DE3915344A1

DE3915344A1 - Serumdiagnose-verfahren

Info

Publication number: DE3915344A1
Application number: DE3915344A
Authority: DE
Inventors: Shuichi Hashizume; Katsumi Mochizuki
Original assignee: Morinaga and Co Ltd
Current assignee: Morinaga and Co Ltd
Priority date: 1988-05-13
Filing date: 1989-05-10
Publication date: 1989-11-23
Also published as: GB2218807B; GB8910969D0; FR2631450B1; JPH0249162A; JP2675117B2; GB2218807A; KR900017549A; FR2631450A1; US5094942A

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein serumdiagnostisches Verfahren zum Nachweis von Krebsen bzw. Krebserkrankungen, welches die Verwendung eines Antigens umfaßt, das von monoklonalen Human-Antikörpern erkannt wird, und insbesondere eines Antigens, welches von einem von Menschen verschiedenen Tier abgeleitet ist.

In jüngster Zeit sind eine Reihe von Berichten veröffentlicht worden, die sich mit einem Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Human-Antikörpern bezie hen, die mit Krebszellen zu reagieren vermögen welche Verfahren darin bestehen, Human-Human-Hybridome (oder -Hybridzellen), die man durch Fusion von Anti körper-bildenden Zellen von Krebspatienten mit Partnerzellen, wie Mylelom-Zellen erhalten hat, zu züchten bzw. zu vermehren (Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 77, 6841 (1980): Brit. J. Cancer, 43, 105 and 696 (1981); Lancet, i 11 (1982); Eur. J. Cancer, 19, 347 (1983); J. Exp. Med., 159, 537 (1984); Cancer Res., 45, 263 und 3951 (1985); J. Immunol., 137, 1083 (1986)).

Die in diesen Berichten beschriebenen monoklonalen Human-Antikörper sind für Krebszellen nicht spezifisch und können daher auch mit normalen Zellen reagieren. Weiterhin sind als Antigene, die von den genannten monoklonalen Antikörpern erkannt werden, bislang im wesentlichen lediglich Gangliosid GM3 oder GD3 bekannt geworden, welche von einem monoklonalen Human-Antikörper erkannt werden, der von einem Hybridom gebildet worden ist (Proc. Nat. Acad. Sco., USA, 84, 2416 (1987)). Es scheint daher so zu sein, daß ein serumdiagnostisches Verfahren zum Nachweis von Krebserkrankungen, bei dem ein von einem monoklonalen Human-Antikörper erkennbares Antigen verwendet wird, bislang noch nicht be schrieben worden ist. In ähnlicher Weise sind bislang keine serumdiagnostischen Verfahren zum Nachweis von Krebserkrankungen beschrieben worden, bei denen ein von monoklonalen Human-Antikörpern erkennbares Antigen, welches von einem von Menschen verschiedenen Tier abgeleitet worden ist, eingesetzt wird.

Tumor-Marker, die üblicherweise bei Bestimmungsmethoden zum Nachweis von Krebs, wie der Serumdiagnose eingesetzt werden, sind vom Menschen abgeleitete Materialien. Solche Tumor-Marker schließen embryotische Proteine, wie α-Fetoprotein und carcinoembryonisches Antigen, Blutgruppensubstanzen, Hormone und Isoenzyme ein. Die Nachweismethoden unter Verwendung solcher Tumor- Marker können mit Vorteil in einfacher Weise zur Behandlung von vielen Proben eingesetzt werden und sind besonders wichtig nicht nur für die Krebsvorsorge sondern auch zur Überwachung von therapeutischen und postoperativen Verände rungen.

Die Nachweismethoden unter Verwendung der oben angesprochenen Tumor-Mar ker oder der üblichen bekannten Antigene sind jedoch nicht ausreichend empfindlich zum Nachweis von Krebserkrankungen. Weiterhin ist es sehr schwierig, die Marker oder Antigene in großer Menge herzustellen, da sie aus Menschen gewonnen werden müssen. Ein weiterer Nachteil besteht darin, daß solche Antigene oder Marker auch in gesunden Individuen vorliegen können, so daß deren Verwendung den Prozentsatz der Falschnachweise in der Bestimmungsmethode erhöhen würde. Andererseits ist es sehr schwierig, Krebserkrankungen in einem frühen Stadium mit Hilfe herkömmlicher Nachweismethoden, die darauf beruhen, die Menge der Tumor-Marker oder Antigene im Blut zu bestimmen, zu diagnostizieren, da diese Produkte in diesem frühen Stadium nur in sehr geringer Menge vorhanden sind.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht nun darin, ein serumdiagnosti sches Verfahren anzugeben, welches zum Nachweis von Krebserkrankungen ge eignet ist und nicht an den Nachteilen der herkömmlichen Methoden leidet.

Es hat sich gezeigt, daß diese Aufgabe dadurch gelöst werden kann, daß man als Antigen von Tieren abgeleitete antigene Materialien, welche von monoklonalen Hu man-Antikörpern erkannt werden, die von Human-Human-Hybridomen von Anti körper-produzierenden Zellen von Krebspatienten gebildet worden sind, als Anti gen einsetzt, insbesondere monoklonale Human-Antikörper, die von dem Hybri dom HB4C5 gebildet worden sind.

Gegenstand der Erfindung ist daher das serumdiagnostische Verfahren gemäß Hauptanspruch. Die Unteransprüche betreffen besonders bevorzugte Ausfüh rungsformen dieses Erfindungsgegenstandes.

Die Erfindung betrifft somit ein serumdiagnostisches Verfahren zum Nachweis von Krebserkrankungen, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man ein von einem monoklonalen Human-Antikörper erkennbares und von einem von Menschen ver schiedene Tier gewonnenes Antigen verwendet.

Die Erfindung besteht somit darin, daß man die Menge der Antikörper gegen die mit der Krebserkrankung verknüpften Antigene in dem Blut bestimmt an Stelle der An tigene selber, die bei den üblichen Verfahren bestimmt werden. Demzufolge ist, auch in dem Fall, daß nur eine extrem geringe Menge der Antigene in dem Blut vor handen ist, es dennoch möglich, die Menge der Antikörper zu bestimmen, da sie sich in dem menschlichen Körper vermehrt haben können. Somit ermöglicht die Erfindung eine frühe Krebsdiagnose.

Die Erfindung sei im folgenden näher unter Bezugnahme auf die beigefügte Zeich nung erläutert. Die Zeichnung zeigt in der einzigen Figur die Ergebnisse der Untersuchung einer Reihe von Krebspatienten und gesunden Individuen.

(1) Herstellung von Zellen, die monoklonale Human-Antikörper produzieren:

Man verschmilzt aus den Lymphknoten oder dem peripheren Blut von Patienten mit Lungenkrebs gewonnene Lymphozyten (2×10⁷ Zellen) mit einer Patienten-Zellinie, die für die Herstellung von Human-Human-Hybridomen geeignet ist. NAT-30 (In Vitro Cell. Develop. Biol., 21, 593 (1985)) oder HO-323 (Cell. Biol. Intern. Re ports, 10, 77 (1986)) in Gegenwart von Polyethylenglykol (Molekulargewicht=4000 oder 1500) wie zur Herstellung von Hybridomen üblich. Aus den erhaltenen Hybri domenen selektiert man die Hybridome, welche monoklonale Human-Antikörper produzieren, die mit der Lungenkrebszellinie PC-8 jedoch nicht mit normalen Zellinien reagieren.

Ein Beispiel von Hybridomen, welche den oben angesprochenen krebsspezifischen monoklonalen Human-Antikörper bilden, ist das Hybridom HB4C5 (In vitro Cell. Develop. Biol., 21, 593 (1985)), welches am 12. Mai 1988 bei dem Fermentation Re search Institute, Agency of Industrial Science and Technology (Japan) hinterlegt worden ist und die Hinterlegungsnummer FERM BP-1979 erhalten hat. Diese Hin terlegung erfolgte auf der Grundlage des Budapester Vertrags über die Internationale Anerkennung der Hinterlegung von Mikroorganismen für die Zwecke von Pa tentverfahren.

(2) Auffinden der antigenen Materialien

Die Untersuchungen zum Auffinden der antigenen Materialien, die von dem mo noklonalen Human-Antikörper der Klasse IgM, welche von dem Human-Hu man-Hybridom HB4C5 gebildet wurden, erkannt werden, erfolgt an Tieren, wie Schweinen, Rindern und Mäusen, wobei sich gezeigt hat, daß solche Materialien in großer Menge im Pankreas dieser Tiere vorhanden ist.

Bei dieser Untersuchung wird die Reaktivität der antigenen Materialien mit dem er findungsgemäß eingesetzten monoklonalen Human-Antikörper mit Hilfe der fol genden Verfahrensweisen in verschiedenen Proben untersucht.

Bestimmungsverfahren

Man trennt Pankreasextrakt sowie die in den jeweiligen Reinigungsstufen erhaltenen Proben mit Hilfe einer Natriumdodecylsulfat(SDS)-Polyacrylamid-Gelelektro phorese (SDS-PAGE) mit Hilfe eines kontinuierlichen (4-20%) Gradientengels auf (Laemmli, et al., Nature, 227, 680 (1970)). Die getrennten Proteine werden elektro phoretisch auf eine Nitrocellulosemembran übertragen, worauf die in dieser Weise übertragenen Proteine auf der Membran mit Hilfe der folgenden Immunfärbe methode mit dem erfindungsgemäß eingesetzten monoklonalen Human-Antikörper umgesetzt werden.

Sämtliche Behandlungen der folgenden Verfahrensweise erfolgen bei Raumtemperatur. Vor der Immunreaktion wird die Nitrocellulose-Membran durch Einbringen in eine phosphatgepufferte Salzlösung (PBS), die 0,05% eines oberflächenaktiven Mittels (Tween 20) enthält (PBS/Tween) während einer Stunde blockiert, um nicht- spezifische Adsorptionen zu verhindern. Nach dem Blockieren der Membran wird diese während einer Stunde mit dem monoklonalen Human-Antikörper behandelt, dann während 30 Minuten mit PBS/Tween gewaschen und während einer Stunde mit einem Peroxidase-konjugierten Anti-Human-IgM-Antikörper umgesetzt. Nach dem Waschen mit PBS/Tween wird die Membran während 15 Minuten in einer Substratlösung 3,3′-Diaminobenzidin-Tetrahydrochlorid) (DAB) inkubiert, was zur Folge hat, daß die von den monoklonalen Human-Antikörper gebundenen anti genen Materialien braun gefärbt werden.

Diese antigenen Materialien, die von dem erfindungsgemäß eingesetzten monoklo nalen Human-Antikörper erkannt werden, sind als Carboxypeptidasen identifiziert worden, wie es in den Beispielen noch näher erläutert werden wird.

Die Carboxypeptidasen kann man aus dem Pankreas von Rindern (Methods Enzy mol., 19, 460 (1979)) oder dem Pankreassaft von Ratten (Anal. Biochem., 171, 294 (1988)) gewinnen. Alternativ kann man die Carboxypeptidasen mit Hilfe der in dem folgenden Beispiel 1 beschriebenen Verfahrensweise reinigen.

(3) Serumdiagnostisches Verfahren

Das von dem erfindungsgemäß verwendeten monoklonalen Human-Antikörper er kannte Antigen wird durch Zugabe von Natriumcarbonatpuffer (pH-Wert=9,5) auf eine Endkonzentration von 10 µg/ml verdünnt. In 48 Näpfchen einer Immunplatte mit 96 Näpfchen gibt man eine 100 µl Probe des verdünnten Antigens und inku biert während einer Stunde bei 37°C, um jedes Näpfchen gut mit dem Antigen zu beschichten. Den Rest der Näpfchen behandelt man mit dem Natriumcarbonatpuffer ohne Antigen und behandelt in der oben beschriebenen Weise, zur Bildung von Kontroll-Näpfchen. Die Platte wird zweimal mit PBS gewaschen und zur Blockierung mit 10% fötalem Kalbsserum (FCS)/PBS während einer Stunde bei 37°C in kubiert. Nach dem Verwerfen der Blockierungslösung gibt man sofort 50 µm einer jeden Serumprobe, die in 1 : 200 mit der 10%igen FCS/PBS-Lösung verdünnt worden sind, in die mit dem Antigen beschichteten Näpfchen und in der oben beschrie benen Weise behandelten Kontrollnäpfchen und inkubiert während einer Stunde bei 37°C. Wenn ein Antikörper, der mit dem in einer Schicht vorliegenden Antigen zu reagieren vermag, in der Serumprobe enthalten ist, kann der Antikörper sich nicht an das Antigen binden und wird demzufolge auf der Platte immobilisiert. Die Platte wird dreimal mit PBS/Tween gewaschen, wonach man die Menge des immo bilisierten Antikörpers in üblicher Weise bestimmt. Man gibt 100 µl Peroxidase konjugiertes Anti-Human-IgG oder IgM in jedes Näpfchen und inkubiert während 30 Minuten bei 37°C. Nach dem dreimaligen Waschen mit PBS/Tween, gibt man 100 µl einer üblicherweise verwendeten Substratlösung, die 2,2′-Azino-bis-(3-et hylbenzothiazolin-6-sulfonsäure) in Form des Diammoniumsalzes enthält, zu jedem gewaschenen Näpfchen und inkubiert während 15 Minuten bei Raumtemperatur. Anschließend bringt man 100 µl einer 1,5%igen Oxalsäurelösung in jedes Näpfchen zur Beendigung der Enzymreaktion. Die Farbentwicklung wird spektro photometrisch bei 415 nm gemessen. Der Grad der Verfärbung steht in positiver Beziehung zu der Menge des Antikörpers in der Serumprobe. Die Extinktion einer jeden Serumprobe erhält man durch Subtrahieren der Extinktion der Kontroll näpfchen von der des entsprechenden mit Antigen beschichteten Näpfchens.

Das oben beschriebene serumdiagnostische Verfahren wird mit dem Serum von gesunden Individuen von Patienten mit gutartigen Veränderungen und Krebspa tienten durchgeführt.

Der Vergleich der bei diesen Proben bestimmten Extinktionen hat gezeigt, daß die Serumprobe von Lungenkrebspatienten signifikant höhere Extinktionen aufweisen als jene von Patienten mit gutartigen Lungenstörungen und jenen von gesunden Individuen. Weiterhin zeigen auch die Serumproben von Patienten mit Eier stockkrebs, Kehlkopfkrebs, Gebärmutterkrebs und Lungenkrebs hohe Extinktionen, was auf einen signifikanten Unterschied in der Extinktion der Proben dieser Krebspatienten gegenüber jenen von gesunden Individuen hinweist.

Die Erfindung sei im folgenden näher unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele erläutert.

Beispiel 1

Zur Herstellung und Reinigung von tierischen antigenen Materialien kann man als Ausgangsmaterialien den pufferförmigen Acetonextrakt von Schweinepankreas, den man in üblicher Weise gewonnen hat (J. Biol. Chem., 223, 457 (1956)) oder ro hes Trypsinpulver (1 : 250, Difco) verwenden. Man suspendiert das pulverförmige Material in einem A-Puffer (10 mM Tris-HCl, pH 7,4). Die erhaltene Suspension wird während 20 Minuten bei 10 000 g und 4°C zentrifugiert unter Bildung einer überstehenden Flüssigkeit (Überstand-I). Der Niederschlag wird erneut in dem Puffer A suspendiert durch Rühren während 10 Minuten bei 4°C gefolgt von der gleichen Zentrifugationsbehandlung unter Bildung einer weiteren überstehenden Flüssigkeit (Überstand-II). Man wiederholt die Verfahrensweisen unter Bildung einer weiteren überstehenden Flüssigkeit (Überstand-III). Die in dieser Weise erhaltenen überstehenden Flüssigkeiten I, II und III werden vermischt und mit dem Puffer A auf eine Endkonzentration von 10 mg/ml verdünnt.

Die erhaltene Lösung wird auf eine mit dem Puffer A equillibrierte Säule (Mono Q, Pharmacia) in einem Verhältnis von 5mg Protein pro Milliliter des Harzes aufge bracht und mit 5 Säulenvolumina Puffer A gewaschen. Nach dem weiteren Wa schen mit dem Puffer A, welcher 150 ml NaCl enthält, eluiert man mit einem linearen Gradienten von 150-350 mM NaCl, wobei man zwei Materialien, die stark mit dem von HB4C5 gebildeten monoklonalen Antikörper reagieren, bei 260 mM bzw. 300 mM NaCl eluiert. Diese Materialien werden als Antigen-I bzw. Antigen-II be zeichnet. Bei der oben beschriebenen Gelelektrophorese (SDS-PAGE) wandern beide Antigene-I und -II in einer einzigen Bande, was darauf hinweist, daß ihre Mole kulargewichte etwa 42 000 bzw. 40 000 betragen. Demzufolge kann man davon ausgehen, daß die in dieser Weise gereinigten Antigene-I und -II eine hohe Reinheit besitzen. Unter der Voraussetzung, daß das Molekulargewicht von Schweine-Tryp sin 23 000 beträgt, kann man annehmen, daß diese Antigene sich vollständig un terscheiden von Schweine-Trypsin, welches in großer Menge im Schweine-Pan kreas vorkommt.

Die bei dem oben beschriebenen Gelelektrophorese-Verfahren (SDS-PAGE) erhaltenen Ergebnisse sind nachfolgend angegegben:

Beispiel 2

Zur Identifizierung der gemäß Beispiel 1 gereinigten antigenen Materialien ver gleicht man sie wie folgt mit verschiedenen Carboxypeptidasen:

I. Vergleich der enzymatischen Aktivität

Nach der in Anal. Biochem., 171, 294 (1988)) beschriebenen Methode bestimmt man die Hydrolyseaktivität unter Verwendung von Hippuryl-L-phenylalanin als Enzymsubstrat und spektrophotometrisch bei 254 nm. Der bei dieser Methode ver wendete Rinder-Carboxypeptidase A (CPase A) ist im Handel erhältlich) Sigma, No. C-0261 Typ I. gewonnen von Rinder-Pankreas). Die Ergebnisse sind im folgenden angegeben:

Die oben angegebenen Ergebnisse lassen eindeutig erkennen, daß sowohl das Anti gen-I als auch das Antigen-II im wesentlichen die gleiche CPase A-Aktivität besitzt wie die handelsübliche Rinder-CPase A.

II. Vergleich der immunologischen Reaktivität

Man bereitet Kaninchen-Antiseren gegen Antigen-I und Antigen-II und verwendet sie bei dem Enzymimmunoassay, der bei dem obigen serumdiagnostischen Verfahren angewandt wird zur Bestimmung ihrer Reaktivitäten gegenüber Rinder-CPase A und handelsüblicher Schweine-Carboxypeptidase B (CPase B, Sigma, NO. C- 7011 Typ I, gewonnen aus Schweine-Pankreas) als auch mit dem Antigen-I und dem Antigen-II. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle zusammengestellt:

Die obigen Ergebnisse lassen erkennen, daß das Kaninchen-anti-Antigen-I-Serum mit Antigen-II und Rinder-CPase A als auch mit seinem Immunogen Antigen-I rea gieren kann, so daß angenommen werden kann, daß diese Materialien sehr nahe miteinander verwandt sind. Das Kaninchen-anti-Antigen-II-Serum reagiert in glei cher Weise. andererseits reagieren diese Antisera nicht mit Schweine-CPase B, was auf die hohe Spezifität dieser Antisera gegenüber CPase A hinweist.

III. Vergleich in der Aminosäuresequenz

Die Aminosäuresequenz von +3 bis +13 von Antigen-II wurde als Ala-Thr-Tyr-His- Thr-Leu-Glu-Glu-Ile-Tyr bestimmt, welche die gleiche ist wie die von Rinder-CPase A, mit dem Unterschied, daß Glu in der Position +9 in der Rinder-CPase A durch Asp ersetzt ist.

Weiterhin erhält man annähernd die gleichen Reaktionsmuster mit Proben bei der serumdiagnostischen Methode unter Verwendung von Antigen-I und Antigen-II und der Rinder-CPase A als Antigen, wie aus der folgenden Tabelle 3 und dem nach folgenden Beispiel 4 hervorgeht.

Demzufolge können an Hand der obigen Ergebnisse die vom Schwein abgeleiteten Antigene-I und -II als Carboxypeptidase A identifiziert werden.

Beispiel 3

Man bestimmt die Menge von Antikörpern des Typs IgM und IgG, die mit Antigen-II reagieren, d. h. Rinder-CPase A als Antigen im Serum von gesunden Individuen und Patienten mit Lungenkrebs mit Hilfe des oben beschriebenen erfindungsgemäßen serumdiagnostischen Verfahrens. Die hierbei erhaltenen Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen 1 und 2 zusammengestellt.

Tabelle 1

Tabelle 2

Wie aus der Tabelle 1 hervorgeht, liegen die Werte von OD₄₁₅ von gesunden Indivi duen bei etwa 0. Wenn man demzufolge Proben mit einer optischen Dichte bei 415 nm von mehr als 0,1 als positiv ansieht, so sind zwei IgM Proben und vier IgG Proben der Serumproben von sechs Lungenkrebspatienten als positiv zu bewerten, was zeigt, daß fünf Seren der Lungenkrebspatienten insgesamt positiv sind.

Die folgenden Beispiele wurden lediglich im Hinblick auf IgG-Proben durchgeführt, die höhere positive Verhältnisse als IgM aufwiesen, was jedoch nicht bedeutet, daß IgM für das serumdiagnostische Verfahren unnötig ist.

Beispiel 4

Unter Verwendung von Antigen-II, Rinder-CPase A, Schweine-CPase B und Mäuse- CPase A, welche nach der in Beispiel 1 beschriebenen Verfahrensweise gereinigt worden sind, führt man das erfindungsgemäße serumdiagnostische Verfahren durch zur Bestimmung der Menge der Antikörper des Typs IgG in dem Serum von gesunden Individuen, von Lungenkrebspatienten und von Eierstockkrebspatienten als auch im Hinblick auf die Bestimmung der Reaktivität dieser Materialien mit dem monoklonalen Human-Antikörper (MoAb), welcher von den Hybridzellen HB4C5 gebildet wird. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 3 angegeben.

Aus Tabelle 3 ist deutlich zu erkennen, daß das erfindungsgemäße serumdiagno stische Verfahren, welches das von den monoklonalen Human-Antikörper erkannte Antigen verwendet, insbesondere Carbixypeptidasen, wie CPase A und CPase B im allgemeinen zufriedenstellende Ergebnisse beim Nachweis von Krebs liefern.

Tabelle 3

Beispiel 5

Man führt das erfindungsgemäße serumdiagnostische Verfahren durch unter Ver wendung von Serumproben von Patienten mit verschiedenartigen Krebsen ein schließlich Lungenkrebs, Patienten mit gutartigen Störungen und gesunden Indi viduen, wobei man Rinder-CPase A als Antigen einsetzt. Die Ergebnisse sind in der Fig. 1 dargestellt. Die Serumproben der gesunden Individuen und der Patienten mit gutartigen Störungen zeigen im allgemeinen geringe Reaktivitäten, während viele Serumproben von Patienten mit Krebsen, wie Lungenkrebs, Eierstockkrebs, Kehlkopfkrebs, Gebärmutterkrebs und Leberkrebs bei dem serumdiagnostischen Verfahren hohe Reaktivitäten zeigen. Es wird daher angenommen, daß diese Er gebnisse die hervorragende Eignung des erfindungsgemäßen serumdiagnostischen Verfahrens zum Nachweis von Krebs beweisen.

Das positive Verhältnis einer jeden Probengruppe wird an Hand der in Fig. 1 dar gestellten Ergebnisse berechnet, wobei der Durchschnittswert von OD₄₁₅ der ge sunden Individuen zu dem Wert von 2×S.D. (Standardabweichung) addiert wurde, was einen Wert von 0,28 ergibt, welcher Wert als Kriterium dafür dient, ob Proben positiv zu bewerten sind oder nicht. Die hierbei erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle 4 zusammengestellt.

Tabelle 4

Wie aus den obigen Ergebnissen hervorgeht, zeigen die Serumproben von Patienten mit Lungenkrebs, Eierstockkrebs, Kehlkopfkrebs, Gebärmutterkrebs und Leber krebs positive Verhältnisse von mehr als 50%. Andererseits zeigen die Serumproben von Patienten mit Pankreaskrebs als auch die von gesunden Individuen und die von Patienten mit gutartigen Störungen wesentlich niedrigere positive Verhält nisse.

Demzufolge kann das erfindungsgemäße serumdiagnostische Verfahren unter Ver wendung eines Antigens, welches von einem monoklonalen Human-Antikörper, der von Human-Human-Hybridomen, wie HB4C5 gebildet worden ist, erkannt wird und von Tieren, die von Menschen verschieden sind, gewonnen worden ist, insbe sondere Carboxypeptidase A, mit Vorteil zum Nachweis von Krebserkrankungen, wie Lungenkrebs, Eierstockkrebs, Kehlkopfkrebs, Gebärmutterkrebs und Leber krebs eingesetzt werden.

Claims

1. Serumdiagnostisches Verfahren zum Nachweis von Krebserkrankungen, da durch gekennzeichnet, daß man ein von einem monoklonalen Human-Antikörper erkennbares und von einem von Menschen verschiedenen Tier gewonnenes Antigen verwendet.

2. Serumdiagnostisches Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man den von Human-Human-Hybridom HB4C5 gebildeten monoklonalen Human-Antikörper verwendet.

3. Serumdiagnostisches Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekenn zeichnet, daß man als Antigen Carboxypepdidase einsetzt.

4. Serumdiagnostisches Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man als Carboxypeptidase Carboxypeptidase A verwendet.

5. Serumdiagnostisches Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man als Carboxypeptidase Carboxypeptidase B verwendet.

6. Serumdiagnostisches Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man ein von Schweinen, Rindern oder Mäu sen abgeleitetes Antigen verwendet.

7. Serumdiagnostisches Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man die Menge eines mit dem Antigen reagierenden Antikörpers in Blut bestimmt.

8. Serumdiagnostisches Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Enzym-Immunoassay-Methode an wendet.