DE2515142B2

DE2515142B2 - Oral verabfolgbare mittel zur senkung des lipid- und cholesterin- spiegels

Info

Publication number: DE2515142B2
Application number: DE19752515142
Authority: DE
Inventors: Tomoyoshi Machida Tokio; Okutomi Tsuneo Fujimi Saitama; Sasaki Hiroshi Higashikurume; Suzuki Kouji Tama; Tokio; Sawada Mikio Sayama Saitama; Hosokawa (Japan)
Original assignee: Chugai Seiyaku KJC., Tokio
Priority date: 1974-04-09
Filing date: 1975-04-08
Publication date: 1976-11-11
Also published as: DE2515142A1; US3995061A; FR2267094B1; GB1495353A; FR2267094A1; NL7504079A; CA1057306A

Description

H,C

(D

in der R einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet

Das Antibiotikum Ascochlorin der Formel

OH
OHC

wird von Fadenpilzen, wie Ascochyta viciae Libert, gebildet. Ein derartiger Stamm wurde in der Kulturtammlung der Agency of Industrial Science und Technology, Fermentation Research Institute, Japan, unter der Hinterlegungsnummer FERM-P Nr. 129 hinterlegt. Dieses Antibiotikum ist nicht nur wirksam gegen Viren, maligne Tumoren und Bakterien, sondern hat auch sedierende Aktivität und es senkt den Cholesterinblutspiegel. Die Aktivität gegenüber Viren und malignen Tumoren ist in der JA-PS 5 85 252, die Wirkung gegenüber Bakterien, die sedierende und den Cholesterinspiegel senkende Wirkung ist in der US-PS 35 46 073 beschrieben. Die Verbindung hat nur eine unzureichende Wirkung bei der Senkung des Triglyceridspiegels und eine starke Toxizität. Die Toxizität ist besonders ausgeprägt bei längerer Applikation.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Ascochlorin-derivate enthaltende oral verabfolgbare Mittel zu tchaffen, die den Lipid- und Cholesterinspiegel senken. Diese Aufgabe wird durch ein oral verabfolgbares Mittel zur Senkung des Lipid- und Cholesterinspiegels gelöst, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es ein Ascochlorin-derivat de^r allgemeinen Formel I

(I) ho

in der R einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, enthält.

Fig. 1 zeigt in graphischer Darstellung die Zunahme des Körpergewichts von Ratten, denen 4-0-MethyIas-

cochlorin bzw. Ascochlorin täglich während eines Zeitraums von 10 Tagen verabfolgt wurde. In F i g. 1 entspricht die Kurze 1 der Kontrollgruppe, der "kein Arzneistoff verabreicht wurde. Kurve 2 entspricht der Gruppe, die 4-O-Methylascochlorin in einer Tagesdosis von 10 mg pro Tier erhielt. Kurve 3 entspricht der Gruppe, die 4-O-Mtithylascochlorin in einer Tagesdosis von 20 mg pro kg Körpergewicht erhielt. Kurve 4 entspricht der Gruppe, die Ascochlorin in einer Tagesdosis von 10 mg pro kg Körpergewicht erhielt.

F i g. 2 zeigt graphisch die Zunahme des Körpergewichts von Ratten, die 4-O-Methylascochlorin, Ascochlorin bzw. p-Chlorphejjoxyisobuttersäureäthylester täglich während eines Zeitraums von 30 Tagen erhielten. Kurve 1 entspricht der Kontrollgruppe, der kein Arzneistoff verabfolgt wurde. Die Kurven 2, 3, 4 und 5 entsprechen den Gruppen, die 4-O-MethyIascochlorin in einer Tagesdosis von 250, 500, 1000 bzw 2000 mg pro kg Körpergewicht erhielten. Die Kurve 6 entspricht der Gruppe, die p-Chlorphenoxyisobuttersäureäthylester in einer Tagesdosis von 500 mg pro kg Körpergewicht erhielt. Die Kurve 7 entspricht der Gruppe, die Ascochlorin in einer Tagesdosis von 50 mg pro kg Körpergewicht erhielt. Die Sterne zeigen den Tod einer Ratte an.

Sp-Jzielle Beispiele für die Ascochlorin-Derivate der allgemeinen Formel I sind

4-O-Methylascochlorin, 4-O-Äthylascochlorin, 4-O-n-Propylas cochlorin,
4-O-Isopropyl2scochlorin,
4-O-n-Butylascochlorin,
4-O-Isobutylascochlorin,
4-O-sek.-Butyli.scochlorin und 4-O-tert.-Ascoehlorin.

Von diesen Verbindungen ist 4-O-Methylascochlorin bekannte Verbindung, während die anderen Verbindungen bisher nicht beschrieben sind. Diese Verbindungen können aus Ascochlorin beispielsweise durch selektive Alkylierung der Hydroxylgruppe in der 4-Stellung und in Gegenwart einer Base hergestellt werden.

Da die Ascochlorin-derivate der allgemeinen Formel I in Wasser sehr schwer löslich sind, können sie in einer wäßrigen Lösung von beispielsweise Gummiarabicum oder Rohrzucker suspendiert oder zur Herstellung vor Tabletten, Granulaten oder Pulvern in an sich bekannter Weise mit üblichen Trägerstoffen, wie Lactose, Stärke kristalliner Cellulose, Kaolin, Calciumcarbonat oder Talkum, konfektioniert werden. Die Granulate oder Pulver können in Kapseln abgefüllt werden.

Die Ascochlorin-derivate der allgemeinen Formel 1 können an Säugetiere, einschließlich Menschen, sowie an Geflügel verabfolgt werden. Die Tagesdosis füt Menschen und Geflügel beträgt 0,05 bis 500, vorzugsweise 0,5 bis 50 mg pro kg Körpergewicht bei oraler Verabfolgung.

Nachstehend wird die Herstellung der Ascochlorinderivate erläutert.

404 mg Ascochlorin werden in 5 ml Aceton gelöst Sodann werden 150 mg Kaliumcarbonat und 0.2 m Äthyljodid zugegeben. Die Lösung wird 2 Stunden untei Rückfluß erhitzt und gerührt. Danach wird da; Reaktionsgemisch abgekühlt und filtriert. Das Filtrai wird eingedampft und der Rückstand mit Diäthyläthei extrahiert.

Der ÄtherextraKt wird mehrmals mit wäßrigei Natriumbicarbonatlösung und verdünnter Salzsäure gewaschen, sodann über Natriumsulfat getrocknet unc eingedampft. Der Rückstand wird aus einem Gemisch

von Methanol und Hexan umkristallisiert. Ausbeute 390 mg 4-O-Äthylascochlorin in Nadeln vom F. 134,5° C.

In ähnlicher Weise werden das 4-O-n-Propylascochlorin, 4-O-lsopropylascochlorin, 4-O-n-3utylascochlorin, 4-O-isobutylascochlorin, 4-O-sek.-Butylascochlorin und 4-O-tert-Butylascochlorin hergestellt.

Die folgenden Vergleiche erläutern die pharmakologischen Eigenschaften der Ascochlorin-denvate.

1. Senkung des Serumoholesterinspiegels

Die Wirkung der Ascochlorin-derivate zur Senkung des Serumcholesterinspiegels wird an männlichen Ratten des Wistar-Imamichi-Stammes mit einem Körpergewicht von 230 + 3Og untersucht. Den Ratten wurde eine fettreiche Diät aus 1000 g pulverisiertem üblichen Rattenfutter im Gemisch mit 10 g Cholesterin, 95 g hydriertem KokosnuBöl, 2 g Cholsäure, 150 g Milchcasein und 671 g Rohrzucker verfüttert.

Die Ratten wurden in Gruppen zu jeweils 5 Tieren unterteilt, und es wurde ihnen die zu untersuchende Verbindung suspendiert in wäßriger Gummiarabicumlösung in einer Dosis von 75 mg pro kg Körpergewicht verabfolgt. Die Ratten wurden nicht gefüttert und 6 Stunden nach der Verabfolgung der zu untersuchenden Verbindung wurde den Ratten Blut aus dem Herz entnommen. Die Gesamtmenge an Cholesterin im Serum wurde nach der modifizierten Methode von Zurkowski, Clinical Chemistry, Bd. 10 (1964), S. 451, mit einem Colorimeter zur Blutanalyse bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefaßt.

Tabelle 1 Tabelle 111

Testverbindung

Cholesterin
im Serum,

mg/dl

Senki:ngsverhaltnis

4-O-Methylascochlorin	76,6	-22.8
4-O-Äthylascochlorin	82,2	-17.2
4-O-n-Propylascochlorin	84,3	-15,1
4-O-lsopropylascochlorin	85,6	-13,8
4-O-n-Butylascochlorin	86,9	-12,5
40sek.-Butylascochlorin	89,1	-10,3
4-O-lsobutylascochlorin	88,5	-10,9
4-O-tert.-Butyl;iscoch!orin	82,7	-16,7
Ascochlorin	101,3	+ 2,0
p-Chlorphenoxyisobuttersäure-	103,8	+ 4,5
äthylester
Wäßrige Gummiarabicumlösung	99,3	—
2.Toxizität
a) Akute Toxizität

40

5°

Die akute Toxizität der Ascochlorin-derivate wurde an männlichen Ratten des Wistar-Imamichi-Stammes mit einem Körpergewicht von 230 ± 30 g und männlichen und weiblichen, 5 Wochen alten Mäusen des ddY-Stammes mit einem Körpergewicht von 20 ± 3 g bestimmt. Für jeden Versuch wurden Gruppen von jeweils 10 Tieren verwendet. Ferner wurden männliche (>o japanische Kaninchen mit einem Körpergewicht von 2 kg ± 300 g verwendet, die in Gruppen von jeweils 5 Tieren untersucht wurden. Den Tieren wurde die zu untersuchende Verbindung oral oder intraperitoneal als Suspension in 5prozentiger wäßriger Gummiarabicum- ds lösung verabfolgt. Die Toxität wurde mit der einer Kontrollgruppe, die Ascochlorin erhielt, verglichen. Die sind in Tabelle 111 zusammengefaßt.

Test- Versuchs-

verbindung tier

Ge- Ver

schlecht abfolgung

LD50
(mg/kg)

Asco	Maus	m	oral	>5ö00	(57-	68	(35-
chlorin	Maus	W	oral	>5 000	184)	133)
desgl.	Maus	m	Lp.	102	> 7 000
desgl.				258
				(156 —
	Maus	W	Lp.	426)
desgl.				> 7 300

	Ratte	m	oral
desgl.	Ratte	m	Lp.
desgl.				> 7 300
				5 000
	Maus	m	oral	5 500
4-O-				> ! 0 000
Melhyl-				3 100
asco-				> 2 000
chlonn	Maus	W	oral	5 b00
desgl.	Maus	m	Lp.
desgl.	Maus	W	Lp.
desgl.	Ratte	m	oral	5 100
desgl.	Ratte	m	Lp.
desgl.	Kaninchen	m	oral
desgl.	Maus	m	Lp.
4-O-Äthvl-
asco-
chlorin	Ratte	m	L p.
desgl.

b)Toxizhät bei kontinuierlicher Verabfolgung
während 10 Tagen

Mannliehe Ratten des Wistar-lmamiclii-Siammes mit einem Körpergewicht von 230 ± 30 g werden in 4 Gruppen zu jeweils 10 Tieren unterteilt. 3 Gruppen erhielten oral 4-O-Methylascochlorin in einer Dosis von 10 mg pro Tier, 20 mg pro Tier 4-O-Mcthylascochlorin bzw. 10 mg pro Tier Ascochlorin als Suspension in 2prozentiger wäßriger Gummiarabicumlösung einmal täglich während 10 Tagen. Die restliche Gruppe erhielt 2prozentige wäßrige Gummiarabicumlösung in gleicher Menge und gleicher Verabfolgungsart. Die Zunahme des Körpergewichts der Versuchstiere wird täglich während der Verabfolgung bestimmt. Die Ergebnisse sind graphisch in F i g. 1 dargestellt.

Aus Fig. 1 ist ersichtlich, daß die Gruppe, der Ascochlorin in einer Doses von 10 mg pro Tier verabfolgt wurde, nur eine geringe Zunahme des Körpergewichts zeigte, während die Gruppe, die 4-O-Methylascochlorin erhielt, eine normale Zunahme des Körpergewichts zeigte, die nahezu vergleichbar ist der Kontrollgruppe, die lediglich wäßrige Gummiarabicumlösung erhielt. Gleiche Ergebnisse wurden mit 4-O-Äthylascochlorin, 4-O-n-Propyiascochlorin,

4-O-lsopropylascochlorin. 4-O-n-Butylascochlorin. 4-O-sek.-Ascochlorin und 4-O-tert.-Butylascochlorin erhalten.

c) Toxizität bei kontinuierlicher Verabfolgung
während 30 Tagen

Männliche Ratten des Wistar-Stammes mit einem Körpergewicht von 150 ± 20 g wurden in Gruppen von jeweils 10 Tieren unterteilt.

Jede Gruppe erhielt oral 4-O-Methylascochlorin als Suspension in 2prozentiger wäßriger Gummiarabicumlösung in bestimmter Dosis einmal täglich während 30 Tagen. Die Zunahme des Körpergewichts der Tiere wurde täglich bestimmt. Als Kontrollverbindungen wurde Ascochlorin (50 mg pro kg Körpergewicht pro Tag) und p-Chlorphenoxyisobuttersäureäthylester (500 mg pro kg Körpergewicht pro Tag) verwendet. Die Ergebnisse sind graphisch in F i g. 2 dargestellt.

Die Versuchsgruppe, die 4-O-Methylascochlorin in

3. Senkung des Fettspiegels

Wistarratten mit einem Körpergewicht von 150 ± 20 g wurden in Gruppen von jeweils 10 Tieren unterteilt und mit der in Beispiel 1 verwendeten fettreichen Diät gefüttert.

Den Ratten wurde oral Ascochlorin, 4-O-Methylascochlorin bzw. p-Chlorphenoxyisobuttersäureäthylester in bestimmter Dosis jeden Morgen während 30 Tagen verabfolgt. 6 Stunden nach der letzten Verabfolgung werden die Tiere getöt. Die Leber und die Aorta jeder

Tabelle IV

Änderung des Serumlipidspiegels

einer Dosis von 250 bzw. 500 mg kg Körpergewicht erhielt, zeigte eine normale Zunahme des Körpergewichts, die vergleichbar war der der Kontrollgruppe. Demgegenüber wurde nur eine geringe oder keine Zunahme des Körpergewichts bei der Gruppe beobachtet, die Ascochlorin in einer Dosis von 50 mg pro kg Körpergewicht erhielt Einige Tiere verloren an Gewicht. 3 Arten der Gruppe starben während der Versuchsdauer.

im Blut und in Organen

Ratte wird entnommen und der Fettspiegel in 'den Organen bestimmt Die in der Leber und der Aorta vorhandenen Lipide wurden mit einem Gemisch gleicher Volumteile Methanol und Chloroform extrahiert. Zu diesem Zweck wurden die Organe 15 Stunden im Lösungsmittel stehen gelassen. Sodann wurde der Extrakt auf Lipide untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV und V zusammengefaßt.

Testverbindung	Dosis	Cholesterin	Triglyceride	Phospholipide	Freie	^-Lipo
					Fettsäuren *	proteine
	(mg/kg)	(mg/dl)	(mg/d!)	(mg/dl)	(uÄqVdl)	(mg/dl)
Ascochlorin	10,0	97,4 ±4,8	72,0 ±13,2	130,1 ±8,4	48,3 ±4,7	720±1l4
		(-8,8)	(-10,0)	(-4,5)	(-4,0)	(-5.6)
40Methylasco-	2,25	102,4 ±13,8	74,5 ±9,8	119,7 ±12,5	49,1 ±8,2	819±109
chlorin		(-4,2)	(-6,8)	(-12,2)	(-2,4)	( + 7,3)
	9,0	87,0 ±4,9	64,8 ±5,2	Π 8,4 ±5,8	44,8 ±3,5	593 ±85
		(-18,6)	(-19,0)	(-13,2)	(-10,4)	(-22,3)
	22,5	88,8 ±9,1	63,6 ±4,6	117.9 ±6,5	42,1 ±2,7	589 ±133
		(-16,9)	(-20,5)	(-13,5)	(-16,3)	(-22,8)
p-Chlorphenoxy-	45,0	115,3 ±5,5	72,1 ±4,4	135,9 ±13,6	45,2 ±1,6	738 ±46
isobuttersäure		( + 7,9)	(-9,2)	(-0,7)	(-10,1)	(-3,7)
äthylester
Vergleich		106,8 ±9,7	80,0 ±9,3	136,3 ±4,8	50,3 ±4,3	763 ±126

Anmerkungen:

Die Zahlen in der Tabelle zeigen Durchschnittswerte und Standardfehler.

Die Zahlen in Klammern zeigen ein Zunahme- oder Abnahmeverhältnis, bezogen auf den Vergleich.

Tabelle V

Änderung des Lipidspiegels in Organen und der Aorta abdominalis

Testverbindung	Dosis	Cholesterin i	in der Triglyceride in	der Phospholipide in	Cholesterin in der
		Leber	Leber	der Leber	Tunica intima der
					Aorta abdominalis
	(mg/kg)	(mg/g)	(mg/g)	(mg/g)	(j>/mg)
Ascochlorin	16,0	36^ ±3,5	2öi±2,5	693 ±42	19,0 ±0,8
		( + 63)	(-73)	(-1.0)	(-4.0)
4-OMethylascochlorin	225	38,4 ±6,4	16,7 ±13	72,0 ±53	18,2 ±1,4
		( + 12,9)	(-23,6)	(+2,6)	(-8.1)
	9,0	28,9 ±3,6	17,2 ±2,8	69,1 ±93	14.0 ±0,3
		(-15,0)	(-21,1)	(-1.6)	(-293)
	224	26,6 ±2,2	17,0 ±0,7	61,8±43	13,0 ±0,4
		(-21,8)	(-22,1)	(-12,0)	(-32,8)
p-Chlorphenoxyisobutter-	45,0	41,0±4,5	24^ ±2,2	793±3,1	163 ±1,4
säureäthylester		( + 20,6)	( + 10.7)	( + 132)	(-14,7)
Vergleich	—	34,0 ±5,4	21,8 ±3.4	702 ±3,4	19,8±l,0
Anmerkungen:
Die Zählen in der Tabelle zeigen	Durchschnittswerte und Standardfehler.
Die Zahlen in Klammern zeigen	ein Zunahme- oder Abnahmeverhältnis, bezogen	auf den Vergleich.

Aus den Tabellen IV und V ist ersichtlich, daß bei Verabfolgung von 4-O-Methylascochlorin in einer Dosis von mindestens 9 mg pro kg der Lipidspiegel stark vermindert wurde. Ferner wurde die Menge an Lipiden in der Leber und vom Cholesterin in der Aorta ebenfalls erheblich vermindert. Diese Wirkungen wurden bei Verabfolgung von Ascochlorin bzw. p-Chlorphenoxyisobuttersäureäthylester nicht beobachtet.

Herstellung von Arzneipräparaten
(a) Kapseln

100 g pulverisiertes 4-O-Methylascochlorin werden mit 358 g Lactose und 2 g Magnesiumstearat versetzt und gründlich vermischt. 230 mg des Gemisches werden in 65 mg schwere Hartgelatinekapseln abgefüllt.

(b) Pulver

50 g pulverisiertes 4-O-Methylascochlorin werden mit 404 g Lactose, 45 g mikrokristalliner Cellulose und 1 g Magnesiumstearat versetzt und gründlich vermischt.

(c) Tabletten

100 g pulverisiertes 4-O-Methylascochlorin werden mit 210 g Lactose, 72 g mikrokristalliner Cellulose, 14 g Maisstärke und 4 g Magiiesiumstearat versetzt und

gründlich vermischt. Das Gemisch wird in einer Tablettiermaschine zu Tabletten mit einem Durchmesser von 8 mm und einem Gewicht von 200 mg verpreßt.

(d) Tabletten

100 g pulverisiertes 4-O-MethylascocHorin werden durch ein Sieb der lichten Maschenweite 300 Mikron gesiebt und mit 273 g Lactose sowie 20 g Calciumcarboxymethylcellulose vermischt. Das Gemisch wird mit einer aus 4 g Maisstärke und Wasser hergestellten Stärkepaste verknetet, granuliert und getrocknet Das Granulat wird durch ein Sieb der lichten Maschenweite 1,4 mm passiert Nach dem Vermischen mit 3 g Magnesiumstearat wird das Gemisch zu Tabletten mit einem Durchmesser von 8 mm und einem Gewicht von 200 mg verpreßt.

(e) Suspension

400 ml einer 50gewichtsprozentigen wäßrigen Rohrzuckerlösunf, werden mit 10 g mikrokristalliner Cellulose u id 0,75 g Natriumcarboxymethylcellulose versetzt. Gesondert werden 5 g 4-O-Methylascochlorin zusammen mit 0,5 g eines Rohrzuckerfettsäureesters und 20 ml Wasser in einer Kugelmühle vermählen. Das erhaltene Pulver wird zur Suspension gegeben, die mil Wasser auf 500 ml aufgefüllt wird.

Hierzu 2 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentanspruch:

Oral verabfolgbares Mittel zur Senkung des Lipid- und Cholesterinspiegels, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem Ascochlorin-derivat der allgemeinen Formel I

OHC