ES2681698T3

ES2681698T3 - Vacunas de combinación con menores dosis de antígeno y/o adyuvante

Info

Publication number: ES2681698T3
Application number: ES12709382.1T
Authority: ES
Inventors: Derek O'hagan; Barbara Baudner; David A.G. SKIBINSKI; Manmohan Singh
Original assignee: GlaxoSmithKline Biologicals SA
Current assignee: GlaxoSmithKline Biologicals SA
Priority date: 2011-03-02
Filing date: 2012-03-02
Publication date: 2018-09-14
Anticipated expiration: 2032-03-02
Also published as: AU2012222883A1; CN103533954B; CA2828844C; EP2680885A1; JP6191082B2; US10603369B2; US20180169204A1; US20140112950A1; RU2013144207A; EP2680885B1; BR112013022397A2; EP2680885B8; JP2017197546A; KR20140026392A; US20180256695A1; WO2012117377A1; CN103533954A; TR201811280T4; JP2014506916A; CA2828844A1

Abstract

Una composición inmunógena en forma de dosis unitaria para administrar a un paciente, que comprende (i) un toxoide diftérico, un toxoide tetánico y un antígeno de pertussis acelular que contiene un toxoide pertussis, (ii) un adyuvante de sal de aluminio, en donde la cantidad de Al+++ en la dosis unitaria es de 10 μg a menos de 0,2 mg, y (iii) un agonista de TLR7 adsorbido al adyuvante de sal de aluminio, en donde el agonista de TLR7 incluye al menos un grupo fosfato o fosfonato y en donde el adyuvante de sal de aluminio y el agonista de TLR7 forman un complejo adyuvante estable que retiene la capacidad del adyuvante de sal de aluminio de adsorber antígenos.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

El sacárido del serogrupo W135 es un polímero de unidades de disacárido de ácido siálico-galactosa. Al igual que el sacárido del serogrupo C, tiene O-acetilación variable, pero en las posiciones 7 y 9 del ácido siálico [41]. La estructura se escribe como: → 4) -D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Gal-α-(1 →.

El sacárido del serogrupo Y es similar al sacárido del serogrupo W135, excepto que la unidad que se repite en el disacárido incluye glucosa en lugar de galactosa. Al igual que el serogrupo W135, tiene O-acetilación variable en las posiciones 7 y 9 del ácido siálico [41]. La estructura del serogrupo Y se escribe como: →4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α(2→6)-D-Glc-α-(1→.

Los sacáridos usados de acuerdo con la invención pueden estar O-acetilados como se ha descrito antes (p. ej., con el mismo patrón de O-acetilación que se observa en sacáridos capsulares naturales), o pueden estar parcial o totalmente des-O-acetilados en una o más posiciones de los anillos de sacáridos, o pueden estar hiper-O-acetilados en relación con los sacáridos capsulares nativos. Por ejemplo, la referencia 42 describe el uso de sacáridos del serogrupo Y que están más de 80% des-O-acetilados.

Los restos de sacáridos en conjugados meningocócicos pueden comprender sacáridos de longitud completa preparados a partir de meningococos, y/o pueden comprender fragmentos de sacáridos de longitud completos, es decir, los sacáridos pueden ser más cortos que los sacáridos capsulares naturales observados en bacterias. Los sacáridos pueden por lo tanto ser despolimerizados, ocurriendo la despolimerización durante o después de la purificación de sacáridos pero antes de la conjugación. La despolimerización reduce la longitud de cadena de los sacáridos. Un método de despolimerización implica el uso de peróxido de hidrógeno [43]. El peróxido de hidrógeno se añade a un sacárido (p. ej., para dar una concentración final de H2O2 de 1%), y después la mezcla se incuba (p. ej., a aproximadamente 55ºC) hasta que se ha logrado la reducción de longitud de cadena deseada. Otro método de despolimerización implica la hidrólisis ácida [44]. Se conocen en la técnica otros métodos de despolimerización. Los sacáridos usados para preparar conjugados para usar de acuerdo con la invención se pueden obtener por cualquiera de estos métodos de despolimerización. La despolimerización se puede usar con el fin de proporcionar una longitud de cadena óptima para la inmunogenicidad y/o para reducir la longitud de cadena para la manejabilidad física de los sacáridos. En algunas realizaciones, los sacáridos tienen el siguiente intervalo de grados de polimerización medio (Gp): A=10-20; C=12-22; W135=15-25; Y=15-25. En términos de peso molecular, en lugar de Gp, los intervalos útiles son, para todos los serogrupos: <100 kDa; 5 kDa-75 kDa; 7 kDa-50 kDa; 8 kDa-35 kDa; 12 kDa-25 kDa; 15 kDa-22 kDa. En otras realizaciones, el peso molecular medio para sacáridos de cada uno de los serogrupos meningocócicos A, C, W135 e Y puede ser más de 50 kDa, por ejemplo, ≥75 kDa, ≥100 kDa, ≥110 kDa, ≥120 kDa, ≥130 kDa, etc. [45], e incluso hasta 1500 kDa, en particular según lo determinado por MALLS. Por ejemplo: un sacárido MenA puede estar en el intervalo de 50-500 kDa, p. ej., 60-80 kDa; un sacárido MenC puede estar en el intervalo de 100-210 kDa; un sacárido MenW135 puede estar en el intervalo de 60-190 kDa, por ejemplo, 120-140 kDa; y/o un sacárido MenY puede estar en el intervalo de 60-190 kDa, p. ej., 150-160 kDa.

Si un componente o composición incluye conjugados tanto de Hib como meningocócicos entonces, en algunas realizaciones, la masa de sacárido de Hib puede ser sustancialmente la misma que la masa de un sacárido de serogrupo meningocócico particular. En algunas realizaciones, la masa de sacárido de Hib será mayor que (p. ej., al menos 1,5x) la masa de un sacárido de serogrupo meningocócico particular. En algunas realizaciones, la masa de sacárido de Hib será menor que (p. ej., al menos 1,5x menos) la masa de un sacárido de serogrupo meningocócico particular.

Cuando una composición incluye sacárido de más de un serogrupo meningocócico, hay una masa media de sacárido por serogrupo. Si se usan masas sustancialmente iguales de cada serogrupo, entonces la masa media será la misma que cada masa individual; donde no se usan masas iguales, entonces la media diferirá, p. ej., con una cantidad de 10:5:5:5 µg para una mezcla MenACWY, la masa media es de 6,25 μg por serogrupo. En algunas realizaciones, la masa de sacárido de Hib será sustancialmente la misma que la masa media de sacárido meningocócico por serogrupo. En algunas realizaciones, la masa de sacárido de Hib será mayor que (p. ej., al menos 1,5x) la masa media de sacárido meningocócico por serogrupo. En algunas realizaciones, la masa de sacárido de Hib será menor que (p. ej., al menos 1,5x) la masa media del sacárido meningocócico por serogrupo [46].

Polipéptidos meningocócicos

El sacárido capsular de serogrupo B de Neisseria meningitidis no es un inmunógeno de vacuna útil y, por lo tanto, en su lugar se pueden usar antígenos polipeptídicos. Por ejemplo, se puede usar con la invención la "vacuna universal para el meningococo del serogrupo B" descrita por Novartis Vaccines en la ref. 47.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno proteína de unión al factor H (fHBP). El antígeno fHBP se ha caracterizado en detalle. También se conoce como proteína "741" [SEQ ID 2535 y 2536 en la ref. 48], "NMB1870", "GNA1870" [refs. 49-51], "P2086", "LP2086" u "ORF2086" [52-54]. Es naturalmente una lipoproteína y se expresa en todos los serogrupos meningocócicos. El antígeno fHBP se divide en tres variantes distintas [55] y se prefiere incluir antígenos para todas las variantes.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno de Neisseria de unión a heparina (NHBA) [56]. Este

7 5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

antígeno se incluyó en la secuencia de genoma publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [57] como gen NMB2132.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno NadA. El antígeno NadA se incluyó en la secuencia de genoma publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [57] como gen NMB1994.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno NspA. El antígeno NspA se incluyó en la secuencia de genoma publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [57] como gen NMB0663.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno NhhA. El antígeno NhhA se incluyó en la secuencia de genoma publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [57] como gen NMB0992.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno App. El antígeno App se incluyó en la secuencia del genoma publicada para la cepa meningocócica MC58 del serogrupo B [57] como gen NMB1985.

Una composición de la invención puede incluir un antígeno Omp85. Omp85 se incluyó en la secuencia del genoma publicada para la cepa meningocócica del serogrupo B MC58 [57] como gen NMB0182.

Una composición de la invención puede incluir una vesícula de membrana exterior meningocócica.

Sacáridos neumocócicos

Streptococcus pneumoniae causa meningitis bacteriana y las vacunas existentes se basan en sacáridos capsulares. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden incluir al menos un sacárido capsular neumocócico conjugado con una proteína transportadora.

La invención puede incluir el sacárido capsular de uno o más serotipos neumocócicos diferentes. Cuando una composición incluye antígenos sacáridos de más de un serotipo, estos se preparan preferiblemente por separado, se conjugan por separado y después se combinan. Los métodos para purificar sacáridos capsulares neumocócicos son conocidos en la técnica (p. ej., véase la referencia 58) y las vacunas basadas en sacáridos purificados de 23 serotipos diferentes se conocen desde hace muchos años. También se han descrito mejoras de estos métodos, p. ej., para el serotipo 3 como se describe en la referencia 59, o para los serotipos 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F y 19A como se describe en la referencia 60.

El(los) sacárido(s) capsular(es) neumocócico(s) se seleccionarán típicamente de los siguientes serotipos: 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C , 19A, 19F, 20, 22F, 23F y/o 33F. Por lo tanto, en total, una composición puede incluir un sacárido capsular de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o más serotipos diferentes. Las composiciones que incluyen al menos el sacárido de serotipo 6B son útiles.

Una combinación útil de serotipos es una combinación 7-valente, p. ej., que incluye sacáridos capsulares de cada uno de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F. Otra combinación útil es una combinación 9-valente, p. ej., que incluye sacárido capsular de cada uno de los serotipos 1, 4, 5, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F. Otra combinación útil es una combinación 10-valente, p. ej., que incluye sacárido capsular de cada uno de los serotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F y 23F. Una combinación 11-valente puede incluir además sacárido del serotipo 3. Se puede añadir una combinación 12-valente a la mezcla 10-valente: serotipos 6A y 19A; 6A y 22F; 19A y 22F; 6A y 15B; 19A y 15B; o 22F y 15B. Se puede añadir una combinación 13-valente a la mezcla 11-valente: serotipos 19A y 22F; 8 y 12F; 8 y 15B; 8 y 19A; 8 y 22F; 12F y 15B; 12F y 19A; 12F y 22F; 15B y 19A; 15B y 22F; 6A y 19A, etc.

Por tanto, una combinación 13-valente útil incluye sacárido capsular de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19 (o 19A), 19F y 23F, p. ej., preparado como se describe en las referencias 61 a 64. Una de dichas combinaciones incluye sacárido de serotipo 6B en aproximadamente 8 μg/ml y los otros 12 sacáridos en concentraciones de aproximadamente 4 μg/ml cada uno. Otra de dichas combinaciones incluye sacáridos de serotipo 6A y 6B en aproximadamente 8 μg/ml cada uno y los otros 11 sacáridos en aproximadamente 4 μg/ml de cada uno.

Las proteínas transportadoras adecuadas para conjugados incluyen toxinas bacterianas, tales como toxinas diftéricas o tetánicas, o toxoides o mutantes de los mismos. Estos se usan habitualmente en vacunas conjugadas. Por ejemplo, es útil el mutante de la toxina diftérica CRM197 [65]. Otras proteínas transportadoras adecuadas incluyen péptidos sintéticos [66,67], proteínas de choque térmico [68,69], proteínas de pertussis [70,71], citoquinas [72], linfoquinas [72], hormonas [72], factores de crecimiento [72] , proteínas artificiales que comprenden múltiples epítopos de linfocitos T CD4+ humanos de diferentes antígenos derivados de patógenos [73] tales como N19 [74], proteína D de H. influenzae [75-77], neumolisina [78] o sus derivados no tóxicos [79], proteína de superficie neumocócica PspA [80], proteínas de absorción de hierro [81], toxina A o B de C. difficile [82], exoproteína A recombinante de Pseudomonas aeruginosa (rEPA) [83], etc.

Las proteínas transportadoras particularmente útiles para las vacunas de conjugados neumocócicos son CRM197, toxoide tetánico, toxoide diftérico y proteína D de H. influenzae. CRM197 se usa en PREVNAR™. Una mezcla 13

8 5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

valente puede usar CRM197 como la proteína transportadora para cada uno de los 13 conjugados, y CRM197 puede estar presente en aproximadamente 55-60 μg/ml.

Cuando una composición incluye conjugados de más de un serotipo neumocócico, se puede usar la misma proteína transportadora para cada conjugado separado, o usar proteínas transportadoras diferentes. En ambos casos, sin embargo, se formará una mezcla de diferentes conjugados preparando cada conjugado de serotipo por separado, y después mezclándolos para formar una mezcla de conjugados separados. La referencia 84 describe las ventajas potenciales cuando se usan diferentes proteínas transportadoras en vacunas de conjugados neumocócicos multivalentes, pero el producto PREVNAR™ usa con éxito el mismo transportador para cada uno de los siete serotipos diferentes.

Una proteína transportadora se puede conjugar covalentemente con un sacárido neumocócico directamente o por un conector. Se conocen diferentes conectores. Por ejemplo, la unión puede ser por un carbonilo, que se puede formar por reacción de un grupo hidroxilo libre de un sacárido modificado con CDI [85,86] seguido de reacción con una proteína para formar un enlace carbamato. Se puede usar la condensación de carbodiimida [87]. Se puede usar un conector de ácido adípico, que se puede formar acoplando un grupo -NH2 libre (p. ej., introducido en un sacárido por aminación) con ácido adípico (usando, por ejemplo, activación con diimida), y después acoplar una proteína al sacárido-ácido adípico intermedio resultante [88,89]. Otros conectores incluyen β-propionamido [90], nitrofeniletilamina [91], haluros de halogenoacilo [92], enlaces glucosídicos [93], ácido 6-aminocaproico [94], N-succinimidil-3(2-piridilditio)-propionato (SPDP) [95], dihidrazida de ácido adípico ADH [96], restos de C4 a C12 [97], etc.

Se puede usar conjugación por aminación reductora. El sacárido se puede oxidar primero con peryodato para introducir un grupo aldehído, que después puede formar un enlace covalente directo con una proteína transportadora por aminación reductora, p. ej., al grupo ε-amino de una lisina. Si el sacárido incluye múltiples grupos aldehído por molécula, entonces esta técnica de enlace puede conducir a un producto reticulado, donde múltiples aldehídos reaccionan con múltiples aminas del transportador. Esta técnica de conjugación por reticulación es particularmente útil para al menos los serotipos neumocócicos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F.

Un sacárido neumocócico puede comprender un sacárido intacto de longitud completa preparado a partir de neumococo, y/o puede comprender fragmentos de sacáridos de longitud completa, es decir, los sacáridos pueden ser más cortos que los sacáridos capsulares naturales observados en bacterias. Los sacáridos, por lo tanto, se pueden despolimerizar, ocurriendo la despolimerización durante o después de la purificación de sacáridos pero antes de la conjugación. La despolimerización reduce la longitud de cadena de los sacáridos. La despolimerización se puede usar con el fin de proporcionar una longitud de cadena óptima para la inmunogenicidad y/o para reducir la longitud de la cadena para la manejabilidad física de los sacáridos. Cuando se usa más de un serotipo neumocócico, entonces se pueden usar sacáridos intactos para cada serotipo, fragmentos para cada serotipo o usar sacáridos intactos para algunos serotipos y fragmentos para otros serotipos.

Cuando una composición incluye sacárido de cualquiera de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 19F y 23F, estos sacáridos son preferiblemente intactos. Por el contrario, cuando una composición incluye sacárido del serotipo 18C, este sacárido preferiblemente está despolimerizado.

Un sacárido de serotipo 3 también se puede despolimerizar. Por ejemplo, un sacárido de serotipo 3 se puede someter a hidrólisis ácida para la despolimerización [61], p. ej., usando ácido acético. Después, los fragmentos resultantes se pueden oxidar para su activación (p. ej., oxidación con peryodato, puede ser en presencia de cationes bivalentes, p. ej., con MgCl2), conjugar con un transportador (p. ej., CRM197) en condiciones reductoras (p. ej., usando cianoborohidruro de sodio) y después (opcionalmente) cualquier aldehído que no haya reaccionado en el sacárido se puede desactivar (p. ej., usando borohidruro de sodio) [61]. La conjugación se puede realizar en material liofilizado, p. ej., después de la co-liofilización del sacárido activado y el transportador.

Un sacárido de serotipo 1 se puede des-O-acetilar al menos parcialmente, p. ej., se consigue por tratamiento con tampón de pH alcalino [62] tal como usando un tampón de bicarbonato/carbonato. Dichos sacáridos des-Oacetilados (parcialmente) se pueden oxidar para la activación (p. ej., oxidación con peryodato), conjugar con un transportador (p. ej., CRM197) en condiciones reductoras (p. ej., usando cianoborohidruro sódico), y después (opcionalmente) cualquier aldehído sin reaccionar en el sacárido se puede desactivar (p. ej., usando borohidruro de sodio) [62]. La conjugación se puede llevar a cabo en material liofilizado, p. ej., después de la co-liofilización del sacárido activado y el vehículo.

Un sacárido de serotipo 19A se puede oxidar para su activación (ej. oxidación con peryodato), conjugar con un transportador (p. ej., CRM197) en DMSO en condiciones reductoras y después (opcionalmente) cualquier aldehído sin reaccionar en el sacárido se puede desactivar (p. ej., usando borohidruro sódico) [98]. La conjugación se puede llevar a cabo en material liofilizado, p. ej., después de la co-liofilización del sacárido activado y el transportador.

Pueden estar presentes uno o más conjugados de sacárido capsular neumocócico en forma liofilizada.

Los conjugados neumocócicos pueden, idealmente, producir anticuerpos anticapsulares que se unen al sacárido relevante, p. ej., producen un nivel de anticuerpo antisacárido ≥ 0,20 μg/ml [99]. Los anticuerpos se pueden evaluar por inmunoensayo enzimático (EIA) y/o medición de la actividad opsonofagocítica (OPA). El método de EIA ha sido

9

imagen6

presencia de NaCl facilita la medición correcta del pH antes de la adsorción de antígenos.

Las composiciones de la invención incluyen de 10 µg a menos de 0,2 mg de Al+++ por dosis unitaria, p. ej., <150 μg, <100 μg, <75 μg, <50 μg, <25 μg, etc.

Las composiciones de la invención tienen una concentración de Al+++ de 20 µg/ml a por debajo de 0,4 mg/ml, p. ej., 5 <300 μg/ml, <250 μg/ml, <200 μg/ml, <150 μg/ml, <100 μg/ml, <75 μg/ml, < 50 μg/ml, etc.

Cuando las composiciones de la invención incluyen un adyuvante basado en aluminio, puede producirse la sedimentación de los componentes durante el almacenamiento. Por lo tanto, la composición debe agitarse antes de la administración a un paciente. La composición agitada será una suspensión blanca turbia.

Agonistas de receptores similares a Toll

10 Cuando las composiciones incluyen un adyuvante de sal de aluminio, entonces se puede adsorber un agonista de TLR a esa sal de aluminio, mejorando así el efecto inmunopotenciador del adyuvante [102]. Esto puede conducir a una mejor respuesta inmunitaria y/o permite una reducción en la cantidad de aluminio en la composición mientras se mantiene un efecto adyuvante equivalente.

Por lo tanto, las composiciones de la invención incluyen una sal de aluminio (preferiblemente un hidróxido de

15 aluminio) a la que se adsorbe un agonista de TLR7 (más preferiblemente un agonista de TLR7 humano). El agonista y la sal pueden formar un complejo adyuvante estable que retiene la capacidad de la sal de adsorber antígenos.

Los agonistas de TLR con propiedades de adsorción incluyen típicamente un resto que contiene fósforo que puede experimentar un intercambio de ligando con grupos de superficie en una sal de aluminio, p. ej., con grupos de hidróxido de superficie. Por lo tanto, un agonista de TLR útil puede incluir un fosfato, un fosfonato, un fosfinato, un

20 fosfonito, un fosfinito, un fosfato, etc. Los agonistas de TLR7 para usar en la invención incluyen al menos un grupo fosfato o fosfonato [102].

Los agonistas de TLR2 y TLR7 adsorbentes útiles se describen en las referencias 102 a 106. Los agonistas de TLR7 adsorbentes específicos de interés incluyen, pero no se limitan a los compuestos 1A a 27A en la Tabla A en las páginas 79-84 de la referencia 107. Por ejemplo, el agonista de TLR7 puede ser uno de:

imagen7

11

imagen8

imagen9

imagen10

imagen11

imagen12

imagen13

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

retenidos en la vacuna final en ≤100 μg/ml, preferiblemente <10 μg/ml, cada uno. Otros componentes de las preparaciones de antígenos, tales como neomicina (p. ej., sulfato de neomicina, en particular de un componente de poliovirus), polimixina B (p. ej., sulfato de polimixina B, en particular de un componente de poliovirus), etc. también pueden estar presentes en cantidades de subnanogramos por dosis. Un posible componente adicional de la vacuna final que se origina en las preparaciones de antígeno procede de una purificación de antígenos menor que la total. Pueden estar presentes pequeñas cantidades de proteínas y/o ADN genómico de B. pertussis, C. diphtheriae, C. tetani y S. cerevisiae. Para minimizar las cantidades de estos componentes residuales, las preparaciones de antígeno se tratan preferiblemente para eliminarlas antes de que los antígenos se usen con la invención.

Cuando se usa un componente de poliovirus, generalmente se habrá cultivado en células Vero. La vacuna final preferiblemente contiene menos de 10 ng/ml, preferiblemente ≤1 ng/ml, p. ej., ≤500 pg/ml o ≤50 pg/ml de ADN de células Vero, p. ej. menos de 10 ng/ml de ADN de células Vero, es decir ≥50 pares de bases de longitud.

Las composiciones de la invención se presentan para usar en envases. Los envases adecuados incluyen viales y jeringas desechables (preferiblemente estériles). Los procedimientos para preparar las composiciones de la invención pueden comprender una etapa de acondicionamiento de la vacuna en envases para su uso. Los envases adecuados incluyen viales y jeringas desechables (preferiblemente estériles).

Cuando se presenta una composición de la invención en un vial, ésta preferiblemente está hecha de un material de vidrio o plástico. El vial preferiblemente se esteriliza antes de que se le añada la composición. Para evitar problemas con pacientes sensibles al látex, los viales se pueden sellar con un tapón sin látex. El vial puede incluir una sola dosis de vacuna, o puede incluir más de una dosis (un vial de "multidosis"), p. ej., 10 dosis. Cuando se usa un vial multidosis, cada dosis debe retirarse con una aguja y jeringa estériles en condiciones asépticas estrictas, teniendo cuidado de evitar la contaminación del contenido del vial. Los viales preferidos están hechos de vidrio incoloro.

Un vial puede tener una tapa (p. ej., un cierre Luer) adaptada de modo que se puede insertar una jeringa precargada en la tapa, el contenido de la jeringa se puede expulsar al vial (p. ej., para reconstituir el material liofilizado en el mismo) y el contenido del vial se puede llevar de nuevo a la jeringa. Después de retirar la jeringa del vial, se puede unir entonces una aguja y la composición se puede administrar a un paciente. La tapa se encuentra preferiblemente dentro de un sello o cubierta, de modo que el sello o cubierta deben ser retirados antes de que se pueda acceder a la tapa.

Cuando la composición se envasa en una jeringa, la jeringa normalmente no tendrá una aguja unida a ella, aunque se puede suministrar una aguja separada con la jeringa para ensamblar y usar. Se prefieren agujas de seguridad. Son típicas las agujas de 25,4 mm (1 pulgada) 23 gauge, 25,4 mm (1 pulgada) 25 gauge y 16 mm (5/8 pulgadas) 25 gauge. Las jeringas pueden estar provistas de etiquetas que se despegan en las que se pueden imprimir el número de lote y la fecha de caducidad del contenido, para facilitar el mantenimiento de registros. El émbolo en la jeringa preferiblemente tiene un tope para evitar que el émbolo salga accidentalmente durante la aspiración. Las jeringas pueden tener un tapón y/o émbolo de caucho de látex. Las jeringas desechables contienen una sola dosis de vacuna. La jeringa en general tendrá un tapón del cono para sellar el cono antes de la unión de una aguja, y el tapón del cono está hecho preferiblemente de caucho de butilo. Si la jeringa y la aguja se envasan por separado, entonces la aguja preferiblemente está provista de una protección de goma de butilo. Se prefiere caucho de butilo gris. Las jeringas preferidas son las comercializadas con el nombre comercial "Tip-Lok"™.

Cuando se usa un recipiente de vidrio (p. ej., una jeringa o un vial), entonces se prefiere usar un recipiente hecho de un vidrio de borosilicato en lugar de un vidrio sódico-cálcico.

Después de envasar una composición en un recipiente, el recipiente puede encerrarse dentro de una caja para su distribución, p. ej., dentro de una caja de cartón, y la caja se etiquetará con detalles de la vacuna, p. ej., su nombre comercial, una lista de los antígenos de la vacuna (p. ej., "hepatitis B recombinante", etc.), el recipiente de presentación (p. ej., "Jeringas desechables precargadas Tip-Lok" o "viales monodosis 10 x 0,5 ml"), su dosis (p. ej., "cada uno contiene una dosis de 0,5 ml"), advertencias (p. ej., “Solo para uso en adultos” o “Solo para uso pediátrico”), una fecha de caducidad, una indicación, un número de patente, etc. Cada caja puede contener más de una vacuna envasada, p. ej., cinco o diez vacunas envasadas (en particular para viales).

La vacuna se puede envasar junto (p. ej., en la misma caja) con un prospecto que incluye detalles de la vacuna, p. ej., instrucciones para la administración, detalles de los antígenos dentro de la vacuna, etc. Las instrucciones también pueden contener advertencias, p. ej., tener una solución de adrenalina fácilmente disponible en caso de reacción anafiláctica después de la vacunación, etc.

La vacuna envasada se almacena preferiblemente entre 2ºC y 8ºC. No debe congelarse.

Las vacunas se pueden proporcionar en forma líquida completa (es decir, cuando todos los componentes antigénicos están en solución o suspensión acuosa) después de la fabricación, o se pueden preparar en una forma que la vacuna se pueda preparar extemporáneamente en el momento/punto de uso mezclando dos componentes entre sí. Dichas realizaciones de dos componentes incluyen la mezcla líquido/líquido y la mezcla líquido/sólido, p. ej., mezclando material acuoso con material liofilizado. Por ejemplo, en una realización, se puede preparar una vacuna mezclando: (a) un primer componente que comprende antígenos y/o adyuvantes acuosos; y (b) un segundo

18

imagen14

imagen15

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

una dosis baja de cada uno de un toxoide diftérico, un toxoide tetánico y un toxoide pertussis.

-una vacuna de combinación exenta de aluminio que comprende al menos un adyuvante de emulsión de aceite en agua, un toxoide diftérico, un toxoide tetánico y un toxoide pertussis, para usar en un método para inmunizar a un bebé contra al menos la difteria, tétanos y tos ferina (tos convulsiva) administrando al bebé no más de dos dosis de la vacuna de combinación. La vacuna puede tener una dosis baja de cada uno de un toxoide diftérico, un toxoide tetánico y un toxoide pertussis.

La vacuna de combinación incluye un toxoide pertussis. Este se puede incorporar en la vacuna como una proteína dentro de un antígeno de pertussis celular, pero se prefiere usar un antígeno de pertussis acelular, como se ha descrito con más detalle antes.

En los programas de inmunización descritos en la presente memoria, no se administran más de dos dosis de la vacuna al bebé, es decir, el bebé recibe una sola dosis o dos dosis de la vacuna, pero no recibe tres (o más) dosis. Sin embargo, el bebé puede recibir una tercera (y quizás más) dosis más tarde en su vida, es decir, después de su primer cumpleaños o después de su segundo cumpleaños.

La una o dos dosis se dan preferiblemente al bebé (i) entre 1 y 5 meses de edad, (ii) entre 2 y 4 meses de edad, (iii) entre 3 y 5 meses de edad, (iv) entre 6 y 16 semanas de edad, o (v) entre 0 y 3 meses de edad. Por ejemplo, se pueden administrar dos dosis a los (i) 1 y 2 meses de edad, (ii) 2 y 4 meses de edad, (iii) 3 y 4 meses de edad, (iv) 2 y 3 meses de edad, (v) 0 y 1 mes de edad, etc.

General

El término "que comprende" abarca "que incluye" así como "que consiste", p. ej., una composición "que comprende" X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional, p. ej., X + Y.

La palabra "sustancialmente" no excluye "completamente", p. ej., una composición que está "sustancialmente exenta" de Y puede estar completamente exenta de Y. Cuando sea necesario, la palabra "sustancialmente" puede omitirse de la definición de la invención.

El término "aproximadamente" en relación con un valor numérico x significa, p. ej., x ± 10%.

Salvo que se indique específicamente, un procedimiento que comprende una etapa de mezclar dos o más componentes no requiere ningún orden específico de mezclamiento. Por lo tanto, los componentes se pueden mezclar en cualquier orden. Cuando hay tres componentes, entonces se pueden combinar entre sí dos componentes, y después la combinación se puede combinar con el tercer componente, etc.

Cuando un antígeno se describe como que está "adsorbido" a un adyuvante, se prefiere que al menos 50% (en peso) de ese antígeno esté adsorbido, p. ej., 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% o más. Se prefiere que tanto el toxoide diftérico como el toxoide tetánico estén totalmente adsorbidos, es decir, ninguno es detectable en el líquido sobrenadante. Se puede usar la adsorción total de HBsAg.

Las cantidades de conjugados en general se dan en términos de masa de sacárido (es decir, la dosis del conjugado (transportador + sacárido) como un todo es mayor que la dosis indicada) con el fin de evitar la variación debido a la elección del transportador.

Cuando una composición incluye un adyuvante de sal de aluminio, entonces preferiblemente no incluye también un adyuvante de emulsión de aceite en agua. A la inversa, cuando una composición incluye un adyuvante de emulsión de aceite en agua, entonces preferiblemente no incluye también un adyuvante de sal de aluminio.

Los grupos que contienen fósforo usados con la invención pueden existir en una serie de formas protonadas y desprotonadas dependiendo del pH del entorno circundante, por ejemplo, el pH del disolvente en el que se disuelven. Por lo tanto, aunque se puede ilustrar aquí una forma particular en la presente memoria, se pretende que salvo que se mencione lo contrario, estas ilustraciones sean meramente representativas y no limitantes a una forma protonada o desprotonada específica. Por ejemplo, en el caso de un grupo fosfato, esto se ha ilustrado como -OP(O)(OH)2, pero la definición incluye las formas protonadas -[OP(O)(OH2)(OH)]+ y -[OP(O)(OH2)2]2+ que pueden existir en condiciones ácidas y las formas desprotonadas -[OP(O)(OH)(O)]-y [OP(O)(O)2]2-que pueden existir en condiciones básicas. La invención abarca todas dichas formas.

Los agonistas de TLR pueden existir como sales farmacéuticamente aceptables. Por lo tanto, los compuestos se pueden usar en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, es decir, sal fisiológica o toxicológicamente tolerable (que incluye, cuando sea adecuado, sales de adición de base farmacéuticamente aceptables y sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables).

En el caso de los agonistas de TLR mostrados en la presente memoria que pueden existir en formas tautómeras (es decir, en formas ceto o enol), el compuesto se puede usar en todas las formas tautómeras.

Cuando se administra un compuesto al cuerpo como parte de una composición, entonces ese compuesto puede

21

imagen16

imagen17

Sin adyuvante: Hidróxido de Al MF59 PLG Al-T lnfanrix-6

Vacunas 3-valentes

TD: 750 21626 15693 9430 23395 -

TT: 13120 17868 22458 15917 23131 -

Pertactina: 639 7209 10258 3946 12857 -

TP: 2501 8270 7212 3679 9938 -

HAF: 3982 12057 14098 14139 23008 -

Vacunas 6-valentes

TD: 1751 18914 13982 7658 23102 21581

TT: 12729 16756 22229 13744 23267 15998

Pertactina: 333 6299 9363 2912 5153 10809

PT: 3069 3384 4823 3906 6484 6052

HAF: 4558 7206 16201 15206 19383 11051

Hib: 177 813 1266 654 2153 1269

HBsAg: 1058 1598 2288 1053 4501 1113

Por lo tanto, para todos estos antígenos, la inclusión de un adyuvante aumentaba los títulos de anticuerpos IgG. Los mejores títulos se vieron usando Al-T. Los siguientes mejores eran con MF59, que daba mejores resultados que el hidróxido de aluminio solo. Los títulos obtenidos usando Al-T eran mejores para todos los antígenos que los

5 observados con Infanrix Hexa, excepto para la pertactina.

Además, los datos muestran que los buenos resultados logrados con la vacuna 3-valente se mantienen incluso después de añadir PVI, Hib y HBsAg.

Las respuestas de IgG también se investigaron por subclase. Para la mayoría de los antígenos en las vacunas 6valentes, los adyuvantes tenían poco efecto en los títulos de IgG1, pero aumentaban los títulos de IgG2a e IgG2b.

10 Los mejores títulos de IgG2a e IgG2b se obtuvieron con Al-T y después con MF59.

Los títulos mayores observados con Al-T en comparación con el hidróxido de aluminio solo, o con la mezcla de sales de aluminio observada en Infanrix Hexa, significa que la cantidad total de aluminio por dosis se puede reducir mientras se mantiene la potenciación de la respuesta inmunitaria.

Reducción de dosis de antígeno

15 Los experimentos se diseñaron para investigar si los adyuvantes mejorados se podrían usar para reducir la cantidad de antígeno por dosis. Se hicieron diluciones de 10 veces, 50 veces y 100 veces (con respecto a la dosis humana es decir, para administrar 1 μg, 0,2 μg o 0,1 μg de HBsAg a cada ratón por dosis de 100 μl) de las combinaciones de antígenos 6-valentes mientras se mantenían las concentraciones de adyuvante.

Se midieron la osmolaridad y el pH (y, si era necesario, se ajustaron) después de dilución. Para todas las

20 composiciones 6-valentes, el pH estaba entre 6,1 y 7,0 y la osmolaridad estaba entre 275-320 mOsm/kg. Un control de tampón tenía un pH de 7,3 y 285 mOsm/kg.

Los ratones se inmunizaron de la misma manera que se ha descrito antes. Los títulos totales de IgG sérica después de 2 inmunizaciones eran los siguientes:

Sin adyuvante: Hidróxido de Al MF59 Al-T

1/10: 1/50 1/100 1/10 1/50 1/100 1/10 1/50 1/100 1/10 1/50 1/100

TD: 459 2043 137 18357 13106 7541 17431 6003 8736 21913 16807 13724

TT: 7602 7929 1700 17595 9664 5531 22791 12062 13015 23570 12237 13183

24

imagen18

imagen19

imagen20

imagen21

imagen22

Claims

imagen1

imagen2