[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

EA022699B1 - НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ - Google Patents

НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ Download PDF

Info

Publication number
EA022699B1
EA022699B1 EA201171479A EA201171479A EA022699B1 EA 022699 B1 EA022699 B1 EA 022699B1 EA 201171479 A EA201171479 A EA 201171479A EA 201171479 A EA201171479 A EA 201171479A EA 022699 B1 EA022699 B1 EA 022699B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
synthetic nanocarrier
synthetic
hours
weight
exposed
Prior art date
Application number
EA201171479A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201171479A1 (ru
Inventor
Чарльз Зепп
Юнь Гао
Марк Дж. Киган
Сэм Болдуин
Фынь-ни Фу
Ллойд Джонстон
Грэйсон Б. Липфорд
Original Assignee
Селекта Байосайенсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селекта Байосайенсиз, Инк. filed Critical Селекта Байосайенсиз, Инк.
Publication of EA201171479A1 publication Critical patent/EA201171479A1/ru
Publication of EA022699B1 publication Critical patent/EA022699B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/525—Isoalloxazines, e.g. riboflavins, vitamin B2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0013—Therapeutic immunisation against small organic molecules, e.g. cocaine, nicotine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/34—Tobacco-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C08G63/08—Lactones or lactides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/91—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G63/912—Polymers modified by chemical after-treatment derived from hydroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G64/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbonic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G64/42—Chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55544—Bacterial toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2367/00—Characterised by the use of polyesters obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain; Derivatives of such polymers
    • C08J2367/04—Polyesters derived from hydroxy carboxylic acids, e.g. lactones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)

Abstract

Изобретение относится к композициям и соответствующим им способам на основе синтетических наноносителей, которые целенаправленно воздействуют на сайты действия клеток, таких как антиген-презентирующие клетки (АРС), и включает иммуномодулирующие средства, которые диссоциируют от синтетических наноносителей рН-зависимым способом. Также раскрыты композиции и способы, относящиеся к синтетическим наноносителям, которые инкапсулируют лабильные иммуномодулирующие средства, которые отделяются от синтетических наноносителей рН-зависимым способом.

Description

Данное изобретение касается композиций и относящихся к ним способов из синтетических наноносителей, которые целенаправленно воздействуют на сайты действия клеток, таких как антигенпрезентирующие клетки (АРС), и включает иммуномодулирующие средства, которые диссоциируют от синтетических наноносителей рН-зависимым способом. Данное изобретение дополнительно относится к защите лабильных иммуномодулирующих средств посредством их инкапсуляции в синтетических наноносителях.
Предпосылки
Иммуномодулирующие средства применяют для получения иммунных ответов у субъектов. Стимуляция иммунной системы, которая включает стимуляцию любого из врожденного иммунитета и приобретенного иммунитета, или и первого, и второго, является сложным явлением, которое может привести либо к защитным, либо к неблагоприятным физиологическим последствиям для хозяина. В последние годы возрос интерес к механизмам, лежащим в основе врожденного иммунитета, который, как полагают, инициирует и поддерживает приобретенный иммунитет. Данный интерес отчасти вызван недавним открытием семейства высококонсервативных белков образраспознающих рецепторов, известных как То11подобные рецепторы (ТЬК), которые, как полагают, вовлечены во врожденный иммунитет в качестве рецепторов для патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (РАМР).
Таким образом, композиции и способы, пригодные для модулирования врожденного иммунитета, представляют огромный интерес, поскольку они могут касаться терапевтических подходов для состояний, включающих воспаление, аллергию, астму, инфекцию, рак, иммунодефицит и т.д.
Время от времени предпочтительно связывать такие средства с носителями для доставки. Однако информация относительно того, как возможно контролировать высвобождение таких средств, в особенности лабильных иммуномодулирующих средств, из носителей для доставки и какой тип высвобождения предусматривает оптимальные эффекты ίη νίνο, ограничена.
Существует необходимость в новых носителях для доставки иммуномодулирующих средств, которые делают возможным оптимальное высвобождение, а также к относящимся к ним способам.
Краткое описание данного изобретения
Аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: ΙΑ (высв.) (4,5)24%/ΙΑ (высв.) (7,4)24%>1/2, где ΙΑ (высв.) (4,5)24% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей, и где ΙΑ (высв.) (7,4)% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 7,4 в течение 24 ч, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 7,4 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 7,4 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления иммуномодулирующее средство инкапсулировано в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, такое как имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-СО-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин, имидазопиридиновый амин, 6,7конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод.
В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида не включает стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций. В некоторых вариантах осуществ- 1 022699 ления иммуномодулирующим средством является адъювант. В определенных вариантах осуществления адъювант включает агонист То11-подобного рецептора (ТЬК), такой как агонист ТЬК 3, агонист ТЬК 7, агонист ТЬК 8, агонист ТЬК 7/8 или агонист ТЬК 9.
В некоторых вариантах осуществления агонистом ТЬК является иммуностимулирующая нуклеиновая кислота, такая как иммуностимулирующая ДНК или иммуностимулирующая РНК. В определенных вариантах осуществления иммуностимулирующая нуклеиновая кислота представляет собой СрОсодержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, которая включает одну или несколько стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления адъювант включает универсальный Т-клеточный антиген.
В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель дополнительно включает Вклеточный антиген и/или Т-клеточный антиген. В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители дополнительно включают свойство нацеливания на антигенпрезентирующие клетки (АРС). В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько биоразлагаемых полимеров. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает поли(лактид), поли(гликолид) или сополимер(лактида и гликолида).
В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В определенных вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает амидную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает сложноэфирную связь.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы.
Аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: ΙΑ (4,5)24%/ΙΑ (4,5)6>%1,2, где ΙΑ (4,5)24% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей, и где ΙΑ (4,5)6 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 6 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, инкапсулированное в синтетическом наноносителе. В определенных вариантах осуществления лабильное иммуномодулирующее средство включает имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-СО-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин, имидазопиридиновый амин, 6,7-конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида не включает стабилизирующие химические модификации, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций.
Дальнейшие аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению: 6<ΙΑ (4, 5)24%/ΙΑ (4,5)6>1,2, где ΙΑ (4,5)24% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей, и где ΙΑ (4,5)6 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 6 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, инкапсулированное в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления лабильное иммуномодулирующее средство включает имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-СО-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид вклю- 2 022699 чает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин, имидазопиридиновый амин, 6,7-конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод.
В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида не включает стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В некоторых вариантах осуществления остов олигонуклеотида включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций. В определенных вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство инкапсулировано в синтетическом наноносителе.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующим средством является адъювант. В определенных вариантах осуществления адъювант включает агонист То11-подобного рецептора (ТЬК), такой как агонист ТЬК. 3, агонист ТЬК 7, агонист ТЬК 8, агонист ТЬК 7/8 или агонист ТЬК 9. В определенных вариантах осуществления агонистом ТЬК является иммуностимулирующая нуклеиновая кислота, такая как иммуностимулирующая ДНК или иммуностимулирующая РНК.
В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующая нуклеиновая кислота представляет собой СрС-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, которая включает одну или несколько стабилизирующих химических модификаций, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В определенных вариантах осуществления адъювант включает универсальный Тклеточный антиген. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель дополнительно включает В-клеточный антиген и/или Т-клеточный антиген.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители дополнительно включают свойство нацеливания на антигенпрезентирующие клетки (АРС). В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько биоразлагаемых полимеров. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает поли(лактид), поли(гликолид) или сополимер(лактида и гликолида).
В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Д, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В определенных вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает амидную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает сложноэфирную связь.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы. В определенных вариантах осуществления композиции, связанные с данным изобретением, дополнительно включают фармацевтически приемлемый эксципиент.
Дополнительные аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим вакцину, которая включает любую из композиций, связанных с данным изобретением.
Дополнительные аспекты данного изобретения включают способы, которые включают введение любой из композиций, связанных с данным изобретением, субъекту. В некоторых вариантах осуществления композиции находятся в количестве, эффективном для индукции или усиления иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления у субъекта - рак, инфекционное заболевание, неаутоимунное нарушение обмена веществ, дегенеративное заболевание или привыкание.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 демонстрирует высвобождение резиквимода (К848) из составов синтетического наноносителя при рН 7,4, 37°С;
фиг. 2 демонстрирует высвобождение К848 из составов синтетического наноносителя при рН 4,5,
37°С;
фиг. 3 демонстрирует высвобождение К848 из составов синтетического наноносителя при рН 7,4 и рН 4,5 за 24 ч;
фиг. 4 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями с СрСсодержащей иммуностимулирующей нуклеиновой кислотой (группы 2 и 3) по сравнению с уровнем индукции антител синтетическими наноносителями без СрС-содержащей иммуностимулирующей нуклеиновой кислоты (группа 1);
фиг. 5 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые высвобождают сложный фосфодиэфир, СрС-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту без
- 3 022699 остатка тиокислоты или СрО-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту с остатком тиокислоты;
фиг. 6 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые высвобождают К.848 с различными скоростями;
фиг. 7 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые транспортируют удерживаемый фосфодиэфирный (РО) СрО, обозначенных как ЫС-№с/РО-СрО;
фиг. 8 демонстрирует высвобождение удерживаемого РО-СрО из наноносителей при рН 4,5 по сравнению с рН 7,5. Данные демонстрируют, что лабильное иммуномодулирующее средство, такое как РО-СрО, защищено инкапсулированием в синтетическом наноносителе. Такое лабильное средство может высвобождаться в требуемом месте действия с рН 4,5 (например, в эндосоме/лизосоме), при этом низкие уровни высвобождения наблюдаются при рН 7,4 (например, обычно рН снаружи эндосомы/лизосомы).
Подробное описание
Прежде чем описывать данное изобретение в деталях, следует понять, что данное изобретение не ограничивается отдельно проиллюстрированными материалами или технологическими параметрами, которые, конечно, могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, использованная в настоящем документе, применена только с целью описания отдельных вариантов осуществления изобретения и не предназначена для ограничения применения альтернативной терминологии для описания данного изобретения.
Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые в данном документе выше или ниже, включены в данный документ в качестве ссылки во всей их полноте для любых целей.
Как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки с множественным числом, если содержание четко не диктует иное.
Например, ссылка на полимер включает смесь из двух или более таких молекул, ссылка на растворитель включает смесь из двух или более таких растворителей, ссылка на адгезив включает смеси из двух или более таких материалов и т.п.
Введение.
Данное изобретение является полезным в том, что оно обеспечивает способ высвобождения иммуномодулирующих средств более напрямую в местах действия представляющих интерес клеток, в частности антиген-презентирующих клеток, что в результате приведет к благоприятному иммунному ответу и/или уменьшит нецелевые эффекты и токсичность, поскольку большая часть высвобождения иммуномодулирующих средств будет на месте действия в представляющих интерес клетках. Это представляет отдельный интерес для доставки адъювантов. Свойства контролируемого высвобождения впервые предлагают контролируемый способ доставки иммуномодулирующих средств к представляющим интерес иммуноцитам, включая возможность высвобождения иммуномодулирующих средств на протяжении продолжительного периода. Все это ведет к очень настраиваемой системе с получением оптимального высвобождения иммуномодулирующего средства так, чтобы оно высвобождалось преимущественно на месте действия требуемых клеток.
Авторы дополнительно узнали, что связывание лабильных иммуномодулирующих средств в синтетических наноносителях по данному изобретению посредством инкапсулирования лабильных иммуномодулирующих средств в синтетических наноносителях по данному изобретению и обеспечение контролируемого способа доставки лабильных иммуномодулирующих средств к представляющим интерес иммуноцитам, предпочтительно на протяжении продолжительного периода, даст в результате целенаправленную доставку лабильных иммуномодулирующих средств, минимизируя при этом нецелевые эффекты иммуномодулирующих средств, особенно нецелевые эффекты, связанные с систематическим введением иммуномодулирующих средств. Кроме того, данный подход может улучшить результативность лабильных иммуномодулирующих средств, имеющих короткий период полувыведения, которые в ином случае могут не иметь требуемый уровень фармакологической активности.
В одном варианте осуществления данное изобретение касается определенных олигонуклеотидов. В последнее время был ряд сообщений, описывающих иммуностимулирующий эффект конкретных типов молекул нуклеиновых кислот, включая СрО-нуклеиновые кислоты, с высоким содержанием Ои оцРНК (одноцепочечные РНК) и двуцепочечные РНК. Следует отметить, что недавно сообщалось о том, что То11-подобный рецептор 9 (ТЬК9) узнает бактериальную ДНК и олигонуклеотиды, содержащие СрО мотив, где цитозин неметилирован. Нешш1 Н. с1 а1. (2000) ЫаШге, 408:740-5; Ваиег 8. с1 а1. (2001) Ргос ЫаН Лсаб 8с1 И8Л, 98:9237-42. Эффекты СрО-содержащих олигонуклеотидов на иммунную модуляцию подробно были описаны в патентах США, таких как патенты США № 6194388, 6207646, 6239116 и 6218371, и в опубликованных международных патентных заявках, таких как АО98/37919. АО98/40100. АО98/52581 и АО99/56755. Неметилированной может быть вся иммуностимулирующая нуклеиновая кислота или неметилированными могут быть части, но, по меньшей мере, должен быть неметилирован С из 5'-СО-3'.
Естественные ДНК-олигонуклеотиды содержат фосфодиэфирные связи, которые быстро расщепляются нуклеазами, обнаруживаемыми во внеклеточной среде; Уи, Ό. е1 а1., Ро1еШ СрО оПдопис1ео0бе8 сойашшд рко8ркоб1е81ег Ппкадез: ίη νίΙΐΌ апб ίη У1уо пптипозОтикЦогу ргорегйез, Вюскет Вюркуз Кее
- 4 022699
Соттип, 2002, 297(1): ρ. 83-90 (Уи е! а1.); Неед, К., е! а1., 81тис!ита1 гесцшетеШк Гог ир!аке апй гесодтΐίοη οί СрО ойдопис1еоййе8, 1п! 1. Мей М1сгоЫо1, 2008, 298(1-2): р. 33-8 (Неед е! а1.). Такие естественные олигонуклеотиды могут считаться лабильными иммуномодулирующими средствами.
Соответственно способы химической стабилизации связей путем замещения фосфодиэфирной связывающей группы фосфоротиоатной группой подробно освещены в литературе; см. патент США № 6811975 Фосфоротиоатные олигонуклеотиды с модифицированными межнуклеозидными связями.
Фосфоротиоатные СрО-содержащие олигонуклеотиды систематично вводили в качестве вакцинных адъювантов; Уи е! а1. Однако систематичное введение стабилизированных СрО-олигонуклеотидов может привести к нецелевым иммуностимулирующим эффектам, таким как общее воспаление, неспецифическая активация лимфоцитов и гриппоподобные симптомы; Наак, Т., е! а1., 8едиепсе шйерепйеп! ш!егГегопа1рйа шйисОоп Ьу тийипеп/ей рйокрйоФекЮг ΌΝΑ йерепйк оп крайа1 теди1айоп оГ То11-Ике гесер!ог-9 асйуайоп ш р1актасу!о1Й йепйгЩс се11к, 1ттипо1оду, 2009, 126(2): р. 290-8 (Наак е! а1.). Соответственно такие олигонуклеотиды могут быть эффективно включены в практическое осуществление настоящего изобретения, как это описано более детально ниже.
Авторы неожиданно и к удивлению обнаружили, что проблемы и ограничения, отмеченные выше, могут быть преодолены применением изобретения, раскрытого в данном документе. В частности, авторы неожиданно обнаружили, что возможно обеспечение наряду со связанными с ними способами композиции, которая включает синтетические наноносители, включающие иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем; где иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
1А(высв.)(4,5),%/ΙΑ (высв.)(7,4)ъ%£1,2;
где ΙΑ (высв.) (4,5)!% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ш уйто водной среды при рН 4,5 в течение ! часов, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ш уйто водной среды при рН 4,5 в течение ! часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель ш уйто водной среды при рН 4,5 в течение ! часов, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее образцов синтетических наноносителей; и где ΙΑ (высв.) (7,4)!% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ш уйто водной среды при рН 7,4 в течение ! часов, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ш уйто водной среды при рН 7,4 в течение ! часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель ш уйто водной среды при рН 7,4 в течение ! часов, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей; и где ! равно 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч.
- 5 022699
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, отделяется от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
1А(высв.)(4,5)Ъ%/1А(высв,) (7,4)Ъ%>1,3,
ΙΑ(выев,) (4,5)Ь%/1А(высв.)(7,4)Ъ%>1, 4,
ΙΑ (ВЫСВ .) (4,5) В%/1А(высв .) (7,4) £%>!., 5,
1А(ВЫСВ.) (4, 5)Ь%/1А(высв.)(7, 4)Т%>1,6,
ΙΑ(выев.) (4,5)С%/1А(высв.) (7,4)Ъ%>1,7,
1А(высв, ) (4,5) Ь%/1А (выев .)(7, 4) -Ь%>1, 8,
ΙΑ (выев . ) (4,5) Ь%/1А(высв .) (7,4)(;%>1,9,
1А(высв.)(4,5)Ь%/1А(выев.)(7,4)Ъ%>2,
1А(ВЫСВ.) (4,5)Ь%/1А(ВЫСВ.)(7,4)ΐ%>2, 2,
ΙΑ(выев .)(4,5)ΐ%/ΙΑ(выев.) (7,4)Ъ%>2,5,
ΙΑ(выев.)(4,5)Ъ%/1А(высв.)(7,4)£%>2,7,
1А(высв.) (4,5)Ь%/1А(высв.) (7,4)Ъ%>3,
1А(ВЫСВ.)(4,5)Ъ%/1А(выев.)(7,4)ΐ%>3,5,
1А(высв.)(4, 5)С%/1А(высв.) (7,4)ΐ%>4,
ΙΑ (выев. )(4, 5) Г%/1А(высв. ) (7,4) Г%>4, 5,
1А(высв.)(4,5)Ъ%/1А(ВЫСВ.)(7, 4)Ъ%>5,
IА(выев.) (4,5)Ъ%/1А(высв.)(7,4)ΐ%>5, 5,
ΙΑ(выев.)(4,5)ΐ%/ΙΑ(выев.)(7,4)Ь%>6,
1А(высв.)(4,5)В%/1А(выев.)(7,4)ΐ%>6,5,
ΙΑ(выев.)(4,5)С%/ΙΑ(высв.)(7,4)Ъ%>7,
1А(высв.)(4,5)В%/1А(высв.)(7,4)Ъ%>7,5,
1А(высв.)(4,5)ΐ%/1А(выев.)(7,4)ь%>8,
1А(высв.)(4,5)£%/1А(высв.)(7,4)Ь%>8,5,
1А(высв.)(4,5)Ъ%/1А(высв.)(7,4)Ь%>9,
1А(высв .)(4, 5) 1;%/1А(высв.) (7, 4) ΐ%>9,5,
ΙΑ(выев.)(4,5)Γ%/ΙΑ(выев.)(7,4)ΐ%>10,
ΙΑ(выев.)(4,5)ύ%/ΙΑ(выев.) (7,4)ύ%>10,5 или
ΙΑ(выев.)(4,5)Ъ%/ΙΑ(выев.)(7,4) где где ΙΑ (высв.) (4,5)1%, ΙΑ (высв.) (7,4)1% и I являются такими, как определено выше.
В других вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
25ΙΑ(высв.) (4,5)ϊ%/ΙΑ(высв.)(7,4)ь%>1, 2,
- 6 022699
2,5ίΙΑ(высв.) (4,5)С%/1А(выев .) (7,4)ь%> 1,2
3ίΙΑ(высв.)(4,5)с%/1А(высв.)(7,4)ь%£1,2,
3,5<1А(высв.) (4,5)1%/1А<высв.) (7,4)„%>1, 2,
4<1А(высв.)(4,5)Ь%/1А(ВЫСВ.)(7,4)е%>1,2,
4,5<1А(высв.) (4,5)ь%/1А(высв.)<7,4)ь%>1,2,
5^1А(высв.) (4,5)7%/1А(высв.)(7,4>е%>1,2,
6^1А(высв.)(4,5)е%/1А(выев.)(7,4)г%£1,2,
7<1А(высв.) (4,5)(%/1А(ВЫСВ.) (7,4>[%>1,2,
8ίΙΑ(выев .)(4,5)Ь%/1А(выев.) (7,4)Е%>1,2,
9^1А(высв.)(4,5)ь1А(выев.)(7,4)ь%^1,2,
10<1А(высв.)(4,5)Ь%/1А(ВЫОВ.)(7,4)е%£1,2,
10^1А(высв.)(4,5)4%/1А(выев.)(7,4)е%^2,
10^1А(выев.)(4,5)Ь%/1А(выев.)(7,4)ь%>2,5,
10^1А(высв.) (4,5) (Λ/ΙΑ(выев.) (7,4)е%>3,
10£1А(высв.) (4,5)(%/1А(высв.)(7,4)ь%>3, 5,
10Й1А(ВЫСВ.)(4,5)1%71А(ВЫСВ.)(7,4)е%>4,
10<1А(высв.>(4,5)е%/1А(высв.)(7,4)е%>4,5,
10<1А(высв.)(4,5)Ь%/1А(выев.)<7,4)ь%>5,
10ί1А(высв .)(4,5)с%/1А(высв.) (7,4)с%>6,
10ί1А(выев.)(4,5)„%/1А(ВЫСВ.)(7,4)ь%>7,
ΙΟίΙΑ(выев .)(4,5)г%/1А(высв .) (7,4)с%>8,
10ίΙΑ(ΒΗθΒ .) (4,5) „%/ΙΑ (высв .)(7,4)е%>9,
3ίΙΑ(ΒΗθΒ. )(4,5)С%/1А(высв. )(7,4)с%>2,
4ίΙΑ(ΒΗϋΒ. )(4,5>Е%/1А(высв. ) (7,4)^2:3,
5ίΙΑ(высв. ) (4, 5)1%/1А(высв. ) <7,4)ь%£4,
6ίΙΑ(ΒΗεΒ. )(4,5)ь%/1А(высв. ) (7,4)ь%25,
7ίΙΑ(высв. ) (4,5П%/1А(ВЫСВ. > (7,4)^6,
8ίΙΑ(высв. )(4,5)ь%/1А(выев. ) <7,4П%>7 ИЛИ
9ίΐΑ(ΒΗσΒ. )(4,5)ь%/1А(высв. ) (7,4)ь%>8,
где ΙΑ (высв.) (4.5),%. ΙΑ (высв.) (7.4),% и 1 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления 1 равно 24 ч.
Соответственно данное изобретение относится к композициям и способам, включающим синтетические наноносители, которые высвобождают иммуномодулирующие средства при значительно различающихся скоростях в нейтральном и кислом рН. При доставке иммуномодулирующих средств, для того, чтобы получить наиболее сильный эффект, желательно, чтобы большая часть иммуномодулирующего средства высвободилась внутри АРС, где они смогут оказывать требуемый эффект. При введении иммуномодулирующих средств в свободной форме, или при их высвобождении и синтетической наночастицы вне АРС, лишь небольшая часть иммуномодулирующего средства найдет путь к АРС, в то время как остаток распространится по телу, при этом иммунная стимуляция будет меньшей и может привести к вредным эффектам. Приведенные в данном документе синтетические наноносители по данному изобретению предпочтительно поглощаются АРС. После поглощения АРС синтетические наноносители считаются поглощенными посредством эндоцитоза в эндосомальный/лизосомальный компартмент, где рН становится более кислым по сравнению с нейтральным рН снаружи клеток. В этих условиях иммуномодулирующее средство проявляет рН-чувствительную диссоциацию от синтетического наноносителя (например, от связывающей иммуномодулирующее средство части) и высвобождается из синтетического наноносителя.
Иммуномодулирующее средство затем имеет возможность взаимодействовать с рецепторами, связанными с эндосомой/лизосомой, и стимулировать требуемый иммунный ответ. Свойство синтетических наноносителей по данному изобретению иметь более низкое высвобождение иммуномодулирующих средств при или около нейтрального рН или в вариантах осуществления при или около значения физио- 7 022699 логического рН (т.е. рН 7,4), но повышенное высвобождение при или около рН 4,5 является желаемым, поскольку оно нацеливает иммуномодулирующие средства на эндосомальный/лизосомальный компартмент АРС, на которые нацелены синтетические наноносители.
Иммуномодулирующие средства могут быть связаны с синтетическими наноносителями любым способом. В целом, связывание может быть результатом связи между иммуномодулирующим средством и синтетическим наноносителем. Данная связь может в результате дать иммуномодулирующее средство, которое прикреплено к поверхности синтетического наноносителя и/или содержится (инкапсулировано) в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления, однако, иммуномодулирующее средство инкапсулируется синтетическим наноносителем скорее вследствие структуры синтетического наноносителя, чем в связи с синтетическим наноносителем.
Если связывание происходит вследствие связи между иммуномодулирующим средством и синтетическим наноносителем, то связывание происходит через связывающую иммуномодулирующее средство часть. Связывающая иммуномодулирующее средство часть может быть любой частью, посредством которой иммуномодулирующее средство связывается с синтетическим наноносителем. Такие части включают ковалентные связи, такие как амидная связь или сложноэфирная связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или нековалентно) иммуномодулирующее средство с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать загруженный полимер, с которым электростатически связывается иммуномодулирующее средство (например, иммуностимулирующая нуклеиновая кислота). В качестве другого примера связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать полимер или его элементарное звено, с которым ковалентно связывается иммуномодулирующее средство.
В некоторых вариантах осуществления полимер включает сложный полиэфир, поликарбонат, полиамид или простой полиэфир. В других вариантах осуществления полимер или его элементарное звено включают поли(этиленгликоль) (РЕС), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блоксополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон или их элементарное звено. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы полимер был биоразлагаемым. Таким образом, в данных вариантах осуществления предпочтительно, что если полимер включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль) или его элементарное звено, то полимер включает блок-сополимер простого полиэфира и биоразлагаемого полимера с тем, чтобы полимер был биоразлагаемым. В других вариантах осуществления полимер сам по себе не включает простой полиэфир или его элементарное звено, такой как поли(этиленгликоль) или его элементарное звено. Связывающая иммуномодулирующее средство часть, которая приведена в данном документе, таким образом может включать один из вышеупомянутых полимеров или его элементарное звено (например, лактид или гликолид).
В некоторых вариантах осуществления для применения в составе синтетического наноносителя полимер из соединений или конъюгатов, приведенных в данном документе, является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С является биоразлагаемым или и то и другое. В других вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С, но растворимым при рН 4,5 и при 25°С. В еще других вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С, но растворимым при рН 4,5 и при 25°С и биоразлагаемым. В других вариантах осуществления любой из приведенных в данном документе полимеров может иметь средневесовой молекулярный вес, который определяют гель-проникающей хроматографией, от приблизительно 800 до 10000 Да (например, 2000 Да).
В одном варианте осуществления иммуномодулирующим средством является адъювант, такой как имидазохинолин. Имидазохинолин включает соединения, такие как имиквимод и резиквимод (также известный как К.848). Такие адъюванты могут быть связанными с полимером, как приведено выше. Например, резиквимод сконъюгировали с полимером полимолочной кислоты (РЬА) ~2000 Да. В исследованиях высвобождения ίη νίίτο такой вариант осуществления демонстрировал повышение высвобождения К848 в 3-6 раз при падении рН от 7,4 до 4,5. Табл. 1 приводит композиции протестированных частиц. Они включали два состава, которые инкапсулировали К848, два состава с РЬА, ковалентно связанной с К848 через амин К848, и четыре состава с РЬА, ковалентно связанной с К848 (посредством способа с раскрытием кольца). Во всех составах высвобождение К848 значительно повышалось при более низком рН. Скорость высвобождения инкапсулированного намного выше, чем скорости высвобождения сконъюгированого, и также есть разницы в скоростях высвобождения среди способов конъюгации.
- 8 022699
Таблица 1
Целевые составы с ковалентным К848
Состав Загрузка К848* Загрузка пептида оуа РЬА- РЕО- мс Тип конъюгата РЬА-К848** РЬА (15- 20К, ΒΙΚ202Η) Химия
1 Е1,5% 1,1-2,2% 25% 75%
2 Е1,5%++ 1,1-2,2% 25% 75%
3 С75% 0,15-0,31% 25% Способ 1 Амин
4 С75% 0,15-0,31% 25% Способ 1 Амин
5 С75% 0,15-0,31% 25% Способ 5 КОР-выс. МВ
6 С75% 0,15-0,31% 25% Способ 5 КОР-низ. МВ
7 С50% 0,15-0,31% 25% Способ 5 25% КОР-низ. МВ
8 С25% 0,15-0,31% 25% Способ 5 50% КОР-низ. МВ
*С=ковалентный К.848;
Е=инкапсуляция К848.
Хотя вышеприведенный пример был с РЬА, иммуномодулирующие средства, такие как К848, могут быть связаны с другими полимерами или их элементарными звеньями, такими как те, что приведены выше или в других частях данного документа, включая блок-сополимер сополимера полилактида и гликолида (РЬОА) или его элементарное звено. Иммуномодулирующие средства, такие как К848, могут быть связаны с такими полимерами или их элементарными звеньями через амидную или сложноэфирную связь. Примеры способов осуществления такого связывания приведены в других частях документа и в примерах.
Авторы также неожиданно обнаружили, что возможно обеспечение, наряду с соответствующими способами, композиции, включающей синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем; при этом иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
1А(4,5)г1/1А(4,5Ц2>1,2;
где 1А (4,5)и определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение И, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей; и где 1А (4,5)ί2 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 12, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей; и где П равно 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч; 12 равно 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28 ч и Π>ΐ2. В некоторых вариантах осуществления И равно 24 ч, а 12 равно 6 ч.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
ΙΑ ( 4, 5} У1/1А (4, 5) с2>1, 5,
где 1А (4,5)а, 1А (4,5)ί2, И и 12 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления И равно 24 ч, а 12 равно 6 ч.
В других вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
10Й1А(4, 5>ы/1А(4, 5>«>1, 2,
- 9 022699
10<1А(4,5)с1/1А(4,5)с2>2,
10<ΙΑ (4, 5) с1/1 А < 4, 5) с2>3, 10<1А(4,5)с1/1А(4,5)«>4,
10<ΙΑ (4, 5) С1/1А (4,5! 12>5, ΙΟ^ΙΑ (4, 5) ϋ/ΙΑ (4,5)^7, 10<1А(4,5)с1/1А(4,5)с2>9, 8<1А(4,5Б1/1А(4,5)с2>1,2, 6<1А(4, 5>с1/1А(4,5>г2>1,2, 4,5^1А(4, 5)п/1А(4,5)«>1,2, 3,5<1А(4,5)С1/1А(4,5)г2>1,2, 2,5<1А(4,5)м/1А(4,5)«>1,2, 1, 5^1А(4,5)Ь1/1А(4,5)Ь221,2, 4<ΙΑ(4,5Ει/ΙΑ(4,542>3,
6^1А (4, 5) ы/1А (4, 5) ь2>5.
10<1А(4,5)с1/1А(4,5)с2>2,5,
10<1А<4,5)«/1А(4,5)С2>3,5,
10<1А(4,5)с1/1А(4,5)с2>4,5,
10<1А(4,5)ц/1А(4,5)ь2гб,
10<1А(4,5>ь1/1А(4,5)ь2>8, 9<1А(4,5!с1/1А(4,5)с2>:1,2, 7<1А<4,5)с1/1А(4,5)с2>:1,2, 5ί ΙΑ (4, 5) ει/ΙΑ(4, 5) с2>1,2, 4ί ΙΑ (4, 5) ει/ΙΑ(4, 5> Ь2Й1,2, 3^ΙΑ(4, 5) ει/ΙΑ(4, 5) ь2>1, 2, 2£ΐΑ(4,5)ε1/ΙΑ(4,5)ι2£1,2, 3<ΙΑ(4, 5) „/ΙΑ (4, 5>ε2>2, 5£ΙΑ(4,5)1ι/ΙΑ(4,5)ϊ2>4, 7<ΙΑ (4, 5) ίΐ/ΙΑ(4, 5 > ϊ2£6,
8<ΙΑ(4, 5)Ь1/1А(4,5)Ь2>7 или 9<ΙΑ( 4, 5 )ц/1А( 4, 5) с2>8 ;
где ΙΑ (4,5)41, ΙΑ (4,5)Ι2, И и 12 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления И равно 24 ч, а 12 равно 6 ч.
Синтетические наноносители по данному изобретению также, как было показано, проявляют свойство усиления гуморального иммунного ответа на специфический антиген. Такой усиленный гуморальный иммунный ответ, как было обнаружено, повышается в некоторых вариантах осуществления более быстрым высвобождением иммуномодулирующего средства. В одном варианте осуществления иммуномодулирующее средство представляет собой СрС-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, и СрС-содержащая иммуностимулирующая нуклеиновая кислота инкапсулирована в синтетическом наноносителе. При исследованиях ίη νίΐτο, описанных далее ниже в примерах, было обнаружено, что оптимальное высвобождение СрС-содержащих иммуностимулирующих нуклеиновых кислот из синтетических наноносителей продуцировало повышенный гуморальный иммунный ответ на никотин, который также был связан с синтетическими наноносителями. В некоторых вариантах осуществления такое оптимальное высвобождение было обнаружено как более хорошее усиление ответа посредством антител на антиген.
Оптимальным высвобождением является диссоциация иммуномодулирующего средства от синтетического наноносителя, которая дает наилучшие уровни требуемого эффекта(эффектов). В некоторых вариантах осуществления требуемым эффектом является немедленный иммунный ответ требуемого уровня (т.е. ответ, который происходит вскоре после введения синтетического наноносителя). Обычно немедленным иммунным ответом является ответ, измеряемый порядка секунд, минут или нескольких часов. В других вариантах осуществления требуемым эффектом является иммунный ответ требуемого уровня, который происходит спустя несколько часов. В еще одних других вариантах осуществления требуемым эффектом является иммунный ответ требуемого уровня, который поддерживается в течение продолжительного периода времени, например в течение 1, 2, 5, 10, 15 или более часов. В других вариантах осуществления продолжительный период времени составляет в течение 1, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30 или более суток. В следующих вариантах осуществления продолжительный период времени составляет в течение 1, 2, 5, 10 или более месяцев. В следующих вариантах осуществления продолжительный период времени составляет в течение 1, 2, 5, 10 или более лет. В некоторых вариантах осуществления композиция из синтетических наноносителей, которая обеспечивает оптимальное высвобождение, является композицией, в которой иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно одному из вышеприведенных соотношений.
- 10 022699
В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, предпочтительно лабильное иммуномодулирующее средство, которое диссоциирует от синтетического наноносителя со средней скоростью, удовлетворяет следующему соотношению:
5<1А(4,5)С1/1А(4,5)«>1,2,
6<1А(4,5)«/1А<4, 5) с2£1, 2, 4<ΠΑ(4,5Πι/ΙΑ(4,5Π2>1,2, 2<1А(4,5)с1/1А(4,5>12>1,2, 6^1А(4, 5) ы/1А(4, 5)12>2, 5, 6<ΙΑ(4,5)Ει/ΙΑ(4,5Κ2^3, 5, 6<ΙΑ(4,5)„/ΙΑ(4,5Κ2>5, 3,5^1А(4,5)ь1/1А(4,5>ъ2>1,5, 2,5<1А(4,5)41/1А(4,5)ь2>1,5, 4^1А(4,5)г1/1А(4,5>^2 и
3<1А(4,5)г1/1А(4,5)с2£1,2, б<1А(4,5)и/1А(4,5)с2>2, б<1А(4,5)и/1А(4,5)^3, б<1А(4,5)ц/1А(4,5)^4,
4<ΙΑ(4,5Πι/ΙΑ(4,5)Ε2>1,5, 3^1А(4,5)ц/1А(4,5)ь2>1,5, 5<1А(4,5)Ь1/1А(4,5)ь2>2,
3<1А(4, 5) „/ΙΑ(4, 5) ьг>2;
где ΙΑ (4,5)и, ΙΑ (4,5)ί2, И и ΐ2 являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления П равно 24 ч, а 12 равно 6 ч.
В другом примере резиквимод инкапсулировали в синтетическом наноносителе. При исследованиях ίη νίίτο, описанных далее ниже в примерах, было обнаружено, что резиквимод, содержащийся в синтетических наноносителях, усиливал гуморальный иммунный ответ на никотин, также связанный с синтетическими наноносителями. Также было обнаружено, что среднее высвобождение резиквимода из синтетических наноносителей было оптимальным, поскольку оно в результате приводило к более высокому уровню индукции антител, чем быстрое или медленное высвобождение резиквимода.
Соответственно приведенные в данном документе синтетические наноносители могут содержать один или несколько антигенов. Антигенами могут быть В-клеточные антигены, или Т-клеточные антигены, или комбинация из того и другого. В некоторых вариантах осуществления такие антигены могут быть связаны с синтетическими наноносителями так, чтобы они присутствовали на поверхности синтетических наноносителей, были инкапсулированы в наноносителях или и то и другое. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство усиливает иммунный ответ на такой антиген. Как упомянуто выше, антиген может быть также связан с синтетическими наноносителями. В других вариантах осуществления, однако, такой антиген ковалентно не связан с синтетическими наноносителями. В некоторых их этих вариантов осуществления такой антиген может быть введен совместно субъекту. В еще других из этих вариантов осуществления такой антиген не вводят совместно субъекту.
Определения.
Адъювант означает средство, которое не представляет собой конкретный антиген, но увеличивает силу и продолжительность иммунного ответа на антиген. Такие адъюванты могут включать, без ограничения, стимуляторы образраспознающих рецепторов, таких как То11-подобные рецепторы, ΚΙΟ-1 и ΝΟΌподобные рецепторы (ΝΚΚ.), минеральные соли, такие как квасцы, квасцы, объединенные с монофосфориллипидами (МРЬ) А из ЕЩсгоЬасЮпа. таких как ЕксйейЫа сой, 8а1топе11а тйтс5о1а. 8а1топе11а ΙνρΠίтигшт или 8Ы§е11а йехпей, или, в частности, с МРЬ® (Α804), МРЬ А из вышеупомянутых бактерий отдельно, сапонины, такие как р8-21,фш1-А, 18СОМ, 18СОМАТЫХ™, эмульсии, такие как МР59™, Мойашйе® Ι8Α 51 и Ι8Α 720, А802 (Ц821+сквален+МРЕ®), липосомы и липосомальные составы, такие как Α801, синтезированные или специально полученные микрочастицы и микротранспортеры, такие как происходящие от бактерий везикулы из внешней мембраны (ОМУ) из Ν. допоттйеае, СЫатуЛа (гасйотаЙ5 и других, или хитозановые частицы, средства, образующие депо, такие как блок-сополимеры Р1итошс®, специально модифицированные или полученные пептиды, такие как мурамил-дипептид, аминоалкилглюкозаминида 4-фосфаты, такие как КС529, или белки, такие как бактериальные токсоиды или фрагменты токсинов. В вариантах осуществления адъюванты включают агонисты для образраспознающих рецепторов (РРК), включая, без ограничения, То11-подобные рецепторы (ТЬК), в особенности ТЬК 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 и/или их комбинации. В других вариантах осуществления адъюванты включают агонисты для То11-подобных рецепторов 3, агонисты для То11-подобных рецепторов 7 и 8 или агонисты для То11-подобного рецептора 9; предпочтительно упомянутые адъюванты включают имидазохинолины; такие как резиквимод (также известный как К848); адениновые производные, такие как те, которые описаны в патенте США № 6329381 (8итйото Рйагтасеийса1 Сотрапу); иммуностимулирующую ДНК или иммуностимулирующую РНК. В специфических вариантах осуществления синтетические наноносители включают в качестве адъювантов соединения, которые представляют собой агонисты То11-подобных рецепторов (ТЬК) 7 и 8 (агонисты ТЬК 7/8). С практической стороны соединения-агонисты ТЬК 7/8 раскрыты в патенте США № 6696076 Тота1 е1 а1., включая, без ограничения, имидазохинолинамины, имидазопиридинамины, 6,7-конденсированные циклоалкилимидазопиридинамины и 1,2-мостиковые имидазохинолинамины. Предпочтительные адъюванты включают имиквимод и резиквимод. В конкретных вариантах осуществления адъювант может быть агонистом для поверхностной молекулы СО 40 ОС (денд- 11 022699 ритных клеток). В определенных вариантах осуществления синтетический наноноситель включает адъювант, который способствует созреванию ОС (необходимых для эффективного примирования наивных Тклеток) и продуцирования цитокинов, таких как интерфероны I типа, которые, в свою очередь, стимулируют иммунный ответ с помощью антител и цитотоксический иммунный ответ против требуемого антигена. В вариантах осуществления адъюванты также могут содержать иммуностимулирующие РНК молекулы, такие как, без ограничения, дсРНК или поли 1:С (ТЬК.3 стимулятор), и/или раскрытые у Р. Ней е! а1., 8рес1ех-8рес|Пс Кесодшйоп ой 8тд1е-8йапбеб Р№А у1а То11-йке РесерЮг 7 апб 8, 8с1епсе 303(5663), 1526-1529 (2004); 1. Уо11тег е! а1., 1ттипе тоби1а!юп Ьу сЬетюайу тобйгеб пЬопис1еох1бех апб оПдопЬопис1еойбех УО 2008033432 А2; А. РогхЬасЬ е! а1., 1ттипохйти1а!огу ойдойЬопискойбех сотаийпд хресЫс хесщепсе тойй(х) апб 1агдейпд 1Ье Той-йке тесер1от 8 ра!йтау УО 2007062107 А2; Е. ИЫтапп е! а1., Мобйтеб ойдойЬопис1еойбе апа1одх \\йй епйапсеб йтапипохйти1а!огу асйуйу и.8. Ра!. Арр1. РиЬ1. И8 2006241076; С. Ырйотб е! а1., 1ттипохйти1а!огу уйа1 ΡΝΛ ойдопис1еойбех апб ихе йог йеайпд сапсег апб ийесйопх УО 2005097993 А2; С. Ырйотб е! а1., 1ттипохйти1а!огу С,и-сойа1тпд ойдойЬопис1еойбех, сотрохйюпх, апб хсгеетпд тейюбх УО 2003086280 А2. В некоторых вариантах осуществления адъювантом может быть агонист ТЬК-4, такой как бактериальный липополисахарид (ЬР8), У8У-С и/или НМСВ-1. В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут включать агонисты ТЬК-5, такие как флагеллин, или их части, или производные, включая, без ограничения, описанные в патентах США № 6130082, 6585980 и 7192725. В специфических вариантах осуществления синтетические наноносители включают лиганд к То11-подобному рецептору (ТЬК)-9, такой как иммуностимулирующий олигонуклеотидные молекулы, включающие мотивы 5'-СС-3', где С неметилирован, которые индуцируют секрецию интерферона I типа и стимулируют активацию Т- и В-клеток, приводя к повышенной продукции антител и цитотоксическим Т-клеточным ответам (Кйед е! а1., СрС тоЫх ш Ьас!ейа1 !йддет бйес! В се11 асйуайоп, №а!иге, 1995, 374:546-549; СЬи е! а1. СрС ойдобеохупис1еойбех ас! ах абщуаШх !Ьа! хтейсй оп Т Ье1рет 1 (ТЫ) 1ттипйу, 1. Ехр. Меб., 1997, 186:1623-1631; Ырйотб е! а1. СрС-соп!а1шпд хуп!йейс ойдопис1еойбех ргото!е В апб су!о!охю Т се11 гехропхех !о рто!ет апйдеп: а пете с1ахх ой уассше аб)иуап!х, Еиг. 1. 1ттипо1., 1997. 27:2340-2344; Ротап е! а1. 1ттипох!1ти1а!огу хециепсех йипсйоп ах Т йе1рег-1ртотойпд аб)иуап!х, №а! Меб., 1997, 3:849-854; Эау1х е! а1. СрС ίχ а ро!еп! епйапсег ой хресйтс 1ттипйу т тюе пптши/еб тейй тесотЫпап! йераййх В хигйасе апйдеп, 1. 1ттипо1., 1998, 160:870-876; Ырйотб е! а1., Вас!ейа1 О№А ах иптипе се11 асйуа!ог. Тгепбх МютоЬюй, 1998, 6:496-500. В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть провоспалительными стимулами, выделенными некротическими клетками (например, кристаллы уратов). В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть активированными компонентами каскада комплемента (например, СО21, СО35 и т.д.). В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть активированными компонентами иммунных комплексов. Адъюванты также включают агонисты рецептора комплемента, такие как молекула, которая связывается с СО21 или СО35. В некоторых вариантах осуществления агонист рецептора комплемента индуцирует опсонизацию эндогенного комплемента синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления адъюванты являются цитокинами, которые относятся к малым протеинам или биологическим факторам (в диапазоне 5-20 кДа), которые выделяются клетками и имеют специфические эффекты на межклеточное взаимодействие, коммуникацию и поведение других клеток. В некоторых вариантах осуществления агонист цитокинового рецептора является малой молекулой, антителом, сшитым белком или аптамером.
Введение или ввод означает обеспечение лекарства пациенту фармакологически пригодным способом.
Признак нацеливания на АРС означает одну или несколько частей, из которых состоят синтетические наноносители по данному изобретению, которые нацеливают синтетические наноносители на специализированные антигенпрезентирующие клетки (АРС), такие как, без ограничения, дендритные клетки, 8С8 макрофаги, фолликулярные дендритные клетки и В-клетки. В вариантах осуществления признак нацеливания на АРС может включать иммуноспецифическую поверхность(поверхности) и/или нацеливающие части, которые связывают известные мишени на АРС. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут включать один или несколько В-клеточных антигенов на поверхности синтетического наноносителя. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут также включать один или несколько размеров синтетических наночастиц, которые выбраны с тем, чтобы способствовать поглощению АРС.
- 12 022699
В вариантах осуществления нацеливающие части для известных мишеней на макрофагах (МФ) включают любую нацеливающую часть, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), которая заметно экспрессируется и/или представлена на макрофагах (т.е. маркеры макрофагов субкапсулярного синуса). Иллюстративные маркеры СКС-МФ включают, без ограничения,
СО4 (ЬЗТ4, НЗ/25, Т4);
СО9 (р24, ϋΕΑΡ-1, МЕР-1); СО11а (ЬРА-Ια, аЬ-цепь интегрина);
СОНЬ (αΜ-цепь интегрина, СЕЗ, Мо1, СЗпгЕ, Мас-1); СО11с (»Хинтегрин, р150, 95, АХЬ2); СО>;12 (р90-120); СО13 (ΑΡΝ, др150,
ЕС 3.4.11.2); СР14 (ЬР5-К); СР15 (Х-гаптен, Льюис X, 55ЕА-1, 3ЕАЬ); Οϋ15ε (сиалил-Льюис X); СЭ15и (3'-сульфо-Льюис X); СО15ви (6-сульфосиалил-Льюис X); СЮ16а (РСЕП1А); СР16Б (ГсдЕШЬ);
СРи17 (лактозилцерамид, ЬасСег); СЭ18 (интегрин β2, СО11а,Ь,с β-субъединица); СЭ26 (ϋΡΡ IV эктоэнеим, АОА-связывающий белок);
СР29 (тромбоцитарный СРПа, β-1 интегрин, СР); СЭ31 (РЕСАМ-1, эндокам); СО32 (РСуЕП); СОЗЗ (др67); СР35 (СК1, СЗЬ/С4Ь рецептор); СО36 (СрШЬ, ΘΡίν, ΡΑ2Ι7) ; СБ37 (др52-40); СРЗЗ (АДФ-рибозилциклаза, Т10); СР39 (АТФ-дегидрогеназа, ΝΤΡдегидрогеназа-1); СР40 (Вр50); СО43 (сиалофорин, лейкосиалин);
СР44 (ЕМСК11, Н-САМ, Рдр-1); СР45 (ЬСА, Т200, В220, Ьу5);
СО45ЕА; СО45ЕВ; СО45ЕС; С045Е0 (ЦСНЬ-1); СО46 (МСР); СО47 (др42, ΙΑΡ, ОАЗ, нейрофилин) ; СО47Е (МЕМ-133); СВ48 (В1а5р-1,
Ни1утЗ, ВСМ-1, ОХ-45); СО49а (УЬА-1а, αΐ-интегрин); СО49Ь (УЬА2а, др1а, а2-интегрин); СО49с (УЬА-За, аЗ-интегрин); СО49е (УЬА-5а, αϋ-интегрин); СЭ49£ (УЬА-ба, аб-интегрин, др1с); СР50 (1САМ-3); СО51 (интегрин а, νΝΕ-α, витронектин-Еа); СВ52 (САМРАТН-1, НЕ5); СО53 (ОХ-44); СО54 (1САМ-1); Οϋ55 фАЕ) ; СО58 (ЪГА-3); СБ59 (1Е5Ад, Н19, протектин, МАС1Е, М1ЕЬ, Р-Ιδ); СВбОа (СОЗ) ; СОбОЬ (9-0-ацетил СОЗ); СО61 (СР Ша, β3-ΗΗΤθΓρπΗ);
СО62Ь (Ь-селектин, ЬАМ-1, ЬЕСАМ-1, МЕЬ-14, Ьеи8, Т<21); СО63 (ЫМР, МЬА1, др55, ΝΟΑ, ЬАМР-3, МЕ491); СО64 (ЕсуЕП; СО65 (церамид, νΐΜ-2); С0б5в (сиалированный СО65, νΐΜ2); СО72 (Ьу19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СО74 (Ιί, инвариантная цепь); СО75 (сиалозамаскированный лактозамин); СО755 (а2, б-сиалированный лактозамин); СО80 (В7, В7-1, ВВ1); СО81 (ТАРА-1); СО82 (4Е9,
СЗЗ, ΙΑ4, КАП, Е2); СО84 (р75, СКб); СО85а (1ЬТ5, ЫЕ2, НЬЭ);
СО850 (1ЬТ4, ЫЕ2, ΜΙΕ10) ; СО85д (1ЬТ2, ЫК1, ΜΙΕ7) ; СО85к (1ЬТЗ, ЫЕ5, НМ18); СО86 (В7-2/В70); СО87 (иРАЕ); СО88 (С5аЕ);
- 13 022699
Οϋ89 (Рс-рецептор к 1дА, РсаК); СР91 (а2М-Е, ЬЕР); СОм92 (р70);
СРиЭЗ (СЕ11); СБ95 (АРО-1, РАЗ, ТЫРЕЗР6); СБ97 (ВЕ-КОО/Р12);
СБ98 (4Р2, РЕР-1, ЕЬ-388); СБ99 (М1С2, Е2); СБ99К (СО99, связываемый моноклоноальными антителами); СБ100 (ЗЕМА4Б); СБ101 (1СЗР2, Р126, У7); СБ102 (1САМ-2); СБ111 (РУЕЫ, ΗνβΟ, ΡΕΕΙ, нектин 1, Н1дК); СБ112 (ΗνθΒ, РЕР2, РУЕЬ2, нектан 2); СБ114 (СЗРЗЕ, С-СЗКР, НС-СЗРК); СШ15 (с-£тз, СЗР-1К, М-СЗРК); СБ116 (СМСЗРЕа); СБВД119 (ΙΡΝγΕ, ΙΡΝγΕΑ); СБ120а (ΤΝΡΕΙ, р55) ; СБ1206 (ΤΝΡΕΙΙ, р75, ΤΝΡΕ р80) ; СБ121Ь (1Ь-1К типа 2); СБ122 (1Ь2Кр);
СБ123 (1Ь-ЗЕа); СБ124 (1Ь-4Ка); СБ127 (р90, 1Ь-7Е, 1Ь-7Ка);
СБ128а (1Ь-8Ка, СХСК1, (ориентировочно переименованный как СБ181)); СШ28Ъ (1Ь-8ЕЬ, С5СЕ2, (ориентировочно переименованный как СО182)); СБ130 (др130); СБ131 (общая β-субъединица); СШ32 (общая γ-цепь, 1Ь-2Ку); СБм136 (М5Р-К, ΚΟΝ, р158-гоп); СБи137 (4-1ВВ, 1ЬА); СБ139; СС141 (тромбомодулин, фетомодулин); СБ147 (басигин, ΕΜΜΡΕΙΝ, Мб, 0X47); СБ148 (ΗΡΤΡ-η, ρ260, РЕР-1);
СР155 (РУК); СР15ба (СР156, АРАМ8, М32); СР1566 (ТАСЕ, ΑΌΑΜ17, сЗУР); СР«156С (АРАМ10); СР157 (Мо5, В5Т-1); СР162 (РЗСЬ-1);
СР164 (МСС-24, МЫС-24); СР165 (АР2, др37); СР168 (КНАММ, ΙΗΑΒΡ,
НММЕ); СР169 (сиалоадгезин, сиглек-1); СР170 (сиглек-5); СР171 (ЫСАМ, Ы1ЬЕ); СЫ172 (3ΙΚΡ-1α, МуР-1); СР172Р (3ΙΚΡβ); СР180 (ЕР105, Вдр95, Ьуб4); СР181 (СХСК1, (прежде известный как
СР128а)); СР182 (СХСЕ2, (прежде известный как СР128Р)); СР184 (СХСК4, ΝΡΥ3Ε); СШ91 (ССК1); СР192 (ССЕ2) ; СР195 (ССЕ5);
СЫк197 (ССЕ7 (был СРи197)) ; СРи198 (ССЕ8); СР204 (МЗК); СР205 (БЕС-25); СО206 (ММЕ); СР207 (лангерин); СРи210 (СК); СР213а (СК) ; СОи217 (СК); СР220 (инсулин К); СБ221 (1СР1 Е) ; СБ222 (МбР-Е, Ι6ΡΙΙ-Ε); СБ224 (ССТ); СБ226 (ΡΝΑΜ-1, РТА1); СР230 (прионный белок (РгР,); СР232 (УЕЗР-Е); СР244 (2В4, Р38, ЫА1Ь>;
СБ245 (р220/240); СБ256 (АРК1Ь, ТАЬЬ2, суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 13); СБ257 (ВЬУЗ, ТАЬЫ, суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 13Ь); СБ261 (ТКА1Ь-Е1, суперсемейство ΤΝΡ-Κ, член 10а); СР262 (ТКА1Ь-К2, суперсемейство ΤΝΡ-Е, член 10Ь);
СБ263 (ТЕА1Ь-Е3, суперсемейство ΤΝΒΡ-Ε, член 10с); СБ264 (ТКА1Ь-К4, суперсемейство ΤΝΡ-К, член 10ά); СР265 (ТЕАЫСЕ-Е, суперсемейство ТЫР-Е, член 11а); СБ277 (ВТ3.1, семейство В7:
бутирофилин 3); СБ280 (ГЕМ22, ЕЮО180); СБ281 (ТЬЕ1, ТОЬЬподобный рецептор 1); СР282 (ТЬК2, ТОЬЬ-подобный рецептор 2);
СР284 (ТЬЕ4, ТОЬЬ-подобный рецептор 4); СБ295 (ЬЕРК,; СР298 (АТР1ВЗ, Ыа/К-АТФаза, |33-субъединица); СБЗООа (СМЕР-35Н);
СБЗООс (СМЕР-35А); СБЗООе (СМКР-35Ы); СБ302 (БСЫ) ; СБ305 (ЬА1Е1); СБ312 (ЕМК2); СБ315 (СР9Р1,; СБ317 (ВЗТ2); СБ321 (ЛАМ1); СР322 (ЫАМ2); С№328 (сиглек-7); СБм329 (сиглек-9) ;
СБ68 (др 110, макросиалин) ;
и/или рецептор маннозы; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия.
В вариантах осуществления нацеливающие части для известных мишеней на дендритных клетках (ДК) включают любую нацеливающую часть, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), которая заметно экспрессируется
- 14 022699 и/или представлена на ДК (т.е. маркер ДК). Иллюстративные маркеры ДК включают, без ограничения, СО1а (Е4, Тб, НТА-1); СМЬ (К1) ; СР1с (М241, К7);
С016 (КЗ); СО1е (Е2); СОНЬ (αΜ-цепь интегрина, СЕЗ, Мо1,
СЗП1К, Мас-1); СР11с (αΧ-интегрин, р150, 95, АХЬ2); СЦм117 (лактозилцерамид, ЬасСег); СР19 (В4); СЭЗЗ (др67); СО 35 (СЕ1, рецептор СЗЬ/С4Ь) ; СО 36 (6рШЬ, 6Р1У, РА51У); СО39 (АТФдегидрогеназа, ЫТР-дегидрогеназа-1); СЦ40 (Вр50); СБ45 (ЬСА,
Т200, В220, Ьу5); СО45ЕА; СО45ЕВ; СО45ЕС; СБ45ЕО (ЦСНЬ-1);
СР49Й (УЬА-4а, а4-интегрин); СО49е (УЬА-5а, а5-интегрин); СБ58 (ЬГА-3); СЦ64 (РсуЕ1); СЦ72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СЦ73 (экто-5'нуклеотидаза); СО74 (Ιί, инвариантная цепь); СО80 (В7,
В7-1, ВБ1) ; СР81 (ТАРА-1); СО83 (НВ15); СО85а (1ЬТ5, ЫЕЗ,
НЬ9) ; СР85с( (1ЬТ4, ЫК2, ΜΙΕ10) ; СР85з (1ЬТ2, ЫЕ1, ΜΙΕ7);
СО85к (1ЬТЗ, ЫК5, НМ1В); СО86 (В7-2/В70) ; СР88 (С5аВ) ; СО97
(ВЬ-К00/Р12); СО101 (1СЗР2, Р126, У7); СЫ16 (СМ- СЗРЕа); СР120а
(ΤΜΓΚΙ, р55); СО120Ь (ТЫРЕН, р75, ΤΝΓΚ р80); СБ123 (1Ь-ЗЕо);
СО139; СР148 (ΗΡΤΡ-η, ϋΕΡ-1); СО150 (ЗЬАМ, ΙΡΟ-З); СО1566 (ТАСЕ, АОАМ17, сЗУР); СБ157 (Мо5, В5Т-1); СО167а (βϋΕΙ, кгкЕ, сак); СШ68 (ЕНАММ, ΙΗΑΒΡ, НММЕ) ; СО169 (сиалоадгезин, сиглек1); СР170 (сиглек-5); СР171 (ЫСАМ, Ы1ЬЕ); СБ172 (5ΙΚΡ-1α, МуО1); СР172Р (5ΙΕΡβ); СО180 (КР105, Вдр95, Ьуб4); СР184 (СХСЙ4,
ΝΡΥ3Ε); СО193 (ССЕЗ); СБ196 (ССЕб); СР197 (ССЕ7 (из СРи197));
СОи197 (ССЕ7, ΕΒΙ1, ВЬК2); СР200 (0X2); СР205 (РЕС-205); СР206 (ММЕ); СР207 (лангерин); СБ208 (ОС-ЬАМР); СО209 (РС51СЫ);
СОн218а (1Ъ18Еа); СРи218Ь (1Ь8Ер); СР227 (МЧС1, РИМ, РЕМ, ЕМА) ;
СО230 (прионный белок (РгР)); СО252 (ОХ40Ь, суперсемейство ΤΝΓ (лиганд), член 4); СО258 (ЫСНТ, суперсемейство ТЫР (лиганд), член 14); СО265 (ТЕАЫСЕ-Е, суперсемейство ΤΝΡ-Ε, член 11а);
ΟΏ271 (ЫСРК, р75, суперсемейство ТЫВЕ, член 16) ; СО273 (В7РС,
Р0Ь2); СО274 (В7Н1, РБЫ) ; СБ275 (В7Н2, 1С03Ь); СР276 (В7НЗ);
СО277 (ВТ3.1, семейство В7; бутирофилин 3); СО283 (ТЬЕЗ, ТОЬЬподобный рецептор 3); СО289 (ТЬЕ9, ТОЬЬ-подобный рецептор 9);
СО295 (ЬЕРЕ); СР298 (АТР1ВЗ, рЗ-субъединица Ыа/К-АТФазы);
СРЗООа (СМКГ-35Н); СРЗООс (СМЕР-35А); СР301 (МСЬ1, СЦЕСЗГ14);
СО302 (ОСЫ); СРЗОЗ (ВРСА2); СО304 (ВРСА4); СО312 (ЕМЕ2); СО317 (В5Т2); СО319 (СЕАСС, ЗЬАМР7); СО320 (806); и СЮбЗ (др110, макросиалин); МНС II класса; ВРСА-1; сиглек-Н;
где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия.
В вариантах осуществления нацеливание может быть выполнено с помощью любой нацеливающей части, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессируется и/или представлен на В-клетках (т.е. маркер В-клеток). Иллюстративные маркеры В-клеток включают, без ограничения,
- 15 022699
С01с (М241, Е7); С01Й (КЗ); С02 (рецептор Е— роэетки, Т11, ЬЕА-2); СО5 (Т1, Тр67, Ьеи-1, Ьу-1); СО6 (Т12); СБ9 (р24, ОКАР-1, МКР-1); СО11а (ЬРА-Ια, аЬ-цепь интегрина); СОНЬ (αΜ-цепь интегрина, СКЗ, Мо1, СЗпЬК, Мас-1) ; СБПс (аХинтегрин, Р150, 95, АХЬ2); СОм17 (лактозилцерамид, ЬасСег);
С018 (интегрин β2, (3-субъединица СБИа, Ь, с) ; СО19 (В4) ; СБ20 (В1, Вр35); СО21 (СК2, ЕВУ-К, СЗс1Е); СО22 (ВЬ-САМ, ЬуЬ8, сиглек-2); С1)23 (ЕсеКИ, Вб, ВЬА5Т-2, Ьеи-20); СБ24 (ВВА-1, НЗА); СО25 (Тас-антиген, 1Ь-2Ка, р55); СО26 (ϋΡΡ IV эктоэнеим, АБА-связывающий белок); СБ27 (Т14, 3152); СБ29 (тромбоцитарный
СРПа, интегрин β-1, СР); СО31 (РЕСАМ-1, эндокам); СО32 (РСуКИ); СБ35 (СК1, СЗЬ/С4Ь рецептор); СБ37 (др52-40); СБ38 (АДФ-рибозилциклаза, Т10); СО39 (АТФ-дегидрогеназа, ΝΤΡдегидрогеназа-1); СБ40 (Вр50); СБ44 (ЕСМК11, Н-САМ, Рдр-1); СБ45 (ЬСА, Т200, В220, Ьу5); СО45КА; СБ45КВ; СО45КС; СЭ45КО (ОСНЬ-1); С1)46 (МСР); СБ47 (др42, ΙΑΡ, ОАЗ, нейрофилин); СБ47К (МЕМ-133); СО48 (В1азЁ-1, Ни1утЗ, ВСМ-1, ОХ-45); СБ49Ь (УЬА-2а, др1а, а2-интегрин); СО49с (УЬА-За, аЗ-интегрин); СО49<4 (УЬА-4а, а4-интегрин); СБ50 (1САМ-3); СО52 (САМРАТН-1, НЕЗ); СБ53 (ОХ44); СБ54 (1САМ-1); СБ55 (БАР); СБ58 (ЬРА-3); СБбОа (СОЗ); СО62Ь (Ь-селектин, ЬАМ-1, ЬЕСАМ-1, МЕЬ-14, Ьеи8, Т<21); СБ72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СО73 (экто-5'-нуклеотидаза); СБ74 (Ιί, инвариантная цепь); СО75 (сиалоэамаскированный лактозамин); СБ755 (а2, 6-сиализированный лактозамин); СО77 (Рк-антиген, ВЬА, СТН/бЬЗ); СО79а (1да, МВ1); СБ79Ь (1д8, В29); СО80; СБ81 (ТАРА-1); СО82 (4Г9, СЗЗ, ΙΑ4, КАП, К2) ; СО83 (НВ15); СО84 (Р75, СК6); СО85} (1ЬТ2, ЫК1, ΜΙΚ7); СОн92 (р70); СБ95 (АРО-1, РАЗ, ΤΝΡΚ5Ρ6); СБ98 (4Р2, РКР-1, КЬ-388); СО99 (М1С2, Е2); СБ100 (ЗЕМА4Б); СБ102 (1САМ-2); СОЮЗ (5ЕМА7А, антиген группы крови ТМН) ; СБиПЭ (ΙΡΝγΚ, ΙΡΝγΚβ); СО120а (ΤΝΡΚΙ, р55); СО120Ь (ΤΝΡΚΙΙ, р75, ΤΝΓΚ р80); СБ121Ь (1Ь-1К типа 2); СО122 (1Ь2КР) ; СО124 (1Ь-4Ка) ; СШЗО (дрЬЗО); СШ32 (общая у-цепь, 1Ь-2Ку); СОм137 (4-1ВВ, 1ЬА); СО139; СО147 (басигин, ΕΜΜΡΚΙΝ, Мб, 0X47); СО150 (ЗЬАМ, ΙΡΟ-3); С0162 (РЗСЬ1); СО164 (МЕС-24, МЦС-24); СЭ166 (АЬСАМ, КС-САМ, ЗС-1, ΒΕΝ,
БМ-СКАЗР) ; С01б7а (ϋϋΚΙ, ЪгкЕ, сак); СО171 (ЫСМА, ЪПЬЕ) ; СО1755 (сиалил-Тп (З-Τη)); СО180 (КР105, Вдр95, Ьуб4) ; СО184 (СХСК4, ΝΡΥ3Κ); СР185 (СХСК5); СО192 (ССК2); СО196 (ССК6); С0197 (ССК7 (был СОУ197)); СОм197 (ССК7, ΕΒΙ1, ВЬК2); С0200 (0X2); СБ205 (ОЕС-205); С0«210 (СК); СО213а (СК); СОи217 (СК) ; СОи218а (1Ы8Ка); СО«218Ь (1Ы8К8); СО220 (инсулин К); СО221 (1СР1 К); СО222 (МбР-К, 1СРП-К); СО224 (ССТ); СО225 (Ьеи13); СО226 (ϋΝΑΜ-1, РТА1); СО227 (МЫС1, РОМ, РЕМ, ЕМА); СО229 (ЬуЭ); СБ230 (прионный белок (Ргр)); СО232 (УЕЗР-К); СБ245 (р220/240); СО247 (зета-цепь СОЗ); СЭ261 (ТКА1Ь-К1, суперсемейство ΤΝΡ-Κ, член 10а); СО262 (ТКА1Ь-К2, суперсемейство ΤΝΕ-Κ, член 10Ь) ;
СБ263 (ТКА1Ь-К3, сулерсемейство ΤΝΡ-Κ, член Юс); СО264 (ТКА1ЬК4, суперсемейство ΤΝΕ-Κ, член 10ά); СО265 (ТКАЫСЕ-К,
- 16 022699 суперсемейство ΤΝΡ-Ε, член 11а); С0267 (ТАС1, суперсемейство
ΤΝΓ-Ε, член 13В); СО268 (ВАРГЕ, сулерсемейство ΤΝΡ-Ε, член
13С); СР269 (ВСМА, суперсемейство ΤΝΡ-Ε, член 16); СО275 (В7Н2,
1СОЗЬ); ΟΌ277 (ВТЗ.1.семейство В7; бутирофилин 3); СО295 (ЬЕРЕ); СО298 (АТР1ВЗ рз-субъединица Ыа/К-АТФазы); СОЗООа (СМЕР-35Н); СОЗООс (СМЕГ-35А); С0305 (ЬА1К1); СО307 (1ЕТА2);
СО315 (СО9Р1); СО316 (ЕИ12); СР317 (ВЗТ2); СБ319 (СЕАСС,
5ЬАМР7); СР321 (ЛАМ1); СО322 (ЛАМ2); СО«327 (сиглек-6, СОЗЗЬ);
СО68 (др 100, макросиалин); СХСЕ5; УЪА-4; МНС II класса; поверхностный 1дМ; поверхностный 1дО; АРЕЬ; и/или ВАРР-Е;
где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают те, которые предусмотрены в других местах данного документа.
В некоторых вариантах осуществления нацеливание на В-клетки может быть выполнено с помощью любой нацеливающей части, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), которая заметно экспрессируется и/или представлена на В-клетках при активации (т.е. маркер активированных В-клеток). Иллюстративные маркеры активированных В-клеток включают, без ограничения,
СО1а (Е4, Тб, НТА-1); СР1Ь (Е1); С015з (сиалилЛьюис X); СБ15и (3'-сульфо-Льюис X); С015зи (6-сульфосиалилЛьюис X); СО30 (Вег-Н2, Κί-1); СО69 (ΑΙΜ, ΕΑ 1, МЬЕЗ, др34/28,
УЕА) ; СО70 (Κί-24, СО27 лиганд); СО80 (В7, В7-1, ВВ1); СО86 (В7-2/В70); СО97 (ВЬКОО/Р12); СР125 (1Ь~5Ес<); СО126 (1Ь-бЕа);
СО138 (синдекан-1, гепарансульфат-протеогликан); СО152 (СТЬА4); СО252 (ОХ40Ь, суперсемейство ТНР(лиганд), член 4); СО253 (ТЕАТЬ, суперсемейство ТЫР(лиганд), член 10); СО279 (РО1);
СО289 (ТЬЕ9, ТОЬЬ-подобный рецептор 9); и СБ312 (ЕМЕ2);
где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают те, которые предусмотрены в других местах данного документа.
В-клеточный антиген означает любой антиген, который встречается в природе или может быть сконструирован для того, чтобы узнаваться В-клеткой, и запускает (естественным образом или будучи сконструированным, как известно в области техники) иммунный ответ у В-клетки (например, антиген, который специфически распознается В-клеточным рецептором на В-клетке). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном, также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Вклеточные антигены включают, без ограничения, белки, пептиды, малые молекулы и углеводы. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является небелковым антигеном (т.е. не является белковым или пептидным антигеном). В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является углеводом, связанным с инфекционным агентом. В некоторых вариантах осуществления Вклеточный антиген является гликопротеином или гликопептидом, связанным с инфекционным агентом. Инфекционный агент может быть бактерией, вирусом, грибом, простейшим, паразитом или прионом. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является слабоиммуногенным антигеном. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является веществом, которым злоупотребляют, или его частью. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является вызывающим привыкание веществом или его частью. Вызывающие привыкание вещества включают, без ограничения, никотин, наркотическое средство, средство от кашля, транквилизатор и седативное средство. В некоторых вариантах осуществления В-клеточным антигеном является токсин, например токсин из химического оружия или естественных источников, или загрязняющее вещество. В-клеточный антиген также может быть средством, вредным для окружающей среды. В других вариантах осуществления В-клеточный антиген является аллоантигеном, аллергеном, контактным сенсибилизирующим веществом, антигеном дегенеративного заболевания, гаптеном, антигеном инфекционного заболевания, раковым антигеном, антигеном атопического заболевания, вызывающим привыкание веществом, ксеноантигеном или ферментом нарушения обмена веществ или продуктом данного фермента.
Биоразлагаемый полимер означает полимер, который распадается с течением времени при введении в организм субъекта. Биоразлагаемый полимер включает, без ограничения, сложные полиэфиры, поликарбонаты, поликетали или полиамиды. Такие полимеры могут включать поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. В некоторых вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер простого полиэфира,
- 17 022699 например поли(этиленгликоля), и сложного полиэфира, поликарбоната или полиамида или другой биоразлагаемый полимер. В вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер поли(этиленгликоля) и поли(молочной кислоты), поли(гликолевой кислоты), блок-сополимера(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактона. В некоторых вариантах осуществления, однако, биоразлагаемый полимер не включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль), или состоит только из простого полиэфира. В целом, для применения в составе синтетического наноносителя биоразлагаемый полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С. Биоразлагаемый полимер в вариантах осуществления имеет средневесовой молекулярный вес в диапазоне от приблизительно 800 до приблизительно 50000 Да, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В некоторых вариантах осуществления средневесовой молекулярный вес составляет от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да, предпочтительно от 800 до 10000 Да, который определяют с помощью гельпроникающей хроматографии. В других вариантах осуществления средневесовой молекулярный вес составляет от 1000 до 10000 Да, что определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В варианте осуществления биоразлагаемый полимер не включает поликеталь.
Вводят совместно означает введение двух или более лекарственных средств субъекту таким способом, который коррелирует во времени. В вариантах осуществления совместное введение может происходить путем введения двух или более лекарственных средств в одной лекарственной форме. В других вариантах осуществления совместное введение может охватывать введение двух или более лекарственных средств в различных лекарственных формах, но в определенном промежутке времени, предпочтительно в пределах 1 месяца, более предпочтительно в пределах 1 недели, еще более предпочтительно в пределах 1 суток и еще более предпочтительно в пределах 1 ч.
Связывают, или связанный, или связывает (и подобное) означает присоединенный к или содержащийся в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления связывание является ковалентным. В некоторых вариантах осуществления ковалентное связывание опосредовано одним или несколькими линкерами, полимерами или их элементарными звеньями. В некоторых вариантах осуществления связывание является нековалентным. В некоторых вариантах осуществления нековалентное связывание опосредовано взаимодействиями зарядов, аффинными взаимодействиями, координационной связью металлов, физической адсорбцией, взаимодействиями типа хозяин-гость, гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями ТТ укладки, взаимодействиями водородных связей, взаимодействиями Ван-дер-Ваальса, магнитными взаимодействиями, электростатическими взаимодействиями, дипольдипольными взаимодействиями и/или их комбинациями. В вариантах осуществления связывание может появляться в контексте инкапсуляции в синтетические наноносители с использованием традиционных методик. Любое из вышеупомянутых связываний может быть организовано так, чтобы быть на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению.
Происходящий от означает адаптированный или модифицированный по сравнению с исходным источником. Например, в качестве неограничивающего примера, пептидный антиген, происходящий от инфекционного штамма, может иметь несколько искусственных аминокислотных остатков, которые замещают естественные аминокислотные остатки, обнаруживаемые в исходном антигене, который обнаруживается у инфекционного штамма. Адаптации или модификации могут быть по ряду причин, включая, без ограничения, повышенную специфичность, более легкий процессинг антигена или повышенную безопасность.
Лекарственная форма означает лекарство в среде, транспортере, носителе или устройстве, пригодном для введения субъекту.
Эффективное количество композиции по данному изобретению представляет собой количество, эффективное для определенной цели. Например, если эффективное количество предназначено для терапевтической цели, то количество является эффективным для лечения, ослабления, улучшения, облегчения, замедления начала, ингибирования развития, уменьшения тяжести и/или уменьшения частоты одного или нескольких симптомов или признаков заболевания, расстройства и/или состояния, приведенных в данном документе.
Инкапсулировать означает заключать в синтетическом наноносителе, предпочтительно полностью заключать в синтетическом наноносителе. Большая часть или все вещество, которое инкапсулируется, не подвергается воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю. Инкапсуляция отличается от абсорбции, которая размещает большую часть или все вещество на поверхности синтетического наноносителя и позволяет веществу подвергаться воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю.
Проявляет рН-чувствительную диссоциацию означает, что связь между двумя частицами, такими как иммуномодулирующее средство, и синтетическим наноносителем или связывающей иммуномодулирующее средство частью значительно ослабляется или устраняется путем изменения рН среды. В вариантах осуществления соответствующие рН-чувствительные диссоциации могут удовлетворять любому из приведенных в данном документе соотношений или сочетаний.
ΙΑ (высв.) (4.5),% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ί часов, делен- 18 022699 ный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ΐ часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ί часов, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей). В вариантах осуществления ί равно 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч. В предпочтительных вариантах осуществления ί равно 24 ч.
ΙΑ (высв.) (7,4)ί% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 7,4 в течение ί часов, деленный на сумму вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 7,4 в течение ί часов, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 7,4 в течение ί часов, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей). В вариантах осуществления ί равно 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 42 или 30 ч. В предпочтительных вариантах осуществления ί равно 24 ч.
ΙΑ (4,5)ί1 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной средой при рН 4,5 в течение ί1 часов, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей. ΙΑ (4,5)ί2 определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной средой при рН 4,5 в течение ί2 ч, взятый как среднее образцов синтетических наноносителей. ί1 равно 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30 ч; ί2 равно 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28 ч; и ί1>ί2. В предпочтительных вариантах осуществления ί1 равно 24 ч, а ί2 равно 6 ч.
Иммуномодулирующее средство означает средство, которое модулирует иммунный ответ. Модулировать, как используется в данном документе, относится к индуцированию, усилению, стимуляции или направлению иммунного ответа. Подобные средства включают адъюванты, которые стимулируют (или поддерживают) иммунный ответ на антиген, но не являются антигеном или производным антигена. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство находится на поверхности синтетического наноносителя и/или заключено в синтетический наноноситель. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем через полимер или его элементарное звено.
В некоторых вариантах осуществления все иммуномодулирующие средства синтетического наноносителя идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит ряд различных типов иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит множество отдельных иммуномодулирующих средств, все из которых идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго один тип иммуномодулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго два различных типа иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит больше двух различных типов иммуномодулирующих средств.
Связывающая иммуномодулирующее средство часть представляет собой любую часть, посредством которой иммуномодулирующее средство связывается с синтетическим наноносителем. Такие части включают ковалентные связи, такие как амидная связь или сложноэфирная связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или нековалентно) иммуномодулирующее средство с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать загруженный полимер, с которым электростатически связывается иммуномодулирующее средство (например, иммуностимулирующая нуклеиновая кислота). В качестве другого примера, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать полимер или его элементарное звено, с которым ковалентно связывается иммуномодулирующее средство. В некоторых вариантах осуществления часть включает сложный полиэфир. В других вариантах осуществления часть включает поли(этиленгликоль), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блок-сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. Часть может также включать элементарное звено из любого из вышеупомянутых полимеров, такое как лактид или гликолид.
Лабильное иммуномодулирующее средство(средства) означает иммуномодулирующее средство или средства, которые являются нестабильными при физиологических условиях и распадаются до точки, где они более не являются фармакологически активными. В вариантах осуществления наблюдается, что лабильные иммуномодулирующие средства имеют период полувыведения из организма меньше 24, предпочтительно меньше 12, более предпочтительно меньше 10, еще более предпочтительно меньше 8 ч и еще более предпочтительно меньше 6 ч. В вариантах осуществления лабильные иммуномодулирующие средства включают имидазохинолины, производное аденина или олигонуклеотиды, которые включают 5'-СО-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей. В вариантах осуществления имидазохинолины вклю- 19 022699 чают имидазохинолиновые амины, имидазопиридиновые амины, 6,7-конденсированные циклоалкилимидазопиридиновые амины, имидазохинолиновые амины, имиквимод или резиквимод.
Максимальный размер синтетического наноносителя означает самый большой размер наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. Минимальный размер синтетического наноносителя означает самый маленький размер синтетического наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. Например, для сфероидального синтетического наноносителя максимальный и минимальный размер синтетического наноносителя были бы, по существу, идентичными и являлись бы величиной его диаметра. Подобным образом, для кубического синтетического наноносителя минимальный размер синтетического наноносителя был бы наименьшим из его высоты, ширины или длины, а максимальный размер синтетического наноносителя был бы наибольшим из его высоты, ширины или длины. В варианте осуществления минимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, составляет больше 100 нм. В варианте осуществления максимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90 синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 5 мкм. Предпочтительно минимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90 синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или больше 110, более предпочтительно равен или больше 120, более предпочтительно равен или больше 130 и все же более предпочтительно равен или больше 150 нм. Предпочтительно максимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 3 мкм, более предпочтительно равен или меньше 2, более предпочтительно равен или меньше 1 мкм, более предпочтительно равен или меньше 800, более предпочтительно равен или меньше 600 и все же более предпочтительно равен или меньше 500 нм. В предпочтительных вариантах осуществления максимальный размер по меньшей мере 75, предпочтительно по меньшей мере 80, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или больше 100, более предпочтительно равен или больше 120, более предпочтительно равен или больше 130, более предпочтительно равен или больше 140 и более предпочтительно также равен или больше 150 нм. Измерение размера синтетического наноносителя проводится суспендированием синтетического наноносителя в жидкой (обычно водной) среде с применением динамического светорассеяния (например, используя прибор Втооккауеп 2е1аРЛЬ8).
Полученный означает взятый без адаптации или модификации из исходного источника. Например, в вариантах осуществления антигены, полученные из источника, могут включать исходные аминокислотные остатки, обнаруживаемые в таком источнике. В других вариантах осуществления, например, антигены, полученные из источника, могут включать исходные молекулярные структуры, обнаруживаемые в таком источнике.
Олигонуклеотид означает нуклеотидную молекулу, имеющую 6-100, предпочтительно 8-75, более предпочтительно 10-50, еще более предпочтительно 15-25 и еще более предпочтительно 20 нуклеотидов. В варианте осуществления по данному изобретению олигонуклеотиды включают меньше 100, предпочтительно меньше 50, более предпочтительно меньше 25 и еще более предпочтительно меньше 10 нуклеотидов. Любые цитозиновые нуклеотиды (С), присутствующие в последовательности 5'-СО-3', которые входят в состав олигонуклеотида, являются неметилированными, С, присутствующие в частях олигонуклеотидов, отличные от тех, что в последовательности 5'-СО-3', которые входят в состав олигонуклеотида, могут быть метилированными или могут быть неметилированными. В вариантах осуществления олигонуклеотиды по данному изобретению включают остов, который включает одну или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей (означающие межнуклеотидные связи, которые являются нестабильными при физиологических условиях).
Нестабилизированная межнуклеотидная связь означает связь между двумя нуклеотидами, которые входят в состав олигонуклеотида и которые химически не модифицированы со стабилизацией остова или химически модифицированы для дестабилизации остова олигонуклеотида при физиологических условиях. Примером нестабилизированной межнуклеотидной связи является фосфодиэфирная связь. В вариантах осуществления остов олигонуклеотида по данному изобретению не включает стабилизирующие химические модификации, чья функция стабилизировать остов в физиологических условиях. В вариантах осуществления остов олигонуклеотида по данному изобретению включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций.
Фармацевтически приемлемый эксципиент означает фармакологически неактивное вещество, добавленное к композиции по данному изобретению для дальнейшего облегчения введения данной композиции. Примеры, без ограничения, фармацевтически приемлемых наполнителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные разбавители, различные сахара и типы крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли.
- 20 022699
Скорость высвобождения означает скорость, с которой удерживаемое иммуномодулирующее средство выходит из композиции, например наноносителя, в окружающую среду в тесте высвобождения ш уПго. Сначала получают синтетический наноноситель для тестирования высвобождения посредством размещения в соответствующей среде высвобождения ш νίΙΐΌ. Это обычно осуществляется посредством замены буфера после центрифугирования с осаждением синтетического наноносителя и ресуспендирования синтетических наноносителей в мягких условиях. Данный анализ начинают путем размещения образца при 37°С в соответствующем приборе с контролируемой температурой. В различные моменты времени забирают образец.
Синтетические наноносители отделяют от среды для высвобождения путем центрифугирования с осаждением синтетических наноносителей. Среду высвобождения анализируют на предмет иммуномодулирующего средства, которое диспергировалось из синтетических наноносителей. Иммуномодулирующее средство измеряют с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства. Осадок, содержащий остаток удерживаемого иммуномодулирующего средства, растворяют в растворителях или гидролизируют основанием с освобождением удерживаемого иммуномодулирующего средства из синтетических наноносителей. Остаток, содержащий иммуномодулирующее средство, также затем измеряют с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства, которые не высвободились на данный момент времени.
Равновесие масс ограничивается иммуномодулирующим средством, которое было высвобождено в среду высвобождения, и тем, что остается в синтетических наноносителях. Данные представлены в виде высвобожденной фракции или чистого высвобожденного веса, представленного как микрограммы, высвобожденные за период времени.
Субъект означает животное, включая млекопитающих, таких как человек и приматы; птиц; животных домашнего хозяйства или фермы, таких как кошки, собаки, овцы, козы, крупный рогатый скот, лошади и свиньи; лабораторных животных, таких как мыши, крысы и морские свинки, рыбы и тому подобное.
Синтетический наноноситель (синтетические наноносители) означает дискретный объект, который не встречается в природе и который обладает по меньшей мере одним размером, который меньше или равен 5 мкм. Наночастицы альбумина специально включены в качестве синтетических наноносителей.
Синтетические наноносители включают полимерные наночастицы. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать одну или несколько полимерных матриц. Синтетические наноносители, однако, могут также включать прочие наноматериалы и могут быть, например, липидно-полимерными наночастицами. В некоторых вариантах осуществления полимерная матрица может быть окружена покрывающим слоем (например, липосома, липидный монослой, мицелла и т.д.). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель не является мицеллой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать ядро, содержащее полимерную матрицу, окруженную липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.). В некоторых вариантах осуществления различные элементы синтетических наноносителей могут быть связаны с полимерной матрицей.
Синтетические наноносители могут содержать один или несколько липидов. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липосому. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный бислой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный монослой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать мицеллу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать неполимерное ядро (например, металлическую частицу, квантовую точку, керамическую частицу, костную частицу, вирусную частицу, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы и т.д.), окруженное липидным слоем (например, липидный бислой, липидный монослой и т.д.).
Синтетические наноносители могут включать наночастицы на основе липидов, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе петида или белка (такие как наночастицы альбумина). Синтетические наноносители могут быть рядом различных форм, включая, без ограничения, сфероидальную, кубическую, пирамидальную, вытянутую, цилиндрическую, тороидальную и тому подобное. Синтетические наноносители согласно данному изобретению имеют одну или несколько поверхностей. Примеры синтетических наноносителей, которые могут быть адаптированы для использования в практическом применении данного изобретения, включают (1) биоразлагаемые наночастицы, раскрытые в патенте США № 5543158, ОгеГ е! а1., (2) полимерные наночастицы из опубликованной заявки на патент США № 20060002852, 8а11/тап е! а1., (3) сконструированные литографическим способом наночастицы из опубликованной заявки на патент США 20090028910, Ое8ипопе е! а1., (4) раскрытие \УО 2009/051837, уоп Лпйпап е! а1., или (5) наночастицы, раскрытые в опубликованной заявке на патент США № 2008/0145441, Репайек е! а1.
Синтетические наноносители согласно данному изобретению, которые имеют минимальный раз- 21 022699 мер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхности с гидроксильными группами, которые активируют комплемент, или, альтернативно, имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, не являющихся гидроксильными группами, которые активируют комплемент. В предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхность, которая, по сути, активирует комплемент, или, альтернативно, имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, которые, по сути, не активируют комплемент. В более предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхность, которая активирует комплемент, или, альтернативно, имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, которые не активируют комплемент. В вариантах осуществления синтетические наноносители могут иметь соотношение сторон более 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или более 1:10.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются сферами или сфероидами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители плоские или пластинчатые. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители кубы или кубические. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители овалы или эллипсы. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители цилиндры, конусы или пирамиды.
Часто желательно применение популяции синтетических наноносителей, которая является относительно равномерной с точки зрения размера, формы и/или композиции так, чтобы каждый синтетический наноноситель имел сходные свойства. Например, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90 или по меньшей мере 95% синтетических наноносителей может иметь минимальный размер или максимальный размер, который попадает в пределы 5, 10 или 20% от среднего диаметра или среднего размера. В некоторых вариантах осуществления популяция синтетических наноносителей может быть гетерогенной по отношению к размеру, форме и/или композиции.
Синтетические наноносители могут быть сплошными или полыми и могут содержать один или несколько слоев. В некоторых вариантах осуществления каждый слой имеет уникальную композицию и уникальные свойства по отношению к другому слою(другим слоям). Чтобы дать лишь один пример, синтетические наноносители могут иметь структуру ядро/оболочка, в которой ядро является одним слоем (например, полимерное ядро) и оболочка является вторым слоем (например, липидный бислой или монослой). Синтетические наноносители могут включать несколько разных слоев.
Т-клеточный антиген означает любой антиген, который распознается и инициирует иммунный ответ в Т-клетках (например, антиген, который специфически распознается Т-клеточным рецептором на Т-клетках или клетках ΝΚΤ посредством презентации антигена или его части, которые связаны с молекулой класса I или класса II главного комплекса гистосовместимости (МНС) или связаны с СЭ1комплексом). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном, также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Т-клеточные антигены обычно являются белками или пептидами. Т-клеточные антигены могут быть антигенами, которые стимулируют ответ СЭ8+ Т-клеток, ответ СЭ4+ Т-клеток или оба из них. Т-клеточные антигены, следовательно, в некоторых вариантах осуществления могут эффективно стимулировать оба варианта ответа.
В некоторых вариантах осуществления Т-клеточный антиген является Т-хелперным антигеном, который является Т-клеточным антигеном, который может давать усиленный ответ на несвязанный Вклетками антиген благодаря стимуляции помощи Т-клеток. В вариантах осуществления Т-хелперный антиген может содержать один или несколько пептидов, происходящих от столбнячного токсина, вируса Эпштейна-Барр, вируса гриппа, респираторно-синцитиального вируса, вируса кори, вируса, вызывающего эпидемический паротит, вируса краснухи, цитомегаловируса, аденовируса, дифтерийного анатоксина или РАОКЕ-пептида. В других вариантах осуществления Т-хелперный антиген может включать один или несколько липидов или гликолипидов, включая, но без ограничений: α-галактозилцерамид (αСа1Сег), гликосфинголипиды, связанные по α-положению (из 8рЫп§отопа8 8рр.), галактозилдиацилглицеролы (из ВоггеБа ЬигдбогГеп). липофосфогликан (из БеЫинаша άοηοναηί) и фосфатидилинозитола тетраманнозид (Р1М4) (из ΜусοЬасΐе^^ит 1ергае). Дополнительные липиды и/или гликолипиды, пригодные в качестве Т-хелперных антигенов, см. V. Οοπιπάοίο е! а1., Натпеккшд шуапап! ΝΚΤ се11§ ίη νасс^ηаί^οη 81га1ед1е8, №-11иге Кеу. 1ттип., 9:28-38 (2009). В вариантах осуществления СЭ4+ Т-клеточные антигены могут быть производными С.О4+ Т-клеточных антигена, полученного из источника, например природного источника. В таких вариантах осуществления последовательности С.О4+ Т-клеточных антигенов, такие как те пептиды, которые связываются с МНС II, могут быть по меньшей мере на 70, 80, 90 или 95% идентичны антигену, полученному из данного источника. В вариантах осуществления Т-клеточный антиген, предпочтительно Т-хелперный антиген, может быть связанным с или несвязанным с синтетическим наноносителем.
Его элементарное звено относится к мономерному элементарному звену полимера, при этом по- 22 022699 лимер в целом составлен из ряда связанных мономеров.
Вакцина означает композицию вещества, которая усиливает иммунный ответ на конкретный патоген или заболевание. Вакцина обычно содержит факторы, которые стимулируют иммунную систему субъекта для узнавания специфического антигена как чужого и его устранения из организма субъекта. Вакцина также создает иммунологическую память, поэтому антиген будет быстро узнаваться и на него будет быстро дан ответ, если человек подвергнется вторичному заражению. Вакцины могут быть профилактическими (например, для предупреждения будущей инфекции каким-либо патогеном) или терапевтическими (например, вакцина против опухолеспецифического антигена для лечения рака). Вакцины по данному изобретению могут включать одно или несколько из приведенных в данном документе синтетических наноносителей или композиций.
Способы создания изобретенных соединений, конъюгатов или синтетических наноносителей
Иммуномодулирующее средство может быть связано с синтетическим наноносителем любым способом так, чтобы диссоциация иммуномодулирующего средства от синтетического наноносителя удовлетворяла диссоциативным соотношениям, приведенным в данном документе. Способы определения того, удовлетворяют или нет иммуномодулирующие средства синтетических наноносителей приведенным в данном документе диссоциативным соотношениям, приведены выше и в примерах.
Олигонуклеотиды по данному изобретению могут быть инкапсулированы в синтетические наноносители с помощью ряда способов, включая, но без ограничений, С. Αδίβίβ с1 а1., δνηΐΐιοδίδ апй сНагасЮпζαίίοη οί РЬОА папорагйс1е8, ί. Вюта1ег. 8ст. Ро1утег Ейп, Уо1. 17, Νο. 3, ρ. 247-289 (2006); К. Ανβοιίδίαίίδ Реду1а1ей Ρο1у(^асί^йе) апй Рο1у(^асί^йе-Сο-Ο1усο1^йе) №июрагПс1е8: ΡΐΌραΐΗίίοη, Ргорегйез апй ΡοβδίϋΚ АррПса1юп8 ш Эгид Песету, Сиггеп, Игид Песету, 1:321-333 (2004); С. Ке18 е, а1., №июепсар8и1аί^οη I. ΜеίЬοЙ8 ίοτ ρ^еρа^аί^οη οί йгид-^айей ρο1уте^^с пагюрагПс^, Миютейюте, 2:8- 21 (2006). Могут быть использованы другие способы, пригодные для инкапсулирования олигонуклеотидов в синтетические наноносители, включая, без ограничения, способы, раскрытые в патенте Соединенных Штатов № 6632671, Ипдег, 14 октября 2003 г.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство ковалентно связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части (например, полимера или его элементарного звена). В целом полимер или его элементарное звено может быть ковалентно связано с иммуномодулирующим средством несколькими способами.
Следующие способы или любой этап из приведенных способов приводятся в качестве примеров и могут быть осуществлены при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакция или любой этап приведенных способов могут быть осуществлены в присутствии растворителя или смеси растворителей.
Неограничивающие примеры растворителей, которые могут быть пригодны для применения в данном изобретении, включают, без ограничения, р-крезол, толуол, ксилол, мезителен, диэтиловый эфир, гликоль, петролейный эфир, гексан, циклогексан, пентан, дихлорметан (или метиленхлорид), хлороформ, диоксан, тетрагидрофуран (ТНР), диметилсульфоксид (ΌΜδΘ), диметилформамид (ΌΜΡ), этилацетат (ЕЮАс), триэтиламин, ацетонитрил, метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ), Ν-метилпиррилидон (ΝΜΡ), диметилацетамид (ΌΜΑΟ), изопропанол (ΙΡΑ) их смеси или подобное. В некоторых случаях растворитель выбран из группы, состоящей из этилацетата, метиленхлорида, ТНР, ΌΜΡ, ΝΜΡ, ЭМЛС, ΌΜδΘ и толуола или их смесей.
Реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при любой подходящей температуре. В некоторых случаях реакция или любой этап из приведенных способов осуществляют при приблизительно комнатной температуре (например, приблизительно 25, приблизительно 20°С, от приблизительно 20 до приблизительно 25°С и подобное). В некоторых случаях, однако, реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при температуре ниже или выше комнатной температуры, например при приблизительно -20, при приблизительно -10, при приблизительно 0, при приблизительно 10, при приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50, приблизительно 60, приблизительно 70, приблизительно 80, приблизительно 90, приблизительно 100, приблизительно 120, приблизительно 140, приблизительно 150°С или выше. В конкретных вариантах осуществления реакцию или любой этап из приведенных способов проводят при температурах от 0 до 120°С. В некоторых вариантах осуществления реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при более чем одной температуре (например, реагенты, добавляемые при первой температуре, и реакционную смесь, перемешиваемую при второй, где переход от первой температуры ко второй температуре может быть постепенным или быстрым).
Реакции или любому этапу из приведенных способов может быть позволено проходить в течение любого подходящего периода времени. В некоторых случаях реакции или любому этапу из приведенных способов позволяют проходить в течение приблизительно 10, приблизительно 20, приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50 мин, приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 4, приблизительно 8, приблизительно 12, приблизительно 16, приблизительно 24 ч, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4 суток или дольше. В некоторых случаях аликвоты реакционной смеси могут быть собраны и проанализированы в промежуточное время для определения хода реакции или лю- 23 022699 бого этапа из приведенных способов. В некоторых вариантах осуществления реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены в инертной атмосфере в безводных условиях (например, в атмосфере азота или аргона, в безводных растворителях и т.д.).
Продукты реакции и/или промежуточные продукты могут быть выделены (например, посредством дистилляции, колоночной хроматографии, экстракции, осаждения и т.д.) и/или проанализированы (например, газожидкостной хроматографией, высокоэффективной жидкостной хроматографией, ядерной магнитно-резонансной спектроскопией и т.д.) с использованием общеизвестных методик. В некоторых случаях синтетический наноноситель может быть проанализирован для определения загрузки иммуномодулирующего средства, например, с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Полимеры могут иметь любой подходящий молекулярный вес. Например, полимеры могут иметь низкий или высокий молекулярный вес. Неограничивающие значения молекулярного веса включают 100, 200, 300, 500, 750, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000 Да или более. В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да. Молекулярный вес полимера может быть определен с помощью гельпроникающей хроматографии.
Ниже в качестве примера приведены реакции, которые не подразумеваются как ограничивающие.
Способ 1.
Полимер (например, ΡΕΑ, ΡΕΟΑ) или его элементарное звено по меньшей мере с одной кислотной концевой группой превращают в реакционноспособное ацилирующее средство, такое как ацилгалогенид, ацилимидазол, активный сложный эфир и т.д., с помощью активирующего реагента, обычно применяемого при синтезе амидов.
В этом двухэтапном способе получаемый в результате активированный полимер или его элементарное звено (например, ΡΕΑ, ΡΕΟΑ) выделяют и затем вводят в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, К848) в присутствии основания с получением требуемого конъюгата (например, ΡΕΑ-Κ848), например, как показано в следующей схеме:
Активирующие реагенты, которые могут быть применены для превращения полимеров или их элементарных звеньев, таких как ΡΕΑ или ΡΕΟΑ, в активированную ацилированную форму, включают, без ограничения, циануровый фторид, Ν,Ν-тетраметилфторформамидингексафторфосфат (ТЕРН); ацилимидазолы, такие как карбонилдиимидазол (/ΌΙ), Ц№-карбонил-бис-(3-метилимидазол)трифлат (СВМ1Т); и активные сложные эфиры, такие как Ν-гидроксилсукцинимид (ΝΗδ или НО§и), в присутствии карбодиимида, такого как Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (ЭСС), ^этил-№-(3-(диметиламино)пропил)карбодиимидгидрохлорид (ЕЭС) или Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимид (ΌΙΟ); Ν,Ν'дисукцинимидилкарбонат (Э§С); пентафторфенол в присутствии ЭСС, или ЕЭС, или ЭК.'; пентафторфенилтрифторацетат.
Активированный полимер или его элементарное звено можно выделить (например, посредством осаждения, экстракции и т.д.) и/или хранить в подходящих условиях (например, при низкой температуре в атмосфере аргона) после активации или можно сразу использовать. Активированный полимер или его элементарное звено можно ввести в реакцию с иммуномодулирующим средством при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакцию осуществляют в присутствии основания и/или катализатора. Неограничивающие примеры оснований/катализаторов включают диизопропилэтиламин (ΌΙΡΕΑ) и 4-диметиламинопиридин (ΌΜΑΡ).
Способ 2.
Полимер или его элементарное звено (например, ΡΕΑ, ΡΕΟΑ, имеющие любой пригодный молекулярный вес) с кислотной концевой группой вступают в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, К848) в присутствии активирующего или связывающего реагента, который превращает полимер или его элементарное звено (например, ΡΕΑ, ΡΕΟΑ) с реакционноспособным ацилирующим средством ίη 81Щ, с получением требуемого конъюгата (например, ΡΕΑ-Κ848, ΡΕΟΑ-Κ848).
- 24 022699 нЛе-ААу™
О 1 η О рьА-согн или он
Б1
Связывающий реагент основание/растворитель
ΡΙ.Α-Ρ348 или
Р1ОА-РМ8
РЮА-СО2Н
Связующие вещества или активаторы включают, но без ограничений, активаторы, используемые в присутствии карбодиимида, такого как БОС, или ЭСС, или Э1С, такого как 1-гидроксибензотриазол (НОВ!), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (НОЛ!), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин (НОΌ№ΐ), Ν-гидроксисукцинимид (ΝΉ8 или НО8и), пентафторфенол (РРР); активаторы без карбодиимида: соли фосфония, такие как О-бензотриазол-1-илокси-трис-(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВОР), О-бензотриазол-1-илокси-трис-(пирролидин)фосфония гексафторфосфат (РуВОР), 7азабензотриазол-1-илокси-трис-(пирролидин)фосфония гексафторфосфат (РуАОР); соли урония, такие как О-бензотриазол-1-илокси-трис-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат (ТВТИ) и гексафторфосфат (НВТи), О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (НАТИ), О-(1,2дигидро-2-оксо-1-пиридил)-1,1,3,3-тетраметил-урония тетрафторборат (ТРТИ); галогенурониевые и галогенфосфониевые соли, такие как бис-(тетраметилен)фторформамидиниевый гексафтофосфат (ВТРРН), бром-трис-(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВгоР), бромтрипирролидинфосфония гексафторфосфат (РуВгоР) и хлортрипирролидинфосфония гексафторфосфат (РуС1ор); производные бензотриазина, такие как О-(3,4-дигидро-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил)-Ы,Ы,Ы',Ы'-тетраметилурония тетрафторборат (ТОВТИ) и 3-(диэтилоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3Н)-он (ЭЕРВТ). Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают ΌΜΡ, ЭСМ, толуол, этилацетат и т.д., которые описаны в данном документе.
- 25 022699
Способ 3.
Иммуномодулирующие средства, такие как К848, также могут быть связаны с полимерами или их элементарными звеньями, которые заканчиваются гидроксильной группой. Такие полимеры или их элементарные звенья включают полиэтиленгликоль, полилактид, сополимер полилактида и гликолида, поликапролактон и другие подобные сложные полиэфиры или их элементарные звенья. В целом реакция протекает следующим образом, где имид с общей структурой (IV) будет вступать в реакцию с концевым гидроксилом вышеупомянутых полимеров или их элементарных звеньев при помощи катализатора, используемого в реакциях полимеризации с раскрытием лактонового кольца. Получаемый в результате продукт реакции (ΙΙ) связывает амидсредства с полимером или его элементарным звеном посредством сложноэфирной связи. Соединения с формулами (IV) и (II) представляют собой следующее:
где К1=Н, ОН, 8Н, ΝΉ2 или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино; К2=Н, алкил или замещенный алкил; Υ=Ν или С; К3 отсутствует, если Υ=Ν; или представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, или объединен с К4 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены, если Υ=^ К4 представляет собой Н или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино, если не объединен с К3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами пиридинового кольца, к которому они присоединены; или объединен с К3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; К5 представляет собой полимер или его элементарное звено; X представляет собой С, Ν, О или 8; каждый из К6 и К7 независимо представляет собой Н или замещен и каждый из К9, К10, Кп и К12 независимо представляет собой Н, галоген, ОН, тио, ΝΉ2 или замещенный или незамещенный алкил, арил, гетероциклил, алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, алкиламино или ариламино.
Катализаторы включают, без ограничения, фосфазиновые основания, 1,8-диазабициклоундец-7-ен (ΌΒϋ), 1,4,7-триазабициклодецен (ΤΒΌ) и ^метил-1,4,7-триазабициклодецен (ΜΤΌΒ). В данной области техники известны и приводятся другие катализаторы, например у КатЬег е! а1., Огдапоса1а1у!1с ШпдОретпд Ро1утеп/а1юп. СНет. Кеу., 2007, 107, 58-13-5840. Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают метиленхлорид, хлороформ и ТНР.
Конкретный пример реакции, осуществляемой по такому способу, показан ниже
где К5-ОН содержит две гидроксильные группы (например, диол, НО-К5-ОН), каждая из которых функционализирована при помощи реакции с имидом, связанным с К848. В некоторых случаях НО-К5ОН представляет собой полидиол, такой как поли(гексаметилкарбонат)диол или поликапролактондиол.
В вариантах осуществления, в которых задействован полидиол, одну из групп диола можно защитить защитной группой (например, !-бутилоксикарбонил), таким образом полидиолом может быть соединение с формулой НО-К5-ОР, в которой Р является защитной группой. После реакции с иммуномодулирующим средством с образованием конъюгата иммуномодулирующего средства-К5-ОР, причем защитную группу можно удалить и можно ввести в реакцию вторую группу диола с любым подходящим реагентом (например, РЬОЛ, РЬЛ).
- 26 022699
Способ 4.
Конъюгат (например, Р848-РЬА) можно образовать посредством проводимой в одном сосуде полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, Р848) с полимером или его элементарным звеном (например, следующей схеме:
Ό/Ь-лактид) в присутствии катализатора, например, как показано в
При одностадийной процедуре иммуномодулирующее средство и полимер или его элементарное звено можно объединить в единую реакционную смесь, содержащую катализатор. Реакция может быть объединена при подходящей температуре (например, при приблизительно 150°С), а полученный в результате конъюгат может быть выделен с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают ОМАР и этилгексаноат олова.
Способ 5.
Конъюгат может быть образован посредством двустадийной полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, Р848) с одним или несколькими полимерами или их элементарными звеньями (например, Ό/Ь-лактид или гликолид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме:
Полимеры или их элементарные звенья могут быть сначала объединены и, в некоторых случаях, нагреты (например, до 135°С) с образованием раствора. В раствор, содержащий полимеры или их элементарные звенья, может быть добавлено иммуномодулирующее средство с последующим добавлением катализатора (например, этилгексаноата олова). Полученный в результате конъюгат может быть выделен с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают ЭМАР и этилгексаноат олова.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть ковалентно связанными с полимерной матрицей. В некоторых вариантах осуществления ковалентное соединение опосредовано линкером. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть нековалентно связаны с полимерной матрицей. Например, в некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть инкапсулированы внутри, окружены и/или диспергированы по полимерной матрице. Альтернативно или дополнительно, иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть связаны с полимерной матрицей гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями зарядов, силами Ванн-дер-Ваальса и т.д.
Иммуномодулирующие средства могут быть также инкапсулированы в наноносители. Наноносители, таким образом, могут быть из любого материала, чувствительного к рН, при условии, что полученные по данному изобретению синтетические наноносители удовлетворяют приведенным в данном документе соотношениям диссоциаций. Такие синтетические наноносители хорошо известны в данной области техники и включают поликеталевые наноносители, рН-чувствительные липосомы, разбухающие под действием кислоты сшитые наночастицы, такие как в Спхе! е! а1., 1. Ат. СЬет. 8ос., 2009, 131, 2469-2471, которые в своем изначальном состоянии являются гидрофобными, но при клеточной интернализации трансформируются в гидрофильную структуру (гидрогелевая частица), и полимерные наночастицы, такие как в диссертации Спхе! с названием ИеЬуегу ой Рас1Ьахе1 У1а рН-Рехропх1уе Ро1утепс №апорагЪс1ех йог РгеуепЬоп ой Ьипд Сапсег апб Мехо!ЬеЬота Ресиггепсе, О1йо 8!а!е ИтуегхИу, 2003. рНчувствительные наноносители также включают такие, которые включают полимеры, которые растворяются при рН ниже 6, полимеры, которые разбухают при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители состоят не из поликеталевого материала. В другом варианте осуществления синтетические наноносители не являются мицеллами.
Широкое разнообразие полимеров и способов формирования полимерных матриц посредством этого общеизвестны. В основном полимерная матрица содержит один или несколько полимеров. Полимеры могут быть природными или неприродными (синтетическими) полимерами. Полимеры могут быть гомополимерами или сополимерами, содержащими два или несколько мономеров. С точки зрения последовательности, сополимеры могут быть статистическими, блок-сополимерами или состоять из комбинации статистических и блоковых последовательностей. Как правило, полимеры в соответствии с настоящим изобретением являются органическими полимерами.
- 27 022699
Примеры полимеров, подходящих для применения в данном изобретении, включают, без ограничения, полиэтилены, поликарбонаты (например, поли(1,3-диоксан-2он)), полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)), полигидроксикислоты (например, полиф-гидроксиалканоат)), полипропилфумераты, поликапролактоны, полиамиды (например, поликапролактам), полиацетали, простые полиэфиры, сложные полиэфиры (например, полилактид, полигликолид), сложные полиэфиры ортокислот, полицианоакрилаты, поливиниловые спирты, полиуретаны, полифосфазены, полиакрилаты, полиметакрилаты, полимочевины, полистиролы, полиамины и полисахариды (например, хитозан).
В некоторых вариантах осуществления полимеры в соответствии с данным изобретением включают полимеры, которые были одобрены к применению для людей Управлением по делам пищевых продуктов и медикаментов США (ΡΩΑ), 21 С.Р.К. § 177.2600, включая, без ограничения, сложные полиэфиры (например, полимолочной кислоты, сополимер полимолочной и полигликолевой кислот) поликапролактон, поливалеролактон, поли(1,3-диоксан-2он)); полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)); простые полиэфиры (например, полиэтиленгликоль); полиуретаны; полиметакрилаты; полиакрилаты и полицианоакрилаты.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофильными. Например, полимеры могут содержать анионные группы (например, фосфатную группу, сульфатную группу, карбоксилатную группу); катионные группы (например, четвертичную аминогруппу) или полярные группы (например, гидроксильную группу, тиоловую группу, аминогруппу). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофильную полимерную матрицу, образует гидрофильное окружение внутри синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофобными. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофобную полимерную матрицу, образует гидрофобное окружение внутри синтетического наноносителя. Выбор гидрофильности или гидрофобности полимера может оказать влияние на характер материалов, которые заключены (например, связаны) в синтетическом наноносителе.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью одного или нескольких частей и/или функциональных групп. Различные части или функциональные группы могут быть использованы в соответствии с данным изобретением. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью РЕС, углеводов и/или ациклических полиацеталей, производных полисахаридов (Γαρίδον, 2001, АС8 8утро5шт 5спс5. 786:301).
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью липидных или жирно-кислотных групп. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или несколькими из масляной, капроновой, каприловой, каприновой, лауриновой, миристиновой, пальмитиновой, стеариновой, арахидиновой, бегеновой или лигноцериновой кислот. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или несколькими из пальмитолеиновой, олеиновой, вакценовой, линолевой, альфа-линоленовой, гамма-линоленовой, арахидоновой, гадолеиновой, арахидоновой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой или эруковой кислот.
В некоторых вариантах осуществления полимерами могут быть сложные полиэфиры, в том числе включая сополимеры, содержащие элементарные звенья гликолевой кислоты и молочной кислоты, такие как сополимер полимолочной кислоты и полигликолевой кислоты и сополимер полилактида и полигликолида, совместно именуемые здесь РЬСА; и гомополимерами, включающими элементарные звенья гликолевой кислоты, упомянутые в настоящем документе как РСА, и элементарные звенья молочной кислоты, такие как поли-Ь-молочная кислота, поли-Э-молочная кислота, поли-О,Ь-молочная кислота, поли-Ь-лактид, поли-Э-лактид и поли-О,Ь-лактид, совместно именуемые здесь РЬА. В некоторых вариантах осуществления образцы сложных полиэфиров включают, например, полигидроксикислоты; РЕС-сополимеры и сополимеры лактида и гликолида (например, сополимеры РЬА-РЕС, сополимеры РСА-РЕС, сополимеры РЬСА-РЕС и их производные). В некоторых вариантах осуществления сложные полиэфиры включают, например, полиангидриды, сложный полиэфир ортокислоты, сополимеры сложного полиэфира ортокислоты-РЕС, поли(капролактон), сополимеры поли(капролактон)-РЕС, полилизин, сополимеры полилизин-РЕС, поли(этиленимин), сополимеры поли(этиленимин)-РЕС, сополимер(Ьлактида и Ь-лизина), сложный полиэфир серина, сложный полиэфир 4-гидрокси-Ь-пролина, поли[а-(4аминобутил)-Ь-гликолевая кислота] и их производные.
В некоторых вариантах осуществления полимер может быть РЬСА. РЬСА является биосовместимым и биоразлагаемым сополимером молочной кислоты и гликолевой кислоты, и различные формы РЬСА характеризуются соотношением молочная кислота:гликолевая кислота. Молочная кислота может быть Ь-молочной кислотой, Ό-молочной кислотой или Ό,Ρ-молочной кислотой. Скорость разложения РЬСА может быть регулирована путем изменения соотношения молочная кислота:гликолевая кислота. В некоторых вариантах осуществления РЬСА, который будет использоваться в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется соотношением молочная кислота:гликолевая кислота приблизительно 85:15, приблизительно 75:25, приблизительно 60:40, приблизительно 50:50, приблизительно 40:60, приблизительно 25:75 или приблизительно 15:85.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть одним или несколькими акриловыми
- 28 022699 полимерами. В определенных вариантах осуществления акриловые полимеры включают, например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, этоксиэтилметакрилаты, цианоэтилметакрилат, сополимер аминоалкилметакрилата, поли(акриловую кислоту), поли(метакриловую кислоту), сополимер алкиламида метакриловой кислоты, поли(метилметакрилат), поли(метакриловой кислоты ангидрид), метилметакрилат, полиметакрилат, сополимер поли(метилметакрилата), полиакриламид, сополимер аминоалкилметакрилата, сополимеры глицидилметакрилата, полицианакрилаты и комбинации, включающие один или несколько из вышеприведенных полимеров. Акриловый полимер может включать полностью полимеризованные сополимеры сложных эфиров акриловой и метакриловой кислот с низким содержанием групп четвертичного аммония.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть катионными полимерами. В целом, катионные полимеры могут конденсировать и/или защищать отрицательно заряженные нити нуклеиновых кислот (например, ДНК, РНК или их производных). Аминосодержащие полимеры, такие как поли(лизин) (2аипег е! а1., 1998, Абу. Эгид Ое1. Кеу., 30:97 и КаЬапоу е! а1., 1995, Вюсоп)ида!е Скет., 6:7), поли(этиленимин) (РЕ1; Вои88г£ е! а1., 1995, Ргос. Ыа!1. Асаб. 8сг., И8А, 1995, 92:7297) и поли(амидоамин) дендримеры (Кико№8ка-Ьа!а11о е! а1., 1996, Ргос. Ыа!1. Асаб. 8ск, И8А, 93:4897; Тапд е! а1., 1996, Вюсоп]ида1е Скет., 7:703 и Наепз1ег е! а1., 1993, Вюсоп)ида!е Скет., 4:372), являются положительно заряженными при физиологических значениях рН, образуют ионные пары с нуклеиновыми кислотами и опосредуют трансфекцию в различных клеточных линиях.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть разлагаемыми полиэфирами, несущими катионные боковые цепи (Ри!пат е! а1., 1999, Масгото1еси1е8, 32:3658; Ваггега е! а1., 1993, 1. Ат. Скет. 8ос, 115:11010; К\\оп е! а1., 1989, Масгото1еси1е8, 22:3250; Ьгт е! а1., 1999, 1. Ат. Скет. 8ос, 121:5633 и 2кои е! а1., 1990, Масгото1еси1е8, 23:3399). Примеры таких полиэфиров включают сополимер(Ь-лактида и лизина) (Ваггега е! а1., 1993, 1. Ат. Скет. 8ос, 115:11010), сложный полиэфир серина (2кои е! а1., 1990, Масгото1еси1е8, 23:3399), сложный полиэфир 4-гидрокси-Ь-пролина (Ри!пат е! а1., 1999, Масгото1еси1е8, 32:3658 и Ьгт е! а1., 1999, 1. Ат. Скет. 8ос, 121:5633) и сложный полиэфир 4гидрокси-Ь-пролина (Ри!пат е! а1., 1999, Масгото1еси1е8, 32:3658 и Ьгт е! а1., 1999, 1. Ат. Скет. 8ос, 121:5633).
Свойства этих и других полимеров и способы их получения хорошо известны в данном уровне техники (см., например, патенты США № 6123727, 5804178, 5770417, 5736372, 5716404, 6095148, 5837752, 5902599, 5696175, 5514378, 5512600, 5399665, 5019379, 5010167, 4806621, 4638045 и № 4946929; Аапд е! а1., 2001, 1. Ат. Скет. 8ос, 123:9480; Ьгт е! а1., 2001, 1. Ат. Скет. 8ос, 123:2460; Ьапдег, 2000, Асс. Скет. Ке8., 33:94; Ьапдег, 1999, 1. Соп!го1. Ке1еа8е, 62:7 и Икггск е! а1., 1999, Скет. Кеу., 99:3181). В целом различные методы синтеза определенных подходящих полимеров описаны в Сопсг8е Епсус1оребга о£ Ро1утег 8сгепсе апб Ро1утепс Атгпе8 апб Аттопгит 8а1!8, Еб. Ьу Оое!ка18, Регдатоп Рге88, 1980; Рггпсгр1е8 о£ Ро1утеп/акоп Ьу Обгап, 1окп Абеу & 8оп8, РоиПк Ебкгоп, 2004; Соп!етрогагу Ро1утег Скетг8ку Ьу А11соск е! а1., Ргеп!гсе-На11, 1981; Иетгпд е! а1., 1997, Ыа!иге, 390:386 и в патентах США № 6506577, 6632922, 6686446 и 6818732.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть линейными или разветвленными полимерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть дендримерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном сшиты друг с другом. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном свободны от сшивок. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, не подвергаясь этапу сшивания. Далее следует понимать, что соединения по данному изобретению и синтетические наноносители могут включать в себя блок-сополимеры, привитые сополимеры, сочетания, смеси и/или аддукты любого из вышеуказанных и других полимеров. Специалистам в данной области техники будет понятно, что полимеры, перечисленные в данном документе, представляют собой примерный, не являющийся исчерпывающим, список полимеров, которые могут быть применены в соответствии с данным изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут включать металлические частицы, квантовые точки, керамические частицы и т.д.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут необязательно содержать один или более амфифильных объектов. В некоторых вариантах осуществления амфифильный объект может способствовать получению синтетических наноносителей с повышенной стабильностью, улучшенной однородностью или повышенной вязкостью. В некоторых вариантах осуществления амфифильные объекты могут быть присоединены к внутренней поверхности липидной мембраны (например, липидного бислоя, липидного монослоя и т.д.). Многие амфифильные объекты, известные в данном уровне техники, подходят для применения при создании синтетических наноносителей в соответствии с данным изобретением. Такие амфифильные объекты включают, без ограничения, фосфоглицериды; фосфатидилхолины; дипальмитоилфосфатидилхолин (ЭРРС); диолеилфосфатидилэтаноламин (ПОРЕ); диолеилоксипропилтриэтиламмоний (ЭОТМА); диолеилфосфатидилхолин, холестерин, сложные эфиры холестерина; диацилглицерол; диацилглицеролсукцинат; дифосфатидилглицерин (ЭРРС); гексанодеканол, жирные спирты, такие как полиэтиленгликоль (РЕО); полиоксиэтилен-9-лауриловый простой эфир,
- 29 022699 поверхностно-активные жирные кислоты, такие как пальмитиновая кислота или олеиновая кислота, жирные кислоты, моноглицериды жирных кислот, диглицериды жирных кислот, амиды жирных кислот; сорбитантриолеат (§рал®85) гликохолат; сорбитанмонолаурат (8ран®20); полисорбат 20 (Т\уссп®20); полисорбат 60 (Т\уссп®60); полисорбат 65 (Т\уссп®65); полисорбат 80 (Т\уссп®80); полисорбат 85 (Т\уссп®85); полиоксиэтилена моностеарат; суфрактин; полоксомер; сорбитановый сложный эфир жирной кислоты, такой как сорбитантриолеат, лецитин; лизолецитин; фосфатидилсерин; фосфатидилинозитол; сфингомиелин; фосфатидилэтаноламин (цефалин); кардиолипин; фосфатидная кислота; цереброзиды; дицетилфосфат; дипальмитоилфосфатидилглицерол; стеариламин; додециламин; гексадециламин, ацетилпальмитат; глицеринрицинолеат; гексадецилстеарат; изопропилмиристат; тилоксапол; поли(этиленгликоль)5000-фосфатидилэтаноламин; поли(этиленгликоль)400-моностеарат; фосфолипиды, синтетические и/или природные моющие средства, имеющие высокие поверхностно-активные свойства; деоксихолаты; циклодекстрины; хаотропные соли; средства ионного спаривания, а также их комбинации. Компонентом амфифильного объекта может быть смесь различных амфифильных объектов. Специалистам в данном уровне техники будет понятно, что это - примерный, не являющийся исчерпывающим, перечень веществ с поверхностно-активным действием. Любое амфифильное средство может быть использовано при создании синтетических наноносителей, которые будут применены в соответствии с данным изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут необязательно включать один или несколько углеводов. Углеводы могут быть природными или синтетическими. Углевод может быть производным природного углевода. В определенных вариантах осуществления углевод включает моносахарид или дисахарид, включая, без ограничения, глюкозу, фруктозу, галактозу, рибозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, целлибозу, маннозу, ксилозу, арабинозу, глюкуроновую кислоту, галактуроновую кислоту, маннуроновую кислоту, глюкозамин, галактозамин и нейраминовую кислоту. В определенных вариантах осуществления углевод является полисахаридом, включая, без ограничения, пуллулан, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксипролилметилцеллюлозу (НРМС), гидроксицеллюлозу (НС), метилцеллюлозу (МС), декстран, циклодекстран, гликоген, крахмал, гидроксиэтилкрахмал, карагенан, гликон, амилозу, хитозан, Ν,Ο-карбоксиметилхитозан, альгин и альгиновую кислоту, крахмал, хитин, гепарин, конджак, глюкоманнан, пустулан, гепарин, гиалуроновую кислоту, курдлан и ксантан. В определенных вариантах осуществления углевод является сахарным спиртом, включая, без ограничения, маннит, сорбит, ксилит, эритрит, мальтит и лактит.
Синтетические наноносители могут быть получены с помощью широкого разнообразия способов, известных в данной области техники. Например, синтетические наноносители могут быть сформированы способами, такими как нанопреципитация, потоковая фокусировка с использованием жидкостных каналов, распылительная сушка, испарение растворителя однокомпонентных и двухкомпонентных эмульсий, экстракция растворителем, разделение фаз, размалывание, микроэмульсионные процедуры, микросборка, наносборка, жертвенные слои, простая и комплексная коацервация, и другими способами, хорошо известными специалисту в данной области техники. Альтернативно или дополнительно, описаны синтезы водных и органических растворителей для монодисперсных полупроводниковых, проводящих, магнитных, органических и других наноматериалов (ΡοΙΙο^Γίηο с1 а1., 2005, §та11, 1:48; Миггау с1 а1., 2000, Αηη. Κβν. Май δά., 30:545 и Ттшбабе βί а1., 2001, Сйет. Май, 13:3843). Дополнительные способы были описаны в литературе (см., например, Ωοη0γο^, Еб., М1сгосар8и1е8 апб №нюрагПс1е8 ίη Мебюте апб Ρйа^тасу, СКС Ρκ88, Вοса Κ^ίοη, 1992; Маίй^οу^ίζ еί а1., 1987, ί. ΟοηίΓο1. Ке1еа8е, 5:13; Маίй^οу^ίζ еί а1., 1987, Реасбуе Ρο1уте^8, 6:275; апб Маίй^οу^ίζ еί а1., 1988, ί. Αρρ1. Ρο1уте^ δά., 35:755, и также патенты США № 5578325 и 6007845).
В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители получают с помощью нанопреципитационного процесса или распылительной сушки. Условия, использованные при подготовке синтетических наноносителей, могут быть изменены для получения частиц нужного размера или свойств (например, гидрофобность, гидрофильность, внешняя морфология, липкость, форма и т.д.). Способ подготовки синтетических наноносителей и используемые условия (например, растворитель, температура, концентрация, расход воздуха и т.д.) могут зависеть от материалов, которые будут связаны с синтетическими наноносителями, и/или композиции полимерной матрицы.
Если частицы, полученные любым из указанных выше способов, имеют диапазон размеров за пределами желаемого диапазона, то они могут быть отсортированы по размеру с помощью, например, микрофильтра.
Связывание может быть достигнуто множеством разных способов и может быть ковалентным или нековалентным. Такое связывание может быть организовано, чтобы быть на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению. Элементы синтетических наноносителей по данному изобретению (такие как части, которые содержит иммуноспецифическая поверхность, части нацеливания, полимерные матрицы и т.п.) могут быть напрямую связаны друг с другом, например, одной или более ковалентными связями или могут быть связаны одним или более линкерами. Дополнительные способы функционализации синтетических наноносителей могут быть адаптированы из опубликованной
- 30 022699 патентной заявки США № 2006/0002852, δαΐΐ/тап е! а1., опубликованной патентной заявки США № 2009/0028910, ЭсЗппопс е! а1. или опубликованной международной патентной заявки ^0/2008/127532 Α1, МийЬу е! а1.
Любой подходящий линкер может использоваться в соответствии с данным изобретением. Линкеры могут быть применены для формирования амидных связей, сложноэфирных связей, дисульфидных связей и т.д. Линкеры могут содержать атомы углерода или гетероатомы (например, азот, кислород, серу и т.д.). В некоторых вариантах осуществления линкер является алифатическим или гетероалифатическим линкером. В некоторых вариантах осуществления линкер является полиалкильным линкером. В определенных вариантах осуществления линкер является линкером простых полиэфиров. В определенных вариантах осуществления линкер является полиэтиленовым линкером. В определенных специфических вариантах осуществления линкер является полиэтиленгликольным (РЕО) линкером.
В некоторых вариантах осуществления линкер является расщепляемым линкером. Чтобы дать лишь несколько примеров, расщепляемые линкеры включают пептидные линкеры, расщепляемые протеазами, нуклеазо-чувствительные линкеры из нуклеиновых кислот, липазо-чувствительные липидные линкеры, гликозидазо-чувствительные углеводные линкеры, рН-чувствительные линкеры, гипоксиячувствительные линкеры, фото-расщепляемые линкеры, термолабильные линкеры, ферментрасщепляемые линкеры (например, эстеразой расщепляемый линкер), УЗИ-чувствительные линкеры, линкеры, расщепляемые рентгеновскими лучами и т.д. В некоторых вариантах осуществления линкер не является расщепляемым линкером.
Множество разнообразных способов может быть использовано для связывания линкера или другого элемента синтетического наноносителя с синтетическим наноносителем. Общая стратегия включает пассивную адсорбцию (например, через электростатические взаимодействия), мультивалентное хелатирование, нековалентное связывание высокой аффинности между членами специфически связывающихся пар, образование ковалентной связи и т.д. (Оао е! а1., 2005, Сшт. Ор. В1о!есЬпо1., 16:63). В некоторых вариантах осуществления для связывания материала с синтетическим наноносителем может быть использована клик-химия.
Могут быть использованы взаимодействия нековалентного специфического связывания. Например, биотином может быть функционализировна или одна частица, или биомолекула, а еще одна функционализирована стрептавидином. Эти две части специфически связываются друг с другом нековалентно и с высокой аффинностью, тем самым связывая частицу и биомолекулу. Аналогичным образом могут быть использованы другие пары специфического связывания. С другой стороны, гистидин-меченые биомолекулы могут быть связаны с частицами, сконъюгированными с никель-нитролотриуксусной кислотой (ΝίΝΤΑ).
Дополнительную общую информацию о связывании см. журнал Вюсоп)ида!е СЬеткйу, опубликованный Американским химическим обществом, Со1итЬик ОН, РО Вох 3337, Со1итЬик, ОН, 43210; Сгокк-Ыпк1п§, Химическая техническая библиотека Пирса, доступная на веб-сайте Р1егсе и первоначально опубликованная в 1994-95 гг. в каталоге Р1егсе и ссылки, цитируемые в них; \Уопд δ.δ., СЬеткйу о£ Рто!еш Сопщдайоп апб Стокк-Нпктд, СКС Ргекк РиЬЬкЬетк, Воса Ка!оп, 1991 и Негтапкоп, О.Т., Вюсоп)ида1е ТесЬтциек, Лсабетю Ргекк, 1пс., δаη Э1едо, 1996.
Следует понимать, что композиции согласно данному изобретению могут быть сделаны любым подходящим способом, и данное изобретение никоим образом не ограничивается композициями, которые могут быть получены с использованием способов, описанных в данном документе. Выбор подходящего способа может потребовать внимания к свойствам конкретных присоединяемых частей.
Фармацевтические композиции и способы применения
Композиции согласно данному изобретению содержат синтетические наноносители по данному изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемыми наполнителями. Композиции могут быть получены с использованием традиционного фармацевтического производства и рецептурных методик для получения пригодных лекарственных форм. В варианте осуществления синтетические наноносители по данному изобретению суспендированы в стерильном физиологическом растворе для инъекций вместе с консервантом.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители по данному изобретению получают в стерильных условиях или в заключении стерилизуют. Это может гарантировать, что полученная композиция стерильна и неинфекционна, тем самым повышая безопасность по сравнению с нестерильными композициями. Это обеспечивает важные меры безопасности, особенно когда субъекты, получающие синтетические наноносители по данному изобретению, имеют иммунные дефекты, страдают от инфекции и/или восприимчивы к инфекции. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители по данному изобретению могут быть лиофилизированными и храниться в виде суспензии или в виде лиофилизированного порошка в зависимости от способа составления в течение длительного периода без потери активности.
Композиции по данному изобретению могут быть введены различными путями введения, включая, без ограничения, подкожный, внутримышечный, внутрикожный, пероральный, парентеральный, интраназальный, чресслизистый, ректальный; глазной, трансдермальный, чрескожный или посредством ком- 31 022699 бинации этих путей.
Композиции и способы, описываемые в данном документе, можно применять для индукции, усиления, стимуляции, модуляции или управления иммунным ответом. Композиции и способы, описываемые в данном документе, можно применять для диагностики, профилактики и/или лечения состояний, таких как разновидности рака, инфекционные заболевания, метболические расстройства, дегенеративные заболевания, воспалительные заболевания, иммунологические заболевания, или других расстройств и/или состояний. Композиции и способы, описываемые в данном документе, также можно применять для профилактики или лечения привыкания, например привыкания к никотину или наркотическому веществу. Композиции и способы, описываемые в данном документе, можно также применять для профилактики и/или лечения состояния, возникшего в результате воздействия токсина, вредного вещества, токсина окружающей среды или другого токсичного вещества.
Примеры
Пример 1. Получение активированного полимера.
РЬЛ (Ό/Б-полилактид) (резомер К202Н от ΒοеН^^ηде^-Iηде1Не^т. кислотное число эквивалента КОН 0,21 ммоль/г, характеристическая вязкость (ίν): 0,21 дл/г) (10 г, 2,1 ммоль, 1,0 экв.) растворили в дихлорметане (ОСМ) (35 мл). Добавили БОС (2,0 г, 10,5 ммоль, 5 экв.) и ΝΉ8 (1,2 г, 10,5 ммоль, 5 экв.). Твердые вещества растворили воздействием ультразвука. Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 дней. Раствор концентрировали для удаления большей части ОСМ и остаток добавили в раствор 250 мл диэтилового эфира и 5 мл МеОН для осаждения активированного сложного эфира РБЛ-ИНК Растворители удалили, полимер дважды промыли простым эфиром (2x200 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РБЛ-ИНЯ в виде белого пенистого твердого вещества (~8 г выделенного, Н ЯМР использовали для подтверждения присутствия сложного эфира ΝΉ8). Сложный эфир РЬЛ-НН8 хранили в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Альтернативно, реакцию можно осуществить в ОМЕ, ТНР, диоксане или СНС13 вместо ОСМ. ЭСС можно использовать вместо БОС (получаемую в результате ЭСС-мочевину отфильтровывают перед осаждением сложного эфира РБЛ-ЫН8 из простого эфира). Количество ЕЭС или ЭСС и ΝΉ8 может варьировать в диапазоне 2-10 экв. РБЛ.
Таким же образом РБЛ с ίν 0,33 дл/г и кислотным числом 0,11 ммоль/г, или РБОЛ (резомер КО653Н, 65% лактида-35% гликолида, ίν: 0,39 дл/г и кислотным числом 0,08 ммоль/г), или РБОЛ (резомер КО752Н, 75% лактида-25% гликолида, ίν: 0,19 дл/г и кислотным числом 0,22 ммоль/г) превращают в соответствующий активированный РБЛ-ИНЯ или РБОЛ-ИН8 сложный эфир и хранят в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Пример 2. Получение активированного полимера.
РБЛ (К202Н, кислотное число 0,21 ммоль/г) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.) растворили в 10 мл сухого ацетонитрила. Добавили Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (Э8С) (215 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) и каталитическое количество 4-^^-диметиламино)пиридина (ОМАР). Полученную в результате смесь перемешивали в атмосфере аргона 1 день. Полученный в результате раствор сконцентрировали до почти полной сухости. Остаток затем добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера, который дважды промыли простым эфиром (2x30 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РБА-ИН8 ('Н ЯМР показал количество сложного эфира ΝΉ8 на уровне приблизительно 80%).
Пример 3. Получение активированного полимера.
РБЛ (К202Н) (5,0 г, 1,05 ммоль) растворили в 25 мл безводного ОСМ и 2,5 мл безводного ЭМЕ. Добавили ЭСС (650 мг, 3,15 ммоль, 5,0 экв.) и пентафторфенол (РРР) (580 мг, 3,15 ммоль, 5,0 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 дней и затем сконцентрировали для удаления ОСМ. Полученный в результате остаток добавили к 250 мл простого эфира для осаждения активированного полимера РБЛ, который промыли простым эфиром (2x100 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РБЛ-РРР в виде белого пенистого твердого вещества (4,0 г).
Пример 4. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
РБЛ-ИН8 (1,0 г), К848 (132 мг, 0,42 ммоль) и диизопропилэтиламин (ΌΡΕΆ) (0,073 мл, 0,42 ммоль) растворили в 2 мл сухого ЭМЕ в атмосфере аргона. Полученный в результате раствор нагревали при 5060°С в течение 2 дней. Раствор охладили до КТ и добавили к 40 мл деионизированной (ΟΪ) воды для осаждения полимерного продукта. Затем полимер промыли Ό! водой (40 мл) и простым эфиром (2x40 мл) и высушили при 30°С под вакуумом с получением конъюгата К848-РБЛ в виде белого пенистого твердого вещества (0,8 г, Н ЯМР показал конъюгацию К848 с РБЛ через амидную связь). Степень конъюгации (загрузки) К848 на полимере подтвердили ВЭЖХ-анализом следующим образом: взвешенное количество полимера растворили в ТНЕ/МеОН и обработали 15% №ЮН. Полученные в результате гидролизованные полимерные продукты проанализировали на количество К848 с помощью ВЭЖХ относительно калибровочной кривой.
- 32 022699
Пример 5.
Конъюгация иммуномодулирующего средства РЕ-Л^Н8 (1,0 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.), К848 (132 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.), ΩΡΕΑ (0,15 мл, 0,84 ммоль, 4,0 экв.) и ^МЛР (25 мг, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) растворили в 2 мл сухого ОМЕ в атмосфере аргона. Полученный в результате раствор нагревали при 50-60°С в течение 2 дней. Раствор охладили до КТ и добавили к 40 мл деионизированной (ΌΙ) воды для осаждения полимерного продукта. Затем полимер промыли ΌΙ водой (40 мл) и простым эфиром (2x40 мл) и высушили при 30°С под вакуумом с получением конъюгата Р^Л-Ρ848 в виде белого пенистого твердого вещества (0,7 г, 20 мг полимера гидролизовали в растворе из 0,2 мл ТНЕ, 0,1 мл МеОН и 0,1 мл 15% №ЮН). Количество К848 на полимере, как определили, составило приблизительно 35 мг/г согласно обращенно-фазовому ВЭЖХ-анализу (колонка С18, подвижная фаза А: 0,1% ТЕΑ в воде, подвижная фаза В: 0,1% ТЕΑ в СН3,СК градиент).
Пример 6. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
ΙΨΑ (К202Н) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.), ЭСС (260 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), ΝΗ8 (145 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), К848 (200 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.), ^МЛР (77 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.) и ΩΡΕΑ (0,223 мл, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) растворили в 4 мл сухого ОМЕ. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 3 дней. Смесь охладили до КТ и разбавили ЭСМ. ЭСС-мочевину отфильтровали и фильтрат сконцентрировали для удаления ЭСМ. Полученный остаток в ОМЕ добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта, который промыли водой (40 мл), простым эфиром/ОСМ (40 мл/4 мл) и простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С получили требуемый конъюгат Р^Л-Ρ848 в виде белого пенистого твердого вещества (1,5 г).
Пример 7. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
ΙΨΑ (К202Н) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.), ΕΩΕ’ (242 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), ΗΟΑΐ (171 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), К848 (200 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.) и ΩΡΕΑ (0,223 мл, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) растворили в 4 мл сухого ОМЕ. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 2 дней. Раствор охладили до КТ и добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта, который промыли водой (40 мл), простым эфиром/МеОН (40 мл/2 мл) и простым эфиром (40 мл). Полимер оранжевого цвета растворили в 4 мл ЭСМ и полученный раствор добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера без значительной части оранжевого цвета. Светло-оранжевый полимер промыли простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С получили требуемый конъюгат Р^Л-Ρ848 в виде светло-коричневого пенистого твердого вещества (1,5 г).
Пример 8. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
ΙΨΑ (К202Н) (1,0 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.), ΕΩΕ’ (161 мг, 0,84 ммоль, 4,0 экв.), ΗΟΒΐ·Η2Ο (65 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.), К848 (132 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.) и ΩΡΕΑ (0,150 мл, 0,84 ммоль, 4,0 экв.) растворили в 2 мл сухого ОМЕ. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 2 дней. Раствор охладили до комнатной температуры и добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта. Полимер оранжевого цвета растворили в 2 мл ЭСМ и полученный раствор добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера, который промыли водой/ацетоном (40 мл/2 мл) и простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С требуемый конъюгат Р^Л-Ρ848 получили в виде грязно-белого пенистого твердого вещества (1,0 г, загрузка К848 на полимере составила приблизительно 45 мг/г на основе ВЭЖХ-анализа и подтверждена 'Н ЯМР). Таким же способом получили Р^СЛ (75% лактида)-К848 и Р^СЛ (50% лактида)К848.
Пример 9. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 218 мг, 6,93х10-4 моль), Ό/Ь лактид (1,0 г, 6,93х10-3 моль) и безводный сульфат натрия (800 мг). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (50 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной ванне, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (19 мг, 15 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили простым эфиром (200 мл) и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 880 мг неочищенного конъюгата полимолочная кислота-К-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10% метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили в высоком вакууме с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 702 мг (57,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с инте- 33 022699 гральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат содержал менее 5% свободного Р848.
Пример 10. Получение конъюгата РЬА-Р848 с низким МВ.
Раствор РЬА-СО2Н (средний МВ: 950, ЭР1:1,32; 5,0 г, 5,26 ммоль) и НВТИ (4,0 г, 10,5 ммоль) в Е!ОАс (120 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение Р848 (1,65 г, 5,26 ммоль) с последующим ЭГРЕА (5,5 мл, 31,6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение 15 ч. После охлаждения смесь разбавили Е!ОАс (150 мл) и промыли 1% раствором лимонной кислоты (2x40 мл), водой (40 мл) и соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над №а28О4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) (150 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли МТВЕ (50 мл) и высушили под вакуумом при комнатной температуре в течение 2 дней в виде белой пены (5,3 г, средний МВ по ГПХ составляет 1200, РЭ1: 1,29; загрузка Р848 составляет 20% по ВЭЖХ).
Пример 11. Получение конъюгата РЬА-Р848 с низким МВ.
Раствор РЬА-СО2Н (средний МВ: 1800, ЭР1:1,44; 9,5 г, 5,26 ммоль) и НВТИ (4,0 г, 10,5 ммоль) в Е!ОАс (120 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение Р848 (1,65 г, 5,26 ммоль) с последующим ЭГРЕА (5,5 мл, 31,6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение 15 ч. После охлаждения смесь разбавили Е!ОАс (150 мл) и промыли 1% раствором лимонной кислоты (2x40 мл), водой (40 мл) и соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над №а28О4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) (150 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли МТВЕ (50 мл) и высушили под вакуумом при комнатной температуре в течение 2 дней в виде белой пены (9,5 г, средний МВ по ГПХ составляет 1900, РЭ1: 1,53; загрузка Р848 составляет 17% по ВЭЖХ).
Пример 12. Конъюгирование Р848 с РСАЭК через раскрытие имидного кольца.
Следующие примеры описывают синтез поликеталя, РСАЭК, согласно способу, приведенному в Ри1епбгап е! а1., УО 2008/127532, который проиллюстрирован на этапе 1 ниже.
РСАЭК синтезируют в 50-мл колбе с двумя горлышками, соединенной с короткой дистилляционной головкой. Сначала 5,5 мг перекристаллизованной р-толуолсульфоновой кислоты (0,029 ммоль, А1бпс1г Сент-Луис, Миссури) растворяют в 6,82 мл этилацетата и добавили к 30 мл раствора бензола (поддерживая 100°С), который содержит 1,4-циклогександиметанол (12,98 г, 90,0 ммоль, А1бпсЬ). Этилацетату позволяют выкипеть и добавляют дистиллированный 2,2-диметоксипропан (10,94 мл, 90,0 ммоль, А1бпсН) к раствору бензола, инициируя реакцию полимеризации. Последовательно добавляют дополнительные дозы 2,2-диметоксипропана (5 мл) и бензола (25 мл) к реакционной смеси каждый час в течение 6 ч через мерную воронку для компенсации выкипевших 2,2-диметоксипропана и бензола. Через 8 ч реакцию останавливают добавлением 500 мкл триэтиламина. Полимер выделяют осаждением в холодном гексане (хранили при -20°С) с последующей вакуумной фильтрацией. Молекулярный вес РСАЭК определяют посредством гель-проникающей хроматографии (ГПХ) (81йтаб/и, Киото, Япония), прибор оборудован УФ-детектором. ТНР применяют в качестве подвижной фазы при скорости потока 1 мл/мин. Стандарты полистирола от Ро1утег ЬаЬога!опех (Амхерст, Массачусетс) применяли для построения калибровочной кривой молекулярного веса. Данное соединение применяют для создания частиц РСАЭК во всех последующих экспериментах.
Р848 можно конъюгировать к концевым спиртовым группам РСАЭК с молекулярным весом 6000 посредством раскрытия имидного кольца в соответствии с этапом 2, показанным ниже.
- 34 022699
Этап 1. Получение РСАЭК.
На этапе 2 полимер из этапа 1 (12 г, 2,0х103 моль) растворяют в 100 мл метиленхлорида и добавляют лактам К848 (3,3 г, 8,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7триазабицикло-[4,4,0]дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,835 г, 6х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 11,3 г (81%) полимера. Часть гидролизируют в кислоте и определяют, что содержание К848 составляет 9 вес.%.
Пример 13. Конъюгирование К848 с поликапролактондиолом через раскрытие имидного кольца.
Раскрытие имидного кольца применяют для присоединения К854 к концевым спиртовым группам поликапролактондиола с молекулярным весом 2000. Поликапролактондиол приобретен у ЛИпсН СНсписа1 Сотрапу, кат. № 189421 и имеет следующую структуру:
О О
Ϊ
ДСН^ОН
НО-[(Н2С)5
Конъюгат поликапролактондиол-К854 имеет следующую структуру:
Полимер (5 г, 2,5х103 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам К854 (2,4 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7-триазабицикло-[4,4,0]дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение 15 мин образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 5,2 г (70%) полимера. Часть гидролизируют в кислоте и определяют, что содержание К848 составляет 18,5 вес.%.
Пример 14. Конъюгирование К848 с поли(гексаметиленкарбонат)диолом посредством раскрытия имидного кольца.
Раскрытие имидного кольца применяют для присоединения К848 к концевым спиртовым группам поли(гексаметиленкарбонат)диола с молекулярным весом 2000. Поли(гексаметиленкарбонат)диол приобретен у ЛИпсН СЬетюа1 Сотрапу, кат. № 461164 и имеет следующую структуру:
но— [СН2(СН2)4СН2ОСО2]пСН2(СН2)4СН2-ОН
Конъюгат поли(гексаметиленкарбонат)диол-К848 имеет следующую структуру:
Полимер (5 г, 2,5х103 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам К848 (2,06 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7-триазабицикло-[4,4,0] дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 5,9 г (84%) полимера. Применяют ЯМР для определения содержания К848, которое, как определили, составляет 21%.
- 35 022699
Пример 15. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина при помощи катализатора на основе этилгексаноата олова.
В двугорлую круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин резиквимод (К-848, 100 мг, 3,18х10-4 моль), Ό/Ь лактид (5,6 г, 3,89х10-2 моль) и безводный сульфат натрия (4,0 г). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 50°С в течение 8 ч. Колбу затем продули аргоном и добавили толуол (100 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной бане, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (75 мг, 60 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения добавили воду (20 мл) и перемешивание продолжали в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавили дополнительно толуолом (200 мл) и затем промыли водой (200 мл). Раствор толуола затем промыли по очереди 10% раствором хлорида натрия, содержащего 5% конц. соляной кислоты (200 мл), затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (200 мл). ТСХ (диоксид кремния, 10% метанол в метиленхлориде) показала, что раствор не содержит свободного К-848. Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 3,59 г конъюгата полимолочная кислота-К-848. Часть полимера гидролизовали основанием и исследовали с помощью ВЭЖХ на предмет содержания К848. Путем сравнения калибровочной кривой концентрации К-848 относительно ВЭЖХ-отклика установили, что полимер содержал 4,51 мг К-848 на 1 г полимера. Молекулярная масса полимера, определенная с помощью ГПХ, составила приблизительно 19000.
Пример 16. Конъюгаты полимолочной кислоты с низким молекулярным весом и имидазохинолина.
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 218 мг, 6,93х10-4 моль), Ό/Ь лактид (1,0 г, 6,93х10-3 моль) и безводный сульфат натрия (800 мг). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (50 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной ванне, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (19 мг, 15 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили простым эфиром (200 мл) и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 880 мг неочищенного конъюгата полимолочная кислота-К-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10% метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили в высоком вакууме с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 702 мг (57,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат содержал менее 5% свободного К848.
Пример 17. Конъюгаты сополимера гликолевой кислоты и полимолочной кислоты с низким молекулярным весом и имидазохинолина.
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 436 мг, 1,39х10-3 моль), гликолид (402 мг, 3,46х10-3 моль), Ό/Ь лактид (2,0 г, 1,39х10-2 моль) и безводный сульфат натрия (1,6 г). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (60 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной бане, установленной на 120°С, пока не растворился весь К848, гликолид и лактид, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (50 мг, 39 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили этилацетатом (200 мл) и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтро- 36 022699 вали и выпарили под вакуумом с получением неочищенного конъюгата ΡΕΟΑ-Κ-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10% метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили в высоком вакууме с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 1,55 г (54,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат не содержал поддающийся обнаружению свободный К848.
Пример 18. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина при помощи катализа на основе диизопропиламида лития.
Имидазохинолин (К-848), Ό/Ь лактид и имеющая отношение лабораторная посуда - все сушили под вакуумом при 50°С в течение 8 ч до использования. В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили К-848 (33 мг, 1,05х10-4 моль) и сухой толуол (5 мл). Ее нагревали с обратным холодильником для полного растворения К-848. Раствор перемешали в атмосфере азота и охладили до комнатной температуры для получения суспензии мелкодисперсного К-848. К этой суспензии добавили раствор диизопропиламида лития (2,0 М в ТНР, 50 мкл, 1,0х10-4 моль), после чего продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 5 мин. Бледно-желтый раствор, который образовался, добавили с помощью шприца к горячему (120°С) раствору Ό/Ь лактида (1,87 г, 1,3х10-2 моль) в атмосфере азота. Устранили тепло и бледно-желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Раствор разбавили метиленхлоридом (200 мл) и затем его промыли 1% соляной кислотой (2х50 мл), а затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением конъюгата полимолочная кислота-К-848. ТСХ (диоксид кремния, 10% метанол в метиленхлориде) показала, что раствор не содержит свободного К-848. Полимер растворили в метиленхлориде (10 мл) и этот раствор добавили по каплям в перемешиваемый гексан (200 мл). Осажденный полимер выделили декантацией и высушили под вакуумом с получением 1,47 г конъюгата полимолочная кислота-К848 в виде белого твердого вещества. Часть полимера гидролизовали основанием и исследовали с помощью ВЭЖХ на предмет содержания К-848. Путем сравнения калибровочной кривой концентрации К-848 относительно ВЭЖХ-отклика установили, что полимер содержал 10,96 мг К-848 на 1 г полимера.
Пример 19. Прикрепление иммуномодулирующего средства к ΡΕΑ с низким ΜΒ.
ΡΕΑ (Ό/Ь-полилактид) с ΜΒ 5000 (10,5 г, 2,1 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в дихлорметане (^СΜ) (35 мл). Добавляют ЕЭС (2,0 г, 10,5 ммоль, 5 экв.) и ΝΗδ (1,2 г, 10,5 ммоль, 5 экв.). Полученный в результате раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Раствор концентрируют для удаления большей части ΩΕ'Μ и остаток добавляют в раствор 250 мл диэтилового эфира и 5 мл МеОН для осаждения активированного сложного эфира ΡΕΑ-ΝΗδ. Растворители удаляют, полимер дважды промывают простым эфиром (2х 200 мл) и высушивают под вакуумом с получением активированного сложного эфира ΡΕΑ-ΝΗδ в виде белого пенистого твердого вещества (~8 г выделенного, Н ЯМР можно использовать для подтверждения присутствия сложного эфира ΝΗδ). Сложный эфир ΡΕΑ-ΝΗδ хранят в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Альтернативно, реакцию можно осуществить в ΌΜΡ, ТНР, диоксане или СНС13 вместо ΩΕ’Μ. ЭСС можно использовать вместо ЕЭС (получаемую в результате ЭСС-мочевину отфильтровывают перед осаждением сложного эфира ΡΕΑ-ΝΜδ из простого эфира). Количество ЕЭС или ЭСС и Ν4δ может варьировать в диапазоне 2-10 экв. ΡΕΑ.
Пример 20. Прикрепление иммуномодулирующего средства к ΡΕΟΑ с низким ΜΒ.
Таким же образом, как приведено выше для активации полимера, ΡΕΟΑ с низким ΜΒ с 50-75% гликолидом превращают в соответствующий активированный сложный эфир ΡΕβΑ-Ν^ и хранят в атмосфере аргона в морозилке при температуре ниже -10°С до использования.
Пример 21. Проводимая в одном сосуде полимеризация с раскрытием кольца К848 с Ό/Ь-лактидом в присутствии катализатора.
Смесь из К848 (0,2 ммоль, 63 мг), Ό/Ь-лактида (40 ммоль, 5,8 г) и 4-диметиламинопиридина (ΌΜΑΡ) (50 мг, 0,4 ммоль) в 2 мл безводного толуола медленно нагрели до 150°С (температура масляной бани) и поддерживали при этой температуре в течение 18 ч (через 3 ч не осталось К848). Смесь охладили до окружающей температуры и в полученной смеси остановили реакцию водой (50 мл) с осаждением полученного полимера, Ρ848-ΡΕΑ. Полимер затем промыли последовательно 45 мл каждого из МеОН, ίΡιΌΜ и этилового простого эфира. Полимер высушили под вакуумом при 30°С с получением грязно- 37 022699 белого рыхлого твердого вещества (5,0 г). Полимерную структуру подтвердили посредством Ή ЯМР в СЭСТх Небольшой образец полимера обработали 2Н водным ΝαΟΗ в ТНР/МеОН для определения загрузки К848 на полимере с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Загрузка К848 составляет 3 мг на 1 г полимера (0,3% загрузка - 27,5% от теории).
Пример 22. Двухэтапная полимеризация с раскрытием кольца К848 с Ό/Ь-лактидом и гликолидом.
Смесь Ό/Ь-лактида (10,8 г, 0,075 моль) и гликолида (2,9 г, 0,025 моль) нагрели до 135°С в атмосфере аргона. После расплавления всех материалов и получения прозрачного раствора добавили К848 (1,08 г, 3,43х10-3 моль). Данный раствор перемешивали при 135°С под медленным потоком аргона в течение 1 ч. Добавили этилгексаноат олова (150 мкл) и продолжали нагревание в течение 4 ч. После охлаждения твердую светлокоричневую массу растворили в метиленхлориде (250 мл) и раствор промыли 5% раствором винной кислоты (2x200 мл). Раствор метиленхлорида высушили над сульфатом магния, профильтровали и затем сконцентрировали под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (20 мл) и добавили 2-пропанол (250 мл) с перемешиванием. Отделившийся полимер выделили декантацией 2пропанола и высушили под высоким вакуумом. ЯМР показал, что полимер имел 71,4% лактида и 28,6% гликолида с молекулярным весом 4000. Загрузка К848 была близкой к теоретической по данным ЯМР.
Пример 23. Получение конъюгата РЬСА-К848.
Смесь из РЬСА (Ьакеккогек Ро1утег8, МВ ~5000, 7525ЭРС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 10 г, 7,0 ммоль) и НВТи (5,3 г, 14 ммоль) в безводном ЕЮАс (160 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 50 мин. Добавили соединение К848 (2,2 г, 7 ммоль) с последующим диизопропилэтиламином (Э1РЕА) (5 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (приблизительно 16 ч).
После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (200 мл) и промыли насыщенным раствором ΝΗ4Ο (2x40 мл), водой (40 мл) и концентрированным соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над №28О4 (20 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (1РА) (300 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли 1РА (4x50 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35-40°С в течение 3 дней в виде белого порошка (10,26 г, МВ по ГПХ составляет 5200, загрузка К848 составляет 12% по ВЭЖХ).
Пример 24. Получение конъюгата РЬСА-854А.
Смесь из РЬСА (Ьакеккогек Ро1утег8, МВ ~5000, 7525ЭРС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение 845А (0,29 г, 0,7 ммоль) с последующим диизопропилэтиламином (ЭГРЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (приблизительно 15 ч). После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (100 мл) и промыли насыщенным раствором ΝΌ4Ο (2x20 мл), водой (20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушили над №28О4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (1РА) (40 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли 1РА (4x25 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 3540°С в течение 2 дней в виде белого порошка (1,21 г, МВ по ГПХ составляет 4900, загрузка К854А составляет 14% по ВЭЖХ).
- 38 022699
Пример 25. Получение конъюгата РЬОА-ВВНА.
Смесь из РЬОА (Ьаке8Ьоге8 Ро1утег8, МВ ~5000, 7525ΌΌΟ1Α, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТи (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (30 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавили соединение ВВНА (0,22 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ΌΜδΘ с последующим диизопропилэтиламином (ΌΙΡΕΑ) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавили дополнительные количества НВТИ (0,53 г, 1,4 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (0,5 мл, 2,8 ммоль) и смесь нагревали при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавили ΕΐОΑс (100 мл) и промыли насыщенным раствором МН4С1 (2x20 мл), водой (20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушили над Ыа28О4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (ΙΡΑ) (35 мл) и коричневатый конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли ΙΡΑ (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричневатого порошка (1,1 г).
Пример 26. Конъюгация К848 с полиглицином, полиамид.
Получают защищенную ΐ-бутилоксикарбонилом (1ВОС) полиглицинкарбоновую кислоту (Ι) посредством полимеризации с раскрытием цикла Ν-карбоксиангидрида глицина (Л1йг1сН кат. № 369772) с применением сложного бензилового эфира 6-аминокапроновой кислоты (Α1άήΛ кат. № §33465) по способу Α1ίίεΓί8 е1 а1. (Вютасгото1еси1е8, 5, 1653, (2004)). Защита концевой аминогруппы в виде ΐ-ВОС-карбамата с последующей гидрогенизацией над палладием на углероде для удаления бензилового сложного эфира завершает синтез ВОС-защищенной полиглицинкарбоновой кислоты (Ι).
Смесь ВОС-защищенной полиглицинкарбоновой кислоты (5 г, МВ=2000, 2,5 х10-3 моль) и НВТИ (3,79 г, 1,0х10-2 моль) в безводном ΌΜΡ (100 мл) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 50 мин. Затем добавляют К848 (1,6 г, 5,0х10-3 моль) с последующим диизопропилэтиламином (4 мл, 2,2х10-2 моль). Смесь перемешивают при КТ (комнатная температура) в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (16 ч). После охлаждения ΌΜΡ выпаривают под вакуумом и остаток растирают в порошок в ΕΐОΑс (100 мл). Полимер выделяют фильтрацией и затем полимер промывают 2пропанолом (4x25 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 35-40°С в течение 3 дней. Полимер выделяют в виде грязно-белого твердого вещества с выходом 5,1 г (88%). Загрузку К848 можно определить с помощью ЯМР, и она составляет 10,1%.
Защитную группу ΐ-ВОС удаляют с помощью трифторуксусной кислоты и полученный полимер прививают к ΡΕΑ карбоксильными концевыми группами посредством традиционных способов.
Пример 27. Получение конъюгата ΡΕΟΑ с полимером полиглицин/К848.
Этап 1.
Конъюгат полиглицин/К848, защищенный ΐ-ВОС, (5 г) растворяют в трифторуксусной кислоте (25 мл) и этот раствор нагревают при 50°С в течение 1 ч. После охлаждения трифторуксусную кислоту удаляют под вакуумом и остаток растирают в порошок в этилацетате (25 мл). Полимер выделяют фильтрацией и хорошо промывают 2-пропанолом. После сушки под вакуумом получают 4,5 г полимера в виде грязно-белого твердого вещества.
Этап 2.
Смесь из ΡΕΟΑ (Ьаке8Ьоге8 Ρο1уте^8, МВ ~5000, 7525ΌΌΟ1Α, кислотное число 0,7 ммоль/г, 10 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (5,3 г, 14 ммоль) в безводном ΌΜΡ (100 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 50 мин. Добавляют полимер из приведенного выше (1,4 г, 7 ммоль), растворенный в сухом ΌΜΡ (20 мл), с последующим диизопропилэтиламином (ΌΙΡΕΑ) (5 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (16 ч). После охлаждения ΌΜΡ выпаривают под вакуумом и остаток растворяют в метиленхлориде (50 мл). Полимер осаждают посредством добавления 2-пропанола (200 мл). Полимер выделяют при помощи декантирования, промывают 2- 39 022699 пропанолом (4x50 мл) для удаления остаточных реагентов и высушивают под вакуумом при 35-40°С в течение ночи. Получают 9,8 г (86%) блок-сополимера.
Пример 28. Получение конъюгата РЬСА-2-бутокси-8-гидрокси-9-бензиладенин.
Смесь РЬСА (ЬакехЬогех Ро1утегх, МВ ~5000, 7525ОЬС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном Е!ОАс (30 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавляют соединение (I) (0,22 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ИМ8О с последующим диизопропилэтиламином (ИГРЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавляют дополнительные количества НВТИ (0,53 г, 1,4 ммоль) и ИГРЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль) и смесь нагревают при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляют Е!ОАс (100 мл) и промывают насыщенным раствором №Н4С1 (20 мл), водой (2x20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушивают над №а28О4 (10 г) и концентрируют в гелеподобный остаток. Затем добавляют изопропиловый спирт (1РА) (35 мл) и осаждают из раствора коричневатый конъюгат полимера. Затем полимер промывают 1РА (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и высушивают под вакуумом при 3540°С в течение 2 дней в виде коричневатого порошка (1,0 г).
Пример 29. Получение конъюгата РЬСА-2,9-дибензил-8-гидроксиаденин.
Смесь РЬСА (ЬакехЬогех Ро1утегх, МВ ~5000, 7525ОЬС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном Е!ОАс (30 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавляют соединение (II) (0,24 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ИМ8О с последующим диизопропилэтиламином (□РЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 20 ч. Добавляют дополнительные количества НВТИ (0,53 г, 1,4 ммоль) и ЭРЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль) и смесь нагревают при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляют Е!ОАс (100 мл) и промывают насыщенным раствором №Н4С1 (20 мл), водой (2x20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушивают над №а28О4 (10 г) и концентрируют в гелеподобный остаток. Затем добавляют изопропиловый спирт (ЕРА) (35 мл) и из раствора осаждают коричневатый конъюгат полимера. Затем полимер промывают ША (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и высушивают под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричневатого порошка (1,2 г).
Пример 30. Раскрытие имидного кольца, применяемое для присоединения 2-пентил-8-гидрокси-9бензиладенина к концевым спиртовым группам поли(гексаметиленкарбонат)диола с молекулярным весом 2000.
Поли(гексаметиленкарбонат)диол приобретен у АИпсН СЬетюа1 Сотрапу, кат. № 461164.
Поли(гексаметиленкарбонат)диол
Конъюгат поли(гексаметиленкарбонат)диол-8-оксоаденин.
Полимер (5 г, 2,5x10^ моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам 2-пентил-8гидрокси-9-бензиладенин (2,05 г, 5,0x10^ моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7триазабицикло-[4,4,0]дец-5-ен (ТВИ, 0,557 г, 4x10^ моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 5,5 г (78%) полимера. Применяют ЯМР для определения содержания бензиладенина, которое составляет 18%.
- 40 022699
Пример 31. Конъюгаты никотин-РЕС-РЬА.
Полимер 3-никотин-РЕО-РЬА синтезировали следующим образом.
Сначала растворили моноаминополи(этиленгликоль) от 1епКет® с молекулярным весом 3,5 КДа (0,20 г, 5,7х10-5 моль) и избыток 4-карбоксиникотина (0,126 г, 5,7х10-4 моль) в диметилформамиде (5,0 мл). Перемешали раствор и добавили дициклогексилкарбодиимид (0,124 г, 6,0х10-4 моль). Этот раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавили воду (0,10 мл) и перемешивание продолжали еще в течение 15 мин. Осадок дициклогексилмочевины удалили фильтрацией и фильтраты выпарили под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (4,0 мл) и этот раствор добавили к диэтиловому эфиру (100 мл). Раствор охлаждали в холодильнике в течение 2 ч и осажденный полимер выделили фильтрацией. После промывания диэтиловым эфиром твердый белый полимер высушили в высоком вакууме. Выход составил 0,188 г. Этот полимер был использован без дополнительной очистки для следующего этапа.
Полимер никотин/РЕО (0,20 г, 5,7х10-5 моль) растворили в сухом тетрагидрофуране (10 мл) в атмосфере азота и перемешивали раствор по мере добавления раствора алюмогидрида лития в тетрагидрофуране (1,43 мл 2 М, 2,85х10-3 моль). Добавление алюмогидрида лития вызвало осаждение полимера в виде студенистой массы. Реакционную смесь нагрели до 80°С в медленном потоке азота, позволяя тетрагидрофурану испаряться. Остаток затем нагревали при 80°С в течение 2 ч. После охлаждения осторожно добавили воду (0,5 мл). После того как выделение водорода остановилось, добавили 10% метанол в метиленхлориде (50 мл) и реакционную смесь перемешивали до растворения полимера. Эту смесь отфильтровали через кизельгур (диатомовую землю) марки СеШе® (доступна от ЕМО Шс. как СеШе® 545, кат. № СХ0574-3) и фильтрат выпарили досуха под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (4,0 мл) и этот раствор медленно добавили к диэтиловому эфиру (100 мл). Полимер, отделенный в виде белого хлопьевидного твердого вещества, выделили с помощью центрифугирования. После промывания в диэтиловом эфире твердое вещество высушили под вакуумом. Выход составил 0,129 г.
Затем наполнили круглодонную колбу объемом 100 мл, оснащенную мешалкой и обратным холодильником, полимером РЕО/никотин (0,081 г, 2,2х10-5 моль), Ό/Ь-лактидом (0,410 г, 2,85х10-3 моль) и безводным сульфатом натрия (0,380 г). Смесь сушили под вакуумом при 55°С в течение 8 ч. Колбу охладили и продули аргоном, а затем добавили сухой толуол (10 мл). Колбу поместили на масляную баню, установленную на 120°С, и после растворения лактида добавили этилгексаноат олова (5,5 мг, 1,36х10-5 моль). Реакцию проводили при 120°С в течение 16 ч.
После охлаждения до комнатной температуры добавили воду (15 мл) и перемешивание продолжили в течение 30 мин. Добавили метиленхлорид (200 мл) и после встряхивания в делительной воронке фазам позволили осесть. Выделили слой метиленхлорида и высушили над безводным сульфатом магния. После фильтрации для удаления высушивающего средства фильтраты выпарили под вакуумом с получением полимера в виде бесцветной пены. Полимер растворили в тетрагидрофуране (10 мл) и этот раствор медленно добавили в воду (150 мл) при перемешивании. Осажденный полимер выделили с помощью центрифугирования и твердое вещество растворили в метиленхлориде (10 мл). Метиленхлорид удалили под вакуумом, а остаток высушили под вакуумом. Выход полимера 3-никотин-РЕО-РЬА составил 0,38 г.
Пример 32. Состав с синтетическим наноносителем.
Для инкапсулированных составов адъюванта синтезировали резиквимод (также известный как К848) в соответствии с синтезом, приведенным в примере 99 патента США № 5389640 ОеШег е! а1. К848 конъюгировали с РЬА вышеприведенным способом и структуру РЬА подтвердили ЯМР.
Конъюгат РЬА-РЕО-никотин получили согласно примеру 31.
Приобрели РЬА (ВοеЬ^^η§е^ ШдеШеш СНенисаШ Шс., 2820 ΝοΠίι Шгтапбу Эпуе, Питерсберг, Вирджиния 23805). Поливиниловый спирт (МВ=11-31 КДа, гидролизованный на 85-89%) приобрели у ν\νΡ 8с1епййс. Пептид овальбумина 323-339 получили от ВасНет Атепсах Шс. (3132 КаШШа 5>1гее1, Торранс, Калифорния 90505. Кат. № 4064565).
Вышеприведенные материалы применяли для получения следующих растворов:
1) резиквимод (К848) 10 мг/мл и РЬА 100 мг/мл в метиленхлориде или конъюгат РЬА-К848 100 мг/мл в метиленхлориде,
2) РЬА-РЕО-никотин в метиленхлориде 100 мг/мл,
3) РЬА в метиленхлориде 100 мг/мл,
4) пептид овальбумина 323-339 в воде 10 или 69 мг/мл,
5) поливиниловый спирт в воде 50 мг/мл.
Раствор № 1 (0,25-0,75 мл), раствор № 2 (0,25 мл), раствор № 3 (0,25-0,5 мл) и раствор № 4 (0,1 мл) объединили в небольшой емкости и смесь обработали ультразвуком при 50% амплитуды в течение 40 с с помощью Вгапюп О1§11а1 δοηίΙΚΓ 250. К этой эмульсии добавили раствор № 5 (2,0 мл) и обработка ультразвуком при 35% амплитуды в течение 40 с с помощью Вгапюп О1§йа1 δοηίΙΚΓ 250 образует вторую эмульсию. Ее добавили в стакан с фосфатно-соляным буфером (30 мл) и данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч для образования наночастиц.
Чтобы промыть частицы, часть дисперсии наночастиц (7,4 мл) перенесли в центрифужную пробир- 41 022699 ку и крутили при 5300 д 1 ч, супернатант удалили, а осадок ресуспендировали в 7,4 мл фосфатносоляного буфера. Повторили процедуру центрифугирования и осадок ресуспендировали в 2,2 мл фосфатно-соляного буфера для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Пример 33. Двойная эмульсия с множеством первичных эмульсий.
Материалы.
Пептид овальбумина 323-339, 17 аминокислотный пептид, известный как Т-клеточный эпитоп белка овальбумина, приобрели у Васйет ΑιικγΗη8 Шс. (3132 Ка8ЙШа 51гее1, Торранс, Калифорния 90505).
Резиквимод (также известный как К848) синтезировали согласно способу, приведенному в патенте США № 6608201.
ΡΕΑ-Κ848, резиквимод конъюгировали с ΡΕΑ с молекулярным весом приблизительно 2500 Да согласно вышеприведенному способу.
ΡΕΟΑ-Κ848, резиквимод конъюгировали с ΡΕΟΑ с молекулярным весом приблизительно 4100 Да согласно вышеприведенному способу.
Ρδ-1826 олигонуклеотид ДНК с полностью фосфотиоатированным остовом, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-ТСС ΑТΟ ΑСΟ ТТС ΟΓΟ ΑСΟ ТТ-3', с натриевым противоионом приобрели у Ο1ίβο8 ЕЮ (9775 δν С'оттегсе Сис1е С-6, Уилсонвиль, Орегон 97070).
Ρδ-1826 олигонуклеотид ДНК с фосфодиэфирным остовом, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-ТСС ΑТΟ ΑСΟ ТТС СТС ΑСΟ ТТ-3', с натриевым противоионом приобрели у Ο1ί§ο8 ЕЮ. (9775 δν Сοтте^се Сис1е С-6, Уилсонвиль, Орегон 97070).
ΡΕΑ с характеристической вязкостью 0,21 дл/г приобрели у δи^Мοб^С8 ΡЬа^тасеиί^са18 (756 Нт Майт Опте, Бирмингем, Алабама 35211. Код продукта 100 ΌΕ 2Α).
ΡΕΑ с характеристической вязкостью 0,71 дл/г приобрели у δи^Мοб^С8 ΡЬа^тасеиί^са18 (756 Нт Майт Опте, Бирмингем, Алабама 35211. Код продукта 100 ΌΕ 7Α).
ΡΕΑ с характеристической вязкостью 0,19 дл/г приобрели у ВοеЬήηде^ ШдеШеш СНеппсаШ Шс. (Питерсберг, Вирджиния. Кат. № К202Н).
Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин с молекулярным весом приблизительно 18500-22000 Да получили согласно вышеприведенному способу.
Ρ^Α-ΡΕΟ-Κ848 с молекулярным весом приблизительно 15000 Да получили согласно вышеприведенному способу.
Поливиниловый спирт (МВ=11000-31000 Да, гидролизованный на 87-89%) приобрели у ЕТ. Вакег (кат. № И232-08).
Партии изготовили с помощью способа двойных эмульсий с множеством первичных эмульсий. Приведенная ниже таблица дает ссылку на индексы растворов (например, В в колонке раствора № 1 указывает на то, что применялся раствор № 1В) и объем использованного раствора.
Номер образца Раствор №1 (объем) Раствор №2 (Объем) Раствор №3 (Объем) Раствор Н‘4 (Объем) Раствор Н*5 (Объем)
1 В (0,1 МЛ) С (1,0 МЛ) А (0,1 мл) С (1,0 мл) А (2,0 мл)
2 А (0,2 мл) А (1,0 мл) А (0,1 МЛ) А (1,0 мл) А (3, 0 мп)
3 А <0,2 ыл) Б (1,0 мл) А (0, 1 мл) В (1,0 мл) А (3,0 мп)
4 А (0, 2 мл) В (1,0 мл) А (0,1 мл) В (1,0 мп) А (3,0 мл)
Раствор 1А. Пептид овальбумина 323-339, 35 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 1В. Пептид овальбумина 323-339, 70 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2А. 0,21-Ιν ΡΕΑ, 75 мг/мл, и Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,21-Ιν ΡΕΑ, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 ч. раствора ΡΕΑ на каждую часть раствора ΡΕΑΡΕΟ-никотин.
Раствор 2В. 0,71-Ιν ΡΕΑ, 75 мг/мл, и Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,71-Ιν ΡΕΑ, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 ч. раствора ΡΕΑ на каждую часть раствора ΡΕΑΡΕΟ-никотин.
Раствор 2С. 0,19-Ιν ΡΕΑ, 75 мг/мл, и Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,19-Ιν ΡΕΑ, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и Ρ^Α-ΡΕΟ-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 ч. раствора ΡΕΑ на каждую часть раствора ΡΕΑ- 42 022699
РΕΟ-никотин.
Раствор 3А. Олигонуклеотид (либо Р8-1826, либо РО-1826), 200 мг/мл, в очищенной воде. Раствор приготовили путем растворения олигонуклеотида в очищенной воде при комнатной температуре.
Раствор 4А. Такой же, как и раствор № 2А.
Раствор 4В. Такой же, как и раствор № 2В.
Раствор 4С. Такой же, как и раствор № 2С.
Раствор 5А. Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в 100 мМ фосфатном буфере с рН 8.
Приготовили две отдельные первичные эмульсии вода-в-масле (В/М). В1/М2 приготовили путем объединения раствора 1 и раствора 2 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50% амплитудой в течение 40 с с помощью Вгапкоп Όί§ί1ο1 8отйет 250. В3/М4 приготовили путем объединения раствора 3 и раствора 4 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50% амплитудой в течение 40 с с помощью Вгапкоп Όί§ίίΗ1 8отйет 250. Третью эмульсию с эмульсией из двух внутренних эмульсий ([В1/М2,В3/М4]/В5) приготовили путем объединения 0,5 мл каждой первичной эмульсии (В1/М2 и В3/М4) и раствора 5 и обработки ультразвуком с 30% амплитудой в течение 40-60 с с помощью Вгапкоп П1§йа1 8отйет 250.
Третью эмульсию добавили в стакан, содержащий 70 мМ фосфатный буферный раствор (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч с тем, чтобы позволить испариться метиленхлориду и сформироваться наноносителям. Часть наноносителей промыли путем перенесения суспензии наноносителей в центрифужную пробирку и кручения при 13823д в течение 1 ч, удаления супернатанта и ресуспендирования осадка в фосфатно-соляном буфере. Повторили процедуру промывания и осадок ресуспендировали в фосфатно-соляном буфере для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Количества олигонуклеотида и пептида в наноносителе определили посредством ВЭЖХ-анализа.
Пример 34. Стандартная двойная эмульсия.
Материалы.
Как приведено в примере 33 выше.
Партии изготовили с помощью стандартного способа двойных эмульсий. Приведенная ниже таблица дает ссылку на индексы растворов (например, В в колонке раствора № 1 указывает на то, что применялся раствор № 1В) и объем использованного раствора.
Номер образца Раствор №1 (объем) Раствор №2 (Объем) Раствор №3 (Объем) Раствор №4 (Объем) Раствор №5 (Объем)
1 А (0Л1 мл) А (0,75 мп) А (0,25 мл) Нет А (2,0 мл)
2 А (0,1 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) А (2,0 мл)
3 А (0,1 мл) В (0,75 мл) А (0,25 мл) Нет А (2,0 мл)
4 В (0,1 мл) С {0,75 мл) А {0,25 мл) Нет В <2,0 мл)
5 В (0,1 мл) ϋ (0,25 мл) А (0,25 мл) А (0,50 мл) В (2,0 мл)
б С (0,2 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) В (2,0 мл)
7 β (0,1 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) В (2,0 мл)
Раствор 1А. Пептид овальбумина 323-339, 69 мг/мл, в деионизированной воде. Раствор приготовили путем медленного добавления пептида овальбумина к воде при перемешивании при комнатной температуре.
Раствор 1В. Пептид овальбумина 323-339, 70 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 1С. Олигонуклеотид (Р8-1826), 50 мг/мл, в очищенной воде. Раствор приготовили путем растворения олигонуклеотида в очищенной воде при комнатной температуре.
Раствор 1Ό. Пептид овальбумина 323-339, 17,5 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина, 70 мг/мл, в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре и затем разведения раствора 3 ч. очищенной воды на 1 ч. исходного раствора.
Раствор 2А. К848, 10 мг/мл, и 0,19-ΙΥ ΓΕΑ, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при
- 43 022699 комнатной температуре.
Раствор 2В. РЬА-К.848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2С. РЬОА-К.848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2Ό. РЬА-РЕО-К.848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 3А. РЬА-РЕС-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 4А. 0,19-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 5А. Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в деионизированной воде.
Раствор 5В. Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в 100 мМ фосфатном буфере с рН 8.
Первичную эмульсию вода-в-масле (В/М) приготовили путем объединения раствора 1 и раствора 2, раствора 3 и раствора 4 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50% амплитудой в течение 40 с с помощью Вгаикои Όίβίΐαΐ §ои1йег 250. Двойную эмульсию вода/масло/вода (В/М/В) приготовили путем добавления раствора 5 к первичной эмульсии и обработки ультразвуком при 30-35% амплитуде в течение 40 с с помощью Вгаизои Όίβίΐαΐ §отйег 250.
Двойную эмульсию добавили в стакан с раствором фосфатного буфера (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч с тем, чтобы позволить испариться метиленхлориду и сформироваться наноносителям. Часть наноносителей промыли путем перенесения суспензии наноносителей в центрифужную пробирку и кручения при 5000-9500 об/мин в течение 1 ч, удаления супернатанта и ресуспендирования осадка в фосфатно-соляном буфере. Повторили процедуру промывания и осадок ресуспендировали в фосфатно-соляном буфере для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Пример 35. Определение количества средств.
Способ для К848 и пептидов (например, пептида оуа, пептида человека, ТТ2рЭТ51).
Количество К848 (иммуностимулирующее средство) и пептида оуа (Т-клеточный антиген) измерили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдПеШ 1100 при соотвествующих длинах волн (λ=254 нм для К848 и 215 нм для пептида оуа), оснащенной колонкой АдйеШ 2огЬах 8В-С18 (3,5 мкм 75x4,6 мм. Температура колонки=40°С (кат. номер 866953-902)) с применением подвижной фазы А (МРА) 95% воды/5% ацетонитрила/0,1% ТРА и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА (градиент: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; обратное понижение до 5% В до 9,5 мин и сохранять в равновесии до конца. Общее время цикла составило 13 мин со скоростью потока 1 мл/мин).
Способ для СрС.
Количество СрС (иммуностимулирующее средство) измерили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдйеШ 1100 при 260 нм, оснащенной ХВпйде С-18 ^а1ег8 (2,5мкм частица, 50x4,6 мм внутренний диаметр (кат. № 186003090), темп. колонки 600°С) с применением подвижной фазы А 2% ацетенитрил в 100 мМ ТЕА-ацетатный буфер, рН приблизительно 8,0, и подвижной фазы В в виде 90% ацетонитрила, 10% воды (колонку уравновесили до 5% В с повышением до 55% В за 8,5 мин, затем постепенно до 90% В до 12 мин. Концентрацию В быстро повысили до 5% за 1 мин и уравновесили до времени остановки, 16 мин. Скорость потока составляла 1 мл/мин до окончания способа, 16 мин).
Способ для аналога никотина.
Аналог никотина измеряли с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе Ащ1еп1 1100, оснащенной ХВпйде С-18 ^а1ег8 (5-мкм частица, 100x4,6 мм внутренний диаметр, температура колонки 400°С) с применением подвижной фазы А (МРА) 95% воды/5% ацетонитрила/0,1% ТРА и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА (градиент: колонку уравновесили при 5% В, повышали до 45% В за 14 мин. Затем постепенно повышали до 95% В от 14 до 20 мин. Концентрацию подвижной фазы В быстро понизили обратно до 5% и повторно уравновесили до конца способа. Скорость потока способа поддерживали при 0,5 мл/мин с общим временем цикла 25 мин. Суспензию ЫС центрифугировали при 14000 об/мин в течение приблизительно 15-30 мин в зависимости от размера частиц. Собранные осадки обрабатывали 200 мкл концентр. ΝΗ4ΟΗ (8 М) в течение 2 ч при покачивании до тех пор, пока раствор не стал прозрачным. 200 мкл 1% ТРА добавили для нейтрализации раствора смеси, что дало общий объем раствора осадка 200 мкл. Аликвоту 50 мкл раствора разбавили МРА (или водой) до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества, присутствовавшего в осадках.
Инкапсулированный свободный К848 в наноносителе 0,5 мл суспензии ЫС центрифугировали при 14000 об/мин, в течение приблизительно 15 мин. Собранный остаток растворили 0,3 мл ацетонитрила и недолго центрифугировали при 14000 об/мин для удаления любых остаточных нерастворимых веществ. Прозрачный раствор дополнительно разбавили 4-кратным эквивалентным объемом МРА и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше.
- 44 022699
Инкапсулированный СрО в наноносителе.
330 мкл суспензии NС с производства (приблизительно 10 мг/мл суспензия в РВ8) осадили центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15-30 мин в зависимости от размера частиц. Собранные осадки ресуспендировали 500 мкл воды и обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин до полного диспергирования частиц. NС затем нагревали при 600°С в течение 10 мин. К смеси добавили дополнительные 200 мкл 1н. №ЮН, нагревали еще 5 мин, в результате чего смесь становится прозрачной. Раствор гидролизированного NС недолго центрифугировали при 14000 об/мин. Затем осуществили конечное 2-кратное разведение прозрачного раствора с использованием воды и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше.
Инкапсулированные Т-клеточные антигены (например, пептид ονа или пептид человека, ТТ2рЭТ51).
330 мкл суспензии NС с производства (приблизительно 10 мг/мл суспензия в РВ8) осадили центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15-30 мин. К осадкам добавили 100 мкл ацетонитрила для растворения полимерных компонентов ΝΟ. Смесь перемешали на вортекс-мешалке и обрабатывали ультразвуком в течение 1-5 мин. 100 мкл 0,2% ТРЛ добавили к смеси для экстрагирования пептидов и обработали ультразвуком в течение еще 5 мин, чтобы обеспечить разрушение агрегатов. Смесь центрифугировали при 14000 об/мин в течение 15 мин для отделения каких-либо нерастворимых материалов (например, полимеров). Взяли 50 мкл аликвоту супернатанта, разведенную 150 мкл МРА (или воды), и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, как описано выше.
Количество конъюгированного аналога никотина (В-клеточный антиген) в наноносителях.
1,5 мл суспензии NС осаждали центрифугированием при 14000 об/мин в течение приблизительно 15 мин, осадки гидролизовали с помощью 150 мкл концентрированного ИН4ОН (8 М) в течение приблизительно 2-3 ч до тех пор, пока раствор не становится прозрачным. К смеси осадков добавили 150 мкл 2% ТРЛ (водн.) для нейтрализации раствора. Аликвоту 100 мкл смеси развели 200 мкл воды и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше, и определили количество на основе калибровочной кривой, построенной при помощи предшественника (РЕО-никотин) РЬЛ-РЕО-никотина, применяемого в производстве.
Пример 36. Тестирование скорости высвобождения.
Высвобождение Т-клеточного антигена, пептида ονа и адъюванта, К848 из синтетического наноносителя (наночастиц) в РВ8 (100 мМ, рН 7,4) и цитратного буфера (100 мМ, рН 4,5) при 37°С осуществили следующим образом.
Аналитический способ.
Высвобожденное количество К848 и ονа пептида измеряют при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе ЛдПеп! 1100 при λ=215 нм, оснащенной колонкой 2отЬах 8В-С18 Лдйеп! (3,5 мкм, 75x4,6 мм. Температура колонки=40°С (кат. номер 866953-902)) с использованием подвижной фазы А (МРА) 98% воды/2% ацетонитрила/0,1% ТРЛ и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРЛ (с градиентом: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; повторно уравновесили до конца. Время цикла - 13 мин. Поток=1 мл/мин).
Общее количество К848 и пептида ονа, присутствующих в наночастицах, составляло, как показано в табл. 1. Водную суспензию тестируемых синтетических наноносителей затем развели РВ8 до конечного объема исходного раствора 4,4 мл.
(A) Измерение скорости высвобождения ш νίΙΐΌ в РВ8 (рН 7,4).
Для образца Т0 сразу удалили аликвоту 200 мкл из каждого образца ΝΓ и центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках с помощью микроцентрифуги (модель: Оа1аху 16). Удалили 100 мкл супернатанта, развели до 200 мкл в подвижной фазе А (МРА) ВЭЖХ и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονа на обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для измерений в моменты времени: 9x200 мкл каждого из образцов добавили в микроцентрифужные пробирки (3x200 для несконъюгированных) и добавили 300 мкл 37С РВ8 к каждой из вышеупомянутых аликвот, образцы немедленно поместили в 37°С термостат. В следующие моменты времени: 24, 48, 96 и 144 ч (для конъюгированного К848) или 2, 16 и 24 ч (для неконъюгированного (инкапсулированного) К848), образцы центрифугировали и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονа, как описано выше для образца Т0.
(B) Измерение скорости высвобождения ш νίΙΐΌ в цитратном буфере (рН 4,5).
Для образца Т0 удалили 200 мкл аликвоту из каждого образца, центрифугировали при 6000 об/мин в течение 20 мин и удалили супернатант. Остаточные наночастицы ресуспендировали в 200 мкл цитратного буфера и центрифугировали на при 14000 об/мин в течение 15 мин. Удалили 100 мкл супернатанта, развели до 200 мкл посредством МРА и проанализировали на К848 и пептид, как приведено выше.
Для измерений в моменты времени: 9x200 мкл каждого из образцов добавили в микроцентрифужные пробирки (3x200 для неконъюгированного), центрифугировали в течение 20 мин при 6000 об/мин и удалили супернатанты. Остаточные NР затем ресуспендировали в 500 мкл цитратного буфера и поместили в 37°С термостат. В следующие моменты времени: 24, 48, 96 и 144 ч (для конъюгированного К848)
- 45 022699 или 2, 16 и 24 ч (для неконъюгированного (инкапсулированного) К848), образцы центрифугировали и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида оуа, как описано выше для образца Т0.
Для установления баланса масс из вышеуказанных измерений в РВ8 и цитратном буфере оставшиеся осадки (только образцы конъюгированного К848) из каждого образца обработали 200 мкл конц. ЫН4ОН (8 М) в течение 3 ч с перемешиванием. После осаждения смеси добавили 200 мкл 1% ТРА с доведением общего объема осадка до 400 мкл. Аликвоту 50 мкл раствора развели МРА до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества К848 и пептида оуа, которые остались в осадке после высвобождения ш νίΙΐΌ для сведения баланса масс. Для несконъюгированных образцов разводят образец посредством ТРА в ацетонитриле и анализируют, как описано выше для К848 и пептида.
Результаты подытожены на фиг. 1-3.
Материалы и способ.
ВЭЖХ - АдПеп! 1100. λ=215 нм. Темп. колонки=40°С.
Колонка - 2огЬах 8В-С18 АдПеп!, 3,5 мкм. 75x4,6 мм (кат. С18 предколонка).
Подвижная фаза А (МРА) - 98% воды/2% ацетонитрила/0,1% ТРА.
Подвижная фаза В (МРВ) - 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА.
Градиент: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; повторно уравновесили до конца. Время цикла - 13 мин. Поток=1 мл/мин.
РВ8 - 100 мМ, рН 7,4.
Цитратный буфер - 100 мМ, рН 4,5.
Термостат.
Микроцентрифуга - Оа1аху 16.
Микроцентрифужные пробирки.
Ультразвуковой аппарат.
Пипетки - 20, 200, 1000 мкл, регулируемые.
Вода класса для ВЭЖХ - ЕМО - №АХ0008-1.
ЫН4ОН - ~8М. МаШпксгоб!.
ТРА, 0,2%. Пригот.
ТРА, 1%. Пригот.
Термометр.
Образцы - 6-1 и 6-2 имеют удерживаемый К848. Все остальные имеют сконъюгированный К848. Оценочные значения основаны на результатах загрузки из 62 серии.
Таблица 2
Оценочные К848 и пептид оуа в синтетических наноносителях
Объемы образцов были слегка ниже, чем планировалось. Для обеспечения достаточного количества материала для всех моментов времени к образцам добавили следующие объемы РВ8 с доведением их всех до 4,4 мл.
- 46 022699
Таблица 3
Процедура.
1) Пригот. образца Т=0.
a. РВ8.
ΐ. Взять 200 мкл аликвоту из каждого образца. Центрифугировать на микроцентрифуге при 14000 об/мин. Удалить супернатант.
ΐΐ. Развести 100>200 мкл супернатанта в МРА (ΌΡ=2). ίίί. Проанализировать пептид и К848.
b. Цитрат.
ί. Взять 200-мкл аликвоту из каждого образца. Центрифугировать на микроцентрифуге при 6000 об/мин в течение 20 мин. Удалить супернатант.
ίί. Добавить 200 мкл цитратного буфера и тщательно ресуспендировать.
ίίί. Центрифугировать на микроцентрифуге при 14000 об/мин в течение 15 мин. Удалить супернатант.
ιν. Развести 100>200 мкл супернатанта в МРА (ΌΡ=2). ν. Проанализировать пептид и К848.
2) РВ8 РУК
a. Добавить 9х200 мкл каждого из образцов в микроцентрифужные пробирки (3х200 для неконъюгированных).
b. К каждой аликвоте добавить 300 мкл 37°С РВ§.
c. Образцы сразу поместить в 37°С термостат.
3) Цитрат 1УК.
a. Добавить 9х200 мкл каждого из образцов в микроцентрифужные пробирки (3х200 для неконъюгированных).
b. Центрифугировать 20 мин при 6000 об/мин.
c. Удалить супернатанты.
б. В каждую пробирку добавить 500 мкл цитратного буфера и тщательно ресуспендировать. е. Образцы поместить в 37°С термостат.
4) Для партий 1-4 и 8 забрать образцы (см. этап 6) в следующие моменты времени.
a. Конъюгированные. ΐ. 24 ч.
ίί. 48 ч (2 суток). ίίί. 96 ч (4 суток). ίν. 144 ч (6 суток).
ν. Дальнейшие моменты времени ΤΒΌ следует определять на основе вышеприведенных данных.
b. Неконъюгированные. ΐ. 2 ч.
ίί. 16 ч. ίίί. 24 ч.
5) Для партий 6 и 7 взять образцы в следующие моменты времени.
а) РΒ8.
ΐ. 24 ч.
ίί. 48 ч (2 суток). ίίί. 96 ч (4 суток). ίν. 144 ч (6 суток).
ν. Дальнейшие моменты времени ΤΒΌ следует определять на основе вышеприведенных данных.
Ь. Цитрат. ΐ. 2 ч. ίί. 16 ч. ίίί. 24 ч.
- 47 022699 ίν. 48 ч (2 суток). ν. 72 ч (3 суток). νί. 96 ч (4 суток). νίί. 120 ч (5 суток).
νίίί. Дальнейшие моменты времени ТВЭ следует определять на основе вышеприведенных данных.
6) Забор образца следующим образом.
a) Центрифугировать на микроцентрифуге при 14000 об/мин в течение 15 мин.
b) Удалить супернатант.
c) Развести от 100 до 200 мкл в МРА (ΌΡ=2).
7) Проанализировать пептид и К848. Это даст количество, высвобождаемое в каждый момент времени.
Для сведения баланса масс выполнить следующее.
8) К оставшимся осадкам (только конъюгированным) добавить 200 мкл МН4ОН.
9) Недолго крутить на вортекс-мешалке и обработать ультразвуком для диспергирования.
10) Добавить магнитную мешалку. Дать осесть до прозрачности (по меньшей мере 3 ч).
11) Добавить 200 мкл 1% ТΡΑ (общий объем осадка=400 мкл).
12) Развести 50-200 мкл в МРА. Проанализировать с помощью ВЭЖХ для определения пептида и К848, оставшихся в осадке (ΌΡ=4).
13) Для неконъюгированных партий проанализировать пептид и К848 посредством обычного способа ΑсN/ТΡΑ.
Пример 37. Тестирование скорости высвобождения.
Высвобождение антигена (например, пептида ονа, Т-клеточного антигена) и иммуностимулирующих средств (например, К848, СрС) из синтетических наноносителей в фосфатно-соляном буфере (ΡΒδ) (100 мМ, рН 7,4) и цитратном буфере (100 мМ, рН 4,5) при 37°С определяли следующим образом.
Высвобождение К848 из наноносителя, составленного из конъюгированного К848 и пептида ονа, осуществили путем замены требуемого количества водной суспензии тестируемых синтетических наноносителей, полученных с производства (например, приблизительно 10 мг/мл в ΡΒδ), на такой же объем соответствующих сред для высвобождения (цитратный буфер, 100 мМ) посредством центрифугирования и ресуспендирования.
Измерение скорости высвобождения ш νίίτο в ΡΒδ (рН 7,4) 1 мл суспензии ЫС в ΡΒδ центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках, в основном от 15 до 30 мин, в зависимости от размера частиц. Собранный супернатант затем развели равным объемом подвижной фазы А (МРА) или водой и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ на предмет количества К848, высвобожденного при хранении. Оставшийся осадок ресуспендировали до однородной суспензии в 1 мл ΡΒδ и поместили в термокамеру при 37°С с постоянным легким помешиванием.
Для образца Т0 сразу удалили аликвоты 150 мкл из суспензии КС перед тем, как поместить суспензию КС в термокамеру при 37°С, и центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках с помощью микроцентрифуги (модель: Са1аху 16). Удалили 100 мкл супернатанта, развели до 200 мкл подвижной фазой А (МРА) ВЭЖХ или водой и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονа на обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для измерений в моменты времени удалили аликвоты 150 мкл из суспензии-образца НС 37°С, образцы центрифугировали и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονа тем же способом, что и для образца ТО. Высвобожденные К848 и пептида ονа тестировали в момент времени 6, 24 ч для обычного контроля с дополнительными моментами времени 2, 48, 96 и 144 ч для установки полного профиля высвобождения.
Измерение скорости высвобождения ш νίίτο в цитратном буфере (рН 4,5).
Применили 100-мМ буфер на основе цитрата натрия (рН 4,5) для замены исходного раствора для хранения ΝΟ’ (например, ΡΒδ) вместо ΡΒδ-буфера, рН 7,4. Для того чтобы свести баланс масс из вышеприведенных измерений в ΡΒδ и цитратном буфере, оставшиеся осадки от каждого момента времени обработали 100 мкл NΗ4ОΗ (8 М) в течение 2 ч (или дольше) при перемешивании до тех пор, пока раствор не стал прозрачным. 100 мкл 1% ТΡΑ добавили для нейтрализации смеси, что дало общий объем раствора осадка 200 мкл. Аликвоту 50 мкл смеси развели МРА (или водой) до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества невысвобожденного К848, который остался в осадке после высвобождения ш νίίτο для сведения баланса масс. Для несконъюгированных образцов образец разводят ТΡΑ в ацетонитриле и анализируют, как описано выше для К848.
Высвобождение СрС определяли схожим образом как для измерения К848 и пептида ονа с точки зрения приготовления образцов и контролируемых моментов времени. Тем не менее, количество СрС в средах для высвобождения оценивали с помощью способа обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанного выше.
Пример 38. Иммунизация посредством транспортирующих адъювант СрС.
Группы из пяти мышей иммунизировали три раза (подкожно, в задние конечности) с 2-недельными интервалами (дни 0, 14 и 28) посредством 100 мг ΝΟΝία представлял собой композицию наноносителей с находящимся на внешней поверхности никотином и для всех групп мышей, за исключением
- 48 022699 группы 1, транспортирующей адъювант СрО-1826 (тиоатированный), который высвобождался из наноносителей с различными скоростями. Наноносители получали в соответствии с приведенным выше способом. Затем измерили антитела к никотину сыворотки крови на 26 и 40 дни. ЕС50 для антител к никотину, как измерено в стандартном ΕΠδΑ на полилизинникотин, показаны на фиг. 4.
Мышам группы 1 вводили ΝΟ-Νΐο без СрО-1826, содержащие пептид оуа и полимеры, 75% которых представляли собой РЬ-Л и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с. Мышам группы 2 вводили Ж.’-№с, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 3,2% СрО-1826; скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 4,2 мкг СрО на 1 мг N0. Мышам группы 3 вводили Νί'.'-Νχ, содержащие полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 3,1% СрО-1826; скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 15 мкг СрО на 1 мг ΝΟ Высвобождение определяли при рН 4,5.
Результаты, показанные на фиг. 4, демонстрируют, что удержание адъюванта в наноносителях является полезным для иммунного ответа на связанный с NС антиген, и, кроме того, что более высокая скорость высвобождения удерживаемого адъюванта СрО из наноносителей (Ν6) на момент времени 24 ч давала иммунный ответ, который был повышен по сравнению с ответом, индуцированным посредством NС с более низкой скоростью высвобождения адъюванта СрО (агонист ТЬК9).
Пример 39. Иммунизация посредством Ν^Νΐο, транспортирующих две формы адъюванта СрО.
Группы из пяти мышей иммунизировали дважды (подкожно, в задние конечности) с 4-недельными интервалами (дни 0 и 28) посредством 100 мкг Ν^Νΐο, а затем антитела к никотину сыворотки крови измеряли на 12, 24 и 40 дни. ΝΓ-Νΐο представлял собой композицию наноносителя с находящимся на внешней поверхности никотином и транспортирующий одну из двух форм адъюванта СрО-1826. Наноносители получали в соответствии с приведенным выше способом. ЕС50 для антител к никотину, как измерено в стандартном ΕΠδΑ на полилизинникотин, показаны на фиг. 5.
Мышам группы 1 вводили Νί'.'-Νχ, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 6,2% СрО-1826 (тиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 16,6 мкг СрО на мг ΝΟ Мышам группы 2 вводили Νί'.'-ΝΚ, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^ΑРЕО-№с, и 7,2% СрО-1826 (тиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 13,2 мкг СрО на 1 мг ΝΟ Мышам группы 3 вводили Νί'.'-ΝΚ, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 7,9% СрО-1826 (сложный фосфодиэфир или РО, нетиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 19,6 мкг СрО на 1 мг Ν6. Мышам группы 4 вводили Νί'.'-ΝΚ, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 8,5% СрО-1826 (РО, нетиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 9,3 мкг СрО на 1 мг ΝΟ Высвобождение определяли при рН 4,5.
Результаты, показанные на фиг. 5, демонстрируют, что скорость высвобождения удерживаемого адъюванта (СрО, агонист ТЬК9) из наноносителей влияла на продуцирование антитела к связанному с NС антигену (никотину), при этом наноноситель, проявлявший более высокую скорость высвобождения на момент времени 24 ч, индуцировал более сильный гуморальный иммунный ответ (группа 1>группа 2 и группа 3>группа 4). Это имело место независимо от использовавшейся формы СрО (более стабильный, тиоатированный или менее стабильный нетиоатированный).
Пример 40. Иммунизация посредством Ν^Νΐο, транспортирующих К848.
Группы из пяти мышей иммунизировали трижды (подкожно, в задние конечности) с 2-недельными интервалами (дни 0, 14 и 28) посредством 100 мкг Ν^Νΐο, а затем антитела к никотину сыворотки крови измеряли на 26, 40 и 54 дни. Наноносители получали в соответствии с приведенным выше способом. ЕС50 для антител к никотину, как измерено в стандартном ΕΠδΑ на полилизинникотин, показаны на фиг. 6.
Мышам группы 1 вводили Ν^Νΐο, содержащие пептид оуа и полимеры, 75% которых представляли собой Р^ и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, но без адъюванта. Мышам группы 2 вводили Ν6№с, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 1,0% К848; из которого 92% высвобождается за 2 ч и более 96% высвобождается за 6 ч. Мышам группы 3 вводили Ν^Νΐο, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Α-К848, и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 1,3% К848; из которого 29,4% высвобождается за 6 ч и 67,8% высвобождается за 24 ч. Мышам группы 4 вводили Ν^Νΐο, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой Р^Α-К848, и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 1,4% К848; из которого 20,4% высвобождается за 6 ч и 41,5% высвобождается за 24 ч. Мышам группы 5 вводили Ν6-Νΐο, содержащие пептид оуа, полимеры, 25% которых представляли собой Р^Α-РΕО-К848, 50% Р^Л. и 25% представляли собой Р^Α-РΕО-N^с, и 0,7% К848; из которого менее 1% высвобождается за 24
ч. Высвобождение определяли при рН 4,5.
Результаты, показанные на фиг. 6, демонстрируют, что адъювант К848 (агонист ТЬК 7/8), содержащийся в Ν6, увеличивает гуморальный иммунный ответ на связанный с NС антиген (группы 25>>группа 1). Более того, ни быстрое (группа 2), ни медленное (группа 5) высвобождение К848 не по- 49 022699 вышало иммунный ответ до такого же уровня, как ΝΟ, высвобождавшие К848 со средней скоростью (группа 3«группа 4>группа 2«группа 5).
Пример 41. Иммунизация посредством Ν^Νκ, транспортирующих удерживаемый РО СрС.
Группы из пяти мышей иммунизировали трижды (подкожно, в задние конечности) с 2-недельными интервалами (дни 0, 14 и 28) посредством 100 мкг Ν^Νκ (наноносители с никотином на внешней поверхности) с удерживаемым РО-СрС или не содержащими удерживаемый РО-СрС, смешанные со свободным РО-СрС. Синтетические наноносители получали в соответствии с приведенными выше способами. Затем в обеих группах измерили антитела к никотину сыворотки крови на 26 и 40 дни. ЕС50 для антител к никотину, как определено стандартным ЕЫ8А на полилизинникотин, показаны на фиг. 7.
Мышей группы 1 иммунизировали посредством ИС-№с с инкапсулированными 1826 РО-СрС и вспомогательным пептидом МНС-ΙΙ из овальбумина (Ον-ΙΙ) (6,6% РО-СрС; 2,3% Ον-ΙΙ). Мышей группы 2 иммунизировали посредством ΝΟ-Νκ с 0,7% удерживаемого Ον-II, смешанными с 20 мкг свободного 1826 РО-СрС.
Эксперимент демонстрирует, что удерживание РО-СрС в наноносителе (ΝΟ) вызывает гуморальный иммунный ответ, который превосходил индуцированный ответ при смешивании 3-кратно более высокой дозы свободного РО-СрС с NС без удерживаемого РО-СрС (титр антител в группе 1>титра антител в группе 2).

Claims (17)

1. Композиция для индукции или усиления иммунного ответа, содержащая синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем посредством связывания внутри синтетического наноносителя; где связывание является рНчувствительным и иммуномодулирующее средство диссоциирует от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
1Агв1 (4,5) 24%/1Аге1 (7,4) 24%*1,2 ;
где !Аге1 (4,5)24% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей;
!Аге1 (7,4)24% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίΐΌ при рН 7,4 в течение 24 ч, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΙΐΌ при рН 7,4 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη \'йго при рН 7,4 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей.
2. Композиция по п.1, где иммуномодулирующее средство инкапсулировано в синтетическом наноносителе и/или включает лабильное иммуномодулирующее средство, например имидазохинолин, производное аденина или олигонуклеотид, которые включают 5'-СС-3', где С неметилирован и где олигонуклеотид включает остов, включающий один или несколько нестабилизированных межнуклеотидных связей; и/или является адъювантом.
3. Композиция по п.2, где имидазохинолин включает имидазохинолиновый амин, имидазопиридиновый амин, 6,7-конденсированный циклоалкилимидазопиридиновый амин, имидазохинолиновый амин, имиквимод или резиквимод.
4. Композиция по п.2, где адъювант включает универсальный Т-клеточный антиген, агонист То11подобного рецептора (ТЬК), например агонист ТЬК 3, агонист ТЬК 7, агонист ТЬК 8, агонист ТЬК 7/8 или агонист ТЬК 9, или иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, например иммуностимулирующую ДНК или иммуностимулирующую РНК.
5. Композиция по п.4, где иммуностимулирующая нуклеиновая кислота представляет собой СрСсодержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, которая включает одну или несколько стабилизирующих химических модификаций, чья функция - стабилизировать остов в физиологических условиях.
6. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где остов олигонуклеотида (а) не включает стабилизирующие химические модификации, чья функция - стабилизировать остов в физиологических условиях; и, необязательно, (Ь) включает остов, который не модифицирован включением фосфоротиоатных стабилизирующих химических модификаций.
7. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где синтетические наноносители дополнительно включают (а) В-клеточный антиген и/или Т-клеточный антиген; и/или (Ь) элемент нацеливания на
- 50 022699 антигенпрезентирующую клетку (АРС); и/или (с) один или несколько биоразлагаемых полимеров; и/или (б) наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы.
8. Композиция по п.7, где биоразлагаемый полимер включает поли(лактид), поли(гликолид) или сополимер(лактида и гликолида), где, необязательно, биоразлагаемые полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, который определяется с помощью гель-проникающей хроматографии.
9. Композиция для индукции или усиления иммунного ответа, содержащая синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем посредством связывания внутри синтетического наноносителя; где связывание является рНчувствительным и иммуномодулирующее средство отделяется от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
ΙΑ{4,5) 24/ΙΑ<4,5) 6£ΐ,2;
где 1А (4,5)24 определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей;
1А (4,5)6 определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 6 ч, взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей, где, необязательно, иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, инкапсулированное в синтетическом наноносителе, и лабильное иммуномодулирующее средство является, например, таким, как определено в любом из пп.2, 3 и 6.
10. Композиция для индукции или усиления иммунного ответа, содержащая синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем посредством связывания внутри синтетического наноносителя; где связывание является рНчувствительным и иммуномодулирующее средство отделяется от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
6*1А<4,5) 24/1А<4,5) «*1,2 ;
где 1А (4,5)24 определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей;
1А (4,5)6 определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 6 ч, взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей, где, необязательно, иммуномодулирующее средство включает лабильное иммуномодулирующее средство, инкапсулированное в синтетическом наноносителе, и лабильное иммуномодулирующее средство является, например, таким, как определено в любом из пп.2, 3 и 6.
11. Композиция по п.9 или 10, где (а) иммуномодулирующее средство является таким, как определено в любом из пп.2, 4 и 5, и/или (Ь) синтетический наноноситель является таким, как определено в любом из пп.7, 8.
12. Композиция по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающая фармацевтически приемлемый эксципиент.
13. Композиция для индукции или усиления иммунного ответа, содержащая вакцину, которая включает композицию по любому из предшествующих пунктов.
14. Применение композиции по любому из предшествующих пунктов в способе лечения или профилактики рака, инфекционного заболевания, неаутоиммунного нарушения обмена веществ, дегенеративного заболевания или привыкания.
15. Применение композиции по любому из пп.1-13 в способе индукции или усиления иммунного ответа.
16. Способ индукции или усиления иммунного ответа, включающий определение, что иммуномодулирующие средства, связанные с синтетическими наноносителями, диссоциируют от синтетических наноносителей согласно следующему соотношению:
где 1Аге1 (4,5)24% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ш νίΙΐΌ при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди
- 51 022699 образцов синтетических наноносителей;
IА^с1 (7,4)24% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т уНго при рН 7,4 в течение 24 ч, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т укго при рН 7,4 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т укго при рН 7,4 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей;
введение синтетических наноносителей субъекту.
17. Способ индукции или усиления иммунного ответа, включающий введение иммуномодулирующих средств субъекту, где иммуномодулирующие средства связаны с синтетическими наноносителями и определены как диссоциирующие от синтетических наноносителей согласно следующему соотношению:
ΙΑτβΙ (4,5) 24%/ΙΑτβΙ (7,4) 24%£ΐ, 2 ;
где IА^с1 (4,5)24% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т уИго при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т укго при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т уНго при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей;
IА^с1 (7,4)24% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т уДго при рН 7,4 в течение 24 ч, деленный на сумму: вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т укго при рН 7,4 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой т укго при рН 7,4 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей.
Фиг. 1 % высвобождения К848 (все) Цитрат, рН 4,5,37С
Фиг. 2
- 52 022699
Высвобождение К848 ΐη νίίΓΟ за 24
4 3 5 6 7
Номер состава
Высвобождение при рН 4,5 было выше для каждого из вышеприведенных составов
Фиг. 3
Фиг. 4
Индукция антител с помощью Ν(Ξ, высвобождающих две формы СрС с различными скоростями
10000000
12 3 4
Фиг. 5
Фиг. 6
- 53 022699
Антитело к никотину после иммунизации посредством 1ЧС-№с/(РО-СрС)
Фиг. 7 высвобождение СрО
Цитрат, рН 43 РВ5, рН 7,5 Партия Время (часы) Выев. (мкг/мг ΝΡ) Выев. (% загрузки) Выев, (мкг/мг ΝΡ) Выев. (% загрузки) РО- СрС -1 0,54 1,21% 0,54 1,21% 0 3,87 8,7% 0,27 0,6% 2 6,72 15,1% 0,68 1,1% 6 10,14 22,8% 0,90 1,5% 24 15,14 34,1% 1,44 3,2% 72 168 336
Фиг. 8
EA201171479A 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ EA022699B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21712409P 2009-05-27 2009-05-27
US21712909P 2009-05-27 2009-05-27
US21711709P 2009-05-27 2009-05-27
US21711609P 2009-05-27 2009-05-27
PCT/US2010/001560 WO2010138193A2 (en) 2009-05-27 2010-05-26 Targeted synthetic nanocarriers with ph sensitive release of immunomodulatory agents

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201171479A1 EA201171479A1 (ru) 2012-06-29
EA022699B1 true EA022699B1 (ru) 2016-02-29

Family

ID=43012672

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500447A EA201500447A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
EA201890311A EA201890311A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения - иммуномодулирующие средства
EA201171478A EA028288B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201171480A EA030246B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства
EA201791383A EA201791383A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201171479A EA022699B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ

Family Applications Before (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500447A EA201500447A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
EA201890311A EA201890311A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения - иммуномодулирующие средства
EA201171478A EA028288B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201171480A EA030246B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства
EA201791383A EA201791383A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения

Country Status (12)

Country Link
US (9) US8629151B2 (ru)
EP (3) EP2435095A2 (ru)
JP (8) JP6282395B2 (ru)
KR (6) KR20120023830A (ru)
CN (7) CN102481375B (ru)
AU (6) AU2010254551B2 (ru)
BR (3) BRPI1010674A2 (ru)
CA (3) CA2762647A1 (ru)
EA (6) EA201500447A1 (ru)
IL (3) IL216548B (ru)
MX (5) MX357630B (ru)
WO (3) WO2010138193A2 (ru)

Families Citing this family (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030129251A1 (en) * 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US6993506B2 (en) 2000-12-05 2006-01-31 Jgr Acquisition, Inc. Method and device utilizing polymorphic data in e-commerce
JP4817599B2 (ja) * 2003-12-25 2011-11-16 独立行政法人科学技術振興機構 免疫活性増強剤とこれを用いた免疫活性の増強方法
US8557292B2 (en) 2008-08-13 2013-10-15 California Institute Of Technology Carrier nanoparticles and related compositions, methods and systems
DK2759306T3 (en) * 2008-12-09 2016-05-09 Coley Pharm Group Inc Immunostimulatory oligonucleotides
JP5813513B2 (ja) 2008-12-09 2015-11-17 ノババックス，インコーポレイテッド 修飾ｒｓｖｆタンパク質及びその使用方法
US11446374B2 (en) 2008-12-09 2022-09-20 Novavax, Inc. Modified RSV F proteins and methods of their use
MX2011011134A (es) * 2009-04-21 2012-01-31 Selecta Biosciences Inc Agentes inmunonanoterapeuticos que proporcionan una respuesta sesgada hacia th1.
KR20120023830A (ko) * 2009-05-27 2012-03-13 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 방출 속도가 상이한 성분을 갖는 나노운반체
EP2470554B1 (en) * 2009-08-26 2017-06-28 Selecta Biosciences, Inc. Compositions that induce t cell help
EP2575773A4 (en) 2010-05-26 2014-06-25 Selecta Biosciences Inc SYNTHETIC NANOTRÄGERKOMBINATIONSIMPFSTOFFE
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
CA3118108C (en) 2010-11-12 2024-02-20 Oncour Pharma, Inc. Modified immune-modulating particles comprising poly(lactic acid)
WO2012079043A2 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 California Institute Of Technology Targeting kidney mesangium with nanoparticles of defined diameter
EP2495567A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-05 Erasmus University Medical Center Rotterdam Methods and means for monitoring disruption of tissue homeostasis in the total body
BR112013024655A2 (pt) * 2011-03-25 2016-12-20 Selecta Biosciences Inc nanotransportadores sintéticos para liberação mediada de modo osmótico
KR101997836B1 (ko) 2011-04-18 2019-07-08 유니버시티 오브 죠지아 리서치 파운데이션, 인코포레이티드 백신 전달 방법
KR20140029468A (ko) * 2011-04-29 2014-03-10 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항체 반응을 감소시키기 위한 관용원성 합성 나노운반체
EP2736537A4 (en) 2011-07-29 2015-04-15 Selecta Biosciences Inc SYNTHETIC NANOTRANSPORTERS FOR THE PRODUCTION OF HUMOROUS AND CYTOTOXIC T-LYMPHOCY (CTL) IMMUNE REACTIONS
RS63244B1 (sr) 2011-12-16 2022-06-30 Modernatx Inc Kompozicije modifikovane mrna
JP2015518705A (ja) 2012-04-02 2015-07-06 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ヒト疾患に関連する生物製剤およびタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US9192651B2 (en) 2012-04-02 2015-11-24 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of secreted proteins
DK2863942T3 (da) 2012-06-21 2019-07-15 Univ Northwestern Peptidkonjugerede partikler
US9597380B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Modernatx, Inc. Terminally modified RNA
US9468681B2 (en) 2013-03-01 2016-10-18 California Institute Of Technology Targeted nanoparticles
WO2014142653A1 (en) 2013-03-11 2014-09-18 Cristal Delivery B.V. Vaccination composition
EP4406597A3 (en) 2013-03-13 2024-11-13 onCOUR Pharma, Inc. Immune-modifying particles for the treatment of inflammation
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
IL284924B2 (en) * 2013-05-03 2023-04-01 Selecta Biosciences Inc Adjacent, local administration of tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce type I and type IV hypersensitivity
CA2910579C (en) * 2013-05-03 2023-09-26 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
IL295392A (en) * 2013-06-04 2022-10-01 Selecta Biosciences Inc Repeated administration of antigen-specific immunotherapies that do not suppress an immune response
HUE056760T2 (hu) 2013-07-11 2022-03-28 Modernatx Inc A CRISPR-hez kapcsolódó fehérjéket és a szintetikus SGRNS-ket kódoló szintetikus polinukleotidokat tartalmazó készítmények és felhasználási módjaik
ES2762187T5 (es) 2013-08-13 2024-06-17 Univ Northwestern Partículas conjugadas con péptidos
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
WO2015034928A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
DE102013015112B4 (de) 2013-09-13 2016-07-14 Holger Frey Spaltbare Polyethylenglykol-(PEG)-Makromoleküle zum Einschluss von (Glyko-) Proteinen/Antigenen/Allergenen in abbaubaren Polyethylenglykol-(PEG)-Nanopartikeln sowie Verfahren zu ihrer Herstellung
JP7097667B2 (ja) 2013-09-27 2022-07-08 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 無担体生物活性タンパク質ナノ構造体
CA2930973A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Pal SAERTROM C/ebp alpha short activating rna compositions and methods of use
EP3094314B1 (en) 2014-01-16 2021-06-23 MUSC Foundation For Research Development Targeted nanocarriers for the administration of immunosuppressive agents
WO2016010788A1 (en) 2014-07-15 2016-01-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Polyketal particles including a cpg oligodeoxynucleotide for the treatment of lung cancer
US20170210788A1 (en) 2014-07-23 2017-07-27 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
WO2016019126A1 (en) * 2014-07-30 2016-02-04 The Research Foundation For The State University Of New York System and method for delivering genetic material or protein to cells
CA2957800A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector immune responses
ES2980216T3 (es) 2015-07-01 2024-09-30 California Inst Of Techn Sistemas de administración basados en polímeros de ácido múcico catiónicos
CN108990413A (zh) 2015-08-12 2018-12-11 麻省理工学院 纳米颗粒的细胞表面偶联
EP3344291B1 (en) 2015-09-03 2024-11-27 Novavax, Inc. Vaccine compositions having improved stability and immunogenicity
EP3347047A1 (en) * 2015-09-09 2018-07-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
SI3718565T1 (sl) 2015-10-22 2022-08-31 Modernatx, Inc. Cepiva za respiratorni virus
KR20180085761A (ko) 2015-11-20 2018-07-27 크리스탈 딜리버리 비.브이. 능동 타겟팅 나노입자
WO2017112943A1 (en) 2015-12-23 2017-06-29 Modernatx, Inc. Methods of using ox40 ligand encoding polynucleotides
WO2017120612A1 (en) 2016-01-10 2017-07-13 Modernatx, Inc. Therapeutic mrnas encoding anti ctla-4 antibodies
US11376324B2 (en) * 2016-03-02 2022-07-05 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Sting activating nanovaccine for immunotherapy
JP7185530B2 (ja) 2016-06-13 2022-12-07 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫細胞機能を促進するための方法および組成物
EP3487527A4 (en) * 2016-07-21 2020-03-11 Case Western Reserve University Plant virus or virus-like particle constructs
MX2019008276A (es) 2017-01-10 2019-09-16 Nektar Therapeutics Conjugados de polimero multibrazo de compuestos agonistas de tlr y metodos de tratamiento inmunoterapeutico relacionados.
MX2019010757A (es) 2017-03-11 2020-01-20 Selecta Biosciences Inc Métodos y composiciones relacionados con el tratamiento combinado con antiinflamatorios y nanoportadores sintéticos que comprenden un inmunosupresor.
US12121573B2 (en) 2019-07-14 2024-10-22 Tianxin Wang Methods and agents including STING agonist to treat tumor
EP3658118A4 (en) 2017-07-24 2021-03-31 Novavax, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING RESPIRATORY DISEASE
US11524033B2 (en) 2017-09-05 2022-12-13 Torque Therapeutics, Inc. Therapeutic protein compositions and methods of making and using the same
CA3075219A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Mina Therapeutics Limited Hnf4a sarna compositions and methods of use
WO2019048645A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Mina Therapeutics Limited STABILIZED COMPOSITIONS OF SMALL ACTIVATOR RNA (PARNA) FROM CEBPA AND METHODS OF USE
MX2020009682A (es) 2018-03-19 2020-10-12 Novavax Inc Vacunas de nanoparticulas multivalentes contra la influenza.
EP4242307A3 (en) 2018-04-12 2023-12-27 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
CN112654710A (zh) 2018-05-16 2021-04-13 辛瑟高公司 用于指导rna设计和使用的方法和系统
US20210115139A1 (en) * 2018-05-30 2021-04-22 Genome And Company Pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, containing cd300e inhibitor as active ingredient
EP3806887A4 (en) 2018-06-13 2022-04-06 California Institute of Technology Nanoparticles for crossing the blood brain barrier and methods of treatment using the same
WO2020033791A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Verseau Therapeutics, Inc. Oligonucleotide compositions for targeting ccr2 and csf1r and uses thereof
KR20210113262A (ko) * 2019-01-04 2021-09-15 아센디스 파마 온콜로지 디비전 에이/에스 패턴 인식 수용체 작용제의 컨쥬게이트
US20220054478A1 (en) * 2019-01-04 2022-02-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Minimization of systemic inflammation
CN113874503A (zh) 2019-01-25 2021-12-31 辛瑟高公司 用于调节crispr活性的系统和方法
US20220211740A1 (en) 2019-04-12 2022-07-07 Mina Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
WO2021016135A1 (en) 2019-07-19 2021-01-28 Synthego Corporation Stabilized crispr complexes
CN111249453B (zh) * 2020-02-26 2021-11-19 浙江大学 一种纳米疫苗及其制备方法
WO2021231702A1 (en) * 2020-05-15 2021-11-18 Rutgers, The State University Of New Jersey Compositions and methods for treating wounds
WO2022006011A1 (en) * 2020-07-01 2022-01-06 Cello Therapeutics, Inc. Platelet membrane coated nanoparticles and uses thereof
IL315371A (en) * 2020-08-31 2024-11-01 Rav Bariach 08 Industries Ltd Multi-bolt electromechanical locking system for remote operation
US11952492B2 (en) * 2020-11-20 2024-04-09 Encapsys, Llc Biodegradable, controlled release microcapsules
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN112494460B (zh) * 2020-12-10 2022-03-11 浙江大飞龙动物保健品股份有限公司 替米考星粉剂及其制备方法
CA3208643A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof
EP4314292A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 MiNA Therapeutics Limited Tmem173 sarna compositions and methods of use
CA3216491A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Rational polyploid aav virions that cross the blood brain barrier and elicit reduced humoral response
US20230086755A1 (en) * 2021-09-17 2023-03-23 Illumina Cambridge Limited Reagent compositions, methods, cartridges, and systems
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023168023A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Reset Pharmaceuticals, Inc. Co-crystals or salts comprising psilocin
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
KR20240076105A (ko) * 2022-11-23 2024-05-30 주식회사 바임 생분해성 고분자 분산체 및 이의 제조방법
WO2024134199A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Mina Therapeutics Limited Chemically modified sarna compositions and methods of use
WO2024196783A1 (en) * 2023-03-21 2024-09-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Bioengineered colon-specific immune niche for the treatment of ulcerative colitis
CN117224699B (zh) * 2023-09-05 2024-03-19 贵州大学 一种纳米复合物及其制备方法和用途

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004098509A2 (en) * 2003-04-30 2004-11-18 Chiron Corporation Compositions for inducing immune responses
US20080160089A1 (en) * 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2008115319A2 (en) * 2007-02-07 2008-09-25 Regents Of The University Of California Conjugates of synthetic tlr agonists and uses therefor
WO2009051837A2 (en) * 2007-10-12 2009-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
WO2009076158A1 (en) * 2007-12-07 2009-06-18 Novartis Ag Compositions for inducing immune responses
WO2010003009A2 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Emory University Synergistic induction of humoral and cellular immunity by combinatorial activation of toll-like receptors
WO2010025324A2 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
WO2010042870A1 (en) * 2008-10-12 2010-04-15 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
WO2010123569A2 (en) * 2009-04-21 2010-10-28 Selecta Biosciences, Inc. Immunonanotherapeutics providing a th1-biased response
WO2010138192A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Nanocarriers possessing components with different rates of release

Family Cites Families (250)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR7461M (ru) 1968-06-19 1970-01-05
GB1355961A (en) 1970-02-27 1974-06-12 Wellcome Found Preparation of immunosuppressive antilymphocytic serum
CH594444A5 (ru) * 1972-12-04 1978-01-13 Gerd Birrenbach
DK143689C (da) 1975-03-20 1982-03-15 J Kreuter Fremgangsmaade til fremstilling af en adsorberet vaccine
US4756907A (en) 1978-10-17 1988-07-12 Stolle Research & Development Corp. Active/passive immunization of the internal female reproductive organs
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US6309669B1 (en) 1984-03-16 2001-10-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive materials encapsulated within a biodegradable-biocompatible polymeric matrix
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4631211A (en) 1985-03-25 1986-12-23 Scripps Clinic & Research Foundation Means for sequential solid phase organic synthesis and methods using the same
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
JPS63122620A (ja) 1986-11-12 1988-05-26 Sanraku Inc ポリ乳酸マイクロスフエア及びその製造方法
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5759830A (en) 1986-11-20 1998-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Three-dimensional fibrous scaffold containing attached cells for producing vascularized tissue in vivo
FR2608988B1 (fr) 1986-12-31 1991-01-11 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une substance, sous forme de nanoparticules
US5912017A (en) 1987-05-01 1999-06-15 Massachusetts Institute Of Technology Multiwall polymeric microspheres
US5229490A (en) 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
US6130082A (en) 1988-05-05 2000-10-10 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
US4929624A (en) 1989-03-23 1990-05-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
US5114703A (en) * 1989-05-30 1992-05-19 Alliance Pharmaceutical Corp. Percutaneous lymphography using particulate fluorocarbon emulsions
US5733572A (en) * 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
GB9016885D0 (en) 1990-08-01 1990-09-12 Scras Sustained release pharmaceutical compositions
US5389640A (en) 1991-03-01 1995-02-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
AU664365B2 (en) 1991-04-02 1995-11-16 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Oral delivery systems for microparticles
US5811447A (en) * 1993-01-28 1998-09-22 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6235313B1 (en) 1992-04-24 2001-05-22 Brown University Research Foundation Bioadhesive microspheres and their use as drug delivery and imaging systems
WO1994002068A1 (en) 1992-07-21 1994-02-03 The General Hospital Corporation System of drug delivery to the lymphatic tissues
GB9216082D0 (en) 1992-07-28 1992-09-09 Univ Nottingham Lymphatic delivery composition
US6608201B2 (en) 1992-08-28 2003-08-19 3M Innovative Properties Company Process for preparing 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
FR2695563B1 (fr) 1992-09-11 1994-12-02 Pasteur Institut Microparticules portant des antigènes et leur utilisation pour l'induction de réponses humorales ou cellulaires.
WO1994007469A1 (en) 1992-09-25 1994-04-14 Dynagen, Inc. An immunobooster for delayed release of immunogen
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
DE69418699T2 (de) 1993-01-11 1999-09-30 Dana-Farber Cancer Institute, Boston Induktion der antworten zytotoxischer t-lymphozyten
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
AU6268894A (en) 1993-02-22 1994-09-14 Alza Corporation Compositions for oral delivery of active agents
US5916539A (en) 1993-03-02 1999-06-29 Silica Gel Ges. M.B.H. Superparamagnetic particles, process for producing the same and their use
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
WO1995003035A1 (en) 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US5798340A (en) 1993-09-17 1998-08-25 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
US5500161A (en) 1993-09-21 1996-03-19 Massachusetts Institute Of Technology And Virus Research Institute Method for making hydrophobic polymeric microparticles
EP0740548B1 (en) 1994-02-28 2002-12-04 Nanopharm AG Drug targeting system, method for preparing same and its use
GB9412273D0 (en) * 1994-06-18 1994-08-10 Univ Nottingham Administration means
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
EP1167377B2 (en) 1994-07-15 2012-08-08 University of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
DE69630514D1 (de) 1995-01-05 2003-12-04 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
WO1997004747A1 (en) 1995-07-27 1997-02-13 Dunn James M Drug delivery systems for macromolecular drugs
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5922695A (en) 1996-07-26 1999-07-13 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonomethyoxy nucleotide analogs having increased oral bioavarilability
US6368598B1 (en) 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
NZ335124A (en) 1996-10-25 2001-02-23 Minnesota Mining & Mfg Immune response modifier compounds for treatment of TH2 mediated and related diseases
US6042820A (en) 1996-12-20 2000-03-28 Connaught Laboratories Limited Biodegradable copolymer containing α-hydroxy acid and α-amino acid units
US6214806B1 (en) 1997-02-28 2001-04-10 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CPC dinucleotide in the treatment of LPS-associated disorders
ATE441432T1 (de) 1997-03-10 2009-09-15 Ottawa Hospital Res Inst Verwendung von nicht-methyliertem cpg dinukleotid in kombination mit aluminium als adjuvantien
US6211159B1 (en) 1997-04-11 2001-04-03 University Of Toronto Flagellin gene, FlaC of campylobacter
US6060082A (en) * 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
CA2301575C (en) 1997-05-20 2003-12-23 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
US6989435B2 (en) * 1997-09-11 2006-01-24 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
DE19745950A1 (de) 1997-10-17 1999-04-22 Dds Drug Delivery Service Ges Arzneistoffträgerpartikel für die gewebespezifische Arzneistoffapplikation
US6329381B1 (en) 1997-11-28 2001-12-11 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Heterocyclic compounds
US6197229B1 (en) 1997-12-12 2001-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Method for high supercoiled DNA content microspheres
US6254890B1 (en) 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
FR2775435B1 (fr) 1998-02-27 2000-05-26 Bioalliance Pharma Nanoparticules comprenant au moins un polymere et au moins un compose apte a complexer un ou plusieurs principes actifs
US6232287B1 (en) * 1998-03-13 2001-05-15 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
CA2323929C (en) 1998-04-03 2004-03-09 University Of Iowa Research Foundation Methods and products for stimulating the immune system using immunotherapeutic oligonucleotides and cytokines
CA2328602A1 (en) 1998-05-06 1999-11-11 University Of Iowa Research Foundation Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides
DE19827164A1 (de) * 1998-06-18 1999-12-23 Merck Patent Gmbh Katalytisch Titan(IV)-oxid vermittelte geminale symmetrische Dialkylierung von Carbonsäureamiden
US6242589B1 (en) 1998-07-14 2001-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages
PT1100468E (pt) 1998-07-29 2006-07-31 Chiron Corp Microparticulas com superficies adsorventes, processos de fabrico e utilizacao das mesmas
DE19839214C1 (de) * 1998-08-28 2000-05-25 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Verfahren zur Herstellung von sphärischen Mikropartikeln mit glatter Oberfläche, die ganz oder teilweise aus mindestens einem wasserunlöslichen linearen Polysaccharid bestehen, sowie mit diesem Verfahren erhältliche Mikropartikel und deren Verwendung
US6306640B1 (en) 1998-10-05 2001-10-23 Genzyme Corporation Melanoma antigenic peptides
NZ511442A (en) 1998-11-02 2003-02-28 Elan Corp Plc Multiparticulate modified release composition for multiple dosing of ADD patients with methylphenidate HCl
US7521068B2 (en) 1998-11-12 2009-04-21 Elan Pharma International Ltd. Dry powder aerosols of nanoparticulate drugs
US7238711B1 (en) 1999-03-17 2007-07-03 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
US6444192B1 (en) 1999-02-05 2002-09-03 The Regents Of The University Of California Diagnostic imaging of lymph structures
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
CA2369595C (en) 1999-04-23 2010-10-05 Alza Corporation Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome
US6800296B1 (en) 1999-05-19 2004-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Modification of surfaces using biological recognition events
US6815170B1 (en) 1999-06-30 2004-11-09 John Wayne Cancer Institute Methods for lymph node identification
WO2001012071A1 (en) * 1999-08-13 2001-02-22 Point Biomedical Corporation Microparticles useful as ultrasonic contrast agents and for lymphatic system
CA2391534A1 (en) 1999-11-15 2001-05-25 Drug Innovation & Design, Inc. Selective cellular targeting: multifunctional delivery vehicles
WO2001051665A2 (en) 2000-01-13 2001-07-19 Nanosphere Inc. Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor
US20050032733A1 (en) 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20050020525A1 (en) 2002-02-20 2005-01-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
JP4751556B2 (ja) 2000-02-28 2011-08-17 ジーンシーグス， インコーポレイテッド ナノカプセルカプセル化システムおよび方法
US7129222B2 (en) 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7192725B2 (en) 2000-05-19 2007-03-20 University Of Toronto Flagellin gene, flaC of Campylobacter
AU2001297913A1 (en) 2000-10-13 2002-12-23 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Polyvalent nanoparticles
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
CA2426692C (en) 2000-10-19 2011-01-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Block copolymers for multifunctional self-assembled systems
US7592008B2 (en) 2000-11-20 2009-09-22 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois, A Body Corporate And Politic Of The State Of Illinois Membrane scaffold proteins
US7097837B2 (en) 2001-02-19 2006-08-29 Pharmexa A/S Synthetic vaccine agents
US20030175950A1 (en) 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
EP2545937A1 (en) 2001-06-05 2013-01-16 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
JP2005514326A (ja) 2001-07-10 2005-05-19 コリクサ コーポレイション ミクロスフェア中に封入されたタンパク質およびアジュバントを送達するための組成物および方法
WO2003014316A2 (en) 2001-08-07 2003-02-20 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions, formulations, and methods for use thereof
WO2003020797A1 (en) 2001-08-30 2003-03-13 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
US8088388B2 (en) 2002-02-14 2012-01-03 United Biomedical, Inc. Stabilized synthetic immunogen delivery system
AU2003215316A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Chiron Corporation Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
US20030232013A1 (en) 2002-02-22 2003-12-18 Gary Sieckman Therapeutic and diagnostic targeting of cancers cells with tumor homing peptides
US7635463B2 (en) * 2002-02-27 2009-12-22 Pharmain Corporation Compositions for delivery of therapeutics and other materials
AU2003230806B2 (en) 2002-04-04 2009-05-07 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides
US20040038303A1 (en) * 2002-04-08 2004-02-26 Unger Gretchen M. Biologic modulations with nanoparticles
US7285289B2 (en) 2002-04-12 2007-10-23 Nagy Jon O Nanoparticle vaccines
US20080233181A1 (en) 2002-04-12 2008-09-25 Nagy Jon O Nanoparticle adjuvants for sub-unit vaccines
RU2004133894A (ru) * 2002-04-22 2005-04-20 Юниверсити Оф Флорида (Us) Функционализированные наночастицы и способы их применения
DK2226316T3 (en) 2002-05-30 2016-04-11 Scripps Research Inst Copper catalyzed ligation of azides and acetylenes
WO2003105780A2 (en) * 2002-06-18 2003-12-24 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. A dry powder oligonucleotide formulation, preparation and its uses
AU2003269904A1 (en) 2002-07-10 2004-01-23 The Ohio State University Research Foundation Antigen-polymer compositions
RU2326693C2 (ru) 2002-07-18 2008-06-20 Цитос Байотекнолоджи Аг Конъюгаты гаптен-носитель и их применение
US7488792B2 (en) * 2002-08-28 2009-02-10 Burnham Institute For Medical Research Collagen-binding molecules that selectively home to tumor vasculature and methods of using same
US20060189554A1 (en) 2002-09-24 2006-08-24 Russell Mumper Nanoparticle-Based vaccine delivery system containing adjuvant
US7008411B1 (en) 2002-09-30 2006-03-07 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method and apparatus for treating vulnerable plaque
NO20024755D0 (no) 2002-10-03 2002-10-03 Amersham Health As Metode
SE0203687D0 (sv) 2002-12-13 2002-12-13 Ian Harwigsson Med Adagit Fa Pharmaceutical Porous Particles
US20040156846A1 (en) 2003-02-06 2004-08-12 Triton Biosystems, Inc. Therapy via targeted delivery of nanoscale particles using L6 antibodies
DE602004008582T2 (de) 2003-02-17 2008-05-21 Peter Burkhard Peptidische nanoteilchen als arzneimittelabgabe- und antigen-display-systeme
US20040191215A1 (en) 2003-03-25 2004-09-30 Michael Froix Compositions for induction of a therapeutic response
CN100361651C (zh) 2003-03-26 2008-01-16 日本株式会社Ltt生物医药 用于靶向药物送递和持续药物释放的静脉内纳米颗粒
ZA200507063B (en) * 2003-03-26 2007-03-28 Cytos Biotechnology Ag Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: Method of preparation and use
US7727969B2 (en) * 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
CA2544240A1 (en) 2003-07-22 2005-02-17 Cytos Biotechnology Ag Cpg-packaged liposomes
US20050042298A1 (en) 2003-08-20 2005-02-24 Pardridge William M. Immunonanoparticles
WO2005037190A2 (en) 2003-09-03 2005-04-28 Dendritherapeutics, Inc. Multiplex vaccines
US7943179B2 (en) 2003-09-23 2011-05-17 Massachusetts Institute Of Technology pH triggerable polymeric particles
JP2007514519A (ja) 2003-10-20 2007-06-07 ウィリアム・マーシュ・ライス・ユニバーシティ ポリマー及び帯電ナノ粒子からなるマイクロカプセルを製造する方法
WO2005051351A2 (en) 2003-11-21 2005-06-09 Alza Corporation Gene delivery mediated by liposome-dna complex with cleavable peg surface modification
US20070116768A1 (en) * 2003-12-09 2007-05-24 Michael Chorny Sustained release preparations composed of biocompatible complex microparticles
ES2625345T3 (es) * 2003-12-19 2017-07-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Métodos para fabricar micro- y nanoestructuras usando litografía blanda o de impresión
US20050191294A1 (en) 2003-12-31 2005-09-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods of use of targeting peptides for diagnosis and therapy
US20070087986A1 (en) 2004-01-26 2007-04-19 Brett Premack Compositions and methods for enhancing immunity by chemoattractant adjuvants
US20050256073A1 (en) 2004-02-19 2005-11-17 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides
JP2007532572A (ja) * 2004-04-09 2007-11-15 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 免疫反応調整剤を送達させるための方法、組成物および調製物
ES2246695B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Composicion estimuladora de la respuesta inmunitaria que comprende nanoparticulas a base de un copolimero de metil vinil eter y anhidrido maleico.
US20060017339A1 (en) * 2004-06-03 2006-01-26 Lalit Chordia Brushless canned motor
CA2569590C (en) 2004-06-11 2014-04-01 Riken Drug having regulatory cell ligand contained in liposome
US7713550B2 (en) 2004-06-15 2010-05-11 Andrx Corporation Controlled release sodium valproate formulation
JP2008512350A (ja) * 2004-07-01 2008-04-24 イェール ユニバーシティ 標的化され、そして高密度で薬物が負荷されるポリマー性物質
US20080206270A1 (en) 2004-07-08 2008-08-28 Minev Boris R Enhancing Class I Antigen Presentation With Synthetic Sequences
US8017151B2 (en) 2004-09-07 2011-09-13 Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center Amphiphilic polymer-protein conjugates and methods of use thereof
CN1692943A (zh) 2004-09-17 2005-11-09 四川大学 CpG DNA分子抗感染免疫制剂的制备和应用
GB0421296D0 (en) 2004-09-24 2004-10-27 Angiogene Pharm Ltd Bioreductively-activated prodrugs
EP1793863B1 (en) 2004-10-01 2017-04-12 Midatech Ltd. Nanoparticles comprising antigens and adjuvants capable of stimulating t helper cells
EP1812864A2 (en) * 2004-10-07 2007-08-01 Emory University Multifunctional nanoparticles conjugates and their use
US9492400B2 (en) 2004-11-04 2016-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
JP2008519052A (ja) 2004-11-05 2008-06-05 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 薬剤によるヒト遊走性細胞の合目的的挙動
EP1812056B1 (en) 2004-11-15 2013-08-07 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Immunogenic compositions containing anthrax antigen, biodegradable polymer microparticles, and polynucleotide-containing immunological adjuvant
US20060111271A1 (en) * 2004-11-24 2006-05-25 Cerny Erich H Active and passive immunization against pharmacologically active hapten molecules using a synthetic carrier compound composed of similar elements
CA2590768A1 (en) 2004-12-14 2006-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of mll-af4 and uses thereof
US20060257359A1 (en) 2005-02-28 2006-11-16 Cedric Francois Modifying macrophage phenotype for treatment of disease
CA2602946A1 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Medstar Health, Inc. Delivery systems and methods for diagnosing and treating cardiovascular diseases
US20080305161A1 (en) 2005-04-13 2008-12-11 Pfizer Inc Injectable depot formulations and methods for providing sustained release of nanoparticle compositions
AU2006241149A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity
EP1877069A2 (de) 2005-05-04 2008-01-16 Noxxon Pharma AG Neue verwendung von spiegelmeren
AU2006244135A1 (en) * 2005-05-10 2006-11-16 Naomi Balaban Compositions for administering RNAIII-inhibiting peptides
ATE541875T1 (de) 2005-05-10 2012-02-15 Univ Emory Strategien zur freisetzung von wirkstoffen unter verwendung von mizellen und partikeln
CA2614049C (en) 2005-07-06 2014-12-02 Molly S. Shoichet Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
CN101287507B (zh) 2005-08-12 2012-12-05 刘江 用于淋巴靶向的方法和装置
JP2009507049A (ja) 2005-09-09 2009-02-19 北京徳科瑞医薬科技有限公司 リン脂質のポリエチレングリコール誘導体に包み込まれたビンカアルカロイド系制癌剤のナノミセル製剤
BRPI0618857B1 (pt) 2005-11-25 2022-07-19 Zoetis Belgium S.A Oligonucleotídeo de rna isolado, e método para regular negativamente células reguladoras cd4+ imunossupressoras
EP1954252B1 (en) 2005-12-02 2016-02-03 GlaxoSmithKline Biologicals SA Nanoparticles for use in immunogenic compositions
WO2007068747A1 (en) 2005-12-14 2007-06-21 Cytos Biotechnology Ag Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
WO2007070682A2 (en) 2005-12-15 2007-06-21 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
US7842312B2 (en) 2005-12-29 2010-11-30 Cordis Corporation Polymeric compositions comprising therapeutic agents in crystalline phases, and methods of forming the same
EP1986685A4 (en) 2006-01-31 2009-02-25 Medivas Llc COMPOSITIONS FOR DISPENSING A VACCINATE AND METHOD FOR THE APPLICATION THEREOF
US8021689B2 (en) 2006-02-21 2011-09-20 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (“EPFL”) Nanoparticles for immunotherapy
EP1991204A2 (en) 2006-02-24 2008-11-19 Novartis AG Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
US20100247653A1 (en) 2006-04-11 2010-09-30 Hans Lautenschlager Nanoparticles containing nicotine and/or cotinine, dispersions, and use thereof
CN101573141B (zh) 2006-05-15 2016-05-04 麻省理工学院 用于功能性颗粒的聚合物
US20110052697A1 (en) 2006-05-17 2011-03-03 Gwangju Institute Of Science & Technology Aptamer-Directed Drug Delivery
US8541559B2 (en) 2006-06-12 2013-09-24 Cytos Biotechnology Ag Process for producing aggregated oligonucleotides
JP2010502766A (ja) * 2006-06-16 2010-01-28 フロリダ アトランティック ユニヴァーシティ アジュバントとしてのキチン微粒子
US9381477B2 (en) 2006-06-23 2016-07-05 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
US20100144845A1 (en) 2006-08-04 2010-06-10 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
WO2008019366A2 (en) 2006-08-07 2008-02-14 Ludwig Institute For Cancer Research Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
RU2413506C2 (ru) 2006-08-11 2011-03-10 Панацея Биотек Лимитед Частицы для доставки активных ингредиентов, способ их получения и композиции из них
WO2008033432A2 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune modulation by chemically modified ribonucleosides and oligoribonucleotides
EP2077821B1 (en) 2006-10-12 2019-08-14 The University Of Queensland Compositions and methods for modulating immune responses
US20100303723A1 (en) 2006-11-20 2010-12-02 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
CA2671850A1 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Massachusetts Institute Of Technology Delivery of nanoparticles and/or agents to cells
WO2008071774A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Cytos Biotechnology Ag Purification process for coat protein of rna bacteriophages
US20080149123A1 (en) * 2006-12-22 2008-06-26 Mckay William D Particulate material dispensing hairbrush with combination bristles
US9217129B2 (en) 2007-02-09 2015-12-22 Massachusetts Institute Of Technology Oscillating cell culture bioreactor
WO2008115641A2 (en) 2007-02-15 2008-09-25 Yale University Modular nanoparticles for adaptable vaccines
US20100151031A1 (en) 2007-03-23 2010-06-17 Desimone Joseph M Discrete size and shape specific organic nanoparticles designed to elicit an immune response
ES2542058T3 (es) 2007-03-30 2015-07-30 Particle Sciences, Inc. Formulaciones en forma de partículas y usos de las mismas
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
EP2144600A4 (en) 2007-04-04 2011-03-16 Massachusetts Inst Technology POLY (AMINIC ACID) TARGET MOLECULES
AU2008236566A1 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
CA2684052A1 (en) * 2007-04-12 2008-10-23 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
US8394914B2 (en) 2007-08-24 2013-03-12 Board Of Trustees Of Michigan State University Functional polyglycolide nanoparticles derived from unimolecular micelles
WO2009038685A1 (en) 2007-09-18 2009-03-26 The Scripps Research Institute Ligands for copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition reactions
EP2217930B1 (en) * 2007-10-24 2013-03-06 Tallinn University Of Technology Maldi ms-based high-throughput screening method for substances inhibiting aggregation of alzheimer's amyloid beta peptides
WO2009109428A2 (en) 2008-02-01 2009-09-11 Alpha-O Peptides Ag Self-assembling peptide nanoparticles useful as vaccines
WO2009106999A2 (en) 2008-02-28 2009-09-03 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
EP2262480B1 (en) 2008-03-04 2018-02-14 Liquidia Technologies, Inc. Immunomodulator particles
US20090297621A1 (en) 2008-06-03 2009-12-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Microparticles For The Treatment Of Disease
AU2009268923B2 (en) * 2008-06-16 2015-09-17 Pfizer Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
WO2010005726A2 (en) * 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mtor inhibitors and methods of making and using same
WO2010017330A1 (en) 2008-08-06 2010-02-11 Novartis Ag Microparticles for use in immunogenic compositions
WO2010018130A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Purine derivatives for use in the treatment of allergic, inflammatory and infectious diseases
WO2010018132A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Compounds
UA103195C2 (ru) 2008-08-11 2013-09-25 Глаксосмитклайн Ллк Производные пурина для применения в лечении аллергий, воспалительных и инфекционных заболеваний
CN102203095A (zh) 2008-08-11 2011-09-28 葛兰素史密丝克莱恩有限责任公司 用于治疗变应性疾病、炎性疾病和感染性疾病的嘌呤衍生物
WO2010039861A2 (en) 2008-09-30 2010-04-08 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8591905B2 (en) * 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
EP2413964B1 (en) 2009-04-01 2019-11-13 University of Miami Vaccine compositions and methods of use thereof
CN102414327B (zh) 2009-05-01 2015-04-08 奇亚根盖瑟斯堡股份有限公司 用于在样品中检测rna剪接形式的非靶向扩增方法
WO2011005850A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 The Research Foundation Of State University Of New York Lipidic compositions for induction of immune tolerance
EP2470554B1 (en) * 2009-08-26 2017-06-28 Selecta Biosciences, Inc. Compositions that induce t cell help
WO2011084513A2 (en) 2009-12-15 2011-07-14 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticle compositions with high glass transition temperature or high molecular weight copolymers
US20110171248A1 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic virus-like particles conjugated to human papillomavirus capsid peptides for use as vaccines
US20110229556A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Lipid-coated polymer particles for immune stimulation
US20110272836A1 (en) 2010-04-12 2011-11-10 Selecta Biosciences, Inc. Eccentric vessels
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
EP2575773A4 (en) 2010-05-26 2014-06-25 Selecta Biosciences Inc SYNTHETIC NANOTRÄGERKOMBINATIONSIMPFSTOFFE
WO2012024629A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising proteins obtained or derived from human influenza a virus hemagglutinin
CN103079589A (zh) * 2010-08-23 2013-05-01 西莱克塔生物科技公司 用于诱导对抗原的免疫应答的靶向多表位剂型
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
WO2012092552A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
BR112013024655A2 (pt) 2011-03-25 2016-12-20 Selecta Biosciences Inc nanotransportadores sintéticos para liberação mediada de modo osmótico
KR20140029468A (ko) 2011-04-29 2014-03-10 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항체 반응을 감소시키기 위한 관용원성 합성 나노운반체
EP2736537A4 (en) * 2011-07-29 2015-04-15 Selecta Biosciences Inc SYNTHETIC NANOTRANSPORTERS FOR THE PRODUCTION OF HUMOROUS AND CYTOTOXIC T-LYMPHOCY (CTL) IMMUNE REACTIONS
US20130058902A1 (en) * 2011-09-06 2013-03-07 Selecta Biosciences, Inc. Dendritic cell subsets for generating induced tolerogenic dendritic cells and related compositions and methods
IL284924B2 (en) 2013-05-03 2023-04-01 Selecta Biosciences Inc Adjacent, local administration of tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce type I and type IV hypersensitivity
IL295392A (en) 2013-06-04 2022-10-01 Selecta Biosciences Inc Repeated administration of antigen-specific immunotherapies that do not suppress an immune response
US20150359865A1 (en) 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
US20160220501A1 (en) 2015-02-03 2016-08-04 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
CA2953507A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
CA2957800A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector immune responses
DK3215133T3 (da) 2014-11-05 2021-02-01 Selecta Biosciences Inc Fremgangsmåder og sammensætninger relateret til anvendelsen af overfladeaktive stoffer med lav hlb ved fremstilling af syntetiske nanobærere, som omfatter en rapalog

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004098509A2 (en) * 2003-04-30 2004-11-18 Chiron Corporation Compositions for inducing immune responses
US20080160089A1 (en) * 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2008115319A2 (en) * 2007-02-07 2008-09-25 Regents Of The University Of California Conjugates of synthetic tlr agonists and uses therefor
WO2009051837A2 (en) * 2007-10-12 2009-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
WO2009076158A1 (en) * 2007-12-07 2009-06-18 Novartis Ag Compositions for inducing immune responses
WO2010003009A2 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Emory University Synergistic induction of humoral and cellular immunity by combinatorial activation of toll-like receptors
WO2010025324A2 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
WO2010042870A1 (en) * 2008-10-12 2010-04-15 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
WO2010123569A2 (en) * 2009-04-21 2010-10-28 Selecta Biosciences, Inc. Immunonanotherapeutics providing a th1-biased response
WO2010138192A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Nanocarriers possessing components with different rates of release
WO2010138194A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Immunomodulatory agent-polymeric compounds

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIWAN M. ET AL.: " Enhancement of immune responses by co-delivery of a CpG ol igodeoxynucleotide and tetanus toxoidin biodegradable nanospheres", JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol . 85, no. 1-3, 13 December 2002 (2002-12-13), pages 247-262, XP004397783, ISSN: 0168-3659, DOI: 10. 1016/50168-3659(02)00275-4, abstract *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2010138193A2 (en) 2010-12-02
JP6236048B2 (ja) 2017-11-22
US20140193453A1 (en) 2014-07-10
EP2435095A2 (en) 2012-04-04
BRPI1010674A2 (pt) 2016-03-15
AU2010254551A9 (en) 2016-10-27
BRPI1012034A2 (pt) 2016-05-17
EP2435094A2 (en) 2012-04-04
US9006254B2 (en) 2015-04-14
CN102481376A (zh) 2012-05-30
US20200390881A1 (en) 2020-12-17
JP6282395B2 (ja) 2018-02-21
US9884112B2 (en) 2018-02-06
JP2018065808A (ja) 2018-04-26
AU2017200383A1 (en) 2017-02-09
JP2016053048A (ja) 2016-04-14
US20140242173A1 (en) 2014-08-28
IL216548B (en) 2018-11-29
KR20120061040A (ko) 2012-06-12
EA028288B1 (ru) 2017-10-31
CA2762653A1 (en) 2010-12-02
EA201171480A1 (ru) 2012-07-30
MX2011012597A (es) 2012-04-19
IL216550A (en) 2016-10-31
JP6297776B2 (ja) 2018-03-20
CN102481374A (zh) 2012-05-30
CA2762650A1 (en) 2010-12-02
CN102481375B (zh) 2017-06-06
EA201171478A1 (ru) 2012-06-29
CA2762647A1 (en) 2010-12-02
AU2010254549A1 (en) 2011-12-15
WO2010138192A2 (en) 2010-12-02
EP2435092A2 (en) 2012-04-04
EA201890311A1 (ru) 2018-10-31
JP2016094411A (ja) 2016-05-26
EA201500447A1 (ru) 2017-03-31
CN107033339A (zh) 2017-08-11
IL216548A0 (en) 2012-02-29
US20100303850A1 (en) 2010-12-02
WO2010138192A3 (en) 2011-06-03
IL216549A0 (en) 2012-02-29
EA201791383A1 (ru) 2018-06-29
JP2017200925A (ja) 2017-11-09
MX350667B (es) 2017-09-12
KR20120087807A (ko) 2012-08-07
EA030246B1 (ru) 2018-07-31
AU2016200137B2 (en) 2018-02-08
AU2010254550A1 (en) 2011-12-15
MX2011012598A (es) 2012-04-19
JP2016041708A (ja) 2016-03-31
JP2012528154A (ja) 2012-11-12
US20110020388A1 (en) 2011-01-27
EA201171479A1 (ru) 2012-06-29
US20150328300A1 (en) 2015-11-19
US20110027217A1 (en) 2011-02-03
JP6297775B2 (ja) 2018-03-20
IL216550A0 (en) 2012-02-29
AU2016200137A1 (en) 2016-02-04
KR20120023830A (ko) 2012-03-13
KR20180026572A (ko) 2018-03-12
KR20180122487A (ko) 2018-11-12
CN107252482A (zh) 2017-10-17
AU2010254551A1 (en) 2011-12-15
CN107096018A (zh) 2017-08-29
MX357630B (es) 2018-07-17
AU2010254549B2 (en) 2016-10-20
AU2010254550B2 (en) 2015-10-15
US20180256709A1 (en) 2018-09-13
MX2011012599A (es) 2012-04-19
CN107080848A (zh) 2017-08-22
KR101916875B1 (ko) 2018-11-08
KR20180026571A (ko) 2018-03-12
JP2012528155A (ja) 2012-11-12
US20140030344A1 (en) 2014-01-30
CN102481375A (zh) 2012-05-30
WO2010138194A3 (en) 2011-06-30
CN102481376B (zh) 2016-12-21
AU2010254551B2 (en) 2016-10-20
WO2010138193A3 (en) 2011-06-03
BRPI1012036A2 (pt) 2017-10-10
WO2010138194A2 (en) 2010-12-02
US8629151B2 (en) 2014-01-14
JP2012528153A (ja) 2012-11-12
AU2017200388A1 (en) 2017-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA022699B1 (ru) НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
JP2020023492A (ja) アジュバント化合成ナノキャリアの投与量選択
US11278608B2 (en) Nicotine nanovaccines and uses thereof
Ebrahimian et al. Induction of a balanced Th1/Th2 immune responses by co-delivery of PLGA/ovalbumin nanospheres and CpG ODNs/PEI-SWCNT nanoparticles as TLR9 agonist in BALB/c mice
Patel et al. Cationic nanoparticles for delivery of CpG oligodeoxynucleotide and ovalbumin: In vitro and in vivo assessment
Wafa The composition of polyanhydrides used in particle-based cancer vaccines affects the magnitude of the antitumor immune response

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU