<p>изобретение относится к кристаллам антител-иммуноглобулинов типа О (1дО) против склеростина (конкретнее, АЪ-30 и АЪ-31), которые подходят для применения в составах для парентерального введения; растворам, солям и способам получения таких кристаллов; способам использования таких кристаллов для изготовления составов для применения в качестве медикаментов и способам применения таких составов для лечения млекопитающих, в частности людей.</p>
<p>В кристаллах или составах, описанных здесь, 1дО-антитело против склеростина в кристаллах или составе может содержать вариабельные области тяжелой и легкой цепей любого из АЪ-30, АЪ-30Р, АЪ30Рт или АЪ-31. Так, в конкретных вариантах воплощения антитело является 1дО, содержащим аминокислотные последовательности: (а) 8ЕС ГО ΝΟ: 5 (вариабельная область тяжелой цепи АЪ-30) и 8ЕС ГО ΝΟ: 3 (вариабельная область легкой цепи АЪ-30), причем, предпочтительно, каждая из них объединена с подходящей константной областью, или (Ъ) 8ЕС ГО ΝΟ: 15 (зрелая тяжелая цепь АЪ-30) и 8ЕС ГО ΝΟ: 13 (зрелая легкая цепь АЪ-30); (с) 8ЕС ГО ΝΟ: 17 (вариабельная область тяжелой цепи АЪ-30Р) и 8ЕС ГО ΝΟ: 16 (вариабельная область легкой цепи АЪ-30Р), причем, предпочтительно, каждая из них объединена с подходящей константной областью; (б) 8ЕС ГО ΝΟ: 17 (вариабельная область тяжелой цепи АЪ-30Рт) и 8ЕС ГО ΝΟ: 20 (вариабельная область легкой цепи АЪ-30Рт); или (е) 8ЕС ГО ΝΟ: 25 (вариабельная область тяжелой цепи АЪ-31) и 8ЕС ГО ΝΟ: 23 (вариабельная область легкой цепи АЪ-31), причем предпочтительно каждая из них объединена с подходящей константной областью. В некоторых вариантах воплощения антитело включает зрелые тяжелые и легкие цепи АЪ-30, АЪ-30Р, АЪ-30Рт или АЪ-31. В</p>
<p>- 1 029956</p>
<p>некоторых вариантах воплощения антитело включает аминокислотные последовательности, получаемые путем экспрессии в клетках-хозяевах млекопитающих кДНК, кодирующей тяжелую и/или легкую цепи, или, в качестве альтернативы, вариабельные области тяжелой и/или легкой цепей, причем предпочтительно каждая из них объединена с подходящей константной областью любого из антител ЛЬ-30, АЬ30К, ЛЬ-30Кт или АЬ-31, как описано здесь. Предпочтительно, антитело связывается со склеростином 5>ЕО ГО N0: 1 с КД сродства связывания 10<sup>-7</sup> М или менее.</p>
<p>Кристаллы антител, описанные здесь, можно охарактеризовать, например, по размеру, форме, морфологии, содержанию солей и другим свойствам. В некоторых вариантах воплощения длина кристалла находится в диапазоне от приблизительно 100 мкм до приблизительно 500 мкм или от приблизительно 50 мкМ до приблизительно 100 мкМ, или от приблизительно 1 мкМ до приблизительно 50 мкМ, причем их структура необязательно имеет форму иглы, стержня, пластины, блока, НЛО, футбольного мяча, листа, зерна пшеницы, майки, пера, эллипсоида (или доски для серфинга), соломинки, хризантемы или шара или является их смесями. В некоторых вариантах воплощения длина кристалла находится в диапазоне от приблизительно 1 мкм до приблизительно 10 мкм, или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 15 мкм, или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 20 мкм или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 25 мкм или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 30 мкм, или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 35 мкм, или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 40 мкм, или от приблизительно 1 мкм до приблизительно 45 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 10 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 15 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 20 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 25 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 30 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 35 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 40 мкм, или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 45 мкм, или от приблизительно 50 мкм до приблизительно 75 мкм или от приблизительно 50 мкм до приблизительно 80 мкм, или от приблизительно 50 мкм до приблизительно 85 мкм, или от приблизительно 50 мкм до приблизительно 90 мкм, или от приблизительно 50 мкм до приблизительно 95 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 150 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 200 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 250 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 300 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 350 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 400 мкм, или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 450 мкм.</p>
<p>Необязательно, кристаллы находятся в кластерах. Характеристики кристаллов также определяют с помощью рентгеновской дифракции. Например, кристаллы АЬ-30 могут иметь форму иглы, стержня, блока или пластины, или смешанную, или другую форму. Большинство кристаллов АЬ-30 имеют форму стержня, иглы или эллипсоида. Например, кристаллы АЬ-31 могут иметь форму доски для серфинга или эллипсоида, или другую форму.</p>
<p>В некоторых вариантах длина кристалла составляет приблизительно 5 мкм, или приблизительно 10 мкм, или приблизительно 15 мкм, или приблизительно 20 мкм, или приблизительно 25 мкм, или приблизительно 30 мкм, или приблизительно 35 мкм, или приблизительно 40 мкм, или приблизительно 45 мкм, или приблизительно 50 мкм, или приблизительно 55 мкм, или приблизительно 60 мкм, или приблизительно 65 мкм, или приблизительно 70 мкм, или приблизительно 75 мкм, или приблизительно 80 мкм, или приблизительно 85 мкм, или приблизительно 90 мкм, или приблизительно 95 мкм, или приблизительно 100 мкм, или приблизительно 125 мкм, или приблизительно 150 мкм, или приблизительно 175 мкм, или приблизительно 200 мкм, или приблизительно 250 мкм, или приблизительно 300 мкм, или приблизительно 350 мкм, или приблизительно 400 мкм, или приблизительно 450 мкм, или приблизительно 500 мкм. Независимо от длины кристаллов, полученных при различных условиях кристаллизации, описанных здесь, указанную длину можно впоследствии изменить до желательной с помощью способов, известных в данной области техники. Например, если в определенных условиях кристаллизации образуется кристалл антитела длиной от приблизительно 5 мкм до приблизительно 100 мкм или от приблизительно 5 мкм до приблизительно 500 мкм или от приблизительно 100 мкм до приблизительно 500 мкм, указанный кристалл можно раздробить до меньшей длины, например, длины от приблизительно 5 мкм до приблизительно 50 мкм.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения для получения определенного размера, формы, длины и морфологии рассматриваемых кристаллов модифицируют условия роста кристаллов. Условия роста кристаллов модифицируют любым способом, известным в данной области техники, включая, но не ограничиваясь, изменение рН, изменение добавления осадителей, изменение концентрации осадителя, изменение температуры и включение добавок, включая соли (включая ацетат цинка, хлорид цинка, сульфат цинка, ацетат аммония, ацетат кальция, дигидрат ацетата лития, тетрагидрат ацетата магния, хлорид магния, формиат магния, нитрат магния, сульфат магния и их комбинации, но не ограничиваясь ими), аминокислоты, сахара, углеводы, моющие средства (ионные, неионогенные, цвиттер-ионные) и ПАВ, но не ограничиваясь ими.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антитела, описанные здесь, характеризуют по типу соли в реагенте для кристаллизации.</p>
<p>Соли, подходящие для получения кристаллов АЬ-30, включают дигидрофосфат натрия, гидрофос- 2 029956</p>
<p>фат калия, хлорид натрия, сульфат аммония, тетрагидрат тартрата калия-натрия, таксимат, дигидрат цитрата натрия, тригидрат ацетата натрия, тартрат аммония, малонат натрия, ацетат, ацетат кальция, какодилат, СНЕ§, сульфат лития, хлорид магния, ацетат цинка, хлорид цезия, фосфат аммония, фосфат натрия, фосфат калия, фторид натрия, иодид калия, иодид натрия, иодид аммония, тиоцианат натрия, тиоцианат калия, формиат натрия, формиат калия и формиат аммония, но не ограничиваются ими. Например, другие соли (включая гидраты) для получения кристаллов ЛЬ-30 могут включать другие дигидрофосфаты, гидрофосфаты, фосфаты, фториды, хлориды, сульфаты, тартраты, таксиматы, цитраты, ацетаты, малонаты, какодилаты и иодиды, тиоцианаты или формиаты; содержащие, например, одновалентные (например, натрия, калия, аммония) или двухвалентные катионы (например, цинка, магния).</p>
<p>Подходящие соли для получения кристаллов АЬ-31 включают хлорид натрия, хлорид калия, ацетат натрия, фосфат калия и гистидин, но не ограничиваются ими. Например, другие соли для получения кристаллов АЬ-31 включают хлориды, ацетаты или фосфаты; содержащие, например, одновалентные (например, натрия, калия, аммония) катионы.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител характеризуют по добавкам для кристаллизации, которые могут влиять на рост и/или форму кристаллов. Подходящие добавки для кристаллизации включают осадители, например, ПЭГ с молекулярной массой от приблизительно 200 кДа до приблизительно 20000 кДа, или от приблизительно 400 кДа до приблизительно 20000 кДа, или от приблизительно 1000 кДа до приблизительно 10000 кДа (например, ПЭГ-3350 или ПЭГ-8000) или 2-метил2,4-пентандиол (ΜΡΌ), поверхностно-активные вещества, например, полисорбат 20, полисорбат 80, моющие средства (ионные, неионогенные и цвиттер-ионные); аминокислоты, короткие пептиды, низкомолекулярные органические соединения, органические соли, нуклеотиды и углеводы, но не ограничиваются ими. В некоторых вариантах воплощения добавки (например, ПЭГ, ΜΡΌ, глицерин) используют в концентрации от приблизительно 0,1% до приблизительно 75% (мас./об. или об./об.), или приблизительно 0,1-50% (мас./об. или об./об.), или приблизительно 0,1-10% (мас./об. или об./об.), или приблизительно 10% до приблизительно 50% (мас./об. или об./об.), или приблизительно 20%-50% (мас./об. или об./об.), или по меньшей мере 10%, или по меньшей мере 20% (мас./об. или об./об.). В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы также характеризуют по способу, посредством которого они получены, а также остаточным примесям.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий янтарную кислоту, НЕРЕ8 и монометиловый эфир полиэтиленгликоля 2000.</p>
<p>Например, в некоторых вариантах воплощения условия кристаллизации включают от приблизительно 0,1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М янтарной кислоты (или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М янтарной кислоты); кроме того, необязательно включая от приблизительно 0,1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М НЕРЕ8 (или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М НЕРЕ8) при рН от приблизительно б до приблизительно 9 или от приблизительно 7 до приблизительно 8,5; и, необязательно, от приблизительно 0,1% до приблизительно 60% (мас./об.), или от приблизительно 0,1% до приблизительно 1%, или от приблизительно 1% до приблизительно 3%, или от приблизительно 2% до приблизительно 4%, или от приблизительно 3% до приблизительно 5% или от приблизительно 20% до приблизительно 40%, или от приблизительно 30% до приблизительно 60%, или от приблизительно 10% до приблизительно 20%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 15% до приблизительно 25% монометилового эфира полиэтиленгликоля 2000 (или приблизительно 0,1%, или приблизительно 0,5%, или приблизительно 1%, или приблизительно 1,5%, или приблизительно 2%, или приблизительно 2,5%, или приблизительно 3%, или приблизительно 3,5%, или приблизительно 4,5%, или приблизительно 5%, или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50%, или приблизительно 55%, или приблизительно 60% монометилового эфира полиэтиленгликоля 2000). В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает 1,0 М янтарной кислоты, 0,1 М НЕРЕ8, рН 7, и 1% (мас./об.) моноэтилового эфира полиэтиленгликоля 2000.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий ПЭГ-8000, имидазол и ацетат кальция. Например, в некоторых вариантах воплощения условия кристаллизации включают от приблизительно</p>
<p>- 3 029956</p>
<p>1% до приблизительно 50%, или от приблизительно 1% до приблизительно 5%, или от приблизительно 5% до приблизительно 10%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 25% до приблизительно 50%, или от приблизительно 30% до приблизительно 45% или от приблизительно 40% до приблизительно 50% ПЭГ-8000 (или приблизительно 1%, или приблизительно 2%, или приблизительно 3%, или приблизительно 4%, или приблизительно 5%, или приблизительно 6%, или приблизительно 7%, или приблизительно 8%, или приблизительно 9%, или приблизительно 10%, или приблизительно 11%, или приблизительно 12% или приблизительно 13%, или приблизительно 14%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45% или приблизительно 50% ПЭГ-8000); кроме того, необязательно, включая от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,1 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М имидазола (или приблизительно 0,05, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М имидазола); и необязательно от приблизительно 0,1 М до приблизительно 5 М или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М (или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М) ацетата кальция. В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает 10% (мас./об.) ПЭГ-8000, 0,1 М имидазола и 0,2 М ацетата кальция.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий ПЭГ-8000, ТРИС и хлорид магния. Например, в некоторых вариантах воплощения условия кристаллизации включают от приблизительно 1% до приблизительно 50%, или от приблизительно 1% до приблизительно 5%, или от приблизительно 5% до приблизительно 10%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 25% до приблизительно 50%, или от приблизительно 30% до приблизительно 45% или от приблизительно 40% до приблизительно 50% ПЭГ-8000 (или приблизительно 1%, или приблизительно 2%, или приблизительно 3%, или приблизительно 4%, или приблизительно 5%, или приблизительно 6%, или приблизительно 7%, или приблизительно 8%, или приблизительно 9%, или приблизительно 10%, или приблизительно 11%, или приблизительно 12% или приблизительно 13%, или приблизительно 14%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45% или приблизительно 50% ПЭГ-8000); кроме того, необязательно, включая от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 0,05 до приблизительно 1 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М Трис (или приблизительно 0,05, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М Трис); и, необязательно, от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 0,05 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М хлорида магния (или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М) хлорида магния. В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает 10% (мас./об.) ПЭГ-8000, 0,1 М Трис и 0,2 М хлорида магния.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий ПЭГ-1000, фосфат натрия/калия и хлорид натрия. Например, в некоторых вариантах воплощения условия кристаллизации включают от приблизительно 10% до приблизительно 80%, или приблизительно 10%-15%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 40% до приблизительно 70% или от приблизительно 50% до приблизительно 80%, или от приблизительно 30% до приблизительно 75% ПЭГ-1000 (или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или</p>
<p>- 4 029956</p>
<p>приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50%, или приблизительно 55%, или приблизительно 60%, или приблизительно 65%, или приблизительно 70%, или приблизительно 75%, или приблизительно 80% ПЭГ-1000); кроме того, необязательно включая от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 0,05 до приблизительно 1 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М фосфата натрия/калия (или приблизительно 0,05 М, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно</p>
<p>4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М фосфата натрия/калия); и, необязательно, от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М или от приблизительно 0,05 М до приблизительно 1 М или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М хлорида натрия (или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М) хлорида натрия. В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает 20% (мас./об.) ПЭГ1000, 0,1 М фосфата натрия/калия и 0,2 М хлорида натрия.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий ПЭГ-8000, какодилат, ацетат кальция и глицерин. Например, в некоторых вариантах воплощения условия кристаллизации включают от приблизительно 1% до приблизительно 50%, или от приблизительно 1% до приблизительно 5%, или от приблизительно 5% до приблизительно 10%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 25% до приблизительно 50%, или от приблизительно 30% до приблизительно 45% или от приблизительно 40% до приблизительно 50% ПЭГ8000 (или приблизительно 1%, или приблизительно 2%, или приблизительно 3%, или приблизительно 4%, или приблизительно 5%, или приблизительно 6%, или приблизительно 7%, или приблизительно 8%, или приблизительно 9%, или приблизительно 10%, или приблизительно 11%, или приблизительно 12% или приблизительно 13%, или приблизительно 14%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45% или приблизительно 50% ПЭГ-8000); кроме того, необязательно, включая от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М какодилата (или приблизительно 0,05 М, или приблизительно 0,06 М, или приблизительно 0,07 М, или приблизительно 0,8 М, или приблизительно 0,9 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М какодилата) при рН от приблизительно 5 до приблизительно 7, или от приблизительно 6 до приблизительно 7, или приблизительно 6,5; необязательно, от приблизительно 0,05 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 0,5 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно</p>
<p>5 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 2 М ацетата кальция (или приблизительно 0,05 М, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,12 М, или приблизительно 0,14 М, или приблизительно 0,16 М, или приблизительно 0,18 М, или приблизительно 0,2 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М ацетата кальция); и необязательно от приблизительно 1% до приблизительно 65% (мас./об.), или от приблизительно 1% до приблизительно 10%, или от приблизительно 1% до приблизительно 5%, или от приблизительно 5% до приблизительно 10%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 35% до приблизительно 50%, или от приблизительно 50% до приблизительно 65% глицерина (или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25% или приблизительно 30% глицерина). В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает приблизительно 14,4% (мас./об.) ПЭГ-8000, 0,08 М какодилата, 0,16 М ацетата кальция и 20% (мас./об.) глицерина.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий изопропанол и фосфат натрия/калия. Например, в некоторых вариантах воплощения условия кристаллизации включают от приблизительно 1% до приблизительно 100%, или от приблизительно 1% до приблизительно 5%, или от приблизительно 5% до приблизительно 10%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизитель- 5 029956</p>
<p>но 2 5% до приблизительно 30%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 35% до приблизительно 50%, или от приблизительно 40% до приблизительно 60%, или от приблизительно 75% до приблизительно 90% или от приблизительно 80% до приблизительно 100% (об./об.) изопропанола (или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50%, или приблизительно 55%, или приблизительно 60%, или приблизительно 65%, или приблизительно 70%, или приблизительно 75%, или приблизительно 80%, или приблизительно 85%, или приблизительно 90%, или приблизительно 95%, или приблизительно 100% (об./об.) изопропанола); и, необязательно, от приблизительно 0,05 до приблизительно 4 М, или от приблизительно 0,05 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 0,1 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 5 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 2 М, или от приблизительно 2 М до приблизительно 4 М, или от приблизительно 3 М до приблизительно 4 М фосфата натрия/калия (или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,2 М, или приблизительно 0,3 М, или приблизительно 0,4 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 0,6 М, или приблизительно 0,7 М, или приблизительно 0,8 М, или приблизительно 0,9 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М фосфата натрия/калия). В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает приблизительно 19,9% изопропанола и приблизительно 0,2 М фосфата натрия/калия.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения кристаллы антител получают в условиях кристаллизации, включающих реагент для кристаллизации, включающий элемент, выбранный из группы, состоящей из 2-пропанола, двухосновного фосфата аммония, ПЭГ-1000, сульфата аммония, тартрата калия/натрия, ПЭГ-3000, ПЭГ-8000, 1,4-бутандиола, хлорида натрия, этанола, ПЭГ-400, 2-метил-2,4пентандиола (ΜΡΌ), джеффамина М-600, ПЭГ-10000. Например, в некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 1% до приблизительно 50%, или от приблизительно 10% до приблизительно 20%, или от приблизительно 1% до приблизительно 10%, или от приблизительно 5% до приблизительно 10%, или от приблизительно 8% до приблизительно 12%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 35%, или от приблизительно 40% до приблизительно 50% (об./об.) 2-пропанола (или приблизительно 1%, или приблизительно 5%, или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50% (об./об.) 2-пропанола).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает от приблизительно 0,05 М до приблизительно 10 М, или от приблизительно 0,5 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 5 М до приблизительно 10 М двухосновного фосфата аммония (или приблизительно 0,05 М, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М, или приблизительно 6 М, или приблизительно 6,5 М, или приблизительно 7 М, или приблизительно 7,5 М, или приблизительно 8 М, или приблизительно 8,5 М, или приблизительно 9 М, или приблизительно 9,5 М, или приблизительно 10 М двухосновного фосфата аммония).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает от приблизительно 10% до приблизительно 80%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 40% до приблизительно 70%, или от приблизительно 50% до приблизительно 80%, или от приблизительно 30% до приблизительно 75% (мас./об.) ПЭГ-1000 (или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50%, или приблизительно 55%, или приблизительно 60%, или приблизительно 65%, или приблизительно 70%, или приблизительно 75%, или приблизительно 80% (мас./об.) ПЭГ-1000).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 0,5 М до приблизительно 10 М, или от приблизительно 0,5 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 5 М до приблизительно 10 М сульфата аммония (или приблизительно 0,05 М, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М, или приблизительно 6 М, или приблизительно 6,5 М, или приблизительно 7 М, или приблизительно 7,5 М, или приблизительно 8 М, или приблизительно 8,5 М, или приблизительно 9 М, или приблизительно 9,5 М или приблизительно 10 М сульфата аммония).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 0,5 М до приблизительно 10 М, или от приблизительно 0,5 М до приблизительно 1 М, или от приблизитель- 6 029956</p>
<p>но 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 5 М до приблизительно 10 М тартрата натрия/калия (или приблизительно 0,05 М, или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М, или приблизительно 6 М, или приблизительно 6,5 М, или приблизительно 7 М, или приблизительно 7,5 М, или приблизительно 8 М, или приблизительно 8,5 М, или приблизительно 9 М, или приблизительно 9,5 М, или приблизительно 10 М тартрата натрия/калия).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 1% до приблизительно 50%, или от приблизительно 1% до приблизительно 5%, или от приблизительно 1% до приблизительно 10%, или от приблизительно 10% до приблизительно 20%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 30% до приблизительно 50% (об./об.) 1,4бутандиола (или приблизительно 1%, или приблизительно 5%, или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50% (об./об.) 1,4-бутандиола).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 0,5 М до приблизительно 10 М, или от приблизительно 0,5 М до приблизительно 1 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 5 М до приблизительно 10 М хлорида натрия (или приблизительно 0,05 М или приблизительно 0,1 М, или приблизительно 0,5 М, или приблизительно 1 М, или приблизительно 1,5 М, или приблизительно 2 М, или приблизительно 2,5 М, или приблизительно 3 М, или приблизительно 3,5 М, или приблизительно 4 М, или приблизительно 4,5 М, или приблизительно 5 М, или приблизительно 6 М, или приблизительно 6,5 М, или приблизительно 7 М, или приблизительно 7,5 М, или приблизительно 8 М, или приблизительно 8,5 М, или приблизительно 9 М, или приблизительно 9,5 М или приблизительно 10 М хлорида натрия).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 10% до приблизительно 50%, или от приблизительно 10% до приблизительно 20%, или от приблизительно 14% до приблизительно 18%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 30% до приблизительно 50% (об. /об.) этанола (или приблизительно 1%, или приблизительно 5%, или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 4 0%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50% (об./об.) этанола).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает от приблизительно 10% до приблизительно 80%, или от приблизительно 10% до приблизительно 15%, или от приблизительно 15% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 25% до приблизительно 30%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 40% до приблизительно 70%, или от приблизительно 50% до приблизительно 80%, или от приблизительно 30% до приблизительно 75% (мас./об.) ПЭГ-400, ПЭГ-1000, ПЭГ-3000, ПЭГ-8000 или ПЭГ10000 (или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50%, или приблизительно 55%, или приблизительно 60%, или приблизительно 65%, или приблизительно 70%, или приблизительно 75%, или приблизительно 80% (мас./об.) ПЭГ-400, ПЭГ-1000, ПЭГ-3000, ПЭГ-8 000 или ПЭГ-10000).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации включает от приблизительно 10% до приблизительно 50% (мас./об.) 2-метил-2,4-пентандиола (ΜΡΌ) (или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50% (мас./об.) 2-метил-2,4-пентандиола (ΜΡΌ)).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения реагент для кристаллизации содержит от приблизительно 1% до приблизительно 50%, или от приблизительно 1% до приблизительно 10%, или от приблизительно 5% до приблизительно 15%, или от приблизительно 10% до приблизительно 20%, или от приблизительно 20% до приблизительно 25%, или от приблизительно 20% до приблизительно 30%, или от приблизительно 15% до 25%, или от приблизительно 30% до приблизительно 50% (об./об.) джеффамина М-600 (или приблизительно 1%, или приблизительно 5%, или приблизительно 10%, или приблизительно 15%, или приблизительно 20%, или приблизительно 25%, или приблизительно 30%, или приблизительно 35%, или приблизительно 40%, или приблизительно 45%, или приблизительно 50% (об./об.) джеффамина М-600).</p>
<p>Еще один аспект, описываемый здесь, обеспечивает способы изготовления кристаллов, описанных здесь. В некоторых вариантах воплощения указанный способ включает объединение раствора антитела АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 с реагентом для кристаллизации, включающим соответствующие соли, включая любую из ранее описанных солей, обеспечивая образование кристалла. В любом из вариантов воплощения, описанных здесь, соль в реагенте для кристаллизации присутствует в концентрации</p>
<p>- 7 029956</p>
<p>от приблизительно 0,1 М до приблизительно 30 М, необязательно от приблизительно 0,1 М до приблизительно 10 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 10 М, или от приблизительно 1 М до приблизительно 5 М, или от приблизительно 5 М до приблизительно 10 М. В некоторых вариантах воплощения указанный способ включает объединение раствора антитела ЛЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или ЛЬ-31 с реагентом для кристаллизации, включающим янтарную кислоту, ПЭГ-1000, ПЭГ-8000 или изопропанол, обеспечивая образование кристалла. Для любого из способов получения кристаллов, описанных здесь, в некоторых вариантах воплощения по меньшей мере 80% (например, по меньшей мере 85%, или по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% или более) от исходного количества антитела в растворе кристаллизуется после этапа объединения. Определение процента кристаллизованного антитела можно осуществить способами, описанными, например, в примере 5, или другими способами, известными в данной области техники.</p>
<p>Способы получения кристаллов антител дополнительно включают удаление по меньшей мере части реагента для кристаллизации (например, центрифугированием) после образования кристаллов. В некоторых вариантах воплощения кристаллы затем помещают в раствор, включающий органическую добавку (например, этанол или изопропанол). В некоторых вариантах воплощения в указанный раствор добавляют вспомогательные вещества (например, сахарозу, трегалозу или сорбит).</p>
<p>Способы получения кристаллов антител, необязательно, дополнительно включают этап сушки образованных кристаллов (например, путем сушки кристаллов на воздухе или помещения кристаллов в вакуум или газообразный азот).</p>
<p>Типичные способы получения кристаллов антител, описанные здесь, включают диффузию паров и массовую кристаллизацию, которые известны в данной области техники.</p>
<p>Еще один аспект, описанный здесь, представляет собой составы (например, порошки и жидкие составы, содержащие антитела против склеростина, описанные здесь) и способы применения кристаллов антител, описанных здесь, для изготовления медикаментов, например, составов, для лечения млекопитающих, в том числе людей. Предполагается лечение любого из состояний, описанных здесь, необязательно, с использованием любых дозировок и графиков приема лекарств, описанных здесь. Указанные составы включают кристаллы антител, например, кристаллы АЬ-30, ЛЬ-30К, ЛЬ-30Кш или АЬ-31, обладающие одним или более из свойств, описанных здесь (например, размером, длиной, формой, содержанием солей, содержанием добавок или другими свойствами). В некоторых вариантах воплощения кристаллы АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кш или АЬ-31 в составе имеют длину от приблизительно 20 мкм до приблизительно 1 мм и форму эллипсоидов, стержней и игл, или смешанную форму. В некоторых вариантах воплощения кристаллы АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кш или АЬ-31 в составе имеют длину от приблизительно 5 мкм до приблизительно 500 мкм и форму эллипсоидов, стержней и игл, или смешанную форму.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения состав является стерильным и включает кристалл 1дО-антитела против склеростина, причем по меньшей мере 70% (или по меньшей мере 75%, или по меньшей мере 80%, или по меньшей мере 85%, или по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% или более) антител находятся в кристаллической форме. В некоторых вариантах воплощения 1§О-антитело против склеростина в составе включает вариабельные области легкой и тяжелой цепей 8ЕО ГО N0: 3 и 5, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности 8ЕО ГО N0: 13 и 15.</p>
<p>Указанные составы пригодны для парентерального введения, например, являются стерильными; имеют уровень эндотоксина, приемлемый для парентерального введения, например, меньше 0,25 ЭЕ/мл или 0,008 ЭЕ/мг; и включают фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Составы также предпочтительно содержат высокие концентрации белка, например по меньшей мере 100 мг антитела на мл композиции; или по меньшей мере 120 мг/мл, или по меньшей мере 140 мг/мл, или по меньшей мере 160 мг/мл, или по меньшей мере 180 мг/мл, или по меньшей мере 200 мг/мл, или по меньшей мере 220 мг/мл, или по меньшей мере 240 мг/мл или выше. В некоторых вариантах воплощения состав содержит концентрацию по меньшей мере 140 мг антитела, диспергированного в 1,5 мл жидкости, или менее. В типичных вариантах воплощения такие составы имеют вязкость приблизительно 10 сП или менее, необязательно 8 сП или менее, или 6 сП или менее. Термин "вязкость", как используется здесь, относится к "абсолютной вязкости". Абсолютная вязкость, иногда называемая динамической или просто вязкостью, является произведением кинематической вязкости и плотности жидкости: Абсолютная вязкость равняется кинематической вязкости умноженной на плотность. Размерностью кинематической вязкости является Ь<sup>2</sup>/Т, где Ь - длина, а Т - время. Как правило, кинематическую вязкость выражают в сантистоксах (сСт). Единица кинематической вязкости в СИ - мм<sup>2</sup>/с, что равно 1 сСт. Абсолютную вязкость выражают в сантипуазах (сП). Единица абсолютной вязкости в СИ - миллипаскаль-секунда (мРа<sup>-с</sup>), где 1 сП=1 мПа<sup>-с</sup>.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения абсолютная вязкость ресуспендированного жидкого состава при температуре хранения и/или введения составляет 15 сП или менее, или 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 сП или менее. В некоторых или любых вариантах воплощения состав можно вводить путем инъекции через шприц с иглой 20 калибра или менее (например, иглой 25 калибра, иглой 27 калибра или менее), используя клинически приемлемое количество силы.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения состав включает вспомогательные вещества, включая сахарозу, трегалозу и сорбит или другие сахара или полиолы, но не ограничиваясь ими.</p>
<p>- 8 029956</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения рН составов находится в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 12, или от приблизительно 6 до приблизительно 9, или от приблизительно 6 до 8,5, или от приблизительно 7 до 7,5, а осмотическое давление - в диапазоне от приблизительно 180 до приблизительно 420 мосмоль/кг, или от приблизительно 200 до приблизительно 400 мосмоль/кг, или от приблизительно 250 до приблизительно 350 мосмоль/кг. Хотя предпочтительны изотонические растворы (250-350 мосмоль/кг) при физиологических значениях рН (приблизительно 7-7,5), можно получить составы вне этих диапазонов.</p>
<p>Перед парентеральным введением состав необязательно ресуспендируют в суспензионной среденосителе. Типичные суспензионные среды-носители включают глутамат, сорбит, ΗΕΡΕδ, декстрозу и воду, но не ограничиваются ими. В некоторых вариантах воплощения суспензионной средой-носителем является декстроза в диапазоне от приблизительно 1% до приблизительно 10% декстрозы, или от приблизительно 5% до приблизительно 10% декстрозы, или от приблизительно 1% до приблизительно 5% декстрозы, или от приблизительно 2% до приблизительно 4% декстрозы (например, приблизительно 1% декстрозы, приблизительно 2% декстрозы, приблизительно 3% декстрозы, приблизительно 4% декстрозы, приблизительно 5% декстрозы, приблизительно 6% декстрозы, приблизительно 7% декстрозы, приблизительно 8% декстрозы, приблизительно 9% декстрозы или приблизительно 10% декстрозы). В некоторых вариантах воплощения суспензионной средой-носителем является сорбит в диапазоне от приблизительно 1% до приблизительно 10% сорбита, или от приблизительно 5% до приблизительно 10% сорбита, или от приблизительно 1% до приблизительно 5% сорбита, или от приблизительно 2% до приблизительно 4% сорбита (например, приблизительно 1% сорбита, приблизительно 2% сорбита, приблизительно 3% сорбита, приблизительно 4% сорбита, приблизительно 5% сорбита, приблизительно 6% сорбита, приблизительно 7% сорбита, приблизительно 8% сорбита, приблизительно 9% сорбита или приблизительно 10% сорбита). В некоторых вариантах воплощения суспензионной средой-носителем является глутамат в диапазоне от приблизительно 1 мМ до приблизительно 20 мМ глутамата, или от приблизительно 10 мМ до приблизительно 15 мМ, или от приблизительно 5 до приблизительно 10 мМ, или от приблизительно 8 мМ до приблизительно 12 мМ (или приблизительно 1 мМ глутамата, приблизительно 2 мМ глутамата, приблизительно 3 мМ глутамата, приблизительно 4 мМ глутамата, приблизительно 5 мМ глутамата, приблизительно 6 мМ глутамата, приблизительно 7 мМ глутамата, приблизительно 8 мМ глутамата, приблизительно 9 мМ глутамата, приблизительно 10 мМ глутамата, приблизительно 11 мМ</p>
<p>глутамата, приблизительно 12 мМ глутамата, приблизительно 13 мМ глутамата, приблизительно 14 мМ</p>
<p>глутамата, приблизительно 15 мМ глутамата, приблизительно 16 мМ глутамата, приблизительно 17 мМ</p>
<p>глутамата, приблизительно 18 мМ глутамата, приблизительно 19 мМ глутамата или приблизительно 20</p>
<p>мМ глутамата). В некоторых вариантах воплощения суспензионная среда-носитель включает комбинацию сорбита и глутамата (например, от приблизительно 1 мМ до приблизительно 20 мМ глутамата (включая промежуточные диапазоны, указанные выше) и от приблизительно 1% до приблизительно 10% сорбита (включая промежуточные диапазоны, указанные выше)). В некоторых вариантах воплощения суспензионная среда-носитель включает приблизительно 10 мМ глутамата и приблизительно 5% сорбита.</p>
<p>В других вариантах воплощения суспензионная среда-носитель выбрана из группы, состоящей из (1) ΗΕΡΕδ и ПЭГ-3350 (например, 0,5 М ΗΕΡΕδ и 20% ПЭГ-3350, рН 7,5), (2) Трис и ПЭГ-3350 (например, 0,5 М Трис и 50% ПЭГ-3350, рН 8) и (3) Трис и ПЭГ-3350 (например, 0,5 М Трис и 50% ПЭГ-3350, рН 8,5).</p>
<p>В необязательном случае состав, пригодный для парентерального введения (например, подкожно или внутримышечно) представлен в контейнере, например, однодозовом флаконе, многодозовом флаконе, шприце, предварительно заполненном шприце или инъекционном устройстве. В некоторых или любых вариантах воплощения указанный контейнер содержит разовую дозу антитела против склеростина (например, от приблизительно 70 до приблизительно 450 мг антитела против склеростина). В некоторых вариантах воплощения указанная доза содержит по меньшей мере приблизительно 5 мг, 15 мг, 25 мг, 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 650 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 750 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 850 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 950 мг или до приблизительно 1000 мг антитела против склеростина. Кроме того, рассматриваются диапазоны между любыми из указанных конечных точек, например, от приблизительно 50 мг до приблизительно 80 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 140 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 350 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 280, от приблизительно 70 мг до приблизительно 210 мг, от приблизительно 75 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 100 мг до приблизительно 150 мг, от приблизительно 140 мг до приблизительно 210 мг, или от приблизительно 150 мг до приблизительно 200 мг, или от приблизительно 280 мг до приблизительно 410 мг антитела против склеростина. Дозу вводят с любым интервалом, например, несколько раз в неделю (например, два или три</p>
<p>- 9 029956</p>
<p>раза в неделю), раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в четыре недели. Например, в некоторых или любых вариантах воплощения дозу антител против склеростина в диапазоне от приблизительно 120 мг до приблизительно 210 мг вводят два раза в неделю. В некоторых или любых вариантах воплощения дозу приблизительно 140 мг антитела против склеростина вводят два раза в неделю. Любую из описанных здесь доз можно вводить в виде разделенных доз. Например, дозу 140 мг антитела против склеростина можно вводить в виде двух инъекций по 70 мг антитела против склеростина. Аналогично, дозу 210 мг антитела против склеростина можно вводить в виде двух инъекций по 105 мг антитела против склеростина.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения состав, включающий кристаллы антитела против склеростина, описанные здесь, сохраняет по меньшей мере 50% (или по меньшей мере 60%, или по меньшей мере 65%, или по меньшей мере 70%, или по меньшей мере 75%, или по меньшей мере 80%, или по меньшей мере 85%, или по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95%) или более активности ίη νίνο этого же антитела не в кристаллическом виде. Например, в некоторых вариантах воплощения состав, включающий кристаллы АЬ30, сохраняет по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 100%, или по меньшей мере от приблизительно 70% до приблизительно 100%, или по меньшей мере от 80% до по меньшей мере 100% или по меньшей мере от 90% до приблизительно 100% (например, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90% или приблизительно 100%) от уровня активности некристаллизованного антитела АЬ30 при введении в той же (или аналогичной) дозе и тем же (или аналогичным) способом. Композицию можно вводить в виде разовой дозы или в виде нескольких доз, как описано здесь. В некоторых вариантах воплощения активностью ίη νίνο является увеличение минеральной плотности костной ткани всего организма (например, головы, туловища, рук и ног), или в области бедра (например, всего бедра и/или шейки бедра), позвоночника (например, поясничного отдела позвоночника), запястья, пальца, большеберцовой кости и/или пятки по сравнению с исходным уровнем.</p>
<p>В некоторых или в любом из вариантов воплощения композиция, включающая кристаллы АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кш или АЬ-31, как описано выше, при введении в организм субъекта-млекопитающего опосредует повышение минеральной плотности костной ткани (по сравнению с исходным уровнем или контролем), по меньшей мере приблизительно на 70% (или по меньшей мере приблизительно на 80%, или по меньшей мере приблизительно на 90%, или по меньшей мере приблизительно на 100%) от уровня повышения минеральной плотности костной ткани, опосредованного некристаллизованным антителом АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кш или АЬ-31 (при введении в той же (или аналогичной) дозе и посредством того же (или аналогичного) пути введения, например, при введении в дозе, описанной здесь, например, приблизительно 100 мг/мл, путем подкожной инъекции). Состав можно вводить в виде разовой дозы или в виде нескольких доз, как описано здесь.</p>
<p>В одном типичном варианте воплощения контейнер может содержать приблизительно 70 мг или 75 мг состава антитела против склеростина и пригоден для введения разовой дозы приблизительно 1 мг/кг. В других вариантах воплощения контейнер может содержать приблизительно 50 мг, или приблизительно 60 мг, или приблизительно 70 мг, или приблизительно 80 мг, или приблизительно 90 мг, или приблизительно 100 мг, или приблизительно 120 мг, или приблизительно 130 мг, или приблизительно 140 мг, или приблизительно 150 мг, или приблизительно 160 мг, или приблизительно 170 мг, или приблизительно 180 мг, или приблизительно 190 мг, или приблизительно 200 мг, или приблизительно 210 мг, или приблизительно 220 мг, или приблизительно 230 мг; или приблизительно 240 мг, или приблизительно 250 мг; или от приблизительно 250 мг до приблизительно 450 мг; или приблизительно 280 мг, или 290 мг, или 300 мг; или приблизительно 350 мг, или 360 мг; или приблизительно 420 мг, или 430 мг, или 440 мг, или 450 мг состава антитела против склеростина. В любом из таких вариантов воплощения контейнер может подходить для введения разовой дозы от приблизительно 2 до приблизительно 6 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 4 мг/кг, или от приблизительно 3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 3 мг/кг массы тела (например, приблизительно 2 мг/кг, или приблизительно 3 мг/кг, или приблизительно 4 мг/кг, или приблизительно 5 мг/кг, или приблизительно 6 мг/кг массы тела). В любом из указанных вариантов воплощения контейнер может включать антитело при высокой концентрации белка, такой, как описанные здесь. В любом из указанных вариантов воплощения контейнер может включать порошкообразный или лиофилизированный состав и быть рассчитан на объем суспензии приблизительно 0,5-2 мл.</p>
<p>Кроме того, описаны способы ресуспендирования любого из вышеуказанных порошкообразных составов, включающие добавление стерильного разбавителя для достижения высокой концентрации белка, такого, как описанные здесь.</p>
<p>Кроме того, здесь описан набор, включающий такой контейнер и этикетку, содержащую инструкции по применению соответствующего объема или количества состава, необходимые для достижения дозы от приблизительно 0,5-20 мг/кг, или 0,5-10 мг/кг массы тела пациента. В некоторых вариантах воплощения доза состава включает от приблизительно 0,1 до приблизительно 50 миллиграммов (например, от приблизительно 5 до приблизительно 50 миллиграммов), или от приблизительно 1 до приблизительно 100 мг антитела против склеростина на килограмм массы тела (мг/кг). Например, доза антитела против</p>
<p>- 10 029956</p>
<p>склеростина может включать по меньшей мере приблизительно 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 26 мг/кг, приблизительно 27 мг/кг, приблизительно 28 мг/кг, приблизительно 29 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг, приблизительно 31 мг/кг, приблизительно 32 мг/кг, приблизительно 33 мг/кг, приблизительно 34 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 36 мг/кг, приблизительно 37 мг/кг, приблизительно 38 мг/кг, приблизительно 39 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 41 мг/кг, приблизительно 42 мг/кг, приблизительно 43 мг/кг, приблизительно 44 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 46 мг/кг, приблизительно 47 мг/кг, приблизительно 48 мг/кг, или приблизительно 49 мг/кг, или приблизительно 50 мг/кг, приблизительно 55 мг/кг, приблизительно 60 мг/кг, приблизительно 65 мг/кг, приблизительно 70 мг/кг, приблизительно 75 мг/кг, приблизительно 80 мг/кг, приблизительно 85 мг/кг, приблизительно 90 мг/кг, приблизительно 95 мг/кг, или до приблизительно 100 мг/кг. Кроме того, рассматриваются диапазоны между любыми из этих конечных точек, например, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 3 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 6 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 4 мг/кг, или от приблизительно 3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг.</p>
<p>Кроме того, здесь описаны составы (например, порошкообразные (т.е. лиофилизированные) и/или жидкие составы), стабильные при комнатной температуре и/или 4°С в течение по меньшей мере 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 года, 18 месяцев, 2 лет, 3 лет, 4 лет, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет или дольше. В некоторых вариантах воплощения указанный состав включает кристаллы АЬ-30 и стабилен при комнатной температуре и/или 4°С в течение по меньшей мере 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 года, 18 месяцев, 2 лет, 3 лет, 4 лет, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет или дольше. В некоторых вариантах воплощения состав АЬ-30 стабилен при температуре 4°С и/или комнатной температуре в течение по меньшей мере 9 месяцев.</p>
<p>Кроме того, описанные здесь способы применения составов, описанных здесь, для лечения любого расстройства, связанного со снижением плотности костной ткани (расстройства, связанного с костями), включая ахондроплазию, ключично-черепную дисплазию, энхондроматоз, фиброзную дисплазию, болезнь Гоше, гипофосфатемический рахит, синдром Марфана, множественный наследственный экзостоз, нейрофиброматоз, незавершенный остеогенез, остеопороз, остеопойкилоз, склеротические поражения, псевдоартроз, гнойный остеомиелит, пародонтоз, потерю костной массы, вызванную противоэпилептическими лекарствами, первичный или вторичный гиперпаратиреоз, синдромы семейного гиперпаратиреоза, потерю костной массы, вызванную невесомостью, остеопороз у мужчин, потерю костной массы после менопаузы, остеоартрит, почечную остеодистрофию, инфильтративные поражения костей, остеопороз в области ротовой полости, остеонекроз челюсти, ювенильную болезнь Педжета, мелореостоз, метаболические поражения костей, мастоцитоз, серповидно-клеточную анемию, потерю костной массы, связанную с трансплантацией органов, потерю костной массы, связанную с трансплантацией почки, системную красную волчанку, анкилозирующий спондилит, эпилепсию, ювенильные артриты, талассемию, мукополисахаридозы, болезнь Фабри, синдром Тернера, синдром Дауна, синдром Клайнфельтера, проказу, болезнь Пертеса, подростковый идиопатический сколиоз, полиорганное воспалительное заболевание с началом в детском возрасте, синдром Винчестера, болезнь Менкеса, болезнь Вильсона, ишемическую болезнь костей (например, болезнь Легга-Кальве-Пертеса или региональный миграционный остеопороз), анемические состояния, состояния, вызванные приемом стероидов, потерю костной массы, вызванную глюкокортикоидами, потерю костной массы, вызванную гепарином, расстройства костного мозга, цингу, недоедание, дефицит кальция, остеопороз, остеопению, алкоголизм, хроническое заболевание печени, постменопаузу, хронические воспалительные состояния, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, неспецифический язвенный колит, воспалительный колит, болезнь Крона, олигоменорею, аменорею, беременность, сахарный диабет, гипертиреоз, расстройства щитовидной железы, расстройства паращитовидных желез, болезнь Кушинга, акромегалию, гипогонадизм, неподвижное состояние или бездействие, синдром рефлекторной симпатической дистрофии, региональный остеопороз, остеомаляцию, потерю костной массы, связанную с заменой сустава, ВИЧ-ассоциированную потерю костной массы, потерю костной массы, связанную с недостатком гормона роста, потерю костной ткани, связанную с муковисцидозом, потерю костной массы, связанную с химиотерапией, потерю костной массы, вызванную опухолью, потерю костной массы, связанную с раком, потерю костной массы при подавлении гормонов, множественную миелому, медикаментозную потерю костной массы, нервную анорексию, потерю костной массы лицевого черепа, связанную с заболеванием, потерю костной массы мозгового черепа, связанную с заболеванием, потерю костной массы челюсти, связанную с заболеванием, потерю костной массы черепа, связанную с заболеванием, потерю костной массы, связанную с возрастными изменениями, потерю костной массы лицевого черепа, связанную с возрастными изменениями, потерю костной</p>
<p>- 11 029956</p>
<p>массы мозгового черепа, связанную с возрастными изменениями, потерю костной массы челюсти, связанную с возрастными изменениями, потерю костной массы черепа, связанную с возрастными изменениями, или потерю костной массы, связанную с космическим полетом, но не ограничиваясь ими.</p>
<p>Составы, описанные здесь, можно использовать для улучшения результатов ортопедических процедур, стоматологических процедур, имплантаций, замены суставов, костной пластики, косметической хирургии костей и восстановления костей, например, заживления переломов, лечения несращений, лечения замедленного заживления и реконструкции лица. Один или более из составов можно вводить до, во время и/или после процедуры, замены, трансплантации, хирургии или восстановления.</p>
<p>Кроме того, рассматриваются зубные имплантаты, матрицы, гели и раневые повязки, включающие составы, описанные здесь. В некоторых вариантах воплощения составом покрывают зубные имплантаты, матрицы, гели и раневые повязки. В других вариантах воплощения состав наносят на область-мишень (т.е. пораженную область десны или пораженный зубодесневый карман субъекта), необязательно до (или после) внедрения зубного имплантата, матриц или наложения раневой повязки. В указанных вариантах воплощения состав наносят любыми способами, известными в данной области техники. В некоторых вариантах воплощения состав вводят в область-мишень путем подкожной инъекции перед внедрением зубного имплантата, матрицы или наложением раневой повязки. В других вариантах воплощения состав наносят на пораженный участок кистью или другим способом покрытия пораженной области перед внедрением зубного имплантата, матрицы или наложением раневой повязки.</p>
<p>В еще одном аспекте здесь описаны способы увеличения минеральной плотности костной ткани у субъекта-млекопитающего, включающие введение состава, описанного здесь, в организм субъектамлекопитающего в количестве, обеспечивающем увеличение минеральной плотности костной ткани. В некоторых вариантах воплощения указанный способ, необязательно, повышает уровень маркеров формирования кости. В некоторых вариантах воплощения минеральная плотность костной ткани увеличивается в течение по меньшей мере приблизительно 7 дней, 2 недель, 3 недель, 4 недель, 1 месяца, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 2 месяцев, 3 месяцев или дольше. В родственных аспектах здесь описан способ лечения расстройства, связанного с костями, у субъекта-млекопитающего, включающий введение состава, описанного здесь, в организм субъекта в количестве, обеспечивающем лечение расстройства, связанного с костями.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения состав повышает уровень маркеров формирования кости по меньшей мере приблизительно на 10% по сравнению с уровнями маркеров кости при отсутствии лечения. Состав можно вводить посредством разовой дозы или в виде нескольких доз. Например, составы, описанные здесь, можно вводить в виде краткосрочной схемы лечения, например, с целью усиленного формирования костей, и/или можно вводить долгосрочно для предотвращения потери минеральной плотности костной ткани в рамках поддерживающих схем лечения.</p>
<p>В любом из предшествующих способов уровень маркеров формирования кости увеличивается по меньшей мере приблизительно на 10%, приблизительно на 20%, приблизительно на 30%, приблизительно на 40%, приблизительно на 50%, приблизительно на 60%, приблизительно на 70%, приблизительно на 80 %, приблизительно на 90%, приблизительно на 100% или более в течение по меньшей мере 2 недель, 3 недель, 30 дней, 1 месяца, 6 недель, 2 месяцев или дольше по сравнению с уровнями до лечения или нормальными уровнями для указанной популяции пациентов. В качестве неограничивающего примера, уровень маркеров формирования кости через 3 недели после лечения повышается, например по меньшей мере приблизительно на 20% по сравнению с уровнями до лечения или нормальными уровнями для указанной популяции пациентов. В одном типичном варианте воплощения маркером костной резорбции является уровень сывороточного С-телопептида коллагена I типа (СТХ). В других типичных вариантах воплощения маркером образования кости является костная щелочная фосфатаза (В8АР), остеокальцин (ОлСа) и/или Ν-концевой удлиняющий сегмент проколлагена 1 типа (Ρ1ΝΡ).</p>
<p>В еще одном аспекте здесь описан способ лечения расстройства, связанного с костями, причем указанный способ включает введение млекопитающему состава, описанного здесь, в количестве, обеспечивающем повышение минеральной плотности костной ткани всего организма (например, головы, туловища, рук и ног) или бедра (например, всего бедра и/или шейки бедра), позвоночника (например, поясничного отдела позвоночника), запястья, пальца, большеберцовой кости и/или пятки приблизительно на 1%, приблизительно на 2%, приблизительно на 3%, приблизительно на 4%, приблизительно на 5%, приблизительно на 6%, приблизительно на 8%, приблизительно на 10%, приблизительно на 12%, приблизительно на 15%, приблизительно на 18%, приблизительно на 20%, приблизительно на 25% или 30% или более. В некоторых вариантах воплощения минеральная плотность костной ткани субъекта-млекопитающего до лечения характерна для остеопороза или остеопении, и одну или более доз состава вводят в количестве и в течение времени, обеспечивающего улучшение минеральной плотности костной ткани, так что минеральная плотность костной ткани больше не является характерной для остеопороза и/или остеопении. Например, одну или несколько доз можно вводить в течение начального периода времени с целью повышения минеральную плотность костной ткани до диапазона в пределах 2,5 или одного стандартного отклонения от плотности, нормальной для молодого взрослого субъекта (т.е. Т-показателя >-2,5 или Т- 12 029956</p>
<p>показателя >-1). В типичных вариантах воплощения указанный начальный период времени составляет приблизительно 3 месяца или менее, 6 месяцев или менее, 9 месяцев или менее, 1 год или менее, 18 месяцев или менее, или дольше. Указанный способ может дополнительно включать последующее введение одной или более порций состава, описанного здесь, обеспечивающих поддержание минеральной плотности костной ткани, необязательно в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев, 1 года, 2 лет или дольше (например, в течение жизни субъекта).</p>
<p>В еще одном аспекте здесь описан способ лечения расстройства, связанного с костями, у субъектамлекопитающего, путем введения состава, описанного здесь, причем указанный состав включает антитело против склеростина, описанное здесь, в дозе 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 2 6 мг/кг, приблизительно 27 мг/кг, приблизительно 28 мг/кг, приблизительно 29 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг, приблизительно 31 мг/кг, приблизительно 32 мг/кг, приблизительно 33 мг/кг, приблизительно 34 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 36 мг/кг, приблизительно 37 мг/кг, приблизительно 38 мг/кг, приблизительно 39 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 41 мг/кг, приблизительно 42 мг/кг, приблизительно 43 мг/кг, приблизительно 44 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 46 мг/кг, приблизительно 47 мг/кг, приблизительно 48 мг/кг, или приблизительно 49 мг/кг, или приблизительно 50 мг/кг, приблизительно 55 мг/кг, приблизительно 60 мг/кг, приблизительно 65 мг/кг, приблизительно 70 мг/кг, приблизительно 75 мг/кг, приблизительно 80 мг/кг, приблизительно 85 мг/кг, приблизительно 90 мг/кг, приблизительно 95 мг/кг, или до приблизительно 100 мг/кг. Кроме того, рассматриваются диапазоны между любыми из этих конечных точек, например, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 3 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 6 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 4 мг/кг, или от приблизительно 3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения субъекту (например, субъекту-человеку) вводят дозу от приблизительно 50 миллиграммов до приблизительно 1000 миллиграммов. Например, в некоторых вариантах воплощения состав включает антитело против склеростина, описанное здесь, в дозе, равной приблизительно 5 мг, 15 мг, 2 5 мг, 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 650 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 750 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 850 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 950 мг или до приблизительно 1000 мг антитела против склеростина. Кроме того, рассматриваются диапазоны между любыми из указанных конечных точек, например, от приблизительно 50 мг до приблизительно 80 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 140 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 350 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 280 мг, от приблизительно 7 0 мг до приблизительно 210, от приблизительно 75 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 100 мг до приблизительно 150 мг, от приблизительно 140 мг до приблизительно 210 мг, или от приблизительно 150 мг до приблизительно 200 мг, или от приблизительно 280 до приблизительно 410 мг.</p>
<p>В любом из способов, описанных здесь, указанную дозу вводят с любым интервалом, например, несколько раз в неделю (например, два или три раза в неделю), раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в четыре недели. В некоторых или любых вариантах воплощения состав, содержащий антитело против склеростина, описанное здесь, в дозе от приблизительно 120 мг до приблизительно 210 мг, вводят два раза в неделю. В некоторых или любых вариантах воплощения состав, содержащий антитело против склеростина, описанное здесь, вводят два раза в неделю в дозе приблизительно 140 мг состава. Любую из описанных здесь доз можно вводить в виде разделенных доз. Например, состав, включающий антитело против склеростина, описанное здесь, в дозе 140 мг антитела против склеростина, можно вводить в виде двух инъекций по 70 мг антитела против склеростина. Аналогично, дозу 210 мг антитела против склеростина можно вводить в виде двух инъекций по 105 мг антитела против склеростина.</p>
<p>Кроме того, здесь описан способ лечения расстройства, связанного с костями, у субъектамлекопитающего, страдающего или подверженного риску гипокальциемии или гиперкальциемии, у субъекта-млекопитающего, которому противопоказано лечение паратиреоидным гормоном или его аналогом, или у субъекта-млекопитающего, которому противопоказано лечение бисфосфонатом. Указанный способ включает введение субъекту-млекопитающему состава, описанного здесь, в количестве, обеспечивающем повышение уровня маркеров формирования кости, не приводящее к гипокальциемии или гиперкальциемии (например, клинически значимой гипокальциемии или гиперкальциемии).</p>
<p>В еще одном аспекте здесь описано применение кристаллов антитела против склеростина, описан- 13 029956</p>
<p>ных здесь, для изготовления медикамента для лечения расстройства, связанного с костями, в первом количестве в течение первого периода времени, причем указанное количество обеспечивает повышение минеральной плотности костной ткани в бедре, позвоночнике, запястье, пальце, большеберцовой кости и/или пятке по меньшей мере приблизительно на 3%, а затем во втором количестве в течение второго периода времени, обеспечивая поддержание минеральной плотности костной ткани.</p>
<p>Кроме того, описано применение кристаллов антитела против склеростина, описанных здесь, для лечения расстройства, связанного с костями, в первом количестве в течение первого периода времени, причем указанное количество обеспечивает повышение минеральной плотности костной ткани в бедре, позвоночнике, запястье, пальце, большеберцовой кости и/или пятке по меньшей мере приблизительно на 3%, а затем во втором количестве в течение второго периода времени, обеспечивая поддержание минеральной плотности костной ткани. Типичные дозы находятся в диапазоне от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/кг, или от приблизительно 0,1 до приблизительно 12 мг/кг, или от приблизительно 0,5 до приблизительно 12 мг/кг, или от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/кг, или от приблизительно 1 до 8 мг/кг, или от приблизительно 2 до 8 мг/кг, или от приблизительно 3 до приблизительно 8 мг/кг. В некоторых вариантах воплощения субъекту (например, субъекту-человеку) вводят дозу от приблизительно 50 миллиграммов до приблизительно 1000 миллиграммов. Например, в некоторых вариантах воплощения состав включает антитело против склеростина, описанное здесь, в дозе, равной приблизительно 5 мг, 15 мг, 25 мг, 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 650 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 750 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 850 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 950 мг или до приблизительно 1000 мг антитела против склеростина. Кроме того, рассматриваются диапазоны между любыми из указанных конечных точек, например, от приблизительно 50 мг до приблизительно 80 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 140 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 350 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 280 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 210, от приблизительно 75 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 100 мг до приблизительно 150 мг, от приблизительно 140 мг до приблизительно 210 мг, или от приблизительно 150 мг до приблизительно 200 мг, или от приблизительно 280 до приблизительно 410 мг.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения способ или применение, описанные здесь, дополнительно включают введение второго терапевтического средства, улучшающего состояние костей, для лечения расстройства, связанного с костями, описанного здесь. В данной области техники известно большое количество терапевтических средств этого типа. В некоторых вариантах воплощения терапевтическое средство, улучшающее состояние костей, выбрано из группы, состоящей из антирезорбтивного лекарственного средства, агента, формирующего костную ткань, модулятора рецептора эстрогена (включая ралоксифен, базедоксифен и лазофоксифен, но не ограничиваясь ими) и лекарственного средства, оказывающего ингибирующее действие на остеокласты. В некоторых вариантах воплощения указанный второй агент, улучшающий состояние костей, выбран из группы, состоящей из бисфосфоната (включая алендронат натрия (ΡΟδΑΜΑΧ®), ризедронат, ибандронат натрия (ΒΟΝίνΑ®) и золедроновую кислоту (КЕСЬЛ8Т®), но не ограничиваясь ими), эстрогена или аналога эстрогенов, источника кальция, тиболона, кальцитонина, кальцитриола и средства для заместительной гормональной терапии. В некоторых вариантах воплощения указанный второй агент, улучшающий состояние костей, включает паратиреоидный гормон (ПТГ) или его пептидный фрагмент, ПТГ-родственный белок (РТНгр), костный морфогенетический белок, остеогенин, ΝαΡ, агонист РСЕ2, статин, антитело против ΌΚΚ1 или ингибитор ΌΚΚ1, лиганд антитела против ΚΑ.ΝΚ (ΚΑΝΚΡ) (например, РКОЫЛ®) или ингибитор ΚΑ.ΝΚΡ, ранелат стронция, витамин Ό или производное или имитатор витамина Ό, но не ограничивается ими. В некоторых вариантах воплощения второй агент, улучшающий состояние костей, является Гойео® (терипаратидом или рекомбинантным аналогом паратиреоидного гормона человека (1-34)), или Ргео1ае1® (паратиреоидным гормоном). В некоторых или любых вариантах воплощения агент, улучшающий состояние костей, является Рто1е1о8®.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения указанный второй агент, улучшающий состояние костей, вводят одновременно с составом (например, в течение периода лечения). В других вариантах воплощения указанный второй агент, улучшающий состояние костей, вводят после окончания периода лечения антителом против склеростина (т.е. в период поддержания). В таких вариантах воплощения второй агент, улучшающий состояние костей, вводят в течение периода поддержания, составляющего от приблизительно 1 недели до приблизительно 5 лет.</p>
<p>Указанный способ может дополнительно включать последующее введение одной или более порций препарата, обеспечивающих поддержание минеральной плотности костной ткани, необязательно в течение периода поддержания, составляющего по меньшей мере приблизительно 12 недель, 6 месяцев, 1 год, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет или более (например, в течение жизни субъекта) после окончания периода</p>
<p>- 14 029956</p>
<p>лечения.</p>
<p>Дополнительные аспекты настоящего изобретения определены или кратко изложены в следующих пронумерованных абзацах:</p>
<p>1. Кристалл 1дС-антитела против склеростина, содержащего вариабельные области легкой и тяжелой цепи 8ЕО ГО N0: 3 и 5, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности 8ЕС ГО N0: 13 и 15.</p>
<p>2. Стерильный состав, включающий кристалл 1дС-антитела против склеростина, в котором по меньшей мере 70% антитела находится в кристаллической форме.</p>
<p>3. Стерильный состав, включающий кристалл 1дС-антитела против склеростина, в котором по меньшей мере 90% антитела находится в кристаллической форме.</p>
<p>4. Состав по абзацу 2 или абзацу 3, в котором 1§С-антитело включает вариабельные области легкой и тяжелой цепи 8ЕС ГО N0: 3 и 5, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности 8ЕС ГО N0: 13 и 15.</p>
<p>5. Кристалл или состав по любому из предыдущих абзацев, в котором длина кристалла составляет до 500 мкм.</p>
<p>6. Кристалл или состав по любому из предыдущих абзацев, в котором кристалл имеет форму, выбранную из группы, состоящей из эллипсоидов, стержней и игл.</p>
<p>7. Состав по любому из предыдущих абзацев, включающий кристаллы длиной до приблизительно 500 мкм и с формой, выбранной из группы, состоящей из эллипсоидов, стержней и игл, или смешанной формой.</p>
<p>8. Кристалл или состав по любому из предыдущих абзацев, включающий соли, выбранные из группы, состоящей из дигидрофосфата натрия, гидрофосфата калия, хлорида натрия, сульфата аммония, тетрагидрата тартрата калия-натрия, таксимата, дигидрата цитрата натрия, тригидрата ацетата натрия, тартрата аммония, малоната натрия, ацетата, ацетата кальция, какодилата, СНЕ8, сульфата лития, хлорида магния, ацетата цинка, хлорида цезия, фосфата аммония, фосфата натрия, фосфата калия, фторида натрия, иодида калия, иодида натрия, иодида аммония, тиоцианата натрия, тиоцианата калия, формиата натрия, формиата калия и формиата аммония, но не ограничиваются ими.</p>
<p>9. Состав по любому из предыдущих абзацев, являющийся лиофилизированным составом.</p>
<p>10. Состав по любому из предыдущих абзацев, являющийся жидким составом.</p>
<p>11. Состав по абзацу 10, имеющий концентрацию по меньшей мере приблизительно 100 мг указанного антитела на мл состава.</p>
<p>12. Состав по абзацу 10, включающий по меньшей мере приблизительно 140 мг антитела, диспергированного в 1,5 мл или меньшем количестве жидкости.</p>
<p>13. Состав по абзацу 11 или абзацу 12, являющийся пригодным для инъекции через шприц с иглой 20 калибра или менее с использованием клинически приемлемого количества силы.</p>
<p>14. Состав по любому из предыдущих абзацев, сохраняющий по меньшей мере 50% активности ίη νίνο при введении в той же дозе и тем же образом, что и жидкий состав указанного некристаллизованного антитела.</p>
<p>15. Состав по абзацу 11 или абзацу 12, который при введении в организм субъекта-млекопитающего опосредует повышение минеральной плотности костной ткани, составляющее по меньшей мере приблизительно 70% или равное уровню повышения минеральной плотности костной ткани, опосредованному жидким составом некристаллизованного антитела, причем указанный состав и указанный жидкий состав некристаллизованного антитела вводят субъекту в одинаковой дозе и одинаковым образом.</p>
<p>16. Состав по абзацу 14 или абзацу 15, который вводят в виде разовой дозы.</p>
<p>17. Состав по абзацу 14 или абзацу 15, который вводят в виде нескольких доз.</p>
<p>18. Состав по любому из предыдущих абзацев, включающий по меньшей мере 20% ПЭГ-3350.</p>
<p>19. Состав по любому из предыдущих абзацев, включающий по меньшей мере 10% ПЭГ-8000.</p>
<p>20. Состав по любому из предыдущих абзацев, в котором осмолярность состава находится в диапазоне от приблизительно 180 до приблизительно 420 мосмоль/кг.</p>
<p>21. Контейнер, включающий по меньшей мере 50 мг кристалла антитела по абзацу 1 в виде суспензии в объеме 0,5-2 мл.</p>
<p>22. Контейнер, включающий состав по абзацу 2 или абзацу 3.</p>
<p>23. Контейнер по абзацу 21 или 22, в котором указанный контейнер является флаконом, шприцем или инъекционным устройством.</p>
<p>24. Контейнер по абзацу 23, отличающийся тем, что шприц снабжен иглой 20 калибра или менее.</p>
<p>25. Способ ресуспендирования состава по абзацу 9, включающий осуществление контакта состава с приблизительно 0,5-2 мл стерильной суспензионной среды-носителя.</p>
<p>26. Способ по абзацу 25, в котором суспензионная среда-носитель выбрана из группы, состоящей из глутамата, сорбита, НЕРЕ8, декстрозы и воды или их комбинации.</p>
<p>27. Способ изготовления кристалла 1дС-антитела против склеростина, содержащего вариабельные области легкой и тяжелой цепи 8ЕС ГО N0: 3 и 5, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности 8ЕС ГО N0: 13 и 15, включающий объединение раствора антитела с реагентом для кри- 15 029956</p>
<p>сталлизации, включающим соль, выбранную из группы, состоящей из дигидрофосфата натрия, гидрофосфата калия, хлорида натрия, сульфата аммония, ацетата аммония, тетрагидрата тартрата калиянатрия, таксимата, дигидрата цитрата натрия, тригидрата ацетата натрия, тартрата аммония, малоната натрия, ацетата, ацетата кальция, какодилата, СНЕЗ, сульфата лития, дигидрата ацетата лития, хлорида магния, тетрагидрата ацетата магния, формиата магния, нитрата магния, сульфата магния, ацетата цинка, хлорида цинка, сульфата цинка, хлорида цезия, фосфата аммония, фосфата натрия, фосфата калия, фторида натрия, иодида калия, иодида натрия, иодида аммония, тиоцианата натрия, тиоцианата калия, формиата натрия, формиата калия и формиата аммония, необязательно, при рН от приблизительно 6 до приблизительно 8, обеспечивающий образование кристалла.</p>
<p>28. Способ по абзацу 27, в котором концентрация соли составляет от приблизительно 0,1 М до приблизительно 10 М.</p>
<p>29. Способ по абзацу 27, в котором реагент дополнительно включает 2-метил-2,4-пентандиол (ΜΡΌ) или полиэтиленгликоль (ПЭГ).</p>
<p>30. Способ по абзацу 27, в котором ΜΡΌ присутствует в концентрации от приблизительно 0,1% до приблизительно 50%.</p>
<p>31. Способ по абзацу 27, в котором молекулярная масса ПЭГ составляет от приблизительно 400 кДа до приблизительно 2 0000 кДа.</p>
<p>32. Способ по абзацу 31, в котором ПЭГ присутствует в концентрации от 0,1% до приблизительно</p>
<p>50%.</p>
<p>33. Способ изготовления кристалла 1дС-антитела против склеростина, содержащего вариабельные области легкой и тяжелой цепи ЗЕф ГО N0: 3 и 5, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности ЗЕф ГО N0: 13 и 15, причем способ включает объединение раствора антитела с реагентом для кристаллизации, включающим элемент, выбранный из группы, состоящей из янтарной кислоты, ПЭГ-1000, ПЭГ-8000 и изопропанола, обеспечивая образование кристалла.</p>
<p>34. Способ по абзацу 33, в котором реагент для кристаллизации включает:</p>
<p>(a) от приблизительно 0,1 М до приблизительно 5 М янтарной кислоты, от приблизительно 0,1 М до приблизительно 5 М НЕРЕЗ и от приблизительно 0,1% (мас./об.) до приблизительно 60% (мас./об.) монометилового эфира полиэтиленгликоля 2000;</p>
<p>(b) от приблизительно 1% (мас./об.) до приблизительно 50% (мас./об.) ПЭГ-8000, от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М имидазола и от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 М ацетата кальция;</p>
<p>(c) от приблизительно 1% (мас./об.) до приблизительно 50% (мас./об.) ПЭГ-8000, от приблизительно 0,05М до приблизительно 5 М Трис и от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М хлорида магния;</p>
<p>(б) от приблизительно 10% до приблизительно 80% (мас./об.) ПЭГ-1000, от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М фосфата натрия/калия и от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М хлорида натрия;</p>
<p>(е) от приблизительно 1% (мас./об.) до приблизительно 20% (мас./об.) ПЭГ-8000, от приблизительно 0,05 М до приблизительно 5 М какодилата, от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М ацетата кальция и от приблизительно 10% до приблизительно 30% (мас./об.) глицерина; или</p>
<p>(ί) от приблизительно 10% до приблизительно 30% изопропанола и от приблизительно 0,1 М до приблизительно 2 М фосфата натрия/калия.</p>
<p>35. Способ по любому из абзацев 27-34, дополнительно включающий удаление по меньшей мере части реагента для кристаллизации после образования кристаллов.</p>
<p>36. Способ по абзацу 35, в котором часть реагента для кристаллизации удаляют центрифугированием.</p>
<p>37. Способ по абзацу 35, в котором кристаллы помещают в раствор, содержащий органическую добавку.</p>
<p>38. Способ по абзацу 37, дополнительно включающий добавление вспомогательного вещества в раствор.</p>
<p>39. Способ по абзацу 38, в котором указанное вспомогательное вещество выбрано из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы и сорбита.</p>
<p>40. Способ по абзацу 37, в котором указанная органическая добавка является этанолом или изопропанолом.</p>
<p>41. Способ по абзацу 27 или абзацу 33, включающий дополнительно сушку образованных кристаллов.</p>
<p>42. Способ по абзацу 41, в котором кристаллы сушат на воздухе или под воздействием вакуума, или под воздействием газообразного азота.</p>
<p>43. Способ по абзацу 27 или 33, в котором кристаллизуется по меньшей мере 80% антитела.</p>
<p>44. Способ по любому из абзацев 27-43, являющийся способом массовой кристаллизации,</p>
<p>45. Кристалл антитела, полученный способом по абзацу 27 или абзацу 33.</p>
<p>46. Способ повышения минеральной плотности костной ткани, лечения расстройства, связанного с</p>
<p>- 16 029956</p>
<p>пониженной плотностью костной ткани, лечения расстройства, связанного с костями, или улучшение результатов процедуры, замены, трансплантации, хирургической операции или восстановления у субъекта-млекопитающего, включающий введение состава по любому из предыдущих абзацев в количестве, обеспечивающем увеличение минеральной плотности костной ткани в организме субъекта.</p>
<p>47. Кристалл 1дО-антитела против склеростина, содержащего вариабельные области легкой и тяжелой цепи 8ЕО ГО N0: 23 и 25, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 33 и 35.</p>
<p>48. Кристалл по абзацу 47, в котором длина указанного кристалла составляет от приблизительно 100 мкМ до приблизительно 500 мкМ или от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 50 мкМ.</p>
<p>49. Кристалл по абзацу 47 или 48, в котором указанный кристалл имеет форму эллипсоида.</p>
<p>50. Кристалл по любому из абзацев 47-49, в котором кристалл включает соль, выбранную из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида калия, ацетата натрия, фосфата калия и гистидина.</p>
<p>51. Стерильный состав, включающий кристалл антитела по абзацу 47, в котором по меньшей мере 70% антитела находится в кристаллической форме.</p>
<p>52. Кристалл или состав по любому из абзацев 47-51, в котором длина кристалла составляет до 500</p>
<p>мкм.</p>
<p>53. Кристалл или состав по любому из абзацев 47-51, в котором кристалл имеет форму, выбранную из группы, состоящей из эллипсоидов, стержней и игл.</p>
<p>54. Состав по любому из абзацев 51-53, включающий кристаллы длиной до приблизительно 500 мкм и с формой, выбранной из группы, состоящей из эллипсоидов, стержней и игл, или смешанной формой.</p>
<p>55. Способ изготовления кристалла 1дС-антитела против склеростина, содержащего вариабельные области легкой и тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 23 и 25, предпочтительно содержащие аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО N0: 33 и 35, причем указанный способ включает объединение раствора антитела с реагентом для кристаллизации, включающим соль, выбранную из группы, состоящей из фосфата калия и гистидина, необязательно при рН от приблизительно 6 до приблизительно 8, обеспечивая образование кристалла.</p>
<p>56. Способ по абзацу 55, в котором, концентрация соли составляет от приблизительно 1-30 мМ, необязательно приблизительно 10 мМ.</p>
<p>57. Способ по абзацу 55 или 56, отличающийся тем, что реагент для кристаллизации дополнительно включает полиэтиленгликоль (ПЭГ).</p>
<p>58. Способ по абзацу 55, дополнительно включающий удаление по меньшей мере части реагента для кристаллизации после образования кристаллов.</p>
<p>59. Способ по абзацу 58, в котором часть реагента для кристаллизации удаляют центрифугированием.</p>
<p>60. Способ по абзацу 55, в котором кристаллы помещают в раствор, содержащий органическую добавку.</p>
<p>61. Способ по абзацу 55, дополнительно включающий добавление вспомогательного вещества в раствор.</p>
<p>62. Способ по абзацу 61, в котором указанное вспомогательное вещество выбрано из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы или сорбита.</p>
<p>63. Способ по абзацу 60, в котором указанная органическая добавка является этанолом или изопропанолом.</p>
<p>64. Способ по абзацу 55, дополнительно включающий сушку образованных кристаллов.</p>
<p>65. Способ по абзацу 64, в котором кристаллы сушат на воздухе или под воздействием вакуума, или под воздействием газообразного азота.</p>
<p>66. Кристалл антитела, полученного способом по любому из абзацев 55-65.</p>
<p>67. Состав по любому из абзацев 51-54, являющийся лиофилизированным составом.</p>
<p>68. Состав по любому из абзацев 51-54, являющийся жидким составом.</p>
<p>69. Состав по абзацу 68, включающий концентрацию по меньшей мере приблизительно 100 мг указанного антитела на мл состава.</p>
<p>70. Состав по любому из абзацев 51-54, в котором кристалл включает соль, выбранную из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида калия, ацетата натрия, фосфата калия и гистидина.</p>
<p>71. Состав по любому из абзацев 51-54, включающий сукралозу, трегалозу и/или сорбит.</p>
<p>72. Состав по абзацу 68, в котором осмолярность состава находится в диапазоне от приблизительно 180 до приблизительно 420 мосмоль/кг.</p>
<p>73. Состав по абзацу 68, включающий по меньшей мере приблизительно 140 мг антитела, диспергированного в 1,5 мл или меньшем количестве жидкости.</p>
<p>74. Состав по абзацу 69 или 73, являющийся пригодным для инъекции через шприц с иглой 20 калибра или менее с использованием клинически приемлемого количества силы.</p>
<p>75. Состав по любому из абзацев 51-54 и 66-75, сохраняющий по меньшей мере 50% активности ίη νίνο при введении в той же дозе и тем же образом, что и жидкий состав указанного некристаллизованно- 17 029956</p>
<p>го антитела.</p>
<p>76. Контейнер, включающий по меньшей мере 50 мг или более кристалла антитела по абзацу 66 в виде суспензии в объеме 0,5-2 мл.</p>
<p>77. Контейнер, включающий состав по абзацу 51.</p>
<p>78. Контейнер по абзацу 77, в котором указанный контейнер является флаконом, шприцем или инъекционным устройством.</p>
<p>79. Контейнер по абзацу 78, в котором шприц снабжен иглой 20 калибра или менее.</p>
<p>80. Способ ресуспендирования состава по абзацу 67, включающий осуществление контакта кристалла с приблизительно 0,5-2 мл стерильной суспензионной среды-носителя.</p>
<p>81. Состав по любому из абзацев 51-54 и 66-75, сохраняющий по меньшей мере 50% активности ίη νΐνο при введении в той же дозе и тем же образом, что и жидкий состав указанного некристаллизованного антитела.</p>
<p>82. Состав по любому из абзацев 51-54 и 66-75, который при введении в организм субъектамлекопитающего опосредует повышение минеральной плотности костной ткани, составляющее по меньшей мере приблизительно 70% или равное уровню повышения минеральной плотности костной ткани, опосредованному жидким составом указанного некристаллизованного антитела, причем указанный состав и указанный жидкий состав некристаллизованного антитела вводят субъекту в одинаковой дозе и одинаковым образом.</p>
<p>83. Состав по п.81 или 82, который вводят в виде разовой дозы.</p>
<p>84. Состав по п.81 или 82, который вводят в виде нескольких доз.</p>
<p>85. Способ повышения минеральной плотности костной ткани, лечения расстройства, связанного с пониженной плотностью костной ткани, лечения расстройства, связанного с костями, или улучшение результатов процедуры, замены, трансплантации, хирургической операции или восстановления у субъекта-млекопитающего, включающий введение состава по любому из абзацев 51-54 и 66-75 в количестве, обеспечивающем увеличение минеральной плотности костной ткани в организме субъекта.</p>
<p>Следует понимать, что хотя различные варианты воплощения в данном описании представлены с использованием выражения "включающий", при различных обстоятельствах родственный вариант воплощения также можно описать с использованием выражений "состоящий из" и "в основном состоящий из". Следует отметить, что формы единственного числа, относящиеся к одной или более, например, "молекуле иммуноглобулина", следует понимать как представляющие одну или более молекул иммуноглобулина. Фактически, формы единственного числа, а также термины "один или более" и "по меньшей мере, один" можно использовать здесь на равных основаниях.</p>
<p>Следует также понимать, что при описании диапазона значений описываемая характеристика может являться отдельным значением, находящимся в пределах диапазона. Например, "рН от приблизительно рН 4 до приблизительно рН 6" может являться рН 4, 4,2, 4,6, 5,1, 5,5 и т.д., и любым значением, находящимся между такими значениями. Кроме того, не следует считать, что выражение "рН от приблизительно рН 4 до приблизительно рН 6" означает, что рН рассматриваемой композиции меняется на 2 единицы рН в диапазоне от рН 4 до рН б при хранении; скорее, что значение может быть выбрано из указанного диапазона рН раствора, и рН остается забуференным при указанном значении рН. В некоторых вариантах воплощения при использовании термина "приблизительно" данный термин означает указанное число плюс-минус 5%, 10%, 15% или более от указанного числа. Фактическое изменение следует определять из контекста.</p>
<p>Любой из диапазонов, описанных здесь, включает конечные точки указанного диапазона. В то же время, описание также рассматривает аналогичные диапазоны, в которых исключены нижняя и/или верхняя конечные точки. Дополнительные элементы и варианты изобретения очевидны для специалистов в данной области техники из полного текста данной заявки, в том числе чертежей и подробного описания, и все такие элементы следует считать аспектами изобретения. Аналогично, элементы изобретения, описанные здесь, можно повторно объединить в дополнительных вариантах воплощения, которые также следует считать аспектами изобретения независимо от того, упоминается ли указанное конкретное сочетание элементов выше в качестве аспекта или варианта воплощения настоящего изобретения. Кроме того, только ограничения, описанные в настоящем документе как критические для изобретения, следует рассматривать в качестве таковых; варианты изобретения, в которых отсутствуют ограничения, не описанные здесь как критические, следует считать аспектами изобретения.</p>
<p>Краткое описание чертежей</p>
<p>На фиг. 1А представлены данные по осмоляльности для различных скрининговых тестов кристаллизации АЬ-3 0Кт. Фиг. 1В является графиком, показывающим данные по осмоляльности композиций АЬ-30Кт, Πδδ-буферов и Х% ПЭГ-3350.</p>
<p>На фиг. 2 показана морфология кристаллов АЬ-30Кт в #12 0,05 М Трис рН 8,0 и при различном процентном содержании ПЭГ-3350, согласно наблюдениям и регистрации с помощью микроскопа Саг1 Ζβίδδ Ахюсат МКс.</p>
<p>Фиг. 3А и 3В являются графиками, показывающими скорость растворения кристаллов АЬ-30 в различных суспензионных средах-носителях.</p>
<p>- 18 029956</p>
<p>Фиг. 4 является графиком, показывающим скорость растворения кристаллов АЬ-30 в зависимости от морфологии кристалла.</p>
<p>Фиг. 5А-5Р являются графиками, показывающими скорость растворения кристаллов АЬ-30 в зависимости от упаковки кристалла.</p>
<p>Фиг. 6А и 6В являются графиками, показывающими скорость растворения кристаллов АЬ-30 в зависимости от температуры и морфологии кристалла.</p>
<p>На фиг. 7 показана минеральная плотность костной ткани (МПКТ) у крыс в виде абсолютной МПКТ (А) и в виде процентного изменения от исходного уровня (В), измеренная в поясничных позвонках с течением времени после однократной инъекции буфера/среды-носителя или однократной инъекции "жидкого" АЬ-30Кт (50 мг/кг раствора 100 мг/мл) или однократной инъекции "кристалла/кристаллизованного" АЬ-30Кт (50 мг/кг раствора 100 мг/мл). ВЬ = исходный уровень. Данные показаны в виде "среднее +/- стандартная ошибка среднего" (8ЕМ). Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой, получавшей буфер/среду-носитель, обозначены звездочками. *р<0,05 по сравнению со средой-носителем согласно тесту Даннетта в дисперсионном анализе. N=9 для группы, получавшей буфер/среду-носитель. N=10 для группы, получавшей "жидкое" АЬ-30Кт. N=10 для группы, получавшей "кристалл/кристаллическое" АЬ-30Кт.</p>
<p>На фиг. 8 показана минеральная плотность костной ткани (МПКТ) у крыс в виде абсолютной МПКТ (А) и в виде процентного изменения от исходного уровня (В), измеренная в костях ноги (бедренная кость-большеберцовая кость) с течением времени после однократной инъекции буфера/средыносителя или однократной инъекции "жидкого" АЬ-30Кт (50 мг/кг раствора 100 мг/мл) или однократной инъекции "кристалла/кристаллизованного" АЬ-30Кт (50 мг/кг раствора 100 мг/мл). ВЬ = исходный уровень. Данные показаны в виде "среднее +/- стандартная ошибка среднего" (8ЕМ). Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой, получавшей буфер/среду-носитель, обозначены звездочками. Для фиг. 8В *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001 по сравнению со средой-носителем согласно тесту Даннетта в дисперсионном анализе. N=8 для каждой группы N=9 для группы, получавшей буфер/среду-носитель. N=10 для группы, получавшей "жидкое" АЬ-30Кт. N=10 для группы, получавшей "кристалл/кристаллизованное" АЬ-30Кт.</p>
<p>На фиг. 9 показана минеральная плотность костной ткани (МПКТ) у крыс в виде абсолютной МПКТ (А) и в виде процентного изменения от исходного уровня (В), измеренная в поясничных позвонках с течением времени после однократной инъекции буфера/среды-носителя или однократной инъекции "жидкого" АЬ-30 (100 мг/кг раствора 100 мг/мл) или однократной инъекции "кристалла/кристаллизованного" АЬ-30 (100 мг/кг раствора 100 мг/мл) составов кристаллов А35. 134, 136 или А46. ВЬ = исходный уровень. Данные показаны в виде "среднее +/-стандартная ошибка среднего" (8ЕМ). Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой, получавшей буфер/среду-носитель, обозначены звездочками. Для фиг. 9А **р<0,01 по сравнению со средой-носителем согласно тесту Даннетта в дисперсионном анализе. Для фиг. 9В *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001 по сравнению со средой-носителем согласно тесту Даннетта в дисперсионном анализе.</p>
<p>На фиг. 10 показана минеральная плотность костной ткани (МПКТ) у крыс в виде абсолютной МПКТ (А) и в виде процентного изменения от исходного уровня (В), измеренная в костях ноги (бедренная кость-большеберцовая кость) с течением времени после однократной инъекции буфера/средыносителя или однократной инъекции "жидкого" АЬ-30 (100 мг/кг раствора 100 мг/мл) или однократной инъекции "кристалла/кристаллизованного" АЬ-30 (100 мг/кг раствора 100 мг/мл) составов кристаллов А35, 134, 136 или А46. ВЬ = исходный уровень. Данные показаны в виде "среднее +/- стандартная ошибка среднего" (8ЕМ). Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой, получавшей буфер/среду-носитель, обозначены звездочками. Для фиг. 10В *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001 по сравнению со средой-носителем согласно тесту Даннетта в дисперсионном анализе. N=8 для каждой группы.</p>
<p>Подробное описание</p>
<p>Здесь описаны кристаллы антител-иммуноглобулинов С (1дС) против склеростина, пригодные для применения в составах для парентерального введения; способы применения таких кристаллов АЬ-30 или АЬ-31 для получения составов для использования в качестве медикаментов; составы, включая высокие концентрации кристаллического антитела против склеростина, способы использования указанных составов для лечения, способы введения указанных составов, например, подкожно или внутримышечно, и контейнеры или комплекты, включающие указанные составы.</p>
<p>I. Антитела в составе</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения антитело против склеростина в составе представлено в концентрации ("высокой концентрации белка"), равной по меньшей мере приблизительно 100 мг/мл, приблизительно 101 мг/мл, приблизительно 102 мг/мл, приблизительно 103 мг/мл, приблизительно 104 мг/мл, приблизительно 105 мг/мл, приблизительно 106 мг/мл, приблизительно 107 мг/мл, приблизительно 108 мг/мл, приблизительно 109 мг/мл, приблизительно 110 мг/мл, приблизительно 111 мг/мл, приблизительно 112 мг/мл, приблизительно 113 мг/мл, приблизительно 114 мг/мл, приблизительно 115 мг/мл, приблизительно 116 мг/мл, приблизительно 117 мг/мл, приблизительно 118 мг/мл, приблизительно 119 мг/мл,</p>
<p>- 19 029956</p>
<p>приблизительно 120 мг/мл, приблизительно 121 мг/мл, приблизительно 122 мг/мл, приблизительно 123 мг/мл, приблизительно 124 мг/мл, приблизительно 125 мг/мл, приблизительно 126 мг/мл, приблизительно 127 мг/мл, приблизительно 128 мг/мл, приблизительно 129 мг/мл, приблизительно 130 мг/мл, приблизительно 131 мг/мл, приблизительно 132 мг/мл, приблизительно 132 мг/мл, приблизительно 133 мг/мл, приблизительно 134 мг/мл, приблизительно 135 мг/мл, приблизительно 136 мг/мл, приблизительно 137 мг/мл, приблизительно 138 мг/мл, приблизительно 139 мг/мл, приблизительно 140 мг/мл, приблизительно 141 мг/мл, приблизительно 142 мг/мл, приблизительно 143 мг/мл, приблизительно 144 мг/мл, приблизительно 145 мг/мл, приблизительно 146 мг/мл, приблизительно 147 мг/мл, приблизительно 148 мг/мл, приблизительно 149 мг/мл, приблизительно 150 мг/мл, приблизительно 151 мг/мл, приблизительно 152 мг/мл, приблизительно 153 мг/мл, приблизительно 154 мг/мл, приблизительно 155 мг/мл, приблизительно 156 мг/мл, приблизительно 157 мг/мл, приблизительно 158 мг/мл, приблизительно 159 мг/мл, приблизительно 160 мг/мл, приблизительно 161 мг/мл, приблизительно 162 мг/мл, приблизительно 163 мг/мл, приблизительно 164 мг/мл, приблизительно 165 мг/мл, приблизительно 166 мг/мл, приблизительно 167 мг/мл, приблизительно 168 мг/мл, приблизительно 169 мг/мл, приблизительно 170 мг/мл, приблизительно 171 мг/мл, приблизительно 172 мг/мл, приблизительно 173 мг/мл, приблизительно 174 мг/мл, приблизительно 175 мг/мл, приблизительно 176 мг/мл, приблизительно 177 мг/мл, приблизительно 178 мг/мл, приблизительно 179 мг/мл, приблизительно 180 мг/мл, приблизительно 181 мг/мл, приблизительно 182 мг/мл, приблизительно 183 мг/мл, приблизительно 184 мг/мл, приблизительно 185 мг/мл, приблизительно 186 мг/мл, приблизительно 187 мг/мл, приблизительно 188 мг/мл, приблизительно 189 мг/мл, приблизительно 190 мг/мл, приблизительно 191 мг/мл, приблизительно 192 мг/мл, приблизительно 193 мг/мл, приблизительно 194 мг/мл, приблизительно 195 мг/мл, приблизительно 196 мг/мл, приблизительно 197 мг/мл, приблизительно 198 мг/мл, приблизительно 199 мг/мл, приблизительно 200 мг/мл, и может меняться до, например, приблизительно 400 мг/мл, приблизительно 390 мг/мл, приблизительно 380 мг/мл, приблизительно 370 мг/мл, приблизительно 360 мг/мл, приблизительно 350 мг/мл, приблизительно 340 мг/мл, приблизительно 330 мг/мл, приблизительно 320 мг/мл, приблизительно 310 мг/мл, приблизительно 300 мг/мл, приблизительно 290 мг/мл, приблизительно 280 мг/мл, приблизительно 270 мг/мл, приблизительно 260 мг/мл, приблизительно 250 мг/мл или приблизительно 240 мг/мл. Рассматривается любой диапазон, представляющий комбинацию вышеизложенных конечных точек, включая, но не ограничиваясь: от приблизительно 70 мг/мл до приблизительно 250 мг/мл, от приблизительно 70 мг/мл до приблизительно 140 мг/мл, от приблизительно 70 мг/мл до приблизительно 350 мг/мл, от приблизительно 50 мг/мл до приблизительно 80 мг/мл, от приблизительно 70 мг/мл до приблизительно 210 мг/мл, от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 150 мг/мл, от приблизительно 280 мг/мл до приблизительно 410 мг/мл, от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 200 мг/мл, от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 250 мг/мл, от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 300 мг/мл, от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 320 мг/мл или от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 350 мг/мл.</p>
<p>Антитело против склеростина необязательно составляют в виде разовой дозы (например, от приблизительно 70 до приблизительно 450 мг антитела против склеростина). В некоторых вариантах воплощения указанная доза содержит по меньшей мере приблизительно 5 мг, 15 мг, 25 мг, 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 650 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 750 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 850 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 950 мг или до приблизительно 1000 мг антитела против склеростина. Кроме того, рассматриваются диапазоны между любыми из указанных конечных точек, например, от приблизительно 50 мг до приблизительно 80 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 140 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 350 мг, от приблизительно 70 мг до приблизительно 280, от приблизительно 70 мг до приблизительно 210 мг, от приблизительно 75 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 100 мг до приблизительно 150 мг, от приблизительно 140 мг до приблизительно 210 мг, или от приблизительно 150 мг до приблизительно 200 мг, или от приблизительно 280 мг до приблизительно 410 мг антитела против склеростина. Дозу вводят с любым интервалом, например, несколько раз в неделю (например, два или три раза в неделю), раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в четыре недели. Например, в некоторых или любых вариантах воплощения дозу антител против склеростина в диапазоне от приблизительно 120 мг до приблизительно 210 мг вводят два раза в неделю. В некоторых или любых вариантах воплощения дозу приблизительно 140 мг антитела против склеростина вводят два раза в неделю. Любую из описанных здесь доз можно вводить в виде разделенных доз. Например, дозу 140 мг антитела против склеростина можно вводить в виде двух инъекций по 70 мг антитела против склеростина. Аналогичным образом, дозу 210 мг антитела против склеростина можно вводить в виде двух инъекций по 105 мг антитела против склеростина, а дозу 140 мг антитела против склеростина можно вводить в виде семи инъекций по 20 мг антитела против склеростина.</p>
<p>- 20 029956</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения состав включает приблизительно 70 мг или 75 мг антитела против склеростина, пригодного для введения разовой дозы приблизительно 1 мг/кг. В других вариантах воплощения состав включает приблизительно 50 мг, или приблизительно 60 мг, или приблизительно 70 мг, или приблизительно 80 мг, или приблизительно 90 мг, или приблизительно 100 мг, или приблизительно 120 мг, или приблизительно 130 мг, или приблизительно 140 мг, или приблизительно 150 мг, или приблизительно 160 мг, или приблизительно 170 мг, или приблизительно 180 мг, или приблизительно 190 мг, или приблизительно 200 мг, или приблизительно 210 мг, или приблизительно 220 мг, или приблизительно 230 мг; или приблизительно 240 мг, или приблизительно 250 мг; или от приблизительно 250 мг до приблизительно 450 мг; или приблизительно 280 мг, или 290 мг, или 300 мг; или приблизительно 350 мг, или 360 мг; или приблизительно 420 мг, или 430 мг, или 440 мг, или 450 мг антитела против склеростина. В любом из таких вариантов воплощения состав включает количество антитела против склеростина, подходящее для введения разовой дозы от приблизительно 2 до приблизительно 6 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 4 мг/кг, или от приблизительно 3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 3 мг/кг массы тела (например, приблизительно 2 мг/кг, или приблизительно 3 мг/кг, или приблизительно 4 мг/кг, или приблизительно 5 мг/кг, или приблизительно 6 мг/кг массы тела).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения антитело против склеростина является ЛЬ-30. В некоторых вариантах воплощения антитело против склеростина является АЬ-31. Антитела АЬ-30 и АЬ-31 были описаны ранее в публикации патентной заявки США № 2007/0110747, содержание которой, включая перечень последовательностей, полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. В других вариантах воплощения антитело против склеростина является АЬ-30К (8ЕС ГО N0: 16-19) или АЬ-30Кт (8ЕС ГО N0: 17 и 19-21).</p>
<p>Антитело против склеростина, описанное здесь, связывается со склеростином 8ЕС ГО N0: 1 с Кй 10<sup>-6</sup> М или менее, или 10<sup>-7</sup> М или менее, или 10<sup>-8</sup> М или менее, или 10<sup>-9</sup> М или менее. Сродство можно определить любыми средствами, известными в данной области техники, в том числе с помощью технологии Шасоге и твердофазного ИФА, как описано в, например, публикации патентной заявки США № 2007/0110747.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения антитело включает тяжелую и/или легкую цепь АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31. Аминокислотные последовательности зрелых полноразмерных легких и тяжелых цепей антител АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31, включая константную область, приведены в 8ЕС ГО N0: 13 и 15; 8ЕС ГО N0: 16 и 19; 8ЕС ГО N0: 20 и 19 и 8ЕС ГО N0: 33 и 35 соответственно. Соответствующие последовательности кДНК, кодирующие полноразмерные легкие и тяжелые цепи антител АЬ-30 и АЬ-31, включая константную область, приведены в 8ЕС ГО N0: 12 и 14; 8ЕС ГО N0: 32 и 34 соответственно.</p>
<p>Термин "антитело АЬ-30", как используется здесь, относится к 1§О, состоящему из двух тяжелых цепей и двух легких цепей, причем тяжелая цепь включает 8ЕС ГО N0: 5 (вариабельная область тяжелой цепи АЬ-30), объединенную с константной областью 1§О, а легкая цепь включает 8ЕС ГО N0: 3 (вариабельная область легкой цепи АЬ-30), объединенную с константной областью легкой цепи. Предпочтительно, АЬ-30 включает аминокислотные последовательности зрелых тяжелой и легкой цепи, представленные в 8ЕС ГО N0: 15 и 13 соответственно. В некоторых вариантах воплощения антитело включает вариабельную область тяжелой и/или легкой цепи антитела АЬ-30 8ЕС ГО N0: 5 (вариабельная область тяжелой цепи АЬ-30), объединенную с константной областью тяжелой цепи человека изотипа 1дО1, 2, 3 или 4 (например, нативной, консенсусной или модифицированной; в данной области техники известен ряд модификаций, заведомо не влияющих на связывание), и/или 8ЕС ГО N0: 3 (вариабельная область легкой цепи АЬ-30), объединенную с константной областью легкой цепи человека (например, нативной, консенсусной или содержащей ряд модификаций, заведомо не влияющих на связывание, 8ЕС ГО N0: 17 (вариабельная область тяжелой цепи АЬ-30К), объединенную с константной областью тяжелой цепи человека изотипа 1§01, 2, 3 или 4, и/или 8ЕС ГО N0: 16 (вариабельная область легкой цепи АЬ-30К) объединенную с константной областью легкой цепи человека; 8ЕС ГО N0: 17 (вариабельная область тяжелой цепи АЬ-30Кт), объединенную с константной областью тяжелой цепи человека изотипа 1дО1, 2, 3 или 4, и/или 8ЕС ГО N0: 20 (вариабельная область легкой цепи АЬ-30Кт), объединенную с константной областью легкой цепи человека.</p>
<p>Термин "антитело АЬ-31", как используется здесь, относится к 1§О, состоящему из двух тяжелых цепей и двух легких цепей, причем тяжелая цепь включает 8ЕС ГО N0: 25 (вариабельная область тяжелой цепи АЬ-31), объединенную с константной областью 1§О, а легкая цепь включает 8ЕС ГО N0: 23 (вариабельная область легкой цепи АЬ-31), объединенную с константной областью легкой цепи. Предпочтительно, АЬ-31 включает аминокислотные последовательности зрелых тяжелой и легкой цепи, представленные в 8ЕС ГО N0: 35 и 33 соответственно. Так, в некоторых вариантах воплощения антитело включает вариабельную область тяжелой и/или легкой цепи антитела АЬ-31 8ЕС ГО N0: 25 (вариабельная область тяжелой цепи АЬ-30), объединенную с константной областью тяжелой цепи человека изотипа 1дО1, 2, 3 или 4 (например, нативной, консенсусной или содержащей ряд модификаций, заведомо не влияющих на связывание), и/или 8ЕС ГО N0: 23 (вариабельная область легкой цепи АЬ-31), объединен- 21 029956</p>
<p>ную с константной областью легкой цепи человека (например, нативной, консенсусной или содержащей ряд модификаций, заведомо не влияющих на связывание).</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения антитело включает аминокислотные последовательности, получаемые путем экспрессии в клетках млекопитающих кДНК, кодирующей тяжелую или легкую цепь, или, в качестве альтернативы, вариабельную область тяжелой и/или легкой цепи антитела ЛЬ-30, АЬ30К, АЬ-30Кт или АЬ-31. Термин "антитело" относится к интактному иммуноглобулину, например, в случае 1дС, тетрамерному иммуноглобулину, включающему две тяжелые цепи и две легкие цепи (например, химерные, гуманизированные или версии цепей человека, предпочтительно содержащие полноразмерные тяжелые и/или легкие цепи, необязательно содержащие мутации в пределах каркасных или константных областей, сохраняющие свойства связывания со склеростином).</p>
<p>"Выделенное" антитело относится к антителу, согласно определению данного термина здесь, отделенному от компонента его естественного окружения. Загрязняющие компоненты естественного окружения являются материалами, которые обычно мешают диагностическому или терапевтическому использованию антитела, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковоподобные или небелковоподобные растворенные вещества. В некоторых вариантах воплощения антитело очищают (1) до более чем 95 мас.% антитела и более предпочтительно до более чем 99 мас.%, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков Ν-концевой или внутренней аминокислотной последовательности, или (3) до гомогенности, определяемой при электрофорезе в ДСН-ПААГ при восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с помощью окрашивания Кумасси голубым или, предпочтительно, серебром. Выделенное природное антитело включает антитело ίη δίίπ в составе рекомбинантных клеток, при условии отсутствия по меньшей мере одного компонента природного окружения антитела. В то же время выделенное антитело обычно получают с использованием по меньшей мере одного этапа очистки.</p>
<p>"Моноклональное" антитело относится к антителу, полученному из популяции практически однородных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, идентичны за исключением возможных естественных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах, по сравнению с "поликлональным" антителом, которое относится к смешанной популяции антител с различными последовательностями, связывающих различные эпитопы. Фраза "гуманизированное антитело" относится к антителу, происходящему от последовательности антитела нечеловеческого происхождения, обычно моноклонального антитела грызунов, включающей изменения, придающие указанной последовательности большее сходство с антителом человека. В качестве альтернативы, гуманизированное антитело можно получить из химерного антитела. Фраза антитело "человека" относится к антителу, происходящему от последовательностей человека, например, путем скрининга библиотек генов человека антитела с использованием известных методик, например, фагового дисплея, или продуцированному с использованием трансгенных животных, не способных к продукции эндогенного иммуноглобулина и модифицированных локусами иммуноглобулинов человека.</p>
<p>"Иммуноглобулин С" или "нативное 1дС-антитело" является тетрамерным гликопротеином. В естественных иммуноглобулинах каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара содержит одну "легкую" (приблизительно 25 кДа) и одну "тяжелую" цепь (приблизительно 50-70 кДа). Ν-концевая часть каждой цепи включает "вариабельную" ("V") область размером приблизительно 100-110 или более аминокислот, главным образом ответственных за распознавание антигена. С-концевая часть каждой цепи ограничивает константную область, главным образом ответственную за эффекторную функцию. Иммуноглобулины могут относиться к различным классам в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей. Тяжелые цепи подразделяются на мю (μ), дельта (Δ), гамма (γ), альфа (α) и эпсилон (ε) и определяют изотип антитела 1дМ, Ι§Ό, 1дС, 1дА и 1дЕ соответственно. Некоторые из них могут далее подразделяться на подклассы или изотипы, например, 1§С1, 1§С2, 1§С3, 1§С4, 1дА1 и 1§А2. Различные изотипы обладают различными эффекторными функциями; например, изотипы 1дС1 и 1дС3 обладают антителозависимой клеточной цитотоксичностью (АЭСС). Легкие цепи человека подразделяются на легкие цепи каппа (к) и лямбда (λ). В составе легких и тяжелых цепей вариабельные и константные области соединены "Τ'-областью из приблизительно 12 или более аминокислот, причем тяжелая цепь также включает "Ό''-область из приблизительно 10 дополнительных аминокислот. См., главным образом, Рипйатеп1а1 1ттипо1оду, СЬ. 7 (Раи1, ей., 2пй ей. Кауеп Рге88, Ν.Υ. (1989)).</p>
<p>Термин "гипервариабельная" область относится к аминокислотным остаткам области, определяющей комплементарность, или СОК (т.е. остатки 24-34 (Ь1), 50-56 (Ь2) и 89-97 (Ь3) вариабельного домена легкой цепи и 31-35 (ΗΙ), 50-65 (Н2) и 95-102 (НЗ) вариабельного домена тяжелой цепи, как описано КаЬа1 е( а1., Зециепсез о£ РгоЮиъ о£ 1ттипо1ощса1 ЬИегеЯ. 51Ь Ей. РиЬЬс НеаЬЬ §егуюе, №Юопа1 1п51Ни1ез о£ НеаЬЬ, ВеШезйа, Мй. (1991)). "Каркасные" или РК-остатки являются остатками вариабельной области, не являющимися остатками гипервариабельной области.</p>
<p>Термин "вариант" при использовании в связи с антителами относится к полипептидной последовательности, содержащей по меньшей мере одну аминокислотную замену, делецию или инсерцию в вариабельной области или фрагменте, эквивалентном вариабельной области, при условии, что указанный ва- 22 029956</p>
<p>риант сохраняет желательное сродство связывания или биологическую активность. Кроме того, антитела, как описано здесь, могут содержать аминокислотные модификации в константной области с целью модификации эффекторной функции антитела, в том числе времени полужизни или выведения, АЭССи/или СЭС-активности. Такие модификации могут, например, улучшить фармакокинетику или повысить терапевтическую эффективность антитела. См. статью δΒίβΙάδ е! а1., 1. ΒίοΙ. СНспт. 276(9):6591-6604 (2001), полностью включенную в настоящий документ посредством ссылки. В случае 1дС1 модификации в константной области, в частности, в области шарнира или СН<sub>2</sub>-области, могут усиливать или ослаблять эффекторную функцию, в том числе АЭСС- и/или СЭС-активность. В других вариантах воплощения модифицируют константную область 1дС2 для снижения образования агрегатов антитело-антиген. В случае 1дС4 модификации в константной области, в частности в области шарнира, могут уменьшить образование полуантител.</p>
<p>Термин "модификация" при использовании в связи с антителами или полипептидами, описанными здесь, включает одно или более изменений аминокислотной последовательности (в том числе замены, инсерции или делеции), химические модификации, которые не мешают склеростин-связывающей активности; ковалентные модификации путем конъюгации с терапевтическими или диагностическими агентами; мечение (например, радионуклидами или различными ферментами), ковалентное присоединение полимеров, например, пегилирование (модификация полиэтиленгликолем) и инсерции или замены путем химического синтеза неприродных аминокислот. В некоторых вариантах воплощения модифицированные полипептиды (включая антитела) по настоящему изобретению сохраняют связывающие свойства немодифицированной молекулы по изобретению.</p>
<p>Термин "производное" при использовании в связи с антителами или полипептидами по изобретению относится к антителам или полипептидам, ковалентно модифицированным путем конъюгации с терапевтическими или диагностическими агентами, мечения (например, радионуклидами или различными ферментами), ковалентного присоединения полимеров, например, пегилирования (модификации полиэтиленгликолем) и инсерции или замены путем химического синтеза неприродных аминокислот. В некоторых вариантах воплощения производные по изобретению сохраняют связывающие свойства немодифицированных молекул по изобретению. Белки и небелковые агенты можно конъюгировать с антителами с помощью способов, известных в данной области техники. Способы конъюгирования включают прямое связывание, связывание через ковалентно присоединенные линкеры и члены специфических пар связывания (например, авидин-биотин). Такие способы включают, например, способ, описанный СгеепйеМ е! а1., Сапсег КекеагсВ 50, 6600-6607 (1990) для конъюгирования доксорубицина, и способы, описанные Агпоп е! а1., Λάν. Εχρ. Меб. Βίο1. 303, 79-90 (1991) и Кт8е1е\'а е! а1., Μο1. Βίο1. (υδδΚ) 25, 508-514 (1991) для конъюгирования соединений платины.</p>
<p>II. Получение кристаллов, составов и композиций кристаллов</p>
<p>Кристаллы полипептидов выращивают путем контролируемой кристаллизации полипептидов из водных растворов или водных растворов, содержащих органические растворители или добавки. Параметры раствора, которые можно контролировать, включают, например, скорость испарения растворителя, органические растворители или добавки, наличие соответствующих совместно растворенных веществ и буферов, рН и температуру. Всесторонний обзор различных факторов, влияющих на кристаллизацию белков, опубликован МсРНегюп (1985, Ме11ю08 Εηζутο1 114: 112-120). Кроме того, МсРНе^и апб Сйй1апб (1988, I Сгу81а1 Сго\\11т 90: 51-59) составили полные списки полипептидов, кристаллизованных на тот момент времени, а также условия, при которых они кристаллизовались. Сборник кристаллов и рецептов кристаллизации, а также хранилище координат раскрытых белковых структур, находится в ведении базы данных белковых структур Брукхейвенской национальной лаборатории (\ν\ν\ν.π:8Β.οΓ§/ράΒ/; Вегп81еш е! а1., 1977, I Μο1 Βίο1 112: 535-542). В то же время следует отметить, что условия, описанные в большинстве вышеприведенных ссылок, оптимизированы для получения, в большинстве случаев, нескольких крупных кристаллов дифракционного качества. Соответственно специалистам в данной области должно быть понятно, что указанные условия отличаются от белка к белку и не обеспечивают процесса массового производства кристаллов любого заданного полипептида с высоким выходом.</p>
<p>В общем случае кристаллы получают путем объединения полипептида (например, антитела), подлежащего кристаллизации, с соответствующим водным растворителем или водным растворителем, содержащим соответствующие агенты для кристаллизации, например, соли или органические растворители или добавки (в совокупности "реагент для кристаллизации"). Растворитель объединяют с полипептидом и могут подвергать перемешиванию при температуре, согласно экспериментальным измерениям, подходящей для индукции кристаллизации и приемлемой для поддержания активности и стабильности полипептида. Способы кристаллизации в лабораторных масштабах включают диффузию паров в висячей капле, диффузию паров в сидячей капле, микродиализ, микросерийную кристаллизацию, кристаллизацию под маслом, в геле и способ сэндвич-капли. Растворитель необязательно может включать добавки для совместной кристаллизации, например, осадители, жирные кислоты, восстанавливающие агенты, глицерин, сульфобетаин, поверхностно-активные вещества, полиолы, двухвалентные катионы, кофакторы или хаотропы, а также буферные компоненты для контроля рН.</p>
<p>"Добавки для совместной кристаллизации" включают соединения, способствующие кристаллизации</p>
<p>- 23 029956</p>
<p>полипептида и/или соединений, стабилизирующих белок и защищающих его от денатурации. Примеры совместно растворенных веществ включают ацетат аммония, хлорид аммония, фторид аммония, формиат аммония, нитрат аммония, фосфат аммония, сульфат аммония, хлорид кадмия, сульфат кадмия, ацетат кальция, хлорид кальция, хлорид цезия, хлорид кобальта, СНз(СН<sub>2</sub>)<sub>15</sub>М(СНз)з+Вг<sup>-</sup> (ЦТАБ), цитрат диаммония, гидрофосфат аммония, фосфат диаммония, тартрат аммония, фосфат дикалия, фосфат динатрия, тартрат натрия, ОЬ-яблочная кислота, хлорид железа Ь-пролин, ацетат лития, хлорид лития, нитрат лития, сульфат лития, ацетат магния, хлорид магния, формиат магния, нитрат магния, сульфат магния, хлорид никеля, ацетат калия, бромид калия, хлорид калия, цитрат калия, фторид калия, формиат калия, нитрат калия, фосфат калия, тартрат натрия-калия, сульфат калия, тиоцианат калия, ацетат натрия, бромид натрия, хлорид натрия, цитрат натрия, фторид натрия, формиат натрия, малонат натрия, нитрат натрия, фосфат натрия, сульфат натрия, тиоцианат натрия, янтарную кислоту, таксимат, цитрат аммония, цитрат лития, Ν-оксид триметиламина, цитрат калия, цитрат натрия, ацетат цинка, сульфат цинка и другие соединения, обеспечивающие получение совместно растворенных веществ. "Буферы для кристаллизации" включают соединения, поддерживающие рН раствора в желательном диапазоне, способствуя кристаллизации полипептида. Примеры включают АСЕ§ Щ-(2-ацетамидо)-2-аминоэтансульфоновую кислоту), ВЕ§ ЩХ-бис(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновую кислоту), бицин (Ν,Ν-бисС-гидроксиэтил)глицин), бис-трис(2,2-бис-(гидроксиметил)-2,2',2''-нитрилтриэтанол), борную кислоту, САР8 (3[циклогексиламино]-1-пропансульфоновую кислоту), ЕРР§ (НЕРР8, 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1пропансульфоновую кислоту), О1у-О1у ((^Ж<sub>2</sub>СН<sub>2</sub>СО:ЖСН<sub>2</sub>СООН, глицил-глицин), НЕРЕ8 (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновую кислоту), имидазол, МЕ§ (2-морфолинэтансульфоновую кислоту), МОР8 (3-Щ-морфолин)пропансульфоновую кислоту), Р1РЕ8 (пиперазин-1,4-бис (2-этансульфоновую кислоту)), ацетат натрия, бикарбонат натрия, одноосновный фосфат натрия (дигидрофосфат натрия), ТАР§ Щ-[трис-(гидроксиметил)метил]-3-аминопропансульфоновую кислоту), ТАР8О Щ-[трис(гидроксиметил)метил]-3-амино-2-гидроксипропансульфоновую кислоту), ТЕ§ Щ-[трис(гидроксиметил)метил]2-аминоэтансульфоновую кислоту), трицин Щ-[трис(гидроксиметил)метил]глицин), Трис-НС1, ΤΒΙΖΜΛ (2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол), а также другие соединения, поддерживающие раствор при или вблизи указанного рН.</p>
<p>Выбор осадителей является одним из факторов, влияющих на кристаллизацию. Например, можно использовать продукты ПЭГ, например, с молекулярной массой от 600 до 20000 кДа. ПЭГ-3350 является длинным полимерным осадителем или обезвоживающим агентом, действующим за счет эффекта исключения объема. Лиотропные соли, например, сульфат аммония, способствуют процессам осаждения, как и короткоцепочечные жирные кислоты, например, каприловая кислота. Полиионные соединения также можно использовать в качестве осадителей.</p>
<p>Антитела для применения в составах для подкожных инъекций, например, предпочтительно осаждают при физиологическом диапазоне рН и в реагенте для кристаллизации, обеспечивающем изотоническое осмотическое давление.</p>
<p>Необходимость добавок, растворенных веществ, буферов и т.д. для облегчения кристаллизации и их концентрации определяют экспериментально. Некоторые примеры подходящих условий кристаллизации для полипептида описаны в примере 1 ниже.</p>
<p>АЬ-30, в частности, легко кристаллизуется при различных условиях. Кристаллы АЬ-30 с различной морфологией можно вырастить при масштабируемых условиях, при которых антитело в жидкой композиции добавляют к объему известного реагента для кристаллизации и хранят в герметичном контейнере. Кристаллы АЬ-30 можно вырастить при этих условиях в течение менее 24 ч, при комнатной температуре или температурах холодильника (4°С) и, как было показано, данные кристаллы обеспечивают медленное высвобождение и высокий выход.</p>
<p>В промышленном масштабе контролируемое осаждение, приводящее к кристаллизации, наилучшим образом осуществляют путем простого объединения полипептида, осадителя, совместно растворенных веществ и, необязательно, буферов в ходе периодического процесса. Как еще один вариант, полипептиды можно кристаллизовать с использованием осадков полипептидов в качестве исходного материала ("засев"). В этом случае к раствору для кристаллизации добавляют осадки полипептидов и инкубируют до образования кристаллов. Кроме того, можно применять альтернативные лабораторные способы кристаллизации, например, диализ или диффузию паров. Обзоры литературы по кристаллизации МсРНсгюп. 8ирга и ОПШаий, 8ирта включают полный перечень подходящих условий. Иногда, в тех случаях, когда кристаллизованный полипептид должен быть перекрестно сшит, ввиду несовместимости между желательным сшивающим агентом и средой для кристаллизации может потребоваться обмен кристаллов в более подходящую систему растворителей.</p>
<p>Согласно некоторым вариантам воплощения полипептидные кристаллы, составы и композиции кристаллов получают следующим способом: сначала кристаллизуют полипептид. Затем непосредственно в маточный раствор добавляют вспомогательные вещества или ингредиенты, как описано здесь. В качестве альтернативы, кристаллы суспендируют в растворе вспомогательного вещества или других ингредиентов согласно справочнику после удаления маточного раствора, на срок как минимум от 1 ч и как максимум до 24 ч. Концентрация вспомогательного вещества обычно составляет от приблизительно</p>
<p>- 24 029956</p>
<p>0,01% до 30% мас./мас, что соответствует концентрации кристаллов полипептида от 99,99% до 70% мас./мас. соответственно. В одном варианте воплощения концентрация вспомогательного вещества составляет от приблизительно 0,1% до 10%, что соответствует концентрации кристалла от 99,9 до 90% мас./мас. соответственно. Маточный раствор можно удалить из суспензии кристаллов путем фильтрации, замены буфера или центрифугирования. Затем кристаллы необязательно промывают 50%-100% растворами одного или нескольких органических растворителей и добавок, например, этанола, метанола, изопропанола или этилацетата при комнатной температуре или при температуре от -20°С до 25°С. Кристаллы высушивают путем пропускания потока азота, воздуха или инертного газа над кристаллами. В качестве альтернативы кристаллы высушивают на воздухе, или лиофилизацией, или вакуумной сушкой. Высушивание проводят в течение от, как минимум, 1 ч до, как максимум, 72 ч после промывки, пока содержание влаги в конечном продукте не станет менее 10 мас.%, наиболее предпочтительно - менее 5%. Наконец, при необходимости можно выполнить измельчение кристаллов. Высушивание полипептидных кристаллов является удалением воды, органического растворителя или добавки или жидкого полимера за счет, в том числе, высушивания в Ν<sub>2</sub>, воздухе или инертном газе; высушивания в вакуумной печи; лиофилизации; промывки в летучем органическом растворителе или добавке с последующим выпариванием растворителя; или выпаривания в вытяжном шкафу. Обычно высушивание достигается, когда кристаллы становятся сыпучим порошком. Высушивание можно осуществлять пропусканием потока газа над влажными кристаллами. Указанный газ может быть выбран из группы, состоящей из азота, аргона, гелия, диоксида углерода, воздуха или их комбинации. Кристаллы полипептидов по изобретению можно дополнительно обработать с целью достижения желательного распределения частиц по размеру путем тонкого измельчения в соответствующей мельнице, например, в струйной мельнице; компоненты состава на основе частиц или порошка можно смешать перед тонким измельчением или после него. Достигаемый диаметр частиц может находиться в диапазоне от 0,1 до 100 мкм, или в диапазоне от 0,2 до 10 мкм, или в диапазоне от 10 до 50 мкм, или в диапазоне от 0,5 до 2 мкм. В одном из вариантов воплощения частицы, образованные из кристаллов полипептида, находятся в диапазоне от 0,5 до 1 мкм, что является подходящим диапазоном, например, для ингаляции.</p>
<p>Согласно некоторым вариантам воплощения, при получении кристаллов белка, составов или композиций на основе белковых кристаллов в процессе кристаллизации не добавляют энхансеры (например, поверхностно-активные вещества).</p>
<p>Вспомогательные вещества или ингредиенты добавляют в маточный раствор после кристаллизации в концентрации от приблизительно 1% до 10% мас./мас., в качестве альтернативы в концентрации от приблизительно 0,1% до 25% мас./мас., в качестве альтернативы в концентрации от приблизительно 0,1% до 50% мас./мас. Эти концентрации соответствуют концентрации кристаллов 99%-90% мас./мас., 99,9%-75% мас./мас. и 99,9%-50% мас./мас. соответственно. Вспомогательное вещество или ингредиент инкубируют с кристаллами в маточном растворе в течение 0,1-3 ч, в качестве альтернативы инкубирование проводят в течение 0,1-12 ч, в качестве альтернативы инкубирование проводят в течение 0,1-24 ч.</p>
<p>В некоторых или любых вариантах воплощения ингредиент или вспомогательное вещество растворяют в растворе, отличающемся от маточного раствора, а белковые кристаллы удаляют из маточного раствора и суспендируют в растворе вспомогательного вещества или ингредиента. Концентрации и времена инкубирования для ингредиента или вспомогательного вещества совпадают с вышеописанными.</p>
<p>Кристаллы полипептидов</p>
<p>Как используется здесь, "кристалл" или "кристаллический" относятся к одной из форм твердого состояния вещества, которая отличается от второй формы - аморфного твердого состояния. Кристаллы проявляют характерные функции, включая структуру решетки, характерные формы и оптические свойства, например, показатель преломления и двойного лучепреломления. Кристалл состоит из атомов, расположенных по шаблону, периодически повторяющемуся в трех измерениях (С. 8. Ваггей, 81гис1иге о£ Ме1а1з, 2"'<sup>1</sup> еб., МсСга\\-НП1. №\ν Уогк, 1952, р.1). В противоположность этому, аморфный материал является некристаллической твердой формой материи, иногда называемой аморфным осадком. Такие осадки не имеют структуры молекулярной решетки, характерной для кристаллического твердого состояния и не проявляют двойного лучепреломления или других спектроскопических характеристик, типичных для кристаллических форм вещества.</p>
<p>Кристаллы полипептидов являются полипептидными молекулами, упорядоченными в составе кристаллической решетки. Кристаллы полипептидов содержат шаблонную структуру на основе специфических полипептид-полипептидных взаимодействий, периодически повторяющуюся в трех измерениях. Кристаллы полипептидов по настоящему изобретению следует отличать от аморфных твердых форм или осадков полипептидов, например, полученных путем лиофилизации раствора полипептида.</p>
<p>В кристаллах полипептидов полипептидные молекулы образуют асимметричные единицы, упорядоченные по отношению друг к другу с образованием симметричных единиц. Геометрическая структура симметричных единиц кристаллов полипептидов может быть, например, кубической, гексагональной, моноклинной, ромбической, тетрагональной, триклинной или тригональной. Общая структура целостных кристаллов может образовывать, например, форму бипирамид, кубов, игл, пластин, призм, ромбоидов, стержней или сфер, или их комбинацию. Другие наблюдаемые формы включают форму блока, НЛО,</p>
<p>- 25 029956</p>
<p>футбольного мяча, листа, зерна пшеницы, майки, пера, соломинки, хризантемы, сферическую форму или их смеси. В некоторых вариантах воплощения кристаллы образуют кластеры. Кристаллы, относящиеся к "кубическому" структурному классу, в более конкретном случае могут обладать октадекаэдрической или додекаэдрической формой. Диаметр кристаллов определяется как диаметр Мартина. Его измеряют как длину линии, параллельной шкале окуляра, разделяющей случайно ориентированные кристаллы на две равные проецированные области. Кристаллы такой формы, как иглы или стержни, также имеют максимальный размер, называемый в данном документе длиной кристалла. Характеристики кристаллов также определяют с помощью рентгеновской дифракции.</p>
<p>Тестирование свойств кристаллических полипептидов</p>
<p>После образования кристаллов полипептидов их можно подвергнуть различным анализам с целью подтверждения содержания в них полипептида и дальнейшего изучения их физической структуры. Например, при необходимости, можно удалить отдельные кристаллы из раствора для кристаллизации и промыть их водными или органическими растворителями или добавками, а затем высушить (например, путем сушки на воздухе, путем пропускания потока инертного газа над кристаллами, путем лиофилизации либо в вакууме). Кристаллы можно выделить, удалить из капли для роста кристаллов, а затем установить для рентгеновской дифракции.</p>
<p>Кристаллы также можно охарактеризовать с помощью различных средств, описанных в литературе. Например, описание процедур получения кристаллов белка и состава и аналитических инструментов для определения характеристик кристаллов и их белкового компонента см. в статье Ваки с1 а1., Ехрей Ορίη. ΒίοΙ. ТЕега. 4, 301-317 (2004), полностью включенной в настоящий документ посредством ссылки. Хотя для идентификации кристаллического материала обычно используют порошковую рентгеновскую дифракцию, она требует очень крупных и совершенных кристаллов белка и обычно не применяется к микрокристаллам белка, обычно используемым в кристаллических составах. Для оценки характеристик кристаллов можно применять электронную дифракцию и ядерный магнитный резонанс твердого тела (ттЯМР). Размер, форму и морфологию (например, морфологию поверхности) кристаллов можно оценить, например, с помощью световой микроскопии, трансмиссионой электронной микроскопии, сканирующей электронной микроскопии, атомно-силовой микроскопии и/или рассеяния света (например, фотон-корреляционной спектроскопии или ОЬ§, малоуглового лазерного светорассеяния или ЬААЬ§). Кроме того, можно охарактеризовать общую площадь поверхности и пористость кристаллов. Массспектрометрия, ИК-микроспектроскопия нарушенного полного внутреннего отражения с Фурьепреобразованием (РТ1К) и/или дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) может предоставить информацию о первичной и вторичной структуре белков.</p>
<p>В качестве другого примера, кристаллы полипептидов можно удалить из раствора для кристаллизации и промыть или прополаскать, либо можно удалить большую часть раствора для кристаллизации от кристаллов и заменить другим раствором. Таким образом, конкретную соль, использованную в процедуре кристаллизации, можно заменить в кристаллической решетке другой солью. В одном варианте воплощения настоящего изобретения кристаллизованные антитела АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 отделяют от буфера для кристаллизации и помещают в раствор, содержащий соль натрия, калия или магния (например, ацетат натрия, хлорид натрия, цитрат натрия, фосфат натрия, сульфат натрия, хлорид калия, цитрат калия или сульфат магния). При рентгеновской дифракции раствор для замены может содержать тяжелые атомы, полезные для определения атомных координат кристаллизованного полипептида. В качестве дальнейшего варианта воплощения антитело АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 можно совместно кристаллизовать со склеростином для определения подробной структуры взаимодействия АЬ-30, АЬ30К, АЬ-30Кт или АЬ-31-склеростин.</p>
<p>В дополнительном примере кристаллы полипептида можно удалить из раствора для кристаллизации и солюбилизировать в соответствующем буфере для дальнейшего тестирования, например, δΌδсодержащем буфере для анализа кристаллизованного полипептида с помощью гель-электрофореза. Способы анализа белков с помощью гель-электрофореза хорошо известны и включают окрашивание геля серебром или красителем Кумасси голубой и сравнение электрофоретической миграции кристаллизованного полипептида с миграцией полипептидных маркеров с известной молекулярной массой. В еще одном способе полипептид визуализируют в геле путем использования меченого антитела, специфически связывающегося с указанным полипептидом. Кристаллизованные полипептиды также можно солюбилизировать в буферах, подходящих для секвенирования аминокислотных последовательностей путем расщепления по Эдману, для масс-спектрометрии, для других спектрографических методик исследования на основе рассеяния, преломления, дифракции или поглощения или для мечения полипептида путем присоединения молекулы-метки к полипептиду.</p>
<p>III. Составы для терапевтического введения</p>
<p>Как используется здесь, термин "композиция" означает смесь, содержащую по меньшей мере два компонента. В частности, здесь описаны композиции, включающие кристаллическое антитело против склеростина, и композиции, полученные с использованием кристаллического антитела против склеростина. В некоторых вариантах воплощения композиция или состав включает или получена с использованием кристаллического антитела против склеростина, пригодного для инъекций и/или введения в орга- 26 029956</p>
<p>низм пациента, нуждающегося в этом. Композиции для введения пациентам в фармацевтических целях практически стерильны и не содержат агентов, являющихся чрезмерно токсичными или инфекционными для реципиента.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения кристаллические антитела против склеростина, например, кристаллическое антитело АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 вводят в виде физиологически приемлемой композиции (также называемой здесь фармацевтической композицией или фармацевтическим составом), включающей кристаллическое антитело против склеростина в составе с одним или более из следующих веществ: физиологически приемлемых носителей, вспомогательных веществ или разбавителей. Такие носители, вспомогательные вещества и разбавители являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях. Обычно изготовление таких композиций подразумевает объединение кристаллического антитела против склеростина с одним или более из следующих веществ: буферами, антиоксидантами, например, аскорбиновой кислотой, низкомолекулярными полипептидами (например, содержащими менее 10 аминокислот), белками, аминокислотами, углеводами, например, глюкозой, сахарозой или декстринами, хелатирующими агентами, например, ЭДТА, глутатионом и другими стабилизаторами и вспомогательными веществами. В жидких составах типичными подходящими разбавителями являются нейтральный забуференный физиологический раствор или физиологический раствор, смешанный с неспецифическим сывороточным альбумином. В соответствии с промышленными стандартами, также можно добавлять консерванты, например, бензиловый спирт. Дополнительные примеры компонентов, которые можно применять в фармацевтических составах, представлены в РепипдЮп! РЬагтасеиПса1 8с1еисе5, 16'<sup>1</sup>' Εά., Маск РиЬйзЫид Сотрапу, ЕаЧоп. Ра., 1980, и в НаибЬоок оГ Ркагтасеийса1 ΕχαρίепК совместно опубликованном Американской фармацевтической ассоциацией и фармацевтическим обществом Великобритании.</p>
<p>В одном варианте воплощения предполагается, что состав, описанный здесь, получают в виде крупной партии и, таким образом, концентрация компонентов фармацевтической композиции скорректирована таким образом, что она превышает концентрацию, необходимую для введения, и указанную композицию надлежащим образом разводят перед введением.</p>
<p>Кристаллы антител, описанные здесь, можно получить в виде твердого кристаллического или порошкообразного состава в формах, пригодных для хранения и использования, и в формах, пригодных для ингаляции или пульмонарного введения, например, в виде порошков для изготовления аэрозольных составов. В дальнейшем варианте воплощения кристаллы антител можно получить в виде жидкого раствора таких кристаллов или суспензии таких кристаллов. В еще одном варианте воплощения кристаллы антител используют для получения жидкого состава, например, водного состава для терапевтического введения.</p>
<p>A. Твердые составы кристаллов антител</p>
<p>Твердые составы кристаллов антител включают кристаллы, практически отделенные от жидкого раствора или высушенные и присутствующие в виде свободных кристаллов или частиц, например, в виде порошка. В данном контексте термин "порошок" относится к скоплению практически сухих частиц, т.е. содержащих менее приблизительно 10 мас.%, или менее 6 мас.%, или менее 4 мас.% влаги. Кристаллы или порошки полипептидов можно при необходимости объединять с носителями или ПАВ. Подходящие носители включают 1) углеводы, например, моносахариды, например, фруктозу, галактозу, глюкозу и сорбозу; 2) дисахариды, например, лактозу и трегалозу; 3) полисахариды, например, рафинозу, мальтодекстрины и декстраны, 4) альдиты, например, маннит и ксилит; 5) неорганические соли, например, хлорид натрия; и 6) органические соли, например, цитрат натрия и аскорбат натрия, но не ограничиваются ими. В некоторых вариантах воплощения носитель выбран из группы, состоящей из трегалозы, рафинозы, маннита, сорбита, ксилита, инозита, сахарозы, хлорида натрия и цитрата натрия. ПАВ можно выбрать из группы, состоящей из солей жирных кислот, желчных солей или фосфолипидов. Соли жирных кислот включают соли С<sub>10-14</sub> жирных кислот, например, капринат натрия, лаурат натрия и миристат натрия. Желчные соли включают урсодезоксихолат, таурохолат, гликохолат и тауродигидрофузидат. В одном варианте воплощения ПАВ является таурохолатом, например, таурохолатом натрия. Фосфолипиды, которые можно использовать в качестве ПАВ, включают лизофосфатидилхолин. Молярное соотношение кристаллического полипептида и ПАВ в порошкообразном составе по настоящему изобретению составляет, например, от 9:1 до 1:9, или от 5:1 до 1:5, или от 3:1 до 1:3.</p>
<p>B. Кристаллы в растворе или суспензиях</p>
<p>Кроме того, здесь описан способ для получения кристаллов полипептидов, подходящих для хранения в суспензиях, включающий замену буфера для кристаллизации (маточного раствора) на неводный растворитель. В еще одном варианте воплощения можно перевести кристаллическую суспензию в твердое состояние за счет удаления первого растворителя и промывки оставшегося кристаллического вещества вторым органическим растворителем или добавкой для удаления воды с последующим выпариванием неводного растворителя. Неводные суспензии кристаллических терапевтических белков особенно полезны для доставки путем подкожного введения.</p>
<p>В одном из таких вариантов воплощения кристаллы полипептида, описанные здесь, объединяют с жидкими органическими добавками с целью стабилизации кристаллов полипептида. Такую смесь можно</p>
<p>- 27 029956</p>
<p>охарактеризовать как водно-органическую смесь, включающую п% органической добавки, где η равно от 1 до 99, и т% водного раствора, где т равно 100-п. Примеры органических добавок включают фенольные соединения, например, т-крезол или фенол или их смесь, а также ацетон, метиловый спирт, метилизобутилкетон, хлороформ, 1-пропанол, изопропанол, 2-пропанол, ацетонитрил, 1-бутанол, 2-бутанол, этиловый спирт, циклогексан, диоксан, этилацетат, диметилформамид, дихлорэтан, гексан, изооктан, метиленхлорид, трет-бутиловый спирт, толуол, тетрахлорметан или их комбинации.</p>
<p>С. Жидкие составы</p>
<p>Другой вариант воплощения, приведенный здесь, представляет собой водный состав, обеспечивающий стабильное долгосрочное хранение фармацевтической композиции, в которой кристаллическое антитело против склеростина является активным ингредиентом, использованным при получении фармацевтической композиции. Указанный состав является полезным, в частности, ввиду большего удобства при использовании для пациента, поскольку указанный состав не требует выполнения дополнительных этапов, например, регидратации. Как используется здесь, термин "раствор" или "жидкая композиция" является жидким препаратом, содержащим одно или более химических веществ, растворенных в подходящем растворителе или смеси взаимно смешиваемых растворителей.</p>
<p>Восстановление является растворением кристаллов полипептидов или кристаллических составов или композиций в подходящем буфере или фармацевтическом составе.</p>
<p>Ресуспендирование относится к суспендированию кристаллов полипептидов в соответствующем буфере или фармацевтическом составе. В некоторых вариантах воплощения.</p>
<p>Ό. Компоненты фармацевтических составов</p>
<p>Настоящую фармацевтическую композицию получают путем объединения кристаллического антитела против склеростина, как описано выше, с одним или более из следующих типов ингредиентов или вспомогательных веществ, перечисленных в нижеследующих абзацах, многие или все из которых доступны у коммерческих поставщиков. Специалисту в данной области техники понятно, что объединение различных компонентов, подлежащих включению в композицию, можно выполнить в любом подходящем порядке, а именно, буфер можно добавить первым, в середине или последним, а модификатор тоничности также можно добавить первым, в середине или последним. Кроме того, специалист в данной области техники должен понимать, что некоторые из этих веществ могут быть несовместимы в определенных комбинациях, и соответственно должны замещаться другими химическими веществами, которые имеют аналогичные свойства, но совместимы в соответствующей смеси. В данной области техники существует информация относительно применимости различных комбинаций вспомогательных веществ и других компонентов или материалов, присутствующих в, например, контейнерах для хранения фармацевтической композиции и/или устройствах для терапевтического введения (см., например, Акегк, 2002, ί РЬагт Зс 91: 2283-2300).</p>
<p>Неограничивающие примеры дополнительных агентов, которые можно включать в составы, описанные здесь, включают подкисляющие вещества (включая уксусную кислоту, ледяную уксусную кислоту, лимонную кислоту, фумаровую кислоту, соляную кислоту, разбавленную соляную кислоту, яблочную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту, разбавленную фосфорную кислоту, серную кислоту, винную кислоту и другие подходящие кислоты, но не ограничиваясь ими); активные ингредиенты (включая дополнительные активные ингредиенты для уменьшения дискомфорта в месте инъекции, и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, например, трометамин, в соответствующей дозировке, но не ограничиваясь ими); аэрозольные пропелленты (включая бутан, дихлордифторметан, дихлортетрафторэтан, изобутан, пропан и трихлормонофторметан, но не ограничиваясь ими); спиртовые денатурирующие агенты (включая бензоат денатония, метилизобутилкетон, октацетат сахарозы, но не ограничиваясь ими); подщелачивающие агенты (включая концентрированный раствор аммиака, карбонат аммония, диэтаноламин, диизопропаноламин, гидроксид калия, бикарбонат натрия, борат натрия, карбонат натрия, гидроксид натрия, троламин, но не ограничиваясь ими); ингибиторы комкования (включая силикат кальция, силикат магния, коллоидный диоксид кремния и тальк, но не ограничиваясь ими), пеногасители (включая диметикон и симетикон, но не ограничиваясь ими), хелатирующие агенты (также называемые разделяющими агентами) (включая эдетат динатрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и ее соли и эдетовую кислоту, но не ограничиваясь этим); покровные вещества (включая натрийкарбоксиметилцеллюлозу, ацетат целлюлозы, ацетат-фталат целлюлозы, этилцеллюлозу, желатин, фармацевтическую глазурь, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, сополимер метакриловой кислоты, метилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, фталат поливинилацетата, шеллак, сахарозу, диоксид титана, карнаубский воск, микрокристаллический воск и зеин, но не ограничиваясь ими); красители (включая карамельный краситель, эритрозин (красный краситель № 3 для химической и пищевой промышленности), красный краситель № 40 для химической и пищевой промышленности, желтый краситель № 5 для химической и пищевой промышленности; желтый краситель № 6 для химической и пищевой промышленности, синий краситель № 1 для химической и пищевой промышленности; красный, желтый, черный, синий красители или их смеси и оксид железа, но не ограничиваясь ими), комплексообразующие агенты (включая этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА) и ее соли, эдетовую кислоту, этаноламид гентизиновой кислоты и сульфат оксихинолина, но не</p>
<p>- 28 029956</p>
<p>ограничиваясь ими); влагопоглотители (включая хлорид кальция, сульфат кальция и диоксид кремния, но не ограничиваясь ими), средства для фильтрации (включая порошкообразную целлюлозу и очищенный диатомит, но не ограничиваясь ими); ароматизаторы и отдушки (включая анетол, анисовое масло, бензальдегид, коричное масло, какао, этилванилин, ментол, метилсалицилат, глутамат натрия, масло цветков апельсина, апельсиновое масло, перечную мяту, масло перечной мяты, спиртовую настойку перечной мяты, розовое масло, концентрированную розовую воду, тимол, настойку толуанского бальзама, ваниль, настойку ванили и ванилин, но не ограничиваясь ими); увлажнители (включая глицерин, гексиленгликоль, пропиленгликоль и сорбит, но не ограничиваясь ими); мазевые основы (включая ланолин, безводный ланолин, гидрофильную мазь, белую мазь, желтую мазь, полиэтиленгликолевую мазь, вазелин, гидрофильный вазелин, белый вазелин, мазь на основе розовой воды и сквален, но не ограничиваясь ими), пластификаторы (включая касторовое масло, диацетилированные моноглицериды, диэтилфталат, глицерин, моно- и диацетилированные моноглицериды, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, триацетин и триэтилцитрат, но не ограничиваясь ими), полимерные мембраны (включая ацетат целлюлозы, но не ограничиваясь им); растворители (включая ацетон, спирт, разбавленный спирт, амиленгидрат, бензилбензоат, бутиловый спирт, тетрахлорметан, хлороформ, кукурузное масло, хлопковое масло, этилацетат, глицерин, гексиленгликоль, изопропиловый спирт, метиловый спирт, метиленхлорид, метилизобутилкетон, минеральное масло, арахисовое масло, полиэтиленгликоль, пропиленкарбонат, пропиленгликоль, кунжутное масло, воду для инъекций, стерильную воду для инъекций, стерильную воду для инфузий и очищенную воду, но не ограничиваясь ими); сорбенты (включая порошкообразную целлюлозу, древесный уголь, очищенный диатомит; и сорбенты диоксида углерода: бариевую известь и натронную известь, но не ограничиваясь ими); загустители (включая гидрированное касторовое масло, цетостеариловый спирт, цетиловый спирт, воск на основе цетиловых эфиров, твердый жир, парафин, полиэтиленовый наполнитель, стеариловый спирт, эмульгирующий воск, белый воск и желтый воск, но не ограничиваясь ими); основы для суппозиториев (включая масло какао, твердый жир и полиэтиленгликоль, но не ограничиваясь ими); суспендирующие и/или повышающие вязкость агенты (включая гуммиарабик, агар, альгиновую кислоту, моностеарат алюминия, бентонит, очищенный бентонит, магматический бентонит, карбомер 934р, кальций-карбоксиметилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу 12, каррагинан, микрокристаллическую целлюлозу и натрий- карбоксиметилцеллюлозу, декстрин, желатин, гуаровую камедь, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, алюмосиликат магния, метилцеллюлозу, пектин, полиэтиленоксид, поливиниловый спирт, повидон, альгинат пропиленгликоля, диоксид кремния, коллоидный диоксид кремния, альгинат натрия, трагакант и ксантановую камедь, но не ограничиваясь ими); подсластители (включая аспартам, декстраны, декстрозу, декстрозный наполнитель, фруктозу, маннит, сахарин, сахарин кальция, сахарин натрия, сорбит, раствор сорбита, сахарозу, сжимаемый сахар, кондитерский сахар и сироп, но не ограничиваясь ими); связующие для таблеток (включая гуммиарабик, альгиновую кислоту, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, декстрин, этилцеллюлозу, желатин, жидкую глюкозу, гуаровую камедь, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, полиэтиленоксид, повидон, желатинизированный крахмал и сироп, но не ограничиваясь ими); разбавители для таблеток и/или капсул (включая карбонат кальция, двухосновный фосфат кальция, трехосновный фосфат кальция, сульфат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, декстраны, декстрин, декстрозный наполнитель, фруктозу, каолин, лактозу, маннит, сорбит, крахмал, желатинизированный крахмал, сахарозу, сжимаемый сахар и кондитерский сахар, но не ограничиваясь ими); разрыхлители для таблеток (включая альгиновую кислоту, микрокристаллическую целлюлозу, натрийкроскармеллозу, кросповидон, полакрилин калия, натрий-крахмалгликолят, крахмал и желатинированный крахмал, но не ограничиваясь ими), скользящие для таблеток и/или капсул (включая стеарат кальция, глицерилбегенат, стеарат магния, легкое минеральное масло, полиэтиленгликоль, стеарилфумарат натрия, стеариновую кислоту, очищенную стеариновую кислоту, тальк, гидрированное растительное масло и стеарат цинка, но не ограничиваясь ими); среды-носители (включают ароматизированные и/или подслащенные (ароматический эликсир, составной эликсир бензальдегида, изоспиртовой эликсир, мятную воду, раствор сорбита, сироп, сироп толуанского бальзама); маслянистые (миндальное масло, кукурузное масло, хлопковое масло, этилолеат, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло, легкое минеральное масло, миристиловый спирт, октилдодеканол, оливковое масло, арахисовое масло, персиковое масло, кунжутное масло, соевое масло, сквалан); твердые носители, например, сахарные шарики; а также стерильные среды-носители (бактериостатическую воду для инъекций, бактериостатический хлорид натрия для инъекций), но не ограничиваются ими); и водоотталкивающие агенты (включая циклометикон, диметикон и симетикон, но не ограничиваясь ими).</p>
<p>В составы, описанные здесь, также можно включать ингибиторы агрегации, снижающие тенденцию полипептида образовывать неподходящие или нежелательные тройные или четверные комплексы. Подходящие ингибиторы агрегации включают аминокислоты Ь-аргинин и/или Ь-цистеин, которые могут действовать, снижая агрегацию полипептидов, содержащих Рс-домен, в течение длительного периода, например, двух лет и более. Концентрация ингибитора агрегации в составе может составлять от приблизительно 1 мМ до 1 М, или от приблизительно 10 мМ до приблизительно 200 мМ, или от приблизительно</p>
<p>- 29 029956</p>
<p>10 мМ до приблизительно 100 мМ, или от приблизительно 15 мМ до приблизительно 75 мМ, или от приблизительно 5 мМ до приблизительно 10 мМ, или от приблизительно 5 мМ до приблизительно 15 мМ, или от приблизительно 10 мМ до приблизительно 20 мМ, или от приблизительно 150 мМ до приблизительно 250 мМ, или приблизительно 25 мМ.</p>
<p>В составы, описанные здесь, также можно включать антиоксиданты. Антиоксиданты, применение которых рассматривается при изготовлении композиций, включают аминокислоты, например, глицин и лизин, хелатирующие агенты, например, ЭДТА и ДТПА, и вещества, связывающие свободные радикалы, например, сорбит и маннит. Дополнительные антиоксиданты включают аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гипофосфористую кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, бисульфит натрия, формальдегидсульфоксилат натрия, метабисульфит натрия, тиосульфат натрия, диоксид серы, токоферол и наполнитель на основе токоферола. Кроме того, для ингибирования окисления предполагается использование слоя азота или диоксида углерода. Слой азота или диоксида углерода можно ввести в свободное пространство флакона или предварительно заполненного шприца в процессе заполнения.</p>
<p>В составы, описанные здесь, также можно включать буферные агенты, поддерживающие рН фармацевтического состава в желательном диапазоне. Комфорт пациента при введении максимален, если рН фармацевтической композиции установлен на физиологическом уровне или вблизи него. В частности, в некоторых вариантах воплощения рН фармацевтической композиции находится в диапазоне рН от приблизительно 4,0 до 8,4, или в диапазоне рН от приблизительно 5,0 до 8,0, или в диапазоне рН от приблизительно 5,8 до 7,4, или от приблизительно 6,2 до 7,0. Следует понимать, что рН можно регулировать до необходимого уровня с целью максимизации стабильности и растворимости полипептида в конкретной композиции и, таким образом, рамки настоящего изобретения включают рН, находящийся вне физиологического диапазона, но переносимый пациентом. Различные буферы, подходящие для использования в фармацевтической композиции по изобретению, включают гистидин, соли щелочных металлов (фосфат, гидрофосфат или дигидрофосфат натрия или калия), цитрат натрия/лимонную кислоту, ацетат натрия/уксусную кислоту, цитрат калия, малеиновую кислоту, ацетат аммония, трис-(гидроксиметил)аминометан (Трис), различные формы ацетата и диэтаноламина, карбонат аммония, фосфат аммония, борную кислоту, молочную кислоту, фосфорную кислоту, метафосфат калия, одноосновный фосфат калия, раствор лактата натрия и любые другие фармацевтически приемлемые буферные агенты, известные в данной области техники. Для получения желательного рН также можно включать рН-регулирующие агенты, например, соляную кислоту, гидроксид натрия или их соли. Одним из подходящих буферов для поддержания рН фармацевтических композиций при рН 6,2 или вблизи него является фосфат натрия. В другом примере ацетат является более эффективным буфером при рН 5, чем при рН 6, поэтому ацетат можно использовать в растворе при рН 5, а не при рН 6. Концентрация буфера в составе может составлять от приблизительно 1 мМ до приблизительно 1 М, или от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно 1 мМ, или от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно 0,5 мМ, или от приблизительно 10 мМ до приблизительно 300 мМ.</p>
<p>В составы, описанные здесь, также можно включать полимерные носители. Полимерные носители являются полимерами, используемыми для капсулирования кристаллов полипептидов для доставки полипептида, включая биологическую доставку. Такие полимеры включают биосовместимые и биоразлагаемые полимеры. Полимерный носитель может являться полимером одного типа или может состоять из смеси полимеров различного типа. Полимеры, используемые в качестве полимерного носителя, включают, например, полиакриловую кислоту, полицианоакрилаты, полиаминокислоты, полиангидриды, полидепсипептиды, полиэфиры, например, полимолочную кислоту или РЬЛ, сополимер молочной и гликолевой кислот или РЬОЛ, поли-В-гидроксибутират, поликапролактон и полидиоксанон; полиэтиленгликоль, полигидроксипропилметакриламид, полиорганофосфазен, полимеры орто-эфиров, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, сополимеры малеинового ангидрида и алкилвинилового эфира, плюрониловые полиолы, альбумин, природные и синтетические полипептиды, альгинат, целлюлозу и производные целлюлозы, коллаген, фибрин, желатин, гиалуроновую кислоту, олигосахариды, гликаминогликаны, сульфатированные полисахариды, или любой общепринятый материал для капсулирования кристаллов полипептидов.</p>
<p>Кроме того, в составах, описанных здесь, рассматривается использование консервантов, например, антимикробных консервантов. Подходящие консерванты включают хлорид бензалкония, раствор хлорида бензалкония, хлорид бензэтония, бензойную кислоту, бензиловый спирт, бутилпарабен, цетилпиридинийхлорид, хлорбутанол, хлоркрезол, крезол, дегидроуксусную кислоту, этилпарабен, метилпарабен, натрий-метилпарабен, фенол, фенилэтиловый спирт, ацетат фенилртути, нитрат фенилртути, бензоат калия, сорбат калия, пропилпарабен, натрий-пропилпарабен, бензоат натрия, дегидроацетат натрия, пропионат натрия, сорбиновую кислоту, тимеросал и тимол, но не ограничиваются ими. Количество включаемого консерванта находится в диапазоне от 0% до 2% (мас./об.) или приблизительно 1% (мас./об.).</p>
<p>В составы, описанные здесь, также можно включать солюбилизирующие агенты и стабилизаторы (также называемые эмульгаторами, совместно растворенными веществами, или сорастворителями), повышающие растворимость полипептида и/или стабилизирующие полипептид в растворе (или в высу- 30 029956</p>
<p>шенной или замороженной форме). Примеры солюбилизирующих и стабилизирующих агентов включают сахара/полиолы. например, сахарозу, лактозу, глицерин, ксилит, сорбит, маннит, мальтозу, инозит, трегалозу, глюкозу; полимеры, например, сывороточный альбумин (бычий сывороточный альбумин (БСА), человеческий СА (ЧСА) или рекомбинантные (НА), декстран, ПВС, гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), полиэтиленимин, желатин, поливинилпирролидон (ПВП), гидроксиэтилцеллюлозу (ГЭЦ); неводные растворители, например, многоатомные спирты (например, ПЭГ, этиленгликоль и глицерин), диметилсульфоксид (ДМСО) и диметилформамид (ДМФ); аминокислоты, например, пролин, Ьметионин, Ь-серин, глутамат натрия, аланин, глицин, гидрохлорид лизина, саркозин и гамма-аминомасляную кислоту; поверхностно-активные вещества, например, Твин-80, Твин-20, ДСН, полисорбат, сополимер полиоксиэтилена; и прочие стабилизирующие вспомогательные вещества, например, фосфат калия, ацетат натрия, сульфат аммония, сульфат магния, сульфат натрия, Ν-оксид триметиламина, бетаин, ионы металлов (например, цинка, меди, кальция, марганца и магния), ΟΗΛΡδ, монолаурат, 2-О-бетаманноглицерат или любое из следующих веществ: гуммиарабик, холестерин, диэтаноламин (вспомогательное средство), глицерилмоностеарат, ланолиновые спирты, лецитин, моно- и диглицериды, моноэтаноламин (вспомогательное средство), олеиновую кислоту (вспомогательное средство), олеиловый спирт (стабилизатор), полоксамер, полиоксиэтилена 50 стеарат, полиоксил 35 касторовое масло, полиоксил 40 гидрированное касторовое масло, полиоксил 10 олеиловый эфир, полиоксил 20 цетостеариловый эфир, полиоксил 40 стеарат, полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80, диацетат пропиленгликоля, моностеарат пропиленгликоля, лаурилсульфат натрия, стеарат натрия, сорбитанмонолаурат, сорбитанмоноолеат, сорбитанмонопальмитат, сорбитанмоностеарат, стеариновую кислоту, троламин, эмульгирующий воск; увлажняющие и/или солюбилизирующие агенты такие как хлорид бензалкония, хлорид бензэтония, цетилпиридинийхлорид, докузат натрия, ноноксинол 9, ноноксинол 10, октоксинол 9, полиоксил 50 стеарат, тилоксапол; или любую комбинацию вышеперечисленного, но не ограничиваются ими. Концентрация солюбилизаторов/стабилизаторов в композиции может составлять от приблизительно 0,001 до 5 мас.% или от приблизительно 0,1 до 2 мас.%. В одном варианте воплощения стабилизатор выбран из поли(окси-1,2-этандиил)-производных сорбитанмоно-9-октадеценоата, включая полисорбат 80 или полисорбат 20, но не ограничиваясь ими. Количество полисорбата 20 или 80 для применения в данном варианте воплощения находится в диапазоне от 0,001% до 1,0% (мас./об.), например, 0,005% (мас./об.), в составах для однократного применения или в многодозовых составах. В еще одном варианте воплощения в состав включают свободный Ь-метионин в диапазоне от 0,05 мМ до 50 мМ: количество свободного Ь-метионина составляет от 0,05 мМ до 5 мМ для составов для однократного применения, и от 1 мМ до 10 мМ в многодозовых составах.</p>
<p>В составы, описанные здесь, также можно включать модификаторы тоничности. Под модификаторами тоничности понимают молекулы, влияющие на осмоляльность раствора. Осмоляльность фармацевтической композиции предпочтительно регулируют с целью максимизации стабильности активного ингредиента, а также минимизации дискомфорта пациента при введении. Осмоляльность сыворотки составляет приблизительно 300±50 миллиосмоль на килограмм. Как правило, предпочтительно, чтобы фармацевтическая композиция была изотонична по отношению к сыворотке, т.е. обладала такой же или аналогичной осмоляльностью, что достигается путем добавления модификатора тоничности, при этом предполагается, что осмоляльность составит от приблизительно 180 до приблизительно 420 миллиосмоль, однако следует понимать, что осмотическое давление может быть выше или ниже, как требуется при конкретных условиях. Примеры модификаторов тоничности для изменения осмоляльности включают аминокислоты (например, аргинин, цистеин, гистидин и глицин), соли (например, хлорид натрия, хлорид калия и цитрат натрия) и/или сахариды (например, сахарозу, глюкозу, декстрозу, глицерин и маннит), но не ограничиваются ими. Концентрация модификатора тоничности в составе может составлять от приблизительно 1 мМ до 1 М, или от приблизительно 10 мМ до приблизительно 200 мМ. В одном варианте воплощения модификатором тоничности является хлорид натрия в диапазоне концентраций от 0 мМ до 200 мМ. В еще одном варианте воплощения модификатором тоничности является сорбит или трегалоза, а хлорид натрия отсутствует.</p>
<p>В некоторых вариантах осуществления композиция содержит соединение, выбранное из следующих соединений, или любую их комбинацию: соли 1) аминокислоты, например, глицин, аргинин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, аспарагин, глутамин, пролин, 2) углеводы, например, моносахариды, например, глюкозу, фруктозу, галактозу, маннозу, арабинозу, ксилозу, рибозу, 3) дисахариды, например, лактозу, трегалозу, мальтозу, сахарозу, 4) полисахариды, например, мальтодекстрины, декстраны, крахмал, гликоген, 5) полиолы, например, маннит, ксилит, лактит, сорбит; 6) глюкуроновую кислоту, галактуроновую кислоту; 7) циклодекстрины, например, метилциклодекстрин, гидроксипропилβ-циклодекстрин; 8) неорганические соли, например, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, фосфаты натрия и калия, борную кислоту, карбонат аммония и фосфат аммония; 9) органические соли, например, ацетаты, цитрат, аскорбат, лактат, 10) эмульгирующие или солюбилизирующие агенты, например, гуммиарабик, диэтаноламин, глицерилмоностеарат, лецитин, моноэтаноламин, олеиновую кислоту, олеиловый спирт, полоксамер, полисорбаты, лаурилсульфат натрия, стеариновую кислоту, сотбитанмо- 31 029956</p>
<p>нолаурат, сорбитанмоностеарат и другие производные сорбитана, производные полиоксила, воск, производные полиоксиэтилена, производные сорбитана; 11) реагенты, повышающие вязкость, например, агар, альгиновую кислоту и ее соли, гуаровую камедь, пектин, поливиниловый спирт, полиэтиленоксид, целлюлозу и ее производные, пропиленкарбонат, полиэтиленгликоль, гексиленгликоль, тилоксапол; и 12) определенные ингредиенты, например, сахарозу, трегалозу, лактозу, сорбит, лактит, инозит, соли натрия и калия, например, ацетаты, фосфаты, цитраты, борат, глицин, аргинин, полиэтиленоксид, поливиниловый спирт, полиэтиленгликоль, гексиленгликоль, метоксиполиэтиленгликоль, желатин и гидроксипропил-в-циклодекстрин.</p>
<p>Е. Формы с замедленным высвобождением</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения используют формы с замедленным высвобождением (также называемые формами с "контролируемым высвобождением") кристаллических антител против склеростина, включая формы кристаллического антитела АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 с замедленным высвобождением; формы с замедленным или контролируемым высвобождением, содержащие кристаллическое антитело АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31, и вещество для продления физического высвобождения или повышения биологической доступности кристаллического антитела АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 в течение желательного периода времени.</p>
<p>Формы с замедленным высвобождением, подходящие для использования в описанных способах, включают, но не ограничиваются им, кристаллическое антитело АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31, капсулированное в материал для замедленного высвобождения, например, медленно растворяющийся биосовместимый полимер (например, полимерные носители, описанные здесь, микрочастицы альгината, описанные в патенте США № 6036978, или композиции полиэтилена-винилацетата и сополимера молочной и гликолевой кислот, описанные в патенте США № 6083534), смешанное с таким полимером (в том числе гидрогелями для наружного применения) и/или заключенное в биосовместимый полупроницаемый имплант. Дальнейшие варианты воплощения настоящего изобретения включают дополнительные формы с замедленным высвобождением, например, полимерные микрочастицы, причем смесь активного ингредиента и средств для замедленного высвобождения, например, полимеров (например, РЬОА) диспергируют в дисперсионной фазе, и полученную дисперсию непосредственно лиофилизуют для удаления воды и органических растворителей или добавок и образования указанных микрочастиц (патент США № 6020004, полностью включенный в настоящий документ посредством ссылки); гелевые композиции для инъекций, включающие биоразлагаемый анионный полисахарид, например, эфир альгината, полипептид по меньшей мере один связанный ион поливалентного металла (патент США № 6432449, полностью включенный в настоящий документ посредством ссылки); биоразлагаемые полимерные матрицы для инъекций, обладающие свойствами обратимого термического гелеобразования и, необязательно, свойствами рН-зависимого гелеобразования/де-гелеобразования (патенты США № 6541033 и 6451346, полностью включенные в настоящий документ посредством ссылки), биосовместимые суспензии полиол:масло, например, суспензии, содержащие полиол в диапазоне от приблизительно 15 мас.% до приблизительно 30 мас.% (патент США № 6245740, полностью включенный в настоящий документ посредством ссылки). Такие формы с замедленным высвобождением пригодны для непрерывной доставки полипептидов при введении в форме депо, где депо может являться имплантом, или может быть в форме инъецируемых микросфер, наносфер или гелей. Вышеперечисленные патенты США (патенты США № 6036978; 6083534; 6020004; 6432449; 6541033; 6451346 и 6245740) полностью включены в настоящий документ посредством ссылки. Кроме того, формы кристаллических полипептидов с замедленным или контролируемым высвобождением по изобретению включают типы материалов для замедленного высвобождения, например, материалы, описанные в Клт, С, 2000, "Сойго11е4 Ке1еа8е Бокаде Рогт Бе81ди", Тескоиотю РиЬНкЫид Со., ЬаисакГег Ра., включающие следующие вещества: природные полимеры (желатин, альгинат натрия, ксантановую камедь, гуммиарабик или хитозан), полусинтетические полимеры или производные целлюлозы (например, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксиэтилметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, ацетат целлюлозы, бутират-ацетат целлюлозы, пропионат-ацетат целлюлозы, ацетат-фталат целлюлозы или фталат гидроксипропилметилцеллюлозы) и синтетические полимеры (например, ионообменные смолы (метакриловую кислоту, сульфированный полистирол/дивинилбензол), полиакриловую кислоту (карбопол), поли(ММА/МАА), ^л^ММА/БРАМА), поли(ММА/ЕА), сополимер винилацетата и фталата, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полимолочную кислоту, полигликолевую кислоту, сополимер молочной и гликолевой кислот, полиэтиленгликоль, полиэтиленоксид, полидиметилсиликон, полигидроксиэтилметакрилат, сополимер этилена и винилацетата, сополимер этилена и винилового спирта, полибутадиен, полиангидрид, полиортоэфир и полиглутаминовую кислоту).</p>
<p>Дальнейшие варианты воплощения, описанные здесь, включают кристаллы АЬ-30, АЬ-30К, АЬ30Кт или АЬ-31, капсулированные по меньшей мере в один полимерный носитель для формирования микросфер путем капсуляции в матрицу полимерного носителя с целью сохранения их нативной и биологически активной третичной структуры, как описано в патенте США № 6541606, полностью включенном в настоящий документ посредством ссылки. Кристаллы АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-3 0Кт или АЬ-31 либо их</p>
<p>- 32 029956</p>
<p>составы суспендируют в полимерном носителе, например, РЬСЛ, растворенном в органическом растворителе или добавке. Такие капсулированные кристаллы ЛЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или ЛЬ-31 сохраняют биологическую активность антитела АЬ-30, ЛЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 в течение более длительного периода времени, чем антитело АЬ-30, АЬ-30К, АЬ-30Кт или АЬ-31 в растворе при хранении в сопоставимых условиях.</p>
<p>IV. Наборы</p>
<p>В качестве дополнительного аспекта здесь описаны наборы, включающие один или несколько составов, описанных здесь и упакованных так, что это облегчает их применение для введения субъектам. В одном из вариантов воплощения такой набор включает составы, описанные здесь (например, композицию, содержащую любое из антител, описанных здесь), упакованные в контейнер, например, герметично закрытую бутыль, сосуд, флакон для одноразового или многоразового применения, предварительно заполненный шприц, или предварительно заполненное устройство для инъекций, необязательно включающий этикетку, прикрепленную к контейнеру, или включенную в упаковку и описывающую применение соединения или композиции для осуществления способа. В одном аспекте соединение или композиция упакована в виде дозированной формы. Указанный набор может дополнительно включать устройство, пригодное для введения композиции в соответствии с определенным способом введения. Предпочтительно, указанный набор содержит этикетку, описывающую применение антител, описанных здесь, или композиции, описанной здесь.</p>
<p>V. Дозы</p>
<p>Лечащий врач должен разработать схему приема лекарственного средства, являющуюся частью способа лечения состояния, описанного здесь, с учетом различных факторов, изменяющих действие лекарств, например, возраста, состояния, массы тела, пола и питания пациента, степени тяжести инфекций, времени приема и других клинических факторов. В различных аспектах ежедневный прием составляет 0,1-50 мг препарата антитела на кг массы тела (из расчета массы самого белка без учета химической модификации). В некоторых вариантах воплощения доза составляет от приблизительно 0,5 мг/кг до 20 мг/кг, или приблизительно 0,5-10 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 3 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 4 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, или от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 4 мг/кг, или от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 3 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 6 мг/кг, или от приблизительно 3 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг или от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг.</p>
<p>Составы обычно вводят парентерально, например, внутривенно, подкожно, внутримышечно, посредством аэрозоля (внутрилегочное или ингаляционное введение), или посредством депо для долгосрочного высвобождения. В некоторых вариантах воплощения состав вводят внутривенно в виде начального болюса с последующим непрерывным вливанием для поддержания терапевтического циркулирующего уровня лекарственного средства. В других вариантах воплощения состав вводят в виде разовой дозы. Специалисты в данной области техники легко могут оптимизировать эффективные дозировки и схемы введения согласно надлежащей медицинской практике и клиническому состоянию пациента. Частота дозировки зависит от фармакокинетических параметров агентов и пути введения. Оптимальный фармацевтический состав определяет специалист в данной области техники в зависимости от пути введения и желательной дозы. См., например, РепипдЮпк РЬагтасеийса1 8с1спсс5. 181Н Еб. (1990, Маек РиЬйкЫпд Со., Еайоп, РА 18042) радек 1435-1712, описание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Такие составы могут влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения ίη νίνο и скорость выведения введенных агентов ίη νίνο. В зависимости от способа введения, подходящую дозу можно рассчитать в соответствии с массой тела, площадью поверхности тела или размером органа. Дальнейшее уточнение расчетов, необходимых для определения соответствующей дозы для лечения каждым из вышеуказанных составов, обычно производится специалистом в данной области техники без излишнего экспериментирования, особенно в свете информации о дозировке и анализов, описанных здесь, а также фармакокинетических данных, наблюдавшихся в клинических испытаниях на людях, обсуждавшихся выше. Соответствующие дозировки можно установить посредством использования установленных анализов для определения уровней дозы в крови в сочетании с соответствующими данными доза-ответ.</p>
<p>По мере проведения исследований, будет появляться дополнительная информация по отношению к соответствующим уровням дозировки и продолжительности лечения различных заболеваний и состояний.</p>
<p>VI. Терапевтическое использование состава</p>
<p>Составы, описанные здесь, можно применять для лечения или профилактики расстройств, связанных с костями, например, расстройств, связанных с костями, ассоциированных с аномальной активностью остеобластов или остеокластов. В некоторых вариантах воплощения указанный состав вводят субъ- 33 029956</p>
<p>екту, страдающему расстройством, связанным с костями, выбранным из группы, состоящей из ахондроплазии, ключично-черепной дисплазии, энхондроматоза, фиброзной дисплазии, болезни Гоше, гипофосфатемического рахита, синдрома Марфана, множественного наследственного экзостоза, нейрофиброматоза, незавершенного остеогенеза, остеопороза, остеопойкилоза, склеротических поражений, псевдоартроза, гнойного остеомиелита, пародонтоза, потери костной массы, вызванной противоэпилептическими лекарствами, первичного и вторичного гиперпаратиреоза, синдромов семейного гиперпаратиреоза, потери костной массы, вызванной невесомостью, остеопороза у мужчин, потери костной массы после менопаузы, остеоартрита, почечной остеодистрофии, инфильтративных поражений костей, остеопороза в области ротовой полости, остеонекроза челюсти, ювенильной болезни Педжета, мелореостоза, метаболических поражений костей, мастоцитоза, серповидно-клеточной анемии, потери костной массы, связанной с трансплантацией органов, потери костной массы, связанной с трансплантацией почки, системной красной волчанки, анкилозирующого спондилита, эпилепсии, ювенильных артритов, талассемии, мукополисахаридозов, болезни Фабри, синдрома Тернера, синдрома Дауна, синдрома Клайнфельтера, проказы, болезни Пертеса, подросткового идиопатического сколиоза, полиорганного воспалительного заболевания с началом в детском возрасте, синдрома Винчестера, болезни Менкеса, болезни Вильсона, ишемической болезни костей (например, болезни Легга-Кальве-Пертеса и регионального миграционного остеопороза), анемических состояний, состояний, вызванных приемом стероидов, потери костной массы, вызванной глюкокортикоидами, потери костной массы, вызванной гепарином, расстройства костного мозга, цинги, недоедания, дефицита кальция, остеопороза, остеопении, алкоголизма, хронического заболевания печени, постменопаузы, хронических воспалительных состояний, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, неспецифического язвенного колита, воспалительного колита, болезни Крона, олигоменореи, аменореи, беременности, сахарного диабета, гипертиреоза, расстройства щитовидной железы, расстройства паращитовидных желез, болезни Кушинга, акромегалии, гипогонадизма, неподвижного состояния или бездействия, синдрома рефлекторной симпатической дистрофии, регионального остеопороза, остеомаляции, потери костной массы, связанной с заменой сустава, ВИЧассоциированной потери костной массы, потери костной массы, связанной с недостатком гормона роста, потери костной ткани, связанной с муковисцидозом, потери костной массы, связанной с химиотерапией, потери костной массы, вызванной опухолью, потери костной массы, связанной с раком, потери костной массы при подавлении гормонов, множественной миеломы, медикаментозной потери костной массы, нервной анорексии, потери костной массы лицевого черепа, связанной с заболеванием, потери костной массы мозгового черепа, связанной с заболеванием, потери костной массы челюсти, связанной с заболеванием, потери костной массы черепа, связанной с заболеванием, потери костной массы, связанной с возрастными изменениями, потери костной массы лицевого черепа, связанной с возрастными изменениями, потери костной массы мозгового черепа, связанной с возрастными изменениями, потери костной массы челюсти, связанной с возрастными изменениями, потери костной массы черепа, связанной с возрастными изменениями, и потери костной массы, связанной с космическим полетом.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения составы, описанные здесь, можно использовать для улучшения результатов ортопедических процедур, стоматологических процедур, имплантаций, замены суставов, костной пластики, косметической хирургии костей и восстановления костей, например, заживления переломов, лечения несращений, лечения замедленного заживления и реконструкции лица. Одну или более из композиций можно вводить до, во время и/или после процедуры, замены, трансплантации, хирургии или восстановления.</p>
<p>Для достижения благоприятной биологической реакции указанный состав не обязательно должен излечивать расстройство у субъекта или полностью защищать от начала расстройства, связанного с костями. Состав можно использовать в профилактических целях, то есть для полной или частичной защиты против расстройства, связанного с костями, или его симптома. Состав также можно использовать в терапевтических целях для полного или частичного облегчения расстройства, связанного с костями, или его симптома, или для полной или частичной защиты, от дальнейшего прогрессирования расстройства, связанного с костями, или его симптома. Фактически, материалы и способы по изобретению особенно полезны для повышения минеральной плотности костной ткани и поддержания повышенной минеральной плотности костной ткани в течение периода времени.</p>
<p>В течение терапевтического периода, например, от приблизительно 1 недели до приблизительно 18 месяцев (например, от приблизительно 1 месяца до приблизительно 12 месяцев, от приблизительно 1 месяца до приблизительно 9 месяцев, или от приблизительно 1 месяца до приблизительно 6 месяцев, или от приблизительно 1 месяца до приблизительно 3 месяцев) можно выполнить одно или более введений состава, описанного здесь. В некоторых вариантах воплощения субъекту вводят одну или более доз состава, описанного здесь, в течение терапевтического периода, например, от приблизительно 1 месяца до приблизительно 12 месяцев (например, приблизительно 2 месяцев, приблизительно 3 месяцев, приблизительно 4 месяцев, приблизительно 5 месяцев, приблизительно 6 месяцев, приблизительно 7 месяцев, приблизительно 8 месяцев, приблизительно 9 месяцев, приблизительно 10 месяцев или приблизительно 11 месяцев). В некоторых вариантах воплощения субъекту вводят одну или более доз состава для поддержания минеральной плотности костной ткани. Термин "поддержание минеральной плотности костной</p>
<p>- 34 029956</p>
<p>ткани", как используется здесь, означает, что повышенная минеральная плотность костной ткани, обусловленная начальной дозой состава, снижается не более чем приблизительно на 1-5% в течение приблизительно 6 месяцев, приблизительно 9 месяцев, приблизительно 1 года, приблизительно 18 месяцев, приблизительно 2 лет или в течение жизни пациента). Следует принимать во внимание, что для увеличения плотности костной ткани и поддержания плотности костной ткани пациенту могут потребоваться чередующиеся фазы лечения.</p>
<p>Кроме того, может быть предпочтительным вводить несколько доз препарата или увеличить промежутки между введением доз, в зависимости от схемы лечения, выбранной для конкретного субъекта. Состав можно вводить периодически в течение периода времени, равного одному году или менее (например, 9 месяцам или менее, 6 месяцам или менее, или 3 месяцам или менее). В связи с этим препарат можно вводить человеку раз в приблизительно 3 дня, или приблизительно 7 дней, или 2 недели, или 3 недели, или 4 недели, или 5 недель, или 6 недель, или 7 недель, или 8 недель, или 9 недель, или 10 недель, или 11 недель, или 12 недель, или 13 недель, или 14 недель, или 15 недель, или 16 недель, или 17 недель, или 18 недель, или 19 недель, или 20 недель, или 21 неделю, или 22 недели, или 23 недели, или 6 месяцев, или 12 месяцев.</p>
<p>VII. Мониторинг терапии</p>
<p>Повышение содержания минеральных веществ в кости или плотности костной ткани, опосредованное антителом против склеростина, можно измерить с помощью рентгеновской абсорбциометрии с одним или двумя источниками энергии, ультразвукового исследования, компьютерной томографии, рентгенографии и магнитно-резонансной томографии. Костную массу также можно рассчитать по массе тела или с помощью других способов (см. Ошппе88-Неу, Ме!аЬ. Вопе Όίδ. Ке1а! Ке8., 5:177-181 (1984)). В данной области техники для тестирования действия фармацевтических композиций и способов на, например, параметры потери костной ткани, резорбцию костей, формирование костей, прочность костей или минерализацию костей, используют животных моделей, имитирующих состояния при заболеваниях человека, например, остеопорозе и остеопении. Примеры таких моделей включают модели крысы с удаленными яичниками (Ка1и, Вопе апД Мшега1, 15:175-192 (1991); Ρτοδΐ апД 1ее, Вопе апД Мшега1, 18:227236 (1992); и 1ее апД Уао, I. Мшси^ке! №игоп. 1п1егас1.. 1:193-207 (2001)). Способы измерения активности антител против склеростина, описанных здесь, также можно использовать для определения эффективности других ингибиторов склеростина.</p>
<p>У людей минеральную плотность костной ткани можно определить клинически с использованием двойной рентгеновской абсорбциометрии (ОХА), например, бедренной кости и позвоночника. Другие способы включают количественную компьютерную томографию (ККТ), ультразвуковое исследование, рентгеновскую абсорбциометрию с одним источником энергии (8ХА) и радиографическую абсорбциометрию. Центральные участки скелета, обычно используемые для измерения, включают позвоночник и бедренную кость; периферийные участки включают предплечье, палец, запястье и пятку. Американская медицинская ассоциация отмечает, что методики измерения МПКТ, кроме УЗИ, обычно включают использование рентгеновских лучей и основаны на принципе, при котором ослабление излучения зависит от толщины и состава тканей на пути излучения. Все методики включают сравнение результатов с базой данных нормативных показателей.</p>
<p>Кроме того, физиологический ответ на один или более склеростин-связывающих агентов можно оценить путем мониторинга уровней костного маркера. Костные маркеры являются продуктами, образующимися при ремоделировании костной ткани и высвобождаемыми костью, остеобластами и/или остеокластами. Колебания уровней "маркеров" резорбции кости и/или формирования кости подразумевают изменения костного ремоделирования/моделирования. Международный фонд остеопороза (ЮР) рекомендует использовать костные маркеры для мониторинга терапии плотности костной ткани (см., например, 0е1пт е! а1., Οδΐеοрο^οδ 1пЦ 8ирр1. 6:82-17 (2000), включенную в настоящий документ посредством ссылки). Маркеры, являющиеся показателями резорбции костей (или активности остеокластов), включают, например, С-телопептид (например, С-концевой телопептид коллагена 1 типа (СТХ) или сывороточный перекрестно связанный С-телопептид), Ν-телопептид (Ν-концевой телопептид коллагена 1 типа (ΝΤΧ)), деоксипиридинолин (ΌΡΌ), пиридинолин, гидроксипролин мочи, галактозилгидроксилизин и тартрат-устойчивую кислую фосфатазу (например, изоформу 5Ь тартрат-устойчивой кислой фосфатазы сыворотки). Маркеры остеогенеза/минерализации включают костную щелочную фосфатазу (В8АР), пептиды, высвобождаемые из Ν- и С-концевых удлиняющих фрагментов проколлагена I типа (Ρ1ΝΡ, Р1СР), и остеокальцин (0δΐСа), но не ограничиваются ими. Доступны для приобретения несколько наборов для обнаружения и определения маркеров в клинических образцах, например, моче и крови. VIII. Комбинированная терапия Лечение патологии путем объединения двух или более агентов, мишенью которых является один и тот же патоген или биохимический путь, иногда приводит к большей эффективности и снижению побочных эффектов по сравнению с использованием терапевтически значимой дозы каждого препарата по отдельности. В некоторых случаях эффективность комбинации лекарств является аддитивной (эффективность комбинации приблизительно равна сумме эффектов каждого препарата по отдельности), но в других случаях эффект может быть синергическим (эффективность комбинации выше, чем сумма эффектов каждого препарата по отдельности). Как используется здесь, термин "комбинированная</p>
<p>- 35 029956</p>
<p>терапия" означает, что два соединения можно доставлять одновременно, например, параллельно друг другу, либо сначала вводят одно из соединений, а затем второй агент, например, последовательно. Желательным результатом может являться субъективное облегчение одного или более симптомов либо объективно определяемое улучшение у реципиента дозировки.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения состав вводят вместе с терапевтическим средством, являющимся стандартом лечения пониженной минеральной плотности костной ткани. Как используется здесь, термин "стандарт лечения" относится к лечению, общепринятому среди клиницистов для пациентов определенного типа с диагнозом заболевания определенного типа. В некоторых вариантах воплощения терапевтическое средство, являющееся стандартом лечения, выбрано из группы, состоящей из антирезорбтивного лекарственного средства, агента, формирующего костную ткань, антагониста рецептора эстрогена (включая ралоксифен, базедоксифен и лазофоксифен, но не ограничиваясь ими) и лекарственного средства, оказывающего стимулирующее действие на остеокласты. В некоторых вариантах воплощения антирезорбтивный препарат включает бисфосфонат (включая алендронат, ризедронат, ибандронат и золедронат, но не ограничиваясь ими), эстроген или аналог эстрогена, селективный модулятор рецептора эстрогенов (§ЕКМ) и источник кальция, тиболон, кальцитонин, кальцитриол и заместительную гормональную терапию, но не ограничивается ими. В некоторых вариантах воплощения агент для формирования костей включает паратиреоидный гормон (ПТГ) или его пептидный фрагмент, ПТГ-родственный белок (РТНгр), костный морфогенетический белок, остеогенин, ΝαΡ, агонист РСЕ<sub>2</sub>, статин, антитело против ΌΚΚ и лиганд ΚΑΝΚ (ΚΑΝΚΣ), но не ограничивается ими. В некоторых вариантах воплощения лекарственное средство, оказывающее стимулирующее действие на остеокласты, включает витамин Ό или производное витамина Ό или их имитатор, но не ограничивается ими.</p>
<p>В некоторых вариантах воплощения состав вводят субъекту, если лечение терапевтическим средством, являющимся стандартом лечения, описанным здесь, противопоказано.</p>
<p>Примеры</p>
<p>Пример 1. Кристаллизация Αϋ-30</p>
<p>Антитело ΑΒ-30, состоящее из двух зрелых тяжелых цепей (8ЕЦ ГО ΝΟ: 15) и двух зрелых легких цепей (8ЕЦ ГО ΝΟ: 13), рекомбинантно полученное из ДНК, кодирующей каждую из этих цепей, кристаллизовали при различных условиях.</p>
<p>Кристаллизацию ΑΒ-30 осуществляли с помощью скринингового теста кристаллизации (1ибех §стееи; НатрЮп КекеатсЬ, Алисо Вьехо, штат Калифорния, США), использующего способ для кристаллизации макромолекул, известный как диффузия паров в "висячей капле". Каплю, состоящую из смеси полипептидного образца и реактива для кристаллизации ("буфер для кристаллизации" или "маточный раствор") помещали на нижнюю сторону силанизированного покровного стекла, а затем каплю на покровном стекле герметизировали смазкой и помещали поверх обычно 24-луночного νΟΧ-лотка, обеспечивая равновесие паров с жидким реагентом в резервуаре. Для достижения равновесия осуществляли обмен водяного пара между каплей и 1 мл раствора в лунке лотка. По мере выхода воды из капли относительная концентрация полипептида в образце увеличивалась, что в конечном итоге могло привести к пересыщению. Именно эта повышенная концентрация полипептида в образце требовалась для кристаллизации. Обычно капля содержала более низкую концентрацию реагента, чем резервуар и, как правило, капля содержала половинную концентрацию реагента по сравнению с резервуаром, поскольку для образования капли смешивали равные объемы образца и реагента.</p>
<p>В указанных экспериментах начальная концентрация полипептида в капле, как правило, составляла 0,1-300 мг/мл или между 3-100 мг/мл.</p>
<p>Скрининговый тест кристаллизации проводили в 24-луночном νϋΧ полипропиленовом лотке для тканевых культур. Каждое положение в νΟΧ-лотке содержало 1-мл резервуар с реагентом, причем резервуар с реагентом в каждой лунке отличался по составу от других лунок, обеспечивая матрицу с различными параметрами буфера для кристаллизации. 1-10 мкл раствора полипептида при каждой концентрации полипептида добавляли к 1-10 мкл раствора резервуара для образования капель. Лотки инкубировали при 4°С или при комнатной температуре.</p>
<p>Условия кристаллизации: Кристаллизацию ΑΒ-30 наблюдали как при 4°С, так и при комнатной температуре с использованием множества реагентов (см. табл. 1-8 ниже).</p>
<p>- 36 029956</p>
<p>один день при комнатной температуре</p>
<p>Таблица 1. Условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 через</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #18</td><td>
0,49 М дигидрофосфат натрия,
0,91 М гидрофосфат калия, рН
б, 9</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #22</td><td>
Ο,θ М янтарная кислота рН Ί</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #30</td><td>
0,1 М хлорид натрия, 0,1 М бистрис, рН 6,5, 1,5 М сульфат
аммония</td><td>
с т ержни</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΌΧ #31</td><td>
0,8 М тетрагидрат тартрата
натрия-калия, 0,1 М Трис, рН
8,5, 0,50% масс./об.
монометиловый эфир
полиэтиленгликоля 5000</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #34</td><td>
1 М янтарная кислота рН 7,0,
0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0, 1%
масс. /об. полиэтилен</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #35</td><td>
1 М сульфат аммония, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 0,50% масс./об.
полиэтиленгликоль 8000</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об,/об, таксимат рН 7,0,
0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0, 2%
масс./об. полиэтиленгликоль
3350</td><td>
стержни,
кластеры
стержней</td></tr>
</table>
<p>Таблица 2. Условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 через один день при 4°С</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #12</td><td>
0,1М Трис рН 8,5, 3 М хлорид
натрия</td><td>
не
регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #18</td><td>
0,49 М дигидрофосфат натрия,
0,91 М гидрофосфат калия, рН
6, 9</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #22</td><td>
0,8 М янтарная кислота рН 7</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #31</td><td>
0,8 М тетрагидрат тартрата
натрия-калия, 0,1 М Трис, рН
8,5, 0,50% масс./об.
монометиловый эфир
полиэтиленгликоля 5000</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
1№Х #35</td><td>
1 М сульфат аммония, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 0,50%
масс./об. полиэтиленгликоль
8000</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0,
0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0, 2%
масс./об. полиэтиленгликоль
3350</td><td>
с т ержни,
кластеры
стержней</td></tr>
</table>
<p>- 37 029956</p>
<p>через два дня при комнатной температуре</p>
<p>Таблица 3. Условия кристаллизации для получения кристаллов ЛЬ-30</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый ТОСТ
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
5АЫ-КХ#1</td><td>
1,8 М ацетат натрия рН 7,0, 0,1
М бис-трис-пропан, рН 7</td><td>
Зерна или
мелкие
стержни</td></tr>
<tr><td>
5АЪТ-КХ#19</td><td>
0,7 М дигидрат цитрата натрия,
Ο,ΙΜ бис-трис-пропан рН 7</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
<tr><td>
5АЬТ-КХ#20</td><td>
0,7 м дигидрат цитрата натрия,
0,1 М Трис, рН 8,5</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ#17</td><td>
1,26 М дигидрофосфат натрия,
0,14 М гидрофссфат калия</td><td>
стержни</td></tr>
</table>
<p>Таблица 4. Условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 через два дня при 4°С</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
5АЬТ-КХ#1</td><td>
1,8 М ацетат натрия рН 7,0, 0,1
М бис-трис-пропан, рН 7</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
8АЪТ-НХ#19</td><td>
0,7 М дигидрат цитрата натрия,
0,1 М бис-трис-пропан рН 7</td><td>
зерна</td></tr>
<tr><td>
5АЪТ-АХ#20</td><td>
0,7 М дигидрат цитрата натрия,
0,1 М Трис, рН 8,5</td><td>
кластеры
стержней</td></tr>
</table>
<p>для получения кристаллов АЬ-30 при комнатной температуре</p>
<p>Таблица 5. Дополнительные доступные для приобретения условия скрининговых тестов</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый тест
крист аллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ЗАЪТ-ГО£#2</td><td>
2,8 Μ ацетат натрия рН
7,0, 0,1 М бис-триспропан, рН 7,0</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #24</td><td>
2,8 М тригидрат ацетата
натрия рН 7,0</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #26</td><td>
1,1 М тартрат аммония
рН 7, 0</td><td>
кластеры стержней</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #28</td><td>
35% об./об. таксимат рН 7, 0</td><td>
хризантемы</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #33</td><td>
1,1 М малонат натрия рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН
7,0, 0,50% об./об.
джеффамин ΕΏ-2001 рН
7, 0</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
И12 I #9</td><td>
0,1 М ацетат, рН 4,5, 1
Μ ίΝΉ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>ΗΡΟ<sub>4</sub></td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #12</td><td>
0, 2 М Са (САс) 2, 0, 1 М
имидазол, рН 8, 20%
масс./об. ПЭГ-1000</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #13</td><td>
0,1 М какодилат, рН
6, 5, 1, 26 Μ (ΝΗ<sub>4</sub>) <sub>2</sub>ЗО<sub>4</sub></td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #22</td><td>
ОД М Трис рН 8,5, 10%
об./об. 2-пропанол</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΣ I #26</td><td>
0,1 СНЕЗ рН 9,5, 10%
масс./об. ПЭГ-3000</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΣ I #29</td><td>
0,2 М ЫаС1, 0,1 М СНЕЗ
рН 9,5, 10% масс./об.
ПЭГ-θΟΰΰ</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
μιζ ι #30</td><td>
0,2 М ИаС1, 0,1 М
ацетат рН 4,5, 1,26 М
(ΝΗ<sub>4</sub>1 <sub>2</sub>ΞΟ<sub>4</sub></td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
μιζ ι #35</td><td>
0,1 М ацетат рН 4,5,
20% об./об. 1,4бутандисл</td><td>
не регистрировали</td></tr>
</table>
<p>- 38 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΜΙΖ I #37</td><td>
0,1 Μ имидазол ρΗ 8,
2,5 Μ ЫаС1</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #39</td><td>
0,2 Μ Ы<sub>2</sub>ЗО<sub>4</sub>, 0, 1 Μ
фосфат-цитрат ρΗ 4,2,
20% масс./об. ПЭГ-1000</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #42</td><td>
0,1 Μ Трис, ρΗ 7,0, 15%
об./об. этанол</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #46</td><td>
0,2 М Са (0Ас)<sub>2</sub>, 0,1 М
имидазол, рН 8, 10%
масс./об. ПЭГ-8000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #10</td><td>
0,1 М Трис рН 8,5, 1 М
(ΝΗ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>ΗΡΟ<sub>4</sub></td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #12</td><td>
0,2 М Ы<sub>2</sub>30<sub>4</sub>, 0,1 М
какодилат, рН 6,5, 30%
об./об. ПЭГ-400</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #15</td><td>
0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7, 5,
1,26 Μ (ΝΗ<sub>4</sub>) <sub>2</sub>НРО<sub>4</sub></td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #21</td><td>
0,1М ацетат рН 4,5,
35% об./об. 2-метил2,4-пентандиол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #22</td><td>
0,1 М имидазол рН 8,0,
10% об./об. 2-пропанол</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #25</td><td>
0,2 М ЫаС1, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,5, 35%
об./об. 2-метил-2,4пентандиол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #26</td><td>
0,1 М СНЕЗ рН 9, 5, 30%
об./об. ПЭГ-400</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #27</td><td>
0,2 М МдС1<sub>2</sub>, 0,1 М
какодилат рН 6,5, 10%
масс./об. ПЭГ-3000</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #30</td><td>
0,2 Μ Ζη(ΟΑο)<sub>2</sub>, 0,1 М
имидазол, рН 8,0, 20%
об./об. 1,4-бутандиол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #32</td><td>
0,1 М Трис рН 8,5, 20%
масс./об. ПЭГ-1000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #38</td><td>
0,2 М Ы<sub>2</sub>30<sub>4</sub>, 0,1 М
ацетат рН 4,5, 2,5 М
ЫаС1</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
</td><td colspan="2">
</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #42</td><td>
0,2 М ЫаС1, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,5, 30%
об./об. ПЭГ-400</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #22</td><td>
0,1 М Трис, рН 8,5, 20%
об./об. этанол</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #25</td><td>
10% масс./об. ПЭГ-8000,
10% масс./об. ПЭГ-1000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #28</td><td>
0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7, 5,
70% об./об. МРЭ</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #29</td><td>
0,1 М Трис рН 8, 0, 40%
об./об. МРГ</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #35</td><td>
0,16 М ацетат кальция,
0,08 М какодилат рН
6,5, 4,4% масс./об. ПЭГ
8000, 20% об./об.
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ III #38</td><td>
2% об./об. диоксан, 0,1
М цитрат, рН 5,5, 15%
масс./об. ПЭГ 10000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #39</td><td>
0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,5,
20% об./об. джеффамин
М-600</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #40</td><td>
0,1 М Оицин, рН 9,0,
10% об./об. ΜΡΌ</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #41</td><td>
0,2 М хлорид кальция,
0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,5,
28% об./об. ПЭГ 400</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ III #42</td><td>
0,2 М сульфат лития,
0, 1 М трис, рН 8,5, 30%
масс./об. ПЭГ 4000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ III #46</td><td>
0,2 М фосфат аммония
(одноосновный), 0,1 М
Трис, рН 8,5, 50%
об./об. МРГ</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #58</td><td>
0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,5,
20% масс./об. ПЭГ 10000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ IV #13</td><td>
0,8 М янтарная кислота
рН 7,0</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 39 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΜΙΖ IV #14</td><td>
40% (об./об.) ПЭГ 400,
0,1 М Трисоснование/соляная
кислота рН 8,5, 0,2 М
сульфат лития</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ IV #26</td><td>
10% (масс./об.)
ПЭГ2000ММЕ, 0,1 М
ацетат натрия/уксусная
кислота, рН 5,5, 0,2 М
сульфат аммония</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ IV #31</td><td>
20% (масс./об.)
полиакриловая кислота
5100, 0, 1 М
НЕРЕЗ/гидроксид натрия
рН 7,0, 0,02 М хлорид
магния</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ IV #33</td><td>
0,8 М гидрофосфат
калия, 0,1 М НЕРЕЗ/гидроксид натрия
рН 7,5, 0,8 М фосфат
натрия</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
С5-СКУО #36</td><td>
0,065 Трис гидрохлорид
рН 8,5, 5,2% масс./об.
полиэтиленгликоль 8000,
35% глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
СЗ-СКУО #46</td><td>
0,16 М гидрат ацетата
кальция, 0,08 М
тригидрат какодилата
натрия рН 6,5, 14,4%
масс./об.
полиэтиленгликоль 8000,
20% глицерин</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #3</td><td>
0,66 М сульфат аммония,
0,33% об./об. ΜΡΌ, 0,1
Μ НЕРЕ5, рН 7,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #4</td><td>
0,66 М сульфат аммония,
1,65% об./об. ПЭГ 400,
0,05 М сульфат магния,
0,1 М Трис-основание рН
8,5</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #10</td><td>
6,6% об./об. глицерин, 0,825 М дигидрофосфат
калия/гидрофосфат
натрия, рН 7,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #13</td><td>
1,65% об./об. изопропанол, 0,66 М
цитрат аммония/лимонная
кислота рН 6,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #14</td><td>
1,65% об./об. ПЭГ 400, 0,66 М цитрат
аммония/лимонная
кислота рН 7, 5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #17</td><td>
0,561 сульфат лития,
2,24% об./об. ΜΡϋ,
0,085 М имидазол рН 6,5</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #18</td><td>
0,66 М сульфат лития,
0,66% об./об. ПЭГ 400,
0,1 М Трис-основание рН
8,5</td><td>
мелкие иглы</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #24</td><td>
6,6% об./об. ПЭГ 400,
0,165 М дигидрофосфат
калия/гидрофосфат натрия, рН 7,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #34</td><td>
13,2% об./об.
изопропанол, 4, 65%
масс./об. ПЭГ 8000, 0,1
М имидазол, рН 6,5</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #35</td><td>
6,6% об./об.
изопропанол, 4,95%
масс./об. ПЭГ 3350, 0,2
М цитрат
аммония/лимонная
кислота рН 7,5</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #39</td><td>
6,6% об./об. ПЭГ 400,
4,95% масс./об. ПЭГ
1000, 0, 15 М
дигидрофосфат
калия/гидрофосфат
натрия, рН 6, 5</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 40 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
РРТ 33% #41</td><td>
8,25% об./об. ПЭГ 400,
6/6% масс./об. ПЭГ
3350, 0,1 М хлорид
магния, 0,1 М Трисоснование рН 8,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #43</td><td>
9,9% масс./об. ПЭГ
1500, 3,3% об./об.
изопропанол, 0,1 М
хлорид кальция, 0,1 М
имидазол, рН 6,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #45</td><td>
9,9% масс./об. ПЭГ
1500, 2,64% об./об.
МРЭ, 0,1 М Трисоснование рН 8,5</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #46</td><td>
8,25% масс./об. ПЭГ
3350, 4,95% об./об.
изопропанол, 0,2 М цитрат аммония/лимонная
кислота рН 4,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 33% #48</td><td>
8,25% масс./об. ПЭГ
3350, 4,95% об./об.
ΜΡϋ, 0,2 М сульфат
лития, 0,1 М имидазол,
рН 6,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 67% #4</td><td>
1,34 М сульфат аммония,
3,35% об./об. ПЭГ 400,
0,05 сульфат магния,
0,1 М Трис-основание рН
8,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 67% #5</td><td>
2,613 М хлорид натрия,
1,34% об./об. ПЭГ 400,
0,1 М хлорид магния,
0,1 М ацетат, рН 5,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 67% #9</td><td>
1,34% об./об. ПЭГ 400, 1,34 М дигидрофосфат
калия/гидрофосфат
натрия, рН 6,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
</td><td colspan="2">
</td></tr>
<tr><td>
РРТ 67% #31</td><td>
20, 1% об./об. ΜΡϋ,
5,36% масс./об. ПЭГ 8000, 0,5 М хлорид
натрия, 0,1 М Трисоснование рН 8,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 67% #35</td><td>
13,4% об./об. изопропанол, 10,05%
масс./об. ПЭГ 3350, 0,2
М цитрат
аммония/лимонная
кислота рН 7,5</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
РРТ 67% #39</td><td>
13,4% об./об. ПЭГ 400,
10,05% масс./об. ПЭГ
1000, 0, 15 М
дигидрофосфат
калия/гидрофосфат
натрия, рН 6,5</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>Таблица 6. Дополнительные доступные для приобретения условия скрининговых тестов для получения кристаллов АЬ-30 при 4°С</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #17</td><td>
рН 5, 6, 1,26 М
дигидрофосфат натрия,
0,14 М гидрофосфат
калия</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #26</td><td>
1,1 М тартрат аммония
рН 7,0</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #28</td><td>
35% об./об. таксимат рН
7, 0</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΟΧ #33</td><td>
1,1 М малонат натрия рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН
7,0, 0,50% об./об.
джеффамин ЕЭ-2001 рН
7, 0</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
</table>
<p>- 41 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΜΙΖ I #2</td><td>
0,2 Μ ЫаС1, 0,1 Μ
ΗΕΡΕ5, 10% об./об. 2пропанол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #9</td><td>
0,1 Μ ацетат, ρΗ 4,5, 1
Μ (ΝΗ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>ΗΡΟ<sub>4</sub></td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #13</td><td>
0,1 Μ какодилат, ρΗ
6, 5, 1,26 Μ (ΝΗ<sub>4</sub>) <sub>2</sub>5Ο<sub>4</sub></td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #18</td><td>
0,2 Μ ЫаС1, 0,1 Μ
имидазол, ρΗ 8, 1Μ
тартрат К/Ыа</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #22</td><td>
0,1 Μ Трис ρΗ 8,5, 10%
об./об. 2-пропанол</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #25</td><td>
0,2 М МдС1<sub>2</sub>, 0, 1 М Трис
рН 8,5, 30% об./об.
ПЭГ-400</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #34</td><td>
0,1 М имидазол рН 8, 1
Μ (ΝΗ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>ΗΡΟ<sub>4</sub></td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #35</td><td>
0,1 М ацетат рН 4,5,
20% об./об. 1,4бутан диол</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #37</td><td>
0,1 М имидазол рН 8,
2,5 М ЫаС1</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #40</td><td>
0,2 М Са (ОАс) <sub>2</sub>/ 0, 1 М
МЕЗ рН 6,0, 10% об./об.
2-пропанол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #42</td><td>
0,1 М Трис, рН 7,0, 15%
об./об. этанол</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #43</td><td>
0,1 М фосфат Ыа/К рН
6,2, 35% об./об. 2метил-2,4-пентандиол</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ I #44</td><td>
0,2 М Са (ОАс) <sub>2</sub>/ 0, 1 М
ацетат рН 4,5, 30%
об./об. ПЭГ-400</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #46</td><td>
0, 2 М Са (ОАс) 2, 0, 1 М
имидазол, рН 7, 10%
масс./об. ПЭГ-8000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #5</td><td>
0,2 М ЫаС1, 0,1 М
НЕРЕ5, рН 7,5, 20%
об./об. 1,4-метил-2,4бутандиол</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #6</td><td>
0,2 М Ъ1<sub>2</sub>5О<sub>4</sub>, 0, 1 М
фосфат-цитрат рН 4,2,
10% об./об. 2-пропанол</td><td>
не регистрировали</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #10</td><td>
0, 1 М Трис рН 8,5, 1 М
(ΝΗ<sub>4</sub>) <sub>2</sub>НРО<sub>4</sub></td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #13</td><td>
0,2 М Ъ1<sub>2</sub>5О<sub>4</sub>, 0,1 М
цитрат, рН 5,5, 15%
об./об. этанол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #14</td><td>
0,2 М ЫаС1, 0,1 М
фосфат Ыа/К рН 6,2, 20%
масс./об. ПЭГ-1000</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #17</td><td>
0,2 М МдС1<sub>2</sub>, 0,1 М Трис,
рН 7,0, 2,5 М ЫаС1</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #20</td><td>
0, 2 Μ Ζη (ОАс) <sub>2</sub>, 0, 1 М
МЕЗ, рН 6,0, 15%
об./об. этанол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #21</td><td>
0,1 М ацетат рН 4,5,
35% об./об. 2-метил2,4-пентандиол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #22</td><td>
0, 1 М имидазол рН 8,0,
10% об./об. 2-пропанол</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #23</td><td>
0,2 М МдС1<sub>2</sub>, 0,1 Μ НЕРЕ5
рН 7,5, 15% об./об.
этанол</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #27</td><td>
0,2 М МдС1<sub>2</sub>, 0, 1 М
какодилат рН 6,5, 10%
масс./об. ПЭГ-3000</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 42 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΜΙΖ II #29</td><td>
0,2 Μ ЫаС1, 0,1 Μ СНЕ5
ρΗ 9,5, 1,26 Μ (ΝΗ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>3Ο<sub>4</sub></td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #33</td><td>
0,2 Μ ЫаС1, 0,1 Μ
цитрат ρΗ 5,5, 1 Μ
(ΝΗ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>5Ο<sub>4</sub></td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #36</td><td>
0,2 Μ ЫаС1, 0,1 Μ
фосфат-цитрат ρΗ 4,2,
10% масс./об. ПЭГ-3000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #45</td><td>
0, 1 Μ МЕЗ ρΗ 6, 0, 1,26
Μ (ΝΗ4)<sub>2</sub>3Ο<sub>4</sub></td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #46</td><td>
0,2 Μ ЫаС1, 0,1 Μ
имидазол ρΗ 8,0, 1 Μ
(ΝΗ<sub>4</sub>)<sub>2</sub>5Ο4</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #48</td><td>
0,1 Μ ΜΕ3 ρΗ 6,0, 1 Μ
тартрат К/Ыа</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #8</td><td>
0,2 Μ нитрат калия, 20%
масс./об. ПЭГ 3350</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #22</td><td>
0,1 М Трис, рН 8,5, 20%
об./об. этанол</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #23</td><td>
2% об./об. диоксан, 0,1
М бицин, рН 9,0, 10%
масс./об. ПЭГ 20000</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #24</td><td>
0,1 М ацетат натрия рН
4,6, 2 М сульфат
аммония</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #27</td><td>
0,2 М хлорид магния,
0, 1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,5,
30% об./об. ПЭГ 400</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #32</td><td>
0,04 М дигидрофосфат
калия, 16% масс./об.
ПЭГ 8000, 20% об./об.
глицерин</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #33</td><td>
0,1 М МЕЗ рН 6,5, 1,6 М
сульфат магния</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #40</td><td>
0,1 М бицин, рН 9,0,
10% об./об. ΜΡΌ</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #1</td><td>
0,2 М фторид натрия 20%
масс./об. ПЭГ 3350 рН
7,3</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #2</td><td>
0,2 М фторид калия 20%
масс./об. ПЭГ 3350 рН
7, 3</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #10</td><td>
0,2 М иодид натрия 20%
масс./об. ПЭГ 3350 рН
7,0</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #11</td><td>
0,2 М иодид калия 20%
масс./об. ПЭГ 3350 рН
7,0</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #12</td><td>
0,2 М иодид аммония 20%
масс./об. ПЭГ 3350 рН
6,2</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #13</td><td>
0,2 М тиоцианат натрия
20% масс./об. ПЭГ 3350
рН 6, 9</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #14</td><td>
0,2 М тиоцианат калия
20% масс./об. ПЭГ 3350
рН 7, 0</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #21</td><td>
0,2 М формиат натрия
20% масс./об. ПЭГ 3350
рН 7,2</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #22</td><td>
0,2 М формиат калия 20%
масс./об. ПЭГ 3350 рН
7,3</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td>
Ред-Ιοη #23</td><td>
0,2 М формиат аммония
20% масс./об. ПЭГ 3350
рН 6,6</td><td>
мелкие кристаллы</td></tr>
<tr><td colspan="2">
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
СЗ-СЕУО #36</td><td>
0,065 Трис гидрохлорид
рН 8,5, 5,2% масс./об.
полиэтиленгликоль 8000,
35% глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 43 029956</p>
<p>кристаллов АЪ-30 при комнатной температуре</p>
<p>Таблица 7. Дополнительные условия кристаллизации для получения</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #1</td><td>
19,90% изопропанол, 0,02
М фосфат Ыа-К, рН 7,5</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #2</td><td>
45,39% изопропанол</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #50</td><td>
0,40 М цитрат натрия,
0,06 М Трис-НС1, рН 7,5,
2,36% глицерин</td><td>
иглы, стержни,
блоки</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #53</td><td>
46,10% этанол, 0,03 М
ацетат натрия рН 4,5,
4,94% глицерин</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #54</td><td>
43,29% этанол, 0,01%
Твин-80</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #58</td><td>
49,65% изопропанол, 0,06
М Трис-НС1, рН 6,5</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #65</td><td>
33,74% изопропанол, 0,06
М глутаминовая кислота
рН 6,5</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #67</td><td>
39,35% изопропанол, 0,03
М ацетат натрия рН 4,5,
0,01 М ЭДТА</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #68</td><td>
38,05% изопропанол, 0,02
М фосфат Ыа-К, рН 7,5</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #70</td><td>
1,60 М ацетат натрия,
3,41% этанол</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #74</td><td>
0,29 М цитрат натрия,
0,08 М фосфат Ыа-К, рН
7,5</td><td>
иглы, блоки</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #78</td><td>
1,82 М ацетат натрия</td><td>
иглы</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #81</td><td>
13,29% этанол, 0,01%
Твин-80</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #82</td><td>
0,71 М цитрат натрия,
0,01 М гистидин рН 5,5,
6,29% глицерин</td><td>
Мелкие</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #83</td><td>
2,04 М ацетат натрия,
0,07 М Трис-НС1, рН 8,5</td><td>
мелкие иглы</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #85</td><td>
20,18% изопропанол, 0,01
гистидин рН 5,5, 0,09 М
фосфат Ыа-К</td><td>
мелкие иглы</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #88</td><td>
12,78% этанол, 0,05 М
фосфат Ыа-К, рН 5, 5,
0,01% Твин-80</td><td>
мелкие иглы</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #96</td><td>
0,38 М цитрат натрия,
0,03 М ацетат натрия, рН
6,5, 0,01% Твин-20</td><td>
иглы, блоки</td></tr>
</table>
<p>Таблица 8. Дополнительные условия кристаллизации для получения кристаллов АЪ-30 при 4°С</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #4</td><td>
0,79 м цитрат натрия, 0,01 М гистидин рН 6,5</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #5</td><td>
39,39% изспропанол, 0,8 М Трис-НС1, рН 7,5</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #10</td><td>
1,9 М ацетат натрия, 0,05 М фосфат Ца-К, рН
7,5, 7,07% изопропанол</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #11</td><td>
0,96 М фосфат Ыа-К, 0,01 М ЭДТА, 1,86%
глицерин</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #12</td><td>
0,96 М фосфат Ыа-К, 0,01 М ЭДТА, 1,86%
глицерин</td></tr>
</table>
<p>- 44 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ЗРАЗ #15</td><td>
18,90% этанол, 0,02 М ЭДТА</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #16</td><td>
0,41 М цитрат натрия, 0,10 М фосфат Ыа-К, рН
7,5, 4,12% глицерин</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #17</td><td>
1,77 М ацетат натрия, 6,00% сахароза, 0,01%
Твин-80</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #18</td><td>
1,97 М ацетат натрия</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #22</td><td>
2,31 М ацетат натрия, 0,05 М фосфат Ыа-К рН
7, 5</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #24</td><td>
1, 43 М фосфат Ыа-К, 0, 03 М цитрат натрия рН
4,5, 4,63% глицерин</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #50</td><td>
0, 40 М цитрат натрия, 0, 06 М Трис-НС1, рН
7,5, 2,36% глицерин</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #54</td><td>
43,29% этанол, 0,01% Твин-80</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #57</td><td>
0,76 М цитрат натрия, 0,01 М цитрат натрия рН
4, 5, 0, 02 М ЭДТА</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #60</td><td>
1,77 М фосфат Иа-К</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #64</td><td>
0,51 М ЫаС1, 0,06 М цитрат натрия рН 7,5</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #66</td><td>
12,13% изопропанол, 9,21% этанол, 9,24%
глицерин</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #70</td><td>
1,60 М ацетат натрия, 3,41% этанол</td></tr>
</table>
<p>Таблица 8. Дополнительные условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 при использовании !и4ех № 36 и добавок (солей) при комнатной температуре</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кри с т алли з ации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
ацетат аммония</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
</td><td colspan="2">
</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
дигидрат ацетата лития</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
тетрагидрат ацетата магния</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
ацетат цинка</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
хлорид магния</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
хлорид цинка</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
формиат магния</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
нитрат магния</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
сульфат магния</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
сульфат цинка</td><td>
стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
ацетат кальция, 10 мМ ацетат цинка</td><td>
стержни</td></tr>
</table>
<p>- 45 029956</p>
<p>Таблица 9. Дополнительные условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 при использовании 1пбех № 36 и добавок (аминокислот) при комнатной температуре</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кри с т алли з ации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
аргинин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20 мМ
аргинин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40 мМ
аргинин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80 мМ
аргинин</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 100 мМ
аргинин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 ММ
цистеин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20 мМ
цистеин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40 мМ
цистеин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80 мМ
цистеин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 100 ММ
цистеин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
метионин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20 мМ
метионин</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 46 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40 мМ
метионин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80 мМ
метионин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 100 мМ
метионин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10 мМ
пролин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20 мМ
пролин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40 мМ
пролин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80 мМ
пролин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 100 ММ
пролин</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>Таблица 10. Дополнительные условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 при использовании 1пйех № 36 и добавок (криопротекторов) при комнатной температуре</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1м
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 47 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ινόχ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 15%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 25%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 30%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40%
этиленгликоль</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
глицерин</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 48 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0/ 0/1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
сахароза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 49 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 15%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20%
трегалоза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 15% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20% ксилит</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>Таблица 11. Дополнительные условия кристаллизации для получения кристаллов АЬ-30 при использовании Ιηάβχ № 36 и добавок (различное процентное содержание полисорбата 20) при комнатной температуре</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации</td><td>
Морфология
кристаллов</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,05%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,10%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,15%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 50 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 Μ
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,20%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,25%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,30%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,35%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,40%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,45%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН 7,0, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 0,50%
полисорбат 20</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>Кристаллы АЬ-30 с различной морфологией можно вырастить при масштабируемых условиях, при которых антитело в жидкой композиции добавляют к объему известного реагента для кристаллизации и хранят в герметичном контейнере. Кристаллы АЬ-30 можно вырастить при этих условиях в течение менее 24 ч, при комнатной температуре или температурах холодильника (4°С) и, как было показано, данные кристаллы обеспечивают медленное высвобождение и высокий выход.</p>
<p>Показано, что кристаллы АЬ-30, полученные при некоторых из условий, приведенных в таблицах 111, выдерживали хранение при 4°С в течение более 6 месяцев, а при комнатной температуре (КТ) - в течение 21 месяца (1п4ех № 36 и различные концентрации криопротекторов), 22 месяцев (1п4ех № 36 и аминокислоты), 32 месяцев (1п4ех № 36 и соли) и 25 месяцев (1п4ех № 36 с различным процентным содержанием полисорбата 20). Типичные условия кристаллизации для получения таких кристаллов АЬ-30 и продолжительность хранения при 4°С и при комнатной температуре приведены ниже в табл. 12 и 13 соответственно.</p>
<p>Таблица 12</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кристаллизации</td><td>
У ело вия крис т аллиз ации</td><td>
Продолжительность
хранения при 4°С</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #22</td><td>
0,1 М Трис рН 8,5, 10%
об./об. 2-пропанол</td><td>
9 мес.</td></tr>
<tr><td>
№ΙΖ I #9</td><td>
0,1 М ацетат, рН 4,5, 1М
(ΝΗ<sub>4</sub>) <sub>2</sub>НРО<sub>4</sub></td><td>
9 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #42</td><td>
0,1 М Трис, рН 7,0, 15%
об./об. этанол</td><td>
10 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #40</td><td>
0,1 М бицин, рН 9,0, 10%
об./об. ΜΡΏ</td><td>
10 мес.</td></tr>
</table>
<p>Таблица 13</p>
<table border="1">
<tr><td>
С кринин г о вый
тест
кристаллизации</td><td>
Условия кристаллизации при
комнатной температуре</td><td>
Продолжительность
хранения при
комнатной
температуре</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<p>- 51 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
этиленгликоль</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
этиленгликоль</td><td>
21 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
этиленгликоль</td><td>
21 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
этиленгликоль</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 15%
этиленгликоль</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 25%
этиленгликоль</td><td>
21 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 30%
этиленгликоль</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΟΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 35%
этиленгликоль</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40%
этиленгликоль</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΟΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΟΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΟΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΟΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<p>- 52 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
глицерин</td><td>
21 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
глицерин</td><td>
21 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
глицерин</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
сахароза</td><td>
21 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
сахароза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<p>- 53 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ ΗΕΡΕ5, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 6%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 8%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ ΗΕΡΕ5, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 15%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20%
трегалоза</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 1%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 2%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 3%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 Μ НЕРЕ5, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 4%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
</table>
<p>- 54 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 5%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 7%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 9%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 15%
ксилит</td><td>
21 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20
мМ аргинин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80
мМ аргинин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7, 0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80
мМ цистеин</td><td>
22 мес.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0, 1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 100
мМ цистеин</td><td>
2 2 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ метионин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40
мМ метионин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0, 1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80
мМ метионин</td><td>
2 2 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0, 1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 100
мМ метионин</td><td>
2 2 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ пролин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 20
мМ пролин</td><td>
2 2 ме с.</td></tr>
</table>
<p>- 55 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 40
мМ пролин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 80
мМ пролин</td><td>
22 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,05% полисорбат 20</td><td>
25 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,10% полисорбат 20</td><td>
2 5 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,15% полисорбат 20</td><td>
2 5 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,20% полисорбат 20</td><td>
25 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,25% полисорбат 20</td><td>
2 5 ме с.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,30% полисорбат 20</td><td>
25 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,35% полисорбат 20</td><td>
2 5 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,40% полисорбат 20</td><td>
2 5 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,45% полисорбат 20</td><td>
25 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350,
0,50% полисорбат 20</td><td>
25 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350</td><td>
2 6 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ ацетат цинка</td><td>
31 мес.</td></tr>
</table>
<p>- 56 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝΕΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ тетрагидрат ацетата
магния</td><td>
32 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ нитрат магния</td><td>
32 мес.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ сульфат магния</td><td>
3 2 ме с.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 Μ НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350, 10
мМ сульфат цинка</td><td>
3 2 ме с.</td></tr>
<tr><td>
пэгскрининговый
тест 1пбех #36</td><td>
15% об./об. таксимат рН
7,0, 0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,0,
2% масс./об.
полиэтиленгликоль 3350</td><td>
4 года и 3 месяца
- Лоток вначале
установили при
4°С и хранили при
КТ в течение
последних 6
месяцев</td></tr>
</table>
<p>В вышеизложенном примере показано, что АЬ-30 кристаллизовалось при различных условиях кристаллизации, но кристаллы образовывались не при любых протестированных условиях. Протестировано приблизительно 2000 условий кристаллизации с рядом различных доступных для приобретения (т.е. Нашр1оп КезеагсГ, ЕшегаЫ Вюзшепсе) и специально разработанных скрининговых тестов, однако кристаллы АЬ-30 получали лишь приблизительно при 775 условиях.</p>
<p>Пример 2. Массовая кристаллизация АЬ-30</p>
<p>50 мкл АЬ-30 при концентрации 75,7 мг/мл смешивали с 50 мкл раствора, соответствующего условиям кристаллизации (скрининговый тест ОКА8, скрининговый тест 1пбех, скрининговый тест Шы.агс! I, скрининговый тест Шы.агс! II и скрининговый тест Шы.агс! III), получая объем партии, равный в общей сложности 100 мкл в 1,5-мл микроцентрифужной пробирке. 40 мкл АЬ-30 (75,7 мг/мл) смешивали с 20 мкл буферов с низкой ионной силой Ι.ο\ν Ыопю 81геп§1Г 8сгееп и с 50 мкл 4% ПЭГ-3350, получая объем партии, равный в общей сложности 110 мкл. Использовали условия кристаллизации, описанные ниже в табл. 14.</p>
<p>Таблица 14</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый
тест
кри с т алли з ации</td><td>
Условия
кристаллизации</td><td>
£
эффективности</td><td>
Морфология</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 1</td><td>
Изопропанол, 19,9%,
фосфат Ыа-К, 0, 02 М,
рН 7, 5</td><td>
85,783</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 2</td><td>
Изопропанол, 45,39%</td><td>
н. д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 50</td><td>
Цитрат Ыа, 0,40 М,
Трис-НС1, 0,06 М, рН
7,5, глицерин, 2,36%</td><td>
70, 012</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 53</td><td>
Этанол, 46,10%,
глутаминовая
кислота, 0,03 М, рН
4,5, глицерин, 4,94%</td><td>
н. д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 54</td><td>
Этанол, 43,29%,
Твин-80, 0,01%</td><td>
н. д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 58</td><td>
Изопропанол, 49,65%,
Трис-НС1, 0,06 М, рН
б, 5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 65</td><td>
Изопропанол, 33,74%,
глутаминовая
кислота, 0,06 М, рН
6, 5</td><td>
н. д.</td><td>
н.д.</td></tr>
</table>
<p>- 57 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
СКАЗ 67</td><td>
Изопропанол, 39,35%,
глутаминовая
кислота, 0,03 М, рН
4,5, ЭДТА, 0,01 М</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 68</td><td>
Изопропанол, 38,05%,
фосфат Иа-К, 0, 02 М,
рН 7,5</td><td>
77,647</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 70</td><td>
Ацетат Иа, 1,60 М,
этанол, 3,41%</td><td>
69,462</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 74</td><td>
Цитрат Ца, 0,29 М,
фосфат Ыа-К, 0,08 М,
рН 7,5</td><td>
73, 229</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 78</td><td>
Ацетат Ыа, 1,82 М</td><td>
73, 561</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 81</td><td>
Этанол, 13,29%,
Твин-80, 0,01%</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 82</td><td>
Цитрат Ыа, 0,71 М,
гистидин, 0,01 М, рН
5,5, глицерин, 6,29%</td><td>
82,633</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 83</td><td>
Ацетат Ыа, 2,04 М,
Трис-НС1, 0,07 М, рН
8, 5</td><td>
67,999</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 85</td><td>
Изопропанол, 20,18%,
гистидин, 0,01 М, рН
5,5, фосфат Ца-К,
0,09 М</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 88</td><td>
Этанол, 12,78%,
фосфат Ыа-К, 0, 05 М,
Твин-80, 0,01%</td><td>
72, 536</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ 96</td><td>
Цитрат Ыа, 0,38 М,
ацетат Иа, 0,03 М,
рН 6, 5, Твин-20,
0,01%</td><td>
75, 029</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #17</td><td>
1,4 моногидрат
дигидрофосфата
натрия/гидрофосфат
калия, рН 5,6</td><td>
53, 209</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #18</td><td>
1,4 моногидрат
дигидрофосфата
натрия/гидрофосфат
калия, рН 6,9</td><td>
79, 667</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #22</td><td>
0,8 М янтарная
кислота, рН 7,0</td><td>
82,371</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #24</td><td>
2,8 тригидрат
ацетата натрия, рН
7,0</td><td>
76, 762</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #26</td><td>
1,1 М двухосновный
тартрат аммония, рН
7,0</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #28</td><td>
35% об./об.
таксимат, рН 7,0</td><td>
83,178</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #30</td><td>
0,1 М хлорид натрия,
0,1 М бис-Трис, рН
6,5, 1,5 М сульфат
аммония</td><td>
70, 106</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #31</td><td>
0,8 М тетрагидрат
тартрата натриякалия, 0,1 М Трис,
рН 8,5, 0,5%
масс./об.
монометиловый эфир
полиэтиленгликоля
5000</td><td>
79, 394</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 58 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #33</td><td>
1,1 Μ малонат
натрия, ρΗ 7,0, 0,1
Μ НЕРЕЗ, ρΗ 7,0,
0,5% об./об.
джеффамин ЕР-2001,
рН 7,0</td><td>
85,613</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #34</td><td>
1,0 янтарная
кислота, рН 7,0, 0,1
М НЕРЕЗ, рН 7, 0, 1%
масс /об.
монометиловый эфир
полиэтиленгликоля
2000</td><td>
87,384</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #35</td><td>
1,0М сульфат
аммония, 0, 1 М
НЕРЕЗ, рН 7,0, 0,5%
масс./об. ПЭГ-8000</td><td>
51,844</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΏΧ #36</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350</td><td>
76, 235</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-1</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350</td><td>
52,485</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-2</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
ацетат аммония</td><td>
70, 246</td><td>
Крошечные
кристаллы</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36-3</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
дигидрат ацетата
лития</td><td>
66, 129</td><td>
Эллипсоиды
(мелкие)</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36-4</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
тетрагидрат ацетата
магния</td><td>
57,306</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36-5</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7,0, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
ацетат цинка</td><td>
50,297</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-6</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7,0, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
хлорид магния</td><td>
51,951</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-7</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7,0, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
хлорид цинка</td><td>
48,838</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΡΧ #36-8</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7,0, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
формиат магния</td><td>
62,074</td><td>
Эллипсоиды
(мелкие)</td></tr>
</table>
<p>- 59 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-9</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
нитрат магния</td><td>
49, 246</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36-10</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
сульфат магния</td><td>
70, 490</td><td>
Крошечные
кристаллы</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-11</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
сульфат цинка</td><td>
54,408</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝΌΧ #36-12</td><td>
15% об./об. таксимат
рН 7, 0, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,0, 2% масс./об.
ПЭГ-3350, 10 мМ
ацетат кальция и
ацетат цинка</td><td>
64,613</td><td>
Эллипсоид</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #2</td><td>
10% об./об. 2пропанол, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,5, 0, 2 М
№01</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #9</td><td>
1,0 М гидрофосфат
аммония, 0,1 М
ацетат, рН 4,5</td><td>
48,48</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #12</td><td>
20% масс./об. ПЭГ1000, 0, 1 М
имидазол, рН 8,0,
0,2 М ацетат кальция</td><td>
47,87</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #13</td><td>
1,26 М сульфат
аммония, 0,1 М
какодилат, рН 6,5</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #18</td><td>
1,0 М тартрат К-Ыа,
0,1 М имидазол, рН
8,0, 0,2 М ЫаС1</td><td>
62, 14</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #22</td><td>
10% об./об. 2пропанол, 0,1 М
Трис, рН 8,5</td><td>
н. д.</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #26</td><td>
10% масс./об. ПЭГ3000, 0,1 М СНЕЗ, рН
9, 5</td><td>
48,04</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #29</td><td>
10% масс./об. ПЭГ8000, 0,1 М СНЕЗ, рН
9,5, 0,2 М ЫаС1</td><td>
87,73</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #30</td><td>
1,26 М сульфат
аммония, 0,1 М
ацетат, рН 4,5, 0,2
М ЫаС1</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #35</td><td>
20% об./об. 1, 4бутандиол, 0,1 М
ацетат, рН 4,5</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #37</td><td>
2,5 М ЫаС1, 0,1 М
имидазол, рН 8,0</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #39</td><td>
20% масс./об. ПЭГ1000, 0,1 М фосфатцитрат, рН 4,2, 0,2
М сульфат лития</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #42</td><td>
15% об./об. этанол,
0,1 М Трис, рН 7, 0</td><td>
н. д.</td><td>
н. д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #46</td><td>
10% масс./об. ПЭГ8000, 0,1 М
имидазол, рН 8,0,
0,2 М ацетат кальция</td><td>
91,46</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #10</td><td>
1,0 М гидрофосфат
аммония, 0,1 М Трис,
рН 8, 5</td><td>
49, 026</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
</table>
<p>- 60 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
ΝΙΖ II #12</td><td>
30% об./об. ПЭГ-400,
какодилат, рН 6,5,
0,2 М сульфат лития</td><td>
59,491</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #13</td><td>
15% об./об. этанол,
0,1 М цитрат, рН
5,5, 0,2 М сульфат
лития</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #14</td><td>
20% масс./об. ПЭГ1000, 0,1 М фосфат
Ыа/К, рН 6,2, 0,2 М
ЫаС1</td><td>
90,258</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #15</td><td>
1,26 М сульфат
аммония, 0,1 М
НЕРЕЗ, рН 7,5</td><td>
64,775</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #21</td><td>
35% об./об. 2-метил2,4-пентандиол, 0,1
М ацетат, рН 4,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #22</td><td>
10% об./об. 2пропанол, 0,1 М
имидазол, рН 8,0</td><td>
80,572</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #25</td><td>
35% об./об. 2-метил2,4-пентандиол, 0,1
М НЕРЕЗ, рН 7, 5, 0, 2
М ЫаС1</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #26</td><td>
30% об./об. ПЭГ-400,
0,1 М СНЕ5, рН 9, 5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #27</td><td>
10% масс./об. ПЭГ3000, 0,1 М
какодилат, рН 6,5,
0,2 М хлорид магния</td><td>
54,811</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ II #30</td><td>
20% об./об. 1,4бутандиол, 0,1 М
имидазол, рН 8,0,
0,2 М ацетат цинка</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ΝΙΖ II #32</td><td>
20% масс./об. ПЭГ1000, 0, 1 Μ Трис, рН
8,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ν?ΙΖ II #37</td><td>
1,0 Μ тартрат К/Ыа,
0,1 М Трис, рН 7,0,
0,2 М сульфат лития</td><td>
74,353</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
νίΐζ II #38</td><td>
2,5 М ЫаС1, 0,1 М
ацетат, рН 4,5, 0,2
М сульфат лития</td><td>
Н.Д.</td><td>
Н.Д.</td></tr>
<tr><td>
№ΙΖ II #42</td><td>
30% об./об. ПЭГ-400,
0,1 М НЕРЕЗ, рН 7,5,
0,2 М ЫаС1</td><td>
82,982</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ II #43</td><td>
10% масс./об. ПЭГ8000, 0,1 М Трис, рН
7,0, 0,2 М хлорид
магния</td><td>
91,443</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #13</td><td>
8% масс./об. ПЭГ4000, 0,1 М ацетат
натрия, рН 4,65</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #22</td><td>
20% об./об. этанол,
0,1 М Трис, рН 8,5</td><td>
51,597</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #25</td><td>
10% масс./об. ПЭГ100, 10% масс./об.
ПЭГ-8000</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #28</td><td>
70% об./об. ΜΡΏ, 0,1
М НЕРЕЗ, рН 7, 5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #29</td><td>
40% об./об. ΜΡΏ, 0,1
М Трис, рН 8,0</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #35</td><td>
14,4% масс./об. ПЭГ8000, 0,8 М
какодилат, рН 6,5,
0,16 М ацетат
кальция, 20% об./об.
глицерин</td><td>
92,195</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
</table>
<p>- 61 029956</p>
<table border="1">
<tr><td>
νιζ ΐΐΐ #36</td><td>
30% об./об.
джеффамин М-600*, рН
7,0, 0,1 М МЕЗ, рН
6,5, 0,05 хлорид
цезия</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
№ΙΖ III #38</td><td>
15% масс./об. ПЭГ10000, 0, 1 М цитрат,
рН 5, 5, 2% об./об.
диоксан</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
№ΙΖ III #39</td><td>
20% об./об.
джеффамин М600*, рН
7, 0, 0, 1 М НЕРЕЗ, рН
7,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ III #40</td><td>
10% об./об. ΜΡϋ, 0,1
М Оицин, рН 9,0</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #41</td><td>
28% масс./об. ПЭГ400, 0,1 М НЕРЕЗ, рН
7,5, 0,2 М хлорид
кальция</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ III #42</td><td>
30% масс./об. ПЭГ4000, 0,1 М Трис, рН
8,5, 0,2 М сульфат
лития</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
№ΙΖ III #46</td><td>
50% об./об. ΜΡϋ, 0,1
М Трис, рН 8,5, 0,2
М хлорид аммония</td><td>
Н.д.</td><td>
Н.д.</td></tr>
<tr><td>
ΝΙΖ III #48</td><td>
20% масс./об. ПЭГ10000, 0,1 М НЕРЕЗ,
рН 7,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #1</td><td>
0,5 М хлорид калия,
4% ПЭГ-3350, рН 2</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #2</td><td>
0,05 М лимонная
кислота, 4% ПЭГ3350, рН 3</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ЫЗЗ #3</td><td>
0,05 М лимонная
кислота, 4% ПЭГ3350, рН 3,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #4</td><td>
0,05 М лимонная
кислота, 4% ПЭГ3350, рН 4</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #5</td><td>
0,05 М лимонная
кислота, 4% ПЭГ3350, рН 4,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #6</td><td>
0,05 М лимонная
кислота, 4% ПЭГ3350, рН 5</td><td>
87,632</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #7</td><td>
0,05 М лимонная
кислота, 4% ПЭГ3350, рН 5, 5</td><td>
88,526</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #8</td><td>
0,05 М МЕЗ, 4% ПЭГ3350, рН 6</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #9</td><td>
0,05 М бис-Трис, 4%
ПЭГ-3350, рН 6,5</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #10</td><td>
0,05 М имидазол, 4%
ПЭГ-3350, рН 7</td><td>
78,786</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #11</td><td>
0,05 М НЕРЕЗ, 4%
ПЭГ-3350, рН 7,5</td><td>
н.д.</td><td>
Сильное
осаждение</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #12</td><td>
0,05 М Трис, 4% ПЭГ3350, рН 8</td><td>
н.д.</td><td>
Сильное
осаждение</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #13</td><td>
0,05 М Трис, 4% ПЭГ3350, рН 8,5</td><td>
н.д.</td><td>
Сильное
осаждение</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #14</td><td>
0,05 М глицин, 4%
ПЭГ-3350, рН 9</td><td>
н.д.</td><td>
н.д.</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #15</td><td>
0,05 М глицин, 4%
ПЭГ-3350, рН 9,5</td><td>
н.д.</td><td>
Среднее
осаждение</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #16</td><td>
0,05 М глицин, 4%
ПЭГ-3350, рН 10</td><td>
н.д.</td><td>
Сильное
осаждение</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
ЫЗЗ #17</td><td>
0,05 М гидрофосфат
натрия, 4% ПЭГ-3350,
рН 11</td><td>
н.д.</td><td>
Сильное
осаждение</td></tr>
<tr><td>
ЫЗЗ #18</td><td>
0,05 М гидрофосфат
натрия, 4% ПЭГ-3350,
рН 11</td><td>
Н.Д.</td><td>
Стержни</td></tr>
</table>
<p>- 62 029956</p>
<p>АЪ-30 массово кристаллизовалось в общей сложности при 104 условиях, демонстрируя диапазон процентного выхода 40%-92% при комнатной температуре (см. табл. 14). Все указанные условия характеризовались образованием кристаллов при комнатной температуре за счет диффузии паров в висячей капле, но не при всех из них происходила массовая кристаллизация. Из 104 условий для массовой кристаллизации лишь 8 условий характеризовались выходом более 85% в первый день при комнатной температуре (т.е. ΙΝΏΧ #34, νΙΖ I #46, νΙΖ II #43, νΙΖ II #14, νΙΖ III #35 и ОРА8 1). Наибольший выход, достигавшийся для кристаллов АЪ-30, составил 92,195% для νΙΖ #35 в первый день. Выход кристаллов менялся в зависимости от условий роста кристалла. АЪ-30 кристаллизовалось как при комнатной температуре, так и при 4°С, однако лишь при комнатной температуре образование кристаллов рассматривали с точки зрения эффективности кристаллизации при комнатной температуре.</p>
<p>Пример 3. Массовая кристаллизация АЬ-30, суспензия и исследования растворимости</p>
<p>200 мкл АЪ-30 (75,7 мг/мл) смешивали с 200 мкл раствора, соответствовавшего условиям кристаллизации (как описано ниже в табл. 15) в 1,5-мл микроцентрифужной пробирке при комнатной температуре. Пробирку встряхивали после добавления раствора, соответствовавшего условиям кристаллизации, и визуально проверяли на прозрачность, опалесценцию или образование осадка. Для каждой микроцентрифужной пробирки при каждом тестируемом условии кристаллизации делали снимки в день 0 и день 1 с помощью микроскопа Ζе^кк. оснащенного программным обеспечением Ахюсат. Регистрировали морфологию полученных кристаллов при каждом условии кристаллизации. Кристаллы собирали на 3 день для всех трех исследованных скоростей растворения независимо от времени, потребовавшегося для достижения высокого процента выхода для индивидуального состояния, за исключением исследования 4 (растворение кристаллов в зависимости от упаковки кристалла, при котором кристаллы собирали на 8 день).</p>
<p>Кристаллы осаждали центрифугированием при 10000 об/мин в течение 15 мин, супернатант удаляли, а кристаллы ресуспендировали в различных средах-носителях (как описано ниже в табл. 15). Микроцентрифужные пробирки хранили при комнатной температуре в течение эксперимента. Процент выхода измеряли с помощью УФ-спектроскопии как А280 нм. Микроцентрифужные пробирки центрифугировали на настольной центрифуге при 10000 об/мин в течение 15 мин. Осуществляли разведение 1:100 в воде и считывали А280 на УФ-спектрофотометре.</p>
<p>Таблица 15</p>
<table border="1">
<tr><td>
№
исследования</td><td>
Условия
крис т а ллиз ации</td><td>
Суспензионная
среда-носитель</td><td>
Морфология</td></tr>
<tr><td rowspan="5">
1</td><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
Вода</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
10 мМ ацетат, 9%
сахароза и 0,004%
Р520, рН 5,2</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
Физиологический
раствор</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td rowspan="5">
2</td><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
0,05 Μ НЕРЕЗ, рН
7,5, 20% ПЭГ-350</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
0,05 М НЕРЕЗ, рН
8,0, 20% ПЭГ-350</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
0,05 М НЕРЕЗ, рН
8,5, 20% ПЭГ-350</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
10 мМ глутамат,
5% сорбит, рН 4,8</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36</td><td>
10 мМ глутамат,
5% сорбит, рН 5,0</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
</table>
<p>- 63 029956</p>
<table border="1">
<tr><td rowspan="7">
3</td><td>
ΉΙΖ III #35</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #88</td><td>
РВЗ</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΉΙΖ I #26</td><td>
РВЗ</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
Ред Ιοη #1</td><td>
РВЗ</td><td>
осаждение</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #1</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #82</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #83</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td rowspan="13">
4</td><td>
ΙΝϋΧ #36-1</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-2</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36+10 мМ
ацетат кальция</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-3</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-4</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-5</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-12</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-6</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-7</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-8</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-9</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-10</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ΙΝϋΧ #36-11</td><td>
РВЗ</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td rowspan="7">
5</td><td>
ΝΙΖ III #35*</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #88*</td><td>
Декстроза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
ΜΙΖ I #26*</td><td>
Декстроза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #1*</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
СКАЗ #82*</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
ЗРАЗ #83*</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
ΤίΙΖ III #35**</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды</td></tr>
</table>
<table border="1">
<tr><td>
</td><td>
СРАЗ</td><td>
#88**</td><td>
Декстроза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
ΜΙΖ I</td><td>
#26**</td><td>
Декстроза</td><td>
Стержни</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
СРАЗ</td><td>
#1**</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
(ЗРАЗ</td><td>
#82**</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
СРАЗ</td><td>
#83**</td><td>
Декстроза</td><td>
Эллипсоиды
(крошечные)</td></tr>
</table>
<p>Растворение кристаллов и суспензионные среды-носители: Эксперименты по скорости растворения в исследованиях 1-4 выполняли при комнатной температуре. Образцы для экспериментов по скорости растворения для исследования 5, отмеченные звездочкой (*), хранили при 4°С, а образцы для исследования 5, отмеченные двумя звездочками (**), хранили при 37°С. В исследовании № 1 и № 2 условия роста кристаллов были постоянны и представляли собой Натр1оп Кекеагсй Ιηάβχ §сгееп #36; кристаллы ресуспендировали в различных средах-носителях для мониторинга скорости растворения кристаллов. 1пйех #36 выбрали в качестве условий роста, поскольку он обеспечивал очень легкое образование кристаллов. В исследовании № 3 условия роста и морфология кристаллов менялись, однако суспензионную средуноситель для кристаллов, РВ§, последовательно использовали для всех условий.</p>
<p>А52§иТ (10 мм ацетат, 9% сахароза, 0,004% полисорбат 20, рН 5,2), физиологический раствор и РВ§ показали наибольшие различия в скорости растворения. Вода и декстроза не проявляли значительной активности растворения после 42 дней по сравнению с Т=0. Таким образом, вода и декстроза являлись идеальными средами-носителями для промывки кристаллов АЬ-30, обеспечивавшими отсутствие значительной потери кристаллов во время этапа промывки. Буферы с низкой ионной силой Ьо\у 1отс ШгепшП 8сгееп 0,05 М НЕРЕ8 рН 7,5, 20% ПЭГ-3350, 0,05 М Трис рН 8,0, 20% ПЭГ-3350, 0,05 М Трис, рН 8,5, 20% ПЭГ-3350 демонстрировали чрезвычайно низкие скорости растворения, практически близкие к исходному уровню в течение месяца. Одна из причин медленного растворения кристаллов в ука- 64 029956</p>
<p>занных буферах может быть обусловлена покрытием кристаллов 20% ПЭГ-3350. 10 мМ глутамат, 5% сорбит при рН 4,8 и 10 мМ глутамат, 5% сорбит при рН 5,0 показали скорость растворения приблизительно 1 мг/мл, аналогичную скоростям растворения в воде и декстрозе в исследовании № 1. Буферы А528иТ, физиологический раствор, декстроза, РВ8 и 10 мМ глутамат являлись изотоническими и пригодными для инъекций (см. фигуры 3 и 4).</p>
<p>Растворение кристаллов и морфология кристаллов: В исследовании № 3 условия роста и морфология кристаллов были различными, в то время как суспензионная среда-носитель РВ8 была одинакова для всех условий. Рассматривали в общей сложности четыре различных морфологии: эллипсоиды, стержни, осадок и крошечные эллипсоиды. Растворение кристаллов в мг/мл различалось в зависимости от морфологии кристаллов, но в целом все морфологии демонстрировали аналогичную картину растворения с пиком растворения в день 12. На основе полученных профилей растворения можно сделать вывод о том, что растворение кристаллов зависит от морфологии кристаллов, размера кристаллов, условий роста кристаллов и даже упаковки кристаллов.</p>
<p>Растворение кристаллов и упаковка кристаллов: В исследовании № 4 условия роста кристаллов были различными, в то время как морфология кристаллов и суспензионная среда-носитель (РВ8) совпадали при всех условиях. АЬ-30 выращивали в 1пбех36 с различными добавками (10 мМ солями). Данные для этого исследования показывают, что различные катионы и анионы в составе добавок оказывают влияние на упаковку кристаллов (фиг. 5А-5Р). Из всех добавок соли цинка продемонстрировали наименьшее растворение, что показывает, что цинк можно добавлять для обеспечения эффекта замедленного высвобождения. Хлорид цинка продемонстрировал наименьшее растворение по сравнению с другими солями цинка, в то время как нитрат магния продемонстрировал наименьшее растворение среди солей магния.</p>
<p>Растворение кристаллов в зависимости от температуры и морфологии кристаллов: В исследовании № 5 условия роста кристаллов, морфология кристаллов, температура хранения кристаллов была различной, однако суспензионная среда-носитель декстроза - была одинаковой для всех условий. Кристаллы ресуспендировали в декстрозе, хранили при 4°С и 37°С и выполняли мониторинг скоростей растворения в течение 9 дней. Скорости растворения кристаллов в основном не зависели от температуры (за исключением ΑΙΖ III #35, при котором скорость растворения была выше при 37°С по сравнению с 4°С) или морфологии, как ожидалось. Вместо этого скорости растворения были связаны с условиями роста кристаллов. Тенденция скоростей растворения была аналогичной независимо от температуры для определенных условий роста кристаллов (фиг. 6А и 6В). Это могло не соблюдаться для всех кристаллов АЬ-30, выращенных в различных условиях и ресуспендированных в одинаковых или различных суспензионных средах-носителях при различных температурах.</p>
<p>Таким образом, растворение кристаллов зависело от более чем одного фактора, а именно, раствора роста кристалла и его компонентов, формы, размера, длины, морфологии кристаллов, суспензионной среды-носителя кристаллов, температуры и/или упаковки кристаллов. Один или более из вышеперечисленных факторов можно изменять в различных комбинациях для получения различных видов (жидких, твердых или суспензий) составов.</p>
<p>Пример 4. Анализ содержания белка в кристаллах АЬ-30</p>
<p>Соли часто присутствуют в образце или растворителе, и могут образовывать кристаллы при попытках кристаллизации. Один популярный способ различения роста кристаллов солей от исследуемых кристаллов-мишеней заключается в воздействии красителя, например, ИТ™, производимого НатрЮп КекеагсН, Лагуна-Нигуэль, штат Калифорния, США. Краситель ИТ™ окрашивает кристаллы белка в синий цвет, но не окрашивает кристаллы солей.</p>
<p>Путем окрашивания (краситель ИТ™; Натр1оп Кекеагсй) было подтверждено, что кристаллы АЬ30, полученные в условиях кристаллизации 15% об./об. таксимат, рН 7,0, 0,1 М НЕРЕ8, рН 7,0, 2% мас./об. полиэтиленгликоль 8000, являлись кристаллами белка и были зарегистрированы как события кристаллизации.</p>
<p>Пример 5. Состав кристаллического антитела против склеростина</p>
<p>Настоящий пример иллюстрирует состав на основе кристаллов антитела против склеростина, включающих высокую концентрацию белка с возможностью медленного высвобождения, с использованием антитела против склеростина, включающего тяжелые и легкие цепи АЬ-30Кт, приведенные в 8ЕО ГО N0: 19 и 21 соответственно.</p>
<p>Вкратце, выполнили скрининг в общей сложности 108 условий кристаллизации на АЬ-30Кт с использованием буферов Бои йтс 81гепд1Б 8сгееп (Натк е1 а1., (1995) Сгук1а1П/а1юп о£ иНас! топос1опа1 апйЬоб1ек, РгоЮтк: 81гис1иге, Рипсйоп апб Сепебск 23, 285-289; НатрЮп Кекеагсб, Алисо-Вьехо, штат Калифорния, США). Два условия свели к составу на основе рН, осмоляльности, ингредиентов для инъекций и эффективности по проценту кристаллизации. Успешно получили состав для кристаллов АЬ-30Кт, пригодный для подкожных инъекций при исследовании животных.</p>
<p>Материалы и способы</p>
<p>Диффузия паров в висячей капле и визуальный осмотр событий получения белковых кристаллов:</p>
<p>Кристаллы АЬ-30Кт выращивали способом диффузии паров в висячей капле с использованием 24- 65 029956</p>
<p>луночных планшетов ΥΟΧ с герметиком (Натр1оп КекеатсЬ, Алисо-Вьехо, штат Калифорния, США (НК3-170)). 1 мл влагопоглотителя 24% ПЭГ-3350 вносили пипеткой в раствор в лунке. На покровное стекло (НК3-233, силиконизированные покровные стекла диаметром 22 мм и толщиной 0,22 мм: Натрΐοη КекеатсВ, Алисо-Вьехо, штат Калифорния, США) добавляли 4 мкл 4 мг/мл ЛЬ-30Кт в А5§иТ (10 мМ ацетат натрия (из уксусной кислоты), 9% сахароза, 0,004% полисорбат 20, рН 5,0) +2 мкл буфера Ьоу 1оп1с 81тепдф Вийет + 5 мкл х% ПЭГ-3350 до конечного объема 11 мкл. Покровное стекло переворачивали без перемешивания капли и помещали на герметик с зазором, образуя воздухонепроницаемое уплотнение. В эксперименте по диффузии паров в висячей капле при достижении равновесия между каплей и раствором в лунке образовывались кристаллы.</p>
<p>В общей сложности создали 108 условий с использованием буферов Ьоу 1отс 8йепдф §стееп (Ы88) (НК2-120, Натр1оп КекеатсВ). Ы§§ представлял собой трехчастный скрининговый тест кристаллизации с 18 буферами в диапазоне рН 2-12, 6 различными процентными концентрациями осадителя ПЭГ-3350 и 24% РЕС-3350 в качестве влагопоглотителя. См. табл. 16 ниже.</p>
<p>Таблица 16</p>
<table border="1">
<tr><td>
Скрининговый тест Ы55</td><td colspan="6">
Концентрация ПЭГ</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
4%</td><td>
8 δ</td><td>
12%</td><td>
16%</td><td>
20%</td><td>
24%</td></tr>
<tr><td>
0,05 М хлорид калия, рН 2</td><td>
</td><td>
</td><td>
С</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М лимонная кислота, рН 3</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М лимонная кислота, рН 3,5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М лимонная кислота, рН 4</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М лимонная кислота, рН 4,5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М лимонная кислота, рН 5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М лимонная кислота, рН 5,5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М МЕЗ, рН б</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М бис-Трис, рН 6,5</td><td>
</td><td>
С</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М имидазол, рН 7</td><td>
</td><td>
С</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М НЕРЕЗ, рН 7,5</td><td>
</td><td>
С</td><td>
с</td><td>
</td><td>
с</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М Трис, рН 8</td><td>
</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
С</td></tr>
<tr><td>
0,05 М Трис, рН 8,5</td><td>
</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М глицин, рН 9</td><td>
</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
с</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М глицин, рН 9,5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М глицин, рН 10</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М гидрофосфат натрия, рН 11</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
0,05 М гидрофосфат натрия, рН 12</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
</table>
<p>С = получение кристаллов</p>
<p>Лотки для кристаллов сканировали каждый день в течение недели, а затем раз в неделю, используя микроскоп Саг1 2е188 Фени §У11, оснащенный программным обеспечением Ахюу18оп 4.0. Образование кристаллов регистрировали и характеризовали с помощью стационарной системы оценки кристаллов и описания морфологии.</p>
<p>Следующие два набора условий являлись типичными условиями для состава кристаллов антител: (а) А5§иТ + 0,05 М Трис, рН 8,0 + 22% ПЭГ-3350 (конечный рН приблизительно 7,2, осмотическое давление 340 мосмоль/кг, % эффективности 95%); (Ь) А5§иТ + 0,05 М Трис, рН 8,0 + 24% ПЭГ-3350 (конечный рН приблизительно 7,2, осмотическое давление 412 мосмоль/кг, % эффективности 99%).</p>
<p>Измерение рН: рН измеряли с помощью рН-метра Мей1ет То1ейо МР230 и калибровали по стандартным буферам с рН 4,0 и рН 7,0. Для измерения рН получали образец путем добавления 40 мкл белка, 20 мкл буфера Ь188 и 50 мкл ПЭГ-3350 с соответствующим процентным содержанием в пробирку Эппендорфа и встряхивания.</p>
<p>Осмоляльность: Осмоляльность измеряли с помощью многоканального осмометра Лйуапсей 1п81гитеп18 2020, Норвуд, штат Массачусетс, США. Указанный прибор измерял осмоляльность с помощью методики понижения температуры замерзания. Для измерения осмоляльности смешивали 8 мкл белка ЛЬ-30Кт в буфере Ьоу 1отс 8сгееп, 2 мкл буфера Ь188 и 5 мкл х% ПЭГ-3350. Ровно 20 мкл этой смеси помещали в одноразовые микропробирки (Лйуапсей 1п81гитеп18. Ыотуоой, МЛ-Са1а1од #202825, США) и помещали в поворотный магазин прибора.</p>
<p>Эффективность: % эффективности рассчитывали путем центрифугирования 1,5-мл пробирки Эппендорфа при 10000 об/мин в течение 15 мин, получая 1:100 разведение супернатанта с водой ιηί11ί-0 и считывая его на спектрофотометре УФ и видимого спектра при А280.</p>
<p>Массовая кристаллизация и подробности эксперимента при исследовании на животных: ЛЬ-30Кт в концентрации 24,39 мг/мл в А5§иТ использовали для первоначального скрининга кристаллов ЛЬ-30Кт и массовой кристаллизации. Для заключительных исследований массовой кристаллизации для исследования на животных использовали ЛЬ-30Кт в концентрации 31,148 мг/мл в А5§иТ. Жидкий состав ЛЬ- 66 029956</p>
<p>30Кт для исследования на животных представлял собой 100 мг/мл в А58иТ, в то время как суспензия кристаллов для состава включала 0,05 М Трис, рН 8,0 и 22% РЕС-3350 при 100 мг/мл, рН 7,2.</p>
<p>Указанный состав АЬ-30Кт получали добавлением 400 мкл АЬ-30Кт в А58иТ + 200 мкл 0,05 М Трис-буфера, рН 8,0 + 500 мкл осадителя 22% ПЭГ-3350 в конечном объеме 1,1 мл в 1,5-мл пробирке Эппендорфа, который мутнел при смешивании. Указанный раствор в конечном итоге приобретал прозрачность на второй день с образованием различимых кристаллов. Кристаллы собирали через шесть дней, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин и удаляли супернатант, обеспечивая отсутствие растворимого белка в пробирке. Супернатант заменяли маточным раствором. Маточный раствор получали следующим образом: 200 мкл 0,05 М Трис-буфера, рН 8,0 + 500 мкл осадителя 22% ПЭГ-3350 в пробирке Эппендорфа. Следует обратить внимание, что к данному раствору не добавляли А58иТ. В 1,1мл партии содержалось 12,46 мг белка и, следовательно, для достижения конечной концентрации 100 мг/мл добавляли 124,9 мкл маточного раствора. Суспензии 100 мг/мл из двух дополнительных пробирок Эппендорфа смешивали в одном флаконе 3 см<sup>3</sup>, получая отдельный флакон для каждой крысы. Буфер для состава получали следующим образом: 400 мкл буфера А58иТ + 200 мкл 0,05 М Трис-буфера рН 8,0 +5 00 мкл осадителя 22% ПЭГ-3350, получая конечный объем 1,1 мл. Конечный объем инъекции при 100 мг/мл составлял 200-250 мкл в зависимости от массы отдельных крыс; для подкожных инъекций использовали иглу 27 01/2.</p>
<p>Исследования разовой дозы продолжительностью 8 недель проводили на 286-месячных самках крыс 8Ό массой 400-500 граммов. Конечная доза составляла 50 мг/кг (20-25 мг белка для каждой крысы); для каждого жидкого и порошкообразного состава использовали 10 отдельных крыс, в то время как для плацебо (А528иТ + 0,05 М Трис, рН 8,0, + 22% ПЭГ-3350) использовали восемь крыс.</p>
<p>Результаты и обсуждение: Выполняли скрининг АЬ-30Кт с помощью скринингового теста НатрЮп Бо\у 1отс 8сгееп 81гепд1Н 8сгееп (Ы88), и получили в общей сложности 20 событий образования кристаллов при рН 2 и рН 6,5-9,0. Наибольшее образование кристаллов наблюдали при 8% и 12% РЕ0-3350 среди всех использованных в скрининге процентных содержаний РЕ0-3350. 0,05 М Трис при рН 8,0 являлся единственным условием, обеспечивавшим образование кристаллов при 8%-24% ПЭГ-3350, за исключением 4% ПЭГ-3350. Большинство событий образования кристаллов, полученных для АЬ-3 0Кт, происходили в диапазоне рН 7,0-7,5, что важно для исследований на животных с точки зрения предотвращения некроза тканей после подкожной инъекции.</p>
<p>На основании данных осмоляльности некоторые из условий 16% и 24% РЕ0-3350 и все условия 20% ПЭГ-3350 не выходили за рамки диапазона осмоляльности. Допустимый диапазон осмоляльности для подкожных инъекций составляет около 250-350 мосмоль/кг (см. фиг. 1А). При наложении данных по осмоляльности и образованию кристаллов выявлено лишь три условия, не выходящие за рамки диапазона осмоляльности и обеспечивавшие образование кристаллов (фиг. 1В).</p>
<p>ПЭГ-3350 относится к химическим факторам, влияющим на кристаллизацию, и может быть охарактеризован как длинноцепочечный полимерный осадитель, действующий согласно эффекту исключения объема. Морфология кристаллов АЬ-30Кт деградировала с увеличением концентраций ПЭГ-3350, как показано при скрининге с Ь188 (фиг. 2). При образовании кристаллов в присутствии повышенных концентраций ПЭГ-3350 наблюдали двухфазное разделение и/или образование осадка. Рост кристаллов АЬ30Кт продолжался приблизительно неделю, что является медленным, если использовать те же условия для массовой кристаллизации.</p>
<p>Скорость кристаллизации не обязательно совпадает при диффузии паров в висячей капле и массовой кристаллизации. Для повышения скорости кристаллизации выполняли манипуляции с диапазоном рН, другими химическими факторами, влияющими на кристаллизацию и концентрацию АЬ-30Кт, сосредоточившись только на условиях НЕРЕ8 и Трис с 12% РЕ0-3350. Выполнили скрининг АЬ-30Кт с использованием скрининговых тестов НЕРЕ8 0пй 8сгееп рН 6,8-8,2 и Трис 0пй 8сгееп рН 7,0-9,0. При обоих скрининговых тестах не наблюдали изменений в скорости кристаллизации, однако встречаемость кристаллов была повышена при рН выше 7,5 в обоих скрининговых тестах. Поэтому сделали еще одну попытку изменить скорость кристаллизации путем исследования концентрации осадителя ПЭГ-3350.</p>
<p>Исследовали условия Ы88 #10-14 с диапазоном рН 7-9,0 и ПЭГ-3350 с 4% до 24% с шагом в 2%. Первые события образования кристаллов наблюдали в 0,05 М Трис, рН 8,0 при 22% и 24% РЕ0-3350 на 2 день. При указанных условиях выполнили массовую кристаллизацию в общем объеме 55 мкл, 110 мкл и 1 мл общего объема; во всех случаях получали кристаллы на 2 день. Скорость кристаллизации для 22% и 24% РЕ0-3350 была одинаковой при диффузии паров в 11-мкл висячей капле и при массовой кристаллизации. Конечное значение рН для обоих условий находилось в диапазоне рН 7-7,5 при рН 7,203 для 22% ПЭГ-3350 и рН 7,354 для 24% ПЭГ-3350. Осмоляльность для 0,05 М Трис, 22% ПЭГ-3350 составляла 340 мосмоль/кг, в то время как для 0,05 М Трис, рН 8,0 осмоляльность составляла 412 мосмоль/кг, что превосходило диапазон осмоляльности. % эффективности измеряли путем центрифугирования кристаллов при 10000 об/мин в течение 15 мин и измерения А280 нм в супернатанте. Скорости растворения для кристаллов АЬ-30Кт в воде составляли 11 мин, в физиологическом растворе - 6 мин, а в РВ8 - 15 мин.</p>
<p>Изотонические и инъекционные условия достигались для состава АЬ-30Кт для исследования на животных при конечном рН 7,203, осмоляльности 340 мосмоль/кг и 95% эффективности кристаллизации.</p>
<p>- 67 029956</p>
<p>Жидкие составы и составы ресуспендированных кристаллов антитела тестировали в исследовании на животных.</p>
<p>В вышеизложенном примере показано, что АЬ-30Вт кристаллизовалось при различных условиях кристаллизации, но кристаллы образовывались не при любых протестированных условиях. Протестировано приблизительно 240 условий кристаллизации с рядом различных доступных для приобретения (т.е. НатрЮп КекеатсБ) скрининговых тестов, однако кристаллы АЬ-30Вт получали лишь приблизительно при 50 условиях. Примечательно, что АЬ-30В (отличающееся от АЬ-30Вт на одну аминокислоту) образовывало кристаллы лишь в 5 из приблизительно 1120 протестированных условий в ряде различных коммерчески доступных (т.е. НатрЮп КекеатсЬ, Етета1Д Вюкаепсе), и специально разработанных скрининговых тестах.</p>
<p>В вышеизложенном примере также показано, что получены составы, содержащие кристаллы АЬ30Вт, с рН и осмоляльностью, достаточными для введения в организм млекопитающего.</p>
<p>Пример 6. Тестирование "жидких" и "кристаллов/кристаллизованных" составов антитела против склеростина на крысах ίη νίνο</p>
<p>Самок крыс Спраг-Доули (8Ό) получили из СЬат1е8 РАег ЬаЬотаЮпек и разместили в чистой клетке по два животных на клетку. Температуру в помещении поддерживали между 68 и 72°Р, а относительную влажность воздуха между 34 и 73%. Лабораторные условия в помещении с клетками включали 12часовой цикл свет/темнота и соответствовали всем спецификациям АААЬАС.</p>
<p>Подкожное введение тестируемого изделия (жидкий состав АЬ-30Вт и состав кристаллов/кристаллизованного АЬ-30Вт) и буфера (контрольная среда-носитель) выполняли в возрасте крыс приблизительно 6,5 месяцев. В начале исследования (день 0) 9 крысам вводили буфер, полученный при следующем соотношении ингредиентов: отбирали 400 мкл А5§иТ (10 мМ ацетата натрия, рН 5, 9% сахарозы, 0,004% полисорбата 20 [Твин]), затем добавляли 200 мкл 0,05 М Трис, рН 8, а затем добавляли 500 мкл 22% ПЭГ-3350. Это была группа, получавшая буфер/среду-носитель. В начале исследования (день 0) 10 крысам из расчета 50 мг/кг вводили 100 мг/мл раствор "кристаллов/кристаллизованного" АЬ-30Вт в суспензии, полученный при следующем соотношении ингредиентов: 200 мкл 0,05 М Трис, рН 8, и 500 мкл 22% ПЭГ-3350. Это была группа, получавшая "кристаллы/кристаллизованный" состав. В начале исследования (день 0) 10 крысам из расчета 50 мг/кг вводили 100 мг/мл раствор "жидкого" (некристаллизованного) АЬ-30Вт в А5§иТ. Это была группа, получавшая "жидкий" состав.</p>
<p>Локальную минеральную плотность костной ткани (МПКТ) определяли у крыс под анестезией (изофлураном) с помощью рентгеновской абсорбциометрии с двумя источниками энергии (ЭХА, Но1одю ΟΌΡ 4500а, Но1одю 1пс., Бедфорд, штат Массачусетс, США). Исходную МПКТ определяли за 4 дня до начала обработки. МПКТ также определяли на 2, 3, 4, 6 и 8 неделе после обработки (день 0). Области интереса (ВО1) включали поясничные позвонки (ЬУ1-5) и "ногу" (бедренную кость-большеберцовую кость [всю бедренную кость в дополнение к части болыпеберцовой кости выше сочленения болыпеберцовая/малоберцовая кость]).</p>
<p>Статистический анализ проводили с использованием ОтарЬРаД РгЕт. Для определения статистических различий использовали односторонний дисперсионный анализ (АЯОУА) с последующим тестом Даннетта. Средние значения по группам для каждого набора данных считали значимо различающимися, если значение Р было менее 0,05 (Р<0,05). Данные анализировали как абсолютную МПКТ (г/см<sup>2</sup>), а также отдельно как процентное изменение по сравнению с исходной МПКТ (рассчитывали для каждого отдельного животного).</p>
<p>Данные по МПКТ (абсолютная МПКТ и процентное изменение МПКТ по сравнению с исходным уровнем) для 3 групп животных показали, что однократное введение "жидкого" состава АЬ-30Вт и однократное введение "кристалл/кристаллизованного" состава АЬ-30Вт привели к аналогичному увеличению МПКТ при настоящем исследовании на крысах. Статистически значимое увеличение по сравнению с группой, получавшей буфер/среду-носитель обнаружено как для группы, получавшей "жидкое" АЬ30Кт (фиг. 7А и 7В), так и для группы, получавшей "кристалл/кристаллизованное" АЬ-30Кт (фиг. 7В) в области поясничных позвонков и области "ноги" (бедренная кость-большеберцовая кость) (фиг. 8В). Указанные данные демонстрируют положительное действие как "жидкого", так и "кристалл/кристаллизованного" составов АЬ-30Кт на кости.</p>
<p>Пример 7. Состав кристаллического АЬ-30</p>
<p>Настоящий пример иллюстрирует составы на основе кристаллов антитела против склеростина, включающих высокую концентрацию белка с возможностью медленного высвобождения, включающие антитело против склеростина АЬ-30, состоящее из двух зрелых тяжелых цепей (8ЕО ГО N0: 15) и двух зрелых легких цепей (8ЕО ГО N0: 13), рекомбинантно продуцированных из ДНК, кодирующей каждую из указанных цепей.</p>
<p>Вкратце, выполнили скрининг в общей сложности 104 условий кристаллизации на АЬ-30 с помощью скрининговых тестов ОКА§ §стееп, 1пДех 8стееп Χνί/агД I §стееп, Χνί/агД II §стееп и Χνί/агД III §стееп. Четыре условия свели к составу на основе процентной эффективности кристаллизации (т.е. νΓΖ III #35, ОКА§ #1, ΓΝΌΧ #34, ΓΝΌΧ #36 и νΓΖ I #46). Успешно получили составы для АЬ-30, ресуспендированные в 5% декстрозе для подкожных инъекций в исследовании на животных.</p>
<p>- 68 029956</p>
<p>Пример 8. Тестирование "жидких" и "кристаллов/кристаллизованных" составов антитела против склеростина АВ-30 на крысах ίη νίνο</p>
<p>Самок крыс Спраг-Доули (8Ό) получили из СНаг1с5 КАег ЬаЬога1опс5 и разместили в чистой клетке по два животных на клетку. Температуру в помещении поддерживали между 20 и 22,2°С, а относительную влажность воздуха - между 34 и 73%. Лабораторные условия в помещении с клетками включали 12часовой цикл свет/темнота и соответствовали всем спецификациям АААЬАС.</p>
<p>Подкожное введение тестируемого изделия (жидкий состав АЬ-30 и различные формы кристаллов/кристаллизованного АЬ-30) и буфера (контрольная среда-носитель) выполняли в возрасте крыс приблизительно 6,5 месяцев. В начале исследования (день 0) 8 крысам вводили 5% декстрозу (источник: мешок Вах1ег IV). Это была группа, получавшая буфер/среду-носитель. В начале исследования (день 0) 8 крысам из расчета 100 мг/кг вводили 100 мг/мл одного из следующих растворов - "кристалл/кристаллизованный" состав АЬ-30 ΑΙΖ III #35, указанные кристаллы ресуспендировали в 5% декстрозе (источник: мешок Вах!ег IV) ("группа А35"); "кристалл/кристаллизованный" состав АЬ-30 ΕΝΌΧ #34, указанные кристаллы ресуспендировали в 5% декстрозе (источник: мешок Вах!ег IV) ("группа ^4<sup>11</sup>^ "кристалл/кристаллизованный" состав АЬ-30 ΓΝΏΧ #36, указанные кристаллы ресуспендировали в 5% декстрозе (источник: мешок Вах!ег IV) ("группа ^6<sup>11</sup>^ "кристалл/кристаллизованный" состав АЬ-30 ΑΓΖ I #46, указанные кристаллы ресуспендировали в 5% декстрозе (источник: мешок Вах!ег IV) ("группа А46"); или "жидкое" АЬ-30 (некристаллизованное) в А5§и (10 мМ ацетат натрия рН 5, 9% сахароза) ("группа, получавшая жидкий состав").</p>
<p>Локальную минеральную плотность костной ткани (МПКТ) определяли у крыс под анестезией (изофлураном) с помощью рентгеновской абсорбциометрии с двумя источниками энергии (ОХА, Ηοίο^ίο ΟΌΒ 4500а, Ηοίοβίο Фе., Бедфорд, штат Массачусетс, США). Исходную МПКТ определяли за 7 дней до начала обработки. МПКТ также определяли на 2 и 4 неделе после обработки (день 0). Области интереса (КОД включали поясничные позвонки (^V1-5) и "ногу" (бедренную кость-большеберцовую кость [всю бедренную кость в дополнение к части болыпеберцовой кости выше сочленения большеберцовая/малоберцовая кость]).</p>
<p>Статистический анализ проводили с использованием СгарЬРай Ргйш. Для определения статистических различий использовали односторонний дисперсионный анализ (АNОVА) с последующим тестом Даннетта. Средние значения по группам для каждого набора данных считали значимо различающимися, если значение Р было менее 0,05 (Р<0,05). Данные анализировали как абсолютную МПКТ (г/см<sup>2</sup>), а также отдельно как процентное изменение по сравнению с исходной МПКТ (рассчитывали для каждого отдельного животного).</p>
<p>Статистически значимое увеличение МПКТ по сравнению с группой, получавшей буфер/средуноситель обнаружено как для группы, получавшей "жидкое" АЬ-30 (фиг. 9А и 9В), так и для некоторых (например, А35. Ю6) из группы, получавшей "кристалл/кристаллизованный" состав АЬ-30 (фиг. 9В) в области поясничных позвонков. Статистически значимое увеличение МПКТ по сравнению с группой, получавшей буфер/среду-носитель также обнаружено как для группы, получавшей "жидкое" АЬ-30 (фиг. 10В), так и для некоторых (например, А35, Ю6) из группы, получавшей "кристалл/кристаллизованный" состав АЬ-30 (фиг. 10В) в области "ноги" (бедренная кость-большеберцовая кость). Указанные данные демонстрируют положительное действие как "жидкого", так и "кристалл/кристаллизованного" составов АЬ-30 на кости.</p>
<p>Пример 9. Кристаллизация антитела против склеростина АЬ-31</p>
<p>Антитело АЬ-31, состоящее из двух зрелых тяжелых цепей (8ЕО ГО ΝΟ: 35) и двух зрелых легких цепей (8ЕО ГО ΝΟ: 33), рекомбинантно полученное из ДНК, кодирующей каждую из этих цепей, кристаллизовали при различных условиях.</p>
<p>Кристаллизацию АЬ-31 осуществляли с помощью скринингового теста кристаллизации (РЕО/ЫС1 Οτίά §сгееп; НатрФп КекеагсЬ, Алисо Вьехо, штат Калифорния, США), использующего способ для кристаллизации макромолекул, известный как диффузия паров в "висячей капле". Каплю, состоящую из смеси полипептидного образца и реактива для кристаллизации ("буфер для кристаллизации" или "маточный раствор"), помещали на нижнюю сторону силанизированного покровного стекла, а затем каплю на покровном стекле герметизировали смазкой и помещали поверх обычно 24-луночного УЭХ-лотка, обеспечивая равновесие паров с жидким реагентом в резервуаре. Для достижения равновесия осуществляли обмен водяного пара между каплей и 1 мл раствора в лунке лотка. По мере выхода воды из капли относительная концентрация полипептида в образце увеличивалась, что в конечном итоге могло привести к пересыщению. Именно эта повышенная концентрация полипептида в образце требовалась для кристаллизации. Обычно капля содержала более низкую концентрацию реагента, чем резервуар и, как правило, капля содержала половинную концентрацию реагента по сравнению с резервуаром, поскольку для образования капли смешивали равные объемы образца и реагента.</p>
<p>В указанных экспериментах начальная концентрация белка АЬ-31 в капле составила 30 мг/мл. Скрининговый тест кристаллизации проводили в 24-луночном ΎϋΧ полипропиленовом лотке для тканевых культур. Каждое положение в УЭХ-лотке содержало 1-мл резервуар с реагентом, причем резервуар с реагентом в каждой лунке отличался по составу от других лунок, обеспечивая матрицу с различными</p>
<p>- 69 029956</p>
<p>параметрами буфера для кристаллизации. 1 мл раствора полипептида при каждой концентрации полипептида добавляли к 1 мкл раствора резервуара для образования капель. Лотки инкубировали при 4°С или при комнатной температуре.</p>
<p>Кристаллизацию АЬ-31 наблюдали как при 4°С, так и при комнатной температуре при следующих условиях кристаллизации: 10 мМ гистидин, рН 7,15-7,47, а также 10 мМ фосфат калия, рН 7,2. Длина полученных кристаллов варьировалась от 100 мкм до 1000 мкм; с помощью стереомикроскопа с поляризацией Ζβΐδδ 81еш1 8У11, сопряженного с цифровой камерой Ζβΐδδ АхюСаш МКс, управляемой программным обеспечением АхюУшоп 4.0, определили, что кристаллы демонстрировали эллипсоидальную форму.</p>
<p>В вышеизложенном примере показано, что АЬ-31 кристаллизовалось при различных условиях кристаллизации, но кристаллы образовывались не при любых протестированных условиях. Протестировано 250 различных условий кристаллизации, но лишь приблизительно 36 условий обеспечивали образование кристаллов АЬ-31.</p>
<p>Ожидается, что специалисты в данной области техники при рассмотрении предпочтительных в настоящее время вариантов воплощения внесут многочисленные модификации и вариации при практическом осуществлении изобретения. Следовательно, единственными ограничениями, которые следует накладывать на рамки изобретения, являются ограничения, приведенные в прилагаемой формуле изобретения.</p>
<p>Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, зарубежные патенты, зарубежные патентные заявки и непатентные публикации, цитируемые в настоящем описании и/или перечисленные в инструкции по применению, полностью включены в настоящий документ в качестве ссылок.</p>
<p>На основании вышесказанного следует принимать во внимание, что, несмотря на приведенное здесь иллюстративное описание конкретных вариантов воплощения настоящего изобретения, можно осуществить его различные модификации без выхода за рамки изобретения.</p>
<p>Список последовательностей</p>
<p><110> Οδδΐυηά, еЬ а1.</p>
<p><120> Кристаллы антител против склеростина и составы на их основе</p>
<p><130> 31173/46053А</p>
<p><150> 61/467868</p>
<p><151> 25.03.2011</p>
<p><160> 35</p>
<p><170> Патентная версия 3.5</p>
<p><210> 1 <211> 213</p>
<p><212> Белок <213> Ното зар±епз</p>
<p><220></p>
<p><221> зрелый_пептид <222> (25)..(213)</p>
<p><400> 1</p>
<table border="1">
<tr><td>
МеЬ</td><td>
С1п</td><td colspan="2">
Ьеи Рго</td><td colspan="2">
Ьеи А1а -20</td><td colspan="3">
Ьеи Суз Ьеи</td><td>
Уа1
-15</td><td colspan="5">
Суз Ьеи Ьеи Уа1 Ηίδ -10</td><td>
ТЬг</td></tr>
<tr><td>
А1а</td><td>
РЬе</td><td>
Агд</td><td>
Уа1</td><td>
Уа1</td><td>
С1и</td><td>
С1у</td><td>
С1п</td><td>
С1у</td><td>
Тгр</td><td>
С1п</td><td>
А1а</td><td>
РЬе</td><td>
Ьуз</td><td>
Азп</td><td>
Азр</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
-5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
-1</td><td>
1</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
А1а</td><td>
ТНг</td><td>
С1и</td><td>
Не</td><td>
11е</td><td>
Рго</td><td>
С1и</td><td>
Ьеи</td><td>
С1у</td><td>
С1и</td><td>
Туг</td><td>
Рго</td><td>
С1и</td><td>
Рго</td><td>
Рго</td><td>
Рго</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
10</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
15</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
20</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
С1и</td><td>
Ьеи</td><td>
С1и</td><td>
Азп</td><td>
Азп</td><td>
Ьуз</td><td>
ТЬг</td><td>
Меь</td><td>
Азп</td><td>
Агд</td><td>
А1а</td><td>
С1и</td><td>
Азп</td><td>
С1у</td><td>
С1у</td><td>
Агд</td></tr>
<tr><td>
25</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
30</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
35</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
40</td></tr>
<tr><td>
Рго</td><td>
Рго</td><td>
Ηΐ3</td><td>
Ηΐδ</td><td>
Рго</td><td>
РЬе</td><td>
С1и</td><td>
ТЬг</td><td>
Ьуз</td><td>
Азр</td><td>
Уа1</td><td>
Зег</td><td>
С1и</td><td>
Туг</td><td>
Зег</td><td>
Суз</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
45</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
50</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
55</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Агд</td><td>
С1и</td><td>
Ьеи</td><td>
ΗΪ5</td><td>
РЬе</td><td>
ТЬг</td><td>
Агд</td><td>
Туг</td><td>
Ча1</td><td>
ТНг</td><td>
Азр</td><td>
С1у</td><td>
Рго</td><td>
Суз</td><td>
Агд</td><td>
Зег</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
60</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
65</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
70</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
А1а</td><td>
Ьуз</td><td>
Рго</td><td>
Уа1</td><td>
ТЬг</td><td>
С1и</td><td>
Ьеи</td><td>
Уа1</td><td>
Суз</td><td>
Зег</td><td>
С1у</td><td>
С1п</td><td>
Суз</td><td>
С1у</td><td>
Рго</td><td>
А1а</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
75</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
80</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
85</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Агд</td><td>
Ьеи</td><td>
Ьеи</td><td>
Рго</td><td>
Азп</td><td>
А1а</td><td>
11е</td><td>
С1у</td><td>
Агд</td><td>
С1у</td><td>
Ьуз</td><td>
Тгр</td><td>
Тгр</td><td>
Агд</td><td>
Рго</td><td>
Зег</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
90</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
95</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
100</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
С1у</td><td>
Рго</td><td>
Азр</td><td>
РЬе</td><td>
Агд</td><td>
Суз</td><td>
11е</td><td>
Рго</td><td>
Азр</td><td>
Агд</td><td>
Туг</td><td>
Агд</td><td>
А1а</td><td>
С1п</td><td>
Агд</td><td>
Уа1</td></tr>
<tr><td>
105</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
но</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
115</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
120</td></tr>
</table>
<p>- 70 029956</p>
<p>Ьеи Уа1 А1а Зег Суз Ьуз Суз Ьуз Агд Ьеи ТЬг Агд РЬе НЬз Азп С1п 140 145 150</p>
<p>Зег С1и Ьеи Ьуз Азр РЬе С1у ТЬг С1и А1а А1а Агд Рго С1п Ьуз С1у 155 160 165</p>
<p>Агд Ьуз Рго Агд Рго Агд А1а Агд Зег А1а Ьуз А1а Азп С1п А1а С1и 170 175 180</p>
<p>Ьеи С1и Азп А1а Туг 185</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область легкой цепи АЬ-30</p>
<p><400> 2</p>
<p>дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬсЬссдсаЬ ссдЬаддсда ссдсдЬаасс 60</p>
<p>аьаасабдьа дадсаьсьса адаваЬЬЬсс аасЬаЬЬЬда аььддьасса асааааассс 120</p>
<p>ддсааадсас сЬааасЬссЬ саЬЬЬасЬаЬ асаЬсаадас ЬссЬсЬссдд сдЬЬссаЬса 180</p>
<p>сдавьсЬсад дсЬссддсьс сддсасадаь зьсасасьса сЬаввьссЬс ссьссаасса 240</p>
<p>даадаЬЬЬЬд саассЬаЬЬа сЬдЬсаасаа ддсдаЬасас ЬсссаЬасас аЬЬсддсддс 300</p>
<p>ддсасаааад ььдаааььаа а 321</p>
<p><210> 3</p>
<p><211> 107</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область легкой цепи АЬ-30</p>
<p>- 71</p>
<p>029956</p>
<p><211> 123</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область тяжелой цепи АЬ-30</p>
<p><400> 5</p>
<p>С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а 15 10 15</p>
<p>Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЪг РЪе ТЪг Азр Туг 20 25 30</p>
<p>Азп Меб Шз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Мер 35 40 45</p>
<p>С1у С1и Не Азп Рго Азп Зег С1у С1у А1а С1у Туг Азп С1п Ьуз РЪе 50 55 60</p>
<p>Ьуз С1у Агд Уа1 ТЪг Мер ТЪг ТЪг Азр ТЪг Зег ТЪг Зег ТЪг А1а Туг 65 70 75 80</p>
<p>Мер С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95</p>
<p>А1а Агд Ьеи С1у Туг Азр Азр 11е Туг Азр Азр Тгр Туг РЪе Азр Уа1 100 105 110</p>
<p>Тгр С1у С1п С1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 120</p>
<p><210> 6</p>
<p><211> 11</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ЬСОР,1 АЬ-ЗОК и АЬ-ЗОРтп</p>
<p><400> 6</p>
<p>Агд А1а Зег С1п Азр Не Зеп Азп Туг Ьеи Азп 15 10</p>
<p><210> 7</p>
<p><211> 7</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ЬСГР2 АЬ-ЗОР и АЬ-ЗОКгг</p>
<p><400 7</p>
<p>Туг ТЕг 2ег Агд Ьеи Ьеи Зег 1 5</p>
<p><210 8</p>
<p><211> 9</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220</p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220</p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ЬСОРЗ АЬ-ЗОР и АЬ-ЗОКх</p>
<p><400 8</p>
<p>С1п С1п С1у Азр ТЪг Ьеи Рго Туг ТЕг 1 5</p>
<p><210> 9</p>
<p><211> 5</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220</p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220</p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ΗΟϋΡΙ АЬ-ЗОР и АЬ-ЗОРт</p>
<p><400> 9</p>
<p>Азр Туг Азп МеЬ Шз</p>
<p>1 5</p>
<p>- 72</p>
<p>029956</p>
<p><210> 10</p>
<p><211> 17</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> НСБР.2 АЪ-ЗОР и АЪ-ЗОКш</p>
<p><400> 10</p>
<p>С1и Не Азп Рго Азп Бег С1у С1у А1а С1у Туг Азп С1п Ьуз РЪе Ьуз 15 10 15</p>
<p>С1у</p>
<p><210> 11</p>
<p><211> 14</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> НСБКЗ АЪ-ЗОК и АЪ-ЗОКш</p>
<p><400> 11</p>
<p>Ьеи С1у Туг Азр Азр 11е Туг Азр Азр Тгр Туг РЪе Азр Уа1 15 10</p>
<p><210> 12</p>
<p><211> 642</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> легкая цепь АЪ-30</p>
<table border="1">
<tr><td>
<400> 12
дасаЬссада</td><td>
Едасссадгс</td><td>
ЪссагссЪсс</td><td>
сЪсЪссдсаЪ</td><td>
ссдЪаддсда</td><td>
ссдсдЪаасс</td><td>
60</td></tr>
<tr><td>
аЪаасаЪдЪа</td><td>
дадсаЪсЪса</td><td>
адаЪаЪЪЪсс</td><td>
аасЪаЪЕЕда</td><td>
аЬЕддгасса</td><td>
асааааассс</td><td>
120</td></tr>
<tr><td>
ддсааадсас</td><td>
сЪааасьссЪ</td><td>
саЕЕЕасЪаЪ</td><td>
асаЪсаадас</td><td>
ЪссЪсЪссдд</td><td>
сдЪЪссаЪса</td><td>
180</td></tr>
<tr><td>
сдаЪЪсЪсад</td><td>
дсЪссддсЪс</td><td>
сддсасадаЪ</td><td>
ЪЪсасасЪса</td><td>
сЪаЪЪЪссЪс</td><td>
ссЪссаасса</td><td>
240</td></tr>
<tr><td>
даадаЕЕЕЪд</td><td>
саассЪаЪЪа</td><td>
сЪдЪсаасаа</td><td>
ддсдагасас</td><td>
ЕсссаЪасас</td><td>
аЪЪсддсддс</td><td>
300</td></tr>
<tr><td>
ддсасаааад</td><td>
ЪЬдаааЪЪаа</td><td>
асдЪасддЬд</td><td>
дсЬдсассаЬ</td><td>
сЬдЪсЪЬсаЬ</td><td>
сЪЪсссдсса</td><td>
360</td></tr>
<tr><td>
ЪсЪдагдадс</td><td>
адгсдаааЪс</td><td>
Еддаасьдсс</td><td>
ъсЕдЕЕдЬдЕ</td><td>
дссЪдсьдаа</td><td>
ЪаасЕЕсЪаЪ</td><td>
420</td></tr>
<tr><td>
сссадададд</td><td>
ссааадЪаса</td><td>
дЪддааддгд</td><td>
дагаасдссс</td><td>
ъссааъсддд</td><td>
ЪаасЕсссад</td><td>
480</td></tr>
<tr><td>
дададЪдЪса</td><td>
сададсадда</td><td>
садсааддас</td><td>
адсассЪаса</td><td>
дссЪсадсад</td><td>
сасссЪдасд</td><td>
540</td></tr>
<tr><td>
сЪдадсааад</td><td>
садасЪасда</td><td>
дааасасааа</td><td>
дЬсЕасдссЕ</td><td>
дсдаадгсас</td><td>
ссагсадддс</td><td>
600</td></tr>
<tr><td>
сЪдадсЬсдс</td><td>
ссдЪсасааа</td><td>
дадсЪЬсаас</td><td>
аддддададЬ</td><td>
д^</td><td>
</td><td>
642</td></tr>
</table>
<p><210> 13</p>
<p><211> 214</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> легкая цепь АЪ-30</p>
<p><400> 13</p>
<p>Азр 11е С1п МеЪ ТЪг С1п Бег Рго Зег Зег Ьеи Бег А1а Бег Уа1 С1у 15 10 15</p>
<p>Азр Агд Уа1 ТЪг Не ТЪг Суз Агд А1а Бег С1п Азр 11е Бег Азп Туг 20 25 30</p>
<p>Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45</p>
<p>Туг Туг ТЪг Бег Агд Ьеи Ьеи Бег С1у Уа1 Рго Бег Агд РЪе Бег С1у 50 55 60</p>
<p>Бег С1у Бег С1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Бег Бег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80</p>
<p>С1и Азр РЪе А1а ТЪг Туг Туг Суз С1п С1п С1у Азр ТЪг Ьеи Рго Туг</p>
<p>ТЪг РЪе С1у С1у С1у ТЪг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд ТЪг Уа1 А1а 100 105 110</p>
<p>- 73</p>
<p>029956</p>
<p>Рго Зег Уа1 РЬе Не РЬе Рго Рго Зег Азр С1и 115 120</p>
<p>ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе 130 135</p>
<p>Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п 145 150 155</p>
<p>С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег 165 170</p>
<p>Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и 180 185</p>
<p>А1а Суз С1и Уа1 ТЬг НЬз С1п С1у Ьеи Зег Зег 195 200</p>
<p>РЬе Азп Агд С1у С1и Суз 210</p>
<p><210> 14</p>
<p><211> 1347</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p>С1п Ьеи Ьуз Зег С1у 125</p>
<p>Туг Рго Агд С1и А1а 140</p>
<p>Зег С1у Азп Зег С1п 160</p>
<p>ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 175</p>
<p>Ьуз ΗΪ5 Ьуз Уа1 Туг 190</p>
<p>Рго \7а1 ТЬг Ьуз Зег 205</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> тяжелая цепь АЬ-30</p>
<table border="1">
<tr><td>
<400> 14
даддрдсадс</td><td>
рддрдсадад</td><td>
сддсдссдад</td><td>
драаааааас</td></tr>
<tr><td>
РсРРдРааад</td><td>
саадсддаРа</td><td>
РасаРРРаса</td><td>
даРРасааса</td></tr>
<tr><td>
ссаддасаад</td><td>
даррддаард</td><td>
дардддсдаа</td><td>
аРРаасссРа</td></tr>
<tr><td>
ааРсаааааР</td><td>
Рсааадддад</td><td>
адРРасааРд</td><td>
асаасадаса</td></tr>
<tr><td>
аРддаасРдс</td><td>
даРсасРРад</td><td>
аадсдасдаР</td><td>
асадсРдРаР</td></tr>
<tr><td>
РаРдаРдаРа</td><td>
рарардарда</td><td>
срддрарррс</td><td>
дардрррддд</td></tr>
<tr><td>
дРсРсРадРд</td><td>
ссРссассаа</td><td>
дддсссаРсд</td><td>
дРсРРссссс</td></tr>
<tr><td>
ассРссдада</td><td>
дсасадсддс</td><td>
ссрдддсрдс</td><td>
сРддРсаадд</td></tr>
<tr><td>
асддРдРсдР</td><td>
ддаасРсадд</td><td>
сдсРсРдасс</td><td>
адсддсдРдс</td></tr>
<tr><td>
садРссРсад</td><td>
дасРсРасРс</td><td>
ссРсадсадс</td><td>
дрддрдассд</td></tr>
<tr><td>
асссадассР</td><td>
асассРдсаа</td><td>
сдРадаРсас</td><td>
аадсссадса</td></tr>
<tr><td>
дррдадсдса</td><td>
аардррдрдр</td><td>
сдадрдссса</td><td>
ссдрдсссад</td></tr>
<tr><td>
РсадРсРРсс</td><td>
РсРРсссссс</td><td>
аааасссаад</td><td>
дасасссРса</td></tr>
<tr><td>
дрсасдрдсд</td><td>
рддрддрдда</td><td>
сдрдадссас</td><td>
даадассссд</td></tr>
<tr><td>
дрддасддсд</td><td>
РддаддРдса</td><td>
РааРдссаад</td><td>
асааадссас</td></tr>
<tr><td>
асдРРссдРд</td><td>
РддРсадсдР</td><td>
ссРсассдРР</td><td>
дрдсассадд</td></tr>
<tr><td>
Расаадрдса</td><td>
аддРсРссаа</td><td>
саааддссРс</td><td>
ссадссссса</td></tr>
<tr><td>
ассааадддс</td><td>
адссссдада</td><td>
ассасаддРд</td><td>
РасасссРдс</td></tr>
<tr><td>
ассаадаасс</td><td>
аддрсадсср</td><td>
дассРдссРд</td><td>
дРсаааддсР</td></tr>
<tr><td>
дрддадрддд</td><td>
ададсааРдд</td><td>
дсадссддад</td><td>
аасаасРаса</td></tr>
<tr><td>
дасРссдасд</td><td>
дсРссРРсРР</td><td>
ссРсРасадс</td><td>
аадсРсассд</td></tr>
<tr><td>
саддддаасд</td><td>
РсРРсРсаРд</td><td>
сРссдРдаРд</td><td>
саРдаддсРс</td></tr>
<tr><td>
аададссРсР</td><td>
сссРдРсРсс</td><td>
дддРааа</td><td>
</td></tr>
</table>
<p>саддадсаад</p>
<p>РдсаРРдддР</p>
<p>арадрддадд</p>
<p>саадсасРРс</p>
<p>асРаРРдсдс</p>
<p>дссадддаас</p>
<p>РддсдсссРд</p>
<p>асРасРРссс</p>
<p>асассРРссс</p>
<p>РдсссРссад</p>
<p>асассааддР</p>
<p>сассассрдр</p>
<p>РдаРсРсссд</p>
<p>аддрссадрр</p>
<p>дддаддадса</p>
<p>асРддсРдаа</p>
<p>Рсдадаааас</p>
<p>ссссаРсссд</p>
<p>РсРассссад</p>
<p>адассасасс</p>
<p>рддасаадад</p>
<p>Рдсасаасса</p>
<p>сдррааадрр</p>
<p>аадасаадсд</p>
<p>адсаддсРас</p>
<p>аасадсаРаР</p>
<p>асдасРРддд</p>
<p>аасадррасс</p>
<p>сРссаддадс</p>
<p>сдаассддрд</p>
<p>адсРдРссРа</p>
<p>саасРРсддс</p>
<p>ддасаадаса</p>
<p>ддсаддассд</p>
<p>дассссРдад</p>
<p>саасРддРас</p>
<p>дРРсаасадс</p>
<p>сддсааддад</p>
<p>саРсРссааа</p>
<p>ддаддадаРд</p>
<p>сдасарсдсс</p>
<p>РсссаРдсРд</p>
<p>саддрддсад</p>
<p>сРасасдсад</p>
<p>60</p>
<p>120</p>
<p>180</p>
<p>240</p>
<p>300</p>
<p>360</p>
<p>420</p>
<p>480</p>
<p>540</p>
<p>600</p>
<p>660</p>
<p>720</p>
<p>780</p>
<p>840</p>
<p>900</p>
<p>960</p>
<p>1020</p>
<p>1080</p>
<p>1140</p>
<p>1200</p>
<p>1260</p>
<p>1320</p>
<p>1347</p>
<p>- 74 029956</p>
<table border="1">
<tr><td colspan="2">
МеБ С1и Ьеи Агд Зег</td><td colspan="2">
Ьеи Агд Зег Азр Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг</td><td rowspan="2">
Суз</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
85</td><td>
90</td><td>
95</td></tr>
<tr><td>
А1а Агд Ьеи</td><td>
С1у Туг</td><td>
Азр Азр 11е Туг Азр</td><td>
Азр Тгр Туг РИе Азр</td><td>
УаЬ</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
100</td><td>
105</td><td>
110</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Тгр С1у С1п.</td><td>
С1у ТИг</td><td>
ТИг Уа1 ТИг Уа1 Зег</td><td>
Зег А1а Зег ТИг Ьуз</td><td>
С1у</td></tr>
<tr><td>
115</td><td>
</td><td>
120</td><td>
125</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Рго Зег \7а1</td><td>
РИе Рго</td><td>
Ьеи А1а Рго Суз Зег</td><td>
Агд Зег ТИг Зег С1и</td><td>
Зег</td></tr>
<tr><td>
130</td><td>
</td><td>
135</td><td>
140</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ТИг А1а А1а</td><td>
Ьеи С1у</td><td>
Суз Ьеи 37а1 Ьуз Азр</td><td>
Туг РИе Рго С1и Рго</td><td>
Уа1</td></tr>
<tr><td>
145</td><td>
</td><td>
150</td><td>
155</td><td>
160</td></tr>
<tr><td>
ТИг Уа1 Зег</td><td>
Тгр Азп</td><td>
Зег 61у А1а Ьеи ТИг</td><td>
Зег С1у Уа1 Нгз ТИг</td><td>
РИе</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
165</td><td>
170</td><td>
175</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Рго А1а Уа1</td><td>
Ьеи С1п</td><td>
Зег Зег С1у Ьеи Туг</td><td>
Зег Ьеи Зег Зег Уа1</td><td>
Уа1</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
180</td><td>
185</td><td>
190</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ТИг 7а1 Рго</td><td>
Зег Зег</td><td>
Азп РИе С1у ТИг С1п</td><td>
ТИг Туг ТИг Суз Азп</td><td>
Уа1</td></tr>
<tr><td>
195</td><td>
</td><td>
200</td><td>
205</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Азр Шз Ьуз</td><td>
Рго Зег</td><td>
Азп ТИг Ьуз Уа1 Азр</td><td>
Ьуз ТИг \7а1 С1и Агд</td><td>
ЬуЗ</td></tr>
<tr><td>
210</td><td>
</td><td>
215</td><td>
220</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Суз Суз Уа1</td><td>
С1и Суз</td><td>
Рго Рго Суз Рго А1а</td><td>
Рго Рго \7а1 А1а С1у</td><td>
Рго</td></tr>
<tr><td>
225</td><td>
</td><td>
230</td><td>
235</td><td>
240</td></tr>
<tr><td>
Зег Уа1 РИе</td><td>
Ьеи РИе</td><td>
Рго Рго Ьуз Рго Ьуз</td><td>
Азр ТИг Ьеи МеБ 11е</td><td>
Зег</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
245</td><td>
250</td><td>
255</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Агд ТИг Рго</td><td>
61и Уа1</td><td>
ТИг Суз Уа1 Уа1 Уа1</td><td>
Азр Уа1 Зег Шз С1и</td><td>
Азр</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
260</td><td>
265</td><td>
270</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Рго 61и Уа1</td><td>
С1п РИе</td><td>
Азп Тгр Туг Уа1 Азр</td><td>
61у Уа1 С1и Уа1 Шз</td><td>
Азп</td></tr>
<tr><td>
275</td><td>
</td><td>
280</td><td>
285</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
А1а Ьуз ТИг</td><td>
Ьуз Рго</td><td>
Агд С1и С1и С1п РИе</td><td>
Азп Зег ТИг РИе Агд</td><td>
Уа1</td></tr>
<tr><td>
290</td><td>
</td><td>
295</td><td>
300</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Уа1 Зег Уа1</td><td>
Ьеи ТИг</td><td>
νβΐ Уа1 НЬз С1п Азр</td><td>
Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз</td><td>
С1и</td></tr>
<tr><td>
305</td><td>
</td><td>
310</td><td>
315</td><td>
320</td></tr>
<tr><td>
Туг Ьуз Суз</td><td>
Ьуз Уа1</td><td colspan="3">
Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и Ьуз</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
325</td><td>
330</td><td>
335</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
ТИг Не Зег</td><td>
Ьуз ТИг</td><td colspan="3">
Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТИг</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
340</td><td>
345</td><td>
350</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Ьеи Рго Рго</td><td>
Зег Агд</td><td colspan="3">
С1и С1и МеБ ТИг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТИг</td></tr>
<tr><td>
355</td><td>
</td><td>
360</td><td>
365</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Суз Ьеи Уа1</td><td>
Ьуз С1у</td><td colspan="3">
РИе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и</td></tr>
<tr><td>
370</td><td>
</td><td>
375</td><td>
380</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Зег Азп С1у</td><td>
С1п Рго</td><td colspan="3">
С1и Азп Азп Туг Ьуз ТИг ТИг Рго Рго МеБ Ьеи</td></tr>
<tr><td>
385</td><td>
</td><td colspan="3">
390 395 400</td></tr>
<tr><td>
Азр Зег Азр</td><td>
С1у Зег</td><td colspan="3">
РИе РИе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТИг Уа1 Азр Ьуз</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
405</td><td>
410</td><td>
415</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Зег Агд Тгр</td><td>
С1п С1п</td><td colspan="3">
С1у Азп Уа1 РИе Зег Суз Зег Уа1 МеБ Нгз С1и</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
420</td><td>
425</td><td>
430</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
А1а Ьеи Шз</td><td>
Азп Нгз</td><td colspan="3">
Туг ТИг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у</td></tr>
<tr><td>
435</td><td>
</td><td>
440</td><td>
445</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Ьуз</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
<210> 16</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
<211> 107</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
</table>
<p><212> Белок</p>
<p><213> РаББиз погчед±сиз</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<table border="1">
<tr><td>
<223</td><td>
</td><td colspan="3">
вариабельная</td><td colspan="2">
область</td><td colspan="2">
легкой ]</td><td>
цепи</td><td>
АЬ-ЗОР</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
<400</td><td>
></td><td>
16</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Азр</td><td>
11е</td><td>
С1п</td><td>
МеБ</td><td>
ТИг</td><td>
С1п</td><td>
Зег</td><td>
Рго</td><td>
Зег</td><td>
Зег</td><td>
Ьеи Зег</td><td>
А1а</td><td>
Зег</td><td>
Ьеи</td><td>
С1у</td></tr>
<tr><td>
1</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
5</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
10</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
15</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Азр</td><td>
Агд</td><td>
Уа1</td><td>
ТИг</td><td>
11е</td><td>
ТИг</td><td>
Суз</td><td>
Агд</td><td>
А1а</td><td>
Зег</td><td>
С1п Азр</td><td>
11е</td><td>
Зег</td><td>
Азп</td><td>
Туг</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
20</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
25</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
30</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Ьеи</td><td>
Азп</td><td>
Тгр</td><td>
Туг</td><td>
С1п</td><td>
С1п</td><td>
Ьуз</td><td>
Рго</td><td>
Азр</td><td>
С1у</td><td>
ТИг Уа1</td><td>
Ьуз</td><td>
Агд</td><td>
Ьеи</td><td>
11е</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
</td><td>
35</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
40</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td><td>
45</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
</table>
<p>75</p>
<p>029956</p>
<p>Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи Ьеи Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у</p>
<p>Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр Туг Зег Ьеи Зег Не Зег Зег Ьеи С1и Зег 65 70 75 80</p>
<p>С1и Азр РЬе А1а МеЬ Туг Туг Суз С1п С1п С1у Азр ТЬг Ьеи Рго Туг</p>
<p>ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз</p>
<p><210> 17</p>
<p><211> 123</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область тяжелой цепи АЬ-ЗОР и АЬ-ЗОРгп</p>
<p>С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1и Ьеи С1п Агд Рго С1у А1а 15 10 15</p>
<p>Зег Уа1 Ьуз Ьеи Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг 20 25 30</p>
<p>Азп МеЬ ΗΪ3 Тгр Уа1 Ьуз С1п Зег Низ С1у Ьуз Зег Ьеи С1и Тгр 11е 35 40 45</p>
<p>С1у С1и 11е Азп Рго Азп Зег С1у С1у А1а С1у Туг Азп С1п Ьуз РЬе</p>
<p>Ьуз С1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Азп ТЬг А1а Туг 65 70 75 80</p>
<p>МеЬ С1и Ьеи Зег Агд Ьеи ТЬг Зег С1и Азр Зег А1а Уа1 Туг Туг Суз</p>
<p>А1а Агд Ьеи С1у Туг Азр Азр 11е Туг Азр Азр Тгр Туг РЬе Азр Ча1 100 105 110</p>
<p>Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120</p>
<p><210> 18</p>
<p><211> 123</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> КаЬЬиз погцедгсиз</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> легкая цепь АЬ-ЗОК</p>
<p><400> 18</p>
<p>С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег С1у Рго С1и Ьеи С1п Агд Рго С1у А1а</p>
<p>10</p>
<p>15</p>
<p>Зег Уа1 Ьуз Ьеи Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг 20 25 30</p>
<p>Азп МеЬ Низ Тгр Уа1 Ьуз С1п Зег Нгз С1у Ьуз Зег Ьеи С1и Тгр 11е</p>
<p>С1у С1и 11е Азп Рго Азп Зег С1у С1у А1а С1у Туг Азп С1п Ьуз РЬе 50 55 60</p>
<p>Ьуз С1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Азп ТЬг А1а Туг</p>
<p>МеЬ С1и Ьеи Зег Агд Ьеи ТЬг Зег С1и Азр Зег А1а Уа1 Туг Туг Суз</p>
<p>А1а Агд Ьеи С1у Туг Азр Азр 11е Туг Азр Азр Тгр Туг РЬе Азр Уа1 100 105 110</p>
<p>Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120</p>
<p><210> 19</p>
<p><211> 445</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> тяжелая цепь АЬ— ЗОК и АЬ-ЗОКш</p>
<p>- 76 029956</p>
<p>- 77 029956</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область легкой цепи АЪ-ЗОКт</p>
<p><400> 20</p>
<p>Азр Не С1п. Меб ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Ьеи С1у 15 10 15</p>
<p>Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег 61п Азр 11е Зег Азп Туг 20 25 30</p>
<p>Ьеи Азп Тгр Туг 31п С1п Ьуз Рго Азр С1у ТЬг Уа1 Ьуз Агд Ьеи Не</p>
<p>Туг ТЬг Зег Агд Ьеи Ьеи Зег (31у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у Зег 50 55 60</p>
<p>С1у Зег С1у ТЬг Азр Туг Зег Ьеи Зег 11е Зег Зег Ьеи С1и Зег С1и</p>
<p>Азр РЬе А1а Меб Туг Туг Суз С1п С1п С1у Азр ТЬг Ьеи Рго Туг ТЬг 85 90 95</p>
<p>РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз 100 105</p>
<p><210> 21</p>
<p><211> 213</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><223> Ратизированное антитело</p>
<p><220</p>
<p><221> разное</p>
<p><223> легкая цепь АЬ-ЗОРт</p>
<p><400> 21</p>
<p>Азр 11е С1п Меб ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Ьеи С1у</p>
<p>Азр Агд Уа1 ТЬг Т1е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр Т1е Зег Азп Туг</p>
<p>20</p>
<p>25</p>
<p>30</p>
<p>Ьеи Азп Тгр Туг 61η С1п Ьуз Рго Азр С1у ТЬг Уа1 Ьуз Агд Ьеи 11е 35 40 45</p>
<p>Туг ТЬг Зег Агд Ьеи Ьеи Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у Зег</p>
<p>50</p>
<p>55</p>
<p>С1у Зег С1у ТЬг Азр Туг Зег Ьеи Зег 11е Зег Зег Ьеи С1и Зег С1и</p>
<p>Азр РЬе А1а Меб Туг Туг Суз С1п С1п С1у Азр ТЬг Ьеи Рго Туг ТЬг</p>
<p>ТЬг Уа1 Зег 11е РЬе Рго Рго Зег ТЬг С1и С1п Ьеи А1а ТЬг С1у С1у 115 120 125</p>
<p>Уа1 Ьуз Тгр Ьуз 11е Азр С1у ТЬг С1и Агд Агд Азр С1у Уа1 Ьеи Азр 145 150 155 160</p>
<p>Зег Уа1 ТЬг Азр С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Мег Зег Зег 165 170 175</p>
<p>ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Ьуз А1а Азр Туг С1и Зег Ηίε Азп Ьеи Туг ТЬг 180 185 190</p>
<p>Суз С1и Уа1 Уа1 Шз Ьуз ТЬг Зег Зег Зег Рго Уа1 Уа1 Ьуз Зег РЬе 195 200 205</p>
<p><210> 22</p>
<p><211> 318</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область легкой цепи АЬ-31</p>
<p><400> 22</p>
<p>дасабссада бдасссадбс бссабссбсс сбдбсбдсаб сбдбаддбда ссдбдбсасс 60</p>
<p>авсасббдсс дсдсаадвса ддаваббадс адсбабРРаа абгддгабса дсадааасса 120</p>
<p>- 78</p>
<p>029956</p>
<p>дддааадссс сРаадсРссР даРсРаРРсР асРРсссдРР рдаарадрдд ддРсссаРса 180</p>
<p>сдсРРсадРд дсадрддсРс РдддасадаР РРсасРсРса ссаРсадсад РсРдсаассР 240</p>
<p>даадаРРРРд саасРРасРа сРдРсаасад даРаРРааас асссРасдРР сддрсааддс 300</p>
<p>ассааддрдд адаРсааа 318</p>
<p><210> 23</p>
<p><211> 106</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<table border="1">
<tr><td>
<223</td><td>
’> вариабельная</td><td>
область</td><td>
легкой цепи</td><td>
АЬ-31</td></tr>
<tr><td>
<4 0 С</td><td>
)> 23</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
Азр</td><td>
Не С1п Мер ТНг</td><td>
С1п Зег</td><td>
Рго Зег Зег</td><td>
Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у</td></tr>
<tr><td>
1</td><td>
5</td><td>
</td><td>
10</td><td>
15</td></tr>
<tr><td>
Азр</td><td>
Агд Уа1 ТНг Не</td><td>
ТНг Суз</td><td>
Агд А1а Зег</td><td>
С1п Азр 11е Зег Зег Туг</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
20</td><td>
</td><td>
25</td><td>
30</td></tr>
<tr><td>
Ьеи</td><td>
Азп Тгр Туг С1п</td><td>
С1п Ьуз</td><td>
Рго С1у Ьуз</td><td>
А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
35</td><td>
</td><td>
40</td><td>
45</td></tr>
<tr><td>
Туг</td><td>
Зег ТНг Зег Агд</td><td>
Ьеи Азп</td><td>
Зег С1у Уа1</td><td>
Рго Зег Агд РНе Зег С1у</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
50</td><td>
55</td><td>
</td><td>
60</td></tr>
<tr><td>
Зег</td><td>
С1у Зег С1у ТНг</td><td>
Азр РНе</td><td>
ТНг Ьеи ТНг</td><td>
11е Зег Зег Ьеи С1п Рго</td></tr>
<tr><td>
65</td><td>
</td><td>
70</td><td>
</td><td>
75 80</td></tr>
<tr><td>
С1и</td><td>
Азр РНе А1а ТНг</td><td>
Туг Туг</td><td>
Суз С1п С1п</td><td>
Азр 11е Ьуз Шз Рго ТНг</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
85</td><td>
</td><td>
90</td><td>
95</td></tr>
<tr><td>
РНе</td><td>
С1у С1п С1у ТНг</td><td>
Ьуз Уа1</td><td>
С1и 11е Ьуз</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
</td><td>
100</td><td>
</td><td>
105</td><td>
</td></tr>
</table>
<p><210> 24</p>
<p><211> 360</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> вариабельная область тяжелой цепи АЬ-31</p>
<p><400> 24</p>
<table border="1">
<tr><td>
даддрдсадс</td><td>
рддрдсадрс</td><td>
РддддсРдад</td><td>
дрдаадаадс</td><td>
сРдддРссРс</td><td>
ддрдааддрс</td><td>
60</td></tr>
<tr><td>
РссРдсаадд</td><td>
сРРсРддРРР</td><td>
РассРРсасс</td><td>
дасРаРаРРа</td><td>
РдсасРдддР</td><td>
дсдРсаддсс</td><td>
120</td></tr>
<tr><td>
ссРддРсаад</td><td>
ддсРРдадрд</td><td>
дардддсрар</td><td>
аРсаасссРР</td><td>
араардарда</td><td>
сассдаарас</td><td>
180</td></tr>
<tr><td>
аасдадаадР</td><td>
Рсаадддссд</td><td>
РдРсасдаРР</td><td>
ассдсддаса</td><td>
ааРссасдад</td><td>
сасадссРас</td><td>
240</td></tr>
<tr><td>
арддадсрда</td><td>
дсадссрдсд</td><td>
сРсРдаддас</td><td>
асддссдрдр</td><td>
аррасрдрдс</td><td>
дсдРРсдаРР</td><td>
300</td></tr>
<tr><td>
РаРРасРасд</td><td>
аРдссссдРР</td><td>
РдсРРасРдд</td><td>
ддссааддда</td><td>
сРсРддРсас</td><td>
сдРсРсРадР</td><td>
360</td></tr>
</table>
<p><210> 25</p>
<p><211> 120</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<table border="1">
<tr><td>
<223></td><td>
вариабельная</td><td>
область</td><td>
тяжелой</td><td>
цепи АЬ-31</td></tr>
<tr><td>
<400> ΐ</td><td>
25</td><td>
</td><td>
</td><td>
</td></tr>
<tr><td>
С1и Уа1 1</td><td>
С1п Ьеи Уа1
5</td><td>
С1п Зег</td><td>
С1у А1а</td><td>
С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 10 15</td></tr>
<tr><td>
Зег Уа1</td><td>
Ьуз Уа1 Зег 20</td><td>
Суз Ьуз</td><td>
А1а Зег 25</td><td>
С1у РНе ТНг РНе ТНг Азр Туг 30</td></tr>
<tr><td>
11е Мер</td><td>
Ηίε Тгр Уа1 35</td><td>
Агд С1п</td><td>
А1а Рго 40</td><td>
С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Мер 45</td></tr>
<tr><td>
С1у Туг 50</td><td>
11е Азп Рго</td><td>
Туг Азп 55</td><td>
Азр Азр</td><td>
ТНг С1и Туг Азп С1и Ьуз РНе 60</td></tr>
<tr><td>
Ьуз С1у 65</td><td>
Агд Уа1 ТНг</td><td>
11е ТНг
70</td><td>
А1а Азр</td><td>
Ьуз Зег ТНг Зег ТНг А1а Туг 75 80</td></tr>
<tr><td>
Мер С1и</td><td>
Ьеи Зег Зег
85</td><td>
Ьеи Агд</td><td>
Зег С1и</td><td>
Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз 90 95</td></tr>
<tr><td>
А1а Агд</td><td>
Зег 11е Туг 100</td><td>
Туг Туг</td><td>
Азр А1а 105</td><td>
Рго РНе А1а Туг Тгр С1у С1п
110</td></tr>
</table>
<p>- 79 029956</p>
<p>61у ТНг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120</p>
<p><210> 26</p>
<p><211> 11</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ЬСЬР1 АЬ-31</p>
<p><400> 26</p>
<p>Агд А1а Зег С1п Азр Не Зег Зег Туг Ьеи Азп 15 10</p>
<p><210> 27</p>
<p><211> 7</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ЬСБР2 АЬ-31</p>
<p><400> 27</p>
<p>Зег ТЬг Зег Агд Ьеи Аэп Зег 1 5</p>
<p><210> 28</p>
<p><211> 8</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> ЬСЬРЗ АЬ-31</p>
<p><400> 28</p>
<p>С1п С1п Азр 11е Ьуз Н1з Рго ТЬг 1 5</p>
<p><210> 29</p>
<p><211> 5</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное <223> НСЬР.1 АЬ-31</p>
<p><400> 29</p>
<p>Азр Туг 11е Мер Н±з 1 5</p>
<p><210> 30</p>
<p><211> 17</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> Н СОР-2 АЬ-31</p>
<p><400> 30</p>
<p>Туг Не Азп Рго Туг Азп Азр Азр ТЬг С1и Туг Азп С1и Ьуз РЬе Ьуз 15 10 15</p>
<p>С1у</p>
<p><210> 31</p>
<p><211> 11</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> НСЭРЗ АЬ-31</p>
<p><400> 31</p>
<p>8ег 11е Туг Туг Туг Азр А1а Рго РЬе А1а Туг 15 10</p>
<p>- 80 029956</p>
<p><210> 32</p>
<p><211> 639</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> легкая цепь АЬ-31</p>
<p><400> 32</p>
<p>дасаОссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддЬда ссдЬдЬсасс 60</p>
<p>авсасЬЬдсс дсдсаадвса ддаваЬЬадс адсЬаЬВВаа аьвддваьса дсадааасса 120</p>
<p>дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬЬсЬ асЬЬсссдЬЬ ЬдааЬадЬдд ддЬсссаЬса 180</p>
<p>сдсПсадгд дсадьддсьс Ьдддасадав ггсасЬсгса ссавсадсад гсгдсаассг 240</p>
<p>даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа сЬдЬсаасад даЬаЬЬааас асссЬасдЬЬ сддЬсааддс 300</p>
<p>ассааддЬдд адаЬсааасд ЬасддЬддсЬ дсассаЬсЬд ЬсЬЬсаЬсЬЬ сссдссаЬсЬ 360</p>
<p>давдадсадв гдааагсгдд аасгдссбсг дгьдьдгдсс ЬдсьдааЬаа сггсбагссс 420</p>
<p>адададдсса аадЬасадЬд дааддЬддаЬ аасдсссЬсс ааЬсдддЬаа сЬсссаддад 480</p>
<p>адвдЬсасад адсаддасад сааддасадс ассЬасадсс Ьсадсадсас ссгдасдсгд 540</p>
<p>адсааадсад асЬасдадаа асасааадЬс ЬасдссЬдсд аадЬсассса ЬсадддссЬд 600</p>
<p>адсгсдсссд всасааадад сггсаасадд ддададвдв 639</p>
<p><210> 33</p>
<p><211> 213</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> легкая цепь АЬ-31</p>
<p><400> 33</p>
<p>Азр 11е С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у</p>
<p>10</p>
<p>15</p>
<p>Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр 11е Зег Зег Туг 20 25 30</p>
<p>Ьеи Аеп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 35 40 45</p>
<p>Туг Зег ТЬг Зег Агд Ьеи Азп Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег 50 55 60</p>
<p>С1у</p>
<p>Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п 65 70 75</p>
<p>Рго</p>
<p>80</p>
<p>С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Азр 11е Ьуз ΗΪ3 Рго 85 90 95</p>
<p>РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд ТЬг 1/а1 А1а А1а 100 105 110</p>
<p>Зег 17а1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125</p>
<p>А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140</p>
<p>ν^Ι С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп $ег С1п 145 150 155</p>
<p>С1и</p>
<p>160</p>
<p>Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175</p>
<p>ТНг Ьеи ТНг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз ΗΪ5 Ьуз Уа1 Туг .</p>
<p>180 185 190</p>
<p>Суз С1и Уа1 ТНг Ηί5 С1л С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205</p>
<p>Азл Агд С1у С1и Суз 210</p>
<p><210> 34</p>
<p><211> 1338</p>
<p><212> ДНК</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> тяжелая цепь АЬ-31</p>
<p>- 81</p>
<p>029956</p>
<p><400> 34</p>
<p>даддЪдсадс бддбдсадбс бддддсбдад дбдаадаадс сбдддбссбс ддбдааддбс 60</p>
<p>бссбдсаадд сГГсГддГГГ ГассГГсасс дасГаГаГГа бдсасбдддб дсдбсаддсс 120</p>
<p>ссбддбсаад ддсббдадбд дабдддсбаб абсаасссбб абаабдабда сассдаабас 180</p>
<p>аасдадаадб бсаадддссд бдбсасдабб ассдсддаса аабссасдад сасадссбас 240</p>
<p>абддадсбда дсадссбдсд сбсбдаддас асддссдбдб аббасбдбдс дсдббсдабб 300</p>
<p>баббасбасд абдссссдбб бдсббасбдд ддссааддда сбсбддбсас сдбсбсбадб 360</p>
<p>дссбссасса адддсссабс ддбсббсссс сбддсдсссб дсбссаддад сассбссдад 420</p>
<p>адсасадсдд сссбдддсбд ссбддбсаад дасбасббсс ссдаассддб дасддбдбсд 480</p>
<p>бддаасбсад дсдсбсбдас садсддсдбд сасассббсс садсбдбссб асадбссбса 540</p>
<p>ддасбсбасб сссбсадсад сдбддбдасс дбдсссбсса дсаасббсдд сасссадасс 600</p>
<p>басассбдса асдбадабса саадсссадс аасассаадд бддасаадас адббдадсдс 660</p>
<p>ааабдббдбд бсдадбдссс ассдбдссса дсассассбд бддсаддасс дбсадбсббс 720</p>
<p>сбсббссссс саааасссаа ддасасссбс абдабсбссс ддассссбда ддбсасдбдс 780</p>
<p>дбддбддбдд асдбдадсса сдаадасссс даддбссадб бсаасбддба сдбддасддс 840</p>
<p>дбддаддбдс абаабдссаа дасааадсса сдддаддадс адббсаасад сасдббссдб 900</p>
<p>дбддбсадсд бссбсассдб бдбдсассад дасбддсбда асддсаадда дбасаадбдс 960</p>
<p>ааддбсбсса асаааддссб сссадссссс абсдадаааа ссабсбссаа аассаааддд 1020</p>
<p>садссссдад аассасаддб дбасасссбд сссссабссс дддаддадаб дассаадаас 1080</p>
<p>саддбсадсс бдассбдссб ддбсаааддс ббсбасссса дсдасабсдс сдбддадбдд 1140</p>
<p>дададсаабд ддсадссдда даасаасбас аадассасас сбсссабдсб ддасбссдас 1200</p>
<p>ддсбссббсб бссбсбасад саадсбсасс дбддасаада дсаддбддса дсаддддаас 1260</p>
<p>дбсббсбсаб дсбссдбдаб дсабдаддсб сбдсасаасс асбасасдса даададссбс 1320</p>
<p>бсссбдбсбс сдддбааа 1338</p>
<p><210> 35</p>
<p><211> 446</p>
<p><212> Белок</p>
<p><213> Искусственная последовательность</p>
<p><220></p>
<p><223> Гуманизированное антитело</p>
<p><220></p>
<p><221> разное</p>
<p><223> тяжелая цепь АЪ-31</p>
<p>С1и Чаб С1п Ьеи Ча! Сбп Зег Сбу Аба С1и Чаб Ьуз Ьуз Рго С1у Зег</p>
<p>Зег Чаб Ьуз Чаб Зег Суз Ьуз Аба Зег Сбу РЬе ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг</p>
<p>Не Меб Нбз Тгр Чаб Агд Сбп Аба Рго Сбу Сбп Сбу Ьеи Сби Тгр Меб</p>
<p>Сбу Туг 11е Азп Рго Туг Азп Азр Азр ТЬг Сби Туг Азп Сби Ьуз РЬе</p>
<p>Ьуз Сбу Агд Чаб ТЬг 11е ТЬг Аба Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг Аба Туг</p>
<p>Меб Сби Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Сби Азр ТЬг Аба Чаб Туг Туг Суз</p>
<p>А1а Агд Зег 11е Туг Туг Туг Азр Аба Рго РЬе Аба Туг Тгр Сбу Сбп</p>
<p>Сбу ТЬг Ьеи Чаб ТЬг Чаб Зег $ег Аба Зег ТЬг Ьуз Сбу Рго Зег Чаб</p>
<p>РЬе Рго Ьеи Аба Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег Сби Зег ТЬг Аба Аба</p>
<p>Ьеи Сбу Суз Ьеи Чаб Ьуз Азр Туг РЬе Рго Сби Рго Чаб ТЬг Чаб</p>
<p>Зег</p>
<p>160</p>
<p>Тгр Азп Зег Сбу Аба Ьеи ТЬг Зег Сбу Чаб Нбз ТЬг РЬе Рго Аба Чаб</p>
<p>Ьеи Сбп Зег Зег Сбу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Ча1 Чаб ТЬг Чаб Рго</p>
<p>Зег Зег Азп РЬе Сбу ТЬг Сбп ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Чаб Азр Нбз Ьуз</p>
<p>Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Чаб Азр Ьуз ТЬг Чаб Сби Агд Ьуз Суз Суз Чаб</p>
<p>Сби Суз Рго Рго Суз Рго Аба Рго Рго Чаб Аба Сбу Рго Зег Чаб</p>
<p>РЬе</p>
<p>240</p>
<p>- 82 029956</p>
<table border="1">
<tr><td rowspan="2">
<p>Ьеи</p></td><td rowspan="2">
<p>РЬе Рго Рго</p></td><td rowspan="2">
<p>Ьуз</p>
<p>245</p></td><td rowspan="2">
<p>Рго</p></td><td colspan="2">
<p>Ьуз Азр ТЪг Ьеи Мек ТЬе Зег Агд ТЪг Рго</p></td></tr>
<tr><td>
<p>250</p></td><td>
<p>255</p></td></tr>
<tr><td>
<p>СЬи</p></td><td>
<p>ЦаЬ ТЪг Суз</p></td><td>
<p>Е/аЬ</p></td><td>
<p>ЦаЬ</p></td><td>
<p>УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз</p></td><td>
<p>СЬи Азр Рго СЬи Е/аЬ</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>260</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>265</p></td><td>
<p>270</p></td></tr>
<tr><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>РЬе Азп Тгр</p></td><td>
<p>Туг</p></td><td>
<p>УаЬ</p></td><td>
<p>Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ</p></td><td>
<p>НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>275</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>280</p></td><td>
<p>285</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Ьуз</p></td><td>
<p>Рго Агд СЬи</p></td><td>
<p>СЬи</p></td><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>РЬе Азп Зег ТЬг РЬе</p></td><td>
<p>Агд Е/аЬ Е7а1 Зег Е7а1</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>290</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>295</p></td><td>
<p>300</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Ьеи</p></td><td>
<p>ТЬг УаЬ УаЬ</p></td><td>
<p>НЬз</p></td><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>Азр Тгр Ьеи Азп СЬу</p></td><td>
<p>Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз</p></td></tr>
<tr><td>
<p>305</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>310</p></td><td>
<p>315</p></td><td>
<p>320</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Ьуз</p></td><td>
<p>Е7а1 Зег Азп</p></td><td>
<p>Ьуз</p></td><td>
<p>СЬу</p></td><td>
<p>Ьеи Рго А1а Рго Не</p></td><td>
<p>СЬи Ьуз ТЬг 11е Зег</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>325</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>330</p></td><td>
<p>335</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Ьуз</p></td><td>
<p>ТЬг Ьуз СЬу</p></td><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>Рго</p></td><td>
<p>Агд СЬи Рго СЬп Е/аЬ</p></td><td>
<p>Туг ТЪг Ьеи Рго Рго</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>340</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>345</p></td><td>
<p>350</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Зег</p></td><td>
<p>Агд СЬи СЬи</p></td><td>
<p>Мек</p></td><td>
<p>ТЬг</p></td><td>
<p>Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег</p></td><td>
<p>Ьеи ТЪг Суз Ьеи Е/аЬ</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>355</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>360</p></td><td>
<p>365</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Ьуз</p></td><td>
<p>СЬу РЬе Туг</p></td><td>
<p>Рго</p></td><td>
<p>Зег</p></td><td>
<p>Азр 11е АЬа УаЬ СЬи</p></td><td>
<p>Тгр СЬи Зег Азп СЬу</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>370</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>375</p></td><td>
<p>380</p></td></tr>
<tr><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>Рго СЬи Азп</p></td><td>
<p>Азп</p></td><td>
<p>Туг</p></td><td>
<p>Ьуз ТЬг ТЪг Рго Рго</p></td><td>
<p>Мек Ьеи Азр Зег Азр</p></td></tr>
<tr><td>
<p>385</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>390</p></td><td>
<p>395</p></td><td>
<p>400</p></td></tr>
<tr><td>
<p>СЬу</p></td><td>
<p>Зег РЬе РЬе</p></td><td>
<p>Ьеи</p></td><td>
<p>Туг</p></td><td>
<p>Зег Ьуз Ьеи ТЬг Е/аЬ</p></td><td>
<p>Азр Ьуз Зег Агд Тгр</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>405</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>410</p></td><td>
<p>415</p></td></tr>
<tr><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>СЬп СЬу Азп</p></td><td>
<p>УаЬ</p></td><td>
<p>РЬе</p></td><td>
<p>Зег Суз Зег УаЬ Мек</p></td><td>
<p>НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>420</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>425</p></td><td>
<p>430</p></td></tr>
<tr><td>
<p>Азп</p></td><td>
<p>НЬз Туг ТЬг</p></td><td>
<p>СЬп</p></td><td>
<p>Ьуз</p></td><td>
<p>Зег Ьеи Зег Ьеи Зег</p></td><td>
<p>Рго СЬу Ьуз</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td>
<p>435</p></td><td>
<p></p></td><td>
<p></p></td><td>
<p>440</p></td><td>
<p>445</p></td></tr>
<tr><td>
<p></p></td><td colspan="5">