EA034918B1 - Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей - Google Patents
Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей Download PDFInfo
- Publication number
- EA034918B1 EA034918B1 EA201790843A EA201790843A EA034918B1 EA 034918 B1 EA034918 B1 EA 034918B1 EA 201790843 A EA201790843 A EA 201790843A EA 201790843 A EA201790843 A EA 201790843A EA 034918 B1 EA034918 B1 EA 034918B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- chimeric insecticidal
- chimeric
- plant
- insecticidal protein
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 324
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 314
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 260
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 51
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 title claims description 83
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 title description 11
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 title description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 100
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 86
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 59
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 46
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 34
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 34
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 22
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 22
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 claims description 14
- 241000931750 Spodoptera cosmioides Species 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 241000122106 Diatraea saccharalis Species 0.000 claims description 12
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 10
- 241001367803 Chrysodeixis includens Species 0.000 claims description 10
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 claims description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 9
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 claims description 9
- 241000256244 Heliothis virescens Species 0.000 claims description 9
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 8
- 241000625764 Anticarsia gemmatalis Species 0.000 claims description 8
- 241000400698 Elasmopalpus lignosellus Species 0.000 claims description 8
- 241000985245 Spodoptera litura Species 0.000 claims description 7
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims description 6
- 241000879145 Diatraea grandiosella Species 0.000 claims description 6
- 241000721451 Pectinophora gossypiella Species 0.000 claims description 6
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 claims description 6
- 241000555281 Brevibacillus Species 0.000 claims description 4
- 241001572697 Earias vittella Species 0.000 claims description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 4
- 241000255990 Helicoverpa Species 0.000 claims description 4
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 3
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 claims description 3
- 241001414989 Thysanoptera Species 0.000 claims description 3
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 claims description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims description 2
- 241001456339 Rachiplusia nu Species 0.000 claims 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 57
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 204
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 113
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 90
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 72
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 42
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 42
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 36
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 36
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 31
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 30
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 29
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 28
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 25
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 22
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 17
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 15
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 15
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 241001147398 Ostrinia nubilalis Species 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 11
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 10
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 10
- 241001012098 Omiodes indicata Species 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 9
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 7
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 7
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 7
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 7
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 7
- 241001521235 Spodoptera eridania Species 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 7
- 241000566547 Agrotis ipsilon Species 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 244000111261 Mucuna pruriens Species 0.000 description 6
- 235000008540 Mucuna pruriens var utilis Nutrition 0.000 description 6
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 6
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 6
- 241000500437 Plutella xylostella Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 5
- 241000256247 Spodoptera exigua Species 0.000 description 5
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 5
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241001340508 Crambus Species 0.000 description 4
- 101150102464 Cry1 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000907661 Pieris rapae Species 0.000 description 4
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 4
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 4
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 4
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 3
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 3
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 3
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 3
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 3
- 241001635274 Cydia pomonella Species 0.000 description 3
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 3
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 3
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 3
- 241001000403 Herpetogramma licarsisalis Species 0.000 description 3
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 3
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 3
- 241000193981 Loxostege sticticalis Species 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 3
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 3
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 3
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 3
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 3
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 3
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 3
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 3
- 241000001996 Agrotis orthogonia Species 0.000 description 2
- 241000449794 Alabama argillacea Species 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241001259789 Amyelois transitella Species 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 2
- 241001002470 Archips argyrospila Species 0.000 description 2
- 241001423656 Archips rosana Species 0.000 description 2
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 2
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 2
- 101000878902 Bacillus thuringiensis Pesticidal crystal protein Cry6Aa Proteins 0.000 description 2
- 101000878906 Bacillus thuringiensis Pesticidal crystal protein Cry6Ba Proteins 0.000 description 2
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 2
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 2
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 2
- 241000426497 Chilo suppressalis Species 0.000 description 2
- 108010049994 Chloroplast Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000098289 Cnaphalocrocis medinalis Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 2
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 2
- 241000122105 Diatraea Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108010074122 Ferredoxins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241001441330 Grapholita molesta Species 0.000 description 2
- 241000721703 Lymantria dispar Species 0.000 description 2
- 241000193386 Lysinibacillus sphaericus Species 0.000 description 2
- 241000732113 Mamestra configurata Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000497111 Paralobesia viteana Species 0.000 description 2
- 241000479842 Pella Species 0.000 description 2
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 2
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 2
- 241001456337 Rachiplusia Species 0.000 description 2
- 235000008406 SarachaNachtschatten Nutrition 0.000 description 2
- 235000004790 Solanum aculeatissimum Nutrition 0.000 description 2
- 235000008424 Solanum demissum Nutrition 0.000 description 2
- 235000018253 Solanum ferox Nutrition 0.000 description 2
- 235000000208 Solanum incanum Nutrition 0.000 description 2
- 235000013131 Solanum macrocarpon Nutrition 0.000 description 2
- 235000009869 Solanum phureja Nutrition 0.000 description 2
- 240000002307 Solanum ptychanthum Species 0.000 description 2
- 235000000341 Solanum ptychanthum Nutrition 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000017622 Solanum xanthocarpum Nutrition 0.000 description 2
- 241001575047 Suleima Species 0.000 description 2
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 2
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000035613 defoliation Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 2
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- ZHVOBYWXERUHMN-KVJKMEBSSA-N 3-[(3s,5r,8r,9s,10s,13s,14s,17s)-10,13-dimethyl-3-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2h-furan-5-one Chemical compound O([C@@H]1C[C@H]2CC[C@@H]3[C@@H]([C@]2(CC1)C)CC[C@]1([C@H]3CC[C@@H]1C=1COC(=O)C=1)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZHVOBYWXERUHMN-KVJKMEBSSA-N 0.000 description 1
- 241000218473 Agrotis Species 0.000 description 1
- 241001652650 Agrotis subterranea Species 0.000 description 1
- 235000005254 Allium ampeloprasum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006108 Allium ampeloprasum Species 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000669 Annexin A4 Proteins 0.000 description 1
- 102100034612 Annexin A4 Human genes 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- 101100257624 Arabidopsis thaliana SPS4 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 241001002469 Archips Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 1
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 description 1
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 108010007108 Chloroplast Thioredoxins Proteins 0.000 description 1
- 241000034870 Chrysoteuchia culmella Species 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 244000045195 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- 244000241235 Citrullus lanatus Species 0.000 description 1
- 235000012828 Citrullus lanatus var citroides Nutrition 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 1
- 235000015655 Crocus sativus Nutrition 0.000 description 1
- 244000124209 Crocus sativus Species 0.000 description 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 235000009849 Cucumis sativus Nutrition 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 241000219122 Cucurbita Species 0.000 description 1
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 1
- 241000219130 Cucurbita pepo subsp. pepo Species 0.000 description 1
- 235000003954 Cucurbita pepo var melopepo Nutrition 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 1
- 241000353522 Earias insulana Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 240000000047 Gossypium barbadense Species 0.000 description 1
- 235000009429 Gossypium barbadense Nutrition 0.000 description 1
- 235000009432 Gossypium hirsutum Nutrition 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000630740 Homoeosoma electellum Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 description 1
- 244000025221 Humulus lupulus Species 0.000 description 1
- 241000370523 Hypena scabra Species 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 241001261104 Lobesia botrana Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101100268515 Mus musculus Serpina1b gene Proteins 0.000 description 1
- 101100268516 Mus musculus Serpina1c gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001310339 Paenibacillus popilliae Species 0.000 description 1
- 241000459456 Parapediasia teterrellus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000319489 Phora Species 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- 241001525654 Phyllocnistis citrella Species 0.000 description 1
- 241001236219 Pinus echinata Species 0.000 description 1
- 235000005018 Pinus echinata Nutrition 0.000 description 1
- 235000017339 Pinus palustris Nutrition 0.000 description 1
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 101100457857 Pseudomonas entomophila (strain L48) mnl gene Proteins 0.000 description 1
- 235000008572 Pseudotsuga menziesii Nutrition 0.000 description 1
- 240000001416 Pseudotsuga menziesii Species 0.000 description 1
- 241000255893 Pyralidae Species 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 241000563489 Sesamia inferens Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241000255901 Tortricidae Species 0.000 description 1
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 1
- 241001389006 Tuta absoluta Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 1
- 241000482268 Zea mays subsp. mays Species 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000011681 asexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013465 asexual reproduction Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N bioresmethrin Chemical compound CC1(C)[C@H](C=C(C)C)[C@H]1C(=O)OCC1=COC(CC=2C=CC=CC=2)=C1 VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N 0.000 description 1
- 244000037672 biotech crops Species 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 230000035611 feeding Effects 0.000 description 1
- 230000004634 feeding behavior Effects 0.000 description 1
- 231100000502 fertility decrease Toxicity 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 244000037671 genetically modified crops Species 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007758 mating behavior Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 150000004045 organic chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- -1 organophosphates Chemical class 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001846 repelling effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013974 saffron Nutrition 0.000 description 1
- 239000004248 saffron Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 1
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
- A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
В изобретении представлены нуклеотидные последовательности, которые кодируют новые химерные инсектицидные белки, проявляющие ингибирующую активность в отношении чешуекрылых. Конкретные варианты реализации изобретения обеспечивают композиции и трансформированные растения, части растений и семена, содержащие рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие один или более химерных инсектицидных белков.
Description
Ссылка на родственную заявку
В настоящей заявке заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/064989, поданной 16 октября 2014 года, содержание которой в полном объеме включено в настоящий документ посредством ссылки.
Включение перечня последовательностей
Перечень последовательностей в машиночитаемой форме подан с этим заявлением в электронном формате и включен в настоящую заявку посредством ссылки в полном объеме. Перечень последовательностей содержится в файле, созданном 23 августа 2016 года, с именем файла P34230WO00_Seq_PCT_Art34.txt и размером 898,229 байт (как измерено в операционной системе MSWindows®).
Область техники
Настоящее изобретение в целом относится к области белков, обладающих ингибиторной активностью в отношении насекомых. В настоящей заявке описан новый класс химерных инсектицидных белков, обладающих ингибиторной активностью против сельскохозяйственных вредителей культурных растений и семян. В частности, раскрытый класс белков обладает инсектицидной активностью в отношении чешуекрылых насекомых-вредителей. Предлагаются растения, части растений и семена, содержащие молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующую один или более описанных токсичных белков.
Уровень техники
Все большее значение приобретает повышение урожайности сельскохозяйственных культур, в том числе кукурузы, сои, сахарного тростника, риса, пшеницы, овощей и хлопчатника. По прогнозам в дополнение к растущей потребности в сельскохозяйственной продукции для обеспечения пищей, одеждой и обеспечения энергией растущего населения, климатическим последствиям и давления со стороны растущего населения на использование земли, отличной от сельскохозяйственной, уменьшается количество доступных пахотных земель для ведения сельского хозяйства. Данные факторы привели к неоптимистичным прогнозам в отношении продовольственной безопасности, особенно в условиях отсутствия значительных улучшений в области биотехнологии растений и агрономических приемов. В свете данных факторов экологически устойчивые усовершенствования в области технологий, агротехники и борьбы с вредителями являются жизненно важными инструментами для расширения производства сельскохозяйственных культур на ограниченном количестве пахотных земель, доступных для ведения сельского хозяйства.
Насекомые, особенно насекомые в пределах отряда чешуекрылых, считаются основной причиной повреждения полевых культур, тем самым снижая урожайность культур в зараженных районах. Виды чешуекрылых вредителей, которые имеют негативное влияние на сельское хозяйство, включают, без ограничений, кукурузную листовую совку (Spodoptera frugiperda), совку малую (Spodoptera exigua), совку латуковую (Mamestra configurata), совку-ипсилон (Agrotis ipsilon), совку капустную (Trichoplusia ni), соевую совку (Chrysodeixis includens), совку бархатных бобов (Anticarsia gemmatalis), совку клеверную (Hypena scabra), табачную листовертку (Heliothis virescens), совку хлопковую (Agrotis subterranea), совку луговую (Pseudaletia unipuncta), совку прямоугольную (Agrotis orthogonia), мотылька стеблевого кукурузного (Ostrinia nubilalis), бабочку-огневку (Amyelois transitella), кукурузную огневку (Crambus caliginosellus), лугового мотылька (Herpetogramma licarsisalis), огневку подсолнечниковую (Homoeosoma electellum), точильщика зернового кукурузного (Elasmopalpus lignosellus), плодожорку яблонную (Cydia pomonella), листовертку виноградную (Endopiza viteana), листовертку восточную персиковую (Grapholita molesta), листовертку подсолнечника (Suleima helianthana), капустную моль (Plutella xylostella), розовый коробочный червь (Pectinophora gossypiella), розовый сверлильщик (Sesamia inferens), шелкопряда непарного (Lymantria dispar), совку хлопковую американскую (Alabama argillacea), листовертку плодовых деревьев (Archips argyrospila), листовертку резанную золотистую (Archips rosana), огневку азиатскую стеблевую или желтую рисовую огневку (Chilo suppressalis), листовертку рисовую (Cnaphalocrocis medinalis), кукурузную огневку (Crambus caliginosellus), мотылька травяного (Crambus teterrellus), огневку кукурузную юго-западную (Diatraea grandiosella)), огневку сахарного тростника (Diatraea saccharalis), совку хлопковую египетскую (Earias insulana), совку пятнистую (Earias vittella), совку американскую (Helicoverpa armigera), американскую кукурузную совку, соевую совку или совку хлопковую (Helicoverpa zea), лугового мотылька (Herpetogramma licarsisalis), гроздевую листовертку (Lobesia botrana), цитрусовую минирующую моль (Phyllocnistis citrella), белянку капустную (Pieris brassicae), репницу или белянку репную (Pieris rapae), азиатскую хлопчатниковую совку или азиатскую хлопковую совку (Spodoptera litura) и пасленовый минер (Tuta absoluta).
Исторически сложилось так, что синтетические химические инсектициды интенсивно применяли в качестве средства борьбы с вредителями в сельском хозяйстве. Озабоченность по поводу окружающей среды и здоровья человека, помимо возникающих проблем с устойчивостью, стимулировала исследования и разработку биологических пестицидов. Данное исследование привело к прогрессивному открытию и применению различных энтомопатогенных видов микроорганизмов, включая бактерии.
Парадигма биологических методов борьбы изменилась, когда был открыт потенциал энтомопато
- 1 034918 генных бактерий, особенно бактерий, относящихся к роду Bacillus, и применен в разработке агентов для биологической борьбы с вредителями. Штаммы бактерии Bacillus thuringiensis (Bt) использовали в качестве источника инсектицидных белков, так как было обнаружено, что штаммы Bt проявляют высокую токсичность против конкретных насекомых. Известно, что штаммы Bt продуцируют дельтаэндотоксины, которые локализованы в параспоральном кристаллическом тельце включения в начале споруляции и во время фазы стационарного роста (например, белки Cry), и также известно, что они продуцирует секретируемый инсектицидный белок. При проглатывании восприимчивым насекомым дельтаэндотоксины, а также секретируемые токсины оказывают свое действие на поверхность эпителия средней кишки, разрушают клеточную мембрану, приводя к разрушению и гибели клеток. Гены, кодирующие инсектицидные белки, также были идентифицированы у бактериальных видов, отличных от Bt, включая другие Bacillus и множество других видов бактерий, таких как Brevibacillus laterosporus, Lysinibacillus sphaericus (is ранее известный как Bacillus sphaericus) и Paenibacillus popilliae.
Кристаллические и секретируемые растворимые инсектицидные белковые токсины являются высокоспецифичными для их хозяев и получили мировое признание как альтернативы химическим инсектицидам. Например, инсектицидные токсичные белки применяют в различных сельскохозяйственных целях для защиты хозяйственно-ценных растений от заражения насекомыми, уменьшения потребности в применении химических пестицидов и повышения урожайности. Инсектицидные токсичные белки применяют для борьбы с сельскохозяйственными вредителями культурных растений механизированными способами, такими как распыление дисперсных микробных препаратов, содержащих различные штаммы бактерий, на поверхности растений, и с использованием способов генетической трансформации для получения трансгенных растений и семян, экспрессирующих инсектицидный токсичный белок.
Применение трансгенных растений, экспрессирующих инсектицидные белки, признано в мировом масштабе. Например, в 2012 году 26,1 миллиона гектаров были засажены трансгенными культурами, экспрессирующими Bt-токсины (James, С., Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops: 2012. Краткое содержание отчета ISAAA (Международная служба по сбору сведений о применении биотехнологий в сельском хозяйстве) № 44). Глобальное применение трансгенных культур, защищенных от насекомых, и ограниченное количество инсектицидных белков, применяемых для этих культур, создало давление отбора для существующих аллелей насекомых, которые придают устойчивость к применяемым в настоящее время инсектицидным белкам.
Развитие резистентности у целевых вредителей к инсектицидным белкам создает постоянную потребность в открытии и разработке новых форм инсектицидных белков, которые полезны для контроля над повышением резистентности насекомых к трансгенным культурам, экспрессирующим инсектицидные белки. Новые инсектицидные белки с повышенной эффективностью, и которые контролируют более широкий спектр восприимчивых видов насекомых, уменьшают число выживших насекомых, которые могут развить резистентные аллели. Кроме того, применение в одном растении двух или более трансгенных инсектицидных белков, токсичных для одного и того же насекомого-вредителя и демонстрирующих различные способы воздействия, снижает вероятность резистентности у любых отдельных целевых видов насекомых.
Следовательно, существует настоятельная необходимость идентифицировать дополнительные инсектицидные белки с улучшенными инсектицидными свойствами, такими как повышенная эффективность против более широкого спектра целевых видов насекомых-вредителей и различные механизмы действия по сравнению с токсинами, применяемыми в настоящее время в агрономических приемах. Для удовлетворения данной потребности настоящее изобретение описывает новые химерные инсектицидные белки Cry1, которые проявляют активность против многочисленных целевых видов чешуекрылых вредителей.
Члены семейства кристаллических белков Cry1, известные в данной области техники, проявляют биологическую активность против чешуекрылых-вредителей. Форма предшественника кристаллических белков Cry 1 состоит из двух сегментов примерно равных размеров. Карбоксиконцевая часть белкапредшественника, известная как сегмент протоксина, стабилизирует образование кристаллов и не проявляет инсектицидной активности. Аминоконцевая половина белка-предшественника содержит сегмент токсина белка Cry1 и, основываясь на выравнивании консервативных или, по существу, консервативных последовательностей в пределах членов семейства Cry1, может быть дополнительно разделена на три структурных домена: домен I, домен II и домен III. Домен I содержит около первой трети активного сегмента токсина и, как было показано, является существенным для формирования канала. Домены II и III вовлечены в связывание рецепторов и специфичны к видам насекомых в зависимости от исследуемого насекомого и инсектицида.
Вероятность произвольного создания химерного белка с улучшенными свойствами из ассортимента доменных структур многочисленных нативных инсектицидных белков, известных в данной области техники, является незначительной. Это является результатом сложного характера структуры белка, олигомеризации и активации (включая соответствующий протеолитический процессинг химерного предшественника, если он экспрессирован в такой форме), необходимой для высвобождения сегмента инсектицидного белка. Только путем тщательного отбора протоксинов и конкретных мишеней в каждом исход
- 2 034918 ном белке для создания химерной структуры могут быть созданы функциональные химерные инсектицидные токсины, которые проявляют улучшенную инсектицидную активность по сравнению с исходными белками, из которых получены химеры. В данной области техники известно, что повторная сборка протоксина и токсиновых доменов I, II и III любых двух или более токсинов, которые отличаются друг от друга, часто приводит к получению белков, которые проявляют дефектное образование кристаллов или у которых полностью отсутствует какая-либо детектируемая инсектицидная активность, направленная на предпочтительный вид насекомых-вредителей. Только метод проб и ошибок являются эффективными в получении инсектицидных химер, и даже в таком случае квалифицированный специалист не уверен, в конечном итоге, в химере, которая проявляет инсектицидную активность, которая эквивалентна или улучшена по сравнению с любым единственным исходным токсичным белком, из которого получены домены протоксинов или токсинов химеры. Например, в литературе приводятся многочисленные примеры конструирования или сборки химерных белков из двух или более предшественников кристаллического белка (см., например, Jacqueline S. Knight, et al. A Strategy for Shuffling Numerous Bacillus thuringiensis Crystal Protein Domains. J. Economic Entomology, 97 (6) (2004):1805-1813; Bosch, et al. (патент США № 6204246); Malvar and Gilmer (патент США № 6017534). В каждом из этих примеров многие из полученных химер не проявляли инсектицидных или кристаллообразующих свойств, которые были эквивалентны или улучшены по сравнению с белками-предшественниками, из которых были получены компоненты химер.
Сущность изобретения
Предложены молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты, которые кодируют химерные инсектицидные белки, токсичные в отношении видов чешуекрылых-вредителей растений. Каждый из химерных инсектицидных белков может применяться по отдельности или в комбинации друг с другом и с другими инсектицидными белками и агентами, обладающими ингибиторной активностью в отношении насекомых, в препаратах и в условиях in planta (в растении); таким образом, обеспечивая альтернативы инсектицидным белкам и химикатам-инсектицидам, применяемым в настоящее время в сельскохозяйственных системах.
В некоторых вариантах реализации изобретения в данном документе описан химерный инсектицидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111. Данный химерный инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность против видов насекомых отряда Lepidoptera, таких как, без ограничений, Anticarsia gemmatalis, Diatraea saccharalis, Elasmopalpus lignosellus, Helicoverpa zea, Heliothis virescens, Chrysodeixis includens, Spodoptera cosmioides, Spodoptera eridania, Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Helicoverpa armigera, Spodoptera litura, Pectinophora gossypiella, Diatraea grandiosella, Earias vitella, Helicoverpa gelotopeon и Rachiplusia nu.
В другом варианте реализации изобретения полинуклеотид кодирует химерный инсектицидный белок, причем полинуклеотид функционально связан с гетерологичным промотором, и химерный инсектицидный белок содержит аминокислотную последовательность, указанную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111. Также рассматривается полинуклеотид, кодирующий химерный инсектицидный белок, причем полинуклеотид содержит нуклеотидную последовательность, которая необязательно гибридизуется в строгих условиях с обратным комплементом полинуклеотидной последовательности, указанной в любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 или 130; или кодирует химерный инсектицидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111.
В других вариантах реализации изобретения в данном документе описана клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид, указанный в любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 или 130, причем клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактериальной клетки-хозяина или растительной клетки-хозяина. Рассматриваемые бактериальные клетки-хозяева включает Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, и Erwinia; и причем виды Bacillus представляют собой Bacillus cereus или Bacillus thuringiensis, указанный Brevibacillus представляет собой Brevibacillus laterosperous, и указанная Escherichia представляет собой Escherichia coli. Кроме того, предполагаемые растительные клетки-хозяева включают однодольные или двудольные растения.
В других вариантах реализации изобретения в данном документе описаны композиции, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых, содержащие химерный инсектицидный белок,
- 3 034918 содержащий аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, может дополнительно содержать по меньшей мере один агент, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых, отличный от химерного инсектицидного белка. Рассматриваемые агенты, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых, отличные от химерного инсектицидного белка, включают белок, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых, молекулу дцРНК, обладающую ингибирующей активностью в отношении насекомых, и химический состав, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых. Данные агенты, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых, отличные от химерного инсектицидного белка, могут проявлять активность в отношении одного или более видов вредителей из отрядов Lepidoptera, Coleoptera, Hemiptera, Homoptera или Thysanoptera.
В еще одном варианте реализации изобретения в данном документе описано семя, содержащее ингибирующе эффективное в отношении насекомых количество химерного инсектицидного белка, содержащего аминокислотную последовательность, указанную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111; или полинуклеотид, указанный в любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 или 130.
Рассматриваются также способы борьбы с чешуекрылыми вредителями, включающие стадию, в которой чешуекрылого вредителя приводят в контакт с ингибирующим количеством химерного инсектицидного белка согласно настоящему изобретению.
В другом варианте реализации изобретения в данном документе описана трансгенная растительная клетка, растение или часть растения, содержащая химерный инсектицидный белок, причем химерный инсектицидный белок содержит любую аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111; или химерный инсектицидный белок содержит белок, имеющий по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 21, 10; по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO: 28, по меньшей мере 87% идентичности с SEQ ID NO: 7; по меньшей мере 90% идентичности с SEQ ID NO: 4; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 13; по меньшей мере 64% идентичности с SEQ ID NO: 16; по меньшей мере 66% идентичности с SEQ ID NO: 19; по меньшей мере 86% идентичности с SEQ ID NO: 23; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 25; по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 30; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 33; по меньшей мере 64% идентичности с SEQ ID NO: 36; по меньшей мере 66% идентичности с SEQ ID NO: 39; по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 41; по меньшей мере 84% идентичности с SEQ ID NO: 43; по меньшей мере с 93% идентичности с SEQ ID NO: 45; по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 47; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 50; или по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO: 53; или по меньшей мере 87% идентичности с SEQ ID NO: 85, 93, 105; или по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID NO: 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79; или по меньшей мере 88% идентичности с SEQ ID NO: 91, 87, 89; или по меньшей мере 89% идентичности с SEQ ID NO: 107, 111; или по меньшей мере 90% идентичности с SEQ ID NO: 97; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 109; или по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO: 83; или по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 91 или 103; или по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID NO: 95, 101; или по меньшей мере 98% идентичности с SEQ ID NO: 99. Также рассматриваются способы борьбы с чешуекрылыми-вредителями, включающие стадию в которой осуществляют воздействие вредителя на эту трансгенную растительную клетку, растение или часть растения, причем указанная растительная клетка, растение или часть растения экспрессирует ингибирующее в отношении чешуекрылых количество химерного инсектицидного белка.
В других вариантах реализации изобретения в данном документе предложены товарные продукты, полученные из растительной клетки, растения или части растения, причем продукт содержит обнаруживаемое количество химерного инсектицидного белка. Рассматриваемые товарные продукты включают растительную биомассу, масло, муку, корм для животных, муку, хлопья, отруби, пух, кожуры и обработанные семена.
Еще один способ, раскрытый в данном документе, представляет собой способ получения семени, содержащего химерный инсектицидный белок, включающий стадии, на которых высаживают по меньшей мере одно семя, содержащее химерный инсектицидный белок; выращивают растения из указанного семени; и собирают семя от растений, причем собранное семя содержит инсектицидный белок.
Рекомбинантные полинуклеотидные молекулы, кодирующие химерный инсектицидный белок, содержащий нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5,
- 4 034918
6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 или 130; и необязательно полинуклеотидную последовательность, кодирующую агент, обладающий ингибиторной активностью в отношении насекомых, отличный от химерного инсектицидного белка.
Другая рассматриваемая в данном документе молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты содержит гетерологичный промотор, функционально связанный с полинуклеотидным сегментом, кодирующим химерные инсектицидные белки, причем химерный инсектицидный белок содержит любую аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 или 111; или химерный инсектицидный белок содержит белок, имеющий: по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 21, 10; по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO: 28; по меньшей мере 87% идентичности с SEQ ID NO: 7; по меньшей мере 90% идентичности с SEQ ID NO: 4; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 13; по меньшей мере 64% идентичности с SEQ ID NO: 16; по меньшей мере 66% идентичности с SEQ ID NO: 19; по меньшей мере 86% идентичности с SEQ ID NO: 23; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 25; по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 30; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 33; по меньшей мере 64% идентичности с SEQ ID NO: 36; по меньшей мере 66% идентичности с SEQ ID NO: 39; по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 41; по меньшей мере 84% идентичности с SEQ ID NO: 43; по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO: 45; по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 47; по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 50; или по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO: 53; или по меньшей мере 87% идентичности с SEQ ID NO: 85, 93, 105; или по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID NO: 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79; или по меньшей мере 88% идентичности с SEQ ID NO: 91, 87, 89; или по меньшей мере 89% идентичности с SEQ ID NO: 107, 111; или по меньшей мере 90% идентичности с SEQ ID NO: 97; или по меньшей мере 91% идентичности с SEQ ID NO: 109; или по меньшей мере 93% идентичности с SEQ ID NO:83; или по меньшей мере 94% идентичности с SEQ ID NO: 91, 103; или по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID NO: 95, 101; или по меньшей мере 98% идентичности с SEQ ID NO: 99; или полинуклеотидный сегмент гибридизуется с полинуклеотидом, имеющим нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 или 130.
Другие варианты реализации, особенности и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего подробного описания, примеров и формулы изобретения.
Краткое описание последовательностей
SEQ ID NO: 1 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC1100, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 2 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC1100, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 3 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC1100, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 4 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1100.
SEQ ID NO: 5 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC860, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 6 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC860, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 7 представляет собой аминокислотную последовательность TIC860.
SEQ ID NO: 8 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC867, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 9 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 10 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867.
SEQ ID NO: 11 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC867_20, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 12 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867_20 для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 13 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867_20.
SEQ ID NO: 14 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC867_21, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 15 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867_21, для экспрессии в растительной клетке.
- 5 034918
SEQ ID NO: 16 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867_21.
SEQ ID NO: 17 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC867_22, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 18 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867_22, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 19 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867_22.
SEQ ID NO: 20 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867_23, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 21 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867_23.
SEQ ID NO: 22 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867_24, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 23 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867_24.
SEQ ID NO: 24 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC867_24, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 25 представляет собой аминокислотную последовательность TIC867_25.
SEQ ID NO: 26 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC868, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 27 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868 для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 28 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868.
SEQ ID NO: 29 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_9, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 30 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_9.
SEQ ID NO: 31 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC868_10, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 32 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую вариант TIC868, TIC868_10, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 33 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_10.
SEQ ID NO: 34 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC868_11, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 35 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_11, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 36 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_11.
SEQ ID NO: 37 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC868_12, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 38 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_12, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 39 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_12.
SEQ ID NO: 40 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_13, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 41 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_13.
SEQ ID NO: 42 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_14, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 43 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_14.
SEQ ID NO: 44 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_15, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 45 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_15.
SEQ ID NO: 46 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC868_29, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 47 представляет собой аминокислотную последовательность TIC868_29.
SEQ ID NO: 48 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC869, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 49 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC869, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 50 представляет собой аминокислотную последовательность TIC869.
SEQ ID NO: 51 представляет собой последовательность рекомбинантной ДНК, кодирующую TIC836, используемую для экспрессии в бактериальной клетке.
SEQ ID NO: 52 представляет собой синтетическую последовательность ДНК, кодирующую TIC836, для экспрессии в растительной клетке.
SEQ ID NO: 53 представляет собой аминокислотную последовательность TIC836.
SEQ ID NO: 54 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC713.
- 6 034918
SEQ ID NO: 55 представляет собой аминокислотную последовательность TIC713, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 54.
SEQ ID NO: 56 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC843.
SEQ ID NO: 57 представляет собой аминокислотную последовательность TIC843, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 56.
SEQ ID NO: 58 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC862.
SEQ ID NO: 59 представляет собой аминокислотную последовательность TIC862, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 58.
SEQ ID NO: 60 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099.
SEQ ID NO: 61 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 60.
SEQ ID NO: 62 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-T507E.
SEQ ID NO: 63 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-T507E, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 62.
SEQ ID NO: 64 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-R522K.
SEQ ID NO: 65 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-R522K, транслированную из открытой рамки считывания, представленной в SEQ ID NO: 64.
SEQ ID NO: 66 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-K490S.
SEQ ID NO: 67 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-K490S, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 66.
SEQ ID NO: 68 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-T562R.
SEQ ID NO: 69 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-T562R, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 68.
SEQ ID NO: 70 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-S553R.
SEQ ID NO: 71 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-S553R, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 70.
SEQ ID NO: 72 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-G498D.
SEQ ID NO: 73 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-G498D, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 72.
SEQ ID NO: 74 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-K490A.
SEQ ID NO: 75 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-K490A, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 74.
SEQ ID NO: 76 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1099-E564A.
SEQ ID NO: 77 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1099-E564A, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 76.
SEQ ID NO: 78 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1103.
SEQ ID NO: 79 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1103, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 78.
SEQ ID NO: 80 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC1101.
SEQ ID NO: 81 представляет собой аминокислотную последовательность TIC1101, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 80.
SEQ ID NO: 82 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC845.
SEQ ID NO: 83 представляет собой аминокислотную последовательность TIC845, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 82.
SEQ ID NO: 84 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC846.
SEQ ID NO: 85 представляет собой аминокислотную последовательность TIC846, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 84.
- 7 034918
SEQ ID NO: 86 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC858.
SEQ ID NO: 87 представляет собой аминокислотную последовательность TIC858, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 86.
SEQ ID NO: 88 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC865.
SEQ ID NO: 89 представляет собой аминокислотную последовательность TIC865, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 88.
SEQ ID NO: 90 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC866.
SEQ ID NO: 91 представляет собой аминокислотную последовательность TIC866, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 90.
SEQ ID NO: 92 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC838.
SEQ ID NO: 93 представляет собой аминокислотную последовательность TIC838, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 92.
SEQ ID NO: 94 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC839.
SEQ ID NO: 95 представляет собой аминокислотную последовательность TIC839, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 94.
SEQ ID NO: 96 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC841.
SEQ ID NO: 97 представляет собой аминокислотную последовательность TIC841, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 96.
SEQ ID NO: 98 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC842.
SEQ ID NO: 99 представляет собой аминокислотную последовательность TIC842, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 98.
SEQ ID NO: 100 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC850.
SEQ ID NO: 101 представляет собой аминокислотную последовательность TIC850, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 100.
SEQ ID NO: 102 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC859.
SEQ ID NO: 103 представляет собой аминокислотную последовательность TIC859, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 102.
SEQ ID NO: 104 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC861.
SEQ ID NO: 105 представляет собой аминокислотную последовательность TIC861, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 104.
SEQ ID NO: 106 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC848.
SEQ ID NO: 107 представляет собой аминокислотную последовательность TIC848, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 106.
SEQ ID NO: 108 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC849.
SEQ ID NO: 109 представляет собой аминокислотную последовательность TIC849, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 108.
SEQ ID NO: 110 представляет собой последовательность ДНК, кодирующую химерную аминокислотную последовательность TIC847.
SEQ ID NO: 111 представляет собой аминокислотную последовательность TIC847, транслированную из открытой рамки считывания, указанной в SEQ ID NO: 110.
SEQ ID NO: 112 представляет собой клетке растения, кодирующей TIC713.
SEQ ID NO: 113 представляет собой клетке растения, кодирующей TIC713.
SEQ ID NO: 114 представляет собой клетке растения, кодирующей TIC843.
SEQ ID NO: 115 представляет собой клетке растения, кодирующей TIC862.
SEQ ID NO: 116 представляет собой клетке растения, кодирующей TIC1099.
синтетическую синтетическую синтетическую синтетическую синтетическую последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК для для для для для экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии
- 8 034918
SEQ ID NO: 117 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC1103.
SEQ ID NO: 118 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC845.
SEQ ID NO: 119 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC846.
SEQ ID NO: 120 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC858.
SEQ ID NO: 121 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC866.
SEQ ID NO: 122 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC838.
SEQ ID NO: 123 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC841.
SEQ ID NO: 124 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC842.
SEQ ID NO: 125 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC850.
SEQ ID NO: 126 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC859.
SEQ ID NO: 127 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC861.
SEQ ID NO: 128 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC848.
SEQ ID NO: 129 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC849.
SEQ ID NO: 130 представляет собой синтетическую клетке растения, кодирующей TIC847.
Подробное описание настоящего изобретения
Проблема в области борьбы с сельскохозяйственными вредителями может быть последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК
ДНК для для для для для для для для для для для для для для экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии экспрессии охарактеризована как потребность в новых инсектицидных белках, которые эффективны против целевых вредителей, проявляют токсичность широкого спектра по отношению к целевым видам вредителей, способны экспрессироваться в растениях, не вызывая нежелательных агрономических проблем, и обеспечивают альтернативный способ воздействия по сравнению с существующими на сегодняшний день токсинами, которые используют в растениях в коммерческих целях. В данном документе описаны новые химерные инсектицидные белки и рассмотрена каждая из этих потребностей, в частности, в отношении широкого спектра чешуекрылых насекомых-вредителей.
Чтобы избежать развития резистентности насекомых к используемым в настоящее время инсектицидным белкам, устраняя их недостатки, необходимы новые инсектицидные белки с различными механизмами действия (МД), а также с широким спектром действия и эффективностью для борьбы с Lepidoptera. Одним из путей решения этой проблемы является обнаружение новых инсектицидных белков из различных биологических источников, предпочтительно из бактерий, грибов или растений. Другим подходом является перестановка сегментов между различными Bt-белками, которые демонстрируют структурное сходство для создания новых химерных Bt-белков, обладающих ингибирующими свойствами в отношении насекомых. Вероятность создания химерного белка с улучшенными свойствами рекомбинацией доменных структур многочисленных нативных инсектицидных кристаллических белков, известных в данной области техники, незначительна (см., например, Jacqueline S. Knight, et al. A Strategy for Shuffling Numerous Bacillus thuringiensis Crystal Protein Domains. J. Economic Entomology, 97 (6) (2004): 18051813).
В данном документе описаны последовательности молекул рекомбинантной нуклеиновой кислоты, которые кодируют новые химерные инсектицидные белки. Данные инсектицидные белки учитывают текущую потребность в данной области технике в разработке дополнительных токсичных инсектицидных белков с улучшенными инсектицидными свойствами, такими как повышенная эффективность против более широкого спектра целевых видов насекомых-вредителей и различных механизмов действия. Члены данной группы белков, включая приведенные в данном документе иллюстративные белки, проявляют инсектицидную активность в отношении видов чешуекрылых насекомых-вредителей.
Термин сегмент или фрагмент используется в настоящей заявке для описания непрерывных последовательностей аминокислот или нуклеиновых кислот, которые короче, чем полная аминокислотная или нуклеотидная последовательность, описывающая раскрытый химерный инсектицидный белок. Сегмент или фрагмент, проявляющий ингибирующую активность в отношении насекомых, также раскрыт в настоящей заявке, если выравнивание такого сегмента или фрагмента с соответствующим участком химерного инсектицидного белка приводит к идентичности аминокислотной последовательности любого
- 9 034918 процента фракции от около 65 до около 100% между сегментом или фрагментом и соответствующим участком химерного инсектицидного белка.
В контексте настоящей заявки термины активная или активность, пестицидная активность или пестицидная или инсектицидная активность, ингибитор в отношении насекомых или инсектицидная относятся к эффективности токсического агента, такого как инсектицидный белок, в ингибировании (ингибирование роста, питания, плодовитости или жизнеспособности), подавлении (подавление роста, кормления, плодовитости или жизнеспособности), контроле (контроль заражения насекомымивредителями, контроль интенсивности питания насекомых-вредителей на определенной культуре, содержащей эффективное количество инсектицидного белка), или уничтожении (вызывающие заболеваемость, смертность или снижение плодовитости) вредителя. Данные термины охватывают результат обеспечения пестицидно эффективного количества инсектицидного белка вредителю, причем воздействие инсектицидного белка на вредителя приводит к заболеваемости, смертности, снижению плодовитости или задержке роста. Данные термины также включают отпугивание вредителя от растения, ткани растения, части растения, семян, растительных клеток или от конкретного географического местоположения, причем растение может расти, в результате обеспечения пестицидно эффективного количества инсектицидного белка в или на растении. В общем, пестицидная активность относится к способности токсичного агента быть эффективным в ингибировании роста, развития, жизнеспособности, кормового поведения, брачного поведения, плодовитости или любого измеримого снижения, вызванного неблагоприятными эффектами, в связи с предоставлением в рацион насекомого данного белка, фрагмента белка, сегмента белка или полинуклеотида, конкретному целевому вредителю, включая, но не ограничиваясь ими, насекомых отряда Lepidoptera. Инсектицидный белок может быть получен растением или может быть применен к растению или к окружающей среде в том месте, где находится растение. Термины биоактивность, эффективный, эффективный или их вариации также являются терминами, взаимозаменяемо используемыми в настоящей заявке, для описания воздействия химерных инсектицидных белков согласно настоящему изобретению на целевых насекомых-вредителей.
Пестицидно эффективное количество токсического агента, обеспеченное в рационе целевого вредителя, проявляет пестицидную активность при контакте токсического агента с вредителем. Токсичным агентом может быть инсектицидный белок, или один или более химических агентов, известных в данной области техники. Инсектицидные химические агенты и инсектицидные белковые агенты можно применять по отдельности или в комбинации друг с другом. Химические агенты включают, без ограничений, молекулы дцРНК, нацеленные на специфические гены для подавления в целевом вредителе, органохлориды, органофосфаты, карбаматы, пиретроиды, неоникотиноиды и рианоиды. Инсектицидные белковые агенты включают химерные инсектицидные белки, представленные в настоящей заявке, а также другие белковые токсичные агенты, в том числе такие, которые нацелены на виды чешуекрылых-вредителей, а также белковые токсины, которые используются для борьбы с другими вредителями растений, такие как Cry-белки, доступные в данной области техники для применения в борьбе с видами Coleoptera, Thysanoptera, Hemiptera и Homoptera.
Предполагается, что ссылка на вредителя, особенно вредителя сельскохозяйственного растения, означает вредителей культурных растений, особенно тех чешуекрылых-вредителей, которые контролируются описанными химерными инсектицидными белками. Однако ссылка на насекомого-вредителя может также включать насекомых-вредителей Coleoptera, Hemiptera и Homoptera, а также нематоды и грибы при тех условиях, когда токсичные агенты, нацеленные на этих вредителей, совместно локализуются или присутствуют вместе с химерным инсектицидным белком или белком, который имеет от около 65 до около 100% идентичности с химерным инсектицидным белком.
Химерные инсектицидные белки, описанные в данном документе, демонстрируют инсектицидную активность по отношению к насекомым-вредителям из видов чешуекрылых насекомых, включая взрослых особей, куколок, личинок и новорожденных, а также представителей отряда Hemiptera, включая взрослых особей и нимф. Насекомые отряда Lepidoptera включают, без ограничений, совок луговых, совок-листоверток и совок из семейства Noctuidae, например кукурузную листовую совку (Spodoptera frugiperda), совку малую (Spodoptera exigua), совку латуковую (Mamestra configurata), совку-ипсилон (Agrotis ipsilon), совку капустную (Trichoplusia ni), соевую совку (Pseudoplusia includens), совку бархатных бобов (Anticarsia gemmatalis), совку клеверную (Нурепа scabra), табачную листовертку (Heliothis virescens), совку хлопковую (Agrotis subterranea), совку луговую (Pseudaletia unipuncta), совку прямоугольную (Agrotis orthogonia); точильщиков, чехлоносок, бабочек, дымчатых листоверток, гусениц бабочки капустницы и пироморфид из семейства Pyralidae, например мотылька стеблевого кукурузного (Ostrinia nubilalis), бабочку-огневку (Amyelois transitella), кукурузную огневку (Crambus caliginosellus), лугового мотылька (Herpetogramma licarsisalis), огневку подсолнечниковую (Homoeosoma electellum), точильщика зернового кукурузного (Elasmopalpus lignosellus); листоверток, огневок Шишковых, плодожорок, и плодовых листоверток из семейства Tortricidae, например плодожорку яблонную (Cydia pomonella), листовертку виноградную (Endopiza viteana), листовертку восточную персиковую (Grapholita molesta), листовертку подсолнечника (Suleima helianthana); и многих других экономически важных представителей отряда Lepidoptera, например капустную моль (Plutella xylostella), розового коробочного червя (Pectino
- 10 034918 phora gossypiella) и шелкопряда непарного (Lymantria dispar). Другие насекомые-вредители отряда Lepidoptera включает, например, Alabama argillacea (совка хлопковая американская), Archips argyrospila (листовертка плодовых деревьев), Archips rosana (листовертая резанная золотистая) и другие виды Archips, Chilo suppressalis (огневка азиатская стеблевая или желтая рисовая огневка), Cnaphalocrocis medinalis (листовертка рисовая), Crambus caliginosellus (кукурузная огневка), Crambus teterrellus (мотылек травяной), Diatraea grandiosella (огневка кукурузная юго-западная), Diatraea saccharalis (огневка сахарного тростника), Earias insulana (совка хлопковая египетская), Earias vittella (совка пятнистая), Helicoverpa armigera (совка американская), Helicoverpa zea (совка хлопковая или американская кукурузная совка), Heliothis virescens (табачная листовертка), Herpetogramma licarsisalis (луговой мотылек), Lobesia botrana (гроздевая листовертка), Phyllocnistis citrella (цитрусовая минирующая моль), Pieris brassicae (белянка капустная), Pieris rapae (репница или белянка репная), Plutella xylostella (капустная моль), Spodoptera exigua (совка малая), Spodoptera litura (азиатская хлопчатниковая совка, азиатская хлопковая совка) и Tuta absoluta (пасленовый минер).
В контексте настоящей заявки термин изолированная молекула ДНК или эквивалентный термин или фраза означает, что молекула ДНК представляет собой молекулу ДНК, которая присутствует отдельно или в комбинации с другими композициями, но не в ее естественной среде. Например, элементы нуклеиновой кислоты, такие как кодирующая последовательность, интронная последовательность, нетранслируемая лидерная последовательность, промоторная последовательность, терминирующая последовательность транскрипции и т.п., которые, естественно, находятся в ДНК генома организма, не считаются выделенными до тех пор, пока элемент находится в геноме организма и в том месте генома, в котором он встречается в природе. Тем не менее, каждый из этих элементов и их части были бы выделены в рамках настоящего раскрытия при условии, если элемент находится внутри генома организма и в том месте в геноме, в котором он естественным образом находится. Точно так же нуклеотидная последовательность, кодирующая инсектицидный белок или любой встречающийся в природе инсектицидный вариант этого белка, будет представлять собой выделенную нуклеотидную последовательность, если нуклеотидная последовательность не находится в ДНК бактерии, в которой естественным образом находится последовательность, кодирующая белок. Синтетическая нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность природного инсектицидного белка, будет считаться выделенной для целей настоящего раскрытия. Для целей настоящего раскрытия любая трансгенная нуклеотидная последовательность, т.е. нуклеотидная последовательность ДНК, вставленная в геном клеток растения или бактерии или присутствующая во внехромосомном векторе, считается выделенной нуклеотидной последовательностью независимо от того, присутствует ли она внутри плазмиды или подобной структуры, используемой для трансформации клеток, в геноме растения или бактерии или присутствует в обнаруживаемых количествах в тканях, потомстве, биологических образцах или товарных продуктах, полученных из растения или бактерии.
Как описано далее в примерах, при помощи химерогенеза из доменов протоксина и токсина известных инсектицидных токсинов (называемые в данном документе исходные белки) сконструировали около 844 нуклеотидных последовательностей, которые кодируют химерные инсектицидные белки, и экспрессировали и проводили испытание в биотесте на активность в отношении чешуекрылых. Небольшое количество сконструированных химерных инсектицидных белков продемонстрировало повышенную активность в отношении чешуекрылых или усиленный спектр в отношении чешуекрылых по сравнению с исходными белками, из которых были получены его токсиновые компоненты.
Данные новые химерные инсектицидные белки с повышенной активностью в отношении чешуекрылых или усиленным спектром в отношении чешуекрылых были сконструированы из следующих протоксиновых и токсиновых доменов исходных инсектицидных белков: Cry1Ah (домен I), Cry1Bb1 (домены I и II), Cry1Be2 (домены I и II), Cry1Ja1 (домены I и II), Cry1Fa1 (домены I и II), Cry1Ac (домен II и протоксин), Cry1Ca (домен III и протоксин), Cry1Ka (домен III и протоксин), Cry1Jx (домен III), Cry1Ab (домен III), Cry1Ab3 (протоксин), Cry1Da1 (протоксин), Cry4 (протоксин), Cry9 (протоксин), Cry1Be (протоксин) и Cry1Ka (протоксин).
В частности, новые химерные инсектицидные белки согласно настоящему изобретению с повышенной активностью в отношении чешуекрылых или усиленным спектром чешуекрылых включают следующие комбинации протоксинов и доменов: TIC1100/SEQ ID NO: 4 (домен I-CrylAh, домен II-Cry1Ac, домен III-Cry1Ca, протоксин-Cry1Ac), TIC860/SEQ ID NO: 7 (домен I-Cry1Bb1, домен II-Cry1BB1, домен III-Cry1Ca, протоксин-Cry1Ac), TIC867/SEQ ID NO: 10 (домен I-Cry1Be2, домен II-Cry1Be2, домен IIICry1Ka, протоксин-Сгу1АЬЗ), TIC868/SEQ ID NO: 28 (домен I-Cry1Be2, домен II-Cry1Be2 и домен IIICry1Ca, протоксин-Сгу1АЬЗ), TIC869/SEQ ID NO: 50 (домен I -Cry1Ja1, домен II-Cry1Ja1, домен IIICry1Jx, протоксин-Сгу1ЛЬЗ) и TIC836/SEQ ID NO: 53 (домен I-Cry1Fa1, домен II-Cry1Fa1, домен IIICry1Ab, протоксин-CrylAc).
Варианты, в которые вводили аминокислотные замены или альтернативные протоксиновые домены, также были конструированы для химерных инсектицидных белков TIC867 и TIC868. В частности, данные варианты TIC867 и TIC868 включают следующие аминокислотные замены или альтернативные протоксиновые домены: TIC867_20/SEQ ID NO: 13 (альтернативный протоксиновый домен CrylDal),
- 11 034918
TIC867_21/SEQ ID NO: 16 (альтернативный протоксиновый домен Cry4), TIC867_22/SEQ ID NO: 19 (альтернативный протоксиновый домен Cry9), TIC867_23/SEQ ID NO: 21 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Be), TIC867_24/SEQ ID NO: 23 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Ka), TIC867_25/SEQ ID NO: 25 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Ka), TIC868_9/SEQ ID NO: 30 (аминокислотная модификация N240S_Y343Q_N349T), TIC868_10/SEQ ID NO: 33 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Da1), TIC868_11/SEQ ID NO: 36 (альтернативный протоксиновый домен Cry4), TIC868 12/SEQ ID NO: 39 (альтернативный домен протоксина Cry 9), TIC868_13/SEQ ID NO: 41 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Be), TIC868 14/SEQ ID NO: 43 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Ka), TIC868 15/SEQ ID NO: 45 (альтернативный протоксиновый домен Cry1Ca) и TIC868_29/SEQ ID NO: 47 (модификация аминокислоты Q136Y_Y343Q_N349T).
Как продемонстрировано в примерах, у каждого из этих вариантов TIC867 и TIC868 изменена активность в отношении чешуекрылых и/или снижен спектр активности исходного химерного инсектицидного белка в отношении чешуекрылых, указывая, таким образом, на то, что альтернативный протоксиновый домен и аминокислотные замены имели прямое влияние на инсектицидную активность и спектр химерных инсектицидных белков TIC867 и TIC868.
Многие из химерных инсектицидных белков демонстрируют инсектицидную активность в отношении многочисленных видов чешуекрылых насекомых-вредителей. В частности, новые химерные инсектицидные белки, раскрытые в настоящей заявке, проявляют активность в отношении одного или более из следующих чешуекрылых насекомых-вредителей: совки бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis), огневки сахарного тростника (SCB, Diatraea saccharalis), точильщика зернового кукурузного (LSCB, Elasmopalpus lignosellus), американской кукурузной совки (CEW, Helicoverpa zea), соевой совки (SPW, Helicoverpa zea), совки хлопковой CBW, Helicoverpa zea), табачной листовертки (TBW, Heliothis virescens), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens), черной совки (BLAW, Spodoptera cosmioides), южной совки (SAW, Spodoptera eridania), кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), совки малой (BAW, Spodoptera exigua), совки американской (OBW, Helicoverpa armigera), азиатской хлопковой совки (OLW, Spodoptera litura), розового коробочного червя (PBW, Pectinophora gossypiella), огневки кукурузной юго-западной (SWCB, Diatraea grandiosella), шиповатого северного коробочного червя (SBW, Earias vitella), южноамериканской совки (SABW, Helicoverpa gelotopeon) и пяденицы подсолнечниковой (SFL, Rachiplusia пи). Таким образом, иллюстративные белки, описанные в настоящей заявке, связаны общей функцией и проявляют инсектицидную активность в отношении видов насекомых-вредителей из отряда Lepidoptera, включая взрослых особей, личинок и куколок.
Белки, которые напоминают химерные инсектицидные белки, могут быть идентифицированы путем сравнения друг с другом с использованием различных компьютерных алгоритмов, известных в данной области техники. Например, идентичность аминокислотных последовательностей белков, связанных с химерными инсектицидными белками, может быть проанализирована с использованием выравнивания Clustal W с использованием этих параметров по умолчанию: матрица сравнения: весы, штраф на внесение делеции в выравнивание: 10,0, штраф на продолжение делеции: 0,05, гидрофильные делеции: вкл., гидрофильные остатки: GPSNDQERK, штраф на остаткоспецифические делеции: вкл. (Thompson, et al. (1994) Nucleic Acids Research, 22:4673-4680). Процент идентичности аминокислот далее рассчитывают в виде выражения: 100% умноженные на (идентичность аминокислот/длина заявленного белка). Другие алгоритмы выравнивания, также доступные в данной области техники, обеспечивают результаты, аналогичные результатам, полученным с использованием выравнивания Clustal W, и рассмотрены в настоящей заявке.
Предполагается, что искомый белок, проявляющий ингибирующую активность в отношении насекомых, раскрыт в настоящей заявке, если выравнивание такого искомого белка с исследуемыми химерными инсектицидными белками, указанными в SEQ ID NO: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 и 111, дает в результате по меньшей мере около 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или около 100% идентичности аминокислотной последовательности (или любой процент в данном диапазоне) между искомым и исследуемым белком.
Как описано далее в примерах настоящей заявки, синтетические или искусственные последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, были сконструированы для применения в растениях. Иллюстративные синтетические нуклеотидные последовательности, которые были сконструированы для применения в растениях, указаны в SEQ ID NO: 2 и 3 (TIC1100), SEQ ID NO: 6 (TIC860), SEQ ID NO: 9 (TIC867), SEQ ID NO: 12 (TIC867_20), SEQ ID NO: 15 (TIC867_21), SEQ ID NO: 18 (TIC867_22), SEQ ID NO: 20 (TIC867_23), SEQ ID NO: 22 (TIC867_24), SEQ ID NO: 24 (TIC867_25), SEQ ID NO:27 (TIC868), SEQ ID NO: 29 (TIC868_9), SEQ ID NO: 32 (TIC868_10), SEQ ID NO: 35 (TIC868_11), SEQ ID NO: 38 (TIC868_12), SEQ ID NO: 40 (TIC868_13), SEQ ID NO: 42 (TIC868_14), SEQ ID NO: 44 (TIC868_15), SEQ ID NO: 46 (TIC868_29), SEQ ID NO: 49 (TIC869) и SEQ ID NO: 52 (TIC836), SEQ ID NO: 112 и 113 (TIC713), SEQ ID NO: 114 (TIC843), SEQ ID NO: 115 (TIC862), SEQ ID NO: 116 (TIC1099), SEQ ID NO: 117 (TIC1103), SEQ ID NO: 118 (TIC845), SEQ ID NO: 119 (TIC846), SEQ ID NO: 120
- 12 034918 (TIC858), SEQ ID NO: 121 (TIC866), SEQ ID NO: 122 (TIC838), SEQ ID NO: 123 (TIC841), SEQ ID NO: 124 (TIC842), SEQ ID NO: 125 (TIC850), SEQ ID NO: 126 (TIC859), SEQ ID NO: 127 (TIC861), SEQ ID NO: 128 (TIC848), SEQ ID NO: 129 (TIC849) и SEQ ID NO: 130 (TIC847).
Для экспрессии в растительных клетках химерные инсектицидные белки могут экспрессироваться так, чтобы они находились в цитозоле или были нацелены на различные органеллы растительной клетки. Например, нацеливание белка на хлоропласт может приводить к увеличению уровней экспрессированного белка в трансгенном растении, предотвращая появление признаков иных фенотипов. Нацеливание может также приводить к повышению резистентности к вредителям у трансгенного объекта. Целевой пептид или транзитный пептид представляет собой короткую пептидную цепь (длиной 3-70 аминокислот), которая направляет перенос белка в определенную область клетки, включая ядро, митохондрии, эндоплазматический ретикулум (ЭР), хлоропласт, апопласт, пероксисому и плазматическую мембрану. Некоторые сигнальные пептиды отщепляются от белка под действием сигнальной пептидазы после транспортирования белков. Для нацеливания на хлоропласт белки содержат транзитные пептиды, которые содержат около 40-50 аминокислот. Для описания применения хлоропластных транзитных пептидов см. патенты США №№ 5188642 и 5728925. Многие локализованные на хлоропласте белки экспрессируются из ядерных генов как предшественники и нацелены на хлоропласт транзитным пептидом хлоропласта (ТПХ). Примеры таких выделенных хлоропластных белков включают, без ограничений, такие, которые связаны с малой субъединицей (МСУ) рибулозо-1,5,-бис-фосфаткарбоксилазы, ферредоксином, ферредоксин-оксидоредуктазой, белком I и белком II светособирающего комплекса, тиоредоксином F, енолпируват шикимат фосфатсинтазой (ЕПШФС) и транзитными пептидами, описанными в патенте США № 7193133. В условиях in vivo и in vitro было продемонстрировано, что нехлоропластные белки могут быть нацелены на хлоропласт с использованием белковых гибридов с гетерологичным ТПХ и что наличия ТПХ достаточно для нацеливания белка на хлоропласт. Включение подходящего хлоропластного транзитного пептида, такого как ЕПШФС ТПХ Arabidopsis thaliana (ТПХ2) (см. Klee et al., Mol. Gen. Genet. 210:437-442, 1987) или ЕПШФС ТПХ Petunia hybrida (ТПХ4) (см. della-Cioppa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA83: 6873-6877, 1986), было показано, что они нацеливают гетерологичные последовательности белка ЕПШФС на хлоропласты в трансгенных растениях (см., патенты США №№ 5627061, 5633435 и 5312910 и EP 0218571, EP 189707, EP 508909 и EP 924299). Для нацеливания химерных инсектицидных белков на хлоропласт последовательность, кодирующая транзитный пептид хлоропласта, расположена 5' в функциональной связи и в рамке к синтетической кодирующей последовательности, кодирующей химерный инсектицидный белок, который был сконструирован для оптимальной экспрессии в растительных клетках.
Экспрессионные кассеты и векторы, содержащие данные синтетические или искусственные нуклеотидные последовательности, конструировали и вводили в клетки растений кукурузы, хлопка и сои в соответствии со способами и методиками трансформации, которые известны в данной области техники. Трансформированные клетки регенерировали в трансформированные растения, которые, как было обнаружено, экспрессировали химерный инсектицидный белок. Для проверки пестицидной активности биотестирование проводили в присутствии личинок чешуекрылых-вредителей с использованием дисков листьев растений, полученных из трансформированных растений. Рассматриваются композиции молекул рекомбинантной нуклеиновой кислоты, которые кодируют химерные инсектицидные белки. Например, химерные инсектицидные белки могут быть экспрессированы конструктами рекомбинантной ДНК, в которых молекула полинуклеотида с ORF, кодирующим химерный инсектицидный белок, функционально связана с генетическими экспрессионными элементами, такими как промотор, и любым другим регуляторным элементом, необходимым для экспрессии в системе, для которых предназначен конструкт. Неограничивающие примеры включают растительный функциональный промотор, функционально связанный с синтетическим химерным инсектицидным белком, кодирующим последовательности, для экспрессии химерного инсектицидного белка в растениях, или Bt-функциональный промотор функционально связанный с последовательностью, кодирующей химерный инсектицидный белок, для экспрессии белка в Bt бактерии или в другом Bacillus. Другие элементы могут быть функционально связаны с последовательностями, кодирующими химерные инсектицидные белки, включая, без ограничений, энхансеры, интроны, нетранслируемые лидеры, кодированные белковые иммобилизационные метки (гистидиновая метка), транслокационные пептиды (т.е. пластидные транзитные пептиды, сигнальные пептиды), полипептидные последовательности для посттрансляционных модифицирующих ферментов, сайты связывания рибосом и сайты-мишени РНКи.
Приведенные в данном документе примеры рекомбинантных полинуклеотидных молекул включают, без ограничений, гетерологичный промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, таким как SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 и 130, который кодирует полипептид или белок, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 4 (TIC1100), 7 (TIC860), 10 (TIC867), 13 (TIC867_20), 16 (TIC867_21), 19 (TIC867_22), 21 (TIC867_23), 23 (TIC867_24), 25 (TIC867_25), 28 (TIC868), 30 (TIC868_9), 33
- 13 034918 (TIC868_10), 36 (TIC868_11), 39 (TIC867_12), 41 (TIC867_13), 43 (TIC867_14), 45 (TIC867_15), 47 (TIC867_29), 50 (TIC869), 53 (TIC836), 55 (TIC713), 57 (TIC843), 59 (TIC862), 61 (TIC1099), 63 (TIC1099T507E), 65 (TIC1099-R522K), 67 (TIC1099-K490S), 69 (TIC1099-T562R), 71 (TIC1099-S533R), 73 (TIC1099-G498D), 75 (TIC1099-K490A), 77 (TIC1099-E564A), 79 (TIC1103), 81 (TIC1101), 83 (TIC845), 85 (TIC846), 87 (TIC858), 89 (TIC865), 91 (TIC866), 93 (TIC838), 95 (TIC839), 97 (TIC841), 99 (TIC842), 101 (TIC850), 103 (TIC859), 105 (TIC861), 107 (TIC848), 109 (TIC849) и 111 (TIC847). Гетерологичный промотор также может быть функционально связан с синтетическими кодирующими последовательностями ДНК, кодирующими химерный инсектицидный белок, нацеленный на пластиду, и ненацеленный химерный инсектицидный белок. Предполагается, что кодоны молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующие химерный инсектицидный белок, описанный в данном документе, могут быть заменены синонимичными кодонами (известны в данной области техники как молчащие замены).
Молекула рекомбинантной ДНК или конструкт, содержащий последовательность, кодирующую химерный инсектицидный белок, может дополнительно содержать область ДНК, которая кодирует один или более токсичных агентов, которые могут быть сконструированы для одновременной экспрессии или совместной экспрессии с последовательностью ДНК, кодирующей химерный инсектицидный белок, отличный от химерного инсектицидного белка, молекулу дцРНК, обладающую ингибирующей активностью в отношении насекомых, или вспомогательный белок. Вспомогательные белки включают, без исключений, кофакторы, ферменты, партнеры по связыванию или другие агенты, которые способствуют повышению эффективности агента, обладающего ингибирующей активностью в отношении насекомых, например, способствуя его экспрессии, влияя на его стабильность в растениях, оптимизируя свободную энергию для олигомеризации, увеличивая его токсичность и увеличивая спектр его активности. Вспомогательный белок может облегчать захват одного или более агентов, обладающих ингибирующих активностью в отношении насекомых, например, или усиливать токсическое действие токсического агента.
Молекулу или конструкт рекомбинантной ДНК можно собирать так, чтобы все белки или молекулы дцРНК экспрессировали из одного промотора, или каждый белок или молекулу дцРНК экспрессировали под контролем отдельного промотора, или в определенной их комбинации. Белки согласно настоящему изобретению могут быть экспрессированы из мультигенной экспрессирующей системы, в которой химерный инсектицидный белок экспрессируется из общего нуклеотидного сегмента, который также содержит другие открытые рамки считывания и промоторы, в зависимости от выбранного типа экспрессирующей системы. Например, бактериальная мультигенная экспрессирующая система может использовать единственный промотор для управления экспрессией множественных/тандемных открытых рамок считывания из одного оперона (то есть полицистронная экспрессия). В другом примере растительная мультигенная экспрессирующая система может использовать многократно несвязанные экспрессионные кассеты, каждая из которых экспрессирует другой белок или другой токсичный агент, такой как одна или более молекул дцРНК.
Рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты или конструкции рекомбинантной ДНК, содержащие последовательность, кодирующую химерный инсектицидный белок, могут быть доставлены в клетки-хозяева векторами, например плазмидой, бакуловирусом, синтетической хромосомой, вирионом, космидой, фагемидой, фагом или вирусным вектор. Такие векторы могут быть использованы для достижения стабильной или транзиентной экспрессии последовательности, кодирующей химерный инсектицидный белок, в клетке-хозяине или более поздней экспрессии кодируемого полипептида. Экзогенный рекомбинантный полинуклеотид или конструкт рекомбинантного ДНК, которая содержит последовательность, кодирующую химерный инсектицидный белок, и которая вводится в клетку-хозяина, упоминаемая в данном документе как трансген.
В данном документе предложены трансгенные бактерии, трансгенные растительные клетки, трансгенные растения и части трансгенных растений, которые содержат полинуклеотид, который кодирует любой один или более химерных инсектицидных белков. Термин бактериальная клетка или бактерия может включать, без ограничений, клетку Agrobacterium, Bacillus, Escherichia, Salmonella, Pseudomonas или Rhizobium. Термин растительная клетка или растение может включать, без ограничений, клетку двудольного растения или клетку однодольного растения. Рассматриваемые растения и растительные клетки включают, без ограничений, клетку или растение люцерны, банана, ячменя, бобов, брокколи, капусты, моркови, маниока, клещевины, цветной капусты, сельдерей, нута, китайской капусты, цитрусовых, кокосовой пальмы, клевера, хлопчатника, тыквы, огурца, ели Дугласа, баклажана, эвкалипта, льна, чеснока, винограда, хмеля, лука-порея, салата, сосны Лоблолли, просо, дыни, грецкого ореха, овса, гороха, арахиса, перца, голубиного гороха, сосны, картофеля, тополя, тыквы, сосны лучистой, редиса, рапса, риса, злака, ржи, американского шафрана, кустарник, сорго, южной сосны, сои, шпината, кабачка, клубники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, сладкой кукурузы, амбрового дерева, сладкого картофеля, просо, чая, табака, томата, тритикале, дерновой травы, арбуза, пшеницы. В некоторых вариантах реализации изобретения представлены трансгенные растения и части трансгенных растений, которые регенерировали из трансгенной растительной клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения трансгенные растения могут быть получены из трансгенного семени путем разрезания, срывания, измельчения или иного отделения части от растения. В определенных вариантах реализации изобре
- 14 034918 тения часть растения может быть семенем, коробочкой, листом, цветком, стеблем, корнем или любой его частью или невосстанавливаемой частью трансгенной части растения. Как используется в данном контексте, нерегенерируемая часть трансгенной части растения представляет собой часть, которая не может быть индуцирована для образования целого растения или которая не может быть индуцирована для образования целого растения, способного к половому и/или бесполому размножению. В некоторых вариантах реализации изобретения нерегенерируемая часть отбираемой части растения представляет собой часть трансгенного семени, коробочки, листа, цветка, стебля или корня.
Приведены способы получения трансгенных растений, которые содержат ингибирующее в отношении насекомых Lepidoptera количество химерных инсектицидных белков. Такие растения могут быть получены путем введения полинуклеотида, который кодирует химерные инсектицидные белки, предусмотренные в этой заявке, в растительную клетку и выбирает растение, полученное из указанной растительной клетки, которое экспрессирует ингибирующее в отношении насекомых или Lepidoptera количество инсектицидного вещества. Растения могут быть получены из растительных клеток путем регенерации семян, пыльцы или меристемы, полученных способами трансформации. Способы трансформации растений известны в данной области техники. Например, трансформация, опосредованная Agrobacterium, описана в публикациях патентной заявки США 2009/0138985A1 (соя), 2008/0280361A1 (соя), 2009/0142837A1 (кукуруза), 2008/0282432 (хлопчатник) и 2008/0256667 (хлопчатник).
Растения, экспрессирующие химерные инсектицидные белки, можно скрещивать путем селекции с трансгенными объектами, экспрессирующими другие инсектицидные белки и/или экспрессирующими другие трансгенные признаки, такие как другие признаки для борьбы с насекомыми, гены устойчивости к гербицидам, гены, повышающие урожайность или устойчивость к стрессу, и т.п. или признаки могут быть объединены в один вектор, так что все признаки будут связаны между собой.
Обработанные растительные продукты, причем процессированный продукт содержит обнаруживаемое количество химерного инсектицидного белка, сегменты и фрагменты, обладающие ингибиторной активностью в отношении насекомых, или его фрагмент или любую его отличительную часть, также раскрыты в настоящей заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения обработанный продукт выбирают из группы, состоящей из частей растения, биомассы растений, масла, муки, сахара, корма для животных, муки, хлопьев, отрубей, волокна, шелухи обработанных семян и семян. В определенных вариантах реализации изобретения обработанный продукт является нерегенерируемым. Растительный продукт может включать товарные или другие коммерческие продукты, полученные из трансгенного растения или части трансгенных растений, причем товарные или другие продукты можно отследить путем обнаружения нуклеотидных сегментов или экспрессированных РНК или белков, которые кодируют или содержат отличные части химерного инсектицидного белка.
Также в настоящей заявке раскрыты способы борьбы с насекомыми, в частности заражениями культурных растений чешуекрылыми насекомыми с использованием химерных инсектицидных белков. Такие способы могут включать выращивание растения, содержащего ингибирующее в отношении насекомых Lepidoptera количество химерного инсектицидного белка. В некоторых вариантах реализации изобретения такие способы могут дополнительно включать любое одно или более из (I) нанесения любой композиции, содержащей или кодирующей химерный инсектицидный белок, на растение или семя, которое дает начало растению; и (II) трансформацию растения или растительной клетки, которые дают начало растению с полинуклеотидом, кодирующим химерный инсектицидный белок. В общем, предполагается, что химерный инсектицидный белок может быть обеспечен в композиции, имеющейся в микроорганизме или имеющейся в трансгенном растении, чтобы обеспечить ингибирующую активность против чешуекрылых насекомых.
В некоторых вариантах реализации изобретения химерный инсектицидный белок является инсектицидно активным ингредиентом композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении насекомых, полученной культивированием рекомбинантного Bacillus или любой другой рекомбинантной бактериальной клетки, трансформированной для экспрессии химерного инсектицидного белка в условиях, подходящих для экспрессии. Такая композиция может быть получена путем высушивания, лиофилизации, гомогенизации, экстракции, фильтрации, центрифугирования, седиментации или концентрирования культуры таких рекомбинантных клеток, экспрессирующих/продуцирующих химерный инсектицидный белок. Такой процесс может приводить к образованию клеточного экстракта, клеточной суспензии, клеточного гомогената, клеточного лизата, клеточного супернатанта, клеточного фильтрата или клеточного осадка из Bacillus или других энтомопатогенных бактерий. Получив сконструированный инсектицидный белок, таким образом создают композицию, которая содержит сконструированный инсектицидный белок, может содержать бактериальные клетки, бактериальные споры, а также параспоральные тельца и может поставляться для различных применений, включая продукты-спреи, обладающие ингибирующей активностью в отношении сельскохозяйственные насекомых, или препараты кормовой биомассы, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых в кормовых биотестах.
Вышеупомянутое соединение или препарат может дополнительно содержать сельскохозяйственно приемлемый носитель, такой как приманка, порошок, пыль, таблетки, гранулы, спреи, эмульсия, коллоидная суспензия, водный раствор, споры Bacillus или кристаллические препараты или обработанные се
- 15 034918 мена. Соединение или препарат также могут дополнительно содержать рекомбинантную растительную клетку, растительную ткань, семена или растение, трансформированные для экспрессии одного или более белков; или бактерии, трансформированные для экспрессии одного или более белков. В зависимости от уровня ингибирования в отношении насекомых или инсектицидного ингибирования, присущего рекомбинантному полипептиду, и уровня соединения или препарата, который должен применяться в анализе растений или рациона, соединение или препарат могут содержать различные массовые количества рекомбинантного полипептида, например от 0,0001 до 0,001, до 0,01, до 1, до 99% от массы рекомбинантного полипептида.
В варианте реализации изобретения для снижения вероятности развития резистентности композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, или трансгенное растение, содержащее химерный инсектицидный белок, может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный токсический агент, который проявляет ингибирующую активность против тех же видов чешуекрылых насекомых, но который отличается от химерного инсектицидного белка. Возможные дополнительные токсичные агенты для такой композиции содержат белок, обладающий ингибирующей активностью против насекомых, и молекулу дцРНК, обладающую ингибирующей активностью против насекомых. Один пример использования таких рибонуклеотидных последовательностей для борьбы с насекомыми-вредителями описан в Baum, et al. (публикация патента США 2006/0021087 A1). Такой дополнительный полипептид(ы) для борьбы с чешуекрылыми-вредителями может быть выбран из группы, состоящей из белка, обладающего ингибирующей активностью в отношении насекомых, такого как, без ограничений, Cry1A (патент США № 5880275), Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1A.105, Cry1Ae, Cry1B (публикация патента США № 10/525318), Cry1C (патент США № 6033874), химеры Cry1D, Cry1E, Cry1F и Cry1A/F (патенты США №№ 7070982, 6962705 и 6713063), Cry1G, Cry1H, Cry1I, Cry1J, Cry1K, Cry1L, Cry2A, Cry2Ab (патент США № 7064249), Cry2Ae, Cry4B, Cry6, Cry7, Cry8, Cry9, Cry15, Cry43A, Cry43B, Cry51Aal, ET66, TIC400, TIC800, TIC834, TIC1415, Vip3A, VIP3Ab, VIP3B, AXMI-001, AXMI-002, AXMI-030, AXMI-035 и AXMI-045 (публикация патента США № 2013-0117884 A1), AXMI-52, AXMI-58, AXMI-88, AXMI-97, AXMI-102, AXMI-112, AXMI-117, AXMI-100 (публикация патента США № 20130310543 A1), AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005 (публикация патента США 2013-0104259 A1), AXMI-134 (публикация патента США 2013-0167264 A1), AXMI-150 (публикация патента США 2010-0160231 A1), AXMI-184 (публикация патента США 2010-0004176 A1), AXMI-196, AXMI-204, AXMI-207, AXMI-209 (публикация патента США 2011-0030096 A1), AXMI-218, AXMI-220 (публикация патента США 20140245491 A1), AXMI-221z, AXMI-222z, AXMI-223z, AXMI-224z, AXMI-225z (публикация патента США № 2014-0196175 A1), AXMI-238 (публикация патента США 2014-0033363 A1), AXMI-270 (публикация патента США 2014-0223598 A1), AXMI-345 (публикация патента США 2014-0373195 A1), DIG-3 (публикация патента США 2013-0219570 A1), DIG-5 (публикация патента США 2010-0317569 A1), DIG-11 (публикация патента США 2010-0319093 A1), AfIP-lA и его производные (публикация патентной заявки США 2014-0033361 A1), A1IP-1B и его производные (публикация патента США 2014-0033361 A1), PIP1APIP-1B (публикация патента США 2014-0007292 A1), PSEEN3174 (публикация патента США 20140007292 A1), AECFG-592740 (публикация патента 2014-0007292 A1), Pput_1063 (публикация патента США 2014-0007292 A1), Pput_1064 (публикация патента США 2014-0007292 A1), GS-135 и его производные (публикация патента США 2012-0233726 A1), GS153 и его производные (публикация патента США 2012-0192310 A1), GS154 и его производные (публикация патента США 2012-0192310 A1), GS155 и его производные (публикация патента 2012-0192310 A1), SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 2012-0167259 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 2012-0047606 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 2011-0154536 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 20110112013 A1, SEQ ID NO: 2 и 4 и ее производные, как описано в публикации патента США 2010-0192256 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 2010-0077507 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 2010-0077508 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в публикации патента США 2009-0313721 A1, SEQ ID NO: 2 или 4 и их производных, как описано в публикации патента США 2010-0269221 A1, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патенте США № 7772465 (B2), CF161_0085 и его производные, как описано в WO 2014/008054 A2, токсичные белки к чешуекрылым насекомым и их производные, как описано в патентах США US 2008-0172762 A1, US 2011-10055968 A1 и US 2012-0117690 A1; SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в US 7510878 (B2), SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патенте США № 7812129 (В1); и тому подобное.
В других вариантах реализации изобретения композиция или трансгенное растение, обладающее ингибирующей активностью в отношении насекомых, может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный токсический агент, который проявляет ингибирующую активность в отношении насекомых-вредителей, которые не ингибируются химерными инсектицидными белками согласно настоящему изобретению (такие насекомые-вредители как жесткокрылые, полужесткокрылые и равнокрылые) с тем, чтобы расширить спектр ингибирующей активности в отношении насекомых.
Такой дополнительный токсичный агент для борьбы с жесткокрылыми насекомыми-вредителями
- 16 034918 может быть выбран из группы, состоящей из белка, обладающего ингибирующей активностью в отношении насекомых, такого как, без ограничений, Cry3Bb (патент США № 6501009), варианты Cry1C, варианты Cry3A, Cry3, Cry3B, Cry34/35, 5307, AXMI134 (публикация патента США 2013-0167264 A1) AXMI-184 (публикация патента США 2010-0004176 A1), AXMI-205 (публикация патента США 20140298538 A1), axmi207 (публикация патента США 2013-0303440 A1), AXMI-218, AXMI-220 (публикация патента США 20140245491A1), AXMI-221z, AXMI-223z (публикация патента США 2014-0196175 A1), AXMI-279 (публикация патента США 2014-0223599 A1), AXMI-R1 и их варианты (публикация патента США 2010-0197592 A1, TIC407, TIC417, TIC431, TIC807, TIC853, TIC901, TIC1201, TIC3131, DIG-10 (публикация патента США 2010-0319092 A1), eHIPs (публикация патентной заявки США 2010/0017914) IP3 и его варианты (публикация патента США 2012-0210462 A1) и та -гексатоксин-ШЫ (публикация патентной заявки US 2014-0366227 A1).
Такой дополнительный токсичный агент для борьбы с полужесткокрылыми-вредителями может быть выбран из группы, состоящей из белков, активных в отношении полужесткокрылых, таких как, без ограничений, TIC1415 (публикация патента США 2013-0097735 A1), TIC807 (патент США № 8609936), TIC834 (публикация патента США 2013-0269060 A1), AXMI-036 (публикация патента США 20100137216 A1) и AXMI-171 (публикация патента США 2013-0055469 A1). Дополнительные полипептиды для борьбы с жесткокрылыми, чешуекрылыми и равнокрылыми насекомыми-вредителями можно найти на сайте номенклатуры токсинов Bacillus thuringiensis, находящемся в ведении Нилом Крикмором (во всемирной паутине по адресу btnomenclature.info).
Последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, и последовательности, имеющие значительную процентную идентичность с химерными инсектицидными белками, можно идентифицировать с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР), термическая амплификация и гибридизация. Например, химерные инсектицидные белки могут быть использованы для получения антител, которые специфически связываются с белками, и могут быть использованы для скрининга и поиска других белков, которые тесно связаны.
Кроме того, нуклеотидные последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, могут быть использованы в качестве зондов и праймеров для скрининга и идентификации других членов класса с использованием способов термоциклической или изотермической амплификации и гибридизации. Например, олигонуклеотиды, полученные из последовательностей, указанных в SEQ ID NO: 2, могут быть использованы для определения присутствия или отсутствия химерного инсектицидного трансгена в образце дезоксирибонуклеиновой кислоты, полученной из товарного продукта. Учитывая чувствительность определенных способов обнаружения нуклеиновых кислот, которые используют олигонуклеотиды, предполагается, что олигонуклеотиды, полученные из последовательностей, указанных в любой из SEQ ID NO: 2, могут быть использованы для обнаружения соответствующего химерного инсектицидного белка в товарных продуктах, полученных из объединенных источников, где только часть товарного продукта получена из трансгенного растения, содержащего любую из SEQ ID NO: 2.
Примеры
Ввиду вышеизложенного специалистам в данной области техники будет понятно, что следующие раскрытые варианты реализации являются исключительно репрезентативными для настоящего изобретения, которые могут быть реализованы в различных формах. Таким образом, конкретные структурные и функциональные детали, раскрытые в данном документе, не должны интерпретироваться как ограничивающие.
Пример 1. Создание и клонирование последовательностей, кодирующих новые химерные инсектицидные белки, активные в отношении чешуекрылых.
Данный пример иллюстрирует создание новых химерных инсектицидных белков и клонирование и экспрессию химерных инсектицидных белков.
Последовательности рекомбинантной нуклеиновой кислоты были сконструированы из известных генов Cry-белка для получения полинуклеотидных последовательностей, кодирующих новые химерные инсектицидные белки. Полученные полинуклеотидные последовательности клонировали в плазмидный экспрессионный вектор Bacillus thuringiensis (Bt). После подтверждения полинуклеотидной последовательности экспрессионную плазмиду трансформировали в Bt и экспрессировали. Препараты новых химерных белков анализировали на активность против различных чешуекрылых-вредителей.
Многие полинуклеотидные последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, были получены и испытаны в биотесте. Не все химерные инсектицидные белки демонстрировали активность. Только несколько из химерных инсектицидных белков были отобраны на основании их активности в отношении конкретных чешуекрылых, продемонстрированной в биотесте. Варианты аминокислот, в которые были введены аминокислотные замены или альтернативные протоксиновые домены, также были получены на основе исходных химерных инсектицидных белков TIC867 и TIC868. Компоненты химерных инсектицидных белков (домены I, II и III и протоксин) согласно настоящему изобретению представлены в табл. 1. Также представлены аминокислотные замены в вариантах TIC868 относительно исходной последовательности белка TIC868.
- 17 034918
Таблица 1 Новые химерные пестицидные белки и их компоненты
| Токсин | ПРТ SEQ ID NO: | Domi | Dom2 | Dom3 | Протоксин | Аминокислотные модификации * |
| TIC1100 | 4 | CrylAh | CrylAc | CrylCa | CrylAc | |
| TIC860 | 7 | CrylBbl | CrylBbl | CrylCa | CrylAc | |
| TIC867 | 10 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | CrylAb3 | |
| Т1С867_20 | 13 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | CrylDal | |
| Т1С867_21 | 16 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | Cry4 | |
| Т1С867_22 | 19 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | Cry9 | |
| Т1С867_23 | 21 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | CrylBe | |
| Т1С867_24 | 23 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | CrylKa | |
| Т1С867_25 | 25 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylKa | CrylCa | |
| TIC868 | 28 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylAb3 | |
| Т1С868_9 | 30 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylAb3 | N240S_Y343Q_N3 49T |
| Т1С868_10 | 33 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylDal | |
| Т1С868_11 | 36 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | Cry4 | |
| Т1С868_12 | 39 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | Cry9 | |
| Т1С868_13 | 41 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylBe | |
| Т1С868_14 | 43 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylKa | |
| Т1С868_15 | 45 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylCa | |
| Т1С868_29 | 47 | CrylBe2 | CrylBe2 | CrylCa | CrylAb3 | Q136Y_Y343Q_N3 49T |
| TIC869 | 50 | CrylJal | CrylJal | CrylJx | CrylAb3 | |
| TIC836 | 53 | CrylFal | CrylFal | CrylAb | CrylAc |
* - аминокислотные мутации идентифицируются с использованием стандартного кода аминокислот ИЮПАК (см. Объединенная комиссия по биохимической номенклатуре ИЮПАК-IUB по биохимической номенклатуре. Номенклатура и система обозначений аминокислот и пептидов. Eur. J. Biochem. 138:9-37(1984). Первое сокращение первой аминокислотной последовательности обозначает исходную аминокислоту в данном каркасном белке, число представляет положение аминокислоты, а второе сокращение аминокислотной последовательности обозначает аминокислоту, помещенную в данное положение в улучшенном варианте белка.
Пример 2. Новые химерные инсектицидные белки демонстрируют активность против чешуекрылых-вредителей.
Данный пример иллюстрирует тестирование химерных инсектицидных белков, описанных в примере 1, и активность в отношении чешуекрылых, наблюдаемую для химерных инсектицидных белков.
Полинуклеотидные последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, экспрессировали в Bt. Экспрессированные химерные инсектицидные белки затем анализировали против множества чешуекрылых, известных как вредители кукурузы, сахарного тростника, сои и хлопчатника, а также других культурных растений. В частности, инсектицидные белки анализировали на активность против совки бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis), огневки сахарного тростника (SCB, Diatraea saccharalis), точильщика зернового кукурузного (LSCB, Elasmopalpus lignosellus), хлопковой совки (CEW, Helicoverpa zea), табачной листовертки (TBW, Heliothis virescens), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens), черной совки (BLAW, Spodoptera cosmioides), южной совки (SAW, Spodoptera eridania), кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), совки малой (BAW, Spodoptera exigua), совки американской (OBW, Helicoverpa armigera), азиатской хлопковой совки (OLW, Spodoptera litura), розового коробочного червя ((PBW, Pectinophora gossypiella), совки-ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon), огневки кукурузной юго-западной (SWCB, Diatraea grandiosella), шиповатого северного коробочного червя (SBW, Earias vitella) и мотылька стеблевого кукурузного (ECB, Ostrinia nubilalis). Американская кукурузная совка (CEW, Helicoverpa zea) также называется как коробочный червь (SPW) и совка хлопковая (CBW). Активность определяли при помощи комбинации показателей смертности и задержки роста, а также оценки МИК50 (минимальная ингибирующая концентрация для 50%). МИК50 относится к концентрации, ингибирующей линьку, причем как мертвые личинки, так и личинки L1 (личинки, которые лишены линьки до вторых возрастов) учитываются в оценке. В табл. 2 показана активность каждого химерного инсектицидного белка. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомого-вредителя.
- 18 034918
Таблица 2
Биологическая активность против выбранных чешуекрылых
Насекомое
| Токсин | ПРТ SEQ ID NO: | VBC | sc в | LSC В | CEWSPWCBW | BLAW | TBW | SB L | SAW | FAW | BAW | OBW | OLW | PBW | BCW | SWCB | ECB | SBW |
| TIC110 0 | 4 | + | + | + | + | + | + | + | ||||||||||
| TIC860 | 7 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | ||||
| TIC867 | 10 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | ||||||||
| TIC867 _2° | 13 | |||||||||||||||||
| TIC867 _21 | 16 | + | ||||||||||||||||
| TIC867 _22 | 19 | + | + | |||||||||||||||
| TIC868 | 28 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | |||||||
| TIC868 _10 | 33 | + | ||||||||||||||||
| TIC868 _1:L | 36 | + | ||||||||||||||||
| TIC868 _12 | 39 | + | ||||||||||||||||
| TIC869 | 50 | + | + | + | + | + | ||||||||||||
| TIC836 | 53 | + | + | + | + | + |
Как можно видеть из табл. 2 выше, большинство химерных инсектицидных белков проявляли активность против одного или более видов чешуекрылых-вредителей.
Пример 3. Синтез генов, кодирующих химерные инсектицидные белки, для экспрессии в растениях.
Данный пример иллюстрирует синтез полинуклеотидов, кодирующих химерные инсектицидные белки, для экспрессии в растениях.
Синтетические кодирующие последовательности были сконструированы для применения в экспрессии химерных инсектицидных белков в растениях. Синтетические последовательности были сконструированы и синтезированы в соответствии со способами, как правило, описанными в патенте США № 5500365, избегая некоторых неподходящих проблемных последовательностей, таких как последовательности полиаденилирования растений, обогащенные ATTTA и A/T, при сохранении аминокислотной последовательности химерного инсектицидного белка. Нуклеотидные последовательности для этих генов, кодирующих химерные инсектицидные белки для экспрессии в растениях, перечислены в табл. 3.
Таблица 3
Полинуклеотидные последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, предназначенные для применения в растениях
| Инсектицидный белок | ДНК SEQ ID NO: | ПРТ SEQ ID NO: |
| TIC1100 | 2 | 4 |
| TIC1100 | 3 | 4 |
| TIC860 | 6 | 7 |
| TIC867 | 9 | 10 |
| TIC867_20 | 12 | 13 |
| TIC867_21 | 15 | 16 |
| TIC867_22 | 18 | 19 |
| TIC867_23 | 20 | 21 |
| TIC867_24 | 22 | 23 |
| TIC867_25 | 24 | 25 |
| TIC868 | 27 | 28 |
| TIC868_9 | 29 | 30 |
| TIC868_10 | 32 | 33 |
| TIC868_11 | 35 | 36 |
| TIC868_12 | 38 | 39 |
| TIC868_13 | 40 | 41 |
| TIC868_14 | 42 | 43 |
| TIC868_15 | 44 | 45 |
| TIC868_29 | 46 | 47 |
| TIC869 | 49 | 50 |
| TIC836 | 52 | 53 |
Пример 4. Экспрессионные кассеты для экспрессии химерных инсектицидных белков в растениях. Данный пример иллюстрирует конструкцию экспрессионных кассет, содержащих предназначенные для применения в растениях полинуклеотидные последовательности, которые кодируют химерные инсектицидные белки.
Разнообразные экспрессионные кассеты растений были сконструированы с применением полинуклеотидных последовательностей, кодирующих химерные инсектицидные белки, предложенные в табл. 3
- 19 034918 и предназначенные для экспрессии в растениях. Такие экспрессионные кассеты полезны для транзиентной экспрессии в протопластах растений или трансформации растительных клеток. Типичные экспрессионные кассеты были разработаны с учетом возможного размещения белка внутри клетки. Один набор экспрессионных кассет был сконструирован таким образом, чтобы белок был транслирован и хранился в цитозоле. Другой набор экспрессионных кассет был сконструирован так, чтобы содержать транзитный пептид, смежный с белком токсина, для обеспечения нацеливания на органеллы клетки, такие как хлоропласт или пластиду. Все экспрессионные кассеты были сконструированы, чтобы начаться на 5'-конце с промотора, который может состоять из нескольких промоторных элементов, энхансерных элементов или других экспрессионных элементов, известных специалистам в данной области техники, функционально связанных, для повышения экспрессии трансгена. За промоторной последовательностью, как правило непрерывно следует одна или более лидерная последовательность на 3'-конце промотора. Интронная последовательность, как правило, расположена на 3'-конце лидерной последовательности, для улучшения экспрессии трансгена. Последовательность, кодирующая токсин или транзитный пептид, и последовательность, кодирующая токсин, как правило, расположена на 3'-конце функционально связанного промотора, лидера и интрона. Последовательность 3'-НТО, как правило, расположена на 3'-конце кодирующей последовательности для облегчения терминации транскрипции и обеспечения последовательности, важной для полиаденилирования получаемого транскрипта. Все элементы, описанные выше, были функционально связаны между собой и расположены последовательно, часто с дополнительными последовательностями, используемыми для конструирования экспрессионной кассеты.
Пример 5. Активность в отношении чешуекрылых химерного инсектицидного белка в стабильно трансформированной кукурузе.
Данный пример иллюстрирует ингибиторную активность, проявляемую химерными инсектицидными белками в отношении чешуекрылых-вредителей, экспрессированными растениями кукурузы и предложенными в виде корма для соответствующих насекомых-вредителей кукурузы.
Сорт кукурузы LH244 трансформировали в бинарные векторы для трансформации, описанные в примере 4, с применением способа трансформации, опосредованной Agrobacterium.
Трансформированные клетки индуцировали для образования растений при помощи способов, известных в данной области техники. Биотестирование с использованием листовых дисков растения выполняли по аналогии с теми, которые описаны в патенте США № 8344207. Ткань, полученную из нетрансформированных растений сорта LH244, использовали в качестве отрицательного контроля. Множество объектов трансформации для каждого бинарного вектора оценивали против американской кукурузной совки (CEW, Helicoverpa zea), кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), совкиипсилон (BCW, Agrotis ipsilon) и огневки кукурузной юго-западной (SWCB, Diatraea grandiosella).
Биотестирование с использованием листовых дисков выполняли на трансгенных растениях Ro и F1 поколений. Кроме того, степень повреждения листьев оценивали для целых трансгенных F1 растений, экспрессирующих определенные химерные инсектицидные белки, зараженных чешуекрылыми насекомыми-вредителями. F1 трансгенные объекты, экспрессирующие TIC860 и TIC868, также оценивали по активности в поле против FAW, CEW и SWCB. Результаты анализа приведены в табл. 4. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомого-вредителя. Как видно из табл. 4, большинство химерных инсектицидных белков и многие из вариантов химерных инсектицидных белков демонстрировали активность в отношении одного или более видов чешуекрылых-вредителей.
- 20 034918
Пример 6. Активность в отношении чешуекрылых химерного инсектицидного белка в стабильно трансформированной сое.
Данный пример иллюстрирует ингибиторную активность, проявляемую химерным инсектицидным белком в отношении чешуекрылых-вредителей, экспрессированным растениями сои и предложенным в виде корма для соответствующих насекомых-вредителей.
Кодирующие последовательности для выбранного химерного инсектицидного белка изменяли для экспрессии в растениях, клонировали в бинарный вектор для трансформации растений и применяли для трансформации клеток растения сои. Векторы для трансформации растений содержали первую трансгенную кассету для экспрессии химерного инсектицидного белка, как описано в примере 4, и вторую трансгенную кассету для селекции трансформированных растительных клеток с применением спектиномициновой селекции. В некоторых случаях, например в случае TIC1100, TIC860 и TIC836, последовательность, кодирующая хлоропластный транзитный пептид, была функционально связана с последовательностью, кодирующей химерный инсектицидный белок. Анализы выполняли с использованием TIC1100, TIC860 и TIC836, нацеленными и не нацеленными на пластиду. В табл. 5 ниже показан химерный инсектицидный белок и вариант TIC867 химерного инсектицидного белка и связанные кодирующие последовательности, применяемые для экспрессии в стабильно трансформированной сое.
Клетки растения сои трансформировали в бинарные векторы для трансформации, описанные выше, с применением способа трансформации, опосредованной Agrobacterium. В результате трансформированные растительные клетки индуцировали для формирования растений сои. Ткани листьев собирали и использовали в биотестировании, как описано в примере 5, или альтернативно, лиофилизированные ткани использовали в виде корма насекомых для биотестирования. Биотестирование выполняли против FAW, южной совки (SAW, Spodoptera eridania), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens), коробочного червя (SPW, Helicoverpa zea), совки бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis), табачной листовертки (TBW, Heliothis virescens), черной совки (BLAW, Spodoptera cosmioides), точильщика зернового кукурузного (LSCB, Elasmopalpus lignosellus) и совки американской (OBW, Helicoverpa armigera).
В табл. 5 показана активность в отношении отдельных видов чешуекрылых для каждого инсектицидного белка в растениях поколения Ro, причем + указывает на активность. Как видно из табл. 5, каждый из химерных инсектицидных белков, экспрессируемых в стабильно трансформированной сое, демонстрировал активность против нескольких видов чешуекрылых. Стоит отдельно отметить, что вариант TIC867, TIC867 23 продемонстрировал активность в отношении SPW.
Таблица 5
Биотестирование активности химерного инсектицидного белка из ткани листа стабильно трансформированной Ro сои
| Инсектицидный белок | FAW | SAW | SBL | SPW | VBC | TBW | BLAW | LSCB | OBW |
| TIC1100 | + | + | + | + | + | + | + | ||
| TIC860 | + | + | + | + | + | ||||
| TIC867 | + | + | + | + | + | + | |||
| Т1С867_20 | + | + | |||||||
| Т1С867_21 | + | + | |||||||
| Т1С867_22 | + | + | |||||||
| Т1С867_23 | + | + | + | + | |||||
| Т1С867_24 | + | + | |||||||
| Т1С867_25 | + | + | |||||||
| TIC868 | + | + | + | + | + | ||||
| TIC869 | + | + | + | + | |||||
| TIC836 | + | + | + | + | + | + | + |
Выбранным трансформированным объектам обеспечили самоопыление, и полученное зерно выращивали. Ткани листа собирали с растений поколения R1 и использовали в кормовом биотесте. R1 растения, экспрессирующие TIC1100, TIC860, TIC867, TIC868, TIC869 и TIC836, исследовали на активность против SAW, SBL, SPW и VBC. В табл. 6 показана наблюдаемая в этих тестах активность. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомого-вредителя. Как показано в табл. 6, наиболее экспрессируемый химерный инсектицидный белок из растений R1 поколения проявил активность в отношении одного или более видов чешуекрылых.
- 21 034918
Таблица 6
Биотестирование активности химерного инсектицидного белка из ткани листа стабильно трансформированной R сои
В табл. 7 представлены результаты полевых испытаний, проведенных в теплице с использованием стабильно трансформированных растений сои поколения Rb экспрессирующих TIC1100, TIC860 и TIC836. Виды, используемые для заражения растений в теплице, включают SAW, SBL и SPW. Резистентность определяли как дефолиацию в растениях сои, которая составляет менее чем или равную 15%. Резистентность, наблюдаемая в экспериментальной клетке, соответствует резистентности, наблюдаемой у ткани листьев R1 поколения растений сои, анализа, представленного в табл. 6. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомого-вредителя.
Таблица 7
Профиль активности TIC1100, TIC860 и TIC836, экспрессированных в сое поколения R, исследуемый в полевых испытаниях . в теплице
| Токсин | SAW | SBL | SPW |
| TIC1100 | + | + | |
| TIC860 | + | + | |
| TIC836 | + | + |
Полевые испытания в теплицах с использованием стабильно трансформированных растений сои поколения R1, экспрессирующих TIC867 и TIC869, также проводили в двух разных местах в Аргентине, в Асеведо и Фонтесуэле. Виды, используемые для заражения растений в теплицах, включают южноамериканскую совку (SABW, Helicoverpa gelotopeon), VBC, BLAW и пяденицу подсолнечниковую (SFL, Rachiplusia пи). Резистентность определяли как дефолиацию в растениях сои, которая составляет менее чем или равная 15%. В табл. 8 ниже показана наблюдаемая резистентность. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомого-вредителя. Как показано в табл. 8, трансгенные растения сои, экспрессирующие TIC867, продемонстрировали резистентность к BLAW и VBC. Трансгенные растения сои, экспрессирующие TIC869, продемонстрировали резистентность к SABW, SFL, BLAW и VBC.
Таблица 8
Профиль активности TIC867 и TIC869, экспрессируемых в сое поколения R, тестировали в полевых испытаниях в теплице
| Асеведо | Фонтесуэла | |||||
| Токсин | SABW | SFL | VBC | SABW | BLAW | VBC |
| TIC867 | + | + | + | |||
| TIC869 | + | + | + | + | + |
Пример 7. Активность в отношении чешуекрылых химерного инсектицидного белка в стабильно трансформированном хлопчатнике.
В данном примере показана ингибиторная активность, проявляемая химерным инсектицидным белком против чешуекрылых насекомых-вредителей при экспрессии в растениях хлопчатника, предложенным в качестве диеты для соответствующих насекомых-вредителей.
Кодирующие последовательности для выбранного химерного инсектицидного белка, измененные для экспрессии в растениях, клонировали в бинарный вектор для трансформации растений и применяли для трансформации растительных клеток хлопчатника. Полученные бинарные векторы были похожи на те, что описаны в примере 4, и их использовали, чтобы экспрессировать TIC860, нацеленные и ненацеленные на пластиды (кодирующая последовательность: SEQ ID NO: 6; последовательность белка: SEQ ID NO: 7), TIC867 (кодирующая последовательность: SEQ ID NO: 9; последовательность белка: SEQ ID NO: 10), TIC868 (кодирующая последовательность: SEQ ID NO: 27; последовательность белка: SEQ ID NO: 28) и TIC867_23 (кодирующая последовательность: SEQ ID NO: 20; последовательность белка: SEQ ID NO: 23).
Растительные клетки хлопчатника трансформировали при помощи способа трансформации, опосредованного Agrobacterium. Трансформированные клетки хлопчатника индуцировали для образования целых растений. Ткань листьев хлопчатника использовали в биотестировании, как описано в примере 5, против совки хлопковой (CBW, Helicoverpa zea), FAW, TBW и SBL. В табл. 9 показана активность, наблюдаемая в отношении данных видов чешуекрылых для TIC860, TIC867, и TIC868 в стабильно трансформированном хлопчатнике поколения Ro, причем + указывает на активность. Как видно из табл. 9, TIC860, TIC867, и TIC868 продемонстрировали активность в отношении двух или более видов чешуекрылых насекомых-вредителей в стабильно трансформированном хлопчатнике поколения R0.
- 22 034918
Таблица 9
Биотестирование активности TIC860, TIC867 и TIC868 из листовой ткани стабильно трансформированного хлопчатника поколения R0
| Токсин | CBW | FA W | ТВ W | SB L |
| TIC860 | + | + | ||
| TIC867 | + | + | + | НТ |
| TIC868 | + | + |
Выбранные трансформированные объекты использовали для того, чтобы получить Ri семена. Ri растения, экспрессирующие TIC860, TIC867, и TIC868, исследовали на резистентность к CBW, FAW, TBW и SBL. Ткани листа, бутона и коробочки использовали в анализе. В табл. 10 показана наблюдаемая в этих тестах активность. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомоговредителя. Как показано в табл. 10, TIC860 продемонстрировал активность против FAW в ткани листьев. Кроме того, химерный инсектицидный белок TIC867 продемонстрировал активность против CBW и FAW в ткани листа, бутона и коробочки, а также TBW и SBL в листе. Химерный инсектицидный белок TIC868 продемонстрировал активность против FAW в тканях листа, бутона и коробочки, а также TBW и
SBL в листе.
Таблица 10 Биотестирование активности химерного инсектицидного белка из ткани листа стабильно трансформированного R хлопчатника
| CBW | FAW | TBW | SBL | ||||
| Лист | Бутон | Коробочка | Лист | Бутон | Коробочка | Лист | Лист |
| + | |||||||
| + | + | + | + | + | + | + | + |
| + | + | + | + | + |
Пример 8. Клонирование последовательностей, кодирующих новые химерные инсектицидные бел ки, активные в отношении чешуекрылых.
Последовательности рекомбинантных нуклеиновых кислот были сконструированы из известных генов Cry-белка для получения кодирующих последовательностей, кодирующих новые химерные инсектицидные белки. Полученные кодирующие последовательности клонировали в плазмидный экспрессионный вектор Bacillus thuringiensis (Bt). После подтверждения клонированной последовательности экспрессионную плазмиду трансформировали в Bt и экспрессировали. Препараты новых химерных Cryбелков исследовали активность против различных чешуекрылых вредителей. Многие кодирующие последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, были получены и испытаны в биоанализе. Не все химерные инсектицидные белки демонстрировали активность. Только несколько из химерных инсектицидных белков были отобраны на основании их активности в отношении конкретных чешуекрылых и представлены в табл. 11 ниже.
Таблица 11
Новые химерные пестицидные белки и их соответствующие
Пример 9. Новые химерные инсектицидные белки демонстрируют активность против чешуекрылых
- 23 034918 вредителей.
Кодирующие последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, экспрессировали в Bt. Затем экспрессированные белки анализировали в отношении различных Lepidoptera, известных как вредители кукурузы, сахарного тростника, сои и хлопчатника, а также других культурных растений. Инсектицидные белки анализировали на активность против совки бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis), огневки сахарного тростника (SCB, Diatraea saccharalis), точильщика зернового кукурузного (LSCB, Elasmopalpus lignosellus), коробочного червя (CEW, Helicoverpa zea), табачной листовертки (TBW, Heliothis virescens), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens), черной совки (BLAW, Spodoptera cosmioides), южной совки (SAW, Spodoptera eridania), кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), совки малой (BAW, Spodoptera exigua), совки американской (OBW, Helicoverpa armigera), азиатской хлопковой совки (OLW, Spodoptera litura), розового коробочного червя (PBW, Pectinophora gossypiella), совки-ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon), огневки кукурузной юго-западной (SWCB, Diatraea grandiosella) и мотылька стеблевого кукурузного (ECB, Ostrinia nubilalis). Американская кукурузная совка (CEW, Helicoverpa zea) также называется как коробочный червь (SPW) и совка хлопковая (CBW). Активность определяли при помощи комбинации показателей смертности и задержки роста, а также оценки МИК50. МИК50 относится к концентрации, ингибирующей линьку, причем как мертвые личинки, так и личинки L1 (личинки, которые лишены линьки до вторых возрастов) учитываются в оценке. В табл. 12 ниже показана активность каждого химерного инсектицидного белка. Знак + указывает на активность, наблюдаемую у конкретного насекомого-вредителя.
Таблица 12 Биологическая активность против выбранных Lepidoptera
Как можно видеть из табл. 12 выше, все химерные инсектицидные белки проявляют активность против нескольких видов чешуекрылых насекомых.
Пример 10. Варианты аминокислот TIC1099 демонстрируют активность в отношении чешуекрылых.
Кодирующую последовательность для TIC1099 (SEQ ID NO: 60) модифицировали известными в данной области техники способами для изменения конкретных аминокислот из исходной белковой последовательности TIC1099 (SEQ ID NO: 61). Полученные варианты исследовали на активность против выбранных Lepidoptera. В табл. 13 ниже показаны варианты TIC1099 и соответствующие ДНК и белковые SEQ ID NO.
- 24 034918
Таблица 13
Варианты TIC1099
| Вариант TIC1099 | ДНК SEQ ID NO: | ПРТ SEQ ID NO: |
| TIC1099-T507E | 62 | 63 |
| TIC1099-R522K | 64 | 65 |
| TIC1099-K490S | 66 | 67 |
| TIC1099-T562R | 68 | 69 |
| TIC1099-S553R | 70 | 71 |
| TIC1099-G498D | 72 | 73 |
| TIC1099-K490A | 74 | 75 |
| TIC1099-E564A | 76 | 77 |
Для каждого варианта исследовали смертность и замедление роста кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), американской кукурузной совки (CEW, Helicoverpa zea), совки-ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens) и огневки кукурузной юго-западной (SWCB, Diatraea grandiosella). В табл. 14 ниже показана активность в отношении каждого чешуекрылого вредителя. Активность оценивали от + до ++++ в зависимости от процента смертности.
Таблица 14
Lepidoptera. Несколько вариантов продемонстрировали более низкую активность по сравнению с другими для конкретных вредителей.
Пример 11. Химерные инсектицидные белки, экспрессированные в стабильно трансформированной кукурузе, демонстрируют активность в отношении чешуекрылых-вредителей.
Синтетические кодирующие последовательности конструировали для экспрессии кодируемого белка в растениях, клонировали в бинарный растительный вектор для трансформации и использовали для трансформации клеток растения кукурузы. Векторы для трансформации растений содержат первую трансгенную кассету для экспрессии химерного инсектицидного белка, который содержит конститутивный промотор, функционально связанный 5' с лидером, функционально связанным 5' с интроном, функционально связанным 5' с последовательностью, кодирующей химерный инсектицидный белок, которая, в свою очередь, функционально связана 5' с 3'-НТО, и вторую трансгенную кассету для селекции трансформированных клеток растений с применением глифосатной селекции. Ниже в табл. 15 показаны последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, применяемые для экспрессии в кукурузе и соответствующие SEQ ID NO.
Таблица 15
Последовательности, кодирующие инсектицидные белки и соответствующие SEQ ID NO
| Инсектицидный белок | ДНК SEQ ID NO: | ПРТ SEQ ID NO: |
| TIC713 | 112 | 55 |
| TIC713 | 113 | 55 |
| TIC843 | 114 | 57 |
| TIC862 | 115 | 59 |
| TIC1099 | 116 | 61 |
| TIC1103 | 117 | 79 |
| TIC845 | 118 | 83 |
| TIC846 | 119 | 85 |
| TIC858 | 120 | 87 |
| TIC866 | 121 | 91 |
| TIC838 | 122 | 93 |
| TIC841 | 123 | 97 |
| TIC842 | 124 | 99 |
| TIC850 | 125 | 101 |
| TIC859 | 126 | 103 |
| TIC861 | 127 | 105 |
| TIC848 | 128 | 107 |
| TIC849 | 129 | 109 |
| TIC847 | 130 | 111 |
- 25 034918
Сорт кукурузы LH244 трансформировали с помощью бинарных векторов для трансформации, описанных выше, с применением способа трансформации, опосредованной Agrobacterium. Трансформированные клетки индуцировали для образования растений при помощи способов, известных в данной области техники. Биотестирование с использованием листовых дисков растения выполняли по аналогии с теми, которые описаны в патенте США № 8344207. Ткань, полученную из ^трансформированных растений сорта LH244, использовали в качестве отрицательного контроля. Множество объектов трансформации для каждого бинарного вектора оценивали против американской кукурузной совки (CEW, Helicoverpa zea), кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), совки-ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon) и огневки кукурузной юго-западной (SWCB, Diatraea grandiosella). Результаты анализа показаны в табл. 16, где + обозначает активность.
Таблица 16
Биотестирование активности химерного инсектицидного белка из стабильно трансформированной ткани листа кукурузы
Как можно видеть в табл. 16 выше, все химерные инсектицидные белки продемонстрировали активность против двух или более видов чешуекрылых-насекомых.
Пример 12. Химерные инсектицидные белки, экспрессированные в стабильно трансформированной сое, демонстрируют активность в отношении чешуекрылых-вредителей.
Кодирующие последовательности для выбранного химерного инсектицидного белка изменяли для экспрессии в растениях, клонировали в бинарный вектор для трансформации растений и применяли для трансформации клеток растения сои. Векторы для трансформации растений содержат первую трансгенную кассету для экспрессии химерного инсектицидного белка, который содержит конститутивный промотор, функционально связанный 5' с лидером, функционально связанным 5' с кодирующей последовательностью химерного инсектицидного белка, которая, в свою очередь, функционально связана 5' с 3'НТО, и вторую трансгенную кассету для селекции трансформированных растительных клеток с использованием спектиномициновой селекции. В табл. 17 ниже показаны последовательности, кодирующие химерные инсектицидные белки, применяемые для экспрессии в сое, и соответствующие SEQ ID NO.
Клетки растения сои трансформировали с помощью бинарных векторов для трансформации, описанных выше, с применением способа трансформации, опосредованной Agrobacterium. В результате трансформированные растительные клетки индуцировали для формирования растений сои. Ткани листьев собирали и использовали в биотестировании, как описано в примере 11, или альтернативно, лиофилизированные ткани использовали в виде корма насекомых для биотестирования. Биотестирование выполняли против кукурузной листовой совки (FAW, Spodoptera frugiperda), южной совки (SAW, Spodoptera eridania), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens), коробочного червя (SPW, Helicoverpa zea), совки бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis), соевой совки (SBL, Chrysodeixis includens), табачной лис
- 26 034918 товертки (TBW, Heliothis virescens), черной совки (BLAW, Spodoptera cosmioides), южной совки (SAW, Spodoptera eridania), точильщика зернового кукурузного (LSCB, Elasmopalpus lignosellus) и совки американской (OBW, Helicoverpa armigera). Ниже в табл. 18 показана активность в отношении выбранных видов Lepidoptera для каждого инсектицидного белка в растениях поколения R0.
Таблица 18 Биотестирование активности химерного инсектицидного белка из ткани листа стабильно трансформированной R0 сои
Как видно из табл. 18, каждый из химерных инсектицидных белков, экспрессированный в стабильно трансформированной сое, демонстрировал активность против нескольких видов чешуекрылых.
Выбранным трансформированным объектам обеспечили самоопыление, и полученное зерно выращивали. Ткани листа собирали с растений поколения R1 и использовали в биотестировании корма. В табл. 19 показана активность инсектицидных белков, экспрессированных в ткани листьев соевого листа R1, наблюдаемая в отношении некоторых видов чешуекрылых.
Таблица 19
Биотестирование активности химерного инсектицидного белка из ткани листа стабильно трансформированной R1 сои
| Токсин | SAW | SBL | SPW | VBC |
| TIC1103 | + | + | + | |
| TIC866 | + | + | + | |
| TIC842 | + | + | ||
| TIC849 | + | + |
Как можно видеть из вышеприведенной табл. 19, экспрессированные химерные инсектицидные белки из растений поколения R1 продемонстрировали активность в отношении двух или более видов чешуекрылых.
Все композиции, раскрытые и заявленные в данном документе, могут быть сделаны и выполнены без излишнего экспериментирования в свете настоящего раскрытия. Хотя композиции настоящего изобретения были описаны с точки зрения вышеизложенных иллюстративных вариантов реализации, специалистам в данной области техники будет понятно, что варианты, изменения, модификации и перестройки могут быть применены к композиции, описанной в данном документе, без отступления от концепции, сущности и объема настоящего изобретения. Более конкретно, будет очевидно, что определенные агенты, которые схожи и химически, и физиологически, могут быть использованы вместо агентов, описанных в данном документе, достигая тех же самых или подобных результатов. Все таковые аналогичные замены и модификации, очевидные специалистам в данной области техники, считаются не выходящими за пределы сущности, объема и концепции настоящего изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
Все публикации и опубликованные патентные документы, цитируемые в настоящей спецификации, включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая индивидуальная публикация или патентная заявка были конкретно и индивидуально указаны для включения посредством ссылки
Claims (15)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Химерный инсектицидный белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, проявляющий ингибиторную активность в отношении насекомых отряда Lepidoptera.
- 2. Химерный инсектицидный белок по п.1, отличающийся тем, что вид насекомого выбран из группы, состоящей из Anticarsia gemmatalis, Diatraea saccharalis, Elasmopalpus lignosellus, Helicoverpa zea, Heliothis virescens, Chrysodeixis includens, Spodoptera cosmioides, Spodoptera eridania, Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Spodoptera litura, Pectinophora gossypiella, Diatraea grandiosella, Earias vitella, Helicoverpa gelotopeon и Rachiplusia nu.
- 3. Полинуклеотид, кодирующий химерный инсектицидный белок по п.1, функционально связанный с гетерологичным промотором.
- 4. Полинуклеотид, кодирующий химерный инсектицидный белок по п.1, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 27.
- 5. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п.4, выбранная из группы, состоящей из бактериальной клетки-хозяина и растительной клетки-хозяина.
- 6. Клетка-хозяин по п.5, отличающаяся тем, что бактериальная клетка-хозяин выбрана из группы,- 27 034918 состоящей из Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella и Erwinia.
- 7. Клетка-хозяин по п.5, отличающаяся тем, что растительная клетка-хозяин получена от растения, выбранного из группы, состоящей из однодольных и двудольных растений.
- 8. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых отряда Lepidoptera, содержащая химерный инсектицидный белок по п.1.
- 9. Композиция по п.8, дополнительно содержащая по меньшей мере один другой инсектицидный агент, отличный от химерного инсектицидного белка по п.1, выбранный из группы, состоящей из инсектицидного белка и инсектицидной молекулы дцРНК.
- 10. Композиция по п.9, отличающаяся тем, что по меньшей мере один указанный инсектицидный агент обладает инсектицидной активностью в отношении насекомых-вредителей отрядов Lepidoptera, Coleoptera, Hemiptera, Homoptera или Thysanoptera.
- 11. Семя, содержащее эффективное количество:a) химерного инсектицидного белка по п. 1 илиb) полинуклеотида по п.4.
- 12. Способ борьбы с насекомыми-вредителями отряда Lepidoptera, включающий приведение в контакт указанных насекомых с эффективным количеством химерного инсектицидного белка по п.1.
- 13. Трансгенное растение или часть растения, содержащее химерный инсектицидный белок по п.1.
- 14. Способ получения семени, содержащего химерный инсектицидный белок с SEQ ID NO: 28, включающий:a) получение по меньшей мере одного семени от трансгенного растения или части растения по п.13;b) посадку указанного по меньшей мере одного семени;c) выращивание растений из указанного по меньшей мере одного семени иd) сбор семени от указанных растений, причем собранное семя содержит химерный инсектицидный белок с SEQ ID NO: 28.
- 15. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая гетерологичный промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим химерный инсектицидный белок по п.1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462064989P | 2014-10-16 | 2014-10-16 | |
| PCT/US2015/055800 WO2016061391A2 (en) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201790843A1 EA201790843A1 (ru) | 2017-08-31 |
| EA034918B1 true EA034918B1 (ru) | 2020-04-07 |
Family
ID=54608929
Family Applications (5)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201892761A EA201892761A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201892760A EA201892760A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201892762A EA201892762A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201892763A EA201892763A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201790843A EA034918B1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
Family Applications Before (4)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201892761A EA201892761A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201892760A EA201892760A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201892762A EA201892762A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
| EA201892763A EA201892763A1 (ru) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US10233217B2 (ru) |
| EP (5) | EP3207049B1 (ru) |
| JP (1) | JP6626102B2 (ru) |
| KR (5) | KR102208985B1 (ru) |
| CN (5) | CN112175093B (ru) |
| AR (6) | AR103129A1 (ru) |
| AU (6) | AU2015332384B2 (ru) |
| BR (4) | BR122020004891B1 (ru) |
| CA (3) | CA3151123A1 (ru) |
| CL (5) | CL2017000895A1 (ru) |
| CO (1) | CO2017004807A2 (ru) |
| CR (3) | CR20170198A (ru) |
| CU (5) | CU24541B1 (ru) |
| EA (5) | EA201892761A1 (ru) |
| EC (1) | ECSP17029551A (ru) |
| ES (1) | ES2864657T3 (ru) |
| IL (1) | IL251570B (ru) |
| MX (5) | MX2017004919A (ru) |
| MY (1) | MY181627A (ru) |
| NI (1) | NI201700044A (ru) |
| NZ (3) | NZ768153A (ru) |
| PE (5) | PE20220372A1 (ru) |
| PH (5) | PH12017500697A1 (ru) |
| SG (5) | SG11201702749RA (ru) |
| SV (1) | SV2017005422A (ru) |
| UA (4) | UA123481C2 (ru) |
| UY (1) | UY36360A (ru) |
| WO (1) | WO2016061391A2 (ru) |
| ZA (6) | ZA201702191B (ru) |
Families Citing this family (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106164274B (zh) * | 2013-12-09 | 2020-03-13 | 阿则耐克斯公司 | 来自苏云金杆菌的axmi477、axmi482、axmi486和axmi525毒素基因及其使用方法 |
| BR122020004891B1 (pt) | 2014-10-16 | 2024-01-30 | Monsanto Technology Llc | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| EP3207050A4 (en) | 2014-10-16 | 2018-09-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
| US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
| EA201890066A1 (ru) | 2015-06-16 | 2018-06-29 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Композиции и способы контроля насекомых-вредителей |
| WO2017030808A1 (en) | 2015-08-18 | 2017-02-23 | Monsanto Technology Llc | Novel insect inhibitory proteins |
| ES2892627T3 (es) | 2015-08-27 | 2022-02-04 | Monsanto Technology Llc | Proteínas inhibidoras de insectos novedosas |
| US10572836B2 (en) | 2015-10-15 | 2020-02-25 | International Business Machines Corporation | Automatic time interval metadata determination for business intelligence and predictive analytics |
| CA3022858A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| WO2018013333A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| US11016730B2 (en) | 2016-07-28 | 2021-05-25 | International Business Machines Corporation | Transforming a transactional data set to generate forecasting and prediction insights |
| EP3528631B1 (en) | 2016-10-21 | 2024-06-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| WO2018111553A1 (en) * | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Syngenta Participations Ag | Engineered pesticidal proteins and methods of controlling plant pests |
| WO2018128744A1 (en) | 2017-01-04 | 2018-07-12 | Syngenta Participations Ag | Compositions and methods for controlling plant pests |
| CN117947082A (zh) * | 2017-01-12 | 2024-04-30 | 孟山都技术公司 | 对鳞翅目昆虫具有活性的杀害虫毒素蛋白质 |
| WO2019074598A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | VIRUS-INDUCED GENETIC SILENCING TECHNOLOGY FOR THE CONTROL OF INSECTS IN MAIZE |
| CN108148841B (zh) * | 2017-12-14 | 2020-12-29 | 云南大学 | 氨基酸序列在用于使昆虫Dip3蛋白失活中的应用 |
| WO2019125651A1 (en) * | 2017-12-19 | 2019-06-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides and uses thereof |
| CN116410286A (zh) * | 2018-03-14 | 2023-07-11 | 先锋国际良种公司 | 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CN112020302B9 (zh) * | 2018-03-14 | 2023-05-09 | 先锋国际良种公司 | 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CN112512305B (zh) * | 2018-07-30 | 2024-02-27 | 孟山都技术公司 | 玉米转基因事件mon 95379及其检测方法和用途 |
| CN109198845A (zh) * | 2018-08-21 | 2019-01-15 | 广州杰赛科技股份有限公司 | 全自主甲面彩绘装置、方法、设备及存储介质 |
| WO2020046701A1 (en) | 2018-08-29 | 2020-03-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN111100208A (zh) * | 2020-01-16 | 2020-05-05 | 黑龙江大鹏农业有限公司 | 一种人工合成的抗虫蛋白mCry1Ia2及其制备方法和应用 |
| WO2022125639A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-16 | Monsanto Technology Llc | Modified plant-associated bacteria and methods of their use |
| MX2023007427A (es) | 2020-12-21 | 2023-07-03 | Monsanto Technology Llc | Proteinas inhibidoras de insectos novedosas. |
| UY39585A (es) | 2020-12-23 | 2022-07-29 | Monsanto Technology Llc | Proteínas que exhiben actividad inhibidora de insectos frente a plagas con importancia agrícola de plantas de cultivo y semillas |
| KR20230127241A (ko) | 2020-12-31 | 2023-08-31 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 신규한 곤충 저해 단백질 |
| TW202305130A (zh) | 2021-03-26 | 2023-02-01 | 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 | 原核系統中環狀多核糖核苷酸之產生 |
| AR125216A1 (es) | 2021-03-26 | 2023-06-28 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Producción de polirribonucleótidos circulares en un sistema eucariota |
| WO2022204464A1 (en) | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Production of circular polyribonucleotides in a eukaryotic system |
| JP2024526635A (ja) | 2021-07-08 | 2024-07-19 | モンサント テクノロジー エルエルシー | 新規の昆虫阻害タンパク質 |
| CN114134171B (zh) * | 2021-10-29 | 2023-09-15 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种抑制或杀灭东方黏虫的方法及其应用 |
| KR20240110818A (ko) | 2021-11-01 | 2024-07-16 | 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 Vii, 엘엘씨 | 유기체를 변형하기 위한 폴리뉴클레오티드 |
| CN114507673A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-17 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种抑制或杀灭小地老虎的方法及应用 |
| MX2024009021A (es) | 2022-01-20 | 2024-08-06 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Polinucleotidos para modificar organismos. |
| CN116063431B (zh) * | 2022-09-19 | 2023-11-10 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种植物抗虫蛋白质及其应用 |
| WO2024092330A1 (pt) * | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária - Embrapa | Proteínas inseticidas quiméricas truncadas |
| CN117144054B (zh) * | 2023-10-27 | 2024-06-11 | 莱肯生物科技(海南)有限公司 | 一种核酸检测方法及其应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024581A2 (en) * | 1997-11-12 | 1999-05-20 | Mycogen Corporation | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins |
| WO2001014562A1 (en) * | 1999-08-19 | 2001-03-01 | Syngenta Participations Ag | Hybrid insecticidal toxins and nucleic acid sequences coding therefor |
| WO2001019859A2 (en) * | 1999-09-15 | 2001-03-22 | Monsanto Technology Llc | LEPIDOPTERAN-ACTIVE BACILLUS THURINGIENSIS δ-ENDOTOXIN COMPOSITIONS AND METHODS OF USE |
| WO2002014517A1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Monsanto Technology Llc | BROAD-SPECTRUM δ-ENDOTOXINS |
| WO2004020636A1 (en) * | 2002-08-29 | 2004-03-11 | Monsanto Technology, Llc | Nucleotide sequences encoding cry1bb proteins for enhanced expression in plants |
| WO2011075588A1 (en) * | 2009-12-16 | 2011-06-23 | Dow Agrosciences Llc | COMBINED USE OF CRY1Ca AND CRY1Fa PROTEINS FOR INSECT RESISTANCE MANAGEMENT |
| WO2014055881A1 (en) * | 2012-10-05 | 2014-04-10 | Dow Agrosciences Llc | Use of cry1ea in combinations for management of resistant fall armyworm insects |
Family Cites Families (77)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3587548T2 (de) | 1984-12-28 | 1993-12-23 | Bayer Ag | Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann. |
| DE3687682T2 (de) | 1985-08-07 | 1993-08-19 | Monsanto Co | Glyphosat resistente pflanzen. |
| US5312910A (en) | 1987-05-26 | 1994-05-17 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
| DE69033816T2 (de) | 1989-02-24 | 2002-08-08 | Monsanto Technology Llc., St. Louis | Synthetische pflanzengene und verfahren zu ihrer herstellung |
| US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
| FR2673643B1 (fr) | 1991-03-05 | 1993-05-21 | Rhone Poulenc Agrochimie | Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide. |
| US5723758A (en) * | 1991-09-13 | 1998-03-03 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis genes encoding lepidopteran-active toxins |
| US5322687A (en) | 1993-07-29 | 1994-06-21 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryet4 and cryet5 toxin genes and proteins toxic to lepidopteran insects |
| GB9318207D0 (en) | 1993-09-02 | 1993-10-20 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US5508264A (en) * | 1994-12-06 | 1996-04-16 | Mycogen Corporation | Pesticidal compositions |
| US6063756A (en) * | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
| US6713063B1 (en) | 1996-11-20 | 2004-03-30 | Monsanto Technology, Llc | Broad-spectrum δ-endotoxins |
| US6017534A (en) | 1996-11-20 | 2000-01-25 | Ecogen, Inc. | Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity |
| ES2229395T3 (es) * | 1996-11-20 | 2005-04-16 | Monsanto Technology Llc | Endotoxinas delta de amplio espectro. |
| US5942664A (en) | 1996-11-27 | 1999-08-24 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants |
| US6489542B1 (en) | 1998-11-04 | 2002-12-03 | Monsanto Technology Llc | Methods for transforming plants to express Cry2Ab δ-endotoxins targeted to the plastids |
| US6283613B1 (en) | 1999-07-29 | 2001-09-04 | Cooper Technologies Company | LED traffic light with individual LED reflectors |
| US6501009B1 (en) | 1999-08-19 | 2002-12-31 | Monsanto Technology Llc | Expression of Cry3B insecticidal protein in plants |
| ATE296539T1 (de) * | 2000-08-25 | 2005-06-15 | Syngenta Participations Ag | Hybriden von crystal proteinen aus bacillus thurigiensis |
| CN101385467B (zh) * | 2001-03-30 | 2014-11-05 | 辛根塔参与股份公司 | 新的杀虫毒素 |
| AR035799A1 (es) * | 2001-03-30 | 2004-07-14 | Syngenta Participations Ag | Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos. |
| CN100497378C (zh) * | 2002-03-22 | 2009-06-10 | 拜尔生物科学公司 | 新的苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白质 |
| PL1732379T3 (pl) | 2004-04-09 | 2014-04-30 | Monsanto Technology Llc | Kompozycje i sposoby do zwalczania inwazji szkodników u roślin |
| CA2569767C (en) | 2004-06-09 | 2011-07-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plastid transit peptides |
| EP1871788B1 (en) | 2005-04-01 | 2009-09-16 | Athenix Corporation | Axmi-027 a family of delta-endotoxin genes and methods for their use |
| AP2519A (en) * | 2005-08-31 | 2012-11-29 | Monsanto Technology Llc | Nucleotide sequences encoding insecticidal proteins |
| US7510878B2 (en) | 2006-07-21 | 2009-03-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| EP2044105A2 (en) | 2006-07-21 | 2009-04-08 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Bacillus thuringiensis toxin with anti-lepidopteran activity |
| US7858849B2 (en) | 2006-12-08 | 2010-12-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis crystal polypeptides, polynucleotides, and compositions thereof |
| CN105112438A (zh) | 2007-03-09 | 2015-12-02 | 孟山都技术公司 | 使用壮观霉素选择的植物转化方法 |
| UA96187C2 (ru) * | 2007-03-28 | 2011-10-10 | Сингента Партисипейшнс Аг | Гибридные инсектицидные белки, которые имеют активность против западного кукурузного корневого жука или европейского кукурузного мотылька |
| US8609936B2 (en) * | 2007-04-27 | 2013-12-17 | Monsanto Technology Llc | Hemipteran-and coleopteran active toxin proteins from Bacillus thuringiensis |
| US7947869B2 (en) | 2007-05-08 | 2011-05-24 | Monsanto Technology Llc | Methods for inducing cotton embryogenic callus |
| US7772465B2 (en) | 2007-06-26 | 2010-08-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| BRPI0815980A2 (pt) | 2007-08-31 | 2015-06-16 | Monsanto Technology Llc | Métodos e aparelhos para isolar substancialmente tecidos de planta |
| US8283524B2 (en) | 2008-05-15 | 2012-10-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US8129594B2 (en) * | 2008-06-11 | 2012-03-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| BRPI0915049A2 (pt) | 2008-06-11 | 2013-09-17 | Pioneer Hi Bred Int | màleculas de Ácido nucleico isolada, construÇço de dna, cÉlula hospedeira, planta transgÊnica, semente transformada, polipeptÍdeo isolado com atividade pesticida, composiÇço e mÉtodos para controlar uma populaÇço de praga de insetos, para exterminar uma praga de insetos, para produzir um polipeptÍdeo com atividade esticida e para proteger uma planta de uma praga. |
| EA020327B1 (ru) | 2008-06-25 | 2014-10-30 | Атеникс Корпорейшн | Гены токсинов и способы их применения |
| CA3183317A1 (en) | 2008-07-02 | 2010-01-07 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Axmi-115, axmi-113, axmi-005, axmi-163 and axmi-184: insecticidal proteins and methods for their use |
| US8445749B2 (en) | 2008-09-19 | 2013-05-21 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US20100077507A1 (en) | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel Bacillus Thuringiensis Gene with Lepidopteran Activity |
| AR074871A1 (es) | 2008-12-22 | 2011-02-16 | Athenix Corp | Genes pesticidas de brevibacillus y metodos para su uso |
| WO2010075498A2 (en) | 2008-12-23 | 2010-07-01 | Athenix Corporation | Axmi-150 delta-endotoxin gene and methods for its use |
| BRPI0924154A2 (pt) | 2009-01-23 | 2015-08-25 | Pioneer Hi Bred Internacional Inc | Mólecula de ácido nucleico isolada, construção de dna, célula hospedeira, planta transgênica, semente transformada, polipetídeo isolado com atividade pesticida, composição e métodos para controlar uma população de praga de insetos, para exterminar uma praga de insetos, para produzir um polipeptídeo com atividade pesticida e para proteger uma planta de uma praga. |
| US8299217B2 (en) | 2009-02-05 | 2012-10-30 | Athenix Corp. | Variant AXMI-R1 delta endotoxin genes and methods for their use |
| CA3081727A1 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Pesticidal proteins and methods for their use |
| AR075818A1 (es) | 2009-03-11 | 2011-04-27 | Athenix Corp | Axmi-001, axmi- 002, axmi-030 y axmi -035 y axmi -045: genes de toxina y metodos para su uso |
| ES2532145T3 (es) | 2009-04-17 | 2015-03-24 | Dow Agrosciences Llc | Toxinas Cry insecticidas DIG-3 |
| CN103002744A (zh) | 2009-06-16 | 2013-03-27 | 陶氏益农公司 | Dig-11杀虫cry毒素 |
| NZ596660A (en) | 2009-06-16 | 2013-10-25 | Dow Agrosciences Llc | Dig-5 insecticidal cry toxins |
| NZ596658A (en) | 2009-06-16 | 2013-12-20 | Dow Agrosciences Llc | Dig-10 insecticidal cry toxins |
| EA035563B1 (ru) | 2009-07-31 | 2020-07-08 | Басф Агрикалчерал Солюшнс Сид Юс Ллк | Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с пестицидной активностью против чешуекрылых, жесткокрылых или нематодных вредителей, ее получение и применение |
| WO2011041256A2 (en) * | 2009-10-02 | 2011-04-07 | Syngenta Participations Ag | Insecticidal proteins |
| BR112012011222A2 (pt) | 2009-11-12 | 2015-09-15 | Pioneer Hi Bred Int | molécula de ácido nucleico isolada, contruto de dna, célula hospedeira, planta transgênica, semente transformada, polipeptídeo isolado com atividade pesticida, composição e métodos para controlar uma população de praga de lepidópteros, para matar uma praga de lepidóptero e para proteger uma planta contra uma praga |
| US8586832B2 (en) | 2009-12-21 | 2013-11-19 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with Lepidopteran activity |
| MX2012009634A (es) | 2010-02-18 | 2012-09-28 | Athenix Corp | Genes delta-endotoxinicos axmi218, axmi219, axmi220, axmi226, axmi227, axmi228, axmi229, axmi230, y axmi231 y metodos para sus uso. |
| EP2937419B1 (en) | 2010-02-18 | 2017-08-16 | Athenix Corp. | Axmi221z, axmi222z, axmi223z, axmi224z, and axmi225z delta-endotoxin genes and methods for their use |
| CN103154247A (zh) | 2010-08-19 | 2013-06-12 | 先锋国际良种公司 | 对鳞翅目昆虫具有活性的新苏云金杆菌基因 |
| MX2013007532A (es) | 2010-12-28 | 2013-09-16 | Pioneer Hi Bred Int | Nuevo gen de bacillus thuringiensis con actividad contra el orden lepidoptera. |
| CN103328637B (zh) | 2011-01-24 | 2016-01-27 | 先锋国际良种公司 | 具有抗鳞翅目昆虫活性的新型苏云金芽孢杆菌基因 |
| BR112013020382A2 (pt) * | 2011-02-11 | 2016-10-25 | Monsanto Technology Llc | ácidos nucleicos e proteínas pesticidas e usos dos mesmos |
| MX2013009092A (es) | 2011-02-11 | 2013-10-17 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas sinteticas activas contra el gusano de la raiz del maiz. |
| US8878007B2 (en) | 2011-03-10 | 2014-11-04 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| WO2012135436A1 (en) | 2011-03-30 | 2012-10-04 | Athenix Corp. | Axmi238 toxin gene and methods for its use |
| GB201105418D0 (en) | 2011-03-31 | 2011-05-18 | Univ Durham | Pesticide |
| CN111197051B (zh) | 2011-04-07 | 2023-10-20 | 孟山都技术公司 | 具有对抗半翅目和/或鳞翅目昆虫的活性的昆虫抑制毒素家族 |
| BR112014001978B8 (pt) | 2011-07-28 | 2022-07-05 | Athenix Corp | Molécula de ácido nucleico recombinante, célula hospedeira, polipeptídeo, composição, métodos para controle, para proteção e para exterminação de uma população de pragas de lepidópteros ou coleópteros, método para produção de um polipeptídeo com atividade pesticida e método para aumentar a produtividade de uma planta |
| US9528122B2 (en) | 2011-07-28 | 2016-12-27 | Athenix Corp. | Axmi270 toxin gene and methods of use |
| CA2844355C (en) | 2011-07-29 | 2022-05-10 | Athenix Corp. | Pesticidal gene with pesticidal activity against western corn rootworm and method for its use |
| EP2822962A1 (en) | 2012-03-08 | 2015-01-14 | Athenix Corp. | Axmi345 delta-endotoxin gene and methods for its use |
| CA3181424A1 (en) | 2012-03-09 | 2013-09-12 | Vestaron Corporation | Toxic peptide production, peptide expression in plants and combinations of cysteine rich peptides |
| EP2834266B1 (en) | 2012-04-06 | 2019-06-12 | Monsanto Technology LLC | Proteins toxic to hemipteran insect species |
| US9688730B2 (en) | 2012-07-02 | 2017-06-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| US9475847B2 (en) | 2012-07-26 | 2016-10-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| BR122020004891B1 (pt) | 2014-10-16 | 2024-01-30 | Monsanto Technology Llc | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
-
2015
- 2015-10-15 BR BR122020004891-3A patent/BR122020004891B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 EP EP15797725.7A patent/EP3207049B1/en active Active
- 2015-10-15 PE PE2021002064A patent/PE20220372A1/es unknown
- 2015-10-15 CN CN202011054128.8A patent/CN112175093B/zh active Active
- 2015-10-15 CA CA3151123A patent/CA3151123A1/en active Pending
- 2015-10-15 CR CR20170198A patent/CR20170198A/es unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037525A patent/KR102208985B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 PE PE2021002063A patent/PE20220374A1/es unknown
- 2015-10-15 UA UAA201909675A patent/UA123481C2/uk unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000051A patent/CU24541B1/es unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000052A patent/CU24570B1/es unknown
- 2015-10-15 UA UAA201909674A patent/UA123480C2/uk unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037523A patent/KR102208980B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 EA EA201892761A patent/EA201892761A1/ru unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000054A patent/CU24551B1/es unknown
- 2015-10-15 UA UAA201909676A patent/UA123482C2/uk unknown
- 2015-10-15 EP EP20171024.1A patent/EP3715362A1/en active Pending
- 2015-10-15 SG SG11201702749RA patent/SG11201702749RA/en unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000053A patent/CU24571B1/es unknown
- 2015-10-15 US US14/884,469 patent/US10233217B2/en active Active
- 2015-10-15 SG SG10201913859XA patent/SG10201913859XA/en unknown
- 2015-10-15 EA EA201892760A patent/EA201892760A1/ru unknown
- 2015-10-15 CA CA3151125A patent/CA3151125A1/en active Pending
- 2015-10-15 ES ES15797725T patent/ES2864657T3/es active Active
- 2015-10-15 CU CU2017000049A patent/CU24456B1/es unknown
- 2015-10-15 KR KR1020177013031A patent/KR102127553B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 CA CA2964776A patent/CA2964776A1/en active Pending
- 2015-10-15 EA EA201892762A patent/EA201892762A1/ru unknown
- 2015-10-15 MY MYPI2017701293A patent/MY181627A/en unknown
- 2015-10-15 MX MX2017004919A patent/MX2017004919A/es unknown
- 2015-10-15 CN CN201580055840.0A patent/CN107074974B/zh active Active
- 2015-10-15 PE PE2017000604A patent/PE20170895A1/es unknown
- 2015-10-15 NZ NZ768153A patent/NZ768153A/en unknown
- 2015-10-15 EP EP20171028.2A patent/EP3715364A1/en active Pending
- 2015-10-15 PE PE2021002061A patent/PE20220375A1/es unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037524A patent/KR102208984B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 JP JP2017520352A patent/JP6626102B2/ja active Active
- 2015-10-15 BR BR122020004897-2A patent/BR122020004897B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 BR BR112017007794-9A patent/BR112017007794B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 CN CN202011069672.XA patent/CN112142858B/zh active Active
- 2015-10-15 NZ NZ768151A patent/NZ768151A/en unknown
- 2015-10-15 WO PCT/US2015/055800 patent/WO2016061391A2/en active Application Filing
- 2015-10-15 SG SG10201913879PA patent/SG10201913879PA/en unknown
- 2015-10-15 CN CN202011068643.1A patent/CN112142857B/zh active Active
- 2015-10-15 SG SG10201913870RA patent/SG10201913870RA/en unknown
- 2015-10-15 BR BR122020004875-1A patent/BR122020004875B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 EP EP20171026.6A patent/EP3715363A1/en active Pending
- 2015-10-15 NZ NZ730747A patent/NZ730747A/en unknown
- 2015-10-15 AU AU2015332384A patent/AU2015332384B2/en active Active
- 2015-10-15 PE PE2021002059A patent/PE20220940A1/es unknown
- 2015-10-15 EA EA201892763A patent/EA201892763A1/ru unknown
- 2015-10-15 CN CN202011055790.5A patent/CN112175094B/zh active Active
- 2015-10-15 EP EP20171022.5A patent/EP3715361A1/en active Pending
- 2015-10-15 CR CR20210268A patent/CR20210268A/es unknown
- 2015-10-15 CR CR20210269A patent/CR20210269A/es unknown
- 2015-10-15 EA EA201790843A patent/EA034918B1/ru unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037522A patent/KR102208978B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 UA UAA201704656A patent/UA121662C2/uk unknown
- 2015-10-15 SG SG10201913849RA patent/SG10201913849RA/en unknown
- 2015-10-16 AR ARP150103361A patent/AR103129A1/es unknown
- 2015-10-16 UY UY0001036360A patent/UY36360A/es active IP Right Grant
-
2017
- 2017-03-29 ZA ZA2017/02191A patent/ZA201702191B/en unknown
- 2017-04-05 IL IL251570A patent/IL251570B/en active IP Right Grant
- 2017-04-07 NI NI201700044A patent/NI201700044A/es unknown
- 2017-04-07 SV SV2017005422A patent/SV2017005422A/es unknown
- 2017-04-11 CL CL2017000895A patent/CL2017000895A1/es unknown
- 2017-04-11 PH PH12017500697A patent/PH12017500697A1/en unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009318A patent/MX2021009318A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009319A patent/MX2021009319A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009320A patent/MX2021009320A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009317A patent/MX2021009317A/es unknown
- 2017-05-12 CO CONC2017/0004807A patent/CO2017004807A2/es unknown
- 2017-05-12 EC ECIEPI201729551A patent/ECSP17029551A/es unknown
- 2017-12-20 US US15/849,218 patent/US10611806B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/848,852 patent/US10494409B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/848,837 patent/US10494408B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/849,012 patent/US10669317B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-10 ZA ZA2019/00217A patent/ZA201900217B/en unknown
- 2019-01-14 CL CL2019000110A patent/CL2019000110A1/es unknown
- 2019-01-14 CL CL2019000109A patent/CL2019000109A1/es unknown
- 2019-01-15 CL CL2019000112A patent/CL2019000112A1/es unknown
- 2019-04-30 AU AU2019203014A patent/AU2019203014B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203021A patent/AU2019203021B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203025A patent/AU2019203025B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203015A patent/AU2019203015B2/en active Active
- 2019-05-15 CL CL2019001328A patent/CL2019001328A1/es unknown
-
2020
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01771A patent/ZA202001771B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01768A patent/ZA202001768B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01769A patent/ZA202001769B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01770A patent/ZA202001770B/en unknown
- 2020-04-05 AU AU2020202394A patent/AU2020202394C1/en active Active
- 2020-05-08 AR ARP200101324A patent/AR118892A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101326A patent/AR118894A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101325A patent/AR118893A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101322A patent/AR118890A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101323A patent/AR118891A2/es unknown
- 2020-05-14 US US16/874,186 patent/US11267849B2/en active Active
-
2021
- 2021-03-04 PH PH12021500019A patent/PH12021500019A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500022A patent/PH12021500022A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500020A patent/PH12021500020A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500021A patent/PH12021500021A1/en unknown
-
2022
- 2022-02-14 US US17/671,011 patent/US20220306703A1/en active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024581A2 (en) * | 1997-11-12 | 1999-05-20 | Mycogen Corporation | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins |
| WO2001014562A1 (en) * | 1999-08-19 | 2001-03-01 | Syngenta Participations Ag | Hybrid insecticidal toxins and nucleic acid sequences coding therefor |
| WO2001019859A2 (en) * | 1999-09-15 | 2001-03-22 | Monsanto Technology Llc | LEPIDOPTERAN-ACTIVE BACILLUS THURINGIENSIS δ-ENDOTOXIN COMPOSITIONS AND METHODS OF USE |
| WO2002014517A1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Monsanto Technology Llc | BROAD-SPECTRUM δ-ENDOTOXINS |
| WO2004020636A1 (en) * | 2002-08-29 | 2004-03-11 | Monsanto Technology, Llc | Nucleotide sequences encoding cry1bb proteins for enhanced expression in plants |
| WO2011075588A1 (en) * | 2009-12-16 | 2011-06-23 | Dow Agrosciences Llc | COMBINED USE OF CRY1Ca AND CRY1Fa PROTEINS FOR INSECT RESISTANCE MANAGEMENT |
| WO2014055881A1 (en) * | 2012-10-05 | 2014-04-10 | Dow Agrosciences Llc | Use of cry1ea in combinations for management of resistant fall armyworm insects |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| BRAVO, A. ; GILL, S.S. ; SOBERON, M.: "Mode of action of Bacillus thuringiensis Cry and Cyt toxins and their potential for insect control", TOXICON, ELMSFORD, NY, US, vol. 49, no. 4, 15 March 2007 (2007-03-15), US, pages 423 - 435, XP026863362, ISSN: 0041-0101 * |
| D.N. BAIG, D.A. BUKHARI, A.R. SHAKOORI: "cry Genes profiling and the toxicity of isolates of Bacillus thuringiensis from soil samples against American bollworm, Helicoverpa armigera", JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY., WILEY-BLACKWELL PUBLISHING LTD., GB, vol. 109, no. 6, 12 December 2010 (2010-12-12), GB, pages 1967 - 1978, XP055243000, ISSN: 1364-5072, DOI: 10.1111/j.1365-2672.2010.04826.x * |
| DATABASE UniProt [online] "SubName: Full=Cry1Be2 {ECO:0000313|EMBL:ACV96720.1};", XP002753212, retrieved from EBI * |
| DE MAAGD RUUD A ET AL: "Bacillus thuringiensis delta-endotoxin Cry1C domain III can function as a specificity determinant for Spodoptera exigua in different, but not all, Cry1-Cry1C hybrids", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 66, no. 4, 1 April 2000 (2000-04-01), US, pages 1559 - 1563, XP002480230, ISSN: 0099-2240, DOI: 10.1128/AEM.66.4.1559-1563.2000 * |
| LILIANA PARDO-L�PEZ, MARIO SOBER�N, ALEJANDRA BRAVO: "Bacillus thuringiensis insecticidal three-domain Cry toxins: mode of action, insect resistance and consequences for crop protection", FEMS MICROBIOLOGY REVIEWS, vol. 37, no. 1, 11 January 2013 (2013-01-11), pages 3 - 22, XP055174115, ISSN: 01686445, DOI: 10.1111/j.1574-6976.2012.00341.x * |
| WAGNER LUCENA, PATR�CIA PELEGRINI, DIOGO MARTINS-DE-SA, FERNANDO FONSECA, JOSE GOMES, LEONARDO DE MACEDO, MARIA DA SILVA, RAQUEL S: "Molecular Approaches to Improve the Insecticidal Activity of Bacillus thuringiensis Cry Toxins", TOXINS, vol. 6, no. 8, pages 2393 - 2423, XP055238443, DOI: 10.3390/toxins6082393 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11267849B2 (en) | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests | |
| US11987603B2 (en) | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests | |
| US11254950B2 (en) | Insecticidal proteins toxic or inhibitory to hemtpteran pests | |
| JP2017533700A5 (ru) | ||
| US20210246464A1 (en) | Novel Insect Inhibitory Proteins | |
| RU2765310C2 (ru) | Новые белки, проявляющие ингибирующую активность по отношению к насекомым | |
| EA040497B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| EA040152B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| EA040101B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| EA040097B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |