DE69620001T2

DE69620001T2 - Impfstoffe gegen grippe

Info

Publication number: DE69620001T2
Application number: DE69620001T
Authority: DE
Inventors: Steven N. Chatfield; West Pharmaceutical Services Illum
Original assignee: West Pharmaceutical Services Drug Delivery and Clinical Research Center Ltd
Current assignee: Kyowa Kirin Services Ltd
Priority date: 1995-11-01
Filing date: 1996-11-01
Publication date: 2002-11-21
Anticipated expiration: 2016-11-02
Also published as: EP0859632A1; NZ320488A; NO323555B1; NO981963L; KR19990067255A; MX9803290A; JP4010462B2; CN1201396A; KR100555687B1; NO981963D0; DK0859632T3; US6136606A; JPH11515023A; CA2236538C; BR9611218A; ATE214615T1; DE69620001D1; PT859632E; ES2174112T3; AU7322796A

Description

Die Erfindung betrifft eine Impfstoff-Zusammensetzung in Form eines Ausrüstungssatzes, der aus einem ersten Behälter, der eine Antigen-Zubereitung enthält, die Influenza-Viren- Antigene enthält, und einem zweiten Behälter beseht, der ein Schleimhaut-Adjuvans enthält. Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eine Chitosans für die Herstellung einer Adjuvans-Verbindung zum Verstärken der Imunogenizität eines Influenca-Viren-Antigens, wenn es gleichzeitig mit diesem verabreicht wird, insbesondere bei einer nasalen Verabreichung.
Zur Zeit übliche Influenza-Impfstoffe bestehen entweder aus deaktivierten ganzen Viren, Virusbruchstücken (gesplittete Impfstoffe) oder gereinigten Zubereitungen des Membran- Glycoproteins Haemagglutinin-(HA)- und Neuraminidase-(NA)-Untereinheiten-Impfstoffen. Haemagglutinin und Neuraminidase sind die Antigene, auf die schützende Antikörper-Reaktionen gerichtet sind, wobei Haemagglutinin das Haupt-Schutz-Antigen ist. Abschätzungen der Wirksamkeit dieser parentaral verabreichten Impfstoffe variieren sehr stark. Es wird angenommen, dass derartige Impfstoffe primär dadurch wirken, dass sie zirkulierende Anti-Haemagglutinin-IgG-Gegenkörper hervorrufen, die in den unteren Atmungstrakt abgegeben werden.
M.L. Clements et al. haben in J. Clinical Microbiology, 24, 157-160, 1986 berichtet, dass sowohl sekretorisches IgA als auch Serum-IgG an der Immunität gegen Influenza-Viren Anteil haben. Darüber hinaus hat eine Reihe von veröffentlichten Studien bei Mäusen die Bedeutung von IgA im Atmungstrakt beim Schutz gegen eine Influenza-Infektion gezeigt. Es wurde auch gefunden, dass ein Vorteil der Stimulierung einer lokalen IgA-Reaktion gegen Influenza darin besteht, dass diese häufig eine breitere Spezifizität als die Serum- Reaktion besitzt und somit einen Kreuz-Schutz gegen Viren bewirken kann, die Haemagglutinin-Moleküle besitzen, die von den im Impfstoff vorhandenen verschieden sind. Somit sollten Influenza-Impfstoffe, die sowohl eine lokale sekretorische als auch eine serale Anti-Haemagglutinin-Reaktion hervorrufen, eine bessere Immunität bewirken als derzeit übliche Impfstoffe. Eine parentarale Impfung (intramuskulär, subkutan usw.) ist jedoch im Sinne des Hervorrufens einer örtlichen Antikörper-Produktion nicht effektiv, wenn zuvor keine Schleimhaut-Exposition (d.h. Infektion) stattgefunden hat. Um das Schleimhaut- Immunsystem zu stimulieren, muss der Impfstoff örtlich einer Schleimhaut-Oberfläche zugeführt werden.
Eine Schleimhaut-Verabreichung von Influenza-Impfstoffen hätte eine Reihe von Vorteilen im Vergleich zu herkömmlichen parentaralen Immunisierungs-Verfahren. Hervorragend unter diesen ist die wirksamere Stimulation des örtlichen Schleimhaut-Immunsystems des Atmungstraktes und die Wahrscheinlichkeit, dass die Teilnehmerzahlen von Imfpungen erhöht würden, weil die Angst und die Unannehmlichkeiten, die mit Injektionen verbunden sind, vermieden würden. Daher wurde eine Reihe von Versuchen unternommen, Schleimhaut-Influenza-Impfstoffe zu entwickeln. Ein Nachteil besteht jedoch darin, dass deaktivierte Impfstoffe häufig eine geringe Immunogenizität besitzen, wenn sie über die Schleimhaut verabreicht werden. Beispielsweise haben Kuno-sakai et al. (Vaccine 12: 1303-1310, 1994) gezeigt, dass die Verabreichung von deaktiviertem Impfstoff an Menschen zu starken Schleimhaut- und Serum-Antikörper-Reaktionen führten und wirksam bei der Verhinderung einer Infektion durch lebende Impfstoff-Viren waren. Um solche Ergebnisse zu erzielen, verabreichten Kuno-sakai et al. jedoch dreimal die handelsüblich verfügbare Dosis; dies ist eine Vorgehensweise, die kommerziell nicht gangbar erscheint. Um dieses Problem zu überwinden, haben verschiedene Versuche zur Verbesserung der Immunogenizität von oral oder intranasal verabreichten Influenza-Impfstoffen die Verwendung der B-Untereinheit von Cholera-Toxin (CTB) als Adjuvans umfasst (siehe S. Tamura et al. Vaccine, 6, 409, 1988), oder die Verkapselung des Impfstoffs in einer Vielzahl von Mikrokügelchen (siehe Z. Moldoveanu et al., J.Inf..Dis. 167, 85-90, 1993), sowie die Verwendung von lebenden, abgeschwächten Stämmen (siehe H.F. Maassab et al., Vaccines, Protkin S.A. und Mortimer F.A.Jr. (Herausgeber), W.B. Saunders Philadelphia, Seite 435 (1993)). Weiterhin beschreibt der Artikel von T. Oka et al. in Vaccine, Band 12, Nr. 14, Seiten 1255-1258 (1994) die Verwendung von Pertussis-Toxin-B-Oligomer als ein mukosales Adjuvans, und der Artikel von A. de Haan et al., Vaccine, Band 13, No. 2, Seiten 155-162 (1995) bezieht sich auf die Verwendung von Liposomen als Adjuvantien für intranasale Influenza-Impfstoffe. Bis heute wurde jedoch keine praktische Vorrichtung zur Erhöhung der Immunogenizität von über die Schleimhaut verabreichten Influenza- Impfstoffen entwickelt.
Es wurde nun durch die Anmelder gefunden, dass dadurch, dass Influenza-Antigene wie z.B. das Haemagglutinin und Neuraminidase-Antigene, in Verbindung mit einem speziellen Chitosan-Derivat verabreicht werden, es möglich ist, gute IgG- und gute IgA-Reaktionen zu erzielen. Genauer gesagt, haben die Anmelder gefunden, dass dann, wenn ein Chitosan gemeinsam intranasal mit Influenza-Antigenen wie z.B. der Neuraminidase und Haemagglutinin-Antigenen verabreicht wird, oder wenn ein Wirt vor der Verabreichung von Influenza-Antigenen mit Chitosan vordosiert wird, gute systemische und örtliche Immun-Reaktionen erzeugt werden.
Chitosane sind Derivate von Chitin oder Poly-N-Acetyl-D-Glucosamin, bei denen der größere Anteil der N-Acetyl-Gruppen durch Hydrolyse entfernt worden ist.
Chitosane wurden bereits bei pharmazeutischen Zubereitungen verwendet und sind in EP-A-0 460 020 als Schleimhaut-Absorptions-Verstärker beschrieben. In EP-A-0 460 020 wird jedoch weder beschrieben noch nahegelegt, dass das Chitosan einen Hilfs- bzw.. Adjuvans-Effekt bewirken könnte, wenn es in einer Impfstoff-Zusammensetzung verabreicht wird. Deacetylierte Chitine sind auch in dem Artikel von K. Nishimura et al., Vaccine, Band 3, Seiten 379-384 (1985) beschrieben; demgegenüber beschreibt EP 0 183 556 (Ihara Chemical Industry Co., Ltd.) Oligomere, die auf vollständig acetylierten oder vollständig deacetylierten Chitin-Monomer-Einheiten basieren.
Gemäß einem ersten Gesichtspunkt schafft die Erfindung eine Impfstoff-Zusammensetzung in der Form eines Ausrüstungssatzes, der aus einem ersten Behälter, der eine Antigen-Zubereitung, die ein Influenza-Antigen oder -Antigene umfasst, enthält, und einem zweiten Behälter besteht, der eine wirksame Adjuvans-Menge eines Chitosan enthält, wobei das Chitosan ein deacetyliertes Chitin ist, das zumindest zu 80% deacetyliert ist.
Die Influenza-Antigene können beispielsweise ganze deaktivierte Influenza-Viren oder gereinigte oder teilweise gereinigte Antigene sein. Bei einer anderen Ausführungsform können die Influenza-Antigene in einem Trägermolekül, beispielsweise als Teil eines Fusionsproteins vorhanden sein.
Die Antigen-Zubereitung enthält vorzugsweise Haemagglutinin- und Neuraminidase-Influenza-Virus-Antigene. Insbesondere ist die Antigen-Zubereitung vorzugsweise ein deaktivierter ganzer Influenza-Virus (WIV) oder eine Zusammensetzung, die gereinigte Haemagglutinin- und Neuraminidase-Influenza-Virus-Antigene enthält.
Wenn eine gereinigte Haemagglutinin- und Neuraminidase-Zusammensetzung verwendet wird, ist es bevorzugt, dass die gereinigten Haemagglutinin- und Neuraminidase-Antigene in der Form von Rosetten vorhanden sind. Die Rosetten sind vorzugsweise Teilchen mit einem Radius im Bereich von 10-25 nm. Es ist bevorzugt, dass die Rosetten im wesentlichen lipid-frei sind und darüber hinaus ist es bevorzugt, dass die gereinigte Haemagglutinin- und Neuraminidase-Antigen-Zubereitung als Ganzes im wesentlichen lipid-frei ist.
Ein Beispiel für eine Haemagglutinin/Neuraminidase-Zubereitung, die für eine Verwendung in den Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung geeignet ist, ist das "Fluvirin"-Produkt, das von Evans Medical Limited of Speke, Merseyside, Großbritannien hergestellt und verkauft wird; siehe auch S. Renfrey und A. Watts, Vaccine, 1994, Band 12, Nr. 8, Seiten 747-752.
Impfstoffe mit ganzen Influenza-Viren können aus abgetöteten Influenza-Virus-Stämmen in bekannter Weise zubereitet werden. Es sei darauf hingewiesen, dass solche Zubereitungen mit ganzen, deaktivierten Viren ein Vorläufer der oben beschriebenen gereinigten Zubereitungen sind.
Die Impfstoff-Zusammensetzungen der Erfindung sind vorzugsweise für eine Abgabe an eine Schleimhaut-Oberfläche und insbesondere für eine orale oder intranasale Verabreichung geeignet.
Vorzugsweise ist das in den Zusammensetzungen der Erfindung verwendete Chitosan wasserlöslich.
Das Chitosan ist zumindest zu 80% deacetyliert. Vorzugsweise ist das Chitosan zumindest zu 85% deacetyliert und in besonders bevorzugter Weise ist es von 88% bis 90% deacetyliert.
Ein spezielles deacetyliertes Chitosan ist das "Sea Cure G210"-Chitosan (Poly-D-glucosamin-hydroglutamat) das von Pronova Biopolymer von Drammen, Norwegen geliefert wird. Das Chitosan, das in der Form seines Glutamat-Derivates vorliegt, hat einen Deacetylierungsgrad von > 80%.
Die Zusammensetzungen der Erfindung können bei Verfahren zur Immunisierung eines Wirts gegen eine Infektion durch Influenza in der Weise verwendet werden, dass eine schützende Schleimhaut-Immun-Reaktion und eine systemische Immun-Reaktion induziert werden; insbesondere werden eine schützende IgA-Schleimhaut-Immun-Reaktion und eine systemische IgG-Immun-Reaktion induziert. Die Verfahren zur Immunisierung umfassen das Verabreichen an den Wirt:
(i) aus dem ersten Behälter die Antigen-Zubereitung, die das Influenza-Virus-Antigen bzw. -Antigene enthält, und
(ii) aus dem zweiten Behälter eine wirksame Adjuvans-Menge des Chitosans.
Gemäß einem anderen Gesichtspunkt offenbart die Erfindung die Verwendung eines Chitosans für die Herstellung einer Adjuvans-Zusammensetzung in einem Behälter zur Verstärkung der Immun-Antwort auf Influenza-Virus-Antigene, die gemeinsam mit ihr aus einem getrennten Behälter verabreicht werden, wobei das Chitosan ein deacetyliertes Chitin mit einem Deacetylierungsgrad von wenigstens 80% ist.
Der Inhalt des ersten und zweiten Behälters kann im wesentlichen zur gleichen Zeit, d.h. gleichzeitig oder mit einem zeitlichen Abstand von wenigen Minuten verabreicht werden, oder sie können in größeren Abständen verabreicht werden. Beispielsweise kann der Wirt mit dem Chitosan vordosiert und die Antigen-Zubereitung später verabreicht werden.
Der erste und der zweite Behälter können vollständig getrennt sein oder können von getrennten Kammern der gleichen Verabreichungsvorrichtung gebildet werden. Wenn die Behälter getrennt sind, können sie in der Form eines Ausrüstungsatzes bzw. Kits vorliegen, der einen ersten und einen zweiten Aerosol-Dispenser umfasst, oder beispielsweise eine erste und zweite Spritze. Wenn der erste und der zweite Behälter Teil der gleichen Verabreichungsvorrichtung sind, können sie beispielsweise von zwei Kolben einer Mehrkolben-Spritze gebildet werden. Derartige Verabreichungsvorrichtungen, die eine Influenza-Antigen-Zubereitung in einer Kammer und eine Chitosan-Zusammensetzung in einer anderen Kammer enthalten, bilden einen weiteren Gesichtspunkt der Erfindung.
Die Zusammensetzungen der Erfindung können für die Verabreichung auf einer Reihe von Wegen angeboten werden, doch werden sie vorzugsweise für eine Verabreichung über eine Schleimhaut und insbesondere für eine intranasale Verabreichung angeboten.
Intranasale Zusammensetzungen können beispielsweise als Flüssigkeiten oder trockene Pulver für eine Verabreichung als Aerosole oder Tropfen zubereitet werden.
Zusammensetzungen für eine Verabreichung als nasale Tropfen können einen oder mehrere Zusatzstoffe enthalten, wie sie üblicherweise in solchen Zusammensetzungen enthalten sind, beispielsweise Konservierungsmittelo, Mittel zur Einstellung der Viskosität, Mittel zur Einstellung der Tonizität, Puffermittel und dergleichen.
Die vorliegende Erfindung sieht auch die Verwendung von Mitteln zur Abgabe von intranasalen Zubereitungen von Influenza-Virus-Antigenen und Chitosan vor. Eine Abgabevorrichtung kann beispielsweise die Form eines Aerosol-Abgabesystems besitzen und kann so ausgebildet sein, dass es nur eine einzige Dosis oder mehrere Dosen abgibt. Der erste und der zweite Behälter können somit für eine Verwendung in einer Aerosol- Abgabevorrichtung ausgebildet sein.
Die Antigen-Zubereitung wird dem Patienten in einer Menge verabreicht, die wirksam ist, um im Patienten eine schützende Immun-Reaktion zu stimulieren. Beispielsweise kann die Antigen-Zubereitung Menschen in einer oder mehreren Dosen verabreicht werden, wobei jede Dosis 1 bis 250 Mikrogramm und bevorzugter Weise 1-50 Mikrogramm Protein enthält, das aus jedem Virusstamm zubereitet ist. Beispielsweise könnte dann, wenn Haemagglutinin- und Neuraminidase-Zubereitungen aus drei Virusstämmen zubereitet werden, beispielsweise 2 · Influenza A und 1 · Influenza B die Gesamtdosis des verabreichten Proteins im Bereich von 3-150 Mikrogramm liegen.
Die Erfindung wird nun in nicht einschränkender Weise unter Bezugnahme auf die Zeichnung und die folgenden Beispiele erläutert.

KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNG

In der Zeichnung zeigen:
Fig. 1 die Serum-IgG-Anti-Haemagglutinin-Reaktion bei Mäusen, die mit einem deaktivierten ganzen Influenza-A/Texas-Virus (WIV) immunisiert wurden. Jeder Balken stellt den logarithmischen geometrischen mittleren Titer von 5 Mäusen dar. Die Fehlerbalken stellen den 1-Standardfehler des geometrischen Mittelwerts dar.
Fig. 2 zeigt die nasale IgA-Anti-Influenza-A/Texas/WIV-Reaktion bei Mäusen, die mit WIV immunisiert wurden. Wie in Fig. 1 stellt jeder Balken den geometrischen mittleren Titer von 4 Mäusen dar, und die Fehlerbalken stellen den 1-Standardfehler des geometrischen Mittelwerts dar.
Fig. 3a und 3b zeigen die Ermittlung von nasalen und pulmonaren WIV-spezifischen Antikörper-abscheidenden Zellen (ASC) bei Mäusen, die mit WIV immunisiert wurden, unter Verwendung von ELISPOT.

BEISPIEL 1

HERSTELLUNG EINER CHITOSAN-ZUBEREITUNG

Eine Lösung von 1%-igem Chitosanglutamat, einem deacetylierten Chitin mittlerer Dichte mit einem Deacetylationsgrad von mehr als 80% wurde dadurch zubereitet, dass das Chitosan-Glutamat in 5,0 Gew./Volumen-% Natriumchlorid unter 48- bis 60-stündigem Rühren bei Zimmertemperatur gelöst wurde. Der pH-Wert der sich ergebenden Lösung wurde unter Verwendung von 0,1 Na&sub2;HPO&sub4; auf 5,8-6,0 erhöht. Die Sorte des verwendeten Chitosan-Glutamats war eine Sorte mittlerer Viskosität, die unter der Handelsmarke "Sea Cure +G210" (Produktcode 27150210) von Pronova Biopolymer aus Drammen, Norwegen verkauft wird.

BEISPIEL 2

HERSTELLUNG VON INFLUENZA-ANTIGEN-ZUBEREITUNGEN

Gereinigtes Oberflächen-Antigen (PSA)

2A. Gereinigtes Influenza-Oberflächenantigen (PSA), das Influenza-A/Texas-Protein enthält und von Evans Medical Limited, Speke, Merseyside, Großbritannien geliefert wird, wurde in mit Phosphat gepufferter Salzlösung (PBS) aufbereitet, so dass sich eine Protein-Konzentration von ungefähr 1 mg/ml ergab. Das PSA besteht nahezu vollständig aus dem Stamm-Protein Haemagglutinin (HA), obwohl es auch etwas Neuraminidase enthält.

INFLUENZA-IMPFSTOFF MIT GANZEN VIREN (WIV)

2B. Ganze Viren enthaltender Influenza-Wirkstoff (WIV) des A/Texas-Stamms wurde zu einer 1 mg/ml Protein-Konzentration in PBS aufbereitet.

BEISPIEL 3

ZUBEREITUNG EINER CHITOSAN/INFLUENZA-BEIMISCHUNG

Eine 1 : 1-Mischung der Chitosan-Glutamat-Lösung und der PSA- oder WIV-Lösung wurde zubereitet, um eine intranasale Impf-Zusammensetzung zu ergeben, die 0,5% Chitosan- Glutamat und 0,5 mg/ml Influenza-Antigen enthielt.
Kontrolllösungen, die die gleichen Konzentrationen von WIV oder PSA aber kein Chitosan-Glutamat enthielten, wurden ebenfalls zubereitet.

BEISPIEL 4

MÄUSE-IMMUNISIERUNGSSTUDIEN

Zusammensetzungen, die, wie oben in den Beispielen beschrieben, zubereitet worden waren, wurden Gruppen von 5 erwachsenen (6 bis 8 Wochen alten), weiblichen BALB/c- Mäusen in folgender Weise verabreicht:
Immunisierungen wurden intranasal in Volumina von 20 ul (10 ul pro Nasenloch) den Mäusen der Gruppen B, D, F verabreicht. Die Mäuse der Gruppe B und D erhielten die oben im Beispiel 3 beschriebenen Zubereitungen, während die Kontrollmäuse der Gruppe E und F die Zubereitungen der Beispiele 2B bzw. 2A und kein Chitosan erhielten. Die Mäuse in den Gruppen A und C erhielten zunächst 5 ul pro Nasenloch der Chitosan- Zusammensetzung aus Beispiel 1, und dann, nach einer Erholungszeit von 5 Minuten, pro Nasenloch 5 ul der Influenza-Zubereitungen der Beispiele 2B bzw. 2A. Das verwendete Immunisierungs- und Probenschema ist in Tabelle 1 dargestellt. TABELLE 1 Immunisierungs- und Probenschema
An den Probepunkten 1 und 2 wurde allen Mäusen einer jeden Gruppe eine Blutprobe entnommen. Die Probe am Probepunkt 3 wurde per Herzpunktierung durchgeführt, worauf die Köpfe der Mäuse entfernt und ihre Nasendurchgänge mit 1 ml PBS + 1% Bovin- Serum-Albumin ausgewaschen wurden.

Antikörper- und ELISPOT-Untersuchungen

Die durch das oben beschriebene Immunisierungsschema stimulierten Immun-Reaktionen wurden in herkömmlicher Weise unter Verwendung der ELISPOT- und ELISA-Verfahren analysiert. Somit wurde ein Enzyme-Linked-Immunosorbant-Assey (ELISA) verwendet, um die Serum-IgG-Anti-A/Texas-Reaktion zu ermitteln und die Ergebnisse sind in Fig. 1 und der folgenden Tabelle 2 wiedergegeben. Das ELISA-Verfahren wurde auch verwendet, um die nasale IgA-Anti-A/Texas-Reaktion zu ermitteln und die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in Fig. 2 und der folgenden Tabelle 3 dargestellt. Bei allen Untersuchungen wurde ein ganze Viren enthaltender Impfstoff (WIV) als Antigen verwendet. ELISA-Endpunkt-Titer wurden als Probelösungen berechnet und führten zu einem Ergebnis von 0,3 OD-Einheiten für IgG und 0,1 OD-Einheiten für die IgA-Untersuchung nach Subtraktion der Hintergrundkontrolle (ohne Probe). ERGEBNISSE TABELLE 2 Serum-Anti-WIV-Serum-Reaktion (Tabelle 2 und Fig. 1)
* No. Positiv/No. getested
+ Geometrischer Titer- Mittelwert Nasale IgA-Anti-WIV-Reaktion TABELLE 3 Nasale IaA-Anti-A/Texas-Reaktion EU/ug Gesamt IgA (Individuelle Reaktionen - geometrischer Mittelwert + sem)

Antikörper-Sekretions-Zellen (ASC) spezifisch für WIV in der nasalen und pulmonaren Schleimhaut

Lymphozyten wurden aus der Schleimhaut und den Lungenparenchyme von Gruppen von 5 Mäusen am dritten Probenpunkt isoliert. Die Lymphozyten einzelner Mäuse wurden gesammelt und unter Verwendung von ELISPOT auf Zellen untersucht, die IgA, IgG und IgM-Anti-Influenza-Antikörper abschieden. Die Ergebnisse sind in den Fig. 3a und 3b dargestellt. In den Fig. 3a und 3b sind die die Antikörper abscheidenden Zellen, die durch die ELISPOT-Untersuchung detektiert wurden, als die Anzahl von positiven Zellen/10&sup7; Gesamtzellen (Lymphozyten) ausgedrückt. Fig. 3a zeigt die Wirkung von Chitosan auf die nasale und pulmonare Immunogenizität der PSA-Zubereitung aus Beispiel 2A, während Fig. 3b die Wirkung von Chitosan auf die nasale und pulmonare Immunogenizität der WIV-Zubereitung aus Beispiel 2B wiedergibt. Die in den Fig. 3a und 3b dargestellten Ergebnisse zeigen, dass Chitosan die IgA-ASC-Reaktion sowohl bei PSA als auch WIV verstärkt, wobei die größere Verstärkung mit PSA beobachtet wurde. Die stärksten ASC- Reaktionen wurden in der Nasenschleimhaut bei dominantem IgA-ASC erzeugt. Pulmonare Reaktionen waren vorwiegend IgG-abscheidende Zellen.
Allgemein wurden stärkere ASC-Reaktionen sowohl durch PSA als auch WIV induziert, wenn diese mit Chitosan zubereitet worden waren, als wenn das Chitosan zunächst verabreicht wurde. Im Falle der IgA-ASC-Reaktion erzeugte die Zubereitung, die sowohl PSA als auch Chitosan enthielt, eine größere Reaktion als sie erzielt wurde, wenn das Chitosan zuerst verabreicht wurde. Es bestand jedoch kein signifikanter Unterschied zwischen den IgA-ASC-Reaktionen, die einerseits durch die Zubereitung induziert wurden, die sowohl WIV und Chitosan enthielt, als andererseits durch eine Zubereitung mit WIV, der das Chitosan vorausging.
Die oben dargestellten Ergebnisse zeigen, dass gute Immun-Reaktionen dadurch erzielt werden können, dass man Influenza-Antigene und Chitosane getrennt über den Schleimhaut-Weg verabreicht. Dies stellt insofern einen Vorteil dar, als es ermöglicht, die potentiellen Probleme zu vermeiden, die mit einer Verabreichung durch Injektion verbunden sind.
Die zuvor erwähnten Beispielen dienen nur zur Erläuterung der Erfindung und sollen in keiner Weise den Schutzumfang der Erfindung einschränken, der lediglich durch die beigefügten Ansprüche definiert ist.

Claims

1. Impfstoff-Zusammensetzung in Form eines Ausrüstungssatzes, der einen ersten Behälter, der eine Antigen-Zubereitung enthält, die ein Influenza-Antigen oder Influenza-Antigene umfaßt, und einen zweiten Behälter umfaßt, der eine wirksame Zusatzstoffmenge eines Chitosans enthält, wobei das Chitosan ein deacetyliertes Chitin ist, das zumindestens zu 80% deacetyliert ist.

2. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 1, bei der die Antigen-Zubereitung im ersten Behälter Haemagglutinin- und Neuraminidase-Influenza-Antigene umfaßt.

3. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 2, bei der die Antigen-Zubereitung im ersten Behälter eine vollständige Influenza-Vius-Zubereitung ist.

4. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 2, bei der die Antigen-Zubereitung im ersten Behälter gereinigte Haemagglutinin- und Neuraminidase-Influenza-Antigene umfaßt.

5. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 4, bei der die gereinigten Haemagglutinin- und Neuraminidase-Influenza-Antigene in der Form von Rosetten vorhanden sind, die einen Radius im Bereich von 10 nm bis 25 nm besitzen.

6. Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die für eine Verabreichung über die Schleimhaut geeignet ist.

7. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 6, die für eine intranasale Verabreichung geeignet ist.

8. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 6, die für eine orale Verabreichung geeignet ist.

9. Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das Chitosan zumindest zu 85% deacetyliert ist.

10. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 9, bei der das Chitosan zu 88% bis 90% deacetyliert ist.

11. Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das Chitosan wasserlöslich ist.

12. Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das Chitosan im zweiten Behälter in einer Lösung vorhanden ist, die einen pH-Wert im Bereich von 5, 5 bis 6, 5 besitzt.

13. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 12, bei der der pH-Wert der Chitosan-Lösung ungefähr 5, 8 bis 6 beträgt.

14. Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der der erste und der zweite Behälter geeignet sind, mit einer Abgabevorrichtung zur Verabreichung ihres Inhalts auf intranasalem Weg zusammenzuwirken.

15. Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der der erste und zweite Behälter von getrennten Kammern in der gleichen Abgabevorrichtung gebildet werden.

16. Impfstoff-Zusammensetzung nach Anspruch 15, bei der der erste und der zweite Behälter von zwei Kammern einer Mehrkammer-Spritze gebildet werden.

17. Pharmazeutisches Produkt, das eine Abgabevorrichtung umfaßt, die geeignet ist, eine Zusammensetzung intranasal abzugeben, in Verbindung mit einer Impfstoff-Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche.

18. Pharmazeutisches Produkt nach Anspruch 17, bei der die Abgabevorrichtung ein Aerosol-Abgabesystem ist.

19. Verwendung eines Chitosans für die Herstellung einer Hilfsstoff-Zusammensetzung in einem Behälter zur Erhöhung der Immunantwort von Influenza-Virus-Antigenen, die gemeinsam mit diesem aus einem getrennten Behälter verabreicht werden, wobei das Chitosan ein deacetyliertes Chitin ist, das zumindest zu 80% deacetyliert ist.