DE69919195T2

DE69919195T2 - Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzender eigenschaft

Info

Publication number: DE69919195T2
Application number: DE69919195T
Authority: DE
Inventors: Michael Ankersen; Stefan Lutz Richter
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Helsinn Therapeutics US Inc
Priority date: 1998-11-03
Filing date: 1999-11-03
Publication date: 2005-08-04
Anticipated expiration: 2019-11-04
Also published as: PL347433A1; EP1127071B1; EP1127071A1; AU1262800A; ZA200102997B; NO20012169L; CA2347102A1; CN1325408A; DE69919195D1; HUP0104244A3; ATE272651T1; BR9915009A; KR20010080388A; WO2000026252A1; NO20012169D0; CZ20011309A3; JP4481502B2; IL142579A0; JP2002528556A; HUP0104244A2

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die folgende Erfindung betrifft neue Verbindungen, diese enthaltende Zusammensetzungen und deren Verwendung zur Behandlung von medizinischen Störungen, die durch einen Mangel an Wachstumshormon verursacht werden.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Wachstumshormon ist ein Hormon, das das Wachstum des gesamten Gewebes, das wachsen kann, stimuliert. Zudem ist bekannt, dass Wachstumshormon eine Anzahl von Wirkungen auf Stoffwechselvorgänge, z. B. Stimulierung von Proteinsynthese und Mobilisierung von freier Fettsäure aufweist und eine Verschiebung des Energiestoffwechsels von Kohlehydrat- zu Fettsäurestoffwechsel verursacht. Ein Mangel an Wachstumshormon kann zu einer Anzahl ernster medizinischer Störungen, z. B. Zwergwuchs führen.
Wachstumshormon wird von der Hypophyse freigesetzt. Die Freisetzung liegt unter enger entweder direkter oder indirekter Regulierung einer Anzahl von Hormonen und Neurotransmittern. Die Wachstumshormonfreisetzung kann durch Wachstumshormon freisetzendes Hormon (GHRH) stimuliert und durch Somatostatin gehemmt werden. In beiden Fällen werden die Hormone von dem Hypothalamus freigesetzt, jedoch wird ihre Wirkung primär über spezifische Rezeptoren, die in der Hypophyse lokalisiert sind, vermittelt. Andere die Freisetzung von Wachstumshormon von der Hypophyse stimulierende Verbindungen wurden ebenso beschrieben. Zum Beispiel setzen Arginin, L-3,4-Dihydroxyphenylalanin (L-Dopa), Glucagon, Vasopressin, PACAP (Hypophyseadenylylcyclase aktivierendes Peptid), Muscarinrezeptoragonisten und synthetisches Hexapeptid, GHRP (Wachstumshormon freisetzendes Peptid) endogenes Wachstumshormon entwe der durch eine direkte Wirkung auf die Hypophyse oder durch Beeinflussung der Freisetzung des GHRH und/oder Somatostatin von dem Hypothalamus frei.
Bei Störungen oder Zuständen, bei welchen erhöhte Wachstumshormongehalte erwünscht sind, trägt die Proteinnatur des Wachstumshormons zu allem bei, macht jedoch eine parenterale Verabreichung unzuverlässig. Weiterhin sind andere direkt wirkende natürliche Sekretagoge, z. B. GHRH und PACAP, längere Polypeptide, wobei aus diesem Grund ihre orale Verabreichung bevorzugt ist.
Die Verwendung von bestimmten Verbindungen zum Erhöhen der Wachstumshormongehalte bei Säugern wurde früher z. B. in EP 18 072 , EP 83 864 , WO 83/02272, WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/10933, WO 88/9780, WO 91/18016, WO 92/01711, WO 93/04081, WO 94/13696, WO 95/17423, WO 95/14668, WO 98/15148, WO 96/22997, WO 96/35713, WO 97/00894, WO 97/22620, WO 97/23508, WO 97/40023 und WO 98/10653 vorgeschlagen.
Die Zusammensetzung von Wachstumshormon freisetzenden Verbindungen ist für deren Wachstumshormon freisetzende Wirkung sowie für ihre Bioverfügbarkeit wichtig. Es ist deshalb die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Verbindungen mit Wachstumshormon freisetzenden Eigenschaften bereitzustellen, die verbesserte Eigenschaften in Bezug auf bekannte Peptide dieses Typs aufweisen. Außerdem ist es eine Aufgabe, neue Verbindungen mit Wachstumshormon freisetzenden Eigenschaften (Wachstumshormonsekretagoge) bereitzustellen, die spezifisch und/oder selektiv sind und im Wesentlichen keine Nebenwirkungen wie z. B. Freisetzung von LH, FSH, TSH, ACTH, Vasopressin, Oxytocin, Kortison und/oder Prolactin aufweisen. Es ist auch eine Aufgabe, Verbindungen bereitzustellen, die eine gute orale Bioverfügbarkeit aufweisen. Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, Verbindungen mit einer relativ kurzen Halbwertszeit der Eliminierung aus dem bereitzustellen. Noch eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, Verbindungen bereitzustellen, die eine gute orale Bioverfügbarkeit mit einer relativ kurzen Halbwertszeit der Eliminierung aus dem Plasma aufweisen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung stellt eine neue Verbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon bereit, die/das unter normalen Versuchsbedingungen in vitro direkt auf die Hypophysezellen zur Freisetzung von Wachstumshormon wirkt.
Die Wachstumshormon freisetzende Verbindung kann in vitro als einzigartiges Forschungswerkzeug zum Verständnis u. a. dessen, wie Wachstumshormnsekretion auf Hypophyseebene reguliert wird, verwendet werden.
Außerdem kann die Wachstumshormon freisetzende Verbindung der vorliegenden Erfindung auch in vivo zur Erhöhung der endogenen Wachstumshormonfreisetzung verwendet werden.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Demzufolge betrifft die vorliegende Erfindung die Verbindung (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-{(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(2-pyridinyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl}carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]amid
und ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Die Verbindung der vorliegenden Erfindung kann gegebenenfalls in Form eines pharmazeutisch verträglichen Salzes wie eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes, einschließlich, eines Salzes, das durch Umsetzen der Verbindung mit einer anorganischen oder organischen Säure wie Salz-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Essig-, Phosphor-, Milch-, Äpfel-, Malein-, Mandel-, Phthal-, Zitronen-, Glutar-, Glucen-, Methansulfon-, Salicyl-, Bernstein-, Wein-, Toluolsulfon-, Trifluoressig-, Sulfamin- oder Fumarsäure und/oder Wasser, hergestellt ist, vorliegen.
Die Verbindung der Erfindung kann in Form eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes verabreicht werden. Es wird angenommen, dass solche Salzformen in etwa dieselbe Aktivitätsordnung wie die Form der freien Base zeigen.
In einem anderen Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Arzneimittel, das eine Verbindung der Erfindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon als Wirkstoff zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel umfasst.
Solche Arzneimittel können durch herkömmliche Techniken, wie z. B. in Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985, oder in Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. Ausgabe (1995) beschrieben, hergestellt werden. Die Zusammensetzungen können in herkömmlichen Formen, z. B. Kapseln, Tabletten, Aerosolen, Lösungen, Suspensionen oder topischen Anwendungen vorkommen.
Bei dem eingesetzten pharmazeutischen Träger oder Verdünnungsmittel kann es sich um einen herkömmlichen festen oder flüssigen Träger handeln. Beispiele für feste Träger sind Laktose, Terra alba, Saccharose, Cyclodextrin, Talkum, Gelatine, Agar, Pektin, Akaziengummi, Magnesiumstearat, Stearinsäure oder Niederalkylether von Cellulose. Beispiele für flüssige Träger sind Sirup, Erdnussöl, Olivenöl, Phospholipide, Fettsäuren, Fettsäureamine, Polyoxyethylen oder Wasser.
Gleichermaßen kann der Träger oder das Verdünnungsmittel jedes beliebige auf dem Fachgebiet bekannte Material mit Dauerfreisetzung wie Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat allein oder gemischt mit einem Wachs einschließen.
Wird ein fester Träger zur oralen Verabreichung verwendet, kann das Präparat in Tablettenform, in eine Hartgelatinekapsel in Pulver- oder Pelletform eingebracht oder in Form eines Trochus oder einer Pastille vorliegen. Die Menge des festen Trägers variiert breit, beträgt jedoch gewöhnlich etwa 25 mg bis etwa 1 g. Wird ein flüssiger Träger verwendet, kann das Präparat in Form eines Sirups, einer Emulsion, einer Weichgelatinekapsel oder einer sterilen injizierbaren Flüssigkeit wie einer wässrigen oder nicht wässrigen flüssigen Suspension oder Lösung vorliegen.
Eine typische durch herkömmliche Tablettiertechniken hergestellte Tablette kann Folgendes enthalten: Kern

Wirkverbindung (als freie Verbindung oder Salz davon) 10 mg

Kolloidales Siliciumdioxid (Aerosil) 1,5 mg

Cellulose, mikrokrist. (Avicel) 70 mg

Modifizierter Cellulosegummi (Ac-Di-Sol) 7,5 mg

Magnesiumstearat

Beschichtung

HPMC ca. 9 mg

Mywacett 9-40 T ca. 0,9 mg
Zur nasalen Verabreichung kann das Präparat eine Verbindung der Formel I enthalten, die in einem flüssigen Träger, insbesondere einem wässrigen Träger zur Aerosolanwendung gelöst oder suspendiert ist. Der Träger kann Zusätze wie Löslichmacher, z. B. Propylenglycol, oberflächenaktive Mittel, Absorptionsverbesserer wie Lecithin (Phosphatidylcholin) oder Cyclodextrin oder Konservierungsmittel wie Parabene enthalten.
Es zeigte sich, dass die Verbindung der Erfindung die Fähigkeit besitzen, endogenes Wachstumshormon in vivo freizusetzen. Die Verbindung kann deshalb bei Behandlung von Zuständen verwendet werden, die erhöhte Plasmawachstumshormongehalte erfordern, wie bei Menschen, welchen es an Wachstumshormonen mangelt, z. B. bei älteren Patienten oder Vieh. Weiterhin weist die Verbindung der Erfindung eine hohe orale Wirksamkeit auf.
Das Arzneimittel der vorliegenden Erfindung kann folglich ein Arzneimittel zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon von der Hypophyse sein.
In einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Erfindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon zur Herstellung eines Medikaments zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon von der Hypophyse eines Säugers.
Dem Fachmann ist es bekannt, dass die gegenwärtigen und möglichen Verwendungen von Wachstumshormon bei Menschen verschiedenartig und zahlreich sind. Folglich kann die Verbindung der Erfindung zum Zwecke des Stimulierens der Freisetzung von Wachstumshormon von der Hypophyse verabreicht werde und würden dann ähnliche Wirkungen oder Verwendungen als Wachstumshormon selbst aufweisen.
Die Verbindung oder das Salz davon wird zur Stimulierung von Wachstumshormonfreisetzung bei älteren Menschen; Verhinderung von katabolischen Nebenwirkungen von Glucocortikoiden, Verhinderung und Behandlung von Osteoporose, Behandlung von chronischem Müdigkeitssyndrom (CFS), Behandlung von akutem Müdigkeitssyndrom und Muskelverlust infolge von Wahloperation, Stimulierung des Immunsystems, Beschleunigung der Wundheilung, Beschleunigung von Knochenbruchreparatur, Beschleunigung der Reparatur von komplizierten Brüchen, z. B. bei Distraktionsosteogenese, Behandlung von Sekundärschwund bei Brüchen, Behandlung von Wachstumsverzögerung, Behandlung von aus Nierenversagen oder -insuffizienz resultierender Wachstumsverzögerung, Behandlung von Cardiomyopathie, Behandlung von Schwund in Verbindung mit chronischer Lebererkrankung, Behandlung von Thrombocytopänie, Behandlung von Wachstumsverzögerung in Verbindung mit Crohn-Erkrankung, Behandlung des "Kurzdarm"-Syndroms, Behandlung von Schwund in Verbindung mit chronischer obstruktiver Lungenerkrankung (COPD), Behandlung von mit Transplantation verbundenen Komplikationen, Behandlung von physiologischer Kurzstatur, einschließlich von Kindern mit Wachstumshormonmangel, und mit chronischer Erkrankung verbundener Kurzstatur, Behandlung von Fettsucht und mit Fettsucht verbundener Wachstumsverzögerung, Behandlung von Magersucht, Behandlung von mit dem Prader-Willi-Syndrom und Turner-Syndrom verbundener Wachstumsverzögerung; Erhöhung der Wachstumsgeschwindigkeit eines Patienten mit teilweisem Wachstumshormonunempfindlichkeitssyndrom, Beschleunigung der Heilung und Reduzierung der Hospitalisierung von Verbrennungspatienten; Behandlung von intrauteriner Wachstumsverzögerung, Skelettdysplasie, Hyperkorti solismus und Cushing-Syndrom; Induzierung von pulsierender Wachstumshormonfreisetzung; Ersatz von Wachstumshormonen bei Stresspatienten, Behandlung von Osteochondrodysplasien, Noonan-Syndrom, Schizophrenie, Depressionen, Alzheimer-Krankheit, verzögerter Wundheilung und psychosozialer Deprivation, Behandlung von Katabolismus in Verbindung mit Lungendysfunktion und Ventilatorabhängigkeit, Behandlung von Herzversagen oder damit verbundener vaskulärer Dysfunktion, Behandlung von beeinträchtigter Herzfunktion, Behandlung oder Verhütung von Herzinfarkt, Senken des Blutdrucks, Schutz gegen ventrikuläre Dysfunktion oder Verhütung von Reperfusionsvorfällen, Behandlung von Erwachsenen in chronischer Dialyse, Schwächung von Protein-katabolischen Reaktionen nach Hauptoperation, Reduzierung von Abmagerung und Proteinverlust aufgrund einer chronischen Erkrankung wir Krebs oder AIDS; Behandlung von Hyperinsulinämie, einschließlich Nesidioblastose, zusätzliche Behandlung zur Eisprungsinduzierung; zur Stimulierung von thymischer Entwicklung und Verhinderung der mit dem Alter verbundenen Abnahme an tyhmischer Funktion, Behandlung von immunsupprimierten Patienten, Behandlung von Sarkopänie, Behandlung von Schwund in Verbindung mit AIDS, Verbesserung der Muskelstärke, Beweglichkeit, Beibehaltung der Hautdicke, metabolische Homöostase und Nierenhomöostase bei gebrechlichen älteren Menschen, Stimulierung von Osteoblasten, Knochenwiederaufbau und Knorpelwachstum, Regulierung der Nahrungsmittelaufnahme, Stimulierung des Immunsystems von Begleittieren und Behandlung von Störungen des Alterns von Begleittieren, Unterstützen des Wachstums bei Vieh und Stimulierung des Wollwachstums beim Schaf, Erhöhung der Milchproduktion in Vieh, Behandlung von metabolischem Syndrom (Syndrom X), Behandlung von Insulinresistenz, einschließlich NIDDM, bei Säugern, z. B. Menschen, Behandlung von Insulinresistenz im Herzen, Verbesserung der Schlafqualität und Korrektur des damit verbundenen Hyposomatropismus von Seneszenz aufgrund der hohen Zunahme des REM-Schlafs und einer Abnahme der REM-Latenz, Behandlung von Hypothermie, Behandlung von mit dem Alter verbundener Gebrechlichkeit, Behandlung von kongestivem Herzversagen, Behandlung von Hüftfrakturen, Behandlung von Immundefizienz in Personen mit einem abgesenkten T4/T8-Verhältnis, Behandlung von Muskelatrophie Behandlung von muskelsketaler Beeinträchtigung bei älteren Menschen, Verbesserung der Aktivität von Proteinkinase B (PKB), Verbesserung der Gesamtlungenfunktion, Behandlung von Schlafstörungen, Behandlung von Wachstumsverzögerung in Verbindung mit Asthma, Behandlung von Wachstumsverzögerung in Verbindung mit jugendlicher rheumatischer Arthritis und Behandlung von Wachstumsverzögerung in Verbindung mit zystischer Fibrose.
Für die vorstehenden Indikationen variiert die Dosierung der Verbindung der Erfindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon abhängig vom Verabreichungsweg und von der gewünschten Therapie. Jedoch werden im allgemeinen Dosierungsgehalte zwischen täglich 0,0001 und 100 mg/kg Körpergewicht an Patienten und Tiere verabreicht, um eine wirksame Freisetzung von endogenem Wachstumshormon zu erhalten. Außerdem wird angenommen, dass die Verbindung der Erfindung im Wesentlichen keine Nebenwirkungen beim Verabreichen in den vorstehenden Dosierungsgehalten, wie z. B. Freisetzung von LH, FSH, TSH, ACTH, Vasopressin, Oxytocin, Kortison und/oder Prolactin aufweist. Gewöhnlich umfassen zur oralen, nasalen, pulmonalen oder transdermalen Verabreichung geeignete Dosierungsformen etwa 0,0001 mg bis etwa 100 mg, vorzugsweise etwa 0,001 mg bis etwa 50 mg der Verbindung der Erfindung, gemischt mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel.
Die Dosierung der erfindungsgemäßen Verbindung beträgt geeigneterweise 0,01–500 mg/Tag, z. B. von etwa 5 bis etwa 50 mg wie etwa 10 mg pro Dosis bei Verabreichung an Patienten, z. B. Menschen als Arzneimittel.
Gegebenenfalls kann das Arzneimittel der Erfindung die Verbindung der Erfindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, vereint mit einer oder mehreren eine andere Aktivität zeigenden Verbindungen wie einem Antibiotikum oder einem anderen pharmakologisch aktiven Material umfassen.
Bei dem Verabreichungsweg kann es sich um einen beliebigen Weg, der wirksam den Wirkstoff zu der geeigneten oder gewünschten Wirkungsstelle transportiert, wie oral, nasal, pulmonal, transdermal oder parenteral, handeln, wobei der orale Weg bevorzugt ist.
Neben der pharmazeutischen Verwendung der Verbindung der Erfindung, kann sie als in-vitro-Werkzeuge zur Regulierung der Wachstumshormonfreisetzung nützlich sein.
Die Verbindung der Erfindung kann auch als in-vivo-Werkzeuge zum Bewerten der Wachstumshormonfreisetzungsfähigkeit der Hypophyse sein. Zum Beispiel können Serumproben, die vor und nach der Verabreichung an Menschen entnommen wurden, auf Wachstumshormon getestet werden. Ein Vergleich des Wachstumshormongehalts in jeder Serumprobe würde direkt die Fähigkeit der Hypophyse des Patienten zur Freisetzung von Wachstumshormon bestimmen.
Die Verbindung der Erfindung oder die Salze davon können an wirtschaftlich wichtige Tiere zur Erhöhung ihrer Wachstumsgeschwindigkeit und ihres Wachstumsgrades und zur Erhöhung der Milch- oder Wollproduktion verabreicht werden.
Bei einer weiteren Verwendung der Wachstumshormon-Sekretagogverbindung der Erfindung oder von Salzen davon handelt es sich um die Kombination mit anderen Sekretagogen wie GHRP (2 oder 6), GHRH und seiner Analoga, Wachstumshormon und seiner Analoga oder Somatomedin, einschließlich IGF-1 und IGF-2.
Pharmakologische Verfahren
Die Verbindung der Erfindung und Salze davon können in vitro auf ihre Effizienz und Wirksamkeit zur Freisetzung von Wachstumshormon in primären Kulturen der Rattenhypophyse bewertet werden, und solch eine Bewertung kann wie nachstehend beschrieben durchgeführt werden.
Die Isolierung von Rattenhypophysezellen ist eine Modifikation des Verfahrens von O. Sartor et al., Endocrinology 1985, Seiten 952–957. Männliche Albino-Sprague-Dawley-Ratten (250+/–25 Gramm) wurden von Møllegaard, Lille Skensved, Dänemark erworben. Die Ratten wurden in Gruppenkäfigen (vier Tiere/Käfig) beheimatet und in Räume mit einem 12-stündigen Lichtzyklus platziert. Die Raumtemperatur variierte von 19–24°C und die Feuchtigkeit von 30–60%.
Die Ratten wurden enthauptet und die Hypophysen dissektiert. Die Neuro-Zwischenlappen wurden entfernt und das übrige Gewebe sofort in eisgekühlten Isolierungspuffer (Gey-Medium (Gibco 041-04030), ergänzt mit 0,25% D-Glucose, 2% nichtessentielle Aminosäuren (Gibco 043-01140) und 1% Rinderserumalbumin (BSA) (Sigma A4503)) gegeben. Das Gewebe wurde in kleine Stücke geschnitten und in Isolierungspuffer, ergänzt mit 3,8 mg/ml Trypsin (Worthington #3707 TRL-3) und 330 μg/ml DNase (Sigma D-4527) überführt. Dieses Gemisch wurde bei 70 Umdrehungen/Min. für eine Daure von 35 Min. bei 37°C in einer 95/5%igen Atmosphäre von O₂/CO₂ inkubiert. Das Gewebe wurde dann dreimal in vorstehendem Puffer gewaschen. Unter Verwendung einer Standardpasteurpipette wurde das Gewebe dann in einzelne Zellen gesaugt. Nach der Dispersion wurden die Zellen zur Entfernung von unaufgeschlossenem Gewebe durch einen Nylonfilter (160 μm) filtriert. Die Zellsuspension wurde 3 mal mit Isolierungspuffer, ergänzt mit Trypsinhemmer (0,75 mg/ml, Worthington Nr. 2829) gewaschen und schließlich in Kulturmedium; DMEM (Gibco 041-01965) ergänzt mit 25 mM HEPES (Sigma H-3375), 4 mM Glutamin (Gibco 043-05030H), 0,075% Natriumbicarbonat (Sigma S-8875), 0,1% nicht-essentielle Aminosäuren, 2,5% fötalem Kalbserum (FCS, Gibco 011-06290), 3% Pferdeserum (Gibco 034-06050), 10% frischem Rattenserum, 1 nM T₃ (Sigma T-2752) und 40 μg/L Dexamethason (Sigma 0-4902), pH 7,3, auf eine Dichte von 2 × 10⁵ Zellen/ml resuspendiert. Die Zellen wurden in Mikrotiterplatten (Nunc, Däne mark), 200 μl/Mulde angekeimt und für eine Dauer von 3 Tagen bei 37°C und 8% CO₂ gezüchtet.
Verbindungstest
Nach dem Züchten wurden die Zellen zweimal mit Stimulierungspuffer (Hanks Balanced Salt Solution (Gibco 041-04020), ergänzt mit 1% BSA (Sigma A-4503), 0,25% Glucose (Sigma G-5250) und 25 mM HEPES (Sigma H-3375) pH 7,3) gewaschen und für eine Dauer von 1 Stunde bei 37°C vorinkubiert. Der Puffer wurde durch 90 μl Stimulierungspuffer (37°C) ersetzt. 10 μl Testverbindungslösung wurden zugesetzt und die Platten für eine Dauer von 15 Minuten bei 37°C und 5% CO₂ inkubiert. Das Medium wurde abdekantiert und auf GH-Gehalt (GH = growth hormone; Wachstumshormon) in einem Testsystem des Typs rGH SPA analysiert.
Die Verbindung wurde in Dosierungen im Bereich von 10 pM bis 100 μM getestet.
Ein Dosierungsansprechverhältnis wurde unter Verwendung der Hill-Gleichung (P, Biosoft) konstruiert. Die Effizienz (maximales freigestztes GH, E_max) wurde in % des E_max von GHRP-6 ausgedrückt. Die Wirksamkeit (EC₅₀) wurde als die Konzentration bestimmt, die die Hälfte der maximalen Stimulierung der GH-Freisetzung induzierte.
BEISPIELE
Die Herstellung der Verbindung der Erfindung und von diese enthaltenden Präparaten ist in den folgenden Beispielen beschrieben und veranschaulicht.
Die Strukturen von in diesem Zusammenhang hergestellten Verbindungen werden entweder durch Elementaranalyse (MA), Kernmagnetresonanz (NMR) oder Mas senspektrometrie (MS) bestätigt. NMR-Verschiebungen (δ) sind in Parts per Million (ppm) angegeben, wobei nur ausgewählte Peaks angegeben sind. Bei Schmp. handelt es sich um den Schmelzpunkt, der in °C angegeben ist. Die Säulenchromatografie wurde unter Verwendung der von W. C. Still et al., J. Org. Chem. 1978, 43, 2923–2925, beschriebenen Technik auf Silicagel 60 durchgeführt. Die als Ausgangsmaterialen verwendeten Verbindungen sind entweder bekannte Verbindungen oder Verbindungen, die leicht durch an und für sich bekannte Verfahren hergestellt werden können.
HPLC-Analyse
Verfahren a
Die RP-HPLC-Analyse wurde unter Verwendung einer UV-Detektion bei 214, 254, 267 und 301 nm und einer C18-Silicasäule des Typs 218TP54 mit 4,6 × 250 mm und 5 m (The Separations Group, Hesperia) die mit 1 ml/Min. bei 41°C eluiert wurde, durchgeführt. Die Säule wurde mit 5%igem Acetonitril in einem Puffer, bestehend aus 0,1 M Ammoniumsulfat, der mit 4 M Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 2,5 eingestellt war, äqulibriert. Nach der Injektion wurde die Probe mit einem Gradienten aus 5 bis 60%igem Acetonitril im selben Puffer innerhalb von 60 Min. eluiert.
Verfahren b

Die RP-Analyse wurde unter Verwendung von UV-Detektionen bei 214, 254, 276 und 301 nm auf einer C-18-Silicasäule des Typs 218TP54 mit 4,6 mm × 250 mm (The Separations Group, Hesperia), die mit 1 ml/Min. bei 42°C eluiert wurde, durchgeführt. Die Säule wurde mit 5% Acetonitril in einen Puffer, bestehend aus 0,1 M Ammoniumsulfat, der mit 4 M Schwefelsäure auf pH 2,5 eingestellt war, äquilibriert. Nach der Injektion wurde die Probe mit einem Gradienten aus 5 bis 60% Acetonitril im selben Puffer innerhalb von 50 Min. eluiert. Abkürzungen

DSC:	Dünnschichtchromatografie
DMSO:	Dimethylsulfoxid
Min.:	Minuten
Std.:	Stunden
ESMS =	Elektronensprühmassenspektrometrie
PDMS =	Plasmadesorptionsmassenspektrometrie
Boc:	tert-Butyloxycarbonyl
DMF:	Dimethylformamid
THF:	Tetrahydrofuran
EDAC:	N-Ethyl-N'-dimethylaminopropylcarbodiimid-Hydrochlorid
HOAL:	1-Hydroxy-7-azabenzotriazol
DIEA:	Diisopropylethylamin
TFA:	Trifluoressigsäure

Aufbaublöcke
N-methylierte Aminosäuren, die im folgenden verwendet werden, wurden wie in Can. J. Chem. 1977, 55, 908, hergestellt.
3-Hydroxy-1,1-dimethylpropylcarbaminsäure-tert-butylester
Bei 0°C wurde Ethylchlorformiat (1,10 ml, 11,5 mmol) einer Lösung von 3-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutansäure (2,50 g, 11,5 mmol) und Triethylamin (1,92 ml, 13,8 mmol) in Tetrahydrofuran (10 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde für eine Dauer von 40 Minuten bei 0°C gerührt. Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert und mit Tetrahydrofuran (20 ml) gewaschen. Die Flüssigkeit wurde sofort auf 0°C abgekühlt. Eine 2 M Lösung von Lithiumborhydrid in Tetrahydrofuran (14,4 ml, 28,8 mmol) wurde zugetropft. Die Lösung wurde bei 0°C für eine Dauer von 2 Stunden gerührt, und dann auf Raumtemperatur über eine Dauer von 4 Stunden aufgewärmt. Sie wurde auf 0°C abgekühlt. Methanol (5 ml) wurde vorsichtig zugesetzt. 1 N Salzsäure (100 ml) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde mit Ethylacetat (2 × 100 ml, 3 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde über Silica (110 g), mit Ethylacetat/Heptan 1 : 2 chromatographiert, um 1,84 g 3-Hydroxy-1,1-dimethylpropylcarbaminsäure-tert-butylester zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,33 (s, 6H); 1,44 (s, 9H); 1,88 (t, 2H); 1,94 (br, 1H); 3,75 (q, 2H); 4,98 (br, 1H) 3-(tert-Butoxycarbonylamino)-3-methylbutanat
DMSO (1,22 ml, 17,2 mmol) wurde einer Lösung von Oxalylchlorid (1,1 ml, 12,9 mmol) bei –78°C in Dichlormethan (15 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde für eine Dauer von 15 Minuten bei –78°C gerührt. Einer Lösung von 3-Hydroxy-1,1-dimethylpropylcarbaminsäure-tert-butylester (1,75 g, 8,6 mmol) in Dichlormethan (10 ml) wurde über eine Dauer von 15 Minuten zugetropft. Die Lösung wurde bei –78°C für eine Dauer von weiteren 15 Minuten gerührt. Triethylamin (6,0 ml, 43 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde bei –78°C für eine Dauer von 5 Minuten gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmt. Die Lösung wurde mit Dichlormethan (100 ml) verdünnt und mit 1 N Salzsäure (100 ml) extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie über Silica (140 g) mit Ethylacetat/Heptan (1 : 3) chromatographiert, um 1,10 g 3-(tert-Butoxycarbonylamino)-3-methylbutanal zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,38 (s, 6H); 1,45 (s, 9H); 2,85 (d, 2H); 4,73 (br, 1H); 9,80 (t, 1H).
Ethyl-(2E)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-enoat
Triethylphosphonacetat (1,98 ml, 9,8 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (30 ml) gelöst. Kalium-tert-butoxid (1,10 g, 9,8 mmol) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde für eine Dauer von 40 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Eine Lösung von 3-(tert-Butoxycarbonylamino)-3-methylbutanal (1,10 g, 5,5 mmol) in Tetrahydrofuran (6 ml) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur für eine Dauer von 75 Minuten gerührt. Es wurde mit Ethylacetat (100 ml) und 1 N Salzsäure (100 ml) verdünnt. Die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (60 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie über Silica (90 g) mit Ethylacetat/Heptan (1 : 4) gereinigt, um 1,27 g Ethyl-(2E)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-5-Methylhex-2-enoat zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,30 (s, 6H); 1,30 (t, 3H); 1,46 (s, 9H); 2,62 (d, 2H); 4,27 (q, 2H); 4,42 (br, 1H); 5,55 (d, 1H); 5,94 (td, 1H).
(2E)-5-(tert-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure
Ethyl-(2E)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-enoat (1,233 g, 4,54 mmol) wurde in Dioxan (20 ml) gelöst. Lithiumhydroxid (0,120 g, 5,00 mmol) wurde als Feststoff zugesetzt. Wasser (10 ml) wurde zugesetzt, bis eine klare Lösung erzielt wurde. Die Lösung wurde für eine Dauer von 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde mit Wasser (70 ml) verdünnt und mit tert-Butylmethylether (2 × 100 ml) extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit 1 N-Natriumhydrogensulfatlösung angesäuert (pH = 1) und mit tert-Butylmethylether (3 × 70 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, um 1,05 g (2E)-5-(tert-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure zu erhalten. Das Rohprodukt wurde zur weiteren Synthese verwendet.
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 1,15 (s, 6H); 1,35 (s, 9H); 2,53 (d, 2H); 5,75 (d, 1H); 6,57 (br, 1H); 8,75 (td, 1H); 12,15 (s, 1H).
Beispiel 1 (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-(2-(2-pyridinyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl)amid
Schritt 1 N-Methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(2-pyridyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbaminsäure-tert-butylester
(2R)-2-(N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-phenylpropionsäure (11,2 g, 40 mmol), 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (5,4 g, 40 mmol) und N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (7,7 g, 40 mmol) wurden in Dichlormethan (100 ml) gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 15 Minuten gerührt. Ethyldiisopropylamin (6,85 ml, 40 mmol) und 2-(2-Methylaminoethyl)pyridin (5,54 ml, 40 mmol) wurden zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 18 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (3 × 150 ml) gewaschen.
Die organische Schicht wurde über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie über Silica (400 g) unter Verwendung von Ethylacetat als Eluent gereinigt, um 10,9 g N-Methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(2-pyridyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbaminsäure-tert-butylester zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,12, 1,20, 1,30 und 1,35 (alles a, zusammen 9H); 2,75–3,20 (m, zusammen 10H); 3,50–4,00 (m, zusammen 2H), 4,95, 5,23 und 5,39 (m, t und t, zusammen 1H); 7,00–7,30 (m, zusammen 7H); 7,55 (m, 1H); 8,51 (br m, 1H)
Schritt 2 (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-phenyl-N-(2-(2-pyridyl)ethyl)propionamid
N-Methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(2-pyridyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbaminsäure-tert-butylester wurde in Dichlormethan (75 ml) gelöst. Trifluoressigsäure (75 ml, 0,978 mol) wurde der gerührten Lösung zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 40 Minuten gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Produkt wurde in Dichlormethan (30 ml) und gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung (20 ml) gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde mit festem Natriumhydrogencarbonat neutralisiert. Dichlormethan (100 ml) wurde zugesetzt und die wässrige Phase mit Dichlormethan (2 × 150 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, um 7,9 g (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-phenyl-N-(2-(2-pyridyl)ethyl)-propionamid zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 2,10 und 2,27 (beides s, zusammen 3H); 2,51 und 2,87 (beide a, zusammen 3H); 2,80–3,20 (m, zusammen 4H); 3,50–3,75 (m, zusammen 3H); 6,97–7,30 (m, zusammen 7H); 7,57 (m, 1H); 8,50 (dd, 1H).
Schritt 3 N-Methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-((1R)-1-[N-methyl-N-(2-pyridinyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)]ethyl]carbaminsäure-tert-butylester
(2R)-2-(N-(tert-Butoxycarbonyl)-N-methylamino)-3-(2-naphthyl)propionsäure (11,2 g, 34 mmol), 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (5,2 g, 38 mmol) und N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (5,9 g, 36 mmol) wurden in Dichlormethan (100 ml) gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 15 Minuten gerührt. Ethyldiisopropylamin (7,0 ml, 41 mmol) wurde zugesetzt. (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-phenyl-N-(2-(2-pyridyl)ethyl)propionamid (7,9 g, 27 mmol), gelöst in Dichlormethan (20 ml), wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 16 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zu Aminomethylrosin (17,3 g, 13,5 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 5 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert. Die organische Schicht wurde mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung (2 × 150 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie über Silica (400 g) unter Verwendung von Ethylacetat als Eluent gereinigt, um 14,9 g N-Methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-((1R)-1-[N-methyl-N-(2-pyridinyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)]ethyl]carbaminsäure-tert-butylester zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,07, 1,15, 1,33 und 1,40 (alles s, zusammen 9H); 1,80–3,75 (m, zusammen 17H); 5,00, 5,35, 5,59, 5,70 und 5,85 (m, zusammen 2H); 6,85–7,80 (m, zusammen 15H); 8,40–8,57 (m, zusammen 1H).
Schritt 4 (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl]-3-(2-naphthyl)propionamid
N-Methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-((1R)-1-[N-methyl-N-(2-pyridinyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl)carbamoyl)-2-(2-naphthyl)]ethyl]carbaminsäure-tert-butylester (14,9 g, 24,5 mmol) wurde in Dichlormethan (75 ml) gelöst. Trifluoressigsäure (75 ml, 0,978 mol) wurde der gerührten Lösung zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 40 Minuten gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Produkt wurde in Dichlormethan (50 ml) und gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung (40 ml) gelöst. Das Gemisch wurde mit festem Natriumhydrogencarbonat neutralisiert. Dichlormethan (100 ml) wurde zugesetzt und die wässrige Phase mit Dichlormethan (2 × 150 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, um 11,9 g (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl]-3-(2-naphthyl)propionamid zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,77, 1,87 und 1,97 (alles s, zusammen 4H); 2,80 (s, 3H); 2,70–3,20 (m, zusammen 9H); 3,52, 3,70 und 4,10 (t, m und m, zusammen 2H); 5,72–5,89 (m, 1H); 6,90–7,80 (m, zusammen 15H); 8,50 (dd, 1H).
Schritt 5 ((3E)-1,1-Dimethyl-4-[N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl]carbamoyl]-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]carbamoyl)but-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester
(2E)-5-(tert-Butoxycarbonylamino)-5-methylhex-2-ensäure (2,87 g, 11,8 mmol), 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (1,6 g, 11,8 mmol) und N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (2,25 g, 11,5 mmol) wurden in Dichlormethan (30 ml) gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 15 Minuten gerührt. Ethyldiisopropylamin (2,0 ml, 11,5 mmol) wurde zugesetzt. (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl]-3-(2-naphthyl)propionamid (6,0 g, 11,8 mmol), gelöst in Dichlormethan (10 ml), wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 15 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie über Silica (400 g) unter Verwendung von Ethylacetat als Eluent gereinigt, um 5,28 g ((3E)-1,1-Dimethyl-4-[N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl]carbamoyl]-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]carbamoyl)but-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 1,17–1,29 (m, 6H); 1,40 (s, 9H); 2,40–3,10 (m, zusammen 18H); 3,37–3,75 (m, zusammen 3H); 4,40 (br m, 1H); 5,55–5,37 (m, zusammen 2H); 6,03–6,19 (m, 1H); 6,70–7,80 (m, zusammen 15H); 8,38–8,65 (m, zusammen 1H).
Schritt 6
((3E)-1,1-Dimethyl-4-[N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl]carbamoyl]-2-phenylethyl]carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]carbamoyl)but-3-enyl)carbaminsäure-tert-butylester (5,20 g, 7,2 mmol) wurde in Dichlormethan (50 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf –10°C abgekühlt. Trifluoressigsäure (50 ml) wurde der gerührten Lösung zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für eine Dauer von 45 Minuten bei –10°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in einer Lösung aus Eis, Natriumhydrogencarbonat und Wasser zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Natriumhydrogencarbonat neutralisiert. Dichlormethan (400 ml) wurde zugesetzt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (300 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Flash-Chromatographie über Silica (40 g) unter Verwendung einer 15%igen Lösung von 7% Ammonium in Ethanol, in Dichlormethan als Eluent gereinigt, um 3,2 g der Titelverbindung zu erhalten.
¹H-NMR (CDCl₃): δ 0,80–1,20 (m, zusammen 6H); 2,05–3,10 (m, zusammen 17H); 3,25–3,70 (m, zusammen 3H); 5,62 und 5,85 (m, m und m, zusammen 2H); 6,03–6,17 (m, 1H); 6,80–7,78 (m, zusammen 15H); 8,38–8,58 (m, 1H)
MS: 634,2
HPLC: 28,243 min (A1)
28, 983 min (B1)
Für den biologischen Test wurde die Titelverbindung durch Lyophilisierung von 0,5 M Essigsäure (100 ml) in ihr Acetatsalz überführt.
Vergleichsbeispiel
Die Verbindung von Beispiel 1 wurde mit der Verbindung von Beispiel 408, offenbart in WO 9723508, verglichen. Die Ergebnisse sind hier nachstehend dargestellt:
Wie ersichtlich, zeigt die Verbindung von Beispiel 1 eine bessere orale Bioverfügbarkeit und eine kürzere Plasmahalbwertszeit, verglichen mit der Verbindung von Beispiel 408 aus WO 9723508.
Die pharmakokinetischen Daten wurden durch das folgende Verfahren erhalten:
Die Pharmakokinetiken der Testverbindungen wurden in nüchternen Beagle-Hunden untersucht.
Intravenöse und orale Verabreichung der Testverbindung in 5%iger Glucoselösung wurde durch ein einwöchiges Auswaschen abgetrennt.
Blutproben wurden unmittelbar vor der Arzneimittelverabreichung (Zeit Null) und dann 0,08, 0,25, 0,50, 0,75, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0 und 6,0 Stunden nach der Verabreichung entnommen.
Die Plasmaproben wurden eingefroren (< –18°C) nach der Analyse gelagert.
Ein HPLC-Verfahren mit Festphasenextraktion und UV-Detektion wurde zur Mengenbestimmung der Verbindung im Plasma verwendet.
Die pharmakokinetischen Parameter für die Verbindungen wurden durch nicht-kompartimentierte Verfahren unter Verwendung der PC-Pharmakokinetik-Software WinNonlin, Version 1.1 (Scientific Consulting Inc., Apax, NC, USA) berechnet.

Claims

Verbindung (2E)-5-Amino-5-methylhex-2-ensäure-N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-{(1R)-1-[N-methyl-N-(2-(2-pyridinyl)ethyl)carbamoyl]-2-phenylethyl}carbamoyl)-2-(2-naphthyl)ethyl]amid
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Arzneimittel, umfassend als Wirkstoff die Verbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon nach Anspruch 1 zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
Verwendung der Verbindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments zum Stimulieren der Freisetzung von Wachstumshormon von der Hypophyse eines Säugers.