ES2709003T3 - Compuestos de 5-(piridin-2-il-amino)-pirazina-2-carbonitrilo y su uso terapéutico - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la siguiente fórmula, o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo: en donde: -RB3 es independientemente: o cada -RB3A es independientemente -H o alquilo C1-3 alifático saturado; -RA4 es independientemente -NHRA4A, -NRA4A2 o -ORA4A; cada -RA4A es independientemente alquilo C1-3 alifático saturado; -RA5 es independientemente -RA5A, -RA5B, -RA5C, -RA5D, -RA5E, o -RA5F; -RA5A es independientemente: o -RA5AA es alquilo C1-3 alifático saturado; -RA5B es -CF3; -RA5C es independientemente -F, -Cl, -Br o -I; -RA5D es independientemente -C≡CH, -C≡C-RA5DA, o -C≡C-RA5DB-OH; -RA5DA es un alquilo C1-4 alifático saturado; -RA5DB es alquileno C1-4 alifático saturado; -RA5E es independientemente cicloalquilo C3-6 saturado; -RA5F es -C(=O)O-RA5FA; y -RA5FA es alquilo C1-3 alifático saturado.

Description

DESCRIPCION

Compuestos de 5-(piridin-2-il-amino)-pirazina-2-carbonitrilo y su uso terapeutico

Campo tecnico

La presente invencion esta relacionada en general con el campo de los compuestos terapeuticos. Mas espedficamente, la presente invencion se refiere a ciertos compuestos de piridil-amino-pirazina-carbonitrilo que, entre otras cosas, inhiben la funcion cinasa de la cinasa de punto de control 1 (CHK1). La presente invencion se refiere tambien a composiciones farmaceuticas que comprenden tales compuestos, y a tales compuestos y composiciones para uso, tanto in vitro como in vivo, para inhibir la funcion de la cinasa CHK1, y en el tratamiento de enfermedades y afecciones que estan mediadas por CHK1, que se mejoran por la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1, etc., incluyendo las afecciones proliferativas tales como el cancer, etc., opcionalmente en combinacion con otro agente, por ejemplo, (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Antecedentes

Se citan en la presente memoria una serie de publicaciones para describir y divulgar mas completamente la invencion y el estado de la tecnica a la que pertenece la invencion.

A lo largo de esta memoria descriptiva, incluidas las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera otra cosa, los terminos "comprender" y variaciones tales como "comprende" y "que comprende" se entendera que implican la inclusion de un numero entero o una etapa o grupo de enteros indicado, pero no la exclusion de cualquier otro numero entero o etapa o grupo de enteros o etapas.

Cabe senalar que, tal como se utilizan en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el", “la” incluyen los referentes plurales, a menos que el contexto indique claramente otra cosa. Asf, por ejemplo, la referencia a "un veldculo farmaceutico" incluye mezclas de dos o mas de tales veldculos, y similares.

Los intervalos se expresan a menudo en la presente memoria como desde "aproximadamente" un valor particular, y/o hasta "aproximadamente" otro valor particular. Cuando se expresa un intervalo de esta manera, otra realizacion incluye desde el un valor particular y/o hasta el otro valor particular. De manera similar, cuando los valores se expresan como aproximaciones, mediante el uso del antecedente "aproximadamente", se entendera que el valor particular forma otra realizacion.

Cinasa de punto de control 1 (CHK1)

La evolucion a traves del ciclo de division celular es un proceso estrechamente regulado y es monitorizado en varias posiciones conocidas como puntos de control del ciclo celular (vease por ejemplo, Weinert and Hartwell, 1989; Bartek and Lukas, 2003). Estos puntos de control se encuentran en las cuatro fases del ciclo celular; G1, S (replicacion de ADN), G2 y M (mitosis) y aseguran que los sucesos clave que controlan la fidelidad de la replicacion del ADN y la division celular se completan correctamente. Los puntos de control del ciclo celular son activados por una serie de estfmulos, incluidos el dano al ADN y los errores del ADN causados por una replicacion defectuosa. Cuando esto ocurre, el ciclo celular se detendra, dando tiempo bien a que tenga lugar la reparacion del ADN o bien, si el dano es demasiado grave, a la activacion de los procesos celulares que llevan a la muerte celular controlada. Todos los canceres, por definicion, tienen alguna forma de ciclo de division celular aberrante. Con frecuencia, las celulas cancerosas tienen uno o mas puntos de control del ciclo celular defectuosos, o albergan defectos en una ruta particular de reparacion del ADN. Por lo tanto, estas celulas a menudo son mas dependientes de los puntos de control del ciclo celular y de las rutas de reparacion restantes, en comparacion con las celulas no cancerosas (donde todos los puntos de control y rutas de reparacion del ADN estan intactos). La respuesta de las celulas cancerosas a los danos en el ADN es con frecuencia un factor determinante cntico de si continuan proliferando o si activan los procesos de muerte celular y mueren. Por ejemplo, las celulas tumorales que contienen una forma o formas mutantes del supresor de tumores p53 son defectuosas en el punto de control de danos al ADN G1. Por lo tanto, se espera que los inhibidores de los puntos de control G2 o fase S afecten aun mas a la capacidad de la celula tumoral para reparar el ADN danado.

Muchos tratamientos conocidos contra el cancer causan danos en el ADN ya sea modificando ffsicamente el ADN de la celula o interrumpiendo procesos celulares vitales que pueden afectar a la fidelidad de la replicacion del ADN y de la division celular, tales como el metabolismo del ADN, la smtesis del ADN, la transcripcion del ADN y la formacion del huso de los microtubulos. Tales tratamientos incluyen, por ejemplo, la radioterapia, que causa roturas de la cadena de ADN, y una variedad de agentes quimioterapeuticos incluyendo los inhibidores de las topoisomerasas, los antimetabolitos, los agentes alquilantes de ADN y los farmacos citotoxicos que contienen platino. Una limitacion significativa a estos tratamientos genotoxicos es la resistencia a los farmacos. Uno de los mecanismos mas importantes que conducen a esta resistencia se atribuye a la activacion de los puntos de control del ciclo celular, que da tiempo a la celula tumoral para reparar el ADN danado. Mediante la anulacion de un punto de control particular del ciclo celular, o la inhibicion de una forma particular de reparacion del ADN, puede ser posible por lo tanto eludir la resistencia de las celulas tumorales a los agentes genotoxicos y aumentar la muerte de las celulas tumorales inducida por los danos del ADN, aumentando de este modo el mdice terapeutico de estos tratamientos contra el cancer.

La CHK1 es una serina/treonina cinasa implicada en la regulacion de las senales de punto de control del ciclo celular que son activadas en respuesta a los danos del ADN y a los errores en el ADN causados por la replicacion defectuosa (vease por ejemplo, Bartek and Lukas, 2003). La CHK1 transduce estas senales a traves de la fosforilacion de sustratos implicados en una serie de actividades celulares, incluida la detencion del ciclo celular y la reparacion del ADN. Dos sustratos clave de CHK1 son las fosfatasas Cdc25A y Cdc25C que desfosforilan la CDK1, llevando a su activacion, lo que es un requisito para salir de G2 a la mitosis (fase M) (vease por ejemplo, Sanchez et al., 1997). La fosforilacion de Cdc25C y de la Cdc25A relacionada por CHK1 bloquea su capacidad para activar la CDK1, evitando asf que la celula salga de G2 a la fase M. El papel de CHK1 en el punto de control del ciclo celular G2 inducido por danos en el ADN se ha demostrado en una serie de estudios en los que se ha eliminado la funcion de CHK1 (vease, por ejemplo, Liu et al., 2000; Zhao et al., 2002; Zachos et al., 2003).

La dependencia de la CHK1 del punto de control G2 inducido por danos en el ADN proporciona un ejemplo de una estrategia terapeutica para el tratamiento del cancer, que implica la inhibicion dirigida de CHK1. Tras el dano al ADN, la protema supresora de tumores p53 se estabiliza y se activa para dar una detencion de G1 dependiente de p53, que lleva a la apoptosis o a la reparacion del ADN (Balaint and Vousden, 2001). Mas de la mitad de todos los canceres son funcionalmente defectuosos en p53, lo que puede hacerlos resistentes a tratamientos genotoxicos del cancer tales como la radiacion ionizante (IR) y ciertas formas de quimioterapia (vease por ejemplo, Greenblatt et al., 1994; Carson and Lois, 1995) . Estas celulas deficientes en p53 no se detienen en el punto de control G1 ni sufren apoptosis o reparacion de ADN, y en consecuencia pueden ser mas dependientes del punto de control G2 para la fidelidad de la viabilidad y replicacion. Por lo tanto, la anulacion del punto de control G2 mediante la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1 puede sensibilizar selectivamente a las celulas cancerosas deficientes en p53 para terapias genotoxicas contra el cancer, y esto ha sido demostrado (vease, por ejemplo, Wang et al., 1996; Dixon and Norbury, 2002).

Ademas, se ha demostrado tambien que la CHK1 esta implicada en los puntos de control del ciclo celular de la fase S y en la reparacion del ADN por recombinacion homologa. Por lo tanto, la inhibicion de la cinasa CHK1 en aquellos canceres que dependen de estos procesos despues del dano al ADN, puede proporcionar estrategias terapeuticas adicionales para el tratamiento de los canceres utilizando inhibidores de CHK1 (vease por ejemplo, Sorensen et al., 2005). Ademas, ciertos canceres pueden exhibir estres replicativo debido a altos niveles de danos endogenos al ADN (vease por ejemplo, Cavalier et al., 2009; Brooks et al., 2012) o mediante replicacion elevada dirigida por oncogenes, por ejemplo genes MYC amplificados o sobreexpresados (vease por ejemplo, Di Micco et al. 2006; Cole et al., 2011; Murga et al. 2011). Dichos canceres pueden presentar senalizacion elevada a traves de la cinasa CHK1 (vease por ejemplo, Hoglund et al., 2011). La inhibicion de la cinasa CHK1 en aquellos canceres que dependen de estos procesos, puede proporcionar estrategias terapeuticas adicionales para el tratamiento de los canceres utilizando inhibidores de Ch K1 (vease por ejemplo, Cole et al., 2011; Davies et al., 2011; Ferrao et al. , 2011).

Datos recientes que utilizan el ARNsi selectivo de la CHK1 apoyan la inhibicion selectiva de CHK1 como una estrategia terapeutica relevante, y dan a entender que la inhibicion combinada con otras determinadas cinasas de punto de control no proporciona ningun beneficio adicional y puede ser no productiva (vease, por ejemplo, Xiao et al., 2006; Guzi et al., 2011). Se han descrito inhibidores selectivos de moleculas pequenas de la funcion de la cinasa CHK1 de diferentes clases qmmicas (vease, por ejemplo, Tao et al., 2006).

Compuestos conocidos

Collins et al., 2009a, describen ciertos compuestos de la siguiente formula que inhiben la funcion cinasa de la cinasa de punto de control 1 (CHK1) y que son utiles en el tratamiento de, por ejemplo, cancer:

Entre los ejemplos de Collins et al., 2009a estan los siguientes compuestos:

Solamente uno de los ejemplos de Collins et al., 2009a tiene -RB6 distinto de -H, espedficamente, como -OMe, mientras que tiene tambien -X= como -N=:

Una realizacion de Collins et al., 2009a tiene -R^B6 definido como “independientemente -Me, -Et, -nPr, -iPr, -CF³ , -OH, -OMe, -OEt, -O(nPr), -O(iPr), -OCF³, -CN, -NH² , -NHMe, -NMe² , -O-CH²CH²-OH, -O-CH²CH²-OMe, -O-CH²CH²-NH², -O-CH²CH²-NHMe, -O-CH²CH²-NMe² , -O-CH²CH²CH²-NH², -O-CH²CH²CH²-NHMe, o -O-CH²CH²CH²-NMe²” (vease la pagina 48, lmeas 37-40 y la reivindicacion 296 de dicha publicacion).

Collins et al., 2009b, describe ciertos compuestos de la siguiente formula que inhiben la funcion cinasa de la cinasa de punto de control 1 (CHK1) y que son utiles en el tratamiento de, por ejemplo, el cancer:

Entre los ejemplos en Collins et al., 2009b estan los siguientes compuestos de isoquinolina:

Walton et al., 2010, describe estudios preclmicos del inhibidor de CHK1 denominado SAR-020106, que tiene la siguiente estructura.

Entre los ejemplos en Collins et al., 2009b estan los siguientes compuestos de 1H-imidazo[4,5-b]piridina:

Almeida et al., 2008, describe ciertas pirazinas sustituidas con pirazolil-amino de la siguiente formula, que supuestamente son utiles en el tratamiento del cancer.

Entre los ejemplos en Almeida et al., 2008 estan los siguientes compuestos:

loannidis et al., 2009, describe ciertos compuestos que inhiben la cinasa Janus (JAK) asociada. Los siguientes compuestos se muestran en el Esquema 5 de la pagina 6526 de esta publicacion.

Lin et al., 2005, describe ciertos compuestos macrodclicos de urea que supuestamente son utiles como inhibidores de la protema cinasa. Vease por ejemplo, el parrafo [0004] en la pagina 1 de la publicacion.

Tao et al., 2005, describe ciertos compuestos macrodclicos de urea que supuestamente son utiles como inhibidores de la protema cinasa. Vease, por ejemplo, la pagina 2 de la publicacion.

Li et al., 2007, describe la preparacion y ensayos de ciertos inhibidores de CHK1 macrodclicos de urea. Vease, por ejemplo, la Tabla 1 en la pagina 6502 de la publicacion.

Tao et al., 2007a, describe la preparacion y ensayos de ciertos inhibidores de CHK1 macrodclicos de urea. Vease, por ejemplo, la Tabla 2 en la pagina 6596 de la publicacion.

Tao et al., 2007b, describe la preparacion y ensayos de ciertos inhibidores de CHK1 macrodclicos de urea. Vease, por ejemplo, la Tabla 3 en la pagina 1517 de la publicacion.

Uno o mas de los inventores han contribuido a publicaciones recientes en las que se describen una serie de inhibidores de CHK1, incluido el siguiente compuesto, denominado CCT244747. Vease Lainchbury et al., 2012 (publicado online el 19 de octubre de 2012) y Walton et al., 2012 (publicado el 15 de octubre de 2012).

Lainchbury et al., 2011 (Exp. Opin. Ther. Pat., Vol. 21, No. 8, pp 1911-1210) es un artfculo de revision que se refiere a los inhibidores de la cinasa de punto de control 1 (CHK1). Este documento se refiere a Collins et al., 2009a y Collins et al., 2009b como las dos primeras entradas de la Tabla 1 de la pagina 1195 de esta publicacion. (Estos dos documentos describen dos de cuatro clases de inhibidores de “pirazina” listados en la Tabla 1 de la publicacion; en la Tabla 2 de la publicacion se enumeran tres clases adicionales de inhibidores de “pirrolo/pirazolopiridina”).

Sumario de la invencion

Un aspecto de la invencion se refiere a ciertos compuestos de piridil-amino-pirazina-carbonitrilo (denominados en la presente memoria compuestos PAPC), como se describen en la presente memoria.

Otro aspecto de la invencion se refiere a una composicion (por ejemplo, una composicion farmaceutica) que comprende un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.

En una realizacion, la composicion (por ejemplo, una composicion farmaceutica) es adecuada para administracion oral a un sujeto.

Otro aspecto de la invencion se refiere a un metodo para preparar una composicion (por ejemplo, una composicion farmaceutica) que comprende la etapa de mezclar un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.

Tambien se describe en la presente memoria un metodo para inhibir la funcion de la cinasa CHK1 en una celula, in vitro o in vivo, que comprende poner en contacto la celula con una cantidad eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en esta memoria.

En una realizacion, el metodo comprende ademas poner en contacto la celula con uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Se describe tambien en la presente memoria un metodo para regular (por ejemplo, inhibir) la proliferacion celular (por ejemplo, la proliferacion de una celula), inhibir la progresion del ciclo celular, promover la apoptosis celular, o una combinacion de uno o mas de ellos, in vitro o in vivo, que comprende poner en contacto una celula con una cantidad eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria

En una realizacion, el metodo comprende ademas poner en contacto la celula con uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Tambien se describe en la presente invencion un metodo de tratamiento que comprende administrar a un sujeto que necesita tratamiento una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, preferiblemente en la forma de una composicion farmaceutica.

En una realizacion, dicha administracion es administracion por via oral.

En una realizacion, el metodo comprende ademas administrar al sujeto uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto PAPC como se describe en la presente memoria para uso en un metodo de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

En una realizacion, el compuesto es para uso en un metodo de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia por administracion oral.

En una realizacion, el metodo de tratamiento comprende el tratamiento con ambos (i) un compuesto PAPC y (ii) uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere al uso de un compuesto PAPC como se describe en la presente memoria, en la fabricacion de un medicamento para uso en tratamiento.

En una realizacion, el medicamento es un medicamento para administracion oral.

En una realizacion, el tratamiento comprende el tratamiento con ambos (i) un medicamento que comprende un compuesto PAPC y (ii) uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de una enfermedad o afeccion que esta mediada por CHK1.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de una enfermedad o afeccion que se mejora por la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de una afeccion proliferativa.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento del cancer.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de cancer deficiente en p53.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento del cancer de cabeza; cancer de cuello; cancer del sistema nervioso; cancer cerebral; neuroblastoma; cancer de pulmon/mediastino; cancer de mama; cancer de esofago; cancer de estomago; cancer de tugado; cancer del tracto biliar; cancer pancreatico; cancer de intestino delgado; cancer de intestino grueso; cancer colorrectal; cancer ginecologico; cancer genitourinario; cancer de ovarios; cancer de la glandula tiroides; cancer de las glandulas suprarrenales; cancer de piel; melanoma; sarcoma oseo; sarcoma de tejidos blandos; tumor maligno pediatrico; enfermedad de Hodgkin; linfoma no Hodgkin; mieloma; leucemia; o metastasis desde un sitio primario desconocido.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de: cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de ovarios, cancer colorrectal, melanoma, glioma o neuroblastoma.

Se describe tambien en la presente memoria un kit que comprende (a) un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, proporcionado preferiblemente como una composicion farmaceutica y en un recipiente adecuado y/o con un empaquetado adecuado; y (b) instrucciones de uso, por ejemplo, instrucciones escritas sobre como administrar el compuesto.

En una realizacion, el kit comprende ademas uno o mas de otros agentes seleccionados entre: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); y (d) un agente dirigido a los microtubulos.

Se describe tambien en la presente memoria un compuesto PAPC obtenible por un metodo de smtesis tal como se describe en esta memoria, o un metodo que comprende un metodo de smtesis como se describe en la presente memoria.

Se describe tambien en la presente memoria un compuesto PAPC obtenido por un metodo de smtesis como se describe en esta memoria, o un metodo que comprende un metodo de smtesis como se describe en la presente memoria.

Se describen tambien en la presente memoria nuevos intermedios, como se describen en la presente memoria, que son adecuados para su uso en los metodos de smtesis descritos en la presente memoria.

Se describe tambien en la presente memoria el uso de tales nuevos intermedios, como se describe en la presente memoria, en los metodos de smtesis descritos en la presente memoria.

Como sera apreciado por los expertos en la tecnica, las caractensticas y realizaciones preferidas de un aspecto de la invencion tambien se referiran a otro aspecto de la invencion.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 es una imagen de barrido por resonancia magnetica (MRI) registrada como parte del estudio in vivo ("PAPC-A-01 en modelo de neuroblastoma impulsado por MYCN transgenico ") descrito a continuacion. La imagen muestra el abdomen de un raton (k = rinon; t = tumor; s.b. = intestino delgado) y se registro antes del tratamiento. El volumen del tumor fue de 1960 mm3.

La Figura 2 es una imagen de barrido por resonancia magnetica (MRI) registrada como parte del estudio in vivo ("PAPC-A-01 en el modelo de neuroblastoma impulsado por MYCN transgenico ") descrito a continuacion. La imagen muestra el abdomen de un raton (k = rinon; t = tumor; s.b. = intestino delgado) y se registro despues de 7 dfas de tratamiento con PAPC-A-01. El volumen del tumor fue de 417 mm3.

Descripcion detallada de la invencion

Compuestos

Un aspecto de la presente invencion se refiere a ciertos compuestos que estan relacionados con el 5-(piridin-2-ilamino)-pirazina-2-carbonitrilo:

Todos los compuestos se caracterizan adicionalmente por un sustituyente adyacente al grupo carbonitrilo (en la posicion 3 de la pirazina) que es independientemente:

en donde RB3A es como se define en la presente memoria. Estas dos formulas definen grupos que se pueden describir convenientemente como "cadena abierta" (a la izquierda) y "anillo cerrado" (a la derecha) analogos entre sf, y comparten los atomos/enlaces marcados en negrita a continuacion:

Por ejemplo, cuando RB3A es metilo, los compuestos estan relacionados con los siguientes compuestos:

Los compuestos de la presente invencion son inhibidores potentes de la actividad de CHK1 (por ejemplo, tienen una IC⁵⁰ de CHK1 inferior a 100 nM). Los compuestos de la presente invencion se pueden caracterizar adicionalmente por (a) una notable selectividad en comparacion con CHK2 (por ejemplo, una selectividad de CHK1 frente a CHK2 de al menos 100 veces) y/o (b) una notable biodisponibilidad oral (por ejemplo, biodisponibilidad oral de al menos 100 nM (concentracion plasmatica, 1 hora despues de 10 mg/kg p.o.)).

Por lo tanto, un aspecto de la presente invencion se refiere a compuestos de la siguiente formula, y las sales, hidratos y solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos, en donde -RA4 -RA5, y -RB3 son como se definen en la presente memoria (por conveniencia, se denominan colectivamente en la presente memoria "compuestos de piridil-amino-pirazina-carbonitrilo" o "compuestos PAPC"):

Algunas realizaciones de la invencion incluyen lo siguiente:

(1) Un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

en donde:

-RB3 es independientemente:

cada -R^B3A es independientemente -H o alquilo C^1-3 alifatico saturado;

-R^A4 es independientemente -NHR^A4A, -NR^A4A2 o -OR^A4A;

cada -R^A4A es independientemente alquilo C^1-3 alifatico saturado;

-R^A5 es independientemente -R^A5A, -R^A5B, -R^A5C, -R^A5D, -R^A5E, o -R^A5F;

-R^A5A es independientemente:

-R^A5AA es alquilo C^1-3 alifatico saturado;

-R^A5B es -CF³;

-R^A5C es independientemente -F, -Cl, -Br o -I;

-R^A5D es independientemente -C=CH, -C=C-R^A5DA, o -C=C-R^A5DB-OH;

-R^A5DA es un alquilo C^1-4 alifatico saturado;

-RA5DB es alquileno C1-4 alifatico saturado;

-RA5E es independientemente cicloalquilo C3-6 saturado;

-RA5F es -C(=O)O-RA5FA; y

-RA5FA es alquilo C1-3 alifatico saturado.

Para evitar dudas, no se pretende que ninguno de dos o mas de -RA4, -RA5 y -RB3 formen juntos un anillo fusionado con el anillo o anillos a los que estan unidos. Por ejemplo, no se pretende que -RA4 y -RA5 formen juntos un anillo fusionado con el anillo al que estan unidos. De manera similar, no se pretende que -RA4 y -RB3 formen juntos un anillo fusionado con los anillos a los que estan unidos. De manera similar, no se pretende que -RA5 y -RB3 formen juntos un anillo fusionado con los anillos a los que estan unidos.

El grupo -RB3 tiene un centro quiral, marcado con un asterisco en las siguientes formulas, que pueden estar independientemente en la configuracion (R) o (S). A menos que se indique otra cosa, se pretende que ambas configuraciones esten incluidas.

El grupo -RB3

(2) Un compuesto segun el punto (1), donde -RB3 es:

(3) Un compuesto segun el punto (1), donde -RB3 es:

(4) Un compuesto segun el punto (1), donde -RB3 es:

(5) Un compuesto segun el punto (1), donde -RB3 es:

(6) Un compuesto segun el punto (1), donde -RB3 es:

(7) Un compuesto segun el punto (1), donde -RB3 es:

El grupo -RB3A

(8 ) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (7), en donde -RB3A es alquilo C1-3 alifatico saturado. (9) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (7), en donde -RB3A es -Me.

(10) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (7), en donde -RB3A es -H.

El grupo -RA4

(11) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (10), en donde -RA4 es independientemente -NHRA4A o -NRA4A2.

(12) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (10), en donde -RA4 es -NHRA4A

(13) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (10), en donde -RA4 es -NRA4A2.

(14) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (10), en donde -RA4 es -ORA4A

El grupo -RA4A

(15) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (14), en donde cada -RA4A es independientemente -Me o -Et.

(16) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (14), en donde cada -RA4A es -Me.

El grupo -RA5

(17) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (16), en donde -RA5 es -RA5A.

(18) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (16), en donde -RA5 es -RA5B.

(19) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (16), en donde -RA5 es -RA5C

(20) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (16), en donde -RA5 es -RA5D.

(21) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (16), en donde -RA5 es -RA5E.

(22) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (16), en donde -RA5 es -RA5F.

El grupo -RA5A

(23) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (22), en donde -RA5A, si esta presente, es:

(24) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (22), en donde -RA5A, si esta presente, es:

El grupo -RA5AA

(25) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (24), en donde cada -RA5AA, si esta presente, es -Me o -Et.

(26) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (24), en donde cada -RA5AA, si esta presente, es -Me.

(27) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (24), en donde cada -RA5AA, si esta presente, es -Et.

El grupo -RA5C

(28) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (27), en donde -RA5C, si esta presente, es independientemente -F, -Cl o -Br.

(29) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (27), en donde -RA5C, si esta presente, es independientemente -F.

(30) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (27), en donde -RA5C, si esta presente, es independientemente -Cl.

(31) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (27), en donde -RA5C, si esta presente, es independientemente -Br.

(32) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (27), en donde -RA5C, si esta presente, es independientemente -I.

El grupo -RA5D

(33) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (32), donde -RA5D, si esta presente, es independientemente -C=CH o -C=C-RA5DA

(34) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (32), en donde -RA5D, si esta presente, es -C=CH. (35) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (32), donde -RA5D, si esta presente, es -C=C-RA5DA (36) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (32), en donde -RA5D, si esta presente, es -C=C-RA5DB-OH.

El grupo -RA5DA

(37) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (36), donde -R^A5DA, si esta presente, es independientemente -Me, -Et, -CH(Me)², o -C(Me)³.

(38) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (36), en donde -R^A5DA, si esta presente, es -CH(Me)².

(39) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (36), en donde -R^A5DA, si esta presente, es C(Me)a.

El grupo -RA5DB-(40) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (39), en donde -RA5DB-, si esta presente, es alquileno C1-3 alifatico saturado.

(41) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (39), en donde -RA5DB-, si esta presente, es independientemente -CH2-, -CH(Me)-, o -C(Me)2-.

(42) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (39), en donde -RA5DB-, si esta presente, es -C(Me)2-.

(43) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (39), en donde -RA5DB-, si esta presente, es -CH(Me)-.

(44) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (39), en donde -RA5DB-, si esta presente, es -CH2-. El grupo -RA5E

(45) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (44), en donde -RA5E, si esta presente, es independientemente ciclopropilo, ciclobutilo o ciclopentilo.

(46) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (44), en donde -RA5E, si esta presente, es independientemente ciclopropilo o ciclobutilo.

(47) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (44), en donde -RA5E, si esta presente, es ciclopropilo.

El grupo -RA5FA

(48) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (47), en donde -RA5FA, si esta presente, es -Me o -Et.

(49) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (47), en donde -RA5FA, si esta presente, es -Me. (50) Un compuesto segun uno cualquiera de los puntos (1) a (47), en donde -RA5FA, si esta presente, es -Et. Algunas combinaciones preferidas

(51) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(52) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(53) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(54) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(55) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(56) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(57) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(58) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(59) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(60) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(61) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(62) Un compuesto según el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes fórmulas, o una sal hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(63) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(64) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(65) Un compuesto según el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes fórmulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(66) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(67) Un compuesto según el punto (1). que es un compuesto de una de las siguientes fórmulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(68) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

Compuestos específicos

(69) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

(70) Un compuesto segun el punto (1), que es un compuesto de una de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

Formas sustancialmente purificadas

Se describen tambien en la presente memoria compuestos PAPC, en forma purificada.

En una realizacion, el compuesto esta en forma sustancialmente purificada y/o en una forma sustancialmente libre de contaminantes.

En una realizacion, el compuesto esta en una forma sustancialmente purificada con una pureza de al menos 50 % en peso, por ejemplo, al menos 60 % en peso, por ejemplo, al menos 70 % en peso, por ejemplo, al menos 80 % en peso, por ejemplo, al menos 90 % en peso, por ejemplo, al menos 95 % en peso, por ejemplo, al menos 97 % en peso, por ejemplo, al menos 98 % en peso, por ejemplo, al menos 99 % en peso.10

A menos que se especifique otra cosa, la forma sustancialmente purificada se refiere al compuesto en cualquier forma estereoisomerica o enantiomerica. Por ejemplo, en una realizacion, la forma sustancialmente purificada se refiere a una mezcla de estereoisomeros, es decir, purificada con respecto a otros compuestos. En una realizacion, la forma sustancialmente purificada se refiere a un estereoisomero, por ejemplo, estereoisomero opticamente puro. En una realizacion, la forma sustancialmente purificada se refiere a una mezcla de enantiomeros. En una realizacion, la forma sustancialmente purificada se refiere a una mezcla equimolar de enantiomeros (es dedr, una mezcla racemica, un racemato). En una realizacion, la forma sustancialmente purificada se refiere a un enantiomero, por ejemplo, enantiomero opticamente puro.

En una realizacion, el compuesto esta en una forma sustancialmente libre de contaminantes en donde los contaminantes representan no mas del 50 % en peso, por ejemplo, no mas del 40 % en peso, por ejemplo, no mas del 30 % en peso, por ejemplo, no mas mas del 20 % en peso, por ejemplo, no mas del 10 % en peso, por ejemplo, no mas del 5 % en peso, por ejemplo, no mas del 3 % en peso, por ejemplo, no mas del 2 % en peso, por ejemplo, no mas de 1 % en peso.

A menos que se especifique otra cosa, los contaminantes se refieren a otros compuestos, es decir, distintos de los estereoisomeros o enantiomeros. En una realizacion, los contaminantes se refieren a otros compuestos y otros estereoisomeros. En una realizacion, los contaminantes se refieren a otros compuestos y al otro enantiomero.

En una realizacion, el compuesto esta en una forma sustancialmente purificada con una pureza optica de al menos 60 % (es decir, el 60 % del compuesto, en una base molar, es el estereoisomero o enantiomero deseado, y el 40 % es un estereoisomero o enantiomero no deseado), por ejemplo, al menos 70 %, por ejemplo, al menos 80 %, por ejemplo, al menos 90 %, por ejemplo, al menos 95 %, por ejemplo, al menos 97 %, por ejemplo, al menos 98 %, por ejemplo, al menos 99 %.

Isomeros

Ciertos compuestos pueden existir en una o mas formas geometricas, opticas, enantiomericas, diastereomericas, epimericas, atropicas, estereoisomericas, tautomericas, conformacionales o anomericas particulares, incluyendo pero sin limitarse a las formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t y r; formas endo y exo; formas R, S y meso; formas D y L; formas d y l; formas (+) y (-); formas ceto, enol y enolato; formas syn y anti; formas sinclinal y anticlinal; formas a y p; formas axial y ecuatorial; formas de barco, silla, twist, sobre y media silla; y combinaciones de las mismas, de aqu en adelante denominadas colectivamente "isomeros" (o "formas isomericas").

Se debe tener en cuenta que, excepto como se expone a continuacion para las formas tautomericas, estan espedficamente excluidos del termino "isomeros", como se usa en la presente memoria, los isomeros estructurales (o constitucionales) (es decir, isomeros que difieren en las conexiones entre los atomos en lugar de simplemente por la posicion de los atomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH³, no se debe interpretar como una referencia a su isomero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH²OH. De manera similar, una referencia a orto-clorofenilo no se debe interpretar como una referencia a su isomero estructural, meta-clorofenilo. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras bien podna incluir formas estructuralmente isomericas que entran dentro de esa clase (por ejemplo, alquilo C^1-3 incluye n-propilo e isopropilo; butilo incluye n-, iso-, sec- y tercbutilo; metoxifenilo incluye orto, meta y parametoxifenilo).

La exclusion anterior no se refiere a las formas tautomericas, por ejemplo, formas ceto, enol y enolato, como por ejemplo, en los siguientes pares tautomericos: ceto/enol (ilustrado a continuacion), imina/enamina, amida/imino alcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enotiol, N-nitroso/hidroxiazo, y nitro/aci-nitro.

Se debe tener en cuenta que en el termino "isomero" estan espedficamente incluidos los compuestos con una o mas sustituciones isotopicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotopica, incluyendo 1H, 2H (D) y 3H (T); C puede estar en cualquier forma isotopica, incluyendo 12C, 13C y 14C; O puede estar en cualquier forma isotopica, incluyendo 16O y 18O; y similares.

A menos que se especifique otra cosa, una referencia a un compuesto particular incluye todas estas formas isomericas, incluidas las mezclas (por ejemplo, mezclas racemicas) del mismo. Los metodos para la preparacion (p. ej., smtesis asimetrica) y separacion (p. ej., cristalizacion fraccionada y medios cromatograficos) de tales formas isomericas o bien son conocidos en la tecnica o se obtienen facilmente mediante la adaptacion de los metodos que se dan a conocer en la presente memoria, o metodos conocidos, de una manera conocida. .

Sales

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar una sal correspondiente del compuesto, por ejemplo, una sal farmaceuticamente aceptable. Los ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables se exponen en Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts", J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19.

Por ejemplo, si el compuesto es anionico o tiene un grupo funcional que puede ser anionico (por ejemplo, -COOH puede ser -COO-), entonces se puede formar una sal con un cation adecuado. Los ejemplos de cationes inorganicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, iones de metales alcalinos tales como Na⁺ y K⁺ , cationes alcalinoterreos tales como Ca²⁺ y Mg²⁺, y otros cationes tales como Al³⁺ . Los ejemplos de cationes organicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, ion amonio (es decir, NH⁴⁺) y iones amonio sustituidos (por ejemplo, NH³R⁺, NH²R²⁺, NHR³⁺, NR⁴⁺). Son ejemplos de algunos iones de amonio sustituidos adecuados los derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina, y trometamina, asf como aminoacidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion de amonio cuaternario comun es N(CH³)⁴⁺.

Si el compuesto es cationico o tiene un grupo funcional que puede ser cationico (por ejemplo, -NH² puede ser -NH³⁺), entonces se puede formar una sal con un anion adecuado. Los ejemplos de aniones inorganicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, los derivados de los siguientes acidos inorganicos: clorhndrico, bromhHdrico, yodhndrico, sulfurico, sulfuroso, mtrico, nitroso, fosforico y fosforoso.

Los ejemplos de aniones organicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, los derivados de los siguientes acidos organicos: 2-acetiloxibenzoico, acetico, ascorbico, aspartico, benzoico, canforsulfonico, cinamico, cftrico, edetico, etanodisulfonico, etanosulfonico, formico, fumarico, glucheptonico, gluconico, glutamico, glicolico, hidroximaleico, hidroxinaftalenocarbox^lico, isetionico, lactico, lactobionico, laurico, maleico, malico, metanosulfonico, mucico, oleico, oxalico, palmttico, pamoico, pantotenico, fenilacetico, fenilsulfonico, propionico, piruvico, salidlico, estearico, succmico, sulfamlico, tartarico, toluenosulfonico y valerico. Los ejemplos de aniones organicos polimericos adecuados incluyen, pero no se limitan a, los derivados de los siguientes acidos polimericos: acido tanico, carboximetilcelulosa.

A menos que se especifique otra cosa, una referencia a un compuesto particular tambien incluye las formas salinas del mismo.

Hidratos y solvatos

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular un solvato correspondiente del compuesto. El termino "solvato" se usa en la presente memoria en el sentido convencional para referirse a un complejo de soluto (por ejemplo, compuesto, sal de compuesto) y disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato se puede denominar convenientemente un hidrato, por ejemplo, un hemihidrato, un monohidrato, un sesquihidrato, un dihidrato, un trihidrato, etc.

A menos que se especifique otra cosa, una referencia a un compuesto particular tambien incluye las formas de solvato e hidrato del mismo.

Formas qmmicamente protegidas

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular el compuesto en una forma protegida qmmicamente. La expresion "forma protegida qmmicamente" se usa en la presente memoria en el sentido qmmico convencional y se refiere a un compuesto en el que uno o mas grupos funcionales reactivos estan protegidos de reacciones qmmicas indeseables en condiciones espedficas (por ejemplo, pH, temperatura, radiacion, disolvente y similares). En la practica, se emplean metodos qmmicos bien conocidos para hacer que un grupo funcional que de otro modo sena reactivo, se vuelva no reactivo de forma reversible, en las condiciones especificadas. En una forma protegida qmmicamente, uno o mas grupos funcionales reactivos estan en la forma de un grupo protegido o protector (tambien conocido como un grupo enmascarado o enmascarador o un grupo bloqueado o bloqueante). Al proteger un grupo funcional reactivo, se pueden realizar reacciones que implican a otros grupos funcionales reactivos no protegidos, sin afectar al grupo protegido; el grupo protector se puede eliminar, generalmente en una etapa posterior, sin afectar sustancialmente al resto de la molecula. Vease, por ejemplo, Protective Groups in Organic Synthesis (T. Greene and P. Wuts; 4th Edition; John Wiley and Sons, 2006).

Una amplia variedad de tales metodos de "proteccion", "bloqueo" o "enmascaramiento" son ampliamente utilizados y bien conocidos en la smtesis organica. Por ejemplo, un compuesto que tiene dos grupos funcionales reactivos no equivalentes, donde ambos podnan ser reactivos en condiciones espedficas, se puede derivar para convertir uno de los grupos funcionales en "protegido" y, por lo tanto, no reactivo, en las condiciones especificadas; y asf protegido, el compuesto se puede usar como un reactante que tiene efectivamente solo un grupo funcional reactivo. Una vez que se completa la reaccion deseada (que implica al otro grupo funcional), el grupo protegido puede ser "desprotegido" para volverlo a su funcionalidad original.

Por ejemplo, un grupo hidroxi puede ser protegido como un eter (-OR) o un ester (-OC(=O)R), por ejemplo, como: un eter t-butilico; un eter de bencilo, benzhidrilo (difenilmetilo) o tritilo (trifenilmetilo); un eter de trimetilsililo o tbutildimetilsililo; o un ester de acetilo (-OC(=O)CH³, - OAc).

Por ejemplo, un grupo amina puede ser protegido, por ejemplo, como una amida (-NRCO-R) o un uretano (-NRCO-OR), por ejemplo, como: una metil amida (-NHCO-CH³); una benciloxi amida (-NHCO-OCH²C⁶H⁵, -NH-Cbz); como una t-butoxi amida (-NHCO-OC(CH³)³ , -NH-Boc); una 2-bifenil-2-propoxi amida (-NHCO-OC(CH³)²C⁶H⁴C⁶H⁵ , -NH Bpoc), como una 9-fluorenilmetoxi amida (-NH-Fmoc), como una 6-nitroveratiloxi amida (-NH-Nvoc) , como una 2-trimetilsililetiloxi amida (-NH-Teoc), como una 2,2,2-tricloroetiloxi amida (-NH-Troc), como una aliloxi amida (-NH-Alloc), como un 2 (-fenilsulfonil)etiloxi amida (-NH-Psec); o, en casos adecuados (p. ej., aminas dclicas), como un radical nitroxido (>N-O^).

Síntesis qmmica general

Se describen en la presente memoria varios metodos para la smtesis qmmica de compuestos PAPC. Estos y/u otros metodos bien conocidos pueden ser modificados y/o adaptados de maneras conocidas para facilitar la smtesis de compuestos adicionales descritos en la presente memoria.

Síntesis qmmica

Se describen en la presente memoria varios metodos para la smtesis qmmica de los compuestos de piridil-aminopirazina-carbonitrilo (PAPC) de la presente invencion. Estos y/u otros metodos bien conocidos pueden ser modificados y/o adaptados de maneras conocidas para facilitar la smtesis de compuestos adicionales dentro del alcance de la presente invencion.

En una estrategia (Metodo general A), se preparan los compuestos de tipo (v) por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. El compuesto (i) comercialmente disponible se hace reaccionar con una fuente de amoniaco, tfpicamente en solucion acuosa con calentamiento, para dar aminopirazina (ii). La reaccion posterior con un agente de bromacion, tal como N-bromosuccinimida a 0 °C, da la bromopirazina (iii). La reaccion posterior de la bromopirazina con una fuente de cianuro, tfpicamente cianuro de potasio, en condiciones de acoplamiento mediadas por paladio, da piritrina-carbonitrilo (iv). La reaccion subsiguiente con un alcohol, tfpicamente en un disolvente aprotico tal como dioxano en presencia de una base tal como hidruro de sodio, tfpicamente con calentamiento, da los 2-aminopirazina-5-carbonitrilos 6-alcoxi-sustituidos requeridos (v).

Esquema 1

En otra estrategia (Metodo general B), los compuestos de tipo (viii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. El compuesto (vi) comercialmente disponible se hace reaccionar con un aldehfdo (vii), por ejemplo paraformaldehndo, en condiciones de aminacion reductora utilizando un agente reductor, por ejemplo triacetoxiborohidruro de sodio, tfpicamente con calentamiento y en presencia de un acido, para dar los compuestos requeridos (viii).

Esquema 2

En otra estrategia (Metodo general C), los compuestos de tipo (x) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Los compuestos (ix) se hacen reaccionar con un agente de yodacion, tipicamente N-yodosuccinimida en acido sulfurico, para dar los compuestos requeridos (x).

Esquema 3

En otra estrategia (Metodo general D), los compuestos de tipo (xii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Los compuestos (xi) se hacen reaccionar con un agente de cloracion, tfpicamente N-clorosuccinimida en acido acetico, para dar los compuestos requeridos (xii).

Esquema 4

En otra estrategia (Metodo general E), los compuestos de tipo (xv) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. El compuesto (xiii) comercialmente disponible se hace reaccionar con una amina (xiv), por ejemplo, metilamina, tfpicamente con calentamiento en un reactor de microondas, para dar los compuestos requeridos (xv).

Esquema 5

En otra estrategia (Metodo general F), los compuestos de tipo (xvii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Los compuestos (xvi) se hacen reaccionar con una amina (xiv), por ejemplo dimetilamina, tfpicamente en acetonitrilo a temperatura ambiente o inferior, para dar los compuestos requeridos (xvii).

Esquema 6

En otra estrategia (Metodo general G), los compuestos de tipo (xix) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Los compuestos (xvi) se hacen reaccionar con una sal de alcoxido (xviii), por ejemplo, metoxido de sodio, en un disolvente aprotico tal como tetrahidrofurano a temperature ambiente, para dar los compuestos requeridos (xix).

Esquema 7

En otra estrategia (Metodo general H), los compuestos de tipo (xxii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Los compuestos (xx) se hacen reaccionar con haloalcanos (xxi), por ejemplo yodometano, tfpicamente en un disolvente aprotico como DMF y en presencia de una base, tal como hidruro de sodio, para dar los compuestos requeridos (xxii).

Esquema 8

En otra estrategia (Metodo general I), los compuestos de tipo (xxv) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Las 5-yodo-2-cloropiridinas (viii) o (x) se acoplan con acidos o esteres boronicos (xxiii), por ejemplo 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol o 2-ciclopropil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano, en condiciones de acoplamiento mediadas por paladio en un disolvente tal como acetonitrilo, tipicamente con calentamiento en bano de aceite o microondas, y tipicamente en presencia de una base de carbonato metalico, para proporcionar piridinas (xxiv). El tratamiento de los compuestos intermedios (xxiv) con compuestos de pirazina (v) en condiciones de aminacion mediadas por paladio, tfpicamente con calentamiento por microondas o bano de aceite y en presencia de una base, tal como un carbonato metalico, da, despues de la eliminacion de cualquier grupo protector, los compuestos PAPC (xxv) requeridos.

Esquema 9

En otra estrategia (Metodo general J), los compuestos de tipo (xxvi) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Los esteres de 2-cloropiridina-5-carboxilato (xvii) o (xix), se acoplan con compuestos de pirazina (v) en condiciones de aminacion mediada por paladio, tipicamente con calentamiento por microondas o bano de aceite y en presencia de una base, tal como un carbonato metalico, para dar, despues de la eliminacion de cualquier grupo protector, los compuestos PAPC requeridos (xxvi).

Esquema 10

En otra estrategia (Metodo general K), los compuestos de tipo (xxvii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Las 2,5-dicloropiridinas (xii) se acoplan con compuestos de pirazina (v) en condiciones de aminacion mediada por paladio, tfpicamente con calentamiento por microondas o bano de aceite y en presencia de una base, tal como un carbonato metalico, para dar, despues de la eliminacion de cualquier grupo protector, los compuestos PAPC (xxvii) requeridos.

Esquema 11

En otra estrategia (Metodo general L), los compuestos de tipo (xxviii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Las 5-trifluorometil-2-cloropiridinas (xv) se acoplan con compuestos de pirazina (v) en condiciones de aminacion mediadas por paladio, tfpicamente con calentamiento por microondas o bano de aceite y en presencia de una base, tal como un carbonato metalico, para dar, despues de la eliminacion de cualquier grupo protector, los compuestos PAPC (xxviii) requeridos.

Esquema 12

En otra estrategia (Metodo general M), los compuestos de tipo (xxxi) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Las 5-yodo-2-cloropiridinas (viii) o (x) se acoplan con alquinos (xxix), por ejemplo etiniltrimetilsilano o trimetil(2-metilbut-3-in-2-iloxi)silano en condiciones de acoplamiento mediadas por paladio en presencia de una sal de cobre (I), por ejemplo yoduro de cobre (I), en un disolvente tal como la DMF, tfpicamente con calentamiento en bano de aceite o microondas, y tfpicamente en presencia de una base, para proporcionar piridinas (xxx). El tratamiento de compuestos intermedios (xxx) con compuestos de pirazina (v) en condiciones de aminacion mediada por paladio, tfpicamente con calentamiento por microondas o bano de aceite y en presencia de una base, tal como un carbonato metalico, da, despues de la eliminacion de cualquier grupo protector, los compuestos PAPC (xxxi) requeridos.

Esquema 13

En otra estrategia (Metodo general N), los compuestos de tipo (xxxii) se preparan por un metodo ilustrado en el siguiente esquema. Las 5-(pirazol-4-il)-2-cloropiridinas (xxii), se acoplan con compuestos de pirazina (v) en condiciones de aminacion mediada por paladio, tipicamente con calentamiento por microondas o bano de aceite y en presencia de una base, tal como un carbonato metalico, para dar, despues de la eliminacion de cualquier grupo protector, los compuestos PAPC (xxxii) requeridos.

Esquema 14

Composiciones

Un aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion (por ejemplo, una composicion farmaceutica) que comprende un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y un vehnculo, diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un metodo para preparar una composicion (por ejemplo, una composicion farmaceutica) que comprende mezclar un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y un vehfculo, diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable.

En una realizacion preferida, la composicion (por ejemplo, una composicion farmaceutica) es adecuada para administracion oral a un sujeto.

Usos

Los compuestos PAPC, como se describen en la presente memoria, son utiles, por ejemplo, en el tratamiento de trastornos (por ejemplo, enfermedades) que se mejoran por la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1, como se describe en la presente memoria.

Uso en metodos de inhibicion de CHK1

Se describe tambien en la presente memoria un metodo para inhibir la funcion de la cinasa CHK1, in vitro o in vivo, que comprende poner en contacto una cinasa CHK1 con una cantidad eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria.

Se describe tambien en la presente memoria un metodo para inhibir la funcion de la cinasa CHK1 en una celula, in vitro o in vivo, que comprende poner en contacto la celula con una cantidad eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en esta memoria.

En una realizacion, el metodo comprende ademas poner en contacto la celula con uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un inhibidor de antimetabolito o de timidilato sintasa (TS); (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante. Los ensayos adecuados para determinar la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1 se describen en la presente memoria y/o son conocidos en la tecnica.

En una realizacion, el metodo se lleva a cabo in vitro.

En una realizacion, el compuesto PAPC se proporciona en forma de una composicion farmaceuticamente aceptable. Cualquier tipo de celula puede ser tratada, incluyendo pero sin limitarse a, tejido adiposo, pulmon, gastrointestinal (incluyendo, por ejemplo, intestino, colon), mama (mamario), ovario, prostata, tugado (hepatico), rinon (renal), vejiga, pancreas, cerebro y piel.

Los expertos en la tecnica pueden determinar facilmente si un compuesto candidato inhibe o no la funcion de la cinasa CHK1. Por ejemplo, en la presente memoria se describen ensayos adecuados.

Uso en metodos de inhibicion de la proliferacion celular, etc.

Los compuestos PAPC descritos en la presente memoria, por ejemplo, (a) regulan (por ejemplo, inhiben) la proliferacion celular; (b) inhiben la progresion del ciclo celular; (c) promueven la apoptosis celular; o (d) una combinacion de una o mas de ellas.

Se describe tambien en la presente memoria un metodo para regular (por ejemplo, inhibir) la proliferacion celular (por ejemplo, la proliferacion de una celula), inhibir la progresion del ciclo celular, promover la apoptosis celular, o una combinacion de una o mas de ellas, in vitro o in vivo, que comprende poner en contacto una celula con una cantidad eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria.

En una realizacion, el metodo es un metodo para regular (por ejemplo, inhibir) la proliferacion celular (por ejemplo, la proliferacion de una celula), in vitro o in vivo, que comprende poner en contacto una celula con una cantidad eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria.

En una realizacion, el metodo comprende ademas poner en contacto la celula con uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana al ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de TS; (d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

En una realizacion, el metodo se lleva a cabo in vitro.

En una realizacion, el compuesto PAPC se proporciona en forma de una composicion farmaceuticamente aceptable. Se puede tratar cualquier tipo de celula, incluyendo pero sin limitarse a, pulmon, tejido gastrointestinal (incluyendo, por ejemplo, intestino, colon), mama (mamario), ovario, prostata, tugado (hepatico), rinon (renal), vejiga, pancreas, cerebro y piel.

Los expertos en la tecnica pueden determinar facilmente si un compuesto candidato regula o no (por ejemplo, inhibe) la proliferacion celular, etc. Por ejemplo, en la presente memoria se describen ensayos que se pueden usar convenientemente para evaluar la actividad ofrecida por un compuesto particular. .

Por ejemplo, se puede cultivar in vitro una muestra de celulas (por ejemplo, de un tumor) y poner en contacto un compuesto con dichas celulas, y se puede observar el efecto del compuesto sobre esas celulas. Como un ejemplo de "efecto", se puede determinar el estado morfologico de las celulas (por ejemplo, vivas o muertas, etc.). Cuando se encuentra que el compuesto ejerce una influencia sobre las celulas, esto se puede usar como un marcador de pronostico o diagnostico de la eficacia del compuesto en los metodos de tratamiento de un paciente que es portador de celulas del mismo tipo celular.

Uso en metodos de terapia

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, para uso en un metodo de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, para uso en un metodo de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia por administracion oral.

En una realizacion, el metodo de tratamiento comprende tratamiento con ambos (i) un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y (II) uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana al ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana al ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); o d) un agente dirigido a los microtubulos como se describe en la presente memoria para uso en un metodo de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia, en donde el metodo de tratamiento comprende el tratamiento con ambos (i) un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y (a) el inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) el agente que dana al ADN; (c) el antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS), o d) el agente dirigido a los microtubulos.

Uso en la fabricacion de medicamentos

Otro aspecto de la presente invencion se refiere al uso de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, en la fabricacion de un medicamento para uso en tratamiento.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere al uso de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, en la fabricacion de un medicamento para uso en el tratamiento por administracion oral.

En una realizacion, el medicamento comprende el compuesto PAPC.

En una realizacion, el tratamiento comprende tratamiento con ambos (i) un medicamento que comprende un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y (II) uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere al uso de (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II, (b) un agente que dana el ADN, (c) un antimetabolito o inhibidor del TS, o (d) un agente dirigido a los microtubulos, como se describe en la presente memoria, en la fabricacion de un medicamento para uso en un tratamiento, en donde el tratamiento comprende el tratamiento con ambos (i) un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, y (a) el inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II, (b) el agente que dana el ADN, (c) el antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS), o (d) el agente dirigido a los microtubulos.

Metodos de tratamiento

Se describe tambien en la presente memoria un metodo de tratamiento que comprende administrar a un paciente que necesita tratamiento una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, preferiblemente en la forma de una composicion farmaceutica.

Se describe tambien en la presente memoria un metodo de tratamiento que comprende administrar oralmente a un paciente que necesita tratamiento una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, preferiblemente en la forma de una composicion farmaceutica.

En una realizacion, el metodo comprende ademas administrar al sujeto uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Afecciones tratadas - afecciones mediadas por CHK1

En una realizacion (por ejemplo, de uso en metodos de terapia, de uso en la fabricacion de medicamentos, de metodos de tratamiento), el tratamiento es tratamiento de una enfermedad o afeccion que es mediada por CHK1. Afecciones tratadas - afecciones mejoradas por la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1

En una realizacion (por ejemplo, de uso en metodos de terapia, de uso en la fabricacion de medicamentos, de metodos de tratamiento), el tratamiento es tratamiento de: una enfermedad o afeccion que se mejora por la inhibicion de la funcion de la cinasa CHK1.

Trastornos tratados - afecciones proliferativas

En una realizacion (por ejemplo, de uso en metodos de terapia, de uso en la fabricacion de medicamentos, de metodos de tratamiento), el tratamiento es tratamiento de: una afeccion proliferativa.

El termino "afeccion proliferativa", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una proliferacion celular no deseada o incontrolada de celulas excesivas o anormales que es un crecimiento no deseado, tal como el crecimiento neoplasico o hiperplasico.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de: una afeccion proliferativa caracterizada por la proliferacion celular benigna, pre-maligna, o maligna, incluyendo por ejemplo: neoplasmas, hiperplasias, y tumores (p. ej., histocitoma, glioma, astrocitoma, osteoma), canceres (vease mas adelante), psoriasis, enfermedades oseas, trastornos fibroproliferativos (por ejemplo, de tejidos conjuntivos), fibrosis pulmonar, ateroesclerosis, proliferacion de celulas musculares lisas en los vasos sangumeos, tal como estenosis o reestenosis despues de angioplastia.

Trastornos tratados - cancer

En una realizacion (por ejemplo, de uso en metodos de terapia, de uso en la fabricacion de medicamentos, de metodos de tratamiento), el tratamiento es tratamiento del cancer.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento del cancer de pulmon, cancer de pulmon de celulas pequenas, cancer de pulmon de celulas no pequenas, cancer gastrointestinal, cancer de estomago, cancer de intestino, cancer de colon, cancer rectal, cancer colorrectal, cancer de tiroides, cancer de mama, cancer de ovarios, cancer de endometrio, cancer de prostata, cancer testicular, cancer de tngado, cancer de rinon, carcinoma de celulas renales, cancer de vejiga, cancer pancreatico, cancer cerebral, neuroblastoma, glioma, sarcoma, osteosarcoma, cancer de huesos, cancer nasofarmgeo (p. ej., cancer de cabeza, cancer de cuello), cancer de piel, cancer escamoso, sarcoma de Kaposi, melanoma, melanoma maligno, linfoma o leucemia.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de:

un carcinoma, por ejemplo un carcinoma de vejiga, de mama, de colon (p. ej., carcinomas colorrectales tales como adenocarcinoma de colon y adenoma de colon), de rinon, epidermico, de tngado, de pulmon (p. ej., adenocarcinoma, cancer de pulmon de celulas pequenas y carcinomas de pulmon de celulas no pequenas), de esofago, de vesmula biliar, de ovarios, pancreatico (p. ej., carcinoma pancreatico exocrino), de estomago, de cuello uterino, de tiroides, de prostata, de piel (p. ej., carcinoma de celulas escamosas);

un tumor hematopoyetico de linaje linfoide, por ejemplo leucemia, leucemia linfodtica aguda, linfoma de celulas B, linfoma de celulas T, linfoma de Hodgkin, linfoma no-Hodgkin, linfoma de celulas peludas, o linfoma de Burkett; un tumor hematopoyetico de linaje mieloide, por ejemplo leucemias mielogenas agudas y cronicas, smdrome mielodisplasico, o leucemia promielodtica;

un tumor del origen mesenquimal, por ejemplo fibrosarcoma o habdomiosarcoma;

un tumor del sistema nervioso central o periferico, por ejemplo astrocitoma, neuroblastoma, glioma o Schwannoma;

melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteosarcoma; xenoderoma pigmentoum; queratoacantoma; cancer folicular tiroideo; o sarcoma de Kaposi.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de cancer de tumor solido.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de cancer de cabeza; cancer de cuello; cancer del sistema nervioso; cancer cerebral; neuroblastoma; cancer de pulmon/mediastino; cancer de mama; cancer de esofago; cancer de estomago; cancer de tngado; cancer de tracto biliar; cancer pancreatico; cancer de intestino delgado; cancer de intestino grueso; cancer colorrectal; cancer ginecologico; cancer genito-urinario; cancer de ovarios; cancer de la glandula tiroides; cancer de las glandulas suprarrenales; cancer de piel; melanoma; sarcoma oseo; sarcoma de tejidos blandos; tumor maligno pediatrico; enfermedad de Hodgkin; linfoma no Hodgkin; mieloma; leucemia; o metastasis desde un sitio primario desconocido.

En una realizacion, el cancer se caracteriza por, o se caracteriza ademas por, ser un cancer deficiente en p53. En una realizacion, el cancer es cancer deficiente en p53.

En una realizacion, el tratamiento es tratamiento de la metastasis cancerosa.

El efecto anti-cancer puede surgir a traves de uno o mas mecanismos, incluyendo pero sin limitarse a, la regulacion de la proliferacion celular, la inhibicion de la progresion del ciclo celular, la inhibicion de la angiogenesis (formacion de nuevos vasos sangumeos), la inhibicion de la metastasis (dispersion de un tumor desde su origen), la inhibicion de la migracion celular (dispersion de las celulas cancerosas a otras partes del cuerpo), la inhibicion de la invasion (dispersion de las celulas tumorales en estructuras normales vecinas), o la promocion de la apoptosis celular (muerte celular programada). Los compuestos de la presente invencion se pueden utilizar en el tratamiento de los canceres descritos en esta memoria, independientemente de los mecanismos expuestos en la presente memoria. Tratamiento

El termino "tratamiento", como se utiliza en la presente memoria en el contexto de tratamiento de un trastorno, se refiere generalmente al tratamiento de un ser humano o de un animal (por ejemplo, en aplicaciones veterinarias), en el cual se logra algun efecto terapeutico deseado, por ejemplo, la inhibicion del progreso del trastorno, e incluye una reduccion en la tasa de progreso, un alto en la tasa de progreso, alivio de los smtomas del trastorno, mejona del trastorno y cura del trastorno. Tambien se incluye el tratamiento como una medida profilactica (es decir, profilaxis). Por ejemplo, el uso con pacientes que aun no han desarrollado el trastorno, pero que estan en riesgo de desarrollar el trastorno, esta englobado en el termino "tratamiento".

Por ejemplo, el tratamiento incluye la profilaxis del cancer, reduciendo la incidencia de cancer, aliviando los smtomas del cancer, etc.

El termino "cantidad terapeuticamente eficaz", como se usa en la presente memoria, se refiere a la cantidad de un compuesto, o de un material, composicion o forma farmaceutica que comprende un compuesto, que es eficaz para producir algun efecto terapeutico deseado, acorde con una relacion razonable beneficio/riesgo, cuando se administra de acuerdo con un regimen de tratamiento deseado.

Terapias de combinacion

El termino "tratamiento" incluye tratamientos de combinacion y terapias, en las que se combinan dos o mas tratamientos o terapias, por ejemplo, secuencial o simultaneamente. Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente memoria tambien se pueden usar en terapias de combinacion, por ejemplo, en conjuncion con otros agentes. Ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, pero no se limitan a, la quimioterapia (administracion de agentes activos, incluyendo, por ejemplo, farmacos, anticuerpos (por ejemplo, como en la inmunoterapia), profarmacos (por ejemplo, como en la terapia fotodinamica, g De PT, ADEPT, etc.); cirugfa; radioterapia; terapia fotodinamica; terapia genica; y dietas controladas.

Tambien se describe aqu un compuesto como se describe en la presente memoria, en combinacion con uno o mas (por ejemplo, 1 , 2 , 3, 4, etc.), agentes terapeuticos adicionales, por ejemplo agentes o terapias que regulan el crecimiento o la supervivencia o la diferenciacion celular a traves de un mecanismo diferente, tratando asf varios rasgos caractensticos del desarrollo del cancer.

La combinacion particular debe ser a discrecion del medico que debe seleccionar las dosis utilizando su conocimiento general comun y regfmenes de dosificacion conocidos por un medico experto.

Los agentes (es decir, el compuesto descrito en la presente memoria, mas uno o mas de otros agentes) se pueden administrar simultanea o secuencialmente, y se pueden administrar en programas de dosis que vanan individualmente y a traves de distintas vfas. Por ejemplo, cuando se administran secuencialmente, los agentes se pueden administrar a intervalos poco espaciados (por ejemplo, durante un penodo de 5-10 minutos) o a intervalos mas largos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o mas horas de separacion, o incluso penodos mas largos de separacion cuando sea necesario), siendo adecuado el regimen de dosificacion exacto a las propiedades del agente o agentes terapeuticos.

Los agentes (es decir, el compuesto descrito en la presente memoria, mas uno o mas de otros agentes) se pueden formular juntos en una sola forma farmaceutica, o alternativamente, los agentes individuales se pueden formular por separado y presentarse juntos en forma de un kit, opcionalmente con instrucciones para su uso.

Terapias de combinacion que emplean agentes que danan el ADN

Como se expone en la presente memoria, en algunas realizaciones, el compuesto PAPC se emplea en combinacion con (p.ej., en conjuncion con) uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); d) un agente dirigido a los microtubulos; y (e) una radiacion ionizante.

Cuando se emplean ambos, un compuesto PAPC y uno o mas de otros agentes, se pueden utilizar (p.ej., poner en contacto, administrar, etc.) en cualquier orden. Ademas, se pueden utilizar (p.ej., poner en contacto, administrar, etc.) juntos, como parte de una sola formulacion, o por separado, como formulaciones separadas.

Por ejemplo, con respecto a los metodos de tratamiento que emplean ambos, un compuesto PAPC y uno o mas de otros agentes, el tratamiento con (por ejemplo, la administracion de) el compuesto PAPC puede ser anterior a, concurrente con o puede seguir al tratamiento con (por ejemplo, la administracion de) el uno o mas de otros agentes, o una combinacion de los mismos.

En una realizacion, el tratamiento con (por ejemplo, la administracion de) un compuesto PAPC es concurrente con, o sigue al tratamiento con (por ejemplo, la administracion de) uno o mas de otros agentes.

En una realizacion, el uno o mas de otros agentes es un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; por ejemplo, etoposido, topotecan, camptotecina, irinotecan, SN-38, doxorubicina, o daunorubicina.

En una realizacion, el uno o mas de otros agentes es un agente que dana el ADN; por ejemplo, agentes alquilantes, agentes de platino o compuestos que generan radicales libres; por ejemplo, temozolomida, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, mitomicina C, ciclofosfamida, BCNU, CCNU o bleomicina.

En una realizacion, el uno o mas de otros agentes es un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); por ejemplo, 5-fluorouracilo, hidroxiurea, gemcitabina, arabinosilcitosina, fludarabina, tomudex, o ZD9331.

En una realizacion, el uno o mas de otros agentes es un agente dirigido a los microtubulos; por ejemplo, paclitaxel, docetaxel, vincristina, o vinblastina.

En una realizacion, el uno o mas de otros agentes es la radiacion ionizante (por ejemplo, como parte de la radioterapia).

Otros usos

Los compuestos PAPC descritos en la presente memoria tambien pueden ser utilizados como aditivos de cultivo celular para inhibir la funcion de la cinasa CHK1, por ejemplo, para inhibir la proliferacion celular, etc.

Los compuestos PAPC descritos en la presente memoria tambien pueden ser utilizados como parte de un ensayo in vitro, por ejemplo, con el fin de determinar si es probable o no que un hospedante candidato se beneficie del tratamiento con el compuesto en cuestion.

Los compuestos PAPC descritos en la presente memoria tambien pueden ser utilizados como un estandar, por ejemplo, en un ensayo, con el fin de identificar otros compuestos, otros inhibidores de la funcion de la cinasa CHK1, otros agentes anti-proliferativos, otros agentes anti-cancer, etc.

Kits

Se describe tambien en la presente memoria un kit que comprende (a) un compuesto PAPC como se describe en la presente memoria, o una composicion que comprende un compuesto PAPC como se describe en la presente memoria, por ejemplo, preferiblemente en un recipiente adecuado y/o con empaquetado adecuado; y (b) Instrucciones de uso, por ejemplo, instrucciones escritas sobre como administrar el compuesto o composicion. En una realizacion, el kit comprende ademas uno o mas de otros agentes seleccionados de: (a) un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II; (b) un agente que dana el ADN; (c) un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS); y d) un agente dirigido a los microtubulos.

Las instrucciones escritas pueden incluir tambien una lista de indicaciones para las cuales el ingrediente activo es un tratamiento adecuado.

Vfas de administracion

El compuesto PAPC o la composicion farmaceutica que comprende el compuesto PAPC se puede administrar a un sujeto por cualquier via de administracion conveniente, ya sea sistemica/periferica o topicamente (es decir, en el lugar de accion deseado).

Las vfas de administracion incluyen, pero no se limitan a, oral (p.ej., por ingestion); bucal; sublingual; transdermica (incluyendo, por ejemplo, mediante un parche, escayola, etc.); transmucosal (incluyendo, p.ej., mediante un parche, escayola, etc.); intranasal (p.ej., por pulverizacion nasal); ocular (p.ej., por gotas oftalmicas); pulmonar (p. ej., por terapia de inhalacion o insuflacion utilizando, p.ej., un aerosol, p.ej., a traves de la boca o la nariz); rectal (p.ej., por supositorio o enema); vaginal (p.ej., por pesario); parenteral, por ejemplo, por inyeccion, incluyendo subcutanea, intradermica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardiaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnoidea e intraesternal; por implante de un deposito o reservorio, por ejemplo, por via subcutanea o intramuscular.

Preferiblemente, la via de administracion es oral, y el compuesto PAPC o composicion farmaceutica que comprende el compuesto PAPC se administra a un sujeto por via oral.

El sujeto/paciente

El sujeto/paciente puede ser un cordado, un vertebrado, un mairnfero, un marnffero placentario, un marsupial (p.ej., canguro, wombat), un roedor (p.ej., un cobaya, un hamster, una rata, un raton), un murino (p.ej., un raton), un lagomorfo (p.ej., un conejo), un ave (p.ej., un pajaro), un canino (p.ej., un perro), un felino (p.ej., un gato), un equino (p.ej., un caballo), un porcino (p.ej., un cerdo), un ovino (p.ej., una oveja), un bovino p.ej., una vaca), un primate, simio (p.ej., un mono o un mono sin cola), un mono (p.ej., titf, babuino), un mono sin cola (p.ej., gorila, chimpance, orangutan, gibon) o un ser humano.

Ademas, el sujeto/paciente puede estar en cualquiera de sus formas de desarrollo, por ejemplo, un feto.

En una realizacion preferida, el sujeto/paciente es un ser humano.

Formulaciones

Aunque es posible que un compuesto PAPC sea administrado solo, es preferible presentarlo como una formulacion farmaceutica (por ejemplo, composicion, preparacion, medicamento) que comprende al menos un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, junto con uno o mas de otros ingredientes farmaceuticos aceptables bien conocidos por los expertos en la tecnica, incluyendo, pero sin limitarse a, vehfculos farmaceuticamente aceptables, diluyentes, excipientes, adyuvantes, cargas, tampones, conservantes, antioxidantes, lubricantes, estabilizantes, solubilizantes, tensioactivos (por ejemplo, agentes humectantes), agentes enmascarantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes y agentes edulcorantes. La formulacion puede comprender ademas otros agentes activos, por ejemplo, otros agentes terapeuticos o profilacticos.

Asf, la presente invencion proporciona ademas composiciones farmaceuticas, como se han definido anteriormente, y metodos para preparar una composicion farmaceutica que comprenden mezclar al menos un compuesto PAPC, como se describe en la presente memoria, junto con uno o mas de otros ingredientes farmaceuticamente aceptables bien conocidos por los expertos en la tecnica, por ejemplo, vehnculos, diluyentes, excipientes, etc. Si se formulan como unidades discretas (por ejemplo, comprimidos, etc.), cada unidad contiene una cantidad predeterminada (dosis) del compuesto.

El termino "farmaceuticamente aceptable", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a compuestos, ingredientes, materiales, composiciones, formas farmaceuticas, etc., que son, dentro del alcance de un buen criterio medico, adecuados para uso en contacto con los tejidos del sujeto en cuestion (por ejemplo, un ser humano) sin excesiva toxicidad, irritacion, respuesta alergica, u otro problema o complicacion, acorde con una relacion beneficio/riesgo razonable. Cada vehnculo, diluyente, excipiente, etc. tambien debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demas ingredientes de la formulacion.

Los vehnculos, diluyentes, excipientes, etc. adecuados se pueden encontrar en los textos farmaceuticos estandar, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Mack Publishing Company, Easton, PA., 1990; y Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th edition, 2005.

Las formulaciones pueden ser preparadas por cualquier metodo bien conocido en la tecnica de la farmacia. Tales metodos incluyen la etapa de poner en asociacion el compuesto con un vehfculo que constituye uno o mas ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociacion de manera uniforme e mtima el compuesto con los vehfculos (por ejemplo, vehfculos lfquidos, vehfculo solido finamente dividido, etc.), y despues dando forma al producto, si es necesario.

La formulacion se puede preparar para proporcionar una liberacion rapida o lenta; liberacion inmediata, retardada, controlada o sostenida; o una combinacion de las mismas.

Las formulaciones pueden estar adecuadamente en forma de lfquidos, soluciones (p. ej., acuosas, no acuosas), suspensiones (p. ej., acuosas, no acuosas), emulsiones ((p. ej., aceite-en-agua, agua-en-aceite), elixires, jarabes, electuarios, colutorios, gotas, comprimidos (incluyendo, p. ej., comprimidos recubiertos), granulos, polvos, comprimidos para chupar, pastillas, capsulas (incluyendo, por ejemplo, capsulas de gelatina duras y blandas), sellos, pfldoras, ampollas, bolos, supositorios, pesarios, tinturas, geles, pastas, pomadas, cremas, lociones, aceites, espumas, pulverizaciones, nieblas o aerosoles.

Las formulaciones se pueden proporcionar adecuadamente como un parche, escayola adhesiva, vendaje, aposito, o similar que esta impregnado con uno o mas compuestos y opcionalmente uno o mas de otros ingredientes farmaceuticamente aceptables, incluyendo, por ejemplo, potenciadores de la penetracion, permeacion y absorcion. Las formulaciones tambien pueden ser proporcionadas adecuadamente en la forma de un deposito o reservorio. El compuesto se puede disolver, suspender o mezclar con uno o mas de otros ingredientes farmaceuticamente aceptables. El compuesto se puede presentar en un liposoma u otro sistema microparticulado que es disenado para dirigir el compuesto, por ejemplo, a los componentes de la sangre o a uno o mas organos.

Las formulaciones adecuadas para administracion oral (p. ej., por ingestion) incluyen lfquidos, soluciones (p. ej., acuosas, no acuosas), suspensiones (p. ej., acuosas, no acuosas), emulsiones (p. ej., aceite-en-agua, agua-enaceite), elixires, jarabes, electuarios, comprimidos, granulos, polvos, capsulas, sellos, pfldoras, ampollas, bolos. Las formulaciones adecuadas para administracion bucal incluyen enjuagues bucales, comprimidos para chupar, pastillas, asf como parches, escayolas adhesivas, depositos y reservorios. Los comprimidos para chupar comprenden tfpicamente el compuesto en una base con sabor, normalmente sacarosa y goma arabiga o tragacanto. Las pastillas comprenden tfpicamente el compuesto en una matriz inerte, como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arabiga. Los enjuagues bucales comprenden tfpicamente el compuesto en un vehfculo lfquido adecuado. Las formulaciones adecuadas para administracion sublingual incluyen comprimidos, comprimidos para chupar, pastillas, capsulas, y pfldoras.

Las formulaciones adecuadas para la administracion transmucosal oral incluyen lfquidos, soluciones (por ejemplo, acuosas, no acuosas), suspensiones (por ejemplo, acuosas, no acuosas), emulsiones (por ejemplo, aceite en agua, agua en aceite), enjuagues bucales, comprimidos para chupar, pastillas, asf como parches, escayolas adhesivas, depositos y reservorios.

Las formulaciones adecuadas para administracion transmucosal no oral incluyen lfquidos, soluciones (p. ej., acuosas, no acuosas), suspensiones (p. ej., acuosas, no acuosas), emulsiones (p. ej., aceite-en-agua, agua-enaceite), supositorios, pesarios, geles, pastas, pomadas, cremas, lociones, aceites, asf como parches, escayolas adhesivas, depositos y reservorios.

Las formulaciones adecuadas para administracion transdermica incluyen geles, pastas, pomadas, cremas, lociones y aceites, as ^como parches, escayolas adhesivas, vendajes, apositos, depositos y reservorios.

Los comprimidos se pueden fabricar por medios convencionales, por ejemplo, compresion o moldeo, opcionalmente con uno o mas ingredientes accesorios. Los comprimidos de compresion se pueden preparar comprimiendo en una maquina adecuada el compuesto en una forma fluida tal como un polvo o granulos, opcionalmente mezclados con uno o mas aglutinantes (por ejemplo, povidona, gelatina, goma arabiga, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetil celulosa); rellenos o diluyentes (p. ej., lactosa, celulosa microcristalina, hidrogenofosfato de calcio); lubricantes (p. ej., estearato de magnesio, talco, sflice); disgregantes (por ejemplo, glicolato sodico de almidon, povidona reticulada, carboximetilcelulosa sodica reticulada); agentes tensioactivos o dispersantes o humectantes (por ejemplo, lauril sulfato sodico); conservantes (p. ej., p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, acido sorbico); sabores, agentes que mejoran el sabor y edulcorantes. Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una maquina adecuada una mezcla del compuesto pulverizado humedecido con un diluyente lfquido inerte. Opcionalmente, los comprimidos pueden ser recubiertos o ranurados y se pueden formular de forma que proporcionen una liberacion lenta o controlada del compuesto a partir de los mismos utilizando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para obtener el perfil de liberacion deseado. Los comprimidos se pueden proporcionar opcionalmente con un recubrimiento, por ejemplo, que afecte a la liberacion, por ejemplo un recubrimiento enterico, para proporcionar la liberacion en partes del intestino distintas del estomago.

Las pomadas se preparan tfpicamente a partir del compuesto y una base de pomada parafrnica o miscible con agua. Las cremas se preparan tfpicamente a partir del compuesto y una base de crema de aceite en agua. Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos aproximadamente el 30 % p/p de un alcohol polihidroxilado, es decir, un alcohol que tiene dos o mas grupos hidroxilo tales como propilenglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol y mezclas de los mismos. Las formulaciones topicas pueden incluir deseablemente un compuesto que mejora la absorcion o penetracion del compuesto a traves de la piel u otras areas afectadas. Los ejemplos de dichos potenciadores de la penetracion dermica incluyen dimetilsulfoxido y analogos relacionados.

Las emulsiones se preparan tfpicamente a partir del compuesto y una fase oleosa, que opcionalmente puede comprender simplemente un emulsionante (tambien conocido como un emulgente), o puede comprender una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con ambos, una grasa y un aceite. Preferiblemente, se incluye un emulsionante hidrofilo junto con un emulsionante lipofilo que actua como un estabilizante. Tambien es preferible incluir ambos, un aceite y una grasa. Juntos, el emulsionante o emulsionantes con o sin estabilizante o estabilizantes forman la llamada cera emulsionante, y la cera, junto con el aceite y/o la grasa, forman la llamada base de pomada emulsionante que forma la fase dispersa oleosa de las formulaciones de crema.

Los emulgentes y estabilizantes de la emulsion adecuados incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoesteanlico, alcohol miristflico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio. La eleccion de aceites o grasas adecuados para la formulacion se basa en lograr las propiedades cosmeticas deseadas, ya que la solubilidad del compuesto en la mayona de los aceites que probablemente se usaran en formulaciones de emulsion farmaceutica puede ser muy baja. Por lo tanto, la crema debe ser preferiblemente un producto no graso, que no manche y lavable con una consistencia adecuada para evitar fugas de los tubos u otros recipientes. Se pueden usar esteres alqrnlicos monobasicos o dibasicos de cadena lineal o ramificada, tales como di-isoadipato, estearato de isocetilo, diester de propilenglicol de acidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de esteres de cadena ramificada conocida como Crodamol CAP, siendo preferidos los tres ultimos esteres. Estos se pueden usar solos o en combinacion dependiendo de las propiedades requeridas. Alternativamente, se pueden usar lfpidos de alto punto de fusion tales como parafina blanda blanca y/o parafina lfquida u otros aceites minerales.

Las formulaciones adecuadas para administracion intranasal, donde el vehfculo es un lfquido, incluyen, por ejemplo, pulverizacion nasal, gotas nasales, o por administracion de aerosol por nebulizador, incluyen soluciones acuosas u oleosas del compuesto.

Las formulaciones adecuadas para administracion intranasal, donde el vehfculo es un solido, incluyen, por ejemplo, las que se presentan como un polvo grueso que tiene un tamano de partfcula, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 20 a aproximadamente 500 micras, que se administra de la misma manera que el rape, es decir, por inhalacion rapida a traves del pasaje nasal desde un recipiente con el polvo que se mantiene cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas para administracion pulmonar (p. ej., por terapia de inhalacion o insuflacion) incluyen las que se presentan como una pulverizacion en aerosol desde un envase presurizado, con el uso de un propelente adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, dicloro-tetrafluoroetano, dioxido de carbono u otros gases adecuados

Las formulaciones adecuadas para administracion ocular incluyen gotas oculares en las que el compuesto esta disuelto o suspendido en un vehfculo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el compuesto.

Las formulaciones adecuadas para administracion rectal se pueden presentar como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas, polioles semiffquidos o ffquidos, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato; o como una solucion o suspension para tratamiento por enema.

Las formulaciones adecuadas para administracion vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones para pulverizacion que contienen ademas del compuesto, aquellos vetffculos que se conoce en la tecnica que son apropiados.

Las formulaciones adecuadas para administracion parenteral (por ejemplo, por inyeccion), incluyen ffquidos esteriles acuosos o no acuosos, isotonicos, libres de pirogenos (por ejemplo, soluciones, suspensiones), en los que el compuesto se disuelve, se suspende o se proporciona de otro modo (por ejemplo, en un liposoma u otro sistema microparticulado). Dichos ffquidos pueden contener adicionalmente otros ingredientes farmaceuticamente aceptables, tales como antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizantes, bacteriostaticos, agentes de suspension, agentes espesantes y solutos que hacen que la formulacion sea isotonica con la sangre (u otro ffquido corporal relevante) del recipiente previsto. Los ejemplos de excipientes incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicerol, aceites vegetales y similares. Ejemplos de vetffculos isotonicos adecuados para uso en tales formulaciones incluyen cloruro de sodio para inyeccion, solucion de Ringer, o solucion de Ringer lactato para inyeccion. Tfpicamente, la concentracion del compuesto en el ffquido es de aproximadamente 1 ng/mL a aproximadamente 10 pg/mL, por ejemplo, desde aproximadamente 10 ng/mL hasta aproximadamente 1 pg/mL. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes sellados de dosis unitarias o de dosis multiples, por ejemplo, ampollas y viales, y pueden ser almacenadas en un estado desecado por congelacion (liofilizado) que requiere solo la adicion del vehffculo ffquido esteril, por ejemplo, agua para inyeccion, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones extemporaneas para inyeccion se pueden preparar a partir de polvos, granulos y comprimidos esteriles.

Dosificacion

Los expertos en la tecnica apreciaran que las dosis apropiadas de los compuestos PAPC, y las composiciones que comprenden los compuestos PAPC, pueden variar de un paciente a otro. La determinacion de la dosis optima generalmente implicara el equilibrio del nivel de beneficio terapeutico frente a cualquier riesgo o efectos secundarios perjudiciales. El nivel de dosificacion seleccionado dependera de una variedad de factores que incluyen, pero no se limitan a, la actividad del compuesto PAPC particular, la via de administracion, el tiempo de administracion, la velocidad de excrecion del compuesto PAPC, la duracion del tratamiento, otros farmacos, compuestos y/o materiales utilizados en combinacion, la gravedad del trastorno y la especie, el sexo, la edad, el peso, la afeccion, la salud general y el historial medico anterior del paciente. La cantidad de compuesto PAPC y la via de administracion seran finalmente a criterio del medico, veterinario o clmico, aunque generalmente la dosis se seleccionara para lograr concentraciones locales en el sitio de accion que logren el efecto deseado sin causar sustanciales efectos secundarios perjudiciales o nocivos.

La administracion se puede efectuar en una dosis, de forma continua o intermitente (por ejemplo, en dosis divididas a intervalos apropiados) a lo largo del tratamiento. Los metodos para determinar los medios mas eficaces y la dosis de administracion son bien conocidos por los expertos en la tecnica y variaran con la formulacion utilizada para la terapia, el proposito de la terapia, la celula o celulas diana a tratar y el sujeto a tratar. Las administraciones unicas o multiples se pueden realizar con el nivel de dosis y el patron seleccionado por el medico, veterinario o clmico responsable del tratamiento.

En general, una dosis adecuada del compuesto PAPC esta en el intervalo de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 250 mg (mas ffpicamente de aproximadamente 100 pg a aproximadamente 25 mg) por kilogramo de peso corporal del sujeto al dfa. Cuando el compuesto es una sal, un ester, una amida, un profarmaco o similar, la cantidad administrada se calcula sobre la base del compuesto original y, por lo tanto, el peso real que se utiliza se incrementa proporcionalmente.

Ejemplos

Síntesis qrnmica

Los siguientes ejemplos se proporcionan unicamente para ilustrar la presente invencion.

Procedimientos sinteticos generales

Las reacciones se llevaron a cabo bajo N2. Las reacciones con microondas se realizaron utilizando reactores de microondas Biotage Initiator 60 o CEM. La cromatograffa rapida sobre sffice se realizo utilizando el gel de sffice Merck 60 (0,025-0,04 mm). La cromatograffa de intercambio ionico se realizo utilizando cartuchos de resina Isolute Flash SCX-II (acido) o Flash NH2 (basico). La cromatograffa de gradiente se llevo a cabo en un sistema de purificacion de cromatograffa rapida automatizado Biotage SP1. Los espectros 1H NMR fueron registrados en un instrumento Bruker AMX500 a 500 MHz o en un instrumento Bruker Avance a 400 MHz utilizando cerraduras internas de deuterio. Los desplazamientos qrnmicos (8 ) se registran con relacion a TMS ( 8 = 0) y/o con referencia al disolvente en el que se midieron. Las constantes de acoplamiento (J) se registran en Hz. Se registraron los analisis combinados de HPLC-MS utilizando uno de los siguientes:

1. (LCT) un modulo de separaciones Waters Alliance 2795 y un detector de masas Water/Micromass LCT con ionizacion por electronebulizacion (modo de iones o - como se indique) con HPLC realizada utilizando columnas Supelco DISCOVERY C18, 50 mm * 4,6 mm o 30 mm * 4,6 mm de diametro interno (i.d.), o Agilent 6210 TOF HPLC-MS con una columna Fenomenex Gemini 3 pm C18 (3 cm * 4,6 mm i.d.). Ambas funcionaron a una temperatura de 22 °C con gradiente de elucion de 10-90 % de MeOH/0,1 % de acido formico acuoso a un caudal de 1 mL/min y un tiempo de recorrido de 3,5 o 4 minutos como se indica. La deteccion UV se hizo a 254 nm y la ionizacion fue por electronebulizacion de iones positivos o negativos. El intervalo de barrido del peso molecular fue de 50-1000 Amu.

2. (ZQ) un espectrometro de masas Micromass ZQ/HPLC Waters Alliance 2795 HT con una columna Fenomenex Gemini 5 pm, C18, 30 mm * 4,6 mm i.d. o Waters X-Bridge C18, 2,5 pm, 3,0 * 30 mm. Ambas funcionaron a una temperatura de 35 °C con un gradiente de elucion de 5-95 % (amomaco al 0,1 % en acetonitrilo)/(amomaco al 0,1 %, acetonitrilo al 5 % y formiato de amonio al 0,063 % en agua) a un caudal de 2 mL/min y un tiempo de recorrido de 4 o 6 minutos como se indica. La deteccion UV se hizo a 220-400 nm utilizando un detector ultravioleta de matriz de fotodiodos Waters 996 y la ionizacion fue por electronebulizacion de iones positivos o negativos. El intervalo de barrido del peso molecular fue de 80-1000 Amu.

Procedimiento general i:

Acoplamiento de los intermedios de 5-yodo-2-cloropiridina a 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol

Esquema 1

Se disolvio el intermedio de 5-yodo-2-cloropiridina adecuado I-8 , o I-9 (1 equivalente) en acetonitrilo (7 mL de disolvente por 1 mmol de compuesto). Se anadieron 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1 equivalente), tetrakis-(trifenilfosfina)paladio(0) (5 % en moles) y carbonato de sodio (1,5 equivalentes) y se calento la mezcla en un reactor de microondas a 100 °C durante 30 minutos (intermedio I-8 ) o durante 15 minutos (intermedio I-9). La mezcla de reaccion se concentro a vado sobre gel de sflice. Por cromatograffa de gradiente (1-5 % de MeOH:CH2Cl sobre 15 volumenes de la columna y 5-10 % sobre 8 volumenes de la columna) se obtuvo el producto 5-sustituido requerido.

Procedimiento general ii

Acoplamiento de los intermedios de 5-yodo-2-cloropiridina a etiniltrimetilsilano o trimetil((2-metilbut-3-in-2-il)oxi)silano Esquema 2

El intermedio de 5-yodo-2-cloropiridina apropiado seleccionado de los intermedios I-8, o I-9 (1 equivalente) 0,365 mmol) se disolvio en DMF (0,9 mL por 1 mmol de compuesto). Se anadio trimetil((2-metilbut-3-in-2-il)oxi)silano o etiniltrimetilsilano (1,3 equivalente) segun corresponda. Se anadieron diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II) (6 % en moles), yoduro de cobre(I) (6 % en moles) y trietilamina (18 equivalentes). Se calento la mezcla en un reactor de microondas a 120 °C durante 10 minutos. Se enfrio la mezcla y se evaporo a sequedad. Por cromatograffa rapida de columna de gel de sflice, eluyendo con mezclas de acetato de etilo-hexano, se obtuvo el producto 5-sustituido requerido.

Procedimiento general iii:

Acoplamiento de los intermedios de 2-aminopirazina I-3, I-4 o I-5 a intermedios de 2-cloropiridina

Esquema 3

1

El intermedio de 2-cloropiridina apropiado seleccionado de los intermedios I-10, I-12, I-13, I-14, I-15, I-16, I-17, I-18, I-19, I-20, o I-22 (1 equivalente) se disolvio en tolueno o en dioxano (10 mL de disolvente por 1 mmol de compuesto). Se anadio el intermedio de 2-aminopirazina apropiado seleccionado de los intermedios I-3, I-4, o I-5 (1 equivalente). Se anadieron Xantphos (20 % en moles), carbonato de cesio (2 equivalentes) y tris(dibencilidenacetona)-dipaladio(0) (10 % en moles). Se calento la mezcla en el microondas a 130 °C durante 60 minutos. Se diluyo la mezcla de reaccion con MeOH (10 mL) y se cargo en una columna de intercambio de iones acidos SCX-2 de 2 g. Se hizo pasar por la columna MeOH (4 * 20 mL), seguido de una solucion de amomaco en MeOH (2 M; 4 * 20 mL). El eluato basico se concentro a vado sobre el gel de sflice. La cromatograffa de gradiente (1-10 % de MeOH: 1 % de NH3 en CH2Cl2 sobre 15 volumenes de la columna) dio el producto acoplado requerido. Si fue necesaria mas purificacion para eliminar el exceso de material de partida de pirazina, entonces el material se sometio a TLC preparativa graduada (2-10 % de MeOH: 1 % de NH3 en CH2Ch).

Procedimiento general iv

Acoplamiento de los intermedios de 2-aminopirazina I-6 o I-7 a los intermedios de 2-cloropiridina con la desproteccion de N-BOC

Esquema 4

El intermedio de 2-cloropiridina apropiado seleccionado de los intermedios I-12, I-15, I-16, o I-21 (1 equivalente) se disolvio en tolueno o en dioxano (10 mL de disolvente por 1 mmol de compuesto). Se anadio el intermedio de 2-aminopirazina apropiado seleccionado de los intermedios I-6 o I-7 (1 equivalente). Se anadieron Xantphos (20 % en moles), carbonato de cesio (2 equivalentes) y tris(dibencilidenacetona)-dipaladio(0) (10 % en moles). Se calento la mezcla en el microondas a 130 °C durante 60 minutos. Se diluyo la mezcla de reaccion con MeOH (10 mL) y se cargo en una columna de intercambio de iones acidos SCX-2 de 2 g. Se hizo pasar por la columna MeOH (4 * 20 mL), seguido de una solucion de amomaco en MeOH (2 M; 4 * 20 mL). El eluato basico se concentro a vacfo sobre gel de silice y se sometio a cromatograffa de gradiente (1-10 % de MeOH: 1 % de NH3 en CH2Cl2 sobre 15 volumenes de la columna) para dar el producto acoplado protegido con N-BOC. El producto acoplado protegido con N-BOC (1 equivalente) se disolvio en CH2Ch(140 mL de disolvente por 1 mmol de compuesto). Se anadio acido trifluoroacetico (470 equivalentes) en una porcion y se agito la solucion a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se concentro la solucion a vacfo sobre el gel de sflice. La cromatograffa de gradiente (5 % MeOH: 1 % de NH3 en CH2Cl sobre 5 volumenes de la columna, despues 5-20 % sobre 15 volumenes de la columna) dio el producto desprotegido en N requerido. Cuando fue necesario, el producto se purifico adicionalmente por cromatograffa en capa fina preparativa graduada (2-10 % de MeOH: 1 % de NH3 en C^Ch).

Intermedio I-1

(R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol

Se anadio lentamente dimetilamina al 40 % en agua (11,39 mL, 90 mmol) a (R)-oxido de propileno (5,25 mL, 74,9 mmol) que habfa sido enfriado en un bano de hielo. Esta solucion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas antes de ser extraida con CH2O 2 (4 x 5 mL). Las capas organicas reunidas se secaron sobre Na2SO4 y se aislo (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol puro (5,12 g, 49,6 mmol, 40 % de rendimiento) como un aceite transparente por destilacion a presion reducida (50 mbar).

1H NMR (CDCla, 500 MHz) 8 3,82-3,76 (m, 1H), 3,40 (brs, 1H), 2,27 (S, 6 H), 2,25-2,21 (M, 1H), 2,16-2,12 (M, 1H), 1,12 (d, J = 6,0, 3H).

Intermedio I-2

5-Amino-3-cloropirazina-2-carbonitrilo

Se agito 2,6-dicloropirazina (2,89 g, 19,4 mmol) en NH3 acuoso (28 %, 10 mL) y se calento a 100 °C en un tubo sellado durante 18 horas. Se enfrio la mezcla de reaccion y se filtro el precipitado resultante. La trituracion con agua y despues con eter dio 6-cloropirazin-2-amina como un solido blanco (2,28 g, 17,6 mmol, 91 % de rendimiento). 1H NMR (D6-DMSO, 400 MHz) 86,9 (brs, 2H), 7,70 (d, J = 0,4, 1H), 7,80 (d, J = 0,4, 1H); LC-MS (ZQ, 6 minutos) Rt = 1,05 minutos; m/z (ESI ) 130 (M H).

Se agito 6-cloropirazin-2-amina (2,50 g, 19,3 mmol) en CH2Cl2 (60 mL) a 0 °C. Se anadio N-bromosuccinimida (2,92 g, 16,4 mmol) lentamente y se agito la mezcla de reaccion a 0 °C durante 60 minutos. Se filtro la mezcla de reaccion a traves de Celita y se concentro para dar un aceite pardo. La purificacion por cromatograffa rapida, eluyendo con 0­ 25 % de EtOAc-hexano, dio 5-bromo-6-cloropirazin-2-amina como un solido amarillo (1,69 g, 8,16 mmol, 42 % de rendimiento).

1H NMR (D6-DMSO, 400 MHz) 8 7,1 (brs, 2H), 7,65 (s, 1H); LC-MS (ZQ, 4 minutos) Rt = 1,46 minutos; m/z (ESI-) 205 (M-H).

Se suspendio una mezcla de 5-bromo-6-cloropirazin-2-amina (1,00 g, 4,8 mmol), yoduro de cobre(I) (914 mg, 4,8 mmol), 18-Crown-6 (95 mg, 0,36 mmol) y tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) (83 mg, 0,072 mmol) en DMF seca (20 mL) y se paso una corriente de nitrogeno durante 5 minutos. Se anadio cianuro de potasio (312 mg, 4,8 mmol) y se agito la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos, despues se mantuvo a reflujo a 200 °C durante 3 horas. Se enfrio la mezcla, se diluyo con EtOAc y se absorbio en gel de silice (10 g). Se elimino la DMF por evaporacion. El producto se purifico por cromatograffa rapida, eluyendo con EtOAc-hexano 1:1, para obtener 5-amino-3-cloropirazina-2-carbonitrilo como un solido amarillo (607 mg, 3,93 mmol, 82 % de rendimiento).

1H NMR (D6 DMSO, 400 MHz) 8 7,87 (s, 1H), 8,1 (brs, 2H); LC-MS (ZQ, 4 minutos) Rt = 1,20 minutos; m/z (ESI-) 153 (M-H).

Intermedio I-3

(R) -5-Amino-3-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se anadio (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol (0,667 g, 6,47 mmol) gota a gota a una suspension de NaH (al 60 % en aceite; 0,388 g, 9,71 mmol) en dioxano (16,2 mL) y se agito durante 30 minutos. Se anadio 5-amino-3-cloropirazina-2-carbonitrilo (intermedio I-2) (1,00 g, 6,47 mmol) en una porcion y se calento la mezcla a 90 °C durante 14 horas. Despues de enfriar, se anadio agua (200 mL) y se extrajo la solucion con Et2O (4 * 100 mL), se seco sobre MgSO4, y se eliminaron los compuestos volatiles a vado. La cromatograffa de columna en gradiente eluyendo con MeOH: NH3 al 1 % en CH2Cl2, dio (R)-5-amino-3-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo (0,558 g, 2,52 mmol, 39 % de rendimiento) como un solido amarillo.

1H NMR (500 MHz, CDC3 8 7,54 (s, 1H), 5,42-5,35 (m, 1H), 5,31 (brs, 2H), 2,76 (dd, J=7,5, 13,5, 1H), 2,52 (dd, J=4,0, 13,5, 1H), 2,37 (s, 6 H), 1,35 (d, J=6,5, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=0,80 minutos; m/z (ESI) 222 (M+H). Intermedio I-4

(R)-5-Amino-3-((1-metilpirrolidin-3-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo como se ha descrito para el intermedio I-3 reemplazando el (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol con (R) -1-metilpirrolidin-3-ol.

1H NMR (500 MHz, Da-DMSO) 87,60 (brs, 2H), 7,51 (s, 1H), 5,36-1,850 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 10,8, 6,1, 1H), 2,69 (ddd, J = 8,2, 8,2, 5,3, 1H), 2,62 (dd, J = 10,8, 2,8, 1H), 2,37-2,21 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,85-1,77 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) RT = 0,62 minutos; m/z (ESI) 220 (M H).

Intermedio I-5

(S) -5-Amino-3-((1-metilpirrolidin-3-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo como se ha descrito para el intermedio I-3 reemplazando (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol con (S)-1-metilpirrolidin-3-ol.

1H NMR (500 MHz, D6-DMSO) 87,60 (brs, 2H), 7,51 (s, 1H), 5,36-1,850 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 10,8, 6,1, 1H), 2,69 (ddd, J = 8,2, 8,2, 5,3, 1H), 2,62 (dd, J = 10,8, 2,8, 1H), 2,37-2,21 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,85-1,77 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt = 0,62 minutos; m/z (ESI) 220 (M H).

Intermedio I-6

(R)-3-((6-Amino-3-cianopirazin-2-il)oxi)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo

Se preparo como se ha descrito para el intermedio I-3 reemplazando (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol con (R)-3-hidroxipirrolidina-1 -carboxilato de terc-butilo.

Se aislo como una mezcla de rotameros. 1H NMR (500 MHz, CDCI3) 87,61-7,58 (m, 1H), 4,50-4,29 (m, 1H), 3-5,30 (m, 2H), 3,03-3,65 (m, 1H), 1-3,50 (m, 3H), 2,28-2,11 (m, 2H), 1,46 (s, 9H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) RT = 2,67 minutos; M/z (ESI) 328 (M Na).

Intermedio I-7

(S)-3-((6-Amino-3-cianopirazin-2-il)oxi)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo

Se preparo como se ha descrito para el intermedio I-3 reemplazando (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol con (S)-3-hidroxipirrolidina-1 -carboxilato de terc-butilo.

Se aislo como una mezcla de rotameros. 1H NMR (500 MHz, CDCh) 8 7,61-7,58 (m, 1H), 5,49-5,44 (m , 1H), 5,35-5,30 (m, 2H), 3,69-3,65 (m, 1H), 3,63-3,50 (m, 3H), 2,28-2,11 (m, 2H), 1,46 (s, 9H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=2,67 minutos; m/z (ESI) 328 (M+Na).

Intermedio I-8

2-Cloro-5-yodo-N-metilpiridin-4-amina

Se disolvieron 2-cloro-5-yodopiridin-4-amina (2,0 g, 7,86 mmol) y paraformaldehido (0,472 g, 15,7 mmol) en AcOH (56,1 mL) y se agitaron durante 2,5 horas a 40 °C. Se anadio triacetoxiborohidruro de sodio (3,66 g, 17,3 mmol) y se agito la mezcla a 40 °C durante 1,5 horas. Se anadio mas triacetoxiborohidruro de sodio (3,66 g, 17,3 mmol) y se agito la mezcla durante 19 horas mas. La mezcla de reaccion se redujo a la mitad de volumen por evaporacion al vado. Se anadio agua a la mezcla, seguido por alcalinizacion con NaHcO3. Se extrajo la mezcla con EtOAc (3*70 mL) y las capas organicas reunidas se secaron sobre MgSO4. Se anadio silice y se concentro la solucion. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con 5-10 % de EtOAc en c-Hex para 4 volumenes de columna y despues 10 % de EtOAc en c-Hex para 11 volumenes mas de columna, dio la 2-cloro-5-yodo-N-metilpiridin-4-amina (1,65 g, 6,14 mmol, 78 % de rendimiento) como un polvo cristalino blanco.

1H NMR (500 MHz, CDCh) 88,27 (s, 1H), 6,41 (s, 1H), 4,85 (brs, 1H), 2,93 (d, J=5,0, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,90 minutos; m/z (ESI) 268 (M+H).

Intermedio I-9

2-Cloro-5-yodo-4-metoxipiridina

Se anadio a una solucion de 2-cloro-4-metoxipiridina (0,5 g, 3,48 mmol) en acido sulfurico (2,5 mL) N-yodosuccinimida (0,825 g, 3,48 mmol) en porciones a temperatura ambiente. Se agito la mezcla a 55 °C durante 2 horas. Se vertio la mezcla de reaccion en agua con hielo (10 mL) y se anadio lentamente NaOH 8 M (20 mL), tras lo cual la solucion de color marron oscuro se volvio de color amarillo palido. Se extrajo la capa acuosa con CH2Ch (2 x 20 mL). Las capas organicas se lavaron con salmuera (10 mL) y se concentraron al vado sobre gel de silice. La cromatograffa rapida seca, eluyendo con EtOAc al 25 %:c-Hex, dio 2-cloro-5-yodo-4-metoxipiridina en forma de un solido cristalino blanco (0,169 g, 0,760 mmol, 22 % de rendimiento).

1H RMN (500 MHz, d6-DMSO) 88,52 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 3,96 (s, 3H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt = 2,56 minutos; m/z (ESI) 270 (M H).

Intermedio I-10

6-Cloro-4-(metilamino)nicotinato de metilo

Se anadio lentamente metilamina al 40 % en agua (0,847 mL, 9,78 mmol) durante 5 minutes a 0 °C a una solucion de 4,6-dicloronicotinato de metilo (0,40 g, 1,94 mmol) en MeCN (6 mL). La solucion se agito a 0 °C durante 30 minutes y despues a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reaccion se concentro al vacte sobre gel de silice. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con 5 % de EtOAc:c-Hex sobre 5 volumenes de columna y 5-50 % sobre 15 volumenes de columna, dio 6-cloro-4-(metilamino)nicotinato de metilo (278 mg, 1,386 mmol, 71,4 % de rendimiento) como un solido blanco.

1H RMN (500 MHz, CDCls) 8 8,65 (s, 1H), 8,10 (brs, 1H), 6,54 (s, 1H), 3,88 (s, 3H), 2,92 (d, J = 5,1, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt = 2,35 minutos; m/z (ESI) 201 (M H).

Intermedio I-11

6-Cloro-4-metoxinicotinato de metilo

Se anadio lentamente metoxido de sodio en polvo (0,136 g, 2,52 mmol) a una solucion en agitacion de 4,6-dicloronicotinato de metilo (0,40 g, 1,94 mmol) en THF (4 mL) a temperatura ambiente. Se agito la mezcla de reaccion a temperatura ambiente durante 18 horas, despues se concentro al vacte en gel de silice. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con 5 % de EtOAc: c-Hex sobre 5 volumenes de columna y 5-50 % sobre 15 volumenes de columna, dio 6-cloro-4-metoxinicotinato de metilo (218 mg, 1,08 mmol, 56 % de rendimiento) como un solido cristalino blanco.

1H NMR (500 MHz, CDCla) 8 8,71 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,90 (s, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt = 2,13 minutos; m/z (ESI) 202 (M+H).

Intermedio I-12

6-Cloro-4-(dimetilamino)nicotinato de metilo

Se anadio lentamente dimetilamina (1,23 mL, 9,71 mmol) a una solucion en agitacion de 4,6-dicloronicotinato de metilo (0,40 g, 1,94 mmol) en MeCN (6 mL) a temperatura ambiente. La solucion se agito a temperatura ambiente durante 18 horas y luego se concentro al vacte sobre gel de silice. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con 5 % de EtOAc:c-Hex sobre 5 volumenes de columna y 5-50 % sobre 15 volumenes de columna, dio 6-cloro-4-(dimetilamino)nicotinato de metilo (335 mg, 1,56 mmol, 80 % de rendimiento) como un solido blanco.

1H RMN (500 MHz, d6-DMSO) 88,21 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,90 (s, 6 H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt = 2,23 minutos; m/z (ESI) 215 (M H).

Intermedio I-13

2-Cloro-N-metil-5-(trifluorometil)piridin-4-amina

Se anadio metilamina 2 M en MeOH (11,6 mL, 23,2 mmol) a 2-cloro-4-yodo-5-(trifluorometil)piridina (357 mg, 1,16 mmol) y se calento la mezcla en un reactor de microondas a 130 °C durante 1 hora. Se concentro la mezcla al vado. La cromatograffa preparativa en capa fina, eluyendo con EtOAc al 20 %:hexano, dio 2-cloro-N-metil-5-(trifluorometil)piridin-4-amina (77 mg, 0,353 mmol, 31 % de rendimiento).

1H RMN (500 MHz, da-DMSO) 8 8,17 (s, 1H), 6,90 (brs, 1H), 6,74 (s, 1H), 2,81 (d, J = 5, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt = 1,98 minutos; m/z (ESI) 211 (M h ).

Intermedio I-14

2,5-Dicloro-N-metilpiridin-4-amina

Se anadio N-clorosuccinimida (0,623 g, 4,67 mmol) a 2-cloro-N-metil-piridin-4-amina (0,50 g, 3,89 mmol) y acetato de potasio (0,763 g, 7,78 mmol) en AcOH (25 mL) y se agito la mezcla a 80 °C durante 1,25 horas. Se enfrio la mezcla y se concentro al vado. La mezcla concentrada se diluyo con agua, se neutralizo con NaOH acuoso y se extrajo con EtOAc (x3). Los extractos organicos se evaporaron sobre gel de s l^ice. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con EtOAc al 10-50 %:c-Hex, dio 2,5-dicloro-N-metilpiridin-4-amina (0,114 g, 0,699 mmol, 18 % de rendimiento).

1H NMR (500 MHz, CDCla) 8 8,02 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 4,95 (brs, 1H), 2,96 (d, J=5, 3H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=2,17 minutos; m/z (ESI) 177 (M+H).

Intermedio I-15

2-Cloro-N-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-4-amina

Se preparo a partir del intermedio I-8 y 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol siguiendo el Procedimiento general i.

1H NMR (500 MHz, CDCla) 87,83 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,68 (brs, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,84 (d, J=5,1, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,09 minutos; m/z (ESI) 223 (M+H).

Intermedio I-16

2-Cloro-4-metoxi-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridina

Se preparo a partir del intermedio I-9 y 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol siguiendo el Procedimiento general i.

1H NMR (500 MHz, CDCI³) 57,83 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,68 (brs, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,84 (d, J=5,1, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutes) Rt=1,09 minutes; m/z (ESI) 224 (M+H).

Intermedio I-17

2-Cloro-N,N-dimetil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-4-amina

Se anadio lentamente DMF (2,99 mL) a hidruro de sodio en agitacion (al 60 % en aceite; 51 mg, 1,28 mmol) y 2-cloro-N-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-4-amina (Intermedio I-15) (104 mg, 0,467 mmol) a temperatura ambiente. Se calento la mezcla a 80 °C durante 10 minutos, seguido por la adicion de yodometano (0,035 mL, 0,560 mmol). Se agito la mezcla a 80 °C durante 30 minutos, despues se enfrio y se diluyo con NaHCO3 acuoso saturado (45 mL) y acetato de etilo (70 mL). Despues de agitar durante 10 minutos, se separo la capa organica y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 70 mL). Las capas organicas reunidas se evaporaron sobre gel de s l^ice. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con 1-10 % de MeOH:1 % de NH3 en CH2Cl2 sobre 10 volumenes de columna, dio 2-cloro-N,N-dimetil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-4-amina (102 mg, 0,431 mmol, 92 % de rendimiento).

1H NMR (500 MHz, CDCh) 58,03 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,72 (s, 6 H).

Intermedio I-18

2-Cloro-N-etil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-4-amina

Se agito a 40 °C durante 15 minutos una mezcla de 2-cloro-5-yodopiridin-4-amina (262 mg, 1,03 mmol), exceso de paraformaldehido (618 mg, 21 mmol) y AcOH (10,3 mL), seguido por la adicion de exceso de triacetoxiborohidruro de sodio (4,8 g, 23 mmol). Despues de agitar durante 2,5 horas, se anadieron mas paraformaldehido (236 mg, 7,86 mmol) y triacetoxiborohidruro de sodio (1,83 g, 8,63 mmol). Despues de 18 horas, se diluyo la mezcla con agua y se basifico con NaHCO3. Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 * 30 mL). Los extractos organicos reunidos se secaron y se evaporaron sobre sflice. La cromatograffa en gradiente, eluyendo con 5-10 % de EtOH:CH2Cl2 sobre 17 volumenes de columna, dio 2-cloro-N-etil-5-yodopiridin-4-amina (291 mg, 1,03 mmol, 100 % de rendimiento). LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt = 2,56 minutos; m/z (ESI) 282 (M H). El material se hizo reaccionar con 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol siguiendo el Procedimiento general i para dar 2-cloro-N- etil-5- (1-metil-1H-pirazol-4-il) piridin-4-amina.1

1H NMR (500 MHz, CDCh) 57,84 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 4,60 (brs, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,19 (2H, q, J=7,2), 1,25 (t, J=7,2, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,35 minutos; m/z (ESI) 237 (M+H).

Intermedio I-19

2-Cloro-N-metil-5-((trimetilsilil)etinil)piridin-4-amina

Se preparo a partir del intermedio I-8 y etiniltrimetilsilano siguiendo el Procedimiento general ii.

1H NMR (500 MHz, CDCh) 58,11 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,15 (brs, 1H), 2,97 (d, J=5, 3H), 0,3 (9H, s); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=3,13 minutos; m/z (ESI) 239 (M+H).

Intermedio I-20

2-Cloro-N-metil-5-(3-metil-3-((trimetilsilil)oxi)but-1-in-1-M)piridin-4-amina

Se preparo a partir del intermedio I-8 y trimetil(2-metilbut-3-in-2-iloxi)silano siguiendo el Procedimiento general ii. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 88,04 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,00 (brs, 1H), 2,94 (d, J=5, 3H), 1,62 (6 H, s), 0,22 (s, 9H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=2,81 minutos; m/z (ESI) 297 (M+H).

Intermedio I-21

2-Cloro-4-metoxi-5-(3-metil-3-((trimetilsilil)oxi)but-1-in-1-il)piridina

Se preparo a partir del intermedio I-9 y trimetil(2-metilbut-3-in-2-iloxi)silano siguiendo el Procedimiento general ii. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 8 8,25 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 1,60 (6 H, s), 0,23 (s, 9H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=3,23 minutos; m/z (ESI) 298 (M+H).

Intermedio I-22

2-Cloro-5-ciclopropil-N-metilpiridin-4-amina

Se anadieron 2-cloro-5-yodo-N-metilpiridin-4-amina (Intermedio I-8) (30 mg, 0,112 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (6,5 mg, 5,59 p mol) y solucion acuosa 0,5 M de carbonato de sodio (290 pL, 0,145 mmol) a 2-ciclopropil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (61 pL, 0,335 mmol) en MeCN. Se calento la mezcla a 130 °C en un reactor de microondas durante 1 hora. Se concentro la mezcla al vado. La cromatograffa preparativa en capa fina, eluyendo con 1 % de NH3, 6 % de MeOH en CH2Cl2, dio 2-cloro-5-ciclopropil-N-metilpiridin-4-amina (10 mg, 0,055 mmol, 49 % de rendimiento) como un polvo blanco.

1H NMR (500 MHz, CDCl3) 87,72 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 4,82 (brs, 1H), 2,85 (s, 3H), 1,37-1,34 (m, 1H), 0,85-0,82 (m, 2H), 0,49-0,46 (m, 2H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=1,23 minutos; m/z (ESI) 183 (M+H).

Compuesto PAPC-A-01

(R)-3-((1-(Dimetilamino)propan-2-il)oxi)-5-((4-metoxi-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-16 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCI³/CD³OD) 59,14 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 5,87-5,75 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,35 (dd, J=13,7, 6,7, 1H), 3,21 (d, J=13,7, 1H), 2,87 (s, 6H), 1,53 (d, J=6,4, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=2,11 minutos; m/z (ESI) 409 (M+H).

Compuesto PAPC-A-02

(R)-3-((1-(Dimetilamino)propan-2-il)oxi)-5-((5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-15 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCl3) 58,23 (brs, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,48­ 5,37 (m, 1H), 4,72 (q, J=5, 1H), 3,98 (s, 3H), 2,90 (d, J=5, 3H), 2,74 (dd, J=13,4, 7,2, 1H), 2,51 (dd, J=13,4, 4,4, 1H), 2,31 (s, 6 H), 1,41 (d, J=6,3, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,09 minutos; m/z (ESI) 408 (M+H).

Compuesto PAPC-A-03

(R)-5-((4-(Dimetilamino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)amino)-3-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-17 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCl3) 58,61 (brs, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,50­ 5,39 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,76 (s, 6 H), 2,73 (dd, J=13,4, 7,3, 1H), 2,50 (dd, J=13,4, 4,4, 1H), 2,30 (s, 6 H), 1,40 (d, J=6,3, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,59 minutos; m/z (ESI) 418 (M+H).

Compuesto PAPC-A-04

(R)-3-((1-(Dimetilamino)propan-2-il)oxi)-5-((4-(etilamino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-18 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCl3) 58,29 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 5,50-5,47 (m, 1H), 4,63-4,61 (m, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,27-3,23 (m, 2H), 2,84-2,80 (m, 1H), 2,62-2,59 (m, 1H), 2,39 (s, 6 H), 1,43 (d, J=6,3, 3H), 1,30 (t, J=7,3, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,22 minutos; m/z (ESI) 422 (M+H).

Compuesto PAPC-A-05

(R)-3-((1-(Dimetilamino)propan-2-il)oxi)-5-((4-(metilamino)-5-(trifluorometil)piridin-2-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo

Se prepare a partir del intermedio I-13 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) 8 8,60 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 5,59-5,53 (m, 1H), 2,94 (s, 3H), 2,82 (dd, J=13,7, 8 , 1H), 2,51 (dd, J=13,7, 5, 1H), 2,33 (s, 6 H), 1,42 (d, J=6 , 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutes) Rt=1,75 minutos; m/z (ESI) 396 (M+H).

Compuesto PAPC-A-06

(R)-5-((5-Cloro-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se prepare a partir del intermedio I-14 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCh) 8 8,22 (s, 1H), 8,02 (brs, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 5,48-5,36 (m, 1H), 4,97 (brq, J=4,2, 1H), 2,98 (d, J=5,1, 3H), 2,74 (dd, J=13,3, 7,3, 1H), 2,51 (dd, J=13,3, 4,3, 1H), 2,31 (s, 6 H), 1,41 (d, J=6,3, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,77 minutos; m/z (ESI) 362 (M+H).

Compuesto PAPC-A-07

(R)-3-((1-(Dimetilamino)propan-2-il)oxi)-5-((5-etinil-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo

Se prepare a partir del intermedio I-19 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCla) 88,28 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,80 (brs, 1H), 6,94 (s, 1H), 5,45-5,40 (m, 1H), 5,21-5,19 (m, 1H), 3,49 (s, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,76-2,73 (m, 1H), 2,54-2,52 (m, 1H), 2,34 (s, 6 H), 1,43 (d, J=6 , 3H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=1,53 minutos; m/z (ESI) 352 (M+H).

Compuesto PAPC-A-08

(R)-3-((1-(Dimetilamino)propan-2-il)oxi)-5-((5-(3-hydroxi-3-metilbut-1-in-1-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo

Se prepare a partir del intermedio I-20 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) 88,46 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,59-5,55 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,85 (dd, J=13, 10, 1H), 2,60 (dd, J=13, 5, 1H), 2,35 (s, 6 H), 1,61 (s, 6 H), 1,43 (d, J=6 , 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,43 minutos; m/z (ESI) 410 (M+H).

Compuesto PAPC-A-09

(R)-5-((5-Ciclopropil-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-22 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCls) 88,11 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,39-5,37 (m, 1H), 4,92 (brs, 1H), 2,93-2,29 (m, 3H), 2,73-2,68 (m, 1H), 2,49 (dd, J=13,3, 3,9, 1H), 2,27 (s, 6 H), 1,40-1,38 (m, 1H), 1,35 (d, J=6 , 3H), 0,86-0,84 (m, 2H), 0,50-0,48 (m, 2H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=1,40 minutos; m/z (ESI) 368 (M+H).

Compuesto PAPC-A-10

(R)-6-((5-ciano-6-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oxi)pirazin-2-il)amino)-4-(metilamino)nicotinato de metilo

Se preparo a partir del intermedio I-10 y el intermedio I-3 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCla) 8 8,68 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,15 (d, J=5, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,50-5,39 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 2,97 (d, J=5, 3H), 2,78 (dd, J=13,4, 7,3, 1H), 2,55 (dd, J=13,4, 4,2, 1 H), 2,34 (s, 6 H), 1,42 (d, J=6,3, 3H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,84 minutos; m/z (ESI) 386 (M+H).

Compuesto PAPC-B-01

(R)-5-((4-Metoxi-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)amino)-3-(pirrolidin-3-iloxi)pirazina-2-carbonitrMo

Se preparo a partir del intermedio I-16 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) 88,51 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,93 (d, J=0,6, 1H), 7,60 (s, 1H), 5,61-5,56 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,23 (dd, J=12,7, 5,5, 1H), 3,06-2,97 (m, 2H), 2,94-2,87 (m, 1H), 2,16-2,09 (m, 1H), 1,99-1,92 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=2,02 minutos; m/z (ESI) 393 (M+H).

Compuesto PAPC-B-02

(R)-5-((4-Metoxi-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)amino)-3-((1 -metilpirrolidin-3-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-16 y el intermedio I-4 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H-NMR (500 MHz, CDCla) 88,39 (brs, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 5,51­ 5,47 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,15 (dd, J=10,7, 6,3, 1H), 2,73-2,62 (m, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,38-2,30 (m, 1H), 2,12-2,05 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=2,01 minutos; m/z (ESI) 407 (M+H).

Compuesto PAPC-B-03

(R)-5-((5-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-(pirrolidin-3-iloxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparo a partir del intermedio I-15 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) 8 10,46 (brs, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 5,84 (q, J=4,7, 1H), 5,61-5,55 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,25 (dd, J=12,7, 5,5, 1H), 3,07-3,00 (m, 2H), 2,93 (ddd, J=10,9, 8,1, 4,7, 1H), 2,78 (d, J=4,8, 3H), 2,17-2,10 (m, 1H), 2,01-1,93 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,24 minutos; m/z (ESI) 392 (M+H).

Compuesto PAPC-B-04

(S)-5-((5-(1 -Metil-1H-pirazol-4-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-(pirrolidin-3-iloxi)pirazina-2-carbonitrMo

Se prepare a partir del intermedio I-15 y el intermedio I-7 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, da-DMSO) 8 10,46 (brs, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 5,84 (q, J=4,7, 1H), 5,61-5,55 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,25 (dd, J=12,7, 5,5, 1H), 3,07-3,00 (m, 2H), 2,93 (ddd, J=10,9, 8,1, 4,7, 1H), 2,78 (d, J=4,8, 3H), 2,17-2,10 (m, 1H), 2,01-1,93 (m, 1H), LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,24 minutos; m/z (ESI) 392 (M+H).

Compuesto PAPC-B-05

(R)-5-((5-(1 -Metil-1H-pirazol-4-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-((1 -metilpirrolidin-3-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se prepare a partir del intermedio I-15 y el intermedio I-4 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) 88,49 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,62-5,60 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,05-3,02 (m, 1H), 2,88 (3H, s), 2,87-2,85 (m, 2H), 2,59-2,55 (m, 1H), 2,48-2,43 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,10-2,08 (m, 1H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=1,20 minutos; m/z (ESI) 406 (M+H).

Compuesto PAPC-B-06

(S)-5-((5-(1-Metil-1H-pirazol-4-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-((1 -metilpirrolidin-3-il)oxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se prepare a partir del intermedio I-15 y el intermedio I-5 siguiendo el Procedimiento general iii.

1H NMR (500 MHz, CDCla) 8 8,33 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 5,56-5,54 (m, 1H), 4,78-4,77 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,29 (dd, J=11, 6,2, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,80-2,78 (m, 1H), 2,74 (dd, J=11, 3,5, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,41-2,37 (m, 1H), 2,16-2,14 (m, 1H); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=1,20 minutos; m/z (ESI) 406 (M+H).

Compuesto PAPC-B-07

(R)-5-((5-(3-Hidroxi-3-metilbut-1 -in-1-il)-4-metoxipiridin-2-il)amino)-3-(pirrolidin-3-iloxi)pirazina-2-carbonitrMo

Se preparo a partir del intermedio I-21 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, da-DMSO) 8 8,51 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 5,62 (ddd, J=5,5, 5,5, 2,8, 1H), 5,41 (brs, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,38 (dd, J=13, 5,3, 1H), 3,25 (d, J=13, 1H), 3,18-3,09 (m, 2H), 2,25-2,16 (m, 1H), 2,14-2,07 (m, 1H), 1,47 (s, 6 H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,84 minutos; m/z (ESI) 395 (M+H).

Compuesto PAPC-B-08

(R)-5-((5-(3-Hidroxi-3-metilbut-1 -in-1-il)-4-(metilamino)piridin-2-il)amino)-3-(pirrolidin-3-iloxi)pirazina-2-carbonitrilo

Se preparO a partir del intermedio I-20 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, da-DMSO) 88,62 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 6,71 (s, 1H), 5,76 (brs, 1H), 3,49-3,48 (m, 2H), 3,45-3,35 (m, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,35-2,32 (m, 2H), 1,60 (s, 6 H) (2H oscurecido por agua); LC-MS (LCT, 4 minutos) Rt=1,59 minutos; m/z (ESI) 394 (M+H).

Compuesto PAPC-B-09

(R)-6-((5-Ciano-6-(pirrolidin-3-iloxi)pirazin-2-il)amino)-4-(metoxi)nicotinato de metilo

Se preparO a partir del intermedio I-11 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) 88,63 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 5,62-5,60 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,18-2,98 (m, 4H), 2,21-2,12 (m, 1H), 2,07-1,99 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=2,04 minutos; m/z (ESI) 371 (M+H).

Compuesto PAPC-B-10

(R)-6-((5-Ciano-6-(pirrolidin-3-iloxi)pirazin-2-il)amino)-4-(metilamino)nicotinato de metilo

Se preparo a partir del intermedio I-10 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, da-DMSO) 88,58 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,01 (q, J=4,7, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,62-5,51 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,18 (dd, J=12,6, 5,5, 1H), 3,01-2,92 (m, 2H), 2,90 (d, J=4,9, 3H), 2,85 (ddd, J=10,8, 8,0, 4,8, 1H), 2,14-2,03 (m, 1H), 1,95-1,87 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,64 minutos; m/z (ESI) 370 (M+H).

Compuesto PAPC-B-11

(R)-6-((5-Ciano-6-(pirrolidin-3-iloxi)pirazin-2-il)amino)-4-(dimetilamino)nicotinato de metilo

Se preparo a partir del intermedio I-12 y el intermedio I-6 siguiendo el Procedimiento general iv.

1H NMR (500 MHz, da-DMSO) 8 8,56 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 5,68-5,59 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,39 (dd, J=13,1, 5,2, 1H), 3,31 (bs, 1H), 3,27 (d, J=13,1, 1H), 3,19-3,12 (m, 2H), 2,91 (s, 6 H), 2,23-2,18 (m, 1H), 2,15-2,08 (m, 1H); LC-MS (LCT, 3,5 minutos) Rt=1,70 minutos; m/z (ESI) 384 (M+H).

Metodos biologicos

Ensayo 1A: Determinacion de la potencia del inhibidor frente a CHK1 en formato de ensayo DELFIA

La funcion de la cinasa CHK1 se midio en un ensayo DELFIA® con el fin de monitorizar la fosforilacion de un peptido CDC25C utilizando un anticuerpo anti-fosfo espedfico. La reaccion enzimatica se llevo a cabo en placas de polipropileno (Greiner) utilizando una mezcla de reaccion (25 ^j L) que contema una mezcla de enzimas y peptidos (CHK1, 1 nM; Biotin-KKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR, 1 j M o 15 j L), ATP (30 j M o 5 j L) y o bien DMSO (2,5 %) o bien compuesto de ensayo (5 j L) diluido para dar un intervalo de concentraciones (de 0 a 100 j M en DMSO al 2,5 %, concentraciones finales) en tampon de ensayo (Tris 40 mM, NaCl 40 mM, MgCh 2 mM, DTT 1 mM y Tween 20 al 0,1 %). La mezcla de reaccion se incubo durante 30 minutos a temperatura ambiente y despues se detuvo mediante la adicion de tampon (125 |^j L) que contema EDTA 40 mM, Tween 20 al 0,05 %, BSA al 0,1 % en TBS (concentrado 10 x, Sigma). Se transfirio una alfcuota (100 j L) de la mezcla de reaccion parada a una placa negra recubierta con neutravidina (Perbio) y se incubo durante 1 hora en un agitador (Titertek, Flow Laboratories) a temperatura ambiente. Se lavaron las placas cuatro veces con tampon de lavado (Tris 25 mM (pH 8 ), NaCl 150 mM y Tween 20 al 0,1 %) (WellWash4, Thermo Life Sciences) y se incubaron durante 1 hora como antes con una mezcla de anticuerpos (100 j L) que consiste en anti-fosfo CDC25C (1,25 nM, #9528, Cell Signaling Technology) e IgG anticonejo marcada con europio (0,3 jg/mL, AD0105, PerkinElmer Life Sciences) diluida en tampon de ensayo DELFIA (PerkinElmer Life Sciences). Las placas se lavaron cuatro veces mas con tampon de lavado antes de la adicion de la solucion de potenciacion (100 jL/pocillo, PerkinElmer Life Sciences). Se leyo la placa en un contador Victor2 1420 multilabel (Perkin Elmer Life Sciences) utilizando un modo de medida de resolucion temporal leyendo la fluorescencia a 615 nm. Se calculo la concentracion de compuesto de ensayo requerida para inhibir la actividad de la enzima en un 50 % (IC50).

Ensayo 1B: Determinacion de la potencia del inhibidor frente a CHK1 en formato de ensayo Caliper

La actividad de la cinasa CHK1 se midio en un ensayo microflmdico que monitoriza la separacion de un producto fosforilado de su sustrato. El ensayo se realizo en un EZ Reader II (Caliper Life Sciences Ltd, Runcorn, UK) utilizando un tampon de separacion (# 760367 Caliper LS) que contema CR-8 (500 nM, # 760278, Caliper LS). Se utilizo un dispensador acustico ECHO® 550 (Labcyte Inc™) para generar curvas de dilucion duplicadas de 8 puntos directamente en 384 placas de ensayo de polipropileno (Greiner Bio-One, Gloucestershire, UK). Para cada compuesto de ensayo se uso una concentracion stock de 50 pM en DMSO al 100 %. La cantidad total de DMSO dispensada por pocillo fue de 250 nL para dar una concentracion final de ensayo de DMSO del 2,5 % y concentraciones del compuesto de ensayo en el intervalo de 0,5-1000 nM. Se anadieron a esta placa de ensayo, 6 |jL de CHK1 (concentracion final 2 nM, preparacion de protema interna), 2 jL de peptido 10 (5-FAM-KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR-COOH, concentracion final 1,5 jM, # 760354 Caliper LS) y 2 jL de ATP (concentracion final 90 jM ) diluido todo en tampon de cinasa (HEPES 50 mM, NaN3 al 0,02 %, BSA al 0,01 %, ortovanadato de sodio 0,1 mM, DTT 1 mM, MgCh 2 mM, Tween 20 al 0,1 %). La placa se sello y se centrifugo (1 minuto, 1000 rpm) antes de la incubacion durante una hora a temperatura ambiente. La reaccion se detuvo mediante la adicion de un tampon de separacion (90 jL). Se leyo la placa en un EZ Reader II, utilizando un chip de 12 sipper (760137-0372R, Caliper LS) con ajustes del instrumento de - 10,34 kPa (1,5 psi) y 1750 AV. El porcentaje de conversion de producto procedente del sustrato se genero automaticamente y el porcentaje de inhibicion se calculo con respecto a los pocillos del blanco (que no contienen enzima y contienen DMSO al 2,5 %) y los pocillos totales (que contienen todos los reactivos y DMSO al 2,5 %). Los valores de IC50 se calcularon en GraphPad Prism5 utilizando un ajuste de regresion no lineal del registro (inhibidor) frente a la respuesta con la ecuacion de pendiente variable.

Ensayo 2: Determinacion de la selectividad del inhibidor para la inhibicion de CHK1 frente a CHK2

La actividad de la cinasa CHK2 in vitro se midio en un ensayo DELFIA® que monitoriza la fosforilacion de un peptido CDC25C utilizando un anticuerpo anti-fosfo espedfico. La reaccion enzimatica se llevo a cabo en placas de polipropileno de 96 pocillos (Greiner). La mezcla de reaccion (volumen total 25 pL) contema una mezcla de enzima y peptido (15 pL) (que contema CHK2, preparada internamente, 1 nM; Biotina-KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR, 1 pM), ATP (30 pM, 5 pL) y o bien DMSO (2,5 %) o bien compuesto de ensayo (5 jL ) diluido para dar un int6ervalo de concentraciones (0-100 jM en DMSO al 2,5 %, concentraciones finales) en tampon de ensayo (HEPES 40 mM (pH 7,4), KCl 40 mM, MgCh 2 mM, DTT 10 mM y Tween 20 al 0,02 %). La mezcla de reaccion se incubo durante 30 minutos a temperatura ambiente y se detuvo mediante la adicion de un tampon (125 pL) que contema EDTA 40 mM, Tween 20 al 0,05 %, BSA al 0,1 % en TBS (concentrado 10 x, Sigma). Se transfirio una alfcuota (100 jL ) de la mezcla de reaccion a una placa negra de 96 pocillos recubierta con neutravidina (Perbio) y se incubo durante 1 hora en un agitador (Titertek, Flow Laboratories) a temperatura ambiente. Se lavaron las placas cuatro veces con tampon de lavado (Tris 25 mM (pH 8 ), NaCl 150 mM y Tween 20 al 0,1 %) (WellWash4, Thermo Life Sciences) y se incubaron durante 1 hora como antes con una mezcla de anticuerpos (100 jL ) que consistfa en anti-fosfo CDC25C (diluido 1/4000 equivalente a 0,35 nM-1,25 nM, # 9528, Cell Signalling Technology) y IgG de conejo marcada con europio, (0,3 jg/mL, AD0105, PerkinElmer Life Sciences) diluida en tampon de ensayo DELFIA® (PerkinElmer Life Sciences). Se lavaron las placas cuatro veces mas con tampon de lavado antes de la adicion de la solucion de potenciacion (100 jL/pocillo, PerkinElmer Life Sciences). Se leyo la placa en un contador Victor2 1420 multilabel (PerkinElmer Life Sciences) usando un modo de medida en funcion del tiempo leyendo la fluorescencia a 615 nM. Se calculo la concentracion de compuesto de ensayo requerida para inhibir la actividad de la enzima en un 50 % (IC50).

Para cada compuesto de ensayo, se uso la relacion de la IC50 del ensayo de actividad de la cinasa CHK2 frente a la IC50 del ensayo de la actividad de la cinasa CHK1 (es decir, IC50 de CHK2 /IC50 de CHK1) para definir la selectividad para la inhibicion de CHK1 frente a CHK2.

Ensayo 3: Ensayo de inhibicion de la mitosis (MIA)

La anulacion del punto de control por los inhibidores de la funcion de la cinasa CHK1 en combinacion con agentes genotoxicos se evaluo utilizando un ensayo ELISA basado en europio disenado para cuantificar el numero de celulas atrapadas en la mitosis despues del tratamiento con un agente genotoxico (para inducir la detencion de G2) seguido por un compuesto de ensayo en combinacion con nocodazol para anular esta detencion. Se sembraron celulas HT29 a 104 celulas por pocillo en placas de 96 pocillos en un volumen de 160 pL y se dejo que se unieran durante 36 horas. Se diluyo etoposido (stock 10 mM en DMSO) en medio hasta 250 jM y despues se anadieron 40 jL a los pocillos apropiados para obtener una concentracion final de 50 jM y se incubaron durante 1 hora. Este tratamiento se habfa optimizado previamente para inducir una detencion de G2 en el 80 % de las celulas 16 horas despues del tratamiento. Despues de la exposicion al farmaco genotoxico, se elimino el medio y se reemplazo por medio nuevo (160 pL). Las celulas o bien no se trataron (control no tratado o pre-tratamiento con etoposido solo), se expusieron a nocodazol despues del pre-tratamiento con etoposido o a nocodazol solo (concentracion final de 100 ng/mL), o bien se expusieron a concentraciones crecientes del compuesto de ensayo (concentracion final de 200 jM a 0,01 nM) en combinacion con nocodazol (concentracion final de 100 ng/mL). Los compuestos de ensayo se anadieron en alfcuotas de 40 jL utilizando pocillos por cuadruplicado para cada dosis. Despues de 21 horas de exposicion, se retiro el medio y se fijaron las celulas en formaldehido al 4 % en solucion salina tamponada con fosfato (PBS, pH 7,4, enfriada previamente a 4 °C) durante 30 minutos a 4 °C, seguido por metanol al 100 % (pre-enfriado a -20 °C) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se lavaron los pocillos con PBS y se bloquearon con leche en polvo al 5 % (Marvel) en solucion salina tamponada con Tris (TBS, pH 7,4) a 37 °C durante 30 minutos. Cada pocillo se lavo tres veces con agua que contema Tween 20 al 0,1 %. Se anadio a cada pocillo anticuerpo primario (MPM-2, Upstate cat # 05-368, 1 jg/mL en leche al 5 % en TBS) y se incubo durante la noche con agitacion. a 4 °C. Se elimino el anticuerpo primario y se lavaron los pocillos con agua que contema Tween 20 al 0,1 %. Se anadio a cada pocillo el anticuerpo secundario (anti-raton marcado con europio, Perkin-Elmer cat# AD0124, 333 ng/mL en el tampon de ensayo Perkin-Elmer cat# 1244-111) y se incubo a 37 °C durante 1 hora. Cada pocillo se lavo con agua que contema Tween 20 al 0,1 % y se trato con solucion de potenciacion (Perkin-Elmer cat# 1244-105). Las emisiones de europio se contaron en un contador Wallac, Victor2 (Perkin-Elmer, Bucks UK). Se incluyeron los controles apropiados y los resultados se expresaron como la concentracion de compuesto de ensayo requerida para permitir que el 50 % de las celulas entren en mitosis (MIA IC50).

Estimacion de la biodisponibilidad oral comparativa por muestreo limitado en estudio farmacocinetico in vivo Se mantuvieron ratones hembra BALB/c (6 semanas de edad) (Charles River UK Ltd, Margate, UK) en un ambiente controlado con alimentos y agua esterilizada disponibles ad libitum. Los animales pesaban 20 ± 2 g en el momento del experimento. Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con las directrices locales y nacionales para la experimentacion con animales. Las soluciones de dosificacion se prepararon disolviendo los compuestos de ensayo en DMSO al 10 % y Tween 20 al 5 % en solucion salina al 85 %. Los compuestos de ensayo se administraron por via oral (p.o.) mediante sonda oral. Se recogio la sangre en puntos de tiempo seleccionados mediante puncion cardfaca bajo anestesia en jeringas heparinizadas, se transfirio a tubos de microcentnfuga y se centrifugo a 4500 * g durante 2 minutos para obtener plasma. El analisis cuantitativo se realizo mediante cromatograffa de lfquidos de alta resolucion en tandem con espectrometna de masas en un instrumento de triple cuadrupolo (Agilent 6410) utilizando una monitorizacion de reaccion multiple de transiciones seleccionadas con olomoucina utilizada como estandar interno. La cuantificacion se realizo frente a una curva estandar que vana desde concentraciones de 2 nM hasta 1000 nM en la matriz medida. Se incluyeron controles de calidad a nivel de 25, 250 y 750 nM. Cuando fue necesario, se diluyeron las muestras en la matriz de interes. Las concentraciones plasmaticas de los compuestos de ensayo se midieron 1 hora despues de la dosis oral y se expresaron en relacion con una dosis de 10 mg/kg para proporcionar una estimacion comparativa del grado de biodisponibilidad oral.

Datos biologicos

Actividad de CHK1

Se analizaron los siguientes compuestos utilizando el Ensayo 1A (Determinacion de la potencia del inhibidor frente a CHK1 en formato de ensayo DELFIA) o el Ensayo 1B (Determinacion de la potencia del inhibidor frente a CHK1 en formato de ensayo Caliper):

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-03, PAPC-A-04, PAPC-A-05, PAPC-A-06, PAPC-A-07, PAPC-A-08, PAPC-A-09, PAPC-A-10, PAPC-B-01, PAPC-B-02, PAPC-B-03, PAPC-B-04, PAPC-B-05, PAPC-B-06, PAPC-B-07, PAPC-B-08, PAPC-B-09, PAPC-B-10, PAPC-B-11.

Todos los compuestos tienen una IC50 de CHK1 inferior a 0,1 |jM (100 nM).

Los siguientes compuestos tienen una IC50 de CHK1 inferior a 0,02 j M (20 nM):

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-03, PAPC-A-08, PAPC-A-10, PAPC-B-01, PAPC-B-02, PAPC-B-03, PAPC-B-04, PAPC-B-05, PAPC-B-06, PAPC-B-08, PAPC-B-10, PAPC-B-11,

Selectividad para CHK1 frente a CHK2

Los siguientes compuestos se analizaron tambien utilizando el Ensayo 2 (Determinacion de la selectividad del inhibidor para la inhibicion de CHK1 frente a CHK2)

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-03, PAPC-A-07, PAPC-A-08, PAPC-A-09, PAPC-B-02, PAPC-B-03, PAPC-B-04, PAPC-B-06, PAPC-B-10, PAPC-B-11.

Todos los compuestos tienen una selectividad de CHK1 frente a CHK2 de al menos 100 veces (esto es, IC50 de CHK2 /IC50 de CHK1 > 100)

Actividad MIA

Los siguientes compuestos se ensayaron utilizando el Ensayo 3 (ensayo de inhibicion de la mitosis (MIA)) PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-03, PAPC-A-04, PAPC-A-05, PAPC-A-06, PAPC-A-07, PAPC-A-08, PAPC-A-09, PAPC-A-10, PAPC-B-01, PAPC-B-02, PAPC-B-03, PAPC-B-04, PAPC-B-05, PAPC-B-06, PAPC-B-07, PAPC-B-08, PAPC-B-09, PAPC-B-10, PAPC-B-11.

Los siguientes compuestos tienen una IC50 en MIA inferior a 0,5 j M:

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-03, PAPC-A-04, PAPC-A-05, PAPC-A-06, PAPC-A-07, PAPC-A-08, PAPC-A-09, PAPC-A-10, PAPC-B-01, PAPC-B-02, PAPC-B-03, PAPC-B-04, PAPC-B-05, PAPC-B-06, PAPC-B-08, PAPC-B-10, PAPC-B-11.

Biodisponibilidad oral

Los siguientes compuestos se evaluaron en cuanto a biodisponibilidad oral utilizando el metodo descrito anteriormente:

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-05, PAPC-A-07, PAPC-A-09, PAPC-B-01, PAPC-B-02, PAPC-B-03, PAPC-B-04, PAPC-B-05, PAPC-B-06, PAPC-B-08, PAPC-B-10.

Todos los compuestos tienen una biodisponibilidad oral (concentracion plasmatica, 1 hora despues de 10 mg/kg p.o.) de al menos 2 nM.

Los siguientes compuestos tienen una biodisponibilidad oral (concentracion plasmatica, 1 hora despues de 10 mg/kg p.o.) de al menos 10 nM.

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-05, PAPC-A-07, PAPC-A-09, PAPC-B-02, PAPC-B-05, PAPC-B-06, PAPC-B-08, PAPC-B-10.

Los siguientes compuestos tienen una biodisponibilidad oral (concentracion plasmatica, 1 hora despues de 10 mg/kg p.o.) de al menos 100 nM.

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-05, PAPC-A-07, PAPC-B-02, PAPC-B-05:

Los siguientes compuestos tienen una biodisponibilidad oral (concentracion plasmatica, 1 hora despues de 10 mg/kg p.o.) de al menos 500 nM.

PAPC-A-01, PAPC-A-02, PAPC-A-05.

A continuacion se resumen los datos de dos compuestos especialmente preferidos:

Estudio 1 in vivo: PAPC-A-01 en modelo de neuroblastoma impulsado por MYCN transgenico

Los neuroblastomas espontaneos que surgen en ratones hemicigotos transgenicos para TH-MYCN (MYCN humano bajo el control del promotor de tirosina hidroxilasa de rata) se detectaron mediante palpacion abdominal. Se distribuyeron aleatoria y secuencialmente animales con tumores bien establecidos (30-70 d^ as de edad) para recibir el compuesto de ensayo (PAPC-A-01) o el vehfculo hasta que se acumularon 8-9 ratones por grupo. El compuesto de ensayo (PAPC-A-01) se administro como un agente unico a 100 mg/kg p.o. al dfa durante 7 dfas consecutivos mediante sonda oral (100 pL/10 g de peso corporal) y los controles recibieron un volumen equivalente de vetuculo (10 % de DMSO, 5 % de Tween 20, 85 % de solucion salina). El tamano del neuroblastoma se evaluo mediante MRI y por la masa de los tumores disecados de la cavidad abdominal al final de la terapia.

La 1H MRI se realizo en un sistema de microimagen de agujero horizontal 7T Bruker (Bruker Instruments, Ettlingen, Alemania) utilizando una bobina de jaula de pajaros de 3 cm. Se indujo la anestesia con una combinacion de citrato de fentanilo (0,315 mg/mL) mas fluanisona (10 mg/mL) (Hypnorm, Janssen Pharmaceutical, Oxford, UK) y midazolam (5 mg/mL) (Roche, Welwyn Garden City, UK) y agua (1:1:2). La temperatura corporal del animal se mantuvo mediante un soplador de aire caliente a traves del agujero del iman.

Se obtuvieron imagenes anatomicas coronales y transversales ponderadas en T2 a partir de veinte cortes coronales contiguos de 1 mm de espesor a traves del abdomen del raton, utilizando una rapida adquisicion con una secuencia de ecos de reorientacion (RAR) con 4 promedios de etapas de codificacion de 128 fases en un campo de vision de 3 x 3 cm, dos ecos de 36 y 132 ms, un TR de 4,5 s y un factor RARE de 8. Despues de la RMI, se dejo que los ratones se recuperaran en una estera termica durante 24 horas. Se midieron los volumenes de los tumores utilizando la segmentacion de las regiones de interes dibujadas sobre cada corte a partir de las imagenes coronales ponderadas en T2 que contienen tumores usando un software interno (ImageView, trabajando bajo IDL, ITT, Boulder, Colorado, USA). Las imagenes de RM en ratones individuales, antes del tratamiento y el dfa 7, mostraron regresion del tumor durante el penodo de tratamiento de 7 dfas. Vease la figura 1 y la figura 2.

El peso medio de los tumores en los ratones control al final del estudio fue de 2,1 ± 0,7 g (media ± SD) y en el grupo tratado fue de 0,3 ± 0,2 g, lo que dio como resultado una T/C de 13,4 %.

Estudio 2 in vivo: PAPC-A-01 en combinacion con gemcitabina en xenoinjerto de carcinoma de colon humano HT29 Se mantuvieron ratones atfmicos hembras CrTac:NCr-Foxn1nu (6-8 semanas de edad) (Charles River UK Ltd., Margate, UK) en un ambiente controlado en jaulas maximizadoras con lecho esteril, alimentos y agua disponibles ad libitum. Los animales pesaban 20,3 ± 2,0 g al inicio del estudio. La manipulacion y todos los procedimientos experimentales se realizaron en condiciones esteriles en campanas de flujo laminar de acuerdo con las directrices eticas nacionales y locales de UK Home Office.

Se recogieron celulas de carcinoma de colon HT29 de la American Type Culture Collection (ATCC, LGC Promochem, Middesex, UK) de matraces de cultivo de tejidos y se inyectaron subcutaneamente en los flancos derechos de los ratones (3 millones de celulas por sitio). Una vez que se establecieron los tumores (diametro medio de 0,55 ± 0,05 cm), se asignaron los ratones aleatoriamente a grupos de tratamiento (n = 6) para recibir (a) compuesto de ensayo (PAPC-A-01) (75 mg/kg), (b) gemcitabina (100) mg/kg), (c) una combinacion (pAPC-A-01) (75 mg/kg) y gemcitabina (100 mg/kg), o (d) vetuculos relevantes.

El hidrocloruro de gemcitabina de grado clmico (GEMZAR, Eli Lilly, Newmarket, UK) se reconstituyo en cloruro de sodio esteril al 0,9 % y se congelaron alfcuotas a -20 °C. La gemcitabina se administro por via intravenosa una vez por semana a traves de una vena lateral de la cola los dfas 0 (dfa 5 despues del implante de la celula tumoral), 7 y 14. El compuesto de ensayo (PAPC-A-01) se disolvio en DMSO al 10 % y se diluyo en Tween 20 al 5 %, solucion salina al 85 %. El compuesto de ensayo (PAPC-A-01) se administro por sonda oral los dfas 1, 2, 8 , 9, 15 y 16. Los animales control recibieron ambos vehfculos por la via apropiada en los dfas designados. Los compuestos se administraron en un volumen de 100 pL por 10 g de peso corporal.

Se observaron los animales diariamente y se midieron el peso corporal y los tumores tres veces por semana. Se utilizaron dos diametros perpendiculares del tumor para calcular los volumenes utilizando la formula: V = 4/3 n [(d1 d2)/4]3.

Los valores de T/C (volumenes de tumores tratados frente a los controles) se calcularon con respecto a los tumores de control con vehfculo o frente a los tratados con gemcitabina solo, expresados como un porcentaje.

El dfa 24 despues del inicio de la terapia, los resultados fueron como sigue:

La gemcitabina sola, cerca de la dosis maxima tolerada recomendada, inhibio el crecimiento del tumor aproximadamente un 20 %. El compuesto de ensayo (PAPC-A-01) solo no produjo ninguna inhibicion del crecimiento. La terapia de combinacion de la gemcitabina con el compuesto de ensayo (PAPC-A-01) inhibio el crecimiento del tumor un 63 % en relacion con los controles, y un 54 % en relacion con la gemcitabina sola.

Referencias

Se citan en la presente memoria una serie de publicaciones para describir mas completamente la invencion y el estado de la tecnica a la que pertenece la invencion. Citas completas para estas referencias se proporcionan a continuacion.

Almeida et al., 2008, “Pyrazolyl-amino-substituted pyrazines and their use for the treatment of cancer”, international (PCT) patent publication number WO 2008/117050 A1 published 2 Oct. 2008.

Balaint and Vousden, 2001, “Activation and activities of the p53 tumour suppressor protein,” Br. J. Cancer, Vol. 85, pp. 1813-1823.

Bartek and Lukas, 2003, “Chk1 and Chk2 kinases in checkpoint control and cancer,” Cancer Cell, Vol. 3, pp. 421­ 429.

Brooks et al., 2012, “A potent chk1 inhibitor is selectively toxic in melanomas with high levels of replicative stress,” Oncogene, doi:10.1038/onc.2012.72.

Carson and Lois, 1995, “Cancer progression and p53,” Lancet, Vol. 346, pp. 1009-1011.

Cavelier et al., 2009, “Constitutive activation of the DNA damage signaling pathway in acute myeloid leukemia with complex karyotype: Potential importance for checkpoint targeting therapy,” Cancer Res., Vol. 69, pp. 8652-8661. Cole et al., 2011 “RNAi screen of the protein kinome identifies checkpoint kinase 1 (chkl) as a therapeutic target in neuroblastoma,” Proc. Natl. Acad Sci. USA, Vol. 108, pp. 3336-3341.

Collins et al., 2009a, “Pyrazin-2-yl-2-yl-amine and pyrazin-2-yl-pyrimidin-4-yl-amine compounds and their use”, international (PCT) patent publication number WO 2009/044162 A1 published 9 Apr. 2009.

Collins et al., 2009b, “Bicyclylaryl-aryl-amine compounds and their use”, international (PCT) patent publication number WO 2009/103966 A1 published 27 Aug. 2009.

Davies et al., 2011, “Single-agent inhibition of chk1 is antiproliferative in human cancer cell lines in vitro and inhibits tumor xenograft growth in vivo," Oncol. Res., Vol. 19, pp. 349-363.

Di Micco et al., 2006, “Oncogene-induced senescence is a DNA damage response triggered by DNA hyper­ replication,” Nature, Vol. 444, pp. 638-642.

Dixon and Norbury, 2002, “Therapeutic exploitation of checkpoint defects in cancer cells lacking p53 function,” Cell Cycle, Vol. 1, pp. 362-368.

Ferrao et al., 2011, “Efficacy of chk inhibitors as single agents in myc-driven lymphoma cells,” Oncogene, doi:10.1038/onc.2011.358.

Greenblatt et al., 1994, “Mutations in the p53 tumor suppressor gene: clues to cancer etiology and molecular pathogenesis,” Cancer Res., Vol. 54, pp. 4855-4878.

Guzi et al., 2011, “Targeting the replication checkpoint using SCH 900776, a potent and functionally selective CHK1 inhibitor identified via high content screening,” Mol. Cancer. Ther., Vol. 10, pp. 591-602.

Hoglund et al., 2011, “Therapeutic Implications for the Induced Levels of Chk1 in Myc-Expressing Cancer Cells,” Clin. Cancer Res., Vol. 17, pp. 7067-7079.

loannidis et al., 2009, “Discovery of pyrazol-3-ylamine pyrazines as novel JAK2 inhibitors”, Bioorg. Med. Chem. Lett., Vol. 19, pp. 6524-6528.

Lainchbury et al., 2012, “Discovery of 3-akloxyamino-5-(pyridin-2-ylamino)pyrazine-2-carbonitriles as selective, orally bioavailable CHK1 inhibitors”, J. Med. Chem., apparently published online on 19 Oct. 2012, dx.doi.org/10.1021/jm3012933.

Li et al., 2007, “Synthesis and in-vitro biological activity of macrocyclic urea CHK1 inhibitors”, Bioorg. Med. Chem. Lett., Vol. 17, pp. 6499-6504.

Lin et al., 2005, “Macrocyclic kinase inhibitors”, US patent publication number US 2005/0215556 A1 published 29 Sep. 2005.

Liu et al., 2000, “Chk1 is an essential kinase that is regulated by Atr and required for the G(2)/M DNA damage checkpoint,” Genes Dev., Vol. 14, pp. 1448-1459.

Murga et al., 2011, “Exploiting oncogene-induced replicative stress for the selective killing of Myc-driven tumors,” Nat. Struct. Mol. Biol., Vol. 18, pp. 1331-1335.

Sanchez et al., 1997, “Conservation of the Chk1 checkpoint pathway in mammals: linkage of DNA damage to Cdk regulation through Cdc25,” Science, Vol. 277, pp. 1497-1501.

Sorensen et al., 2005, “Cell-cycle checkpoint kinase Chk1 is required for mammalian homologous recombination repair,” Nat. Cell Biol., Vol 7, pp. 195-201.

Tao et al., 2005, “Macrocyclic kinase inhibitors”, international (PCT) patent publication number WO 2005/047294 A1 published 26 May 2005.

Tao et al., 2006, “Chk1 inhibitors for novel cancer treatment,” Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry, Vol. 6 , pp.

377-388.

Tao et al., 2007a, “Macrocyclic ureas as potent and selective CHK1 inhibitors: an improved synthesis, kinome profiling, structure-activity relationships, and preliminary pharmacokinetics,” Bioorg. Med. Chem. Lett., Vol. 17, pp.

6593-6601.

Tao et al., 2007b, “Structure-based design, synthesis, and biological evaluation of potent and selective macrocyclic checkpoint kinase 1 inhibitors,” J. Med. Chem., Vol. 50, pp. 1514-1527.

Walton et al., 2010, “The preclinical pharmacology and therapeutic activity of the novel CHK1 inhibitor SAR-020106,” Mol. Cancer. Ther., Vol. 9, No. 1, pp. 89-100.

Walton et al., 2012, “CCT244747 is a novel potent and selective CHK1 inhibitor with oral efficacy alone and in combination with genotoxic anticancer drugs”, Clin. Cancer Research, Vol. 18, No. 20, pp. 5650-5661.

Wang et al., 1996, “UCN-01: a potent abrogator of G2 checkpoint function in cancer cells with disrupted p53,” J. Natl. Cancer Inst., Vol. 8 , pp. 956-965.

Weinert and Hartwell, 1989, “Control of G2 delay by the rad9 gene of Saccharomyces cerevisiae,” J. Cell Sci. Suppl., Vol. 12, pp. 145-148.

Xiao et al., 2006, “Differential roles of checkpoint kinase 1, checkpoint kinase 2, and mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 2 in mediating DNA damage-induced cell cycle arrest: implications for cancer therapy,” Mol. Cancer. Ther., Vol. 5, pp. 1935-1943.

Zachos et al., 2003, “Chk1-deficient tumour cells are viable but exhibit multiple checkpoint and survival defects,” EMBO J., Vol. 22, pp. 713-723.

Zhao et al., 2002, “Disruption of the checkpoint kinase 1/cell division cycle 25A pathway abrogates ionizing radiationinduced S and G2 checkpoints,” Proc. Natl. Acad Sci. USA, Vol. 99, pp. 14795-14800.

Claims (28)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

en donde:

-RB3 es independientemente:

cada -RB3A es independientemente -H o alquilo C1-3 alifatico saturado;

-RA4 es independientemente -NHRA4A, -NRA4A2 o -ORA4A;

cada -RA4A es independientemente alquilo C1.3 alifatico saturado;

-RA5 es independientemente -RA5A, -RA5B, -RA5C, -RA5D, -RA5E, o -RA5F;

-RA5A es independientemente:

-RA5AA es alquilo C1.3 alifatico saturado;

-RA5B es -CF3;

-RA5C es independientemente -F, -Cl, -Br o -I;

-RA5D es independientemente -CeCH, -CeC-RA5DA, o -CeC-RA5DB-OH;

-RA5DA es un alquilo C1-4 alifatico saturado;

-RA5DB es alquileno C1.4 alifatico saturado;

-RA5E es independientemente cicloalquilo C3-6 saturado;

-RA5F es -C(=O)O-RA5FA; y

-RA5FA es alquilo C1-3 alifatico saturado.

2. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en donde -RB3 es:

y -RB3A es -Me.

3. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en donde -RB3 es:

y -RB3A es -Me.

4. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en donde -RB3 es:

y -RB3A es -Me.

5. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en donde -RB3 es:

y-R B3A es H o-Me.

6. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en donde -RB3 es:

y -RB3A es H o -Me.

7. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en donde -RB3 es:

y -RB3A es H o -Me.

8. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde -RA4 es independientemente -NHRA4A o -NRA4A2; y cada -RA4A es -Me.

9. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde -RA4 es -ORA4A y -RA4A es -Me.

10. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde -RA5 es -RA5A.

11. Un compuesto segun la reivindicacion 10, en donde -RA5A es:

y -ra5aa es -Me.

12. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde -RA5 es -RA5B.

13. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde -RA5 es -RA5C.

14. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde -RA5 es -RA5E.

15. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde -RA5 es -RA5F.

16. Un compuesto segun la reivindicacion 1, que es uno de los compuestos de las siguientes formulas, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

17. Un compuesto segun la reivindicacion 1, que es un compuesto de la siguiente formula, o una sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo:

18. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, y un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.

19. Un metodo para preparar una composicion farmaceutica que comprende la etapa de mezclar un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, y un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.

20. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para uso en el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

21. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para uso en el tratamiento del cancer.

22. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para uso en el tratamiento del cancer de cabeza; cancer de cuello; cancer del sistema nervioso; cancer cerebral; neuroblastoma; cancer de pulmon/mediastino; cancer de mama; cancer de esofago; cancer de estomago; cancer de hugado; cancer del tracto biliar; cancer pancreatico; cancer de intestino delgado; cancer de intestino grueso; cancer colorrectal; cancer ginecologico; cancer genitourinario; cancer de ovarios; cancer de la glandula tiroides; cancer de las glandulas suprarrenales; cancer de piel; melanoma; sarcoma oseo; sarcoma de tejidos blandos; tumor maligno pediatrico; enfermedad de Hodgkin; linfoma no Hodgkin; mieloma; leucemia; o metastasis desde un sitio primario desconocido.

23. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para uso en el tratamiento del cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de ovarios, cancer colorrectal, melanoma, glioma o neuroblastoma.

24. Un compuesto para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde el tratamiento comprende ademas tratamiento con un inhibidor de la ADN-topoisomerasa I o II.

25. Un compuesto para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde el tratamiento comprende ademas tratamiento con un agente que dana el ADN.

26. Un compuesto para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde el tratamiento comprende ademas tratamiento con un antimetabolito o inhibidor de la timidilato sintasa (TS).

27. Un compuesto para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde el tratamiento comprende ademas tratamiento con un agente dirigido a los microtubulos.

28. Un compuesto para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde el tratamiento comprende ademas tratamiento con radiacion ionizante