DE1157734B

DE1157734B - Verfahren zur Herstellung von haltbaren, oral zu verabreichenden Poliomyelitisvirus-Praeparaten

Info

Publication number: DE1157734B
Application number: DEB63662A
Authority: DE
Inventors: Dr Walter Hennessen; Dr Rudolf Mauler; Dr Gerhard Ross
Original assignee: Behringwerke AG
Current assignee: Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
Priority date: 1961-08-16
Filing date: 1961-08-16
Publication date: 1963-11-21
Also published as: FR2084M; SE303173B; LU40963A1; GB989077A; FI40401B

Description

Verfahren zur Herstellung von haltbaren, oral zu verabreichenden Poliomyelitisvirus-Präparaten Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von haltbaren, oral zu verabreichenden Poliomyelitisvirus-Präparaten aus abgeschwächten lebenden Poliomyelitisviren.
Man hat schon versucht, Poliomyelitisviren, die oral eingenommen werden sollen, dadurch in eine haltbare Form zu bringen, daß man sie in Kapseln verschloß. Dieses Verfahren ist jedoch sehr umständlich und zeitraubend. Außerdem werden Kapseln von vielen Patienten, insbesondere von Kleinkindern, ungern eingenommen. Es ist auch schon versucht worden, das Poliovirus mit Zucker zu vermengen und in Zuckersirup oder in Form von Bonbons zu verabreichen (vgl. USA.-Patentschrift 2 966 443, Academy of Medical Science of the USSR, Inst. for Poliomyelitis Research, Moskau, 1960, Report Nr. 2 [31. 12. 1959], S. 66, 72, 73). Zuckersirup ist jedoch nur schlecht dosierbar, und außerdem sind Polioviren sowohl in Zuckersirup als auch in Bonbons bei Raumtemperatur nur wenige Tage haltbar. In der obigen, zuletzt genannten Literaturstelle wird darauf hingewiesen, daß das lebende Sabin-Virus bei - 15 bis -20"C gelagert werden müsse und bei 4 bis 8"C nicht länger als 30 Tage haltbar sei. Daraus erhellt, daß den russischen Autoren kein Verfahren zur Herstellung einer längere Zeit haltbaren oralen Poliovaccine zur Verfügung stand, wie es Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist.
Es war auch nicht zweckdienlich, eine für die orale Verabreichung vorgesehene Poliovirussuspension etwa durch Gefriertrocknung in eine haltbare Form überzuführen, da die Infektiosität des Virus als Voraussetzung für die Wirksamkeit des Impfstoffes beeinträchtigt worden wäre. Man mußte sich bisher damit behelfen, die Poliomyelitis-Vaccine als solche einzufrieren, im gefrorenen Zustand zu transportieren und unmittelbar vor der Applikation aufzutauen.
Es wurde nun gefunden, daß man haltbare, oral zu verabreichende Poliomyelitisvirus-Präparate aus abgeschwächten lebenden Poliomyelitisviren in einfacher Weise dadurch herstellen kann, daß man die Poliomyelitisviren auf Zuckerkerne aufbringt und trocknet.
Zur Durchführung dieses Verfahrens verfährt man zweckmäßig in der Weise, daß man eine wäßrige Suspension von lebenden abgeschwächten Poliomyelitisviren, z. B. des TypsI (Sabin) mit einer IDso 107 335 auf Zuckerkerne aufbringt und vorzugsweise unter sterilen Bedingungen trocknen läßt. Zur Beschleunigung des Trocknungsvorganges kann man unter vermindertem Druck arbeiten oder einen sterilen Gasstrom, z. B. Luftstrom, anwenden. Die Trocknungstemperatur liegt zwischen 0 und 37"C, vorzugs- weise zwischen 20 und 37°C. Die Titerbestimmung erfolgt auf bekannte Weise in der Gewebekultur.
Durch das vorliegende Verfahren wird ein oral wirksamer Polio-Impfstoff von guter Stabilität erhalten. Die Haltbarkeit von bekannten oral zu verabreichenden Polioimpfstoffen in nichtgefrorenem Zustand beträgt, wie bereits erwähnt, bei Raumtemperatur z. B. nur wenige Tage, während ein erfindungsgemäß hergestelltes Poliomyelitisvirus-Präparat bei Raumtemperatur 6 Wochen ohne Beeinträchtigung der Wirksamkeit haltbar ist. Diese Eigenschaft ist als großer Vorteil für die breite Anwendbarkeit von sogenannten oralen Poliolebendimpfstoffen anzusehen.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Herstellung von Impfstoffpräparaten auf der Grundlage von Zuckerkernen, auf deren Oberfläche lebende abgeschwächte Polioviren vom TypI, II und III sowie eines Gemisches der drei Typen angetrocknet werden.
Pro Zuckerkern wird die für die Infektion eines Menschen erforderliche Dosis, etwa 200000 bis 500000 TCID50 aufgebracht (TCIDso = tissue culture IDso) Es können freilich zum Lagern auch Zuckerkerne mit einer höheren Dosis von Polioviren, z. B. dem Vielfachen einer für die Infektion eines Menschen erforderlichen Dosis, versehen werden. So lassen sich sogenannte »Multidose«-Präparate zum Lagern herstellen, die z. B. das 50- oder 100fache der obigen Dosis enthalten. Vor der Verabreichung müssen sie aufgelöst werden, da sie für entsprechend viele Impflinge dienen, z. B. für 50 oder 100 Personen.
Beispiel 1 500 Zuckerkerne (Globuli sacchari, Durchmesser 8 mm) werden bei 20° C in einem rotierenden Kolben tropfenweise mit 20 ml einer Mischung, die einen Teil einer wäßrigen Suspension von Poliovirus Typ 1 (Sabin) mit einer IDSo 107,835 und 2 Teile einer Zuckerlösung (2 Teile Zucker auf einen Teil Wasser) enthält, versetzt und mit Hilfe eines sterilen Luftstromes bei 20° C getrocknet.
Die Titer pro Zuckerkern betragen nach der Herstellung 105,667 ID50 = 665 000 nach 6 Wochen Lagerung ... 105'375 ID50 = 237 000 Die auf diese Weise hergestellten, oral anwendbaren Präparate sind 6 Wochen bei Raumtemperatur unter Berücksichtigung der Fehlergrenze des Testes praktisch ohne Wirkungseinbuße haltbar.
Beispiel 2 Auf entsprechende Weise werden erfindungsgemäße Poliomyelitisvirus-Präparate aus Poliovirus Typ II (Sabin) mit einer ID50 107,500 hergestellt.
Die Titer betragen pro Zuckerkern nach der Herstellung 105,286 ID50 = 193 000 nach 6 Wochen Lagerung ... 105-354 ID50 = 225 000 Die Aktivität dieses Präparates ist nach 6 Wochen Lagerung bei 20° C praktisch unverändert.
Beispiel 3 Aus Poliovirus Typ III (Sabin) mit einer ID50 107,714 werden entsprechend dem Verfahren des Beispiels 1 Poliomyelitispräparate hergestellt.
Die Titer pro Zuckerkern betragen nach der Herstellung 105'685 ID50 = 484 000 nach 6 Wochen Lagerung ... 105,417 ID50 = 261 000 Die gemessenen Titer ergeben, daß die Aktivität des gelagerten Präparates innerhalb der Fehlergrenze des Testes erhalten geblieben ist.
Beispiel 4 20 ml Poliovirus Typ I (Sabin) mit einer ID50 107,836, 20 ml Poliovirus Typ II (Sabin) mit einer IDso 107,600 und 20 ml Poliovirus Typ III (Sabin) mit einer IDso 107s444 werden miteinander vermischt und entsprechend dem im Beispiel 1 angegebenen Verfahren zu Polioviruspräparaten verarbeitet.
Die Titer betragen pro Zuckerkern für alle drei Typen zusammen nach der Herstellung 105,806 ID50 = 381 000 nach 6 Wochen Lagerung ... 105,715 ID50 = 373 000 Wie den Daten entnommen werden kann, ist das Präparat, das die Typen I, II und III enthält, 6 Wochen ohne Aktivitätseinbuße lagerfähig.

Claims

PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Herstellung von haltbaren, oral zu verabreichenden Poliomyelitisvirus-Präparaten aus abgeschwächten lebenden Poliomyelitisviren, dadurch gekennzeichnet, daß man die Poliomyelitisviren auf Zuckerkerne aufbringt und trocknet.

In Betracht gezogene Druckschriften: USA.-Patentschrift Nr. 2 966 443.