ES2233401T3

ES2233401T3 - Induccion de estres farmacologico con agonistas del receptor de la adenosina.

Info

Publication number: ES2233401T3
Application number: ES00941335T
Authority: ES
Inventors: Joel M. Linden; David K. Glover; George A. Beller; Timothy L. Macdonald
Original assignee: University of Virginia UVA; University of Virginia Patent Foundation
Current assignee: UVA Licensing and Ventures Group; University of Virginia UVA
Priority date: 1999-06-18
Filing date: 2000-06-12
Publication date: 2005-06-16
Anticipated expiration: 2020-06-12
Also published as: IL146939A; JP2003502433A; AU5605100A; ATE289317T1; DE60018185T2; NO20015974L; US6322771B1; ZA200200342B; NZ516169A; NO322229B1; PT1194440E; TW585870B; JP4890705B2; EP1194440A2; BR0011725A; WO2000078774A2; NO20015974D0; EP1194440B1; DE60018185D1; CA2375374A1

Abstract

Uso de un compuesto de fórmula (I): en la que (a) cada R es individualmente hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, fenilo o fenilalquilo C1-C3; (b) X es ¿CH2OH, -CO2R2, -OC(O)R2, -CH2OC(O)R2 o C(O)NR3R4; (c) cada uno de R2, R3 y R4 es individualmente hidrógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido con 1-3 alcoxilo C1-6, cicloalquilo C3-C7, alquiltio C1-6, halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C1-6)amino, di(alquil C1-6)amino o arilo C6-10, en donde arilo puede estar sustituido con 1-3 halógeno, alquilo C1-6, hidroxilo, amino, mono(alquil C1-6)amino, o di(alquil C1-6)amino; arilo C6-10; o arilo C6-10 sustituido con 1-3 halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C1- 6)amino, di(alquil C1-6)amino o alquilo C1-6. (d) cada uno de R3 y R4 es individualmente hidrógeno, cicloalquilo C3-7, o cualquiera de los significados de R2, y (e) R1 es (X-(Z)-)n[cicloalquil(C3-C10)]-(Z¿)- en donde Z y Z¿ son individualmente alquilo (C1-C6), opcionalmente interrumpido por 1-3 de S u O no peróxido, o está ausente, y n es 1-3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para detectar la presencia de estenosis de arteria coronaria.

Description

Inducción de estrés farmacológico con agonistas del receptor de la adenosina.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos y composiciones para llevar a cabo obtención de imágenes de estrés farmacológico con ciertos compuestos de alquiniladenosina.

Antecedentes de la invención

La presente invención se realizó con la ayuda de financiación del gobierno de los EE.UU. (NIH Grant ROL HL37942). El gobierno de los EE.UU. tiene ciertos derechos en esta invención.

El estrés farmacológico se está empleando cada vez más como una alternativa a la prueba de esfuerzo en pacientes que están siendo sometidos a obtención de imágenes nucleares o ecocardiográficas para la detección de la enfermedad de la arteria coronaria. Se induce frecuentemente con adenosina o dipiridamol en pacientes en los que se sospecha enfermedad de la arteria coronaria antes de obtener imágenes con marcadores de perfusión radiomarcados tales como ^{201}Tl o ^{99m}Tc-sestamibi, o mediante ecocardiografía. Se predice que en 1999, se estudiarán 1,7 millones de pacientes usando obtención de imágenes de estrés farmacológico solamente en los Estados Unidos. La ventaja de la vasodilatación farmacológica sobre el ejercicio es que el estrés farmacológico da como resultado un nivel repetitivo de aumento del flujo coronario que no es dependiente de la forma física y/o motivación del paciente. La sensibilidad y especificidad para la detención de la enfermedad de la arteria coronaria es alta tanto para la obtención de imágenes de perfusión de estrés con adenosina como con dipiridamol, oscilando entre el 85-90%.

Un inconveniente muy importante de usar estrés con adenosina o dipiridamol es que hay una incidencia inusualmente alta de efectos secundarios adversos con ambos de estos vasodilatadores. En un estudio prospectivo de 9.256 pacientes que se sometieron a gammagrafía de estrés con adenosina, el 82% experimentaron efectos secundarios adversos (M. D. Cequiera et al., J. Am. Coll. Cardiol., 23, 384 (1994)). Los efectos secundarios más comunes fueron sofoco (37%), dolor torácico (35%), respiración entrecortada o disnea (35%), cefalea (14%), variaciones del ECG (electrocardiograma) (9%) y bloqueo de la conducción A-V (8%). Se ha informado de un perfil de efecto secundario similar para dipiridamol. En un estudio de A. Ranhosky et al. (Circulation, 81, 1205 (1990)) con 3.911 pacientes que recibieron dipiridamol, el 19,7% experimentaron dolor torácico, el 12% tuvieron cefaleas y el 8% tuvieron cambios del segmento ST en sus ECG. Además de estos efectos secundarios, un número considerable de pacientes experimentaron una disminución notable en la tensión arterial durante la administración de esos vasodilatadores. En otros 3.715 pacientes que recibieron dipiridamol, la tensión arterial sistólica media cayó en 14 mm Hg, demostrando un 11% de los pacientes > 20% de caída en la tensión arterial sistólica (J. Lette et al., J. Nucl. Cardiol., 2, 3 (1995)).

Aunque la vasodilatación coronaria deseada está mediada por la estimulación del receptor A_{2A} de adenosina por adenosina, la mayoría de los efectos secundarios están producidos por la estimulación de los otros tres subtipos de receptores de adenosina: A_{1}, A_{2B} y A_{3}. Aunque una estrategia de pretratamiento con un antagonista del receptor de adenosina puede reducir algunos efectos secundarios y mejorar la comodidad y la seguridad del paciente, una estrategia más simple sería diseñar un vasodilatador que tenga escasa o ninguna afinidad por los subtipos de receptores A_{1}, A_{2B} o A_{3} de adenosina, pero que esa selectividad estimule parcialmente los receptores A_{2A}. De hecho, ha habido un desarrollo progresivo de compuestos que son cada vez más potentes y/o selectivos como agonistas de los receptores A_{2A} de adenosina (AR), basado en ensayos de unión a radioligando y respuestas fisiológicas. Al principio, se desarrollaron compuestos con poca o ninguna selectividad hacia receptores A_{2A}, tales como la propia adenosina o 5'-carboxamidas de adenosina, tales como 5'-N-etilcarboxamidoadenosina (NECA) (B. N. Cronstein et al., J. Immunol., 135, 1366 (1985)). Posteriormente, se mostró que la adición de sustituyentes de 2-alquilamino aumentaba la potencia y selectividad, por ejemplo, CV1808 y CGS21680 (M. F. Jarvis et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 251, 888 (1989)). Los derivados de adenosina 2-alcoxisustituida tales como WRS-0090 son incluso más potentes y selectivos como agonistas en el receptor A_{2A} de la arteria coronaria (M. Ueeda et al., J. Med. Chem., 34, 1334 (1991)).

Olsson et al. (patente de los EE.UU. número 5.140.015) describen ciertos agonistas del receptor A_{2} de la adenosina de fórmula:

1

en la que C(X)BR_{2} puede ser CH_{2}OH y R_{1} puede ser alquilo o alcoxialquilo. Se describe que los compuestos son útiles como vasodilatadores o antihipertensores.

Linden et al. (patente de los EE.UU. número 5.877.180) se basan en el descubrimiento de que ciertas enfermedades inflamatorias, tales como la artritis y el asma, pueden tratarse eficazmente mediante la administración de compuestos que son agonistas selectivos de los receptores A_{2A} de adenosina, preferiblemente en combinación con un inhibidor de la fosfodiesterasa tipo IV. Una realización de la invención de Linden et al. proporciona un método para tratar enfermedades inflamatorias mediante la administración de una cantidad eficaz de receptor A_{2A} de adenosina de la siguiente fórmula:

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en la que R y X son tal como se describen en la patente.

Mohiuddin et al. (patente de los EE.UU. número 5.070.877) describen el uso del análogo de adenosina relativamente no específico, 2-cloroadenosina (Cl-Ado), como un factor estresante farmacológico. Sin embargo, el análogo Cl-Ado es en realidad un activador más potente de los receptores A_{1} de adenosina que de los receptores A_{2A} de adenosina y, de este modo, es probable que produzcan efectos secundarios debido a la activación de los receptores A_{1} en el músculo cardiaco y de otros tejidos produciendo efectos tales como un "bloqueo auriculoventricular".

G. Cristalli (patente de los EE.UU. número 5.593.975) describe derivados de 2-ariletinilo, 2-cicloalquiletinilo o 2-hidroxialquiletinilo, en los que el residuo de ribósido está sustituido por carboxiamino, o carboxiamino sustituido (R_{3}HNC(O)-). Los derivados de 2-alquinilpurina también se han descrito en Miyasaka et al. (patente de los EE.UU. número 4.956.345), en el que el grupo 2-alquinilo se sustituye con alquilo(C_{3}-C_{16}). Se describe que los compuestos del documento 5.593.975 son vasodilatadores y que inhiben la agregación plaquetaria y, por tanto, son útiles como agentes antiisquémicos, anti-ateroescleróticos y antihipertensores.

R.A. Olsson et al. (patente de los EE.UU número 5.278.150) describen agonistas de los receptores A_{2} de la adenosina selectivos de fórmula:

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en la que Rib es ribosilo, R_{1} puede ser H y R_{2} puede ser cicloalquilo. Se describe que los compuestos son útiles para tratar hipertensión, ateroesclerosis y como vasodilatadores.

Estos derivados de adenosina 2-alquilhidracino, tales como 2-ciclohexil-metilidén-hidrazinoadenosina (WRC-0470), también se han evaluado como agonistas del receptor A_{2A} de la arteria coronaria (K. Niiya et al., J. Med. Chem., 35, 4557 (1992)). La WRC-0470 se ha evaluado adicionalmente en el modelo de perro para uso en la obtención de imágenes de estrés farmacológico con talio. Véase, D.K. Glover et al., Circulation, 94, 1726 (1996).

Manger, P.P. en Med. Chem. Res. (1998), 8(6), 277-290 describe 2-aralquinil y 2-heteroaralquinil-derivados de adenosina -5^{1}-N-N-etiluroamidas como agonistas selectivos del receptor A_{2A} de adenosina. Sus efectos en la agregación plaquetaria se midieron en el documento WO 00/44763, publicado el 3 de agosto de 2000 y reivindicando una fecha de prioridad del 15 de junio de 1999, cae bajo el artículo 54(3) del CPE. Este documento describe los mismos compuestos que la presente solicitud y su uso para tratar respuestas inflamatorias.

De este modo, existe una necesidad continua de agonistas del receptor A_{2} de adenosina útiles para su uso como factores estresantes farmacológicos en la obtención de imágenes de estrés o en otras técnicas de obtfención de imágenes de la función ventricular, que preferiblemente hayan reducido los efectos secundarios a la vez que sean químicamente estables y de acción corta.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a derivados de 2-alquiladenosina, sustituidos en la posición etino por restos cicloalquilo sustituidos. Preferiblemente, el residuo de ribósido está sustituido en la posición 5' ("X") por un resto N-alquil(o N-cicloalquil)aminocarbonilo, de fórmula general (I):

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en la que

(a) cada R es individualmente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo o fenil(C_{1}-C_{3})alquilo;

(b) X es -CH_{2}OH, -CO_{2}R^{2}, -OC(O)R^{2}, -CH_{2}OC(O)R^{2} o C(O)NR^{3}R^{4};

(c) cada uno de R^{2}, R^{3} y R^{4} es individualmente H, alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6}sustituido con 1-3 de alcoxilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, alquiltio C_{1-6}, halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino o arilo C_{6-10}, en la que arilo puede estar sustituido con 1-3 de halógeno, alquilo C_{1-6}, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino o di(alquil C_{1-6})amino; arilo C_{6-10}; o arilo C_{6-10} sustituido con 1-3 de halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino, o alquilo C_{1-6}.

(d) R^{1} es (X-(Z)-)_{n}[cicloalquil(C_{3}-C_{10})]-(Z')- en la que Z y Z' son individualmente alquilo (C_{1}-C_{6}), opcionalmente interrumpido por 1-3 de S u O no peróxido, o está ausente, y n es 1-3.

La presente invención comprende el uso de un compuesto de fórmula (I) para detectar la presencia de anomalías de perfusión miocárdica, tales como las debidas a estenosis de la arteria coronaria en un mamífero, tales como un ser humano o un animal doméstico. Preferiblemente, los compuestos se usan como agentes que inducen estrés farmacológico o factores estresantes, que son útiles en la obtención de imágenes de estrés farmacológico para la detección de estenosis de la arteria coronaria debido a una enfermedad de la arteria coronaria. Los compuestos de fórmula (I) son potentes y selectivos en los receptores A_{2A} de adenosina, pero también son de acción corta, de modo que se eliminan rápidamente por el cuerpo tras el procedimiento de obtención de imágenes.

La presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I para la fabricación de un vasodilatador farmacológico que puede usarse con técnicas de obtención de imágenes de perfusión para detectar estenosis de la arteria coronaria. Aunque la estenosis puede deberse a una enfermedad de la arteria coronaria, es decir, ateroesclerosis, también puede producirse debido a angioplastia, colocación de stent (endoprótesis vascular) o insuficiencia y similares.

Las técnicas preferidas de obtención de imágenes de perfusión son planar o tomografía computerizada por emisión de fotón simple (SPECT), escintigrafía de rayos gamma (gammagrafía), tomografía por emisión de positrones (PET), resonancia magnética nuclear (RMN), ecocardiografía de contraste de perfusión, angiografía por sustracción digital (DSA) y tomografía computerizada de Rayos-X ultrarrápida (CINE CT).

Breve descripción de las figuras

Figura 1: Ensayo de unión competitiva que muestra la potencia relativa de tres agonistas del receptor A_{2A} de la adenosina frente a CGS-21680 en receptores de adenosina humanos recombinantes.

Figura 2: Respuesta de flujo coronario de la arteria circunfleja izquierda (LCX) a diversas dosis de JMR-193 administradas mediante infusión i.v. durante 10 minutos.

Figura 3: Respuesta de la tensión arterial media a diversas dosis de JMR-193 administradas mediante infusión i.v. durante 10 minutos.

Figura 4: Flujo coronario máximo y respuesta de la tensión arterial media a una inyección en bolo de JMR-193 (0,3 \mug/kg).

Figura 5: Semivida farmacodinámica de una inyección en bolo de JMR-193 (0,3 \mug/kg).

Figura 6: Respuestas de flujo coronario de la arteria circunfleja izquierda (LCx) a diversas dosis de DWH-146e administradas mediante inyección en bolo i.v..

Figura 7: Respuesta de la tensión arterial media a diversas dosis de DWH-146e administradas mediante inyección en bolo i.v.

Figura 8: Semivida farmacodinámica de una inyección en bolo de DWH-146e. Obsérvese que la fase meseta seguida de administración en bolo es de suficiente duración como para permitir la inyección de un marcador de obtención de imágenes.

Figura 9: Comparación entre las respuestas de flujo coronario a los 3 min. de la infusión i.v. de adenosina frente a una inyección en bolo de DWH-146e en el mismo perro. Obsérvese que la respuesta de flujo coronario a una inyección en bolo i.v. de DWH-146e es de mayor magnitud y tiene una duración igual o mayor que la infusión normal de adenosina.

Descripción detallada de la invención

Se usan las siguientes definiciones, a no ser que se describa de otra manera. Halógeno es flúor, cloro, bromo o yodo. Alquilo, alcoxilo, aralquilo, alquilarilo, etc. indican tanto los grupos alquilo lineales como los ramificados; pero la referencia a un radical individual tal como "propilo" comprende sólo el radical de cadena lineal, aludiéndose específicamente un isómero de cadena ramificada tal como "isopropilo" . Arilo incluye un radical fenilo o un radical carbocíclico bicíclico orto-condensado que tiene aproximadamente de nueve a diez átomos de anillo en el que al menos un anillo es aromático. Heteroarilo engloba un radical unido mediante un carbono del anillo de un anillo aromático monocíclico que contiene cinco o seis átomos de anillo que consisten en carbono y de uno a cuatro heteroátomos seleccionados cada uno del grupo que consiste en oxígeno no peróxido, azufre y N(X) en el que X está ausente o es H, O, alquilo (C_{1}-C_{4}), fenilo o bencilo, así como un radical de un heterociclo bicíclico orto-condensado de aproximadamente de ocho a diez átomos de anillo derivados del mismo, particularmente un benzo-derivado o uno derivado mediante condensación de un dirradical de propileno, trimetileno o tetrametileno de él.

Los expertos en la técnica apreciarán que los compuestos de fórmula (I) tengan más de un centro quiral y que puedan aislarse en formas racémicas y ópticamente activas. Preferiblemente, el resto de ribósido de fórmula (I) se deriva de la D-ribosa, es decir, los grupos 3',4'-hidroxilo son alfa al anillo de azúcar y los grupos 2' y 5' son beta (3R, 4S, 2R, 5S). Cuando los dos grupos en el grupo ciclohexilo están en la posición 4, son preferiblemente trans. Algunos compuestos pueden presentar polimorfismo. Debe entenderse que la presente invención engloba cualquier forma racémica, ópticamente activa, polimórfica o estereoisomérica, o mezclas de las mismas, de un compuesto de la invención que posee las propiedades útiles descritas en el presente documento, siendo bien conocido en la técnica cómo preparar formas ópticamente activas (por ejemplo, mediante resolución de la forma racémica mediante técnicas de recristalización, o técnicas enzimáticas, mediante síntesis de materiales de partida ópticamente activos, mediante síntesis quiral o mediante separación cromatográfica usando una fase estacionaria quiral) y cómo determinar la actividad de los agonistas de adenosina usando las pruebas descritas en el presente documento, o usando otras pruebas similares que son bien conocidas en la técnica.

Los valores preferidos y específicos que se enumeran a continuación para radicales, sustituyentes e intervalos son sólo a modo de ejemplo; no excluyen otros valores definidos u otros valores dentro de los intervalos definidos para los radicales y los sustituyentes.

Específicamente, alquilo (C_{1}-C_{6}) puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, pentilo, 3-pentilo o hexilo. Tal como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo" engloba (cicloalquil)alquilo, así como también bicicloalquilo y tricicloalquilo. De este modo, cicloalquilo (C_{3}-C_{6}) puede ser ciclopropilo, norbonilo, adamantilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; cicloalquil(C_{3}-C_{6})-alquilo(C_{1-}C_{6}) puede ser cicloropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo; 2-ciclopropiletilo, 2-ciclobutiletilo, 2-ciclopentiletilo o 2-ciclohexiletilo; alcoxilo(C_{1}-C_{6}) puede ser metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, butoxilo, isobutoxilo, sec-butoxilo, pentoxilo, 3-pentoxilo o hexiloxilo; alquenilo (C_{2}-C_{6}) puede ser vinilo, alilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 4-pentenilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexenilo o 5-hexenilo; alquinilo (C_{2}-C_{6}) puede ser etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, 3-butinilo, 1-pentinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 1-hexinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo o 5-hexinilo; alcanoilo (C_{1}-C_{6}) puede ser acetilo, propanoilo o butanoilo; haloalquilo(C_{1}-C_{6}) puede ser yodometilo, bromometilo, clorometilo, fluorometilo, trifluorometilo, 2-cloroetilo, 2-fluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo o pentafluoroetilo; hidroxialquilo(C_{1}-C_{6}) puede ser hidroximetilo, 3-hidroxietilo, 2-hidroxietilo, 1-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 1-hidroxibutilo, 4-hidroxibutilo, 1-hidroxipentilo, 5-hidroxipentilo, 1-hidroxihexilo o 6-hidroxihexilo; alcoxicarbonil(C_{1}-C_{6}) (CO_{2}R^{2}) puede ser metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, pentoxicarbonilo o hexiloxicarbonilo; alquiltio(C_{1}-C_{6}) puede ser metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, butiltio, isobutiltio, pentiltio o hexiltio; alcanoiloxilo(C_{2}-C_{6}) puede ser acetoxilo, propanoiloxilo, butanoiloxilo, isobutanoiloxilo, pentanoiloxilo o hexanoiloxilo; arilo puede ser fenilo, indenilo o naftilo; y heteroarilo puede ser furilo, imidazolilo, triazolilo, triazinilo, oxazoilo, isoxazoilo, tiazolilo, isotiazoilo, piraxolilo, pirrolilo, pirazinilo, tetrazolilo, puridilo (o su N-óxido), tientilo, pirimidinilo (o su N-óxido), indolilo, isoquinolilo (o su N-óxido) o quinolilo (o su N-óxido).

Un valor específico para R es amino, monometilamino o ciclopropilamino.

Un valor específico para R^{1} es carboxilo o alcoxicarbonilciclohexil(C_{1}-C_{4})-alquilo(C_{1}-C_{4}).

Un valor específico para R^{2} es H o alquilo(C_{1}-C_{4}), es decir, metilo o etilo.

Un valor específico para R^{3} es H, metilo o fenilo.

Un valor específico para R^{4} es H, metilo o fenilo.

Un valor específico para Z es -CH_{2}- o -CH_{2}-CH_{2}-.

Un valor específico para X es CO_{2}R^{2}, alcanoiloximetilo (C_{2}-C_{5}) o amido.

Un valor específico para n es 1.

Los compuestos preferidos de fórmula (I) son aquellos en los que cada R es H, X es etilaminocarbonilo y R^{3} es 4-carboxiciclohexilmetilo (DWH-146a), R^{1} es 4-metoxicarbonilciclohexilmetilo (DWH-146e) o R^{1} es 4-acetoximetilciclohexilmetilo (JMR-193). A continuación se representan (DWH-146 (ácido)) y éster de metilo (e)) y JMR-193.

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La síntesis de 4[3-(6-amino-9(5-[(etilamina)carbonil]-3,4-dihidroxitetrahidro-Z-furanil-9H-2-purinil)-2-propinil]-1-ciclohexanocarboxilato de metilo (DWH 146e) se llevó a cabo mediante el acoplamiento cruzado de un derivado de yodo-adenosina (N-etil-1'-desoxi-1'-(amino-2-yodo-9H-purin-9-il)-\beta-D-ribofuranuoramida) con 4-(2-propinil)-1-ciclohexanocarboxilato de metilo mediante la utilización de un catalizador de Pd^{11}. La síntesis del derivado de yodo-adenosina se llevó a cabo a partir de guanosina. En primer lugar, la guanosina se trató con anhídrido acético, que acetiza los hidroxilos del azúcar, seguido por la cloración de la posición 6 con cloruro de tetrametilamonio y oxicloruro de fósforo. La yodación de la posición 2 se llevó a cabo mediante una reacción de Sandmeyer modificada, seguida por la sustitución del Cl 6 y de los acetatos de azúcar con amoniaco. Los hidroxilos en 2' y 3' se protegieron como el acetónido y el hidroxilo en 5' se yodó a ácido con permanganato potásico. La desprotección de los acetónidos en 2' y 3', la esterificación de Fischer del ácido en 5' con etanol y la conversión del éster de etilo resultante en la amida de etilo con etilamina dio N-etil-1'-desoxi-1'-(amino-2-yodo-9H-purin-9-il)-\beta-D-ribofuranuoramida.

El acetileno (4-(2-propinil)-1-ciclohexanocarboxilato de metilo) se sintetizó partiendo de trans-1,4-ciclohexanodimetanol. Inicialmente, el trans-diol se monotosiló seguido por sustitución del tosilato con un anión de acetileno. El hidroxilo de las especies resultantes de acetileno de hidroxilo se oxidó al ácido mediante el reactivo de Jones seguido por metilación con (trimetilsilil)diazometano para dar 4-(2-propinil)-1-ciclohexanocarboxilato de metilo.

La reacción de acoplamiento cruzado se llevó a cabo a las siguientes condiciones, previamente notificadas. A una disolución de N,N-dimetilformamida (0,5 mL), acetonitrilo (1 mL), trietilamina (0,25 mL) y N-etil-1'-desoxi-1'-(amino-2-yodo-9H-purin-9-il)-\beta-D-ribofuranuroamida (25 mg, 0,06 mmol) se añadió dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (1 mg, 2% molar) y yoduro de cobre (I) (0,06 mg, 0,5% molar). A la mezcla resultante se añadió 4-(2-propinil)-1-ciclohexanocarboxilato de metilo (54 mg, 0,3 mmol) y la reacción se agitó bajo atmósfera de N_{2} durante 16 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y el residuo resultante se trató mediante cromatografía ultrarrápida en 20% de metanol en cloroformo (R_{f}= 0,45) para dar 19 mg (sólido blanquecino, punto de fusión (p.f.) 125ºC (descompuesto)) de 4[3-(6-amino-9(5-[(etilamina)carbonil]-3,4-dihidroxitetrahidro-Z-furanil)-9H-2-purinil)-2-propinil]-1-ciclohexanocarboxilato de metilo (DWH-146e).

Otros compuestos de fórmula (I) pueden prepararse mediante las metodologías descritas en las patentes de los EE.UU. números 5.278.150, 5.140.015, 5.877.180, 5.593.975 y 4.956.345.

Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son sales de adición de ácidos orgánicos formadas con ácidos que forman un anión fisiológicamente aceptable, por ejemplo, tosilato, metanosulfonato, malato, acetato, citrato, malonato, tartrato, succinato, benzoato, ascorbato, \alpha-cetoglutarato y \alpha-glicerofosfato. También pueden formarse sales inorgánicas adecuadas que incluyen clorhidrato, sulfato, nitrato, bicarbonato y sales de carbonato.

Las sales farmacéuticamente aceptables puede obtenerse usando procedimientos normalizados bien conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante reacción de un compuesto suficientemente básico tal como una amina con un ácido adecuado que permita un anión fisiológicamente aceptable. Las sales de los metales alcalinos (por ejemplo, sodio, potasio o litio) o de los metales alcalinotérreos (por ejemplo calcio) también pueden obtenerse.

Los compuestos de fórmula I pueden formularse como composiciones farmacéuticas y administrarse a un huésped mamífero, tal como un paciente humano, en una variedad de formas adaptadas a la vía elegida de administración, es decir, vía oral o, preferiblemente, vía parenteral, intravenosa, intramuscular, tópica o subcutánea.

El principio activo también puede administrarse vía intravenosa o intraperitoneal mediante infusión o inyección. Las disoluciones del principio activo o sus sales pueden prepararse en agua, opcionalmente mezcladas con un tensioactivo no tóxico. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles líquidos, triacetina y mezclas de los mismos y en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos.

Las formas farmacéuticas adecuadas para la inyección o infusión pueden incluir disoluciones acuosas estériles o dispersiones o polvos estériles que comprenden el principio activo que se adaptan para la preparación improvisada de disoluciones o dispersiones, inyectables o de infusión, estériles, opcionalmente encapsuladas en liposomas. En todos los casos, la forma farmacéutica final debe ser estéril, fluida y estable a las condiciones de fabricación y almacenamiento. El excipiente o vehículo líquido puede ser un disolvente o un medio de dispersión líquida que comprende, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos y similares), aceites vegetales, ésteres de glicerilo no tóxicos y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante la formación de liposomas, mediante el mantenimiento de un tamaño de partícula adecuado en el caso de dispersiones o mediante el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos puede lograrse mediante varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, se preferirá incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, tampones o cloruro de sodio. Una prolongada absorción de las composiciones inyectables puede lograse por el uso en las composiciones de agentes retardantes de la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las disoluciones inyectables estériles se preparan mediante incorporación del principio activo en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los otros componentes enumerados anteriormente, según se necesite, seguido por esterilización en filtro. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos de preparación preferidos son las técnicas de secado a vacío y liofilización que dan un polvo del principio activo más cualquier componente adicional deseado presente en las disoluciones previamente estériles filtradas.

Las dosificaciones útiles de los compuestos de la fórmula I pueden determinarse mediante comparación de su actividad in vitro y la actividad in vivo en modelos de animales. Los métodos para la extrapolación de las dosificaciones eficaces en ratones, y otros animales, a humanos se conocen en la técnica; por ejemplo, véase la patente de los EE.UU. número 4.938.949.

Los presentes compuestos y composiciones que las contienen se administran como factores estresantes farmacológicos y se usan conjuntamente con cualquiera de varios procedimientos de diagnóstico no invasivo para medir aspectos de perfusión miocárdica. Por ejemplo, la adenosina intravenosa puede usarse conjuntamente con la obtención de imágenes de perfusión miocárdica con talio-201 para evaluar la gravedad de la isquemia miocárdica. En este caso, cualquiera de los diversos radiofármacos diferentes puede sustituirse por talio-201, tales como aquellos agentes que comprenden Tc-99m, yodo-123, nitrógeno-13, rubidio-82 y oxígeno 13. Tales agentes incluyen radiofármacos marcados con tecnecio 99m, es decir, tecnecio 99m-sestamibi, tecnecio 99m-teboroxima; tetrofosmina y NOET; y radiofármacos marcados con yodo 123 tales como I-123-IPPA o BMIPP. Asimismo, uno de los presentes compuestos puede administrarse como un factor estresante farmacológico conjuntamente con ventriculogrammagrafía para evaluar la gravedad de la disfunción contráctil de miocardio. En este caso, los estudios de ventriculogammagrafía pueden ser estudios de equilibrio de entrada o primer paso del ventrículo derecho y/o izquierdo. Asimismo, un compuesto de fórmula (I) puede administrase como un factor estresante farmacológico conjuntamente con ecocardiografía para evaluar la presencia de anomalías regionales en el movimiento de la pared. Asimismo, el principio activo puede administrase como un factor estresante farmacológico conjuntamente con medidas invasivas del flujo de sangre coronaria tales como mediante catéter intracardíaco para evaluar la relevancia funcional de los vasos coronarios
estenóticos.

Normalmente el método supone la administración de uno o más compuestos de fórmula (I) mediante infusión intravenosa en dosis que son eficaces para proporcionar la dilatación de la arteria coronaria (aproximadamente de 0,25-500, preferiblemente de 1-250 mcg/kg/min). Sin embargo, su uso en la práctica invasiva puede suponer la administración intracoronaria del fármaco en dosis en bolo de 0,5-50 mcg.

Los métodos preferidos comprenden el uso de un compuesto de fórmula (I) como un sustituto del ejercicio conjuntamente con la obtención de imágenes de perfusión miocárdica para detectar la presencia y/o evaluar la gravedad de la enfermedad de las arterias coronarias en humanos en los que la obtención de imágenes de perfusión miocárdica se lleva a cabo mediante una cualquiera de varias técnicas que incluyen obtención de imágenes de perfusión miocárdica con radiofármacos usando escintigrafía planar o tomografía computerizada por emisión de fotón simple (SPECT), tomografía por emisión de positrones (PET), resonancia magnética nuclear (RMN), ecocardiografía de contraste de perfusión, angiografía por sustracción digital (DSA) y tomografía computerizada de rayos-X ultrarrápida (CINE
CT).

También se proporciona un método que comprende el uso de un compuesto de fórmula (I) como un sustituto al ejercicio conjuntamente con la obtención de imágenes para detectar la presencia y/o evaluar la gravedad de la disfunción ventricular isquémica en humanos en los que la disfunción ventricular isquémica se mide mediante una cualquiera de las varias técnicas de obtención de imágenes que incluyen ecocardiografía, ventriculografía de contraste o ventriculogammagrafía.

También se proporciona un método que comprende el uso de un compuesto de fórmula (I) como un agente hiperémico coronario conjuntamente con medios para medir la velocidad de flujo de la sangre coronaria para evaluar la capacidad vasodilatadora (capacidad de reserva) de las arterias coronarias en humanos en los que la velocidad de flujo de la sangre coronaria se mide mediante una cualquiera de las varias técnicas que incluyen catéter de flujo Doppler o angiografía por sustracción digital.

La invención se describirá adicionalmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos detallados que se facilitan para ilustración de la invención, y que no pretenden ser limitantes de la misma.

Ejemplo 1 Trans-(1-[4-hidroximetil)ciclohexil]metil)-4-metilbencenosulfonato (5.2)

Se añadió hidruro de sodio (1,68 g, 70 mmol) a una disolución de 10 g (70 mmol) ([4-hidroximetil)ciclohexil]metano-1-ol (5.1) en 700 mL de tetrahidrofurano y se agitó durante 1 hora. Entonces se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (13,3 g, 70 mmol) y la mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 5 horas. Entonces se enfrió la reacción a 0ºC y se extinguió lentamente con agua hasta que no había más hidruro reactivo. Una vez que el hidruro se extinguió, la mezcla de reacción se diluyó con éter (700 mL) y se extrajo dos veces con un carbonato potásico acuoso al 10% (700 mL). Las fases orgánicas se secaron usando sulfato de sodio y el disolvente se eliminó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con acetona-diclorometano (5:95) para dar 5.2 (35%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,75 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,32 (d, J=8,1 Hz, 2H), 3,79 (d, J=6,35 Hz, 2H), 3,39 (d, J=6,35 Hz, 2H), 2,42 (s, 3H), 1,75 (m, 4H), 1,59 (m, 1H), 1,37 (m, 1H), 0,9 (m, 4H). ^{13}C RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 145,3, 133,4, 130,3, 130,3, 128,3, 128,3, 75,8, 68,5, 40,6, 37,8, 28,9, 28,9, 28,9,
22,1.

Ejemplo 2 (4-prop-2-inilciclohexil)metano-1-ol (5.3)

Un complejo de etilendiamina-acetiluro de litio (90%) (6,4 g, 70 mmol) se añadió muy lentamente a una disolución de 5.2 (3 g, 10 mmol) en 40 mL de dimetilsulfóxido. Se permitió que la mezcla de reacción se agitara durante 5 días y entonces se extinguió lentamente a 0ºC con agua. La mezcla se diluyó con éter (300 mL) y se extrajo 3 veces con cloruro de amonio acuoso saturado (200 mL). Las fases orgánicas se secaron con sulfato de sodio. El disolvente se eliminó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con acetato de etilo-hexanos (20:80) para dar 5.3 (85%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,41 (d, J=6,5 Hz, 2H), 2,07 (dd, J=2,5, 6,5 Hz, 2H), 1,96-1,75 (m, 5H), 1,41 (m, 2H), 0,095 (m, 4). ^{13}C RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 83,8, 69,6, 68,9, 40,7, 37,7, 32,3, 32,3, 29,6, 29,6, 26,5.

Ejemplo 3 Ácido 4-prop-2-inilciclohexanocarboxílico (5.4)

Una disolución de trióxido de cromo (1,1 g, 11 mmol) en ácido sulfúrico 1,5 M (40 mL, 27 mmol) se mantuvo a 0ºC mientras que se añadió 5.3 (0,46 g, 3 mmol) en 80 mL de acetona durante 2 horas. La reacción se agitó entonces durante 2 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con éter (200 mL) y se extrajo 2 veces con agua. Las fases orgánicas se secaron con sulfato de sodio. El disolvente se eliminó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con acetona-diclorometano (70:30) para dar 5.4 (75%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,24 (dt, J=3,66, 12,1 Hz, 1H), 2,10 (dd, J=2,7, 6,5 Hz, 2H), 2,04-1,89 (m, 5H), 1,76 (d, J=2,3 Hz, 1H), 1,43 (dq, J= 3,28, 13,1 Hz, 2H), 1,03 (dq, J= 3,28, 13,1 Hz, 2H). ^{13}C RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 183,2, 83,3, 69,9, 43,4, 36,7, 31,8, 28,9, 26,3.

Ejemplo 4 4-prop-2-inilciclohexanocarboxilato de metilo (5.5)

Se añadió una disolución de (trimetilsilil)diazometano (2,0 M) en hexanos (1 mL, 2 mmol) a una disolución de 5.4 (0,34 g, 2 mmol) en 15 mL de metanol:diclorometano (3:7). Los disolventes se eliminaron a presión reducida dando como resultado una conversión del 100% de los materiales de partida a producto. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,24 (dt, J=3,66, 12,1 Hz, 1H), 2,10 (dd, J=2,7, 6,5 Hz, 2H), 2,06 (dd, J=1,54, 6,54 Hz, 1H), 2,00-1,89 (m, 3H), 1,76 (d, J=2,3 Hz, 1H), 1,43 (dq, J= 3,28, 13,1 Hz, 2H), 1,03 (dq, J= 3,28, 13,1 Hz, 2H). ^{13}C RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 176,8, 83,3, 69,8, 51,9, 43,4, 36,7, 31,9, 29,2, 26,3.

Ejemplo 5 Acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(2-amino-6-oxohidropurin-9-il)oxolano-2-il]metilo(6.2)

Una suspensión de 113 g (0,4 mol) de guanosina anhidra (6.1), anhídrido acético (240 mL, 2,5 mol), piridina anhidra (120 mL) y DMF anhidro (320 mL) se calentó durante 3,75 horas a 75ºC sin permitir que la temperatura excediera los 80ºC. La disolución transparente se transfirió entonces a un matraz Erlenmyer de 3 L y se enrasó con 2-propanol. Con el enfriamiento de la disolución a temperatura ambiente se inició la cristalización y se dejó que avanzara a 4ºC durante la noche. El filtrado sólido de color blanco se filtró, se lavó con 2-propanol y se recristalizó a partir de 2-propanol para dar 6.2 (96%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,20 (s,1H, H-8), 6,17 (d, J=5,41 Hz, 1H, H-1') 5,75 (t, J= 5,39 Hz, 1H, H-2'), 5,56 (t, J= 5,0, H-3'), 4,41 (m, 3H, H-4', 5'), 2,14 (s, 3H, Ac), 2,11 (s, 3H, Ac), 2,10 (s, 3H, Ac). ^{13}C RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 171,0, 170,3, 170,2, 157,7, 154,8, 152,4, 136,7, 117,7, 85,5, 80,4, 73,0, 71,3, 64,0, 31,3, 21,2, 21,0.

Ejemplo 6 Acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(2-amino-6-cloropurin-9-il)oxolano-2-il]metilo (6.3)

A un matraz de 100 mL se añadieron 80 g (0,195 mol) de acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(2-amino-6-oxohidropurina-9-il)oxolan-2-il]metilo (6.2), cloruro de tetrametilamonio (44 g, 0,4 mol), acetonitrilo anhidro (400 mL) y N,N-dimetilanilina (25 mL). El matraz se colocó en un baño de hielo-sal y se enfrió a 2ºC. A esta disolución se añadió, gota a gota, POCl_{3} (107 mL, 1,15 mol) a una velocidad que mantuvo la temperatura por debajo de los 5ºC (45 minutos). Entonces el matraz se sacó del baño de hielo, se equipó con un condensador, se colocó en un baño de aceite y se dejó a reflujo durante 10 minutos mientras que la disolución cambiaba a un color rojo/marrón. Entonces se eliminó el disolvente a presión reducida para obtener un residuo aceitoso que se trasladó a un vaso de precipitados que contenía 1000 g de hielo y 400 mL de CHCl_{3} y se dejó agitar durante 1,5 horas para descomponer cualquier POCl_{3} residual. Entonces se eliminó la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con 3\times 50 mL de CHCl_{3} y se reunió con la fase orgánica. Entonces la fase orgánica reunida se volvió a extraer con 50 mL de agua seguido por agitación con 200 mL de NaHCO_{3} saturado. La fase orgánica se extrajo adicionalmente con NaHCO_{3} hasta que el extracto acuoso era neutro (2\times). La fase orgánica se extrajo finalmente con salmuera y a continuación se secó sobre MgSO_{4} durante 16 horas. A la disolución se añadieron 800 mL de 2-propanol después de los cuales se concentró la disolución a presión reducida. Al sólido aceitoso se añadieron 200 mL de 2-propanol y la disolución se refrigeró durante la noche. El producto cristalino se filtró, se lavó y se dejó secar durante la noche para dar 6.3 (77%). ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,31 (s,1H, H-8), 7,00 (s,2H, NH_{2}), 6,06 (d, J=5,8 Hz, 1H, H-1') 5,83 (t, J=6,16 Hz, 1H, H-2'), 5,67 (m, 1H, H-3'), 4,29 (m, 3H, H-4', 5'), 2,07 (s, 3H, Ac), 1,99(s, 3H, Ac), 1,98(s, 3H, Ac). ^{13}C RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 171,0, 170,4, 170,2, 160,8, 154,6, 150,8, 142,2, 124,5, 85,8, 80,6, 72,8, 71,2, 63,9, 21,4, 21,3, 21,1.

Ejemplo 7 Acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(6-cloro-2-yodopurin-9-il)oxolano-2-il]metilo (6.4)

Se añadió nitrito de isoamilo (5 mL, 37 mmol) a una mezcla de 5,12 g (12 mmol) de acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(2-amino-6-cloropurin-9-il)oxolano-2-il]metilo (6.3), I_{2} (3,04 g, 12 mmol), CH_{2}I_{2} (10 mL, 124 mmol) y CuI (2,4 g, 12,6 mmol) en THF (60 mL). La mezcla se calentó a reflujo durante 45 minutos y entonces se dejó enfriar a temperatura ambiente. A esta disolución se añadieron 100 mL de Na_{2}S_{2}O_{3} sat. que eliminó el color rojizo debido al yodo. La fase acuosa se extrajo 3\times con cloroformo, que se reunió, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a presión reducida. Entonces se purificó el producto en una columna de gel de sílice usando CHCl_{3}-MeOH (98:2) para recoger acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(6-cloro-2-yodopurin-9-il)oxolano-2-il]metilo (6.4) (el 80% cristalizó a partir de EtOH). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,20 (s,1H, H-8), 6,17 (d, J= 5,41 Hz, 1H, H-1'), 5,75 (t, J=5,39 Hz, 1H, H-2'), 5,56 (t, J=5,40 Hz, 1H, H-3'), 4,38 (m, 3H, H-4', 5'), 2,14 (s, 1H, Ac), 2,11(s, 1H, Ac), 2,10(s, 1H, Ac).

Ejemplo 8 (4R,2R,3R,5R)-2-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol (6.5)

A un matraz que contenía 6,0 g (11,1 mmol) de acetato de [(2R,3R,4R,5R)-3,4-diacetiloxi-5-(6-cloro-2-yodopurin-9-il)oxolano-2-il]metilo (6.4) se añadieron 100 mL de NH_{3} líquido a -78ºC y la disolución se dejó agitar durante 6 horas. Después de ese tiempo, se dejó que alcanzara la t.a. durante la noche con evaporación simultánea del NH_{3} para obtener un aceite de color marrón. El producto se cristalizó a partir de isopropanol caliente para dar 6.5 (80%), p.f. de 143-145ºC, Rf = 0,6 en MeOH/CHCl_{3} al 20%. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,24 (s,1H), 7,68 (s,2H), 5,75 (d, J=6,16, 1H), 5,42 (d, J=5,40 Hz, 1H,), 5,16 (d, J=4,62 Hz, 1H), 4,99 (t, J=5,39 Hz, 1H), 4,67 (d, J=4,81 Hz, 1H), 4,06 (d, J=3,37 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,54 (m, 2H).

Ejemplo 9 [(1R,2R,4R,5R)-4-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-7-7-dimetil-3,6,8-trioxabiciclo[3.3.0]oct-2-il]metano-1-ol (6.6)

A una disolución de 2,0 g (5,08 mmol) de (4R,2R,3R,5R)-2-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol (6.6) en 100 mL de acetona se añadieron 9,6 g de ácido p-toluenosulfónico y 5 mL de dimetoxipropano. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora momento en el que 15 g de NaHCO_{3} y entonces se agitó durante 3 horas adicionales. El residuo se filtró y se lavó 2X con EtOAc. Entonces se concentró el filtrado a presión reducida. El residuo se llevó a cromatografía en una columna de gel de sílice con MeOH-CHCl_{3} (1:99) para dar 6.6 (72%) como un sólido, p.f. 185-187ºC. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,22 (s, 1H, H-8), 7,69 (s, 2H, NH_{2}), 6,00 (d, J=2,70, 1H, H-1'), 5,21 (m, 1H, H-2'), 5,07 (bs, 1H, OH), 4,88 (m, 1H, H-3'), 4,13 ((m, 1H, H-4'), 3,47 (m, 2H, H-5'),1,49 y 1,28 (s, 3H, C(CH_{3})_{2}).

Ejemplo 10 Ácido (2R,1R,4R,5R)-4-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-7,7-dimetil-3,6,8-trioxabiciclo[3.3.0]octano-2-carboxílico (6.7)

A una disolución agitada de 1,6 g (3,7 mmol) de [(1R,2R,4R,5R)-4-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-7-7-dimetil-3,6,8-trioxabiciclo[3.3.0]oct-2-il]metano-1-ol (6.6) en 200 mL de H_{2}O se añadieron 0,60 g de KOH y, gota a gota, una disolución de 1,70 g (10,8 mL) de KMnO_{4} en 50 mL de H_{2}O. La mezcla se apartó a temperatura ambiente en la oscuridad durante 225 horas. Entonces se enfrió la mezcla de reacción a 5-10ºC y se decoloró mediante una disolución de 4 mL al 30% de H_{2}O_{2} en 16 mL de agua, mientras que la temperatura se mantenía por debajo de los 10ºC usando un baño de hielo-sal. La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida hasta aproximadamente 10 mL y entonces se acidificó hasta un pH 4 con HCl 2 N. El precipitado resultante se eliminó por filtración y se lavó con éter dando, después de secado, 6.7 (70%) como un sólido de color blanco, p.f. 187-190ºC. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,11 (s, 1H, H-8), 7,62 (s, 2H, NH_{2}), 7,46 (s, 1H, COOH), 6,22 (s, 1H, H-1'), 5,42 (d, J=5,71 Hz, 1H, H-2'), 5,34 (d, J=6,16 Hz, 1H, H-3'), 4,63 (s, 1H, H-4'), 1,46 y 1,30 (s, 3H, C(CH_{3})_{2}).

Ejemplo 11 Ácido (2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-3,4-dihidroxioxolano-2-carboxílico (6.8)

Se agitó una disolución de 1,72 g (3,85 mmol) de ácido (2R,1R,4R,5R)-4-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-7,7-dimetil-3,6,8-trioxabiciclo[3.3.0]octano-2-carboxílico (6.7) en 80 mL de HCOOH al 50% a 80ºC durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida, se disolvió en H_{2}O y la disolución se evaporó de nuevo. Este procedimiento se repitió hasta que no había olor de ácido fórmico en el residuo. La recristalización a partir de agua dio 1,33 g (85%) de 6.8 como un sólido blanco, p.f. 221-223ºC, desc.

^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,31 (s, 1H, H-8), 7,68 (s, 2H, NH_{2}), 5,90 (d, J=6,55 Hz, 1H, H-1'), 4,42 (m, 1H, H-2'), 4,35 (d, J=2,31 Hz, 1H, H-4'), 4,22 (m, 1H, H-3').

Ejemplo 12 [(2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-3,4-dihidroxioxolano-2-il]-N-etilcarboxamida (6.9)

A una disolución enfriada (5ºC) y agitada de 1,29 g (3,17 mmol) de ácido (2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-3,4-dihidroxioxolano-2-carboxílico (6.8) en 150 mL de etanol absoluto se añadió, gota a gota, 1,15 mL de SOCl_{2} enfriado en hielo. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y entonces se llevó hasta un pH 8 con NaHCO_{3} acuoso saturado. La mezcla se filtró, y entonces el filtrado se concentró a presión reducida para dar un sólido blanco que se secó y a continuación se volvió a disolver en 20 mL de etilamina anhidra a -20ºC durante 3 horas y entonces a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con etanol absoluto y el producto precipitado se eliminó por filtración y se lavó con éter anhidro para dar 530 mg (72%) de 6.9 como un sólido puro, p.f. 232-234ºC. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,34 (s, 1H, H-8), 8,12 (t, 1H, NH), 7,73 (s, 2H, NH2), 5,85 (d, J=6,93 Hz, 1H, H-1'), 4,54 (m, 1H, H-2'), 4,25 (d, J=1,92 Hz, 1H, H-4'), 4,13 (m, 1H, H-3'), 3,28 (m, 2H, CH_{2}CH_{3}), 1,00 (t, J=7.2 Hz, 3H, CH_{2}CH_{3}).

Ejemplo 13 Metil-4-(3-{9-[(4S,5S,2R,3R)-5-(N-etilcarbamoil)-3,4-dihidroxioxolano-2-il]-6-aminopurin-2-il)}prop-2-inil)ciclohexanocarboxilato (DWH-146e)

A una disolución desgasificada de 25 mg (0,063 mmol) de [(2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-3,4-dihidroxioxolano-2-il]-N-etilcarboxamida (6.9), 16,9 mg (0,094 mmol) de (5.5) y 0,75 mg de CuI en 5 mL de cada uno de TEA y acetonitrilo se añadieron 15 mg de Pd(PPh_{3})_{4}. La disolución se agitó durante 24 horas a 70ºC, tiempo tras el cual la disolución se filtró a través de Celite y se llevó a cromatografía en columna de gel de sílice con MeOH-CHCl_{3} (5:95) para dar DWH-146e (24%).

Ejemplo 14 Acetato de (4-prop-2-inilciclohexil)metilo (5.6)

Se añadieron anhídrido acético (0,92 mL, 8,25 mmol) y piridina (0,2 mL, 2,5 mmol) a una disolución de 5.3 (250 mg, 1,65 mmol) en 25 mL de éter. Se permitió que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante 24 horas. Se añadió agua a la reacción y la fase orgánica se extrajo adicionalmente con NaHCO_{3} al 10%. La capa orgánica se secó con MgSO_{4} y se evaporó. El residuo se llevo a cromatografía en gel de sílice con EtOAc-hexanos (5:95) para dar 5.6 (47%).

Ejemplo 15 Acetato de [4-(3-{9-[4S,5R,2R,3R)-5-(N-etilcarbamoil)-3,4-dihidroxioxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}prop-2-inil) ciclohexil]metilo (JMR193)

A una disolución desgasificada de 125 mg (0,29 mmol) de [(2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-2-yodopurin-9-il)-3,4-dihidroxioxolano-2-il]-N-etilcarboxamida (6.9), 150 mg (0,77 mmol) de (5.6) y 1,0 mg de CuI en 1,3 mL de TEA y 4 mL de DMF se añadieron 25 mg de Pd(PPh_{3})_{4}. La disolución se agitó durante 72 horas a 60ºC, tiempo tras el cual la disolución se filtró a través de Celite y se llevó a cromatografía en columna de gel de sílice con MeOH-CHCl_{3} (5:95) para dar JMR193 (10%).

Ejemplo 16 Estudios de unión de radioligandos

Se evaluó la unión a receptores A_{2A} con el radioligando ^{125}I-ZM241385. La figura 1 representa la competencia de los agonistas selectivos para unirse a un receptor A_{2A} de adenosina humano recombinante. El DWH-146e es sumamente selectivo para el subtipo A_{2A}(hA2A) recombinante humano. La selectividad por el receptor A_{3} (no mostrado) es menos impresionante, pero todavía es de aproximadamente 50 veces. DWH-146e es aproximadamente 5 y 10 veces más potente que WRC0470 y CGS21680, respectivamente (figura 1). Un interesante e inesperado descubrimiento es que el éster, DWH-146e también es aproximadamente 50 veces más potente que el ácido, DWH-146a (figura 1).

Ejemplo 17 Efecto de diferentes dosis de JMR-193 en el flujo coronario y la tensión arterial en un modelo canino

Todos los experimentos se llevaron a cabo en perros mestizos adultos en ayunas, anestesiados con pentobarbital sódico (30 mg/kg i.v.). Los animales se intubaron y se ventilaron mecánicamente (Harvard Apparatus) con aire ambiental con una presión positiva expiratoria final de 4 cm H_{2}O. Se controlaron los gases en sangre arterial (Modelo ABL5, Radiómetro) y se hicieron ajustes adecuados para mantener el pH y los gases en sangre dentro del intervalo fisiológico normal. La vena femoral izquierda se canuló con un catéter 8F para la administración de fluidos y se necesitó adicionalmente anestesia. Ambas arterias femorales se canularon con catéteres 8F y se usaron para la extracción de sangre de referencia con microesferas. Un catéter 7F adicional se colocó en la arteria femoral derecha para monitorizar la tensión arterial sistémica. Un catéter 7F Millar de presión de alta fidelidad se insertó en el ventrículo izquierdo a través de una vaina 8F en la arteria carótida izquierda.

Se llevó a cabo una toracotomía a la altura del quinto espacio intercostal y el corazón se suspendió en una cavidad pericárdica. Se realizó un corte en el lado izquierdo del cuello y se introdujo un catéter de presión Millar a través de la arteria carótida hasta que su punta descansó dentro del ventrículo izquierdo. La derivada primera de la presión del ventrículo izquierdo (LV) (dP/dt) se obtuvo mediante diferenciación electrónica. Se colocó un tubo de polietileno ensanchado en la orejuela auricular izquierda para la medida de la presión y para la inyección de microesferas. Una ligadura con asa se colocó sin apretar en una parte proximal de la arteria coronaria anterior descendente anterior izquierda (LAD). Se colocaron sondas de flujo ultrasónico (T206, Transonic Systems, Inc.) en una parte más distal de la LAD y en la arteria coronaria circunfleja izquierda (LCX). Para ambos protocolos, se monitorizó continuamente la derivación II del ECG, la tensión arterial y auricular izquierda, los flujos de la LAD y la LCX y la tensión del LV y su primera derivada y se grabaron en un registrador de banda de térmica de 16 canales (modelo K2G, Astromed, Inc.). Además del grabado analógico, todas las señales fisiológicas se digitalizaron y almacenaron en un disco óptico para un análisis posterior y con fines de archivo.

Tras la preparación quirúrgica, se administraron a tres perros diversas dosis de JMR-193 bien durante 10 min. mediante infusión i.v. o bien mediante administración en bolo y se compararon las respuestas hemodinámicas frente a adenosina i.v. (ADO) (250 \mug/kg/min\times3 min). Como se muestra en la figura 2, JMR-193 aumentó el flujo coronario en la LCX de una manera dependiente de la dosis desde 42 mL/min en la referencia hasta 66, 75, 124, 153 y 140 mL/min a 0,05, 0,1, 0,2, 0,3 y 0,4 \mug/kg/min\times10 min, respectivamente. El aumento de flujo máximo se produjo a la dosis de 0,3 \mug/kg/min sin hipotensión significativa (de 117 a 103 mm Hg) como se muestra en la figura 3. A la dosis más alta, el flujo máximo se atenuó por una leve disminución en la tensión arterial (de 112 a 96 mm Hg). En comparación, la ADO aumentó el flujo en la LCX hasta 139 mL/min pero produjo una notable caída en la tensión arterial de desde 109 hasta 80 mm Hg. Después de terminarse la infusión de JMR-193, las respuestas hemodinámicas volvieron al nivel inicial con un t_{1/2} farmacodinámico = 12 \pm 2 min.

Con la administración en bolo (0,3 \mug/kg), JMR-193 aumentó el flujo en la LCX desde 41 hasta 140 mL/min con una disminución mínima en la tensión arterial (de 111 a 100 mm Hg) (figura 4). El flujo máximo en la LCX se produjo a los 2,3 min. tras la inyección y el flujo permaneció alto más de 2X de lo normal durante 3-4 min (figura 4). Esta respuesta de flujo prolongada tras la administración en bolo debería hacer que JMR-193 fuera más adecuado para protocolos de obtención de imágenes clínicas. En conclusión, estos datos muestran que JMR-193 es útil como un factor estresante farmacológico con obtención de imágenes de perfusión miocárdica.

Ejemplo 18 Uso de DWH-146e en obtención de imágenes de perfusión de estrés farmacológico

Se utilizó la preparación quirúrgica canina del ejemplo 15. Tras un periodo de estabilización inicial de 15 minutos, el oclusor de asa de la LAD se apretó para producir una estenosis crítica de la LAD. Una estenosis crítica se definió como una que no produjo cambio en el flujo coronario de reposo, sin embargo, la reserva de flujo coronario estaba completamente suprimida. Quince minutos más tarde, se comenzó una infusión i.v. de DWH-146e (0,3 \mug/kg/min) y se continuó durante 5 minutos, tiempo en el que el flujo coronario de la LCX era máximo. Entonces, se inyectó vía intravenosa (8 mCi) ^{99m}Tc-N-NOET (bis(n-etil ditiocarbamato)nitrido de ^{99m}Tc(V)), agente para la obtención de imágenes de perfusión miocárdica con unas propiedades excelentes de extracción de flujo. Cinco minutos más tarde, se obtuvo una imagen in vivo y el animal se mató inmediatamente a continuación para evitar la redistribución de ^{99m}Tc-N-NOET. Se extrajo el corazón y se cortó en 4 anillos desde el vértice hasta la base. Los cortes de corazón se colocaron en una hoja de cartón, se cubrieron con un envoltorio de plástico y se llevó a cabo directamente una obtención de imágenes ex vivo de los cortes de corazón en el colimador de una cámara gamma planar.

La resta de la imagen de fondo se llevó a cabo en la imagen in vivo usando un software de medicina nuclear estándar desarrollado para este fin. La magnitud defecto se expresó como una razón del recuento LAD/LCX entre los recuentos en las regiones LAD y LCX de interés representadas en las imágenes del corazón in vivo y ex vivo. Los parámetros hemodinámicas tras una infusión i.v. de DWH-146e se resumen en la tabla 1:

TABLA 1 Parámetros hemodinámicas

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7

Como puede observarse, la infusión de DWH-146e aumentó el flujo coronario casi 5 veces en la arteria coronaria LCX normal. Sin embargo, el flujo coronario en la arteria coronaria LAD permaneció constante debido a la presencia de la estenosis coronaria limitante de flujo. De este modo, había una disparidad de 5:1 en el flujo coronario en el momento en que se inyectó el ^{99m}Tc-N-NOET. Y lo que es más importante, no había cambio en la tensión arterial media con la infusión de DWH-146e.

Las imágenes in vivo y ex vivo de este perro mostraron grandes defectos de perfusión anteroseptal fácilmente detectables. La razón de recuento del defecto ^{99m}Tc-N-NOET era idéntica tanto en las imágenes in vivo como en las ex vivo y muy similar a lo que se observó usando adenosina y obtención de imágenes con ^{201}Talio en perros con el mismo grado de estenosis coronaria.

La excelente disparidad del flujo coronario creado por esta nueva clase de agonistas del subtipo de receptor A_{2A} de la adenosina se detecta fácilmente usando obtención de imágenes de estrés farmacológico. El aumento de casi 5 veces en el flujo coronario sin el desarrollo de hipotensión indica que los presentes compuestos serían útiles como vasodilatadores para la obtención de imágenes clínicas.

Ejemplo 19 Uso de un bolo de DWH-146e i.v. en la obtención de imágenes de perfusión de estrés farmacológico

Se utilizó la preparación quirúrgica canina del ejemplo 15. Tras un periodo de estabilización inicial de 15 minutos, el oclusor de asa de la LAD se apretó para producir una estenosis crítica de la LAD. Una estenosis crítica se definió como una que no produjo cambio en el flujo coronario de reposo, sin embargo, la reserva de flujo coronario estaba completamente suprimida. Quince minutos más tarde se administró una inyección en bolo de DWH-146e (0,25-1,5 mcg/kg). Se inyectó ^{99m}Tc-sestamibi (8 mCi) vía intravenosa. Cinco minutos más tarde, se obtuvo una imagen in vivo y el animal se mató inmediatamente a continuación. Se extrajo el corazón y se cortó en 4 anillos desde el vértice hasta la base. Los cortes de corazón se colocaron en una hoja de cartón, se cubrieron con un envoltorio de plástico y se llevó a cabo directamente una obtención de imágenes ex vivo de los cortes de corazón en el colimador de una cámara gamma planar.

El flujo coronario aumentó de una manera dependiente de la dosis cuando el DWH-146e se administró mediante una inyección en bolo i.v. (figura 6). Las dosis de bolo en un intervalo de 0,5 - 1,5 mcg/kg produjeron un aumento de 3-5 veces en el flujo coronario sin producir hipotensión clínicamente significativamente (figuras 6 y 7).

Tal como se observa en la figura 8, el flujo coronario aumentó rápidamente tras una inyección en bolo i.v. (1,4 mcg/kg) y alcanzó una meseta que duró durante varios minutos. Después, el flujo coronario regresó al nivel inicial con una semivida farmacodinámica de aproximadamente 3 minutos y se restableció completamente al nivel inicial en 20 minutos. En la figura 8 el tiempo medio hasta alcanzar el flujo máximo era de 2,4 \pm 0,1 minutos, el t_{1/2} medio era 2,9 \pm 0,5 min. Los valores de "y" se calcularon usando la fórmula:

y = 249,7 \times e^{(-x/3,85)} = 0,31 \times X + 54,2

y r es 0,96.

Cuando la respuesta de flujo coronario a una inyección en bolo i.v. de DWH-146e (0,5 mcg/kg) se compara frente a una respuesta del flujo coronario a una infusión de adenosina (250 mcg/kg/min \times 3 min) en el mismo perro (figura 9), puede observarse que la magnitud del aumento de flujo era mayor que con una inyección en bolo de DWH-146e y que la duración de la respuesta era al menos tan larga como la de una infusión de adenosina habitual de 3 min.

Claims

1. Uso de un compuesto de fórmula (I):

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8

en la que

(a): cada R es individualmente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, fenilo o fenilalquilo C_{1-}C_{3};

(b): X es -CH_{2}OH, -CO_{2}R^{2}, -OC(O)R^{2}, -CH_{2}OC(O)R^{2} o C(O)NR^{3}R^{4};

(c): cada uno de R^{2}, R^{3} y R^{4} es individualmente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6}sustituido con 1-3 alcoxilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-}C_{7}, alquiltio C_{1-6}, halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino o arilo C_{6-10}, en donde arilo puede estar sustituido con 1-3 halógeno, alquilo C_{1-6}, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, o di(alquil C_{1-6})amino; arilo C_{6-10}; o arilo C_{6-10} sustituido con 1-3 halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino o alquilo C_{1-6}.

(d): cada uno de R^{3} y R^{4} es individualmente hidrógeno, cicloalquilo C_{3-7}, o cualquiera de los significados de R^{2}, y

(e): R^{1} es (X-(Z)-)_{n}[cicloalquil(C_{3}-C_{10})]-(Z')- en donde Z y Z' son individualmente alquilo (C_{1}-C_{6}), opcionalmente interrumpido por 1-3 de S u O no peróxido, o está ausente, y n es 1-3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para detectar la presencia de estenosis de arteria coronaria.

2. Uso según la reivindicación 1 en el que 5'-X es CH_{2}OH o -C(O)NR^{3}R^{4}.

3. Uso según la reivindicación 1 en el que R^{3} es H y R^{4} es alquilo(C_{1}-C_{4}).

4. Uso según la reivindicación 1 en el que R es H o alquilo(C_{1}-C_{4}).

5. Uso según la reivindicación 1 en el que Z' es -CH_{2}- o -CH_{2}-CH_{2}-.

6. Uso según la reivindicación 5 en el que Z es -CH_{2}- o -CH_{2}-CH_{2}-.

7. Uso según la reivindicación 1 en el que el cicloalquilo C_{3}-C_{10} comprende ciclohexilo o ciclopentilo.

8. Uso según la reivindicación 7 en el que X es alcoxicarbonilo (C_{1}-C_{4}), C(O)NR^{3}R^{4} o acetoximetilo.

9. Uso según la reivindicación 6 en el que X-Z es HO_{2}C-Z.

10. Uso según la reivindicación 6 en el que X-Z y Z' son trans en el cicloalquilo.

11. Uso según la reivindicación 1 en el que R es H, 5'-X es etilaminocarbonilo y R^{1} -C\equivC- es 2-(4-metoxicarbonil-ciclohexilmetil)etinilo o 2-(4-carboxi-ciclohexilmetil)etinilo.

12. Uso según la reivindicación 1 en el que R es H, 5'-X es etilaminocarbonilo y R^{1} -C\equivC- es 2-(4-acetoximetil-ciclohexilmetil)etinilo.

13. Uso de un compuesto de fórmula (I):

9

en la que

(a): cada R es individualmente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, fenilo o fenil(C_{1-}C_{3})alquilo;

(c): cada uno de R^{2}, R^{3} y R^{4} es individualmente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6}sustituido con 1-3 alcoxilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-}C_{7}, alquiltio C_{1-6}, halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino o arilo C_{1-6}, en donde arilo puede estar sustituido con 1-3 halógeno, alquilo C_{1-6}, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino o di(alquil C_{1-6})amino; arilo C_{6-10}; o arilo C_{6-10} sustituido con 1-3 halógeno, hidroxilo, amino, mono(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino o alquilo C_{1-6};

(e): R^{1} es (X-(Z)-)_{n}[cicloalquil(C_{3}-C_{10})]-(Z')- en donde Z y Z' son individualmente alquilo (C_{1}-C_{6}), opcionalmente interrumpido por 1-3 S u O no peróxido, o está ausente, y n es 1-3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un vasodilatador farmacológico para su uso con técnicas de obtención de imágenes de perfusión para detectar estenosis de arteria coronaria.

14. Uso según la reivindicación 13, en el que dicha técnica de obtención de imágenes se selecciona del grupo que consiste en obtención de imágenes de perfusión miocárdica, obtención de imágenes de la función ventricular y un método para medir la velocidad de flujo de la sangre coronaria.

15. Uso según la reivindicación 14, en el que dicha obtención de imágenes de perfusión miocárdica se selecciona del grupo que consiste en escintigrafía planar, tomografía computerizada por emisión de fotón simple (SPECT), tomografía por emisión de positrones (PET), resonancia magnética nuclear (RMN), ecocardiografía de contraste de perfusión, angiografía por sustracción digital (DSA) y tomografía computerizada de rayos-X ultrarrápida (CINE CT).

16. Uso según la reivindicación 15, en el que dicha obtención de imágenes es escintigrafía planar, tomografía computerizada por emisión de fotón simple (SPECT) y tomografía por emisión de positrones (PET) usada conjuntamente con un agente radiofarmacéutico que comprende talio-201, tecnecio-99m, nitrógeno-13, rubidio-82, yodo-123 u oxígeno-15.

17. Uso según la reivindicación 16, en el que dicha obtención de imágenes de perfusión miocárdica es escintigrafía y dicho agente radiofarmacéutico es talio-201.

18. Uso según la reivindicación 14, en el que dicha técnica de obtención de imágenes de la función ventricular se selecciona del grupo que consiste en ecocardiografía, ventriculografía de contraste y ventriculogammagrafía.

19. Uso según la reivindicación 14, en el que dicha técnica de obtención de imágenes de la función ventricular es ecocardiografía.

20. Uso según la reivindicación 14, en el que dicho método para medir la velocidad de flujo de la sangre coronaria se selecciona del grupo que consiste en un catéter de flujo Doppler, angiografía por sustracción digital y técnicas de obtención de imágenes radiofarmacéuticas.