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ES2271971T3 - Inhibidores de la adhesion celular. - Google Patents

Inhibidores de la adhesion celular. Download PDF

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ES2271971T3
ES2271971T3 ES97934289T ES97934289T ES2271971T3 ES 2271971 T3 ES2271971 T3 ES 2271971T3 ES 97934289 T ES97934289 T ES 97934289T ES 97934289 T ES97934289 T ES 97934289T ES 2271971 T3 ES2271971 T3 ES 2271971T3
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ES
Spain
Prior art keywords
substituted
aryl
alkyl
alkenyl
heterocycle
Prior art date
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Expired - Lifetime
Application number
ES97934289T
Other languages
English (en)
Inventor
Zhongli Zheng
Carol L. Ensinger
Steven P. Adams
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biogen Inc
Biogen MA Inc
Original Assignee
Biogen Idec Inc
Biogen Idec MA Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A NUEVOS COMPUESTOS QUE SON UTILES PARA LA INHIBICION Y PREVENCION DE LA ADHESION CELULAR Y DE PATOLOGIAS MEDIADAS POR DICHA ADHESION. ESTA INVENCION SE REFIERE IGUALMENTE A FORMULACIONES FARMACEUTICAS QUE COMPRENDEN TALES COMPUESTOS, Y A LOS PROCEDIMIENTOS DE USO DE LOS MISMOS PARA LA INHIBICION Y PREVENCION DE LA ADHESION CELULAR Y DE LAS PATOLOGIAS MEDIADAS POR DICHA ADHESION. LOS COMPUESTOS Y COMPOSICIONES FARMACEUTICAS DE LA PRESENTE INVENCION PUEDEN UTILIZARSE COMO AGENTES TERAPEUTICOS O PROFILACTICOS. SON PARTICULARMENTE ADECUADOS PARA EL TRATAMIENTO DE MUCHAS ENFERMEDADES INFLAMATORIAS Y AUTOINMUNES.

Description

Inhibidores de la adhesión celular.
Campo técnico de la invención
La presente invención se refiere a compuestos novedosos que son útiles para la inhibición, alteración, o prevención de la adhesión celular y patologías mediadas por la adhesión celular. Esta invención también se refiere a métodos para identificar compuestos novedosos adicionales que tienen la actividad deseada, así como a formulaciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, y describe métodos de uso de los mismos para la inhibición y prevención de la adhesión celular y de patologías mediadas por la adhesión celular. Los compuestos y composiciones farmacéuticas de esta invención pueden usarse como agentes terapéuticos o profilácticos. Son particularmente bien adecuados para el tratamiento de muchas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias.
Antecedentes de la invención
La adhesión celular es un proceso por el cual las células se asocian entre ellas, migran hacia una diana específica o se localizan en la matriz extra celular. Como tal, la adhesión celular constituye uno de los mecanismos fundamentales que subyace numerosos fenómenos biológicos. Por ejemplo, la adhesión celular es responsable de la adhesión de células hematopoyéticas a las células endoteliales y la posterior migración de esas células hematopoyéticas fuera de los vasos sanguíneos y hacia el sitio de la lesión inflamatoria. Como tal, la adhesión celular desempeñar un papel en numerosas patologías tales como, por ejemplo, inflamación y reacciones inmunitarias en
mamíferos.
Las investigaciones en la base molecular para la adhesión celular han revelado que diversas macromoléculas de superficie celular (conocidas colectivamente como receptores o moléculas de adhesión celular) median interacciones célula-célula y célula-matriz. Por ejemplo, las proteínas de la superfamilia denominadas "integrinas" son mediadores clave en interacciones adhesivas entre células hematopoyéticas y su microentorno (M.E. Hemler, "VLA Proteins in the Integrin Family: Structures, Functions, and Their Role on Leukocytes.", Ann. Rev. Immunol., 8, pág. 365 (1990)). Las integrinas son complejos heterodiméricos no covalentes que consisten en dos subunidades denominadas \alpha y \beta. Hay al menos 16 subunidades \alpha diferentes (\alpha1-\alpha9, \alpha-L, \alpha-M, \alpha-D, \alpha-X, \alphaIIB, \alpha-V y \alpha-E) y al menos 9 subunidades \beta diferentes (\beta1-\beta9) que se han identificado hasta la fecha. Basándose en el tipo de sus componentes de subunidades \alpha y \beta, cada molécula de integrina puede categorizarse en una subfamilia.
La integrina \alpha4\beta1, también conocida como antígeno muy tardío de la activación-4 ("VLA-4") o CD49d/CD29, es un receptor de superficie de célula de leucocito que participa en una amplia variedad de interacciones adhesivas tanto célula-célula como célula-matriz (M.E. Hemler, Ann. Rev. Immunol., 8, pág. 365 (1990)). Sirve como receptor para la proteína de superficie de célula endotelial inducible por citocina, molécula de adhesión celular vascular 1 ("VCAM-1"), así como para la proteína de matriz extracelular fibronectina ("FN") (Ruegg et al., J. Cell. Biol., 177, pág. 179 (1991); Wayner et al., J. Cell. Biol., 105, pág. 1873 (1987); Kramer et al., J. Biol. Chem., 264, pág. 4684 (1989); Gehlsen et al. Science, 24, pág. 1228 (1988)). Se ha mostrado que los anticuerpos monoclonales anti-VLA4 ("mAb's") inhiben las interacciones adhesivas dependientes de VLA4 tanto in vitro como in vivo (Ferguson et al. Proc. Natl. Acad. Sci., 88, pág. 8072 (1991); Ferguson et al., J. Immunol., 150, pág. 1172 (1993)). Los resultados de experimentos in vivo sugieren que la inhibición de la adhesión celular dependiente de VLA4 puede prevenir, inhibir o alterar varias patologías inflamatorias y autoinmunitarias. (R. L. Lobb et al., "The Pathofysiologic Role of \alpha4 Integrins In Vivo", J. Clin. Invest., 94, págs. 1722-28 (1994)).
Otra integrina, la integrina \alphaIIb\betaIIIa ("IIb/IIIa"), es la integrina más abundante encontrada sobre la superficie de la membrana de plaquetas normales. Jennings, et al., J. Biol. Chem., 257, pág. 10458 (1982). Las plaquetas dependen de las interacciones adhesivas de las glucoproteínas, tales como la integrina "IIb8IIIa", para una función apropiada. J. Hawiger, Atherosclerosis Reviews, 21, págs. 165-86 (1990). Por lo tanto, la inhibición de estas interacciones es un método para regular la agregación o formación de trombos de plaquetas. Se conocen una diversidad de compuestos para inhibir la unión de las integrinas \alphaIIb\betaIIIa a sus ligandos naturales y así pueden regularse trastornos humanos asociados con un estado hipertrombótico. Se describen compuestos conocidos para inhibir las IIb/IIIa en las siguientes patentes y solicitudes de patentes : GB 2 271 567 A; GB 2 292 558 A; EP 0 645 376 A1; EP 0 668 278 A1; EP 0 608 759 A2; EP 0 635 492 A1; WO 94/22820; US 5.340.798 y WO 94/09029; US 5.256.812, EP 0 381 033 y US 5.084.466; WO 94/18981; WO 94/01396 y US 5.272.162; WO 94/21602; WO 94/22444; WO 94/29273; WO 95/18111; WO 95/18619; WO 95/25091; WO 94/18162, US 5.220.050 y WO 93/16038; US 4.879.313 y EP 0 352 249 B1; WO 93/16697, US 5.227.490, EP 0 478 363 A2, US 5.229.616 y WO 94/12181; US 5.258.398 y WO 93/11759; WO 93/08181 y EP 0 537 980 A1; WO 93/09133; EP 0 530 505 B1; EP 0 566 919 A1; EP 0 540 334 B1; EP 0 560 730 A2; WO 93/10091, EP 0 542 363 A2 y WO 93/14077; EP 0 505 868 B1; EP 0 614 664 A1; US 5.358.956; US 5.334.596 y WO 94/26745; WO 94/12478; WO 94/14776; WO 93/00095; WO 93/18058, WO 93/07867, US 5.239.113, US 5.344.957 y EP 0 542 708 A1; WO 94/22825; US 5.250.679 y WO 93/08174; US 5.084.466; EP 0 668 278 A1; US 5.264.420; WO 94/08962; EP 0 529 858; US 5.389.631; WO 94/08577; EP 0 632 016; EP 0 503 548; EP 0 512 831 y WO 92/19595; WO 93/22303; EP 0 525 629; EP 0 604 800; EP 0 587 134; EP 0 623 615; EP 0 655 439; US 5.446.056 y WO 95/14682; US 5.399.585; WO 93/12074; EP 0 512 829; EP 0 372 486 y US 5.039.805; EP 0 632 020 y US 5.494.922; US 5.403.836; WO 94/22834; WO 94/21599; EP 0 478 328; WO 94/17034 WO 96/20192, WO 96/19223, WO 96/19221, WO 96/19222, EP 727425, EP 478362, EP 478363, US 5.272.158, US 5.227.490, US 5.294.616, US 5.334.596, EP 645376, EP 711770, US 5.314.902, WO 94/00424, US 5.523.302, EP 718287, DE 4446301, WO 96/22288, WO 96/29309, EP 719775, EP 635492, WO 96/16947, US 5.602.155, WO 96/38426, EP 712844, US 5.292.756, WO 96/37482, WO 96/38416, WO 96/41803, WO 97/11940.
Con el fin de identificar la secuencia de aminoácido activo mínima necesaria para unir VLA-4, Komoriya et al. sintetizó una diversidad de péptidos solapantes basándose en la secuencia de aminoácido de la región CS-1 (el dominio de unión de VLA-4) de una especie particular de fibronectina. ("The Minimal Essential Sequence for a Major Cell Type-Specific Adhesion Site (CS1) Within the Alternatively Spliced Type III Connecting Segment Domain of Fibronectin Is Leucine-Aspartic Acid-Valine", J. Biol. Chem., 266 (23), págs. 15075-79 (1991)). Identificaron un péptido de 8 aminoácidos, Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr, así como dos pentapéptidos solapantes más pequeños, Glu-Ile-Leu-Asp-Val y Leu-Asp-Val-Pro-Ser, que poseían una actividad inhibidora contra la adhesión celular dependiente de FN. Estos resultados sugirieron que el tripéptido Leu-Asp-Val era la secuencia mínima para la actividad de la adhesión celular. Se mostró más tarde que Leu-Asp-Val se une sólo a linfocitos que expresan una forma activada de VLA-4, presentando por tanto una duda sobre la utilidad de un péptido así in vivo (E.A. Wayner et al., "Activation-Dependent Recognition by Hematopoietic Cells of the LDV Sequence in the V Region of Fibronectin", J. Cell. Biol., 116(2), págs. 489-497 (1992)). Sin embargo, se mostró posteriormente que ciertos péptidos mayores que contienen la secuencia LDV son activos in vivo (T. A. Ferguson et al., "Two Integrin Binding Peptides Abrogate T-cell-Mediated Immune Responses In Vivo", Proc. Natl. Acad. Sci., EE.UU., 88, págs. 8072-76 (1991); y S. M. Wahl et al., "Syntetic Fibronectin Peptides Suppress Arthritis in Rats by Interrupting Leukocyte Adhesion and Recruitment", J. Clin. Invest., 94, págs. 655-62 (1994)).
También se ha descrito un pentapéptido cíclico, Arg-Cys-Asp-TPro-Cys (en el que TPro indica 4-tioprolina), que puede inhibir la adhesión tanto de VLA-4 como de VLA-5 a FN. (Véase, por ejemplo, D.M. Nowlin et al. "A Novel Cyclic Pentapeptide Inhibits \alpha4\beta1 and \alpha5\beta1 Integrin-mediated Cell Adhesion", J. Biol. Chem., 268(27), págs. 20352-59 (1993) y la publicación PCT PCT/US91/04862). Este pentapéptido se basó en la secuencia del tripéptido Arg-Gly-Asp de FN que se ha conocido como un motivo común en el sitio de reconocimiento para varias proteínas de matriz extracelular.
Se han notificado ejemplos de otros inhibidores de VLA-4, por ejemplo, en la solicitud de patente de los Estados Unidos en tramitación con la presente 08/376.372, incorporada específicamente como referencia en el presente documento. El documento USSN 376.372 describe compuestos peptídicos lineales que contienen b-aminoácidos que tienen actividad inhibidora de la adhesión celular. Las solicitudes de patente internacionales WO 94/15958 y WO 92/00995, describen compuestos peptidomiméticos y de péptidos cíclicos con actividad inhibidora de la adhesión celular. Las solicitudes de patente internacionales WO 93/08823 y WO 92/08464 (incorporadas específicamente como referencia en el presente documento) describen compuestos inhibidores de la adhesión celular que contienen guanidinilo, urea y tiourea. La patente de los Estados Unidos número 5.260.277 describe compuestos de modulación de la adhesión celular de guanidinilo, y también se incorpora específicamente en el presente documento.
A pesar de estos avances, queda una necesidad de inhibidores potentes y pequeños de la adhesión celular, particularmente de inhibidores potentes de la adhesión celular de VLA-4 o IIb/IIIa. De manera ideal, tales inhibidores serán pequeños de tal modo que puedan administrarse por vía oral. Tales compuestos proporcionarán agentes útiles para el tratamiento, alteración, prevención o supresión de diversas patologías mediadas por la adhesión celular y la unión de VLA-4 o IIb/IIIa.
El documento US-A-5.403.836 proporciona un derivado de benzazepina que se dice que actúa como un inhibidor no peptídico de la agregación plaquetaria que inhibe potentemente la unión de fibrinógeno al receptor GPII_{b}III_{a}. Este inhibidor se proporciona en composiciones terapéuticas para el tratamiento de enfermedades para las que se indica el bloqueo de la agregación plaquetaria.
Sumario de la invención
La presente invención resuelve el problema anterior proporcionando compuestos novedosos que inhiben la adhesión celular, y, específicamente, la unión de ligandos a VLA-4. Estos compuestos son útiles para la inhibición, prevención y supresión de la adhesión celular mediada por VLA-4, y patologías asociadas con esa adhesión, tales como inflamaciones y reacciones inmunitarias. Los compuestos de esta invención pueden usarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos o profilácticos para inhibir, alterar, prevenir o suprimir la adhesión celular.
Por tanto, la presente invención proporciona compuestos, formulaciones y métodos novedosos que pueden usarse en el estudio, diagnóstico, tratamiento o prevención de enfermedades y estados que se refieren a la adhesión celular, que incluyen, pero no se limitan a artritis, asma, alergias, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, enfermedad cardiovascular, trombosis o agregación plaquetaria perjudicial, rechazo de aloinjerto, enfermedad neoplásica, psoriasis, esclerosis múltiple, inflamación de SNC, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, nefritis glomerular y enfermedad renal inflamatoria relacionada, diabetes, inflamación ocular (tal como uveítis), aterosclerosis, enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias. También, esta invención proporciona formulaciones farmacéuticas que contienen estos inhibidores de la adhesión celular mediada por VLA-4 y describe métodos de utilización de los compuestos y composiciones de la invención para la inhibición de la adhesión celular.
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Según una realización de esta invención, estos compuestos, composiciones y métodos novedosos se usan ventajosamente para la fabricación de un medicamento para tratar enfermedades inflamatorias e inmunitarias. También, la presente invención proporciona métodos para preparar los compuestos de esta invención y productos intermedios útiles en esos métodos.
En consecuencia, la presente invención se refiere a inhibidores de la adhesión celular según las reivindicaciones que comprenden un compuesto que tiene fórmula (I)
(I)A-B
en la que A comprende un determinante de especificidad que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y B comprende una estructura de integrina. Mas especialmente, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) que tiene actividad inhibidora de VLA-4 y una estructura de integrina derivada de un compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa.
En otras realizaciones, la invención reivindicada se refiere a inhibidores de VLA-4 preferidos en el que B se elige de las estructuras de integrina de los compuestos expuestos en la tabla 2, o más preferiblemente, de las estructuras identificadas en los compuestos en la tabla 1. Además, los compuestos más preferidos son aquellos de la tabla 3, y las estructuras preferidas, así como los determinantes de especificidad preferidos, son los derivados a partir de los compuestos dados como ejemplos en las tablas 1, 2 y 3.
Adicionalmente, la presente invención se refiere a métodos de preparación de inhibidores de la adhesión celular, generalmente, eliminando el determinante de especificidad de IIb/IIIa de un inhibidor IIb/IIIa, y sustituyendo dicho determinante de especificidad con un determinante de especificidad de VLA-4, de ese modo creando un inhibidor VLA-4 novedoso, hasta ahora no descrito en el presente documento.
Más específicamente, los métodos para preparar los inhibidores de la adhesión celular de la invención comprenden las etapas de proporcionar un primer compuesto que tiene actividad inhibidora de IIa/IIIa. El primer compuesto comprende un determinante de especificidad de IIb/IIIa, que comprende una funcionalidad de nitrógeno básico, que, por ejemplo, puede ser un resto fenilamidina, y una estructura de integrina. Se elimina el resto de fenilamidina, o, si no hay ninguno presente, como por ejemplo, cuando la funcionalidad de nitrógeno es una piperidina o una bencilamina, se crea un resto fenilamidina "fantasma" creando enlaces fantasma en la orientación para, y eliminando los enlaces innecesarios, tal como se trata más adelante en más detalle, y eliminando el resto "fantasma". Entonces se sustituye el resto fenilamidina con un determinante de especificidad de VLA-4, creando de ese modo un segundo compuesto, que tiene un determinante de especificidad de VLA-4 y una estructura de integrina, y que tiene actividad de VLA-4. En ciertas realizaciones, puede ser preferible insertar un grupo adicional en el punto de, o adyacente a, la conexión entre la estructura de integrina y el determinante de especificidad, para conferir características deseables al compuesto. Tales características deseables se determinan fácilmente por los expertos en la técnica, y pueden abarcar, por ejemplo, características tales como flexibilidad, o modificaciones estructurales diseñadas para alterar las actividades del compuesto. Puede usarse cualquier grupo adicional adecuado, y se conocen por lo expertos en la técnica. Los grupos preferidos pueden incluir, pero no se limitan a carbonilo, carboxamida, éter, nitrógeno, oxígeno, sulfuro, sulfuroamida, y metileno.
Aún en otra realización, el método descrito anteriormente puede usarse para preparar una composición farmacéutica para el tratamiento de un estado asociado con la adhesión celular. Se siguen los métodos descritos anteriormente para preparar inhibidores de VLA-4 y entonces pueden añadirse vehículos, excipientes, aditivos, estabilizadores, etc., aceptables farmacéuticamente adecuados. También, la invención reivindicada abarca composiciones "cóctel", es decir aquellas que contienen los compuestos de la invención además de otros principios activos. Tales composiciones se tratan en más detalle más adelante.
Ciertas realizaciones abarcan métodos de tratamiento de estados asociados con la adhesión celular en mamíferos administrando una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición. Los métodos reivindicados de tratamiento son lo más apropiados para seres humanos, aunque otros mamíferos también son sujetos adecuados. Ventajosamente, debido al tamaño relativamente pequeño de los compuestos de la invención, las compasiones son particularmente adecuadas para la administración por vía oral en forma de un sólido, líquido o suspensión.
Se expondrán características y ventajas adicionales de la invención en la descripción que sigue, y en parte serán claras a partir de la descripción, o pueden aprenderse mediante la práctica de la invención. Los objetivos y otras ventajas de la invención se realizarán y se alcanzarán mediante los métodos y composiciones particularmente puntualizados en la descripción escrita y en las reivindicaciones del presente documento.
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Descripción detallada de la invención A. Definiciones
Las siguientes abreviaturas se usan en la descripción:
\underbar{Designación}
\underbar{Reactivo o Fragmento}
Ac
acetilo
Bn
bencilo
Boc
terc-butoxicarbonilo
Bu
butilo
Cbz
carbobenciloxilo
Cy
ciclohexilo
CyM
ciclohexilmetilo
DIPEA
diisopropiletilamina
EDC
1-(3-dietilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
HOBT
hidrato de 1-hidroxibenzotriazol
I-amilo
isoamilo
I-Pn
isopentilo
I-Pr
isopropilo
Me
metilo
2-MPUBA
4-(N=-(2-metilfenil)urea)-fenilmetilamino
2-MPUPA
4-(N=-(2-metilfenil)urea)-fenilacetilo
NMP
N-metilpirrolidinona
NMM
N-metilmorfolina
Ph
fenilo
PUPA
4-(N=-fenilurea)fenilacetilo
Su
succinimidilo
TBTU
tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
TEA
trietilamina
TFA
ácido trifluoroacético
TAM
tris(hidroxi)metilaminometano
Definiciones
Tal como se usa en el presente documento, el término "alquilo", solo o en combinación, se refiere a un radical alquilo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene desde 1 hasta 10, preferiblemente desde 1 hasta 6 y más preferiblemente desde 1 hasta 4, átomos de carbono. Ejemplos de tales radicales incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, iso-amilo, hexilo, decilo y similares.
El término "alquenilo", solo o en combinación, se refiere a un radical alquenilo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene desde 2 hasta 10, preferiblemente desde 2 hasta 6 y más preferiblemente desde 2 hasta 4, átomos de carbono. Ejemplos de tales radicales incluyen, pero no se limitan a, etenilo, E- y Z-propenilo, isopropenilo, E- y Z-butenilo, E- y Z-isobutenilo, E- y Z-pentenilo, decenilo y similares.
El término "alquinilo", solo o en combinación, se refiere a un radical alquinilo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene desde 2 hasta 10, preferiblemente desde 2 hasta 6 y más preferiblemente desde 2 hasta 4, átomos de carbono. Ejemplos de dichos radicales incluyen, pero no se limitan a, etinilo (acetilenilo), propinilo, propargilo, butinilo, hexinilo, decinilo y similares.
El término "cicloalquilo", solo o en combinación, se refiere a un radical alquilo cíclico que contiene desde 3-12, preferiblemente desde 3-8 y más preferiblemente desde 3-6, átomos de carbono y puede estar opcionalmente aril-condensado. Ejemplos de dichos radicales incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares.
El término "cicloalquenilo", solo o en combinación, se refiere a un carbociclo cíclico que contiene desde 4 hasta 8, preferiblemente 5 ó 6, átomos de carbono y uno o más dobles enlaces. Ejemplos de dichos radicales cicloalquenilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopentenilo, ciclohexenilo, ciclopentadienilo y similares.
El término "arilo" se refiere a un grupo aromático carbocíclico seleccionado del grupo que consiste en fenilo, naftilo, indenilo, indanilo, azulenilo, fluorenilo, y antracenilo; o un grupo heterocíclico aromático seleccionado del grupo que consiste en furilo, tienilo, piridilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, 1,3,5-triazinilo, 1,3,5-tritianilo, indolizinilo, indolilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolinilo, benzo[b]furanilo, 2,3-dihidrobenzofuranilo, benzo[b]tiofenilo, 1H-indazolilo, bencimidazolilo, bencitiazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1,8-naftiridinilo, pteridinilo, carbazolilo, acridinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, pirazolo[1,5-c]triazinilo y similares.
Grupos "arilo", "cicloalquilo" y "cicloalquenilo", tal como se define en esta solicitud pueden contener independientemente hasta tres sustituyentes que se seleccionan independientemente del grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, amino, nitro, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, ciano, carboxilo, carboalcoxilo, alquilo Ar'-sustituido, alquenilo o alquinilo Ar'-sustituido, 1,2-dioximetileno, 1,2-dioxietileno, alcoxilo, alquenoxilo o alquinoxilo, alcoxilo Ar'-sustituido, alquenoxilo o alquinoxilo Ar'-sustituido, alquilamino, alquenilamino o alquinilamino, alquilamino Ar'-sustituido, alquenilamino o alquinilamino Ar'-sustituido, carboniloxilo Ar'-sustituido, alquilcarboniloxilo, acilo alifático o aromático, acilo Ar'-sustituido, alquilcarboniloxilo Ar'-sustituido, carbonilamino Ar'-sustituido, amino Ar'-sustituido, oxilo Ar'-sustituido, carbonilo Ar'-sustituido, alquilcarbonilamino, alquilcarbonilamino Ar'-sustituido, alcoxi-carbonilamino, alcoxicarbonil-amino Ar'-sustituido, Ar'-oxicarbonilamino, alquilsulfonilamino, mono o bis-(Ar'-sulfonil)amino, alquil-sulfonilamino Ar'-sustituido, morfolinocarbonilamino, tiomorfolinocarbonilamino, N-alquilguanidino, N-Ar'-guanidino, N-N-(Ar',alquil)guanidino, N,N-(Ar',Ar')guanidino, N,N-dialquilguanidino, N,N,N-trialquilguanidino, N-alquilurea, N,N-dialquilurea, N-Ar'-urea, N,N-(Ar'-,alquil)urea, N,N-(Ar'-)_{2}urea, alquilo aralquiloxicarbonil-sustituido, aralquilaminocarbonilo, tioariloxilo y similares; en los que "Ar'" es análogo a arilo, pero contiene hasta tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, amino, nitro, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, 1,2-dioximetileno, 1,2-dioxietileno, alcoxilo, alquenoxilo, alquinoxilo, alquilamino, alquenilamino o alquinilamino, alquilcarboniloxilo, acilo alifático o aromático, alquilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, alquilsulfonilamino, N-alquil o N,N-dialquilurea.
El término "aralquilo", solo o en combinación, se refiere a un radical alquilo aril-sustituido, en el que el termino "alquilo" y "arilo" son tal como se definieron anteriormente. Ejemplos de radicales aralquilo adecuados incluyen, pero no se limitan a, fenilmetilo, fenetilo, fenilhexilo, difenilmetilo, piridilmetilo, tetrazolilmetilo, furilmetilo, imidazolil-metilo, indolilmetilo, tienilpropilo y similares.
El término "alcoxilo", solo o en combinación, se refiere a un radical alquiléter, en el que el término "alquilo" es tal como se definió anteriormente. Ejemplos de radicales alquiléter adecuados incluyen, pero no limitan a, metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, iso-propoxilo, n-butoxilo, iso-butoxilo, sec-butoxilo, terc-butoxilo y similares.
El término "alquenoxilo", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquenil-O-, en la que el término "alquenilo" es tal como se definió anteriormente, siempre que el radical no sea un éter enol. Ejemplos de radicales alquenoxilo adecuados incluyen, pero no se limitan a, aliloxilo, E- y Z-3-metil-2-propenxilo y similares. El término "alquiniloxilo", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquinil-O-, en la que el término "alquinilo" es tal como se definió anteriormente, siempre que el radical no sea un éter inol. Ejemplos de radicales alquinoxilo adecuados incluyen, pero no se limitan a, porpargiloxilo, 2-butiniloxilo y similares.
El término "tioalcoxilo" se refiere a un radical tioéter de fórmula alquil-S, en la que alquilo es tal como se definió anteriormente.
El término "alquilamino", solo o en combinación con otros sustituyentes, se refiere a un radical amino mono o dialquil-sustituido (es decir, un radical de fórmula alquil-NH- o (alquil)_{2}-N-), en el que el término "alquilo" es tal como se definió anteriormente. Ejemplos de radicales alquilamino adecuados incluyen, pero no se limitan a, metilamino, etilamino, propylamino, isopropilamino, t-butilamino, N,N-dietilamino y similares.
El término "alquenilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquenil-NH- o (alquenil)_{2}
N-, en el que el término "alquenilo" es tal como se definió anteriormente, siempre que el radical no sea una enamina. Un ejemplo de tales radicales alquenilamino es el radical alilamino.
El término "alquinilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquinil-NH- o (alquinil)_{2}N-, en la que el término "alquinilo" es tal como se definió anteriormente, siempre que el radical no sea una amina. Un ejemplo de tales radicales alquinilamino es el radical propargilamino.
El término "ariloxilo", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula aril-O-, en la que arilo es tal como se definió anteriormente. Ejemplos de radicales ariloxilo incluyen, pero no se limitan a, fenoxilo, naftoxilo, piridiloxilo y similares.
El término "arilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula aril-NH-, en la que arilo es tal como se definió anteriormente. Ejemplos de radicales arilamino incluyen, pero no se limitan a, fenilamino (aniluro), naftilamino, 2-, 3- y 4-piridilamino y similares.
El término "biarilo", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula aril-arilo, en la que el término "arilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "tioarilo", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula aril-S-, en la que el término "arilo" es tal como se definió anteriormente. Un ejemplo de un radical tioarilo es el radical tiofenilo
El término "cicloalquilo aril-condensado", solo o en combinación, se refiere a un radical cicloalquilo que comparte dos átomos adyacentes con un radical arilo, en el que los términos "cicloalquilo" y "arilo" son tal como se definieron anteriormente. Un ejemplo de un radical cicloalquilo aril-condensado es el radical ciclobutilo benzo-condensado.
El término "acilo alifático", solo o en combinación, se refiere a radicales de fórmula alquil-CO-, alquenil-CO- y alquinil-CO- derivados de un ácido alcano-, alqueno- o alquilcarboxílico, en la que los términos "alquilo", "alquenilo" y "alquinilo" son tal como se definieron anteriormente. Ejemplos de tales radicales acilo alifáticos incluyen, pero no se limitan a, acetilo, propionilo, butirilo, valerilo, 4-metilvalerilo, acriloilo, crotilo, propiolilo, metilpropiolilo y similares.
Los términos "acilo aromático" o "aroilo", solos o en combinación, se refieren a un radical de fórmula aril-CO-, en la que el término "arilo" es tal como se definió anteriormente. Ejemplos de radicales acilo aromático adecuados incluyen, pero no se limitan a, benzoilo, 4-halobenzoilo, 4-carboxibenzoilo, naftoilo, piridilcarbonilo y similares.
El término "heterocicloilo", solo o en combinación, se refiere a radicales de fórmula heterociclo-CO-, en la que el término "heterociclo" es tal como se definió anteriormente. Ejemplos de radicales de heterocicloilo adecuados incluyen pero no se limitan a, tetrahidrofuranilcarbonilo, piperidinilcarbonilo, tetrahidrotiofenocarbonilo y similares.
Los términos "morfolinocarbonilo" y "tiomorfolinocarbonilo", solos o en combinación con otros términos, se refieren a un radical morfolino N-carbonilado y tiomorfolino N-carbonilado, respectivamente.
El término "alquilcarbonilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquil-CONH, en la que el término "alquilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "alcoxicarbonilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquil-OCONH-, en la que el término "alquilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "alquilsulfonilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquil-SO_{2}NH-, en la que el término "alquilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "arilsulfonilamino", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula aril-SO_{2}NH-, en la que el término "arilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "N-alquilurea", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula alquil-NH-CO-NH-, en la que el término "alquilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "N-arilurea", solo o en combinación, se refiere a un radical de fórmula aril-NH-CO-NH, en la que el término "arilo" es tal como se definió anteriormente.
El término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo y yodo.
Los términos "heterociclo" y "anillo heterocíclico", solos o en combinación, se refieren a un anillo no aromático de 3 a 10 miembros que contiene al menos un átomo de N, O o S endocílico. Opcionalmente el heterociclo puede estar arilo-condensado. El heterociclo también puede estar opcionalmente sustituido con de uno a tres sustituyentes que se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, nitro, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, ciano, carboxilo, carboalcoxilo, alquilo Ar'-sustituido, alquenilo o alquinilo Ar'-sustituido, 1,2-dioximetileno, 1,2-dioxietileno, alcoxilo, alquenoxilo o alquinoxilo, alcoxilo Ar'-sustituido, alquenoxilo o alquinoxilo Ar'-sustituido, alquilamino, alquenilamino o alquinilamino, alquilamino Ar'-sustituido, alquenilamino o alquinilamino Ar'-sustituido, carboniloxilo Ar'-sustituido, alquilcarboniloxilo, acilo alifático o aromático, acilo Ar'-sustituido, alquilcarboniloxilo Ar'-sustituido, carbonilamino Ar'-sustituido, amino Ar'-sustituido, oxilo Ar'-sustituido, carbonilo Ar'-sustituido, alquilcarbonilamino, alquilcarbonilamino Ar'-sustituido, alcoxi-carbonilamino, alcoxi-carbonilamino Ar'-sustituido, Ar'-oxicarbonilamino, alquilsulfonilamino, mono o bis-(Ar'-sulfonil)amino, alquilsulfonilamino Ar'-sustituido, morfolinocarbonilamino, tiomorfolinocarbonilamino, N-alquilguanidino, N-Ar'-guanidino, N-N-(Ar',alquil)guanidino, N,N-(Ar',Ar')guanidino, N,N-dialquilguanidino, N,N,N-trialquilguanidino, N-alquilurea, N,N-dialquilurea, N-Ar'-urea, N,N-(Ar',alquil)urea, N,N-(Ar')_{2} urea, alquilo aralcoxicarbonil-sustituido, carboxialquilo, oxo, arilsulfonilo y aralquilaminocarbonilo.
El término "grupo saliente" se refiere generalmente a grupos fácilmente desplazables mediante un nucleófilo, tal como un nucleófilo de amina, alcohol o tiol. Tales grupos salientes se conocen bien en la técnica e incluyen carboxilatos, N-hidroxisuccinimida, N-hidroxibenzotriazol, halógeno (haluros), triflatos, tosilatos, mesilatos, alcoxilo, tioalcoxilo y similares.
El término "grupo hidrófobo" se refiere a un grupo que es resistente a la unión con o absorción de agua. Ejemplos de tales grupos hidrófobos incluyen, pero se limitan a, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, fenilo, bencilo, naftilo, N-bencilimidazolilo, metiltioetilo y similares.
El término "grupo ácido funcional" se refiere a grupo que tiene un hidrógeno ácido en el. Ejemplos de tales grupos incluyen, pero no se limitan a, ácido carboxílico, tetrazol, imidazol, hidroxilo, mercapto, hidroxilaminocarbonilo, ácido sulfónico, ácido sulfínico, ácido fosfórico y ácido fosfónico.
Los términos "derivado activado de un "aminoácido" adecuadamente protegido" y "derivado de ácido fenilacético sustituido activado" se refieren a derivados de ácidos carboxílicos en los que el grupo OH se sustituye por un grupo saliente superior. Ejemplos de derivados de ácidos activados incluyen, pero no se limitan a, los correspondientes haluros de acilo (por ejemplo, fluoruro de ácido, cloruro de ácido y bromuro de ácido), ésteres activados correspondientes (por ejemplo, éster de nitrofenilo, el éster de 1-hidroxibenzotriazol, HOBT, o el éster de hidroxisuccinimida, HOSu), y otros derivados convencionales en la experiencia de la técnica.
El término "cadena(s) lateral(es) de aminoácido" se refiere a la cadena lateral unida al carbono \alpha de un aminoácido. Ejemplos de cadenas laterales de aminoácido incluyen, pero no se limitan a, metilo, isopropilo, bencilo y carboximetilo para alanina, valina, fenilalinina y ácido aspártico, respectivamente.
Los términos "grupo protector o protegido" se refieren a un grupo químico adecuado que puede unirse aun grupo funcional de una molécula, luego se elimina en una fase posterior para descubrir la molécula y grupo funcional intacto. Ejemplos de grupos protectores adecuados para diversos grupos funcionales se describen por T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser y M. Fieser, Fieser y Fieser=s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); L. Paquette, ed. Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995).
Los compuestos de esta invención pueden contener uno o más átomos de carbono asimétricos y por tanto producirse como racematos y mezclas racémicas, enantiómeros únicos, mezclas diastereoméricas y diastereómeros individuales. Todas esas formas isoméricas de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente invención. Cada carbono estereogénico puede ser de configuración R o S. Aunque los compuestos específicos dados como ejemplos en esta solicitud pueden describirse en una configuración estereoquímica particular, los compuestos que tienen o bien la estequiometría opuesta en cualquiera de los centros quirales dados o bien mezclas de los mismos se prevén como parte de la invención. Aunque los aminoácidos y cadenas laterales de aminoácidos pueden describirse en una configuración particular, tanto formas naturales como formas no naturales se prevén como parte de la invención.
En vista de las definiciones anteriores, pueden entenderse fácilmente otros términos químicos que usan a lo largo de esta solicitud por los expertos en la técnica. Los términos pueden usarse solos o en cualquier combinación de los mismos. Las longitudes de cadenas de los radicales preferidas y más preferidas se aplican a todas las combinaciones de ese tipo.
B. Descripción
Los compuestos de esta invención resultan a partir de los descubrimientos que los compuestos inhibidores de integrinas IIb/IIIa existentes pueden convertirse en compuestos inhibidores de VLA-4, y pueden prepararse compuestos inhibidores de de IIb/IIIa combinando una estructura de integrina de VLA-4 única con un determinante de especificidad de IIb/IIIa. Pueden describirse estructuralmente los inhibidores de IIb/IIIa conocidos como que comprenden un "determinante de especificidad" y una "estructura de integrina". Un "determinante de especificidad" es una porción de un compuesto que confiere a dicho compuesto una selectividad deseada hacia una pareja de unión. La "estructura de integrina" es la porción restante de dicho compuesto. Así por ejemplo, un determinante de especificidad de IIb/IIIa típico puede contener una funcionalidad de nitrógeno básico, y la estructura de integrina puede indicar la parte con una funcionalidad ácida.
Por tanto, los compuestos novedosos de la invención abarcan compuestos de fórmula (I) según las reivindicaciones.
Más específicamente, para los fines de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) tiene una actividad inhibidora de VLA-4, y, A comprende un determinante de especificidad que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa al compuesto, y B se deriva de un inhibidor de IIb/IIIa. Tal como se usa en el presente documento, el término "actividad significativa" significa que tiene un valor de CI_{50} inferior a aproximadamente 50 \muM.
Inhibidores de VLA-4 que comprenden un determinante de especificidad de VLA-4 y una estructura de IIb/IIIa
El compuesto de fórmula (I) es un inhibidor de la adhesión celular en el que A es un determinante de especificidad de VLA-4 que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y B es una estructura de integrina derivada de una molécula que tiene actividad de IIb/IIIa. En una realización más preferida, b es una estructura de integrina derivada de cualquiera de los inhibidores de IIb/IIIa descritos en la tabla 2. Sin embargo, debe entenderse que basándose en la invención de los solicitantes, y usando los métodos reivindicados, virtualmente cualquier compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa puede convertirse en inhibidor de VLA-4 eliminando el determinante de especificidad de IIb/IIIa y sustituyéndolo con un determinante de especificidad de VLA-4. Se explican métodos de conversión en más detalle más adelante.
Sorprendentemente, cuando una estructura de integrina de un inhibidor de IIb/IIIa se une a un determinante de especificidad de VLA-4, se forma un compuesto con actividad inhibidora de VLA-4. Además, los inhibidores de VLA-4 resultantes, como una clase, no muestran ninguna actividad inhibidora de IIb/IIIa significativa en relación con los inhibidores de IIb/IIIa de los cuales se deriva la estructura. Por tanto, esta invención proporciona inhibidores de VLA-4 que comprenden cualquier estructura de integrina derivada de un compuesto que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa, y cualquier determinante de especificidad de VLA-4.
La invención reivindicada también abarca métodos de preparación de esos compuestos que tienen actividad inhibidora de la adhesión celular, más preferiblemente, actividad inhibidora de VLA-4. Adicionalmente se describen en el presente documento métodos de preparación de composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos.
Los solicitantes proporcionan en el presente documento métodos de identificación de compuestos que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa, y métodos de identificación de compuestos que tienen actividad inhibidora de VLA-4. Además, los solicitantes describen métodos de identificación de la "estructura" en cualquier compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa, y métodos de identificación del determinante de especificidad en cualquier compuesto que tiene actividad inhibidora de VLA-4. Adicionalmente se describen métodos de combinación de la "estructura" con un determinante de especificidad de VLA-4 para crear un inhibidor de VLA-4 novedoso.
Métodos de conversión de compuestos que tienen actividad inhibidora de IIb/IIIa en compuestos novedosos que tienen actividad inhibidora de VLA-4
En general, la presente invención proporciona métodos de conversión de compuestos que tienen actividad inhibidora de IIb/IIIa en compuestos novedosos que tienen actividad inhibidora de VLA-4 y no retienen actividad de IIb/IIIa significativa. Generalmente, los métodos implican identificar una estructura de integrina en un inhibidor IIb/IIIa, e identificar un determinante de especificidad de VLA-4. El determinante de especificidad es esa porción del compuesto que confiere la actividad de unión en la molécula. Una vez se identifican esas estructuras, puede combinarse la estructura de integrina de IIb/IIIa con el determinante de especificidad de un compuesto que tiene actividad inhibidora de VLA-4, y obtener un nuevo inhibidor de VLA-4.
Por tanto, en una realización básica un experto en la técnica identifica en primer lugar un compuesto que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa. Se conocen bien compuestos que tienen una actividad inhibidora de IIb/IIIa por los expertos en la técnica, y están disponibles fácilmente, véase, por ejemplo, la tabla 2 y las bibliografías incorporadas en el presente documento en los antecedentes de la invención. Para los fines de esta invención, un experto en la técnica puede usar cualquiera de estos compuestos conocidos. Alternativamente, puede determinarse en ensayos conocidos por los expertos en la técnica si un compuesto particular tiene actividad de IIb/IIIa. Si el ensayo es positivo, entonces la estructura será útil en la presente invención. Se conocen bien los ensayos para la actividad inhibidora de IIb/IIIa en la técnica. Por tanto, por ejemplo, puede demostrarse la actividad de IIb/IIIa sometiendo a ensayo la capacidad de los compuestos para inhibir la unión del receptor de IIb/IIIa a, por ejemplo, un ligando de IIb/IIIa conocido, tal como fibrinógeno o fibronectina, o alternativamente, a un antagonista conocido (documento WO93/00095). Adicionalmente, la unión mencionada a ligandos puede someterse a ensayo por un experto en la técnica en un ensayo de agregación plaquetaria.
Muchos de los inhibidores de IIb/IIIa existentes contienen un determinante de especificidad que compromete un resto de fenilamidina, que, para los fines de la invención, puede servir como un punto de orientación para la conversión de dicho inhibidor de IIb/IIIa en un inhibidor de VLA-4. En los inhibidores que no tienen un resto de fenilamidina, la funcionalidad básica existente se convierte en un resto de fenilamidina "fantasma", tal como se explica adicionalmente en detalle más adelante. Por tanto, según las enseñanzas en el presente documento, puede convertirse virtualmente cualquier compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa en un inhibidor de VLA-4 eliminando el determinante de especificidad de IIb/IIIa.
Las siguientes enseñanzas permitirán a un experto en la técnica preparar un inhibidor de VLA-4 reivindicado, usando como material de partida cualquier compuesto que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa. Por tanto, basándose en la enseñanza siguiente, puede tomarse la estructura química de cualquier compuesto de IIb/IIIa, y predecir la estructura de un compuesto que tiene actividad inhibidora de VLA-4. Los solicitantes han aplicado con éxito esta enseñanza a numerosos compuestos, y han determinado que los compuestos identificados de este modo tienen de hecho actividad inhibidora de VLA-4.
Enseñanza I
En ciertas realizaciones, el experto identifica la estructura química de un compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa, tal como, por ejemplo la siguiente:
1
Tal como se trató anteriormente, con el fin de convertir esta estructura de IIb/IIIa en una estructura que tiene actividad inhibidora de VLA-4, debe sustituirse el determinante de especificidad de IIb/IIIa con un determinante de especificidad de VLA-4.
Los inhibidores de IIb/IIIa conocidos tienen frecuentemente determinantes de especificidad que comprenden un resto de fenilamidina u otra funcionalidad básica. Por tanto, por ejemplo, en el inhibidor de IIb/IIIa anterior (documento US 5.239.113, reivindicado en el presente documento como referencia), el determinante de especificidad comprende un resto de fenilamidina. Para convertir este compuesto en un compuesto inhibidor de VLA-4, la fenilamidina se "elimina" y se une un determinante de especificidad de VLA-4.
En la primera etapa de esta conversión, por ejemplo, el anillo fenilo del resto de fenilamidina en el compuesto anterior puede tomarse para ser el anillo de fenilo interno de una difenilurea. En la segunda etapa, la funcionalidad amidina se elimina y el resto de la urea se une. En este ejemplo el enlace de conexión entre el determinante de especificidad y la estructura de integrina es el enlace de amida próximo al anillo fenilo interno de la urea. Las etapas de esta enseñanza no se limitan a anillos de fenilo que llevan amidina. Pueden aplicarse de manera similar a, por ejemplo, anillos de piperazina y piperidina que llevan una funcionalidad amidina.
2
El compuesto creado por medio esta enseñanza es un compuesto nuevo que tiene actividad inhibidora de VLA-4. Generalmente consiste en la estructura de integrina de un inhibidor de IIb/IIIa y un determinante de especificidad de VLA-4, es decir, una urea. Este compuesto no tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa significativa.
Enseñanza II
No todos los inhibidores de IIb/IIIa tienen un resto de fenilamidina. Por tanto, para convertir un compuesto de IIb/IIIa sin resto de fenilamidina en un inhibidor VLA-4, la funcionalidad básica puede usarse como punto de referencia. Por ejemplo, en el inhibidor de IIb/IIIa a continuación (documento WO 92/19595, reivindicado en el presente documento como referencia), el experto usa la funcionalidad básica, es decir, el nitrógeno de piperidina, del determinante de especificidad como un punto de referencia para crear, teóricamente, una fenilamidina "fantasma".
3
Esto se realiza dibujando enlaces "fantasma" entre la posición 3 de la piperidina y el carbono alfa del nitrógeno de lactama. Los enlaces "fantasma" se muestran por puntos en la figura siguiente. La orientación de los grupos en el anillo "fantasma" es preferiblemente para.
4
La segunda etapa de creación de esta fenilamidina "fantasma" es eliminar los enlaces y átomos innecesarios para generar una estructura que tiene una fenilamidina para-sustituida "fantasma", tal como se muestra a continuación.
5
En tercer lugar, ya que el determinante de especificidad del "fantasma" comprende un resto de fenilamidina, la estructura de un compuesto que tiene actividad de VLA-4 puede dibujarse siguiendo las etapas de la enseñanza (I). En este ejemplo, el enlace de conexión entre el determinante de especificidad y la estructura de integrina es el que conecta el anillo de fenilo interno de la urea al nitrógeno de la lactama.
6
Enseñanza III
En otras realizaciones el compuesto de IIb/IIIa original puede tener un determinante de especificidad que comprende un grupo guanidina. Tal como en la enseñanza II, la funcionalidad básica puede usarse como un punto de referencia para convertir el inhibidor de IIb/IIIa en un inhibidor de VLA-4.
7
En la estructura anterior (documento WO 93/08174), se construye la fenilamidina "fantasma" a partir del nitrógeno de guanidina interna y el carbono alfa del carbonilo de la amida. Esta construcción se elige de tal modo que los grupos del anillo "fantasma" están en la orientación para preferida. Los enlaces "fantasmas" se dibujan en puntos en la estructura siguiente.
8
Tal como se detalló previamente, la funcionalidad de amidina se elimina y se sustituye con el resto del resto de urea. El enlace de conexión en este ejemplo es el enlace de amida. En algunas realizaciones puede ser deseable añadir funcionalidad en o adyacente al enlace de conexión. Por tanto, en este ejemplo, se inserta un metileno opcional entre el anillo de fenilo interno de la urea y el carbonilo de la amida. Así, el compuesto que tiene la estructura siguiente posee actividad inhibidora de VLA-4 sin tener actividad de IIb/IIIa significativa.
9
Enseñanza IV
En una realización adicional, ciertos compuestos de IIb/IIIa originales poseen un resto de 4,4'-bispiperidilo como un determinante de especificidad tal como se muestra en al estructura siguiente (documento WO 94/14776).
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\newpage
Este ejemplo es similar al de la enseñanza II; se forma un anillo "fantasma" entre los carbonos 3 y 3' del sistema bispiperidilo tal como sigue:
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Tal como en enseñanzas previas, se eliminan los átomos innecesarios de tal modo que el anillo "fantasma" resultante está para-sustituido.
12
La función amidina se elimina y se construye la urea tal como en la enseñanza I. En este ejemplo, el enlace de conexión es el enlace de amida. En algunas realizaciones puede ser deseable modificar la funcionalidad en el enlace de conexión. Así, en este caso, la conexión de la amida destacada puede revertirse. El(los) compuesto(s) que resultan de esta conversión posee(n) actividad inhibidora hacia VLA-4 sin actividad de IIb/IIIa significativa.
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Pueden aplicarse las etapas de la enseñanza IV a estructuras que tiene determinantes de especificidad de IIb/IIIa similares dados como ejemplo por, pero sin limitarse a, 4-piperazinilfenilo, 4-piperidil-piperazinilo, 4-piperidinilpiperazinilo, 4-piperidinifenilo, y 4-vinilpiperidinilo.
Puede aplicarse un procedimiento similar al esquematizado en las enseñanzas I-IV para identificar compuestos inhibidores de VLA-4 novedosos a inhibidores de IIb/IIIa que contienen grupos funcionales en sus determinantes de especificidad tales como, por ejemplo, amidinofenilo, bispiperidilo, piperidilo, bencilamino, piridinilo, aminopiridilo, alquilamino, amidinopiperazinilo, guanidino y similares. Por tanto, estos análisis son similares a aquellos específicamente ilustrados anteriormente. Además, aplicación de las enseñanzas anteriores no solo identifica a los determinantes de especificidad y estructuras de integrinas sino que, por defecto, también a los enlaces de conexión entre de los dos restos. Por tanto, la porción de determinante de especificidad de un inhibidor de IIb/IIIa puede distinguirse claramente de la estructura de integrina de tal modo que resultarán compuestos inhibidores de VLA-4 del intercambio adecuado de determinantes de especificidad. Pueden mejorarse adicionalmente los inhibidores de VLA-4 que surgen a partir de los análisis del presente documento mediante un alargamiento, acortamiento, inversión o sustitución de la funcionalidad en o inmediatamente adyacente al enlace de conexión entre los determinantes de especificidad de VLA-4 y la estructuras de integrina. Tal funcionalidad de conexión incluye, pero no se limita a, alquilo C_{1}-C_{3}, alquenilo C_{1}-C_{3}, alquinilo C_{1}-C_{3}, amida, éster, éter, y tioéter. Sin embargo, para un experto en la técnica tales cambios se considerarán obvios y cualquier alteración se realizará basándose en las características deseadas del compuesto. Además, aunque las enseñanzas I-IV proporcionan todas la introducción de un resto o-metilfenilureidofenilo para comprender el determinante de especificidad de VLA-4, se entenderá que cualquier determinante de especificidad de VLA-4 puede intercambiarse con otro cualquiera tal como se expone en otra parte de esta solicitud. Por tanto, la enseñanza anterior permite a un experto en la técnica convertir virtualmente cualquier compuesto que posea actividad inhibidora de IIb/IIIa en un inhibidor de VLA-4.
Enseñanza V
En otra realización, cualquier determinante de especificidad de VLA-4, una vez identificado, puede intercambiarse con otro cualquiera de tal modo que se obtiene un nuevo compuesto que posee actividad inhibidora de VLA-4. Por ejemplo, el compuesto siguiente es un inhibidor de VLA-4 obtenido tal como se definió anteriormente.
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El enlace de conexión es el enlace de amida. Por tanto, el determinante de especificidad de VLA-4 es el resto de o-metilfenilureido-fenilacetilo. Esto puede sustituirse en su totalidad con un determinante de especificidad de VLA-4 diferente tal como, por ejemplo, el resto de indolilcarbonilaminofenilacetilo tal como se representa a continuación. Este compuesto posee actividad inhibidora de VLA-4.
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Enseñanza VI
Aún en otra realización, puede sustituirse el determinante de especificidad de VLA-4 y también puede modificarse el enlace de conexión tal como se trata en la enseñanza IV anterior. Por ejemplo, puede sustituirse el resto o-metilfenilureidofenilacetilo de la enseñanza V con el o-hidroxifeniletinilfenilacetilo del determinante de especificidad de VLA-4 tal como se muestra a continuación. Este determinante de especificidad de VLA-4 alternativo se describe en otra parte de esta solicitud. Este nuevo compuesto posee actividad inhibidora de VLA-4.
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En la segunda etapa, el enlace amida de conexión puede sustituirse con, por ejemplo, una unión éter tal como se representa.
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Ya que un cambio así de funcionalidad puede realizarse en el, o inmediatamente adyacente al, enlace de conexión, el átomo de oxígeno de la unión éter puede colocarse en lugar de cualquiera de los carbonos marcados en vez de eso. El(los) compuesto(s) que resultan de esta conversión posee(n) actividad inhibidora de VLA-4. Por lo tanto, las enseñanzas V y VI permiten a un experto en la técnica tanto intercambiar de manera predecible determinantes de especificidad de VLA-4 como modificar la funcionalidad del enlace de conexión mientras se conserva la actividad inhibidora de VLA-4 selectiva.
Composiciones de la invención
Esta invención proporciona una amplia clase de compuestos novedosos que pueden inhibir la adhesión celular mediada por VLA-4 mediante la inhibición de la unión de ligandos a ese receptor. Estos compuestos se representan por la fórmula (I) tal como se define en las reivindicaciones.
En particular, la presente invención proporciona inhibidores de la adhesión celular que tienen la fórmula (I)
(I)A-B
en la que A comprende un determinante de especificidad de VLA-4 que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y B comprende una estructura de integrina derivada de un compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa,
en la que B es un compuesto seleccionado de las fórmulas IIb y IIc
\vskip1.000000\baselineskip
18 
\newpage
en las que
A^{1} se selecciona de NR^{1}, O, S, (CR^{1}R^{2})_{r}, y N[(CR^{1}R^{2})_{m}(CY)A^{2}R^{1}];
A^{2} se selecciona de O, NR^{2}, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
A^{3} se selecciona de NR^{1}, O, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
X se selecciona de CH_{2}, O, y S;
Y es H_{2} u O;
r es 0 ó 1;
n es 0-5;
m es 1-4;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
U se selecciona de COR^{12}, (CR^{1}R^{2})_{n}R^{12}, y SO_{2}R^{11};
R^{l} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{3} es R^{1} o cadenas laterales de aminoácido;
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente de H, OR^{1}, halógeno, alquilo, SR^{1}, NZR^{12}, y NR^{1}R^{2};
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida y
R^{12} se selecciona de H, alquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, heterociclo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, carboxamida, o aralcoxilo, o en la que B comprende una estructura seleccionada de la fórmula IIIa, fórmula IIIb y fórmula IIIc
19
en las que
n es 0-5;
m es 1-4;
q es 1 ó 2;
r es 0 ó 1;
Y es H_{2} u O;
W se selecciona de HCO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H; alquilo, alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{7} se selecciona de H; arilo; arilo sustituido; aralquilo; alquilo; alquenilo; y alquilo sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, o halógeno;
R^{10} se selecciona de R^{2}, NHSO_{2}R^{11}, NH_{2}, OR^{2}, y NHZR^{12};
R^{12} se selecciona de H; alquilo, cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, heterociclo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, carboxamida, o aralcoxilo;
R^{13} es H o -CH_{2}(CH_{2})_{m}CH_{2}-;
R^{2} y R^{7} pueden tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{2} y R^{10} pueden tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{11} se selecciona de alquilo; alquenilo, alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo, arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
Q es (CR^{1}R^{2})_{r}, o NR^{12}, o
en la que B comprende una estructura seleccionada de la fórmula IVa, fórmula IVb y fórmula IVc
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en las que
A^{4} se selecciona de (CR^{1}R^{2})_{n}, O, S, NR^{1}, SO_{2}NR^{1}, CONR^{1}, CH_{2}NR^{11}, NR^{1}SO_{2}, CH_{2}O, CH_{2}NCOR^{11}, y
CH_{2}CONR^{1};
n es 0-5;
m es 1-4;
W se selecciona de -CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H; Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{4} se selecciona de H, OR^{1}, SR^{1}, NR^{1}R^{2}, alquilo, NZR^{1}, NSO_{2}R^{11}, y CO_{2}R^{1};
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente de H, OR^{1}, halógeno, alquilo y NR^{1}R^{2}; y
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida, o
en la que B comprende una estructura que tiene la fórmula Va o Vb
21
en las que
A^{3} se selecciona de NR^{1}, O, S; y (CR^{1}R^{2})_{r};
A^{5} se selecciona de SO_{2}R^{11}, COR^{7}, y (CR^{1}R^{2})_{n}R^{7};
n es 0-5;
m es 1-4;
r es 0 ó 1;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
P es CO o SO_{2};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{7} se selecciona de H, arilo, arilo sustituido, aralquilo, alquilo, alquenilo; alquilo opcionalmente sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, y halógeno;
cuando R^{8} es H, entonces R^{9} es R^{7}, o R^{8} y R^{9} pueden tomarse juntos para formar un anillo de 4-7 miembros opcionalmente sustituido con hidroxilo, -OR^{1}, -N^{1}R^{1}R^{2}, -SR^{1}, -SO_{2}R^{11}, o -SOR^{11}, y
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, y carboxamida, y
en la que A se selecciona de acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido; aroilo; heterocicloilo; aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; heterocicloalquilcarbonilo; alcoxicarbonilo; aralquiloxicarbonilo; cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo; heterocicloalcoxicarbonilo; alquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo; arilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo; aralquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo; alquilsulfonilo; aralquilsulfonilo; arilsulfonilo; cicloalquilsulfonilo opcionalmente condensado con arilo; heterociclilsulfonilo; heterociclilalquilsulfonilo; aralcoxicarbonilo; ariloxicarbonilo; cicloalquiloxicarbonilo; heterocicliloxicarbonilo; heterociclilalcoxicarbonilo, mono o di-alquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; (alquil)(aralquil)aminocarbonilo; mono o di-arilalquilaminocarbonilo; mono o di-arilaminocarbonilo; (aril)(alquil)aminocarbonilo; mono o di-cicloalquilaminocarbonilo; heterociclilaminocarbonilo; heterociclilalquilaminocarbonilo; (alquil)(heterociclil)aminocarbonilo; (alquil)(heterociclilalquil)aminocarbonilo; (aralquil)(heterociclil)aminocarbonilo; (aralquil)(heterociclilalquil)aminocarbonilo; alquenoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; cicloalquenilcarbonilo; cicloalquenilsulfonilo; cicloalquilalcanoilo; cicloalquilalquilsulfonilo; arilaroilo, biarilsulfonilo; alcoxisulfonilo; aralcoxisulfonilo; alquilaminosulfonilo; ariloxisulfonilo; arilaminosulfonilo; alcanoilo N-arilurea-substituido; alquilsulfonilo N-arilurea-sustituido; carbonilo cicloalquenil-sustituido; sulfonilo cicloalquenil-sustituido; alquenoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenil o alquinil-aminocarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenil o alquinil-aminosulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcanoilo acilamino-sustituido; alquilsulfonilo acilamino-sustituido; alcanoilo aminocarbonil-sustituido; alcanoilo carbamoil-sustituido; alquilsulfonilo carbamoil-sustituido; heterociclilalcanoilo; heterociclilaminosulfonilo; aralcoxilo carboxialquil-sustituido; aralquilsulfonilo carboxialquil-sustituido; aroilo oxocarbociclil-condensado; arilsulfonilo oxocarbociclil-condensado; heterociclilalcanoilo; N',N'-alquilo, arilhidrazinocarbonilo; alcanoilo ariloxi-sustituido y heterociclilalquilsulfonilo; alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; aril-condensado cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; alquilo aril-sustituido; alquenilo aril-sustituido; alquinilo aril-sustituido; alquilo cicloalquil-sustituido; cicloalquilo ciclalquenil-sustituido; biarilo; alcoxilo; alquenoxilo; alquinoxilo; alcoxilo aril-sustituido; alquilamino; alquenilamino; alquinilamino; alquilamino aril-sustituido; alquenilamino aril-sustituido; alquininlamino aril-sustituido; ariloxilo; arilamino; alquilo N-alquilurea-sustituido; alquilo N-arilurea-sustituido; alquilo alquilcarbonilamino-sustituido; heterociclilo; amino heterociclil-sustituido; aralquilo carboxialquil-sustituido; arilo oxocarbociclil-condensado arilalquilcarbonilamino arilurea-sustituido; arilalquilcarbonilamino heteroarilamino-sustituido; y arilurea arilurea-sustituida.
En otra realización, la presente solicitud proporciona un inhibidor de la adhesión celular que tiene la fórmula (I)
(I)A-B
en la que A comprende un determinante de especificidad de VLA-4 que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y B comprende una estructura de integrina derivada de un compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa,
en la que B es un compuesto de fórmula IIa
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en la que
A^{1} se selecciona de NR^{1}, O, S, (CR^{1}R^{2})_{r}, y N[(CR^{1}R^{2})_{m}(CY)A^{2}R^{1}];
A^{2} se selecciona de O, NR^{2}, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
X se selecciona de CH_{2}, O y S;
Y es H_{2} u O;
r es 0 ó 1;
n es 0-5;
m es 1-4;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{3} es R^{1} o cadenas laterales de aminoácido;
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente de H, OR^{1}, halógeno, alquilo, SR^{1}, NZR^{12}, y NR^{1}R^{2}; y
en la que A se selecciona de acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido; aroilo; alquil o arilsulfonilo; aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcoxicarbonilo; aralquiloxicarbonilo; cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo; alquilsulfonilo; aralquilsulfonilo; arilsulfonilo; cicloalquilsulfonilo opcionalmente condensado con arilo; aralcoxicarbonilo; ariloxicarbonilo; cicloalquiloxicarbonilo; alquenoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; cicloalquenilcarbonilo; cicloalquenilsulfonilo; cicloalquilalcanoilo; cicloalquilalquilsulfonilo; arilaroilo, biarilsulfonilo; alcoxisulfonilo; aralcoxisulfonilo; ariloxisulfonilo; alcanoilo N-arilurea-sustituido; alquilsulfonilo N-arilurea-sustituido; carbonilo cicloalquenil-sustituido; sulfonilo cicloalquenil-sustituido; alquenoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcanoilo acilamino-sustituido; alquilsulfonilo acilamino-sustituido; alcanoilo aminocarbonil-sustituido; alcanoilo carbamoil-sustituido; alquilsulfonilo carbamoil-sustituido; aralcoilo carboxialquil-sustituido; aralquilsulfonilo carboxialquil-sustituido; aroilo oxocarbociclil-condensado; arilsulfonilo oxocarbociclil-condensado; N',N'-alquilo, arilhidrazinocarbonilo; alcanoilo ariloxi-sustituido; alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquilo aril-condensado; cicloalquenilo; arilo; alquilo aril-sustituido; alquenilo aril-sustituido; alquinilo aril-sustituido; alquilo cicloalquil-sustituido; cicloalquilo cicloalquenil-sustituido; biarilo; alcoxilo; alquenoxilo; alquinoxilo; alcoxilo aril-sustituido; alquilamino; alquenilamino; alquinilamino; alquilamino aril-sustituido; alquenilamino aril-sustituido; alquinilamino aril-sustituido; ariloxilo; arilamino; alquilo N-alquilurea-sustituido; alquilo N-arilurea-sustituido; alquilo alquilcarbonilamino-sustituido; aralquilo carboxialquil-sustituido; arilo oxocarbociclil-condensado arilalquilcarbonilamino arilurea-sustituido; arilalquilcarbonilamino heteroarilamido-sustituido; y arilurea arilurea-sustituida.
En las reivindicaciones adjuntas se describen realizaciones adicionales de la presente invención.
Los grupos químicos definidos como "A" en la fórmula I son ejemplos del "determinante de especificidad" mencionado anteriormente. Los grupos químicos definidos como "B" en la fórmula I son ejemplos de la "estructura de integrina" mencionada anteriormente. Aunque se delinean ejemplos específicos de "estructura de integrinas" a partir de inhibidores de IIb/IIIa conocidos, un experto en la técnica sabrá que derivados estructurales químicos de estos inhibidores de IIb/IIIa poseen actividad inhibidora de IIb/IIIa similar. También se prevé que la "estructura de integrinas" de tales derivados de IIb/IIIa o de cualquier compuesto que pueda mostrarse que tiene actividad de IIb/IIIa, pueda incorporarse a inhibidores de VLA-4 de la presente invención.
Un "derivado farmacéuticamente aceptable" representa cualquier sal, éster, sal de tal éster, amida o sal de tal amida farmacéuticamente aceptable, de un compuesto de esta invención. La invención también incluye cualquier otro compuesto que, al administrarse a un paciente, puede proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de esta invención (por ejemplo, un profármaco). La invención también incluye metabolitos o residuos de un compuesto de esta invención caracterizados por la capacidad de inhibir, prevenir o suprimir la adhesión celular y las patologías mediadas por la adhesión celular.
En otra realización preferida, A se selecciona de alquilo, acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido, aroilo, heterocicloilo, alquil y arilsulfonilo, aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo, heterocicloalquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo, heterocicloalcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo y aralquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis-(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo.
Más preferiblemente, A se selecciona de acilo alifático, aroilo, aralquilcarbonilo, heterocicloilo, alcoxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo y heterocicloalquilcarbonilo. En otras realizaciones, A se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en aralquilcarbonilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido, aralquilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido y arilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido. Lo más preferiblemente, A se selecciona del grupo que consiste en fenilmetilcarbonilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido, fenilmetilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido y fenilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido.
Ejemplos de compuestos específicos preferidos de esta invención se proporcionan en la tabla 2.
Ejemplos de compuestos más preferidos incluyen compuestos descritos en la tabla 1.
Los compuestos más preferidos son los descritos en la tabla 3.
Además, los compuestos preferidos tienen una CI_{50} de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 \muM según se mide mediante un ensayo de unión a VLA-4. Inhibidores más preferidos tienen una CI_{50} inferior a aproximadamente 100 nM, más preferiblemente de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 100 nM, y lo más preferiblemente, de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 10 nM.
Inhibidores de IIb/IIIa novedosos y métodos para prepararlos
En otras realizaciones, los solicitantes han descubierto que pueden transformar con éxito inhibidores de VLA-4 novedosos que tienen una estructura de integrina para los que no existen precedentes de IIb/IIIa en inhibidores de IIb/IIIa novedosos. Por lo tanto, los solicitantes han demostrado adicionalmente la portabilidad de las estructuras de IIb/IIIa y VLA-4 creando inhibidores de IIb/IIIa novedosos, sustituyendo el determinante de especificidad de un inhibidor de VLA-4 novedoso con un determinante de especificidad de IIb/IIIa. Específicamente, los inhibidores de VLA-4 que tienen estructuras novedosas, tales como estructuras de peptoides, pueden convertirse en inhibidores de IIb/IIIa novedosos sustituyendo el determinante de especificidad de VLA-4 con un determinante de especificidad de IIb/IIIa. Por lo tanto, por ejemplo, se tiene un compuesto de fórmula I, en la que A es un determinante de especificidad de VLA-4, y B es una estructura de VLA-4, comprendiendo preferiblemente un peptoide. Entonces se sustituye el resto A original con un determinante de especificidad que tiene actividad IIb/IIIa, creando así un compuesto novedoso que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa.
Este concepto se demuestra por el compuesto A, cuya estructura se muestra a continuación:
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El compuesto A, un compuesto que tiene actividad inhibidora de VLA-4, comprende un determinante de especificidad que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y una estructura de integrina tal como se ilustra. No se notifica ningún ejemplo de esta estructura de integrina en la bibliografía de IIb/IIIa. Sustituir el determinante de especificidad de VLA-4 con un determinante de especificidad de IIb/IIIa tal como bis-piperidinilo, da como resultado un compuesto tal como el compuesto B, que es un potente inhibidor de IIb/IIIa.
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Por lo tanto, en una realización preferida, los compuestos representados por PB-1 y PB-2 también se reivindican como inhibidores de IIb/IIIa novedosos derivados mediante la combinación de estructuras de VLA4 novedosas con determinantes de especificidad de IIb/IIIa conocidos.
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en las que A es cualquier determinante de especificidad de IIb/IIIa tal como los ejemplificados en la tabla 2.
A^{3} se selecciona de NR^{1}, O, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
A^{5} se selecciona de SO_{2}R^{11}, COR^{7}, y (CR^{1}R^{2})_{n}R^{7};
n = 0-5;
m = 1-4;
r = 0, 1;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
P se selecciona de CO, SO_{2};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H; alquilo; alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo opcionalmente sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, o alcoxicarbonilo, carboxamida;
R^{7} se selecciona de H; arilo; arilo sustituido; aralquilo; alquilo; alquenilo; y alquilo opcionalmente sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, o halógeno;
R^{15} y R^{16} son independientemente H o metilo;
R^{11} se selecciona de alquilo; alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo opcionalmente sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida.
Esta conversión demuestra que los inhibidores de IIb/IIIa nuevos pueden ahora diseñarse basándose en estructuras de integrina descubiertas a partir de inhibidores de VLA-4. Por lo tanto, los inhibidores de VLA-4 de la invención son una nueva fuente de estructuras de integrina útiles para crear inhibidores de IIb/IIIa novedosos.
Para facilitar el estudio, los solicitantes han ejemplificado las preparaciones farmacéuticas y métodos de tratamiento en el presente documento ya que se refieren a los inhibidores de VLA-4 de la invención. Sin embargo, se pretende que la invención reivindicada por los solicitantes abarque las mismas preparaciones y métodos de tratamiento dados a conocer en el presente documento que comprenden inhibidores de IIb/IIIa novedosos en lugar de, o además de, los inhibidores de VLA-4 reivindicados.
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\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr \cr
\cr}
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\newpage
Los compuestos de esta invención pueden sintetizarse usando cualquier técnica convencional. Preferiblemente, estos compuestos se sintetizan químicamente a partir de materiales de partida fácilmente disponibles, tales como \alpha-aminoácidos y sus equivalentes funcionales. También se prefieren métodos modulares y convergentes para la síntesis de estos compuestos. En un enfoque convergente, por ejemplo, se juntan secciones grandes del producto final en las últimas fases de la síntesis, en lugar de mediante la adición en incrementos de pequeñas partes a una cadena molecular en crecimiento.
Los compuestos de esta invención también pueden modificarse agregando funcionalidades apropiadas para mejorar las propiedades biológicas selectivas. Tales modificaciones se conocen en la técnica e incluyen las que aumentan la penetración biológica en un sistema biológico dado (por ejemplo, sangre, sistema linfático, sistema nervioso central), aumentan la disponibilidad oral, aumentan la solubilidad para permitir una administración mediante inyección, alteran el metabolismo y alteran la tasa de excreción. Ejemplos de estas modificaciones incluyen, pero no se limitan a, esterificación con polietilenglicoles, derivatización con sustituyentes de ácidos grasos o pivolatos, conversión en carbamatos, hidroxilación de anillos aromáticos, y sustitución por heteroátomos en anillos aromáticos.
Tal como se usa a lo largo de esta solicitud, el término "paciente" se refiere a mamíferos, incluyendo seres humanos. Y el término "célula" se refiere a células de mamíferos, incluyendo células humanas.
Una vez sintetizados, las actividades y especificidades de VLA-4 o IIb/IIIa de los compuestos según esta invención pueden determinarse y/o confirmarse usando ensayos in vitro e in vivo.
Por ejemplo, la actividad inhibidora de la adhesión celular de estos compuestos puede medirse mediante la determinación de la concentración del inhibidor requerida para bloquear la unión de las células que expresan VLA-4 a placas recubiertas con fibronectina o CS1. En este ensayo se recubren pocillos de microtitulación o bien con fibronectina (que contiene la secuencia de CS-1) o bien con CS-1. Si se usa CS-1, debe conjugarse con una proteína excipiente, tal como albúmina de suero bovino, con el fin de unirse a los pocillos. Una vez recubiertos los pocillos, entonces se añaden concentraciones variantes del compuesto de prueba junto con células que expresan VLA-4, apropiadamente marcadas. Alternativamente, puede añadirse en primer lugar el compuesto de prueba y dejar que incube con los pocillos recubiertos antes de la adición de las células. Se dejan incubar las células en los pocillos durante al menos 30 minutos. Tras la incubación, se vacían los pocillos y se lavan. La inhibición de la unión se mide mediante la cuantificación de la fluorescencia o radiactividad unida a la placa para cada una de las diversas concentraciones de compuesto de prueba, así como para los controles que no contienen compuesto de prueba.
Células que expresan VLA-4 que pueden utilizarse en este ensayo incluyen células Ramos, células Jurkat, células de melanoma A375, así como linfocitos de sangre periférica (PBL) humanos. Estas células están comercialmente disponibles y pueden marcarse fluorescente o radiactivamente si se desea.
También puede emplearse un ensayo de unión directa para cuantificar la actividad inhibidora de los compuestos de esta invención. ("DBA") En ensayos de unión directa, por ejemplo, una proteína de fusión VCAM-IgG que contiene los dos primeros dominios de inmunoglobulina de VCAM (D1D2) unidos sobre la región de bisagra de una molécula de IgG1 ("VCAM 2D-IgG"), se conjuga con una enzima marcadora, tal como fosfatasa alcalina ("FA"). La síntesis de esta proteína de fusión VCAM-IgG se describe en la publicación PCT WO 90/13300. La conjugación de la esa proteína de fusión con una enzima marcadora puede conseguirse mediante métodos de reticulación bien conocidos en la técnica.
Entonces se coloca el conjugado de enzima VCAM-IgG en los pocillos de una placa de filtración de múltiples pocillos, tal como la contenida en el sistema de ensayo de múltiples tamices Millipore (Millipore Multiscreen Assay System, Millipore Corp., Bedford, MA). Entonces se añaden concentraciones variantes del compuesto inhibidor de prueba a los pocillos seguido de la adición de células que expresan VLA-4. Las células, el compuesto y el conjugado de enzima VCAM-IgG se mezclan juntos y se les deja incubar a temperatura ambiente.
Tras la incubación, se drenan los pocillos a vacío, dejando atrás las células y todo VCAM unido. La cuantificación de VCAM unido se determina mediante la adición de un sustrato colorimétrico apropiado para la enzima conjugada a VCAM-IgG y la determinación de la cantidad de producto de reacción. La disminución del producto de reacción indica el aumento de la actividad inhibidora de la unión. El protocolo se describe más específicamente a continuación:
A. Preparación de la placa para el ensayo
1. Bloquear una placa de filtración de un sistema de ensayo de múltiples tamices Millopore^{1} de 96 pocillos con 200 \mul/pocillo de tampón de bloqueo (1x solución salina tamponada con fosfato, 0,1% de Tween 20, 1% de BSA) durante al menos 1 hora a temperatura ambiente.
\newpage
2. Drenar la placa con el colector de vacío, y lavar con 200 \mul/pocillo de tampón de ensayo (solución salina tamponada con Tris, 0,1% de BSA, glucosa 2 mM, HEPES 10 mM, pH 7,7) drenando la placa entre medias. Repetir dos veces. Luego secar la parte de debajo de la placa con papel para eliminar el exceso de tampón.
B. Adición de reactivos de ensayo a la placa
3. Preparar una disolución de VCAMIg-FA 4 \mug/ml VCAMIg-AP (fosfatasa alcalina unida a VCAMIg) en tampón de ensayo y filtrar con un filtro de jeringuilla de unión a proteína baja de 0,2: (Gelman Sciences número 4454). A partir de esta disolución madre, preparar una disolución de trabajo de VCAMIg-FA 0,4 \mug/ml en tampón de ensayo. Añadir 25 \mul de VCAMIg-FA 0,4 \mug/ml a cada pocillo.
5. Preparar diluciones de los compuestos que van a probarse en tampón de ensayo. Las concentraciones deben ser de 4x la concentración final deseada y hacerse pasar por triplicado. Añadir 25 \mul de las diluciones de compuesto a los pocillos designados.
6. Añadir 25 \mul de tampón de ensayo (en lugar del compuesto de ensayo) a los pocillos de unión total (TB) y 75 \mul de tampón de ensayo a los pocillos de unión no específica (NSB) que adicionalmente no reciben células.
7. Se centrifugan las células Jurkat para eliminar el medio de cultivo celular y se lavó una vez en tampón de ensayo. Se vuelven a suspender las células Jurkat lavadas hasta una concentración de 8 x 10^{6}/ml en tampón de ensayo que contiene MnCl_{2} 2 mM. Pipetear la mezcla arriba y abajo para garantizar una suspensión celular uniforme. Añadir 50 \mul de suspensión celular a cada pocillo excepto a los pocillos de NSB.
8. Golpear suavemente los lados de la placa para mezclar bien los contenidos. Incubar la placa durante 60 minutos a temperatura ambiente (TA).
C. Ensayo de desarrollo del color
9. Colocar la placa sobre el colector de vacío para drenar el contenido del pocillo. Lavar dos veces con 100 \mul/pocillo de tampón de lavado (tampón de ensayo que contiene MnCl_{2} 1 mM). Drenar la placa y secar sobre toallas de papel.
10. Añadir 10 mg/ml de fosfato de 4-nitrofenilo al tampón de sustrato (glicina 0,1 M, ZnCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 1 mM, pH 10,5. Añadir 100 \mul/pocillo e incubar durante exactamente 30 minutos a TA.
11. Para parar la reacción, añadir 100 \mul/pocillo de NaOH 3 N.
12. Leer la placa de 96 pocillos en un lector de placas ELISA de Molecular Devices a 405 nm. Analizar los datos con un programa SoftMax.
Con el fin de evaluar la especificidad inhibidora de VLA-4 de los compuestos de esta invención, pueden realizarse ensayos para otros grupos principales de integrinas, es decir, \beta2 y \beta2, así como otras 81 integrinas, tales como VLA-5, VLA-6 y \alpha4\beta7. Estos ensayos pueden ser similares a los ensayos de inhibición de la adhesión y de unión directa descritos anteriormente, sustituyendo la célula que expresa integrina apropiada y el ligando correspondiente. Por ejemplo, las células polimorfonucleares (PMN) expresan integrinas \beta2 sobre su superficie y se unen a ICAM. Las integrinas \beta3 están implicadas en la agregación plaquetaria y puede medirse la inhibición en un ensayo de agregación plaquetaria habitual. VLA-5 se une específicamente a las secuencias Arg-Gly-Asp, mientras que VLA-6 se une a la laminina. \alpha4\beta7 es un homólogo recientemente descubierto de VLA-4, que también se une a la fibronectina y VCAM. La especificidad con respecto a \alpha4\beta7 se determina en un ensayo de unión que utiliza el conjugado marcador de VCAM-IgG-enzima descrito anteriormente y una línea celular que expresa \alpha4\beta7, pero no VLA-4, tal como RPMI-8866 o células JY.
Una vez identificados los inhibidores de VLA-4, pueden caracterizarse adicionalmente en ensayos in vivo. Un ensayo así prueba la inhibición de la hipersensibilidad al contacto de un animal, tal como se describe por P.L. Chisholm et al., "Monoclonal Antibodies to the Integrin \alpha-4 Subunit Inhibit the Murine Contact Hypersensitivitt Response", Eur. J. Immunol., 23, págs. 682-688 (1993) y en "Current Protocols in Immunology", J. E. Coligan, et al., Eds., John Wiley & Sons, Nueva York, 1, págs. 4,2,1-4,2,5 (1991), cuyas descripciones se incorporan al presente documento como referencia. En estos ensayos, se sensibiliza la piel de un animal mediante exposición a un agente irritante, tal como dinitrofluorobenceno, seguido por una ligera irritación física, tal como rascar la piel ligeramente con un borde afilado. Tras un periodo de recuperación, se vuelven a sensibilizar los animales siguiendo el mismo procedimiento. Varios días después de la sensibilización, se expone una oreja del animal al agente irritante químico, mientras que se trata la otra oreja con una disolución control no irritante. Poco después de tratar las orejas, se administran a los animales diversas dosis del inhibidor de VLA-4 mediante inyección subcutánea. La inhibición in vivo de la inflamación asociada con la adhesión celular se evalúa midiendo la respuesta de la hinchazón de la oreja del animal en la oreja tratada frente a la no tratada. La hinchazón se mide usando compases u otro instrumento adecuado para medir el espesor de la oreja. De esta manera, pueden identificarse los inhibidores de esta invención que se adecuan mejor para inhibir la inflamación.
Otro ensayo in vivo que puede emplearse a los inhibidores de esta invención es el ensayo del asma de la oveja. Este ensayo se realiza esencialmente tal como se describe por W. M. Abraham et al., "\alpha-Integrins Mediate Antigen-induced Late Bronchial Responses and Prolonged Airway Hyperresponsiveness in Sheep", J. Clin. Invest., 93, págs. 776-87 (1994), cuya descripción se incorpora al presente documento como referencia. Este ensayo mide la inhibición de la hiperreactividad de las vías aéreas y las respuestas de las vías aéreas en fase tardía inducidas por antígeno Ascaris en ovejas alérgicas.
Los compuestos de esta invención también pueden probarse en un ensayo de agregación plaquetaria.
Los compuestos de la presente invención pueden usarse en forma de sales farmacéuticamente aceptables derivadas a partir de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos. Se incluyen entre tales sales de ácidos las siguientes: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenil-propionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato. Sales de bases incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino, tales como sales de sodio y de potasio, sales de metal alcalinotérreo, tales como sales de calcio y de magnesio, sales con bases orgánicas, tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, tris(hidroximetil)metilamina y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina, y similares. También, los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferior, tales como cloruro, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo, tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga, tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo y otros. Así se obtienen productos dispersables o solubles en agua o aceite.
Los compuestos de la presente invención pueden formularse en composiciones farmacéuticas que pueden administrarse por vía oral, parenteral, mediante pulverizador de inhalación, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o mediante un depósito implantado. El término "parenteral" tal como se usa en el presente documento incluye técnicas de infusión o inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención comprenden cualquiera de los compuestos de la presente invención, o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos, junto con cualquier excipiente farmacéuticamente aceptable. El término "excipiente" tal como se usa en el presente documento incluye adyuvantes y vehículos aceptables. Excipientes farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de esta invención incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina sérica humana, sustancias tampón tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.
Según esta invención, las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una preparación inyectable estéril, por ejemplo una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse según técnicas conocidas en la técnica usando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico, parenteralmente aceptable, por ejemplo como una disolución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua, disolución de Ringer y disolución de cloruro de sodio isotónica. Además, se emplean convencionalmente aceites estériles, fijos, como medio disolvente o de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo suave incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados de glicérido, son útiles en la preparación de preparaciones inyectables, como lo son los aceites naturales farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas suspensiones o disoluciones de aceite también pueden contener un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga, tal como Ph. Helv o alcohol similar.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse por vía oral en cualquier forma farmacéutica oralmente aceptable incluyendo, pero sin limitarse a, cápsulas, comprimidos, disoluciones o suspensiones acuosas.
En el caso de comprimidos para uso oral, los excipientes que se usan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz. También se añaden normalmente agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio. Para la administración por vía oral en forma de cápsula, diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se requieren suspensiones acuosas para el uso oral, el principio activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también pueden añadirse ciertos agentes edulcorantes, aromatizantes o colorantes.
Alternativamente, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse en forma de supositorios para la administración por vía rectal. Estos pueden prepararse mezclando el principio con un excipiente adecuado no irritante que es sólido a temperatura ambiente pero líquido a la temperatura rectal y por tanto se fundirá en el recto liberando el fármaco. Tales materiales incluyen mantequilla de cacao, cera de abejas y polietilenglicoles.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención también pueden administrarse por vía tópica, especialmente cuando la diana del tratamiento incluye áreas u órganos fácilmente accesibles mediante aplicación tópica, incluyendo enfermedades del ojo, la piel, o el tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos.
La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior puede realizarse en una formulación de supositorio rectal (véase anteriormente) o en una formulación de enema adecuada. También pueden usarse parches tópicos transdérmicos.
Para las aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una pomada adecuada que contiene el principio activo suspendido o disuelto en uno o más excipientes. Los excipientes para la administración por vía tópica de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, propilenglicol, polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una loción o crema adecuada que contiene los principios activos suspendidos o disueltos en uno o más excipientes farmacéuticos. Excipientes farmacéuticos incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitano, polisorbato 60, ceras de ésteres cetílicos, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.
Para el uso oftálmico, las composiciones farmacéuticas pueden formularse como suspensiones micronizadas en solución salina estéril de pH ajustado, isotónica, o, preferiblemente, como disoluciones en solución salina estéril de pH ajustado, isotónica, ya sea con o sin un conservante tal como cloruro de bencilalconio. Alternativamente, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una pomada tal como vaselina.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención también pueden administrarse mediante aerosol nasal o inhalación mediante el uso de un pulverizador, un inhalador de polvo seco o un inhalador de dosis medida. Tales composiciones se preparan según técnicas bien conocidas en la técnica de la formulación farmacéutica y pueden prepararse como disoluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, estimulantes de la absorción para mejorar la biodisponibilidad, fluorocarbonos, y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes convencionales.
La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales excipientes para producir una forma de una única dosis variará dependiendo del huésped tratado, y del modo particular de administración. Sin embargo, debe entenderse que una dosis específica y régimen de tratamiento para cualquier paciente particular dependerá de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, momento de la administración, tasa de excreción, combinación de fármacos, y el criterio del médico que le trate y la gravedad de la enfermedad particular que está tratándose. La cantidad de principio activo también puede depender del agente terapéutico o profiláctico, si lo hay, con el que se administra el principio conjuntamente.
La dosis y velocidad de dosis de los compuestos de esta invención eficaz para prevenir, suprimir o inhibir la adhesión celular dependerá de una diversidad de factores, tales como la naturaleza del inhibidor, el tamaño del paciente, el objetivo del tratamiento, la naturaleza de la patología que va a tratarse, la composición farmacéutica específica usada, y el criterio del médico que le trata. Son útiles los niveles de dosis de entre aproximadamente 0,001 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día del principio activo.
Según otra realización, las composiciones que contienen un compuesto de esta invención también pueden comprender un agente adicional seleccionado del grupo que consiste en corticosteroides, broncodilatadores, antiasmáticos (estabilizantes mastocitos), antiinflamatorios, antirreumáticos, inmunosupresores, antimetabolitos, inmunomoduladores, antipsoriásicos y antidiabéticos. Pueden seleccionarse compuestos específicos dentro de cada una de estas clases a partir de cualquiera de los enumerados bajo el encabezado de grupo apropiado en "Comprehensive Medicinal Chemistry", Pergamon Press, Oxford, Inglaterra, págs. 970-986 (1990), cuya descripción se incorpora al presente documento como referencia. También se incluyen dentro de este grupo compuestos tales como teofilina, sulfasalazina y aminosalicilatos (antiinflamatorios); ciclosporina, FK-506, y rapamicina (inmunosupresores); ciclofosfamida y metotrexato (antimetabolitos); esteroides (inhalados, orales o tópicos) e interferonas (inmunomoduladores).
Según otras realizaciones, la invención proporciona usos de los compuestos reivindicados en la fabricación de medicamentos para prevenir, inhibir o suprimir la inflamación asociada con la adhesión celular y las respuestas inmunitarias o autoinmunitarias asociadas con la adhesión celular. La adhesión celular asociada con VLA-4 desempeña un papel central en una diversidad de enfermedades de inflamación, inmunitarias y autoinmunitarias. Por lo tanto, la inhibición de la adhesión celular por los compuestos de esta invención puede utilizarse para tratar o prevenir enfermedades inflamatorias, inmunitarias o autoinmunitarias incluyendo, pero sin limitarse a, la artritis, asma, alergias, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, enfermedad cardiovascular, trombosis o agregación plaquetaria nociva, rechazo de aloinjerto, enfermedad neoplásica, psoriasis, esclerosis múltiple, inflamación de SNC, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, nefritis glomerular y enfermedad renal inflamatoria relacionada, diabetes, inflamación ocular (tal como uveitis), aterosclerosis, enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias. Esta invención también proporciona formulaciones farmacéuticas que contienen estos inhibidores de la adhesión celular mediada por VLA-4 y métodos para usar los compuestos y composiciones de la invención para la inhibición de la adhesión celular. Preferiblemente, las enfermedades que van a tratarse con los métodos de esta invención se seleccionan de asma, artritis, alergias, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, enfermedad cardiovascular, trombosis o agregación plaquetaria nociva, rechazo de aloinjerto, enfermedad neoplásica, psoriasis, esclerosis múltiple, inflamación de SNC, enfermedad de Chron, inflamación ocular (tal como uveitis), arterosclerosis, psoriasis, rechazo de transplante, esclerosis múltiple y enfermedad inflamatoria del intestino.
Estos usos pueden emplear los compuestos de esta invención en una monoterapia o en combinación con un agente antiinflamatorio o inmunosupresor. Tales terapias de combinación incluyen la administración de los agentes en una forma de una única dosis o en formas de dosis múltiples administradas al mismo tiempo o en momentos diferentes.
Preparación de AX7
A)
Se añadió lentamente una disolución de 2-bromoacetato de bencilo en NMP (10 ml) a una disolución de éster \beta-alanina t-butilo (67 mg, 0,124 mmol) en NMP (20 ml) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 4 h y a TA durante 6 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc (150 ml), se lavó con agua (50 ml x 2), NaCl saturado (30 ml) y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (1:1) como eluyente para dar 210 mg (72%) de la amina. Se añadió gota a gota cloruro de p-anisoílo a una disolución de esta amina (160 mg, 0,55 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) a 5°C en presencia de Et_{3}N (167 mg; 1,65 mmol). Después de agitar a TA durante 18 h, se diluyó la mezcla con Et_{2}O (150 ml), se lavó con ácido cítrico al 5% (30 ml), NaHCO_{3} saturado (30 ml), NaCl saturado (30 ml) y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexano/EtOAc (2:1) como eluyente para dar 230 mg (98%) del producto deseado. ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,33 (m, 7 H, Ar), 6,80 (m, 2 H, Ar), 5,15 (s, 2 H, Bn), 4,19 (m, 2 H), 3,79 (s, 3 H, OMe), 2,62 (m, 2 H), 2,55 (m, 2 H), 1,40 (s, 9 H); CCF, hexanos/EtOAc (1:1), R_{f} = 0,43.
B)
Se agitaron el compuesto de la etapa A (170 mg; 0,4 mmol), Pd(OH)_{2} al 10% (140 mg, 0,1 mmol) y EtOAc (30 ml) a TA bajo una atmósfera de H_{2} (1 atm) durante 18 h. Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado a presión reducida para dar 100 mg (74%) del compuesto deseado. ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,32 (m, 2 H, Ar), 6,88 (m, 2 H, Ar), 4,16 (m, 2 H), 3,79 (s, 3 H, OMe), 3,67 (m, 2 H), 2,56 (m, 2 H), 1,40 (s, 9 H); CCF, 10% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,09.
C)
Se activó el compuesto de la etapa B (50 mg, 0,148 mmol) en DMF (1,0 ml) con EDC\cdotHCl (34 mg, 0,178 mmol) durante 15 min. Se unió el ácido activado con (33 mg, 0,148 mmol) a TA durante 18 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc, se lavó con ácido cítrico al 5%, NaHCO_{3} saturado, y se secó con Na_{2}SO_{4}. Se concentró la fase orgánica a presión reducida para dar 67 mg (84%) del compuesto deseado. ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,60-6,61 (m, 10 H, Ar+NH), 4,25-3,30 (m, 9 H), 3,13-2,48 (m, 4 H), 1,54 (m, 2 H), 1,34 (s, 9 H), 1,18 (m, 1 H), 0,84 (m, 6 H); MS, m/z 540 (C_{26}H_{33}N_{3}O_{6} de M^{+}+1 requiere 540).
D)
Se trató una disolución del compuesto de la etapa C (67 mg, 0,124 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) con TFA (5 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 6 h, luego se concentró a vacío. Se purificó el producto crudo sobre una columna C18 en fase inversa Vydac (22 mm x 25 cm) usando un gradiente lineal del 15% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) al 40% de CH_{3}CN/H_{2}O, (TFA al 0,1%) con una velocidad de flujo de 10 ml/min para dar AX7 (10,0 mg, rendimiento aislado del 17%): ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,94 (m, 1H), 7,59-6,91 (m, 9H), 4,36-4,03 (m, 4H), 3,76 (s, 3H, OMe), 3,53-3,11 (m, 4H), 2,59 (m, 2H), 1,52-0,71 (m, 9H); MS, m/z 484 (C_{26}H_{33}N_{3}O_{6} de M^{+}+1 requiere 484).
Preparación de BX17
A)
Se añadió gota a gota una disolución de fosgeno en tolueno (1,93 M; 20 ml; 38,5 mmol) a una disolución de ácido 2-metilamino-5-yodobenzoico (6,93 g; 25 mmol) y Na_{2}CO_{3} (2,65 g) en agua (70 ml). Después de agitar a TA durante 4 h, se filtró la mezcla de reacción y se recogieron los sólidos. Se lavaron los sólidos con agua (100 ml x 2) y se secaron para proporcionar 5,9 g (78%) del producto deseado. Se calentó una mezcla del sólido anterior (5,33 g, 17,6 mmol), clorhidrato del éster etílico de \beta-alanina (3,07 g; 20 mmol), Et_{3}N (2,23 g, 22 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (50 mg; 0,41 mmol) en DMF (50 ml) a 60°C durante 2 h. Se concentró la mezcla a vacío y se diluyó el residuo con EtOAc (90 ml), se lavó con agua, NaHCO_{3} saturado, y Nacl saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se obtuvieron 5,7 g (86%) del compuesto deseado: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,52-7,46 (m, 2 H, Ar+NH), 6,67 (s, 1 H, NH), 6,40 (d, J = 8,7 Hz, 1 H, Ar), 4,14 (q, J = 7,2 Hz, 2 H), 3,61 (q, J = 6,0 Hz, 2 H), 2,79 (s, 3 H, N-Me), 2,58 (t, J = 6,0 Hz, 3 H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS, m/z 399 (C_{13}H_{17}N_{2}O_{3}I de M^{+}+Na requiere 399).
\newpage
B)
Se agitó una mezcla del compuesto de la etapa A (3,76 g; 10 mmol), bromuro de \alpha-bromoacetilo (3,03 g; 15 mmol), CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y agua (25 ml) a TA durante 2 h. Después de separarla, se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se obtuvieron 4,2 g (85%) del compuesto deseado: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,87-7,80 (m, 2 H, Ar), 7,06 (d, J = 8,2 Hz, 1 H, Ar), 6,75 (s, 1 H, NH), 4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,73-3,57 (m, 4 H), 3,14 (s, 3 H, N-Me), 2,56 (t, J = 5,8 Hz, 3 H), 1,22 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
C)
Se agitó una mezcla del compuesto de la etapa B (3,1 g; 6,24 mmol) y Cs_{2}CO_{3} (3,05 g; 9,36 mmol) en DMF (20 ml) a TA con nitrógeno durante 2 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc (90 ml), se lavó con agua, ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexano/EtOAc (1:2) como eluyente para dar 1,65 g (64%) del compuesto deseado: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, -ppm) 8,29 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,76 (m, 1 H), 6,90 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 4,10 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 4,04-3,83 (m, 4 H), 3,32 (s, 3 H, N-Me), 2,77-2,56 (m, 2 H), 1,22 (t, J = 7 ,1 Hz, 3 H); CCF, hexano/EtOAc (1:1), R_{f} = 0,22.
D)
Se calentó una mezcla del compuesto de la etapa C (100 mg; 0,24 mmol), 2-metilfenilurafenilamina (87 mg; 0,36 mmol), PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (17 mg; 0,024 mmol) y Bu_{3}N (89 mg, 0,48 mmol) en DMF (10 ml) a 100°C con CO (1 atm) durante 18 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc (90 ml), se lavó con ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando MeOH al 5% en CH_{2}Cl_{2} como eluyente para dar 40 mg (30%) del compuesto deseado: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,18 (s, 1 H), 8,55 (s, 1 H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,69 (s, 1 H), 7,41 (d, J = 8,3 Hz, 3 H), 7,24-7,09 (m, 7 H), 4,10 (t, J = 7,1 Hz, 2 H), 4,01-3,85 (m, 4 H), 3,36 (s, 3 H, N-Me), 2,70-2,59 (m, 2 H), 2,24 (s, 3 H, Me), 1,22 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS, m/z 580 (C_{30}H_{31}N_{5}O_{6} de M^{+}+Na requiere 580); CCF, 5% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,56.
E)
Se trató una disolución del compuesto de la etapa D (20 mg, 0,036 mmol) en MeOH (4 ml) con LiOH acuoso (2 N, 2 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 2 h, luego se acidificó con TFA (hasta pH = 5-6). Se purificó el producto sobre una columna C18 en fase inversa Vydac (22 mm x 25 cm) usando un gradiente lineal del 15% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) al 27% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) con una velocidad de flujo de 10 ml/min para dar BX17 (12,0 mg, rendimiento aislado del 63%): ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,02 (s, 1 H), 8,34 (s, 1 H), 8,16 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,91-6,90 (m, 11 H), 4,11-3,75 (m, 4 H), 3,33 (s, 3 H, N-Me), 2,88-2,56 (m, 2 H), 2,24 (s, 3 H, Me); MS, m/z 530 (C_{28}H_{27}N_{5}O_{6} de M^{+}+1 requiere 530).
Preparación de BX31
A)
Se añadió cloruro bencenosulfonilo (7,1 g, 40 mmol) a una disolución de ácido 3-metil-4-nitrobenzoico (3,62 g, 20 mmol) en piridina (48 ml) a TA. Después de agitar durante 10 min, se enfrió la mezcla hasta 5°C y se añadió alcohol t-butílico (4,44 g, 60 mmol). Se agitó la mezcla resultante a TA durante 2 h. Se vertió la mezcla sobre una mezcla de hielo y agua (200 ml; 1:1). Se recogieron los sólidos y se lavaron con agua (30 ml x 3). Después secar a vacío, se obtuvieron 4,6 g (97%) del éster.
Se añadió N-bromosuccinimida (2,94 g, 16,5 mmol) y peróxido de benzoxilo (182 mg, 0,75 mmol) a una disolución del éster anterior (3,55 g, 15 mmol) en CCl_{4} (50 ml) a TA. Se sometió a reflujo la mezcla durante 18 h. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (19:1) como eluyente para dar 1,90 g (40%) del bromuro como un aceite amarillo.
Se añadió una disolución del bromuro (1,57 g, 10 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) a una disolución de metilamina (2 N en THF; 30 ml; 60 mmol) a TA durante un periodo de 60 min. Se agitó mezcla resultante a TA durante 18 h y luego se concentró a vacío. Se disolvió el residuo en CH_{2}Cl_{2} (80 ml), se lavó con NaHCO_{3} saturado, (20 ml), y Nacl saturado (20 ml) y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (1:1) como eluyente para dar 810 mg (61%) del compuesto deseado como aceite amarillo claro: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 8,47 (s, 1 H), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,02 (s, 2 H, Bn), 2,43 (s, 3 H, Me), 1,62 (s, 1 H, NH), 1,58 (s, 9 H); CCF, hexanos/EtOAc (1:1), R_{f} = 0,27.
B)
Se agitó una mezcla del compuesto de la etapa A (810 mg; 3,05 mmol), dicarbonato de di-t-butilo (1,33 g, 6,1 mmol) y Et_{3}N (926 mg, 9,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) durante 18 h. Se diluyó la mezcla con CH_{2}Cl_{2} (50 ml), se lavó con ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (3:1) como eluyente para dar 1,06 g (95%) del producto.
Se agitó una mezcla de amina protegida (1,06 g; 2,9 mmol), Pd/C al 10% (300 mg, 0,28 mmol) y EtOH (40 ml) a TA bajo una atmósfera de H_{2} (50 psi) durante 18 h. Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (4:1) como eluyente para dar 620 mg (64%) del compuesto deseado: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,72-7,65 (m, 2 H, Ar), 6,56 (d, J = 8,3 Hz, 1 H, Ar), 5,06 (s, 2 H, NH), 4,32 (s, 2 H, Bn), 2,73 (s, 3 H, Me), 1,55 (s, 9 H), 1,45 (s, 9 H); CCF, hexanos/EtOAc (3:1), R_{f} = 0,49.
C)
Se sometió a reflujo una mezcla del compuesto de la etapa B (0,62 g; 1,84 mmol) y dicarboxilato de dimetilacetileno (275 mg; 1,93 mmol) en MeOH (30 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno durante 1 h. Después de eliminar el disolvente en exceso, se obtuvieron 0,85 g (96%) de los aductos. Se agitó una mezcla de estos aductos (0,85 g, 1,78 mmol), Pd/C al 10% (300 mg, 0,28 mmol) y EtOH (40 ml) a TA bajo una atmósfera de H_{2} (40 psi) durante 5 h. Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (3:1) como eluyente para proporcionar 0,75 g (88%) de producto reducido.
Se trató una disolución del producto reducido anterior (0,99 g, 2,06 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) a TA con TFA (10 ml). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h. Se concentró la mezcla a presión reducida para proporcionar 0,68 g (99%) del producto deseado como la sal de TFA: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 8,57 (s, 1 H, NH), 7,89 (s, 1 H, Ar), 7,79 (d, J = 9,0 Hz, 1 H, Ar), 6,76 (d, J = 8,8 Hz, 1 H, Ar), 6,34 (d, J = 8,6 Hz, 1 H, NH), 4,64 (m, 1 H), 3,64 (s, 3 H, Me), 3,61 (s, 3 H, Me), 3,05-2,87 (m, 2 H), 2,43 (s, 3 H, N-Me); MS, m/z 325 (C_{15}H_{2}ON_{2}O_{6} de M+1 requiere 325); CCF, 10% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,13.
D)
Se sometió a reflujo una mezcla del compuesto de la etapa C (200 mg; 0,62 mmol) y NaOMe (0,5 N; 2,47 ml; 1,23 mmol) en MeOH (30 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno durante 5 h. Después de enfriar hasta 0°C, se añadió HCl (1 N, 2 ml). Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1:9) como eluyente para dar 110 mg (82%) del ácido deseado como sólido amarillo claro: ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) 7,58 (s, 1 H, Ar), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 1 H, Ar), 6,62 (s, 1 H, NH), 6,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H, Ar), 5,45 (d, J = 16,4 Hz, 1 H, Bn), 5,16 (s, 1 H), 3,92 (d, J = 16,6 Hz, 1 H, Bn), 3,59 (s, 3 H, Me), 2,90 (s, 3 H, Me), 2,76 (m, 2 H); MS, m/z 293 (C_{14}H_{16}N_{2}O_{5} de M+1 requiere 293); CCF, 10% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,47.
E)
Se activó ácido de la etapa D (45 mg, 0,154 mmol) en DMF (1,0 ml) con EDC\cdotHCl (35,5 mg, 0,185 mmol) durante 15 min. Se unió el ácido activado con 2-metilfenilurafenilamina (41 mg, 0,169 mmol) a TA durante 72 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc, se lavó con ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Se concentró la disolución orgánica a presión reducida para dar el compuesto deseado con un rendimiento del 82%: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,70-6,40 (m, 15 H), 5,50 (m, 1 H, Bn), 5,11 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H, Bn), 3,60 (s, 3 H, OMe), 2,92 (s, 3 H, Me), 2,81-2,48 (m, 2 H), 2,23 (s, 3 H, Me); MS, m/z 538 (C_{28}H_{29}N_{5}O_{5} de M+Na requiere 538).
F)
Se trató una disolución del compuesto de la etapa E (65 mg, 0,13 mmol) en MeOH (3 ml) con LiOH acuoso (2 N, 1 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 2 h, luego se acidificó con TFA (hasta pH = 5-6). Se purificó el producto sobre una columna C18 en fase inversa Vydac (22 mm x 25 cm) usando un gradiente lineal del 15% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) al 32% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) con una velocidad de flujo de 10 ml/min para dar BX31 (15 mg, rendimiento aislado del 23%): ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,73 (s, 1 H), 8,94 (s, 1 H), 7,89-6,40 (m, 13 H), 5,52 (d, J = 16,6 Hz, 1 H), 5,11 (m, 1 H), 3,88 (d, J = 16,6 Hz, 1 H), 2,94 (s, 3 H, NMe), 2,82-2,52 (m, 2 H), 2,23 (s, 3 H, Me); MS, m/z 502 (C_{27}H_{27}N_{5}O_{5} de M^{+}+1 requiere 502).
Preparación de BX36
A)
Se añadió cloruro bencenosulfonilo (19,4 g, 110 mmol) a una disolución de ácido 4-metil-3-nitrobenzoico (10 g, 55 mmol) en piridina (100 ml) a TA. Después de agitar durante 10 min., se enfrió la mezcla hasta 5°C y se añadió alcohol t-butílico (12,2 g, 165 mmol). Se agitó mezcla resultante a TA durante 2 h. Se vertió la mezcla sobre una mezcla de hielo y agua (500 ml; 1:1). Se recogieron los sólidos y se lavaron con agua (30 ml x 3). Después de secarlos a vacío, se obtuvieron 12,5 g (96%) de éster.
Se añadió N-bromosuccinimida (5,88 g, 32 mmol) y peróxido de benzoxilo (727 mg, 3 mmol) a una disolución del éster anterior (7,1 g, 30 mmol) en CCl_{4} (50 ml) a TA. Se sometió a reflujo la mezcla durante 18 h. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (19:1) como eluyente para dar 8,0 g (91%) del bromuro como un aceite amarillo. Se añadió una disolución del bromuro (3,16 g, 10 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) a una disolución de metilamina (2 N en THF; 30 ml; 60 mmol) a TA durante un periodo de 60 min. Se agitó mezcla resultante a TA durante 18 h y se concentró a vacío. Se disolvió el residuo en CH_{2}Cl_{2} (80 ml), se lavó con NaHCO_{3} saturado (20 ml), y Nacl saturado (20 ml) y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (1:1) como eluyente para dar 1,43 g (54%) de la amina deseada como un aceite amarillo claro: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 8,47 (s, 1 H), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,02 (s, 2 H, Bn), 2,43 (s, 3 H, Me), 1,62 (s, 1 H, NH), 1,58 (s, 9 H); CCF, 10% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,49.
B)
Se agitó una mezcla del compuesto de la etapa A (1,09 g; 3,45 mmol), dicarbonato de di-t-butilo (1,5 g, 6,9 mmol) y Et_{3}N (1,05 g, 10,35 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) durante 18 h. Se diluyó la mezcla con CH_{2}Cl_{2} (50 ml), se lavó con ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexano/EtOAc (3:1) como eluyente para dar 1,16 g (92%) del producto.
Se agitó una mezcla de la amina protegida (1,16 g; 3,17 mmol), Pd/C al 10% (300 mg, 0,28 mmol) y EtOH (40 ml) a TA bajo una atmósfera de H_{2} (50 psi) durante 18 h. Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexanos/EtOAc (4:1) como eluyente para dar 0,78 g (73%) del compuesto deseado: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,25-7,0 (m, 3 H, Ar), 4,60 (s, 2 H, NH), 4,34 (s, 2 H, Bn), 2,71 (s, 3 H, Me), 1,54 (s, 9 H), 1,45 (s, 9 H); CCF, hexanos/EtOAc (4:1), R_{f} 0,29.
C)
Se sometió a reflujo una mezcla del compuesto de la etapa B (0,78 g; 2,32 mmol) y dicarboxilato de dimetilacetileno (363 mg; 2,55 mmol) en MeOH (30 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. Después de eliminar el disolvente en exceso, se obtuvieron 1,05 g (95%) de los aductos. Se agitó una mezcla de estos aductos (1,05 g, 2,2 mmol), Pd/C al 10% (300 mg, 0,28 mmol) y EtOH (40 ml) a TA bajo una atmósfera de H_{2} (50 psi) durante 6 h. Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado a presión reducida para proporcionar 0,99 g (94%) del producto reducido.
Se trató una disolución del producto reducido anterior (0,99 g, 2,06 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) a TA con TFA (15 ml). Se agitó la reacción durante 4 h. Se concentró la mezcla a presión reducida para proporcionar 0,90 g (99%) del compuesto deseado como la sal de TFA: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 8,63 (s, 1 H), 7,37-7,26 (m, 3 H, Ar), 5,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H, NH), 4,53 (m, 1H), 4,15 (m, 2H, Bn), 3,64 (s, 3 H, Me), 3,62 (s, 3 H, Me), 3,04-2,85 (m, 2 H), 2,57 (s, 3 H, Me); CCF, 10% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,22.
D)
Se sometió a reflujo una mezcla del compuesto de la etapa C (550 mg; 1,70 mmol) y NaOMe (0,5 N; 6,8 ml; 3,4 mmol) en MeOH (60 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno durante la noche. Después enfriar hasta 0ºC, se añadió HCl (1 N, 5 ml). Después de eliminar el disolvente en exceso, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida usando MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1:9) como eluyente para dar 200 mg (40%) del ácido deseado como un sólido amarillo claro: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 7,18 (s, 1 H, Ar), 7,04 (s, 2 H, Ar), 6,17 (s, 1 H, NH), 5,47 (t, J = 6,6, 1 H), 5,07 (m, 3 H, OMe), 3,89 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,58 (s, 3 H, Me), 2,89 (s, 3 H, Me), 2,83-2,60 (s, 2 H); MS, m/z 291 (C_{14}H_{16}N_{2}O_{5} de M-1 requiere 291); CCF, 10% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}, R_{f} = 0,22.
E)
Se activó el ácido de la etapa D (50 mg, 0,17 mmol) en DMF (0,5 ml) con EDC (39 mg, 0,204 mmol) durante 15 min. Se unió el ácido activado con 2-metilfenilurafenilamina (45 mg, 0,188 mmol) a TA durante 96 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc, se lavó con ácido cítrico al 5%, y NaHCO_{3} saturado y se secó con Na_{2}SO_{4}. Se concentró la disolución orgánica a presión reducida para dar el compuesto deseado con un rendimiento del 10%: ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,97-8,57 (m, 2 H), 7,95-6,50 (m, 12 H), 6,10 (m, 1H), 5,50 (m, 1 H, Bn), 4,98 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H, Bn), 3,58 (s, 3 H, OMe), 2,90 (s, 3 H, Me), 2,89-2,55 (m, 2 H), 2,20 (s, 3 H, Me); MS, m/z 538 (C_{28}H_{29}N_{5}O_{5} de M+Na requiere 538).
F)
Se trató una disolución del compuesto de la etapa E (9,0 mg, 0,017 mmol) en MeOH (3 ml) con LiOH acuoso (2 N, 1 ml). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 2 h, luego se acidificó con TFA (hasta pH = 5-6). Se purificó el producto sobre una columna C18 en fase inversa Vydac (22 mm x 25 cm) usando un gradiente lineal del 15% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) al 32% de CH_{3}CN/H_{2}O (TFA al 0,1%) con una velocidad de flujo de 10 ml/min para dar BX36 (3,0 mg, un rendimiento aislado del 35%): ^{1}H RMN (DMSO-d^{6}, 300 MHz, ppm) 9,98 (s, 1 H), 8,98 (s, 1 H), 7,89-6,92 (m, 12 H), 6,06 (s, 1 H), 5,48 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,03 (m, 1 H), 3,89 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 2,91 (s, 3 H, NMe), 2,75-2,53 (m, 2 H), 2,23 (s, 3 H, Me); MS, m/z 502 (C_{27}H_{27}N_{5}O_{5} de M^{+}+1 requiere 502).
Preparación de BX47
A. Se calentó una suspensión de anhidro N-metilisatoico (10,12 g, 57,15 mmol) y glicina (4,29 g, 57,17 mmol) en ácido acético glacial (125 ml) a 120°C durante 3,5 h. Luego se concentró la disolución de reacción a vacío hasta dar un aceite espeso y se añadió éter (100 ml). Se filtraron los sólidos resultantes, se aclararon con éter y se secaron al aire para dar 8,80 g de un sólido de color tostado. Se suspendió el sólido con CHCl_{3}, (250 ml) durante 1 h. Se filtró la disolución y se concentró el filtrado a vacío para dar 7,43 g (rendimiento del 68%) de un sólido de color tostado identificado como el producto deseado: MS (ESP+) 190,9 m/z; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 3,38 (s, 3H), 3,78-3,83(m, 2H), 6,85(t a, 1H), 7,20-7,34 (m, 2H), 7,52-7,58 (m, 1H), 7,88 (dd, J = 7,81, 1,65 Hz, 1H).
B. Se suspendieron el compuesto del procedimiento A (1,52 g, 8,01 mmol), CsF anhidro (1,22 g, 8,03 mmol), ortosilicato de tetraetilo (1,79 ml, 8,03 mmol) y acrilato de etilo (0,96 ml, 8,86 mmol) en THF anhidro (8,0 ml) a temperatura ambiente durante 26 h. Luego se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, se concentró el filtrado a vacío y se purificó el sólido resultante mediante cromatografía en columna ultrarrápida (CHCl_{3} 6 10:1 CHCl_{3}/éter) para dar 1,63 g (rendimiento del 70%) de un sólido amarillo claro identificado como el producto deseado: MS (ESP+) 291 m/z; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 1,24 (t, J = 7,12 Hz, 3H), 2,60-2,78 (m, 2H), 3,37 (s, 3H), 3,94 (q AB, J = 14,86 Hz,) L= 52,41 Hz,2H), 3,92(t, J = 7,01 Hz, 2H), 4,13 (q, J = 7,10 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 8,07 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,57 Hz, 1H), 7,50 (dt, J = 7,78, 1,67 Hz, 1H), 7,84 (dd, J = 7,83, 1,63 Hz, 1H).
C. Se disolvió el compuesto del procedimiento B (1,61 g, 5,55 mmol) en ácido nítrico fumante helado (7,4 ml). Se dejó a calentar lentamente la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y después de 2 h se vertió sobre una mezcla de NaHCO_{3} acuoso saturado (100 ml)/hielo (100 g). Se llevó la suspensión hasta pH neutro con NaHCO_{3} sólido. Se extrajo la disolución acuosa con acetato de etilo (4 x 100 ml). Se lavaron las fases orgánicas combinadas con agua (1 x 100 ml) y NaCl acuoso saturado (1 x 100 ml), se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío para dar 1,83 g (rendimiento del 98%) de un aceite amarillo identificado como el producto deseado: MS (ESP+) 336, 358 m/z; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 1,25 (t, J = 7,10 Hz, 3H), 2,62-2,81 (m, 2H), 3,42 (s, 3H), 3,90-3,95 (m, 2H), 4,01 (s, 2H), 4,13 (q, J = 7,17 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 9,05 Hz, 1H), 8,33 (dd, J = 8,97, 2,70 Hz, 1H), 8,73 (d, J = 2,71 Hz, 1H).
D. Se calentó hasta reflujo una suspensión del compuesto del procedimiento C (1,82 g, 5,44 mmol) y Fe en polvo de < 10 micras (0,91 g, 16,99 mmol) en etanol/agua 2:1 (54 ml) y se añadió ácido acético glacial (0,63 ml, 11,01 mmol). Después de 2 h se filtró la mezcla de reacción caliente a través de Celite y se lavó la almohadilla con etanol caliente (3 x 50 ml). Se concentró el filtrado a vacío, se disolvió en acetato de etilo (125 ml), se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 40 ml), agua (1 x 40 ml) y NaCl acuoso saturado (1 x 40 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar un sólido amarillo. Se disolvió el sólido en CHCl_{3}/THF 1:1, se hizo pasar a través de un tapón de gel de sílice y se concentró a vacío para dar 1,20 g (rendimiento del 72%) de una espuma amarilla identificada como el producto deseado: MS (ESP+) 306,1, 328,2 m/z; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) * 1,21 (t, J = 7,13 Hz, 3H), 2,57-2,76 (m, 2H), 3,27 (s, 3H), 3,63 (s a, 1H), 3,87 (t, J = 7,25 Hz, 2H), 3,89 (q AB, J = 14,69 Hz, ) L= 77,45 Hz, 2H), 4,10 (q, J = 7,12 Hz, 2H), 6,79 (dd, J = 8,84, 2,56 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,66 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,56 Hz, 1H).
E. Se disolvieron ácido 4-o-tolilureidofenilacético (0,57 g, 2,00 mmol), EDC\cdotHCl (0,43 g, 2,24 mmol) y el compuesto del procedimiento D (0,61 g, 2,00 mmol) en DMF anhidro (10 ml) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar durante 3 d se extinguió la reacción con agua (30 ml). Se agitó la suspensión resultante durante 24 h y se filtró. Se lavó el precipitado de color tostado con ácido cítrico acuoso al 5% (2 x 20 ml), NaHCO_{3} acuoso al 10% (3 x 20 ml) y agua (2 x 20 ml) y se secó a vacío para dar 0,76 g (rendimiento del 66%) de un sólido de color tostado identificado como el producto deseado: MS (ESP+) 572,4, 594,5 m/z; ^{1}H RMN (acetona-d_{6}, 300 MHz, ppm) 1,19 (t, J = 7,17 Hz, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,62-2,68 (m, 2H), 3,31 (s, 3H), 3,64 (s, 2H), 3,78-3,96 (m, 2H), 3,96 (q AB, J = 14,87 Hz) L= 86,48 Hz, 2H), 4,07 (q, J = 7,08 Hz, 2H), 6,94 (dd, J = 8,42, 7,51 Hz, 1H), 7,13 (dd, J = 7,90, 5,36 Hz, 2H), 7,27-7,32 (m, 3H), 7,47-7,59 (m, 3H), 7,91-7,94 (m, 3H), 8,40 (s, 1H), 9,46 (s, 1H).
F. Se añadió trimetilsilanolato de sodio 1,0 M/CH_{2}Cl_{2} (4,0 ml, 4,0 mmol) a una disolución del compuesto del procedimiento E (0,57 g, 0,99 mmol) en THF anhidro (100 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Después de agitar durante 5 h se filtró la reacción y se lavó el precipitado con THF. Se suspendió el precipitado con ácido acético glacial/éter 1:1 (10 ml) durante 22 h, se filtró, se lavó con ácido acético glacial/éter 1:1 (3 x 10 ml) y éter y se secó al aire para dar 0,42 g (rendimiento del 78%) de un sólido blanco identificado como BX47: MS (ESP+) 544,2, 566,2 m/z; ^{1}H RMN (acetona-d_{6}, 300 MHz, ppm) 2,14 (s, 3H), 2,56 (t, J = 7,10 Hz, 1H), 2,57 (t, J = 7,50 Hz, 1H), 3,20 (s, 3H), 3,53 s, 2H), 3,72-3,77 (m, 2H), 3,87 (q AB, J = 15,13 Hz,) L= 75,08 Hz, 2H), 6,82-6,85 (m, 1H), 7,01-7,05 (m, 2H), 7,27 (q AB, J = 8,59 Hz, )L = 60,76 Hz, 4H), 7,16-7,21 (m, 1H), 7,80-7,84 (m, 3H), 8,28 (s, 1H), 9,34 (s, 1H).
Preparación de RX18
A. Se añadió trietilamina (0,35 ml, 2,51 mmol) a una suspensión de -bromo-3-nitrotolueno (0,22 g, 1,04 mmol) y \beta-etilalaninaAHCl (0,19 g, 1,24 mmol) en THF anhidro (5 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 24 h y a 60ºC durante 18 h, se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (50 ml), se lavó con agua (1 x 15 ml), NaHCO_{3} acuoso al 5% (1 x 15 ml) y NaCl acuoso saturado (1 x 15 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo. Se purificó el aceite mediante cromatografía en columna ultrarrápida (acetato de etilo/hexanos 2:1) para dar 0,22 g (rendimiento del 84%) de un aceite amarillo identificado como el producto deseado: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 1,24 (t, J = 7,16 Hz, 3H), 1,68 (s a, 1H), 2,52 (t, J = 6,30 Hz, 2H), 2,88 (t, J = 6,31 Hz, 2H), 3,89 (s, 2H), 4,13 (q, J = 7,14 Hz, 2H), 7,47 (t, J = 7,89 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,52 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H).
B. Se agitó una disolución del compuesto del procedimiento A (0,072 g, 0,28 mmol), piridina anhidra (0,035 ml, 0,43 mmol) y cloruro de benzoilo (0,050 ml, 0,43 mmol) a 0°C durante 2 h. Luego se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (14 ml), se lavó con ácido cítrico acuoso al 5% (2 x 5 ml), NaHCO_{3} acuoso al 10% (2 x 5 ml), agua (1 x 5 ml) y NaCl acuoso saturado (1 x 5 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar un aceite espeso. Se purificó el aceite mediante cromatografía en columna ultrarrápida (cloroformo/éter 95:5) para dar 0,089 g (rendimiento del 92%) de un aceite incoloro identificado como el producto deseado: ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 1,23 (s a, 3H), 2,50 (s a, 1H), 2,72 (s a, 1H), 3,65 (s a, 2H), 4,10 (s a, 2H), 4,73 (s a, 2H), 7,40 (s, 5H), 7,53 (t, J = 7,81 Hz, 1H), 7,60 (s a, 1H), 8,00 (s a, 1H), 8,14 (d, J = 7,13 Hz, 1H).
C. Se sometió a una atmósfera de H_{2} (60 psi) una suspensión de Pd/C al 10% (0,016 g, 0,15 mmol) y el compuesto del procedimiento B (0,086 g, 0,25 mmol) en etanol/acetato de etilo 2:1 (1,8 ml) a temperatura ambiente durante 18 h. Luego se filtró la reacción a través de Celite, lavando la almohadilla extensamente con acetato de etilo. Se concentraron los lavados combinados a vacío para dar 0,80 g (rendimiento del 95%) de un aceite naranja identificado como el producto deseado: MS (ESP+) 327 m/z; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) los picos fueron muy anchos pero concuerdan con el producto deseado.
D. Se agitó una disolución del producto del procedimiento C (0,077 g, 0,24 mmol), ácido 4-o-tolilureidofenilacético (0,075 g, 0,26 mmol), TBTU (0,089 g, 0,28 mmol) y diisopropiletilamina (0,046 ml, 0,26 ml) en NMP (0,60 ml) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno durante 3 d. Luego se diluyó con acetato de etilo (25 ml), se lavó con ácido cítrico acuoso al 5% (2 x 6 ml), NaHCO_{3} acuoso 5% (2 x 6 ml), agua (1 x 6 ml) y NaCl acuoso saturado (1 x 6 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo. Se purificó el aceite mediante cromatografía en columna ultrarrápida (cloroformo/metanol 99:1 - cloroformo/metanol 98:2) para dar 0,11 g (rendimiento del 78%) de un vidrio blanco identificado como el producto deseado: MS (ESP+) 593, 615 m/z; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) los picos fueron muy anchos pero concuerdan con el producto deseado.
E. Se agitó una disolución del producto del procedimiento D (0,047 g, 0,079 mmol) e hidróxido de litio hidratado (0,021 g, 0,51 mmol) en THF/agua 2:1 (3 ml) a temperatura ambiente durante 4 h. Luego se extinguió la reacción con ácido acético glacial y se concentró a vacío para dar un sólido blanco. Se purificó el sólido mediante cromatografía en columna ultrarrápida (cloroformo/metanol/ácido acético 98:1:1 - cloroformo/metanol/ácido acético 94:5:1) para dar, después de una liofilización, 0,037 g (rendimiento del 82%) de un vidrio blanco identificado como RX18: MS (ESP+) 565, 587 m/z; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) 2,23 (F, 3/), 2,48-2,59 (m, 2/), 3,31-3,70 (m, 4/), 4,44 (F, 1/), 4,66 (F, 1/), 6,84-7,56 (m, 16H), 7,83 (d, J = 7,55 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 10,17 (s, 1H).
Procedimiento general para la síntesis de 1,4-benzodiazepina-2,5-dionas sobre soporte sólido Análogos de \beta-alanina
A. Se trató resina de Wang cargada con \beta-alanina protegida con Fmoc (7,0 g, 2,8 mmol) con piperidina al 20% en dimetilformamida (75 ml) durante 15 minutos. Luego se lavó la resina con dimetilformamida (3 x 75 ml), metanol (1 x 75 ml) y diclorometano (3 x 75 ml), metanol (1 x 75 ml) y diclorometano (3 x 75 ml). B. Se añadió una disolución de ácido 2-fluoro-5-nitrobenzoico (5,18 g, 28,0 mmol) y diisopropilcarbodiimida (4,4 ml, 28,0 mmol) en N-metilpirrolidinona (50 ml) a la resina. Después de agitar la resina mecánicamente durante más de 5 horas, se lavó la resina con N-metilpirrolidinona (3 x 10 ml) y diclorometano (3 x 75 ml). C. Se separó la resina en 14 partes iguales (en peso) y se colocó en reactores separados. Se añadió una disolución 0,20 M (10 ml) de una amina primaria en N-metilpirrolidinona a cada reactor con resina. Algunas aminas primarias representativas usadas en este etapa fueron: bencilamina, fenetilamina, sec-butilamina, tetrahidrofurilamina, éster metílico de glicina, éster etílico de \beta-alanina, éster metílico de valina, éster t-butílico de \beta-alanina, 2-amino-1-metoxipropano, isobutilamina, (aminometil)ciclopropano, 4-amino-1-bencilpiperidina, 4-fluorobencilamina y ciclohexilamina. Se agitó cada resina mecánicamente durante 20 horas. Se lavaron las resinas con N-metilpirrolidinona (3 x 10 ml) y diclorometano (2 x 10 ml). D. Luego se trató cada resina con 2,0 g (8,86 mmol) de cloruro de estaño (II) dihidratado en 10 ml de etanol/N-metilpirrolidinona 1/1 durante 1 hora a 80°C. Se lavaron las resinas con N-metilpirrolidinona (2 x 10 ml), una disolución de bicarbonato de sodio al 0,5% en agua/N-metilpirrolidinona 1/1 (5 x 10 ml), N-metilpirrolidinona (5 x 10 ml) y diclorometano. E. Se añadió una mezcla de ácido 4-(2-tolilureido)fenilacético (570 mg, 2,0 mmol) y diisopropilcarbodiimida (0,315 ml, 2 mmol) a cada resina en 5 ml de N-metilpirrolidinona. Se agitaron las resinas mecánicamente durante 5 horas. Luego, se lavó cada resina con N-metilpirrolidinona (3 x 10 ml) y diclorometano (2 x 10 ml). F. Se añadió una disolución 0,2 M de bromuro de bromoacetilo en N-metilpirrolidinona (10 ml) y diisopropiletilamina (0,350 ml, 2,0 mmol) a cada reactor de resina. Después de 5 horas de agitación mecánica continua, se lavó cada resina con N-metilpirrolidinona (5 x 10 ml). G. Se añadió una disolución 0,2 M de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (10 ml) a cada resina. Se agitaron las resinas mecánicamente durante más de 5 horas, se lavaron con N-metilpirrolidinona (3 x 10 ml), diclorometano (3 x 10 ml) y luego se secaron. H. Se añadió una disolución de ácido trifluoroacético/agua, 9,5/0,5 (5,0 ml) a cada resina. Se agitaron las resinas durante más de 30 minutos. Se filtraron las resinas. Se recogió cada disolución de ácido en un tubo centrifugador de 50 ml diferente. Se añadió éter etílico (30 ml) a cada tubo. Se centrifugó cada tubo durante 5 minutos. Se descartó el éter. Se purificaron los productos crudos (sedimentos) mediante RP-HPLC para dar las 1,4-benzodiazepina-2,5-dionas correspondientes. Ejemplos: BX58, MS, m/z 620; BX52, MS, m/z 634; BX49, MS, m/z 586; BX40, MS, m/z 612; BX55, MS, m/z 614; BX39, MS, m/z 602; BX57, MS, m/z 602; BY84, MS, m/z 630; BX63, MS, m/z 644; BX53, MS, m/z 586; BX54, MS, m/z 602; BX46, MS, m/z 584; BX43, MS, m/z 703; BX48, MS, m/z 638.
Análogos del ácido DL-3-aminobutírico
Se aplicó exactamente el mismo procedimiento tal como se describió para los análogos de \beta-alanina con resina Wang de ácido Fmoc-DL-aminobutírico (0,476 g, 0,20 mmol). La razón de resina con respecto a los disolventes y reactivos fue proporcional a este procedimiento. En la etapa C, se añadió una disolución 0,20 M de éster t-butílico de \beta-alanina (10 ml) en N-metilpirrolidinona a la resina. Después de que la etapa H se completara, se obtuvo BY76, MS, m/z 616.
Procedimientos generales durante la síntesis de peptoides
Procedimiento A
1. Se añadió anilina o anilina sustituida (60,0 mmol) a isocianato de 4-nitrofenilo (60,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml), a TA. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1,5 horas. Se filtró el producto sólido de urea, se lavó con CH_{2}Cl_{2} (3 X 100 ml) y éter (3 X 100 ml). Luego se secó al aire el producto de urea.
Precursor de E-1:
Rendimiento: 94%; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 8,52 (d, 1H), 8,2-8,4 (m, 2H), 7,78-7,9 (m, 4H), 7,06-7,35 (m, 1H), 2,35 (s, 3H); MS (FAB): 272,2.
Precursor de E-2:
Rendimiento: 95%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 8,4 (d, 2H), 7,86 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,51 (t, 2H), 7,35 (t, 1H); MS (FAB): 258.
2. Se añadió cloruro de estaño (II) dihidratado (45,0 mmol, Aldrich) al producto de la etapa A (15,0 mmol) en etanol (30 ml), y se sometió a reflujo la mezcla resultante a 75°C (usando un baño de aceite) durante 2,5 hrs. Se enfrió la mezcla de reacción con un baño de hielo y se añadió HCl 1 N para acidificar la disolución. Se lavó la mezcla de reacción acidificada con EtOAc (3 X 100 ml). Se combinaron los extractos acuosos y se llevó el pH hasta 10-12, usando una disolución de K_{2}CO_{3} saturado. Se extrajo con EtOAc (3 X 100 ml). Se combinaron los extractos de EtOAc y se lavaron con una disolución de NaHCO_{3} saturado y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y la concentración a vacío proporcionaron un producto puro.
E-1:
Rendimiento: 85%; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 8,91 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,15-7,26 (m, 4H), 6,98 (t, 1H), 6,6 (d, 2H), 4,82 (s, 2H), 2,32 (s, 3H); MS (FAB): 241.
E-2:
Rendimiento: 88%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,58 (m, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,32 (d, 2H), 7,27 (t, 1H), 6,88 (d, 2H); MS (FAB): 227.
Procedimiento B
1. Se llevó una disolución del diclorhidrato de 4,4=-bipiperidina (5,09, 20 mmol) en 20 ml de agua desionizada a pH 8-9 con NaOH 5 N. Después de que se diluyera la disolución con 240 ml de etanol y se agitara a TA, se añadió dicarbonato de di-t-butilo en 160 ml de etanol en una porción. Se mantuvo la disolución resultante a pH 8-9 con adiciones periódicas de NaOH 5 N. Después de 3 horas a TA, se acidificó la disolución de reacción usando HCl 1 N. Después de lavarla con EtOAc (2 x 100 ml), se llevó la disolución acuosa hasta pH 7 y luego se lavó con EtOAc para extraer el producto mono-Boc. Se lavó la fase orgánica con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 100 ml), NaCl acuoso saturado (2 X 100 ml) y se secó sobre MgSO_{4}. Después de concentrar la disolución a vacío, se obtuvieron 2,5 g (rendimiento del 52%) de la amina secundaria mono-Boc.
B-1:
^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 4,3 (d, 2H), 3,25 (d, 2H), 2,9 (t, 2H), 2,73 (t, 2H), 1,93 (d, 4H), 1,65 (s, 9H), 1,22-1,56 (m, 6H); MS (FAB): 268,9; HPLC (Gr A: del 5% de B al 95% de B en 15 min; columna C_{18}, 100 \ring{A}; tampón B: TFA al 0,1% en acetonitrilo; Tampón A: TFA al 0,1% en agua HPLC): 5,67 min.
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Procedimiento C
1. Se añadió EDC (1,1 mmol) a la disolución de amina primaria (1,0 mmol, obtenida a partir del procedimiento A) o a una disolución de la amina secundaria (1,0 mmol, obtenida a partir del procedimiento B) en NMP (5 ml), y se siguió rápidamente por la adición de ácido bromoacético (1,0 mmol) a TA. Después de que se agitara la mezcla de reacción a TA durante más de 18 horas, se dividió la reacción en EtOAc (15 ml) y agua desionizada (10 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 10 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 10 ml) y NaCl acuoso saturado (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto de bromuro:
F-1:
Rendimiento: 84%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,83 (d, 1H), 7,57-7,73 (m, 4H), 7,4 (m, 2H), 7,34 (t, 1H), 4,39 (s, 2H), 2,49 (s, 3H); MS (FAB): 362.
F-2:
Rendimiento: 89%; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 7,44-7,61 (m a, 6H), 7,41 (t, 2H), 7,02 (t, 1H), 3,25 (s, 2H); MS (FAB): 348.
F-3:
Rendimiento: 61%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 4,53 (d, 1H), 3,92-4,12 (m, 4H), 3,82 (d, 1H), 3,0 (t, 1H), 2,4-2,7 (m, 3H), 1,55-1,8 (m, 4H), 1,4 (s, 9H), 0,98-1,33 (m a, 6H); MS (FAB): 382 (aducto de Na^{+}).
2. Se añadió gota a gota una disolución del producto de bromuro de la etapa C1 (1,0 mmol) en NMP (2 ml) a una disolución de una amina (5 mmol) en NMP (4 ml) a 0°C. Después de que se agitara la mezcla de reacción a 0°C durante 30 minutos, se dividió la reacción en EtOAc (15 ml) y en agua desionizada (10 ml). Se lavó la fase orgánica con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 10 ml), y NaCl acuoso saturado (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto de amina secundaria.
G-1:
Rendimiento: 78%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,55-8,0 (m a, 6H), 7,4 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 3,61 (s, 2H), 2,9 (t, 2H), 2,52 (s, 3H), 1,9 (m, 1H), 1,69 (m, 2H), 1,23 (d, 6H); MS (FAB):369.
G-2.
Rendimiento: 80%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,55-7,72 (m a, 6H), 7,49 (t, 2H), 7,21 (t, 1H), 3,59 (s, 2H), 2,84 (t, 2H), 1,89 (m, 1H), 1,64 (q, 2H), 1,12 (d, 6H); MS (FAB): 355.
G-3:
Rendimiento: 75%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,55-7,72 (m a, 6H), 7,49 (m, 2H), 7,21 (t, 1H), 3,59 (s, 2H), 2,95 (t, 2H), 2,8 (t, 2H), 2,5 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,05 (m, 2H); MS (FAB): 387.
3. Se añadió EDC (1,1 mmol) a una disolución de la amina secundaria (1,0 mmol) de la etapa C2 en NMP (3 ml), y se siguió rápidamente por la adición de ácido bromoacético (1,0 mmol) a 0°C. Después de que se agitara la mezcla de reacción durante 3 horas a 0°C, se dividió la reacción en EtOAc (15 ml) y agua desionizada (10 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 10 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 10 ml) y NaCl acuoso saturado (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto de bromoacetilo N-sustituido.
H-1;
Rendimiento: 82%; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 9,08 (d, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,43-7,62 (m, 4H), 7,22 (q, 2H), 7,02 (t, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,44 (s, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 2,32 (s, 3H), 1,54-1,75 (m, 2H), 1,38-1,53 (m, 1H), 0,98 (m, 6H).
H-2:
Rendimiento: 72%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 4,9 (d, 1H), 3,54-3,82 (m a, 6H), 3,4 (d, 1H), 2,49-2,78 (m, 2H), 2,0-2,3 (m, 3H), 1,02-1,43 (m a, 8H), 0,9 (s, 9H), 0,58-0,88 (m a, 6H), 0,49 (m, 6H).
H-3:
Rendimiento: 50%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 4,9 (d, 1H), 3,54-3,82 (m a, 6H), 3,4 (d, 1H), 2,49-2,78 (m, 2H), 2,3-2,52 (m a, 3H), 2,2 (s, 3H), 1,45-1,72 (m, 4H), 1,3 (s, 9H), 0,8-1,2 (m a,6H).
\newpage
H-4:
Rendimiento: 45%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 4,5 (d, 1H), 3,9-4,1 (m, 6H), 3,6 (d, 1H), 2,75-3,0 (m a, 1H), 2,4-2,6 (m, 3H), 1,48-1,71 (m a, 4H), 1,3 (s, 9H), 0,9-1,25 (m a, 6H).
4.a. Se añadió trietilamina (5 mmol) a una disolución de clorhidrato de éster t-butílico de \beta-alanina (5 mmol, SIGMA) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) a TA. Después de que se agitara la disolución a TA durante 15 min., se filtró el precipitado formado y se eliminó el CH_{2}Cl_{2} a vacío para dar la amina libre, éster t-butílico de \beta-alanina.
4. b. Se añadió gota a gota una disolución del producto de bromoacetilo N-sustituido de la etapa C3 en NMP (2 ml) al éster t-butílico de \beta-alanina (5 mmol) de la etapa 4.a (5 mol) en NMP (10 ml) a 0°C. Después de que se agitara la mezcla de reacción durante más de 18 horas a 0°C, se dividió la reacción en EtOAc (15 ml) y agua desionizada (10 ml). Se lavó la fase orgánica con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 10 ml) y NaCl acuoso saturado (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto de amina secundaria.
I-1:
Rendimiento: 75%; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,1 (d, 1H), 7,92-8,1 (m, 2H), 7,45-7,61 (m, 4H), 7,25 (m, 2H), 7,04 (t, 1H), 4,1-4,28 (d a, 2H), 3,5 (m, 2H), 2,74-2,91 (m, 3H), 2,44 (m, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,55-2,1 (m, 3H), 1,5 (s, 9H), 0,99 (m, 6H); MS (FAB): 554.
I-2:
Rendimiento: 45%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 4,6 (d, 1H), 3,9-4,2 (m, 6H), 3,63-3,9 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,89-3,04 (m, 2H), 2,4-2,7 (m, 5H), 1,0-1,85 (m a, 28H); MS (FAB): 511,4.
I-3:
Rendimiento: 50%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 4,55 (d, 1H), 4,0-4,3 (m, 4H), 3,5-3,85 (m, 4H), 2,85-3,18 (m, 5H), 2,48-2,71 (m, 5H), 1,0-1,85 (m a, 28H); MS (FAB): 525,4.
I-4.
Rendimiento: 60%; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 3,75-4,62 (m, 8H), 3,25 (m, 1H), 2,9 (m, 2H), 2,49-2,75 (m, 5H), 1,0-1,85 (m a, 32H), 0,9 (m, 6H); MS (FAB): 581,5.
Procedimiento D
1. Se añadió amina E-1 (10 mmol) obtenida a partir del procedimiento A a una disolución agitada de Boc-L-prolina o prolina Boc-L-sustituida (10 mmol) y EDC (11 mmol) en NMP (10 ml) a TA. Después de que se agitara la disolución durante más de 18 horas, se dividió la reacción en EtOAc (100 ml) y agua desionizada (60 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 60 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado, y NaCl acuoso saturado (50 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto unido.
Precursor de J-1:
Rendimiento: 70%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,82 (d, 1H), 7,56-7,77 (m, 4H), 7,4 (m, 2H), 7,22 (t, 1H), 4,4-4,6 (m, 1H), 3,6-3,85 (m, 2H), 2,5 (s, 3H), 2,0-2,33 (m, 4H), 1,5-1,75 (d a, 9H); MS (FAB): 439,2.
2. se añadió lentamente una disolución de TFA al 75% en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) al producto de la etapa D1, a 0°C. Después de que se agitara la mezcla a 0°C durante aproximadamente 2 horas, se concentró la reacción a vacío. Volvió a disolverse el producto en CH_{2}Cl_{2}, se concentró dos veces más y se colocó a alto vacío para eliminar las trazas finales de TFA. Luego se trituró el residuo sólido en éter durante más de 18 horas, se filtró y se secó al aire (rendimiento cuantitativo).
J-1:
Rendimiento: 80%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,82 (d, 1H), 7,6-7,8 (m, 4H), 7,82-7,93 (q, 2H), 7,74 (t, 1H), 4,58 (m, 1H), \sim3,6 (m, 2H), 2,62 (m, 1H), 2,5 (s, 3H), 2,32 (m, 3H); MS (FAB): 339,5.
J-2:
Rendimiento: 75%; ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,82 (d, 1H), 7,6-7,8 (m, 4H), 7,82-7,93 (q, 2H), 7,74 (t, 1H), 4,58-4,76 (m, 3H), 3,75 (m, 2H), 2,5 (s, 3H); MS (FAB): 358,4 (aducto de Na^{+}).
Ejemplo 1 AY50
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando aminas E-1 (obtenidas usando o-toluidina en el procedimiento A) en la etapa C1 e isoamilamina en la etapa C2, para obtener el producto de amina (I-1) en la etapa C4.
B. En primer lugar se trató una disolución agitada de la amina preparada en el ejemplo 1A (0,9102 mmol, 0,504 g) con DIEA (0,9102 mmol, 158,6 \mul) en 20 ml de NMP a 0°C (bajo una atmósfera de nitrógeno), y luego se añadió gota a gota cloruro de benzoilo (0,9102 mmol, 105,7 \mul). Después de que se agitara la disolución durante 4 horas, se dividió la reacción en EtOAc (50 ml) y agua desionizada (40 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 25 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 25 ml), y NaCl acuoso saturado (25 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto deseado (350 mg, 59%) como una espuma:
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm): 6,72-7,55 (m a, 12H), 6,3-6,7 (d a, 1H), 3,8-4,2 (m, 4H), 3,55-3,7 (m, 2H), 3,1-3,5 (m a, 2H), 2,45 (t, 1H), 2,1 (m, 3H), 0,6-1,6 (m a, 19H); MS (FAB): 658,5.
C. Se añadió lentamente una disolución de TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) al producto del ejemplo 1B (350 mg, 0,5315 mmol), a 0°C. Después de agitar a 0°C durante 1 hora, se concentró la reacción a vacío. Volvió a disolverse el producto en CH_{2}Cl_{2}, se concentró dos veces más y se colocó a alto vacío para eliminar las trazas finales de TFA. Se purificó el producto mediante HPLC para dar AY50 (260 mg, 91%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,7-10,32 (m, 1H), 9,05 (s, 1H), 7,99 (m, 2H), 7,35-7,77 (m, 7H), 7,25 (q, 2H), 7,05 (t, 1H), 4,0-4,55 (m a, 4H), 3,68 (q, 1H), 3,2 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 1,3-1,75 (m a, 4H), 0,77-1,22 (m a, 6H); MS (FAB): 602,5; HPLC (Gr A): 8,72 min.
Ejemplo 2 AY49
A. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1B, usando la amina (I-1, 0,9102 mmol, 0,504 g) preparada mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 1A, DIEA (0,9102 mmol, 158,5 \mul) y cloruro de m-anisoílo (0,9102 mmol, 127,9 \mul) para proporcionar el producto deseado (380 mg, rendimiento del 61%) como una espuma:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,1 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,3-7,65 (m, 5H), 7,23 (m, 2H), 6,83-7,15 (m a, 4H), 4,0-4,5 (m a, 4H), 3,8-3,91 (m, 3H), 3,15-3,22 (m, 4H), 2,5-2,8 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,35-1,8 (m, 12H), 0,77-1,22 (m a, 6H); MS (FAB): 710,2 (aducto de Na^{+}).
B. Se realizó el procedimiento, tal como se describió en el ejemplo 1C, usando el compuesto de la etapa B (380 mg, 0,5523 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) para proporcionar AY49 (315,0 mg, 91%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,1 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,3-7,65 (m, 5H), 7,23 (m, 2H), 6,83-7,15 (m a, 3H), 4,0-4,5 (m a, 4H), 3,8-3,91 (m, 3H), 3,15-3,22 (m, 4H), 2,5-2,8 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,35-1,8 (m, 3H), 0,77-1,22 (m a, 6H); MS (FAB): 632,3, 654,2 (aducto de Na^{+}); HPLC (Gr A): 9,05 min.
Ejemplo 3 AY62
A. Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (10,9781 mmol, 957,702 \mul) a una disolución del ácido 2,3-dimetoxibenzoico (10,9781 mmol, 2,0 g) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) con una gota de DMF, a TA. Después de 2 horas se concentró la mezcla de reacción a vacío para proporcionar cloruro de 2,3-dimetoxibenzoilo (1,9 g, 90%):
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm): 7,52 (m, 1H), 7,12 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,88 (s, 3H).
B. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1B usando la amina (I-1, 2,0031 mmol, 1,073 g) preparada mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 1A, DIEA (2,2034 mmol, 383,81 \mu1) y cloruro de 2,3-dimetoxibenzoilo (2,2034 mmol, 440,677 mg) preparado en el ejemplo 3A para proporcionar el producto deseado (856,0 mg, rendimiento del 51%) como una espuma:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 9,1 (s, 1H), 7,9-8,1 (m, 2H), 7,4-7,65 (m, 3H), 6,95-7,3 (m a, 4H), 6,6-6,9 (m a, 1H), 3,7-4,7 (m a, 10H), 2,38 (s, 3H), 1,2-1,8 (m a, 12H), 0,9-1,1 (m, 5H), 0,8 (d, 2H); MS (FAB): 740,4 (aducto de Na^{+}).
C. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (856,0 mg, 1,1922 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar AY62 (786,0 mg, 98%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 9,1 (s, 1H), 7,9-8,1 (m, 2H), 7,4-7,65 (m, 3H), 6,95-7,3 (m a, 4H), 6,6-6,9 (m a, 1H), 3,7-4,7 (m a, 10H), 2,38 (s, 3H), 1,2-1,8 (m a, 1H), 1,18 (t, 3H), 0,89-1,1 (m, 4H), 0,8 (d, 2H); MS (FAB): 662,2, 684,2 (aducto de Na^{+}; HPLC (Gr A): 8,795 min.
Ejemplo 4 CX13
A. Se añadió la amina (G-1, 0,271 mmol, 100,0 mg), obtenida a partir de la etapa C2 en el procedimiento C usando las aminas E-1 (obtenidas usando o-toluidina en el procedimiento A) en la etapa C1 e isoamilamina en C2, a una disolución agitada de adipato de mono-metilo (0,271 mmol, 40,15 \mul) y EDC (0,271 mmol, 51,951 mg) en 4 ml de NMP a TA. Después de que se agitara la reacción durante más de 18 horas a TA, se dividió la reacción en EtOAc (15 ml) y agua desionizada (10 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 10 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 10 ml), y NaCl acuoso saturado (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto deseado (103 mg, 75%) como una espuma:
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros): 8,88 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 6,6-7,4 (m a, 7H), 4,0 (m, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,43 (m, 1H), 1,9-2,4 (m a, 7H), 1,29-1,8 (m a, BH), 0,9 (d, 6H); MS (FAB): 511,3.
B. Se trató una disolución agitada del compuesto de la etapa A (103 mg, 0,2034 mmol) en metanol (2 ml) con LiOH acuoso (1,0 M, 1,0 ml, 1,0 mmol) a TA durante 3 horas. Se acidificó la reacción con HCl 1 N y se concentró a vacío. Se purificó el producto crudo mediante HPLC para proporcionar CX13 (66,0 mg, 65%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,9-10,1 (d a, 1H), 9,05 (d, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,55 (m, 4H), 7,25 (q, 2H), 7,05 (t, 1H), 4,1-4,25 (d a, 1H), 3,5 (m, 1H), 2,21-2,52 (m, 7H), 1,38-1,71 (m, 7H), 1,2 (t, 1H), 0,95 (m, 6H); MS (FAB): 497,2; HPLC (Gr A): 8,24 min.
Ejemplo 5 P1
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando aminas E-1 (obtenidas usando diclorhidrato de 4,4'-bipiperidina en el procedimiento B) en la etapa C1 y amoniaco en la etapa C2, para proporcionar el producto de amina (I-2) en la etapa C4.
B. Se añadió la amina (I-2, 0,1351 mmol, 69,0 mg) preparada mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 5A a una disolución agitada de ácido benzoico (0,1351 mmol, 16,5 mg) y EDC (0,1351 mmol, 25,902 mg) en 3 ml de NMP. Después de que se agitara la disolución durante más de 18 horas, se dividió la reacción en EtOAc (10 ml) y agua desionizada (5 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 5 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 5 ml), y NaCl acuoso saturado (5 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto deseado (35,0 mg, 51%) como una espuma.
C. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (35,0 mg, 0,068 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para obtener P1 (17,0 mg, 55%) como polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 8,4 (m, 1H), 7,9-8,25 (m, 2H), 7,4 (d, 3H), 4,4 (d, 1H), 3,7-4,2 (m, 5H), 2,18-3,12 (m, 4H), 1,6-1,85 (d, 4H), 0,85-1,41 (m, 6H); MS (FAB): 458,8; HPLC (Gr A): 4,1 min.
Ejemplo 6 P2
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando aminas E-1 (obtenidas usando diclorhidrato de 4,4'-bipiperidina en el procedimiento B) en la etapa C1 y metilamina en la etapa C2, para obtener el producto de amina (I-3) en la etapa C4.
B. Se realizó el procedimiento descrito en el ejemplo 5B usando la amina (I-3, 0,2835 mmol, 148,8 mg) preparada mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 6A, ácido benzoico (0,2836 mmol, 34,63 mg) y EDC (0,2836 mmol, 54,37 mg) para proporcionar el producto deseado (84,0 mg, rendimiento al 56%) como una espuma.
C. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (84,0 mg, 0,158 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para obtener P2 (49,0 mg, 66%) como un polvo liofilizado.
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 8,5 (m, 1H), 8,2 (m, 1H), 7,35-7,6 (m, 4H), 4,1-4,6 (m, 6H), 3,8-4,1 (m, 3H), 2,77-3,2 (m, 7H), 1,7-2,0 (m, 4H), 1,0-1,6 (m, 6H); MS (FAB): 473,2; HPLC (Gr A): 4,403 min.
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Ejemplo 7 P3
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando aminas E-1 (obtenidas usando diclorhidrato de 4,4'-bipiperidina en el procedimiento B) en la etapa C1 e isoamilamina en la etapa C2, para proporcionar el producto de amina (I-4) en la etapa C4.
B. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 5B usando la amina (I-4, 0,05131 mmol, 29,8 mg) preparada mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 7A, ácido benzoico (0,05131 mmol, 6,2657 mg) y EDC (0,05131 mmol, 9,836 mg) para proporcionar el producto deseado (15,0 mg, rendimiento del 51%) como una espuma.
C. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (15,0 mg, 0,0256 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para obtener P3 (9,0 mg, 67%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 8,5 (m, 1H), 8,2 (m, 1H), 7,33-7,6 (m, 4H), 3,85-4,6 (m a, 6H), 2,8-3,2 (m, 4H), 0,78-2,0 (m a, 19H); MS (FAB): 529,4, 551,3 (aducto de Na^{+}); HPLC (Gr A): 6,27 min.
Ejemplo 8 CY14
A. Se añadió el producto de amina libre (J-1, 0,2955 mmol, 100,0 mg), obtenido a partir del procedimiento D usando Boc-L-prolina a una disolución agitada de adipato de mono-metilo (0,2955 mmol, 43,78 \mul) y EDC (0,2955 mmol, 56,65 mg) en 4 ml NMP a TA. Después de que se agitara la disolución durante más de 18 horas, se dividió la reacción en EtOAc (15 ml) y agua desionizada. Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 10 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 10 ml), y NaCl acuoso saturado (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto deseado (88,2 mg, 62%) como una espuma:
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm): 7,1-7,52 (m a, 8H), 6,1-6,42 (s, 1H), 4,75 (d, 1H), 3,42-3,68 (m, 5H), 1,94-2,42 (m a, 10H), 1,6-1,8 (m, 4H); MS (FAB): 481,4, 503,3 (aducto de Na^{+}).
B. Se realizó el mismo procedimiento tal como se describió en el ejemplo 4B usando el compuesto de la etapa A (88,2 mg, 0,1832 mmol) y LiOH acuoso (1,0 M, 1,0 ml, 1,0 mmol) en MeOH (2 ml) para obtener CY14 (50,8 mg, 60%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,9-10,12 (d a, 1H), 9,05 (d, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,45-7,61 (m, 4H), 7,24 (q, 2H), 7,05 (t, 1H), 4,45-4,61 (m, 1H), 3,52-3,74 (m, 2H), 1,88-2,44 (m a, 11H), 1,6 (m, 4H); MS (FAB): 467,2, 489,2 (aducto de Na^{+}); HPLC (Gr A): 6,66 min.
Ejemplo 9 CY17
A. Se añadió gota a gota n-butil-litio (3,0 mmol, 1,875 ml) a una disolución de dietilfosfonacetato de terc-butilo (3,0 mmol, 756,75 mg) en 25 ml de THF anhidro, agitada a -75°C (hielo seco/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno, durante un periodo de 5 min. Después de que se agitara la disolución durante 1 hora a 0°C, se añadió levulinato de etilo (2,7 mmol, 425,7 \mul) con N_{2} a 0°C. Se calentó gradualmente la reacción hasta TA y se agitó durante 3,5 h. Después de 3,5 h se lavó la mezcla de reacción con NH_{4}Cl acuoso saturado (3 X 100 ml) y se concentró a vacío. Luego, se añadieron 100 ml de éter al residuo y se lavó la fase de éter con agua desionizada (60 ml), y NaCl acuoso saturado (2 X 60 ml). Se secó la fase orgánica (MgsO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el producto crudo. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía ultrarrápida usando hexano:EtOAc 20:1 para proporcionar el 6-carboetoxi-3-metil-3-pentenoato de t-butilo protegido ortogonalmente (404,0 mg, 54%) como un líquido viscoso:
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, isómeros): 5,6 (s, 1H), 4,12 (q, 2H), 2,84 (t, 1H), 2,4-2,53 (m, 4H), 2,1 (s, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,23 (t, 3H); MS (FAB): 264,6 (aducto de Na^{+}); HPLC (Gr A): 12,24 min y 12,48 min.
B. Se redujo el producto del ejemplo 9A (0,8277 mmol, 200,3 mg) en 10 ml de EtOAc usando un 5% en moles Pd/C al 10% (0,04139 mmol, 43,63 mg) en un contenedor de hidrogenación presurizado. Después de 1 hora se centrifugó la mezcla de reacción durante 30 min. Se repitió la centrifugación con EtOAc (2 X 30 ml) durante 30 min más. Se reunieron todas las fases orgánicas y se concentraron a vacío para proporcionar 6-carboetoxi-3-metil-3-pentanoato de t-butilo (150,0 mg, 75%): ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm): 4,1 (q, 2H), 2,18-2,4 (m, 3H), 1,88-2,1 (m, 2H), 1,45-1,75 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,23 (t, 3H), 0,92 (d, 3H); MS (FAB): 266,6 (aducto de Na^{+}).
C. Se realizó el mismo procedimiento tal como se describió en el ejemplo 4B usando 6-carboetoxi-3-metil-3-pentanoato de t-butilo (150,0 mg, 0,6147 mmol) y LiOH acuoso (1,0 M, 1,0 ml, 1,0 mmol) en MeOH (2 ml) par obtener el producto de mono-ácido (100 mg, 75%) como un sólido:
\global\parskip0.990000\baselineskip
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm): 2,18-2,4 (m, 3H), 1,88-2,1 (m, 2H), 1,45-1,75 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 0,92 (d, 3H); MS (FAB): 239,1 (aducto de Na^{+}).
D. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el procedimiento en el ejemplo 8A usando el producto de ácido del ejemplo 9C (0,0925 mmol, 20,0 mg), la amina (J-1, 0,0925 mmol, 31,30 mg), obtenida usando Boc-L-prolina en el procedimiento D, y EDC (0,0925 mmol, 17,73 mg) en NMP (3 ml) para proporcionar el compuesto deseado (39,3 mg, 73%):
^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 7,1-7,8 (m a, 8H), 4,75 (m, 1H), 3,43-3,62 (m, 2H), 1,9-2,6 (m a, 12H), 0,8-1,0 (m, 3H); MS (FAB): 559,3.
E. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa D (39,3 mg, 0,0703 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para obtener CY17 (20,2 mg, 60%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (MeOH-d_{4}, 300 MHz, ppm): 7,81 (d, 1H), 7,52-7,71 (m, 4H), 7,38 (q, 2H), 7,23 (t, 1H), 4,64-4,8 (m, 1H), 3,7-4,0 (m, 2H), 2,05-2,74 (m a, 12H), 1,68-2,0 (m, 2H), 1,05-1,23 (m, 3H); MS (FAB): 481,3, 503,4 (aducto de Na^{+}); HPLC (Gr A): 8,1 min.
Ejemplo 10 CX12
A. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 8A usando la amina (J-2, 0,2974 mmol, 100,0 mg), obtenida usando Boc-L-tioprolina en el procedimiento D, ácido adípico (0,2974 mmol, 43,46 mg) y EDC (0,3569 mmol, 68,414 mg) en NMP (3 ml) para proporcionar el producto de ácido crudo. Se purificó el producto crudo mediante HPLC para proporcionar CX12 (30,0 mg, 30%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm): 9,99 (s, 1H), 9,1 (s, 1H), 7,98 (m, 2H), 7,48-7,62 (m, 4H), 7,25 (q, 2H), 7,05 (t, 1H), 4,55-5,05 (m, 4H), 3,22 (m, 1H), 2,41 (m, 6H), 1,6 (m, 4H); MS (FAB): 485,5; HPLC (Gr A): 7,935 min.
Ejemplo 11 AX41
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando amina E-1 (obtenido usando o-toluidina en el procedimiento A) en la etapa C1 e isoamilamina en la etapa C2, para obtener la amina (I-1) en la etapa C4.
B. Se añadió anhídrido acético (0,0792 mmol, 7,5 \mul) a una disolución agitada de amina preparada en al ejemplo 11A (0,072 mmol, 39,8 mg) y DIEA (0,0864 mmol, 15,1 \mul) en NMP (4 25 ml) a 0°C. Después de que se agitara la disolución durante 4 h a 0°C, se dividió la reacción en EtOAc (10 ml) y agua desionizada (5 ml). Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 X 5 ml), NaHCO_{3} acuoso saturado (2 X 5 ml), y NaCl acuoso saturado (5 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto deseado (20 mg, 50%) como una espuma.
C. Se realizó el procedimiento descrito en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (20,0 mg, 0,034 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar AX41 (9,0 mg, 50%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 9,76-10,22 (m a, 1H), 9,05 (d, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,45-7,65 (m, 4H), 7,24 (q, 2H), 7,03 (t, 1H), 4,1-4,54 (m a, 4H), 2,33 (s, 3H), 2,18 (s, 1H), 1,98 (d, 2H), 1,3-1,8 (m a, 3H), 0,98 (m, 6H); MS (FAB): 540,3; HPLC (Gr A): 7,047 min.
Ejemplo 12 AY48
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando amina E-1 (obtenida usando o-toluidina en el procedimiento A) en la etapa C1 e isoamilamina en la etapa C2, para obtener la amina (I-1) en la etapa C4.
B. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 5B usando la amina del ejemplo 12A (0,0905 mmol, 50,0 mg), succinato de mono-metilo (0,0905 mmol, 11,96 mg) y EDC (0,09955 mmol, 19,084 mg) para proporcionar el compuesto deseado (30 mg, 50%) como una espuma.
C. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (30 mg, 0,045 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para obtener AY48 (15 mg, 46%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 9,76-10,22 (m a, 1H), 9,05 (d, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,45-7,65 (m, 4H), 7,24 (q, 2H), 7,03 (t, 1H), 4,1-4,54 (m a, 4H), 3,18 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,3-1,8 (m a, 3H), 0,98 (m, 6H); MS (FAB): 612,4; HPLC (Gr A): 7,998 min.
Ejemplo 13 AY44
A. Se siguió el método descrito en el procedimiento C, usando amina E-1 (obtenida usando o-toluidina en el procedimiento A) en la etapa C1 e isoamilamina en la etapa C2, para obtener la amina (I-1) en la etapa C4.
B. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 5B usando la amina del ejemplo 12A (0,0398 mmol, 22,0 mg), ácido 3-metoxipropionico (0,0398 mmol, 3,7 \mul) y EDC (0,04378 mmol, 8,393 mg) para proporcionar el compuesto deseado (15 mg, 59%) como una espuma.
C. Se realizó el procedimiento tal como se describió en el ejemplo 1C usando el compuesto de la etapa B (15 mg, 0,0234 mmol) y TFA al 25% en CH_{2}Cl_{2} para obtener AY44 (10 mg, 74%) como un polvo liofilizado:
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) RMN parcial de compuesto: 9,05 (d, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,45-7,65 (m, 4H), 7,24 (q, 2H), 7,03 (t, 1H), 4,1-4,54 (m a, 4H), 3,29 (m, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,3-1,8 (m a, 3H), 0,98 (m, 6H); MS (FAB): 584,3, 607,4 (aducto de Na^{+}); HPLC (Gr A): 6,17 min.
Síntesis de SX44
A. Se añadió isocianato de o-tolilo (10,5 ml, 86 mmol) a una suspensión de 1,4-fenilendiamina (9,15 g, 86 mmol) en diclorometano (30 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 min se filtró la suspensión y se lavó con diclorometano (200 ml). El secado a vacío proporcionó el producto deseado como un sólido gris (15,8 g, 65,6 mmol, 76%), >99% de pureza basada en HPLC.
^{1}HRMN (DMSO-d_{6}): \delta 8,61 (1H, s), 7,95 (1H, d), 7,81 (1H, s), 7,30 (2H, m), 7,15 (2H, d), 7,0 (1H, t), 6,61 (2H, d), 4,88 (2H, s a), 2,32 (3H, s).
B. Se añadió HOBT (2,1 g, 15,5 mmol) seguido por EDC (2,4 g, 13,0 mmol) y base de Hunigs (5,4 ml, 31,1 mmol) a una disolución del ácido (2R)-[(t-butiloxicarbonil)metil]-4-metilvalérico (Oxford Asymmetry) (2,4 g, 10,4 mmol) en DMF (20 ml) enfriada hasta 0°C. Después de agitar durante 15 min se añadió clorhidrato de éster metílico de 2,3-dimetoxi-\beta-fenilalanina (2,9 g, 10,4 mmol). Después de agitar durante la noche con calentamiento hasta temperatura ambiente se sometió la reacción a tratamiento final precipitando el producto con bicarbonato acuoso al 60%. Se filtró el producto y se lavó con agua, ácido cítrico al 5% y salmuera. Se secó el producto a vacío para proporcionar el producto deseado (4,5 g, 9,9 mmol, 99%), >88% de pureza basada en HPLC como un polvo blanco.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): \delta 6,81 (3H, m), 6,60 (1H, d a), 5,35 (1H, m), 3,76 (3H, s), 3,75 (3H, s), 3,63 (3H, s), 2,90-2,50 (4H, m), 2,30 (1H, - 1,45 (2H, m), 1,40 (9H, s), 1,15 (1H, m), 0,88 (3H, d), 0,82 (3H, s).
C. Se añadió ácido trifluoroacético (5 ml) a una disolución del compuesto de la etapa B (4,5 g, 9,9 mmol) en diclorometano (15 ml) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 h. Se eliminaron los disolventes a vacío y se precipitó el producto mediante la adición de éter. La filtración del sólido y el secado a vacío proporcionaron el compuesto deseado (2,9 g, 7,3 mmol, 74%) como un polvo blanco con >96% de pureza basado en HPLC.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): \delta 6,92 (1H, d a), 6,70 (3H, m), 5,35 (1H, m), 3,85 (6H, s), 3,65 (3H, s), 2,95-2,40 (5H, m), 1,55 (2H, m), 1,35 (1H, m), 0,90 (3H, d), 0,87 (3H, d).
D. Se añadió HBTU (2,1 g, 5,5 mmol) seguido por base de Hunigs (2,1 ml, 12,1 mmol) y el compuesto de la etapa A (1,15 g, 4,8 mmol) a una disolución del compuesto de la etapa C (1,9 g, 4,8 mmol) en DMF (15 ml). Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente se sometió la reacción a tratamiento final mediante precipitación en bicarbonato acuoso al 60%, se lavó con agua, ácido cítrico al 5% y salmuera. El secado a vacío proporcionó el producto deseado (2,9 g, 4,7 mmol, 98%) como un sólido de color tostado con > 87% de pureza basada en HPLC.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): S 9,01-6,81 (15H, m), 5,35 (1H, m), 3,85 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,65 (3H, s), 2,90-2,35 (5H, m), 2,33 (3H, s), 1,65-0,90 (3H, m), 0,90 (3H, d), 0,86 (3H, d).
E. Se añadió LiOH 2 M (7 ml, 13,8 mmol) a una disolución del compuesto de la etapa D (2,9 g, 4,6 mmol) en metanol (30 ml) que contenía DMF (15 ml) y se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se eliminó el metanol a vacío y se añadió la mezcla cruda gota a gota a una disolución de HCl 1 M a 0°C. Se filtró el precipitado y se lavó con agua, metanol/éter (1:9) y éter. Se secó el producto a vacío para proporcionar un producto crudo SX44 con >91% de pureza basada en HPLC. La recristalización del isopropanol proporciona SX44 puro como un sólido blanco (1,25 g, 2,1 mmol, 46%) >98% de pureza basada en HPLC.
^{1}HRMN (DMSO-d_{6}): \delta 9,95 (1H, s), 9,11 (1H, s), 8,61 (1H, d), 8,01 (1H, s), 7,95 (1H, d), 7,60 (2H, d), 7,47 (2H, d), 7,24 (2H, m), 7,02 (2H, m), 6,90 (2H, m), 5,25 (1H, m), 3,82 (3H, s), 3,81 (3H, s), 2,98-2,60 (3H, m), 2,46 (2H, m), 2,33 (3H, s), 1,65-1,10 (3H, m), 0,93 (3H, d). 0,84 (3H, s). ESMS(+): m/z = 605
Síntesis de SY62
A. Se añadió gota a gota diisopropilamida de litio (2,4 ml, 4,5 mmol, Aldrich 2,0 M) a una disolución de (S)-3-(1-oxopropil)-4-(fenilmetil)-2-oxazolidinone (922 mg, 3,95 mmol) en THF anhidro (40 ml) enfriada hasta -78°C. Se dejó la reacción a -78°C durante 1 h dando como resultado una disolución amarilla pálida. Luego se añadió bromoacetato de t-butilo (1,74 ml, 11,8 mmol) de una vez y se agitó la reacción durante 15 min adicionales a -78°C, luego se calentó hasta 0°C y se dejó proceder 45 min adicionales. Se extinguió la reacción con cloruro de amonio acuoso saturado y se eliminó el THF. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (3 X 50 ml) y se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron para proporcionar un jarabe espeso que se solidifica cuando se coloca en el congelador para dar un sólido ceroso. La trituración con hexano frío proporciona el producto deseado (735 mg, 2,11 mmol, 54%) como un sólido blanco con >90% de pureza mediante HPLC.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): \delta 7,40-7,15 (5H, m), 4,65 (1H, m), 4,25-4,0 (3H, m), 3,32 (1 H, dd), 2,83 (1H, dd), 2,76 (1H, dd), 2,37 (1H, dd), 1,41 (9H, s), 1,19 (3 H, d).
B. Se añadió peroxido de hidrógeno al 30% (1,10 ml, 10,1 mmol) seguido por hidróxido de litio 2,0 M (1,0 ml, 2,0 mmol) a una disolución a 0°C del compuesto de la etapa A (350 mg, 1,00 mmol) en THF (15 ml) y agua (5 ml) y se dejó agitar la disolución durante 2-3 h hasta que se consideró completa mediante HPLC. Se extinguió la reacción con sulfito de sodio en exceso y se ajustó el pH hasta \sim10 con bicarbonato de sodio saturado si es necesario. Se eliminó el THF a vacío y se diluyó la fase acuosa con agua (30 ml) y se extrajo dos veces con diclorometano (30 ml). Entonces se acidificó la fase acuosa con HCl 1 M hasta pH \sim2 y se extrajo con acetato de etilo (3 X 50 ml). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron para proporcionar el producto deseado (153 mg, 0,81 mmol, 81%) >95% de pureza basada en HPLC como un jarabe claro que se convirtió en un sólido ceroso cuando se colocó en el congelador.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): \delta 2,88 (1H, m), 2,61 (1H, dd), 2,35 (1H, dd), 1,42 (9H, s), 1,22 (3H, d).
C. Siguiendo el procedimiento usado para la síntesis de SX44B, se unió el compuesto de la etapa B (153 mg, 0,81 mmol) a clorhidrato de éster metílico de 2,3-dimetoxi-\beta-fenilalanina (253 mg, 0,85 mmol) para proporcionar el compuesto deseado (268 mg, 0,6 mmol, 78%) > 85% de pureza basada en HPLC como una espuma blanca.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): \delta 6,81 (3H, m), 6,72 (1H, d a), 5,40 (1H, m), 3,85 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,41 (3H, s), 2,96-2,15 (5H, m), 1,41 5 (9H, s), 1,14 (3H, d).
D. Siguiendo el procedimiento para SX44C, se desprotegió el compuesto de la etapa C (268 mg, 0,6 mmol) para proporcionar el producto deseado (210 mg, 0,59 mmol, 98%) como un jarabe espeso amarillo pálido.
^{1}HRMN (CDCl_{3}): \delta 6,97 (1H, d a), 5,33 (1H, m), 3,85 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,58 (3H, s), 2,95-2,40 (5H, m), 1,24 (3H, d).
E. Siguiendo el procedimiento para la preparación de SX44D, se unió el compuesto de la etapa D (210 mg, 0,60 mmol) a SX44A (168 mg, 0,70 mmol) para proporcionar el compuesto deseado (320 mg, 0,55 mmol, 921) con \sim72% de pureza basada en HPLC como un sólido de color tostado.
^{1}HRMN (DMSO-d_{6}): \delta 9,92 (1H, s), 9,42 (1H, a), 8,52 (1H, d), 8,15 (1H, a), 7,92 (1H, d), 7,61 (2H, d), 7,47 (2H, d), 7,25 (2H, m), 7,10-6,85 (4H, m), 5,35 (1H, m), 3,85 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,63 (3H, s), 3,15-2,40 (5H, m), 2,35 (3H, s), 1,12 (3H, d).
F. Siguiendo el procedimiento para la hidrólisis de SX44D, el compuesto de la etapa E (300 mg, 0,52 mmol) proporcionó el SY62 crudo (108 mg) con >90% de pureza basada en HPLC. Se purificó una pequeña cantidad mediante HPLC para proporcionar SY62 (8 mg) con >99% de pureza como un sólido blanco.
^{1}HRMN (DMSO-d_{6}): \delta 9,95 (1H, s), 9,04 (1H, s), 8,46 (1H, d), 7,93 (2H, m a), 7,59 (2H, d), 7,47 (2H, d), 7,24 (2H, m), 7,21-6,89 (4H, m), 5,22 (1H, m), 3,83 (3H, s), 3,8 (3H, s), 2,95-2,65 (5H, m), 2,34 (3H, s), 1,10 (3H, d).
ESMS(-): m/z-H = 561
Síntesis de SY60
A. Se añadió SX44A (482 mg, 2,0 mmol) a una disolución de anhídrido succínico (200 mg, 2,0 mmol) en diclorometano (5 ml) y se agitó la suspensión durante la noche a temperatura ambiente. Se filtró el sólido y se lavó con diclorometano para proporcionar el producto deseado (630 mg, 1,8 mmol, 92%) como un sólido gris claro.
^{1}HRMN (DMSO-d_{6}): \delta 12,25 (1H, a), 9,95 (1H, s), 9,05 (1H, s), 7,95 (2H, m), 7,60 (2H, d), 7,50 (2H, d), 7,25 (2H, m), 7,05 (1H, m), 2,33 (4H, m).
B. Se añadió HBTU (265 mg, 0,70 mmol) seguido por base de Hunigs (0,25 ml) y éster metílico de 2,3-dimetoxi-\beta-fenilalanina (154 mg, 0,56 mmol) a una disolución del compuesto de la etapa A (192 mg, 0,56 mmol) en DMF (4 ml). Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente se precipitó el producto con bicarbonato acuoso al 60%, se lavó con agua, ácido cítrico al 5%, salmuera y se secó a vacío para proporcionar el producto deseado (100 mg, 0,18 mmol, 32%) como un sólido de color tostado con >85% de pureza basada en HPLC.
^{1}HRMN (DMSO-d_{6}): \delta 9,93 (1H, s), 9,10 (1H, s), 8,47 (1H, d), 8,0 (1H, s), 7,95 (1H, d), 7,60 2H, d), 7,46 (2H, d), 7,25 (2H, m),7,05 (1H, m), 6,92 (2H, m), 5,26 (1H, m), 3,85 (3H, s), 3,84 (3H, s), 3,66 (3H, s), 2,85 (2H, m), 2,55 (2H, m), 2,36 (3H, s).
C. Se añadió LiOH 2 M (0,3 ml) a una disolución del compuesto de la etapa B (100 mg, 0,18 mmol) en metanol y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 h. Se eliminó el metanol y se precipitó el producto en HCl 1 N. Se filtró el sólido, se lavó con agua, éter/metanol (9:1), y éter. El secado a vacío proporciona SY60 (74 mg, 0,13 mmol, 72%) como un sólido de color tostado claro con >97% de pureza basada en HPLC.
^{1}HRMN (DMSO-d6): \delta 9,88 (1H, s), 9,05 (1H, s), 8,41 (1H, d), 8,47 (1H, s), 7,90 (1H, d), 7,54 (2H, d), 7,43 (2H, d), 7,20 (2H, m), 6,96 (2H, m a), 6,90 (2H, m a), 5,21 (1H, m), 3,81 (3H, s), 3,80 (3H, s), 2,71 (2H, m), 2,50 (2H, m), 2,30 (3H, s).
ESMS(-): m/z-1 = 547
Síntesis de RX19
A. Se añadió tiramina (1,379, 0,01 mmol) por partes durante 30 minutos con agitación a éster de N-t-boc-L-leucina-N-hidroxisuccinimida (3,288, 0,01 mmol) en DMF (20 ml) a temperatura ambiente. Después de dos horas de agitación, se eliminó el DMF mediante bombeo a presión reducida y se llevó el residuo a 50 ml de cloruro de metileno. Se lavó la fase orgánica con ácido cítrico al 5% (2 x 15 ml), H_{2}O (15 ml) y salmuera (15 ml), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró, y se concentró para proporcionar el compuesto deseado (3,32 g, 95%) como una espuma blanca. ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,96 (d, 1H, 8Hz), 6,93(d, 2H, 8Hz), 6,73(d, 2H, 8Hz), 6,53(s a, 1H), 5,09(d, 1H, 8Hz), 4,02(s a, 1H), 3,47-3,31 (m a, 2H), 2,64(t, 2H, 7Hz), 1,55(m, 2H), 1,37(s, 9H), 0,84(d, 6H, 6Hz), m/z 351.
B. Se sometió a reflujo una mezcla del compuesto de la etapa A (1 g, 2,85 mmol) y acetato de bromo-metilo (0,45 g, 2,85 mmol) en acetona (15 ml) con K_{2}CO_{3} sólido durante 3,5 horas. Se enfrió la mezcla de reacción, se filtró, y se concentró para dar el producto deseado (1,09 g, 91%) como una goma ámbar. ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm), 7,08 (d, 2H, 8Hz), 6,81(d, 2H, 8Hz), 6,14(s, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,59 (s, 2H), 4,00 (s, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,78-3,40 (m a, 2H), 2,71 (t, 2H, 7Hz), 1,60-1,39 (m, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,87 (d, 6H, 6Hz); m/z 423.
C. Se añadió TFA (3 ml) al compuesto de la etapa B (353 mg, 0,836 mmol) en 1 ml de CH_{2}Cl_{2} frío y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Se concentró la reacción a presión reducida para proporcionar el producto deseado que se utilizó sin purificación. ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,59 (s a, 3H), 7,24 (m, 1H), 7,04 (d, 2H, 9 Hz), 6,77 (d, 2H, 9 Hz), 4,60 (s, 2H) 4,04 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,52-3,43 (m a, 2H), 2,75-2,70 (t, 2H, 6 Hz), 1,56 (m, 2H), 1,46 (m, 1H), 0,84 (d, 6H, 6 Hz); m/z 323.
D. Se agitó en DMF (5 ml) una mezcla de 2-MPUPA (225 mg, 0,79 mmol), HOBt (169 mg, 1,25 mmol), y EDC (192 mg, 1,00 mmol) a temperatura ambiente durante 1,5 horas. En un vial separado, se neutralizó gota a gota el compuesto de la etapa C (0,836 mmol) en DMF (1 ml) frío con TEA (de verde a tornasol) con agitación. Se combinaron las dos disoluciones y se agitaron a temperatura ambiente durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción y se redujo el volumen hasta la mitad a vacío luego se hizo gotear rápidamente sobre bicarbonato de sodio al 5% agitado (50 ml). Después de una hora de agitación se recogieron los sólidos por filtración, se lavaron con agua, y se secaron al aire para dar el compuesto deseado (140 mg, 35%) como un sólido beige. ^{1}H RMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 9,06 (s, 1H), 8,20 (d, 1H, 8Hz), 8,07 (m, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, 8Hz), 7,47 (d, 2H, 9Hz), 7,27-7,19 (m, 6H), 7,03 (t, 1H, 7Hz), 6,92 (d, 2H, 9Hz), 4,84 (s, 2H), 4,34-4,31 (m, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,48 (d, 1H, 6Hz), 3,44 (s, 3H), 3,37-3,27 (m, 2H), 2,72 (t, 2H, 7Hz), 2,33 (s, 3H), 1,58-1,46 (m, 3H), 0,91 (dd, 6H, 6Hz, 13Hz); m/z 589.
E. Se agitó una disolución del compuesto de la etapa D (24 mg, 0,041 mmol) y LiOH 2 N (62 \mul, 0,122 mmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente durante 6 horas. Se acidificó la mezcla de reacción (de rojo a tornasol) con TFA y se purificó directamente mediante HPLC preparativa dando como resultado RX19 (10 mg, 43%) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 9,27 (s, 1H), 8,18 (m, 1H), 8,16 (m, 1H), 7,92 (d, 1H, 7Hz), 7,46 (d, 2H, 8Hz), 7,19-7,03 (m, 12H), 6,88 (d, 2H, 8Hz), 4,63 (s, 2H), 4,33 (m, 1H), 2,69 (t, 8Hz), 2,34 (s, 3H), 1,51-1,33 (m, 3H), 0,96-0,88 (dd, 6H, 6Hz, 12Hz), m/z 5,73.
Síntesis de RX23
A. Se añadió EDC (2,7 g, 0,014 mmol) a una disolución agitada de m-hidroxianilina (1,09 g, 0,01 mmol) y HOBt (2,0 g, 0,015 mmol) en DMF (12 ml) a 0°C. Se dejó a calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. A continuación se enfrió la reacción hasta 0°C y se añadió 2-MPUPA (2,84 g, 0,01 mmol). Se añadió gota a gota trietilamina hasta que la mezcla fue básica (de verde a tornasol) y se continuó la agitación durante la noche a temperatura ambiente. Después de la filtración, se hizo gotear la mezcla en 500 ml de bicarbonato de sodio al 5% agitado vigorosamente. Después de dos horas de agitación, se recogieron los sólidos por filtración a través de un embudo de vidrio aglomerado grueso y se lavaron abundantemente con H_{2}O. El secado durante la noche a vacío dio el producto deseado (3,2 g, 85%) como un sólido color crema. ^{1}H RMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 7,94 (s, 1H), 7,82 (d, 1H, 8Hz), 7,21 (d, 2H, 8Hz), 7,20-6,90 (m, 7H), 6,42 (d, 1H, 7Hz) 3,53 (s, 2H), 2,22 (s, 3H); m/z 376.
B. Se añadió K_{2}CO_{3} (120 mg, 1,45 mmol) a una disolución agitada del compuesto de la etapa A (200 mg, 0,53 mmol) y butirato de 4-bromo-etilo (104 mg, 0,53 mmol) en DMF (1 ml). Se agitó la suspensión a 70-75°C durante 6 horas, se filtró a través de un embudo de vidrio aglomerado y se hizo gotear sobre 50 ml de HCl al 5% agitado vigorosamente. Se extrajo la suspensión acuosa con 3 x 50 ml de EtoAc. Se combinaron las fases orgánicas y se lavaron con salmuera (25 ml), se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para dar el compuesto deseado (150 mg, 57%) como un sólido amarillo. ^{1}H RMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 8,98 (s, 1H) 7,88 (s, 1H), 7,85 (d, 1H, 8Hz), 7,40 (d, 2H, 7Hz) 7,3-7,1 (m, 6H), 6,95 (t, 1H, 6Hz), 6,6 (d, 1H, 6Hz), 4,45 (t, 1H, 6Hz), 4,02 (q, 2H, 7Hz), 3,91 (t, 2H, 7Hz), 3,54 (s, 2H), 2,42 (t, 2H, 7Hz), 2,25 (s, 3H), 1,94 (t, 2H, 7Hz), 1,15 (t, 3H, 7Hz); m/z 490.
C. Se añadió LiOH 2 N (385 \mul, 0,77 mmol) a una disolución agitada del compuesto de la etapa B (150 mg, 0,31 mmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla durante la noche y después de la acidificación con TFA (de rojo a tornasol) se purificó una alícuota mediante HPLC preparativa para dar RX23. ^{1}HRMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 9,01 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,83 (d, 1H, 8Hz), 7,39 (d, 1H, 8Hz), 7,29 (s, 1H), 7,23-7,14 (m, 5H), 6,92 (t, 1H, 8Hz), 6,6 (d, 1H, 8Hz), 3,92 (t, 2H, 7Hz), 3,54 (s, 2H), 2,35 (t, 2H, 7Hz), 2,22 (s, 1H), 1,90 (m, 2H); m/z 460.
Síntesis de RX19
A. Tal como se describió para la síntesis de RX23B usando RX23A (119 mg, 0,317 mmol) y dimetilacetal de 3-bromo-propionaldehido (89 mg, 0,49 mmol) con 250 mg de K_{2}CO_{3}. Se filtraron los sólidos y se eliminó mediante bombeo el DMF a alto vacío. La recristalización en metanol proporcionó el producto deseado (75 mg, 52%) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 8,98 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,83 (d, 1H, 8Hz), 7,39 (d, 2H, 8Hz), 7,32 (s, 1H), 7,32-7,12 (m, 6H), 6,93 (t, 1H, 6H), 6,6 (m, 1H), 4,53 (t, 6H), 3,92 (t, 2H, 7H), 3,54 (s, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,24 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,95 (q, 2H, 6Hz, 6Hz), m/z (M+Na)^{+} 500.
B. Se agitó el compuesto de la etapa A (29 mg, 0,061 mmol) en 2 ml de THF/H_{2}O 50/50 con una cantidad catalítica de p-toluensulfónico a 40°C durante 4 horas. Se redujo la mezcla de reacción a vacío y se usó sin purificación: m/z 454. Se llevó el residuo crudo a 2 ml de acetona, se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo y se añadieron 44 \mul de reactivo de Jones. Se dejó a calendar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente con agitación durante la noche. Se añadió isopropanol (2 ml) y se agitó la mezcla durante 30 minutos adicionales, se filtró, y se concentró a alto vacío. La HPLC preparativa proporcionó RX19 (15,5 mg, 57%) como un sólido de color tostado. ^{1}H RMN (DMSO, 300 MHz, ppm) 9,01 (s, 1H), 7,9 (s, 1H), 7,83 (d, 1H, 8Hz), 7,40 (d, 2H, 8Hz), 7,31 (s, 1H), 7,24-7,09 (m, 6H), 6,93 (t, 1H, 7Hz), 6,59 (d, 1H, 8Hz), 4,09 (t, 2H, 6Hz), 3,54 (s, 2H), 2,66 (t, 2H, 6Hz), 2,22 (s, 3H); m/z 448.
Preparación de BX41
A. Se añadió por partes ácido 2-amino-4-fluorobenzoico (1,94 g, 12,51 mmol) a una disolución de Na_{2}CO_{3} (1,33 g, 12,51 mmol) en H_{2}O (35 ml). Se agitó la mezcla a TA hasta que fue homogénea, luego se enfrió en un baño de hielo. Se añadió gradualmente fosgeno (9,72 ml de una disolución 1,93 M en tolueno, 18,76 mmol) a la disolución fría. Después de completar la adición, se agitó la reacción enérgicamente a TA durante 2 h. Se recogieron los sólidos precipitados mediante filtración por succión, se aclararon con H_{2}O (1 x 35 ml, 1 x 20 ml), se captaron con n-hexano, y se secaron sobre el filtro. Se obtuvieron 2,023 g (89%) de producto deseado como un sólido blanco: p.f. = 228-229°C; CCF (CH_{2}Cl_{2}/Et_{2}O 1:1) R_{f} = 0,74; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,97-7,93 (m, 1H), 6,84-6,79 (m, 2H).
B. Bajo un corriente de N_{2} anhidro, se lavó NaH (0,459 g de una dispersión al 60%, 11,48 mmol) con n-hexano (2 x 10 ml), se suspendió en DMF anhidro (55 ml), y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió gota a gota una disolución del producto de la parte A (1,98 g, 10,93 mmol) en DMF anhidro (55 ml) a la suspensión fría. Después de completar la adición, se agitó la mezcla a 0°C durante 45 min. Se añadió MeI (0,71 ml, 11,48 mmol) a la disolución resultante casi incolora. Se agitó la reacción a TA durante 2 h hasta que se consideró completa mediante análisis por CCF. Se eliminó el DMF mediante evaporación rotativa a alto vacío. Se disolvió el residuo de jarabe en EtOAc/H_{2}O, se separó, y se lavó la fase orgánica con H_{2}O (1 x), salmuera (1 x), y se secó (MgSO_{4}). La filtración y concentración proporcionaron 2,04 g (96%) del producto deseado como un sólido amarillo pálido: CCF (CH_{2}Cl_{2} al 100%) R_{f} = 0,18; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 8,10-8,04 (m, 1H), 6,95-6,89 (m, 1H), 6,84-6,77 (m, 1H), 3,46 (s, 3H).
C. Se sometió a reflujo enérgicamente con N_{2} una mezcla del producto de la parte B (2,04 g, 10,45 mmol) y glicina (0,79 g, 10,45 mmol) en ACOH glacial (22 ml). Después de 18 h, se consideró la reacción completa mediante análisis por CCF y se enfrió hasta TA. Se eliminó la mayor parte del AcOH por evaporación rotativa a alto vacío. Se trituró el residuo de jarabe con Et_{2}O (20 ml) y se agitó enérgicamente a TA durante 2 h. Se recogieron los sólidos precipitados mediante filtración por succión, se aclararon con Et_{2}O, y se secaron sobre el filtro. Se obtuvieron 1,806 g (83%) del producto deseado como un sólido blanco: MS (ESP+) 208,9; CCF (EtOAC al 100%) R_{f} = 0,30; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,84 (t a, 1H), 7,89-7,74 (m, 1H), 6,92-6,86 (m, 1H), 6,83-6,79 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,24 (s, 3H).
D. De la manera descrita para la preparación de BX47, parte B, se hicieron reaccionar el producto de la parte C anterior (0,50 g, 2,402 mmol), acrilato de etilo (0,39 ml, 3,60 mmol), CsF anhidro (0,401 g, 2,642 mmol), y ortosilicato de tetraetilo (0,54 ml, 2,40 mmol) en THF (8 ml) a TA con N_{2} durante 18 h. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía ultrarrápida (de CH_{2}Cl_{2} al 100% a Et_{2}O al 10%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 0,51 g (69%) de producto puro como un sólido blanco: MS (ESP+) 309,2; CCF (Et_{2}O al 10%/CH_{2}Cl_{2}) R_{f} = 0,30; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,83-7,78 (m, 1H), 6,97-6,90 (m, 1H), 6,86-6,82 (m, 1H), 4,08 (q, 2H, J = 7,15 Hz), 3,98 (B de AB, 1H, J = 14,91 Hz), 3,87-3,80 (m, 3H), 3,30 (s, 3H), 2,74-2,54 (m, 2H), 1,19 (t, 3H, J = 7,20 Hz).
E. De la manera descrita para la preparación de BX47, parte C, se hizo reaccionar el producto de la parte D anterior (0,51 g, 1,68 mmol) con ácido nítrico fumante (3 ml) durante 18 h. Se obtuvieron 0,49 g (83%) de producto deseado crudo como una espuma: MS (ESP+) 354,0; CCF (Et_{2}O al 100%) R_{f} = 0,25; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 8,61 (d, 1H, J = 8,34 Hz), 7,07 (d, 1H, J = 11,83 Hz), 4,11 (q, 2H, J = 7,11 Hz), 4,02 (s, 2H), 3,88 (t, 2H, J = 6,63 Hz), 3,38 (s, 3H), 2,80-2,57 (m, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,21 Hz).
F. De la manera descrita para la preparación de BX47, parte D, se sometieron a reflujo el producto de la parte E anterior (0,35 g, 0,991 mmol), polvo de Fe (0,166 g, 2,97 mmol), y AcOH glacial (0,11 ml, 1,98 mmol) en EtOH/H_{2}O 2:1 (10 ml) con N_{2} durante 3 h. Se obtuvieron 0,302 g (94%) de producto deseado crudo como un aceite: MS (ESP+) 324,0; CCF (EtOAc al 100%) R_{f} = 0,53; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,32 (d, 1H, J = 9,41 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 4,51 (s a, 1H), 4,15-4,00 (m, 3H), 3,89-3,79 (m, 3H), 3,29 (s, 3H), 2,78-2,60 (m, 2H), 1,26-1,20 (m, 3H).
G. Se disolvieron el producto de la parte F (0,30 g, 0,93 mmol), ácido 4-nitrofenilacético (0,169 g, 0,93 mmol) y EDC (0,269 g, 1,40 mmol) en DMF anhidro y se agitaron a TA con N_{2}. Después de 18 h, se consideró completa la reacción mediante CCF y se eliminó el DMF mediante evaporación rotativa a alto vacío. Se disolvió el residuo en EtOAC/H_{2}O, se separó, y se lavó la fase orgánica con H_{2}O (1 x) y NaHCO_{3} al 5% (1 x). Se extrajeron las fases acuosas combinadas con EtOAc (2x). Se lavaron las fases orgánicas reunidas con salmuera (1 x) y se secaron (MgSO_{4}). La filtración, evaporación y cromatografía ultrarrápida (de CHCl_{3} al 100% a THF al 40%/CHCl_{3}) proporcionaron 0,279 g (61%) de producto deseado puro como una espuma: MS (ESP+) 486,6; CCF (THF/CHCl_{3} 1:1) R_{f} = 0,53; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 8,54 (d, 2H, J = 8,64 Hz), 8,22 (dd, 1H, J = 1,90, 6,82 Hz), 7,52 (d, 2H, J = 8,68 Hz),6,89 (d, 1H, J = 11,79 Hz), 4,12 (q, 2H, J = 7,13 Hz), 4,01 (A de AB, 1H, J = 14,98 Hz), 3,87 (s, 2H), 3,92-3,77 (m, 3H), 3,31 (s, 3H), 2,79-2,57 (m, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,13 Hz).
H. De la manera de la parte F anterior, se sometieron a reflujo el producto de la parte G (0,28 g, 0,574 mmol), polvo de Fe (0,096 g, 1,722 mmol), y AcOH glacial (66 \mul) en EtOH/H_{2}O 2:1 (6 ml) con N_{2} durante 2 h. Se obtuvieron 0,208 g (78%) de producto deseado crudo como una espuma: MS (ESP+) 457,3; CCF (THF/CHCl_{3} 1:1) R_{f} = 0,38; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 8,54 (d, 1H, J = 8,64 Hz), 7,53 (s a, 1H), 7,07 (d, 2H, J = 8,24 Hz), 6,84 (d, 1H,J = 11,70 Hz), 6,73 (d, 2H, J = 8,06 Hz), 4,14-4,04 (m, 2H), 3,99 (A de AB, 1H, J = 14,92 Hz), 3,88-3,72 (m, 3H), 3,64 (s, 2H), 3,27 (s, 3H), 2,78-2,58 (m, 2H), 1,25-1,20 (m, 3H).
I. Se sometió a reflujo una disolución del producto de la parte H (0,21 g, 0,456 mmol) e isocianato de o-tolilo (0,11 ml, 0,89 mmol) en EtOAc (4,5 ml) con N_{2} durante 2 h hasta que se consideró completa mediante análisis por CCF. Se enfrío la reacción hasta TA. Se recogieron los sólidos precipitados mediante filtración por succión, se aclararon con EtOAc y se secaron sobre el filtro para proporcionar 0,159 g (59%) de producto puro como un sólido color crema: MS (ESP+) 590,2; CCF (THF/CHCl_{3} 1:1) R_{f} = 0,50; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) 10,07 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 8,77 Hz), 7,89 (s, 1H), 7,83 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,42-7,38 (m, 3H), 7,23 (d, 2H, J = 8,46 Hz), 7,17-7,10 (m, 2H), 6,92 (t, 1H, J = 7,33 Hz), 4,08-3,98 (m, 3H), 3,84-3,76 (m, 2H), 3,70-3,60 (m, 1H), 3,66 (s, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,60-2,54 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,14 t, (3H, J = 7,11 Hz).
J. Se añadió trimetilsilanolato de sodio (0,68 ml de una disolución 1,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 0,678 mmol) a una suspensión sometida ligeramente a reflujo del producto de la parte I (0,100 g, 0,170 mmol) en THF anhidro (17 ml) con N_{2}. Se retiró el calor y se agitó la reacción durante la noche a TA. Se recogieron los sólidos precipitados mediante filtración por succión, se aclararon con THF, y se secaron sobre el filtro. Se disolvió el producto crudo en AcOH glacial (1 ml), se trató con Et_{2}O (1 ml), y se agitó enérgicamente durante la noche. Se recogieron los sólidos resultantes, se aclararon con Et_{2}O/AcOH 1:1, y se secaron sobre el filtro. Se obtuvieron 0,059 g (62%) de BX41 como un sólido color crema: MS (ESP+) 584,0 (M + Na); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) 10,07 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 8,22 (d, 1H, J = 8,71 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,82 (d, 1H, J = 7,91 Hz), 7,42-7,38 (m, 3H), 7,24 (d, 2H, J = 8,36 Hz), 7,17-7,10 (m, 2H), 6,92 (t, 1H, J = 7,32 Hz), 4,05 (A de AB, 1H, J = 15,1 Hz), 3,83 (B de AB, 1H, J = 15,1 Hz), 3,72-3,66 (m, 4H), 3,25 (s, 3H), 2,50-2,46 (m, 2H), 2,23 (s, 3H).
Preparación de BX67
A. De la manera descrita para la preparación de BX41, parte D, se hicieron reaccionar 1-metil-1,4-benzodiazepin-2,5-diona (5,00 g, 26,29 mmol), CsF anhidro (4,393 g, 28,92 mmol), crotonato de etilo (4,90 ml, 39,44 ml) y ortosilicato de tetraetilo (5,86 ml, 26,29 mmol) en THF anhidro (88 ml) a TA con N_{2} durante 72 h. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía ultrarrápida (de CH_{2}Cl_{2} al 100% a Et_{2}O al 25%/CH_{2}C_{2}) para proporcionar 4,04 g (50%) de producto deseado puro como un sólido blanco: MS (ESP+) 305,4; p.f.= 84-86°C; CCF (Et_{2}O/CH_{2}Cl_{2} 1:1) R_{f} = 0,51; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotómeros) 7,87-7,79 (m, 1H), 7,51-7,45 (m, 1H), 7,28-7,23 (m, 1H), 7,17-7,14 (m, 1H), 5,31-5,22 y 5,19-5,08 (m, 1H), 4,13-4,03 (m, 2H), 3,86-3,73 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 2,85-2,77 y 2,59-2,45 (m, 2H), 1,33 y 1,28 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,24-1,16 (m, 3H).
B. De la manera descrita para la preparación de BX47, parte E, se hizo reaccionar el producto de la parte A anterior (4,04 g, 13,27 mmol) con ácido nítrico fumante (26 ml) durante 2 h. La trituración del producto crudo con Et_{2}O (45 ml) a -20°C dio una masa sólida que se rompió con una espátula. Luego se agitó la suspensión enérgicamente a TA durante 18 h. Se recogió el sólido mediante filtración por succión, se lavó con Et_{2}O y se secó sobre el filtró. Se obtuvieron 4,061 g (88%) de producto puro como un polvo ligeramente amarillo: MS (ESP+) 350,3; p.f. = 104-106°C; CCF (EtOAc al 100%) R_{f} = 0,76; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotámeros) 8,75-8,70 (m, 1H), 8,34-8,29 (m, 1H), 7,33-7,30 (m, 1H), 5,24-5,06 (m, 1H), 4,15-4,03 (m, 2H), 3,94-3,78 (m, 2H), 3,41 (s, 3H), 2,85-2,76 y 2,63-2,47 (m, 2H), 1,35 y 1,30 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,27-1,17 (m, 3H).
C. Se sometió a reflujo una suspensión del producto de la parte B (4,06 g, 11,62 mmol), polvo de Fe (1,95 g, 34,87 mmol), y AcOH glacial (1,33 ml, 23,24 mmol) en EtOH/H_{2}O 2:1 (120 ml) con N_{2} durante 3 h. Se enfrió la reacción completada hasta TA, se diluyó con H_{2}O (40 ml) y se filtró a través de Celite. Se lavaron el matraz de la reacción y la torta del filtro con EtOAc (4 x 100 ml). En un embudo de decantación, se lavó el filtrado combinado con NaHCO_{3} al 5% (2 x 100 ml). Se extrajeron los lavados acuosos combinados con EtOAc (1 x 100 ml), y se lavaron las fases orgánicas reunidas con salmuera (1 x 100 ml) y se secaron (MgSO_{4}). La filtración y concentración proporcionaron el producto crudo como una espuma. Se purificó mediante trituración con Et_{2}O, inicialmente a -20°C luego a reflujo durante 2 h. Después del enfriamiento hasta TA, se recogieron los sólidos mediante filtración por succión, se aclararon con Et_{2}O, y se secaron sobre el filtro. Se obtuvieron 3,09 g (83%) de producto puro como un sólido de color melocotón: MS (ESP+) 320,0; p.f. = 116-118°C; CCF (EtOAc al 100%) R_{f} = 0,35; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotámeros) 7,15-7,08 (m, 1H), 6,96-6,93 (m, 1H), 6,84-6,79 (m, 1H), 5,27-5,05 (m, 1H), 4,27 (s a, 2H), 4,11-4,01 (m, 2H), 3,84-3,62 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 2,81-2,73 y 2,56-2,42 (m, 2H), 1,30-1,24 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,22-1,14 (m, 3H).
D. De la manera descrita para la preparación de BX41, parte G, se condensó el producto de la parte C (3,09 g, 9,66 mmol) con ácido 4-nitrofenilacético (2,10 g, 11,59 mmol) en presencia de EDC (2,78 g, 14,49 mmol) en DMF anhidro (50 ml) a TA con N_{2} durante 18 h. Se purificó el producto crudo mediante trituración con Et_{2}O a TA. Se recogió el sólido mediante filtración por succión, se lavó con Et_{2}O (100 ml), y se secó sobre el filtró. Se obtuvieron 4,30 g (92%) de producto deseado como un polvo amarillo pálido: MS (ESP+) 483,3; p.f. = 118-120°C; CCF (EtOAc al 100%) R_{f} = 0,45; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotámeros) 8,77 y 8,32 (s, 1H), 8,25 (dd, 1H, J = 2,54, 8,99 Hz), 8,19 y 8,17 (d, 2H, J = 8,67 y 8,64 Hz, respectivamente), 7,69 y 7,59 (d, 1H, J = 2,60 y 2,56 Hz, respectivamente), 7,50 y 7,49 (d, 2H, J = 8,73 y 8,68 Hz, respectivamente), 7,15 (d, 1H, J = 8,98 Hz), 5,28-5,13 (m, 1H), 4,09 y 3,98 (q, 2H, J = 7,12 y 7,13 Hz, respectivamente), 3,87-3,73 (m, 4H), 3,35 y 3,32 (s, 3H), 2,84-2,75 y 2,54-2,47 (m, 2H), 1,32 y 1,25 (d, 3H, 6,93 y 6,86 Hz, respectivamente), 1,21 y 1,15 (t, 3H, J = 7,23 y 7,12 Hz, respectivamente).
E. De la manera descrita en la parte C anterior, se redujo el producto de la parte D (4,30 g, 8,91 mmol) con polvo de Fe (1,49 g, 26,74 mmol) y AcOH (1,02 ml, 17,82 mmol) en EtOH/H_{2}O 2:1 (90 ml) a reflujo. Después de un tratamiento final acuoso, se obtuvieron 3,98 g (99%) de producto crudo como una espuma frágil: MS (ESP+) 453,5; CCF (EtOAc al 100%) R_{f} = 0,30; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotámeros) 8,09 (m, 1H), 7,43-7,38 (m, 1H), 7,10-7,02 (m, 3H), 6,73-6,69 (m, 2H), 5,21-5,08 (m, 1H), 4,13-4,01 (m, 2H), 3,76 (s, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,31 y 3,30 (s, 3H), 2,82-2,74 y 2,53-2,46 (m, 2H), 1,34-1,15 (m, 6H).
F. De la manera descrita para la preparación de BX41, parte I, se sometió a reflujo el producto de la parte E (3,98 g, 8,8 mmol) en EtOAc (90 ml) con isocianato de o-tolilo (2,18 ml, 17,6 mmol) durante 3 h. Se enfrió la reacción hasta TA y se concentró hasta aproximadamente un tercio del volumen original. Se recogieron los sólidos precipitados mediante filtración por succión, se aclararon con EtOAc (1 x 25 ml) y se secaron sobre el filtro. Se obtuvieron 3,77 g (73%) de producto deseado como un polvo color crema: MS (ESP+) 586,4; p.f. = 164-166°C; CCF (THF/CHCl_{3} 1:1) R_{f} = 0,45; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm, rotámeros) 9,02 y 8,90 (s a, 1H), 7,96 y 7,92 (s a, 1H), 7,88-7,84 (m, 1H), 7,68-7,63 (m, 1H), 7,51-7,48 (m, 1H), 7,31 (s a, 1H), 7,03-6,85 (m, 8H), 5,22-5,10 (m, 1H), 4,06-3,92 (m, 2H), 3,75-3,65 (m, 2H), 3,40 (s, 2H), 3,26 y 3,23 (s, 3H), 2,79-2,70 y 2,51-2,44 (m, 2H), 2,06 (s, 3H), 1,30 y 1,22 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,17-1,11 (m, 3H).
G. Se añadió gradualmente a TA trimetilsilanolato de sodio (10,25 ml de una disolución 1,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 10,25 mmol) a una disolución turbia del producto de la parte F (1,00 g, 1,71 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (7 ml). Después de agitar durante la noche a TA, se concentró la reacción hasta sequedad y se trató el residuo sólido con HCl 1 N hasta pH 2-3. Se diluyó la mezcla viscosa con H_{2}O (50 ml) y se extrajo con Et_{2}O al 20%/THF (1 x 100 ml). Se lavó el extracto orgánico con H_{2}O (1 x 25 ml) y salmuera (2 x 25 ml) y se secó (MgSO_{4}). La filtración y evaporación proporcionaron 0,93 g de producto crudo que se recristalizó en MeCN (25 ml) para dar 0,657 g (69%) de BX67 como un polvo beige: MS (ESP+) 558,2; p.f. = 237-239°C; CCF (THF/CHCl_{3} 3:1) R_{f} = 0,37; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm, rotámeros) 10,46 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 7,95-7,93 (m, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,84-7,76 (m, 2H), 7,40 (d, 2H, J = 8,56 Hz), 7,33 (dd, 1H, J = 1,82, 8,93 Hz) 7,23 (d, 2H, J = 8,50 Hz), 7,17-7,07 (m, 2H), 6,95-6,90 (m, 1H), 5,03-4,90 (m, 1H), 3,84-3,71 (q AB, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,24 y 3,22 (s, 3H), 2,56-2,40 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 1,17 y 1,14 (d, 3H, J = 7,0 y 6,80 Hz, respectivamente).
Preparación de MX3
A. Se añadió, en orden, N-metilmorfolina (0,34 ml, 3,09 mmol) y cloroformiato de isobutilo (0,40 ml, 3,09 mmol) a una disolución de Z-Asp(OtBu) (1,00 g, 3,09 mmol) en DME anhidro (8 ml) a -20°C con N_{2}. Después de 5 min, se filtró la reacción a través de lana de vidrio para eliminar los sólidos. Se añadió CH_{2}N_{2} etereo (cerca de 4,64 mmol) al filtrado a 0°C. Después de 30 min, se eliminó el CH_{2}N_{2} en exceso burbujeando una corriente de N_{2} seco a través de la reacción durante 10 min. Se concentró la reacción hasta sequedad y se disolvió el residuo en MeOH (16 ml) a lo que se añadió una disolución de benzoato de plata (0,14 g, 0,62 mmol) en Et_{3}N (1,55 ml) a TA. Después de agitar durante 30 minutos, se evaporó la reacción hasta sequedad, se disolvió el residuo en EtOAc, y se hizo pasar esta disolución a través de una almohadilla de de SiO_{2}. Se lavó el filtrado con NaHCO_{3} al 5% (3x), H_{2}O (1x), ácido cítrico al 5% (3x), y salmuera (2x), y se secó (MgSO_{4}). La filtración y evaporación proporcionaron producto crudo como un aceite (0,70 g, 64%): MS (FAB) 348; CCF (EtOAc al 20%/hexano) R_{f} = 0,30; 1H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,35-7,27 (m, 5H), 5,72 y 5,58 (d a, 1H, 8,9 Hz), 5,10 y 5,06 (s, 2H), 4,60-4,51 y 4,36-4,29 (m, 1H), 3,73 y 3,64 (s, 3H), 2,75-2,47 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
B. Se trató una disolución del producto anterior (0,70 g, 1,99 mmol) en MeOH (3 ml) con NaOH 1 N (3 ml) a TA. Después de agitar durante 1 h, se consideró la reacción completa mediante análisis por CCF. Se eliminó el MeOH por evaporación rotativa. Se diluyó el residuo con H_{2}O y se extrajo con Et_{2}O (3x). Se descartaron estos extractos. Se acidificó la disolución acuosa (pH 4) mediante adición de NaHSO_{4} de 1 M y se extrajo con EtOAc (3x). Se lavaron los extractos de EtOAc combinados con H_{2}O (1x), y salmuera (1x), y se secaron (MgSO_{4}). Se obtuvo el producto como un aceite (0,52 g, 77%): MS (FAB) 338 (M+H), 360 (M+Na); CCF (EtOAc/CHCl_{3} 1:1) R_{f} = 0,13; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,33-7,28 (m, 5H), 5,77 y 5,63 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 5,11 y 5,07 (s, 2H), 4,63-4,58 y 4,37-4,30 (m, 1H), 2,78-2,50 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
C. Se agitó a TA una mezcla de DCC (1,85 g, 8,95 mmol) y HOBT (1,37 g, 8,95 mmol) en EtOAc (55 ml) durante 20 min hasta homogeneidad. Luego se añadieron el producto de la parte B (3,02 g, 8,95 mmol), 4-metoxibencilamina (1,17 ml, 8,95 mmol), y N-metilmorfolina (1,97 ml, 17,9 mmol). Después de agitar durante la noche, se filtró la reacción para eliminar los sólidos y se lavó la torta con EtOAc nuevo (50 ml). Se lavó el filtrado con H_{2}O (2x), ácido cítrico al 5% (1x), NaHCO_{3} al 5% (1x), y salmuera (1x), y se secó (MgSO_{4}). La cromatografía en columna ultrarrápida sobre SiO_{2} eluyendo con CHCl_{3} al 100% seguido por EtOAc al 10%/CHCl_{3} proporcionó producto como un sólido blanco (3,41 g, 83%): p.f. = 100-102°C; MS (FAB) 457; CCF (CHCl_{3}/MeOH 9:1) R_{f} = 0,71; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,33-7,27 (m, 5H), 7,16 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,82 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 6,06 (s a, 1H), 5,89 (d a, 1H), 5,04 (s, 2H), 4,31 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 4,31-4,22 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,68-2,44 (m, 4H), 1,39 (s, 9H).
D. Se hidrogenó una suspensión de este producto (0,50 g, 1,1 mmol) y E101 NE/W Pd/C al 10% tipo Degussa (0,117 g) en MeOH (20 ml) a 25 psi de H_{2} durante 18 h. Se filtró la reacción a través de Celite, se aclaró con MeOH. Se evaporó el filtrado hasta sequedad. Se obtuvo el producto como un aceite incoloro (0,36 g, 100%): MS (FAB) 323; CCF (CHCl_{3}/MeOH 9:1) R_{f} = 0,30; ^{1}H RMN (CDC_{3}, 300 MHz, ppm) 7,58 (s a, 1H), 7,15 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,79 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,30 (d, 2H, J = 6,50 Hz), 3,74 (s, 3H), 3,54 (m, 1H), 3,15 (s a, 2H), 2,46-2,29 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
E. Se sometieron a reflujo el producto de la parte D (0,36 g, 1,1 mmol) y sal de Eschenmoser (0,204 g, 1,1 mmol) en MeCN (10 ml) bajo una atmósfera inerte durante 42 h. Se enfrió la reacción hasta TA y se evaporó hasta sequedad. Se diluyó el residuo con NaHCO_{3} al 5% y se extrajo con EtOAc (3x). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con NaHCO_{3} al 5% (1x), H_{2}O (1x), y salmuera (1x), y se secaron (MgSO_{4}). La cromatografía en columna ultrarrápida con un gradiente de CHCl_{3}/EtOAc proporcionó el producto como un aceite (0,19 g, 51%): MS(FAB) 335; CCF (EtOAC/CHCl_{3} 1:1) R_{f} = 0,22; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,16 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,81 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,64 (A de AB, 1H, J = 14,6 Hz), 4,27 (B de AB, 1H, J = 14,6 Hz), 4,10 (q AB, 2H, J = 11,7 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,28 (m, 1H), 2,50 (dd, 1H, J = 4,4, 17,2 Hz), 2,37 (AB de ABX, 2H, J = 15,8 Hz), 2,24 (dd, 1H, J = 11,2, 17,2 Hz), 1,99 (s a, 1H), 1,40 (s, 9H).
F. Se agitó durante la noche una mezcla del ácido o-tolilureidofenilacético (3,53 g, 12,4 mmol), H-Leu-OtBu\cdotHCl (2,78 g, 12,4 mmol), TBTU (3,98 g, 12,4 mmol), e iPr_{2}NEt (4,32 ml, 24,8 mmmol) en DMF (25 ml) a TA. Se precipitó el producto mediante adición de H_{2}O (10 ml). Se recogieron los sólidos mediante filtración sobre una frita mediana, lavando con DMF/H_{2}O 2:1 (35 ml), H_{2}O (25 ml), y Et_{2}O (2 x 25 ml), y se secaron sobre el filtro (4,18 g, 74%). Se suspendió la totalidad de este producto en CH_{2}Cl_{2} (16 ml) y se trató con TFA (16 ml) y se agitó a TA durante 2 h. Se concentró la reacción hasta dar un jarabe que se evaporó en CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 ml). Se trituró el residuo con Et_{2}O (100 ml) a TA durante 2 h. Se recogieron los sólidos mediante filtración sobre una frita mediana, lavando con Et_{2}O (50 ml), y se secaron sobre el filtro (3,40 g, 93%): MS (FAB) 398.
H. Se agitaron el producto de la etapa G (0,66 g, 1,96 mmol), el producto de la parte F (0,78 g, 1,96 mmol) y EDC (0,410 g, 2,14 mmol) en NMP (4 ml) a TA durante 48 h. Se vertió la reacción sobre EtOAc (60 ml), se lavó con H_{2}O (8 x 6 ml), salmuera (1 x), y se secó (MgSO_{4}). Se aisló puro el diastereómero deseado (0,34 g, 24%) mediante cromatografía en columna ultrarrápida repetida usando EtOAc/CH_{2}Cl_{2} 1:1: MS (ESP+) 714,3; CCF (EtOAc al 100%) R, = 0,53; ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300 MHz, ppm) 7,53-7,43 (m, 2H), 7,20-7,00 (m, 9H), 6,80-6,73 (m, 2H), 6,45-6,33 (m, 1H), 5,31-4,58 (m, 4H), 4,21-4,00 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,41 (s, 2H), 2,74-2,35 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 1,36 (s, 9H), 1,56-1,05 (m, 3H), 0,88, 0,82, 0,68, 0,63 (4d, 6H en total, J = 6,17, 6,32, 6,46, 6,37 Hz, respectivamente).
G. Se agitó este producto (0,34 g, 0,476 mmol) en TFA (3 ml) a TA durante 3 h. Se concentró la reacción hasta sequedad y se evaporó el residuo en CH_{2}Cl_{2} (3 x 3 ml). Se trituró el producto crudo con Et_{2}O a TA, se recogió mediante filtración y se secó sobre el filtro. Se obtuvo el producto, MX3, como un sólido amarillo claro (0,263 g, 84%): MS (ESP+) 680,2 (M+Na); ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz, ppm) que concuerda con la estructura y es indicativo de los rotámeros.
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Claims (28)

1. Inhibidor de la adhesión celular que tiene la fórmula (I)
(I)A-B
en la que A comprende un determinante de especificidad de VLA-4 que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y B comprende una estructura de integrina derivada de un compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa,
en la que B es un compuesto seleccionado de las fórmulas IIb y IIc
79
en las que
A^{1} se selecciona de NR^{1}, O, S, (CR^{1}R^{2})_{r}, y N[(CR^{1}R^{2})_{m}(CY)A^{2}R^{1}];
A^{2} se selecciona de O, NR^{2}, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
A^{3} se selecciona de NR^{1}, O, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
X se selecciona de CH_{2}, O, y S;
Y es H_{2} u O;
r es 0 ó 1;
n es 0-5;
m es 1-4;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
U se selecciona de COR^{12}, (CR^{1}R^{2})_{n}R^{12}, y SO_{2}R^{11};
R^{l} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{3} es R^{1} o cadenas laterales de aminoácido;
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente de H, OR^{1}, halógeno, alquilo, SR^{1}, NZR^{12}, y NR^{1}R^{2};
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida; y
R^{12} se selecciona de H, alquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, heterociclo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, carboxamida, o aralcoxilo, o
\newpage
en la que B comprende una estructura seleccionada de la fórmula IIIa, fórmula IIIb y fórmula IIIc
80
en las que
n es 0-5;
m es 1-4;
q es 1 ó 2;
r es 0 ó 1;
Y es H_{2} u O;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H; alquilo, alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{7} se selecciona de H; arilo; arilo sustituido; aralquilo; alquilo; alquenilo; y alquilo sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, o halógeno;
R^{10} se selecciona de R^{2}, NHSO_{2}R^{11}, NH_{2}, OR^{2}, y NHZR^{12};
R^{12} se selecciona de H; alquilo, cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, heterociclo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, carboxamida, o aralcoxilo;
R^{13} es H o -CH_{2}(CH_{2})_{m}CH_{2}-;
R^{2} y R^{7} pueden tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{2} y R^{10} pueden tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{11} se selecciona de alquilo; alquenilo, alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo, arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
Q es (CR^{1}R^{2})_{r}, o NR^{12}; o
\newpage
en la que B comprende una estructura seleccionada de la fórmula IVa, fórmula IVb y fórmula IVc
\vskip1.000000\baselineskip
81 
\vskip1.000000\baselineskip
en las que
A^{4} se selecciona de (CR^{1}R^{2})_{n}, O, S, NR^{1}, SO_{2}NR^{1}, CONR^{1}, CH_{2}NR^{11}, NR^{1}SO_{2}, CH_{2}O, CH_{2}NCOR^{11}, y
CH_{2}CONR^{1};
n es 0-5;
m es 1-4;
W se selecciona de -CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H; Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{4} se selecciona de H, OR^{1}, SR^{1}, NR^{1}R^{2}, alquilo, NZR^{1}, NSO_{2}R^{11}, y CO_{2}R^{1};
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente de H, OR^{1}, halógeno, alquilo y NR^{1}R^{2}; y
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida; o
en la que B comprende una estructura que tiene la fórmula Va o Vb
\vskip1.000000\baselineskip
82 
\newpage
en las que
A^{3} se selecciona de NR^{1}, O, S; y (CR^{1}R^{2})_{r};
A^{5} se selecciona de SO_{2}R^{11}, COR^{7}, y (CR^{1}R^{2})_{n}R^{7};
n es 0-5;
m es 1-4;
r es 0 ó 1;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
P es CO o SO_{2};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{7} se selecciona de H, arilo, arilo sustituido, aralquilo, alquilo, alquenilo; alquilo opcionalmente sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, y halógeno;
cuando R^{8} es H, entonces R^{9} es R^{7}, o R^{8} y R^{9} pueden tomarse juntos para formar un anillo de 4-7 miembros opcionalmente sustituido con hidroxilo, -OR^{1}, -N^{1}R^{1}R^{2}, -SR^{1}, -SO_{2}R^{11}, o -SOR^{11}, y
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, y carboxamida; y
en la que A se selecciona de acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido; aroilo; heterocicloilo; aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; heterocicloalquilcarbonilo; alcoxicarbonilo; aralquiloxicarbonilo; cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo; heterocicloalcoxicarbonilo; alquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo; arilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo; aralquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo; alquilsulfonilo; aralquilsulfonilo; arilsulfonilo; cicloalquilsulfonilo opcionalmente condensado con arilo; heterociclilsulfonilo; heterociclilalquilsulfonilo; aralcoxicarbonilo; ariloxicarbonilo; cicloalquiloxicarbonilo; heterocicliloxicarbonilo; heterociclilalcoxicarbonilo, mono o di-alquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; (alquil)(aralquil)aminocarbonilo; mono o di-arilalquilaminocarbonilo; mono o di-arilaminocarbonilo; (aril)(alquil)aminocarbonilo; mono o di-cicloalquilaminocarbonilo; heterociclilaminocarbonilo; heterociclilalquilaminocarbonilo; (alquil)(heterociclil)aminocarbonilo; (alquil)(heterociclilalquil)aminocarbonilo; (aralquil)(heterociclil)aminocarbonilo; (aralquil)(heterociclilalquil)aminocarbonilo; alquenoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; cicloalquenilcarbonilo; cicloalquenilsulfonilo; cicloalquilalcanoilo; cicloalquilalquilsulfonilo; arilaroilo, biarilsulfonilo; alcoxisulfonilo; aralcoxisulfonilo; alquilaminosulfonilo; ariloxisulfonilo; arilaminosulfonilo; alcanoilo N-arilurea-substituido; alquilsulfonilo N-arilurea-sustituido; carbonilo cicloalquenil-sustituido; sulfonilo cicloalquenil-sustituido; alquenoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenil o alquinil-aminocarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenil o alquinil-aminosulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcanoilo acilamino-sustituido; alquilsulfonilo acilamino-sustituido; alcanoilo aminocarbonil-sustituido; alcanoilo carbamoil-sustituido; alquilsulfonilo carbamoil-sustituido; heterociclilalcanoilo; heterociclilaminosulfonilo; aralcoxilo carboxialquil-sustituido; aralquilsulfonilo carboxialquil-sustituido; aroilo oxocarbociclil-condensado; arilsulfonilo oxocarbociclil-condensado; heterociclilalcanoilo; N',N'-alquilo, arilhidrazinocarbonilo; alcanoilo ariloxi-sustituido y heterociclilalquilsulfonilo; alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; aril-condensado cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; alquilo aril-sustituido; alquenilo aril-sustituido; alquinilo aril-sustituido; alquilo cicloalquil-sustituido; cicloalquilo cicloalquenil-sustituido; biarilo; alcoxilo; alquenoxilo; alquinoxilo; alcoxilo aril-sustituido; alquilamino; alquenilamino; alquinilamino; alquilamino aril-sustituido; alquenilamino aril-sustituido; alquinilamino aril-sustituido; ariloxilo; arilamino; alquilo N-alquilurea-sustituido; alquilo N-arilurea-sustituido; alquilo alquilcarbonilamino-sustituido; heterociclilo; amino heterociclil-sustituido; aralquilo carboxialquil-sustituido; arilo oxocarbociclil-condensado; arilalquilcarbonilamino arilurea-sustituido; arilalquilcarbonilamino heteroarilamino-sustituido; y arilurea arilurea-sustituida.
\newpage
2. Inhibidor de la adhesión celular seleccionado de los siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
83 
\vskip1.000000\baselineskip
3. Inhibidor de la adhesión celular seleccionado de los siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
84 
\newpage
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr \cr
\cr}
85
86 
\vskip1.000000\baselineskip
4. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 1, en el que A se selecciona de acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido, aroilo, heterocicloilo, alquil y arilsulfonilo, aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo, heterocicloalquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo, heterocicloalcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo y aralquilaminocarbonilo opcionalmente sustituido con bis-(alquilsulfonil)amino, alcoxicarbonilamino o alquenilo.
5. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 4, en el que A se selecciona de acilo alifático, aroilo, aralquilcarbonilo, heterocicloilo, alcoxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo y heterocicloalquilcarbonilo.
6. Inhibidor de la adhesión celular que tiene la fórmula (I)
(I)A-B
en la que en la que A comprende un determinante de especificidad de VLA-4 que no confiere actividad de IIb/IIIa significativa, y B comprende una estructura de integrina derivada de un compuesto que tiene actividad de IIb/IIIa,
\newpage
en la que B es un compuesto de fórmula IIa
87
en la que
A^{1} se selecciona de NR^{1}, O, S, (CR^{1}R^{2})_{r}, y N[(CR^{1}R^{2})_{m}(CY)A^{2}R^{1}];
A^{2} se selecciona de O, NR^{2}, S, y (CR^{1}R^{2})_{r};
X se selecciona de CH_{2}, O y S;
Y es H_{2} u O;
r es 0 ó 1;
n es 0-5;
m es 1-4;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{3} es R^{1} o cadenas laterales de aminoácido;
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente de H, OR^{1}, halógeno, alquilo, SR^{1}, NZR^{12}, y NR^{1}R^{2}; y
en la que A se selecciona de acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido; aroilo; alquil o arilsulfonilo; aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcoxicarbonilo; aralquiloxicarbonilo; cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo; alquilsulfonilo; aralquilsulfonilo; arilsulfonilo; cicloalquilsulfonilo opcionalmente condensado con arilo; aralcoxicarbonilo; ariloxicarbonilo; cicloalquiloxicarbonilo; alquenoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinilsulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; cicloalquenilcarbonilo; cicloalquenilsulfonilo; cicloalquilalcanoilo; cicloalquilalquilsulfonilo; arilaroilo, biarilsulfonilo; alcoxisulfonilo; aralcoxisulfonilo; ariloxisulfonilo; alcanoilo N-arilurea-sustituido; alquilsulfonilo N-arilurea-sustituido; carbonilo cicloalquenil-sustituido; sulfonilo cicloalquenil-sustituido; alquenoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquenoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxicarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alquinoxisulfonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcanoilo acilamino-sustituido; alquilsulfonilo acilamino-sustituido; alcanoilo aminocarbonil-sustituido; alcanoilo carbamoil-sustituido; alquilsulfonilo carbamoil-sustituido; aralcoilo carboxialquil-sustituido; aralquilsulfonilo carboxialquil-sustituido; aroilo oxocarbociclil-condensado; arilsulfonilo oxocarbociclil-condensado; N',N'-alquilo, arilhidrazinocarbonilo; alcanoilo ariloxi-sustituido; alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquilo aril-condensado; cicloalquenilo; arilo; alquilo aril-sustituido; alquenilo aril-sustituido; alquinilo aril-sustituido; alquilo cicloalquil-sustituido; cicloalquilo cicloalquenil-sustituido; biarilo; alcoxilo; alquenoxilo; alquinoxilo; alcoxilo aril-sustituido; alquilamino; alquenilamino; alquinilamino; alquilamino aril-sustituido; alquenilamino aril-sustituido; alquinilamino aril-sustituido; ariloxilo; arilamino; alquilo N-alquilurea-sustituido; alquilo N-arilurea-sustituido; alquilo alquilcarbonilamino-sustituido; aralquilo carboxialquil-sustituido; arilo oxocarbociclil-condensado; arilalquilcarbonilamino arilurea-sustituido; arilalquilcarbonilamino heteroarilamido-sustituido; y arilurea arilurea-sustituida.
7. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 6, en el que A se selecciona de acilo alifático opcionalmente sustituido con N-alquil o N-arilamido; aroilo; alquil y arilsulfonilo; aralquilcarbonilo opcionalmente sustituido con arilo; alcoxicarbonilo; aralquiloxicarbonilo; y cicloalquilcarbonilo opcionalmente condensado con arilo.
8. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 7, en el que A se selecciona de acilo alifático, aroilo, aralquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, y aralquiloxicarbonilo.
9. Inhibidor de la adhesión celular según las reivindicaciones 5 u 8, en el que A se selecciona de aralquilcarbonilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido, aralquilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido y arilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido.
10. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 9, en el que A se selecciona de fenilmetilcarbonilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido, fenilmetilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido y fenilo (N-Ar'-urea)-para-sustituido.
11. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 10, en el que
B es un compuesto seleccionado de las fórmulas IIb y IIc según la reivindicación 1, o B es un compuesto de fórmula IIa según la reivindicación 6.
12. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 9, en el que:
B es una estructura seleccionada de la fórmula IIIa, fórmula IIIb y fórmula IIIc
88
en las que m es 1-4;
q es 1 ó 2;
r es 0 ó 1;
Y es CH_{2} u O;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
n es 0-5;
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H; alquilo, alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
\newpage
R^{7} se selecciona de H; arilo; arilo sustituido; aralquilo; alquilo; alquenilo; y alquilo sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, o halógeno;
R^{10} se selecciona de R^{2}, NHSO_{2}R^{11}, NH_{2}, OR^{2}, y NHZR^{12};
R^{12} se selecciona de H; alquilo, cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; alquilo sustituido con cicloalquilo, heterociclo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, carboxamida, o aral-
coxilo;
R^{13} es H o -CH_{2}(CH_{2})_{n}CH_{2}-;
R^{2} y R^{7} pueden opcionalmente tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{2} y R^{10} pueden opcionalmente tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{11} se selecciona de alquilo; alquenilo, alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo, arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
Q es (CR^{1}R^{2})_{r}, o NR^{12}.
13. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 9, en el que
B comprende una estructura seleccionada de la fórmula IVa, fórmula IVb y fórmula IVc según la reivindicación 1.
14. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 9, en el que:
B es una estructura de fórmula Va o Vb
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89 
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en las que
A^{3} se selecciona de NR^{1}, O, S; y (CR^{1}R^{2})_{r};
A^{5} se selecciona de SO_{2}R^{11}, COR^{7}, y (CR^{1}R^{2})_{n}R^{7};
n es 0-5;
m es 1-4;
r es 0 ó 1;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
P es CO o SO_{2};
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{7} se selecciona de H, arilo, arilo sustituido, aralquilo, alquilo, alquenilo; y alquilo opcionalmente sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, y halógeno;
cuando R^{8} es H, entonces R^{9} es R^{7}, o R^{8} y R^{9} pueden tomarse juntos para formar un anillo de prolina, tioprolina o pipecolínico; y
R^{11} se selecciona de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, aralquilo, heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, y carboxamida.
15. Composición farmacéutica que comprende
(a)
el inhibidor de la adhesión celular según las reivindicaciones 1 ó 6 en una cantidad eficaz para la prevención, inhibición o supresión de la adhesión celular; y
(b)
un vehículo farmacéuticamente aceptable.
16. Inhibidor de la adhesión celular según las reivindicaciones 1 ó 6, en el que dicho inhibidor tiene una CI_{50} de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 10 \muM, según se mide mediante un ensayo de unión directa a VLA-4.
17. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 16, en el que dicho inhibidor tiene una CI_{50} de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 100 nM.
18. Inhibidor de la adhesión celular según la reivindicación 17, en el que dicho inhibidor tiene una CI_{50} de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 10 nM.
19. Método para convertir un primer compuesto que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa, comprendiendo dicho primer compuesto un determinante de especificidad de IIb/IIIa, comprendiendo dicho determinante de especificidad un resto de fenilamidina o una funcionalidad básica, y una estructura de integrina, en un segundo compuesto, diferente, que puede interferir en la adhesión celular de VLA-4 en un mamífero sin inhibir significativamente la adhesión celular basada en IIb/IIIa, comprendiendo dicho método las etapas de:
(a)
identificar el resto de fenilamidina en el determinante de especificidad de dicho primer compuesto, o, si no hay ninguno presente, convertir la funcionalidad básica en dicho determinante de especificidad en un resto de fenilamidina fantasma creando enlaces fantasma en la orientación para, y eliminando los enlaces innecesarios;
(b)
eliminar el resto de fenilamidina identificado en la etapa a) y sustituir dicho resto con un determinante de especificidad de VLA-4 creando así el segundo compuesto.
20. Método para preparar una composición farmacéutica para el tratamiento de un estado asociado con la adhesión celular, comprendiendo dicho método las etapas de:
(a)
proporcionar un primer compuesto que tiene actividad inhibidora de IIb/IIIa, comprendiendo dicho primer compuesto (i) un determinante de especificidad de IIb/IIIa, comprendiendo dicho determinante de especificidad un resto de fenilamidina o una funcionalidad de nitrógeno básico, y (ii) una estructura de integrina;
(b)
eliminar dicho determinante de especificidad de IIb/IIIa y sustituirlo con un determinante de especificidad de VLA-4, creando así un segundo compuesto que tiene actividad inhibidora de VLA-4; y
(c)
combinar dicho segundo compuesto con un vehículo farmacéuticamente aceptable para así preparar una composición farmacéutica.
21. Uso de un compuesto que tiene la fórmula (I) que puede interferir con la actividad de VLA-4
(I)A-B
según las reivindicaciones 1 ó 6 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o la prevención de una enfermedad inflamatoria, inmunitaria o autoinmunitaria en un mamífero.
22. Uso según la reivindicación 21, en el que B comprende una estructura seleccionada de la fórmula IIIa, fórmula IIIb y fórmula IIIc según la reivindicación 1.
\newpage
23. Uso según la reivindicación 21, en el que B es un compuesto seleccionado de la fórmula IIIa, IIIb y IIIc
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90 
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en las que m es 1-4;
q es 1 ó 2;
r es 0 ó 1;
Y es CH_{2} u O;
W se selecciona de CO_{2}H, SO_{3}H, PO_{4}H_{2}, tetrazol, y H;
Z es CO o (CR^{1}R^{2})_{n};
n es 0-5;
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de H; alquilo, alquenilo; alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
R^{7} se selecciona de H; arilo; arilo sustituido; aralquilo; alquilo; alquenilo; y alquilo sustituido con heterociclo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alcoxilo, o halógeno;
R^{10} se selecciona de R^{2}, NHSO_{2}R^{11}, NH_{2}, OR^{2}, y NHZR^{12};
R^{12} se selecciona de H; alquilo, cicloalquenilo; arilo; aralquilo; heterociclo; y alquilo sustituido con cicloalquilo, heterociclo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, carboxamida, o aralcoxilo;
R^{13} es H o -CH_{2}(CH_{2})_{m}CH_{2}-;
R^{2} y R^{7} pueden opcionalmente tomarse juntos para formar -{CH_{2})_{m};
R^{2} y R^{10} pueden opcionalmente tomarse juntos para formar -(CH_{2})_{m};
R^{11} se selecciona de alquilo; alquenilo, alquinilo; cicloalquilo; cicloalquenilo, arilo; aralquilo; heterociclo; alquilo sustituido con cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo, alquenilo, alquinilo, alcoxilo, hidroxilo, halógeno, aralcoxilo, tioalcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, o carboxamida;
Q es (CR^{1}R^{2})_{r}, o NR^{12}.
\newpage
24. Uso según la reivindicación 21, en el que el inhibidor se selecciona de
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94 
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25. Uso según la reivindicación 21, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en
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106
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110
111
112
26. Uso según la reivindicación 21, en el que el compuesto A-B de fórmula (I) se define según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.
27. Uso según la reivindicación 21, en el que B del compuesto A-B de fórmula (I) comprende una estructura seleccionada del grupo que consiste en la fórmula IVa, fórmula IVb y la fórmula IVc, o comprende una estructura que tiene la fórmula Va o Vb según la reivindicación 1.
28. Uso según la reivindicación 21, en el que dicha enfermedad inflamatoria, inmunitaria o autoinmunitaria es asma, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, esclerosis múltiple, diabetes, artritis, alergias, enfermedad cardiovascular, trombosis, agregación plaquetaria perjudicial, rechazo de aloinjerto, enfermedad neoplásica, psoriasis, inflamación de SNC, enfermedad de Chron, colitis ulcerosa, nefritis glomerular, enfermedad renal inflamatoria, inflamación ocular, arteriosclerosis, rechazo de transplante y enfermedad inflamatoria del intestino.
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