DE3213744A1

DE3213744A1 - PHARMACEUTICAL AGENT

Info

Publication number: DE3213744A1
Application number: DE19823213744
Authority: DE
Inventors: Takao Fujita; Shigemi Kitasaitama Saitama Kondo; Masahiro Hachioji Tokyo Makuta
Original assignee: Nissui Pharmacetuical Co Ltd; Nippon Suisan Kaisha Ltd
Current assignee: Nissui Pharmacetuical Co Ltd; Nissui Corp
Priority date: 1981-04-14
Filing date: 1982-04-14
Publication date: 1982-11-04
Also published as: GB2098065A

Description

Die Erfindung betrifft ein pharmazeutisches Mittel, das auch in Form eines medizinischen Nahrungsmittels oder
Gesundheitsnahrungsmittels vorliegen kann. Inbesondere betrifft die Erfindung ein pharmazeutisches Mittel oder Gesundheitsnahrungsmittel zur Verhinderung von Kreislauferkrankungen und insbesondere zur Verhinderung oder Behandlung von Thrombosen.The invention relates to a pharmaceutical agent, which is also in the form of a medicinal food or
Health food may be present. In particular, the invention relates to a pharmaceutical agent or health food for the prevention of circulatory diseases and in particular for the prevention or treatment of thromboses.

Mit zunehmendem Verzehr von Fetten aus an Land lebenden Tieren ist die Häufigkeit verschiedener Erkrankungen
des Kreislaufsystems gestiegen. Dies gilt insbesondere für die Hyperpiesie, Arteriosklerose, Herzinfarkte, Ste-As the consumption of fats from land-based animals increases, the incidence of various diseases increases
the circulatory system increased. This applies in particular to hyperpiesia, arteriosclerosis, heart attacks, st

nocard, Adiemorrhyse und andere Erkrankungen. Veränderungen des Gefäßsystems stellen sicherlich eine wesentliche generative Ursache dar für solche ischaemisehen Herzerkrankungen, Adiemorrhyse oder Apoplexie. Andererseits nuß jedoch auch eine besonders wichtige Rolle der Ausbildung eines Thrombus zugeschrieben werden. Bei Erkrankungen, die von der Bildung eines Thrombus begleitet sind, ist es besonders wichtig, die Agglutinationsfähigkeit des Bluts herabzusetzen. Dies kann dadurch geschehen, daß man die Agglutinationscharakteristika des Bluts an sich verbessern kann. Wirksame Maßnahmen hierfür sind daher in hohem Maße erwünscht.nocard, adiemorrhysis and other diseases. Changes of the vascular system are certainly an essential generative cause for such ischemic heart diseases, Adiemorrhysis or apoplexy. On the other hand, however, training must also play a particularly important role attributed to a thrombus. In diseases that are accompanied by the formation of a thrombus, it is particularly important to reduce the blood's ability to agglutinate. This can be done in that one can improve the agglutination characteristics of the blood itself. Effective measures for this are therefore highly desirable.

Alle pharmazeutischen Mittel, die bisher vorgeschlagen und weithin verwendet wurden, um Erkrankungen zu behandeln, welche mit einem Thrombus verbunden sind, wirken als Inhibitoren für die Gefäßkontraktion. Es handelt sich dabei um Mittel für die symptomatische Behandlung. Bisher wurden somit keine an die Wurzel gehenden Maßnahmen zur Bekämpfung von thrombotischen Erkrankungen sowie zur Verhinderung derselben gefunden.All pharmaceutical agents previously proposed and widely used to treat disease which are associated with a thrombus act as inhibitors of vascular contraction. It is about thereby about means for symptomatic treatment. So far, no measures have been taken that go to the root found to combat thrombotic diseases as well as to prevent the same.

Andererseits ist es bekannt, daß die Einnahme von Fischölen sich bei Patienten mit thrombo-cardiatischen Erkrankungen lebensverlängernd auswirkt und daß der Verzehr einer größeren Menge Fisch oder/und Fleisch von Meeressäugetieren sich im Sinne einer Inhibierung der Ausbildung von thrombo-cardiatischen Erkrankungen auswirkt. A.M.Nelson et al. haben z.B. ihren Patienten Fischöl verabreicht und sodann im Verlauf einer längeren Zeitdauer Nachfolgeuntersuchungen durchgeführt. Sie berichten, daß die Sterblichkeit der Patienten mit Fischölverzehr merklich geringer ist als bei der Vergleichsgruppe (Geriatrics, £3_> Seite 103, 1972). Dyerberg et al. haben auf Basis ihrer epidemiologischen UntersuchungenOn the other hand, it is known that the ingestion of fish oils is beneficial in patients with thrombo-cardiac diseases has a life-prolonging effect and that the consumption of a large amount of fish and / or meat from Marine mammals act in the sense of an inhibition of the development of thrombo-cardiac diseases. A.M. Nelson et al. have administered fish oil to their patients, for example, and then over a longer period of time Duration of follow-up examinations carried out. They report that patient mortality with fish oil consumption is noticeably lower than in the comparison group (Geriatrics, £ 3_> Page 103, 1972). Dyerberg et al. have based on their epidemiological investigations

bei Grönland-Eskimos festgestellt, daß der geringe Anfall von Thromboseerkrankungen unter den Eskimos auf spezifische Fettsäuren in ihrem Blut zurückzuführen ist. Im Blut der Eskimos ist Arachidonsäure nur in geringer Konzentration enthalten, während Eicosapentaensäure in hoher Konzentration enthalten ist. Dies ist zurückzuführen auf die in großem Umfang aus Fisch- und Meeressäugetierfleisch bestehende Diät (Landet II, Seiten 15 bis 17, 1978). Ferner haben Siess et al. weißen Erwachsenen Makrelen in einer Menge von 500 bis 800 g/Tag verabreicht, und zwar an 6 Tagen, und sodann einen Test hinsichtlich der Agglutinationsfähigkeit der Blutplättchen durchgeführt. Ferner wurde die Fettsäurenzusammensetzung des Blutplasmas untersucht. Es konnte gezeigt werden, daß die Agglutinationsfähigkeit sinkt und daß die Konzentration der Eicosapentaensäure im Blutplasma steigt. Es besteht somit eine negative Wechselwirkung zwischen dem Verhältnis von Eicosapentaensäure zu Arachidonsäure im Blutplasma (EPA/AA-Wert) und der Agglutinationsfähigkeit der Blutplättchen (Lancet I, Seite 441, 1980).in Greenland Eskimos found that the low incidence of thrombosis among the Eskimos was specific Fatty acids in their blood. There is only a low concentration of arachidonic acid in the blood of the Eskimos while eicosapentaenoic acid is contained in high concentrations. This is due to those made in large quantities from fish and marine mammal meat existing diet (Landet II, pp. 15-17, 1978). Furthermore, Siess et al. white adults Mackerel administered in an amount of 500 to 800 g / day for 6 days, and then a test for the ability of platelets to agglutinate. Furthermore, the fatty acid composition of the Blood plasma examined. It could be shown that the agglutination capacity decreases and that the concentration eicosapentaenoic acid in the blood plasma increases. There is thus a negative interaction between the Ratio of eicosapentaenoic acid to arachidonic acid in the blood plasma (EPA / AA value) and the ability to agglutinate of platelets (Lancet I, p. 441, 1980).

Es wurden daher die speziellen Charakteristika der Fettsäurenzusammensetzung bei aquatischen Tieren und Pflanzen untersucht. Es wurde festgestellt, daß die Öle und Fette von aquatischen Tieren und Pflanzen größere Mengen höherer ungesättigter Fettsäuren enthalten als Landtiere und Landpflanzen und daß die Doppelbindungen dieser höher ungesättigten Fettsäuren in << >3-Posrtion liegen.It was therefore the special characteristics of the fatty acid composition studied in aquatic animals and plants. It was found that the oils and Fats from aquatic animals and plants contain larger amounts of higher unsaturated fatty acids than terrestrial animals and land plants and that the double bonds of these higher unsaturated fatty acids in << > 3-position lying.

Es wurden nun spezielle, höhere ungesättigte Fettsäuren untersucht, und zwar insbesondere hinsichtlich ihrer Wirkung im Sinne einer Verhinderung der Blutplättchen-Agglutination. Diese Untersuchungen wurden bisher mit Eicosapentaensäure (EPA) durchgeführt. Bisher wurden jedoch keine Untersuchungen hinsichtlich Docosahexaen-Special, higher unsaturated fatty acids have now been investigated, in particular with regard to their effect in the sense of preventing platelet agglutination. These studies have so far been carried out with eicosapentaenoic acid (EPA). So far, however no studies regarding docosahexaen-

säure [all-cis-4,7,10,13,i6,19-Docosahexaensäure (22:6 '-Λ -3) J durchgeführt. Diese Säure wird im folgenden mit '¹QPiA" abgekürzt. Es handelt sich dabei um eine höhere ungesättigte Fettsäure, welche EPA ähnlich ist.acid [all-cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid (22: 6 '-Λ -3) J. This acid is ^{abbreviated to '1} QPiA "in the following. It is a higher unsaturated fatty acid, which is similar to EPA.

Die Erfinder haben gesunden, erwachsenen Personen 5 g Sardinenöl/Tag verabreicht, und zwar im Verlauf von einem Monat, und sodann die Relation zwischen der Fettsäurenzusammensetzung im Blutplasma und der Blutplättchen-Agglutinationsfähigkeit untersucht. Es wurde festgestellt, daß durch die Verabreichung von Sardinenö1 die Blutplättchen-Agglutination aufgrund von Adenosindiphosphat (ADP), Collagen oder dergl. merklich beschränkt wird und daß somit eine negative Beziehung zwischen der Menge an DHA und der Blutplattchen-Agglutination besteht.The inventors administered 5 g of sardine oil / day to healthy adults for one month, and then examined the relationship between the fatty acid composition in blood plasma and platelet agglutination ability. It has been found that the administration of sardine oil remarkably restricts platelet agglutination due to adenosine diphosphate (ADP), collagen or the like, and thus there is a negative relationship between the amount of DHA and platelet agglutination.

Es war bisher schon bekannt, daß Linolsäure, Linolensäure und viele andere Fettsäuren in vitro eine Anti-Agglutinationswirkung auf Blutplattchen ausüben. Es wurde aber auch gezeigt, daß dies nicht bedeutet, daß solche Fettsäuren die Bildung von Thrombosen in vivo unterdrücken können. Diese Fettsäuren können nämlich in vivo in Arachidonsäure (AA) umgewandelt werden. Diese wiederum kann in Tromboxan A₂ umgewandelt werden, welches auf Blutplättchen eine äußerst starke Agglutinationswirkung ausübt.It was previously known that linoleic acid, linolenic acid and many other fatty acids exert an anti-agglutination effect on blood platelets in vitro. However, it has also been shown that this does not mean that such fatty acids can suppress the formation of thromboses in vivo. Namely, these fatty acids can be converted into arachidonic acid (AA) in vivo. This in turn can be converted into tromboxane A ₂ , which has an extremely strong agglutination effect on blood platelets.

Daher verabreichten die Erfinder gereinigte DHA sowie ihre Derivate, wie Glyceride oder dergl., an Ratten, um die Fettsäurenzusammensetzung des Bluts festzustellen. Es wurde bestätigt, daß die DHA-Konzentration im Blutplasma steigt, ohne daß eine Änderung der AA-Konzentration beobachtet wird. Ferner wurde festgestellt, daß diese Maßnahme zu einer Verringerung der Agglutinationsfähigkeit der Blutplättchen sowie der Haftfähigkeit der-Therefore, the inventors administered purified DHA and its derivatives such as glycerides or the like to rats in order to determine the fatty acid composition of the blood. It was confirmed that the concentration of DHA in blood plasma increases without any change in AA concentration being observed. It was also found that this Measure to reduce the agglutination ability of the blood platelets and the adhesiveness of the

selben führt. Somit führt die DHA-Verabreichung in wirksamer Weise zur Verhinderung der BIutplättchen-Agglutination in vivo, ohne daß es zu einer Umwandlung in AA kommt. Ferner wurde bestätigt, daß DHA ähnlich wie herkömmliche, eßbare Öle und Fette gehandhabt werden kann und somit als Grundstoff verschiedenen Nahrungsmitteln zugesetzt werden kann.same leads. Thus, DHA administration is effective in preventing platelet agglutination in vivo without converting to AA. It was also confirmed that DHA is similar to conventional, Edible oils and fats can be handled and thus used as a basic ingredient in various foods can be added.

Es ist somit Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Nahrungsmittel zu schaffen, die in hohem Maße die Gesundheit fördern und welche auf natürliche Weise verzehrt werden können, ähnlich wie übliche Nahrungsmittel, ohne daß es spezieller Anstrengungen oder Überwindungen, wie im Falle üblicher pharmazeutischer Präparate oder medizinischer Diät oder dergl., bedarf, so daß Thrombosen oder andere Blutstörungen des Kreislaufsystems in wirksamer Weise verhindert oder behandelt werden können.It is therefore an object of the present invention to provide foods which are highly beneficial to health promote and which can be consumed naturally, similar to normal foods, without that there is special effort or overcoming, as in the case of conventional pharmaceutical preparations or medical ones Diet or the like., So that thrombosis or other blood disorders of the circulatory system in more effective Way can be prevented or treated.

Ferner soll erfindungsgemäß ein pharmazeutisches Präparat geschaffen werden, das sich zur Verhinderung und Behandlung von Thrombosen eignet.Furthermore, according to the invention, a pharmaceutical preparation be created that is suitable for the prevention and treatment of thrombosis.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe durch ein die Gesundheit förderndes Nahrungsmittel gelöst, welches mindestens eine der Docosahexaensäuren oder der Derivate derselben umfaßt. Diese Säuren und Derivate können aus Ölen und Fetten konzentriert und isoliert werden, welche aus aquatischen Tieren und Pflanzen extrahiert werden können. Ferner werden erfindungsgemäß pharmazeutische Präparate geschaffen, welche mindestens eine der vorgenannten Verbindungen in einer wirksamen Menge enthalten.According to the invention, this object is achieved by a health promoting food, which at least one of the docosahexaenoic acids or derivatives thereof. These acids and derivatives can be obtained from oils and fats, which can be extracted from aquatic animals and plants, are concentrated and isolated. Pharmaceutical preparations are also used according to the invention created which contain at least one of the aforementioned compounds in an effective amount.

Erfindungsgemäß kann DHA in Form einer freien Säure oder eines Derivats derselben verwendet v/erden, und zwar einzeln oder als Gemisch. Als Derivate kommen Salze infrage,According to the invention, DHA can be in the form of a free acid or of a derivative thereof is used, individually or as a mixture. Salts can be used as derivatives,

-JfT - -JfT -

ζ.3. Natrium-, Kalium- oder ähnliche Salze. Ferner kommen Ester in Betracht, wie Methylester, Äthylester oder dergl. oder Mono- Di- oder Triglyceride oder Amide usw..ζ.3. Sodium, potassium or similar salts. Further come Esters into consideration, such as methyl esters, ethyl esters or the like. Or mono-, di- or triglycerides or amides, etc.

Im folgenden sollen einige Rohmaterialien (aus aquatischen Tieren und Pflanzen) aufgezählt werden, aus denen DHA und Derivate von DHA gewonnen werden können: Fische, wie Makrelen, Makrelenhecht, Sardinen, Sardellen, Menhaden, Kabeljau, Dorsch, Hai oder dergl.; Krebstiere, wie Krabben, Hummer oder dergl.; aquatische Mollusken, wie Kuttelfisch, Tintenfisch, Schalentiere oder dergl.; Meeressäugetiere, wie Seehund- und Walfleisch oder dergl.; tierisches Plankton, wie Euphasia, Copepoda oder dergl.; Phytoplankton, die Dinoflagellaten oder dergl.; und Algen, wie Chlorella oder dergl.. Die ausgewählten Rohstoffe müssen recht frisch und von guter Qualität sein. Die Extraktion von DHA aus solchen Rohstoffen kann nach herkömmlichen Verfahren durchgeführt werden, z. B. nach dem Koch-Extraktions-Verfahren, nach dem Lösungsmittel-Extraktions-Verfahren, nach dem Verdauungs-Verfahren oder dergl.. Es ist bevorzugt, die Extraktion innerhalb einer möglichst kurzen Zeitdauer und bei niedriger Temperatur durchzuführen, um die Bildung von Peroxiden und Polymerisationsprodukten zu verhindern. Das extrahierte Öl sollte bei niedriger Temperatur und unter Ausschluß von Luft aufbewahrt werden, um eine Qualitätsminderung auszuschließen. Eine nachfolgende Konzentrierung und Isolierung kann aufgrund der physikochemischen Eigenschaften von DHA erfolgen, und zwar durch starke Abkühlung, AzidoIyse oder dergl. im Falle von DHA vom Glycerid-Typ, oder durch starke Abkühlung, Harnstoffzugabe, Säulenchromatographie, Destillation oder dergl. im Falle von DHA vom Ester-Typ. Ss ist natürlich bevorzugt, die begleitende Arachidonsäure zu entfernen, da diese, wie bereits erwähnt, in Tromboxan Ao umgewandelt wird und in vivo eine starkeIn the following some raw materials (from aquatic Animals and plants) from which DHA and derivatives of DHA can be obtained: fish, such as Mackerel, jackfish, sardines, anchovies, menhaden, cod, cod, shark or the like; Crustaceans, like crabs, Lobster or the like; aquatic mollusks, such as tripe fish, Squid, shellfish or the like; Marine mammals such as seal and whale meat or the like; animal Plankton such as Euphasia, Copepoda or the like; Phytoplankton, the dinoflagellates or the like; and algae, like Chlorella or the like. The selected raw materials must be quite fresh and of good quality. The extraction DHA from such raw materials can be carried out by conventional methods, e.g. B. after the Koch extraction process, by the solvent extraction process, by the digestive process or the like .. It it is preferred to carry out the extraction within the shortest possible time and at low temperature, to prevent the formation of peroxides and polymerization products. The extracted oil should be at be kept at a low temperature and in the absence of air in order to rule out any deterioration in quality. Subsequent concentration and isolation can occur due to the physicochemical properties of DHA, namely by strong cooling, azido lysis or the like. In the case of DHA of the glyceride type, or by strong cooling, addition of urea, column chromatography, Distillation or the like in the case of ester type DHA. Ss is of course preferred, the accompanying arachidonic acid to remove, as this, as already mentioned, is converted into Tromboxan Ao and is strong in vivo

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Blutagglutinationswirkung zeigt. Eine zweckentsprechende Kombination der erwähnten Methoden der Konzentration und Isolierung führt zu DHA oder den Derivaten derselben, welche nahezu keine Arachidonsäure enthält.Shows blood agglutination effect. An appropriate combination of the mentioned methods of concentration and isolation leads to DHA or its derivatives which contain almost no arachidonic acid.

Das erhaltene Konzentrat der DHA oder der Derivate derselben kann erforderlichenfalls einer weiteren Adsorptions- oder Destillationsbehandlung unterzogen werden, um einen ungünstigen Geruch oder ungünstige Färbungen zu beseitigen sowie Peroxide zu entfernen oder Polymerisationsprodukte oder nichtverseifte Substanzen, Wachse oder andere Verunreinigungen.The resulting concentrate of DHA or the derivatives thereof can, if necessary, undergo a further adsorption or distillation treatment to remove an offensive odor or color as well as removing peroxides or polymerization products or non-saponified substances, waxes or other impurities.

Es ist bei der genannten Reihe von Behandlungen der Konzentration, Isolierung und Reinigung wichtig, daß diese stets bei möglichst niedrigen Temperaturen erfolgen, und zwar im Inertgasstrom, um mögliche Qualitätsveränderungen durch Oxidation, Polymerisation oder dergl. zu verhindern. Das erhaltene Konzentrat von DHA oder den Derivaten derselben zeigt eine hohe ReirJieit und einen geringen Oxid-Wert von weniger als 5,0 mÄquiv./kg sowie einen geringen Gehalt an nichtverseiften Substanzen von 0,3% oder weniger. Das Konzentrat hat einen guten Geschmack und hat somit alle erwünschten Eigenschaften für den Zusatz zu Nahrungsmitteln.In the aforementioned series of treatments of concentration, Isolation and cleaning are important that these always take place at the lowest possible temperatures, and although in the inert gas flow in order to prevent possible quality changes due to oxidation, polymerization or the like. The obtained concentrate of DHA or the derivatives thereof shows a high degree of purity and a low one Oxide value of less than 5.0 meq / kg and a low content of non-saponified substances of 0.3% or less. The concentrate has a good taste and therefore has all the desired properties for the addition to food.

Die freie DHA vom Säure-Typ liegt normalerweise in Form der allcis-4,7,10,13,i6,19-Docosahexaensäure (C₂₂ ¹S)* iO -3) vor mit einem Molekulargewicht von 328. Der Bre-The free DHA from the acid type is usually in the form of allcis-4,7,10,13, i6,19-docosahexaenoic acid (C ₂₂ ¹ S) -3 * NG) in front with a molecular weight of 328. The Bre-

2020th

chungsindex der DHA vom Methylester-Typ beträgt n_D =chung index of DHA of the methyl ester type is n _D =

1,49736.1.49736.

DHA und ihre Derivate können leicht oxidiert v/erden, und es ist somit bevorzugt, ein Antioxidans zu verwenden. Als Antioxidans eignen sich Tocopherol, dl-a-Tocopherol, 3HT, Erythorbsäure oder dergl.. Falls man DHA oder ihreDHA and its derivatives can easily be oxidized, and thus it is preferable to use an antioxidant. Suitable antioxidants are tocopherol, dl-a-tocopherol, 3HT, erythorbic acid or the like. If you have DHA or theirs

Derivate als Nahrungsmittel oder als Zusatz zu Nahrungsmitteln verwendet, so kann man einen Synergisten zusetzen, wie Citronensäure, Lecithin, Ascorbinsäure oder ■iergl.. Wenn man das Konzentrat von DHA oder eines Derivats derselben als Nahrungsmittel verwendet, so kann das Konzentrat in Gelatine oder einem anderen Kapselmaterial eingekapselt werden, und zwar zusammen mit einem der oben erwähnten Antioxidantien und/oder Synergisten. Auf diese Weise erhält man ein eingekapseltes Nahrungsmittel.Derivatives as food or as an additive to food used, you can add a synergist, such as citric acid, lecithin, ascorbic acid or ■ iergl .. If you use the concentrate of DHA or a derivative If the same is used as food, the concentrate can be in gelatin or another capsule material encapsulated together with one of the above mentioned antioxidants and / or synergists. To this One way to get an encapsulated food.

DHA und ihre Derivate können in ähnlicher Weise gehandhabt werden wie herkömmliche oder übliche eßbare Öle und Fette. Sie können verschiedensten Nahrungsmitteln zugesetzt werden, die üblicherweise Öl oder Fett enthalten. Der Zusatz kann auf übliche Weise erfolgen, z.B. durch Kneten, Mischen, Emulgieren, Sprühen, Auftragen, Injizieren, Eintauchen oder dergl.. Die DHA oder ihre Derivate können somit als Teil der Ausgangsmaterialien für die Nahrungsmittelbereitung verwendet werden, und zwar insbesondere in Ölen für Kochzwecke, für Gewürzzwecke, in Saucen für Kochzwecke, in Salatdressings, Mayonnaise, Butter, Margarine oder dergl.. Die Menge an DHA-Konzentrat, welche zugesetzt werden muß, kann bestimmt werden, indem man die ratsame tägliche Dosis für einen durchschnittlichen Erwachsenen in Betracht zieht. Diese beträgt 1,0 bis 1,5 g/Tag. Falls man bei Zusatz des Konzentrats zu Nahrungsmitteln eine Beeinträchtigung des Geschmacks einzelner Nahrungsmittel befürchtet, so kann man zur Losung dieses Problems Geschmacks- oder Gewürzstoffe, Parfüms, Geruchsmodifiziermittel oder dergl. zusetzen.DHA and its derivatives can be handled in a similar manner as conventional or common edible oils and fats. They can be added to a wide variety of foods, which usually contain oil or fat. The addition can take place in the usual way, e.g. by kneading, mixing, emulsifying, spraying, applying, injecting, Dipping or the like. The DHA or its derivatives can thus be used as part of the starting materials for the Food preparation are used, and in particular in oils for cooking purposes, for seasoning purposes, in sauces for cooking purposes, in salad dressings, mayonnaise, Butter, margarine or the like. The amount of DHA concentrate that has to be added can be determined by considering the advisable daily dose for an average adult. This amounts to 1.0 to 1.5 g / day. In case the taste is impaired when the concentrate is added to food fears of individual foods, one can use flavors or spices to solve this problem, Add perfumes, odor modifiers or the like.

Alle Nahrungsmittel mit einem Gehalt an DHA oder einem i rer Derivate sollten vorzugsweise in einer verschlossenen Packung vorliegen, die undurchlässig ist gegenüber luft-und Lichtdurchtritt. Auf diese Weise Kann das Nahrungsmittel über eine relativ lange Zeitdauer gelagertAll foods containing DHA or one of its derivatives should preferably be sealed Packing is present that is impermeable to air and light penetration. This way the food can stored for a relatively long period of time

ΛΟΛΟ

werden, ohne daß es zu einer Beeinträchtigung der Qualität kommt.without impairing the quality.

Es ist bevorzugt, das erfindungsgemäße pharmazeutische Präparat auf oralem Weg zu verabreichen. Das Präparat kann jedoch auch durch intramuskuläre oder intravenöse Injektion verabreicht werden oder rektal mit Hilfe von Zäpfchen oder hypodermatisch. Zum Zwecke der oralen Verabreichung kann das Konzentrat in eine weiche, eßbare Kapsel eingeschlossen werden. Außer diesen Kapselpräparaten kann man jedoch auch Pulverpräparate oder Granulatpräparate herstellen. Zu diesem Zweck verwendet man zweckentsprechende Trägermaterialien, wie Kaolin, Calciumphosphat, Stärke, kristallisierte Cellulose oder dergl. Ferner kann man Tabletten herstellen, indem man das Pulver oder Granulat auf übliche V/eise tablettiert. Für Injektionsverabreichungszwecke wird das Konzentrat mit Wasser versetzt und gerührt, wobei man eine zusätzliche Menge eines oberflächenaktiven Mittels zusetzt, um eine Öl-in-Wasser-Emulsion zu bereiten.It is preferred to administer the pharmaceutical preparation of the present invention by the oral route. The preparation however, it can also be administered by intramuscular or intravenous injection, or rectally with the help of Suppository or hypodermic. For the purpose of oral administration the concentrate can be enclosed in a soft, edible capsule. Except for these capsule preparations However, you can also produce powder preparations or granulate preparations. For this purpose one uses appropriate carrier materials, such as kaolin, calcium phosphate, Starch, crystallized cellulose or the like. Furthermore, tablets can be prepared by using the Powder or granulate, made into tablets in the usual form. For injection administration purposes, the concentrate is supplied with Added water and stirred, adding an additional amount of a surfactant to a Prepare oil-in-water emulsion.

Die effektive Dosis an DHA oder einem ihrer Derivate auf Konzentrationsbasis beträgt 1,0 bis 1,5 g/Tag für Erwachsene. Die Menge kann jedoch im Falle einer präventiven Benutzung verringert werden sowie im Falle einer kontinuierlichen Verabreichung über lange Zeiträume.The effective dose of DHA or one of its derivatives on a concentration basis is 1.0 to 1.5 g / day for adults. However, the amount can be reduced in the case of preventive use as well as in the case of continuous use Administration over long periods of time.

Die Erfindung wird unter Bezugnahme auf die Zeichnungen erläutert; es zeigen:The invention is explained with reference to the drawings; show it:

Fig. 1 eine graphische Darstellung der Relation zwischen der Konzentration von Docosahexaensäure (DHA) und dem Inhibitionsverhältnis (%), und zwar bezogen auf die Blutplättchen-Agglutinationswirkung von 1 /UM Adenosindiphosphat (ADP); und1 is a graph showing the relationship between the concentration of docosahexaenoic acid (DHA) and the inhibition ratio (%), based on the platelet agglutination effect of 1 / UM adenosine diphosphate (ADP); and

Fig. 2 eine graphische Darstellung der Relation zwischen der Konsentration der Docosahexaensäure (DHA) und dem Inhibierungsverhältnis in bezug auf die Blutplättchen-Agglutination, wenn man 25/ug/ml Collagen als Aggiutiniemittel anstelle von ADP verwendet.Fig. 2 is a graphic representation of the relationship between the concentration of docosahexaenoic acid (DHA) and the inhibition ratio with respect to platelet agglutination, when using 25 / µg / ml collagen as an aggregate in place of ADP.

Im folgenden wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen und Vergleichsbeispielen näher erläutert. Im Ralunen dieser Beispiele wird die Bereitung erfindungsgei^äßoer Nahrungsmittel erläutert sowie die Durchführung der Untersuchung der pharmazeutischen Effekte.The invention is explained in more detail below with reference to working examples and comparative examples. in the Preparation of these examples becomes more inventive Food explained as well as the implementation of the study of the pharmaceutical effects.

Seispiele für die Nahrungsmittelbereitung Beispiel 1Examples of food preparation example 1

Es werden Makrelen verwendet, die unmittelbar nach dem Fang gefroren wurden. Nach dem Abtauen werden 100 kg Makrelenfilets gewonnen. Aus diesen isoliert man nach dem Eichverfahren 15 kg Kakrelenöl. Das öl wird während 2 h verseift, und zwar durch Behandlung nit einer 10%igen Lösung von NaOH in Äthanol. Das erhaltene Gemisch wird durch Zusatz von Salzsäure angesäuert. Man erhält 9 kg eines Fettsäuregemisches. Dieses wird sodann auf -6O⁰C abgekühlt. Man erhält 4 kg eines Konzentrats höherer ungesättigter Fettsäuren. Das Konzentrat wird bei 10 mmHg einer Molekulardestillation mit einem Gerät vom herabfließenden Typ unterzogen. Die verbleibende Fraktion wird sodann durch Säulenadsorptionschromatographie weiter konzentriert. Man erhält 900 g DKA-Koηζentrat. Das Gaschronatogramm zeigt eine Reinheit von 8250.It uses mackerel that has been frozen immediately after being caught. After defrosting, 100 kg of mackerel fillets are obtained. 15 kg of jackfish oil are isolated from these using the calibration method. The oil is saponified for 2 hours by treatment with a 10% solution of NaOH in ethanol. The mixture obtained is acidified by adding hydrochloric acid. 9 kg of a fatty acid mixture are obtained. This is then cooled to ⁰ C -6O. 4 kg of a concentrate of higher unsaturated fatty acids are obtained. The concentrate is subjected to molecular distillation at 10 mmHg with a downflow type apparatus. The remaining fraction is then further concentrated by column adsorption chromatography. 900 g of DKA concentrate are obtained. The gas chronograph shows a purity of 8250.

Es werden 175 g mit Dampf gekochtes, flockiges Thunfischfleisch verwendet. Diesem werden 40 g einer Gewürzflüssig keit zugesetzt sowie 5 g des DHA-Konzentrats und 0,1 g Tccopherol. Die Mischung v/ird in eine Dose gefüllt und unter Luftentzug verschlossen und durch Erhitzen der Dose während 70 min auf 110⁰C sterilisiert. Man erhält aufIt uses 175 g of steamed flaky tuna meat. 40 g of a spice liquid are added to this, as well as 5 g of the DHA concentrate and 0.1 g of tocopherol. The mixture is filled into a can and closed with aeration and sterilized ^{by heating the can to 110 ° C. for 70 min.} One receives on

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diese Weise eine Dose eines Thunfisch-Flockenprodukts. Dieses Nahrungsmittel wird durch eine Gruppe von Versuchspersonen beurteilt, und zwar neben einem im Handel erhältlichen Thunfisch-Flockenprodukt, Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 1 zusammengestellt. Es zeigt sich, daß kein signifikanter Unterschied im Geschmack und Geruch zwischen dem erfindungsgemäßen Erzeugnis und dem Handelserzeugnis festgestellt wird, und zwar selbst bei einer 1%igen Risikorate.this way a can of a tuna flake product. This food will be judged by a panel of test persons, besides one in the store available tuna flake product, the results are summarized in Table 1 below. It it turns out that there is no significant difference in taste and smell between the product according to the invention and the commercial product is detected, even at a 1% risk rate.

Tabelle 1 Zahl der Testpersonen: 30 Personen Table 1 Number of test subjects: 30 people

Taste smell

Zahl der Personen, die das erfindungsgemäße Produkt günstig
beurteilen 19 14Number of people who favorably use the product according to the invention
assess 19 14

Zahl der Personen, die das handelsübliche Produkt günstig beurteilen 11 16Number of people who rate the commercial product as favorable 11 16

Example 2

Aus den inneren Organen von Kuttelfisch werden 1000 g Öl gewonnen, und zwar durch Extraktion. Daraus erhält man 250 g eines Fettsäuregemisches nach dem AutoIyseverfahren durch Hydrolyse in einer dreistufigen Behandlung unter Verwendung von Lipase und Phospholipase. Das Gemisch wird einer Silikagel-Chromatographie unterworfen. Man erhält 53 g einer DHA-Fraktion. Diese hat eine Reinheit von 75%. 1000 g of oil are obtained from the internal organs of tripe fish by extraction. From this, 250 g of a fatty acid mixture are obtained by the auto-lysis process by hydrolysis in a three-stage treatment using lipase and phospholipase. The mixture is subjected to silica gel chromatography. 53 g of a DHA fraction are obtained. This has a purity of 75%.

Es werden 100 Gew.Teile feingehackter Pollack verwendet und mit 3 Gew.Teilen Speisesalz, 0,5 Gew.Teilen Zucker, 1,2 Gew.Teilen Natriumglutamat, 3 Gew.Teilen süßem, japanischem Saki (Reiswein), 3 Gew.Teilen frischem Eiweiß, 3 Gew.Teilen der DHA-Fraktion oder des Konzentrats und 0,3 Gew.Teilen Vitamin E versetzt. Diese Masse wird mit einer Knetmaschine geknetet und auf einer Holzplatte geformt und sodann 50 min mit Dampf bei 9O⁰C gekocht. !-lan erhält eine gekochte Fischpastete des Typs "Kamaboko".100 parts by weight of finely chopped pollack are used and 3 parts by weight of table salt, 0.5 parts by weight of sugar, 1.2 parts by weight of sodium glutamate, 3 parts by weight of sweet Japanese saki (rice wine), 3 parts by weight of fresh Egg white, 3 parts by weight of the DHA fraction or the concentrate and 0.3 parts by weight of vitamin E added. This mass is kneaded with a kneader and molded on a wooden board and then boiled 50 min with steam at 9O ⁰ C. ! -lan receives a cooked "Kamaboko" fish pie.

Sine Gruppe von Testpersonen zeigt, daß die erhaltene Fischpastete von einem vergleichbaren Handelsprodukt hinsichtlich des Geschmacks und des Gefühls im Mund nicht unterschieden v/erden kann.His group of test persons shows that the fish pie obtained is of a comparable commercial product in terms of the taste and the feeling in the mouth cannot be distinguished.

3eisDiel 33eisDiel 3

Aus den eßbaren Teilen von frischen Sardinen wird Öl gewonnen, und zwar nach dem Kochverfahren. Dieses wird mit einer 10%igen Losung von NaOH in Äthanol verseift und dann mit Salzsäure angesäuert. Man erhält rohe DHA vom Typ der freien Säure. Die rohe DHA wird durch Säulenchromatographie an Silbernitrat enthaltendem Silikagel gereinigt. Man erhält ein DHA-Konzentrat nit einer Reinheit von 95%» 10 Gew.Teile des erhaltenen DHA-Konzentrats werden mit 1 Gew.Teil des Sardinenöls vermischt, und die Mischung wird einer Azidolyse unterworfen. Sodann wird das gebildete Triglycerid abgetrennt. Eine gaschromatographische Analyse zeigt, daß die DHA im Fettsäureanteil des Triglycerids 855£ beträgt.Oil is obtained from the edible parts of fresh sardines using the cooking process. This is saponified with a 10% solution of NaOH in ethanol and then acidified with hydrochloric acid. Crude DHA of the free acid type is obtained. The crude DHA is purified by column chromatography on silica gel containing silver nitrate. A DHA concentrate with a purity of 95% is obtained. 10 parts by weight of the DHA concentrate obtained are mixed with 1 part by weight of the sardine oil, and the mixture is subjected to acidolysis. The triglyceride formed is then separated off. Gas chromatographic analysis shows that the DHA in the fatty acid portion of the triglyceride is £ 855.

Das Triglycerid mit einem hohen Gehalt an DHA wird in eine Kapsel vom Doppel-Zylinder-Typ gefüllt. Auf diese './eise erhält man eingekapselte Nahrung, wobei jede Kapsel 0,4 g des Triglycerids enthält, und zwar hermetisch verschlossen in einer Gelatine-Glycerin-Membran. Die Kapsel kann leicht mit Wasser geschluckt v/erden. Man bemerkt keinerlei Ölgeschmack oder -geruch.The triglyceride high in DHA is filled in a double-cylinder type capsule. To this './Ice you get encapsulated food, with each capsule Contains 0.4 g of the triglyceride, hermetically sealed in a gelatin-glycerol membrane. The capsule can easily be swallowed with water. You don't notice any oil taste or smell.

Example 4

3s werden Sardinen verwendet, die unmittelbar nach dem Fang nit Eis gekühlt wurden. 1C00 kg der Sardinen werden innerhalb von 5 h nach dem Fang vom Kopf und von den inneren Organen befreit und gekocht. Man erhält 100 kg 3ar» dir.enol. Das Öl wird verseift, indem man es während 2 h .-it einer 10!&Lgen Lösung von MaOH in Äthanol behandelt3s are used sardines, which are immediately after Fang not chilled with ice. 1C00 kg of sardines will be freed from the head and internal organs within 5 hours of being caught and cooked. You get 100 kg 3ar » dir.enol. The oil is saponified by treating it with a 10% solution of MaOH in ethanol for 2 hours

und dann mit Salzsäure ansäuert. Man erhält 60 kg eines Fettsäuregemisches. Das Gemisch wird im Vakuum bei weniger als 1 mmHg destilliert. Man erhält 10 kg einer verbleibenden Fraktion. Die Fraktion wird sodann der AzidoIysereaktion mit 1 kg Sardinenöl unterworfen. Man erhält ein Triglycerid, das DHA in großen Mengen enthält. Das Gaschromatogramm zeigt, daß in dem Fettsäureanteil des Triglycerids DHA 55# ausmacht.and then acidified with hydrochloric acid. You get 60 kg of one Fatty acid mixture. The mixture is distilled in vacuo at less than 1 mmHg. 10 kg of a remaining one is obtained Fraction. The fraction then undergoes the azido lysis reaction subjected to 1 kg of sardine oil. A triglyceride is obtained which contains DHA in large quantities. That Gas chromatogram shows that DHA is 55 # in the fatty acid portion of the triglyceride.

60 Gew.Teile Milch, 20 Gew.Teile Zucker, 17,5 Gew.Teile Eigelb, 0,8 Gew.Teile Vanille-Essenz, 0,1 Gew.Teil Tocophero!präparat, 0,1 Gew.Teil Glycerinfettsäureester und 1,5 Gew.Teile des Triglycerids mit hohem DHA-Gehalt werden unter Erhitzen vermischt. Das erhaltene, heiße Gemisch wird in Puddingbecher aus Kunststoffmaterial gefüllt, die zuvor mit einer geeigneten Menge Karamelsirup beschickt wurden. Die Mischung in den Bechern wird 15 min bei 80⁰C mit Dampf behandelt. Man erhält auf diese V/eise ein Puddingerzeugnis. Dieses Produkt wird durch Testpersonen begutachtet. Sie bestätigen, daß das Erzeugnis einen guten Geschmack hat und daß auch das Gefühl in Mund .<jut ist, und zwar nicht unterscheidbar von einem handelsüblichen Produkt.60 parts by weight of milk, 20 parts by weight of sugar, 17.5 parts by weight of egg yolk, 0.8 part by weight of vanilla essence, 0.1 part by weight of tocopheroid preparation, 0.1 part by weight of glycerol fatty acid ester and 1, 5 parts by weight of the high DHA triglyceride are mixed with heating. The hot mixture obtained is filled into pudding cups made of plastic material, which have previously been filled with a suitable amount of caramel syrup. The mixture in the beakers is treated with steam ^{at 80 ° C. for 15 min.} A puddling product is obtained in this way. This product is assessed by test persons. They confirm that the product has a good taste and that the feeling in the mouth is also good, and indeed indistinguishable from a commercially available product.

Example 5

Aus den eßbaren Teilen von Sardinen gewinnt man 10 kg Sardinenöl durch Kochen. 100 g Natriummethylat und 3 1 Äthanol v/erden zugesetzt, worauf während 6 h bei 20⁰C unter Rühren eine Umesterung stattfindet. Nach vollständiger Umsetzung läßt man die Mischung stehen, um das abgeschiedene Glycerin abzutrennen. Es erfolgt eine Neutralisation mit 0,1 M H₀SO/ . Es wird ausreichend mit V/asser gewaschen und dann erfolgt eine Zentrifugentrennung bei 10 000 χ G. Man erhält 9,5 kg eines Gemisches von Fettsäuremethylaten. Das Gemisch wird unter Vakuum von 1 mriKg oder weniger destilliert, um eine leichter flüchtige10 kg of sardine oil are obtained from the edible parts of sardines by boiling them. 100 g of sodium methylate and 3 liters of ethanol are added, whereupon ^{transesterification takes place for 6 hours at 20 °} C. with stirring. When the reaction is complete, the mixture is left to stand in order to separate off the separated glycerol. There is a neutralization with 0.1 MH ₀ SO /. It is washed sufficiently with water and then centrifugally separated at 10,000 χ G. 9.5 kg of a mixture of fatty acid methylates are obtained. The mixture is distilled under a vacuum of 1 mriKg or less to make it more volatile

Fraktion abzutrennen. Man erhält 950 g einer Ruckstandsfraktion. Diese 950 g der Rückstandsfraktion werden in ^i 75 kg η-Hexan aufgelöst und zur Abtrennung von Verunreinigungen, wie Peroxiden, Polymerisationsprodukten oder dergl., an einer Säule aus aktivierter Kieselsäure gereinigt. Dann wird das η-Hexan abdestilliert, wobei man 930 g eines Methylesters erhält, der einen hohen Anteil an DHA aufweist. Die Gaschromatographie zeigt, daß die Reinheit hinsichtlich des DHA-Anteils 729^ beträgt.Separate faction. 950 g of a residue fraction are obtained. These 950 g of the residue fraction are in ^ i 75 kg η-hexane dissolved and used to separate impurities, such as peroxides, polymerization products or the like., Purified on a column of activated silica. The η-hexane is then distilled off, 930 g of a methyl ester being obtained, which has a high proportion of DHA. Gas chromatography shows that the purity in terms of the DHA content is 729 ^.

23,2 Gew.Teile gehacktes Schweinefleisch, 41,5 Gew.Teile Zwiebeln, 5>4 Gew.Teile Stärke, 10,0 Gew.Teile Weizenmehl, 7,5 Gew.Teile Shiitake (japanischer Pilz), 1,0 Gew.-Teil Speisesalz, 1,0 Gew.Teil japanische Sojasauce, 0,3 Gew.Teile Pfeffer, 0,2 Gew.Teile Ingwer, 0,9 Gew.Teile Zucker, 0,3 Gew.Teile eines chemischen Gewürzes, 2,0 Gew.Teile Sesamöl und 4,7 Gew.Teile des Methylesters mit einem hohen DHA-Gehalt werden in einem Mixer gemischt. Die erhaltene Mischung Die erhaltene Mischung wird in eine Formmaschine gegeben. Mit dieser werden chinesische Ghaomais (eine Art Knödel) mit einem Gewicht von jeweils 15 g geformt. Die geformten Shaomais werden in einer kontinuierlichen Kochapparatur 13 min bei 96° C gekocht und dann durch Einblasen von Luft gekühlt. Das erhaltene Erzeugnis wird rasch auf -30⁰C abgekühlt, und zwar unter Verwendung einer kontinuierlichen Gefrierapparatur vom Spiraltransport-Typ. Dann wird das Erzeugnis hermetisch mit einer laminierten Polyamidharzfolie verpackt.23.2 parts by weight minced pork, 41.5 parts by weight onions, 5> 4 parts by weight starch, 10.0 parts by weight wheat flour, 7.5 parts by weight shiitake (Japanese mushroom), 1.0 weight parts -Part of table salt, 1.0 part by weight of Japanese soy sauce, 0.3 part by weight of pepper, 0.2 part by weight of ginger, 0.9 part by weight of sugar, 0.3 part by weight of a chemical spice, 2.0 Parts by weight of sesame oil and 4.7 parts by weight of the methyl ester with a high DHA content are mixed in a mixer. The obtained mixture The obtained mixture is placed in a molding machine. This is used to form Chinese ghao corn (a type of dumpling), each weighing 15 g. The shaped Shaomais are cooked in a continuous cooking apparatus for 13 minutes at 96 ° C. and then cooled by blowing air. The resulting product is rapidly cooled to -30 ⁰ C, and using a continuous freezer apparatus spiral transport type. Then the product is hermetically packed with a laminated polyamide resin film.

Nach der Aufbewahrung während 3 Monaten bei -25°C werden die gefrorenen Shaomai mit Dampf bei 96°C während 15 min jekocht und dann einer Gruppe von Testpersonen zur Begutachtung serviert. Der Vergleich erfolgt mit einem handelsüblichen Shaoraai-Erzeugnis. Es wird bestätigt, daß das erfindungsgemäße Erzeugnis einen guten Geruch und Gesclimack ähnlich dem Handelserzeugnis aufweist.After storage for 3 months at -25 ° C, the frozen Shaomai are steamed at 96 ° C for 15 minutes cooked and then a group of test subjects for assessment served. The comparison is made with a commercially available Shaoraai product. It is confirmed that the product according to the invention has a good smell and Gesclimack similar to the commercial product.

example

Es werden 10 kg gefrorene Köpfe von rotem Alaska-Lachs verwendet. Diese werden abgetaut und gehackt. Sodann erfolgt eine Gefriertrocknung, um den Wassergehalt auf 5% oder weniger zu verringern. Dann wird das Kopföl mit 8 kg η-Hexan extrahiert. Die das Kopföl enthaltende Hexanlösung läßt man nun über Nacht bei -45⁰C stehen. Nach dem Abfiltrieren des ausgeschiedenen, festen Fetts wird das FiI-trat an einer Säule mit aktivierter Kieselsäure behandelt, um Peroxide, Polymerisationsprodukte und andere Verunreinigungen zu entfernen. Dann wird das η-Hexan abdestilliert. Man erhält 0,7 kg eines Öls mit einem Gehalt an DHA-Triglycerid als Hauptkomponente. Die Gaschromatographie zeigt, daß der DHA-Gehalt in dem Öl 29,554 beträgt.10 kg of frozen Alaskan red salmon heads are used. These are thawed and chopped. Freeze-drying is then carried out to reduce the water content to 5% or less. The top oil is then extracted with 8 kg of η-hexane. The head the oil containing hexane solution is now allowed to stand overnight at -45 ⁰ C. After the solid fat which has separated out has been filtered off, the filtrate is treated with activated silica on a column in order to remove peroxides, polymerization products and other impurities. Then the η-hexane is distilled off. 0.7 kg of an oil containing DHA triglyceride as the main component is obtained. Gas chromatography shows the DHA content in the oil to be 29,554.

0,7 kg dieses Öls und 1,4 g a-Tocophercl werden vermischt. Die erhaltene Mischung wird in eine Kapselformmaschine gegeben. Diese bringt die Mischung sandwichartig zwischen zwei Gelatine-Glycerin-Folien. Diese werden sodann gepreßt und gleichzeitig mit einer Form von beiden Seiten her gestanzt unter Bildung von Kapseln. Jede Kapsel enthält 0,4 g des Öls. Das erhaltene, eingekapselte Nahrungsmittel wird einer Gruppe von Testpersonen gegeben. Diese bestätigen, daß die Kapseln leicht mit Wasser geschluckt werden können, ohne daß ein öliger Geschmack entsteht oder ein Fischgeruch wahrgenommen wird.0.7 kg of this oil and 1.4 g of α-Tocophercl are mixed. The mixture obtained is placed in a capsule molding machine. This sandwiches the mixture between two gelatine-glycerin foils. These are then pressed and at the same time with a shape punched from both sides to form capsules. Each capsule contains 0.4 g of the oil. The resulting encapsulated food is given to a panel of test subjects. These confirm that the capsules can be swallowed easily with water without developing an oily taste or a fishy smell is perceived.

Example 7

1 kg eines handelsüblichen Gemüsesaftes, 1,5 g Karragheen, 1,5 g Fettsäurezuckerester, 1,5 g Monoglycerid (Emulgator), 4,5 g Zucker, 10 g ausgepreßte Zitrone, 0,8 g Zitronenessenz und 50 g eines essentiellen Öls eines DHA-Glyceridkonzentrats, erhalten nach einem Verfahren, ähnlich demjenigen des Beispiels 6, werden durch Vermischen während 5 min mit einem Saftmixer homogeni-1 kg of a commercial vegetable juice, 1.5 g carragheen, 1.5 g fatty acid sugar ester, 1.5 g monoglyceride (Emulsifier), 4.5 g of sugar, 10 g of squeezed lemon, 0.8 g of lemon essence and 50 g of an essential oil of a DHA glyceride concentrate obtained by a method similar to that of Example 6 are prepared by Mix for 5 min with a juice mixer homogen-

siert. Der erhaltene Gemüsesaft wird auf 5⁰C abgekühlt und sodann Testpersonen serviert. Diese bestätigen, daß der Saft keinen öligen Geschmack oder Geruch besitzt und hinsichtlich des Geschmacks nicht von einem handelsüblichen Gemüsesaft unterschieden werden kann.sated. The vegetable juice obtained is ^{cooled to 5 °} C. and then served to test persons. These confirm that the juice has no oily taste or odor and cannot be distinguished from a commercial vegetable juice in terms of taste.

Example 8

Antarktische Euphausien werden gefriergetrocknet und dann mit η-Hexan extrahiert, wobei man 10 kg Öl und Fett erhält. Dieses Produkt wird unter Verwendung von Lipase und Phospholipase hydrolysiert. Man erhält 6,1 kg eines Fettsäuregemisches. Die Mischung wird einer Molekulardestillation bei 10 mmHg unterworfen, und zwar mit einem Molekulardestillationsgerät vom herabfließenden Typ. Die zurückbleibende Fraktion wird konzentriert und isoliert, wozu man die Chromatographie an Silikagel heranzieht. Man erhält 1 kg eines DHA-Konzentrats. Das Gaschroma togramm zeigt, daß die Reinheit 82% beträgt.Antarctic euphouses are freeze-dried and then extracted with η-hexane, 10 kg of oil and fat being obtained. This product is hydrolyzed using lipase and phospholipase. 6.1 kg of one are obtained Fatty acid mixture. The mixture is subjected to molecular distillation at 10 mmHg with a Downflow type molecular still. The remaining fraction is concentrated and isolated, what is used for chromatography on silica gel. 1 kg of a DHA concentrate is obtained. The Gas Chroma togramm shows that the purity is 82%.

8,5 g des DHA-Konzentrats, 47 g Kartoffeln, 10 g grüne Erbsen, 10 g Karotten, 1,5 g Gewürz und 0,1 g Tocopherol werden in eine Dose der Größe Nr. 4 gefüllt und diese wird nach dem Entfernen der Luft verschlossen und 50 min bei 110⁰C sterilisiert. Die Versuchspersonen bestätigen, daß das Erzeugnis einen guten Geschmack hat, der von demjenigen eines handelsüblichen Erzeugnisses nicht unterschieden werden kann.8.5 g of the DHA concentrate, 47 g of potatoes, 10 g of green peas, 10 g of carrots, 1.5 g of spice and 0.1 g of tocopherol are placed in a can of size no. 4 and this is after removing the Sealed with air and ^{sterilized at 110 °} C. for 50 min. The test persons confirm that the product has a good taste which cannot be distinguished from that of a commercial product.

Untersuchung der pharmazeutischen Effekte TierversucheInvestigation of the pharmaceutical effects Animal experiments

Die pharmazeutischen Effekte des erfindungsgemäßen Mittels werden in Tierversuchen ermittelt. Bei jedem Test wird DHA mit 93?6 Reinheit verwendet. Dieses wurde erhalten durch Kochen der eßbaren Teile von Sardinen, durch Äthyl-Umesterung des erhaltenen Öls unter Verwendung vonThe pharmaceutical effects of the agent according to the invention are determined in animal experiments. With every test DHA with 93? 6 purity is used. This was received by cooking the edible parts of sardines, by ethyl transesterification of the oil obtained using

Natriumäthylat, gefolgt von einer Reinigung des erhaltenen Äthylats durch Säulenchromatographie mit Silbernitrat enthaltendem SilikagelSodium ethylate, followed by purification of the obtained Ethylate by column chromatography with silica gel containing silver nitrate

Test 1Test 1

Gesunden Kaninchen (weiße japanische Rasse) erhalten während 24 h keine Nahrung. Dann wird das Blut aus den Zirkularvenen entnommen. Zu diesem Blut gibt man 1/1O des Volumens einer 3,8%igen Lösung von Natriumeitrat. Sodann wird die erhaltene Mischung mit 1000 U/min während 10 min zentrifugiert. Man erhält eine obere Schicht aus Blutplasma, welches reich an Blutplättchen ist (PRP). Die untere Schicht wird einer weiteren Zentrifugalbehandlung bei 3000 U/rain während 10 min unterworfen. Man erhält wiederum eine obere Schicht aus Blutplasma, die arm an Blutplättchen ist (PPP). Es wird ein herkömmlicher Blutplättchen-Agglutina tor verwendet. Nach dem Verfahren von Born und O'Brien wird eine Agglutinationssubstanz (ADP und Collagen) mit einer konstanten Konzentration zugesetzt, und zwar bei 37⁰C unter Rühren. Die Agglutination der Blutplättchen führt zu einer Erhöhung der Transparenz. Diese wird ermittelt und auf einem Aufzeichnungsgerät im Agglutinator aufgezeichnet. DHA wird 6 min vor der Zugabe der Agglutinationssubstanz zugesetzt. Die Ergebnisse sind in den Fig. 1 und 2 dargestellt. Man erkennt aus den graphischen Darstellungen der Fig. 1 und 2 die folgenden Ergebnisse. Healthy rabbits (Japanese white breed) are not fed for 24 hours. Then the blood is drawn from the circular veins. 1/10 of the volume of a 3.8% solution of sodium citrate is added to this blood. The mixture obtained is then centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes. An upper layer of blood plasma which is rich in blood platelets (PRP) is obtained. The lower layer is subjected to a further centrifugal treatment at 3000 rpm for 10 minutes. In turn, an upper layer of blood plasma which is low in blood platelets (PPP) is obtained. A conventional platelet agglutinator is used. According to the method of Born and O'Brien, an agglutination substance (ADP and collagen) is added at a constant concentration, namely at 37 ^° C. with stirring. The agglutination of the platelets leads to an increase in transparency. This is determined and recorded on a recording device in the agglutinator. DHA is added 6 minutes before the agglutination substance is added. The results are shown in Figs. The following results can be seen from the graphs of FIGS. 1 and 2.

Bei ADP-Agglutination (1 /uM) und Collagen-Agglutination (2,5/ug/ml) zeigt DHA keine Inhibierungswirkung bei 1,2 bzw. 3 mM. Diese Wirkung hängt ab von der zugesetzten Menge und ist in ihrem Ausmaß derjenigen, welche durch ΞΡΑ erreichbar ist, äquivalent.With ADP agglutination (1 / uM) and collagen agglutination (2.5 / µg / ml) DHA shows no inhibitory effect at 1.2 and 3 mM, respectively. This effect depends on the amount added and its extent is the same as that which occurs through ΞΡΑ is achievable is equivalent.

Die DHA bewirkt bei 2 mM eine Parallelbewegung der ADP-Agglutinationskurve (0,5, 1,0, 2,0, 4,0und 8,0 /uM) und der Collagen-Agglutinationskurve (1,25, 2,5, 5,0, 10,0 und 20,0/ug/ml) zur Seite der höheren Konzentration hin. Man erkennt hieran einen entgegenwirkenden Antagonismus, welcher demjenigen der EPA äquivalent ist.The DHA causes a parallel movement of the ADP agglutination curve at 2 mM (0.5, 1.0, 2.0, 4.0 and 8.0 / µM) and the collagen agglutination curve (1.25, 2.5, 5.0, 10.0 and 20.0 / µg / ml) toward the higher concentration side. A counteracting antagonism can be recognized here, which is equivalent to that of the EPA.

Bei der ADP-Agglutination (1 /um) und bei der Collagen-Agglutination (2,5 /ug/ml) ist die kombinierte Wirkung von 1,5 mM DHA und 1,5 mM EPA äquivalent der Inhibierungswirkung, welche mit 3 mM der DHA oder EPA allein bewirkt wird.In ADP agglutination (1 / µm) and in collagen agglutination (2.5 / µg / ml) the combined effect of 1.5 mM DHA and 1.5 mM EPA is equivalent to the inhibiting effect, which is effected with 3 mM of the DHA or EPA alone.

Test 2Test 2

Gesunde, männliche Wistar-Ratten (6 Wochen alt) werden in vier Gruppen eingeteilt zu je 10 Tieren.Healthy male Wistar rats (6 weeks old) are divided into four groups of 10 animals each.

Table 2

Gruppe 1 normale Nahrung Wasser 2 ml/kg Gruppe 2 cholesterinreiche Nahrung " Gruppe 3 " " DHA 100 mg/kgGroup 1 normal food water 2 ml / kg Group 2 high cholesterol food " Group 3 "" DHA 100 mg / kg

Gruppe 4 " " EPA 100 mg/kgGroup 4 "" EPA 100 mg / kg

Die Ratten in den Gruppen 3 und 4 erhalten DHA bzw. EPA, und zwar kontinuierlich oral und zwangsmäßig im Verlauf von 30 Tagen in einer Menge von 100 mg/kg/Tag. 30 Tage nach Verabreichung der Mittel erhalten die Ratten keine Nahrung mehr. Am nächsten Tag werden sie mit Äther anästhesiert. Dann wird Blut aus der Aorta der unteren Abdominalregion entnommen. Aus dem Blut erhält man PRP- und PPP-Proben ähnlich wie bei dem in vitro-Test des Ver suchs 1. Die Blutplättchen-Agglutinationsfähigkeit wird gemessen durch Zusatz eines Mittels, das Blutplättchen-Agglutination bewirkt (ADP oder Collagen), und zwar mit gleicher Konzentration zu PRP. Ferner wird die Gesamtcholesterinkonzentration (T-Ch) im Blutserum gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 aufgeführt.The rats in groups 3 and 4 received DHA and EPA, respectively, continuously orally and compulsorily over the course of the day for 30 days in the amount of 100 mg / kg / day. Thirty days after the administration of the agents, the rats received none Food more. The next day they are anesthetized with ether. Then blood is drawn from the aorta of the lower abdominal region taken. PRP and PPP samples are obtained from the blood similar to the Ver suchs 1. The platelet agglutination ability is measured by adding an agent that causes platelet agglutination (ADP or collagen), namely with same concentration as PRP. The total cholesterol concentration (T-Ch) in the blood serum is also measured. The results are shown in Table 3.

Table 3

Gruppe Anteil der Blutplättchen- T-Ch-KonzentrationGroup Percentage of platelet T-Ch concentration

Agglutination (%) im Serum (mg/dl) Agglutination (%) in serum (mg / dl)

ADP (2/UM j ColiagenC4yUg/mi;ADP (2 / UM j ColiagenC4yUg / mi;

1 38,4+4,7 48,6+5,3 61,45+ 5,631 38.4 + 4.7 48.6 + 5.3 61.45+ 5.63

2 51,6+6,2 59,8+5,8 206,41+31,122 51.6 + 6.2 59.8 + 5.8 206.41 + 31.12

3 39,3 + 3,6 43,7 + 4,5 124,35 + 32,483 39.3 + 3.6 43.7 + 4.5 124.35 + 32.48

4 40,7+5,1 42,3+4,4 111,25+25,554 40.7 + 5.1 42.3 + 4.4 111.25 + 25.55

Aus den obigen Ergebnissen werden die folgenden Schlüsse gezogen. Bei der ADP-Agglutination (1 bis 10/UM) und Collagen-Agglutination (1 bis 10/ug/ml) kommt es bei der Verabreichung von DHA 100 mg/kg (Gruppe 3) deutlich zu einer Verhinderung der Blutplättchen-Agglutination im Vergleich zur Gruppe mit hohem Cholesteringehalt in der Nahrung der Gruppe 2. Die Wirkung ist äquivalent der Wirkung bei der Gruppe, die EPA (100 mg/kg) erhielt (Gruppe 4). In der Gruppe mit cholesterinreicher Nahrung (Gruppe 2) beobachtet man eine Steigerung der Blutplättchen-Agglutination im Vergleich zur normalen Gruppe 1. Die T-Ch-Konzentration in der Gruppe mit cholesterinreicher Nahrung (Gruppen 2 bis 4) ist höher als bei der normal ernährten Gruppe 1.From the above results, the following conclusions are drawn. In ADP agglutination (1 to 10 / UM) and Collagen agglutination (1 to 10 / ug / ml) occurs when Administration of DHA 100 mg / kg (group 3) markedly a prevention of platelet agglutination in the Compared to the group 2 high cholesterol diet group. The effect is equivalent to the effect in the group that received EPA (100 mg / kg) (Group 4). In the high cholesterol group (group 2) one observes an increase in platelet agglutination compared to normal group 1. The T-Ch concentration in the high cholesterol group (groups 2 to 4) is higher than normal fed group 1.

Diese Tatsachen zeigen, daß DHA eine Anti-Agglutinie rungswirkung in bezug auf Blutplättchen aufweist. Die Wirkung ist äquivalent der Wirkung von EPA. In den Tests werden die folgenden Nahrungsstoffe verwendet.These facts show that DHA has an anti-agglutination effect in relation to platelets. The effect is equivalent to the effect of EPA. In the tests the following nutrients are used.

Normal nutrients

Festes Tierfutter, hergestellt von Oriental Yeast Industry Co., Ltd., Japan, unter der Bezeichnung "MF".Solid animal feed manufactured by Oriental Yeast Industry Co., Ltd., Japan, under the name "MF".

High cholesterol feed

Hergestellt durch Vermischen der folgenden Bestandteile. Made by mixing the following ingredients.

3434

- 00 -- 00 -

Table 4

Casein 18Casein 18

Saccharose 61Sucrose 61

Cellulose 4Cellulose 4

gehärtetes Pflanzenöl 10hydrogenated vegetable oil 10

Vitamine 2Vitamins 2

Mineralien 4Minerals 4

Cholesterin 0,5Cholesterol 0.5

Natriumcholat 0,5Sodium cholate 0.5

Test 3Test 3

Männliche Meerschweinchen der Hartley-Rasse mit einem Gewicht von 800 bis 1000 g werden in zwei Gruppen eingeteilt zu je 10 Tieren. Sie erhalten normale Nahrung, die von Oriental Yeast Industry Co., Ltd., Japan, unter der Bezeichnung "RC-4" vertrieben wird. Die Vergleichsgruppe und die Gruppe mit Verabreichung eines Mittels erhalten eine einzige Tagesdosis einer physiologischen Salzlösung bzw. 200 mg/kg 98%ige DHA, und zwar über 2 Wochen. Die DKA-Dosen werden hergestellt durch Emulgieren von DHA in gereinigtem Wasser. Hierzu verwendet man einen Potter-Homogenisator. Das erhaltene Mittel wird zwangsmäßig oral verabreicht, wobei ein Gerät für orale Verabreichung verwendet wird.Male Hartley breed guinea pigs weighing from 800 to 1000 g are divided into two groups of 10 animals each. You get normal food that by Oriental Yeast Industry Co., Ltd., Japan, under the designation "RC-4". The comparison group and the agent-administering group receive a single daily dose of physiological saline or 200 mg / kg 98% DHA, over 2 weeks. The DKA doses are made by emulsifying DHA in purified water. A Potter homogenizer is used for this. The agent obtained becomes inevitably oral administered using an oral delivery device.

Die für den Test herangezogenen Meerschweinchen werden 5 min in einen Raum mit einer Temperatur von 50⁰C gegeben. Sodann führt man in ihre aurikulare Vene eine Injektionsnadel mit 1 mm Durchmesser ein, um Blut zu entnehmen. Das entnommene Blut wird auf Filterpapier absorbiert, und zwar in Intervallen von 5 see. Auf diese Weise wird die Zeit gemessen, bis die Blutung aufhört. In diesem Falle wird eine farblose Lösung vom Filterpapier absorbiert. Die Blutungszeit wird als die Zeitspanne ermittelt, bisThe guinea pigs used for the test are placed in a room with a temperature of 50 ^° C. for 5 minutes. An injection needle 1 mm in diameter is then inserted into her auricular vein to collect blood. The withdrawn blood is absorbed on filter paper at intervals of 5 seconds. This will measure the time it will take for the bleeding to stop. In this case a colorless solution is absorbed by the filter paper. The bleeding time is determined as the amount of time until

sich auf dem Filterpapier keine rote Färbung aufgrund des Bluts mehr zeigt. Die Blutungsdauer wird in bezug auf die Venen der beiden Ohren gemessen. Als wahre Blutungszeit wird der Mittelwert angesehen. 2 Wochen nach der ersten Verabreichung wird die Blutungszeit bei jeder Gruppe gemessen. Es wird festgestellt, daß im Falle der DHA-Verabreichung eine deutliche Verlängerung der Blutungszeit eintritt im Vergleich zur Gruppe, welche nur eine physiologische Salzlösung erhielt. Die numerischen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle 5 angegeben.there is no longer any red color on the filter paper due to the blood. The duration of bleeding is measured in relation to the veins of the two ears. The mean value is taken as the true bleeding time. 2 weeks after the first administration, the bleeding time is measured in each group. It was found that in the case of DHA administration, the bleeding time was significantly prolonged in comparison with the group that received only a physiological saline solution. The numerical results are given in Table 5 below.

Table 5

Gruppe mit physiologischer Kochsalzlösung 109,5 + 7,8 seeGroup with physiological saline solution 109.5 + 7.8 see

Gruppe mit DHA 132,6 +11,2 seeGroup with DHA 132.6 +11.2 see

Klinische Tests Test AClinical Tests Test A

Nach dem Verfahren des Beispiels 8 wurde ein Gemüsesalat in Dosen hergestellt. Der Inhalt wird jeweils 8 gesunden männlichen Erwachsenen gegeben, und zwar in einer Menge von 1 Dose/Tag an insgesamt 7 Tagen. Die Testergebnisse sind in der folgenden Tabelle 6 aufgeführt.Following the procedure of Example 8, a canned vegetable salad was prepared. The content will be 8 healthy each given to male adults at a rate of 1 can / day for a total of 7 days. The test results are listed in Table 6 below.

In der folgenden Tabelle 6 bedeutet die Abkürzung DHA Docosahexaensäure und AA Arachidonsäure.In the following Table 6, the abbreviation DHA means docosahexaenoic acid and AA means arachidonic acid.

Testperson Vor und nach dem Verzehr des Doseninhalts Test person Before and after consuming the contents of the can

DHA(/ug/ml im Blutplasma)DHA (/ ug / ml in blood plasma)

Tabel

DIIA/AA Blutplättchen-Agglutination
(ADP-Agglutinations-DIIA / AA platelet agglutination
(ADP agglutination

Threshold value, / UM)

Adhäsionskoeffizient der Blutplättchen(%)Platelet Adhesion Coefficient (%)

vor dem Versehr nach 7 Tagenbefore the failure after 7 days

vor dem Verzehr nach 7 Tagenbefore consumption after 7 days

Mittelwert vor dem Verzehr nach 7 TagenAverage before consumption after 7 days

108,4
212,3108.4
212.3 0,55
1,020.55
1.02 1,0
2,01.0
2.0 58,9
118,758.9
118.7 0,41
0,360.41
0.36 1,0
3,01.0
3.0 48,7
268,448.7
268.4 0,36
1,430.36
1.43 2,0
2,02.0
2.0 32,4
135,532.4
135.5 0,37
1,110.37
1.11 2,0
2,52.0
2.5 42,1
114,342.1
114.3 0,34
0,830.34
0.83 1,0
1,51.0
1.5 74,6
161,974.6
161.9 0,69
1,240.69
1.24 1,0
3,01.0
3.0 54,6
259,854.6
259.8 0,45
1,810.45
1.81 3,5
4,03.5
4.0 37,1
91,837.1
91.8 0,37
0,830.37
0.83 3,5
3,53.5
3.5 57,1
170,357.1
170.3 0,44
1,170.44
1.17 1,9
2,71.9
2.7

30,3 0,530.3 0.5

80,9 14,280.9 14.2

72,6 13,472.6 13.4

22 J122 J1

69,3 45,969.3 45.9

49,8 47,549.8 47.5

58,5 49,558.5 49.5

41,8 28,341.8 28.3

57,0 27,757.0 27.7

Man erkennt aus Tabelle 6, daß die DHA-Konzentration und das Verhältnis der DHA-Konzentration zur AA-Konzentration (Mittelwerte) auf etwa das 3fache bzw. 2,7fache steigen, und zwar nach Verzehr des Dosenerzeugnisses. Es werden somit signifikante Verbesserungen hinsichtlich der Aggluti nationsneigung und der Haftneigung der Blutplättchen beobachtet. Beide Eigenschaften stehen in enger Beziehung zur Ausbildung von Thrombose und anderen Kreislauferkrankungen. It can be seen from Table 6 that the DHA concentration and the ratio of the DHA concentration to the AA concentration (mean values) increases to about 3 times or 2.7 times, after consumption of the canned product. There are thus significant improvements in terms of agglutination national tendency and the tendency of the platelets to adhere. Both properties are closely related to Development of thrombosis and other circulatory diseases.

Test BTest B

Es wird jeweils die Kapselnahrung gemäß Beispiel 3 verabreicht, und zwar 10 männlichen, gesunden Erwachsenen in einer Dosis von 3 Kapseln/Tag im Verlauf von 4 Wochen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 aufgeführt.The capsule food according to Example 3 is administered in each case to 10 healthy male adults in a dose of 3 capsules / day for 4 weeks. The results are shown in Table 7.

.Tabelle 7 . Table 7

Mean values in 10 adults

Verzehr der Kapselnahrung Vor Verzehr Nach Verzehr DHA ( /Ug/ml Blutplasma) 60,3 150,8 DHA/AA 0,41 0,94Consumption of the capsule food Before consumption After consumption DHA (/ Ug / ml blood plasma) 60.3 150.8 DHA / AA 0.41 0.94

Blutplättchen-Agglutination
(ADP-AgglutinationsSchwellenwert, /uM) 1 ,5 1,8Platelet agglutination
(ADP agglutination threshold, / µM) 1.5 1.8

Adhäsionskoeffizient derAdhesion coefficient of

Blutplättchen (%) 54,4 30,2Platelets (%) 54.4 30.2

Man erkennt aus Tabelle 7, daß die DHA-Konzentration und das Verhältnis von DHA zu AA (Mittelwert) auf etwa den 2,5fachen bzw. 2,3fachen Wert steigt, und zwar nach Einnahme der Kapselnahrung. Dies führt zu einer beträchtlichen Verbesserung der Agglutinationsneigung sowie der Haftneigung der Blutplättchen. Beide Eigenschaften stehen in enger Beziehung zu Thrombose und anderen Erkrankungen des Kreislaufsystems.It can be seen from Table 7 that the DHA concentration and the ratio of DHA to AA (mean value) to about 2.5 times or 2.3 times the value increases after taking the capsule food. This leads to a considerable Improvement of the tendency to agglutinate as well as the tendency of the blood platelets to stick. Both properties are closely related Relationship to thrombosis and other diseases of the circulatory system.

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Claims

1. Health foods, characterized in that they contain at least one compound, selected from the group of the docosahexaenoic acids and derivatives thereof.

2. Health food according to claim 1, characterized in that at least one of the compounds is obtained was taken from the group of aquatic animals and plants and added to an edible food.

3. Pharmaceutical preparation for the prevention and treatment of thrombosis, characterized by an effective Amount of at least one compound selected from the group of docosahexaenoic acid and derivatives thereof.

4. Pharmaceutical preparation according to claim 3, characterized characterized in that the compound was obtained by extraction, concentration and isolation from aquatic Animals or plants.