DE3320175A1

DE3320175A1 - Aminosaeure- bzw. peptidderivate, verfahren zu deren herstellung und verwendung als arzneimittel

Info

Publication number: DE3320175A1
Application number: DE19833320175
Authority: DE
Inventors: Rainer Dr.rer.nat. 6800 Mannheim Haag; Hans Dr.rer.nat. 8132 Tutzing Seidel; Peter Dr.Rer.Nat. 8131 Bernried Stahl; Gerd Dr.rer.nat. Zimmermann
Original assignee: Boehringer Mannheim GmbH
Current assignee: Roche Diagnostics GmbH
Priority date: 1983-06-03
Filing date: 1983-06-03
Publication date: 1984-12-06

Description

Aminosaeure- bzw. Peptidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel Die vorliegende Erfindung betrifft a-Aminosaeure- und Peptidderivate, die ueber eine aliphatisch gebundene Hydroxy- oder Mercaptogruppe der Seitenkette eine esterartig verknuepfte Phosphonsaeure tragen.
Phosphon- und phosphonigsaeurehaltige Peptide wurden in juengster Zeit mehrfach beschrieben (z.B. DT-OS 2602 193, DT-OS 2732 454, DT-OS 2721 760, DT-OS 2730 524, EP 000 2822, EP 000 2039, Heterocycles 16 1205 (1981), 18 295 (1982)). Jedoch handelt es sich dabei ausschließlich um Peptide, die anstelle der C-terminalen a-Aminocarbonsaeure eine «-Aminoalkanphosphon- oder phosphonigsaeure tragen, die ueber die Aminogruppe amidartig mit dem uebrigen Peptidrest verbunden ist.
Im Gegensatz dazu sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung bisher nicht bekannte Monoester von Phosphonsaeuren mit Oligopeptiden oderAminosaeuren, die mindestens eine aliphatisch gebundene Hydroxy- oder Mercaptogruppe enthalten.
Die erfindungsgemaeßen Verbindungen haben die allgemeine Struktur I worin m und n die Werte 0, 1, 2 und 3 annehmen koennen mit der Maßgabe, daß die Summe m + n nicht mehr als 3 betragen soll, R, Wasserstoff, Niederalkyl, Niedercycloalkyl, Arylniederalkyl, Niederalkanoyl bedeuten kann und diese Reste außerdem durch Oarboxy- oder Niederalkoxycarbonylgruppen substituiert sein koennen, R4 und R7 die gleiche Bedeutung wie R1 haben und gleich oder verschieden sein koennen, R2 fuer Wasserstoff, Niederalkyl, Aryl, Arylniederalkyl steht, wobei diese Reste durch Hydroxy, Niederalkoxy, Amino, Niederalkylamino, Mercapto, Niederalkylthio, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Niederalkanoylamido, N-Hydroxyniederalkanoylamido, N-Hydroxyformamido, Guanidino, Cyano oder einen heterocyclischen Rest, der ein oder mehrere Stickstoffatome enthalten kann, substituiert sein koennen, R1 und R2 zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden koennen, die durch Sauerstoff oder Schwefel unterbrochen und durch Hydroxy, Niederalkoxy, Oxo, oder Niederalkylgruppen substituiert sein kann, R3, Rs, R6 und Rg fuer Wasserstoff oder Niederalkyl stehen und gleich oder verschieden sein koennen, R6 die gleiche Bedeutung wie R2 hat und mit R7 zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden kann, die durch Sauerstoff oder Schwefel unterbrochen und durch Hydroxy-Niederalkoxy, Oxo oder Niederalkylgruppen substituiert sein kann, Rto Hydroxy, Niederalkoxy, Amino oder Niederalkylamino sein kann, R1 t fuer Niederalkyl und Arylniederalkylreste steht, die durch ein oder mehrere Hydroxy-, Amino-, Niederalkoxy-, Niederalkylamino-, durch Niederalkoxycarbonyl substituierte Niederalkylamino-, Oarboxy-, Aminocarbonyl-, Niederalkoxycarbonyl-, Niederalkylaminocarbonyl-, Niederalkanoylamidogruppen substituiert sein koennen, wobei gegebenenfalls eine als Substituent vorkommende primaere oder sekundaere Aminogruppe durch einen Rest der Formel II a acyliert sein kann, in dem R1, R2, R, und m die oben erlaeuterte Bedeutung haben koennen, und in R1 1 vorkommende asymmetrische C-Atome unabhaengig voneinander die R-, S- oder R,S-Konfiguration besitzen koennen, die mit einem Stern (*) markierten C-Atome in der R-, S-, oder R,S-Konfiguration vorliegen koennen, wenn durch vier voneinander verschiedene Substituenten ein asymmetrisches C-Atom gebildet wird, X die Bedeutung Sauerstoff oder Schwefel hat und y ein Kohlenstoffatom sein kann oder -P-OH, -P-ONiederalkyl oder -P-O-Aryl bedeuten kann.
Bevorzugte erfindungsgemaesse Verbindungen sind Peptide der Formel I mit m + n = 2, insbesondere bei denen die Konfiguration des mit einem Stern (*) markierten C-Atoms gleich der natuerlich vorkommender L-Aminosaeuren ist.
Der in dieser Beschreibung verwendete Ausdruck "Niederalkyl" bedeutet geradkettige oder verzweigte Alkylreste mit vorzugsweise 1-6 C-Atomen. Beispiele dafuer sind die Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Isobutyl oder die tert. Butylgruppe. Der Ausdruck Niedercycloalkyl bedeutet cyclische Kohlenwasserstoffe mit drei bis sechs Kohlenstoffatomen z.B. Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl oder Cyclohexyl.
Der Ausdruck "nryl" bezeichnet. vorzugsweise einkernige Reste wie die Phenylgruppe, die an ein oder mehrere Stellen durch die angegebenen Substituenten substituiert sein koennen.
"Arylniederalkyl" bedeutet einen Rest bei dem eine oben erlaeuterte Niederalkylgruppe durch einen vorstehend beschriebenen Arylrest substituiert ist. Arylniederalkylreste koennen sowohl im Aryl- als auch im Niederalkylteil zusaetzlich durch die in der Beschreibung von R1 und R2 angegebenen Reste z.B.
Hydroxy, Carboxy, Amino substituiert sein. Beispiele fuer solche Arylniederalkylgruppen sind die Benzyl, Hydroxybenzyl, Methoxybenzyl, Phenylethyl, 2-Phenylethyl, α-Carboxyphenylmethyl, a-Ethoxycarbonylphenylmethyl, a-Hydroxyphenylmethylgruppe.
Niederalkanoylreste sind Acylrest aliphatischer Carbonsaeuren mit 1 - 6 C-Atomen, z.B. Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl, Pivaloyl.
Niederalkylsulfonylreste koennen z.B. sein Methansulfonyl, Ethansulfonyl, Propansulfonyl.
Bei dem Arylsulfonylrest hat die Arylgruppe die bereits oben gegebene Bedeutung. Beispiele dafuer sind Benzolsulfonyl, Toluolsulfonyl.
Die oben beschriebene Bedeutung fuer Niederalkyl, Niedercycloalkyl, Arylniederalkyl, Aryl gilt auch in erweiterten Substituenten, die diese Gruppen als Teil enthalten z.B.
Niederalkylamino, Niederalkylureido, Niederalkylthio.
Ein "heterocyclischer Rest" als moeglicher Substituent eines Restes R2 oder R8 ist vorzugsweise ein mono - oder bicyclischer Rest, der gesaettigt sein kann, isolierte >C=C< oder >C=N -Doppelbindungen enthalten kann, oder auch aromatischen Charakter haben kann. Beispiele sind der Pyrrolidinyl-, Imidazolyl-oder Indolylrest, vorzugsweise 3-Indolyl.
R1 und R2 bzw. R7 und Re koennen zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden. Eine derartige Gruppe kann 2-10, vorzugsweise 2-5 C-Atome umfassen.
Beispiele dafuer sind -(CH2)5-, -(CH2) 3-, -CH2-CH=CH-CH2-, -CH=CH-(CH2) 3-. Eine durch ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom unterbrochene Kohlenwasserstoffkette kann z.B. folgende Strukturen haben; -CH2-O-CH 2 -, -CH2-S-CH2-, - (CH 2 ) 2 -O-(CH2)2-, -CH=CH-CH2-O-CH2-, -(CH2-S-(CH2)2-CH=CH-).
Beispiele fuer durch ein oder mehrere Hydroxy, Niederalkoxy, Oxo oder Niederalkylgruppe substituierte Polymethylenketten sind Wenn m oder n fuer 2 oder 3 steht, dann koennen die Reste R1, R2 und R3 bzw. Rv, Rs und Rg in den jeweiligen Einheiten gleich oder verschieden sein. Ist in den jeweiligen Einheiten ein asymmetrisches C-Atom enthalten, kann dieses die R-, S- oder R,S-Konfiguration haben.
Die Verbindungen der Formel I koennen insbesondere fuer den Fall, daß die Summe aus m + n 0, 1 oder 2 betraegt, als Zwischenprodukte zur Herstellung anderer Produkte der Formel I dienen.
Die erfindungsgemaeßen Peptidderivate koennen dadurch erhalten werden, daß man die Schutzgruppen einer Verbindung der allgemeinen Formel IIf worin die Reste R1, R2, Ra, R4, R5, R6, Rz, R8, R9, R11, X, Y, n, m und * die gleiche Bedeutung haben wie oben beschrieben, R1 2 eine aus der Peptidchemie bekannte Aminoschutzgruppe ist und R13 entweder das gleiche wie der oben beschriebene Rest Rlo bedeutet oder, falls Y = -C- ist, eine aus der Peptidchemie bekannte Carboxylschutzgruppe darstellt, nach an sich bekannten Methoden abspaltet und gewuenschtenfalls in einer weiteren Reaktion in ein pharmazeutisch vertraegliches Salz ueberfuehrt.
Die Verbindungen der Formel II koennen einmal dadurch hergestellt werden, daß man eine Verbindung der Formel III, worin die Reste R1 bis R13, X, Y, *, m und n die oben beschriebene Bedeutung haben mit der Maßgabe, daß gegebenenfalls in R1, R2, R41 R7 oder R8 vorkommende funktionelle Gruppein, wenn erforderlich, in geschuetzter Form vorliegen, mit einer Phosphonsaeure der allgemeinen Formel IV umsetzt, worin R1 die bereits oben gegebene Bedeutung von R1 1 hat und darueber hinaus eventuell in R11 vorkommende funktionelle Gruppen, falls noetig, durch geeignete aus der Peptidchemie bekannte Schutzgruppen geschuetzt sind, nach an sich bekannten Methoden kondensiert. Als Kondensationsmittel koennen verwendet werden Carbodiimide, besonders Dicyclohexylcarbodiimid, Arylsulfonsaeurehalogenide, insbesondere 2,4,6-Triisopropylphenylsulfonylchlorid oder Mesitylsulfonylchlorid, Trichloracetonitril oder N,N'-Carbonyldiimidazol. Die Kondensation kann man in inerten organischen Loesungsmitteln, vorzugsweise in Pyridin, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran oder Gemischen dieser Losungsmittel durchfuehren.
Geschuetzte Peptide der allgemeinen Formel III koennen nach an sich bekannten Methoden der Peptidchemie durch Kondensation einer Aminosaeure der allgemeinen Formel V worin R41 Rs, R6, * und X die oben erlaeuterte Bedeutung haben und R15 entweder Wasserstoff ist oder eine aus der Peptidchemie bekannte Hydroxy- oder Mercaptoschutzgruppe darstellt, die selektiv neben evtl. vorhandenen Amino-oder Carboxylschutzgruppen abspaltbar ist oder, falls X fuer S steht, R15 gleich dem uebrigen Rest der Verbindung V sein kann, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel VI bzw. VII, worin die Reste R1, R2, R3, R7, Rs, R9, R12, R13, Y und * die oben beschriebene Bedeutung haben und gegebenenfalls in R1, R2, R7 oder Rs vorkommende funktionelle Gruppen, falls erforderlich, geschuetzt sind, hergestellt werden, wobei die Aminosaeure V jeweils entweder am Stickstoffatom oder an der Carboxylgruppe eine Schutzgruppe traegt, um eine eindeutige Amidbildung mit einer Verbindung der Formel VI oder VII zu gewaehrleisten.
Die teilweise geschuetzten Verbindungen der allgemeinen Formeln VI und VII mit m bzw. n gleich 1 sind teilweise bekannt oder koennen in Analogie zur Herstellung bekannter Verbindungen synthetisiert werden. Peptide der allgemeinen Formel VI oder VII mit m bzw. n groeßer oder gleich 2 koennen nach den aus der Peptidchemie bekannten Verfahren jeweils durch Kondensation von Verbindungen der Formel VIII bzw. IX, worin die Reste R1, R2, RJ bzw. R7, R8, Rg, Y und * die bereits oben erwaehnte Bedeutung haben, erhalten werden. Dabei muessen die Aminogruppen oder Saeuregruppen, die nicht in Reaktion treten sollen durch geeignete Schutzgruppen geschuetzt werden, die nach der Kondensation selektiv neben anderen Schutzgruppen wieder abgespalten werden koennen.
Verbindungen der Formel VI bzw. VII mit m bzw. n groeßer als 2 koennen auf analoge Weise aus den soeben beschriebenen Zwischenprodukten hergestellt werden.
Die Phosphonsaeuren der allgemeinen Formel sind bekannt oder koennen in Analogie zu bekannten Verbindungen hergestellt werden.
In einem weiteren Verfahren koennen Verbindungen der allgemeinen Formel II dadurch hergestellt werden-, daß man eine Verbindung der Formel V in der R15 gleich Wasserstoff ist, die Aminogruppe und die Carboxylgruppe eine Schutzgruppe tragen mit einer Phosphonsaeure der allgemeinen Formel IV nach an sich bekannten Methoden kondensiert. Als Kondensationsmittel koennen verwendet werden Carbodiimide, besonders Dicyclohexylcarbodiimid, Arylsulfonsaeurehalogenide, insbnsondere 2,4 ,6-TriisopropylpIlcnylsulfonylchlorid oder Mesitylsulfonylchlorid, Trichloracetonitril oder N,N'-Carbonyldiimidazol. Die Kondensation kann man in inerten organischen Loesungsmitteln, vorzugsweise in Pyridin, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran oder Gemischen davon, durchgefuehrt werden.
Nach Abspaltung der Aminoschutzgruppe oder der Carboxylschutzgruppe kann die erhaltene Verbindung mit nach den schon oben erlaeuterten Verfahren der Peptidchemie mit Verbindungen der allgemeinen Formel VI oder VII zu den gewuenschten Verbindungen der allgemeinen Formel II kondensiert werden.
Die in den oben erlaeuterten Verfahren verwendeten Schutzgruppen sind aus der Peptidchemie bekannt und z.B. in Houben/Weyl Bd. 15/1 ausfuehrlich beschrieben. Bevorzugt verwendet werden als Aminoschutzgruppen Aralkyloxycarbonylgruppen, insbesondere Benzyloxycarbonyl, oder Alkoxycarbonylgruppen, bevorzugt tert. Butyloxycarbonyl. Es kann jedoch auch eine Formyl-, Trityl-, Trifluoracetyl-, oder die Trichlorethoxycarbonylgruppe verwendet werden. Schutzgruppen fuer Hydroxygruppen z.B. R15 koennen Aralkyloxycarbonylgruppen wie Benzyloxycarbonyl, Aralkyl oder Niederalkyl wie Benzyl- oder tert. Butylgruppen sein. Es lassen sich auch Acetalschutzgruppen wie Tetrahydropyranyl- oder Niederalkanoylgruppen wie die Acetylgruppe verwenden. Eine Mercaptogruppe kann ebenfalls durch eine Reihe aus der Peptidchemie bekannter Schutzgruppen geschuetzt sein beispielsweise durch Aralkylgruppen wie Benzyl oder Trityl, Niederalkylthiogruppen wie tert. Butylthio oder durch Niederalkanoylamidomethylgruppen beispielsweise Acetamidomethyl, Mercaptogruppen koennen auch durch Ueberfuehrung in Disulfide geschuetzt werden. Carbonsaeuren koennen durch Ueberfuehrung in einen Aralkylester, z.B. den Benzylester, in einen Niederalkylester z.B. den Methylester oder tert. Butylester oder in einen Trialkylsilylester, vorzugsweise den Trimethylsilylester oder auch durch Salzbildung mit einer anorganischen Base, vorzugsweise einer Alkalimetallbaselgeschuetzt werden.
Phosphonsaeuren koennen durch Niederalkylestergruppen z.B.
Methyl- oder Ethylester, Aralkylester z.B. Benzylester oder Diphenylmethylester, Arylester z.B.
Phenylester oder Trialkylsilylestergruppen, insbesondere Trimethylsilyl, geschuetzt werden.
Die Kondensation einer Verbindung der allgemeinen Formel V, die je nach der beabsichtigten Weiterreaktion eine Amino-oder eine Carboxylschutzgruppe traegt, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel VI oder VII kann nach an sich bekannten Verfahren der Peptidchemie durchgefuehrt werden.
Als reaktive Derivate der Carbonsaeurekomponenten der Formel VI oder V mit einer Aminoschutzgruppe kommen gemischte Anhydride, insbesondere mit Kohlensaeuremononiederalkylestern wie Ethyl oder Isobutylestern, oder aktive Ester, insbesondere p-Nitrophenyl-, 2,4,5-Trichlorphenyl-, Pentachlorphenyl-, N-Hydroxysuccinimid- oder 1-N-Hydroxybenzotriazolylester in Betracht. Die Aktivierung der Carboxylgruppe kann auch nach dem Carbodiimid- oder Azidverfahren durchgefuehrt werden. Beim Carbodiimidverfahren koennen bekannte raceminierungsdaempfende Zusaetze wie 1 -N-Hydroxybenzotriazol oder N-Hydroxysuccinimid zugesetzt werden.
Die Kondensationsreaktion wird vorzugsweise in inerten organischen Loesungsmitteln, beispielsweise Methylenchlorid, Aceton, Essigester, Acetonitril, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Dioxan oder Mischungen dieser Loesungsmittel bei Temperaturen von -70 bis +1000C, bevorzugt zwischen -30 und +20 cm durchgefuehrt. Wird bei einer Kondensationsreaktion die Carboxylgruppe einer Aminokomponente durch Salzbildung geschuetzt, so kann die Umsetzung mit der Carbonsaeurekomponente auch in Wasser oder Alkohol/Wassermischungen als Loesungsmittel durchgefuehrt werden, wenn als reaktives Derivat der letzteren Komponente ein Mischanhydrid oder ein Aktivester, vorzugsweise der N-Hydroxysuccinimidester verwendet wird.
Die Abspaltung der Schutzgruppen nach erfolgter Kondensation kann in ueblicher Weise durchgefuehrt werden. Benzylester oder Benzyloxycarbonylgruppen lassen sich durch katalytische Hydrierung in Gegenwart von Edelmetallkatalysatoren, z.B.
Palladium auf Kohle, tert. Butylester oder tert. Butoxycarbonylgruppen durch Einwirkung von starken Saeuren in organischen Loesungsmitteln z.B. Chlorwasserstoff in Ether, Essigsaeureethylester oder Tetrahydrofuran oder auch durch Trifluoressigsaeure abspalten. Trimethylsilylester werden in einfacher, milder Weise bereits durch Wasser hydrolysiert. Trichlorethoxycarbonylgruppen sind reduktiv z.B. durch Einwirkung von Zink in Eisessig spaltbar.
Carbonsaeureniederalkylestergruppen sind durch alkalische Hydrolyse oder durch Einwirkung von Trimethyljodsilan zu spalten. Die Freisetzung einer Mercaptogruppe die durch Benzyl geschuetzt ist, kann durch Einwirkung von Natrium in fluessigem Ammoniak erfolgen, S-Tritylgruppen lassen sich durch Einwirkung von starken Saeuren wie Trifluoressigsaeure, S-Niederalkylthiogruppen durch Thiole oder Na2 SO3 /Na2S204 entfernen.
Niederalkanoylamidomethylgruppen koennen mit Hg2+-Salzen abgespalten werden. Eine als Disulfid geschuetzte Mercaptogruppe kann durch Reduktion mit Natrium in fluessigem Ammoniak freigesetzt werden.
Niederalkylester oder Aralkylester von Phosphonsaeuren koennen durch starke Saeuren wie HBr in Eisessig oder durch Einwirkung von Trimethylsilylbromid oder -jodid und nachfolgende waessrige Hydrolyse gespalten werden. Eine Phosphonsaeurearylestergruppe laeßt sich durch Hydrogenolyse spalten.
Die Verbindungen der Formel I sind amphoter und koennen mit Saeuren oder Basen in Salze ueberfuehrt werden. Als Saeuren koennen starke Saeure wie Salzsaeure, Schwefelsaeure, Methansulfonsaeure und als Basen z.B. Kali- oder Natronlauge verwendet werden.
Die Verbindungen der Formel I zeigen eine antimikrobielle Wirksamkeit. Sie sind besonders wirksam gegen einen weiten Bereich von gram-positiven und gram-negativen Bakterien.
Ausgezeichnete Wirkungen werden gegenueber E. coli, Salmonellen, Enterobacter species und Proteus, sowohl in vitro als auch in vivo, beobachtet.
Die erfindungsgemaeßen Verbindungen sind in ihrer antibakteriellen Wirkung vergleichbaren, phosphonsaeurehaltigen Verbindungen ueberlegen. In der folgenden Tabelle 1 sind einige in vitro Daten aufgefuehrt. Zum Vergleich sind die Daten der in DOS 2602 193 beschriebenen L-Alanyl-R-1-aminoethanphosphonsaeure (Alafosfalin) angegeben. Die Bestimmung der minimalen Hemmkonzentration wurde in einem Agar-Verduennungstest auf folgende Weise durchgefuehrt: Naehrmedium: 1.5 g Fumarsaeure, 0.5 g D-Glucose, 0.5 g Dikaliumhydrogenphosphattrihydrat, 1.0 g L-Asparagin, 1.0 g L-Prolin, 1.0 g L-Cystein, 1.0 g Glycin, 25 mg Uracil, 2.5 ml Phenolrotloesung (20 mg in 20 ml 70proz. Ethanol), 1.0 ml Mineralsalzloesung (50 g MgSOI . 7 H20, 0.5 g FeSO4 . 7 H20, 80 mg ZnSO4 . 7 H20, 36 mg MnSO4 . 4 H20, 1.5 ml konzentrierte HCl, Aqua dest. ad 100 ml) und 15 g Agar-Agar wurden in 700 ml destillierten Wassers geloest, auf pH 8.0 - 8.5 eingestellt und autoklaviert. 5 mg Biotin wurden in 50 ml MOPS/Tris-Puffer [158.9 g 2-(N-Morpholino)propansulfonsaeure und 100.8 g Tris (2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol) in 1 Liter destillierten Wassers loesen und autoklavieren] geloest und sterilfiltriert mit 50 ml einer sterilfiltrierten Vitaminloesung und 200 ml einer sterilfiltrierten Aminosaeureloesung zu dem autoklavierten Medium zugegeben. 50 ml der Vitaminloesung enthielten 5 mg Ca-D (+)-Panthothenat, 5 mg Cholinchlorid, 5 mg Folsaeure, 10 mg meso-Inosit, 5 mg Nicotinsaeureamid, 5 mg Pyridoxal . HCl, 0.5 mg Riboflavin und 5 mg Thiamin . HOl . 200 ml der Aminosaeureloesung enthielten 1.26 g L-Arginin . HCl, 313 mg L-Cystin . 2 IlCl, 419 mg L-ilistidin . HOl . H2O, 525 mg L-Isoleucin, 525 mg L-Leucin, 731 mg L-Lysin . HCl, 149 mg L-Methionin, 330 mg L-Phenylalanin, 476 mg L-Threonin, 102 mg L-Tryptophan, 362 mg L-Tyrosin und 469 mg L-Valin.
Nach Zugabe dieser Substitutionsloesungen wurde der pH-Wert auf 7.4 eingestellt.
Bestimmungsmethode: Die zu vergleichenden Substanzen wurden in Sorensen-Phosphatpuffer pH 7.2 geloest und mit diesem Loesungsmittel eine Vorverduennungsreihe hergestellt, die von 10.240 mg/l ausgehend Verduennungen mit dem Faktor 2 umfaßt. Jeweils 2 ml dieser Vorverduennungsreihe wurden mit 18 ml des oben beschriebenen Agars bei Temperaturen unter 50°C gut vermischt und in Agarplatten ausgegossen. Eine mitgefuehrte Wachstumskontrolle enthielt statt der Vorverduennung 2 ml des angegebenen Phosphatpuffers.
Zur Herstellung des Inokulums wurde von jeweils 10 maximal 2 Tage alten Kolonien des betreffenden gramnegativen Bakterienstamms auf den beschriebenen Agarplatten Material entnommen und in physiologischer Kochsalzloesung verrieben.
Die Truebung wurde durch entsprechendes Verduennen mit physiologischer Kochsalzloesung auf einem Bariumsulfatstandard eingestellt (0.5 ml lproz. BaCl2 und 99.5 ml lproz.
H2SO4). Diese Keimsuspension wurde noch 1:10 mit physiologischer Kochsalzloesung verduennt, so daß eine Bakteriensuspension mit ungefaehr 10 7 Kolonie-bildenden Einheiten/ml entstand. Die grampositiven Bakterien wurden in dem oben angegebenen Fluessigmedium (saemtliche Bestandteile mit Ausnahme von Agar-Agar) im Schuettelwasserbad ueber 3 Stunden vorkultiviert.

Die so hergestellten Bakteriensuspensionen wurden in den Inokulumsbehaelter eines Multiinokulators ueberfuehrt und auf die Plattenreihen transferiert. Die Inokulumsdichte bei den gramnegativen Bakterien entsprach ungefaehr 104 Kolonie-bildenden Einheiten pro Impfpunkt. Nach der Bebruetung ueber 18 + 2 Stunden bei 36 + 100 wurde der Versuch abgelesen. Der Endpunkt wurde dort festgelegt, wo kein sichtbares Wachstum mehr auftrat bzw. nur noch wenige Einzelkolonien (weniger als 99.9 % des aufgebrachten Inokulums) oder Mikrowachstum festzustellen war.

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3 < 0.5 < 0. 5 < 0.5 < 0.5 1 > 1024

4 < 0.5 0.125 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 4 < 0.5

5 0.5 0.125 0.031 0.125 0.5 0.24 2

6 -< 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5

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7 1 0.125 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5

8 -< 0.5 -< 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5

9 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5 < 0.5

10 1 ( 0.5 < 0.5 1 < 0.5 < 0.5 > 1024

Alafosfalin 8 16 4 8 4 64 4 16

*) Verbindung Nr.

1 = O-(Aminomethanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin 2 = O-(N-Methylaminomathanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin 3 = O-(Aminomethanphosphonyl)-L-seryl-L-lysyl-L-alanin 4 = 0- (1R,S-1-Aminoethanphosphonyl) -L-seryl-L-alanyl-L-alanin 5 = O-(1R,S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-arginin 6 = L-Alanyl-L-alanyl-O-(1S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin 7 = Sarcosyl-L-norvalyl-O-(1S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin 8 = L-Arginyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin 9 = L-Norvalyl-L-norvalyl-O-(1S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin 10 = L-Prolyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin Alafosfalin = 1 R- 1 - (Alanylamido) ethanphosphonsaeure (Vergleichssubstanz) Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung zeigen in Kombination mit anderen Antibiotika insbesondere Penicillinen und Cephalosporinen eine Wirkungsverstaerkung.
Die P-X-C-Bindungen in den Verbindungen der Formel I sind unter den Bedingungen des biologischen Tests stabil. Es wird keine Spaltung dieser Bindungen durch bakterielle oder tierische Enzyme beobachtet.
Zur Herstellung von Arzneimitteln werden die erfindungsgemaeßen Verbindungen der allgemeinen Formel I oder deren pharmakologisch unbedenklichen Salze in an sich bekannter Weise mit geeigneten pharmazeutischen Traegersubstanzen, Aroma-, Geschmacks- und Farbstoffen gemischt und beispielsweise als Tabletten oder Dragees ausgeformt oder unter Zugabe entsprechender Hilfsstoffe in Wasser oder Qel, wie z.B.
Olivenoel, suspendiert oder geloest.
Die erfindungsgemaeßen neuen Substanzen I und ihre Salze koennen in fluessiger oder fester Form parenteral appliziert werden. Als Injektionsmedium kommt vorzugsweise Wasser zur Anwendung, welches die bei Injektionsloesungen ueblichen Zusaetze wie Stabilisierungsmittel, Loesungsvermittler oder Puffer enthaelt. Derartige Zusaetze sind z.B. Tartrat- und Citratpuffer, Ethanol, Komplexbildner (wie Ethylendiamintetraessigsaeure und deren nicht-toxischen Salze), hochmolekulare Polymere (wie fluessiges Polyethylenoxyd) zur Viskositaetsregulierung. Feste Traegerstoffe sind z.B.
Staerke, Lactose, Mannit, Methylcellulose, Talkum, hochdisperse Kieselsaeuren, hoeher-molekulare Fettsaeuren (wie Stearinsaeure), Gelatine, Agar-Agar, Calciumphosphat, Magnesiumstearat, tierische und pflanzliche Fette und feste hochmolekulare Polymere (wie Polyethylenglykole), fuer orale Applikation geeignete Zubereitungen koennen gewuenschtenfalls Geschmacks- und Sueßstoffe enthalten.
Die tägliche Dosis der an Erwachsene verabreichten Peptidderivate wird innerhalb weiter Grenzen variieren, und zwar in Abhängigkeit von Faktoren, wie dem gewählten Peptidderivat, der Verabreichungsart und der zu behandelnden Infektion. So kann z.B. die tägliche Dosis für orale Verabreichung bis zu 2000-4000 mg und die tägliche Dosis für parenterale Verabreichung bis zu 800-2000 mg betragen. Es versteht sich, dass die tägliche Dosis als Einzeldosis oder in mehreren Teilmengen verabreicht werden kann und dass die erwähnten Dosierungen sowohl nach unten wie nach oben variiert werden können, je nach individuellen Erfordernissen und in Anpassung an die besondern Umstände, wie sie vom behandelnden Arzt angetroffen werden.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele naeher erlaeutert. In den Beispielen wird zur Bezeichnung der Konfiguration asymmetrischer C-Atome neben der R,S-Konvention nach Cahn, Ingold und Prelog auch das bei Aminosaeuren verwendete D,L-System benutzt.
Beispiel 1 1.1.
85 g N-tert.-Butoxycarbonyl-L-alanin werden in 1 Liter Methylenchlorid geloest, mit 49.5 g N-Methylmorpholin versetzt und die Loesung auf -150C gekuehlt. Dazu tropft man unter Ruehren eine Loesung von 71.2 g Chlorameisensaeureisobutylester in 100 ml Methylenchlorid und haelt die Reaktionsmischung noch 10 min bei -15"C. Anschließend fuegt man portionsweise eine Loesung von 158 g L-Alaninbenzylester-Tosylat in 300 ml Methylenchlorid und 45.5 g N-Methylmorpholin zu. Die Reaktionsmischung wird 2 Stunden bei Temperaturen zwischen -10 und -5°cgeruehrt, dann auf Raumtemperatur aufgewaermt und eingedampft. Der Rueckstand wird zwischen Wasser und Essigsaeureethylester verteilt. Die organische Phase wird abgetrennt, mit Sproz. Citronensaeureloesung und Sproz.
Natriumbicarbonatloesung gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Das verbleibende Oel wird aus Ether/Ligroin kristallisiert. Man erhaelt 127.5 g N-tert.
Butoxy-L-alanyl-alanin-benzylester.
127 g N-tert.-Butoxy-L-alanyl-alaninbenzylester werden in 400 ml Ether geloest und unter Kuehlung im Eisbad und Ruehren mit 800 ml 6 N etherischer HCl versetzt. Das Kuehlbad wird entfernt. Nach 3-stuendigem Stehen bei Raumtemperatur werden die ausgefallenen Kristalle abgesaugt. Man erhaelt 87.8 g L-Alanyl-alanin-benzylester-Hydrochlorid.
1.3.
45.6 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin werden in einer Mischung aus 100 ml Dimethylformamid und 400 ml Essigsaeureethylester geloest und mit 19.3 g N-Methylmorpholin versetzt. Man kuehlt die Loesung auf -15°C und setzt tropfenweise unter Ruehren eine Loesung von 26.3 g Chlorameisensaeureisobutylester in 60 ml Methylenchlorid zu. Nach 10 min wird eine Loesung von 52 g L-Alanyl-alanin-benzylester-Hydrochlorid in 100 ml Dimethylformamid, 250 ml Essigsaeureethylester und 18.4 g N-Methylmorpholin zugetropft. Man haelt die Reaktionsmischung noch 1 Stunde bei -100Cund laeßt dann auf Raumtemperatur aufwaermen. Nach weiteren 2 Stunden wird der ausgefallene Niederschlag abfiltriert. Die Kristalle werden in Wasser suspendiert, 30 min geruehrt, abgesaugt und getrocknet. Die filtrierte Reaktionsmischung wird mit 1 N Salzsaeure, Sproz. Natriumbicarbonatloesung und Wasser gewaschen, mit MgSO4 getrocknet und eingedampft. Der Rueckstand wird mit den aus der Reaktionsmischung abgesaugten und mit Wasser behandelten Kristalle vereinigt und aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 74.5 g N-BenzylOxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-alaninbenzylester vom Fp. 193-1940C.
4. 73 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1.65 g Methanphosphonsaeure werden in 50 ml trockenem Pyridin geloest und tropfenweise mit einer Loesung von 7.1 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Pyridin versetzt. Die Reaktionsmischung wird 2 Stunden bei Raumtemperatur geruehrt.
Der Niederschlag wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft.
Der verbleibende Rueckstand wird mit gesaettigter Natriumbicarbonatloesung versetzt und die ungeloest bleibenden Reste werden abfiltriert. Man fuegt Essigsaeureethylester zu der waessrigen Phase, saeuert mit 2 N HOl an, trennt die organische Phase ab und extrahiert die waessrige Phase noch zweimal mit Essigsaeureethylester. Die organischen Phasen werden vereinigt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Man erhaelt 1.2 g (23 %) N-Benzyloxycarbonyl-O-(methanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-alaninbenzylester vom Fp. 148cm (Zersetzung).
1.5.
2.3 g N-Benzyloxycarbonyl-O-(methanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester werden in einer Mischung aus 300 ml Ethanol und 100 ml Wasser geloest und ueber Pd/C als Katalysator bei Normaldruck hydriert. Nach Beendigung der Wasserstoffaufnahme wird der Katalysator abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der Rueckstand wird heiß in Ethanol geloest. Von etwas Ungeloestem wird abfiltriert und das Filtrat konzentriert. Beim Erkalten kristallisiert das Produkt aus.
Man erhaelt 0.4 g (55 %) O-(Methanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 160-1700C(unter Zersetzung) 1D20 = -52.20 (c = 1, H20) Beispiel 2 In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamino)-ethanphosphonsaeure O-(1R,S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 170-175°C(unter Zersetzung).
[«]20 = -49.9° (c = 1, H20) Beispiel 3 3.1.
Analog Beispiel 6.1. erhaelt man aus 1S-1-Aminoethanphosphonsaeure und Chlorameisensaeurebenzylester 1S-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonsaeure vom Fp. 136°C.
[α]D20 = +13.30 (c = 1, OH3OH) 3.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1S-1-(Benzyloxycarbonylamino)-ethanphosphonsaeure O-(1S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin. Zur Reinigung wird aus Methanol, wenig Wasser und Aceton umkristallisiert. rp. 188°C(Zersetzung) [«]D° = -52.40 (c = 1, H20) Beispiel 4 4.1.
Analog Beispiel 6.1. erhaelt man aus 1R-1-Aminoethanphosphonsaeure und Chlorameisensaeurebenzylester 1R-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonsaeure vom Fp. 128"C.
[α]D20 = -14.4° (c = 1, OH3OH) 4.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl -L-alanyl -L-alaninbenzylester und 1R-1-(Benzyloxycarbonylamino)-ethanphosphonsaeure 0- (1R-1-Aminoethanphosphonyl) -L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 16517OCO (Zersetzung) [a]D° = -47.4° (c = 1, H20) Beispiel 5 5.1.
10 g R,S-1-Aminoethanphosphonsaeure werden in einem Gemisch aus 15 ml Acetanhydrid und 40 ml Eisessig 4 Std. unter Rueckfluß erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird im Vakuum eingeengt, in Wasser aufgenommen und erneut im Vakuum eingedampft.
Der Rueckstand wird aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 9.4 g (70 %) 1R,S-1-Acetamido-ethanphosphonsaeure vom Fp. 182-185°C.
5.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1R,S-1-Acetamido-ethanphosphonsaeure O-(1R,S-1-Acetamidoethanphosphonyl)-L-sery.l-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 155-160°C (Zersetzung).
[a]ZO = -43.2 (c = 1, H20) D Beispiel 6 6.1.
8.88 g Aminomethanphosphonsaeure werden in 60 ml Wasser suspendiert. Die Suspension wird mit 4 N NaOH auf pH 10 gestellt, im Eisbad gekuehlt und unter Ruehren langsam mit 41 ml einer 50proz.
Loesung von Chlorameisensaeurebenzylester in Toluol versetzt. Der pH-Wert der Reaktionsmischung wird durch Zugabe von 4 N NaOH zwischen 9 und 10 gehalten. Die Kuehlung wird entfernt. Man ruehrt die Mischung noch 3 Std. bei Raumtemperatur und laeßt dann ueber Nacht stehen. Das Reaktionsgemisch wird mit Etherextrahiert, die waessrige Phase mit 6 N HOl angesaeuert und das Reaktionsprodukt durch mehrfache Extraktion mit Essigsaeureethylester isoliert. Die organischen Phasen werden vereinigt, getrocknet und eingedampft. Der Rueckstand wird aus Essigsaeureethylester umkristallisiert. Man erhaelt 16.8 g (85 t) N-Ben'yloxycarbonylaminomethanphosphonsaeurc vom Fp. 127-1280C(Zersetzung).
6.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1-Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure O-(Aminomethanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 165-170°C (Zersetzung) [α]D20 = -53.1° (c = 1, H20). Das Rohprodukt wird durch Umkristallisation aus Wasser/Ethanol gereinigt.
Beispiel 7 7.1.
Durch Umsetzung von Chlorameisensaeurebenzylester mit 1R,S-1-Aminopropanphosphonsaeure analog Beispiel 6.1. wird 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamino)-propanphosphonsaeure vom Fp. 147-148°C(Z) hergestellt.
7.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamino)-propanphosphonsaeure O-(1R,S-1-Aminopropanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 167-172°C(Zersetzung) nach Umkristallisation des Rohproduktes aus Ethanol/Wasser [α]D20 = -48.7° (c = 1, H2O).
Beispiel 8 8.1.
Durch Umsetzung von Chlorameisensaeurebenzylester mit 1R,S-1-Amino-2-methyl-propanphosphonsaeure analog Beispiel 6.1. wird 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamino)-2-methyl-propanphosphonsaeure vom Fp. 120-121°C hergestellt.
8.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamino) -2-methyl-propanphosphonsaeure 0-(1R,S-1-Amino-2-methyl-cropanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 185°C (Zersetzung) nach Reinigung durch Umkristallisation aus Methanol/Etahnol.
[a] 20 = 41.6C (c = 1, H2O) Beispiel 9 9.1.
Durch Umsetzung von Chlorameisensaeurebenzylester mit (Methylamino) -methan-phosphonsaeure analog Beispiel 6. 1. erhaelt man (N-Benzyloxycarbonyl-N-methyl)aminomethanphosphonsaeure als farblosen Sirup, der ohne weitere Reinigung verarbeitet wird.
9.2.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und (N-Benzyloxycarbonyl-N-methyl) -aminomethanphosphonsaeure O-((Methylamino)methanphosphonyl) -L-seryl-L-alanyl-L-alanin, das aus einer konzentrierten waessrigen Loesung durch Zusatz von Ethanol auskristallisiert.
Fp. 156-1580C(Zersetzung) [alD° = -50.2° (c = 1, H20) Beispiel 10 10.1.
4.7 g N-Phosphonomethylglycin werden in 17 ml Methanol suspendiert. Die Mischung wird auf -5"C abgekuehlt, tropfenweise mit 2.2 ml Thionylchlorid versetzt und jeweils 30 min bei -5°C und Raumtemperatur geruehrt. Nun erwaermt man 5 Stunden auf 50°C, laeßt ueber Nacht stehen und dampft das Reaktionsgeriisch ein. Der Rueckstand wird in Methanol geloest und die Loesung erneut eingedampft. Der Eindampfrueckstand wird in Methanol geloest und die Loesung mit Propylenoxid versetzt, bis kein Niederschlag mehr ausfaellt.
Die Kristalle werden abgesaugt, mit Ether gewaschen und getrocknet. Man erhaelt 4.9 g (96 %) N-Phosphonomethylglycinmethylester vom Fp. 208-2110C,der nach dem Duennschichtchromatogramm noch eine geringe Menge Ausgangsmaterial enthaelt.
10.2.
N-Phosphonoglycinmethylester wird wie in Beispiel 6.1. beschrieben mit Chlorameisensaeurebenzylester umgesetzt.
Die Reaktionsmischung wird mit wenig Essigsaeureethylester extrahiert. Die waessrige Phase wird auf einen stark sauren Ionenaustauscher DOWEX 50 H+-Form gegeben und das Produkt mit Wasser eluiert. Die produkthaltigen Fraktionen werden eingedampft. Man erhaelt ein Oel, das noch etwas N-Benzyloxycarbonyl-phosphonomethylglycin enthaelt. Durch 3stuendiges Behandeln des Rohproduktes bei 500C mit ca.
2 N methanolischem Chlorwasserstoff und Eindampfen des Gemisches erhaelt man duennschichtchromatographisch einheitlichen ((N-Benzyloxycarbonyl)-phosphonomethyl)-glycinmethylester als oeliges Produkt.
10.3.
In Analogie zu den Beispielen 1.4. und 1.5. wird N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester mit ((N-Benzyloxycarbonyl)-N-phosphonomethyl)-glycinmethylester umgesetzt. Die hydrogenolytische Abspaltung der Schutzgruppen wird in einem Gemisch aus Methanol-Wasser (2:1) vorgenommen.
Man erhaelt O-(Methoxy-carbonylaminomethylphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin. Das Rohprodukt wird durch Aufloesen in wenig Wasser und Zugabe von Ethanol umkristallisiert und schmilzt bei 120°C unter Zersetzung.
[α]D20 = -41.5° (c = 1, H2O) Beispiel 11 11.1.
10.5 g L-Serin und 34.2 g t-Butyl-2,4,5-trichlorphenylcarbonat in 80 ml Wasser, 120 ml t-Butanol und 35 ml Triethylamin suspendiert, erwaermt man 2 Stunden auf 60/65"C, gibt zur entstandenen Loesung 150 ml Wasser, stellt mit gesaettigter, waessr. Zitronensaeure auf pH 3 ein, extrahiert mit 150 ml und dann noch 2 mal mit je 80 ml Essigester, extrahiert die vereinigten Essigesterextrakte mit 100 ml waessr. 1 N NaHCO3-Loesung und dann noch 3 mal mit je 50 ml dieser Loesung. Die vereinigten waessrigen Loesungen stellt man nun mit Zitronensaeure auf pH 3, extrahiert dann oefter mit Essigester und dampft die vereinigten Essigesterextrakte im Vacuum ein, wobei 19.9 g Oel, naemlich rohes N-(t-Butoxycarbonyl) -L-Serin verbleibt.
11.2.
Dieses loest man in 900 ml abs. Methylenchlorid, gibt 10.5 ml N-Methylmorpholin zu, versetzt bei -15°C mit 12.6 ml Chlorameisensaeureisobutylester, ruehrt 30 min bei -150C nach, tropft zu dem so in situ erhaltenen gemischten Anhydrid aus N-t-Butoxycarbonyl-L-Serin und Isobutoxycarbonsaeure bei -150C eine Loesung von 33.69 g L-Alaninbenzylester-p-Toluolsulfonat in 900 ml abs. Methylenchlorid und 10.5 ml N-Methylmorpholin, ruehrt 1 Stunde bei -15°C, 1 h bei 0°C und 2 h bei 250C nach. Nun extrahiert man 2 mal mit Sproz., waessr.
NaHCO3-Loesung und dann 2 mal mit Sproz., waessr. Zitronensaeure und zuletzt noch 2 mal mit Wasser. Nach Trocknen mit Na2SO4 dampft man die organische Phase im Vacuum ein, wobei 27.2 g orangegelbes Oel verbleiben. Dieses reinigt man an einer Kieselgelsaeule (1200 g Gel; Laufmittel ist Essigester) und erhaelt so nach Eindampfen der identischen Fraktionen im Vacuum 1 3. 55 g N-t-Butoxycarbonyl-L-seryl-L-alanin-benzylester als farbloses Oel, welches nach Stehen Kristalle vom Fp. 73/820C bildet. 14.1 g der so erhaltenen Substanz loest man in 50 ml Tetrahydrofuran, tropft unter Eiskuehlung 120 ml 6 N etherische HOl ein, ruehrt 15 min bei OOC und 6 h bei 250C nach, laeßt ueber Nacht stehen, saugt das entstandene Kristallisat ab, waescht mit Ether und erhaelt so 11.86 g rohes HCl-Salz des L-Seryl-L-alanin-benzylesters vom Fp. 135/1420C.
11.3.
Man loest 2.23 g N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin in 100 ml Methylenchlorid und 1.1 ml N-Methylmorpholin, tropft bei -15°C, 1.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester ein, ruehrt 20 min bei -15°C nach, tropft zu dem so in situ erhaltenen, gemischten Anhydrid eine Suspension von 3.02 g rohem L-Seryl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid in 100 ml Methylenchlorid und 1.1 ml N-Methylmorpholin und ruehrt 1 Stunde bei -15°C, 1 Stunde bei OOC und 2 Stunden bei 23"C nach. Nun extrahiert man die entstandene Loesung 2 mal mit 5 % waessr. Zitronensaeure und Wasser, trocknet die org. Phase mit Na2SO4, und dampft sie ein, wobei 3.57 g roher N-Benzyloxycarbonylsarcosyl-L-seryl-L-alaninbenzylester vom Fp. 131/1330C verbleiben.
11.4.
2.35 g der so erhaltenen Substanz und 1.3 g D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure loest man in 40 ml trockenem Pyridin, tropft dazu eine Loesung von 3.1 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Pyridin, ruehrt 6 Stunden bei Raumtemperatur nach und laeßt ueber Nacht stehen. Nun saugt man den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, loest den Eindampfrueckstand in Essigsaeureethylester, waescht diese Loesung mit 5 % waessr.
NaHOO3 und dann mit 0.5 N HCl und Wasser, dampft die organische Phase nach Trocknen mit Na2 SO4 im Vacuum ein und reibt das verbliebene Oel mit Ether an, wobei 2.77 g Kristalle vom Fp. 154/162cm verbleiben, naemlich der rohe Monoester der D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-seryl-L-alaninbenzylester.
11.5.
2.7 g der so erhaltenen Substanz loest man in 300 ml einer Mischung von Methanol-Wasser 2:1, gibt 1 g 10pro. Pd-C-Katalysator zu und hydriert bei Normaldruck und Raumtemperatur unter heftigem Schuetteln (20 min), saugt dann den Katalysator ab, verdampft das Methanol im Vacuum, saugt wenig ausgefallenen Dicyclohexylharnstoff ab, extrahiert die waessr. Loesung mit Essigsaeureethylester, engt die waessr.
Phase im Vacuum auf ein kleines Volumen ein und faellt durch Ethanolzugabe 0.93 g Kristalle aus, naemlich den Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit Sarcosyl-L-seryl-L-alanin. Nach 10 Stunden Trocknen (im Vacuum bei Raumtemperatur ueber P205) ist der Fp. 184cm (Zers.). Pro 1 mol dieser Substanz ist 1/3 mol Ethanol und 1 mol Wasser addiert.
Beispiel 12 Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 2.09 g rohem N-Benzyloxycarbonylglycin (Fp. 121/1250C) und 1.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid und nach dessen Reaktion mit 3.03 g L-Seryl-L-alanin-benzylester Hydrochlorid 1.97 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L-seryl-L-alanin-benzylester vom Fp. 130/1400C (Zers.) , wobei diese Substanz bereits nach Waschen mit der Zitronensaeure kristallin ausfaellt.
1.5 g dieser Verbindung liefern analog Beispiel 11.4. mit 0.99 g D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure 1.6 g rohen Monoester der D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanchosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L-seryl-L-alanin-benzylester als Oel, welches nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. 0.58 g Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit Glycyl-L-seryl-L-alanin liefert , wobei pro 1 mol Substanz, 1.5 mol Wasser addiert sind. Fp. 18700 (Zers.).
Beispiel 13 Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 2.23 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin ueber das gemischte Anhydrid mit Ohlorameisensaeuresabutylester (in situ)und 3.03 g L-Seryl-L-alanin-benzylester ftyclrochioid (nach Reinigung des rohen Reaktionsproduktes an de Sleselgelsaeulc mit 500 g Gel und mit Chloroform, welches 5 o Methanol enthaelt, als Laufmittel) 3.1 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-seryl-L-alanin-benzylester vom Fp. 168/ 171°C.
2.3 g dieser Verbindung und 1.3 g D,L-1-(Benzyloxycarbonylamino)-ethanphosphonsaeure liefern analog Beispiel 11.4. mit 3.1 g Dicyclohexylcarbodiimid 2.47 g Kristalle vom Fp. 173/1850C, naemlich den rohen Monoester der D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-seryl-L-alanin-benzylester, welcher nach Hydrierung mit 1.5 g Katalysator analog Beispiel 11.5.
0.85 g Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Alanyl-L-seryl-L-alanin als weißes Pulver liefert. Pro 1 mol Substanz sind 1.5 mol Wasser und 0.5 mol Ethanol addiert, Fp. ab 165"C Zers..
Beispiel 14 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 6.61 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-seryl-L-alanin-benzylester (Beispiel 13) und 4.5 g D,L-a{Benzyloxycarbonylamini-benzyl-phosphonsaeure 5.4 g rohen Monoester, von dem 5 g analog Beispiel 11.5.
(in 600 ml Mischung aus Methanol und Wasser 3:1 mit 3 g Katalysator in 30 min) hydriert werden. Man bekommt so 0.7 g Kristallisat,naemlich den Monoester der D,L-«-Amino-benzylphosphonsaeure mit L-Alanyl-L-seryl-L-alanin. Pro mol Substanz sind 1.5 mol Wasser und 0.25 mol Ethanol addiert. Fp. ab 18300 Zers..
Beispiel 15 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 4.71 g N-Benzyloxycarbonyl-alanyl-L-seryl-L-alanin-benzylester und 2.45 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsae (Fp. 126/128°C) 1.85 g rohen Monoester, wobei die Essigesterloesung am Schluß der Aufarbeitung nicht eingedampft, sondern durch Etherzugabe der gebildete Monoester ausgefaellt wird.
Nach Hydrierung dieser Substanz mit 0.5 g Katalysator (in 300 ml Mischung von Methanol-Wasser 3:1) faellt 0.62 g weißer Monoester der Aminomethylphosphonsaeure mit L-Alanyl-L-seryl-L-alanin an. An ein mol dieser Substanz sind 2 mol Wasser und 0.25 mol Ethanol addiert. Fp. ab 18700 Zers.
Herstellung von Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure: 15 a 5.55 g Aminomethanphosphonsaeure (Fp. 260/265°C) in 40 ml Wasser suspendiert, bringt man mit 4 N NaOH auf pH 9 bis 9.5 bis Loesung eintritt. Im Verlauf von 6 bis 7 h tropft man unter Eiskuehlung 11.7 ml Chlorameisensaeurebenzylester zu, wobei der pH-Wert mit NaOH stets auf 9 bis 9.5 gehalten wird. Nach Stehen ueber Nacht extrahiert man 3 mal mit Ether, gießt dann die waessr. Phase auf 75 ml halbkonz. HCl und 100 g Eis, extrahiert nun mit Essigester, dampft die mit Na2 SO4 getrockneten, vereinigten Essigesterextrakte im Vacuum ein, reibt den Eindampfrueckstand mit 20 ml Essigester an und erhaelt so 7.5 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure vom Fp. 126/128°C.
Beispiel 16 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 7.05 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-seryl-L-alanin-benzylester (Beispiel 13) und 3.9 g 2-Benzyloxycarbonylamino-ethanphosphonsaeure (Fp. 103/106°C), (sowie 9.6 g Dicyclohexylcarbodiimid und 100 ml Pyridin) 6.75 g rohen Monoester vom Fp. 190/192°C, wovon 3 g analog Beispiel 11.5. it 0.6 g Katalysator in 1200 ml Methanol-Wasser 3:1 hydriert, 0.5 g wei#en Monoester von 2-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Alanyl-L-seryl-alanin liefern.
An 1 mol dieser Substanz sind 2 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol addiert. Fp. ab 193cm, Zers.
Die Herstellung von 2-Benzyloxycarbonylamino-ethanphosphonsaeure aus 2-Amino-ethanphosphonsaeure (Fp. 2780C) erfolgt analog wie im Beispiel 15 a fuer Benzyloxycarbonylaminomethanphosphonsaeure beschrieben.
Beispiel 17 Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 2.49 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-Prolin (Fp. 77/800C) und 3.02 g rohem L-Seryl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid 3.68 g kristall. i'I-Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-seryl-alaninbenzylester, von dem 2.48 g mit 1.22 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure (Beispiel 15 a) analog Beispiel 11.4. 1.62 g rohen Monoester liefern. 1.5 g davon erbringen nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (mit 0.5 g Katalysator und 400 ml einer Mischung von Methanol-Wasser 3:1) 0.57 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit L-Prolyl-L-seryl-L-alanin. An 1 mol dieser Substanz sind 1.5 mol Wasser und 0.5 mol Ethanol addiert. Fp. ab 1600C, Zers.
Beispiel 18 Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 2.07 g rohem N,N'-Dibenzyloxycarbonyl-L-Lysin und 0.65 ml Chlorameisensaeureisobutylester (nach 45 min Nachruehren bei -20°C) in situ das gemischte Anhydrid und nach dessen Reaktion mit 1.51 g rohem L-Seryl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid 2.34 g rohen N,N'-Dibenzyloxycarbonyl-L-lysyl -L-seryl-L-alaninbenzylester.
2.2 g dieser Substanz liefern analog Beispiel 11.4. mit Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure (Beispiel 15 a) 1.52 g rohen Monoester. 2 g dieser Substanz bringen nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (in 400 ml Methanol-Wasser 3:1) 0.55 g weißen Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit L-Lysyl-L-seryl-L-alanin. An 1 mol dieser Substanz sind 2 mol Wasser und 0.33 mol Ethanol addiert. Fp. ab 173°C, Zers.
Beispiel 19 Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 1.5 g N-t-Butoxycarbonyl-L-serin, 0.78 g N-Methylmorpholin, 0.94 ml Chlorameisensaeureisobutylester und 100 ml Methylenchlorid in situ das gemischte Anhydrid, aus dem durch Reaktion mit dem HOl-Salz von 1.76 g L-Prolin-benzylester (Fp. 1450C) (0.74 ml N-Methylmorpholin in 100 ml Methylenchlorid) 2.8 g roher N-t-Butoxycarbonyl-L-seryl-L-prolin-benzylester gebildet werden. Diese Verbindung in 60 ml Ether geloest und unter Eiskuehlung tropfenweise mit 18.6 ml 6 N etherischer HOl versetzt, liefert nach 15 min Nachruehren bei 0°C und 3 h bei Raumtemperatur 1.43 g rohen L-Seryl-L-prolinbenzylester als Hydrochlorid. Durch Umsetzung dieser Substanz mit dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus N-Benzyloxycarbonyl-L-prolin (1.06 g) und 0.55 ml Chlorameisensaeureisobutylester werden analog Beispiel 11.3. 2.1 g roher N-Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-seryl-L-prolinbenzylester erhalten. Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus dieser Substanz nach Umsetzung mit 0.98 g Benzyloxycarbonylamino-methanphcspnonsaeure (mittels 2.47 g Dicyclohexylcarbodiimid in 30 ml abs.
Pyridin und Anreiben des Eindampfrueckstandes mit Petrolether am Schluß) 2 g rohen Monoester. Analog Beispiel 11.5. gewinnt man daraus durch Hydrierung 0.8 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit L-Prolyl-L-seryl-L-prolin. An 1 mol dieser Verbindung sind 2.5 mol Wasser und 0.2 mol Ethanol addiert.
Fp. ab 182"C, Zers.
Beispiel 20 20.1.
Zu einer Loesung von 10 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin in 400 ml Methylenchlorid und 4.58 ml N-Methylmorpholin tropft man bei -15°C 5.8 ml Chlorameisensaeureisobutylester, ruehrt 15 min bei -150C nach, traegt zu dem so in situ erzeugten, gemischten Anhydrid eine Loesung von 7.5 g rohem L-Alanint-butylester . Hydrochlorid (Fp. 165/1680C) in 300 ml Methylenchlorid und 4.58 ml N-Methylmorpholin tropfenweise ein, ruehrt 1 Stunde bei -150C, 1 h bei OOC und 2 h bei Raumtemperatur nach, laeßt ueber Nacht stehen, schuettelt den Ansatz mit 5 % waessr. NaHOC3-Loesung und dann mit 5 % waessr.
Zitronensaeure aus, dampft die org. Phase nach Trocknen mit Na 2 S04 im Vacuum ein, reinigt den erhaltenen, sirupoesen Eindampfrueckstand an einer Kieselgelsaeule (ca. 60 cm lang, ca. 6 cm lichte Weite), wobei Essigsaeureethylester mit 5 % Heptan als Laufmittel dient. So gewinnt man 6.12 g farblosen Sirup. Aus den Mischfraktionen werden nach erneuter Reinigung an der Saeule weitere 5.25 g des gleichen Sirups erhalten, naemlich N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanin-t-butylester.
Herstellung von L-Alanin-t-butylester . Hydrochlorid: Zu 11.25 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin und 125 ml t-Butanol, in 50 ml Pyridin geloest, tropft man bei -5"C 5.5 ml POOl3, ruehrt 3 h bei Raumtemperatur nach, gießt dann auf 1 Liter einer Mischung aus Wasser und Essigester 1:1, trennt die organische Schicht ab, waescht diese 2 mal mit 150 ml 1 N HCl, dann mit 5 i waessr. NaHCO3-Loesung und mit Wasser und dampft sie nach Trocknen mit Na2SO4 im Vacuum ein, wobei 13.5 g schwach gelbliches Oel, naemlich roher N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin-t-butylester erhalten werden. 13.3 g dieser Substanz hydriert man bei Normaldruck und Raumtemperatur mit 2 g 10 % Pd-C-Katalysator (30 min). Nach Absaugen des Katalysators, dampft man das Filtrat ein, loest den Eindampfrueckstand in Ether, faellt durch Zugabe von 6 N etherischer HOl 5.41 g der gewuenschten Substanz aus (Fp. 165/1680C).
20.2.
6.12 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanin-t-butylester und 4.12 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure in 100 ml abs. Pyridin, ruehrt man 24 h bei Raumtemperatur mit 10.33 g Dicyclohexylcarbodiimid, saugt dann den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, ruehrt den Eindampfrueckstand mit Essigester aus, saugt von etwas Ungeloestem ab, schuettelt das Filtrat mit 5 % waessr. NaHCO3-Loesung und dann mit 0.5 N HOl aus, dampft die org. Phase nach Trocknen mit Na2 SO4 im Vacuum ein, ruehrt den Eindampfrueckstand mit Ether an und erhaelt so 6.75 g rohen Monoester.
1.5 g davon in 40 ml Methylenchlorid geloest, versetzt man mit 3 ml 6 N etherischer HCl, ruehrt 24 h nach, gibt erneut 1.5 ml 6 N etherische HOl zu, laeßt abermals 24 h nachruehren, saugt dann das ausgeschiedene Material ab, naemlich 0.94 g rohen Monoester von Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanin 20.3.
3.15 g dieser so erhaltenen Substanz und 1.37 g N-Hydroxysuccinimid (in einer Mischung aus 60 ml Tetrahydrofuran und 60 ml Methylenchlorid) versetzt man mit 1.21 g Dicyclohexylcarbodiimid bei -10°C, ruehrt 2 h bei -100C und 24 h bei Raumtemperatur nach, saugt den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, schuettelt diese Loesung mehrfach mit Wasser aus, dampft die org. Phase nach Trocknen mit Na2SO4 im Vacuum ein, reibt den Eindampfrueckstand mit Ether an, wodurch 1.02 g Kristalle erhalten werden, naemlich roher Monoester der (Benzyloxycarbonyl-amino) -methanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanin-N-hydroxysuccinimidester.
1.9 g dieser Substanz in-12 ml heißem Ethanol geloest, traegt man in eine Loesung von 0.36 g D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure in 12 ml Wasser und 0.6 g NaHCO3 so ein, daß die Temperatur nicht ueber OOC steigt, ruehrt 1 h bei 0°C und 24 h bei Raumtemperatur nach, dampft dann das Ethanol im Vacuum ab, extrahiert nun die verbliebene Wasserphase mit Ether und reinigt die waessr. Loesung an einer Ionenaustauschersaeule (DOWEX-50, H-Form), wobei mit Wasser eluiert wird. Die vereinigten, im Duennschichtchromatogramm einheitlichen identischen Fraktionen extrahiert man mit Ether und danach mit Essigester, dampft die Wasserphase im Hochvacuum ein, reibt den Eindampfrueckstand mit Ether an und erhaelt so 0.66 g kristallinen Monoester der (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure mit D,L-1-[(Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl)-amino]-ethanphosphonsaeure.
20.4.
Nach 20 min Hydrierung dieser Verbindung (0.66 g) in 25 ml einer Mischung aus Ethanol-Wasser 3:1 mit 0.16 g 10 % Pd-C-Katalysator bei Normaldruck, saugt man den Katalysator ab, verdampft im Filtrat das Ethanol im Vacuum, extrahiert die verbliebene waessr. Loesung mit Essigester, engt die Wasserschicht im Vacuum stark ein und faellt durch Ethanolzugabe.
Das so erhaltene Kristallisat loest man erneut in Wasser, faellt wieder durch Ethanolzugabe Kristalle aus, saugt diese ab, waescht mit Ethanol und Aceton und erhaelt so 0.13 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit D,L-1-(L-Seryl-L-alanyl-amino)-ethanphosphonsaeure.
Nach Trocknen im Vacuum ueber P205 sind an 1 mol dieser Substanz 1 mol Wasser und 0.33 mol Ethanol addiert.
Fp. ab 200es, Zers.
Beispiel 21 1.67 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 0.77 ml N-Methylmorpholin loest man in 70 ml Methylenchlorid, tropft bei -10°C eine Loesung von 0.91 ml Chlorameisensaeureisobutylester in 21 ml Methylenchlorid zu, ruehrt 30 min bei -100C nach, tropft dann zu dem so in situ erzeugten, gemischten Anhydrid bei -100C eine Loesung von 2.5 g Hydrobromid des rohen D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeurediphenylesters vom Fp. 1400C und 0.77 ml N-Methylmorpholin in 70 ml Methylenchlorid, ruehrt 1 Stunde bei -100C, 1 h bei OOC und 2 h bei Raumtemperatur nach, waescht dann mit 5 % waessr. NaHCO3-Loesung und darauf mit 5 % waessr. Zitronensaeure und zuletzt mit Wasser. Nach Trocknen der org. Phase mit Na2 SO4 und Eindampfen im Vacuum verbleiben 3.3 g Oel, naemlich roher D,L-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl)-amino]-ethanphosphonsaeure-diphenylester.
3 g davon verestert man analog Beispiel 11.4. mit 1.62 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure (in insgesamt 120 ml abs. Pyridin) mittels 3.74 g Dicyclohexylcarbodiimid und erhaelt so 2.9 g rohen Monoester (Fp. ab 1400C, Zers.) 1.4 g davon hydriert man bei Normaldruck mit 0.45 g 10 % Pd-C-Katalysator in 140 ml einer Mischung von Methanol-Wasser 3:1 (9 Stunden), gibt dann nochmals die gleiche Menge Katalysator zu und hydriert weitere 8 Stunden. Nun saugt man den Katalysator ab, dampft im Vacuum aus dem Filtrat das Methanol ab, saugt etwas ausgeschiedenen Dicyclohexylharnstoff ab, extrahiert das Filtrat mit Essigester, engt die Wasserphase im Vacuum stark ein und faellt durch Ethanolzugabe 0.5 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit D,L-1- (L-Seryl-amino)ethanphosphonsaeuremonophenylester.
An 1 mol dieser Substanz sind 0.5 mol Wasser addiert.
Fp. 200/210°C, Zers.
Beispiel 22 3 g [(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-methanphosphonsaeure und 2.96 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin-benzylester in 50 ml abs. Pyridin geloest, versetzt man mit 5.6 g Dicyclohexylcarbodiimid, ruehrt 5 Stunden bei Raumtemperatur, laeßt ueber Nacht stehen, dampft dann im Vacuum das Pyridin voellig ab, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, saugt den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, waescht das Filtrat mit 5 % waessr. NaHCO3-Loesung und darauf mit 0.5 N waessr. HOl und Wasser und dampft die org.
Phase nach Trocknen mit Na2S04 im Vacuum ein. Man gewinnt so 4.82 g rohen Monoester als glasig harte Masse. 1.5 g davon loest man zur Reinigung in 40 ml 5 % waessr. NaHCO3-Loesung und etwas Aceton, extrahiert dann mit 20 ml Ether und anschließend mit Essigester; die so erhaltene Essigesterloesung extrahierte man mit 1 N HOl und dampft die org. Phase nach Trocknen mit Na2SO4 im Vacuum ein, wobei der Monoester aus [(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl) -amino] -methanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-serinbenzylester vom Fp. 158/1620C anfaellt.
1 g des vorgenannten Rohproduktes hydriert man (mit 0.3 g 10 % Pd-C-Katalysator 25 min bei Normaldruck in 150 ml einer Mischung aus Methanol-H20 2:1) analog Beispiel 11.5. und erhaelt so 0.15 g Monoester, der (L-Alanyl-amino)-methanphosphonsaeure mit L-Serin. 1 mol dieser Substanz haftet 1.5 mol Wasser und 0.125 mol Ethanol an. Fp. 168/ 172°C, Zers..
Beispiel 23 Analog Beispiel 22 erhaelt man aus 0.78 g L-1-[(N-BenzyloxyCarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-methanphosphonsaeure (Fp. 188/1920C, Zers.) und 0.72 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serinbenzylester (mit 24 ml abs. Pyridin verrieben, dann mit 1.25 g Dicyclohexylcarbodiimid in 24 ml Pyridin tropfenweise versetzt und wie bei Beispiel 22 aufgearbeitet, nach Eindampfen des Essigesters) 1 g rohen Monoester der [(N-BenzylOxyCarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-methanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-serinbenzylester vom Fp. 135/138°C und nach dessen Hydrierung 0.35 g Monoester der [(L-Alanyl-L-alanyl)-amino]-methanphosphonsaeure mit L-Serin. An 1 mol dieser Substanz sind 1 mol Wasser und 0.66 mol Ethanol addiert.
Fp. 168/172°C, Zers.
Beispiel 24 24.1.
6.25 g N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalin (Fp. 85/860C) loest man in 25 ml Methylenchlorid, gibt 3 g N-Hydroxysuccinimid in 10.5 ml Tetrahydrofuran geloest, zu, tropft bei -100C eine Loesung von 5.4 g Dicyclohexylcarbodiimid in 12.5 ml Methylenchlorid zu, ruehrt 1 Stunde bei -100C, 1 h bei -50C, 1 h bei OOC und 2 h bei Raumtemp. nach, laeßt ueber Nacht stehen, saugt den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, loest den Eindampfrueckstand in Essigester, waescht diese Loesung mit 5 % waessr.
NaHCO3-Lsg., dann 2 mal mit Wasser und dampft nach Trocknen die org. Phase im Vacuum ein, wobei 8 g oeliger Rueckstand, naemlich roher N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalin- (N-hydroxysuccinimidester) verbleiben.
2.75 g L-1-Amino-ethanphosphonsaeure suspendiert man in 100 ml Wasser und 50 ml Ethanol, gibt bei 5 bis 10°C portionsweise 5 g NaHCO3 zu, tropft dann in 30 min bei 0°C eine Loesung von 6.96 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalin-(N-Hydroxysuccinimidester) in 70 ml Ethanol geliest, zu, ruehrt 2 Stunden bei 0°C nach, iaeßt ueber Nacht stehen, dampft im Vacuum bei Raumtemperatur ein, nimmt das verbliebene Oel in 100 ml Wasser auf und extrahiert diese Loesung 3 mal mit Chloroform. Die truebe waessr.
Phase wird filtriert, mit halbkonz. HCl auf pH 2 gestellt und erneut mit Chloroform extrahiert. Nun engt man die Wasserphase im Vacuum auf ca. 50 ml ein, saugt die dabei ausgefallene Substanz ab und trocknet sie im Vacuum ueber P205. So erhaelt man 3.4 g rohe L-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalyl)-amino]-ethanphosphonsaeure vom Fp. 181/182°C.
2.4 g davon hydrierte man mit 0.8 g Pd-C-Katalysator (10 %) in 36 ml Methanol und 36 ml Wasser und 1 Tropfen Eisessig 2.0 Stunden bei Normaldruck, saugt den Katalysator ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, zuletzt noch 3 mal nach jeweils vorheriger Zugabe von n-Propanol. So verbleiben 1.4 g Eindampfrueckstand vom Fp. 284/285°C, Zers., naemlich rohe L-1-(L-Norvalyl-amino)ethanphosphonsaeure.
24.2.
Zu 1.12 g davon in 30 ml Wasser und 10 ml Ethanol und 1.26 g NaHCO3 geloest, tropft man bei 0°C eine Lsg. von 1.92 g N-BenzylOxycarbonyl-sarcosin-(N-hydroxysuccinimidester) in 25 ml Ethanol, ruehrt 2 Stunden bei 0°C und 1 h bei Raumtemperatur nach, laeßt ueber Nacht stehen, dampft dann die Loesung ein (im Vacuum) , nimmt den oeligen Rueckstand in ca. 50 ml Wasser auf, extrahiert die truebe Loesung 3 mal mit Chloroform, stellt die Wasserphase mit HCl auf pH 2, extrahiert nochmals 3 mal mit Chloroform, engt die Wasserphase im Vacuum stark ein, saugt die gelartige Substanz ab, und trocknet ueber P205 im Vacuum, wobei 2.0 g rohe L-1- (N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl) -amino -ethanphosphonsaeure verbleiben. Nach Anreiben mit ca.
7 ml abs. Isopropanol oder abs. Aceton saugt man das Ungeloeste ab, reibt es mit Ether durch und gewinnt so 1.45 g Kristalle vom Fp. 204/206es, Zers., naemlich rohe L-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl)-amino]-ethanphosphonsaeure.
24.3.
Analog Beispiel 23 setzt man 0.86 g dieser Substanz mit 0.72 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin-benzylester zum Monophosphonsaeureester um, wobei dieser bereits beim Einengen der Essigesterloesung ausfaellt (0.5 g, Fp. 142/146"C) und erhaelt nach dessen Hydrierung (0.15 g 10 % Pd-C-Katalysator, 15 min in 50 ml Mischung Methanol-Wasser 3:1) 0.18 g Monoester der L-1- [ (Sarcosyl-L-norvalyl) -amino]-ethanphosphonsaeure mit L-Serin. An 1 mol dieser Substanz sind 3 mol Wasser addiert. Fp. 178/1800C, Zers.
Herstellung von N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin-(N-hydroxysuccinimidester): Zu 8.92 g N-Benzyloxycarbonylsarcosin und 4.8 g N-Hydroxysuccinimid in 40 ml Methylenchlorid und 16.8 ml Tetrahydrofuran tropft man bei -100C eine Lsg. von 8.64 g Dicyclohexylcarbodiimid in 18 ml Tetrahydrofuran, ruehrt 1 Stunde bei -100C, 1 h bei OOC und 2 h bei Raumtemperatur nach, laeßt ueber Nacht stehen, saugt dann den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, nimmt das verbliebene Oel in Essigester auf, filtriert, schuettelt das Filtrat mit 5 % waessr. NaHCO3-Lsg. und 2 mal mit Wasser aus, dampft die org. Phase nach Trocknen mit Na2SO4 im Vacuum ein, wobei 11.2 g der gewuenschten Substanz als Oel verbleiben.
Beispiel 25 Analog Beispiel 24.1. erhaelt man aus 13.92 g N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalin- (N-hydroxysuccinimidester) , 4.88 g Aminomethanphosphonsaeure (240 ml Ethanol und 200 ml Wasser) 8.1 g rohe [(N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalyl)-amino]-methanphosphonsaeure, welche nach der anschließenden Hydrierung und Anreiben des rohen Hydrierungsproduktes mit ca. 50 ml abs. Aceton 5.35 g (L-Norvalyl-amino)-methanphosphonsaeure vom Fp. 236/2420C, Zers. liefert. 5.3 g davon ergeben nach Reaktion mit N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin- (N-hydroxysuccinimidester) analog Beispiel 24.2. 4.2 g rohe [(N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl)-amino]-methanphosphonsaeure, welche nach Anreiben mit Wasser einen Fp. 146/1480C aufweist.
Analog Beispiel 24.3. erhaelt man aus 1.5 g dieser Substanz und 1.2 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin-benzylester mittels 2.2 g Dicyclohexylcarbodiimid unter extrem wasserfreien Bedingungen 1.12 g rohen Monoester. Diesen loest man in 112 ml 95proz. Methanol, tropft dann 35 ml Wasser zu und erhaelt nach anschließender Hydrierung 0.25 g Monoester der (Sarcosyl-L-norvalyl-amino)-methanphosphonsaeure mit L-Serin.
Einem mol dieser Substanz haften 2 mol Wasser an.
Fp. 172/1740C, Zers.
Beispiel 26 26.1.
Zu 6.7 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin in 134 ml Methylenchlorid und 3.3 ml N-Methylmorpholin geloest, tropft man bei -150C 3.94 ml Chlorameisensaeureisobutylester, ruehrt 15 min bei dieser Temp. nach, tropft zu dem so in situ erzeugten, gemischten Anhydrid bei -15°C eine Loesung von silylierter L-1-Amino-ethanphosphonsaeure (3.75 g L-1-Aminoethanphosphonsaeure in 300 ml Methylenchlorid suspendiert, versetzt man mit 12.1 ml Chlortrimethylsilan, erhitzt zum Rueckfluß, tropft 12.5 ml Triethylamin so zu, daß ohne aeußere Heizung Rueckfiuß erhalten bleibt und kocht dann noch 1 Stunde unter Rueckflu#), laeßt 1 Stunde bei -15°C, 1 h bei 0°C und 2 h bei Raumtemp. nachruehren und dann ueber Nacht stehen. Nun dampft man das Methylenchlorid ab, loest den Rueckstand in Wasser, extrahiert 2 mal mit Ether, laeßt die Wasserschicht ueber eine Ionenaustauschersaeule (800 ml Dowex-50, H-Form) laufen, eluiert mit Wasser und dampft die vereinigten identischen, einheitlichen Fraktionen im Vacuum ein. Man erhaelt so 7.75 g L-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl)-amino]-ethanphosphonsaeure vom Fp. 165/169°C. 7.7 g davon hydriert man mit 1.0 g 10 % Pd-C-Katalysator bei Normaldruck (in 400 ml Ethanol-Wasser 2:1, 20 min), saugt den Katalysator ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, ruehrt den Rueckstand mit Ethanol an und erhaelt so 3.85 g rohe 1-L-(L-Alanyl-amino)-ethanphosphonsaeure.
26.2.
Zu einer Loesung von 4.2 g dieser Substanz und 5.4 g Nah003 in 76 ml Wasser-Ethanol 2:1 tropft man eine Loesung von 8.23 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin-(N-hydroxysuccinimidester) in 150 ml Ethanol, ruehrt 4 Stunden nach, laeßt ueber Nacht stehen, destilliert dann das Ethanol im Vacuum ab, extrahiert das verbleibende Wasser mit Ether, gibt die Wasserphase auf eine Ionenaustauschersaeule (800 ml Dowex-50, H-Form), eluiert mit Wasser1 dampft die vereinigten, identischen, einheitlichen Fraktionen im Vacuum ein, ruehrt den trockenen Eindampfrueckstand mit 300 ml Aceton aus, wobei 6.1 g rohe 1-L-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-an'no] -ethanphosphonsaeure gewonnen werden.
Fp. ab 198°C, Zers.
26. 3.
Analog Beispiel 23 erhaelt man aus 0.8 g der so erhaltenen Phosphonsaeure und 0.72 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serinbenzylester mittels 0.63 g Dicyclohexylcarbodiimid 1.24 g zaehes Qel, das nach Anreiben mit Essigester 0.62 g Kristalle vom Fp. 790/194es liefert, naemlich den entsprechenden Monoester.
26.4.
0.5 g dieser Substanz loest man in 50 ml 95proz. Methanol, tropft 15 ml Wasser dazu und hydriert analog Beispiel 11.5., wodurch 0.2 g Monoester der L-1-[(L-Alanyl-L-alanyl)-amino]-ethanphosphonsaeure mit L-Serin erhalten werden. An 1 mol dieser Substanz sind 2 mol Wasser und 1 mol Ethanol addiert.
Fp. 290/2990C, Zers.
Beispiel 27 2 g rohe, feinpulverige L-1-[(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-ethanphosphonsaeure (hergestellt nach Beispiel 26.2.) und 0.86 g N-Acetyl-L-serin-benzylester suspendiert man in 60 ml abs. Pyridin, tropft dazu eine Lsg. von 3.12 g Dicyclohexylcarbodiimid in 60 ml abs. Pyridin, ruehrt 30 min nach, gibt dann 20 g Molekularsieb zu, ruehrt 9 Stunden weiter, laeßt 2 Tage stehen, saugt ab, waescht mit Pyridin und Ether, dampft das Filtrat im Vacuum ein, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, waescht diese Loesung mit 0.2 N HOl und 3 mal mit Wasser, dampft die org.
Phase nach Trocknen mit Na2 SO4 im Vacuum ein, reibt den Eindampfrueckstand mit Ether an und erhaelt so 0.83 g rohen Monoester der L-1-[ (N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino]-ethanphosphonsaeure mit L-N-Acetylserin-benzylester.
0.4 g dieser Substanz hydriert man [20 min in 40 ml waessr.
Ethanol (8oproz.) bei Normaldruck mit 0.1 g Pd-C-Katalysator (l0proz.)] analog Beispiel 11.5. und erhaelt so 0.1 g Monoester der L-1-[(L-Alanyl-L-alanyl)-amino]ethanphosphonsaeure mit L-N-Acetylserin. An 1 mol dieser Substanz sind 1 mol Wasser und 0.33 mol Ethanol addiert.
Fp. 182/1840C, Zers.
Beispiel 28 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 4 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alaninbenzylester (Fp. 1180C) und 3.9 g D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure mittels 6.2 g Dicyclohexylcarbodiimid 4.5 g rohen Monoester (Fp. 140/1450C) von dem 3.2 g nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. 1.19 g Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanin liefert. An 1 mol dieser Substanz haftet 1.5 mol Wasser.
Fp. ab 165"C, Zers.
Beispiel 29 Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 1.4 g rohem N-t-Butoxycarbonyl-sarcosin (Fp. 800C) (in 100 ml Methylenchlorid geloest) und 1.3 ml Ohlorameisensaeureisobutylester, sowie 3.51 g L-Alanin-benzylester. p-Toluolsulfonat 2.4 g Rohprodukt als Oel, welches nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (240 g Gel, Chloroform als Laufmittel) 1.37 g N-t-Butoxycarbonyl-sarcosyl-L-alanin-benzylester als prakt. farbloses Oel liefert. 1.27 g dieser Substanz loest man in 6 ml Ether, gibt bei OOC 8.6 ml 6 N etherische HOl zu, ruehrt 15 min bei 0°C und 2 h bei 230C und saugt das erhaltene Kristallisat ab (0.72 g). Es ist rohes Sarcosyl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid vom Fp. 155/157"C.
Analog Beispiel 11.3. gewinnt man aus 5.75 g dieser Substanz und 4.8 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin rohes, wachsartiges Reaktionsprodukt, welches nach Anreiben mit Ether 6. 1 5 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-sarcosyl-L-alaninbenzylester ergibt. Fp. 128/1310C.
Analog Beispiel 11.4. reagieren 5.2 g dieser Substanz mit 2.84 g D,L-1-Benzyloxycarbonylamino-ethanphosphonsaeure (mittels 7.13 g Dicyclohexylcarbodiimid in 45 ml abs.
Pyridin) zum Monoester. Das erhaltene Rohprodukt loest man in Sproz., waessr. NaHCO3-Loesung, extrahiert diese Loesung 5 mal mit je 100 ml Ether, dann 5 mal mit je 100 ml Essigester, dampft die vereinigten Essigesterloesungen im Vacuum ein und erhaelt so 4.95 g Monoester der D,L-1-(Benzyloxycarbonylamino) -ethanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-sarcosyl-L-alanin-benzylester als Natriumsalz.
Analog Beispiel 11.5. erhaelt man durch Hydrierung dieser Substanz (1 g Pd-C-Katalysator, 50 ml Wasser und 100 ml Ethanol) und voelliges Eindampfen der Wasserloesung im Vacuum 1.1 g Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Seryl-sarcosyl-L-alanin als Natriumsalz. An 1 mol dieser Substanz haengen 2.5 mol Wasser an. Fp. ab .10500, Zers..
Beispiel 30 Analog Beispiel 11.2. gewinnt man aus 6.58 g N-t-Butoxycarbonyl-glycin (Fp. 940C) in 140 ml Methylenchlorid und 4.1 ml N-Methylmorpholin mit 5 ml Chlorameisensaeureisobutylester in 15 ml-Methylenchlorid in situ das gemischte Anhydrid, aus dem nach Reaktion mit 13.2 g L-Alanin-benzylester . p-Toluolsulfonat 10.4 g eines viskosen Oels, naemlich roher N-t-Butoxycarbonyl-glycyl-L-alanin-benzylester, gewonnen werden, von dem man 10 g in 50 ml Ether loest, bei OOC langsam mit 70 ml 6 N etherischer HCl versetzt, 15 min bei OOC und 2 h bei 23"C nachruehren laeßt und nach Absaugen des ausgefallenen Materials so 7.8 g rohes Glycyl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid erhaelt. Fp. 206/2100C.
Analog Beispiel 11.3. bekommt man aus 6.4 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin (in 75 ml Methylenchlorid und 3.2 g N-Methylmorpholin mit 4.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester) das gemischte Anhydrid. Nach dessen Umsetzung mit einer Suspension aus 7.14 g Glycyl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid in 80 ml Methylenchlorid, 20 ml Dimethylformamid und 2.9 ml N-Methylmorpholin und anschließendem Waschen mit 0.5 N HOl und Wasser, sowie Anreiben des Rueckstandes der eingedampften Methylenchloridloesung mit Ether werden 8.2 g Kristalle vom Fp. 132/136°C erhalten, naemlich N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-glycyl-L-alanin-benzylester.
Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 2.35 g dieser Substanz und 2 g D,L-1-(Benzyloxycarbonylamino)-ethanphosphonsaeure 3 g rohen Monoester; Fp. 134/138°C.
Analog Beispiel 11.5. erhaelt man aus 1.5 g dieser Substanz, in 150 ml Ethanol und 38 ml Wasser geloest, nach der Hydrierung 0.65 g Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Seryl-glycyl-L-alanin als Monohydrat.
Fp. 1480C, Zers.
Beispiel 31 Analog Beispiel 30 erhaelt man aus 7.1 g N-t-Butoxycarbonyl-L-alanin (Fp. 780C) und 5 ml Chlorameisensaeureisobutylester das in situ gebildete, gemischte Anhydrid und nach dessen Reaktion mit 13.2 g L-Alanin-benzylester . p-Toluolsulfonat 1 0. 3 g N-t-Butoxy-L-alanyl-L-alanin-benzylester vom Fp. 74/760C. 10 g dieser Verbindung laeßt man in 50 ml abs. Ether geloest, mit 68 ml 6 N etherischer HOl 15 min bei OOC und 3 h bei 25"C reagieren, dampft dann im Vacuum ein, ruehrt den Eindampfrueckstand mit 100 ml frischem Ether durch, laeßt ueber Nacht stehen und saugt nun das erhaltene Kristallisat ab (7.6 g); Fp. 158/160dz. Es ist rohes L-Alanyl-L-alanin-benzylester . Hydrochlorid.
Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 12 g dieser Substanz nach Reaktion mit dem gemischten Anhydrid, welches aus 10.0 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 6.72 g Chlorameisensaeureisobutylester in situ entsteht, 11.2 g Kristalle vom Fp. 196-1990C und aus der analog Beispiel 11.3. aufgearbeiteten Mutterlauge 4.9 g Kristalle, die nach Umkristallisation aus Ethanol bei 194/1980C schmelzen. Es ist N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alanin-benzylester.
Analog Beispiel 11.4. liefert die Umsetzung von 4.7 g dieser so erhaltenen Substanz mit 2.59 g 2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure (Fp. 103/106"C) 3.9 g rohen Monoester.
Analog Beispiel 11.5. gewinnt man aus 1.5 g dieses Monoesters nach Hydrierung 0.3 g Monoester der 2-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanyl-L-alanin als Dihydrat. Fp. ab 187°C, Zers.
Die Herstellung von 2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure aus 2-Amino-ethanphosphonsaeure und Chlorameisensaeurebenzylester erfolgt analog Beispiel 15 a.
Beispiel 32 Analog Beispiel 11.4. ergibt die Umsetzung von 0.9 g D,L-(c-Benzyloxycarbonyl-amino)-benzylphosphonsaeure (Fp. 151/ 154"C) mit N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester (Beispiel 31) 2 g rohen Monoester, von dem 1 g analog Beispiel 11.5. hydriert, 0.32 g Monoester der D,L- (a-Amino) -benzylphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanyl-L-alanin liefert. An 1 mol dieser Substanz haften 1.5 mol Wasser und 0.25 mol Ethanol. Fp. ab 1840C, Zers.
Die Herstellung von D,L-(a-Benzyloxvcarbonylamino)-benzylphosphonsaeure aus a-Amino-benzylphosphonsaeure (Fp. 2830C) erfolgt analog Beispiel 15 a.
Beispiel 33 33.1.
11.6 g rohen L-Glutaminsaeure-y-benzylester (Fp. 1800C), 17.1 g t-Butyl-2,4,5-trichlorphenylcarbonat, 8.4 ml Triethylamin, 40 ml Wasser und 60 ml t-Butanol ruehrt man 3 Stunden bei 60 - 62"C, dampft dann im Vacuum das t-Butanol ab, gibt 70 ml Wasser zu, extrahiert mit Ether, stellt die Wasserschicht mit konz. HOl auf pH 3, extrahiert nun mit Essigester, dampft die vereinigten Essigesterextrakte ein und erhaelt so 9 g rohen, oeligen N-t-Butoxycarbonyl-L-glutaminsaeure-y-benzylester.
Analog Beispiel 11.2. erzeugt man aus 2.5 g dieser Substanz (in 75 ml Methylenchlorid und 0.83 ml N-Methylmorpholin mit 0.99 ml Chlorameisensaeureisobutvlester) in situ das gemischte Anhydrid, welches nach Umsetzung mit 2.59 S L-Alaninbenzylester . p-Toluolsulfonat (in 75 ml Methylenchlorid und 0.83 ml N-Morpholin) 3.6 g oeligen (N-t-Butoxycarbonyl-Y-benzyl)-L-glutaminyl-L-alanin-benzylester ergibt.
Diese Substanz in 50 ml Ether geloest, laeßt man mit 23 ml 6 N etherischer HCl 15 min bei 0°C und 48 Stunden bei 25"C stehen, dampft dann im Vacuum ein und bekommt so 3 g rohen y-Benzyl-L-glutamyl-L-alanin-benzylester als Hydrochlorid, und zwar in Form einer zaehen Masse.
Analog Beispiel 11.3. ernaelt man durch Reaktion dieser Substanz mit dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus 1.62 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 0.9 ml Chlorameisensaeureisobutylester (und schließlichem Anreiben mit Essigester) 2.43 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-Y-benzyl-L-glutamyl-L-alanin-benzylester vom Fp. 156/1600C.
Analog Beispiel 11.4. liefern 7 g dieser Verbindung mit 2.93 g D,L-1-(Benzy1oxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure (mittels 7.25 g Dicyclohexylcarbodiimid und schließlichem Anreiben mit Essigester) 2.12 g rohen Monoester vom Fp.
150/153°C, welcher nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. in 200 ml Gemisch Methanol-H20 3:1 0.8 g weißen Monoester der D,L-1-Anino-ethanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-glutaminyl-L-alanin ergibt. An 1 mol dieser Substanz sind 2.5 mol Wasser und 0.25 mol Ethanol addiert. Fp. ab 180°C, Zers.
Beispiel 34 Analog Beispiel 11.4. stellt man mit 0.94 d N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-sarcosyl-L-alanin-benzylester (Beispiel 29) und 0.54 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure (mittels 1.23 g Dicyclohexylcarbodiimid und nach schließlichem Anreiben mit Ether) 1.15 g rohen Monoester her.
(Fp. 104/1080C). 1.1 g davon hydriert man analog Beispiel 11.5. in 110 ml tiethanol-Wasser 3:1 und erhaelt nach schließlichem Anreiben mit Isopropanol 0.35 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Seryl-sarcosyl-L-alanin. 1 mol dieser Substanz sind mit 1.5 mol Wasser und 0.33 mol Ethanol behaftet. Fp. 150/1560C, Zers.
Beispiel 35 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 1.83 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-glycyl-L-alanin-benzylester (Beispiel 30) und Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure (1.08 g) und schließlichem Anreiben mit Ether 2.05 g rohen Monoester vom Fp. 158/1620C. Diese 2.05 g hydriert man analog Beispiel 11.5. (in 150 ml Methanol und 50 ml Wasser 40 min bei Normaldruck) und gewinnt nach schließlichem Anreiben mit Isopropanol 0.75 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Seryl-glycyl-L-alanin. An 1 mol dieser Substanz sind 1.5 mol Wasser und 0.5 mol Ethanol addiert.
Fp. 148/1500C, Zers.
Beispiel 36 Analog Beispiel 11.4. gewinnt man aus 3.84 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanin-benzylester (Beispiel 28) und Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure mittels 6.4 g Dicyclohexylcarbodiimid und schließlichem Einengen der Essigesterloesung 3.8 g kristaillnen, rohen Monoester, von den 3 g analog Beispiel 11.5. hydriert, 1.15 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanin liefern.
An 1 mol dieser Substanz sind 1.5 mol Wasser addiert.
Fp. ab 187"C, Zers.
Beispiel 37 Analog Beispiel 11.4. entsteht aus 6.56 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alanin-benzylester (Beispiel 31) und 1.76 groherMethoxymethanphosphonsaeure (mittels 8.92 g Dicyclohexylcarbodiimid) 4.7 g roher Monoester, von dem 4 g analog Beispiel 11.5. hydriert (in 800 ml Methanol-Wasser 1:1) 1.2 g kristallinen, rohen Monoester der Methoxymethanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanyl-l-alanin ergeben. An 1 mol dieser Substanz sind 0.5 mol Wasser und 0.33 mol Ethanol addiert.
Fp. ab 155°C, Zers.
Zur Herstellung der Methoxy-methanphosphonsaeure gibt man zu 3.2 g Methoxy-methanphosphonsaeurediethylester (kot6 = 650C) 13.5 g BrSi(CH3)3, ruehrt 4 Stunden bei Raumtemp., destilliert dann das ueberschuessige BrSi(CHJ)3 ab, gibt zur verbliebenen Substanz 75 ml Wasser, ruehrt 20 min nach, trennt die org. Phase ab (Hexamethyldisiloxan) dampft die Wasserschicht im Vacuum ein, loest den Eindampfrueckstand in Essigester, dampft diesen nach Trocknen mit Na2S04 im Vacuum ein, wobei 1.76 g der gewuenschten Substanz, als Rohprodukt (gelbes Oel) verbleiben.
Beispiel 38 Analog Beispiel 11.4. gewinnt man aus 1.42 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alanin-benzylester (Beispiel 31) und 0.88 g roher 3-(Benzyloxycarbonyl-amino)-n-propanphosphonsaeure (Fp. 74/760C) mittels 1.86 g Dicyclohexylcarbodiimid und schließlichem Anreiben des Reaktionsproduktes mit Hexan 1.67 g rohen Monoester vom Fp. 54/560C, von dem 1.5 g analog Beispiel 11.5. hydriert (in 150 ml Methanol-Wasser 3:1), 0.5 g Monoester der 3-Amino-n-propanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanyl-L-alanin liefern. An 1 mol dieser Substanz haften 1.5 mol Wasser und 0.5 mol Ethanol. Fp. 140/1500C, Zers.
Die Herstellung von 3- (Benzyloxycarbonyl-amino) -n-propanphosphonsaeure aus roher 3-Amino-propanphosphonsaeure (Fp. 2580C) erfolgt (mit 3 ml Soproz. Loesung von Chlorameisensaeurebenzylester in Toluol) analog Beispiel 15 a.
Fp. 74/760C.
Beispiel 39 Analog Beispiel 11.2. stellt man aus 1.89 g N-t-Butoxycarbonyl-L-alanin (in 100 ml Methylenchlorid und 1.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester bei -200C) das gemischte Anhydrid in situ her, aus dem nach Reaktion mit 4.81 g L-Nitroarginin-benzylester . p-Toluolsulfonat 4.3 g N-t-ButoXvcarbonyl-L-alanyl-L-nitroarginin-benzylester als Rohprodukt erhalten werden.
4 g der so erhaltenen Substanz loest man in 20 ml abs.
Methylenchlorid und ca. 10 ml absl. Ether, gibt bei OOC 5 ml 6 N etherische HCl zu, ruehrt 15 min bei OOC und 1 Stunde bei Raumtemperatur nach und saugt das entstandene rohe L-Alanyl-L-nitroarginyl-benzylester . Hydrochlorid ab (2.7 g).
Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 2.5 g der so erhaltenen Verbindung und dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid (aus 1.43 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 0.78 ml Ohlorameisensaeureisobutylester bei -20°C) nach dem Waschen mit der waessr. Zitronensaeure, eine gelartige Ausfaellung von rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-nitroarginin-benzylester, welche nach Absaugen mit Ether gewaschen wird. 0.6 g davon und 0.26 g D,L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure, sowie 0.62 g Dicyclohexylcarbodiimid (in 10 ml abs. Pyridin) ruehrt man ca.
2 Stunden bei Raumtemperatur, saugt den entstandenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, schuettelt diese Loesung mit 5 % waessr. NaHCO3-Lsg. und dann mit 0.5 N HCl, trocknet die org. Phase mit Na2SO4 und dampft sie dann im Vacuum ein, wobei nach Anreiben des Eindampfrueckstandes mit Ether 0.43 g Rohprodukt verbleibt, welches zur weiteren Reinigunc in Methylenchlorid geloest, und mit Wasser ausgeschuettelt wird. Nach Eindampfen der org. Phase und Anreiben mit Essigester verbleibt der Monoester. Aus der Essigesteranreibemutterlauge wird noch ein Anteil der gleichen Substanz erhalten. 4.2 g des auf diese Weise erhaltenen rohen Monoesters loest man in 120 ml Eisessig, hydriert mit 4 g 10 % Pd-C-Katalysator bei Normaldruck (1 Stunde), saugt dann den Katalysator ab, dampft das Filtrat ein, ruehrt das verbliebene Material mit Ethanol an, saugt die so erhaltenen Kristalle ab, waescht mit Ether und erhaelt so 1.72 g Monoester der D,L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanyl-L-arginin. An 1 mol dieser Substanz sind 1 mol Essigsaeure und 2 mol Wasser addiert. Fp 158 - 165°C, Zers.
Beispiel 40 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 1.37 g Benzyloxymethanphosphonsaeure, 2.36 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alanin-benzylester (Beispiel 31) und 3.1 g Dicyclohexylcarbodiimid nach starkem Einengen der Essigesterloesung des Reaktionsproduktes und Faellen mit Ether 2.56 g Monoester, von dem 2.2 g analog Beispiel 11.5. hydriert (40 min) werden. Man bekommt so 0.63 g Monoester der Hydroxy-methanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-alanyl-L-alanin. An 1 mol dieser Substanz sind 1 mol Wasser und 0.5 mol Ethanol addiert. Fp. ab 1050C, Zers.
Synthese von Benzyloxy-methanphosphonsaeure: 6.26 g rohen Benzyl-chlormethyl-ether erhitzt man mit 6.72 ml Triethylphosphit 24 h auf 1100C, haelt dann bei 0.2 mm Hg auf 1600C, wobei 8.41 g roher Benzyloxy-methanphosphonsaeure-diethylester verbleibt. 3.9 g davon versetzt man mit 10 ml Bromtrimethyl-silan, ruehrt 4 Stunden nach, destilliert dann das ueberschuessige Trimethyl-brom-silan ab und erhaelt so 5.6 g rohen Benzyloxy-methanphosphonsaeure-di-trimethyl-silylester. Diesen ruehrt man 20 min mit 100 ml Wasser aus, trennt die obere Schicht (Hexamethyldisiloxan) ab, dampft die Wasserschicht im Vacuum ein, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, dampft diese Loesung im Vacuum ein (nach Trocknen mit Na2SO4) und gewinnt so 2.54 g Benzyloxy-methanphosphonsaeure als gelbes Qel Beispiel 41 In Analogie zu Beispiel 23 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-D-serinbenzylester anstatt der entsprechenden L-Verbindung O-((N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanylamido)-methanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-D-serinbenzylester. Das Rohprodukt wird mit Ether digeriert und der duennschichtchromatographisch einheitliche Rueckstand (2.8 g) wird in 224 ml eines 2:1 Gemisches aus Ethanol und Wasser geloest und ueber Palladium auf Kohle als Katalysator hydriert. Man filtriert vom Katalysator ab, dampft ein, loest den Rueckstand in wenig Wasser, filtriert erneut und faellt das Produkt durch Zugabe von Ethanol aus.
Man ernaelt 1.2 g (88 %) O-((L-Alanyl-L-alanyl)-amidomethanphosphonyl)-D-serin . Monohydrat vom Fp. 216-2200C(Zers.).
[a]20 = 18.00 , c = 1, H20 Beispiel 42 In Analogie zu Beispiel 24 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-D-serinbenzylester anstatt der entsprechenden L-Verbidung O-(1R-1-(N-Benzyloxycarbonylsarcosyl-L-norvalylamido)-ethanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-D-serinbenzylester. Das Rohprodukt wird durch Umkristallisation aus Ethanol gereinigt. Zur Abspaltung der Schutzgruppen wird die Substanz (4.5 g) in einem Gemisch aus Ethanol-Methanol-Wasser (1:1:1) suspendiert, mit 1 g Palladium (10 %) auf Kohle versetzt und die Suspension in einer Wasserstoffatmosphaere 30 min geschuettelt. Bis auf den Katalysator geht alles in Loesung. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der Rueckstand wird mit Ethanol verruehrt und der verbleibende Feststoff abgesaugt. Man erhaelt 1.6 g (69 %) O-(1R-1-(Sarcosyl-L-norvalylamido)-ethanphosphonyl)-D-seri vom Fp. 148-162°C (Zersetzung) als Halbhydrat.
D20 = 41.20 (c = 1, H20) Beispiel 43 In Analogie zu Beispiel 25 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-D-serinbenzylester anstatt der entsprechenden L-Verbindung 0- ( (N-Benzyloxycarbonylsarcosyl-L-norvalylamido) -methanphosphonyl) -N-benzyloxvcarbonyl-D-serinbenzylester. 4.2 g dieses duennschichtchromatographisch einheitlichen Produktes werden in 420 ml eines Gemisches aus Ethanol und Wasser (2:1) suspendiert, mit 1 g Palladium (10 t) auf Kohle versetzt und 20 min in einer Wasserstoffatmosphaere geschuettelt. Bis auf den Katalysator geht alles in Loesung. Man filtriert ab und dampft das Filtrat fast zur Trockene ein. Die verbleibende, konzentrierte waessrige Loesung wird mit Ethanol versetzt und das ausgefallene Produkt abgesaugt. Man erhaelt 1.6 g (76 %) O- (Sarcosyl-L-norvalylamido) -methanphosphonyl) -D-serin . Monohydrat vom Fp. 147-1630C(Zersetzung) [a] 20 = -17.40 (c = 1, H20) D Beispiel 44 In Analogie zu Beispiel 26 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-D-serinbenzylester anstatt der entsprechenden L-Verbindung 0-(1R-1-(N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanylamido)-ethanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-D-serinbenzylester. Zur Reinigung wird das Rohprodukt in Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung unter Zusatz von etwas Aceton geloest. Die waessrige Phase wird mit Ether ausgeschuettelt und dann das Produkt durch Extraktion der waessrigen Phase mit Essigsaeureethylester isoliert. Die Essigsaeureethylesterphase wird mit 1 N Salzsaeure und Wasser gewaschen. Das Produkt faellt teilweise bereits in der organischen Phase aus. Diese wird abgetrennt und eingedampft. Das Rohprodukt wird ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet. 5 g davon werden unter Erwaermen in 300 ml eines Gemisches aus Ethanol und Wasser (2:1) unter Erwaermen geloest und nach dem Abkuehlen ueber Palladium (10 %) auf Aktivkohle als Katalysator 20 min hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat eingedampft, der Rueckstand in wenig Wasser geloest, das Produkt durch Zugabe von Ethanol ausgefaellt und anschließend abgesaugt. Man erhaelt 1.9 g (76 %) O-(1R-1-(L-Alanyl-L-alanylamido)ethanphosphonyl)-D-serin . Monohydrat vom Fp. 200-207°C(Zersetzung).
[α]D20 = -40.3° (c = 1, H2O) Beispiel 45 45.1.
4.8 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 2.2 ml N-Methylmorpholin werden in 200 ml getrocknetem Methylenchlorid geloest. Die Loesung wird bei -159C tropfenweise mit 2.6 ml Chlorameisensaeureisobutylester versetzt und 15 min bei -150 geruehrt. Dann fuegt man portionsweise eine Suspension von 8 g Glycyl-glycinbenzylester-Tosylat in 200 ml Methylenchlorid und 2.2 ml N-Methylmorpholin hinzu und ruehrt das Reaktionsgemisch je 1 Stunde bei -10°, 0" und 2 Stunden bei Raumtemperatur. Nach dem Stehen ueber Nacht wird das Reaktionsgemisch mit Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung, Sproz. Citronensaeureloesung und Wasser gewaschen. Die organische Phase wird mit MgSO 4 getrocknet und eingedampft.
Der Rueckstand wird aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 6.4 g (72 %) N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-glycylglycinbenzylester vom Fp. 143-145°C.
45.2.
Analog der in Beispiel 1.4. beschriebenen Weise setzt man N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-glycyl-glycinbenzylester mit lR,S-1-(Benzyloxycarbonylamido)-ethanphosphonsaeure um.
Der Eindampfrueckstanc des Filtrats der Reaktionsmischung wird unter Hinzufuegung von wenig Aceton in Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung geloest. Die waessrige Phase wird 2 mal mit Ether extrahiert. Daraufhin extrahiert man das Produkt mit Essigsaeureethylester, waescht die Essigsaeureethylesterextrakte mit 1 N Salzsaeure und Wasser, trocknet mit MgSO4 und dampft zur Trockene ein. Der Rueckstand wird je einmal aus 100 ml Ethanol und 50 ml Methanol umkristallisiert. Man erhaelt 5.4 g (56 "o) O-(1R,S-(Benzyloxycarbonylamido)-etnanphosphonyl) -N-benzyloxycarbonyl-L-seryl-glycyl-glycinbenzylester.
Das Produkt zeigt im Duennschichtchromatogramm noch Spuren von Verunreinigungen und wird ohne weitere Reinigung verwendet.
45.3.
5.2 g der in Beispiel 45.2. hergestellten Verbindung werden unter Erwaermen in einem Gemisch aus je 100 ml Methanol, Ethanol und Wasser geloest. Nach dem Abkuehlen fuegt man 1 g Palladium (10 %) auf Kohle hinzu und hydriert das Gemisch 20 min lang. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat zu einer konzentrierten Loesung eingedampft.
Durch Zusatz von Ethanol wird das Produkt ausgefaellt. Zur Reinigung wird das Rohprodukt in wenig Wasser geloest und die Loesung mit Methanol versetzt. Der Niederschlag wird abgesaugt. Man erhaelt 1.6 g (64 i) O-(1R,S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-seryl-glycyl-glycin, das mit 1.5 mol Wasser kristallisiert und bei 155-1580C(Zersetzung) schmilzt.
[a]20 = +15.00 (c = 1, H20) Beispiel 46 46.1.
In Analogie zu Beispiel 1.1. wird durch Umsetzung von 10.8 g N-tert.Butoxycarbonyl-L-norvalin mit 19 g L-Norvalinbenzylester 17.5 g (86 %) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-norvalyl-norvalin-benzylester vom Fp. 66-680C hergestellt. Das zunaechst als Oel aufallende Rohprodukt wird durch Zugabe von Ligroin kristallin.
46.2.
1 7. 5 g N-tert.-Butoxycarbonyl-L-norvalyl-L-norvalinSenzylester werden in 175 ml Ether geloest und unter Eiskuehlung mit 350 ml 5 N etherischer Salzsaeure versetzt. Nach einer Stunde bei Raumtemperatur wird das Reaktionsprodukt durch Zugabe von Ligroin ausgefaellt und ohne weitere Reinigung verarbeitet. Man erhaelt 9.7 g (66 %) L-Norvalyl-L-norvalinbenzylester . Hydrochlorid.
46.3.
Analog Beispiel 45.1. erhaelt man aus 6.8 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 9.7 g L-Norvalyl-L-norvalinbenzylester . Hydrochlorid 10.4 g (69 %) N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-norvalyl-L-norvalylbenzylester vom Fp. 162-1660C.
46.4.
3.3 g 1S-1- (Benzyloxycarbonylamido) -ethanphosphonsaeure werden analog Beispiel 45.2. mit 5.2 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-norvalyl-L-norvalinbenzylester umgesetzt. Man erhaelt 5.4 g (71 %) duennschichtchromatographisch nicht ganz einheitliches 0-(1S-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphono) -N-benzyloxycarbonyl-t-seryi-L-norvalyl-L-norvalinbenzylester. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung verarbeitet.
46.5.
Hydrierung von 5.3 g O-(15-1-(Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-norvalyl-L-norvalinbenzylester analog Beispiel 45. 3. liefert ein Rohprodukt, das durch Digerieren mit Ethanol gereinigt wird. Man erhaelt 1.7 g (60 %) O-(1S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-seryl-L-norvalyl-L-norvalin vom Fp. 188-1940C(Zersetzung).
Das Produkt enthaelt 4 % Wasser.
1D20 = 31.90 (c = 1, H20) Beispiel 47 Fuehrt man die Reaktionsfolgen des Beispiels 46 durch unter Verwendung von 1R-1- (Benzyloxycarbonylamido) ethanphosphonsaeure anstatt der entsprechenden 1S-Verbindung durch, so erhaelt man schließlich 0-(1R-1-Aminoethanphosphonyl)-L-seryl-L-norvalyl-L-norvalin vom Fp. 189-193°C (Zersetzung). Das Rohprodukt der Hydrierung wird zur Reinigung aus Wasser/Ethanol umkristallisiert.
[a]20 = -26.80 (c = 1, H20) Beispiel 48 48.1.
4.3 g N£-Benzyloxycarbonyl-L-lysin werden in 120 ml Methylenchlorid suspendiert und mit 4.1 ml Trimethylchlorsilan versetzt. Das Gemisch wird zum Sieden erhitzt und nach Entfernung der Heizung rasch mit 3.1 g Triethylamin versetzt. Man haelt das Reaktionsgemisch noch 1 h bei Siedetemperatur, laeßt abkuehlen und filtriert den Rueckstand unter Feuchtigkeitsausschluß ab.
3.4 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin werden in 120 ml trockenem Methylenchlorid geloest und 1.54 ml N-Methylmorpholin versetzt. Zu dieser Loesung tropft man bei -150C 1.84 ml Chlorameisensaeureisobutylester, ruehrt das Gemisch noch 15 min bei dieser Temperatur und tropft dann das oben erhaltene Filtrat, das den Silylester des N#-Benzyloxycarbonyl-L-lysinsenthaelt, zu.
Die Reaktionsmischung wird 2 Stunden bei -10°C, 1 Stunde bei OOC, 2 Stunden bei Raumtemperatur geruehrt und dann ueber Nacht stehen gelassen. Man engt zur Trockene ein, nimmt den Rueckstand in Essigsaeureethylester und Sproz.
Natriumhydrogencarbonatloesung auf. Nach dem Durchschuetteln werden die beiden Phasen getrennt und die waessrige Phase wird mit 2 N HCl angesaeuert. Man extrahiert das Produkt mit Essigsaeureethylester. Die organische Phase wird getrocknet, teilweise eingeengt und mit Ligroin versetzt. Die Kristalle werden abgesaugt und getrocknet. Man erhaelt 5.1 g (71 %) im Duennschichtchromatogramm weitgehend einheitliches N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-N-benzyloxycarbonyl-L-lysin.
48.2.
5.6 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-N£-benzyloxycarbonyl-L-lysin, 4.6 g L-Alaninbenzylester-tosylat, 1.33 g N-Methylmorpholin und 3.7 g 1-Hydroxybenzotriazol-Hydrat werden in 150 ml Tetrahydrofuran geloest und die Loesung auf 0" gekuehlt. Unter Ruehren wird dazu eine Loesung von 2.5 g Dicyclohexylcarbodiimid in 25 ml Tetrahydrofuran getropft.
Man ruehrt das Reaktionsgemisch 2 Stunden bei 0" und 1 Stunde bei Raumtemperatur. Der Niederschlag wird abfiltriert und das Filtrat wird eingedampft. Der Rueckstand wird in Essigsaeureethylester aufgenommen, die Loesung filtriert und das Filtrat mit Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung, 0.5 N Salzsaeure und Wasser gewaschen.
Das Produkt beginnt aus der organischen Phase auszufallen, diese wird eingeengt und das ausgefallene Rohprodukt durch Absaugen isoliert. Zur Reinigung wird aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 2.9 g (39 %) N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-N£-benzyloxycarbonyl-L-lysyl-L-alaninbenzylester vom Fp. 179-1810C.
48.3.
In Analogie zu Beispiel 45.2. setzt man 6.3 g des in Beispiel 48.2. erhaltenen Tripeptides mit 3.5 g Benzyloxycarbonyl-amidomethanphosphonsaeure um. Man erhaelt 6.6 g (78 %) O-(Benzyloxycarbonyl-amidomethanphosphonyl)-N-benzylOxyCarbonyl-L-seryl-N£-benzyloxycarbonyl-L-lysyl-L-alaninbenzylester vom Fp. 160-162°C(Zersetzung).
48.4.
6.5 g der in Beispiel 48.3 erhaltenen Verbindung werden in einer Mischung aus 490 ml Ethanol und 240 ml Wasser geloest und ueber 1.5 g Palladium (10 %) auf Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat eingeengt und das Rohprodukt durch Zugabe von Ethanol ausgefaellt. Man kristallisiert aus Wasser/Ethanol um und erhaelt 2.4 g (82 %) O-(AminomethanphosphonylfL-seryl-L-lysyl-L-alanin vom Fp. 186-1880C(Zersetzung) . Dem Produkt haften 5 % Ethanol und 8 % Wasser an.
1D20 = -30.7 (c = 1, H20) Beispiel 49 49.1.
In Analogie zu den Beispielen 46.1., 46.2. und 46.3. wird ausgehend von den Ausgangsmaterialien N-tert.-Butoxycarbonyl-L-prolin, L-Alaninbenzylester und N-Benzyloxycarbonyl-L-serin das geschuetzte Tripeptid N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-prolyl-L-alaninbenzylester hergestellt.
Fp. 171-1720C.
49.2.
3. 7 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-prolyl-L-alaninbenzylester werden analog Beispiel 1.4. mit 2.5 g Benzyloxycarbonylamido-methanphosphonsaeure umgesetzt. Die Reaktionsmischung wird filtriert, das Filtrat eingedampft und der Rueckstand in Essigsaeureethylester geloest und ueber Nacht im Kuhelschrank stehen gelassen. Die ausgefallenen Kristalle werden abgesaugt, das Filtrat mit Wasser versetzt und die waessrige Phase durch Zusatz von 2 N Salzsaeure angesaeuert. Die organische Phase wird abgetrennt und mit Wasser gewaschen. Das Produkt kristallisiert aus der organischen Phase aus. Es wird abgesaugt, in 100 ml Methylenchlorid suspendiert und die Suspension portionsweise mit insgesamt 1000 ml Wasser gewaschen.
Die waessrigen Phasen werden abgetrennt und verworfen.
Die Methylenchloridphase wird eingedampft. Man erhaelt 5.3 g (97 %) O-(Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-L-seryl-L-prolyl-L-alaninbenzylester als duennschichtchromatographisch praktisch einheitliche Substanz, die ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
49.3.
Analog Beispiel 48.4. werden 5.3 g der oben in Beispiel 49.2. erhaltenen Verbindung hydriert. Man erhaelt 2.6 g eines Rohprodukts, das im Duennschichtchromatogramm mehrere Flecken aufweist. 0.5 g des Rohproduktes werden ueber eine Saeule mit 750 ml Sephadex G 10 chromatographiert und die Substanz mit Wasser eluiert. Die produkthaltigen Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Man erhaelt 0.25 g O-(Aminomethanphosphonyl)-L-seryl-L-prolyl-L-alanin vom Fp. 15500(Zersetzung). Das Produkt enthaelt 10 E Wasser.
Beispiel 50 50.1.
Wie in Beispiel 49.2. beschrieben werden 7.35 g Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure mit 6.58 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serinbenzylester umgesetzt. Das Rohprodukt wird aus Essigsaeureethylester umkristallisiert. Man erhaelt 9 g (80 %) O-(Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-L-serinbenzylester, das durch etwas Dicyclohexylharnstoff verunreinigt ist und ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
50.2.
27.8 g der in Beispiel 50.1. erhaltenen Verbindung werden in einem Gemisch aus 500 ml Aceton und 200 ml Wasser geloest. Unter Eiskuehlung setzt man 95 ml 1 N NaOH hinzu und laeßt die Mischung unter Ruehren langsam auf Raumtemperatur kommen. Nach 2 Stunden wird das Aceton aus der Reaktionsmischung abdestilliert, der pH-Wert, falls noetig auf 9 gestellt und die Mischung mit Essigsaeureethylester extrahiert. Die waessrige Phase wird mit 2 N Salzsaeure angesaeuert und mit Essigsaeureethylester extrahiert. Die organische Phase wird getrocknet und eingedampft. Das Rohprodukt wird aus Essigsaeureethylester/Ether umkristallisiert. Man erhaelt 8.1 g (38 %) O-(Benzyloxycarbonvlamidomethanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-L-serin, das ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
50.3.
4.6 g O-(Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-N-benzyloxycarbonyl-L-serin werden in 50 ml Dimethylformamid geloest, mit 2.34 g L-Alanyl-L-alaninamid-Hydrochlorid und 1.21 g Triethylamin versetzt. Dazu tropft man unter Eiskuehlung eine Loesung von 2.26 g Dicyclohexylcarbodiimid in 5 ml Dimethylformamid zu und laeßt dann das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur aufwaermen.
Nach 2 Stunden Reaktionszeit wird der Niederschlag abgesaugt und das Filtrat mit Ether versetzt. Es faellt ein oeliger Niederschlag aus. Der Ether wird abdekantiert und der Rueckstand zwischen Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung und Essigsaeureethylester verteilt. Die organische Phase wird abgetrennt und die waessrige Phase nochmals mit Essigsaeureethylester extrahiert. Die Wasserphase wird mit 2 N Salzsaeure angesaeuert, der ausgefallene Niederschlag wird abgesaugt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhaelt 4.9 g (80 i) O-(Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-N-benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninamid vom Fp. 211-2120C (Zersetzung).
50.4.
Analog Beispiel 48.4. wird O-(Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl) -N-benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninamid hydriert. Das Rohprodukt wird durch Umkristallisation aus Ethanol/Wasser gereinigt. Man erhaelt O-(Aminomethanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alaninamid vom Schmelzpunkt 1650C(Zersetzung), das nach Duennschichtchromatographie eine Reinheit von etwa 80 % aufweist.
[α]D20 = -51.9° (c = 1, H2O) Beispiel 51 51 .1 2.3 g N-tert.-Butoxycarbonyl-L-asparagin und 3.5 g L-Alaninbenzylester-Tosylat werden in 58 ml getrocknetem Tetrahydrofuran geloest und mit 1. 1 ml N-Methylmorpholin und 3.06 g 1-Hydroxybenzotriazol . Hydrat versetzt. Man kuehlt das Gemisch auf OOC ab, gibt eine Loesung von 2.3 g Dicyclohexylcarbodiimid in 20 ml Tetrahydrofuran zu und ruehrt 2 Stunden bei 0° und 2 Stunden bei Raumtemperatur. Der Niederschlag wird abgesaugt, das Filtrat eingedampft und der Rueckstand in wenig Essigsaeureethylester aufgenommen. Eine weitere Menge Niederschlag wird abgetrennt und das Filtrat mit Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung, Sproz. Zitronensaeureloesung und Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhaelt 3.1 g (79 %) N-tert.-Butoxycarbonyl-asparaginyl-L-alaninbenzylester, das zur Weiterverarbeitung rein genug ist.
51.2.
7. 3 g N-tert . -Butyloxycarbonyl-L-asparaginyl-L-alanylbenzylester werden unter Kuehlung in 55 ml Trifluoressigsaeure geloest und die Loesung 30 min bei 00 und 60 min bei Raumtemperatur geruehrt. Die Loesung wird eingedampft und das verbleibende Oel wird durch Digerieren mit Ether von ueberschuessiger Trifluoressigsaeure befreit. Man erhaelt 7 g oeliges L-Asparaginyl-L-alaninbenzylester-Trifluoracetat, das ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
51.3.
Analog Beispiel 1.3. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und L-Asparaginyl-L-alaninbenzylester-Trifluoracetat N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-asparaginyl-L-alaninbenzylester, der im Duennschichtchromatogramm noch Spuren von Verunreinigungen zeigt und ohne weitere Reinigung verwendet wird.
51.4.
Analog den Beispielen 1.4. und 1.5. erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-asparaginyl-L-alaninbenzylester und Methanphosphonsaeure O-(Methanphosphonyl) -L-seryl-L-asparaginyl-L-alanin. Das Rohprodukt der Hydrierungsreaktion wird durch Chromatographie an dem stark sauren Ionenaustauscher DOWEX-50, H+-Form gereinigt.
Die Saeule wird zunaechst mit Wasser gewaschen, dann wird mit 1 N Ameisensaeure und spaeter mit 2 N Ameisensaeure eluiert. Die produkthaltigen Fraktionen werden vereinigt und eingdampft. Das isolierte Produkt enthaelt je 1/2 mol Ameisensaeure und Wasser und schmilzt bei 1450C(Zersetzung).
[a]20 = ~35 7° (c = 1, H20) Beispiel 52 52.1 Analog Beispiel 1.3. erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-L-threonin und L-Alanyl-L-alaninbenzylester-Hydrochlorid N-Benzyloxycarbonyl-L-threonyl-L-alanyl-L-alaninbenzylester, der analog Beispiel 49.2. mzt Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure umgesetzt wird.
Man erhaelt O-(Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-N-threonyl-L-alanyl-L-alaninbenzylester, das zur Reinigung aus Methanol umkristallisiert wird. Das gereinigte Produkt enthaelt aber immer noch Dicyclohexylharnstoff und wird ohne zusaetzliche Reinigungsschritte weiterverarbeitet.
52.2.
5 g O-(BenzylOxycarbonylamidomethanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-L-threonyl-L-alanyl-L-alaninbenzylester werden in 450 ml Methanol und 100 ml Wasser geloest und ueber 1 g Palladium (10 %) auf Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Man nimmt den Rueckstand in Wasser auf, filtriert vom ungeloesten Dicyclohexylharnstoff ab und dampft erneut ein. Der Rueckstand wird aus Wasser/Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 0.9 g O-(Aminomethanphosphonyl)-L-threonyl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 178-1880C(Zersetzung) . Dem Produkt haften 0.5 mol Ethanol und 1 mol Wasser an.
[α]D20 = -42.70 (c = 1, H20) Beispiel 53 53.1.
Analog Beispiel 1.3. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-N-methyl-L-serin und L-Alanyl-L-alaninbenzylester-Tosylat N-BenzylOxycarbonyl-N-methyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie an Kieselgel mit Essigsaeureethylester als Elutionsmittel gereinigt. Man erhaelt ein oeliges duennschichtchromatographisch einheitliches Produkt.
53. 2.
4.0 g N-Benzyloxycarbonyl-N-methyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester und 3.0 g Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure werden in 80 ml trockenem Pyridin geloest, mit einer Loesung von .5.1 g Dicyclohexylcarbodiimid in 25 ml trockenem Pyridin versetzt und 4 Stunden bei Raumtemperatur geruehrt. Der Niederschlag wird abfiltriert, das Filtrat eingedampft und der Rueckstand in Essigsaeureethylester aufgenommen. Man laeßt einige Zeit in der Kaelte stehen und filtriert eine weitere Menge Niederschlag ab. Das Filtrat wird eingedampft und der Rueckstand unter Zusatz von wenig Aceton in Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung geloest. Die waessrige Phase wird mit Ether extrahiert. Die Etherextrakte werden verworfen.
Nun extrahiert man das Produkt mit Essigsaeureethylester.
Der Extrakt wird mit 1 N Salzsaeure und Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rueckstand wird durch Digerieren mit Ether gereinigt und ist fuer die Weiterverarbeitung rein genug. Man erhaelt 4.2 g (72 %) O-(BenzylOxycarbonylamidomethanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-N-methyl-L-seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester.
53.3.
Analog Beispiel 48.4. wird das in Abschnitt 53.2. erhaltene Produkt hydriert. Man erhaelt O-(Aminomethanphosphonyl)-N-methyl-L-seryl-L-alanyl-L-alanin vom Fp. 145-1830C(Zersetzung).
Dem Produkt haften 0.5 mol Wasser und 0.5 mol Ethanol an.
[a]D20 = 64.60 (c = 1, H20) BeisPiel 54 54. 1.
Analog Beispiel 1.3. setzt man 11.5 g S-Benzyl-N-tert.-butoxycarbonyl-L-cystein mit 10.2 g L-alanyl-L-alanintert.-butylester-Acetat um. Man erhaelt 11.2 g (60 %) S-Benzyl-N-tert.-butoxy-carbonyl-L-cysteinyl-L-alanyl-L-alanin-tert.-butylester vom Fp. 152-1550C. Zur Reinigung wird aus Essigsaeureethylester umkristallisiert.
54.2.
In 3 Ansaetzen werden jeweils 2.5 g S-Benzyl-N-tert.-butoxycarbonyl-L-cysteinyl-L-alanyl-L-alanin-tert. -butylester in 100 ml trockenem Ammoniak geloest und bei der Siedetemperatur des Ammoniaks durch Zugabe von 0.23 g Natrium reduziert. Der Ammoniak wird abdestilliert, der Rueckstand in eiskaltem Wasser geloest und der pH-Wert der Loesung mit 1 N Salzsaeure auf 7-8 gestellt. Die waessrige Phase wird mit Essigsaeureethylester extrahiert, vom ungeloest bleibenden Ausgangsmaterial wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der Rueckstand wird mit Ligroin digeriert. Man erhaelt insgesamt 3.5 g (57 %) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-cysteinyl-L-alanyl-Lalanin-tert.-butylester, das laut Duennschichtchromatogramm noch etwas verunreinigt ist, aber fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
54.3.
3. 5 g N-tert. -Butoxycarbonyl-L-cysteinyl-L-alanyl-L-alanintert.-butylester und 3.1 g Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure werden in 66 ml trockenem Pyridin unter Ausschluß von Luftsauerstoff geloest und mit einer Loesung von 7.75 g Dicyclohexylcarbodiimid in 77 ml trockenem Pyridin versetzt. Man ruehrt das Gemisch 3 Tage bei Raumtemperatur, filtriert den Niederschlag ab und dampft das Filtrat ein.
Der Rueckstand wird in Sproz. Natriumhydrogencarbonatloesung geloest. Die alkalische Wasserphase wird zunaechst mit Ether extrahiert. Die Etherphase wird verworfen. Dann wird mit Methylenchlorid extrahiert. Ein Teil des Produktes laeßt sich extrahieren. Die waessrige Phase wird 1 N Salzsaeure auf pH 3 gestellt und mitMethylenchlorid extrahiert.
Die Methylenchloridphasen werden vereinigt, mit 1 N Salzsaeure und Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft.
Der Rueckstand wird mit Ether/Ligroin digeriert, abgesaugt und mit Ligroin gewaschen. Man erhaelt 1.6 g (30 %) S-(BenzylOxyCarbonylamidomethanphosphonyl)-N-tert.-butylOxycarbonyl-L-cysteinyl-L-alanyl-L-alanin-tert.-butylester.
Das Rohprodukt wird ohne Reinigung weiterverarbeitet.
54.4.
0.8 g S- (Benzllloxycarbonylamidomethanphosphonyl -N-tert.-butyloxycarbonyl-L-cysteinyl-L-alanyl-Lalanin-tert . -butylester werden unter Eiskuehlung in 16 ml 4Oooz. Bromwasserstoff in Eisessig geloest. Man ruehrt das Gemisch 1 Stunde bei Eisbadtemperatur und 1 Stunde bei Raumtemperatur und faellt dann durch Zugabe von Diethylether das Produkt aus.
Der Niederschlag wird abfiltriert und gut mit Ether gewaschen. Das Hydrobromid wird in wenig Wasser geloest und ueber den schwach basischen Ionenaustauscher IR 45 in der Acetat-Form abfiltriert. Man eluiert mit Wasser, vereinigt die produkthaltigen Fraktionen und unterwirft sie der Gefriertrocknung. Das so erhaltene Produkt wird mit Ethanol verruehrt, abgesaugt und getrocknet. Man erhaelt 0.12 g (26 %) 5- (Aminomethanphosphonyl)-L-cysteinyl-L-alanyl-L-alanin, das noch 1 mol Wasser und nach dem Kernresonanzspektrum noch 15 % Aminomethanphosphonsaeure enthaelt.
Das Produkt schmilzt ab 247"C unter Zersetzung.
Beispiel 55 55.1.
In Analogie zu Beispiel 1.1. erhaelt man ausgehend von N-tert. -Butoxycarbonyl-L-alanin und L-Serin-p-nitrobenzylester-Tosylat N-tert.-Butoxycarbonyl-L-alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester. Abspaltung der N-tert.-Butoxycarbonylgruppe durch Chlorwasserstoff in Ether gemaeß Beispiel 1.2. liefert L-Alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester-Hydrochlorid.
55.2.
N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin wird analog Beispiel 1.3. mit L-Alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester . Hydrochlorid umgesetzt. Als Loesungsmittel verwendet man Tetrahydrofuran.
Zur Reinigung wird das aus der Reaktionsmischung ausgefallene Rohprodukt in Ethanol suspendiert, 30 min geruehrt und abgesaugt. Man erhaelt duennschichtchromatographisch einheitlichen N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester vom Fp. 225-226°C.
55.3.
3.9 g 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamido)-ethanphosphonsaeure werden analog Beispiel 45.2. mit 5.2 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-serin-p-nitro-benzylester umgesetzt.
Das Rohprodukt wird aus Ethanol/Ether umkristallisiert.
Man erhaelt 6.2 g (82 %) N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-O- ( (lR,S-1-benzyloxycarbonylamido) ethanphosphonyl) -L-seryl-p-nitrobenzylester, der fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
55.4.
Hydrierung von 6.2 g der in Beispiel 55.3. erhaltenen Verbindung analog Beispiel 45.3. liefert ein Produkt, das aus einer konzentrierten waessrigen Loesung unter Zusatz von Ethanol auskristallisiert. Man erhaelt 2.9 g (99 %) L-Alanyl-L-alanyl-O- (1R,S-1-amino-ethanphosphonyl) -L-serin vom Fp. 175-180°C (Zersetzung).
[c120 = -9.3° (c = 1, H20) Beispiel 56 Analog Beispiel 55.3. und 55.4. erhaelt man unter Verwendung von 1S-1-(Benzyloxycarbonylamido)-ethanphosphonsaeure statt der 1R,S-Verbindung L-Alanyl-L-alanyl-O-(1S-l-aminoethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 780-1850C(Zersetzung) . Das Produkt enthaelt 12 % Wasser.
[α]D20 = -10.1° (c = 1, H2O) Beispiel 57 Analog Beispiel 55.3. und 55.4. erhaelt man unter Verwendung von Ethanphosphonsaeure L-Alanyl-L-alanyl-O-(ethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 18300(,Zersetzung) Beispiel 58 Analog Beispiel 55.3. und 55.4. erhaelt man unter Verwendung von Methanphosphonsaeure L-Alanyl-L-alanyl-O-(methanphosphonyl)-L-serin als Dihydrat vom Fp. 18600 (Zersetzung).
[a] 20 = -70.20 (c = 1, H20) D Beispiel 59 59.1.
Analog Beispiel 1.1. erhaelt man aus N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin und L-Serin-p-nitrobenzylester N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester. Das Rohprodukt wird aus Ethanol umkristallisiert und ist nach dem Duennschichtchromatogramm fuer die Weiterverarbeitung rein genug.
59.2.
Analog Beispiel 1.4. liefert die Umsetzung von Methanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-serin-pnitrobenzylester N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-O-(methanphosphonyl)-L-serin-p-nitrobenzylester, der ohne weitere Reinigung gemaeß Beispiel 1.5. hydriert wird. Man erhaelt L-Alanyl-O-(methanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 15000 (Zersetzung) [α]D20 = +14.5° (c = 1, H2O) Beispiel 60 Verwendet man statt Methanphosphonsaeure in Beispiel 59.2.
1R,S4iBenzyloxycarbonylamido)-ethanphosphonsaeure, so erhaelt man L-Alanyl-O-(1R,S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin als Monohydrat vom Fp. 163-167°C(Zersetzung).
[a] 2 0 = +20.80 (c = 1 , H20) D Beispiel 61 Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 0.92 g L-Alanyl-L-alaninbenzylester . Hydrochlorid und de in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus 0.8 q D,L-(N-Benzyloxycarbonyl-amethyl)serin und 0.42 ml Ohlorameisensaeureisobutylester 1.4 g sirupoesen D,L-(N-Benzyloxycarbonyl-α-methyl)seryl-L-alanyl-L-alaninbenzylester, aus dem man analog Beispiel 11.4. mit 0.7 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphon saeure (mittels 1.78 g Dicyclohexylcarbodiimid) 1.38 g glasig, harten Monoester als Rohprodukt bekommt. Nach Hydrierung dieser Substanz analog Beispiel 11.5. fallen 0.41 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit D,L-(a-Methyl)-seryl-L-alanyl-L-alanin an, wobei 1.5 mol Wasser und 0.3 mol Ethanol pro mol Substanz addiert sind.
Fp. ab 182°C, Zers.
Synthese von D,L-(N-Benzyloxycarbonyl-α-methyl)-serin: 0.6 g rohes D,L-«-Methylserin (Fp. 258/2620C) suspendiert man in 15 ml Wasser, gibt bis pH 11 2 N NaOH zu, wobei Loesung eintritt, tropft nun bei 0°C in 2 Stunden 2.33 ml Chlorameisensaeurebenzylester zu, laeßt 2 h bei 0°C nachruehren (pH bei 11 halten!), extrahiert dann mit Ether, saeuert die Wasserphase auf pH 1.7 an, extrahiert mit Essigester, dampft die vereinigten, org. Extrakte im Vac. ein und erhaelt so D,L-(N-Benzyloxycarbonyl-α-methyl)-serin als Rohprodukt.
Beispiel 62 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 1.28 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-prolin-benzylester (Fp. 110/112"C) und 0.81 g Benzyloxycarbonylamino-methanphosphonsaeure (mittels 1.86 g Dicyclohexylcarbodiimid) 2.06 g rohen Monoester vom Fp. 72/750C). 2.6 g dieser Substanz liefern nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. 0.57 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-prolin (als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 0.25 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. 140/1450C, Zers.
Herstellung des N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-prolinbenzylesters: Aus dem in situ aus 1.44 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin (in 60 ml Methylenchlorid und 0.66 ml N-Methylmorpholin und 0.78 ml Chlorameisensaeureisobutylester in 15 ml Methylenchlorid in 30 min bei -:OOC) hergestellten, gemischten Anhydrid und 1.46 g L-Prolin-benzylester . Hydrochlorid (Fp. 1450C) erhaelt man analog Beispiel 11.3. und nach Anreiben mit Ether 1.8 g N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-prolin-benzylester als Rohprodukt vom Fp. 110/112"C.
Beispiel 63 Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 3.7 g rohem N-t-Butoxycarbonyl-L-a-phenylglycin (hergestellt analog Beispiel 11.1.) in 150 ml Methylenchlorid mit 1.9 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, aus dem man mit 5.2 g L-Alanin-benzylester . p-Toluolsulfonat 6 g rohen N-t-Butoxycarbonyl-L-phenylglycvl-L-alanin-benzylester gewinnt.
Diese Substanz loest man in 60 ml Ether, versetzt bei 0°C mit 60 ml 6 N etherischer HCl, laeßt 15 min bei 0°C und 12 Stunden bei 25"C stehen und saugt das ausgefallene Kristallisat ab (3.99 g), naemlich den rohen L-Phenylglycyl-L-alanin-benzylester (Fp. 184/190"C). 3.9 g dieser Substanz laeßt man analog Beispiel 11.3. mit dem aus 3.3 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serin und 1.8 ml Chlorameisensaeureisobutylester in 300 ml Methylenchlorid in situ erzeugten, gemischten Anhydrid reagieren und gewinnt so 5.27 g rohen N-BenzylOxyCarbonyl-L-seryl-L-phenylglycyl-L-alanin-benzylester, von dem 3.81 g mit 1.85 g D,L-1-(Benzyloxycarbonylamino)-ethanphosphonsaeure analog Beispiel 11.4. (mittels 4.45 g Dicyclohexylcarbodiimid in 100 ml abs. Pyridin) zum rohen Monoester umgesetzt werden (3.46 g).
3 g davon erbringen nach Hydrierung analog Beispiel 11.5.
(in 400 ml Methanol-H20 3:1) den Monoester der D,L-1-Aminoethanphosphonsaeure mit L-Seryl-L-a-phenl-glycyl-alanin (1 g) als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 0.33 mol Ethanol pro mol Substanz. Fp. ab 175°C, Zers.
Beispiel 64 5.9 g L-Glutaminsaeure-y-benzylester in 100 ml 1 N waessr.
NaHCO3-Loesung suspendiert, ruehrt man 10 min, tropft dann in 4 bis 5 Stunden 11.7 ml einer Soproz. Loesung von Chlorameisensaeurebenzylester in Toluol zu, ruehrt 1 Stunde nach, extrahiert mehrmals mit Ether, stellt die Wasserphase mit halbkonz. HOl auf pH 2, extrahiert 3 mal mit Methylenchlorid, dampft die vereinigten org. Extraktloesungen ein und erhaelt so 7.69 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-glutaminsaeurey-benzylester. Aus einer Loesung von 11.3 g dieser Substanz in 300 ml Methylenchlorid stellt man mit 3.9 ml Chlorameisensaeureisobutylester in Analogie zu Beispiel 11.3. das gemischte Anhydrid her (bei -200C), welches man mit 9.06 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) umsetzt und so 16.75 g (N-Benzyloxycarbonyl-y-benzyl)~L~ glutamyl-L-alanyl-L-serin-benzylester erhaelt. 21.42 g liefern nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (600 g Gel; Methylenchlorid + 5 % Methanol als Laufmittel) 15.8 g vom Fp. 123/1260C.
Analog Beispiel 11.4. erzielt man mit 3.08 g dieser Substanz und 1.23 g N-(Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (140 ml abs. Pyridin, 3.2 g Dicyclohexylcarbodiimid und 48 Stunden Stehen) nach schließlichem Faellen der stark eingeengten Essigesterloesung mit Ether 1.47 g Ausbeute an rohem Monoester. 3 g dieser Substanz hydriert man analog Beispiel 11.5. (in 400 ml Methanol-H20 3:1) und erreicht so eine Ausbeute von 1.12 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit L-Glutaminyl-L-alanyl-L-serin als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 0.66 mol Ethanol pro mol Substanz. Fp. ab 165°C, Zers.
Beispiel 65 Analog Beispiel 11.3. erhaelt man aus 1.21 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid nach Umsatz mit dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin und 0.52 ml Chlorameisensaeureisobutylester 1.4 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-serinbenzylester vom Fp. 188/1900C, Zers., der nach Reaktion mit 0.81 g N-Benzyloxvcarbonylamino-methanphosphonsaeure (mittels 1.86 g Dicyclohexylcarbodiimid) analog Beispiel 11.4. 1.7 g rohen Monoester ergibt (Fp. 224/228"C). Nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (in 170 ml Methanol-Wasser 3:1, 40 min) gewinnt man daraus 0.6 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Alanyl-L-alanyl-L-serin als Addukt von 1.5 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol pro mol Substanz. Fp. 172/1800C, Zers.
Beispiel 66 Analog Beispiel 11.2. wird aus 1.89 g rohem t-Butoxycarbonyl-sarcosin (Fp. 80"C) und 1.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester (100 ml Methylenchlorid, 1.1 ml N-Methylmorpholin bei -20°C, 30 min) in situ das gemischte Anhydrid erhalten, welches mit 2.31 g L-Serin-benzylester . Hydrochlorid (in 100 ml Methylenchlorid und 1.1 ml N-Methylmorpholin) umgesetzt, 3.56 g rohen N-(t-Butoxycarbonyl)-sarcosyl-L-serinbenzylester als gelbliches Oel ergibt. Analog wie bei Beispiel 63 beschrieben gewinnt man daraus mit etherischer HOl 2.35 g rohes Sarcosyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid vom Fp. 156/1620C.
Analog Beispiel 11.3. erhaelt man nach Reaktion (48 Stunden, 25"C) von 6 g dieser Substanz in 200 ml abs. Tetrahydrofuran mit dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus 4.48 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin (in 200 ml abs. Tetrahydrofuran und 2.2 ml N-Methylmorpholin) und 2.6 ml Chlorameisensaeureisobutylester (bei -20°C, 0.5 Stunden) anschließendem Eindampfen der filtrierten Loesung im Vacuum, Loesen dieses Eindampfrueckstandes in 200 ml Methylenchlorid und Aufarbeitung analog Beispiel 11.3. 4.83 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-sarcosyl-L-serin-benzylester vom Fp. 117/ 119"C.
Analog Beispiel 11.4. kann man aus 4.71 g dieser Substanz und 2.45 g (Benzyloxycarbonyl-amino) -methanphosphonsaeure (100 ml Pyridin, 6.5 g Dicyclohexylcarbodiimid; 48 Stunden bei 250C) 3.98 g rohen Monoester bereiten, von dem 3.8 g nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. 1.2 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Alanyl-sarcosyl-L-serin liefert (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol pro mol Substanz). Fp. ab 157°C, Zers.
Beispiel 67 Analog Beispiel 11.3. gewinnt man aus dem aus 0.9 g N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin und 0.52 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ bereiteten, gemischten Anhydrid und 1.21 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid 1. 6 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-alanyl-L-serinbenzylester vom Fp. 162/1660C, von dem 1.41 g analog Beispiel 11.4. mit 0.82 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (mittels 1.88 g Dicyclohexylcarbodiimid) umgesetzt, 1.5 g rohen Monoester liefern. Dessen Hydrierung ananlog Beispiel 11.5. (in 150 ml Methanol-H20 3:1, 40 min) erbringt 0.5 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit Sarcosyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. ab 165°C, Zers.
Beispiel 68 Analog Beispiel 11.3. erzeugt man aus dem in situ erhaltenen, gemischten Anhydrid aus N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalin (F-, 850C) und 0.98 ml Chlorameisensaeureisobutylester (0.5 Stunden, -10°C) und 1.75 g L-Serin-benzylester . Hydrochlorid 3.05 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-serin benzylester vom Fp. 145/147"C, der analog Beispiel 11.4. mit 1. 9 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure umgesetzt, 3.1 g rohen Monoester vom Fp. 160/1660C liefert und welcher nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (in 300 ml Methanol-H20 3:1) 1 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Norvalyl-L-serin ergibt (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/4 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. 188/1920C, Zers.
Beispiel 69 Analog Beispiel 11.3. kann man aus dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus rohem N-Benzyloxycarbonyl-L-prolin (Fp. 77/800C) und 0.52 ml Chlorameisensaeureisobutylester (0.5 Stunden bei -10°C), und L-Alanyl-L-serin-benzylester Hydrochlorid 1.7 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-alanyl-L-serin-benzylester vom Fp. 108/114°C erhalten.
Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 1.49 g dieser Substanz und 0.82 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (nach 30 Stunden Reaktionszeit bei 23"C) 1.2 g rohen Monoester vom Fp. 103/1060C, der nach Hydrierung (in 120 ml Methanol-Wasser 3:1) analog Beispiel 11.5. 0.32 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit L-Prolyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 1/4 mol Ethanol pro mol Substanz) liefert.
Fp. 150/16000, Zers.
Beispiel 70 Analog Beispiel 11.1. setzt man 5.8 g L-Norvalin mit 17.1 g t-Butyl-2,4,5-trichlorphenylcarbonat um (2 h, 60-650C), destilliert dann das t-Butanol ab, extrahiert die Wasserphase mit Ether, stellt sie dann mit Zitronensaeure auf pH 3 und arbeitet analog Beispiel 11.1. auf, wobei 8.86 g N-t-Butoxycarbonyl-L-norvalin als Rohprodukt anfallen.
Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 4 g dieser Substanz mit 2.4 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, aus dem man mit 4.26 g L-Serin-benzylester . Hydrochlorid und schließlichem Faellen des in Ether geloesten Reaktionsproduktes mit Petrolether 6.5 g N-t-Butoxycarbonyl-L-norvalyl-L- serin-benzylester als Rohprodukt gewinnt und von dem man aus 5 g , analog wie in Beispiel 63 beschrieben (in 20 ml Ether und 32 ml etherischer 6 N HCl, 3 h 250C), 4.66 g rohes L-Norvalyl-L-serinbenzylester . Hydrochlorid vom Fp. 173/1770C bekommen kann. Aus 3.3 g dieser Substanz erzielt man, analog Beispiel 11.3., mit dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus 2.23 g N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin und 1.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester eine Ausbeute von 4.35 g N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester als Rohprodukt, von dem 3.6 g mit 1.76 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure analog Beispiel 11.4.
(mittels 4.45 g Dicyclohexylcarbodiimid) 1.85 g rohen Monoester entstehen lassen (nach Anreiben mit Petrolether).
Nach Hydrierung von 1.7 g davon (analog Beispiel 11.5.) fallen 0.7 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit Sarcosyl-L-norvalyl-L-serin (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/6 mol' Ethanol pro mol Substanz) an.
Fp. ab 172°C, Zers.
Beispiel 71 Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 2.45 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester (Beispiel 70) und 1.3 g roher D-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure (Fp. 125/1270C) (100 ml abs. Pyridin, 5.1 g Dicyclohexylcarbodiimid) und Ausfaellen des in wenig Essigester geloesten Reaktionsproduktes mit Petrolether 2.25 c rohen Monoester, von dem 2 g, analog Beispiel 11.5. hydriert (0.5 g 10 % Pd-C-Katalysator, 15 min) und das rohe Reaktionsprodukt mit Ether angerieben, 0.66 g Monoester der D-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit Sarcosyl-L-norvalyl-L-serin liefern (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. ab 1740C, Zers.
Die Herstellung der D-1-( Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure aus 7.5 g D-1-Amino-ethanphosphonsaeure (Fp. 288/2920C, Zers.) und 12.7 ml Chlorameisensaeurebenzylester geschieht analog wie bei Beispiel 15 a beschrieben, nur daß der Ansatz nicht ueber Nacht stehen bleibt. Die Ausbeute (nach Faellen des Reaktionsproduktes aus einer Lsg. in 35 ml Essigester mittels 60 ml n-Hexan) ist 11.15 g (Fp. 125/1270C).
Beispiel 72 Analog Beispiel 11.4. bekommt man aus 2.45 g rohen N-BenzyloxyCarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester (Beispiel 70) und 1.3 g roher L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure (nach Faellen des Reaktionsrodutes aus einer angereicherten Loesung in Essigester mittels Petrolether) 2.1 g rohen Monoester, von dem 2 g nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (vergl. Beispiel 71) 0.57 g Monoester der L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit Sarcosyl-L-norvalyl-L-serin ergeben (Fp. ab 176"C Zers.) u. zwar als Dihydrat Die Herstellung der L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure aus 5 g L-1-Amino-ethanphosphonsaeure (Fp. 283/2900C, Zers.) und 8.5 ml Chlorameisensaeurebenzylester erfolgt analog der Arbeitsweise, wie sie bei Beispiel 71, dargestellt ist. Die Ausbeute an roher Substanz (nach Faellen aus einer Loesung in 25 ml Essigester mit Petrolether betraegt) 7.45 g (Fp. 128/13100).
Beispiel 73 Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 1.89 g N-t-Butoxycarbonyl-alanin und 1.3 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, aus dem durch Reaktion mit 2.31 g L-Serin-benzylester . Hydrochlorid 3.35 g roher N-t-Butoxycarbonyl-L-alanyl-L-serin-benzylester entsteht.
Aus 18.3 g dieser Substanz und 12.3 g (Benzyloxycarbonylamino)-methanphosphonsaeure erhaelt man analog Beispiel 11.4.
15.2 g rohen Monoester vom Fp. 124/1250C. 1.97 g davon loest man in 20 ml Tetrahydrofuran und 60 ml Ether, versetzt bei 0°C mit 15 ml 6 N etherischer HCl, ruehrt 15 min bei OOC und 1 Stunde bei Raumtemperatur nach, dampft dann im Vacuum ein, loest den Eindampfrueckstand in ca. 30 ml Ethanol, gibt bis pH 6 Propenoxid zu, engt dann im Vacuum auf etwa 10 ml ein und faellt durch Etherzugabe 1.07 g rohen Monoester der (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure mit L-Alanyl-L-serin-benzylester (Fp. 720C, Zers.) aus. Diese Substanz (1.02 g) loest man in 34 ml Ethanol-Wasser 1:2, gibt 0.57 g NaHCO3 zu und tropft dazu eine Loesung von 0.76 g N-Benzyloxycarbonyl- (P-4-hydroxy-S-prolin-hydroxysuccinimidester in 34 ml Ethanol, ruehrt 2 Stunden nach, destilliert das Ethanol im Vacuum ab, extrahiert die Wasserphase mehrmals mit Essigester, waescht die vereinigten org. Phasen mit 5 t waessr. iQaHCO3 und dann mit 0.5 N HCl, trocknet mit lea2SO4, dampft den Essigester im Vacuum ab, reibt den Eindampfrueckstand mit Petrolether an und erhaelt so 0.4 g rohen Monoester der (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure mit N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-hydroxy-S-prolyl)-L-alanyl-L-serin-benzylester.
0.35 g davon liefern nach Hydrierung analog Beispiel 11.5.
(in 60 ml Methanol-H20 2:1, 30 min) 0.06 g Monoester der rnino-methanphosphonsaeure mit 4R-4-Hydroxy-S-proyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/5 mol Ethanol pro mol Substanz). Fp. ab 168°C, Zers.
Synthese von N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-hydroxy-S-proli hydroxysuccinimidester: 2.62 g R-4-Hydroxy-S-prolin loest man in 80 ml 1 N, waessr.
NaHCO3, tropft in 4 Stunden 9.32 ml Chlorameisensaeurebenzylester (als 50 % Loesung in Toluol) zu, ruehrt 1 h nach, extrahiert 2 mal mit Ether, stellt mit HOl auf pH 2, extrahiert dann mit Essigester und erhaelt nach Eindampfen dieser org. Loesung 4.71 g glasig, harten Rueckstand von rohem N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-hydroxy-S-prolin).
Zu 6.7 g dieser Substanz in 21 ml Methylenchlorid und 3.04 g N-Hydroxysuccinimid in 15 ml Tetrahydrofuran tropft man bei -10°C eine Loesung von 5.43 g Dicyclohexylcarbodiimid in 13 ml Methylenchlorid, ruehrt 2 h bei -10°C, 1 h bei -5°C, 1 h bei 0°C nach, laeßt ueber Nacht bei 20°C stehen, saugt das entstandene Kristallisat ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, extrahiert die org. Phase mit 5 % waessr. NaHCO3 und mit Wasser, dampft nach Trocknen den Essigester ab und erhaelt so 8.1 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-hydroxy-S-prolin)-hydroxysuccinimidester.
Beispiel 74 Analog Beispiel 11.3. gewinnt man aus 1.1 g rohem N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-methoxy-S-prolin) und 0.51 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, aus dem man nach Reaktion mit 1.18 g L-Alanyl-L-serin-benzylester Hydrochlorid 0.7 g rohen N-Benzyloxycarbonvl-(R-4-methoxy-S-prolyl)-L-alanyl-L-serin-benzylester (Fp. 156/1580C) bekommt.
Analog Beispiel 11.4. erhaelt man aus 2.16 g dieser Substanz und 1 g (Benzyloxycarbonyl-amino) -methanphosphonsaeure (2.56 g Dicyclohexylcarbodiimid, 80 ml abs. Pyridin) schlieB-lich nach Faellen des Reaktionsproduktes aus der eingeengten Essigesterloesung mit Ether 1.93 g rohen Monoester, von dem 0.9 g nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (in 900 ml Methanol-Wasser 2:1 mit 0.5 g 10 % Pd-C-Xatalysator) 0.3 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit R-4-Methoxy-S-prolyl-L-alanyl-L-serin ergibt (als Addukt mit 2 mol Wasser pro mol Substanz). Fp. ab 1700C, Zers.
Herstellung von N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-methoxy-S-prolin): Eine Suspension von 1.17 g N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-hydroxy-S-prolln) (Synthese in Beispiel 73), 2.3 g Ag,O und 2.82 g 0H3J in 8 ml Aceton erwaermt man 6 Stunden auf 30-35°C, saugt dann ab, dampft das Filtrat ein, gibt erneut 1.4 g Ag2O, 1.72 g 0H3J und 6 ml Aceton zu und erwaermt nochmals 6 h auf 30-35°C, saugt nach Stehen ueber Nacht ab, dampft das Filtrat ein und erhaelt so rohen N-Benzyloxycarbonyl-(R-4-methoxy-S-prolin)-methylester. Man loest diesen in 20 ml Methanol, gibt 5.6 ml 1 N NaOH zu, ruehrt 1 h nach, stellt dann auf pH 4, engt auf etwa 6 ml ein, gibt 12 ml Wasser zu, extrahiert das ausgeschiedene Oel mit Essigester, dampft diesen ein, wobei 1.1 g gelbes Oel verbleibt, naemlich das Rohprodukt der gewuenschten Substanz.
3einzel 75 3.02 c rohes L-a-Phenyl-glycin (Fp. 2900C) suspendiert man in 100 ml Wasser, stellt mit 4 N NaOH auf pH 11, tropft zu der so erhaltenen Loesung 4.68 g Chlorameisensaeurebenzylester (bei 0 bis +5°C), wobei der pH-Wert auf 10 gehalten wird, extrahiert dann wiederholt mit Ether, stellt die Wasserphase auf pH 1.5, saugte das ausgefallene Kristallisat ab und erhaelt nach Waschen mit Petrolether 2.45 g rohes N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin vom Fp. 118/123°C.
Dieses ergibt analog Beispiel 11.3. mit 1.1 ml Chlorameisensaeureisobutylester das gemischte Anhydrid in situ, welches dann nach Reaktion mit 2.54 g rohem L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid sofort 1.98 g Kristallisat (nach Waschen mit Wasser und Ether) vom Fp. 161/1630C liefert. Aus der Methylenchloridmutterlauge davon gewinnt man nach der angegebenen Aufarbeitung weitere 1.22 g der gleichen Substanz, welche nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (Laufmittel: Essigester) ebenfalls bei 161/163°C schmilzt (0.64 g); es ist N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycyl-L-alanyl-L-serinbenzylester.
2.62 g dieser Substanz ergeben nach Umsetzung mit 1.28 g D,L-1- (Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure analog Beispiel 11.4. 1.5 g rohen Monoester, aus dem nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. 0.58 g Monoester der D,L-1-Aminoethanphosphonsaeure mit L-a-Phenyl-glycyl-L-alanyl-L-serin erhalten werden (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol pro mol Substanz). Fp. ab 185"C, Zers.
Beispiel 76 Aus 28 g D,L-Serin, sowie 260 ml Methanol und 69.6 ml SOC12 erhaelt man nach 2 Tagen bei 230C 39.3 g rohes D,L-Serinmethylester . Hydrochlorid vom Fp. 137/1400C. 30 g davon traegt man in eine Suspension von 45 g PC15 in 180 ml Chloroform bei OOC ein, ruehrt 4 Stunden bei OOC nach, laeßt die erhaltene Loesung ueber Nacht stehen, kuehlt auf 0°C ein und faellt mit Ether 27.75 g rohes D,L-2-Amino-3-chlorpropionsaeure-methylester . Hydrochlorid vom Fp. 130/134°C aus.
Zu einer Loesung aus 25 g dieser Substanz in 148 ml Wasser gibt man portionsweise 36.2 g NaHOC3, tropft in 30 min 24 ml Chlorameisensaeurebenzylester zu, ruehrt 4 Stunden nach, saugt ab, waescht mit Wasser nach, suspendiert den Filterrueckstand in 200 ml Wasser, gibt in der Hitze soviel Methanol zu (ca. 100 ml) bis Loesung erfolgt, kuehlt ab, gibt 200 ml Wasser zu, extrahiert das ausgeschiedene Oel mit Essigester, dampft die vereinigten Essigesterextrakte im Vacuum ein und erhaelt so 30.45 g rohen 2-(Benzyloxycarbonylamino)-3-chlor-propionsaeure-methylester. 30 g davon und 30.9 g Phtalimid-K in 120 ml abs. Dimethylformamid suspendiert, erhitzt man 7.5 Stunden auf 900C, gibt dann 420 ml Wasser zu, extrahiert 4 mal mit 70 ml Chloroform, extrahiert die vereinigten Chloroformloesungen mit 280 ml 0.1 N NaOH und 2 mal mit 140 ml Wasser, dampft die Chloroformloesung ein (im Vacuum), wobei 26.6 g roher D,L-2-(BenzyloxyCarbonyl-amino)-3-phtalimido-propionsaeure-methylester anfallen.
Diese Substanz suspendiert man in 60 ml Tetrahydrofuran, gibt 112 ml 1 N NaOH zu, ruehrt 2 Stunden nach, laeßt ueber Nacht stehen, trennt von einer gummiartigen Masse ab, dampft im Vacuum das Tetrahydrofuran ab, gibt zum Eindampfrueckstand 237 ml 1 N HCl, kocht 4 Stunden unter Rueckfluß, extrahiert nach Erhalten mit Ether, stellt die Wasserphase mit 2 N NaOH auf pH 6, kuehlt im Eisbad ein und bekommt so 22 g rohe D,L-2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-3-aminopropionsaeure. 7 g davon ruehrt man mit 9 ml Acetanhydrid und 80 ml Eisessig 5 bis 6 Stunden bis Loesung eintritt.
Nun laeßt man ueber Nacht stehen, dampft im Vacuum ein, zuletzt 2 mal nach jeweiliger Zugabe von 50 ml Ethanol und erhaelt so 9 g rohe D,L-2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-3-acetamido-propionsaeure, als gelbes Del. Aus 8 g davon bereitet man analog Beispiel 11.3. mit 3.7 ml Chlorameisensaeureisobutylester das gemischte Anhydrid und laeßt dieses mit 8.62 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid reagieren, wobei das Umsetzungsprodukt nach der angegebenen Reaktionszeit gleich kristallin ausfaellt. Nach Absaugen war die Ausbeute 9.25 g rohes D,L-[2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-3-acetamido]-propionyl-L-alanyl-L-serin-benzvlester.
Analog Beispiel 11.4. erzielt man mit 9 g dieser Substanz und 4.18 g N- (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (225 ml Pyridin; 10.8 g Dicyclohexylcarbodiimid) 4.35 g Ausbeute an rohem Monoester, von dem 1.1 g analog Beispiel 11.5. hydriert wird (200 ml Methanol-Wasser 1:1). Man gewinnt so 0.3 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit D,L-(2-Amino-3-acetamido)-propionyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 2 mol Wasser und 1/3 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. ab 177°C, Zers.
Beispiel 77 Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 5.67 g N-t-Butoxycarbonyl-L-alanin und 4 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid und nach dessen Umsetzung mit 10.6 g L-Serin-benzylester . Hydrochlorid 11.2 g rohen N-t-Butoxycarbonyl-L-alanyl-L-serin-benzylester. Zu 11 g davon in 150 ml abs. Ether geloest, tropft man bei OOC 69 ml 6 N HOl in Ether, laeßt 15 min bei 0°C und 3 Stunden bei 230C nachruehren, dampft die Suspension ein, ruehrt den Eindampfrueckstand mit 250 ml Ether (3 h) , laeßt 2 Tage stehen, saugt ab und erzielt so 8 g Ausbeute an rohem L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid vom Fp. 180/19000, Zers..
2.42 g davon laeßt man mit dem in situ erzeugten, gemischten Anhydrid aus 2.96 g D,L- 2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-3-(benzyloxycarbonyl-amino)-propionsaeure und 1.04 ml Chlorameisensaeureisobutylester analog Beispiel 11.3. reagieren und erhaelt so 4 g rohen D,L- 2-(Benzyloxycarbonyl-amino)-3-(benzylOxycarbonyl-amino)-propionyl-X-alanyl-L-serinbenzylester vom Fp. 124/128"C.
Analog Beispiel 11.4. bekommt man aus 3.72 g dieser Verbindung und 1.64 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (3.7 g Dicyclohexylcarbodiimid, 30 Std. Reaktionszeit) 3.2 g rohen Monoester vom Fp. 162°C, Zers., von dem 1.8 g analog 11.5. hydriert werden (180 ml Methanol-Wasser 3:1). Der Rueckstand, der nach Eindampfen (im Vacuum) der Hydrierloesung verbleibt, liefert nach Anreiben mit Ethanol O.5 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit D,L-(2-Amino-3-amino)-propionyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 1 mol Wasser und 2/3 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. ab 112°C, Zers.
BeisPiel 78 Analog wie in Beispiel 64 beschrieben, stellt man aus 3.06 g rohem N-n-Propyl-glycin mit 9.6 ml Chlorameisensaeurebenzylester (50 % in Toluol) 3.8 g rohes, oeliges [N-(Benzyloxycarbonyl)-N-n-propyl]-glycin her, von dem man 2.08 g analog Beispiel 11.3. mit 1.04 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ in das gemischte Anhydrid ueberfuehrt, welches nach Reaktion mit 2.64 g rohem L-Norvalyl-L-serinbenzylester . Hydrochlorid (Beispiel 70), 3.95 g [N-(Benzyloxycarbonyl)-N-n-propyl]-glycyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester vom Fp. 162/168°C liefert.
Analog Beispiel 11.4. gibt diese Substanz mit 2.03 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (150 ml abs. Pyridin, 4.68 g Dicyclohexylcarbodiimid) 4.5 g rohen Monoester, nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (400 ml Methanol-Wasser 3:1) und Eindampfen der waessr. Loesung im Vacuum 1.4 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit N-n-Propylslycyl-L-norxzalyl-L-serin (als Monohydrat) liefert.
Fp. ab 172°C Zers.
Beispiel 79 Analog wie in Beispiel 64 beschrieben, stellt man aus 1.95 g 3-t-Butoxy-L-alanin (Fp. 2250C) und 1.95 ml Chlorameisensaeurebenzylester 2.34 g rohen t-Butylether des N-Benzyloxycarbonyl-L-serins her, aus dem man analog Beispiel 11.3. (mit 1.02 g Chlorameisensaeureisobutylester) in situ das gemischte Anhydrid bereitet und dieses mit 2.39 g rohem L-Alanyl-L-serinbenzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) umsetzt (360 ml Methylenchlorid), wodurch 2.81 g roher (N-Benzyloxycarbonyl-O-t-butyl)-X-seryl-L-alanyl-L-serin-benzylester vom Fp. 127/ 131"C erhalten werden.
Analog Beispiel 11.4. erzeugt man aus 2.8 g dieser Substanz und 1.28 g (Benzyloxycarbonyl-amino) -methanphosphonsaeure 2 g rohen Monoester, der mit Petrolether angerieben wird.
Analog Beispiel 11.5. bereitet man daraus nach Hydrierung (370 ml Methanol-Wasser 3:1; 0.5 g Katalysator) 0.63 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit O-t-Butyl-L-seryl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 2.5 mol Wasser pro mol Substanz). Fp. ab 1600C, Zers.
Beispiel 80 Zu 1.89 g N-(D,L-1-Ethoxycarbonyl-ethyl)-L-alanin (Fp. 135/ 137°C) in 70 ml Wasser und 30 ml Aceton, sowie 2.23 g NaHOO3 geloest, tropft man in 2 Stunden eine Lsg. von 5.4 g Chlorameisensaeurebenzylester in 30 ml Aceton, laeßt 3 h nachruehren (pH mit NaHCO3 auf 7.5 gehalten!), destilliert das Aceton im Vacuum ab, extrahiert die verbliebene Wasserloesung mit Ether, stellt die Wasserphase mit HOl auf pH 2, extrahiert sie dann mit Essigester, dampft die vereinigten Essigesterextrakte im Vacuum ein und bekommt so 1.75 g rohes [N-Benzyloxycarbonyl-N- (D ,L-1 -Ethoxycarbonyl-ethyl) ] -L-alanin als gelbes Oel.
Analog Beispiel 11.3. bereitet man daraus mit 0.73 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, laeßt dieses mit 1.64 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) reagieren und reinigt das erhaltene Rohprodukt an der Kieselgelsaeule (Essigester als Elutionsmittel), wobei 1.5 g [N-Benzyloxycarbonyl-N-(D,L-1-Ethoxycarbonyl-ethyl)]-L-alanyi-L-alanyl-L-serin-benzylester als zaeher, gelblicher Sirup anfallen.
Analog Beispiel 11.4. setzt man diese Verbindung mit 0.67 g L-1- (Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure um (16 Stunden Nachruehren!) wobei 1.64 g roher Monoester anfaellt.
Dieser wird in waessr. NaHCO3 Loesung und etwas Aceton geloest, und diese Loesung mehrmals mit Ether extrahiert. Die waessr.
Phase wird dann mit HOl angesaeuert, mit Essigester extrahiert und die vereinigten, org. Extrakte im Vacuum eingedampft, wodurch 1.2 g Monoester verbleiben.
Analog Beispiel 11.5. wird dieser hydriert. Man erhaelt so 0.45 g Monoester der L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit N(D,L-1-Ethoxycarboryl-ethyl) -L-alanyl-L-alanyl-L-serin als Dihydrat. Fp. ab 1300C, Zers.
Herstellung von N- (D,L-1-Ethoxycarbonyl-ethyl)-L-alanin: Zu einer Lsg. von 35 g L-Alanin-benzylester . p-Toluolsulfonat in 300 ml abs. Tetrahydrofuran und 20.2 g Triethylamin, tropft man eine Lsg. von 21.8 g 2-Brom-propionsaeureethylester in 100 ml abs. Tetrahydrofuran, laeßt 7 Tage bei Raumtemp. stehen, saugt ab, dampft das Filtrat ein, nimmt den Eindampfrueckstand in Essigester auf, extrahiert diese Lsg. mit 10 % waessr. Zitronensaeure und dann mit Wasser, dampft nach Trocknen die Essigesterloesung ein, loest den EindampfruecKstand in 6 N HCl, schuettelt diese Lsg. mit Essigester aus, macht die Wasserphase mit N32CO) alkalisch, extrahiert das dabei ausqeschiedene Oel mit Essigester und dampft die vereinigten Essigesterextrakee im Vacuum ein. So verbleiben 10.2 g einer orangebraunen Fluessigkeit, welche man an der Kieselgelsaeule reinigt (800 g Gel, Chloroform als Eluationsmittel), wodurch man so 9.37 g N-(D,L-1-Ethoxycarbonyl-ethyl)-L-alanin-benzylester als gelblichen Sirup gewinnt. 5.58 g davon hydriert man in 100 ml Methanol-Wasser 2:1 mit 1 g Pd-C-Katalysator (10 proz.) 30 min bei Normaldruck, dampft nach Absaugen des Katalysators das Filtrat im Vacuum ein und reibt das verbliebene Material mit Ether an, wodurch 3 g der gewuenschten Substanz vom Fp. 135/1370C anfallen.
Beispiel 81 Analog Beispiel 11.2. erhaelt man aus 2.17 g N-(t-Butoxycarbonyl)-L-norvalin mit 1.35 g Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, aus dem durch Umsetzung mit 3.3 g L-Norvalyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 70) roher N-(t-Butoxycarbonyl)-L-norvalyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester anfaellt, der nach Loesen mit Ether und Faellen mit Petrolether 3.47 g dieser Substanz vom Fp. 112/1160C liefert. Durch Umsetzung dieser Verbindung mit 16 ml 6 N etherischer HOl in 40 ml Ether (20 min bei OOC und 3 Stunden bei Raumtemp.) erhaelt man nach Absaugen 1.97 g rohes L-Norvalyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid.
Analog Beispiel 11.3. bekommt man aus dem durch Reaktion von 1.02 g N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin mit 0.62 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ erzeugten, gemischten Anhydrid und 1.96 g L-Norvalyl-L-norvalyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid, (nach Anreiben des Eindampfrueckstandes mit Ether) 1. 7 g rohen N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-norvalyl-L-norva lyl-L-serin-benzylester vom Fp. 165/17000, der nach Reaktion mit 0.73 g L-1- (Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure analog Beispiel 11.4. und Ausfaellen des so erhaltenen, rohen Monoesters mit Petrolether (aus der eingeengten Essigesterloesung) 1.63 g dieses Monoesters ergibt.
Analog Beispiel 1.5. hydriert man davon 1.6 g (in 300 ml Methanol-Wasser 2:1), wodurch 0.66 g Monoester der L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit Sarcosyl-L-norvalyl-L-norvalyl-L-serin entstehen (als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 1 mol Ethanol pro mol Substanz).
Fp. ab 175°C, Zers.
Beispiel 82 Analog Beispiel 11.3. erzeugt man aus 2.13 g rohem [N-Benzyloxycarbonyl-N- (D,L-4-phenyl-2-n-butyl-L-alanin und 0.78 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid und setzt dieses mit 1.82 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) um, wodurch man 2.93 g rohes [N-Benzyloxycarbonyl-N-(D,L-4-phenyl-2-nbutyl)]-L-alanyl-L-alanyl-L-serin-benzylester als Oel erhaelt.
Analog Beispiel 11.4. gewinnt man aus 2.89 g dieser Substanz und 1.52 g L-1- (Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure (mittels 3 g Dicyclohexylcarbodiimid) 3.14 g rohen Monoester als Oel, von dem 3 g analog Beispiel 11.5. hydriert werden (300 ml Methanol-Wasser 3:1). Man dampft dann am Schluß die waessr. Loesung im Vacuum ein, loest die verbliebene Substanz in ca. 10 ml Ethanol und faellt durch Etherzugabe 0.52 g Monoester der L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit N-(D,L-4-Phenyl-2-n-butyl)-L-alanyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 2.5 mol Wasser pro mol Substanz). Fp. ab 145°C, Zers.
Herstellung von [N-Benzyloxycarbonyl-N- (D ,L-4-phenyl-2-nbutyl)]-L-alanin: Eine Lsg. von 2.67 g D-2-Brom-propionsaeure (Kp1,5 = 780C) in 10 ml Wasser tropft man zu einer Lsg. von 8.75 g D,L-2-Amino-4-phenyl-n-butan in 35 ml Dioxan, ruehrt 1 Stunde nach, kocht dann 5 Stunden unter Rueckfluß, destilliert anschließend das Dioxan ab, gibt nun unter Kuehlung 35 ml 2 N NaOH zu, extrahiert 3 mal mit Ether, saeuert die waessr.
Phase mit HOl an, dampft die saure Loesung dann im Vacuum ein und reibt die verbliebene Substanz 3 mal mit Ether an.
Die so erhaltene feste Substanz reibt man noch mit 50 ml Ethanol an, saugt anschließend das ungeloeste NaCl ab, dampft die Ethanolmutterlauge im Vacuum ein und reibt den Eindampfrueckstand 3 mal mit Ether an, wodurch 2.9 g rohes N-(D,L-4-Phenyl-2-n-butyl)-L-alanin vom Fp. 141/142°C erhalten werden.
2.57 g davon und 5.5 ml Triethylamin in 100 ml abs. Dimethylformamid versetzt man bei OOC mit 5.6 ml 50proz. Loesung von Chlorameisensaeurebenzylester in Toluol (in 1 Stunde) laeßt 15 min bei OOC und 5 Stunden bei 23"C nachruehren, saugt nun ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, versetzt den Eindampfrueckstand mit 30 ml Wasser, stellt mit 2 N NaOH auf pH 10, extrahiert 3 mal mit Ether,dampft die vereinigten Etherextrakte ein und bekommt so 4 g oeligen Rueckstand. Diesen nimmt man in 40 ml Ether auf, schuettelt diese Lsg. mit 0.5 N Hol und mit Wasser aus, dampft die Etherloesung ein und erhaelt so 2.3 g der gewuenschten Substanz als Oel.
Beispiel 83 Analog Beispiel 11.3. stellt man aus 3.4 g rohem tN-Benzyloxycarbonyl-N-D,L-(a-methyl-benzyl) ]-glycin und 1.45 g Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid her, welches nach Reaktion mit 3.15 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) 5.15 g Rohprodukt gibt, das nach Reinigung an der Kieselgelsaeule 2.3 g weißes Pulver liefert, naemlich [N-Benzyloxycarbonyl-N-D ,L- (o-methyl-benzyl) glycyl-L-alanyl-L-serin-benzylester.
Analog Beispiel 11.4. bringen 0.84 g davon mit 0.52 g L-1-(Benzyloxycarbonyl-amino)-ethanphosphonsaeure (mit 1.6 g Dicyclohexylcarbodiimid; 21 Stunden Ruehren in 50 ml abs.
Pyridin) 1.16 g rohen Monoester als weißes Pulver.
Analog Beispiel 11.5. erhaelt man nach Hydrierung von 1 g dieses Monoesters (75 ml Methanol-Wasser 4:1, 15 min), Eindampfen der waessr. Lsg. im Vacuum und Anreiben des Eindampfrueckstandes mit Ether 0.37 g Monoester der L-1-Aminoethanphosphonsaeure mit N-D,L-1-Phenylethyl-glycyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 1.5 mol Wasser und 1/2 mol Ethanol pro mol substanz). Fp. ab 156°C, Zers. a) Herstellung des [N-D,L-(α-Methyl-benzyl)-N-benzyloxycarbonyli-glycins: 13.9 g Bromesslgesaeure in 44 ml Wasser wird mit waessr.
Na2C03 neutralisiert, tropft dann 36.3 g D,L--Methylbenzylamin, in 180 ml Dioxan geloest, zu, ruehrt 30 min nach, kocht 5 Stunden unter Rueckfluß, destilliert das Dioxan im Vacuum ab, gibt unter Eisuehlung 150 ml 2 N NaOH zu, extrahiert mit Ether, stellt die waessr.
Phase mit HOl auf pH 1, dampft im Vacuum ein, ruehrt den trockenen Eindampfrueckstand mit 160 ml abs. Ethanol aus, saugt ab und dampft das Filtrat im Vacuum ein; nun reibt man das dabei verbliebene Material mit Ether an, saugt die erhaltenen Kristalle ab und bekommt so 13 g rohes N-D,L-(1-Phenyl-ethyl)-glycin . Hydrochlorid vom Fp. 169/1730C. b) 2.5 g davon loest man in 40 ml Wasser, stellt mit 4 N NaOH auf pH 10, tropft in 5 Stunden bei OOC 2.85 ml Ohlorameisensaeurebenzylester ein, wobei der pH-Wert stets auf 9-10 gehalten wird und extrahiert dann mit Ether. Die Wasserphase stellt man auf pH 1, extrahiert mit Methylenchlorid und erhaelt nach dessen Eindampfen 1.27 g der gewuenschten Substanz als gelblichen Sirup.
Beispiel 84 Analog Beispiel 83 b, gewinnt man aus 9.67 g N-Cyclohexylglycin . Hydrochlorid mit 13.25 ml Chlorameisensaeurebenzylester (50 ml Wasser; Extraktion der sauren Wasserloesung mit Essigester, statt Methylenchlorid) 3.85 g rohes (N-Benzyloxycarbonyl-N-cyclohexyl)-glycin als farblosen Sirup.
Analog Beispiel 11.3. entsteht in situ aus 3.85 g dieser Substanz und 1.82 ml Ohlorameisensaeureisobutylester das gemischte Anhydrid, aus dem nach Umsetzung mit 3.93 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorld 4.91 g roher (N-Benzyloxycarbonyl-N-cyclohexyl) -glycyl-L-alanyl-L-serinbenzylester erhalten werden. Fp. 171/17500.
Analog Beispiel 11.4. entstehen aus 2.16 g dieser Substanz und 1. 6 g L- 1 - (Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure 2.54 g roher Monoester, von dem O.54 g analog Beispiel 11.5. hydriert wird (30 ml Methanol-Wasser 4:1, 0.05 g Pd-C-Katalysator, 40 min Hydrierzeit).
Nach Eindampfen der waessr. Loesung und Anreiben der so verbliebenen Substanz mit Ether gewinnt man 0.15 g Monoester der L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit N-Cyclohexylglycyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 2.5 mol Wasser pro mol Substanz). Fp. ab 1700C, Zers.
Beispiel 85 Zu 1.13 g rohem D,L-3,4-Dehydro-prolin (Fp. 2430C, Zers.) in 40 ml 1 N-, waessr. NaHCO3-Lsg. tropft man in 4 Stunden 4.7 ml einer 50proz. Lsg. von Chlorameisensaeurebenzylester in Toluol, laeßt 1 Stunde nachruehren, extrahiert 3 mal mit Ether, macht dann die Wasserphase sauer (pH 2), extrahiert 3 mal mit Methylenchlorid und erhaelt nach dessen Verdampfen 2.48 g rohes D,L-(N-Benzyloxycarbonyl)-3,4-dehydroprolin als Oel.
2.47 g dieser Substanz gibt analog Beispiel 11.3. mit 1.4 ml Chlorameisensaeureisobutylester in situ das gemischte Anhydrid, das mit 3.04 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) 5 g rohen D,L-(N-Benzyloxycarbonyl)-3, 4-dehydroprolyl-L-alanyl-L-serin-benzylester liefert und der nach Anreiben mit Ether bei 154/158°C schmilzt (3.8 g).
Analog Beispiel 11.4. geben 2.97 g dieser Verbindung mit 1.61 g (Benzyloxycarbonyl-amino) -methanphosphonsaeure (nach Einengen der Essigesterloesung) 2.3 g rohen Monoester (Fp. 134/140"C). 0.55 g davon suspendiert man in 2.3 ml Anisol, tropft bei 0°C 7.6 ml Methansulfonsaeure zu, ruehrt 30 min nach, faellt mit 100 ml Ether, gießt nach 1 Stunde stehen den Ether ab, ruehrt noch 3 rnäl den Bodensatz mit Ether durch und reibt ihn dann mit Isopropanol an, wobei 0.4 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit D,L-3,4-Dehydroprolyl-L-alanyl-L-serin verbleiben (als Addukt mit 2 mol Methansulfonsaeure, 1 mol Wasser und 1/3 mol Isopropanol). Fp. 78/o00C (Zers.) BeisPiel 86 Analog Beispiel 11.3. bereitet man aus 4.68 g [N-(D,L-aethoxycarbonyl) -benzyl-N-benzyloxycarbonyl]-L-alanin und 1.65 ml Chlorameisensaeureisobutylester (30 min Nachruehren bei -20°C) in situ das gemischte Anhydrid, das nach Umsetzung mit 3.66 g L-Alanyl-L-serin-benzylester Hydrochlorid (Beisp. 77) 5.7 g Rohprodukt ergibt. Nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (Laufmittel: Essigester und 5 % Heptan) gewinnt man daraus 2.26 g [N-(D,L-PhenylethOxyCarbonyl-methyl)-N-benzyloxycarbonyl]-L-alanyl-L-alanyl-L-serin-benzylester vom Fp. 54/580C.
Analog Beispiel 11.4. geben 1.46 g dieser Substanz mit 0.9 g L-1- (Benzyloxycarbonyl-amino) -ethanphosphonsaeure (mittels 1.42 g Dicyclohexylcarbodlimid) 1.85 g rohen Monoester (nach Anreiben mit Petrolether), von dem 1.6 g nach Hydrierung analog Beispiel 11.5. (0.15 g 10 8 Pd-C-Katalysator, 100 ml Methanol-Wasser 4:1) und Anreiben der eingedampften waessr. Lsg. mit Ether 0.55 g Monoester der L-1-Amino-ethanphosphonsaeure mit N-(D,L-Phenyl-ethoxycarbonyl-methyl) -L-alanyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 1.5 mol Wasser) ergeben. Fp. ab 160°C, Zers.
Herstellung von rohem [N- (D,L-Phenyl-ethoxycarbonylmethyl)-N-benzyloxycarbonyl]-L-alanin: Zu einer Lsg. von 8.75 g L-Alanin-benzvlester . p-Toluolsulfonat in 75 ml Tetrahydrofuran und 6.9 ml Triethylamin tropft man eine Lsg. von 7.3 g D,L-a-Brom-phenylessigsaeureethylester (Kp0,5 = 98/1000C) in 75 ml Tetrahydrofuran, laeßt 5 Tage stehen, saugt ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, loest den Eindampfrueckstand in Essigester, schuettelt mit 1Oproz. Zitronensaeure und dann mit Wasser, dampft den Essigester ein (im Vacuum) , loest die dabei verbliebene Substanz in 100 ml 6 N HCl, extrahiert mit Essigester, stellt die wasserphase mit arC03 alkalisch, extrahiert sofort mit Essigester und dampft diese org. Phase im Vacuum ein, wobei 9.14 g orangefarbenes Oel verbleiben.
Nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (als Laufmittel dient Essigester-Heptan 1:3) erhaelt man daraus 2.19 g gelbliches Oel, naemlich N-(D,L-Phenyl-ethoxycarbonylmethyl) -L-alanin-benzylester.
30 g dieser Substanz hydriert man 25 min bei Normaldruck mit 6 g 10 % Pd-C-Katalysator in 1 Liter Methanol-Wasser 5:1, saugt dann ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, reibt den so erhaltenen Rueckstand mit Ether an und erzielt so eine Ausbeute von 19 g N-(D,L-Phenyl-ethoxycarbonylmethyl)-L-alanin vom Fp. 148/1510C. 2.5 g davon loest man in 30 ml Dimethylformamid, gibt 5.5 ml Triethylamin zu, tropft bei 0°C in 1 Stunde 2.8 ml Chlorameisensaeurebenzylester zu, ruehrt 24 Stunden nach, saugt ab, dampft das Filtrat im Vacuum ein, loest den Eindampfrueckstand in Wasser, stellt schwach alkalisch, extrahiert mit Ether, saeuert die Wasserphase an (pH 1), extrahiert mit Methylenchlorid und erhaelt nach dessen Verdampfen 2.04 g der gewuenschten Verbindung als gelben Sirup.
Beispiel 87 In eine Suspension von 5.25 g D,L-(3-Benzyloxyamino-2-amino)-propionsaeure in 50 ml Methanol traegt man 13 ml Tetramethylammoniumhydroxid (als 20proz. Lsg. in Methanol) ein, gibt zu der so entstandenen Loesung 6.23 g N-(Benzyloxycarbonyloxy) -succinimid (Fp. 80/820C), haelt 6 Stunden auf 500C, laeßt ueber Nacht bei 230C stehen, dampft die Loesung im Vacuum ein, gibt zum Rueckstand 80 ml Wasser, extrahiert mit Ether, dampft die vereinigten Etherextrakte ein, reibt den Eindampfrueckstand mit Petrolether an und erhaelt so 1.84 g rohe D,L-(3-Benzyloxvamino-2-benzyloxycarbonylamino)-propionsaeure vom Fp. 102/1070C.
Die waessr. Phase saeuert man mit HOl an, wobei weitere 4.5 g der gleichen Verbindung anfallen (Fp. 107/108°C).
3.44 g dieser Substanz loest man in 21 ml Ameisensaeure, gibt bei OOC 7 ml Acetanhydrid zu, ruehrt 3 Stunden nach, setzt dann ca. 50 ml Eiswasser zu, extrahiert die ausgefallene Substanz mit Essigester, dampft diese org. Lsg. im Vacuum ein, reibt den Eindampfrueckstand mit Ether/ Petrolether an und gewinnt so 3.04 g rohe D,L-[3-(N-benzyloxy-N-formyl)-amino-2-benzyloxycarbonyl-amino]-propionsaeure vom Fp. 1.32/1370C.
Analog Beispiel 11.3. stellt man bei -20°C in situ aus 1.86 g dieser Substanz und 0.7 ml Chlorameisensaeureisobutylester das gemischte Anhydrid her und setzt dieses mit 1.51 g L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) um, wodurch (nach Umkristallisation des Reaktionsproduktes aus Essigester) 0.72 g D,L-[3-(N-benzyloxy-N-formyl) -amino-2-benzyloxycarbonyl-amino] -propionyl-L-alanyl-L-serin-benzylester erhalten werden. Aus der Essigestermutterlauge gewinnt man nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (40 g Gel und Essigester als Laufmittel) weitere 0.66 g der gleichen Substanz.
Analog Beispiel 11.4. bekommt man aus 1.38 g dieser Substanz und 0.53 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure 1.25 g rohen Monoester. Analog Beispiel 11.5. werden aus 1.2 g dieser Substanz durch Hydrierung (0.3 g Katalysator, 200 ml Ethanol-Wasser 3:1) 0.4 g Monoester der Aminomethanphosphonsaeure mit D,L-[3- (N-Formyl)-hydroxyamino-2-amino]-propionyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 1 mol Ethanol und 1 mol Wasser pro mol Substanz) erhalten.
Fp. ab 140°C, Zers.
Beispiel 88 88.1.
Analog Beispiel 1.3. setzt man Na NG-Tris-benzyloxycarbonyl-L-arginin mit L-Alanyl.-L-serinbenzylester in einem Methylenchlorid-Dimethylformamidgemisch (1:1) um. Das Reaktionsgemisch wird eingedampft, mit Wasser versetzt und das Produkt mit Essigsaeureethylester extrahiert. Man erhaelt Nα,NG-Tris-Benzyloxycarbonyl-L-arginyl-L-alanyl-L-serinbenzylester, das ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
88.2.
Das im obigen Abschnitt 88.1. erhaltene Produkt wird analog Beispiel 49.2. mit Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure umgesetzt. Der rohe Phosphonsaeuremonoester wirc in Eisessig ueber Palladium (10 %) auf Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat eingedampft und der Rueckstand in Wasser geloest. Die Loesung wird gefriergetrocknet, der Rueckstand mit Ethanol verruehrt und der Niederschlag abgesaugt. Man erhaelt L-Arginyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin als Monoacetat vom Fp. 140°C (Zersetzung). Dem Produkt haften noch 9 % Ethanol und 8 % Wasser an.
[α]D20 = +1.8° (c = 1, H2O) Beispiel 89 89.1.
Analog Beispiel 1.3. setzt man N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin mit L-Alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester-Hydrochlorid um.
Der erhaltene N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester wird gemaeß den Beispielen 45.2. und 45.3. mit 1R, S-1-(Benzyloxycarbonyl-amido)ethanphosphonsaeure umgesetzt und durch Hydrierung von den Schutzgruppen befreit. Man erhaelt Sarcosyl-L-alanyl-O-(1R,S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin als Monohydrat vom Fp. 164-16900(Zersetzung) [α]D20 = -24.7° (c = 1, H2O) Beispiel 90 Verwendet man N-Benzyloxycarbonylaminoisobuttersaeure statt N-Benzyloxycarbonylsarcosin als Ausgangsprodukt, so erhaelt man analog Beispiel 89 Aminoisobutyryl-L-alanyl-O-(1R,S-Aminoethanphosphonyl)-L-serin als Monohydrat, das ab 180°C unter Zersetzung schmilzt.
[a] = +15.70 (c = 1, H20) Beispiel 91 Analog Beispiel 89 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-3-methyl-sulfonyl-L-alanin statt des Sarcosinderivates und Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure als Phosphonsaeurekomponente (3-Methylsulfonyl)-L-alanyl-L-alanylO (aminomethanphosphonyl) -L-serin als Monohydrat vom Fp. 222-225°C(Zersetzung) [aj20 = +4.7° (c = 1,H2O) Beispiel 92 Analog Beispiel 89 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-y-benzyl-L-glutaminsaeure statt N-Benzyloxycarbonylsarcosin und lR,S-1-Benzyloxycarbonylamidoethanphophonsaeure als Phosphonsaeurekomponente L-Glutamyl-L-alanyl-O-(1R,S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-serin als Trihydrat, das ab 163°C unter Zersetzung schmilzt.
[α]D20 = +2.5° (c = 1, H2O) Beispiel 93 Verwendet man N-Benzyloxycarbonyl-L-prolin statt N-Benzyloxycarbonylsarcosin so erhaelt man analog Beispiel 89 nach der hydrogenolytischen Abspaltung der Benzyloxycarbonyl- bzw. Benzylestergruppen ein Rohprodukt, das in Wasser geloest und gefriergetrocknet wird. Dieses Produkt wird in Methanol heiß geloest und abgekuehlt. Der ausgefallene Niederschlag wird abgesaugt. Man erhaelt L-Prolyl-L-alanyl-O-(1R,S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin.
Dem Produkt haften 10 % Wasser an. Es schmilzt ab 17500 unter Zersetzung.
20 = 37.10 (c = 1, H2O) D Beispiel 94 Analog Beispiel 89 erhaelt man unter Verwendung von D,L-N-Benzyloxycarbonyl-α-tert.-butylglycin statt des Sarcosinderivates und Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure als Phosphonsaeurekomponente ein Rohprodukt, das wie folgt gereinigt und in die Diastereomeren getrennt wird.
Das Filtrat der Reaktionsmischung aus der Hydrierung wird bis auf wenige Milliliter eingeengt und mit Ethanol versetzt. Man laeßt ueber Nacht im Kuehlschrank stehen und saugt dann das ausgefallene Produkt ab. Zur Reinigung wird dieses nochmals in wenig Wasser geloest und durch Zugabe von Ethanol ausgefällt. Man erhaelt das erste Diastereomere a-tert.-Butylglycyl-L-alanyl-O-(amino-methanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 250-2550C (Zerstzung). Die HPLC-Analyse ergibt einen Isomerenverhaelthis von 19:81. [α]57820 = =6.2° (c = 1, H2O). Das andere Diastereomere wird folgenderma#en isoliert. Das Filtrat der ersten Faellung wird zur Trockene eingedampft und durch Chromatographie ueber 750 ml Sephadex G-10 mit Wasser als Elutionsmittel gereinigt. Die peptidhaltigen Fraktionen werden eingeengt und das Produkt durch Zugabe von Ethanol ausgefaellt. Man erhaelt das zweite Diastereomere von a-tert.-Butylgylcyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 270-272°C (Zersetzung).
Die KPLC-Analyse ergibt ein Isomerenverhaeltnis von 81:18.
[«]20 = -54.60 (c = 1, H2O) Beispiel 95 Analog Beispiel 89 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-3-cyano-L-alanin statt des Sarcosinderivates und Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure als Phosphonsaeurekomponente ein Rohprodukt, das durch Chromatographie an dem schwach sauren Ionenaustauscher IR-45 gereinigt wird. Die Saeule wird zunaechst mit Wasser gewaschen, dann wird das Produkt mit 1 N Ameisensaeure eluiert. Man erhaelt L-2,4-Diaminobutyryl-L-alanyl-o-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 143-175°C (Zersetzung). Dem Produkt haften 1.5 mol Ameisensaeure und 1 mol Wasser an.
[α]D20 = -5.6° (c = 1, H2O) Beispiel 96 96.1.
12.7 g N-tert.-Butoxycarbonyl-L-alanyl-L-alanin werden analog Beispiel 48.2.. mit 20 g L-Serin-p-nitrobenzylester in Gegenwart von 11.4 g Dicyclohexylcarbodiimid und 15.4 g 1-Hydroxybenzotriazol umgesetzt. Die Reaktionsmischung wird filtriert, das Filtrat eingedampft und in Essigsaeureethylester aufgenommen. Dabei kristallisiert ein Teil des Produktes aus (19 g) und wird abfiltriert. Das Filtrat wird jeweils mit Sproz. Citronensaeureloesung und Sproz. Natriumhydrogencarbonat in Wasser durchgeschuettelt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Dieser Teil des Produktes (6.9 g) und der bereits frueher erhaltene Teil werden vereinigt und aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 18.8 g N-tert.-Butoxycarbonyl-L-alanyl-L-alanyl-L-serin-pnitrobenzylester, das laut Duennschichtchromatogramm fuer die weitere Verarbeitung gut genug ist.
96.2.
Das unter beschnitt 96.1. erhaltene Tripeptid wird gemaeß Beispiel 1.2. mit etherischer Salzsaeure behandelt. Man erhaelt L-Alanyl-L-alanin-L-serin-p-nitrobenzylester Hvcrochlor d, der ohne Reinigung weiter verwendet wird.
96.3.
Das im vorigen. Abschnitt erhaltene Tripeptid-Hydrochlorid wird analog Beispiel 1.3. mit N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin umgesetzt. Man erhaelt N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-alanyl-L-alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester. der fuer die Weiterveratbeitung rein genug ist.
96.4.
Das im Abschnitt 96.3. beschriebene Tetrapeptid wird analog Beispiel 49.2. mit 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonsaeure umgesetzt. Die mit 2 N Salzsaeure gewaschene Essigsaeureethylesterphase wird getrocknet und eingedampft.
Zur Reinigung wird der Rueckstand aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt N-Benzyloxycarbonyl-sarcosyl-L-alanyl-L-alanyl-O- (1R,S-1-(benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonyl)-L-serin-p-nitrobenzylester, der nach dem Duennschichtchromatogramm zur Weiterverarbeitung rein genug ist.
96.5.
5.7 g der oben (Abschnitt 96.4.) erhaltenen Verbindung werden in 400 ml Ethanol und 100 ml Wasser geloest und ueber 1 g Palladium (10 %) auf Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat eingedampft und der Rueckstand aus Wasser und Methanol umkristallisiert. Man erhaelt 1.5 g (43 t) Sarcosyl-L-alanyl-L-alanyl-O-(1R,S-1-aminoethanphosphonyl) -L-serin vom Fp. 178-185°C(Zersetzung). Das Produkt enthaelt 3.5 mol Wasser.
20 = 60.00 (c = 1, H20) D Beispiel 97 97.1.
37 g N-propylglycin-Hydrochlorid werden analog Beispiel 6.1, mit Chlorameisensaeurebenzylester umgesetzt. Man erhaelt N-Benzyloxycarbonyl-N-propylglycin als Del, das ohne zusaetzliche Reinigung weiter umgesetzt wird.
97.2.
Eine Loesung von 6.0 g N-Benzyloxycarbonyl-N-propylglycin in 20 ml Methylenchlorid wird mit einer Loesung von 2.9 g N-Hydroxysuccinimid in 10 ml Tetrahydrofuran vereinigt.
Das Gemisch wird auf -10°Cgekuehlt und mit einer Loesung von 5.2 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Methylenchlorid versetzt. Man ruehrt das Gemisch 2 Stunden bei -100C, 1 Stunde bei O0Ound laeßt ueber Nacht bei Raumtemperatur stehen. Der Niederschlag wird abfiltriert, das Filtrat eingedampft und das verbleibende Oel in Ether aufgenommen.
Etwas Niederschlag wird abfiltriert, die Etherphase mit Natriumhydrogencarbonatloesung und Wasser gewaschen und getrocknet. Nach dem Eindampfen verbleiben 6.8 g (81 t) des oeligen N-Benzyloxycarbonyl-N-propyl-glycin-N-hydroxysuccinimidesters, der ohne weitere Reinigung verwendet wird.
97.3.
51 g tert.-Butoxycarbonyl-L-alanyl-L-serinbenzylester werden analog Beispiel 45.2. mit Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure umgesetzt. Das Rohprodukt wird in Methylenchlorid geloest und die Loesung gruendlich mit insgesamt 3 Liter Wasser gewaschen. Das Produkt kristallisiert aus der Methylenchloridphase aus. Man erhaelt 40 0 g tert.-Butoxycarbonyl-L-alanyl-O- (benzyloxycarbonyl-2midomethanphosphonyl)-L-serinbenzylester, der fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
97.4.
20 g der in obigem Abschnitt 97.3. erhaltenen Verbindung werden in 100 ml trockenem Tetrahydrofuran geloest und unter Eiskuehlung mit 150 ml 6 N etherischer Salzsaeure versetzt. Man ruehrt das Gemisch 30 min unter Eiskuehlung, 1 Stunde bei Raumtemperatur und saugt dann die ausgefallenen Kristalle ab. Diese Kristalle werden in Ethanol geloest und die Mischung wird bis pH 6 mit Propylenoxid versetzt.
Die Loesung wird etwas eingeengt und die nach dem Aufbewahren der Mischung im Kuehlschrank ausgefallenen Kristalle werden abgesaugt. Man erhaelt 16 g (96 %) L-Alanyl-O-(benzylOxycarbonylamidomethanphosphonyl)-L-serinbenzylester, das im Duennschichtchromatogramm noch Spuren von Verunreinigungen aufweist, aber fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
97.5.
8.4 g des in Abschnitt 97.4. erhaltenen Dipeptldesters und 4.3 g Natriumhydrogencarbonat werden in einem Gemisch aus 120 ml Ethanol und 60 ml Wasser geloest und unter Ruehren mit einer Loesung des in Abschnitt 97.2. erhaltenen Succinimidesters versetzt. Das Gemisch wird 2 Stunden bei Raumtemperatur geruehrt und dann das Ethanol abdestilliert.
Die waessrige Phase wird 3 mal mit Essigsaeureethylester extrahiert und die organische Phase mit 2 N Salzsaeure und Wasser gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet und eingedampft. Der Rueckstand wird aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 9.3 g (75 t) N-Benzyloxy-N-propylglycyl-L-alanylO- (benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl) -L-serinbenzylester, der ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
97.6.
9 g des im vorstehenden Abschnitt erhaltenen Produktes werden analog Beispiel 45.3. hydriert. Das Rohprodukt wird in wenig Wasser gelost, die Loesung mit viel Ethanol versetzt und ueber Nacht im Kuehlschrank aufbewahrt. Die ausgefalenen Kristalle werden abgesaugt. Man erhaelt 3.7 g (81 %) N-Propyl-glycyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 160-165°C(Zersetzung). Das Produkt enthaelt 0.5 mol Wasser.
[α]D20 -27.4° (c = 1, H2O) Beispiel 98 Analog Beispiel 97 erhaelt man unter Verwendung von N-Benzyloxycarbonyl-N-methyl-L-alanin-N-hydroxysuccinimidesters statt des N-Propylglycinderivates N-Methyl-L-alanyl-L-alanyl-O- (aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 169-186°C (Zersetzung). Dem Produkt haften 0.5 mol Wasser an.
[a20 = -22.30 (c = 1, H2O) Beispiel 99 99.1.
N-tert.-Butoxycarbonyl-S-methyl-L-cystein wird analog Beispiel 97.2. durch Umsetzung mit N-Hydroxysuccinimid in den N-tert.-Butoxycarbonyl-s-methyl-L-cystein-N hydroxysuccinimidester ueberfuehrt. Das Rohprodukt laeßt sich aus Isopropanol umkristallisieren und ist fuer die Weiterverarbeitung rein genug.
99.2.
Verwendet man statt des N-Benzyloxycarbonyl-N-propylglycin-N-hydroxysuccinimidesters in Beispiel 97.5. den oben (Abschnitt 99.1.) erhaltenen N-Hydroxysuccinimidester, so erhaelt man N-tert.-Butoxycarbonyl-S-methyl-L-cysteinyl-L-alanyl-O- (benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl) -L-serinbenzylester, der ohne zusaetzliche Reinigung weiterverarbeitet wird.
99.3.
4.9 g des oben erhaltenen geschuetzten Tripeptides werden in 200 ml Ethanol und 100 ml Wasser geloest und ueber 1 g vorhydriertem Palladium (10 %) auf Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat zur Trockene eingedampft. Der Rueckstand wird in 10 ml Trifluoressigsaeure geloest, die Loesung 45 min bei Raumtemperatur geruehrt und schließlich eingedampft. Der Rueckstand wird in wenig Wasser geloest und ueber eine Saeule mit dem schwach basischen Ionenaustauscher Amberlite IRA-68 in der Acetatform mit Wasser als Elutionsmittel chromatographiert. Die produkthaltigen Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Der Rueckstand wird aus Wasser/ Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 1.2 g (44 %) S-Methyl-L-cysteinyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 178-1810C (Zersetzung). Das Produkt enthaelt 3 % Wasser.
[α]57820 = +13.5° (c = 1, H2O) Beispiel 100 0.5 g des in Beispiel 99.3. erhaltenen Produktes werden in 7.5 ml Eisessig geloest und mit 0.23 ml 30proz.
Wasserstoffperoxid versetzt. Nach 80 min ist die Oxidation laut Duennschichtchromatogramm vollstaendig, das Loesungsmittel wird abdestilliert und der Rueckstand durch Zugabe von Ethanol unter Ruehren zur Kristallisation gebracht.
Der Niederschlag wird isoliert. Man erhaelt 0.46 g (88 t) S-Methylsulfinyl-L-alanyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 175-1780C (Zersetzung).
[«]20 = +11.8° (c = 1, H20) 578 Beispiel 101 101.1.
Analog Beispiel 97.2. erhaelt man ausgehend von N-Benzyloxycarbonyl-L-thiazolidin- 4-carbonsaeure N-Benzyloxycarbonyl-L-thiazolidin-4-carbonsaeure-Nhydroxysuccinimid ester,als Oel, das ohne Reinigung weiter verwendet wird.
101 .2.
Verwendet man statt des N-Benzyloxycarbonyl-N-propylglycin-N-hvdroxvsuccinimidesters in Beispiel 97.5. den oben (Abschnitt 101.1.) erhaltenen N-Hydroxysuccinimidester als Ausgangsprodukt, so erhaelt man N-Benzyloxycarbonyl-L-thiazolidin-4-carbonyl-L-alanyl-O-(benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-L-serinbenzylester, der laut Duennschichtcnromatogramm zur Weiterverarbeitung rein genug ist.
101.3.
2.7 g der oben erhaltenen Verbindung werden in 4 g Anisol und 25 ml einer 40proz. Loesung von Bromwasserstoff in Eisessig geloest. Die Loesung wird 6 Stunden bei Raumtemperatur geruehrt und dann mit Ether versetzt. Der Niederschlag wird abfiltriert, getrocknet und ueber eine Saeule mit 30 ml des schwach basichen Ionenaustauschers Amberlite IRA-68 (Acetatform) mit Wasser als Elutionsmittel chromatographiert. Die Fraktionen 2 und 3 enthalten das gemischte Produkt. Sie werden eingedampft und der Rueckstand durch Zugabe von Ethanol kristallisiert.
Man erhaelt 0.66 g (49 %) L-Thiazolidin-4-carbonyl-L-alanyl-O- (aminomethanphosphonyl) -L-serin . Acetat vom Fp. 139-142°C (Zersetzung).
[a]ZO = 62.8" (c = 1, H20) Beispiel 102 102.1.
L-5, 5-Dimethyl-thiazolidin-4-carbonsaeure wird analog Beispiel 6.1. in N-Benzyloxycarbonyl-L-5,5-thiazolidin-4-carbonsaeure ueberfuehrt, die als Oel erhalten wird.
102.2.
Das oben erhaltene Thiazolidincarbonsaeurederivat wird analog Beispiel 48.2. mit L-Alanyl-L-serinbenzylester-Hydrochlorid umgesetzt. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie an Kieselgel und Essigsaeureethylester als Elutionsmittel als Sirup erhalten1 der sofort weiter umgesetzt wird.
102.3.
Das oben erhaltene geschuetzte Tripeptid wird analog Beispiel 45.2. mit Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure umgesetzt. Man erhaelt N-Benzyloxycarbonyl-L-5,5-dimethylthiazolidin-4-carbonyl-L-alanyl-O-(benzyloxycarbonylamidomethanphosphonyl)-L-serinbenzylester als Sirup, der ohne weitere Reinigung analog Beispiel 101.3. mit Bromwasserstoff in Eisessig behandelt wird.
Man erhaelt L-5, 5-Dimethyl-thiazolidin-4-carbonyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 171-173°C (Zersetzung). Nach dem NMR-Spektrum enthaelt die Substanz noch 10 % Aminomethanphosphonsaeure.
[α]D20 = -41.3° (c = 1, H2O) Beispiel 103 Analog Beispiel 97 erhaelt man unter Verwendung des N-Benzyloxycarbonyl-O-tert.-butyl-L-threonin-N-hydroxysuccinimidesters statt des N-Propylglycinderivates O-tert-.Butyl-L-threonyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 246-247°C (Zersetzung).
[α]D20 = - 10.3° (c = 1, H2O) Beispiel 104 104.1.
4.4 g L-pyro-glutaminsaeure-2,4,5-trichlorphenylester werden in einer Mischung aus 8 ml Dimethvlformamid und 40 ml trockenem Tetrahydrofuran geloest und mit 1.36 g N-Methylmorpholn und einer Loesung von 4.16 g L-Alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester-Hydrochlorid in 16 ml Dimethylformamid und öO ml Tetrahydrofuran versetzt. Die Mischung wird 4 Stunden geruchrt, ueber Nacht stehen gelassen und 3 Stunden im Kuehlschrank aufbewahrt. Die ausgefallenen Kristalle werden abgesaugt und getrocknet. Man erhaelt 4.5 g (75 %) fuer die Weiterverarbeitung genuegend reinen L-pyro-glutamyl-L-alanyl-L-serin-p-nitrobenzylester.
104.2.
Das oben erhaltene Produkt wird analog Beispiel 45.2. mit 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonsaeure umgesetzt und gemaeß Beispiel 45.3. hydriert. Man erhealt L-pyro-glutamyl-L-alanyl-O- (1R,S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 185-1870C(Zersetzung) . Das Produkt enthaelt 5 mol Wasser.
[Qj D0 = -11 90 (c = 1, H2O) Beispiel 105 105.1.
11 g N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin werden in 150 ml trockenem Dimethylformamid geloest und mit 38.3 ml 1-Jod?ropan versetzt. Unter Eiskuehlung und Ruehren werden 6.6 g Natriumhydrid portionsweise eingetragen. Nach 1 Stunde bei 0°C,1 Stunde bei Raumtemperatur und 3 Stunden bei 50°C gießt man die Reaktionsloesung in 3 Liter eines Eis/Wasser Gemisches, saeuert mit 2 N Salzsaeure an und extrahiert mit Essigsaeureethylester. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie an Kieselgel mit Essigsaeureethylester/Ligroin (1:5) als Elutionsmittel gereinigt.
Man erhaelt 14.2 g (94t) oeligen N-Benzyloxycarbonyl-N-(1-propyl)-L-alanyl-(1-propyl)-ester.
105.2.
14.1 g des oben erhaltenen (1-Propyl)-esters werden in 36 ml Aceton geloest und mit 46 ml 1 N NaOH versetzt.
Nach dem Stehen ueber Nacht wird das Aceton abdestilliert, die waessrige Phase mit Essigsaeureethylester extrahiert, filtriert, mit 2 N Salzsaeure angesaeuert und das Produkt mit Essigsaeureethylester extrahiert. Der Extrakt wird getrocknet und eingedampft. Es verbleiben 13 g (100 %) oeliges N-Benzyloxycarbonyl-N- (1 -propyl) -L-alanin, das analog dem entsprechenden Glycinderivat gemaeß den Beispielen 97.2., 97.5. und 97.5. weiter umgesetzt wird.
Man erhaelt N-(1-propyl)-L-alanyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serln-Monohydrat vom Fp. 200-2050C.
[a]ZO = 26.90 (c = 1, H20) Beispiel 106 106.1.
5.26 g N-Benzyloxycarbonyl-D,L-pipecolinsaeure werden analog Beispiel 1.3. in Methylenchlorid mit L-Alanyl-L-serinbenzylester-Hydrochlorid umgesetzt. Das Rohprodukt wird durch Ohromatographie an 750 g Kieselgel mit Essigsaeureethylester/Methylenchlorid bzw. reinen Essigsaeureethylester als Elutionsmittel chromatographiert. Man erhaelt 5.9 g N-Benzyloxycarbonyl-D,L-pipecolyl-L-alanyl-L serinbenzylester, der fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
106.2.
Das oben erhaltene Produkt wird analog Beispiel 49.2. mit N-Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure umgesetzt.
Das erhaltene Produkt wird gemaeß Beispiel 45.3. hydriert.
Das Rohprodukt wird durch Umkristallisation aus Methanol gereinigt. Man erhaelt D,L-Pipecolyl-L-alanyl-O-(aminomethanphosphonyl,-L-serin vom Fp. 178°C (Zersetzung). Dem Produkt haften 8 z Wasser an.
[aJD20 = -12.9° (c = 1, H20) Beispiel 107 107.1.
7.. 53 g N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalin werden analog Beispiel 1.3. mit L-norvalyl-L-serinbenzylester-Hydrochlorid umgesetzt. Das Rohprodukt wird aus Ethanol umkristallisiert.
Man erhaelt 11.4 g (74 %) N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-norvalyl-L-serinbenzylester vom Fp. 146-147°C.
107.2.
5.1 g des oben erhaltenen geschuetzten Tripeptids werden analog Beispiel 49.2. mit 3.1 g lR-1-(Benzyloxycarbonylamido)-ethanphosphonsaeure umgesetzt. Das erhaltene Rohprodukt wird aus Ethanol und wenig Wasser umkristallisiert. Man erhaelt 3.8 g (51 C.) N-Benzyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-norvalyl-0- (1R-1- (Benzyloxycarbonylamido) ethanphosphonyl) -L-serinbenzylester. Das Produkt enthaelt laut Duennschichtchromatogramm noch etwas Dicyclohexylharnstoff und wird ohne zusaetzliche Reinigung weiter umgesetzt.
107.3.
3.6 g des oben erhaltenen Produkts werden gemae# Beispiel 45.3. hydriert. Man erhaelt 1.3 g (66 %) L-Norvalyl-L-norvalyl-O-(1R-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 216-220°C (Zersetzung).
[α]D20 = +9.7° (c = 1.H2O) Beispiel 108 Analog Beispiel 107.2. und 107.3. erhaelt man unter Verwendung der 1S-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonsaeure statt des entsprechenden 1R-Isomeren L-Norvalyl-L-norvalyl-O-(1S-1-aminoethanphosphonyl)-L-serin als dihydrat vom Fp. 184°(Zersetzung).
[Q]0 ° +7.9° (c = 1, H2O) Beispiel 109 Ausgehend von den Ausgangsmaterialien N-tert.-Butoxy-L-prolin, L-Serinbenzylester-Hydrochlord, N-Benzyloxycarbonyl-L-Prolin stellt man analog den Beispielen 55.1. und 55.2. das geschuetzte Tripeptid N-Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-prolyl-L-serinbenzylester her, aus dem man analog den Beispielen 55.3. und 55.4. durch Umsetzung mit N-Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure und Hydrierung L-Prolyl-L-prolyl-O- (aminomethanphosphonyl) -L-serin vom Fp. 165-170°C (Zersetzung) erhaelt. Dem Produkt haften 12 % Wasser an.
[α]D20 = -81.9° (c = 1, H2O) Beispiel 110 Ersetzt man N-Benzyloxycarbonyl-L-prolin in Beispiel 109 durch N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin, so erhaelt man L-alanyl-L-prolyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 2340C (Zersetzung). Das Produkt enthaelt 10 % Wasser.
[a]ZO = -54.8° (c = 1, H20) D BeisPiel 111 Durch Einsatz von N-Benzyloxycarbonyl-sarcosin statt des N-Benzyloxycarbonyl-L-prolins erhaelt man analog Beispiel 109 Sarcosyl-X-prolyl-O-(aminomethanphosphonyl)-L-serin, das ab 164°C unter Zersetzung schmilzt.
[α]D20 = -53.6° (c = 1, H2O) Beispiel 112 N-Benzyloxycarbonyl-L-seryl-L-alaninbenzylester werden analog Beispiel 1.4. mit Methanphosphonsaeure umgesetzt.
Hydrierung dieses Produktes gemae# Beispiel 1.5. liefert O- (Methanphosphonyl)-L-seryl-L-alanin, das 280°Cunter Zersetzung schmilzt.
[α]D20 = 21.50 (c = 1, H20) Beispiel 113 Analog Beispiel 62 erhaelt man unter Verwendung von Methanphosphonsaeure als Phosphonsaeurekomponente O-(Methanphosphonyl)-L-seryl-L-prolin vom Fp. 120-130°C (Zersetzung). Das Produkt enthaelt 4 % Wasser.
Beispiel 114 Ausgehend von den Ausgangsmaterialien N-Benzyloxycarbonyl-L-alanin, N-tert.-Butoxycarbonyl-sarcosin und L-Serin-pnitrobenzylester erhaelt man analog den Beispielen 55.1. und 55.2. das geschuetzte Tripeptid N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-sarcosyl-L-serin-p-nitrobenzylester, das durch Umsetzung mit 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamido)ethanphosphonsaeure und anschließender Hydrierung analog den Beispielen 55.3. und 55.4. L-Alanyl-sarcosyl-O-(1R,S-l-aminoethanphosphonyl)-L-serin-Dihydrat vom Fp. 155-170°C (Zersetzung) liefert. fci]D20 = +10.90 (c = 1 t H20) Beispiel 115 115.1.
5 g L-Serin-p-nitrobenzylester werden in 25 ml Dimethylformamid suspendiert und mit 1.4 ml N-Methylmorpholin versetzt. Die Loesung wird auf O0Ogekuehlt und eine Loesung von 4. 9 g N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-glycin-p-nitrophenylester in 25 ml Dimethylformamid zugetropft. Man setzt noch 0.96 g 1-Hydroxybenzotriazol hinzu, ruehrt 30 min bei OOC, 3 Stunden bei Raumtemperatur und laeßt ueber Nacht stehen.
Das Reaktionsgemisch wird in Wasser gegossen, der ausgefallene Niederschlag wird abfiltriert und mit Natriumhydrogencarbcnatloesung, Zitronensaeureloesung und Wasser gewaschen, getrocknet und aus Ethanol umkristallisiert.
Man erhaelt 5.2 g (84 t) N-Benzyloxycarbonyl-slycylglycyl-L-serin-p-nitrobenzylester vom Fp. 97-1020C.
115.2.
Das oben erhaltene Tripeptid wird analog Beispiel 45.2. mit 1R,S-1-(Benzyloxycarbonylamino)ethanphosphonsaeure umgesetzt. Man erhaelt N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-glycyl-O-(lR,S-1-Benzyloxycarbonyl- (aminoethanphosphonyl)-L-serinp-nitrobenzylester, das laut Duennschichtchromatogramm fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
115.3.
5 g des oben erhaltenen Tripeptides werden analog Beispiel 45.3. hydriert. Das Rohprodukt wird in wenig Wasser gelöst und mit Ethanol versetzt. nie ausgefallenen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet. Man erhaelt 1.7 g(76 %) Glycyl-glycyl-O- (1 R 5-1 -aminoethanphosphonyl) -L-serin-Monohydrat vom Fp. 155-159°C(Zersetzung).
[α]D20 = +9.2° (c = 1, H2O) Beispiel 116 1.1 g O-(Methanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin werden in 50 ml Wasser geloest und unter Eiskuehlung zuerst mit 2.9 g Natriumhydrogencarbonat und dann tropfenweise mit 1 g Acetanhydrid versetzt. Man ruehrt das Gemisch 1 Stunde bei 0°C und 1.5 Stunden bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird ueber eine Saeule mit 200 ml stark saurem Ionenaustauscher Dowex 50 in der H+-Form filtriert. Man eluiert mit Wasser und faengt die saure Peptidfraktion auf, die gefriergetrocknet wird. Das Rohprodukt wird aus Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 1 g (81 t) N-Acetyl-O-(methanphosphonyl)-L-seryl-L-alanyl-L-alanin? vom Fp. 164-16800.
20 = -69.6° (c = 1, H20) D Beispiel 1 7 Analog Beispiel 11.3. kann man aus 5.56 g roher D,L-N-Benzyloxycarbonyl-thiomorpholin-3-carbonsaeure und 2.56 ml Ohlorameisensaeureisobutylester (250 ml Methylenchlorid und 2.16 ml N-Methylmorpholin, bei -20°C) in situ das gemischte Anhydrid bereiten, das dann nach Umsetzung mit 5.95 g rohem L-Alanyl-L-serin-benzylester . Hydrochlorid (Beispiel 77) (in 250 ml Methylenchlorid suspendiert) 9.85 g Rohprodukt liefert. Nach Reinigung an der Kieselgel saeule (400 c Gel und Essigester als Laufmittel) erhaelt man 5.6 g Krlstalllsat vom Fp. 65/68°C, naemlich D,L-N-benzyloxycarbonyl-thiomorpholin-3-carbonyl-L-alanyl-L-serinbenzylester.
Analog Beispiel 11.4. gewinnt man durch Reaktion dieser Substanz (5.6 g) mit 2.6 g (Benzyloxycarbonyl-amino)-methanphosphonsaeure (70 ml Pyridin; 6.6 g Dicyclohexylcarbodiimid, 6 Stunden bei 230C) 7.2 g rohen Monoester, der nach Reinigung an der Kieselgelsaeule (250 g Gel und CHCl3 + 5 z Methanol als Laufmittel und Entfernen des Monoesters aus der Saeule mit einem Gemisch aus CHCl 3 + 15 % Methanol) 3.9 g ergibt.
Analog Beispiel 11.5. bekommt man durch Hydrierung dieser Substanz (500 ml Methanol-H20 3:1; 3 g Katalysator Pd-C, 10pro.; 40 min), Eindampfen der waessr. Loesung im Vacuum und Anreiben der so verbliebenen Substanz mit Ethanol und Ether 0.22 g Monoester der Amino-methanphosphonsaeure mit D,L-Thiomorpholin-3-carbonyl-L-alanyl-L-serin (als Addukt mit 4 mol Wasser pro mol Substanz).
Herstellung der rohen D,L-N-Benzyloxycarbonyl-thiomorpholin-3-carbonsaeure: Zu 5.2 g Thiomorpholin-3-carbonsaeure . Hydrochlorid in 80 ml gesaettigter, waessr. N7aHCO3-Lsg. tropft man 4.2 ml Chlorameisensaeurebenzvlester (als 50proz. Lsg. in Toluol) ruehrt 2 Stunden nach, extrahiert mit Ether, stellt die Wasserphase mit HOl auf pH 2, extrahiert dann m t Essigester, dampft diese Essigesterextrakte im Vacuum ein und erhaelt so 5.56 g der gewuenschten Substanz als zaehen Sirup.
Beispiel 118 Ausgehend von L-Prolinbenzylester, N-tert.-Butoxycarbonyl-L-prolin, N-Benzyloxycarbonyl-L-serin erhaelt man analog den Beispielen 1.1. - 1.3. das geschuetzte Tripeptid N-BenzylOxyCarbOnyl-L-seryl-L-prolyl-L-prolylbenzylester, das durch Umsetzung mit N-Benzyloxycarbonyl-amidomethanphosphonsaeure und anschließende Hydrierung analog den Beispielen 55.3. und 55.4. O-(Aminomethanphosphonyl)-L-seryl-L-prolyl-L-prolin als hygroskopisches Pulver vom Fp. 165°C (Zersetzung) ergibt.
Beispiel 119 Analog Beispiel 49.2. setzt man 7.35 g N-Benzyloxycarbonylamidomethanphosphonsaeure mit 6.58 g N-Benzyloxycarbonyl-L-serinbenzylester um. Das Rohprodukt wird aus Essigsaeureethylester umkristallisiert. Man erhaelt 9 g (81 %) O-(BenzylOxycarbonylamidomethanphosphonyl)-N-benzylOxycarbonyl-L-serinbenzylester, der nach dem Duennschichtchromatogramm fuer die Weiterverarbeitung rein genug ist.
5 g dieses Produktes werden in 400 ml Ethanol und 100 ml Wasser geloest und ueber 1 g Palladium (10 t) auf Kohle hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat eingedampft und der Rueckstand aus Wasser/Ethanol umkristallisiert. Man erhaelt 1.4 g (78 %) ? 0- (Aminomethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 168°C (Zersetzung. Das Produkt enthaelt 0.5 mol Wasser.
[α]D20 = -14.0° (c = 1, H2O) Beispiel 120 Analog Beispiel 120 erhaelt man ausgehend von 1R-1-Benzyloxycarbonylamido-ethanphosphonaeurs O-(1R-1-Aminoethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 175-178°C.
[a]20 = 6.90 (c = 1, H20) Beispiel 121 Analog Beispiel 120 erhaelt man ausgehend von 1S-1-(Benzyl-Oxycarbonylamidoethanphosphonsaeure O-(1S-1-Aminoethanphosphonyl)-L-serin vom Fp. 166-168°C(Zersetzung).
[α]D20 = -16.60 (c = 1, H20) Beispiel 122 Analog Beispiel 120 erhaelt man ausgehend von Ethanphosphonsaeure O-(Ethanphosphonyl)-L-serin, das sich ab 210°C ohne zu schmelzen zersetzt.
[a]ZO = -11.3° (c = 1, H20) D Beispiel 123 Analog Beispiel 120 erhaelt man ausgehend von Methanphosphonsaeure 0- (Methanphosphonyl) -L-serin vom Fp. 162-165°C (Zersetzung).
[α]D20 = +4.2° (c = 1, H2O)

Claims

Patentansprüche X Aminosaeure- bzw. Peptidderivate der Formel I worin m und n die Werte 0, 1, 2 und 3 annehmen koennen mit der Ma#gabe, da# die Summe m + n nicht mehr als 3 betragen soll, R@ Wasserstoff, Niederalkyl, Niedercycloalkyl, Arylniederalkyl, Niederalkanoyl bedeuten kann und diese Reste auBerdem durch Carboxy- oder Niederalkoxycarbonylgruppen substituiert sein knennen, R4 und R7 die gleiche Bedeutung wie R1 haben und gleich oder verschieden sein koennen, R2 fuer Wasserstoff, Niederalkyl, Aryl, Arylniederalkyl steht, wobei diese Reste durch Hydroxy, Niederalkoxy, Amino, Niederalkylamino, Mercapto, Niederalkylthio, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Niederalkanoylamido, N-Hydroxyniederalkanoylamido, N-Hydroxyformamido, Guanidino, Cyano oder einen heterocyclischen Rest, der ein oder mehrere Stickstoffatome enthalten kann, substituiert sein koennen, R1 und R2 zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden koennen, die durch Sauerstoff oder Schwefel unterbrochen und durch Hydroxy, Niederalkoxy, Oxo, oder Niederalkylgruppen substituiert sein kann, R3, Rg, R6 und R9 fuer Wasserstoff oder Niederalkyl stehen und gleich oder verschieden sein koennen, R8 die gleiche Bedeutung wie R2 hat und mit R7 zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden kann, die durch Sauerstoff oder Schwefel unterbrochen und durch Hydroxy-Niederalkoxy, Oxo oder Niederalkylgruppen substituiert sein kann, R1o Hydroxy, Niederalkoxy, Amino oder Niederalkylamino sein kann, R1 1 fuer Niederalkyl und Arylniederalkylreste steht, die durch ein oder mehrere Hydroxy-, Amino-, Niederalkoxy-, Niederalkylamino-, durch Niederalkoxycarbonyl substituierte Niederalkylamino-, Carboxy-, Aminocarbonyl-, Niederalkoxycarbonyl-, Niederalkylaminocarbonyl-, Niederalkanoylamidogruppen substituiert sein koennen, wobei gegebenenfalls eine als Substituent vorkommende primaere oder sekundaere Aminogruppe durch einen Rest der Formel II a acyliert sein kann, in dem R1, R2, R3 und m die oben erlaeuterte Bedeutung haben koennen, und in R 1 vorkommende asymmetrische C-Atome unabhaengig voneinander die R-, S- oder R,S-Konfiguration besitzen koennen, die mit einem Stern (*) markierten C-Atome in der R-, S-, oder R,S-Konfiguration vorliegen koennen, wenn durch vier voneinander verschiedene Substituenten ein asymmetrisches C-Atom gebildet wird, X die Bedeutung Sauerstoff oder Schwefel hat und y ein Kohlenstoffatom sein kann oder -P-OH, -P-ONiederalkyl oder -P-O-Aryl bedeuten kann und physiologisch vertraegliche Salze dieser Verbindungen.
2. Verfahren zur Herstellung von Aminosaeure- bzw. Peptidderivaten der Formel I worin m und n die Werte 0, 1, 2 und 3 annehmen koennen mit der Maßgabe, daß die Summe m + n nicht mehr als 3 betragen soll, R1 Wasserstoff, Niederalkyl, Niedercycloalkyl, Arylniederalkyl, Niederalkanoyl bedeuten kann und diese Reste auBerdem durch Oarboxy- oder Niederalkoxycarbonylgruppen substituiert sein knennen, R4 und R7 die gleiche Bedeutung wie R1 haben und gleich oder verschieden sein koennen, R2 fuer Wasserstoff, Niederalkyl, Aryl, Arylniederalkyl steht, wobei diese Reste durch Hydroxy, Niederalkoxy, Amino, Niederalkylamino, Mercapto, Niederalkylthio, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylslfonyl, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Niederalkanoylamido, N-Hydroxyniederalkanoylamido, N-Hydroxyformamido, Guanidino, Cyano oder einen heterocyclischen Rest, der ein oder mehrere Stickstoffatome enthalten kann, substituiert sein koennen, R1 und R2 zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden koennen, die durch Sauerstoff oder Schwefel unterbrochen und durch Hydroxy, Niederalkoxy, Oxo, oder Niederalkylgruppen substituiert sein kann, R3, R5, R6 und R9 fuer Wasserstoff oder Niederalkyl stehen und gleich oder verschieden sein koennen, Re die gleiche Bedeutung wie R2 hat und mit Rv zusammen eine gesaettigte oder ungesaettigte Kohlenwasserstoffkette bilden kann, die durch Sauerstoff oder Schwefel unterbrochen und durch Hydroxy-Niederalkoxy, Oxo oder Niederalkylgruppen substituiert sein kann, Rlo Hydroxy, Niederalkoxy, Amino oder Niederalkylamino sein kann, R11 fuer Niederalkyl und Arylniederalkylreste steht, die durch ein oder mehrere Hydroxy-, Amino-, Niederalkoxy-, Niederalkylamino-, durch Niederalkoxycarbonyl substituierte Niederalkylamino-, Oarboxy-, Aminocarbonyl-, Niederalkoxycarbonyl-, Niederalkylaminocarbonyl-, Niederalkanoylamidogruppen substituiert sein koennen, wobei gegebenenfalls eine als Substituent vorkommende primaere oder sekundaere Aminogruppe durch einen Rest der Formel II a acyliert sein kann, in dem R1, R21 R1 und m die oben erlaeuterte Bedeutung haben koennen, und in R.1 vorkommende asymmetrische C-Atome unabhaengig voneinander die R-, S- oder R,S-Konfiguration besitzen koennen, die mit einem Stern (*) markierten C-A+ome in der R-, S-, oder R,S-Konfiguration vorliegen koennen, wenn durch vier voneinander verschiedene Substituenten ein asymmetrisches C-Atom gebildet wird, X die Bedeutung Sauerstoff oder Schwefel hat und y ein Kohlenstoffatom sein kann oder -P-OH, -P-ONiederalkyl oder -P-O-Aryl bedeuten kann und von physioloqisch vertraeglichen Salzen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der Formel IIIa worin R1 bis R10, X, Y, m, n und * die oben angegebene Bedeutung haben und die Amino- bzw. Saeuregruppe sowie eventuell vorhandene funktionelle Gruppen der Substituenten R1, R2, R4, R7 und R8 durch in der Peptidchemie uebliche Gruppen geschuetzt sind, mit einer Phosphonsaeure der Formel IV a worin R11 die oben angegebene Bedeutung hat, deren eventuell vorhandene funktionelle Gruppen durch in der Peptidchemie uebliche Gruppen geschuetzt sind, umsetzt oder b) eine Verbindung der Formel IIIa worin R1 bis R10, X, Y und * die oben angegebene Bedeutung haben, m und n die Werte 0, 1 oder 2 darstellen, mit der Maßgabe, daß die Summe m + n nicht mehr als 2 betragen soll und die Amino- bzw. Saeuregruppe sowie eventuell vorhandene funtionelle Gruppen der Substituenten R1, R2, R4, R7 und R8 durch in der Peptidchemie uebliche Gruppen geschuetzt sind, mit einer Phosphonsaeure der Formel IVa worin R11 die oben angegebene Bedeutung hat, kondensiert und anschließend nach Abspaltung entweder der Amino- oder Saeureschutzgruppe die erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel VIa oder Formel VIIa worin die Reste R1 bis R3, R7 bis R10, Y, m, n und * die oben angegebene Bedeutung haben, unter Schutz der entsprechenden Amino- oder Saeuregruppe, kondensiert, und anschließend in den nach den Verfahren a) oder b) erhaltenen Verbindungen vorhandene Schutz gruppen abspaltet sowie diese Verbindungen gewuenschtenfalls in ihre physiologisch unbedenkliche Salze ueberfuehrt.
3. Arzneimittel, enthaltend eine Verbindung gemaeß Anspruch 1 und uebliche Traeger- und Hilfsstoffe.
4. Verwendung von Verbindungen gemaeß Anspruch 1 zur Bekaempfung von bakteriellen Infektionen.