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ES2613723T3 - Método de medición del tiempo de coagulación sanguínea para detectar anticoagulantes de Lupus - Google Patents

Método de medición del tiempo de coagulación sanguínea para detectar anticoagulantes de Lupus Download PDF

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ES2613723T3
ES2613723T3 ES12801236.6T ES12801236T ES2613723T3 ES 2613723 T3 ES2613723 T3 ES 2613723T3 ES 12801236 T ES12801236 T ES 12801236T ES 2613723 T3 ES2613723 T3 ES 2613723T3
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positive
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Masahiro IEKO
Chizuru Morikawa
Keiko HATTORI
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Sekisui Medical Co Ltd
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SCHOOL JURIDICAL PERSON HIGASHI-NIPPON-GAKUEN
Sekisui Medical Co Ltd
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Abstract

Un método de medición del tiempo de coagulación sanguínea para detectar el anticoagulante de lupus, comprendiendo el método la adición de una composición de solución tampón que contiene factores de coagulación sanguínea a una muestra de sangre antes de la medición o en el momento de la medición del tiempo de coagulación sanguínea, y medir el tiempo de coagulación sanguínea.

Description

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imagen3
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imagen5
que se utiliza en reactivos convencionales para la medición del tiempo de coagulación sanguínea. Ejemplos de un agente tampón incluyen HEPES y TRIS, pero los ejemplos no se limitan a estos.
El reactivo para la medición del tiempo de coagulación sanguínea puede contener un componente que está
5 contenido en los reactivos conocidos convencionalmente para la medición del tiempo de coagulación sanguínea, además de los componentes descritos anteriormente. Ejemplos de dicho componente incluyen un agente activador, veneno de serpiente y factores tisulares. Ejemplos de un agente activador incluyen el ácido elágico, caolín, Celita, sílice coloidal, ácido silícico coloidal, alúmina, y magnesio. Ejemplos de venenos de serpiente incluye el veneno de víbora de Russell, veneno de serpiente Textarina, y veneno de serpiente Ecrina. Ejemplos de los factores tisulares incluyen las tromboplastinas tisulares naturales tales como las tromboplastinas tisulares derivadas de cerebro de conejo, derivadas de placenta humana, y derivadas de cerebro bovino; y la tromboplastina tisular recombinada genéticamente.
El método de la presente invención también se puede aplicar al ensayo de corrección de la coagulación sanguínea
15 (ensayo de mezcla) descrito en el Documento No Patente 1. Es decir, el método se puede aplicar a un método de adición de una muestra de sangre normal a una muestra de sangre que se va a ensayar, y determinar hasta qué punto se corrige el tiempo de coagulación sanguínea, representándolo en un gráfico.
Más particularmente, por ejemplo, una muestra de plasma diluida por la adición de Plasma Normal Agrupado (fabricado por Precision Biologic, Inc.; abreviado, de aquí en adelante como PNP) como plasma normal o la composición de solución tampón de la presente invención al plasma de ensayo a 1:1, se utiliza como una muestra que se va a ensayar. Las muestras se prepararon añadiendo plasma normal a esta muestra que se va a ensayar, y mezclar esta muestra que se va a ensayar con el plasma normal de manera que las proporciones del plasma normal sean un 0%, 20%, 50%, 80% y 100%, y se lleva a cabo la medición del APTT. Los resultados se representan en un
25 gráfico (eje horizontal: proporción de plasma normal mezclado, o proporción de plasma de ensayo (%); eje vertical: tiempo de coagulación (segundos)), y el tiempo de coagulación sanguínea se puede determinar visualmente por la forma del gráfico.
Cuando se utiliza el método de la presente invención, solo necesita simplemente llevar a cabo la medición convencional del tiempo de coagulación sanguínea, excepto que simplemente se añade la composición de solución tampón descrita anteriormente, y de esta manera se puede detectar con precisión la presencia o ausencia de LA y determinar incluso con una muestra de sangre derivada de un consumidor de warfarina, una persona que tiene deficiencia de vitamina K, o un paciente con fallo hepático.
35 La composición de solución tampón que contiene factores de coagulación sanguínea se puede utilizar como un reactivo auxiliar que se utiliza en combinación con un agente para la medición del tiempo de coagulación sanguínea para detectar el anticoagulante de lupus.
Además, una combinación de (A) un reactivo para la medición del tiempo de tromboplastina parcial activada o un reactivo para la medición del tiempo de veneno de víbora de Russell diluido, con (b) un reactivo auxiliar incluyendo una composición de solución tampón que contiene factores de coagulación sanguínea como ingrediente principal, es útil como un kit de reactivos para la medición del tiempo de coagulación sanguínea para detectar el anticoagulante de lupus.
45 Ejemplos
La presente invención se describirá con más detalle por medio de los siguientes Ejemplos, pero la presente invención no pretende limitarse a los siguientes Ejemplos.
Ejemplo 1
Se diluyó un plasma de ensayo con cada uno de los reactivos auxiliares descritos en la Tabla 1 a 1:1, y las mezclas se utilizaron como muestras para llevar a cabo un ensayo de mezcla convencional. Se hizo una comparación entre las formas de curva en los gráficos.
55 < Artículo de medición>
(1) Ensayo de exploración por APTT
Se llevó a cabo utilizando el reactivo PTT LA, “RD” (fabricado por Roche Diagnostics GmbH), y un analizador de coagulación de sangre automático, STA-R (fabricado por Roche Diagnostics GmbH). Para la determinación, se utilizó el valor de corte descrito en el prospecto del reactivo. El reactivo relevante es un reactivo para llevar a cabo la medición utilizando una solución de cloruro cálcico auto-producida, aparte de un reactivo PTT LA que contiene cefalina que es un fosfolípido, y sílice que es un agente activador del factor de contacto (cuerpo cargado 65 negativamente). El reactivo se puede utilizar para el método de la presente invención en combinación con la composición de solución tampón que contiene los factores de coagulación sanguínea (reactivo auxiliar) de la
7
imagen6
[Tabla 2]
Resultados y determinación del ensayo de LA
Artículo
Exploración APTT dRWT Método de neutralización de fosfolípidos
Unidad
seg Determinación seg seg Relación Determinación seg seg Δseg Determinación
Valor de corte
47 1,3 8
Plasma A
143,0 Positivo 220,4 82,5 2,67 Positivo 132,0 86,0 46,0 Positivo
Plasma B
57,4 Positivo 77,9 54,8 1,42 Positivo 47,7 47,8 -0,1 Negativo
Como se indica en las filas de No tratados en la Tabla 3, el diagrama de la izquierda en la FIG. 2, y el diagrama de la izquierda de la FIG. 3, los plasmas A y B muestran ambos una tendencia a ser convexos descendentes en el ensayo 5 de mezcla, y se determinan como LA-negativos. Entre las modificaciones del ensayo de mezcla, en el método que utiliza plasma normal (PNP) que se recomienda en general, el plasma A da un gráfico en forma de S que es casi una línea recta, y era difícil determinar si la curva era convexa ascendente o convexa descendente (en la fila de plasma normal añadido de la Tabla 3, y el diagrama de la derecha en la FIG. 2). Por el contrario, cuando se utilizaban los reactivos auxiliares 1 a 4 de la presente invención, el plasma A daba gráficos que eran claramente convexos
10 ascendentes, y por lo tanto se determinaban fácilmente que eran positivos (en las filas de los reactivos auxiliares de la Tabla 3, y la FIG. 4). El plasma B daba gráficos que eran claramente convexos descendentes, y se determinaba que eran negativos (en la columna de reactivo auxiliar de la Tabla 3, y la FIG. 5).
[Tabla 3]
Ensayo de mezcla y modificación de ensayo de mezcla
Muestra
Determinación Proporción de Muestra
Plasma de ensayo
Tratamiento 0% 10% 20% 50% 100%
Plasma A
No tratados Negativo 34,1 49,4 57,4 88,2 166,1
Adición de plasma normal
Pendiente de determinación 34,6 43,4 47,3 60,0 87,8
Adición de Reactivo auxiliar 1
Positivo 34,2 45,1 46,6 55,2 73,8
Adición de Reactivo auxiliar 2
Positivo 34,2 42,4 43,7 46,4 46,0
Adición de Reactivo auxiliar 3
Positivo 34,2 44,2 45,9 53,8 71,3
Adición de Reactivo auxiliar 4
Positivo 34,2 41,4 41,9 42,6 42,2
Plasma B
No tratados Negativo 34,4 35,3 36,4 40,3 56,6
Adición de plasma normal
Negativo 33,2 33,6 33,9 35,9 39,7
Adición de Reactivo auxiliar 1
Negativo 34,1 33,6 34,0 35,8 47,0
Adición de Reactivo auxiliar 2
Negativo 34,1 33,5 32,6 31,5 35,0
Adición de Reactivo auxiliar 3
Negativo 34,1 33,2 33,2 32,4 37,3
Adición de Reactivo auxiliar 4
Negativo 34,1 32,1 30,7 27,6 28,6
15 De acuerdo con la presente invención, se determinaba fácilmente que la determinación de negatividad en el ensayo de mezcla del plasma A era un falso negativo debido a la administración de warfarina, y actualmente era LA-positivo. Esto no se podía descubrir por el ensayo de mezcla convencional o con la modificación del ensayo de mezcla. Además. El plasma B era positivo en el ensayo de exploración ATPP y el ensayo dRVVT, pero se determinó que la
20 determinación era un falso positivo en todos los casos debido a la administración de warfarina, y era actualmente LA-negativo.
9
imagen7
[Tabla 4]
FII
U/ml) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
FX (U/ml)
LA W t/c t/c t/c t/c t/c t/c
0
_ . 1,04 imagen8 imagen9 imagen10 imagen11 1,14
_
+ 0,62 0,86
+
_ 2,21 2,16
+
+
1,26 2,22
0,1
_ _ imagen12 1,06 1,08 1,07 1,09 1,11
_
+ 0,84 0,90 0,91 0,94 0,97
+
_ 2,31 2,33 2,36 2,36 2,37
+
+
1,95 2,21 2,35 2,40 2,43
0,2
_ _ imagen13 1,09 1,11 1,12 1,11 1,07
__
+ 0,88 0,92 0,90 0,93 0,94
+
_ 2,36 2,43 2,41 2,42 2,28
+
+
2,10 2,39 2,37 2,54 2,09
0,3
_ _ imagen14 1,11 1,12 1,11 1,12 1,12
_
+ 0,89 0,98 0,93 0,97 0,99
+
_ 2,37 2,46 2,44 2,43 2,43
+
+
2,05 2,39 2,40 2,47 2,51
0,4
_ _ imagen15 1,11 1,11 1,13 1,14 1,14
_
+ 0,87 0,94 0,96 0,99 1,03
+
_ 2,45 2,48 2,48 2,47 2,46
+
+
2,13 2,30 2,49 2,59 2,58
0,5
_ _ 1,11 1,10 1,12 1,12 1,14 1,14
_
+ 0,98 0,97 0,88 0,95 1,00 1,02
+
_ 2,35 2,35 2,37 2,46 2,47 2,45
+
+
2,06 1,99 2,20 2,43 2,57 2,65
De acuerdo con el método de la presente invención, incluso cuando se medía el plasma de un sujeto (+) que a veces se determinaba como LA-negativo (falso negativo) por el ensayo dRVVT, pero es LA-positivo (+) y también recibe la administración de warfarina (+) (plasma de L(+)W(+)), la determinación correcta, es decir de LA-positivo, se hacía sin que estuviera afectada por la administración de warfarina.
11

Claims (1)

  1. imagen1
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