DE60128448T2

DE60128448T2 - Verwendung von isothiazolderivaten als ureaseinhibitoren zur behandlung von helicobacter pylori verursachte gastrointestinale krankheiten

Info

Publication number: DE60128448T2
Application number: DE60128448T
Authority: DE
Inventors: Masahiro Niiza-shi KAJIWARA
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2000-03-07
Filing date: 2001-03-02
Publication date: 2008-01-17
Anticipated expiration: 2021-03-03
Also published as: EP1262181A4; US20040058952A1; US20030060482A1; PT1262181E; JP2001247462A; KR20030016235A; CN1171589C; ATE362366T1; DE60128448D1; CA2400527A1; AU2001236052B2; EP1262181A1; CN1422155A; AU3605201A; WO2001066112A1; ES2284619T3; EP1262181B1; DK1262181T3

Description

TECHNISCHES GEBIET
Die Erfindung betrifft einen neuen Ureaseinhibitor und ein neues Anti-Helicobacter pylori-Mittel.
STAND DER TECHNIK
Es ist vor kurzem verdeutlicht worden, dass Urease, die durch Helicobacter pylori erzeugt wird, in einer engen Beziehung zur Entwicklung von Gastrointestinalkrankheiten, wie chronische Gastritis und Gastroduodenal-Ulcus, steht. Der Mechanismus von Magenschleimhautverletzung aufgrund von Urease wird wie folgt angenommen.
Harnstoff, der vom Magenparietal abgesondert wird, wird durch Urease hydrolysiert, wodurch Ammoniak und Kohlendioxid erzeugt werden. Ammoniak hat eine starke, für die Schleimhaut schädliche Wirkung, wodurch eine Durchblutungsstörung der Magenschleimhaut verursacht wird, und außerdem neutralisiert er die Magensäure, wodurch der Aufenthalt von Helicobacter pylori innerhalb des Magens in einer stark sauren Umgebung ermöglicht wird. Wenn Helicobacter pylori an der Magenschleimhaut anhaftet, erzeugen Epithelzellen der Magenschleimhaut Interleukin-8 (IL-8) als eine Art von Cytokinen, während IL-8 auf die Neutrophile wirkt, wodurch Migration und Aktivierung von Neutrophilen verursacht wird. Die aktivierten Neutrophile bilden Phagocytose und Phagosom und verursachen außerdem die Bildung von aktivem Sauerstoff und Degranulation. Der erzeugte aktive Sauerstoff selbst verursacht eine Schleimhautverletzung und erzeugt durch die Wirkung von Chlor und Myeloperoxidase in dem Magen Hypochlorsäure und wird außerdem mittels Ammoniak in Monochloramin umgewandelt, wodurch eine Zellverletzung hervorgerufen wird.
Es wird auch angenommen, dass Ammoniak reduziertes Glutathion als ein Fänger für aktiven Sauerstoff verringert, wodurch die Herstellung von aktivem Sauerstoff erhöht wird.
Eine Substanz mit einer Wirkung der Inhibierung einer Aktivität von Urease, erzeugt durch Helicobacter pylori, nämlich ein Ureaseaktivitätsinhibitor, ist wirksam, um die Entwicklung von Gastrointestinalkrankheiten, wie Magenschleimhautverletzung, zu verhindern und zu behandeln, und solch ein Ureaseaktivitätsinhibitor hat kürzlich spezielles Interesse hervorgerufen. Beispiele dafür beinhalten Hydroxamsäuren, wie Acetohydroxamsäure (A), Benzohydroxamsäure (B) und Nicotinhydroxamsäure (C); Disulfide, wie 2,2'-Dipyridyldisulfid, Cystein und Disulfiram; und Phenole, wie Hydrochinon, p-Nitrophenol und p-Aminophenol.
Vorher erwähnte Hydroxamsäuren (A) bis (C) sind in K. Kobayashi et al., Biochem. Biophys. Acta., 65, 380–383 (1962)) und K. Kobayashi et al., Biochem. Biophys. Acta., 227, 429–441 (1971)) beschrieben.
Disulfide sind in R. Norris et al., Biochem. J., 159, 245–257 (1976) und Matthew J. Todd, Robert P. Hausinger, J. Biol. Chem., 266, 10260–10267 (1991)) beschrieben.
Diese Verbindungen sind jedoch hinsichtlich einer Ureaseaktivitätshemmenden Wirkung von Helicobacter pylori ungenügend, und es ist gewünscht, eine neue Substanz mit einer Urease-hemmenden Wirkung zu studieren und zu entwickeln, durch die die vorher genannten Verbindungen auf diesem Gebiet ersetzt werden können.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, eine Substanz mit einer Ureaseaktivitäts-hemmenden Wirkung bereitzustellen, die auf diesem Gebiet gebraucht wird.
OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
Die gegenwärtigen Erfinder haben intensive Untersuchungen durchgeführt, um einen neuen Urease-hemmenden Wirkstoff bereitzustellen, der die Anforderungen auf diesem Gebiet erfüllt, und waren zuvor in der Entwicklung einer Serie von neuen Dithiobenzohydroxamsäurederivate, die die Aufgabe lösen, erfolgreich. Basierend auf diesem Wissen haben sie damit die Erfindung vollendet und die Patentanmeldung eingereicht (siehe japanische veröffentlichte ungeprüfte Patentanmeldung (Kokai) Tokkyo Koho Hei Nr. 316651/1998 ).
In der nachfolgenden Untersuchung haben die gegenwärtigen Erfinder gefunden, dass mehrere Arten an neuen Isothiazolderivaten ausgezeichnete Urease-hemmende aktive Wirkung und eine ausgezeichnete Anti-Helicobacter pylori-Aktivität besitzen. Damit haben sie die vorliegende Erfindung, basierend auf diesem Wissen, vollendet.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird ein Ureaseinhibitor bereitgestellt, der als Wirkstoff ein Isothiazolderivat enthält, das dargestellt wird durch die allgemeine Formel (1):
worin R¹ ein Wasserstoffatom oder eine Aminogruppe darstellt, R² ein Wasserstoffatom, eine Niederalkylgruppe oder eine Acetylgruppe darstellt, und X ein Kohlenstoffatom oder ein Stickstoffatom darstellt.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird außerdem ein Anti-Helicobacter pylori-Mittel bereitgestellt, das als Wirkstoff ein Isothiazolderivat, dargestellt durch dieselbe allgemeine Formel (1), enthält.
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden ferner der Ureaseinhibitor und das Anti-Helicobacter pylori-Mittel bereitgestellt, worin der Wirkstoff wenigstens eine Art ist, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on, Isothiazolo[5,4-b]pyridin-3(2H)-on, 5-Amino-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on, N-Methyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on und N-Acetyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on.
KURZE BESCHREIBUNG DER ABBILDUNGEN
1 ist ein Graph, der eine Urease-hemmende Aktivität der Wirkstoffverbindung der vorliegenden Erfindung, bestimmt gemäß Testbeispiel 1, zeigt.
2 ist ein Graph, der eine Urease-hemmende Aktivität der Wirkstoffverbindung der vorliegenden Erfindung, bestimmt gemäß Testbeispiel 1, zeigt.
3 ist ein Graph, der eine Anti-Helicobacter pylori-Aktivität der Wirkstoffverbindung der vorliegenden Erfindung, bestimmt gemäß Testbeispiel 2, zeigt.
BESTE WEISE ZUR AUSFÜHRUNG DER ERFINDUNG
Unter den Verbindungen, dargestellt durch die allgemeine Formel (1), die verwendet werden als Wirkstoff in dem Ureaseinhibitor und dem Anti-Helicobacter pylori-Mittel der vorliegenden Erfindung (hier im folgenden manchmal lediglich als "Medikament der vorliegenden Erfindung" bezeichnet) ist eine Verbindung, worin R¹ und R² ein Wasserstoffatom darstellen und X ein Kohlenstoffatom darstellt, nämlich 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on (BIT), eine Verbindung, deren antimikrobielle Aktivität allgemein bekannt war. Eine antipsychotische Aktivität ist kürzlich in einem Derivat gefunden worden, das von einer Carbonylgruppe an der 3-Position davon abgeleitet ist (F. Zini et al., Arch. Pharm., (Weinheim), 331, 219–223 (1998); N. H. Hrib et al., J. Med. Chem., 15, 2308–2314 (1994); P. J. Collier et al., J. Appl. Bacteriol., 69, 567–577 (1990); J.P. Yevich et al., J. Med. Chem., 29, 359– 369 (1986); R. Fisher et al., Arzeim Forsch., 14, 1301–1306 (1964)). Als ein Verfahren zur Herstellung des Derivats ist z.B. ein Verfahren von McClelland et al. bekannt, umfassend das Synthetisieren des Derivats aus 2,2-Dithiodibenzoesäure über ein Säurechlorid (E.W. McClelland et al., J. Chem. Soc., 3311–3315 (1926); L. Katz et al., J. Org. Chem., 19, 103–114 (1954)).
Es ist jedoch niemals die Tatsache berichtet worden, dass die Verbindung eine Ureaseaktivität besitzt, und diese Tatsache ist das Wissen, das von den gegenwärtigen Erfindern neu herausgefunden wurde.
Die Verbindung, dargestellt durch die allgemeine Formel (1), als Wirkstoff in der vorliegenden Erfindung, einschließlich BIT, und das Verfahren zur Herstellung derselben wird unten im Detail beschrieben.
In der vorliegenden Beschreibung beinhalten Beispiele für die Niederalkylgruppe, dargestellt durch R² in der allgemeinen Formel (1), eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, tert-Butyl-, Pentyl- oder Hexylgruppe.
Beispiele für die Verbindung, dargestellt durch die allgemeine Formel (1), die bevorzugt ist als Wirkstoff des Medikaments der vorliegenden Erfindung, beinhalten (1) solche, worin R¹ ein Wasserstoffatom ist und (2) solche, worin X ein Kohlenstoffatom ist. Beispiele für andere bevorzugte Verbindungen beinhalten solche, worin R1 eine Aminogruppe ist, R² ein Wasserstoffatom ist und X ein Kohlenstoffatom ist, und solche, worin sowohl R¹ als auch R² Wasserstoffatome sind und X ein Stickstoffatom ist.
Beispiele für die Verbindung, die besonders geeignet ist für medizinische Anwendung, beinhalten die folgenden Verbindungen:
1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on,
Isothiazolo[5,4-b]pyridin-3(2H)-on,
5-Amino-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on,
N-Methyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on und
N-Acetyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on.
Die Verbindung, die als Wirkstoff verwendet wird, kann hergestellt werden durch das oben erwähnte öffentlich bekannte Verfahren oder ein Äquivalent davon. Die gegenwärtigen Erfinder haben ein verbessertes Verfahren gefunden, das die Herstellung der Zielverbindung in höherer Ausbeute mit weniger Nebenreaktionsprodukt, verglichen mit dem oben genannten öffentlich bekannten Verfahren, ermöglicht.
Dieses verbesserte Verfahren wird unten im Detail beschrieben in Bezug auf die Art des Substituenten R2 in der Verbindung, dargestellt durch die allgemeine Formel (1).
Die Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R2 ein Wasserstoffatom ist, kann hergestellt werden durch das folgende Verfahren über ein Säureazid.
Obwohl das Säureazid allgemein verwendet wurde, um ein Amin, ein Amid und einen Thioester zu synthetisieren, werden diese Synthesereaktionen von der Curtius-Umlagerung begleitet oder verwenden die Azidgruppe als eine Abgangsgruppe (E. Jabri et al., J. Mol. Biol., 227, 934–937 (1992)). Die gegenwärtigen Erfinder jedoch haben ein Verfahren zum Erlangen einer gewünschten Verbindung, zyklisiert durch die Eliminierung eines Stickstoffatoms durch Bildung von Azidthiosalicylat unter niedrigen Temperaturbedingungen und Durchführen eines Angriffs eines Schwefelatoms gegen den Azidstickstoff, ohne Curtius-Umlagerung zu verursachen, erzielt.
Gemäß dem Verfahren kann zunächst eine Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = R² = H und X = C ist, auf die folgende Weise hergestellt werden. D.h., öffentlich bekannte Thiosalicylsäure als ein Ausgangsmaterial wird umgesetzt mit Diphenylphophorylazid (DPPA) in Pyridin in Gegenwart von Triethylamin, wodurch ein Säureazid als ein Intermediat erhalten wird, und dann wird das Säureazid der Zyklisierungsreaktion bei Raumtemperatur unterworfen.
In der Reaktion können herkömmlich verwendete verschiedene Basen anstatt von Triethylamin verwendet werden. Beispiele dafür beinhalten anorganische Basen, z.B. Trialkylamin, wie Triethylamin oder Tributylamin; organische Base, wie Pyridin, Picolin, 1,5-Diazabicyclo[4.3.0]nonen-5, 1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octan oder 1, 8-Diazabicyclo[5.4.0]undecen-7; Alkalimetallhydroxid, wie Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid; Alkalimetallcarbonat, wie Natriumcarbonat oder Kaliumcarbonat; und Alkalimetallhydrogencarbonat, wie Natriumhydrogencarbonat oder Kaliumhydrogencarbonat. Es ist geeignet, dass diese Basen in einer Menge innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 100 mol verwendet werden und bevorzugt von etwa 1 bis 20 mol pro mol der Ausgangsmaterialverbindung.
Außerdem können andere geeignete Lösungsmittel anstatt Pyridin verwendet werden. Beispiele dafür beinhalten Kohlenwasserstofflösungsmittel, wie Benzol oder Hexan; Etherlösungsmittel, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran; und Halogenlösungsmittel, wie Chloroform oder Methylenchlorid.
DPPA, das in dem oben genannten Verfahren verwendet wird, kann ersetzt werden durch das andere Azid, wie NaN₃ oder H₄N₂. Wenn NaN₃ verwendet wird, wird Carbonsäure als Ausgangsmaterial bevorzugt durch ein Säurehalogenid davon ersetzt, allgemein ein Säurechlorid. Wenn H₄N₂ verwendet wird, wird Carbonsäure als Ausgangsmaterial durch Ester davon ersetzt, und nach der Reaktion kann das gewünschte Säureazid erlangt werden durch Umsetzung mit salpetriger Säure.
In der Reaktion wird die Menge des Azids, wie DPPA oder dgl., gewöhnlich ausgewählt innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 10 mol und bevorzugt von etwa 1 bis 2 mol pro mol der Ausgangsmaterialverbindung.
Die Reaktionstemperatur der Reaktion ist gewöhnlich ausgewählt innerhalb eines Bereiches von etwa –10 bis 10°C und bevorzugt von etwa –5 bis 5°C, und die Reaktion ist gewöhnlich beendet innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 3 Stunden.
Die anschließende Zyklisierungsreaktion des Säureazids kann durchgeführt werden lediglich durch Zurücksetzen der Temperatur des Reaktionssystems auf Raumtemperatur, ohne das Säureazid aus dem Reaktionssystem zu isolieren oder es zu reinigen.
Zweitens kann, wenn 2-Mercaptonicotinsäure als Ausgangsmaterial verwendet wird, eine Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = R² = H und X = N ist, hergestellt werden auf dieselbe Weise wie oben beschrieben.
Drittens kann, wenn 4-Mercaptoisophthalsäure (und das entsprechende Pyridinderivat) als Ausgangsmaterial verwendet wird, die gewünschte Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = NH₂ und R² = H ist, verwendet werden. D.h., nur eine aus zwei Carbonylgruppen der Ausgangsmaterialverbindung wird selektiv zyklisiert.
Nach Beendigung der Zyklisierungsreaktion wird das restliche Säureazid der resultierenden Verbindung der Curtius-Umlagerungsreaktion unterworfen durch Erwärmen unter Bedingungen, bei denen mit Salzsäure angesäuert wird, und dann der Hydrolysereaktion unterworfen, wodurch es ermöglicht wird, die gewünschte 5-Aminoverbindung zu erhalten. Spezieller wird diese Curtius-Umlagerungsreaktion durchgeführt durch Erwärmen des resultierenden Säureazids in einem geeigneten Lösungsmittel, z.B. Kohlenwasserstofflösungsmittel, wie Benzol oder Hexan, Etherlösungsmittel, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran, Halogenlösungsmittel, wie Chloroform oder Methylenchlorid, und Stickstoff-haltiges Lösungsmittel, wie Pyridin, bei einer Temperatur innerhalb eines Bereiches von etwa 40 bis 200°C für etwa 1 bis 24 Stunden.
Die anschließende Hydrolysereaktion kann durchgeführt werden in einer wässrigen Lösung einer Säure, wie Salzsäure oder Schwefelsäure, oder einer wässrigen Lösung aus einem Alkali, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Lithiumhydroxid bei einer Temperatur innerhalb eines Bereiches von etwa 0 bis 100°C für 1 bis 24 Stunden gemäß einem normalen Verfahren.
In dem dritten Verfahren kann 4-Mercaptoisophthalsäure, die verwendet wird als eines der Ausgangsmaterialien, hergestellt werden aus einer entsprechenden 4-Bromverbindung auf die folgende Weise.
D.h., die 4-Bromverbindung wird umgewandelt in einen Alkylester unter Verwendung von Alkoholen, wie Ethylalkohol, der einen geeigneten Alkylester bilden kann, und dann wird der Alkylester umgesetzt mit Natriumsulfid, wodurch eine Bromgruppe durch eine Mercaptogruppe ersetzt wird.
Diese Reaktion wird beendet durch Erwärmen in einem geeigneten Lösungsmittel (z.B. Kohlenwasserstofflösungsmittel, wie Alkohollösungsmittel, Benzol oder Hexan; Etherlösungsmittel, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran; Halogenlösungsmittel, wie Chloroform oder Methylenchlorid; oder Stickstoff-haltiges Lösungsmittel, wie Pyridin) bei einer Temperatur innerhalb eines Bereiches von etwa 40 bis 200°C und bevorzugt von etwa 80 bis 150°C für etwa 1 bis 24 Stunden unter Verwendung eines NaSH-, KSH-, LiSH- oder SH-Gases in der Menge innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 100 mol und bevorzugt von etwa 1 bis 20 mol pro mol der Rohverbindung.
Die gewünschte 4-Mercaptoisophthalsäure kann hergestellt werden durch Hydrolysieren der so erhaltenen 4-Mercaptoalkylesterverbindung. Diese Hydrolysereaktion kann durchgeführt werden unter denselben Bedingungen wie die im Fall der vorher genannten Hydrolysereaktion.
Unter den Verbindungen, dargestellt durch die allgemeine Formel (1), als Wirkstoff der vorliegenden Erfindung, kann eine Verbindung, worin R2 ein Wasserstoffatom ausschließt, hergestellt werden auf die folgende Weise unter Verwendung einer Verbindung als Rohmaterial, worin R² ein Wasserstoffatom ist, als ein Wirkstoff der vorliegenden Erfindung, erhalten durch das vorher genannte Verfahren über das Säureazid.
Z.B. kann eine Verbindung, worin R2 eine Alkylgruppe ist, hergestellt werden durch Umsetzung einer Rohverbindung mit einem Schwefelsäuredialkyl. Beispiele für das Schwefelsäuredialkyl beinhalten entsprechende Schwefelsäuredialkyle, wie Schwefelsäuredimethyl oder Schwefelsäurediethyl. Diese Schwefelsäuredialkyle werden in einer Menge innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 20 mol und bevorzugt von etwa 1 bis 10 mol pro mol der Rohverbindung verwendet. Die Reaktion wird durchgeführt in einem geeigneten Lösungsmittel, z.B. wässriger Alkalilösung, wie einer wässrigen 10%igen Natriumhydroxidlösung, einer wässrigen Kaliumhydroxidlösung oder einer wässrigen Lithiumhydroxidlösung oder in Abwesenheit eines Lösungsmittels bei einer Temperatur innerhalb eines Bereiches von etwa 0 bis 100°C und bevorzugt von 0 bis 40°C für etwa 1 bis 24 Stunden.
Außerdem kann eine Verbindung, worin R² eine Acetylgruppe ist, hergestellt werden durch Umsetzung einer Rohverbindung mit einem Säureanhydrid. Diese Reaktion wird gewöhnlich durchgeführt in einem geeigneten Lösungsmittel wie Pyridin oder in Abwesenheit eines Lösungsmittels bei einer Temperatur innerhalb eines Bereiches von etwa 0 bis 100°C und bevorzugt von etwa 0 bis 40°C für etwa 1 bis 24 Stunden unter Verwendung eines Säureanhydrids in der Menge innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 20 und bevorzugt von 1 bis 10 mol pro mol einer Rohverbindung.
Die Zielverbindung, erhalten durch die entsprechenden Reaktionen, die oben beschrieben sind, kann von dem Reaktionssystem durch einen gewöhnlichen Weg isoliert und gereinigt werden. Beispiele für den Weg zur Isolierung und Reinigung beinhalten Adsorptionschromatographie, Umkristallisation und Lösungsmittelextraktion.
Der Ureaseinhibitor und das Anti-Helicobacter pylori-Mittel der vorliegenden Erfindung werden hergestellt in der Form einer gewöhnlichen pharmazeutischen Zubereitung unter Verwendung des Isothiazolderivats, das wie oben beschrieben erhalten wurde, oder seines Säureadduktsalzes als Wirkstoff und eines geeigneten herkömmlichen Trägers für die Zubereitung.
Das Säureadduktsalz kann hergestellt werden unter Verwendung einer geeigneten Säure, die allgemein zur Bildung eines Salzes verwendet wird, z.B. eine anorganische Säure, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure oder Bromwasserstoffsäure, und eine organische Säure, wie Oxalsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Zitronensäure oder Benzoesäure, gemäß einem normalen Verfahren.
Die Träger für die Zubereitung beinhalten allgemein verwendete Streckmittel oder Hilfsstoffe, z.B. Füllstoffe, Streckmittel, Bindemittel, Befeuchtungsmittel, Sprengmittel, Tenside und Gleitmittel.
Die Form der pharmazeutischen Zubereitung kann ausgewählt werden aus verschiedenen Formen gemäß dem therapeutischen Zweck und typische Beispiele dafür beinhalten Tabletten, Pillen, Pulver, flüssige Zubereitungen, Suspensionen, Emulsionen, Granulen und Kapseln.
Bei der Bildung in die Form von Tabletten können als Träger verwendet werden Hilfsstoffe, wie Lactose, Saccharose, Natriumchlorid, Glucose, Harnstoff, Stärke, Calciumcarbonat, Kaolin, kristalline Cellulose und Kieselsäure; Bindemittel, wie Wasser, Ethanol, Propanol, ein einfacher Sirup, Glucoselösung, Stärkelösung, Gelatinelösung, Carboxymethylcellulose, Shellac, Methylcellulose, Calicumphosphat und Polyvinylpyrrolidon; Sprengmittel, wie trockene Stärke, Natriumalginat, Agarpulver, Laminaranpulver, Natriumhydrogencarbonat, Calciumcarbonat, Polyoxyethylensorbitanfettsäureester, Natriumlaurylsulfat, Monoglyceridstearat, Stärke und Lactose; Disintegrierungsinhibitoren, wie Saccharose, Stearin, Kakaobutter und hydriertes Öl; Adsorptionsbeschleuniger, wie quaternäre Ammoniumbase und Natriumlaurylsulfat; Befeuchtungsmittel, wie Glycerin und Stärke; Absorbenzien, wie Stärke, Lactose, Kaolin, Bentonit und kolloidale Kieselsäure; und Gleitmittel, wie gereinigter Talk, Stearat, pulverförmige Borsäure und Polyethylenglycol.
Ferner können Tabletten optional die Form von normalen überzogenen Tabletten annehmen, z. B. Zucker-überzogene Tabletten, Gelatine-überzogene Tabletten, Magensaft-resistente Tabletten, Film-beschichtete Tabletten, Zweischichttablette und Mehrschichttablette.
Bei der Bildung in die Form von Pillen können Hilfsstoffe, wie Glucose, Lactose, Stärke, Kakaobutter, gehärtetes Pflanzenöl, Kaolin und Talk; Bindemittel, wie pulverförmiger Gummi arabicum, pulverförmiger Tragakant, Gelatine und Ethanol; und Sprengmittel, wie Laminaran und Agar als Träger verwendet werden.
Kapseln können hergestellt werden durch Mischen verschiedener Träger, die oben beschrieben sind, mit dem Derivat der allgemeinen Formel (1) oder seinem pharmazeutisch annehmbaren Salz und Befüllen einer Hartgelatinekapsel oder Weichgelatinekapsel mit der Mischung.
Wenn notwendig, können auch Farbstoffe, Konservierungsmittel, Parfums, Geschmacksstoffe, Süßungsmittel und andere Arzneimittel in das Medikament der vorliegenden Erfindung eingebaut werden.
Die Menge des Wirkstoffes, die in die pharmazeutische Zubereitung der vorliegenden Erfindung eingebaut wird, ist nicht speziell limitiert und kann geeignet ausgewählt werden aus einem breiten Bereich. Die Menge kann gewöhnlich innerhalb eines Bereiches von etwa 1 bis 70 Gew.% sein, basierend auf der Gesamtmenge der pharmazeutischen Zubereitung.
Die Dosis der pharmazeutischen Zubereitung der vorliegenden Erfindung ist nicht speziell limitiert und wird geeignet ausgewählt gemäß dem Alter, Geschlecht und anderer Bedingungen des Patienten, Zustand der Erkrankung und Form der verschiedenen Zubereitungen. Es ist bevorzugt, dass die pharmazeutische Zubereitung oral verabreicht wird.
Die Dosis der pharmazeutischen Zubereitung der vorliegenden Erfindung beim Menschen wird geeignet ausgewählt gemäß dem Alter, Körpergewicht, Symptom, therapeutische Wirkung, Verabreichungsweg und Behandlungszeit, aber die pharmazeutische Zubereitung wird bevorzugt verabreicht einmal oder geteilt in zwei Portionen zu mehreren Zeiten an einem Tag mit einer täglichen Dosis innerhalb eines Bereiches von 0,1 bis 100 mg/kg pro einem Erwachsenen.
Die pharmazeutische Zubereitung der vorliegenden Erfindung kann allein verabreicht werden oder in Kombination mit anderen Verbindungen, wie einem pharmakologisch aktiven Mittel oder Arzneimittel, enthaltend dasselbe, z.B. Antibiotika, wie Amoxycillin und Clarithromycin; Nitronidazolantiprotozoalmittel, wie Metronidazol und Tinidazol; Antiulcusmedikamente, wie Wismutzubereitung, Sofalcone und Plaunotol; und Protonenpumpeninhibitoren, wie Asomeprazol und Lansoprazol. Gemäß solch einer kombinierten Verabreichung ist es manchmal möglich, Helicobacter pylori mit hoher Wahrscheinlichkeit zu entfernen und leichter vollständige Genesung von Gastrointestinalkrankheiten, verursacht durch chronische Gastritis und Gastroduodenalulcus, zu erreichen.
BEISPIELE
Um die vorliegende Erfindung weiter im Detail zu veranschaulichen werden Herstellungsbeispiele der Verbindungen der vorliegenden Erfindung als Referenzbeispiele beschrieben und Testbeispiele dieser Verbindungen sind anschließend beschrieben.
REFERENZBEISPIEL 1
Herstellung von 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on [Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = R² = H und x = C, hier im folgenden mit "Verbindung (3)" bezeichnet].
Eine Lösung aus Thiosalicylsäure (3,1 g, 20 mmol) in Pyridin (40 ml) wurde tropfenweise in eine Lösung aus Diphenylphosphorylazid (DPPA) (4,5 ml, 20 mmol) in Triethylamin (20 ml) bei 0°C über 30 Minuten eingetropft.
Die Mischung wurde gerührt bei Raumtemperatur für 6 Stunden, gefolgt von Extraktion mit Chloroform. Der Extrakt wurde gewaschen mit Wasser und getrocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat. Nach Destillation wurde der Rückstand durch Silikagelsäulenchromatografie (Ethylacetat:Hexan = 1:3) gereinigt und aus Chloroform umkristallisiert, wodurch 2,45 g der Zielverbindung (Ausbeute: 81 %) erhalten wurden.
Schmelzpunkt: 142 bis 144°C
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7,44 (1H, dt, J = 7,8, 0,9 Hz), 7,64 (1H, dt, J = 7,8, 0,9 Hz), 7,89 (1H, dd, J = 7,8, 0,9 Hz), 7,99 (1H, dd, J = 7,8, 0,9 Hz), 11,51 (1H, b)
¹³C-NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 121,8, 124,4, 125,0, 125,1, 130,4, 147,7, 165,1
FT-IR (KBr) cm^–1: 606, 743, 1316, 1443, 1639, 2688, 2920, 3058
FAB-MS (m/z): 152 (M+H)⁺
Elementaranalyse (%)
Berechnet für C₇H₅NOS: C, 55,61; H, 3,33; N, 9,26
Gefunden: C, 55,37; H, 3,37; N, 9,25
REFERENZBEISPIEL 2
Herstellung von 5-Amino-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on [Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = R2 = H und X = C ist, hier im folgenden bezeichnet mit "Verbindung (10)"].
(1) Herstellung von 4-Mercaptoisophthalsäure 4-Bromisophthalsäure (10,0 g, 40,8 mmol) wurde gelöst in konzentrierter Schwefelsäure (10 ml) und trockenem Ethylalkohol (100 ml). Die Mischung wurde unter Rückfluss für einen Tag gehalten, abgekühlt auf Raumtemperatur und mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat neutralisiert, gefolgt durch Extraktion mit Chloroform. Der Extrakt wurde gewaschen mit Wasser und getrocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat. Nach Destillation wurde der Rückstand gelöst in Ethylalkohol (100 ml), und 70 % Natriumhydrogensulfid (10 g, 0,13 mol) wurde zugegeben.
Die Reaktionsmischung wurde unter Rückfluss für 2 Stunden gehalten und mit 50%iger Salzsäure angesäuert, gefolgt von Extraktion mit Diethylether. Der Extrakt wurde gewaschen mit Wasser und getrocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat, gefolgt von Destillation. Der Rückstand wurde gereinigt durch Silikagelsäulenchromatografie (Ethylacetat:Hexan = 1:20) und aus Hexan umkristallisiert, wodurch 6,1 g eines 4-Mercaptoisophthalsäurediethylesters (58,8 %) erhalten wurden.
Dieselbe Verbindung (10 g, 39,3 mmol) wurde zugegeben zu einer wässrigen 40%igen Natriumhydroxidlösung (100 ml), und die Mischung wurde für 12 Stunden unter Rückfluss gehalten. Nach dem Abkühlen wurde 50%ige Salzsäure bei 0°C zugegeben, um einen Niederschlag herzustellen. Der resultierende Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt und mit Wasser gewaschen. Der Niederschlag wurde gesammelt und aus Methylalkohol umkristallisiert, wodurch 7,61 g der Titelverbindung (Ausbeute: 97,7 %) erhalten wurden.
Schmelzpunkt: 280°C oder höher
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 3,17 (1H, s), 7,64 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,86 (1H, dd, J = 8,4, 1,8 Hz), 8,47 (1H, d, H = 1,8 Hz)
¹³C-NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 126,8, 127,0, 131,8, 132,6, 146,1, 166,9, 167,5
FT-IR (KBr) cm^–1: 671, 761, 1256, 1305, 1412, 1598, 1683, 2545, 2641, 2830
FAB-MS (m/z): 199 (M+H)⁺
Elementaranalyse (%)
Berechnet für C₈H₆O₄S: C, 48,48; H, 3,05
Gefunden: C, 48,03; H, 3,08
(2) Herstellung von 5-Amino-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on (Verbindung (10))
Eine Lösung aus der Verbindung (2,0 g, 10 mmol), erhalten unter Punkt (1), in Pyridin (20 ml) wurde tropfenweise zugegeben in eine Lösung aus Diphenylphosphorylazid (DPPA) (4,5 ml, 20 mmol) in Triethylamin (10 ml) bei 0°C über 30 Minuten.
Die Mischung wurde bei Raumtemperatur für 12 Stunden gerührt, und die Reaktionsmischung wurde schrittweise in 30%ige Salzsäure (50 ml) gegeben. Die Mischung wurde unter Rückfluss für 6 Stunden gehalten und neutralisiert mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat, und dann wurde das Rohprodukt destilliert und in Methylalkohol gelöst. Die resultierende Lösung wurde adsorbiert an einem sauren aktiven Aluminiumoxid für Chromatographie. Als erstes wurden Verunreinigungen eluiert und mit Methylalkohol entfernt und dann wurde mit einer gemischten 20%igen konzentrierten Ammoniakwasser-Methylalkohol (1:4)-Lösung eluiert, wodurch eine reine Zielverbindung erhalten wurde, die aus Methylalkohol kristallisiert wurde (1,24 g, Ausbeute: 75 %)
Schmelzpunkt: 230 bis 233°C oder höher
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 5,36 (1H, s), 6,96 (1H, dd, J = 8,5, 1,9 Hz), 6,98 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,55 (1H, d, J = 8,5 Hz), 10,94 (1H, br)
¹³C-R (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 164,5, 146,4, 125,36, 121,1, 119,4, 105,9
FT-IR (KBr) cm^–1: 611, 759, 1270, 1315, 1477, 1618, 2678, 2924, 2924, 3330, 3432
FAB-MS (m/z): 16753 (M+H)⁺
Elementaranalyse (%)
Berechnet für C₇H₆N₂OS: C, 50,59; H, 3,64; N, 16,86
Gefunden: C, 50,80; H, 3,73; N, 16,79
REFERENZBEISPIEL 3
Herstellung von Isothiazolo[5,4-b]pyridin-3(2H)-on [Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = R² = H und X = N, hier im folgenden mit "Verbindung (11)" bezeichnet].
Eine Lösung aus 2-Mercaptonicotinsäure (3,1 g, 20 mmol) in Pyridin (40 ml) wurde tropfenweise in eine Lösung aus Diphenylphosphorylazid (DPPA) (4,5 ml, 20 mmol) in Triethylamin (20 ml) bei 0°C über 30 Minuten zugegeben.
Die Mischung wurde bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt, und die Reaktionsmischung wurde destilliert und an ein saures aktives Aluminiumoxid für Chromatographie adsorbiert. Als erstes wurden Verunreinigungen eluiert und mit Methylalkohol entfernt, und dann wurde mit 10 % Essigsäure-Methylalkohol eluiert, wodurch eine reine Zielverbindung erhalten wurde, die aus Methylalkohol kristallisiert wurde (2,64 g, Ausbeute: 87 %).
Schmelzpunkt: 235 bis 237°C
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ : 7,51 (1H, d, J = 4,8 Hz), 7,53 (1H, d, J = 5,1 Hz), 8,33 (1H, dd, J = 5,1, 1,5 Hz), 8,83 (1H, dd, J = 4,8, 1,5 Hz), 11,93 (1H, b)
¹³C-NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 118,9, 120,8, 133,5, 153,0, 163,4
FT-IR (KBr) cm^–1: 606, 753, 1387, 1461, 1674, 2696, 2911, 3032
FAB-MS (m/z): 153 (M+H)⁺
Elementaranalyse (%)
Berechnet für C₆H₄N₂OS: C, 47,36; H, 2,65; N, 18,41
Gefunden: C, 47,26; H, 2,68; N, 18,11
REFERENZBEISPIEL 4
Herstellung von N-Methyl-i,2-benzoisothiazol-3(2H)-on [Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R1 = H, R2 = Methylgruppe und X = S, hier im folgenden mit "Verbindung (12)" bezeichnet].
Eine wässrige 10%ige Natriumhydroxidlösung (20 ml) aus 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on (0,5 g, 3,3 mmol) wurde tropfenweise in Dimethylschwefelsäure (2 ml, 21 mmol) zugegeben. Die Mischung wurde unter Rückfluss über Nacht gehalten, gefolgt von Extraktion mit Chloroform. Der Extrakt wurde gewaschen mit 10 % Salzsäure, getrocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat und dann destilliert. Der Rückstand wurde umkristallisiert aus Ethylacetat, wodurch 0,47 g der Zielverbindung (Ausbeute: 86 %) erhalten wurden.
Schmelzpunkt: 43 bis 46°C
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 3,45 (3H, s), 7,41 (1H, dt, J = 8,2, 1,4 Hz), 7,52–7,64 (2H, m), 8,04 (1H, dt, J = 8,0, 0,5 Hz)
¹³C-NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 30,4, 120,3, 124,5, 125,5, 126,7, 131,8, 140,0, 165,6
FT-IR (KBr) cm^–1: 670, 745, 1341, 1447, 1638, 3449
FAB-MS (m/z): 166 (M+H)⁺
Elementaranalyse (%)
Berechnet für C₈H₇NOS: C, 58,16; H, 4,27; N, 8,48
Gefunden: C, 57,48; H, 4,26; N, 8,38
REFERENZBEISPIEL 5
Herstellung von N-Acetyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on [Verbindung der allgemeinen Formel (1), worin R¹ = H, R² = Acetylgruppe und X = S, hier im folgenden mit "Verbindung (13)" bezeichnet].
Eine Lösung aus 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on (1 g, 6,6 mmol) in Pyridin (20 ml) wurde tropfenweise in Essigsäureanhydrid (10 ml) zugegeben. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, gefolgt von Extraktion mit Chloroform. Der Extrakt wurde gewaschen mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat, getrocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat und dann destilliert. Der Rückstand wurde gereinigt durch Silikagelsäulenchromatografie (Ethylacetat:Hexan = 1:10) und umkristallisiert aus Ethylacetat, wodurch 1,2 g der Zielverbindung (Ausbeute: 94 %) erhalten wurden.
Schmelzpunkt: 135 bis 137°C
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ : 2,79 (3H, s), 7,41 (1H, ddd, J = 8,0, 7,1, 0,8 Hz), 7,53 (1H, dt, J = 8,0, 0,8 Hz), 7,71 (1H, ddd, J = 8,0, 7,1, 1,4 Hz), 8,03 (1H, ddd, J = 8,0, 1,4, 0,8 Hz)
¹³C-NMR (75 MHz, CDCl3) 6: 24,9, 120,6, 125,4, 125,9, 134,5, 141,0, 163,4, 170,1
FT-IR (KBr) cm^–1: 604, 737, 1368, 1451, 1687, 2931, 3009, 3064
EI-MS (m/z) (rel.int.%): 193 (M⁺, 16), 151(100), 123(5), 96(4)
Elementaranalyse (%)
Berechnet für C₉H₇NO₂S: C, 55,95; H, 3,65; N, 7,25
Gefunden: C, 55,92; H, 3,66; N, 7,20
TESTBEISPIEL 1
Ureaseaktivitätsinhibitionstest
Unter Verwendung der Verbindung als Wirkstoff der vorliegenden Erfindung als Testverbindung (Ureaseinhibitorprobe) wurde der folgende Test zur Ureaseaktivitätshemmung durchgeführt.
Unter Verwendung von ¹³C-Harnstoff als Substrat wurde die Menge von Harnstoff, die aufgrund der Ureaseenzymreaktion eliminiert wird, mit dem Zeitverlauf mittels ¹³C-NMR gemessen. Auf der Basis einer Eliminierungsgeschwindigkeit (M/sec) von ¹³C-Harnstoff in Abwesenheit der Ureaseinhibitorprobe wurde der Fall, bei dem die Eliminierungsgeschwindigkeit in Gegenwart der Probe auf die Hälfte reduziert wird, als IC₅₀ der Probe berechnet.
[¹³C-NMR-Apparat und Messbedingungen]
Apparat: GEMINI300 (75 MHz), hergestellt von Varian Co.
Erfassungszeit: 1,0 Sekunden
Pulsabfallzeit: 0,5 Sekunden
Scan-Anzahl: 8- bis 30-mal
Probentemperatur: 20°C
Spektrale Bandbreite: 18.102,9 Hz
Datenpunkt: 36192 Pulse Winkel: 27°
(Herstellung der Probe) In ein NMR-Röhrchen mit einem Durchmesser von 5 mm wurde Helicobacter pylori-Urease (hergestellt von Otsuka Pharmaceutical Co., 1,6 Einheiten), gelöst in 500 μl aus einem gemischten Lösungsmittel (pH 7) aus 400 μl 0,1 M Phosphatpuffer (pH 7) und 100 μl DMSO, zugegeben und jede Testverbindung (Ureaseinhibitorprobe), gelöst in 100 μl Ethanol, wurde zugegeben, gefolgt von Stehenlassen bei 20°C für 30 Minuten und weiteres Stehenlassen auf einem Eisbad für 10 Minuten.
¹³C-Harnstoff (hergestellt von Mass Trace, Inc. (99 Atom% ¹³C) 1 mg), getrennt gelöst in 100 μl aus dem gemischten Lösungsmittel, das auf 10°C abgekühlt wurde, wurde in des NMR-Röhrchen zugegeben, gefolgt von schnellem Schütteln, um eine Probe herzustellen, worin die Reaktionslösungsmittelmenge 600 μl ist. Eine Probe, enthaltend keine Testverbindung, wurde als eine Kontrolle verwendet.
[Durchführung der Messung]
Jede Probe wurde in ein Messröhrchen („Probe") eingebracht, und die Enzymreaktion wurde bei der Reaktionstemperatur (Temperatur des Messröhrchens) von 20°C durchgeführt, und die Messung wurde alle 20 Sekunden durchgeführt, nachdem 1 bis 4 Minuten vergangen waren seit dem Beginn der Reaktion, während die Messung jede Minute durchgeführt wurde, nachdem 4 oder mehr Minuten vergangen waren, unter Verwendung eines ¹³C-NMR-Apparates. Dementsprechend wurde eine Abfallgeschwindigkeit (M/sec) eines Signals (165 ppm) von ¹³C-Harnstoff als Substrat bestimmt.
[Ergebnisse]
Unter Verwendung der Verbindung (BIT), hergestellt in Referenzbeispiel 1, als Testverbindung wurde ein Test durchgeführt. Demzufolge war IC₅₀ von BIT 5,5 × 10^–5 M.
Derselbe Test wurde wiederholt, außer dass eine kommerziell erhältliche „Jack-Bean"-Urease anstatt der Helicobacter pylori-Urease verwendet wurde. Demzufolge war IC₅₀ von BIT 13,2 × 10^–5 M.
Diese Werte sind äquivalent zu denen von Hydroxamsäuren als ein konventionell bekannter typischer Ureaseinhibitor (K. Kyoichi et al., Biochim. Biophys. Acta, 65, 380–383 (1962); K. Kyoichi et al., ibid, 227, 429–441 (1971); S. Odake et al., Biol. Pharm. Bull., 17, 1329–1332 (1994)) und diese Tatsache zeigt, dass BIT eine starke Urease-hemmende Wirkung besitzt.
Unter Verwendung der entsprechenden Verbindungen, die in Referenzbeispielen 2 bis 5 erhalten wurden, als Testverbindung wurde derselbe Test (unter Verwendung der „Jack-Bean"-Urease) wiederholt und IC₅₀ von allen Testverbindungen bestimmt, wodurch ein relativer Urease-hemmender Aktivitätswert relativ zu einem Standard (1) für denselben Wert von BIT berechnet wurde. Die Ergebnisse sind in 1 gezeigt.
In 1 zeigt die Ordinate eine relative Urease-hemmende Aktivität der entsprechenden Testverbindungen (Verbindungen, erhalten in Referenzbeispielen 2 bis 5) relativ zu dem Wert 1 für die Urease-hemmende Aktivität der Verbindung (BIT), erhalten in Referenzbeispiel 1, während die Abszisse die entsprechenden Testverbindungen zeigt.
Ferner wurde derselbe Test wiederholt, außer dass der pH des Reaktionssystems auf 6 eingestellt wurde (eine gemischte Lösung aus 350 μl aus einer Lösung, hergestellt durch Lösen von NaH₂PO₄·2H₂O (1,04 g) in destilliertem Wasser, um 50 ml zu ergeben, 150 μl aus einer Lösung, hergestellt durch Lösen von NaH₂PO₄·12H₂O (2,39 g) in destilliertem Wasser, um 50 ml zu ergeben, 100 μl einer Lösung, hergestellt durch Lösen von NaH₂PO₄·H₂O (1,04 g) und H₂PO₄ (100 μl) in destilliertem Wasser, um 50 ml zu ergeben, und 100 μl DMSO wurde als Puffer (pH 6) verwendet). Die Ergebnisse sind in 2 gezeigt (in Bezug auf die Verbindungen, erhalten in Referenzbeispielen 2 und 3).
Wie aus 1 und 2 deutlich wird, besitzen alle Verbindungen als Wirkstoff der vorliegenden Erfindung, hergestellt in Referenzbeispielen 2 bis 5, ausgezeichnete Urease-hemmende Aktivität ähnlich zu der Verbindung als Wirkstoff, die in Referenzbeispiel 1 hergestellt wurde.
TESTBEISPIEL 2
Anti-Helicobacter pylori-Aktivitätstest
Ein Anti-Helicobacter pylori-Aktivitätstest der Verbindung als Wirkstoff der vorliegenden Erfindung wurde durchgeführt nach dem folgenden Verfahren unter Verwendung einer Verdünnungsmethode.
(1) Herstellung der Helicobacter pylori-Lösung
Helicobacter pylori ATCC 43501-Stämme wurden in ein Medium in einer Petri-Schale geimpft (Brucella agar (BECTON DIKINSON), enthaltend 7 % FBS) und dann in einem gemischten Kohlensäuregas-Stickstoffgas-Kulturmedium (10 % CO₂, 5 % 0₂, 85 % N₂, 37°C) für 2 Tage kultiviert. Die Stämme wurden wiedergewonnen, ähnlich kultiviert in einem flüssigen Medium unter Verwendung einer „Brucella-broth" (BECTON DIKINSON) für einen Tag und dann mit demselben Medium verdünnt, um OD_660nm auf 0,1 einzustellen.
(2) Herstellung von Verdünnungsserien der Testverbindung
Die Testverbindung wurde gelöst in 50 % Ethanol-Kochsalzlösung, um 1 mg pro ml Lösung herzustellen, und die Lösung wurde durch 12 Schritte mit demselben Medium 1- bis 2.048-fach verdünnt, um Verdünnungsserien herzustellen.
(3) Testverfahren
In jede Vertiefung einer Zellkulturplatte (20 μl/Vertiefung) wurde jede schrittweise verdünnte Lösung (20 μl) der Testverbindung gefüllt, und ein Brucella-Medium (enthaltend 7 % FBS) (160 μl) wurde zugegeben, und dann wurde schließlich eine Pylori-Stamm-Lösung (20 μl) zugegeben. Nachdem die Platte in einem gemischten Kohlensäuregas-Stickstoffgas-Kulturmedium (10 % CO₂, 5 % O₂, 85 % N₂) bei 37°C für 3 Tage kultiviert wurde, wurde die Trübung (OD_660nm) von jeder Vertiefung gemessen, und die bakteriell hemmende Geschwindigkeit (Eradikationsgeschwindigkeit, %) wurde berechnet unter Verwendung des entsprechenden Wertes bei Beginn des Tests als Standard.
(4) Ergebnisse
Die Ergebnisse, erhalten unter Verwendung der Wirkstoffverbindung der vorliegenden Erfindung, erhalten in Referenzbeispiel 1, sind in 3 gezeigt. In 3 zeigt die Ordinate die Eradikationsgeschwindigkeit (%), während die Abszisse die Konzentration (μg/ml) der Testverbindung zeigt. In 3 zeigen die Auftragungen (1) die Ergebnisse, erhalten unter Verwendung der Verbindung als Wirkstoff der vorliegenden Erfindung, während Auftragungen (2) die Ergebnisse zeigen, die unter Verwendung der folgenden Kontrollverbindung erhalten wurden.
Kontrollverbindung: Metronidazol (MN), das konventionell bekannt war als Mittel zum Ausrotten von Helicobacter pylori, wurde verwendet.
Die obigen Testergebnisse wurden ausgedrückt als Mittelwert ± SD. Im Fall der Wirkstoffverbindung der vorliegenden Erfindung ist n = 12. Im Fall der Kontrollverbindung ist n = 6.
Aus 3 wird deutlich, dass die Verbindungen als Wirkstoff der vorliegenden Erfindung (erhalten in Referenzbeispiel 1) größere Helicobacter pylori-hemmende Geschwindigkeit bei einer niedrigeren Konzentration zeigen, verglichen mit MN, und daher besitzen sie eine stärke Anti-Helicobacter pylori-Aktivität als MN.
Wie oben beschrieben wird deutlich, dass alle Verbindungen als Wirkstoffe der vorliegenden Erfindung sowohl Urease-hemmende Wirkung als auch eine Anti-Helicobacter pylori-Aktivität besitzen.
INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden damit eine Verbindung mit ausgezeichneter Inhibitoraktivität gegenüber Urease von Helicobacter pylori sowie ein Ureaseinhibitor und ein Anti-Helicobacter pylori-Mittel, die die Verbindung als ein Wirkstoff enthalten, bereitgestellt. Die Medikamente der vorliegenden Erfindung sind wirksam, um Gastrointestinalkrankheiten, verursacht durch Urease von Helicobacter pylori, wie chronische Gastritis und Gastroduodenal-Ulcus, zu vermeiden und zu behandeln.

Claims

Verwendung eines Isothiazolderivats dargestellt durch die allgemeine Formel (1):
worin R¹ ein Wasserstoffatom oder eine Aminogruppe darstellt, R² ein Wasserstoffatom, eine Niederalkylgruppe oder eine Acetylgruppe darstellt, und X ein Kohlenstoffatom oder ein Stickstoffatom darstellt, als Wirkstoff für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung und Verhinderung einer Gastrointestinalkrankheit, die durch Urease, die von Helicobacter pylori erzeugt wird, hervorgerufen wird.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei der Wirkstoff zumindest eine Art ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on, Isothiazolo[5,4-b]pyridin-3(2H)-on, 5-Amino-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on, N-Methyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on und N-Acetyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on ist.
Verwendung eines Isothiazolderivats dargestellt durch die allgemeine Formel (1):
worin R¹ ein Wasserstoffatom oder eine Aminogruppe darstellt, R2 ein Wasserstoffatom, eine Niederalkylgruppe oder eine Acetylgruppe darstellt, und X ein Kohlenstoffatom oder ein Stickstoffatom darstellt, als Wirkstoff für die Herstellung eines Medikaments für die Behandlung und Verhinderung einer durch Helicobacter pylori hervorgerufenen Gastrointestinalkrankheit.
Verwendung gemäß Anspruch 3, wobei der Wirkstoff zumindest eine Art ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 1,2-Benzoisothiazol-3(2H)-on, Isothiazolo[5,4-b]pyridin-3(2H)-on, 5-Amino-1,2-benzoisothiazo1-3(2H)-on, N-Methyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on und N-Acetyl-1,2-benzoisothiazol-3(2H)-on ist.