-citopatológico, la observación microscópica de muestras biológicas sirve para la formulación del diagnóstico.
La preparación de muestras biológicas, es decir tejidos y células, es un proceso de múltiples etapas que hace uso de tecnologías automáticas y/o protocolos manuales para hacer que la propia muestra sea adecuada para la observación con un microscopio.
Como es sabido en la técnica, las muestras son sometidas a varios procedimientos que proporcionan fijación, diafanización y tinción, antes de ser “montadas” en un portaobjetos de microscopio para el análisis con un microscopio.
El “montaje” consiste en cubrir la muestra que se encuentra en el portaobjetos de microscopio con un cubreobjetos, que normalmente tiene un grosor inferior a un milímetro. Se logra la adhesión estable del cubreobjetos al portaobjetos de microscopio utilizando un medio de montaje que tiene un índice de refracción similar al del portaobjetos de microscopio.
Los medios de montaje son sustancias viscosas, normalmente solubles en disolventes orgánicos, que actúan como un adhesivo y, una vez secadas, garantizan una buena conservación de la muestra. Además, es un requisito fundamental que todos los materiales utilizados para el montaje sean ultratransparentes, para permitir que la luz procedente de la fuente de luz alcance cuantitativamente el objetivo. El medio más común de montaje es el bálsamo de Canadá (también conocido habitualmente como trementina de Canadá).
Entonces, el portaobjetos de microscopio montado experimenta la observación bajo el microscopio óptico, para formular el diagnóstico.
El montaje de los portaobjetos de microscopio es un tipo de empaquetamiento de la muestra histo-citopatológica y afecta en gran medida a su legibilidad ya su estabilidad temporal con el paso del tiempo.
El objeto del montaje es, por lo tanto, permitir que la muestra que ha de analizarse esté dentro de medios con índices de refracción adecuados, es decir, similares a los del vidrio, para evitar posibles distorsiones de la imagen durante la observación con microscopio.
Otro fin del montaje es proteger la muestra y permitir su conservación durante periodos prolongados.
En el procedimiento práctico de montaje de los portaobjetos de microscopio, después de que se ha llevado a cabo la tinción con sustancias solubles en agua (tal como la tinción típica de hematoxilina y eosina), es necesario proceder a la deshidratación de la muestra por medio de inmersiones en una escala crecientemente alcohólica del portaobjetos de microscopio, con un último paso en xileno. La deshidratación es necesaria dado que el anterior medio de montaje no puede ser mezclado con agua o soluciones del mismo. Tras una deshidratación apropiada se deposita una parte alícuota del medio de montaje en el portaobjetos de microscopio de una pipeta desechable, prestando atención a cualquier exceso del medio. Inmediatamente después, se coloca el cubreobjetos delgado en el portaobjetos de microscopio.
Este procedimiento puede realizarse manual o automáticamente, utilizando montadores automáticos de cubreobjetos.
Un montador automático estándar de cubreobjetos puede aplicar secuencialmente los cubreobjetos sobre los portaobjetos de microscopio que portan la sección de muestra, tomándolos directamente del cestillo utilizado para la tinción. Al final de la tinción, se coloca el cestillo en una bandeja del montador automático de cubreobjetos, subsiguientemente una pinza toma del cestillo un portaobjetos de microscopio en cierto momento y lo coloca en una posición horizontal debajo de la boquilla que suministra el medio de montaje.
Después de que se ha suministrado una parte alícuota del medio de montaje, una ventosa coloca un cubreobjetos sobre el portaobjetos de microscopio, completando, de esta manera, la organización de la preparación. Algunos de estos montadores automáticos de cubreobjetos no utilizan cubreobjetos, sino más bien una película liberada sobre la superficie del portaobjetos de microscopio después de que ha sido empapada de forma apropiada con xileno para permitir una adhesión apropiada.
Sin embargo, el procedimiento de montaje de la muestra descrito anteriormente, utilizado de forma apropiada, tiene varias desventajas.
Cuando se emplea un procedimiento manual de montaje, existirá la necesidad de utilizar la campana de humos. De hecho, es utilizada para limitar el riesgo que se deriva del uso de sustancias tóxicas tales como xileno, que es utilizado para el tratamiento de las secciones, así como también como diluyente del medio de montaje.
Además, existe el problema crítico del posicionamiento apropiado del cubreobjetos sobre el portaobjetos de microscopio (tanto en el caso de un montaje manual como automático). Puede ocurrir que el cubreobjetos sobresalga ligeramente de los bordes del portaobjetos de microscopio, y en los casos de mayor desalineación, el cubreobjetos tiene que ser montado de nuevo por el usuario. Sin embargo, tal operación se vuelve irreversible una vez que se seca el medio de montaje. Si se operase con el medio de montaje secado, el portaobjetos montado de microscopio permanecería en el xileno en algunos casos durante hasta 3-4 días antes de poder retirar el cubreobjetos desalineado, para montar, entonces, otro de nuevo. Además, los microscopios tienen una presilla metálica enganchada a la bandeja móvil, útil para mantener el portaobjetos de microscopio fijo durante la observación. Durante el posicionamiento del portaobjetos de microscopio bajo la lente, la presilla metálica golpea enérgicamente el portaobjetos montado de microscopio, provocando, de esta manera, la rotura de pequeños fragmentos de los bordes del portaobjetos de microscopio. El posicionamiento incorrecto del cubreobjetos sobre el portaobjetos de microscopio puede empeorar de forma significativa el mellado del portaobjetos de microscopio montado en el microscopio, dado que los fragmentos creados se acumulan en la lámpara del microscopio, colocada debajo del portaobjetos de microscopio) y, además, dejan bordes mellados peligrosos del portaobjetos montado de microscopio. Además, el problema más frecuente es la posible formación de burbujas de aire entre el cubreobjetos y la muestra. Durante el procedimiento de montaje, las burbujas de aire se forman como consecuencia de la manipulación del usuario, mediante el simple desplazamiento del recipiente o mediante la recogida del medio de montaje con la pipeta (cuando se ha depositado un exceso del medio de montaje). Todas estas operaciones provocan el deslizamiento del cubreobjetos sobre el portaobjetos de microscopio, provocando que se incluyan pequeñas burbujas de aire en el medio de montaje. Estas permanecen atrapadas en el mismo debido a su viscosidad elevada, provocando, por lo tanto, problemas a la observación apropiada con el microscopio. También se puede producir el mismo problema con los sistemas de montaje automático (montador de cubreobjetos).
Una desventaja adicional hace referencia a un administración imprecisa y posiblemente abundante del medio de montaje. Cuando esto se produce, será necesario retirar el exceso del medio de montaje que se sale del portaobjetos montado de microscopio, dado que tiene un poder adhesivo intenso, haciendo claramente difícil, por lo tanto, la manipulación por parte del usuario. La eliminación del exceso del medio de montaje es un proceso delicado, dado que posibles corrimientos del fluido sobre el cubreobjetos pondrían en peligro la observación con el microscopio.
El “desmontaje” de la preparación es otro problema crítico. De hecho, en aquellos casos en los que existe la necesidad de recuperar la muestra biológica del portaobjetos de microscopio montado desde hace mucho tiempo (con el objetivo de llevar a cabo pruebas adicionales), para poder retirar el cubreobjetos, según se ha mencionado, el portaobjetos montado de microscopio debe permanecer en el baño de xileno durante al menos 3 días. De hecho, según pasa el tiempo, el medio de montaje se vuelve menos propenso a ser solubilizado en xileno (disolventead hocpara la solubilización y/o la disolución de los medios más comunes de montaje). Además, si no se lleva a cabo de forma apropiada el procedimiento de resolubilización del medio de montaje, la retirada del cubreobjetos provoca la separación de la muestra del portaobjetos de microscopio o la retirada de parte del mismo, dañando, por lo tanto, de forma irremediable el uso de la propia muestra para las pruebas adicionales necesarias.
Por lo tanto, es evidente que el montaje requiere mucho tiempo, siendo proporcional al número de los portaobjetos de microscopio que han de ser montados y también debido a la precisión elevada requerida para la aplicación del medio de montaje y del cubreobjetos. A este tiempo se debería añadir el tiempo requerido para el secado completo de los portaobjetos montados de microscopio. Por lo tanto, para acelerar el proceso de secado, los portaobjetos montados de microscopio se incuban en un horno a 60°C durante aproximadamente 30 minutos.
Con respecto al procedimiento automático, existen otras desventajas con respecto al procedimiento manual. Entre estas, existe la calibración fina del instrumento. Dado que el procedimiento de montaje requiere una precisión significativa, el instrumento necesita una calibración milimétrica para evitar errores macroscópicos de preparación. Por ejemplo, una calibración imprecisa del mecanismo que mueve la pinza puede dar lugar a la rotura del portaobjetos de microscopio; análogamente, el posicionamiento descentrado del cubreobjetos obliga al usuario a desmontar y montar de nuevo la preparación. Además, todos los componentes del aparato aspirar el medio de montaje deben ser perfectamente firmes para evitar la formación de burbujas de aire.
También existen montadores automáticos de cubreobjetos que utilizan una película en vez del cubreobjetos; tales montadores de cubreobjetos requieren una calibración precisa, para garantizar que la película se extienda uniformemente y no provoque artefactos en el portaobjetos de microscopio.
Además, dado que es un instrumento de alta precisión, debe colocarse sobre una mesa dedicada aislada de las vibraciones y, posiblemente, también sobre un suelo antivibraciones. Además, es ventajoso colocar el instrumento debajo de la campana en una posición perfectamente horizontal, y las operaciones de limpieza se llevan a cabo normalmente con xileno.
Además, se requieren diariamente los procedimientos de limpieza del instrumento. Al final del uso del montador automático de cubreobjetos, se deben eliminar los residuos del medio de montaje de las unidades de distribución, del enganche y de la cinta transportadora, al igual que de la boquilla que administra el medio de montaje. Tales procedimientos de limpieza son llevados a cabo con un trapo empapado con xileno, que es tóxico para el usuario, en particular si el instrumento no se coloca debajo de una campana de humos. También se debería tener mucho cuidado para evitar la penetración de líquidos en el instrumento y en los contactos eléctricos. Además, en el supuesto caso de que quedase algo de disolvente en el instrumento, podrían salir vapores del disolvente. Con el uso del aparato sin una campana de humos, existe el riesgo de incendio y de intoxicación.
Dado que es frecuente la rotura de pequeños fragmentos del portaobjetos de microscopio, debido a pequeñas imperfecciones en la calibración del sistema completo, es necesaria la eliminación de los fragmentos mencionados anteriormente de la cinta transportadora, del cestillo que acumula los portaobjetos de microscopio, del cestillo de carga, de la ventosa y del compartimento interno del instrumento. Además, son claramente necesarios varios procedimientos de mantenimiento de los instrumentos utilizados.
Finalmente, los portaobjetos de microscopio para el análisis de inmunohistoquímica tienen, a menudo, una etiqueta de código de barras en el extremo esmerilado, aun antes de que se coloque la muestra biológica. Tal etiqueta, necesaria para la identificación, puede ser una fuente de fallo del enganche del montador automático de cubreobjetos, dado que tienden a acumularse residuos de cola procedentes de la etiqueta en los enganches, haciendo necesaria, por lo tanto, una limpieza con xileno.
En vista de lo anterior, es evidente que existe la necesidad de encontrar sistemas para montar los portaobjetos de microscopio que puedan solucionar las distintas desventajas relacionadas con el proceso convencional de montaje de las muestras biológicas.
Objetos de la invención
Un objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento rápido y eficaz para montar portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar una nueva composición particularmente adecuada para el procedimiento de la invención para montar portaobjetos de microscopio de la invención, para el análisis de muestras citológicas, histológicas y autópsicas.
También es un objeto de la presente invención proporcionar una composición que permita que se obtenga un portaobjetos montado de microscopio sin burbujas ni imperfecciones y que, al mismo tiempo, proporcione ventajas adicionales, tales como una protección adecuada del propio portaobjetos de microscopio.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar el uso de dicha composición para la preparación de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas para su observación con microscopio.
Descripción de la invención
La presente invención versa acerca de un procedimiento para montar portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas, que comprende:
(i) sumergir dichos portaobjetos de microscopio en al menos una composición fluida que comprende:
a) al menos un componente líquido seleccionado entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y disolventes a base de isoparafina; y
b) uno o más polímeros o copolímeros seleccionados entre metacrilato de polimetilo, metacrilato de polietilo, metacrilato de polibutilo, acrilato de polimetilo y acrilato de polietilo, en una cantidad de un 15%-80% ([g de polímero (b)/100 ml de la composición final]).
Según una realización, el contenido de la invención es un procedimiento para montar portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas, que comprende:
(i) sumergir dichos portaobjetos de microscopio en al menos una composición fluida que comprende:
a) al menos un componente líquido seleccionado entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y disolventes a base de isoparafina; y
b) uno o más polímeros o copolímeros seleccionados entre metacrilato de polimetilo, metacrilato de polietilo, metacrilato de polibutilo, acrilato de polimetilo y acrilato de polietilo, en una cantidad de un 15%-80% ([g de polímero (b)/100 ml de la composición final]).
(ii) extraer dichos portaobjetos de microscopio de la composición;
(iii) dejar que escurran;
(iv) repetir, opcionalmente, las etapas (i) a (iii); y
(v) dejar que sequen al aire o secarlos con un medio adecuado.
Las etapas (i) a (iii) pueden ser repetidas dos o más veces; en general, son suficientes dos inmersiones. Cuando se llevan a cabo dos o más inmersiones, las composiciones pueden ser idénticas o distintas entre sí, en lo que respecta a los componentes y las concentraciones.
Según una realización, se llevan a cabo dos inmersiones en dos composiciones idénticas, que tienen, preferiblemente, una concentración del componente (b) de aproximadamente un 20%.
Según una realización, se llevan a cabo dos inmersiones en dos composiciones distintas, teniendo la primera composición utilizada una concentración del componente (b) de aproximadamente un 30% y la segunda aproximadamente un 20%.
Sin embargo, son posibles otras realizaciones y todas ellas se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
En el procedimiento de la presente invención, la inmersión y el escurrido solo requieren unos segundos/minutos, como se describirá con más detalle en la presente memoria y en los ejemplos.
La etapa (v) de secado puede ser llevada a cabo con cualquier medio adecuado conocido en la técnica, por ejemplo debajo de una campana de humo, en el horno, etc.
Todos los porcentajes expresados en la presente invención, a no ser que se indique claramente algo distinto, hacen referencia a la concentración porcentual de masa/volumen ([g/100 ml]), es decir al peso del componente (b) con respecto a 100 unidades volumétricas de la composición final. En la práctica, a modo de ejemplo, según la presente invención, una composición del 20% indica que en la composición hay 20g de polímero (b) al que se ha añadido el componente líquido (a) en una cantidad adecuada para alcanzar un volumen total de 100 ml.
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 20-70%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 20-50%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 20-40%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 30-70%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 30-60%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 30-40%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 40-70%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 40-60%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 40-50%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 50-70%
Según una realización, dichos uno o más pol ímeros (b) suponen un 60-70%
Según una realización preferida, dichos uno o más polímeros (b) suponen una cantidad de un 10-50%, aún más preferiblemente de un 20-40% o un 25-45%.
Según la presente invención, “inmersión”, “inmersiones” o “sumergir” (o conjugaciones verbales derivadas) denota que el portaobjetos de microscopio se introduce, generalmente verticalmente, en la composición fluida para cubrirlo. En la presente invención, “disolventes a base de parafina” denota un componente líquido que comprende, entre las otras sustancias, mezclas de hidrocarburos alifáticos que tienen, preferiblemente, hasta 13 átomos de carbono, suponiendo dichas mezclas de hidrocarburos cantidades, en el componente líquido, preferiblemente superiores a un 40%, de forma ventajosa al menos un 50%, tales como los productos comercializados por el solicitante con las marcas registradas Diasolv® y Ottix Plus®.
Según una realización preferida, el componente líquido (a) se selecciona entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y mezclas de los mismos. El contenido de la invención, según otro de los aspectos de la misma, es una composición para montar un portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas, que comprende:
a') un componente líquido seleccionado entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y mezclas de los mismos; y
b') un copolímero de metacrilato de metilo y de metacrilato de butilo, en una cantidad de un 15%-80% ([g de polímero (b')/100 ml de la composición final]).
En la presente memoria, también se define dicha composición como la “composición de la invención”.
Por otra parte, la expresión “composiciones descritas en la presente memoria” hace referencia tanto a la composición de la invención como a la composición descrita anteriormente en su lugar, junto con el procedimiento de la invención.
Según una realización preferida, el componente líquido (a') de la composición de la invención se selecciona entre acetato de etilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y mezclas de los mismos.
Según una realización preferida, el copolímero (b') de la composición de la invención se selecciona entre un copolímero de metacrilato de metilo y de metacrilato de butilo, por ejemplo entre los productos comercializados en la actualidad con las marcas registradas Paraloid B-64® y Elvacite 4021®.
Según una realización preferida, en la composición de la invención dicho copolímero (b') se encuentra en una cantidad de un 10-50%, aún más preferiblemente de un 20-40% o un 25-45%.
Según una realización preferida, la composición de la invención comprende al menos un agente de estiramiento, tal como, por ejemplo, el polimetilalquilsiloxano modificado con poliéter, preferiblemente en una cantidad de un 0,1-0,3%.
El contenido de la invención, según otro de los aspectos de la misma, es el procedimiento descrito anteriormente que utiliza la composición de la invención. El contenido de la invención también es el uso de la composición de la invención para la preparación de portaobjetos de microscopio de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas (en el presente documento, a continuación, también definidas únicamente como muestras biológicas). Las composiciones descritas en la presente memoria pueden asimilarse esencialmente a una resina y son útiles para montar muestras, normalmente biológicas, en microscopía óptica.
En la presente invención, “resina” denota un material viscoso líquido, que puede endurecerse en condiciones específicas, como se explicará a continuación.
En la presente invención, “montaje” denota, en el proceso para la preparación de una muestra normalmente biológica, por ejemplo histológica o citológica, pero también de otros tipos, la etapa final en un portaobjetos de microscopio llevada a cabo, normalmente, para llevar a cabo un análisis con microscopio, como es bien conocido por el experto en la técnica.
Según algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria también pueden comprender otros componentes además de los mencionados anteriormente.
De hecho, en una realización, las composiciones descritas en la presente memoria comprenden, además, uno o más medios de montaje comercializados en la actualidad con las marcas registradas Diamount® (comprende isoparafinas), Micromount® (comprende xileno y etilbenceno), Eukitt® (comprende xileno) y OpticMount® (comprende polímeros de tolueno y acrilato), en una cantidad desde un 5% a un 30% v/v con respecto al volumen total de la composición formada por (a) o (a') y (b) o (b').
Las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender componentes que pueden mejorar la adhesión de las composiciones al portaobjetos de microscopio (compuestos “potenciadores de enlaces”), tales como uno o más derivados funcionalizados de organosilano, preferiblemente Y-metaacriloxipropiltrimetoxisilano; tales componentes se encuentran, preferiblemente, a un 0,5%-10% y, más preferiblemente, a un 1%-5%.
Además, las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender agentes de antirrayado, tales como polisiloxanos (es decir, siliconas) y/o parafina, preferiblemente polidimetilsiloxano y/o un agente de estiramiento tal como un polimetilalquilsiloxano modificado con poliéter, tal como el producto comercializado en la actualidad con la marca registrada BYK-320®; tales componentes se encuentran, preferiblemente, en una cantidad de un 0,01%-5% y, más preferiblemente, de un 0,1%-1%.
Las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender, además, antioxidantes, preferiblemente fenoles y/o aminas aromáticas funcionalizados, aún más preferiblemente butilhidroxitolueno (BHT); tales componentes se encuentran, preferiblemente a un 0,05-2% y, más preferiblemente, a un 0,1%-1%.
Las composiciones descritas en la presente memoria también pueden comprender algunos componentes con capacidad para proteger la propia composición de la luz UV (“absorbentes de radiación UV”), preferiblemente benzofenonas y/o benzotriazoles funcionalizados, tales como, por ejemplo, 2-hidroxibenzofenona, 4-hidroxibenzofenona y 2-hidroxifenil benzotriazol. Tales componentes se encuentran, preferiblemente, a un 0,01%-2% y, más preferiblemente, a un 0,1%-1%.
Las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender, además, plastificantes, preferiblemente al menos un plastificante seleccionado entre la familia de ftalatos, adipatos y benzoatos; preferiblemente a un 0,05%-5%, preferiblemente a un 0,1%-3%.
El experto en la técnica puede comprender perfectamente la utilidad de cada uno de los componentes mencionados anteriormente en la composición.
El proceso para la preparación de las composiciones descritas en la presente memoria no requiere condiciones o procedimientos críticos. De hecho, el proceso puede producirse completamente a temperatura ambiente y puede ser llevado a cabo en un recipiente, preferiblemente opaco o ámbar, dotado de un tapón u otro tipo de cierre para evitar la evaporación del componente líquido. A este recipiente se añade el componente líquido y luego, con agitación mecánica o magnética, se añaden los otros elementos que componen las composiciones descritas en la presente memoria o en una de las realizaciones preferidas de las mismas. Finalmente, se deja bajo agitación hasta obtener una mezcla homogénea transparente. En la sección experimental se proporcionan ejemplos prácticos del proceso para la preparación de algunas realizaciones ilustrativas.
Las composiciones descritas en la presente memoria, como se explicará ampliamente a continuación, pueden proteger de forma eficaz la muestra biológica y no generan distorsiones bajo el microscopio, dado que son ultratransparentes y, además, reproducen todas las características funcionales de un cubreobjetos. Además, las composiciones descritas en la presente memoria se caracterizan por una adhesión elevada al portaobjetos de microscopio, una resistencia a esfuerzos mecánicos y una estabilidad elevada en el tiempo. Además, por su naturaleza, las composiciones descritas en la presente memoria no interfieren con el material, sin producir alteraciones o artefactos en la estructura o una tinción de la muestra.
La combinación peculiar de los polímeros que componen las composiciones descritas en la presente memoria confiere flexibilidad y rigidez al mismo tiempo al material. Es evidente que se necesita un cierto nivel de flexibilidad para crear una capa aplanada y homogénea en toda el área del portaobjetos de microscopio, que cubre uniformemente el portaobjetos de microscopio en aproximadamente 3-6 micrómetros, sin el riesgo de roturas en los bordes de la sección después de que se seca completamente la composición. Al mismo tiempo, es necesario que las composiciones descritas en la presente memoria estén dotadas de tal rigidez para crear una barrera de protección, por ejemplo, que sean resistentes a esfuerzos mecánicos, protegiendo, por lo tanto, a la muestra de forma eficaz.
Además, las composiciones descritas en la presente memoria tienen un índice de refracción muy cercano al del portaobjetos de microscopio (1,48-1,50), pareciendo, de ese modo, ultratransparente a simple vista (como se representa en la Figura 3).
Las composiciones descritas en la presente memoria, preferiblemente las composiciones según la invención, son particularmente adecuadas para el montaje de portaobjetos de microscopio para la observación con microscopio, dado que no crean aberraciones, distorsiones y alteraciones del color de la muestra biológica; de hecho, es posible hacer notar a partir de la Figura 4, que muestra la imagen de microscopio de una muestra biológica montada con las composiciones descritas en la presente memoria, que la muestra se ve ultratransparente, perfectamente adecuada para la observación, y no tiene ninguna distorsión ni aberración.
Es posible modular con precisión la viscosidad de las composiciones descritas en la presente memoria para evitar la incorporación de burbujas de aire y, al mismo tiempo, fomentar tanto la adhesión de una capa de grosor adecuado sobre el portaobjetos de microscopio como el autoaplanado de la composición tras su aplicación. Se puede obtener la modulación de la viscosidad modificando las proporciones entre polímeros y el componente líquido; como es evidente para un experto en la técnica, al aumentar la cantidad del componente líquido en las composiciones descritas en la presente memoria se reducirá la viscosidad, y viceversa.
Además, la inmiscibilidad completa de las composiciones descritas en la presente memoria con agua hace que sean un material que no puede ser alterado por la humedad del aire. Por otra parte, resulta ser soluble en xileno, tolueno y disolventes a base de limoneno y en disolventes a base de isoparafina.
En aquellos casos en los que es necesario desmontar el portaobjetos montado de microscopio, por ejemplo para un análisis adicional del material histo-citológico, se pueden eliminar las composiciones descritas en la presente memoria del portaobjetos de microscopio mediante una simple inmersión en uno de los disolventes mencionados anteriormente, además de disolventes o mezclas de disolventes que estén en las composiciones y con capacidad de solubilizar la composición. La operación de resolubilización de la composición y de desmontaje de la muestra requiere poco tiempo, es decir algunos minutos (5-7 minutos), significativamente menor que el mismo procedimiento que permite el uso de portaobjetos de microscopio montados convencionalmente, es decir mediante un medio de montaje y un cubreobjetos, lo que requiere varios días.
Por lo tanto, es evidente que la aplicación de las composiciones descritas en la presente memoria sobre la superficie del portaobjetos de microscopio da lugar a varias ventajas con respecto al proceso convencional de montaje. De hecho, según se ha mencionado, tal aplicación crea una película ultratransparente aplanada uniforme libre de burbujas de aire y no requiere la aplicación del cubreobjetos, como en la técnica conocida y convencional, y permite un desmontaje rápido y tiene características adecuadas de rigidez y de flexibilidad.
El hecho de que no se requiera la aplicación de un cubreobjetos es un resultado importante proporcionado por la presente invención.
En algunos casos esporádicos, por ejemplo a una ampliación de 40x o mayor, es posible que la observación de la muestra que ha de ser analizada sea subóptima. Sin embargo, se ha comprobado que es posible corregir un posible enfoque imperfecto aplicando simplemente un cubreobjetos (de circunferencia muy pequeña, proporcional a la de la lente del objetivo) por medio de una mezcla adhesiva a base de agua que no dañe la propia lente del objetivo y que pueda ser retirado con facilidad. Por lo tanto, en el caso en el que la muestra montada según la invención no fuese perfectamente analizable, bastaría apoyar un portaobjetos de microscopio, como una lente de contacto, en la lente del objetivo. Para la aplicación se puede utilizar una gota de una mezcla adhesiva a base de agua, por ejemplo una mezcla que comprende y, preferiblemente, consta de:
- PVP (polivinilpirrolidona) a una concentración desde un 2 hasta un 20%;
- PEG400 a una concentración desde un 5 hasta un 40%; y
- agua c.p. hasta 100 ml.
La mezcla tiene propiedades adhesivas, es completamente segura, tiene un índice de refracción elevado (aproximadamente 1,50) y, en caso de que tenga que ser eliminada, basta con utilizar agua.
Una ventaja adicional del procedimiento de la invención y de las composiciones descritas en la presente memoria es representada por las condiciones que permiten el curado de las composiciones descritas en la presente memoria (que son análogas a una resina) tras la aplicación de las propias composiciones sobre uno o más portaobjetos de microscopio. De hecho, estas condiciones no requieren una irradiación UV, sino la simple exposición al aire o a una temperatura de aproximadamente 50°C, en el último caso ahorrando tiempo con respecto a la exposición al aire por sí sola.
Por lo tanto, las condiciones de curado de las composiciones descritas en la presente memoria dan lugar a una ventaja significativa con respecto a los límites de estabilidad de las muestras biológicas, que no pueden tolerar de una forma aceptable esfuerzos térmicos prolongados o una radiación UV continua. Debido a estos esfuerzos, existe la posibilidad real de que se alteren diversas características de la muestra, por ejemplo debido a la interferencia con el ADN, estructuras biológicas en su conjunto y tinciones, creando, por lo tanto, alteraciones o artefactos en la estructura de la muestra.
Por otra parte, el proceso de polimerización mediante radiación UV requiere una orientación bien definida del portaobjetos de microscopio con respecto a la fuente de radiación UV y una orientación subóptima prolongaría los tiempos de irradiación, dañando, por lo tanto, la muestra biológica. Por otra parte, si se utilizan los sistemas automáticos normales de tinción, en lo que se colocan los portaobjetos de microscopio en el cestillo, para lograr una orientación óptima de los portaobjetos de microscopio con respecto a la fuente de radiación UV, el usuario estaría obligado a intervenir para moverlos fuera del cestillo y colocarlos sobre una superficie adecuada, una operación que requiere tiempo y anula las ventajas del procesamiento automático.
En cambio, la presente invención permite al usuario montar directamente los portaobjetos de microscopio en el cestillo y para la tinción, con un único procedimiento simple y sin la necesidad de retirar/reajustar los portaobjetos de microscopio.
Otra ventaja proporcionada por las composiciones descritas en la presente memoria es que el tiempo requerido para curar dichas composiciones es breve pero en cualquier caso deja al usuario, o al instrumento automático, suficiente tiempo para manipular convenientemente el portaobjetos de microscopio que ha de ser montado.
De hecho, el tiempo de curado de las composiciones descritas en la presente memoria es el tiempo ideal para permitir al usuario, o al instrumento automático, manipular de forma adecuada el portaobjetos de microscopio que ha de ser montado, permitiendo, por lo tanto, al mismo tiempo una operación veloz y rápida de montaje y reduciendo significativamente los tiempos de preparación de las muestras biológicas y optimizando, de ese modo, el flujo de trabajo.
Las composiciones descritas en la presente memoria pueden ser aplicadas de forma adecuada sobre el portaobjetos de microscopio que ha de ser montado gracias a una inmersión simple y rápida de uno o más portaobjetos de microscopio, normalmente en una posición vertical, en dichas composiciones. Según el grosor deseado de la resina, es posible llevar a cabo varias inmersiones. Por lo tanto, es evidente que la viscosidad de la composición afecta también al grosor de la resina que se aplica sobre el portaobjetos de microscopio durante las inmersiones.
A modo de ejemplo, es posible llevar a cabo una inmersión doble que proporciona la introducción del portaobjetos de microscopio en dos estaciones que contienen la composición de la invención al 20%. Según una realización, se pueden proporcionar tanto una inmersión de aproximadamente 1,5 minutos en la primera resina al 20%, como un escurrido de aproximadamente 1 minuto, como una segunda inmersión en la resina al 20% de aproximadamente 1,5 minutos y finalmente como un escurrido durante aproximadamente 1 minuto y un secado al aire o en horno.
De forma alternativa, es posible llevar a cabo una inmersión doble del portaobjetos de microscopio en dos estaciones que contienen dos resinas a distintas concentraciones; por ejemplo, una primera inmersión en una resina al 30% durante aproximadamente 1,5 minutos, un escurrido de aproximadamente 1 minuto y una segunda inmersión en la resina al 20% durante 10 segundos, seguida por un escurrido durante aproximadamente 1 minuto.
Otras posibles soluciones, en términos de inmersión y/o de escurrido y/o de composiciones cualitativas-cuantitativas de las composiciones, se encuentran claramente entre las habilidades del experto en la técnica.
Para la inmersión en las composiciones descritas en la presente memoria, los portaobjetos de microscopio pueden alojarse, de forma ventajosa, en un cestillo como el descrito en las Figuras 5 y 6.
Las Figuras 5 y 6 muestran, en particular, un cestillo adecuado para la colocación de los portaobjetos de microscopio que tienen que ser sumergidos en las composiciones descritas en la presente memoria, para implementar el procedimiento de la invención. En particular, la Figura 5 muestra el cestillo con un único portaobjetos de micros y la Figura 6 muestra el cestillo que aloja todos los portaobjetos de microscopio, listos para la inmersión según el procedimiento de la invención.
Con referencia a las Figuras 5 y 6, dicho cestillo está fabricado de un cuerpo (1) caracterizado por ranuras (2) en las que es posible insertar los portaobjetos (3) de microscopio por medio de una presión suave. A este cuerpo se fija un asa (4), que permite los procedimientos de recogida y de transporte por medio del brazo móvil del sistema automático de tinción. Es importante que los portaobjetos de microscopio estén alojados en el cestillo por medio de (en la sección de) la banda esmerilada del propio portaobjetos de microscopio. La superficie restante del portaobjetos de microscopio permanecerá libre para permitir que las composiciones descritas en la presente memoria cubran el portaobjetos de microscopio y luego fluyan por gravedad homogéneamente en la etapa que sigue inmediatamente a la inmersión, es decir, en la etapa “de escurrido”.
Es evidente que el procedimiento según la invención da lugar a todas las ventajas descritas anteriormente y muchas otras además.
Entre estas ventajas adicionales, existe un ahorro de tiempo adicional y significativo. De hecho, como se mostrará en la Sección experimental de la presente invención, la etapa de inmersión en las composiciones descritas en la presente memoria puede involucrar a más portaobjetos de microscopio al mismo tiempo, es decir, puede ser llevada a cabo en paralelo en un número variable de portaobjetos de microscopio, por ejemplo hasta 30 si se utiliza un cestillo estándar como soporte. Esto da lugar a un claro ahorro de tiempo con respecto al proceso convencional de montaje, que permite que se dispongan el medio de montaje y el cubreobjetos una muestra cada vez, es decir, en serie.
Las composiciones que en la presente memoria se describen introducidas en el cestillo, que contiene los portaobjetos de microscopio que han de ser montados/ya montados, pueden ser eliminadas con un lavado rápido del cestillo con un disolvente adecuado, por ejemplo xileno o sustitutos del mismo, o con acetato de etilo. Además, las composiciones descritas en la presente memoria de la invención permiten al usuario montar directamente los portaobjetos de microscopio en el cestillo que es utilizando normalmente para la tinción, con una acción única y simple (la inmersión del cestillo) y sin la necesidad de retirar y de reposicionar los portaobjetos de microscopio, con un ahorro de tiempo adicional. A modo de ejemplo, en la sección experimental se describirá un proceso manual para el montaje de la muestra, que comprende el uso de las composiciones descritas en la presente memoria y un cestillo utilizado normalmente para la tinción.
Además de los procedimientos habituales para el montaje manual, las composiciones descritas en la presente memoria también pueden ser utilizadas con facilidad en sistemas automáticos convencionales de tinción, que son utilizados normalmente en la preparación de muestras biológicas y conocidos sin duda por el experto en la técnica. Esto es muy ventajoso, dado que el sistema automático de tinción no tiene todos los problemas críticos expuestos anteriormente, que tiene el montador automático de cubreobjetos, tales como, por ejemplo, una calibración precisa y fina del instrumento y, además, esto permitirá que se proporcione un proceso preciso de montaje sin el uso de ningún usuario.
A modo de ilustración, un sistema automático de tinción es un instrumento que comprende diversos depósitos que contienen fluidos, generalmente disoluciones de tinción, y un brazo mecánico. El brazo mecánico puede elevar de forma autónoma, posicionar y sumergir el cestillo que contiene los portaobjetos de microscopio que han de ser tincionados en los diversos depósitos. Es posible programar el brazo mecánico para definir la secuencia de inmersión en los diversos depósitos, al igual que el tiempo de inmersión en cada depósito.
Esta aplicación de las composiciones descritas en la presente memoria ofrece el enésimo ahorro de tiempo con respecto a los procesos convencionales de montaje y, a modo de ejemplo, en la sección experimental se describirá un proceso de montaje que comprende un sistema automático de tinción y las composiciones descritas en la presente memoria.
Además, y a diferencia de las composiciones y resinas conocidas para montar portaobjetos de microscopio, las composiciones descritas en la presente memoria, en particular la composición de la invención, son particularmente adecuadas para la realización del procedimiento de la invención, que tienen las características requeridas para ese objetivo. De hecho, con las composiciones y las resinas conocidas, podría no resultar posible llevar a cabo el montaje de los portaobjetos de microscopio por medio de la técnica de inmersión del portaobjetos de microscopio en la composición, debido a la viscosidad de dichas composiciones y resinas conocidas que no son adecuadas para tal técnica.
Será evidente que el ahorro de tiempo del proceso de montaje, debido a las composiciones descritas en la presente memoria, es significativo. De hecho, el proceso convencional de montaje, bien manual o bien automático, requiere un tiempo proporcional al número de los portaobjetos de microscopio. En la sección experimentar se proporcionará un ejemplo comparativo del proceso convencional de montaje.
Por lo tanto, las composiciones descritas en la presente memoria permiten prescindir de una serie de etapas de precisión que tienen como objetivo preparar una muestra cada vez, sustituyéndola por un único procedimiento que puede ser llevado a cabo para varios portaobjetos de microscopio de una sola vez, sin imprecisiones y de forma sumamente reproducible.
El uso según la invención proporciona todas las ventajas descritas anteriormente para la preparación de muestras para el análisis con microscopio, específicamente para la etapa de montaje de la preparación de las muestras, entre las cuales se encuentran, por ejemplo, un ahorro de tiempo significativo y un procesamiento más preciso y reproducible de muestras biológicas.
Breve descripción de los dibujos
Las Figuras 1 y 2 muestran las composiciones descritas en la presente memoria tras un secado, al final del proceso de montaje.
La Figura 3 muestra la ultratransparencia de las composiciones descritas en la presente memoria.
La Figura 4 muestra una imagen de microscopio que representa una muestra biológica montada con las composiciones descritas en la presente memoria.
Las Figuras 5 y 6 muestran el cestillo utilizable en el procedimiento de la invención.
Sección experimental
Ejemplo 1
Proceso para la preparación de una realización de una composición para el procedimiento según la invención Se llena un recipiente opaco con 800 ml de acetato de butilo. Se añaden 1,05 g de n-octadecil-3-(3',5'- di-t-butil-4'-hidroxifenil) propionato (agente antioxidante) y se deja bajo agitación hasta una disolución completa, es decir aproximadamente 2 minutos. En este momento, se añaden 200 g de metacrilato de polimetilo y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente. Entonces, se añaden 10,45 g/ml de Y-metaacriloxipropiltrimetoxisilano (“potenciador de enlaces”) y 10 g de 2-etilhexil adipato (plastificante).
El proceso es llevado a cabo completamente a temperatura ambiente; la agitación mecánica solo se detiene tras obtener una mezcla homogénea transparente (aproximadamente 20 minutos). De esta manera, la formulación final tiene aspecto viscoso y libre de partículas.
Ejemplo 2
Proceso para la preparación de una realización de una composición para el procedimiento según la invención Para la producción de 1 litro de disolución, se llena un recipiente opaco con 700 ml de xileno. Se añaden 1,7 g de butilhidroxitolueno (BHT) (agente antioxidante) y se deja bajo agitación hasta obtener una mezcla homogénea transparente, es decir aproximadamente 2 minutos. En este momento, se añaden 300 g de metacrilato de polimetilo y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente. Entonces, aún a temperatura ambiente, se añaden 2 g de parafina líquida (agente de antirrayado) y 2,1 g de 2-(5-terbutil-hidroxifenil)benzotriazol (“absorbente de radiación UV”). Tras aproximadamente 30 minutos bajo agitación, se obtiene una mezcla homogénea transparente. De esta manera, la formulación final tiene aspecto viscoso y libre de partículas.
Ejemplo 3
Proceso para la preparación de una realización de una composición para el procedimiento según la invención Para la producción de 1 litro de disolución, se llena un recipiente opaco con 600 ml de xileno. Se añaden 2 g de noctadecil-3-(3',5'-di-t-butil-4-hidroxifenil)propionato (agente antioxidante) y se deja bajo agitación hasta obtener una mezcla homogénea transparente, es decir aproximadamente 2 minutos. En este momento, se añaden 400 g de metacrilato de polibutilo y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente. Entonces, aún a temperatura ambiente, se añaden 15 g de dibutil ftalato (plastificante). Tras aproximadamente 30 minutos bajo agitación, se obtiene una mezcla homogénea transparente, que tiene aspecto viscoso y libre de partículas.
Ejemplo 4
Proceso para la preparación de una realización de una composición para el procedimiento según la invención Se llena un recipiente opaco con 1000 ml de xileno y 250 ml de Diamount®. Se añaden 400 g de metacrilato de polibutilo y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente viscosa y libre de partículas.
Ejemplo 5
Proceso para la preparación de una realización de una composición para el procedimiento según la invención Se llena un recipiente opaco con 800 ml de xileno y 240 ml de Micromount®. Se añaden 250 g de metacrilato de polietilo y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente viscosa y libre de partículas.
Ejemplo 6
Proceso para la preparación de una realización de una composición para el procedimiento según la invención Se llena un recipiente opaco con 800 ml de xileno y 100 ml de OpticMount®. Se añaden 200 g de acrilato de polietilo y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente viscosa y libre de partículas.
Ejemplo 7
Proceso para la preparación de una realización de una composición de la invención
Se llena un recipiente opaco con 400 ml de acetato de etilo y 400 ml de acetato de 1-metil-2-metoxietilo. Se añaden 200 g de Paraloid B-64® y 1 g de BYK-320® (polimetilalquilsiloxano modificado con poliéter) y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente viscosa y libre de partículas.
Ejemplo 8
Proceso para la preparación de una realización de una composición de la invención
Se llena un recipiente opaco con 350 ml de acetato de etilo y 350 ml de acetato de 1-metil-2-metoxietilo. Se añaden 300 g de Elvacite 4021® (copolímero de metacrilato de metilo/metacrilato de n-butilo) y 1,5 g de BYK-320® (polimetilalquilsiloxano modificado con poliéter) y se deja bajo agitación durante aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente hasta obtener una mezcla homogénea transparente viscosa y libre de partículas.
Ejemplo 9
Proceso de montaje
Ejemplo 9.1 (Comparativo)
Proceso convencional de montaje manual
Al final del proceso común de tinción manual, terminando con un lavado con alcohol, cada uno de los 30 portaobjetos de microscopio pasó por las siguientes etapas: (I) colocar el portaobjetos de microscopio horizontalmente sobre la superficie de trabajo; (II) distribuir la cantidad apropiada de medio de montaje sobre el portaobjetos de microscopio (aproximadamente 2 gotas); (III) colocar el cubreobjetos; y (IV) ajustar el cubreobjetos. Tiempo total requerido para montar cada portaobjetos de microscopio: aproximadamente 12 segundos; multiplicado por cada portaobjetos de microscopio; aproximadamente 360 segundos (es decir, aproximadamente 6 minutos). Al tiempo total empleado para el montaje convencional de todos los portaobjetos de microscopio se debería añadir el tiempo de secado del medio de montaje, que lleva aproximadamente 20 minutos para ser secado aceptablemente, para un tiempo total de montaje de aproximadamente 26 minutos y 30 segundos.
A diferencia de lo que se ha descrito anteriormente, con el proceso según la invención y considerando dos inmersiones, es posible ahorrar tiempo, como será evidente a partir de los siguientes ejemplos.
Además, como es evidente a partir del ejemplo recién descrito, las cuatro etapas documentadas anteriormente requeridas para el montaje convencional, además de llevar una cantidad significativa de tiempo, no están absolutamente libres de errores o de imprecisiones, siendo estas características particularmente significativas. Por esta razón, el tiempo total del procedimiento descrito anteriormente se aumenta adicionalmente cuando: (1) se añade el medio de montaje en exceso sobre el portaobjetos de microscopio y se requeriría eliminar tal exceso; y (2) el medio de montaje se escapa del portaobjetos de microscopio y se requeriría esperar el secado total y completo del mismo para una gestión práctica del flujo de trabajo. Finalmente, se requiere esperar al menos un día tras el proceso de montaje para el almacenamiento eficaz de los portaobjetos de microscopio montados de esta manera, dado que se requiere esperar hasta que se sequen completamente.
Ejemplo 9.2
Proceso de montaje manual utilizando el procedimiento de la invención
Siguiendo el procedimiento habitual de tinción manual, que termina con el lavado con xileno (o disolventes similares), se sumerge manualmente un cestillo, que contiene 25 portaobjetos de microscopio, en un depósito que contiene la composición según el ejemplo 7 durante aproximadamente 1,5 minutos, tras lo cual se elimina el exceso de la composición mediante escurrido durante 1 minuto y se lleva a cabo una segunda inmersión en la misma composición durante aproximadamente 1,5 minutos, seguida por un escurrido durante aproximadamente 1 minuto. Finalmente, se secan los portaobjetos montados de microscopio a 50°C durante 15 minutos, para un tiempo total de trabajo de 20 minutos.
De forma alternativa, se pueden colocar los 25 portaobjetos montados de microscopio en un horno a 65°C durante aproximadamente 5 minutos, proporcionando, de esta manera, un proceso de montaje que lleva un tiempo total de aproximadamente 10 minutos.
En las Figuras 5 y 6 se muestran portaobjetos de microscopio montados de esta forma.
Ejemplo 9.3
Proceso de montaje automático utilizando el procedimiento de la invención
Siguiendo el proceso habitual de tinción por medio de un sistema automático de tinción, que termina con un lavado con xileno, se toman 25 portaobjetos de microscopio (recién tincionados) por medio del brazo automático y son sumergidos durante 1,5 minutos en un depósito en reposo del sistema automático de tinción, que contiene la composición del ejemplo 8. Entonces, el brazo automático del sistema automático de tinción transfiere los portaobjetos de microscopio al interior de un depósito vacío, para eliminar el exceso de la composición durante 1 minuto y luego son sumergidos en un depósito que contiene la composición del ejemplo 7 durante 10 segundos y luego son transferidos a un depósito vacío, para eliminar el exceso de la composición durante 1 minuto y para ser completamente secados al aire; de lo contrario son colocados en un horno para un secado más corto.
El proceso de montaje simplificado de esta manera de los portaobjetos de microscopio comienza inmediatamente después de la tinción y es completado en pocos minutos, sin implicar al usuario de ninguna manera.
Es evidente que los procesos de montaje que contemplan el uso de las composiciones descritas en la presente memoria, es decir los Ejemplos 9.2 y 9.3, proporcionan un ahorro de tiempo importante con respecto al tiempo necesario para el montaje convencional, según se describe en el Ejemplo 9.1, reduciendo, de esta manera, el tiempo total para la preparación de las muestras biológicas y optimizando el flujo de trabajo y también eliminando los problemas relacionados con las burbujas de aire, el aplanamiento y la posible imprecisión debida a la operatoria del usuario.
Claims (14)
1. Un procedimiento para montar portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas, que comprende:
(i) sumergir dichos portaobjetos de microscopio en al menos una composición fluida que comprende:
a) al menos un componente líquido seleccionado entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y disolventes a base de isoparafina; y
b) uno o más polímeros o copolímeros seleccionados entre metacrilato de polimetilo, metacrilato de polietilo, metacrilato de polibutilo, acrilato de polimetilo y acrilato de polietilo, en una cantidad de un 15%-80%.
2. El procedimiento según la reivindicación 1, para montar portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas, que comprende:
(i) sumergir dichos portaobjetos de microscopio en al menos una composición fluida que comprende:
a) al menos un componente líquido seleccionado entre xileno, acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y disolventes a base de isoparafina; y
b) uno o más polímeros o copolímeros seleccionados entre metacrilato de polimetilo, metacrilato de polietilo, metacrilato de polibutilo, acrilato de polimetilo y acrilato de polietilo, en una cantidad de un 15%-80%;
(ii) extraer dichos portaobjetos de microscopio de dicha composición;
(iii) dejar que escurran;
(iv) repetir, opcionalmente, las etapas (i) a (iii); y
(v) dejar que sequen al aire o secarlos con un medio adecuado.
3. El procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque dichos uno o más polímeros (b) están presentes en una cantidad de un 10-50%.
4. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho al menos uno de dichos uno o más polímeros (b) es un copolímero de metacrilato de metilo/metacrilato de butilo.
5. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicho al menos un componente líquido (a) es seleccionado entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y mezclas de los mismos.
6. Una composición para montar un portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas, que comprende:
a') un componente líquido seleccionado entre acetato de etilo, acetato de butilo, acetato de 1-metil-2-metoxietilo y mezclas de los mismos; y
b') copolímero de metacrilato de metilo/metacrilato de butilo, en una cantidad de un 15%-80%;
c') opcionalmente un plastificante, a una concentración de un 0,05%-5%, preferiblemente a un 0,1%-3% en peso con respecto al peso total de la composición.
7. La composición según la reivindicación 6, caracterizada porque dicho copolímero (b') de metacrilato de metilo/metacrilato de butilo está presente en una cantidad de un 20-40%.
8. La composición según la reivindicación 6, caracterizada porque dicho copolímero (b') de metacrilato de metilo/metacrilato de butilo está presente en una cantidad de un 25-45%.
9. El uso de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, para montar un portaobjetos de microscopio para el análisis de muestras biológicas, citológicas, histológicas y autópsicas según el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y 10 a 14.
10. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque comprende el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8.
11. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y 10, caracterizado porque se llevan a cabo al menos dos etapas (i).
12. El procedimiento según la reivindicación 11, caracterizado porque las composiciones utilizadas en las etapas (i) tienen la misma concentración.
13. El procedimiento según la reivindicación 12, caracterizado porque se llevan a cabo dos etapas (i) y porque dichas concentraciones tienen una concentración de aproximadamente un 20%.
14. El procedimiento según la reivindicación 11, caracterizado porque las composiciones utilizadas en las etapas (i) tienen distintas concentraciones, en particular porque la primera composición utilizada tiene una concentración de aproximadamente un 30% y la segunda de aproximadamente un 20%.
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