DE2129675C3 - 7-Methoxycephalosporinderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel - Google Patents

Description

worin ^COOH

R' die Phenylacetyl-, Phenylthioacetyl-, Thienylacetyl-, Furylacetyl-, a-Carboxyphenylacetyl-, a-Aminophenylacetyl- oder Cyanoacetylgruppe bedeutet und

A eine Acetoxy-, 1 -Methyl- 1,2,3,4-tetrazoIyl-5-thio-, Carbamoyloxy- oder Pyridiniumgruppe ist;

und Salze dieser Verbindungen.

Z 3-Carbamoyioxymethyi-7-methoxy-7-(2-thinylacetajnido)-3-cephem~4-carbonsäure und ihr Natriumsalz.

3. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

a) einen 7-Azidocephalosporanester der allgemeinen Formel

OCH₃

J-CH₂A

COOR¹ »

worin A die in Anspruch 1 angegebene Be-

OCH₃

deutung aufweist und R⁸ eine auf dem Cephalosporingebiet übliche Carboxylschutzgruppe ist, in an sich bekannter Weise zu dem entsprechenden Amin reduziert und in einer Stufe acyüert und das erhaltene Ester-Derivat spaltet, oder b) einen Ester der allgemeinen Formel

OCH

H₂N

HOOC — CH—(CH₂)j-CNH NH

C = O

in an sich bekannter Weise mit einem entsprechenden Acylierungsmittel behandelt,

und den erhaltenen Ester spaltet

4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel

CH₂OCNH₂

worin R' einen 2-ThienyIacetyl- oder 2-Furylacetylrest darstellt, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel

CH₂OCNH₂

COOR*

OR³⁰

oder ein veresterte^ Derivat davon, worin R³⁰ einen Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, der polyhalogeniert sein kann, darstellt, mit einem 2-Thienyl- oder 2-FurylaGetylhalogenid in Gegenwart eines Tri-niedrig-alkylsilyNDerivats von Succinamid, Phthalimid, Cyanoacetamid, Trifluoracetamid, Benzamid, p-Nitrobenzamid, Trichloracetamid oder einem Sulfonamid, in einem Lösungsmittel, das keinen aktiven Wasserstoff enthält, bei Tempera·

55 türen zwischen -20° und 10O⁰C umsetzt, das Reaktionsgemisch durch Zugabe eines Alkohols oder in wäßriger Lösung in Gegenwart einer kleinen Menge Säure oder Base hydrolysiert und den erhaltenen monoacylierten Ester in an sich bekannter Weise in die freie Säure überführt.

5. Arzneimittel, enthaltend eine Verbindung gemäß Anspruch I und 2 neben üblichen Hilfs- und Trägerstoffen.

Bekanntlich führte die Anwendung von Antibiotika, wie Penicillin, Streptomycin, die Tetracycline und Novobiocin, zur Bildung von resistenten Pathogenenstämmen. Ferner besitzen die bekannten Antibiotika den Nachteil, daß sie lediglich gegen gewisse Arten von Mikroorganismen wirksam sind und nicht gegen einen breiten Bereich von Pathogenen.

Es wurden nun Cephalosporine mit antibiotischsr Wirksamkeit gefunden, die sich durch eine besondere Beständigkeit gegenüber /9-Lactamase auszeichnen.

Den Gegenstand der Erfindung bilden daher die in den Patentansprüchen beschriebenen Verbindungen, Herstellungsverfahren und Arzneimittel.

Innerhalb der Definition von, R' sind Beispiele für den

Thienylacetyl- und den Furylaceiylrest, die 2-Thienylacetyl- und 3-Thienylacetylreste und die 2-Furylacetyl- und 3-FuryIacetylreste.

Gemäß der auf dem Fachgebiet verwendeten Nomenklatur der Cephalosporin-Verbindungen wird die durch Hydrolyse von Cephalosporin C erhaltene Verbindung, die durch die folgende Strukturformel wiedergegeben werden kann.

H₂N

CH₂OCOCH₃

COOH

mit 7-Aminocephalosporansäure oder 7-ACA bezeichnet.

Der hier zur Beschreibung bestimmter Produkte verwendete Ausdruck »Decephalosporansäure« auf Grund seiner Verwendung auf diesem Fachgebiet stellt den heterocyclischen Grundkern der Strukturformel

COOH

Die Cephalosporin-Verbindungen, mit denen sich die Erfindung befaßt, werden auch in einfacher Weise als »Cepham«-Verbindungen bezeichnet, weiche die kondensierte Ring-ß-Iactamthiazin-Gr^ndstruktur aufweisen

die als Cepham bekannt ist Die Cephalosporin-Verbindungen werden daher als »Cephem« bezeichnet, das sich auf die Grundstruktur mit einer einzelnen olefinischen Bindung bezieht.

Die erfindungsgemäßen Cephalosporine können durch verschiedene Verfahren hergestellt werden, die wie folgt veranschaulicht werden können.

CH₂A

COOR«

(Π)

M)

(111)

COOR,

(IV)

0CH3

COORs

(V)

^H OCHj

^R'-^N-h'^si

J N Λ— CH₂A

0 T

COOR,

(VI)

T
COOH

(D

worin R' und A die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen.

tn dem vorangehenden Fließschema ist die Ausgangs* verbindung ein Derivat der 7-Aminocephalosporansäure (II), die im folgenden auch mit 7-ACA bezeichnet wird, worin die Carboxygruppe bevorzugt blockiert ist, beispielsweise durch Bildung eines geeigneten Esters. Somit können 7'ACA oder deren Analoge mit einem unterschiedlichen Substituenten in der 3-StelIung nach bekannten Methoden verestert werden, um eine auf dem Cephalosporingebiet übliche Carboxy !schutzgruppe einzuführen, z.B. einen Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethylrest, einen Halogenalkylrest, wie beispielsweise Trichloräthylrest, einen Aralkylrest, z. B. Benzyl- oder Benzhydryl-, o-Nitrobenzyl-, 3,5-Dinitrobenzyl- oder p-Methoxybenzylrest, eine Siiylgruppe, z. B. Trimethylsilylgruppe, oder einen Stannylrest, z. B. Tributylzinnrest, Phenacylrest oder Trichloräthoxycarbonylrest. Der Ester (Ii) wird in den entsprechenden 7-Diazocephalosporansäureester oder 3-CH2A-7-D1-azocephalosporansäureester (III) durch Umsetzung mit Nitrit überführt. Der 7-Diazoester (III) wird durch Um-

Setzung mit einer Pseudohalogen-Verbindung oder Pseudohalogen-Verbindungen oder einer Verbindung, die als ein Pseudohalogen wirkt, unter Bildung von Zwischenprodukt (IV), in dem X ein Halogenatom, wie Brom, Chlor oder Jod, oder eine andere verbleibende Gruppe darstellt und Y ein stickstoffhaltiger Substituent oder —OCH3 ist, überführt. Die Zwischenprodukt-Verbindung (IV) wird dann in Verbindung (V) überführt, worin Z eine stickstoffhaltige Gruppe bedeutet, die leicht in eine Amino- oder Acylaminogruppe überführbar ist. Die Verbindung (V) wird dann in den gewünschten Cephalosporinsäureester (VI) überführt, der unter Erhalt der entsprechenden Cephalosporinsäure oder eines Salzes davon umgesetzt werden kann. Auch kann der Substituent in 3-Stellung des /³-Cephamkerns in andere Substituenten der Formel -CHiA gemäß bekannten Methoden und solchen, die hierin beschrieben sind, überführt werden. Die Verfahren zur Durchführung der verschiedenen Stufen des vorstehenden Fließschemas ergeben sich genauer aus den folgenden ausführlichen Beschreibungen der Methoden, die zur Durchführung dieser Verfahren verwendet werden können.

Das Ausgangsmaterial in dem vorangehenden Verfahren kann 7-ACA oder eine 3-CH2A 7-Aminodecephalosporansäure sein, die zunächst zur Blockierung oder zum Schutz der Carboxygruppe umgesetzt wird. Eine derartige Schutzgruppe ist eine Tri-niedrig-Alkylsilylgruppe.

Die Diazotierung des 7-Aminoesters erfolgt nach bekannten Verfahren. Diese erfolgt in einfacher Weise in wäßrigem oder wäßrigem-organischem Lösungsmedium, z. B. durch Umsetzung mit Natriumnitrit in Gegenwart eines Säure oder durch Umsetzung mit einem organischen Nitrit. Organische Lösungsmittel, die

H,CO

sich zur Durchführung dieser Reaktion eignen, sind solche, die keinen aktiven Wasserstoff enthalten. Beispiele für diese Lösungsmittel, die erwähnt werden können, sind Methylenchlorid, Äther, Benzol, Toluol und Chloroform. Die Reaktion erfolgt vorzugsweise bei Temperaturen zwischen etwa 0 und 50³C; gewöhnlich erfolgt sie am zweckmäßigsten bei Raumtemperatur. Die Isolierung der gewünschten Diazo-Verbindung erfolgt in einfacher Weise nach bekannten Methoden.

Somit werden gemäß einer spezifischen Ausführungsform der Erfindung die neuen Cephalosporine durch folgende Verfahren erhalten:

N,=

COOR₈

(III)

COOR»

H₁N

worin die Substi.tönten die oben angegebene Bedeutung besitzen.

In dem obigen Verfahren wird der 7-Diazoeephalospornsäureester (III) mit einem Halogenazid (Brom-, Chlor- oder Jodazid), vorzugsweise in Gegenwart eines tertiären Aminazids unter Erzeugung des 7-Halogen-

7-azidocephalosporansäureester-Zwisehenproduktes (VII) umgesetzt, das nach Reaktion mit einem geeigneten nukleophilen Reagens in den gewünschten 7-Methoxy-7-azidocephalosporansäureester (Vl 11) überführt wird. Dieses Zwischenprodukt wird reduziert und in einer Stufe acyliert, um den substituierten Cephalosporansäureester (Xl) zu bilden, der dann unter Entfernung der Blockierungsgruppe gespalten werden kann, und man erhält die Cephalosporansäure oder ein Salz davon (I). Wie in dem Fließschema gezeigt, kann der 7-Methoxy-7azidocephalosporansäureester (VIII) auch zu dem 7-Methoxy-7-aminocephalosporansäureester (IX) reduziert werden, der unter Bildung des 7-Methoxy-7-acylaminocephalosporansäureester (Xl) acyliert werden kann. Die Estergruppe der Verbindung (IX) kann auch gespalten werden, um die freie Säure (X) zu erhalten, die unter Bildung des gewünschten Cephalosporins oder eines Salzes davon acyliert werden kann. Die Stufe der Abspaltung der Blockieriingsgruppe erfolgt in einfacher Weise nach bekannten Verfahren. Beispielsweise wird eine Benzhydrvlgruppe leicht durch Umsetzung mit Trifluoressigsäure in Gegenwart von Anisol abgespalten. Auch kann, wie oben angegeben, der 3-Substituent an dem zl'-Cephamkern gemäß bekannten Verfahren verändert werden, um die substituierten Cephalosporine der Formel I zu erhalten.

Die Stufe der Herstellung des Halogenazid-Zwischenproduktes durch Umsetzung der Diazo-Verbindung mit einem Halogenazid wird unter den in der DE-OS 21 43 331 vorgeschlagenen Bedingungen durchgeführt.

Die nächste Stufe des Verfahrens, die den Ersatz des Halogen-Substituenten durch die Methoxygruppc umfaßt, erfolgt vorzugsweise in Gegenwart eines geeigneten nicht-reagierenden Lösungsmittels: es ist zweckmäßig, die Verwendung von Lösungsmitteln, die aktiven Wasserstoff enthalten, zu vermeiden. Die Reaktion kann mit Methanol als nukleophile Verdüngiingsreagens

reduziert, und man erhält die entsprechende 7-Amino-7-methoxy-Verbindung. Verschiedene Methoden zur Durchführung dieser Reduktion können angewendet werden, jedoch wird es im allgemeinen bevorzugt, die Reduktion der Azido-Verbindung zu der Aminogruppe durch katalytische Hydrierung unter Anwendung eines Edelmetallkatalysators, beispielsweise Platin, Palladium oder deren Oxiden durchzuführen. Diese Verfahren werden nach bekannten Verfahren auf diesem Fachgebiet durchgeführt. Die Reduktion kann auch in Gegenwart eines geeigneten Acylierungsmittels erfolgen, um die gewünschte 7-Acylamido-7-methoxy-Verbindung herzustellen. Die 7-Amino-Verbindung kann mit geeigneten Acylierungsmitteln unter Verwendung von an sich bekannten Verfahren umgesetzt werden, um die gewünschten 7-Acylamino-Verbindungen zu erhalten. Somit kann in dem oben beschriebenen Verfahren, wo der Substituent X eine Halogengruppe, beispielsweise Chlor, Brom oder Jod. ist. die 7-Azido-7-halogen-Verbindung zu der entsprechenden Amin-Verbindung reduziert werden, und letztere Verbindung kann dann unter Erhalt des 7-Acylamino-7-halogen-Zwischenproduktes acyliert werden. Wie oben angegeben, können die Reduktions- und Acylierungsstufen auch kombiniert werden, um die 7-Acylamido-Verbindung ohne Abtrennung und Acylierung des 7-Acylamido-Zwischenproduktes herzustellen.

Nach einer bevorzugten Alisführungsform der vorstehenden Verfahrensweise führt man als R' den tvAzidophenylacetylrest ein und das erhaltene Produkt wird zum entsprechenden 7/i-(.-*-Aminophenylacctamido)-substituierten Derivat reduziert.

Die 7-Halogen-substituierten Cephalosporin-Zwischenprodukte für das erfindungsgemäße Verfahren werden dadurch hergestellt, daß die 7-Halogen-7-azido-Zwischenprodukte der obigen Formel VII der Reduktion unterworfen werden, um die entsprechende 7-Halogen-7-amino-Verbindung zu bilden, und dieses Zwischenprodukt wird zur Herstellung der entsprechenden 7-Acylamido-7-halogencephalosporin-Verbindung acyliert. Der erhaltene Ester wird dann gespalten und in sein entsprechendes Carboxylatsalz durch übliche

in Gegenwart eines Schwermetallkations, wie beispielsweise ein Silbersalz, durchgeführt.

In der nächsten Stufe des oben beschriebenen Verfahrens wird die 7-Azido-7-methox>-Verbindung dann

S-

und einer wäßrigen Lösung einer Base überführt.

Gemäß einer Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens werden die 7-Methoxyverbindungen durch den folgenden Reaktionsverlauf erhalten:

OCH.

, S-

.' N

N ' -CH.-.A

C O; R,

C O; R₈

III

XXIII

OCH.

RNH

, S

OCH,

XW

worin R« und A die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen.

CO;R,

XXIV

Nach dem obigen Fließschema wird die Ausgangsverbindung, ein Ester einer 7-Diazo-Verbindung, wie oben bei III definiert, mit einem Hypohalogenit des Methanols un.gesetzt oder mit Methanol in Gegenwart eines positiven Halogens, wie beispielsweise ein N-Halogenamid, z.B. N-Bromacetamid, N-Brombernsteinsäureimid, N-Bromphthalsäureimid, umgesetzt, die regieren, als ob sie das entsprechende Hypohalogenit wärt'n. Die erhaltenen 7-Halogen-7-methoxyester (XXIII) sind häufig ein Gemisch aus Epimeren bei 7, die durch Chromatographie leicht trennbar sind. Wenn jedoch lediglich ein Epimeres erhalten wird, kann es in ein Gemisch aus Epimeren durch Behandlung mit einem organischen Halogenid in einem polaren Lösungsmittel ins Gleichgewicht gebracht werden. Ein Lithiumsalz des entsprechenden Halogenids in Dimethylformamid ist besonders zur Epimerisierung dieses Zwischenproduktes geeignet. Das 7-Halogen-7-methoxy-Produkt kann dann mit einem Azid. z. B. Lithiumazid. unter B'ldung des entsprechenden 7-Methoxy-7-azidoeephalosporanatesters (XXIV) umgesetzt werden. Diese letztere Verbindung kann dann entweder mit Wasserstoff oder einem anorganischen Reduktionsmittel unter Bildung des 7-Methoxy-7-aminoester-Zwischenproduktes (XXV) (R' = H) reduziert werden. Diese letztere Verbindung kann unter Herstellung des substituierten Cephalosporinsäureesters acyliert werden. Die Reduktion des Azido-Zwischenproduktes kann auch in Gegenwart eines Acylierungsmittels erfolgen, wobei diese Ester direkt gebildet werden. Diese Verbindungen können dann in das gewünschte Cephalosporin der Formel XXV oder dessen Salzen nach den oben beschriebenen Verfahren überführt werden.

So lassen sich beispielsweise Benzhydr>l-7:\-azido-7/?-methoxy-(und 7/?-azido-7<x-methoxy)-cephalosporaiiat erzeugen, und die 7/?-Methoxy-Verbindung wird in

Benzhydryl-73-methoxy-7:ⁱ<-(2-thienylacetaiTiido)-cephalosporanat überführt.

Die oben beschriebenen verschiedenen Verfahren können zur Herstellung eines besonderen Epimeren bei 7 oder zu einem Gemisch von Epimeren bei 7 führen. Wenn ein Gemisch von Epimeren erhalten wird, können diese !eicht nach bekaiiruen fvieiiiuüeii, wie ueispieibweise Chromatographie, getrennt werden. In einigen Fällen, wenn lediglich ein Epimeres erhalten wird, kann dies unter Erzeugung eines Gemisches von Epimeren durch bekannte Verfahren ins Gleichgewicht gebracht werden.

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann auch die Acylgruppe einer 7-Acylamidocephalosporin-Verbindung durch einen abweichenden Acyl-Substituenten ersetzt werden. Nach diesem Verfahren wird die 7-Acylamidocephalosporin-Verbindung mit einem Acylierungsmittel umgesetzt, wobei eine

7-Diacylamidocephalosporin-Zwischenprodukt-Verbindung, die zwei verschiedene Acyl-Substituenten enthält, erhalten wird, und die ursprüngliche Acylgruppe wird dann abgespalten, um eine neue 7-Acylamidocephalosporin-Verbindung zu erhalten. Dieses Verfahren wird durch das folgende Fließschema erläutert:

OCH₃

AcHN

CH₂A'

OCH,

IMIN

-CH₂A

COOH

worin Ac eine Acylgruppe darstellt. A' und R_n, die mit A bzw. R' bezeichneten Substituenten darstellen, oder durch Entfernung irgendwelcher Schutz- oder Blockierungsgruppen darin überführbar sind.

In dem in dem vorangehenden Fließschema beschriebenen Verfahren können die Reaktionen mit der freien Säure ausgeführt werden, obgleich es sich im allgemeinen als bevorzugt erwies, die Carboxygruppe durch Bildung eines geeigneten Esters zu blockieren oder zu schützen, der leicht nach Beendigung des Verfahrens entfernt werden kann.

Die erste Stufe des Verfahrens umfaßt die Umsetzung der Cephalosporin-Verbindung oder eines Derivates davon, worin die Carboxylgruppe blockiert ist mit einem Acylierungsmittel, bevorzugt einem Acylhalogenid. in Gegenwart einer Silylgruppe. um die 7-Diacylamido-Verbindung herzustellen. Dieses Produkt wird dann umgesetzt, um den ursprünglichen Acyl-Substituenten zu entfernen und die Cephalosporin-Verbindung nebst dem neuen 7-Acylamido-Substituenten herzustellen.

Die erste Stufe der Herstellung des diacylierten Pro-

UuklCb Clfuigl aiii UCSlCII uuiin inniges IwuiakuCiCii

der Cephalosporin-Verbindung mit einem Acylierungsmittel in einem geeigneten Lösungsmittelmedium in Gegenwart eines tri-substituierten Silyl-Derivats eines negativ-substituierten Amids. Die Temperatur, bei der die Reaktion durchgeführt wird, ist nicht besonders kritisch, und Temperaturen von etwa —20°C bis etwa 100°C sind im allgemeinen zufriedenstellend, obgleich bevorzugt wird, die Reaktion bei Temperaturen von etwa 25 bis 40° C auszuführen. Zahlreiche Lösungsmittel, die keinen aktiven Wasserstoff enthalten, wie beispielsweise Chloroform, Acetonitril, Methylenchlorid, Dioxan, Benzol, Halogenbenzol, Tetrachlorkohlenstoff und Diäthyläther sind am günstigsten als Medien bei der Reaktion.

Verschiedene Trikohlenwasserstoffsilyl-Verbindungen, in denen der Kohlenwasserstoff-Substituent einen niederen Alkylrest (1 bis 6 Kohlenstoff atome), einen Arylrest, wie beispielsweise einen Phenylrest, oder eine Aralkylgruppe, wie beispielsweise einen Benzylrest, bedeutet können in diesem Verfahren verwendet werden. Diese Verbindungen sind leicht durch Umsetzung äquimolarer Mengen eines Trikohlenwasserstoffsilyl-halogenids mit einem negativ-substituierten Amid oder Imid herzustellen. Jedoch wird im allgemeinen bevorzugt, ein Tri-niedrig-alkylsilyl-Derivat zu verwenden und insbe-

sondere das Trimethylsilyl-Derivat. da dieses Produkt billig und leicht erhältlich ist. Negativ-substituierte Amide und Imide, die erwähnt werden können, sind z. B. Succinamid, Phthalimid, Cyanoacetamid, Trifluoracetamid, Benzamid, p-Nitrobenzamid, Trichloracetamid. ein Sulfonamid. Beispiele für Tri-niedrig-alkylsilyl-Derivate, die insbesondere geeignet sind und erwähnt werden können, sind N-Trimethylsilyltrifluoracetamid, N-Trimethylsilylphthalamid.

Im allgemeinen wird es bevorzugt, die vorstehenden Reaktionen mit einer Cephalosporin-Verbindung durchzuführen, in der die Carboxygruppe blockiert oder geschützt ist, da maximale Ausbeuten des gewünschten Produktes mit derartigen Derivaten erhalten werden. Zu diesem Zweck wird der Carboxy-Substituent durch Bildung eines geeigneten Esters, z. B. eines Benzyl-, Benzhydryl-, p-Nitrophenyl-, Trimethylsilyl-, Trichloräthoxy-, p-Methoxybenzyl-, Phthalimidomethyl- oder Succinimidomethylesters, blockiert, der nach bekannten Verfahren leicht entfernt werden kann. Besonders bevorzugt sind die p-Methoxybenzyl- und die Benzhydrylester. Ferner wird es im allgemeinen bevorzugt, irgendwelche in der Ausgangs-C'ephalosporin-Verbindung vorliegenden Aminogruppen zu blockieren oder zu schützen, da maximale Ausbeuten an dem gewünschten Produkt mit derartigen Derivaten erhalten werden. Zu diesem Zweck werden die Gruppen vorzugsweise mit Substituenten, die leicht entfernt werden können, blockiert. Derartige Gruppen sind bekannt. Beispielsweise wird die Aminogruppe am einfachsten durch eine Gruppe, wie beispielsweise Trichloräthoxycarbonyl-, tert.-Butoxycarbonyl-. Benzoylmethoxycarbonyl-. Trimethylsilyl-. p-Methoxybenzyloxy- oder o-Nitrophenylthiogruppe, blockiert.

Die Stufe der Abspaltung der ursprünglichen Acylgruppe kann in verschiedener Weise erfolgen, nämlich durch Verlängerung der Reaktionszeit, durch Zugabe eines Alkohols, wie beispielsweise ein niederes Alkanol oder ein niederes Alkylthiol oder durch Hydrolyse in wäßriger Lösung, die eine kleine Menge Säure oder Base enthält. Somit erfolgt in einigen Fällen die Abspaltung durch Zugabe eines niederen Alkanols oder

i-:_ c U-V

eines Aralkanols, wie beispielsweise Benzylalkohol, oder des entsprechenden Thiols. Die Abspaltung liefert die gewünschte monoacylierte Cephaiosporin-Verbindung oder kann auch zur Herstellung eines Gemisches von monoacylierten Verbindungen führen. Im letzteren Fall wird die gewünschte monoacylierte Cephalosporin-Verbindungen durch Abtrennverfahren, wie beispielsweise Chromatographie., die auf diesem Gebiet bekannt sind, erfolgen.

Das Verfahren gemäß dieser Ausführungsform der Erfindung eignet sich besonders zum Ersatz der Aminoadipoylgruppe der 7-(Aminodipoylamido)-Seitenkette der Cephalosporine, wie beispielsweise solche, die durch Fermentation erhalten werden und deren Derivate mit anderen Substituenten in der 3-SteIlung. Gemäß einer spezifischen Ausfühningsform dieses Verfahrens wird also eine Cephalosporin-Verbindung, wie beispielsweise

NH₂

O H

H —C— (CH₂J₃C-N

COOH

7-( D-5'-Amino-V-carboty valeramido)-3-carbamoy loxymethyl-7-methoxy l-cephem-4-carbonsäure oder Derivate davon mit einem Acylierungsmittel in Gegenwart eines tri-substituierten Silylrestes unter Erhalt des 7-Diacylamido-Derivats mit zwei verschiedenen Acylgruppen umgesetzt. Das diacylierte Produkt kann selektiv gespalten werden, um die Λ-Aminoadipoylgruppe zu entfernen und die gewünschte, abweichende 7-Acylamidocephalosporin-Verbindung zu erhalten. Obgleich die Cephalosporin-Verbindung an sich nach dem erfindungsgemäßen Verfahren umgeestert werden kann, wurde festgestellt, daß das Verfahren vereinfacht wird und maximale Ausbeuten an der neuen 7-Acylamido-Verbindung unter optimalen Bedingungen erhalten werden, wenn die Amino- und Carboxy-Substituenten der Cephalosporin-Verbindung während der Durchführung des Verfahrens blockiert oder geschützt sind. Die verschiedenen, obenerwähnten Blockierungs- oder Schutzgruppen eigenen sich für diesen Zweck. Somit werden beim Ersatz der «-Aminoadipoyl-Seitenkette der vorstehend erwähnten Cephalosporine durch eine andere Acylgruppe gemäß dieser bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sowohl die Carboxygruppe in der 4-Stellung als auch die Carboxygruppe des Amiroadipoyl-Substituenten blockiert, und die Aminogruppe wird gleichfalls geschützt. Das erhaltene, blockierte Derivat wird mit einem Acylierungsmittel. vorzugsweise einem Säurehalogenid. wie beispielsweise das Chlorid, in Gegenwart des tri-substituierten Silyl-Derivats des negativ-substituierten Amids oder Imids unter Erzeugung des 7-Diacylamido-Derivats umgesetzt. Während dieser Acylierungsreaktion tritt eine gewisse Abspaltung der Λ-Aminoadipoylgruppe ein, jedoch wird der Hauptteil des Produktes in Form des diacylierten Derivates erhalten.

Die Abspaltung der Schutzgruppen an den Amino- und Carboxy-Funktionen erfolgt nach an sich bekannten Verfahren. So wird beispielsweise die Trichloräthoxycarbonylgruppe durch Umsetzung mit Zink und Essigsäure und die tert.-Butoxycarbonyl- und Benzhydrylgruppen werden durch Umsetzung mit Trifluoressigsäure entfernt. Letztlich erhält man dah^r die erf:— J..— ——.*-~.:ΐΩ«*« Γι,ρΚηηΓϋι,ραη r\Aor riornn Qo1-?i»

durch Spaltung der Ester-Derivate. So kann z. B. ein Benzyl- oder Benzhydrylester, wie das Benzhydryl-

3-carbamoyIoxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylat oder das Benzhydryl-

3-acetoxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylat hydriert und mit Base unter Erhalt des entsprechenden Salzes behandelt werden. Der Ester kann auch mit einer Trihalogenaikansäure. wie Trifluoressigsäure, unter Erhalt der entsprechenden Säure behandelt werden.

Ein vollständigeres Verständnis der erfindungsgemäßen Verfahren wird durch folgende erläuternde Ausführungsformen herbeigeführt Somit wird 7-(D-5'-Amino-S'-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in die entsprechende 7-(?ThienyIacetamido)-Verbindung gemäß den Verfahren des folgenden Reaktionsablaufs überführt:

OCH,

N J-CH₂OCONH₂
COOH

O I!	JII;	OOH	Cl,	H OCH,	■—r	J-CH2OCONH COOH
Il COCIIjC	H-C-(CH,		O !I	I -N —	I
Γ	(	I! ),C-	O

Il

C — OCH-C Cl.

NH O H

I Il I

Il — C-(ClL)₁C- N--

COOCHW;

, S

N >— C H-OCONH. COOCHW-

C -OC Il -C Cl-. j

I ' c =

NH O

OCH =

II —C—(CIIO-.C N—u

COOCHW-

L- - N C H-OC ONI

-ΙΛ1\1 II(Λ

O H

-CH--C-N-

OCH CH-OCONH-

N
COOCH0:

O H

CII C-N

OCH-.

N A—CH-OCONH-

COOH

Phenol

Besonders bevorzugt wird nach der vorstehenden Arbeitsweise der Dibenzhydrylester der Tß-(D-5'-Tr\- halogenäthoxycarbonylamino-S'-carboxyvaleramido)-S-carDarnoyloxymethyl-F-methoxy-S-cephem-'l-carbonsäure mit 2-Thien.vlacetylhalogenid und N-Tri-niedrigalkylsilyl-trifluoracetamid unter Bildung eines Zwischenproduktes behandelt, das nach Abspaltung der 7/}-(D-5'-Trihalogenäthoxycarbonylamino-5'-carboxyvaleryl)-Gruppe den Benzhydrylester der 3-Carbamoyl-

oxymethyl-7-methoxy-7^-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure ergibt Bei Anwendung anderer Acylierungsmittel sollten Amino- oder Carboxy-Substituenten der Acylierungsmittel blockiert oder geschützt werden.

Es können auch andere Acylierungsmittel. wie beispielswcise die Anhydride oder gemischte Anhydride anstelle der Säurehalogenide verwendet werden. Diese Methode der Transacylierung oder Umacylierung ist tatsächlich ein wertvoller Fortschritt auf diesem Gebiet, da sie ein Mittel zur Herstellung von Cephalosporinen liefert, die verschiedene '-Acylamido-Substituenten anstelle der Aminoadipoylamidogruppe enthalten und dadurch die Notwendigkeit vermieden wird, zunächst bekannte Cephalosporine in die entsprechenden 7-AminocephaIosporansäure-Verbindungen zu überführen und dann dieses Produkt zu acylieren. Außer der Verwendung von durch Fermentation erzeugten Cephalosporinen als Ausgangsmaterialien in diesem Verfahren können Derivate derartiger Cephalosporine, die in 3-Stellung andere Substituenten der allgemeinen Formel CH2A tragen, verwendet werden. Auch können andere 3-substituierte Cephalosporine, beispielsweise aus den S-Acetoxymethyl^-acylamidocephalosporinen, nach bekannten Methoden auf diesem Gebiet hergestellt werden, beispielsweise mit Pyridin, die 3-Pyridi-

niummethyl-7-methoxy-7-(2-furyIacetamido)-decephalosporansäure.

Ein Alternativweg zur Herstellung der 7-Methoxy-7-amino-Zwischenprodukie der obigen Formel IX umfaßt die Umsetzung einer 7-Amino-Verbindung der obigen Formel Il mit einem aromatischen Aldehyd unter Bildung eines Imino-Adduktes. Behandlung dieses imino-Adduktes mit einem bestimmten Reagens, das zu einem 7-Methoxy-Schiffsche-Basen-Addukt führt und anschließende Regenerierung des Amino-Anteils. Dieses Verfahren wird in der GB-PS 13 66 682 vorgeschlagen.

Das Ausgangsmaterial ist die 7-NHrVerbindung der obigen Formel II, die mit einem aromatischen Aldehyd, bevorzugt einem mit wenigstens einem o- oder p-elektronegativen Substiluentcn aus beispielsweise Nitro·. Methylsulfonyl-, Cyano- und Carboxyl-Derivaien. umgesetzt wird. Das bevorzugte Reaktionsmittel ist p-Nitrobenzaldehyd.

Das Ausgangsmaterial und der aromatische Aldehyd werden miteinander in etwa äquimolaren Mengen in einem inerten Lösungsmittel vermischt. Geeignete Lösungsmittel sind Dioxan, Acetonitril, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Benzyl und Toluol, per Aldehyd kann gegebenenfalls in einem molaren Überschuß verwendet Werden. Die Reaktion Schreitet rasch bei Temperaturen im Bereich von Raumtemperatur bis RückfluBtemperattir des Lösungsmittels fort. Da diese Kondensation eine Gleichgewiehtsreaktion ist und da Wasser eines der Reaktionsprodukte ist. wird Wasser von der aktiven Teilnahme in weiteren Reaktionen durch irgendeine zahlreiche üblicher Methoden, zu denen azcotrope Destillation. Molekularsiebe oder Boratester gehören, entfernt. Die spezielle Methodi hängt von den exakten Parametern der Reaktion at Die Reaktion wird durch Abdampfung des Lösungs mittels beendet Das Imino-Derivat wird dann gewon ") nen und in der nächsten Stufe verwendet

Letztere führt die Substitution am Kohlenstoffaton benachbart zu dem Iminostickstofi herbei. Diese Reak tion erfolgt in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels beispielsweise wie oben aufgeführt, und in weiterei

in Gegenwart einer organischen oder anorganischen Base Es wird bevorzugt organische Basen zu verwenden wie beispielsweise tertiäre Amine oder Pyridin Eir spezielles tertiäres Amin, das bevorzugt wird, ist Diiso propyläthylamin, obgleich jedes tertiäre niedere Alkyl

η amin verwendet werden kann. Anorganische Basen wie beispielsweise NaH, NaOH, K.0H, Carbonat odei Bicarbonatsalze, können auch verwendet werden. Beispielsweise kann die Reaktion in »Weichglas« durchgeführt werden, das genug lösliche, anorganische Base zur Katalyse der Reaktion enthält

Mit der Imino-Vcrbindung werden zur Herstellung der Zwischenprodukte, worin der neue Substituent die Methoxygruppe darstellt Methylperoxid und zur Herstellung der Zwischenprodukte, worin der neue Substituent ein Halogen bedeutet, tert-Butylhypohalogenit oder Perhalogenmethylhypohalogenit zur Reaktion gebracht

Nach der Reaktion zwischen der Imino-Verbindung und dem Reaktionsmittel zur Bildung der 7-Methoxy-

jii Zwischenprodukte wird der Imino-Anteil zur Aminogruppe regeneriert

Diese Regenerierung erfolgt durch Aminolyse odei Hydrazinolyse in Gegenwart einer katalytischen Menge der Säure. Vorzugsweise wird Anilin-hydrochlorid ver-

r> wendet das sowohl als eine Quelle des Amins als auch der Säure dient Wenn Hydrazin oder Hydrazin-Derivate, wie beispielsweise Phenylhydrazin oder 2,4-Dinitrophenylhydrazin, verwendet werden, wird Säure zugegeben. Andere Hydrazine oder Amine können ver-

m> wendet werden. Bevorzugte Medien sind die niederen Alkanole. z. B. Methanol oder Äthanol. Die gewöhnlichen Säuren oder Basen können verwendet werden Z. B. können Chlorwasserstoffsäure, p-Toluolsulfonsäure oder Anilin verwendet werden. Die einzige Be-

r. grenzung besteht darin, daß keine unerwünschte Hydrolyse oder Ringzerstörung eintritt.

Die 7-Melhoxy-7-aminocephalosporansäure und 7-Methoxy-7-aminodecephalosporansäureester dei vorstehenden Formel IX, die auf diese Weise herge-

χι stellt werden, können dann in die gewünschten Cephalosporin-Verbindungen gemäß den oben beschriebenen Verfahren überführt werden.

Die Stufe der Acylierung der 7-Amino-Zwischen· produkte der vorstehenden Formel IX erfolgt durch

r, die Umsetzung der Amin-Verbindung mit der Acylsäure in Gegenwart eines Aktivierungsmittels, wie beispielsweise Dicyclohexyldiimid, mit dem Säureanhydrid, mit einem Acylhalogentd, wie beispielsweise dem Säurechlorid oder mit einem aktivierten Ester der Säure, wie

wi beispielsweise der p-Nitrophenylester. Bevorzugte Acyliefungsmittel sind beispielsweise Thienyläcetylhälögenid, Thienylessigsäureanhydrid oder Phenylessigsäureanhydrid. Beispielsweise wird zur Herstellung von Benzhydryl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-cephalo-

h-> sporanat. das Benzhydryl-7-amino-7-methoxycephalosporanat mit 2-Thienylacetylchlorid behandelt. Bei dem Verfahren der reduktiven Acylierung der 7-Azido-Verbindungen der obigen Formel VIII wird die reduktive

130 228/40

Acylierung vorzugsweise in Gegenwart des Säureanhydrids durchgeführt

Die neuen Cephalospoiine der Formell sind wertvolle Antibiotika, die gegenüber verschiedenen grampositiven und gram-negativen Bakterien wirksam sind. Obgleich im allgemeinen ihre biologischen Spektren ähnlich denen der bekannten Cephalosporine sind, besitzen die neuen Cephalosporine einige neue und unerwartete Eigenschaften. Somit sind sie im allgemeinen gegenüber vielen Mikroorganismen wirksam, die gegenüber den bekannten Cephalosporine^ wie beispielsweise Cefaloridin und Cefalothin resistent sind und sind resistent gegenüber der 0-Lactamase, die durch Cephalosporin resistente klinische Isolate von Pathogenen, wie beispielsweise E. coli und A. cloacae erzeugt werden. Auch sind sie im allgemeinen gegenüber Stämmen von Proteus, wie beispielsweise mirabilis, stärker wirksam und sind wirksam gegen Stämme von Proteus morganii, die gegenüber den unsubstituierten Cephalosporinen resistent sind.

Die gemäß dem Verfahren der Erfindung erzeugten 7-MethoxycephaIosporine sind somit im allgemeinen gegenüber zahlreichen gram-negativen Organismen wirksamer als die 7-(D-5'-Amino-5'-carboxycaleramido)-7-methoxycephalosporine und besitzen erhöhte Wirksamkeit gegenüber gram-positiven Organismen. Beispielsweise sind diese 7-Methoxycephalosporine wirksam gegen gram-positive Pathogene, wie beispielsweise Staphylococcus aureus bei minimalen Inhibierungskonzentrationen (MIC) von nur etwa l,5mcg/ml, Streptococcus pyogenes bei MIC von etwa 0,7 mcg/ml und Diplococcus pneumonia bei MIC von etwa 0,7 mcg/ml und gegen gram-negative Organismen, wie

Untersuchte Verbindungen der Formel I

beispielsweise Aerobacter aerogenes bei MIC von etwa 3 mcg/ml; Proteus vulgaris bei MIC von etwa 1,5 mcg/ml und Proteus morganii bei etwa 6 mcg/ml. Somit sind die Wirksamkeiten spezifischer Produkte der vorangehenden Beispiele, die erwähnt werden können, folgende:

S-Carbamoyloxymethyl^-methoxy^-phenylacetamido-3-cephem-4-carbonsäure, S. pyogenes MIC 1,56 mcg/ml und p. vulgaris MIC 1,56 mcg/ml;

3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure, S. pyogenes MIC 0,78 mcg/ml und P. morganii MIC 12,5 mcg/ml;

3-CarbamoyloxymethyI-7-methoxy-7-(2-furylaceiamido)-3-cephem-4-carbonsäure, S. aureus MIC 6,25 mcg/ml und P. vulgaris MIC 1,56 rncg/ml;

3-Acetoxymethy!-7-methoxy-7-(2-thienyIacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure, S. pyogenes MIC 1,56 mcg/ml und P. vulgaris MIC 0,78 mcg/ml und S-Pyridiummethyl^-methoxy-7-(2-thienyIacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure Serratia MIC 25 mcg/ml und S. aureus MIC 156 mcg/ml.

Die folgenden Vergleichsversuche zeigen die überlegene /3-Lactamasebeständigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen:

Die Verbindungen der Erfindung werden auf ihre Beständigkeit durch Inaktivierung gegen /J-Lactamase und auf ihre in vivo-Aktivität untersucht Zum Vergleich werden die bekannten Antibiotika Cefalothin und Cefaloridin herangezogen.

Verbindung

Substituent
in 7-Stellung

Cefalothin

Cefaloridin

2-Thienylacetyl OCHj

2-Furylacetyl OCHj «-Carboxyphenylacetyl OCHj

Thienylacetyl OCH₃

Phenylacetyl OCHj

Phenylthioacetyl OCHj

Thienylacetyl H

Thienylacetyl H

Carbamoyloxy Carbamoyloxy

Acetoxy

Pyridinium Carbamoyloxy

Carbamoyloxy

Acetoxy

Pyridinium

1, Beständigkeit gegen 0-Lactamase

Die Beständigkeit gegen durch Escherichia coli und Aerobacter cloacae gebildete 0-Lactamase wird gemäß dem in Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1974, S. 38 bis 48, angegebenen Verfahren ermittelt. Die Konzentration der zu untersuchenden Verbindungen beträgt dabei jeweils 250 μg/ml. Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle zusammengestellt.

Verbindung	prozentuale Inaktivierung durch	Aerobacter
	/7-Lactamase aus	cloacae
	Escherichia coli	0
		16
A	0	0
B	16
C	0

Verbindung

prozentuale Inaktivierung durch /9-Lactamase aus

Escherichia coli

Aerobacter cloacae

D 8 12

E 20 56

F 4 4

Cefaloridin >95 >95 Cefalothin i»95 74

2. in vivo-Aktivität

Die in vivo-Aktivität wird gemäß Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Januar 1974, S. 33 bis 37 ermittelt.

Verbindung

ED» fog χ 2, s. c.) Staph E coli

aureus

Proteus morganii

A
B
C
D

Cefaloridin Cefalothin

250
151

>2000

111

250

0.2
14,0

530

414

1 130

1000

>2000

133 1 210

151

414

90

1 000

604

1000

5 300 > 20 000

Aus den vorstehenden Tabellen ergibt sich, daß die Verbindungen der Erfindung im Vergleich zu Cefaloridin und Cefalothin wesentlich resistenter gegen 0-Lactamase sind und insgesamt gesehen auch eine bessere in vivo-Aktivität aufweisen.

Die Produkte tier Erfindung können allein oder in Kombination als aktive Bestandteile in verschiedenen pharmazeutischen Präparaten verwendet werden. Diese Antibiotika und ihre entsprechenden Salze können in Form von Kapseln oder als Tabletten, Pulver oder flüssige Lösungen oder ab Suspensionen oder Elixiere verwendet werden. Sie können oral, intravenös oder intramuskulär verabreicht werden. In pharmazeutischen Zubereitungen können sie neben einem Träger auch andere Bestandteile enthalten, wie Stabilisatoren, Bindemittel, Antioxidantien, Konservierungsmittel, Gleitmittel, Suspendiermittel, Viskositätsmittel oder Geschmacksmittel.

Die zu verabreichende Dosierung riängt weitgehend vom Zustand und Gewicht des zu behandelnden Patienten ab, wobei der parenteral Wig für allgemeine Infektionen und der orale Weg für Intestinalinfektionen bevorzugt wird. Im allgemeinen besteht eine tägliche Dosis aus etwa 15 bis etwa 600 mg aktivem Bestandteil je kg Körpergewicht des Patienten bei einer oder mehreren Anwendungen je Tag. Eine bevorzugte tägliche Dosis liegt im Bereich von etwa 80 bis 120 mg aktivem Bestandteil je kg Körpergewicht Die bevorzugte tägliche Dosis für die Verbindung Natrium-3-carbamoyloxymethyI-7-methoxy-7-(2-thienylacetami- do)-decephalosporanai liegt im Bereich von etwa 80 bis 120 mg aktivem Bestandteil je kg Körpergewicht.

Die erfindungsgemäßen Zubereitungen können in Einheitsdosierungsformer verabreicht werden. Die festen oder flüssigen Zubereitungen umfassen im allgemeinen 15 mg bis 1500 mg und vorzugsweise 250 mg bis 1000 mg des aktiven Bestandteils. Bei parenteraler Verabreichung ist die Einheitsdosierung gewöhnlich die reine Verbindung in einer etwas angesäuerten sterilen Wasserlösung oder in Form eines löslichen Pulvers, das zur Lösung bestimmt ist.

Die erfindungsgemäßen Cephalosporine können in Arzneimitteln in Form der freien Säure oder als Salze, wie beispielsweise als Alkali', Erdalkali' oder Ammoniumsalze, beispielsweise Natrium-, Kalium·, Calcium-, Triäthylammonium· und Procainsalze verwendet werden.

Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der Erfindung.

Beispiel I A. Benzhydryl-7-aminocephalosporanat

Zu einer Aufschlämmung aus 6,8 g (0,025 Mol) 7-Amino-cephalosporansäure in 300 ml peroxidfreiem Dioxan werden bei Raumtemperatur unter Rühren 4,3 g (0,022 Mol) p-Toluolsulfonsäure-monohydrat zugegeben. Die klare Lösung wird im Vakuum konzentriert und zweimal mit Dioxan gespült

Der Rückstand wird in 300 ml Dioxan bei Raumtemperatur gelöst, und eine Lösung aus 10 g (0,05 Mol) Diphenyldiazomethan in 25 ml Dioxan wird tropfenweise in einem Zeitraum von 15 Minuten zugegeben. Die weinfarbene Lösung wird weitere 30 Minuten

in gerührt, dann werden 25 ml MEOH zugegeben, um überschüssiges Φ2CN₂ zu zerstören. Das Gemisch wird im Vakuum konzentriert und der Rückstand zwischen 200 ecm CH₂Cl₂ und 200 ml Wasser, das 10 g K₂HPO₄ enthält (pH 8,5) verteilt Die organische Phase wird mit Wa;ser gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert, wobei ein Öl erhalten wird.

Das öl wird mit 100 ml Äther 1 Stunde gerührt Der Niederschlag wird abfiltriert mit Äther gewaschet/ und auf konstantes Gewicht von 4,7 g (43%) getrocknet; Fp 126 bis 128° C.

B. Benzhydryl-7-diazocephalosporanat

Zu einem gerührten Gemisch aus 1,6 g NaNO₂,30 ml Wasser und 40 ml CH₂Cl₂ werden bei O⁰C 880 mg (0,002 Mol) Benzhydryl-7-aminocephalosporanat zugegeben, anschließend eine Lösung aus 760 mg (0,004 MoI) p-ToluoIsuIfonsäure in 5 ml Wasser über einem Zeitraum von wenigen Minuten zugegeben. Das Gemisch wird bei 0⁰C 20 Minuten gerührt dann wird die organische Phase abgenommen, mit Ix 10 ecm Eiswasser gewaschen, über Na₂SÜ4 bei 0⁰C getrocknet, Filtriert und im Vakuum bei Raumtemperatur konzentriert wobei 900 mg eines Glases aus Benzhydryl-7-diazocephalosporajiat erhalten werden.

J5 IR:

4,8 μ (starke N = N), 5,6 μ (/3-Lactam C = O) und 5,8 μ (Ester C-O).

C Benzhydryl^-brom^-azidocephalosporanat

Zu einer Lösung aus 900 mg Benzhydryl-7-diazocephalosporanat in 20 ml CH₂Cl₂ und IC ml CH3NO2 bei 0 bis 10⁰C wird auf einmal die gesamte Triäthylammoniumazid-Lösung (ÄtsNHNJ (im folgenden hergestellt) zugegeben, nachfolgend die BrN₃-Lösung (im folgenden hergestellt), und dann 50 ml Wasser zugegeben, worauf festes NaHCO3 bis zu pH 8 zugegeben wird.

Die organische Schicht wird abgetrennt und mit 2 χ 20 ml Wasser extrahiert, über Na₂SO* getrocknet und im Vakuum konzentriert, wobei 900 mg (83%) Benzhydryl'7-brom-7-azidocephalosporanat erhalten werden.

Herstellung von BrN₃-Lösung

Zu 8 ml CH₂CI₂ werden bei 0"C 2,66 g (0,04 Mol) NaNj und anschließend 0,65 g (0,0042 Mol) Brom zugegeben. Zu diesem gerührten Gemisch werden bei O⁰C tropfenweise 2 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure zugegeben. Das Gemisch wird 3 Stunden bei 0°C gerührt

Die organische Schicht wird abdekantiert und die wäßrige Schicht mit 1x5ml CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigte organische Phase wird bei -10°C aufbewahrt.

Herstellung von ÄtjNHNj-Lösung

Zu einer Aufschlämmung von 1,5 g NaN) in 5 ml Wasser und 10 ml CH₂CI₂ bei - 1O⁰C werden tropfen-

weise bei -10' bis OC 4ml 50%iger H-SO₄ zugegeben. Die organische Phase wird von der wäßrigen Paste abgegossen und der wäßrige Extrakt mit 1 χ 5 ecm CHiCIi extrahiert. Die vereinigte organische Phase wird über CaCIi getrocknet. Die dekantierte HNi-Lösung wird mit ÄtjN auf pH 7 gebracht, und das so erhaltene Triäthylammoniumazid wird bei -10⁼C aufbewahrt.

D. Benzhydryl-Z-methoxy^-azidocephalosporanat

Zu einer Lösung aus 400 mg (0,00072 Mol) Benzhydryl^-brom^-azidocephalosporanat in 30 ml Methanol werden 150 mg (0,0008 Mol) AgBF₁ zugegeben. Das Gemisch wird im Dunkeln 2'/j Stunden gerühr..

Das Gemisch wird im Vakuum konzentriert und der Rückstand in 50 ml CHiCb aufgenommen und filtriert. Das Filtrat wird zweimal mit gesättigter NaHCOj-Lösung, zweimal mit Wasser extrahiert, über wasserfreiem MgSOi getrocknet und im Vakuum konzentriert, wobei 300 mg (83%) Kristalle erhalten werden; Fp 145 bii 148'-C.

E. Benzhydry!-7-methoxy-7-aminocepnaIosporanat

1,0 g Benzhydryl-T-azido^-methoxycephalosporanat werden in 100 ml Dioxan gelöst, 1,0 g Platinoxid wird zugegeben und das Reaktionsgemisch unter Wasserstoff bei Atmosphärendruck während 1 Stunde gerührt. Eine weitere Menge von 1,0 g Platinoxid wird zugegeben und das Reaktionsgemisch wieder unter Wasserstoff gebracht und 3 Stunden gerührt, bis das Azid vollständig umgesetzt ist, was durch Infrarot-Analyse aliquoter Mengen ermittelt wird. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand in 50 ml Chloroform aufgenommen und durch Silicagel G in Chloroform in einem so gesintertem Glastrichter von 60 ml filtriert. Das Material wird mit Chloroform eluiert, bis 200 ml Chloroform gewonnen worden sind. Das Chloroform wird unter vermindertem Druck entfernt, wobei 0.632 g Benzhydryl-7-methoxy-7-aminocephalosporanat erhalten werden. Die Ausgangsverbindung wird unter Verwendung der in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren hergestellt, wobei von dem Benzhydrylester der 7-Aminocephalosporansäure ausgegangen wird.

F. Benzhydryl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-caphalosporanat

0,632 g Benzhydryl^-methoxy^-aminocephalosporanat werden in 25 ml Methylenchlorid aufgenommen und auf 0⁰C gekühlt. 0,6 ml 2-ThienyIacetylchlorid werden tropfenweise während 30 Sekunden zugegeben und anschließend 0,6 ml Pyridin 60 Sekunden später. Das Reaktionsgemisch wird bei 0⁰C 15 Minuten gerührt und in zerkleinertes Eis gegossen. Das Gemisch wird bewegt und die organische Schicht abgetrennt, einmal mit 20 ml Wasser, einmal mit 20 ml 5%igem Natriumbicarbonat und einmal wieder mit 20 ml Wasser gewaschen. Das Methylenchlorid wird getrocknet und zur Trockne eingedampft, wobei 1,417 g rohes Produkt erhalten werden. Dieses Material wird auf eine Kolonne mit 60 g Silicagel unter Benzol gebracht und die Kolonne wird mit Benzol eluiert, wobei lOO-ml-Fraktionen, gefolgt von 300 ml Methylenchlorid/Benzol (Verhältnis 1 : I) in 3 Fraktionen und 500 ml Methylenchlorid in 5 Fraktionen genommen werden. Das Produkt wird aus r!er Kolonne entfernt, indem es mit 4C0 ml Chloroform in 4 Fraktionen eluiert wird, wobei 0.5J2 g erhalten werden. Dieses Material wird in 25 ml Methylenchlorid aufgenommen und bei Raumtemperatur mit 20 ml einer Lösung aus 0,120 g Natiiumbicarbonai in Wasser während Ui Stunde gerührt. Die Schichten werden getrennt und die organische Schicht -, mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Trockne eingedampft, wobei 0,420 g Benzhydr>l-7-meihoxy-7-{2-thienylacetamido)-cephalosporanat erhalten werden, die einen Einzelfleck auf einer Dünnschicht-Chromatographie-Platte ergeben.

G. Natrium-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-cephalosporanat

0,420 g Benzhydryl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-cephalosporanat werden in 3,5 ml Anisol gelöst und

ij mit 10 ml Trifluoressigsäure bei Raumtemperatur während 10 Minuten behandelt. Die Trifluoressigsäure und Anisol werden unter verhindertem Druck unter Beibehaltung der Temperatur unterhalb von 40⁰C entfernt und der Rückstand wird in 25 ml Chloroform aufgenommen und mit 20 m¹ Wasser, das 0,120 g Natriumbicarbonat enthält, bei-andelt. Das Gemisch wird V: Stunde bei Raumtemperatur gerührt und die organische Phase wird abgetrennt und mit Wasser gewaschen. Die vereinigte wäßrige Phase wird zweimal mit Methylenchlorid gewaschen und lyophilisiert, und man erhält 0382 g Natrium-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-cephalosporanat als ein bräunlicher Feststoff.

IR:

5,65	■i ttf-Lactam),	tau (Singlett) und	tau (Singlett, 6 H):
5,91		3,06 tau (Dupiett) (Tienylprolonen):	f °\
■i (Amidcarbonyl).	5,04	1 tau. g\CH2—O —C —CH,
NMR (DMSOD6):		tauisinglctt, \SJ-
2.65	5,16	-CH1)
6,19

6,65 tau (Singlett, OCH₁);
6,77IaUf-S-CHi);

8,01 lau \CH,— Cj.

Beispiel 2

7-Methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-desacc-toxy-3-pyridinHjm-cephalosporansaijre-thiocyanai

0,100 g Natrium-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-cephalosporanat werden in 100 μΙ Wasser, die ί)0μΙ Pyridin, 5 μι 85%ige Phosphorsäure und 0,475 g Kaliumthiocyanat enthalten, gelöst, Das Reaktionsgemisch wird bei 6O⁰C 5 Stunden gerührt und auf Raumtemperatur gekühlt. Das Reaktionsgemisch wird mit Wasser auf ein Gesamtvolumen von 20 ml verdünnt und 5mal mit 5 ml Anteilen Chloroform extrahiert. Chloroform wid aus der wäßrigen Phase durch Abdampfen unter Vakuum entfernt, und die wäßrige Phase wird dann auf 0°C gekühlt und auf pH 2 angesäuert. Man

läßt das Gemisch bei (TC 2 Stunden stehen, und der ausgefällte Feststoff wird abfiltriert und getrocknet und man erhält 0,015 g 7-Methoxy-7-(2-thienylaeetamido)-

S-desacetoxy-S-pyridinkimcephalosporansäure-thio·
cyanat als einen blaßgelben Feststoff.
IR: 4,83 μ (CNS): 5,62 μ (/J-Lactam).
Rf-Wert 0.61 (BAW 3:1 : I. auf Papier).

B e i s ρ i e 1 3

Natrium-7-methoxy-7-(2-fiirvlacetamido)-ccphalosporan.it

1.00 g BenzhvdiyU-methoxy/azidocephalospoia iiat wird in 100 ml Dioxan während 1 Stunde mil I g PtC);. dann während 3 weiterer Stunden mit einem weiteren Gramm PtO; hvilriert D;is I otnnpimitti-l wird im Vakuum bei einer Temperatur unterhalb von 30"C entfernt. Der Rückstand wird in Chloroform aufgenommen und durch ein Bett von etwa 2.5 cm Silicagel (Dünnschicht Chromatographie-Qualität) filtriert,

reichlich mit Chloroform gewaschen, wobei das Gesamtvolumen etwa 500 ml beträgt. Naih Entfernung des Chloroforms im Vakuum erhält man Ben/hulryl-7-methoxy-7-aminocephalosporanat.

40 ml Methylenchlorid werden zugegeben und dann werden bei OC zunächst 0.7 ml 2-Furylacetylchlorid und dann 1 ml Pyridin zugegeben. Nach 25minütigem Rühren bei OC wird Wasser zugefügt und das Rühren einige Minuten fortgesetzt. Die Schichten werden getrennt und der organische Anteil aufeinanderfolgend mit l%iger. wäßriger HiPOi. Wasser und gesättigtem, wäßrigem Natriumbicarbonat gewaschen. Nach dem Trocknen der Methylenehlorid-I.ösung mit MgSCX. Filtrieren und Abdampfen des Lösungsmittels, wird

Benzhydryl-7-mcthoxy-7-(2-furylacctamido)-ccphalosporanat erhalten. Fs wird durch Chromatographie auf 60 g neutralem Silicagel gereinigt und mit Chloroform-Äthylacetat (Verhältnis 4:1) eluiert. Der Rf-Wert beträgt auf der Kolonne 0.6t bis 0.45. und auf TLC in

UCIlI gTCIV-MCIt .3JMCIII U.U ~l Uli V.J· iin L. M I / C11 ICl. N.

0.57g dieser Verbindung werden bei OC während 5 Minuten mit 0.8 ml Anisol und 4.0 ml Trifluorcssig- ι säure behandelt. Die TFA und Anisol werden unterhalb von 30" C im Vakuum entfernt und 2 ml weiteres Anisol werden zugegeben und wie vorstehend angegeben abgedampft. Der Rückstand wird in einigen ml Wasser, die 0.1 g NaHCO) enthalten, aufgenommen und zu ■ einem Pulver lyophilisiert. da"· reichlich mit Äther gewaschen wird und getrocknet wird, wobei 0.45 g Natrium-7-metho\\-7-(2-furylacetamido)-cephalosporanat erhalten werden. Das IR-Spektrum (CHCh-Losung) besitzt Banden bei ca.

3.: μ (breit. N — H). 5.67 μ (^-Lactam). 5.75 μ (Ester).

5.92 μ (Amid) und 5.18 μ (COONa).
Das NMR-Spektrum in D_O besitzt Banden bei

7.92 tau (3 H. -COCH j). 6.60. 6.66 tau (2 H.

S-CH:-). 6.47 tau (3 H. -OCH₁). 6.20 tau (2 H. ,,.

Furyl-CH:-). 5J8 tau (HDO). 5.13 tau (2 H.

-CH^OAc). 4.88 tau (I H. C-H). 3.63 tau (2 H.

Furyl ß-H). 2.53 tau (1 H. Fury! A-H).
Das UV-SpektPjm in pH-7-Puffer weist folgende Werte auf:

Λ max. 263 um. E¹Vo= 141.

Der Rf-Wert auf TLC (Silicagel. Aceton-AcOH Verhältnis 9:1) beträgt 0.68.

Beispiel 4

A. Benzhydryl-7-(D-vazido-2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporanat

Zu einer Lösung aus I g Benzhydryl-7-amino-7-meth oxycephalosporanat in 25 ml Methylenchlorid werdet bei O⁰C 1,1g D-iii-Azidophenylacetylchlorid in 15 m Methylenchlorid und anschließend I ml Pyridin züge geben. Nach 15minütigem Rühren bei 0^rC wird da; Gemisch mit 2x5 ml kaltem Wasser. 3x5 ml l%iger wäßriger Phosphorsäure, ix 5ml gesättigter, wäßrigei Natriumbicarbonat-I.ösiing und 2 χ 5 ml Wasser extra hiert. Die Methylenchlorid Lösung wird über Magne siumsulfat getrocknet, filtriert und unter verminderten Druck eingeengt, wobei 1.1 g Benzhydrvl-7-(D-vazido 2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporanat ir

Form eines Öls erhalten werden. Dieses Produkt wird auf 60 ρ ntMilrnlrn Silirappl rhrnmntnpranhiprt iinH Hai Produkt wird mit Chloroform cluicrt. Nach Abdampfung des Lösungsmittels erhält man 600 mg Benzhydryl-7-(D-\-a/ido-2-phenylacetainido)-7-methoxvcephalosporanal. dessen Rf-Wert auf der Kolonne 0.069 bis 0,047 und auf TLC (Silicagel. CHCIi) 0.25 als Einzelfleck beträgt.

B 7(D-vAzido-2-phenylacetamido)-7-methoxyeephalosporansäure

Das oben bei A erhaltene Produkt (600 mg) wird 5 Minuten bei OC mit I ml Aniso¹ und 5 ml Trifluoressigsäure behandelt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird bei 30" C bei 0.1 mm Druck eingedampft und danr zweimal mit Anisol behandelt und wieder eingedampft Der so erhabene Rückstand wird in 25 ml Methylenchlorid gelöst und mit 4 χ 3 ml gesättigtem, wäßrigem Natriumbicarbonat extrahiert. Die wäßrige Lösung wird einmal mit 5 ml Methylenchlorid gewaschen, mil 5°/oiger Phosphorsäure auf pH 1.8 eingestellt und mil 3 χ IO ml Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetat-Lösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet und eingeuainpfi. wobei 370 mg 7-(D-t-Äziuo-2-ptieiiviacciamido)-7-methoxycephalosporansäure erhalten werden.

C. 7-(D-vAmino-2-phenylaceiamido)-7-methoxycephalosporansäure

Zu einer Lösung aus 620 mg 7-(D-^-Azido-2-phe^rlylacetamido)-7-methoxycephalosporansäure in 6.2 ml Essigsäure und 9 ml Wasser werden 3.1 g pulverförmiges Zink zugegeben, und die Lösung wird 6 Minuten bei 0^c C gerührt. Das Zink wird abfiltriert und mit 60 ml kaltem Wasser gewaschen. Die vereinigten Filtrate werden bei 0⁼C mit Schwefelwasserstoff gesättigt und durch Diatomeenerde filtriert. Das Filtrat wird mit 3 χ 50 ml Äthylacstat gewaschen und die wäßrige Lösung unter vermindertem Druck erwärmt, um gelöstes Äthylacetat zu entfernen und schließlich lyophilisiert, wobei 480 mg 7-(D-n-Amino-2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporansäure als ein weißes Pulver erhalten werden. Dieses Produkt enthält 1 Äquivalent Essigsäure und 2 Äquivalente Wasser und 2% Ammoniak als Acetat oder antibiotisches Salz. Die Aminosäure-Analyse zeigt 1,58 Mikromol/mg Phenylglycin (84% der Theorie). Thermische gravimetrische

Analyse ergibt 17,8% Gewichtsverlust bis HOC (99% der Theorie). Titration: Wendepunkte bei pH 5.7 und 8,7. pH '/2 = 7,0. Äquivalentgewicht 476 (Theorie für Acetat-dihydrat = 5l5). D'..' Elektrophorese bei pH 7 zeigt einen Einzelfleck als ein iVtonoanion.

Analyse für CH₂₁NiO₇ ■ 2 H,O AcOH+ 2% NH,: P-r.: C 46.2, H 5,7, N 8,8, S 5,6%;
gef.: C 47,41. H 4,99, N 9,48. S 6,36%.

Destillation aus Alkali und Titration des Destillats ergibt 2% NH₁. UV (pH 7 gepuffert): A max.-263. E%1I6 (f =6170). Das NMR-Spektriim (100 MIIz₁ D₂O) besitzt Banden bei 7.65 tau (AcOII. ca. 1 Äquivalent), 7,61 tau (Singlett. -COCHi). 6,17 tau (Singlett. -OCH,). 6.02, 6,19. 6.45, 6.62 tau (AB qt.. J = Hz. S — CH> — ), 2,13 tau (Singlett-Phenyl); monodeuteriertes Wasser (im folgenden mit HOD bezeichnet) verdunkelt bei 5 tau die anderen Protonen. IR-Spektnim iNJMi/jh. 2,8 bis 4,5" 'NH-,"*. 5ί;5·: '-ί ! ac·.;¹.":¹ 5 85·; (Ester)! 6,2 bis 6,3μ'((:θΟ^> ).'

Beispiel 5

A. Benzhydryl-7 (2-carhi)xy-2-pheny!acetamido)■
7-methoxycephalosporanat

Zu einer Losung aus 0,5 g Benzhydryl-7-amino-7-methoxycephalosporanat in 15 ml Methylenchlorid wird das Monobenzhydrylphenylmalonylchlorid (wie im fc'jenden beschrieben hergestellt) und anschließend 0,5 ml Pyridin zugesetzt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird 30 Minuten gerührt und dann werden 12 ml Wasser zugegeben. Das wäßrige Gemisch wird 5 Minuten gerührt und die Schichten werden getrennt. Der Methylenchlorid-Anteil wird mit 2,5 n-HCI. Wasser, zweimal mit wäßrigem Natriumbicarbonat und gesättigtem Natriumchlorid gewaschen. Die Lösungsmittelschicht wird dann über Magnesiumsulfat ge trocknet, filtriert und unterhalb von 25^CC unter vermindertem Druck eingedampft, wobei 0,695 g Benzhydryl-7 (2-carboxy-2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporanat erhalten werden. Dieses wird aut 50 g neutralem Silicagel Chromatographien und mit Chloroform eluiert. wobei 400 mg Produkt als gelbbraunes Glas erhalten werden.

Das oben verwendete Monobenzhydrylphenylmalonylchlorid wird wie folgt hergestellt: Zu einer Lösung aus 19,25 g Phenylmalonsäure in 165 ml Athylacetat wird eine Lösung aus 25 g Diphenyldiazomethan in 100 ml Äthylacetat über einen Zeitraum von 15 Minuten bei 15 bis 2O⁰C zugegeben. Die Lösung wird weitere 10 Minuten gerührt, und 500 ml Wasser werden zugegeben und ausreichende Mengen 50%iges Natriumhydroxid werden bei 15° C zugegeben, um das Reaktionsgemisch alkalisch zu machen. Die Lösungsmittelschicht des Gemisches wird abgetrennt und zweimal mit wäßriger Natriumbicarbonatlösung extrahiert Die vereinigten, wäßrigen Lösungen werden zweimal mit Äthylacetat gewaschen, gekühlt mit Chlorwasserstoffsäure angeräuchert und dreimal mit Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetat-Extraktionen werden zweimal mit Wasser, einmal mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet Das Lösungsmittel wird dann bei einer Temperatur unterhalb von 25° C unter vermindertem Drück zu einem öl eingedampft das aus 200 ml Äther im Petroläther (Verhältnis 1 :3) kristallisiert wird, und man erhält 20,9 g Monobenzhydrylphenylmalonat. Fp 119,5 bis 122⁰C. Zu einer Aufschlämmung von 0.7 g dieses Monoesters in 2,5 ml Wasser werden 2,10 ml 0.962 n-Natriumhyrlroxid zugegeben, Die Lösung wird 3 Mi-

-> nuten gerührt, filtriert und gefiieigestrocknet. um das Natriumsalz des Monoesters zu erhalten. Zu diesem Natriumsalz werden 5 ml Benzol zugegeben und die Aufschlämmung wird bei O⁰C mit 1,5 ml Oxalylchlorid behandelt. Nach 10 Minuten bei 0⁰C und 5 Minuten bei in 25° C wird das Gemisch bei einer Temperatur unterhalb von 25°C unter vermindertem Druck eingedampft, und der Rückstand wird zweimal aus Tetrachlorkohlenstoff konzentriert. Unter einer trockenen Atmosphäre wird das Produkt in 5 ml Tetrachlorkohlenstoff filtriert und

, konzentriert, wobei das Monobenzhydrylphenylmalonylchlorid erhalten wird.

B. Dinati ium-7-(2-carboxy-2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporanat

400 mg Benzhydryl-7-(2-carboxy-2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporanat werden bei 0"C während 2 Minuten mit 1.2 ml Anisol und 6 ml Trifluoressigsäure behandelt. Das erhaltene Reaktionsprodukt wird dann gefroren, bei niedriger Temperatur und hohem Vakuum abgestreift, mit Anisol verdünnt und wieder bei 25" C abgestreift. Der die freie Säure enthaltende Rückstand wird in 20 ml I molarer Natriumbicarbonat-l.ösung aufgenommen, viermal mit kleinen Mengen Methylenchlorid gewaschen, mit HCI angesäuert, mit NaCl gesättigt und mit 4 χ 10 m! Athylacetat extrahiert. Die Lösungsmittel-Extraktionen werden zweimal mit gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei 218 mg 7-(2-Carboxy-2phenylacetamido)-7-methoxycephalosporansäure als ein gelber Sirup erhalten werden. Dieser wird in 5 ml Wasser, das 79 mg Natriumbicarbonat enthält, gelöst und gefriergetrocknet. Der gefriergetrocknete Kuckstand wird in Ί ml Wasser gelöst, filtriert und wieder lyophilisiert, wobei 182 mg Dinatrium-7-(2-carboxy-2-phenylacetamido)-7-methoxycephalosporanat erhalten werden. Das so erhaltene Produkt wird mit 550 mg des aus einem zweiten Versuch erhaltenen gleichen Produktes vereinigt und in 10 ml Wasser gelöst. Die erhaltene Lösung wird filtriert und lyophilisiert, wobei 647 mg Produkt erhalten werden. UV (pH 7): λ max. 265 nm, ε = 6300, NMR (D₂O): 7,90 tau (3 H, Singlett, Acetyl), 6,70, 6,54 tau (2 H, 2 AB Quartette, diastereomeres S-CHj-), 630, 6,38 tau (3 H, Dublett. diastereomere OCHj-Gruppen). 5.22 tau (2 H, breites, -CH₂O-), 4,85 tau (IH, Singlett Q, Proton). 235 tau (5 H, Singlett, aromatisch). Der große HOD-Peak überdeckt die Malonylprotonen Adsorption. Bei der Elektrophore bei pH 7, wobei sich das Produkt als Dianion bewegt, wird ein Einzelfleck erhalten. Der pH-Wert einer 10%igen, wäßrigen Lösung ist 8,8.

Analyse für

C₂₀H₁₈N₂SO₄Na₂ +Na₂CO₃+ 0,4 NaHCOj+ H₂O:

Ben: C 3839. H 3.09, N 4.21. S 4.81%.

Asche (als Na) 15,19;
gef.: C 3839. H 3.10, N 4.17. S 431%.

Asche (als Na) 153.

Beispiel 6

S-Carbamoyloxymethyl^-methoxy^/ii-phenylacetamidoO-cephem-'l-carbonsäure

Stufe A

7/?-(D-5'-'^richloräthoxycarbonylamino-

S'-carboxyvaleiamidoJO-carbamoyloxymethyl-

7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

20.5 g des Mononatrium5al7.es der 7/?-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-B-cephem-'t-carbonsäure werden in dem Gemisch aus 80 ml Aceton und 240 ml wäßrigem, IO%igem Dikaliumhydrogenphosphat gelöst. Zu dieser Lösung werden tropfenweise 25 g (118 mMol) Trichloräthoxycarbonylchlorid in 80 ml Aceton zugegeben. Während der Zugabe wird der pH-Wert der Lösung auf 9.1 ge

>m nar»h iinri

n.Malriiin-»hwlrnviflstand wird zwischen Methylenchlorid und Natriumbicarbonat-Lösung verteilt. Die organische Schicht wird mit Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet und zur Trockene eingedampft. Das auf diese Weise erhaltene rohe Produkt wird durch Chromatographie auf Silicagel unter Verwendung von Chloroform-Äthylacetat (Verhältnis 95 :5) als Eluiermittel gereinigt. Die erhaltene, gewünschte Verbindung erscheint bei der Diinnschicht-Chromatographie homogen.

Stufe D

Benzhydrylester der J-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7^-phenylacetamido-3-cephem-

4-carbonsäure

Die Lösung des Di-benzhydrylesters der 7/J-[(D-5'-Trichloräthoxycarbonylamino-S'-carboxyvalerylJ-phenylacetylamino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-

Lösung zugegeben werden. Nach 30 Minuten wird das Gemisch mit Athylacetat extrahiert, die Äthylacetatschicht verworfen und die wäßrige Schicht mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,5 angesäuert. Das ausgefällte Produkt wird in Athylacetat extrahiert. Nach Trocknen über Natriumsulfat und Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum wird das gewünschte Produkt als ein öl erhalten.

Stufe B

Di-benzhydrylester der 7/J-(D-5'-trichloräthoxy-

carbonylamino-S'-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyl-

oxymethyl-7-methoxy-3cephem-4-carbonsäure

Zu der Lösung der obigen 7/?-(D-5-Trichloräthoxycarbonylamino-S'-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in

500 ml Athylacetat werden 17 g Diphenyldiazomethan in 200 ml Äther zugegeben. Nach Rühren des Gemisches übernacht wird es aufeinanderfolgend mit Natriumbicarbonat und Natriumchlorid-Lösung extrahiert. Das Lösungsmittel wird aus der getrockneten Lösung abgedampft, und ms", erhält ein rohes Produkt, das durch Chromatographie auf Silicagel gereinigt wird. Ein Gemisch aus Chloroform und Athylacetat (Verhältnis 2:1) wird zur Eluierung verwendet. Das Material zeigte einen Einzelfleck bei der TLC-Chromatographie.

Stufe C

Di-benzhydrylester der 70-[(D-5'-Trichloräthoxy-

carbonylamino-S'-carboxyvalerylJ-phenylacetyl-

amino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-

3-cephem~4-carbonsäure

Ein Gemisch aus 1,1 g (1,18 mMol) des Di-benzhydrylesters der 70-(D-5'-Trichloräthoxycarbonylami-

no-S'-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyloxymethyl-T-methoxy-S-cephem-'l-carbonsäure, 5 ml Acetonitril und 3 ml bis-Trimethylsilyltrifluoracetamid läßt man bei Raumtemperatur 6 Stunden stehen. Nach Ablauf dieser Zeit werden die flüchtigen Produkte im Hochvakuum entfernt und der Rückstand wird in 3 ml Methylenchlorid gelöst. Zu dieser Lösung werden 0,23 ml (1,79 Mol) Phenylacetylchlorid zugegeben, und man läßt das Gemisch 65 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Danach wird die Lösung eingedampft und der Rückstand in 5 rnl Tetrahydrofuran und 0,7 ml 25 n-Chlorwasserstoffsäure gelöst Nach 20minütiger Reaktionszeit wird das Lösungsmittel abgedampft und der Rücken säure-Wasser (ImI) wird mit 100 mg Zinkstaub 5 Stunden gerührt. Danach wird die Lösung filtrier; und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird zwischen Methylenchlorid und Wasser verteilt rind die Methylenchloridschicht mit Natriumbicarbonat-

:> und Natriumchlorid-Lösungen extrahiert. Nach Trocknung und Eindampfen wird ein rohes Produkt erhalten, das durch Dünnschicht-Chromatographie unter Verwendung von Silicage'-Platten bzw. -Bögen und einem Gemisch aus Chloroform und Athylacetat (Verhälmis

in 3 :2) gereinigt wird. Das Produkt wird durch sein IR- und NMR-Spektrum charakterisiert.

Stufe E

S-Carbamoyloxymethyl^-methoxy-7/?-phenylacetamido-3-cephem-4-carbonsäure

17 mg Benzhydrylester der 3-Carbamoyloxymeihyl-7-methoxy-7/?-phenylacetamido-3-cephem-4-carbonsäure werden in 0,2 ml Anisol gelöst und mit 0,5 ml Tri-

Hi fluoressigsäure 5 Minuten behandelt. Danach wird das Gemisch rasch im Hochvakuum konzentriert -ind mit Athylacetat verdünnt. Das Produkt aus der Äthylacetat-Lösung durch Extraktion mit einem Natriumphosphatpuffer (pH 7,5) entfernt. Die Pufferlösung wird mit

J". Verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,5 angesäuert und die gewünschte Verbindung wird durch Extraktion mit Äthylacetat entfernt. Nach Trocknen und Eindampfen der Lösung wird das Produkt erhalten. Eine analytische Probe wird durch Umkristallisation aus

in Athylacetat erhalten; Fp 159 bis 161°C.

UV: (pH 7 Puffer) λ max. 2670 μΐη, ε 8650. IR: (CH₃CN) 1780, 1735 und 1700. NMR: (Lösungsmittel -CD₃CN + D₂O), <5 = 3,42 (0-CH₃, s), 335 (2-H₂, -partiell sichtbar), 5,01 " (6-H, s), 4,83 (10-H₂, d), 3,01 (13-H₂. s).

Elementaranalyse für C18H19O7N3S:

Ben: C 51,29, H 4,54;
gef.: C 51,47, H 4,73.

2 mg der obigen Säure werden in einem Tropen Methanol gelöst und mit einer Lösung aus 2 mg Dibenzyläthylendiamindiacetat in Athylacetat behandelt Das Dibenzyläthylendiaminsalz der gewünschb5 ten Verbindung fällt nach dem Stehen als nadeiförmige Kristalle aus: Fp 140 bis 143°C.

UV: (CH₃OH) λ max. 263 μηι, ε 8600.

Beispiel 7

S-Carbamoyloxymethyl^-methoxy^-phenylscetamido-S-cephem-'t-carbonsäure

Stufe A

Di-benzhydrylester der 7/?-[(D-5'-trichloräthoxycarbonylamino-S'-carboxyvalerylJ-phenylacetyl- amino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-

3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 9,3 g (10 mMol) des Di-bcnzhydrylesters der 7/?-(D-5-Trichloräthoxycarbonvlainino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-niethoxyO-cepherrM-carbonsäure, 7,8 g (40 mMol) N-Trimethylsilylphthalimid und 5,3 ml (40 mMol) Phenylaeetylchlorid in 50 ml Acetonitril wird 20 Stunden auf 40" C erhitzt. Nach diesem Zeitraum wird das Gemisch auf Raumtemperatur gekühlt und filtriert. Das Filtrat wird zur Tronkene eingedampft und mit Hexan angerieben. Der urt'ösliche Rückstand, c den Di-benzhydrylester der 7/?-[(D-S'-Trichloräthoxycarbonylamino-5 -carboxy valeryl)-phenylace ty lamino]-3-carbamoyloxy mcthyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure enthält, wird ohne Reinigung in der nächsten Stufe verwendet.

Stufe B

Benzhydrylester der 3-Carbamoyloxymethvl-7-methoxy-7^-phenylacetamido-3-cephem-

4-carbonsäure

Das rohe Produkt aus Stufe A wird in einem Gemisch aus 50 ml Äthylacetat, 45 ml Essigsäure und 5 ml Wasser gelöst. Zu dieser Lösung werden 20 g Zinkpulver zugegeben, und das Gemisch wird 4 Stunden bei Raumtemperatur bewegt. Danach wird überschüssiges Zink abfiltriert und das Filtrat zwischen Äthylacetat und Wasser verteilt. Die organische Schicht wird mit Natriumbicarbonat-Lösung und Wasser gewaschen. getrocknet und das Lösungsmittel abgedampft. Das so erhaltene rohe Produkt wird durch Chromatographie auf 1 kg Silicagel unter Verwendung eines Gemisches

„..r. /~U!_rt-„r -** t-l_nv~_ J *4-,.l l /\;~_u-i._:.

oxyO-cephetTM-carbonsiuire, 4,7 g (40 mMol) N Tri methylsilyltrifluoracetamid, 3,42 ml (25 mMol) 2-Thienylacetylchlorid und 50 ml Chloroform wird 16 Stunden auf 47°C erwärmt. Nach Entfernung des Lösungsmittels durch Abdampfen wird das rohe Reaktionsgemisch mit Hexan extrahiert und weiter durch Chromatographie auf 1 kg Silicagel unter Verwendung von 10% Äthylacetat in Chloroform als Eluiermittel gereinigt.

Stufe B

Benzhydrylester der 3-Carbamovlox\meth>l-7-methoxy-7/?-(2-thienvlacetainido)-

3-cephem-4-carbonsäure

4,2 g (3,8 mMol) des Di-benzhydr\lcsters der 7/?-[(D-5'-Trichloräthoxycarbonvlamino-5 -carboywaleryl)-2-thienylace!ylaminol-3-carbamovlo\\niethNl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure werden in 30 ml Äthylacetat gelöst und zu 30 ml 90%iger. wäßriger Essigsäure und 12 g Zinkstaub zugegeben. Das Gemisch wird 5¹/; Stunden bei Raumtemperatur kräftig gerührt. Nachdem das Zink abfiltriert worden ist. wird überschüssige Essigsäure durch Waschen der Aihylaceut-Lösung mit Wasser entfernt. Die gewünschte Verbindung wird in der gleichen Weise wie in Beispiel t. Stufe E, beschrieben isoliert. Sie wird durch TLC (7°e CHiOH in CHCh :n-Hcxan (Verhältnis I M als ein Einzelfleck material charakterisiert.

Stufe C

3-Carbamoyloxymeth\ l-7-metrin\\ 7/J-(2-thienylacet amido)-3-ceph em-·*-carbon saure

Eine kalte Lösung aus 1.3b g des Ben/lndrvlesters der S-Carbamoyloxymethyl^-methow-r.-f-i.? thiensiacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure in 10.!SS ml -\niso! wird mit 5.44 ml Trif;..oressigsäurc bei 0 (. : Stunde gerührt. Die flüchtigen Anteile werden im Hochvakuum entfernt, und das Produkt wird aus -\th\lace:\i umkn-

*~ ice U:- κ."

47 :47 :6) zur Eluierung gereinigt. Das erhaltene Produkt besitzt die in Beispiel 6. Stufe E. beschriebenen physikalischen Eigenschaften.

Stufe C

3-Carbamoyloxymethyl-7-piethoxy-7/?-phenylacetamido-3-cephem-4-carbonsäure

Die gewünschte Verbindung wird durch das in Beispiel 6, Stufe F, beschriebene Verfahren hergestellt und weist die gleichen physikalischen Eigenschaften wie das Produkt gemäß Beispiel 6 auf.

Beispiel 8

3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7,i-(2-thienvlacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure

Stufe A

Di-benzhydrylester der 7/?-[(D-5'-Trichloräthox\- carbonylamino-5'-carboxyvaler\l)-

2-thienylacetylamino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

Ein Gemisch aus 6.0 g (63 mMol) des Dibenzhydrvlesters der 7£-(D-5'-Trichloräthoxycarbonylamino-S'-carboxyvalerarnido^-carbarnoyloxyrnethvi-'-meth- (pH 7 Puffer).

λ max. 263 μπι f 8840: 236 um f 14 000:

NMR: (Losungsmittel -CD.CN-D.O) ,1 = 3.48 (-OCHi. s). -3.4 (2-H;. partiell sichtbar). 5.0i (6-H. s). 4.91 (10-H;. d). 3.8b (13-H_;. s).

Elementaranalvse für C _rH -NiO-S-: Ber.: C 44.96. H 4.01. N 9.83:
gef.: C 44.86. H 3.99. N 9.21. S !5.(Xl.

Stufe D

Natrium-3-carbamoylox\meth\l-7-n,eiho\\- 7^-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbo\\lat

Eine Suspension aus 1 g 3-Carbamo\lo\\meth>l-7-methoxy-7^-(2-thienylacetamid)-3-cephem-4-carbcnsäure in 100 ml destilliertem Wasser w ird bei Raumtemperatur gerührt, während langsam 0.2 g Natnumbicarbonat zugegeben werden. Nachdem Lösung erreicht is; und der pH-Wert praktisch neutral ist (pH e bis 7) w ird der Ansatz in einen Lyophilisierkolben filtrier: Da? Filtrat wird lyophilisiert.

Es wird 1 g amorphes Natrium-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7/?-(2-thienylacetamid)-3-cephem-

4-carboxylat erhalten, was einer 99%igen Ausbeute entspricht

UV: (6 PH 7 Puffer): £% 198 bei 262 nm, 315 bei

236 nm. IR(KBr): 1760 (Lactam), F«]_D=183,I^C (C=I, pH 7

Puffer).

Beispiel 9

3-Carbamoyloxymethyl-7/?-(2-furylacetamido)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

Stufe A

Di-benzhydrylester der 7/?-[(D-5'-Trichlor-

äthoxycarbonylamino-5'carboxyvaleryl)-

2-furyIacetylamino]-3-carbamoyIoxymethyl-

7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

Ein Gemisch aus 93 g des Di-benzhydrylesters der 7/?-(D-5'-Trichloräthoxycarbonylamino-5'-carboxy-

valeramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7,0 ml bis-(Trimethylsilyl)-trifluoracetamid, 4,7 ml 2-Furylacetylch!orid und 50 ml Dichlormethan wird 16 Stunden auf 47^CC erwärmt. Die Lösjng wird durch Verdampfen entfernt, das rohe Reaktionsgemisch wird mit Hexan extrahiert, und der Rückstand wird ohne Reinigung in der nächsten Stufe verwendet

Sture B

Benzhydrylester der 7/J-(2-Furylacetamido)- S-carbamoyloxymethyl^-methoxyO-cephem-

4-carbonsäure

Der Di-benzhydrylester aus Stufe A wird mit Zinkstaub und Essigsäure nach den in Beispiel 8, Stufe B. beschriebenen Verfahren umgesetzt. Nach Kristallisation aus Chloroform-Hexan besitzt das reine Produkt folgende physikalische Eigenschaften:

Fp: 168° bis 17TC.

IR: (CHCIj) 1800. 1720. 1700.

UV: λ max. 265 um, ε 7200.

NMR: (Lösungsmittel -CD₁CN) 0-3,43 (-OCHj, s),

339 (2-H₂, partiell sichtbar), 5,0 (6-H. s). 4,75 (10'H₂. d), 3.64(13-HaS).

Beispiel 10

7/?-(D,L-«-Aminophenylacetylamido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

Stufe A

7/?-(D-5-tert-Buto*ycarbonylamino-5-carboxy valeramido)-3-carbamoyloxymethyl'7-methoxy-

3-cephem-4-carbonsäure

50,0 g 70-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyI-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure werden in einem Gemisch aus 1500 ml wäßrigen 5%igem Dikaüumhydrogenphosphat und 1000 ml Aceton gelöst und mit 2,5 n-Natriumhydroxid-Lösung aul pH 9,5 eingestellt Zu dieser gerührten Lösung werden 50 ml tert-Butoxycarbonylazid zugegeben, und der pH-Wert wird über einen Zeitraum von 20 Stunden bei 9,5 gehalten. Das Reaktionsgemisch wird dann mit Äthylacetat extrahiert, die Äthylacetatschicht verworfen und die wäßrige Schicht auf 0"C gekühlt, mit 1200 ml Äthylacetat gerührt und auf pH 24 mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure angesäuert Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum konzentriert, und der so erhaltene Feststoff kann ohne weitere Reinigung verwendet werden.

Stufe B

Di-benzhydrylester der 7/?-(D-5-tert-Butoxy-

carbonylamino-S-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyl oxymethyl^-methoxy-S-cephem^-carbonsäure

Zu einer Lösung aus 15,0 g 7/?-(D-5-Butoxycarbonylamino-S-carboxyvaleramidoJ-S-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in 500 ml Äthylacetat werden 54 g Diphenyldiazomethan in 70 ml Äther zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird auf 40° C unter Rühren erwärmt und wird nach 30 Minuten mit zusätzlichen 54 g Diphenyldiazomethan in 70 ml Äther behandelt. Nach 3 Stunden wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und durch ein Gemisch aus 500 ml Methanol und 20 ml Wasser ersetzt. Die Methanol-Wasser-Lösung wird viermal mit Hexan extrahiert und dann im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in Äthylacetat gelöst, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei die gewünschte Verbindung erhalten wird, die ohne Reinigung in der nächsten Stufe weiter verwendet wird.

Stufe C

S-Carbamoyloxymelhyl^-methoxy-7/?-(2-furylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure

Die 3-Carbamoyloxymethyl-7methoxy-70-(2-furylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure wird aus dem Produkt der Stufe B nach dem in Beispiel 8, Stufe C. beschriebenen Verfahren hergestellt. Das Produkt besitzt nach Umkristallisation aus Äthylacetat einen Schmelzpunkt von 156 bis 161⁰C.

UV: (pH 7 Puffer) λ max. 265 μιπ. f 7200. IR: stimmt mit der Struktur iibcrcin. NMR: (Lösungsmittel -CDiCN + DiO) Λ = 3.44

(-OCH,, s), -J.J8 (2 Hi. teilweise sichtbar).

5,02 (6-H, s). 4.82 (10-H₂. d). 3.66 (13-H₂, s).

Stufe C

Di-benzhydrylester der 7/J-[(D-5'-tert.-Butoxy-

carbonylamino-S'-carboxyvaleryO-D.L-Ä-azido phenylacetylamino]-3-carbamoyloxymethyl· 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

Ein Gemisch aus 10,8 g des Di-benzhydrylesters der 7^-(D«5'-tert.=Butoxycarbonylamino=5'=carboxyvaler= amido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure. 100 ml Chloroform. 16.2 g bis-(Trimethylsilyl)-trifluoracetamid und D,L-<vAzidophenylacetylchlorid wird 16 Stunden bei 45⁰C erwärmt. Das Gemisch wird mit 300 ml Chloroform verdünnt, mit 2%igem. wäßrigem Bicarbonat und gesättigtem, wäßrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und /u einem Öl eingedampft, das durch

130 228/40

Ausfällung des Produktes aus einer Chloroform-Lösung mit Hexan gereinigt wird. Der hellgelbe Feststoff wird in der nächsten Stufe ohne weitere Reinigung verwendet

Stufe D -,

7/J-(D,L-a-AzidophenyIacetylamido)-3-carbamoyI-oxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung aus 13,0 g des Di-benzhydrylesters der 7/3-[(D-5'-tert-Butoxycarbonylamino-5'-carboxy- nt valeryI)-D,L-a-azidophenylacetylamino]-3-carbamoyloxymethyl^-methoxy-S-cephem^-carbonsäure in 13 ml Anisol wird in 65 ml kalte (0⁰C) Trifluoressigsäure gegossen. Nach 5 Minuten wird die Lösung in 1800 ml gerührten, kalten (0⁰C) Äther gegossen. Der ausgefällte π Feststoff wird gesammelt und zwischen 10%igem, wäßrigem, saurem Dinatriumphosphat und Äthylacetat verteilt Die Äthylacetatschicht wird verworfen, und die wäßrige Schicht wird mit frischem Äthylacetat beschichtet, und das gerührte Gemisch wird in der Kälte mit 60%iger, wäßriger Phosphorsäure auf pH 2 gebracht Die Äthylacetatschicht wird gewonnen, mit gesättigtem, wäßrigem Natriumchlorid gewaschen und dann über Natriumsulfat getrocknet Flüchtige Stoffe werden im Vakuum entfernt, und man erhält die gewünschte Verbindung.

Stufe F

7/?-(D,L-<x-AminophenyIacetylamido)-3-carbamoyloxymethyl-Z-methoxy-S-cephem-^carbonsäure *°

Eine Aufschlämmung aus 1,0 g 7/?-(D,L-«-AzidophenylacetylamidoJ-S-carbamoyloxymethyl^-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in 10 ml Essigsäure und 90 ml Wasser bei 0⁰C wird mit 5,0 g Zinkstaub 10 Minuten « gerührt und filtriert Das Filtrat wird mit Schwefelwasserstoff besprüht, filtriert und das Filtrat gefriergetrocknet, wobei ein weißer Feststoff erhalten wird, der mit Äther gewaschen und im Vakuum getrocknet wird, wobei die gewünschte Verbindung als ein weißes Pulver erhalten wird.

UV: (pH 7 Puffer) λ max. 264 μηι, e 6525. IR: 1770 (^-Lactam) 2650, 1550 (HN₁₊). NMR: (Lösungsmittel -D₂O-I-HCO₃-) <) = 3,78

(-OCH3, s), 3,84 (-OCH3, s), 3,90 (2-H₂, par- ^4; tiell sichtbar).

Beispiel Π

3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-(2-thienylacetamido)-3-eephem-4-carbonsäure

Man gibt zu einer Aufschlämmung von 200 mg

7P-(O-5'-t-Butoxycarbonylamino'5'-carboxyvalep

amido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem- 4-carbonsäure in 2 ml äthanolfreiem Chloroform 432 mg N-Trimethylsilyltrifluoracetamid und 0,56 mg

Triäthylamin. Zu diesem Gemisch gibt man 182 μΙ Thie-

nylacetylchlorid. Man erhitzt die Lösung in einem ölbad 93 Stunden auf 45° C. Dann schreckt man das Gemisch durch Zugabe von n·Hexan ab. Man zentrifugiert die Lösung und gießt das Hexan von dem gummiartigen, festen Stoff ab. Diese Maßnahme wiederholt man und verwirft die Hexanfraktionen. Der gummiartige feste Stoff wird 30 Minuten in 10 ml Ameisensäure gelöst. Man entfernt die Ameisensäure im Vakuum. Dann verteilt man den festen Stoff zwischen 3 ml Essigsäureäthylester und 3 ml Wasser, wobei der pH-Wert auf 2,5 eingestellt ist. Man konzentriert die Essigsäureäthylesterschicht zur Trockne. Sowohl die Dünnschichtchromatographie-Analyse als auch die Flüssig-Chromatographie zeigen die Gegenwart von 3-Carbamoyloxymethyl-7-metlioxy-7^-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure. Man reinigt das Rohprodukt durch präparative Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Platten aus Siliciumdioxidgel und einem Lösungsmittel, welches aus 50 Teilen Benzol, 10 Teilen Methanol und 6 Teilen Essigsäure besteht wobei man 20 g der Verbindung der Oberschrift erhält

Beispiel 12

3-CarbamoyIoxymethyl-7-methoxy-7,9-(2-thienyI-acetamido)-3-cephem-4-carbonsäure

Man gibt zu einer Aufschlämmung ve η 200 mg 7/?-(D-5-Amino-5-carboxyvaIeramido)-3-carbamoyI-oxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in 2 ml äthanolfreiem Chloroform, 430 mg N-Trimethylsilylbenzolsulfonamid und 0,6 mg Triäthylamin. Zu diesem Gemisch fügt man 182 μΐ Thienylacetylchlorid. Man erhitzt das erhaltene Reaktionsgemisch in einem öibad 10 Stunden bei 45° C und schreckt es durch Eingabe in η-Hexan ab. Man zentrifugiert die Lösung und trennt das Hexan von dem gunimiartigen Feststoff ab und verwirft das Hexan. Man wiederholt diese Maßnahme zweimal und verwirft die Hexan-Fraktionen. Den gummiartigen, festen Stoff verteilt man zwischen 3 ml Essigsäureäthylester und 3 ml Wasser, wobei der pH-Wert auf 2^ eingestellt ist Die Konzentrierung der Essigsäureäthylester-Schicht zur Trockne ergibt rohe 3-CarbamoyIoxymethyl-7-methoxy-7/?-(2-thienyIacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure, weiche man durch Dünnschichtchromatographie-Analyse und Flüssig-Chromatographie charakterisiert Man reinigt das Rohprodukt durch präparative Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Platten aus Siliciumdioxidgel und einem Lösungsmittelsystem aus 50 Teilen Benzol, 10 Teilen Methanol und 6 Teilen Essigsäure, wobei man 25 mg der in der Oberschrift angegebenen Verbindung erhält

Formulierungsbeispiele für Arzneimittel Einheitsdosierungsform

Eine Einheitsdosierungsform erhält man durch Vermischen von 120mg 3-CarbamoyIo?s:methyl-7-meth-

v> oxy-7-(D-a-aminophenylacelamido)-decephalosporansäure-natriumsalz mit 20 mg Lactose und 5 mg Magnesiumstearat und Einbringung des 145 mg Gemischs in eine Gelatinekapsel. In ähnlicher Weise können unter Verwendung von mehr aktivem Bestandteil und weni-

« ger Lactose andere Dosierungsformen in Gelatinekapseln eingebracht werden, und¹ sollte es notwendig sein, mehr als 145 mg Bestandteile miteinander zu vermischen, so können auch größere Kapseln sowie gepreßte Tabletten und Pillen hergestellt werden.

125 mg T-Methoxy-T-iD-Ä-arhihophenylacetamiaOi-cephalosporansäure enthaltende Tablette

|e Tablette

7-Methoxy-7-(D-«-aminophenylacet- 125 mg f,-, amido)-cephalosporansäure

Maisstärke 6 mg Dicalciumphosphat 192 mg

Lactose 190 mg

Der aktive Bestandteil wird mit dem Dicalciumphosphat, der Lactose und etwa der Hälfte der Maisstärke vermischt. Das Gemisch wird dann mit einer 15%igen Maisstärkepaste (6 mg) granuliert und grobgesiebt. Es wird bei 45" C getrocknet und wieder durch ein Sieb mit 1,19-mm-Siebötfnungen gesiebt Der Rest der Maisstärke und des Magnesiumstearats werden zugegeben, und das Gemisch wird zu Tabletten von etwa 13 mm Durchmesser mit einem jeweiligen Gewicht von 800 mg gepreßt

500 mg 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienyiacetamido)-decephalosporanat enthaltende parenteral Lösung

Ampulle:

Natrium-3-carbamoyloxymethyl- 500 mg

7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-

decephalosporanat

Ampulle:

Verdünnungsmittel: Steriles Wasser

zur Injektion

2 cm³

Unter Einsatz einer äquivalenten Menge 7-Methoxy-7-(et-carboxyphenylacetamido)-cephaIosporansäure anstelle der 500 mg in den vorangehenden Beispiel aufgeführten Natriumsalzes des 3-Carbamoyloxymethyl-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanats wird gleichfalls eine zur parenteralen Verabreichung geeignete Zubereitung erhalten.

100 mg Natrium-3-cart)amoyloxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat enthaltende ophthalmische Lösung

Natrium-3-carbamoyloxy-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat
Hydroxypropylmethylcellulose Steriles Wasser

zu

100 mg

5 mg 1 ml

100 mg Natrium-S-carbamoyloxymethyl^-methoxy-?- (2-thienylacetamido)-decephalosporanat enthaltende ο tische Lösung

Natrium-3-carbamoyloxy-7-meth- 100 mg

oxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat

Benzalkoniumchlorid 0,1 mg

Steriles Wasser zu 1 ml

100 mg Nairium-a-carbamoyioxymethyl^-methoxy-/-

(2-thienylacetamido)-decephaIosporanat enthaltende topische Salbe

Natrium-3-carbamoyloxy-7-meth- 100 mg

oxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat

Polyäthyienglykol 4000 US.P. 400 mg

Polyäthylengiykol 40OtO US.?. 1,0 g

Claims (1)

1. Patentansprüche:

   t. /-Methoxy-cephaiosporinderivate der allgemeinen Formel

   OCH₃

   R' —NH

   CH₂A