CZ9901423A3

CZ9901423A3 - Deriváty N-(AR¥L/HETEROARYL) aminokyselin, farmaceutické kompozice s jejich obsahem a způsoby inhibice uvolňování βAMYLOIDOVÉHO PEPTIDU a/nebo jejich syntézy použitím těchto sloučenin

Info

Publication number: CZ9901423A3
Application number: CZ19991423A
Authority: CZ
Inventors: James E. Audia; Beverly K. Folmer; Varghese John; Lee H. Latimer; Jeffrey S. Nissen; Warren J. Porter; Eugene D. Thorsett; Jing Wu
Original assignee: Elan Pharmaceuticals, Inc.; Eli Lilly And Company
Priority date: 1997-11-20
Filing date: 1997-11-20
Publication date: 2001-01-17

Abstract

Sloučeniny inhibují uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézu, a proto jsou použitelné při léčení Alzheimerovy nemoci. Farmaceutické kompozice, obsahující sloučeniny, které inhibují uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézu a léčení Alzheimerovy nemoci jak profylakticky, tak terapeuticky pomocí takových farmaceutických kompozic.

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká sloučenin, které inhibují uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézu a proto jsou použitelné při léčení Alzheimerovy nemoci. Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozic, obsahujících takové sloučeniny stejně tak jako způsobů inhibice uvolňování β-amyloidového peptidu.

Reference

Následující publikace, patenty a patentové přihlášky jsou v této přihlášce citovány pod čísly, uvedenými jako horní indexy:

¹ Glenner a kol. Alzheimer's Disease: Initial Report of the Purification a Characterization of a Novel • · ·

Cerebrovascular Amyloid Protein, Biochem. Biophys, Res. Commun., 120:885- 890 (1984).

² Glenner a kol. Polypeptide Markér for Alzheimer's Disease a its Use for Diagnosis. U. S. Patent No. 4,666,829 issued May 19. 1987.

³ Selkoe, „The Molecular Pathology of Alzheimer's Disease, Neuron. 6:481-498 (1991).

⁴ Goate a kol., Segregation of a Missense Mutation in the Amyloid Precursor Protein Gene with Familial Alzheimer's Disease, Nátuře, 349:704-106 (1990).

⁵ Chartier-Harlan a kol., Early-Onset Alzheimer's Disease Caused by Mutations at Codon 711 of the β-Amyloid Precursor Protein Gene, Nátuře, 353:844-846 (1989).

⁶ Murrell a kol., A Mutation in the Amyloid Precursor Protein Associated with Hereditary Alzheimer's Disease, Science, 254:97-99 (1991).

⁷ Mullan a kol., A Pathogenic Mutation for Probable Alzheimer's Disease in the APP Gene at the N-Terminus of βAmyloid, Nátuře Genet., 1:345-341 (1992).

⁸ Schenk a kol., „Methods a Compositions for the Detection of Soluble β-amyloid Peptide, International Patent ApplicationPublication No. WO 94/10,569. published 11 May

1994 .

³ Selkoe, Amyloid Protein a Alzheimer's Disease, Scientific American, pp. 2-8, November, 1991.

¹⁰ Yates a kol., „N,N-Disubstituted Amino Acid Herbicides, U.S. Patent No. 3,598,859, vydán 10. října 1971.

¹¹ Citron a kol., Mutation of the β-Amyloid Precursor Protein in Familial Alzheimer's Disease Increases β-Protein Production, Nátuře, 360:672-674 (1992j.

¹² Hansen a kol., „Reexamination a Further Development of a Precise a Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth/Cell Kill, J. Immun. Meth., 119:203-210 (1989).

Všechny výše uvedené publikace, patenty a patentové přihlášky jsou zde zahrnuty ve své celistvosti jako reference stejným způsobem, jak kdyby každá jednotlivá publikace, patent nebo patentová přihláška byly specificky a individuálně uvedeny jako reference, zahrnuté ve své celistvosti.

Dosavadní stav techniky

Alzheimerova nemoc (AD) je degenerativní mozková porucha, charakterizovaná klinicky progresivní ztrátou pamětí, poznávacích schopností, myšlení, úsudku a emoční stability, které postupně vedou k hlubokému mentálnímu poškození a nakonec k smrti. Alzheimerova nemoc je velmi obvyklou příčinou progresivního duševního selhání (demence) starých lidí a má se za to, že představuje čtvrtou nejrozšířenější • 0 00 • 0 · · ·· • · 0 • · · 4·· -·· • ·

příčinu smrti ve Spojených státech. Alzheimerova nemoc byla pozorována u různých ras a etnických skupin po celém světě a představuje jeden z nej závažnějších současných a budoucích veřejných zdravotních problémů. Odhaduje se, že tato nemoc v současné době zasahuje dva až tři miliony osob jen v samotných Spojených státech. Alzheimerova nemoc je v současné době neléčitelná. V současné době není znám žádný způsob léčení, který by účinně předcházel Alzheimerově nemoci nebo zamezoval jejím symptomům.

Mozky osob, postižených Alzheimerovou nemocí vykazují charakteristické léze, které jsou nazývány senilní (nebo amyloidní) plaky, amyloidovou angiopatii (amyloid deponovaný v krevních cévách) a neurofibrilární zauzlení. U pacientů s Alzheimerovou nemocí se obecně nachází velký počet těchto lézí, obzvláště amyloidní plaky a neurofibrilární zauzlení, v řadě oblastí lidského mozku, které jsou důležité pro paměťové a poznávací funkce. Menší množství těchto lézí s omezenějším anatomickým rozložením se také nachází v mozku většiny starých lidí, kteří nemají klinickou Alzheimerovu nemoc. Amyloidní plaky a amyloidová angiopatie také charakterizuje mozek osob s onemocněním Trisomy 21 (Downův syndrom) a dědičnou mozkovou hemoragií s amyloidózou holandského typu (HCHWA-D). V současné době definitivní diagnóza Alzheimerovy nemoci obvykle vyžaduje pozorování výše uvedených lézí v mozkové tkáni pacientů, kteří na chorobu zemřeli a nebo, řidčeji, v malých bioptických vzorcích mozkové tkáně odebrané v průběhu invazivní neurochirurgické procedury.

Základní chemická složka amyloidních plaků a vaskulárních amyloidových depozitů (amyloidová angiopatie), φ'φ • φφ • ♦ · ··- ·· ·· φφ • · φ · • · · ·

charakteristických pro Alzheimerovu nemoc a další výše uvedené poruchy, je protein o molekulové hmotnosti přibližně 4,2 kilodaltonů (kD) skládající se z přibližně 39-43 aminokyselin, který je označován jako β-amyloidový peptid (βΑΡ) nebo někdy Αβ, ΑβΡ nebo β/Α4. β-amyloidový peptid byl nejprve vyčištěn a jeho částečná sekvence aminokyselin byla určena Glennerem a kol.¹ Způsob izolace a údaje o sekvenci prvních 28 aminokyselin jsou popsány v U.S. Patentu č. 4,666,829².

Molekulárně biologické a proteinově chemické analýzy ukázaly, že β-amyloidový peptid je malý fragment daleko většího prekurzorového proteinu (APP), který je normálně produkován buňkami v mnoha tkáních různých zvířat, v to počítaje člověka. Znalost struktury genového kódu APP prokázaly, že β-amyloidový peptid vzniká jako peptidový segment, které je odštěpen od APP proteázovým enzymem nebo enzymy. Přesný biochemický mechanismus, kterým je βamyloidový peptidový fragment odštěpen od APP a následně uložen ve formě amyloidních plaků v mozkové tkáni a ve stěnách cerebrálních a meningeálních krevních cév, je v současné době neznámý.

Řada důkazů naznačuje, že cerebrální ukládání βamyloidového peptidu hraje ústřední roli v patogenezi Alzheimerovy nemoci a může předcházet kognitivním symptomům o roky nebo desetiletí, viz například Selkoe³. Nejdůležitějším důkazem je objev, že DNA mutace s chybným smyslem v aminokyselině 717 izoformy APP o 770 aminokyselinách může být nalezena u postižených členů, ale ne u nezasažených členů řady rodin s geneticky určenou (Goate a kol.⁴;

a je označována * · « · • · ·« « · » · · « · · · ·· - ·· » 9 9

R 9 9 · » 9 9 9 ··· 999 (familiární) formou Alzheimerovy nemoci

Chartier-Harlan a kol.⁵; a Murrell a kol.⁶) jako Švédská varianta. Dvojitá mutace, která spočívá v mutaci lysinu⁵⁹⁵-methioninu⁵⁹⁶ na asparagin⁵⁹⁵-leucin⁵⁹⁶ (s odvoláním na izoformu 695) a byla nalezena ve švédské rodině, byla popsána v roce 1992 (Mullan a kol.⁷) . Analýzy genetické vazby prokázaly, že tyto mutace, stejně tak jako jisté další mutace v genu APP, jsou specifickou molekulární příčinou Alzheimerovy nemoci u postižených členů takových rodin. Kromě toho mutace aminokyseliny 693 v izoformě APP o 770 aminokyselinách byly identifikovány jako příčina choroby, spočívající v ukládání β-amyloidového peptidu, HCHWA-D a změna alaninu na glycin v aminokyselině 692 se zdá být příčinou fenotypu, který připomíná Alzheimerovu nemoc u některých pacientů, ale HCHWA-D u jiných. Objev těchto a dalších mutací APP v geneticky způsobených případech Alzheimerovy nemoci dokazují, že změna APP a následné ukládání fragmentu β-amyloidového peptidu může způsobit Alzheimerovu nemoc.

I přes pokrok, kterého bylo dosaženo v pochopení mechanismu, který je základem Alzheimerovy nemoci a dalších nemocí spojených s β-amyloidovým peptidem přetrvává potřeba vyvinout způsoby a kompozice pro léčbu nemoci nebo nemocí. Ideálně by způsoby léčení byly založeny na látkách, které by byly schopny inhibice uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézy.

Předmět vynálezu • · • · • ·· · ·· · * · ·· * « ·« 0 ♦ · · · *

0 0 0« · ·· ··· ··· ·«·« · · ·· 7 _ e. .« ··· ··· ·· ··

Předložený vynález se týká objevu třídy sloučenin, které inhibují uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézy a proto jsou použitelné při prevenci Alzheimerovy nemoci u pacientů, náchylných k Alzheimerově nemoci a/nebo pro léčbu pacientů trpících Alzheimerovou nemocí, aby se zabránilo dalšímu zhoršování jejich stavu. Třída sloučenin, které mají uvedené vlastnosti, je definována obecným vzorcem I, který následuje:

ve kterém:

R¹ je zvolen ze souboru, zahrnujícího (a) fenyl, (b) substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce II:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom • · • · ·* ϋ · · »

I · · · »9 · » halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b’ jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení arylového nebo heteroarylového atomu k atomu uhlíku;

R³ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heteroaryl, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkinyl a heterocyklický systém;

• 0 · 0 0 0

0 00 • · · ·

0 0 ·

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl, (c) alkoxy nebo thioalkoxy, (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR’R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y' , kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, heterocyklický systém a Y' je zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru substituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocyklický systém, souboru, zahrnujícího aryl, heteroaryl a zvolen ze souboru, , -OC(O)R⁵, -SSR⁵, , zahrnujícího alkyl, aryl, heteroaryl a a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(O)OCH₃.

V souladu s tím se jeden ze způsobových předmětů předloženého vynálezu týká způsobu inhibice uvolňování βamyloidového peptidu a/nebo jeho syntézy v buňce, přičemž způsob zahrnuje podávání do takové buňky takového množství sloučeniny nebo směsi sloučenin obecného vzorce I uvedeného výše, které je účinné pro inhibici buněčného uvolňování a/nebo syntéza β-amyloidového peptidu.

Protože in vivo vytváření β-amyloidového peptidu je spojeno s patogenezí Alzheimerovy nemoci⁸'⁹, sloučeniny obecného vzorce I mohou být také použity spolu s farmaceutickou kompozicí pro profylaktickou a/nebo terapeutickou prevenci a/nebo léčbu Alzheimerovy nemoci. V souladu s tím se ve svém dalším předmětu předložený vynález týká profylaktického způsobu prevence vzniku Alzheimerovy nemoci u pacienta s rizikem vzniku Alzheimerovy nemoci, přičemž uvedený způsob zahrnuje podávání uvedenému pacientovi farmaceutické kompozice, obsahující farmaceuticky inertní nosič a účinné množství sloučeniny nebo směsi sloučenin obecného vzorce I uvedeného výše.

Ve svém dalším předmětu se předložený vynález týká terapeutického způsobu léčení pacienta trpícího Alzheimerovou nemocí pro inhibici dalšího zhoršování stavu uvedeného pacienta, přičemž uvedený způsob zahrnuje podávání uvedenému pacientovi farmaceutické kompozice, φφφ

- 11 obsahující farmaceuticky inertní nosič a účinné množství sloučeniny nebo směsi sloučenin obecného vzorce I uvedeného výše.

V obecném vzorci I uvedeném výše, R¹ substituovaný fenyly jsou výhodně 4-substituované, 3,5-disubstituované nebo

3.4- disubstituované fenylové substituenty, kde substituentsy v poloze 3 a/nebo 5 jsou defined pomocí R^b,

R^b' výše uvedeným způsobem a substituent v poloze 4 je definován R^c definovaným výše. Obzvláště výhodné

3.5- disubstituované fenyly zahrnují, uvedeno jako příklad,

3.5- dichlorfenyl, 3,5-difluorfenyl,

3.5- di(trifluormethyl)fenyl, 3,5-dimethoxyfenyl a podobně. Obzvláště výhodné 3,4-disubstituované fenyly zahrnují, uvedeno jako příklad, 3,4-dichlorfenyl, 3,4-difluorfenyl,

3-(trifluormethyl)-4-chlorfenyl, 3-chlor-4-kyanofenyl,

3- chlor-4-jodfenyl, 3,4-methylendioxyfenyl a podobně. Obzvláště výhodné 4-substituované fenyly zahrnují, uvedeno jako příklad, 4-azidofenyl, 4-bromfenyl, 4- chlorfenyl,

4- kyanofenyl, 4-ethylfenyl, 4-fluorfenyl, 4-jodfenyl,

4-(fenylkarbonyl)fenyl, 4-(1-ethoxy)ethylfenyl a podobně.

Další výhodné substituenty R¹ zahrnují, uvedeno jako příklad, 2-naftyl, chinolin-3-yl, 2-methylchinolin-6-yl, benzothiazol-6-yl, benzothiazol-2-yl, 5-indolyl, fenyl, 2naftyl a podobně.

Výhodně R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty

9 0

9 9 ·

9 9 9

999 999 ·

9 9 9 »9 9

999 9 nejsou ortho k místu připojení atomu arylu nebo heteroarylu k atomu uhlíku. Obzvláště výhodné substituenty R² zahrnují, uvedeno jako příklad, methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, -CH2CH2SCH3, fenyl a podobně.

Výhodné substituenty R³ zahrnují alkylová skupiny jako je methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, sek.-butyl a podobně; substituované alkylové skupiny jako je α-hydroxyethyl, -CH2-cyklohexyl, benzyl, phydroxybenzyl, 3-jod-4-hydroxybenzyl, 3,5-dijod-4hydroxybenzyl, -CH2-indol-3-yl, fenyl, - (CH2)4-NH-BOC, (CH₂)₄-NH₂, —CH₂— (l-N-benzyl-imidazol-4-yl) , -CH₂- imidazol4-yl, -CH2CH2SCH3, -(CH₂)₄NHC(O) (CH₂)₄CH₃, - (CH₂) _yC (0) OR⁵, kde y je rovno 1 nebo. 2 a R⁵ představuje atom vodíku, methyl, terč.-butyl, fenyl a podobně.

Výhodné X substituenty zahrnují -C(O)Y skupiny, kde Y je methoxy, ethyoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy, isobutoxy, terč.-butoxy, amino (-NH₂) , N-(iso-butyl)amino, Nmethylamino, N, N-dimethylamino, N-benzylamino a podobně stejně tak jako X představuje -CH2OH a podobně.

Předložený vynález se také týká nových farmaceutických kompozic, obsahující farmaceuticky inertní nosič a sloučeninu obecného vzorce I uvedeného výše .

Obzvláště výhodné sloučeniny pro použití ve způsobech a kompozicích podle předloženého vynálezu zahrnují, uvedeno jako příklad, následující sloučeniny, kde stereochemie R² a R³ skupin je výhodně odvozena od L-aminokyseliny:

Β · Β ·

Β · ♦ ·

Β Β Β · • Β Β ΒΒΒ

Β · • · Β ·

ΒΒ ·· · · Β Β Β · Β

Β Β «Β Β • · * · * ·

Β ΒΒΒ Β

ΒΒ ·Β ΒΒΒ ·

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, methylester

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-iso-butylamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]threonin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, ethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, terč.-butylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, amid

N-(3,4-dichlorfenyl)alanin, N-(l-hydroxy-3-methyl-2-butyl) amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N,N-dimethylamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-methylamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]isoleucin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

ΦΦ ΦΦ « Φ Φ Φ

Φ Φ Φ · « Φ Φ ΦΦΦ

Φ Φ • Φ Φ» • Φ φ φ * φ · φ * » φ φ • ΦΦΦ φ • · « « · · φφφφ Φ •Φ ΦΦ ΦΦΦ Φ

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tryptophan, methylester

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, amethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, P~(terc.butylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-N-BOC-lysin, methylester

N-[N-benzothiazol-6-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]lysin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3, 5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, β(methylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-1-benzylhistidin, methylester

99

9 9 9 • · · · ·«· ··· • · * · 9 • 9 · · 9 9

9 9 9 99 99

9 99 9 9 · 9 9 * * · • · 9 · · 9

99 999 99 9

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, y-(terc.butylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, amethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3,5-dijod)tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3-jod)tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)glycyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν- [N- (3,4-dichlorfenyl) alanyl] -Νε- (hexanoyl) lysin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-β-cyklohexylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N,N-dimethyl)amid • · • · · tt tt · · · tt • tttttt • tt * tttt • tttt · «— tttt tttt tt • · tttt • tt · · • tttt · • watt «tt# • · tt· ·*

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]methionin, methylester

Ν-[N-(3, 5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N,N-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3, 5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]histidin, methylester

Ν-[N-(chinolin-3-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(benzothiazol-2-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-benzyl)-amid

N-IN-(3, 4-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)fenylglycinyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanol • · • φ φ · · φφφ φ φ · φ φ φ φ φ · φ φ φ φ φ φφφ φ φ φ • · φ •φ· φφφ • * φ φ φ φ

Ν-[Ν-(3, 5-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[Ν-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.butylester

Ν-[N-(3,5-di-(trifluormethyl)fenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.-butylester

Ν-[N-(3, 5-dimethoxyfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ještě dále se předložený vynález týká nových sloučenin obecného vzorce III:

ra ve kterém:

• 0 ♦ 0·

0 00 • · · 0 0 · · 0

0 0

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

0

00 0 0·

0 00

0 0

0 0 0

00 00 00 00 0 00 0

0 0 0 0 0

0 0 000000 0 0 0 0

000 000 0» 00

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl, (c) alkoxy nebo thioalkoxy, (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom ·· »· * · · · • · · ·

9 * *·· • 9

9 ·· • · «

·· « ·

4» · · • · • · · • · » ·♦· kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y' , kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a Y' je zvolen ze souboru, zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol, -OC(O)R⁵, -SSR⁵, SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(O)OCH₃ a navíc také s podmínkou, že jsou vyloučeny následující známé sloučeniny:

pokud R¹ představuje fenyl, R² představuje methyl, X představuje -Ο(Ο)ΝΗΦ, potom R³ nepředstavuje methyl, isopropyl, iso-butyl; a pokud R¹ představuje fenyl, R² představuje methyl, X představuje -C(O)NH₂, potom R³ nepředstavuje benzyl.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce III uvedeného výše zahrnují sloučeniny, které jsou uvedeny v Tabulce I, která následuj e:

00 ř 0 0 · ► 0 00 » 00 · » 00 0 ·0

• 0 • 0

0

000 • 0 ··

0

0 0 •

0 • · · 9

4 49 4

4 4 4 4 9

4 4 4 4

44 944 • ft

44 44

4 9 · · ft • ftftftft

9 944 ftftft • ftft ftftft ·♦ ft·

Tabulka I

R'	R¹	R¹	X
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,)j	-c<o)och,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,),	-C(O)NHCH,CH(CH,),
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(OH)CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,)j	-C(O)OCH,CH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,),	-C(O)OC(CH,),
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,),	-C(O)NH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,),	-CHjOH
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,),	-C(O)N(CHj),
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,),	-C(O)NHCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,CH(CH,),	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,-<J>	-C(O)OCH,
\| 3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH(CH,)CH,CH,	-C(O)OCH,
\| 3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,CHjCH,	-C(O)OCH,
4 3,4-dichlorfenyl	-CH,	-<CH,),CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CHj-indol-3-yl	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CHjCOOH	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,C(O)O-/ere-butyl	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-(CH,)_rNH-BOC	-C(O)OCH,
benzothiazol-6-yl	-CH,	-(CH,),CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-(CH,),NH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	p-hydroxybenzyl	-C(O)OCH,
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-CH,	-C(O)OCH,
\| 3,S-dichlorfenyl	-CH,	-CHjCHjCH,	-C(O)OCH,

0· 00

0 0 0

000 000

0 ·0 • 0 0

0 00

0 0

4 0 0

00

000 000

R¹	R*	R⁵	X
3.5-dichlorfcnyl	-CHj	-CH_r0	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,C(O)OCH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,-(l-N-benzyl- imidazol-4-yl)	-C(O)OCH,
3.4-dichlorfenyl	-CHj	-(CH₂)₂C(O)O-ren:-Bu	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂CH(CHJ₂	-C(O)NH₂
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂CH₂COOH	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂-(3,5-dijod- 4-hydroxyfenyl)	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH,-(3-jod- 4-hydroxyfenyl)	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	H	-CH₂CH₂CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-(CH₂)₄NC(O)- (CH₂)₄CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂-<5	-C(O)NH₂
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CHjCHjCHjCH,	-C(O)NHCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂-cyklohexyl	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-(CH₂),CH,	-C(O)NH₂
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-(CH₂),CH,	-C(O)N(CH,)₂
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CHjCHjSCH,	-C(O)OCH,
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂CHjCH₂CH,	-C(O)N(CH,)₂
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-ch₂ch₂ch₂ch,	-C(O)NH,
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-ch₂ch₂ch₂ch,	-C(O)NHCH,
3.4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂-imidazol-4-yl	-C(O)OCH,
chinohn-3-yl	-CH,	-CH₂CH₂CH₂CH,	-C(O)OCH,
bcnzothiazol-2-yl	-CH,	-ch₂ch₂ch₂ch.	-C(O)OCH,
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-CH,	-C(O)OCH,

·· • · 4 4 • 444 4

4 44

4 4 4 4

4 4 4

- 24 -.....

444 444

R*	R^J	R^J	X
3,5-difluorfenyl	-CH,	-CH,CH,CH,CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂CH₂CH₂CH,	-C(O)NH₂
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CH₂CH₂CH₂CH,	-C(O)NHCH₂-</>
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-ψ	-ch₂oh
3,5-dichlorfenyl		-CH,	-C(O)OCH,
3,4-dichlorfenyl	-CH,	-CHjCH₂CH,CH,	-ch₂oh
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-Ψ	-ch₂oh
3,5-dichlorfenyl	-CH,	-Φ	“C(O)OC(CH,)j
3,5-di-(trifluor- methyl)fenyl	-CH,	-Φ	-C(O)OC(CH,),
3,5-dimethoxy- fenyl	-CH,	-ch₂ch₂ch₂ch,	-C(O)OCH,

Detailní popis předloženého vynálezu

Jak bylo uvedeno výše předložený vynález se týká sloučeniny, které inhibují uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézy a v souladu s tím je možné je použít při léčení Alzheimerovy nemoci. Předtím, než bude předložený vynález dále detailněji popsán, budou nejprve definovány následující výrazy.

Definice

Výraz β-amyloidový peptid se vztahuje k peptidu o 39-43 aminokyselinách, který má molekulovou hmotnost přibližně 4,2 kD přičemž tento peptid je v zásadě homologický té formě proteinu, kterou popsal Glenner a kol.¹, v to počítaje mutace a post-translační modifikace normálního βamyloidovového peptidu. Ať se nachází v jakékoli podobě, βamyloidový peptid je fragment většího transmembránového • · · · • · ·♦ • · · · · · · ·

glykoproteinu s přibližně 39-43 aminokyselinami, který je označován jako β-amyloidový prekursorový protein (APP). Jeho sekvence 43-aminokyselin je následující:

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr

Glu Val His His Gin Lys Leu Val Phe Phe

Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala

Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val

Ile Ala Thr (SEQ ID NO: 1) nebo sekvence, která je této sekvenci v zásadě homologická.

Alkyl se vztahuje k monovalentním alkylovým skupinám, které výhodně obsahují od 1 do 10 atomů uhlíku a výhodněji 1 až 6 atomů uhlíku. Jako příklady tohoto výrazu je možno uvést skupiny jako jsou methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, iso-butyl, n-butyl a podobně.

Substituovaný alkyl se vztahuje k alkylové skupině, výhodně obsahující od 1 do 10 atomů uhlíku, která má 1 až 3 substituenty zvolené ze souboru, zahrnujícího alkoxy, substituovanou skupinu alkoxy, acyl, acylamino, acyloxy, amino, aminoacyl, aminoacyloxy, skupinu kyano, halogen,

44

4 4 4 4

4 44

4 4 4 4

4 4 4

4 4 4 • 4 4 · · • · 44 4 4 4 4 • · · • 444 44 94 hydroxyl, karboxyl, karboxylalkyl, cykloalkyl, oxyacylamino, thiol, thioalkoxy, substituovanou skupinu thioalkoxy, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém, skupinu nitro a mono- a di-alkylamino, mono- a di(substituovaný alkyl)amino, mono- a di-cykloalkylamino, mono- a di- arylamino, mono- a di-heteroaryl-amino, mono- a di-heterocyklickou aminovou skupinu a nesymetrické disubstituované aminy, které mají různý počet substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém.

Alkylen se vztahuje k divalentním alkylenovým skupinám, které výhodně obsahují od 1 do 10 atomů uhlíku a výhodněji 1 do 6 atomů uhlíku. Tento výraz je představován skupinami jako je methylen (-CH₂-), ethylen (-CH₂CH₂-) , isomery propylenu (například -CH₂CH₂CH₂- a -CH (CH₃) CH₂-) a podobně.

Alkaryl se vztahuje k -alkylen-arylovým skupinám, které výhodně obsahují od 1 do 10 atomů uhlíku v alkylenové části a od 6 do 10 atomů uhlíku v arylové části . Takové alkarylovy skupiny jsou například benzyl, fenethyl a podobně.

Alkoxy se vztahuje ke skupině alkyl-O-. Výhodné alkoxy skupiny zahrnují, uvedeno jako příklad, methoxy, ethoxy, npropoxy, iso-propoxy, n-butoxy, terč.-butoxy, sek.-butoxy, n-pentoxy, n-hexoxy, 1,2-dimethylbutoxy a podobně.

Substituovanou skupinu alkoxy skupina se vztahuje ke skupině substituovaný alkyl-O-, kde substituovaný alkyl má stejný význam, jaký byl definován výše.

• 9 · 9 9 9 • · 9 9 9

9 999 999

9 9

999 99 99

9

9 9 9

9 99

9 9 9 9

Alkylalkoxy se vztahuje ke skupině -alkylen-O-alkyl, kde alkylen a alkyl mají význam, který byl definován výše. Takové skupiny zahrnují, uvedeno jako příklad, methylenmethoxy (-CH2OCH3) , ethylenmethoxy (-CH2CH2OCH3) , npropylen-iso-propoxy (-CH2CH2CH2OCH (CH₃) 2, methylen-terc.butoxy (-CH2-O-C (CH3) 3) a podobně.

Alkylthioalkoxy se vztahuje ke skupině -alkylen-Salkyl, kde alkylen a alkyl mají význam, který byl definován výše. Takové skupiny zahrnují, uvedeno jako příklad, methylenthiomethoxy (-CH₂SCH₃) , ethylenthiomethoxy (-CH2CH2SCH3) , n-propylen-iso-thiopropoxy (CH₂CH₂CH₂SCH (CH3) 2) , methylenthio-terc. - butoxy (CH₂SC(CH₃)₃) a podobně.

Alkenyl se vztahuje k alkenylovým skupinám, které výhodně obsahují od 2 do 10 atomů uhlíku a výhodněji 2 do 6 atomů uhlíku a mají alespoň 1 a výhodně 1-2 místa alkenylového nenasycení. Výhodné alkenylové skupiny zahrnují ethenyl (CH=CH₂) , n-propenyl (-CH2CH=CH₂), iso-propenyl (-C (CH₃) =CH₂) a podobně.

Substituovaný alkenyl se vztahuje k alkenylové skupině jako bylo definováno výše, která má od 1 do 3 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkoxy, substituovanou skupinu alkoxy, acyl, acylamino, acyloxy, amino, aminoacyl, aminoacyloxy, skupinu kyano, cykloalkyl, oxyacylamino, halogen, hydroxyl, karboxyl, karboxylalkyl, thiol, thioalkoxy, substituovanou skupinu thioalkoxy, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém, skupinu nitro a mono- a di-alkylamino, mono- a di-(substituovaný alkyl)amino, mono·· ·· • · · · • · · · • ··· ··♦ • · ·· ·· • · • ·

9· ·· • · · • · ·· • · · • · · · ·· ·· a di-cykloalkyl, mono- a di-arylamino, mono- a diheteroarylamino, mono- a di-heterocyklickou aminovou skupinu a nesymetrické di-substituované aminy, které mají různé substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém.

Alkinyl se vztahuje k alkinylovým skupinám, které výhodně obsahují od 2 do 10 atomů uhlíku a výhodněji 2 do 6 atomů uhlíku a mají alespoň 1 a výhodně 1-2 místa alkinylového nenasycení. Výhodný alkinylové skupiny zahrnují ethinyl (C=CH), propargyl (-CH₂C=CH) a podobně.

Substituovaný alkinyl se vztahuje k alkinylové skupině jako bylo definováno výše, která má 1 do 3 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkoxy, substituovanou skupinu alkoxy, acyl, acylamino, acyloxy, amino, aminoacyl, aminoacyloxy, skupinu kyano, cykloalkyl, oxyacylamino, halogen, hydroxyl, karboxyl, karboxylalkyl, thiol, thioalkoxy, substituovanou skupinu thioalkoxy, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém, skupinu nitro a mono- a di-alkylamino, mono- a di-(substituovaný alkyl)amino, monoa di-cykloalkylamino, mono- a di-arylamino, mono- a diheteroarylamino, mono- a di-heterocyklická aminová skupina a nesymetric di- substituované aminy, které mají různé substituenty zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém.

Acyl se vztahuje ke skupinám alkyl-C(O)-, substituovaný alkyl-C(O)-, cykloalkyl-C(O)-, aryl-C(O)-, heteroaryl-C(O)a heterocykl-C(O)-, kde alkyl, substituovaný alkyl, • · • · ·* • · · • * ·· • « ·

9 9 • · ·· ·♦ «· ·♦ · 9 9 9 • · 9 9 · · • 9 9 999 999 • · « · • ΦΦ 999 99 Φ* cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém mají význam, který byl definován výše.

Acylamino se vztahuje ke skupině -C(O)NRR, kde každý R je nezávisle atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a kde každý alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém mají význam, který byl definován výše.

Aminoacyl se vztahuje ke skupině -NRC(O)R, kde každý R je nezávisle atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a kde každý alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém mají význam, který byl definován výše.

Acyloxy se vztahuje ke skupinám -OC(0)-alkyl, -0C(0)substituovaný alkyl,-OC(0)-cykloalkyl, -0C(0)-aryl, -C(0)0heteroaryl- a -C(0)O-heterocyklický systém, kde alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém mají význam, který byl definován výše.

Aminoacyloxy se vztahuje ke skupinám -NRC(0)O-alkyl, NRC(0)0- substituovaný alkyl, -NRC(0)O-cykloalkyl,

NRC(0)0-aryl, -NRC(0)0- heteroaryl- a -NRC(0)0heterocyklický systém, kde R je atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a kde každý alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém mají význam, který byl definován výše .

• ·

Oxyacylamino se vztahuje ke skupinám -OC(O)NR-alkyl, OC(O)NR- substituovaný alkyl, -OC(O)NR-aryl, -OC(O)NRheteroaryl- a -OC(O)NR- heterocyklický systém, kde R je atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a kde každý alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém mají význam, který byl definován výše.

Aryl se vztahuje k nenasycené aromatické karbocyklické skupině, která obsahuje od 6 do 14 atomů uhlíku, které mají jednoduchý kruh (například fenyl) nebo více kondenzovaných kruhů (například naftyl nebo anthryl). Výhodné aryly zahrnují fenyl, naftyl a podobně.

Pokud není jinak omezeno definicí arylového substituentu, pak takové arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího hydroxy, acyl, acyloxy, alkyl, substituovaný alkyl, alkoxy, substituovanou skupinu alkoxy, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkinyl, substituovaný alkinyl, amino, aminoacyl, acylamino, aminoacyloxy, oxyacylamino, aryl, aryloxy, karboxyl, karboxylalkyl, skupinu kyano, atom halogenu, skupinu nitro, heteroaryl, trihalogenmethyl, thioalkoxy, substituovanou skupinu thioalkoxy, mono- a dialkylamino, mono- a di-(substituovaný alkyl)amino, mono- a di- cykloalkylamino, mono- a di-arylamino, mono-a diheteroarylamino, mono- a di-heterocyklickou aminovou skupinu a nesymetrické di-substituované aminy, které mají různé substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a • · ·· · • · heterocyklický systém, a podobně. Výhodné substituenty zahrnují alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupinu kyano, skupinu nitro, trihalogenmethyl a thioalkoxy. Pokud jsou takto substituované, takové arylové skupiny jsou někdy označovány jako substituovaný aryl.

Aryloxy se vztahuje ke skupině aryl-Ο-, kde arylová skupina je jako bylo definováno výše, v to počítaje popřípadě substituované arylové skupiny jako bylo také definováno výše.

Karboxyalkyl se vztahuje ke skupinám -C(O)O-alkyl a C(0)O-substituovaný alkyl, kde alkyl a substituovaný alkyl mají význam, který byl definován výše .

Cykloalkyl se vztahuje k cyklickým alkylovým skupinám, obsahujícím od 3 do 20 atomů uhlíku, které mají jednoduchý cyklický kruh nebo více kondenzovaných kruhů (v to počítaje aromatické kruhy kondenzované k cykloalkýlovému kruhu), které mohou být popřípadě substituovány 1 až 3 alkylovými skupinami. Takové cykloalkylová skupiny zahrnují, uvedeno jako příklad, jednoduché kruhové struktury jako je cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklooktyl, 1methylcyklopropyl, 2-methylcyklopentyl, 2-methylcyklooktyl a podobně nebo vícenásobné kruhové struktury jako je dibenzosuberan, adamantanyl a podobně.

Cykloalkenyl se vztahuje k cyklickým alkenylovým skupinám, obsahujícím od 4 do 8 atomů uhlíku, které mají jednoduchý cyklický kruh nebo více kondenzovaných kruhů a alespoň jedno místo vnitřního nenasycení, které mohou být popřípadě substituovány 1 až 3 alkylovými skupinami.

Příklady vhodných cykloalkenylové skupiny zahrnují například cyklobut-2-enyl, cyklopent-3-enyl, cyklookt-3enyl a podobně.

Halo nebo halogen se vztahuje k atomu fluoru, atomu chloru, atomu bromu a atomu jodu a výhodně buď k atomu chloru nebo atomu bromu.

Heteroaryl se vztahuje k monovalentní aromatic skupině od 2 do 10 atomů uhlíku a 1 až 4 heteroatomů, zvolených ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom dusíku a atom síry, uvnitř kruhu.

Pokud není jinak omezeno definicí heteroarylového substituentu, takové heteroarylové skupiny mohou být popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího hydroxy, acyl, acyloxy, alkyl, substituovaný alkyl, alkoxy, substituovanou skupinu alkoxy, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkinyl, substituovaný alkinyl, amino, aminoacyl, acylamino, aminoacyloxy, oxyacylamino, aryl, aryloxy, karboxyl, karboxylalkyl, skupinu kyano, atom halogenu, skupinu nitro, heteroaryl, trihalogenmethyl, thioalkoxy, substituovanou skupinu thioalkoxy, mono- a di- alkylamino, mono- a di(substituovaný alkyl)amino, mono- a di- cykloalkylamino, mono- a di-arylamino, mono-a di-heteroarylamino, mono- a di-heterocyklickou aminovou skupinu a nesymetrické disubstituované aminy, které mají různé substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a podobně. Takové heteroarylové skupiny mohou mít jednoduchý kruh (například pyridyl, furyl a podobně) nebo více • · • · · · • · · • · ·· • · « • · · • r · λ

kondenzovaných kruhů (například indolizinyl nebo benzothienyl). Výhodné heteroaryly zahrnují pyridyl, pyrrolyl a furyl. Pokud jsou takto substituovány, takové heteroarylové skupiny jsou někdy označovány jako substituovaný heteroaryl.

Heterocykl nebo heterocyklický systém se vztahuje k monovalentní nasycené nebo nenasycené skupině, která má jednoduchý kruh nebo více kondenzovaných kruhů, od 1 do 12 atomů uhlíku a od 1 do 4 heteroatomů, zvolených ze souboru, zahrnujícího atom dusíku, atom síry nebo atom kyslíku, uvnitř kruhu.

Pokud není jinak omezeno definicí heterocyklického substituentu, takové heterocyklické skupiny mohou být popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty, zvolenými ze souboru, zahrnujícího hydroxy, acyl, acyloxy, alkyl, substituovaný alkyl, alkoxy, substituovanou skupinu alkoxy, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkinyl, substituovaný alkinyl, amino, aminoacyl, acylamino, aminoacyloxy, oxyacylamino, aryl, aryloxy, karboxyl, karboxylalkyl, skupinu kyano, atom halogenu, skupinu nitro, heteroaryl, trihalogenmethyl, thioalkoxy, substituovanou skupinu thioalkoxy, mono- a di- alkylamino, mono- a di(substituovaný alkyl)amino, mono- a di-arylamino, mono-a di-heteroarylamino, mono- a di-heterocyklickou aminovou skupinu a nesymetrické di-substituované aminy, které mají různé substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a podobně. Takové heterocyklické skupiny mohou mít jednoduchý kruh nebo více kondenzovaných

0 • 0 • · · 0 • 0 00 • 0 0 » · - . 0 0 0 0

- »· ·· kruhů. Výhodné heterocyklické systémy zahrnují morfolino, piperidinyl a podobně.

Příklady heterocyklů a heteroarylů zahrnují, aniž by tím byly omezeny, furan, thiofen, thiazol, oxazol, pyrrol, imidazol, pyrazol, pyridin, pyrazin, pyrimidin, pyridazin, indolizin, isoindol, indol, indazol, purin, chinolizin, isochinolin, chinolin, ftalazin, naftylpyridin, chinoxalin, chinazolin, cinnolin, pteridin, karbazol, karbolin, fenanthridin, akridin, fenanthrolin, isothiazol, fenazin, isoxazol, fenoxazin, fenothiazin, imidazolidin, imidazolin, piperidin, piperazin, indolin, ftalimide, 1,2,3,4tetrahydroisochinolin, 4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]thiofen, thiazol, thiazolidin, thiofen, benzo[b]thiofen, morfolino, piperidinyl, pyrrolidin, tetrahydrofuranyl a podobně.

Thiol se vztahuje ke skupině -SH.

Thioalkoxy se vztahuje ke skupině -S-alkyl.

Substituovaná skupina thioalkoxy se vztahuje ke skupině S-substituovaný alkyl.

Thioaryloxy se vztahuje ke skupině aryl-S-, kde arylová skupina je jako bylo definováno výše, v to počítaje popřípadě substituované arylové skupiny jako bylo také definováno výše.

Thioheteroaryloxy se vztahuje ke skupině heteroaryl-S-, kde heteroarylová skupina je jako bylo definováno výše, v to počítaje popřípadě substituované arylové skupiny jako bylo také definováno výše.

φ φ φ φ

Ve sloučeninách obecného vzorce I, R^b a R^c mohou být kondenzovány a vytvářet heteroarylový nebo heterocyklický kruh Kondenzace tohoto typu vede ke kondenzované bicyklické kruhové struktuře obecného vzorce:

ve kterém R^b je jako bylo definováno výše a A je kondenzovaná heteroarylová nebo heterocyklická skupina v tom smyslu, ve kterém tyto výrazy byly definováno výše, kde dva atomy fenylového kruhu jsou zahrnuty mezi atomy přítomné v heteroarylové nebo heterocyklické skupině. Příklady takových kondenzovaných systémů kruhů zahrnují například indol-5-yl, indol-6-yl, thionaften-5-yl, thionaften-6-yl, isothionaften-5-yl, isothionaften-6-yl, indoxazin-5-yl, indoxazin-6-yl, benzoxazol-5-yl, benzoxazol-6-yl, anthranil-5-yl, anthranil-6-yl, chinolin6- yl, chinolin-7-yl, isochinolin-6-yl, isochinolin-7-yl, cinnolin-6-yl, cinnolin-7-yl, chinazolin-6-yl, chinazolin7- yl, benzofuran-5-yl, benzofuran-6-yl, isobenzofuran-5-yl, isobenzofuran-6-yl a podobně.

Farmaceuticky přijatelné sůl se vztahuje k farmaceuticky přijatelné soli sloučeniny obecného vzorce I, kde soli jsou odvozeny od řady organických a anorganických iontů dobře známých ze stavu techniky a zahrnují, uvedeno pouze jako příklad, ionty sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, amonium, tetraalkylamonium a podobně; a pokud molekula obsahuje bázickou funkční skupinu, soli organických nebo anorganických kyselin, jako je hydrochlorid, hydrobromid, tartarát, mesylát, octan, maleát, oxalát a podobně.

Příprava sloučenin

Sloučeniny obecného vzorce I uvedeného výše je možné snadno připravit několika divergentními syntetickými cestami, přičemž konkrétní cesta je zvolena vzhledem k obtížnosti přípravy sloučeniny, komerční dostupnosti výchozích materiálů a podobně.

V jednom způsobu syntézy se R¹ skupina aminokyseliny NH₂CH (R²)COOH nebo jejího esteru nejprve uvede do molekuly. Potom se konvenční kopulací první sloučeniny R¹NHCH (R²) COOH nebo jejího esteru s aminem NH2CH (R³) C (0) Y získají sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém X představuje C(0) Y.

Podobně konvenční redukce skupiny -C(O)Y vede na skupiny CH₂OH a podobně.

Zavedení R¹ skupiny do aminokyseliny NH₂CH (R²) COOH nebo jejího esteru může být dosaženo použitím řady způsobů. Například konvenční kopulace halogenované octové kyseliny s primárním aminem vytvoří aminokyselinu, jak je znázorněno v reakci (1), která následuje:

ve kterém R¹ a R² mají význam, který byl definován výše a X' představuje výhodně halogenovou skupinu jako je atom chloru nebo atom bromu. Alternativně mohou být použity jiné odštěpitelné skupiny než atom halogenu, jako je triflát, mesylát, tosylát a podobně. Kromě toho mohou být v této reakci použity vhodné estery sloučeniny jL.

Reakce (1) zahrnuje kopulaci vhodného haloderivátu 1 octové kyseliny s primárním arylem/heteroarylaminem j? za podmínek, které vedou k získání aminokyseliny 2· Tato reakce je popsána například v Yates a kol.¹⁰ a postupuje tak, že se zkombinují přibližně stechiometrické ekvivalenty halogenoctové kyselina 1. s primárním arylem/heteroarylaminem 2 ve vhodném inertním ředidle jako je voda, dimethylsulfoxid (DMSO) a podobně. Reakce používá přebytek vhodné báze jako je hydrogenuhličitan sodný, hydroxid sodný a podobně pro vychytávání kyseliny generované reakcí. Reakce je výhodně prováděna při teplotě od přibližně 25 °C do přibližně 100 °C až do ukončení reakce, což obvykle nastává po uplynutí doby od 1 do přibližně 24 hodin. Tato reakce je dále popsána v U.S. Patenta č. 3,598,859, který je zde zahrnut ve své celistvosti jako reference. Po ukončení reakce se N-aryl/N0 0

0· 0

0 0 ·

000 000

0· heteroarylová aminokyselina JL izoluje obvyklými způsoby, v to počítaje precipitaci, chromatografií, filtraci a podobně.

V reakci (1) je každý z reagentů (halogenoctová kyselina 1, primární aryl/heteroarylamin 2 a alkohol 3) dobře známý ze stavu techniky a mnoho z nich je komerčně dostupných.

V alternativním provedení předloženého vynálezu může být skupina R¹ kopulována k alaninesteru (nebo jinému vhodnému esteru aminokyseliny) konvenční N-arylací. Například může být rozpuštěn stechiometrický ekvivalent nebo mírný přebytek esteru aminokyseliny ve vhodném ředidle jako je DMSO a kopulován s haloarylovou sloučeninou, X-R¹, kde X představuje halogenovou skupinu jako je atom fluoru, atom chloru nebo atom bromu a R¹ má význam definovaný výše. Reakce je prováděna v přítomnosti přebytku báze jako je hydroxid sodný pro vychytávání kyseliny generované reakcí. Reakce typicky postupuje při teplotě od 15 °C do přibližně 250 °C a je dokončena za přibliáně 1 až 24 hodin. Po ukončení reakce se N-aryl ester aminokyseliny izoluje obvyklými způsoby, v to počítaje chromatografií, filtraci a podobně.

V ještě dalším alternativním provedení předloženého vynálezu, může být esterifikovaná aminokyselina obecného vzorce I uvedeného výše připravena redukční aminací vhodného esteru 2-oxokarboxylové kyseliny (jako je pyruvátový ester) způsobem znázorněným v reakci (2), která následuje:

9 9

9 9 9

999 999

9 • · · 9 • 9 ·· • · 9 9 9

9 9 9

9

R’-NH₂

Hj

ve kterém R¹ a R² mají význam, který byl definován výše.

V reakci (2) se přibližně stechiometrické ekvivalenty esteru 6 2-oxokarboxylové kyseliny a arylaminu 2 kombinují v inertním ředidle jako je methanol, ethanol a podobně a reakční roztok se zpracovává za podmínek, které vedou k vytvoření iminu (není znázorněno). Vytvořený imin je potom redukován za obvyklých podmínek vhodným redukčním činidlem jako je kyanoborohydrid sodný, H₂/paládium na aktivním uhlí a podobně pro vytvoření N-arylesteru 5 aminokyseliny. V obzvláště výhodném provedení předloženého vynálezu je redukčním činidlem H₂/paládium na aktivním uhlí, které je přidáno do výchozího reakčního prostředí, což umožňuje redukci iminu in šitu v jedné in šitu proceduře a tím se získá N-aryl ester aminokyseliny.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od přibližně 20 °C do přibližně 80 °C při tlaku od 1 do 10 atmosfér až do ukončení reakce, což obvykle nastává po uplynutí doby od 1 do přibližně 24 hodin. Po ukončení reakce se N-arylester 5 aminokyseliny je izoluje obvyklými způsoby, v to počítaje chromatografii, filtraci a podobně.

• · • ·

Následná hydrolýza esteru 5 vede k získáního odpovídající derivátu karboxylové kyseliny.

Další provedení předloženého vynálezu pro přípravu Narylových aminokyselin zahrnuje aromatickou nukleofilní substituci fluorbenzenů aminovou skupinou aminokyseliny.

Derivát _5 karboxylové kyseliny je potom kopulován za obvyklých podmínek dobře známých ze stavu techniky se sloučeninou obecného vzorce NH2CH (R³) C (0) Y, kde R³ a Y mají význam, který byl definován výše. Taková kopulace vede k vytvoření sloučenin obecného vzorce I. Následné modifikace (například redukce) vedou k vytvoření dalších sloučenin obecného vzorce I.

Pokud Y je esterová skupina, konvenční transesterifikační techniky mohou být použity pro přípravu mnoha různých esterových skupin na sloučeninách obecného vzorce I. Četné techniky jsou známy ze stavu techniky pro provádění transesterifikace a každý takový způsob pouze nahrazuje esterovou skupinu odlišnou esterovou skupinou odvozenou od odpovídajícího alkoholu nebo thioalkoholu a v některých případech je použit katalyzátor jako je iso-propoxid titaničitý pro usnadnění dokončení reakce. V jednom způsobu se alkohol nebo thioalkohol nejprve zpracovává hydridem sodným ve vhodném ředidle jako je toluen pro vytvoření odpovídajícího sodného alkoxidu nebo thioalkoxidu, který je potom použit pro provedení transesterifikace. Účinnost této techniky ji tvoří obzvláště užitečnou při použití vysokovroucích a/nebo drahých alkoholů.

• φ • · • ·

• φφφ • · · · · • · · · ·· ·· • ♦ · · · • φ • ΦΦ ··

V jiné transesterifikační technice se ester, který má být transesterifikován, umístí do velkého přebytku alkoholu nebo thioalkoholu, který provádí transesterifikaci. Potom se přidá katalytické množství hydridu sodného a reakce postupuje za obvyklých podmínek rychle a tím se získá požadovaný transesterifikovaný produkt. Protože tento protokol vyžaduje použití velkého přebytku alkoholu nebo thioalkoholu, tato procedura je obzvláště užitečná, pokud alkohol je laciný.

Transesterifikace přináší snadný prostředek, jak získat množství různých esterových substituentů na sloučeninách obecného vzorce I uvedeného výše. Ve všech případech jsou alkoholy a thioalkoholy, použité k provádění transesterifikace, dobře známé ze stavu techniky a velké množství z nich je komerčně dostupných.

Další způsoby přípravy esterů podle předloženého vynálezu zahrnuje, uvedeno jako příklad, nejprve hydrolýzu esteru na volnou kyselinu, následovanou O-alkylací například halogenalkylové skupiny v přítomnosti báze jako je uhličitan draselný.

Další způsoby přípravy sloučenin obecného vzorce I jsou podány v příkladech uvedených níže.

Sloučeniny, kde X představuje -CR⁴R⁴Y' se snadno připraví kopulací například aminoalkoholu H₂NCHR³CR⁴R⁴OH ke karboxylové skupině sloučeniny R¹NHCHR²C(0)OH za standardních kopulačních podmínek dobře známých v peptidové kopulační chemii, které mohou používat dobře známých kopulačních reagentů, jako jsou karbodiimidy, se současným

44'

999 999 • · · · · · • 4 · 9 9

99 999

99 použitím dobře známých aditiv, jako je N-hydroxysukcinimid, 1-hydroxybenzotriazol a podobně. Je-li to nutné, mohou být použity dobře známé blokující skupiny na Y' pro ochranu této skupiny v průběhu kopulace. Takové blokující skupiny jsou obzvláště žádoucí, pokud Y' je aminová skupina.

Reakce se běžně provádí v inertním aprotickém ředidle jako je dimethylformamid, dichlormethan, chloroform, acetonitril, tetrahydrofuran a podobně. Po ukončení reakce se všechny blokující skupiny na Y' selektivně odstraní a tím se získá požadovaná sloučenina.

Pokud. Y’ představuje -OH nebo -SH, post-syntetická přeměna těchto skupin na odpovídající estery (to jest -OC(O)R⁵), disulfidy (to jest -SSR⁵) a -SSC(O)R⁵ skupiny docáhne použitím dobře známých chemických postupů. Například syntéza esteru vyžaduje pouze reakci, s vhodnou kyselinou jako je octová kyselina (R⁷ = methyl), kyselý halid (například kyselý chlorid) nebo anhydrid kyseliny za vhodných esterifikačních podmínek.

Pokud jedna ze skupin R⁴ je atom vodíku, post-syntetická oxidace skupiny -CHR⁴OH vede k vytvoření ketonových derivátů. Alternativně mohou být takové ketony připraveny kopulací vhodného aminoketonu . HCl sůl s koncovou karboxylovou skupinou aminokyseliny.

V těchto způsobech syntézyy mohou výchozí materiály zahrnovat chirální centrum (například alanin) a pokud je použit racemický výchozí materiál, výsledný produkt je směs diastereomerů nebo R,S enantiomerů. Alternativně může být použit chirální isomer výchozího materiálu a jestliže

0·

I 0 0 <

• ·

0 ·· • 0 0

0 00 • · ·

0 0 «

0·

000 • 0 použitý reakční protokol neracemizuje tento výchozí materiál, získá se chirální produkt. Takové reakční protokoly mohou zahrnovat inverzi chirálního centra v průběhu syntézy.

V souladu s tím, pokud není uvedeno jinak, produkty podle předloženého vynálezu jsou směsí diastereomerů (jestliže jsou přítomna dvě nebo více chirálních center) nebo R, S enantiomerů (jestliže pouze jedno chirální centrum je přítomno). Pokud je však požadován chirální produkt, pak chirální produkt výhodně odpovídá L-aminokyselinovému derivátu. Alternativně chirální produkty mohou být získány purifikačními způsoby, které separují diastereomery nebo enantiomery z R, S směsi a tím se získá jeden nebo druhý stereoisomer. Takové techniky jsou dobře známy ze stavu techniky.

Farmaceutické přípravky

Pokud jsou používány farmaceuticky, jsou sloučeniny obecného vzorce I obvykle podávány ve formě farmaceutických kompozic. Tyto sloučeniny mohou být podávány řadou různých cest, které zahrnují cestu orální, rektální, transdermální, subkutánní, intravenózní, intramuskulární a intranasální. Tyto sloučeniny jsou účinné jako injektovatelné i jako orální kompozice. Takové kompozice mohou být připraveny způsobem dobře známým ve farmaceutickém oboru a obsahují alespoň jednu účinnou sloučeninu.

Tento vynález se také týká farmaceutických kompozic, které obsahují jako účinnou složku jednu nebo více sloučenin obecného vzorce I uvedeného výše spolu s farmaceuticky

9

«. 9 9 9 <· 9 · 9

9 99 • · · ·9

9 9 9 ·9

9

99

9

9·

9 •9« 999

9 9 · » · 9 9 «99 999

9

99 přijatelným nosičem. Při vytváření kompozic podle předloženého vynálezu se účinná složka obvykle smísí s excipientem, zředí excipientem nebo se obklopí takovým nosičem, který může být ve formě kapslí, oplatek, sáčků nebo jiných obalů. Pokud excipient slouží jako ředidlo, může být představován pevným, polotuhým nebo kapalným materiálem, který slouží jako vehikulum, nosič nebo médium pro účinnou složku. Kompozice tedy může být ve formě tablet, pilulek, prášků, pastilek, sáčků, oplatek, elixírů, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (ve formě pevné látky nebo v kapalném médiu), mastí, obsahujících například až do 10% hmotnostních účinné sloučeniny, měkkých a tvrdých želatinových kapslí, čípků, sterilních injektovatelných roztoků a sterilně balených prášků.

Při přípravě přípravku může být nutné rozemlít účinnou sloučeninu, aby bylo dosaženo odpovídající velikosti částic před jejich kombinací s dalšími složkami. Pokud je účinná sloučenina v zásadě nerozpustná, je obvykle rozemleta na velikost částic menší než 200 mesh. Jestliže je účinná sloučenina v zásadě rozpustná ve vodě, velikost částic se normálně upraví mletím na takovou velikost, aby bylo dosaženo v zásadě stejnoměrného rozptýlení v přípravku, například na velikost přibližně 40 mesh.

Některé příklady vhodných excipientů zahrnují laktózu, dextrózu, sacharózu, sorbitol, manitol, škroby, arabskou gumu, fosforečnan vápenatý, algináty, tragacant, želatinu, křemičitan vápenatý, mikrokrystalickou celulózu, polyvinylpyrrolidon, celulózu, sterilní vodu, sirup a methylcelulózu. Přípravky mohou dále obsahovat: lubrifikační činidla jako je talek, stearan hořečnatý a tt » · · · ·· · ··· minerální olej; smáčedla; emulsifikační a suspenzní činidla; konzervační činidla jako je methyl- a propylhydroxybenzoát; sladidla a ochucovadla. Kompozice podle předloženého vynálezu mohou být připraveny tak, aby poskytovaly okamžité, trvalé nebo zpožděné uvolňování účinné složky po jejím podání pacientovi, použitím procedur známých ze stavu techniky.

Kompozice jsou výhodně připraveny jako jednotková dávka, přičemž každá dávka obsahuje od přibližně 5 do přibližně 100 mg, obvykleji od přibližně 10 do přibližně 30 mg, účinné složky. Výraz „jednotková dávka znamená fyzicky diskrétní jednotku, vhodnou jako jedna dávka pro člověka nebo další savce, každá jednotka přitom obsahuje předem stanovené množství účinné látky, vypočtené tak, aby vyvolalo požadovaný terapeutický účinek, spolu s vhodným farmaceutickým excipientem. Výhodně se sloučenina obecného vzorce I uvedeného výše používá tak, že nečiní více než 20 hmotnostních procent farmaceutické kompozice, výhodně ne výše než 15 hmotnostních procent, zatímco zbývající část je tvořena farmaceuticky inertním nosičem nebo nosiči.

Účinná sloučenina působí v širokém rozmezí dávek a je obecně podávána ve farmaceuticky účinném množství. Je však zřejmé, že množství sloučeniny, které bude skutečně podáváno, bude určeno lékařem v závislosti na relevantních okolnostech, které zahrnují stav, který má být léčen, zvolený způsob podávání, sloučeninu, která je podávána, věk, váhu a odezvu individuálního pacienta, závažnost pacientových symptomů a podobně.

0 • 0

0 ► ti

0

Pro přípravu pevných kompozic jako jsou tablety se hlavní účinná složka smíchá s farmaceutickým excipientem, aby vytvořila pevnou předběžně zpracovanou kompozici, obsahující homogenní směs sloučenin podle předloženého vynálezu. Pokud se o této předběžně zpracované kompozici mluví jako o homogenní, míní se tím, že účinná složka je dispergována stejnoměrně v celé kompozici, tak aby kompozice mohla být snadno rozdělena do účinných jednotkových dávek, jako jsou tablety, pilulky a kapsle, které obsahují totéž množství účinné látky. Tato pevná předběžně zpracovaná kompozice se potom rozděluje na jednotkové dávky typu, který byl popsán výše a které obsahují například od přibližně 0,1 do přibližně 500 mg účinné složky podle předloženého vynálezu.

Tablety nebo pilulky podle předloženého vynálezu mohou být potahované nebo mít jiné složení, aby se vytvořila dávková forma, která poskytuje výhodu prodlouženého působení. Například mohou tablety nebo pilulky obsahovat vnitřní dávku složky a vnější dávku složky, přičemž vnější dávka vytváří obal vnitřní dávky. Tyto dvě složky dávkové formy mohou být odděleny enterickou vrstvou, která slouží k tomu aby zabránila desintegraci v žaludku a dovolila vnitřní složce projít neporušena do dvanáctém!ku a nebo aby bylo dosaženo jejího zpožděného uvolňování. Pro vytvoření takové enterické vrstvy nebo povlaku lze použít množství materiály obsahující řadu směsí polymerických kyselin s materiálů, jako jsou polymerických kyselin a materiály jako je šelak, ketylalkohol a acetát celulózy.

Kapalné formy, ve kterých mohou být obsaženy nové kompozice podle předloženého vynálezu, mohou být vytvořeny pro « φ • φ φ φ φ • · · · · · • · · · ♦ · φ··· φ φ · φ <> φ · · ΦΦΦ··· φφφφ · · © φ ** *· ...... ” podávání orálním způsobem nebo ve formě injekce a zahrnují vodné roztoky vhodně ochucených sirupů, vodné nebo olejové suspenze a ochucené emulze s jedlými oleji jako je olej bavlníkového semene, sezamový olej, kokosový olej nebo podzemnicový olej, stejně tak jako elixíry a podobná farmaceutická vehikula.

Kompozice pro inhalaci nebo vdechování zahrnují roztoky a suspenze ve farmaceuticky přijatelných vodných nebo organických rozpouštědlech nebo jejich směsi a prášky. Kapalné a pevné kompozice mohou obsahovat vhodné farmaceuticky přijatelné excipienty jaké byly popsány výše. Výhodně jsou takové kompozice podávány orální nebo nasální respirační cestou pro vyvolání lokálního nebo systemického účinku. Kompozice ve výhodně farmaceuticky přijatelných rozpouštědlech mohou být rozprašovány použitím inertních plynů. Atomizované roztoky mohou být přímo vdechovány z rozprašovacího zařízení nebo může být rozprašovací zařízení připevněno k obličejové masce nebo dýchacímu přístroji s přerušovaným přetlakem. Roztoky, suspenze nebo práškové kompozice mohou být podávány, výhodně orálně nebo nasálně, ze zařízení, které podávají přípravek vhodným způsobem.

Následující příklady přípravků ilustrují farmaceutické kompozice podle předloženého vynálezu.

Příklad přípravku 1

Byly připraveny tvrdé želatinové kapsle, obsahující následující složky.

ΒΒ ΒΒ « « Β Β

Β · Β Β

ΒΒΒ Β·Β

Β Β • · v«

Β · · · ·

Β ΒΒΒ • · · · Β _ 48 ** **

Složka

Množství (mg/kapsle)

Účinná složka 30,0 Škrob 305,0 Stearan hořečnatý 5,0

Výše uvedené složky byly smíchány a plněny do tvrdých želatinových kapslí v množství 340 mg.

Příklad přípravku 2

Byly připraveny tablety, používajíce složky uvedené níže:

Množství

Složka (mg/tableta)

Účinná složka 25,0 Celulóza, mikrokrystalická 200, 0 Koloidní oxid křemičitý 10,0 Kyselina stearová 5,0

Složky byly smíchány a lisovány do tvaru tablet, z nichž každá měla hmotnost 240 mg.

• · ♦ · · ·· · • · • · · ·

Příklad přípravku 3

Byl připraven suchý práškový inhalační přípravek s obsahem následujících složek:

Složka

Hmotn. %

Účinná složka Laktóza

Účinná složka je míchána s laktózou a směs je vložena do inhalačního zařízení se suchým práškem.

Příklad přípravku 4

Tablety, každá obsahující 30 mg účinné složky, byly připraveny následujícím způsobem:

Složka

Množství (mg/tablet)

Účinná složka 30,0 mg

Škrob 45,0 mg

Mikrokrystalická celulóza35,0 mg Polyvinylpyrrolidon (jako 10% roztok ve sterilní vodě) 4,0 mg Sodný karboxymethylový škrob4,5 mg Stearan hořečnatý 0,5 mg

Talek 1,0 mg • · · • ·

9 9

Λ.9 • · 9 · • 99 9

999 999

9

9 99

Celkově 120 mg

Účinná složka, škrob a celulóza se prosívají sítem s velikostí ok 20 U.S. mesh a pečlivě se smíchají. Roztok polyvinylpyrrolidonu se smíchá se vzniklým práškem, a prosívá sítem s velikosti ok 16 U.S. mesh. Takto vytvořené granule se suší při teplotě 50 až 60 °C a prosívají sítem s velikostí ok 16 U.S. mesh. Sodný karboxymethylový škrob, stearan hořečnatý a talek, předem prosívané sítem s velikostí ok 30 U.S. mesh, byly potom přidány ke granulím, a po smíchání se látka lisovala na tabletovacím stroji a tím se získaly tablety, které každá vážila 120 mg.

Příklad přípravku 5

Kapsle, každá obsahující 40 mg léku, byly vytvořeny následujícím způsobem:

Složka	Množství (mg/kapsle)
Účinná složka	40,0 mg
Škrob	109,0 mg
Stearan hořečnatý	1,0 mg
Celkově	150,0 mg

Účinná složka, škrob a stearan hořečnatý byly smíchány, prosívány sítem s velikostí ok 20 U.S. mesh a plněny do tvrdých želatinových kapslí v množství 150 mg.

• 0

Příklad přípravku 6

Čípky, každý obsahující 25 mg účinné složky, byly vytvořeny následujícím způsobem:

0 0 0 51 ·*

Složka

Množství

Účinná složka mg

Glyceridy nasycených mastných kyselin do 2,000 mg

Účinná složka byla prosívána sítem s velikostí ok 60 U.S. mesh a suspendována v glyceridech nasycených mastných kyselin , které byly předtím roztaveny použitím minimálního množství tepla. Směs byla potom vlita do čípkové formy o nominální kapacitě 2,0 g a ponechána ochladnout.

Příklad přípravku 7

Suspenze, obsahující 50 mg léku v dávce 5,0 ml, byly vytvořeny následujícím způsobem:

Složka Množství

Účinná složka 50,0 mg

Xanthanová guma 4,0 mg

Sodná karboxymethylcelulóza (11%)

Mikrokrystalická celulóza (89%)50,0 mg

Sacharóza 1,75 g

Benzoát sodný 10,0 mg

Ochucovadlo a barvivo q.v.

Purifi kovaná voda do 5,0 ml • · · · • ·· · ···

Účinná složka, sacharóza a xanthanová guma byly smíchány, prosívány sítem s velikostí ok 10 U.S. mesh a potom smíchány s předem vytvořeným roztokem mikrokrystalické celulózy a sodné karboxymethylcelulózy ve vodě. Benzoát sodný, ochucovadlo a barvivo byly rozpuštěny v malém množství vody a byly přidány za míchání. Potom bylo přidáno dostatečné množství vody pro dosažení požadovaného objemu.

9 9 9 • · 9 9

9 9 9

999 999 ·

99

Příklad přípravku 8

Složka

Účinná složka Škrob

Stearan horečnatý · · · • * · · • · ·· • 9 9 9 9 • · 9 9

Množství (mg/kapsle)

15,0 mg 407,0 mg 3,0 mg

Celkově

425,0 mg

Účinná složka, škrob a stearan horečnatý byly smíchány, prosívány sítem s velikostí ok 20 U.S. mesh a plněny do tvrdých želatinových kapslí v množství 560 mg.

Příklad přípravku 9

Subkutánní přípravek může být připraven následujícím způsobem:

Složka

Množství

Účinná složka Kukuřičný olej

5,0 mg 1 ml

Příklad přípravku 10

Topický přípravek může být připraven následujícím způsobem:

00

0 0 ·

0 0 0

000 000

0

0 0 0

0 0 0 0

00 ·

0 0 0 0

0 0 0

0 0 0 0

Složka

Množství

Účinná složka 1-10 g Emulsifikační vosk 30 g Tekutý parafín 20 g Měkký bílý parafín do 100 g

Měkký bílý parafín byl zahříván až do roztavení. Byl přidán kapalný parafín a emulsifikační vosk a směs byla míchána do rozpuštění. Byla přidána účinná složka a míchání pokračovalo do vytvoření disperze. Směs byla potom chlazena, dokud neztuhla.

Další výhodné přípravky, využívající způsobu podle předloženého vynálezu používají transdermální podávači zařízení („náplasti). Takové transdermální náplasti mohou být používány za účelem dosažení kontinuální nebo diskontinuální infuze sloučenin podle předloženého vynálezu v řízených množstvích. Konstrukce a použití transdermálních náplastí pro podávání farmaceutického činidla je dobře známá ze stavu techniky. Viz například U.S. Patent 5,023,252, vydaný 11. června 1991, který je zde zahrnut jako reference. Takové náplasti mohou být konstruovány pro podávání farmaceutického činidla kontinuálním nebo nárazovým způsobem nebo v případě potřeby.

Často je žádoucí nebo nutné dopravit farmaceutické kompozice do mozku, buď přímo nebo nepřímo. Přímé techniky obvykle zahrnují umístění katetru pro podávání léku do příjemcova ventrikulárního systému, který obejde hematoencefalickou bariéru. Jeden takový implantovatelný *·· ·· podávači systém, použitý pro transport biologických faktorů do specifických anatomických oblastí těla je popsán v U.S. Patentu č. 5,011,472, který je zde zahrnut jako reference.

Nepřímé techniky, kterým je obecně dávána přednost, obvykle zahrnují přípravu kompozice tak, aby poskytovala latenciaci léku přeměnou hydrofilního léku na lipidově rozpustný lék. Latenciace je obvykle dosažena blokováním hydroxylové, karbonylové, sulfátové a primární aminové skupiny, která se ve sloučenině nachází, aby se látka stala více rozpustnou v lipidech a tím i vhodnější k přenosu přes hematoencefalickou bariéru. Alternativně může být dodávání hydrofilního léku zesíleno intra-arteriální infuzí hypertonických roztoků, které přechodně otevřou hematoencefalickou bariéru.

Další vhodné přípravky pro použití podle předloženého vynálezu mohou být nalezeny v Remingron's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985).

Použitelnost

Sloučeniny a farmaceutické kompozice podle předloženého vynálezu jsou použitelné pro inhibici uvolňování βamyloidového peptidu a/nebo jeho syntézy a na základě toho mohou být použity pro léčení Alzheimerovy nemoci u savců, v to počítaje člověka.

Jak již bylo uvedeno výše, sloučeniny které byly popsány výše jsou vhodné pro použití v množství systémů podávání léků, které byly uvedeny výše. Kromě toho, za účelem ·· ·· • 0 · · • 0 • 000 ··· • · • 0· ·· • 0 • · · · • ··

0 · · ·· ··· zvýšení poločasu pobytu podávané sloučeniny v séru mohou být sloučeniny enkapsulovány, vloženy do lumenálních liposomů, připraven jako koloid nebo upraveny další obvyklou technikou, která dosahuje prodloužení poločasu pobytu sloučeniny v séru. Řada způsobů, které jsou použitelné pro přípravu liposomů, jsou popsány například v patentech Szoka a kol., U.S. Patenty č. 4,235,871, 4,501,728 a 4,837,028, které jsou zde všechny zahrnuty jako reference.

Množství sloučeniny, podávané pacientovi, se mění v závislosti na podávané látce, cíli podávání, jako je profylaxe nebo terapie, stavu pacienta, způsobu podávání a podobně. Při terapeutickém podávání jsou kompozice podávány pacientovi, který již trpí Alzheimerovou nemocí, v množství dostatečném k alespoň částečnému zastavení dalšího vzniku symptomů nemoci a jejích komplikací. Množství vhodné pro dosažení tohoto cíle je zde označováno jako „terapeuticky účinná dávka. Množství, které je účinné pro toto použití, závisí na úsudku ošetřujícího lékaře a vychází z faktorů jako je stupeň nebo závažnost Alzheimerovy nemoci u pacienta, věk, váha a celkový stav pacienta a podobně. Výhodně, při použití jako terapeutické látky, jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu podávány v dávkách, které jsou v rozmezí od přibližně 1 do přibližně 500 mg/kg/den.

V případě profylaktického podávání jsou kompozice podávány pacientovi, u kterého je riziko vývinu Alzheimerovy nemoci (určené například genetickým vyhledáváním nebo na základě rodinné anamnézy), v množství dostatečném k inhibici nástupu symptomů nemoci. Množství vhodné pro dosažení • · tttt tttt tt tttt • · tttt • tttt tt tttt • tt tt* • tttt tt • tttt · • tttttt tt · * • · tohoto cíle je zde označováno jako „profylakticky účinná dávka. Množství, které je účinné pro toto použití, závisí na úsudku ošetřujícího lékaře a vychází z faktorů jako je stupeň nebo závažnost Alzheimerovy nemoci u pacienta, věk, váha a celkový stav pacienta a podobně. Výhodně, při použití jako profylaktické látky, jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu podávány v dávkách, které jsou v rozmezí od přibližně 1 do přibližně 500 mg/kg/den.

Jak bylo uvedeno výše, sloučeniny jsou podávány pacientovi ve formě farmaceutických kompozic popsaných výše. Tyto kompozice mohou být sterilizovány obvyklými sterilizačními technikami nebo mohou být sterilně filtrovány. Pokud jsou používány vodné roztoky, pak mohou být baleny pro použití tak jak byly získány nebo mohou být lyofilizovány, přičemž lyofilizovaný přípravek může být kombinován se sterilním vodným nosičem před podáváním. pH přípravku sloučeniny je typicky mezi 3 a 11, výhodněji od 5 do 9 a nejvýhodněji od 7 do 8. Je zřejmé, že použití některých z uvedených excipientů, nosičů nebo stabilizátorů povede k vytvoření farmaceutických solí.

Následující syntetické a biologické příklady jsou podány pro ilustraci předloženého vynálezu a není jejích cílem jakýmkoli způsobem omezit rozsah předmětu předloženého vynálezu. Pokud není uvedeno jinak, všechny teploty jsou udávány ve stupních Celsia.

Příklady provedení vynálezu

V příkladech uvedených níže mají následující zkratky níže uvedené významy. Pokud je použita zkratka, která není definována, má svůj obecně přijímaný význam.

BOC = terč.-butoxykarbonyl bd = široký doublet bs = široký singlet

Cbz = karbobenzyloxy cc = kubický centimetr

CDI = 1, 1'-karbonyldiimidazol d = doublet dd = doublet doubletů

DMF = dimethylformamid

DMSO = dimethylsulfoxid

EDC = 1-(3-dimethyaminopropyl)-ethylkarbodiimid, hydrochlorid

EDTA = ethylen diamin tetraoctová kyselina eq. - ekvivalent ether = diethylether g = gram = litr m = multiplet

M = molární max = maximum mg = miligram min = minuta ml = mililitr mM = milimolární mmol = milimol

N = normální ng = nanogram

9 • 9 ··

9 · · · 99

9 9 · · · · · «L9 ··

9 999 • 999 99 nm = nanometr

OD = optická hustota (optical density) pg = pikogram pM = picomolární

X psi = liber na čtvereční palec q = kvartet quint = kvintet rpm = otáček za minutu rt = teplota okolí s = singlet sept = septet t = triplet

THF = tetrahydrofuran tle = chromatografie na tenké vrstvě gg = mikrogram μΐι = mikrolitr

UV = ultrafialový w/v = hmotnost k objemu (weight to volume)

Kromě toho, výraz Aldrich označuje, že sloučenina nebo reagent, použitá v následujících příkladech, je dodávaná společností Aldrich Chemical Company, Inc., 1001 West Saint Paul Avenue, Milwaukee, WI 53233 USA;

výraz Bachem označuje, že sloučenina nebo reagent je dodávaná společností Bachem Biosciences Inc., 3700 Horizon Drive, Renaissance at Gulph Mills, King of Prussia, PA

19406 USA;

výraz Fluka označuje, že sloučenina nebo reagent je dodávaná společností Fluka Chemical Corp., 980 South 2nd Street, Ronkonkoma, NY 11779 USA;

τ • · · · · · · · « · ·· · · ··«·« · 9 9

9 9 9 9 9 ▼· ·· ··* 999

99

9 9 9

999 999

9 • » ♦ · výraz Lancaster označuje, že dodávaná společností Lancaster 100, Windham, NH 03087 USA; výraz Sigma označuje, že sloučenina nebo reagent je dodávaná společností Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178 USA; a výraz Sennchem označuje, že sloučenina nebo reagent je dodávaná společností Senn Chemicals AG, P.O. Box 267, CH9157 Dielsdorf, Switzerland.

V příkladech uvedených níže jsou všechny teploty jsou uvedeny ve stupních Celsia (pokud není uvedeno jinak) a byly použity následující obecné procedury pro přípravu uvedených sloučenin.

Obecná procedura A

Redukční aminace

Do roztoku arylaminu v ethanolu v hydrogenační baňce byl přidán 1 ekvivalent esteru 2-oxokarboxylové kyseliny (například pyruvátový ester), následovaný 10 % paládium na aktivním uhlí (25 hmotnostních procent, vztaženo k arylaminu). Reakční směs byla hydrogenován při tlaku 20 psi H₂ v Parrově přístroji dokud nebylo uončení reakce indikováno chromatografii na tenké vrstvě (30 minut až 16 hodin). Reakční směs byla potom filtrována přes vrstvu Celitu 545 (dodáván společností Aldrich Chemical Company, lne.) a zbavena rozpouštědla v rotační odparce. Surové residuum produktu bylo potom dále čištěn pomocí chromatografie.

sloučenina nebo reagent je Synthesis, lne., P.O. Box

Obecná procedura B » · · · » · · · ·· · ···

N-Heteroarylace alaninu

Roztok 1,1 ekvivalentů L-alaninu a 2 ekvivalentů NaOH v DMSO byl míchán při teplotě okolí po dobu 1 hodiny, potom byl přidán 1 ekvivalent 2- chlorbenzothiazolu. Směs byla zahřívána na teplotu 100 °C po dobu 4 hodin, potom ochlazena na teplotu okolí a vlita na led. pH výsledného vodného roztoku bylo upraveno na přibližně 2 a precipitovaná pevná látka byla odstraněna filtrací. Tato pevná látka byla potom rozpuštěna v IN NaOH a výsledný roztok byl filtrován přes vrstvu Celitu 545. pH filtrátu bylo upraveno na přibližně 2 a bílý precipitát byl odstraněn filtrací a promýván vodou a tím se získal produkt.

Obecná procedura C

Hydrolýza esteru na volnou kyselinu

Hydrolýza esteru na volnou kyselinu byla prováděna obvyklými způsoby. Nížejsou uvedeny dva příklady takových konvenčních deesterifikačních způsobů.

Ke sloučenině, tvořené esterem karboxylové kyseliny (připravené například redukční aminací pomocí obecné procedury A, kterou se získal N-arylester aminokyseliny) v 1:1 směsi CH3OH/H2O bylo přidáno 2-5 ekvivalentů K2CO3. Směs byla zahřívána na teplotu 50 °C po dobu 0,5 to 1,5 hodin dokud chromatografie na tenké vrstvě neukázala ukončení reakce. Reakční směs byla ochlazena na teplotu okolí a methanol byl odstraněn v rotační odparce. Zbývající vodný roztok byl upraven na pH-2 a byl přidán ethylacetát pro extrakci produktu. Organická fáze byla potom promývána nasyceným vodným NaCl a sušena nad MgSO₄. Roztok byl zbaven rozpouštědla v rotační odparce a tím se získal produkt.

Ester aminokyseliny byl rozpuštěn ve směsi dioxan/voda (4:1) , do které byl přidán LiOH ( ~ 2 ekviv.), který byl rozpuštěn ve vodě tak, aby veškeré rozpouštědlo po přidání bylo přibližně 2: 1 dioxan:voda. Reakční směs byla míchána do ukončení reakce a dioxan byl odstraněn za sníženého tlaku. Residuum bylo zředěno EtOAc, vrstvy byly odděleny a vodná vrstva okyselena na pH 2. Vodná vrstva byla zpětně extrahována EtOAc, sloučené organické látky byly sušeny nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku po filtraci. Residuum bylo čištěno obvyklými způsoby (například rekrystalizace).

Následující postup je příkladem naúposledy uvedeného způsobu. 9,27 g methylesteru 3-NO₂ fenylacetylalaninu (0,0348 molů) bylo rozpuštěno v 60 ml dioxanu a 15 ml H₂O a byl přidán LiOH (3,06 g, 0,0731 molů), který byl rozpuštěn v 15 ml H₂O. Po míchání po dobu 4 hodin byl dioxan odstraněn za sníženého tlaku a residuum bylo zředěno EtOAc, vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla okyselena na pH 2. Vodná vrstva byla zpětně extrahována EtOAc (4 X 100 ml), sloučené organické látky byly sušeny nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku po filtraci. Residuum bylo rekrystalizováno ze směsi EtOAc/isooktan a to dalo 7,5 g (85 %).

ΟιιΗ₁₂Ν₂Ο₅ dává C, 52,38 H, 4,80 N, 11,11.

Analýzou nalezeno C, 52,54 H, 4,85 N, 11,08.

[a] ₂₃ - - 29, 9 @ 559 nm.

Obecná procedura D

První EDC kopulační procedura

···· · · « · · · • · · ·« 9 · · ··<··· ···· 9 9 9 9 — ·· ·9 999 ··· ·· *·

Do 1:1 směsi požadované kyseliny a amino esteru/amidu v CH2CI2 při teplotě 0 °C bylo přidáno 1,5 ekvivalentů triethylaminu, následovaných 2,0 ekvivalenty monohydrátu hydroxybenzotriazolu, potom 1,25 ekvivalentů ethyl-3-(3dimethylamino)-propyl karbodiimidu.HCl (EDC). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě okolí, potom přenesen do separační nálevky a promývána vodou, nasyceným vodným NaHCO₃, IN HCl a nasyceným vodným NaCl a byla potom sušena nad MgSO₄. Roztok byl zbaven rozpouštědla v rotační odparce a tím se získal surový produkt.

Obecná procedura E

Druhá EDC kopulační procedura

Karboxylová kyselina byla rozpuštěna v methylenchloridu. Ester aminokyseliny/amidu (1 ekviv.), N-methylmorfolin (5 ekviv.) a monohydrát hydroxybenzotriazolu (1,2 ekviv.) byly přidány v tomto pořadí. Na baňku s kulatým dnem byla použita chladicí lázeň, dokud teplota roztoku nedosáhla 0 °C. V tmto okamžiku bylo přidáno 1,2 ekvivalentů hydrochloridu 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (EDC). Roztok byl ponechán za míchání přes noc a vrátil se na na teplotu okolí pod tlakovou dusíkovou atmosférou. Reakční směs byla nakonec zpracována promýváním organické fáze nasyceným vodným uhličitanem sodným, O,1M citrónovou kyselinou a solankou před sušením nad síran sodný. Rozpouštědla byla potom odstraněna a tím se získal surový produkt. Čisté produkty byly získány mžikovou chromatografii ve vhodném rozpouštědle.

Obecná procedura F

Proceduře pro odstranění BOC a terč.-butylesteru ·· *· ► · · · k · · · • · · · · · • · • · · · • ·

- 64 BOC- nebo terč.-butylesterová sloučenina byla přidána do 1:1 směsi CH2CI2 a trifluoroctové kyseliny a byla míchána, dokud chromatografie na tenké vrstvě neukázala úplnou přeměnu, typicky po uplynutí 2 hodin. Roztok byl potom stripován do sucha a residuum bylo vyjmuto v ethylacetátu. V případě BOC chráněných sloučenin byl roztok promýván zředěným HCI. Vodná fáze byla upravena na bázické pH, potom extrahována ethylacetátem. V případě terč.-butylesterových sloučenin byl roztok promýván nasyceným vodným NaHCO₃. Vodná fáze byla potom upravena na pH 2 a extrahována ethylacetátem. Organická fáze v obou případech byla potom promývána nasyceným vodným NaCl a sušena nad MgSO₄. Roztok byl zbaven rozpouštědla v rotační odparce a tím se získal produkt.

Obecná procedura G

N-Alkylace

Do roztoku 3-aminochinolinu v CH2CI2 bylo přidán l,lo ekvivalentů triethylaminu, následovaných CH2CI2 roztokem pnitrobenzenesulfonyl (nosyl) chloridu. Reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 5 hodin, potom byl dinosylovaný aminochinolin izolován filtrací a byl promýván ethylacetátem. Tento materiál byl potom přidán do 1: 1 směsi dioxanu a IN NaOH a tento roztok byl zahříván na teplotu 60 °C po dobu 4 hodin, po jejímž uplynutí se všechna pevná látka rozpustila. Reakční směs byla ochlazena na teplotu okolí, potom bylo pH upraveno na přibližně 4. Precipitovaný mono-nosylovaný aminochinolin byl odstraněn filtrací a promýván H2O. Roztok této sloučeniny v THF byl potom přidán do suspenze NaH v THF o teplotě -78 °C, potom byl přidán ethyl-2- brompropionát. Reakční směs byla ohřátá na teplotu zpětného toku, potom zahřívána na teplotu • 9 • · · · • · · 4 · 4 4

4 4 4

4 4 ·4· · · 444444

4 4 4

444 4 4 4 ·· · · zpětného toku po dobu 4 dní. Surová reakční směs byla zbavena rozpouštědla v rotační odparce a alkylovaný, nosylovaný aminochinolin byl získán chromatografii. Tento produkt byl potom rozpuštěn v DMF a byly přidány 3 ekvivalenty K2CO3, následované 1,2 ekvivalenty thiofenolu. Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Reakce byl potom zastavena vodou a etherová a organická fáze byly promývány nasyceným vodným NaHC03 a nasyceným vodným NaCl, potom sušeny nad MgSO₄. Roztok byl zbaven rozpouštědla v rotační odparce a tím se získal surový produkt, který byl potom čištěn chromatografii.

Obecná procedura H

Výměna ester/amid

Do roztoku 3 ekvivalentů požadovaného aminu v 1,2dichlorethanu byly přidány 5,2 ekvivalenty trimethylaluminia, přičemž uvedená adice byla prováděna pod povrchem roztoku stříkačkou. Po míchání po dobu 30 minut při teplotě okolí byl přidán roztok požadovaného esteru, rozpuštěného v 1,2- dichlorethanu. Reakční směs byla zahříván na teplotu zpětného toku, dokud chromatografie na tenké vrstvě neukázala úplnou přeměnu, typicky po uplynutí 3 hodin. Reakční směs byla potom ochlazena na teplotu 0 °C a zastavena 10 % HCl (Poznámka: kyselina by měla být přidávána pomalu, nebo v průběhu přidávání dochází k pěnění). U těch produktů, které nejsou rozpustné ve vodné kyselině byla směs přenesena do separační nálevky a vrstvy byly odděleny. Vodná fáze byla promývána ethylacetátem a organické fáze byly promývány nasyceným vodným NaCl, sušeny nad MgSC>4 a koncentrovány za sníženého tlaku což zanechalo surový produkt.

U produktů rozpustných ve vodných kyselinách byl po zastavení reakce objem reakční směsi redukován za sníženého tlaku na přibližně 1/3 původního objemu. Do výsledného roztoku byl přidán 20 % vodný vínan draselno-sodný (Rochellova sůl) a ethylacetát. pH roztoku bylo upraveno na přibližně 13 a hlinité soli byly rozpuštěny ve vodném roztoku. Organická fáze byla oddělena a vodná fáze byla extrahována ethylacetátem. Sloučené organické roztoky byly promývány nasyceným vodným NaCl, sušeny nad MgSO₄ a koncentrovány za sníženého tlaku což zanechalo surový produkt.

Obecná procedura I

Redukce esteru na alkohol

Do 0 °C roztok výchozího esteru v bezvodém THF byl přidán 1,0 ekvivalent LiBH₄ v THF. Reakční směs byla míchána při teplotě okolí přes noc a reakce byla potom zastavena vodou. THF byl odstraněn v rotační odparce a byl přidán ethylacetát a fázes byly odděleny. Organická fáze byla promývána nasyceným vodným NaCl, sušena nad MgSO₄ a koncentrována za sníženého tlaku, což zanechalo produkt.

Obecná'procedura J

Přemístění triflátu

Do 0 °C roztoku isobutyl-R-( + )-laktátu v CH2CI2 byly přidány 1,1 ekvivalenty anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové. Po míchání při teplotě okolí po dobu 20 minut, byly přidány 1,1 ekvivalenty 2,6-lutidinu a míchání pokračovalo po dobu 10 minut. Tento roztok byl potom přenesen do baňky, obsahující 1 ekvivalent arylaminu a 1 ekvivalent diisopropylethylaminu v CH₂C1₂ nebo CH3NO₂ • · *·· ··· ·· ·♦ při teplotě 0 °C. Reakční směs byla udržována přes noc při teplotě okolí, potom zbavena rozpouštědla v rotační odparce. Residuum bylo rozpuštěno v ethylacetátu, promýváno 5 % citrónovou kyselinou, následovanou nasyceným vodným

NaCl a potom roztok byl zbaven rozpouštědla v rotační odparce a tím se získal surový produkt, který byl potom čištěn chromatografii.

Obecná procedura K

Vytváření methylesteru z aminokyseliny

Aminokyselina (aminokyselina nebo hydrochlorid aminokyseliny) byla suspendována v methanolu a ochlazena na 0 °C. Plynný HCI byl probubláván tímto roztokem po dobu 5 minut. Reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí a potom míchána po dobu 4 hodin. Rozpouštědla potom byla odstraněna a takto byla získána požadovaná aminokyselina ve formě hydrochloridu methylesteru. Tento produkt se obvykle používá bez dalšího čištění.

Příklad A

Syntéza N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu

Použitím způsobu, popsaného v U.S. Patentu č. 3,598,859, jehož předmět je zde zahrnut jako reference ve své celistvosti, byl připraven N-(3,4- dichlorfenyl)-D,Lalanin. Konkrétně byla do roztoku 3,4- dichloranilinu (1 ekvivalent) (Aldrich) v isopropanolu (asi 500 ml na jeden mol 3,4-dichloranilinu) přidána voda (asi 0,06 ml na jeden ml isopropanolu) a kyselina 2-chlorpropionová (2 ekvivalenty) (Aldrich). Tato směs byla ohřátá na teplotu 40 °C a byl přidán hydrogenuhličitan sodný (0,25 ekvivalenty) v postupných dávkách před zahříváním na teplotu zpětného toku po dobu 4-5 dní. Po ochlazení byla reakční směs vlita do vody a nezreagovaný 3,4-dichloranilin byl odstraněn filtrací. Filtrát byl okyselen na pH 3-4 koncentrovánou kyselinou chlorovodíkovou a výsledný precipitát byl filtrován, promýván a sušen a tím se získala sloučenina z názvu, teplota tání = 148-149 °C.

Alternativně se postupem podle obecné procedury A uvedené výše a použitím 3,4- dichloranilinu (Aldrich) a ethylpyruvátu (Aldrich) připraví ethylester N-(3,4dichlorfenyl) -D,L-alaninu ve formě oleje. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě na silikagelu (Rf = 0,4 v 25 % EtOAc/hexany) a čištění bylo prováděno preparativní deskovou chromatografií (silikagel s použitím směsi 25 % EtOAc/hexany jako vymývacího rozpouštědla) .

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,2 (d, 1H); 6,7 (d, 1H,) ; 6,4 (dd,

1H); 4,30 (bs, 1H) ; 4,2 (q, 2H) ; 4,1 (q, 1H) ; 1,5 (d, 3H) ;

1,3 (t, 3H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 175; 146,7; 133; 131; 121; 114,9;

112,6; 72,0; 52,4; 28,3; 19,5.

C11H13CI2NO2 (MW = 262,14); hmotová spektroskopie (MH⁺ 263). Hydrolýza tohoto esteru například pomocí obecné procedury C dává sloučeninu z názvu.

Příklad B

Syntéza N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alaninu

Použitím procedury popsané v U.S. Patentu č. 3,598,859 (nebo Příkladu A uvedeného výše) byl připraven N-(3,5dichlorfenyl) -D, L-alanin použitím 3,5- dichloranilinu (Aldrich) a 2-chlorpropionové kyseliny (Aldrich).

• · 99 · · ·· ··

00 0 00 00 0 9 9 0

00 0 · 0000 0 00 ·· » · · 0·90·0

0·09 · · 99

- ·· ·· 909 090 09 «0

Příklad C

Syntéza Ν-(3,5-difluorfenyl)-D,L-alanin

Použitím procedury popsané v U.S. Patentu č. 3,598,859 (nebo Příkladu A uvedeného výše) byl připraven N-(3,5difluorfenyl)-D,L-alanin použitím 3,5- difluoranilinu (Aldrich) a 2-chlorpropionové kyseliny (Aldrich).

Příklad D

Syntéza L-Valin N,N-dimethylamidu

Do míchaného roztoku 2,51 mg (10 mmolů) Cbz-L-Valin (Bachem) v 20 ml DMF bylo přidáno 1,46 g (9 mmolů) CDI a směs byla míchána po dobu 50 minut. Do této směsi bylo přidáno 6 ml (12 mmolů) dimethylaminu (Aldrich) v 5 ml THF a reakční směs byla míchána po dobu 18 hodin. Směs byla vyjmuta v 100 ml ethylacetátu, promývána 10 % HC1 (3 x 40 ml), 10 ml solanky a 20 % uhličitanem draselným (2 x 50 ml) a sušena nad MgSOí. Směs byla filtrována a koncentrována a tím se získal Cbz-L-valin N,N-dimethylamid, který byl hydrogenován za standardních podmínek s 10 % Pd/C jako katalyzátoru pro odstranění Cbz skupiny a získání sloučeniny z názvu ve formě oleje.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 3,47 (d, J = 5,4 Hz, 1H) , 3,03 (s, 3H) , 2,96 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 1,60 (s, 2H), 0,95 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 175, 1, 56,2, 37,0, 35,7, 32,0, 19, 9,

16,8.

Příklad E

Syntéza L-Valin N-methylamidu φφ φ φ φφφ • φφφ φφ φφ φ φ φ φφφ* • φ φ φ φ φ

Sloučenina z názvu byla připravena postupem, který byl popsán v Příkladu D uvedeném výše a použitím methylaminu namísto dimethylaminu. Sloučenina z názvu byla olej.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : Ó = 7,27 (bs, IH) , 3,20 (d, J = 3,8 Hz,

IH), 2,79 (d, J = 5,0 Hz, 3H), 2,27 (m, IH), 1,40 (bs, 2H), 0,96 (d, J =; 7,1 Hz, 3H), 0,79 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

^X3C-nmr (CDC1₃) : δ = 175,0, 60, 1, 30,7, 25, 6, 19,7, 15, 9.

Příklad F

Syntéza BOC-norleucin amidu

Do míchané směsi 3,47 g (15 mmolů) BOC-norleucinu (Bachem), 3,44 g (22,5 mmolů) monohydrátu 1-hydroxybenzotriazolu a 50 ml dichlormethanu při bylo teplotě 0 °C přidáno 3,45 g (1,2 mmolů) EDC. Výsledná směs byla míchána při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a potom byl směsí probubláván plynný amoniak po dobu 10 minut. Chladicí lázeň byla ponechána zahřát se na teplotu okolí a směs byla míchána po dobu 18 hodin. Směs byla odpařena do sucha, rozetřena s 20 % Na₂CO₃. Výsledná pevná látka byla shromážděna filtrací a promývána vodou a tím se získalo 2,69 g (11,7 mmol, 78 %) sloučeniny z názvu.

Příklad G

Syntéza N-[3,5-di(trifluormethyl)fenyl]-L-alaninu

Krok A: Postupem podle obecné procedury J a použitím 3,5di(trifluormethyl)anilinu (Aldrich) a isobutyl-R-(+)laktátu (Aldrich) byl iso-butylester N- [3,5di(trifluormethyl)fenyl]-L-alaninu připraven ve formě oleje. Reakce byla monitorována silikagelovou chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,38 v 10% směsi » · · · ··· ··· ·· ·· • · · · · • · ·· • · Β · ·

EtOAc/hexany). Čištění bylo prováděno preparativní deskovou chromatografii na tenké vrstvě použitím 10 % směsi

EtOAc/hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ = 7,13 (s, IH) , 6,91 (S, 2H) , 4,97 (d, J = 8,24 Hz, IH) , 4,18 (m, IH) , 3,93 (d, J = 6,59 Hz, 2H) , 1,93 (sept, J = 6,71 Hz, IH) , 1,49 (d, J = 7,02 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,59 Hz, 6H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174,4, 147,9, 133, 6, 133,2, 132,7,

132,3, 129,4, 125,8, 122,2, 118,6, 112,81, 112,76, 111,42, 111,37, 111,32, 111,27, 111,22, 72,2, 52,0, 32,1, 28,24,

28,17, 23,2, 19,5, 19,3, 19,2, 18,9, 14,6.

Ci₅H₁₇F₆NO₂ (MW = 357,30);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 358.

Krok Β: N-[3,5-di(trifluormethyl)fenyl]-L-alanin ve formě iso-butylesteru byl potom hydrolyzován postupem podle obecné procedury C použitím hydroxidu lithného v THF.

Příklad H

Syntéza N-(3,5-dimethoxyfenyl)-D,L-alaninu

Sloučenina z názvu byla připravena použitím procedury popsané v U.S. Patentu č. 3,598,859 (nebo v Příkladu A uvedeném výše) použitím 3,5-dimethoxyanilinu (Aldrich) a 2chlorpropionové kyseliny (Aldrich).

Příklad I

Syntéza N-(3,4-dichlorfenyl)glycinu

Použitím procedury popsané v U.S. Patentu č. 3,598,859 byl připraven N- (3,4- dichlorfenyl)glycin použitím 3,400

0 00

0 0 • ·· • 0 0 ·

0 0

0 0 0

0 0 0 0

0 000 000 dichloranilinu (Aldrich) a kyseliny 2-chloroctové (Aldrich).

Příklad J

Syntéza N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-fenylglycinu

3,5-dichloranilin (1 ekviv.) (Aldrich) a methyl-abromfenylacetát (1 ekviv.) (Aldrich) byly zahříván na teplotu zpětného toku v ethanolu s N-methylmorfolinem (Aldrich) po dobu 3 dní. Po standardním zpracování bylo residuum krystalizováno ze směsi ethylacetát/hexane/ether/voda a takto byl získán methyl N(3,5-dichlorfenyl)-D,L-fenylglycin. Methylester byl potom hydrolyzován použitím směsi 1M NaOH/voda v methanolu a takto byla získána sloučenina z názvu.

Příklad 1

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání 1 N HCl) a použitím L- valinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 7,20 (m, IH) , 6, 92-7,03 (m, IH) , 6,69 (m, IH), 6,44 (m, IH), 4,50 (m, IH), 4,19 (m, IH) , 3,78 (m, IH), 3,71 (s, 1,5H), 3,65 (s, 1,5H), 2,12 (m, IH), 1,50 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,80-0,92 (m, 4,5H), 0,71 (d, J = 6,8 Hz, 1,5H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173,4, 173,0, 172,2, 171,8, 146, 0,

145,8, 132,9, 132,8, 130,7, 130,6, 121,7, 115,1, 114,8, ·· ·· · · 99 99 ···· 9 9 99 9 9 9 9

9 99 9 · · · ♦ · • · · ·· 9 9 9 999 999

9 9 9 9 9 9 9

- 73 - .......... ·· ··

113,5, 113, 1, 56, 9, 56, 6, 55, 1, 54,8, 52,2, 52, 1, 31, 1,

31,0, 30,9, 19,6, 19,4, 17,7, 17,4.

Příklad 2

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinu ve formě N-iso-butylamidu

Postupem podle obecné procedury H uvedené výše a použitím methylesteru N-[N-(3,4- dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinu (z Příkladu 1 uvedeného výše) a isobutylaminu (Aldrich) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf =0,3 v 10 % směsi methanol/dichlormethan).

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,2 (d, 1H) , 7,0 (m, 1H) , 6,7 (m, 1H) ,

6,4 (m, 1H), 4,6 (m, 1H) , 3,8 (m, 3H) , 1,9 (m, 2H) , 1,4 (d, 3H), 1,1 (m, 6H), 0,9 (m, 6H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173,8, 173,4, 172,9, 146, 6, 133, 6,

133,4, 131,3, 122,5, 122,4, 115,8, 113,8, 56,9, 55,7, 38,2, 25, 6, 20, 16, 12, 1.

Ci₈H₂₇N₃O₂C1₂ (MW = 388,3);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 389.

Příklad 3

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-threoninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCl) a použitím N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a L-threoninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu ve • Β ·· * • * · · · ·

Β β ΒΒ · « · · · Β ·

ΒΒΒΒ Β

ΒΒ · t ·Β Β • ΒΒ ··

ΒΒ ΒΒΒ· • Β · Β β • Β ΒΒΒ ΒΒΒ

Β Β Β

ΒΒΒ te · · formě oleje. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografii použitím 50 % směsi ethylacetát/hexan.

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 1,06 (d, J = 6,4) a 1,17 (d, J = 6,3; \

3H celkově v poměru 2:1), 1,53 (d, J = 7, 3H) , 2,31 (d, J =

5,6) a 2,58 (d, J = 4,7; IH celkově v poměru 2:1), 3,68 (s) a 3,75 (s) (3H celkově v poměru 1:2), 3,8-3,9 (m, IH), 4,15-4,25 (m, IH), 4,3-4,45 (m, IH), 4,5-4,6 (m, IH), 6,46,5 (m, IH), 6,65-6,7 (m, IH), 7,4-7,55 (m, 2H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 19, 96, 20,23, 20,39, 20, 49, 53,23,

53,28, 55,35, 55,59, 57,5, 68,13, 68,21, 113,72, 114,20,

115,42, 115,60, 122,26, 122,35, 131,22, 131,33, 133,41,

133,55, 146, 47, 146, 6, 171, 63, 171, 80, 174,69, 174,86.

C₁₄Hi₈N₂O₄C1₂ (MW = 349,22);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 349.

Příklad 4

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinu ve formě ethylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a L-valinu ve formě hydrochloridu ethylesteru byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografii použitím 35 % směsi ethylacetát/hexan.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 0,7-1,0 (překrývající se skupina d, J = 7, 6H), 1,19 a 1,27 (pár t, J = 7, 3H), 1,5 (d, J = 7, 3H), 2,05-2,2 (m, IH), 3,7-3,9 (m, IH), 4,0-4,3 (m, 3H), 4,5-4,6 (m, IH), 6,4-6,5 (m, IH) , 6,5-6,6 (m, IH) , 6,9-7,1 (Μ, IH) , 7,2-7,3 (Μ, IH).

• · • 0 • 0 00 0 0 0000 · 0 00 0 0 0 000000 _ _ ···· * · · ·

- 75 - ·* ·· ··· ··· *· ·· ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 14,65, 14,77, 17,96, 18,25, 19, 56,

20,06, 20,31, 31,77, 31,81, 55,50, 55,73, 57,22, 57,46,

61,88, 61,94, 113,76, 114,01, 115,48, 115,76, 122,40,

122,46, 131,30, 131,33, 133,48, 133,61, 146,41, 146,60, v

171,86, 172,36, 173,54, 173,84.

Ci₆H₂₂N₂O₃Cl2 (MW = 361,27);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 361.

Příklad 5

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinu ve formě terč.-butylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a L-valinu ve formě hydrochloridu terc.butylesteru (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografií použitím 25 % směsi ethylacetát/hexan.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 0,7-1,0 (překrývající se skupina d, J =

7, 6H), 1,36 (s) a 1,45 (s) (9H), 1,5-1,54 (2 d, J = 7,

3H), 2,0-2,2 (m, 1H) , 3,7-3,85 (m, 1H) , 4,1-4,2 (m, 1H) ,

4,3-4,5 (m, 1H), 6,4-6,5 (m, 1H), 6,7 (s, 1H), 6,9-7,1 (m,

1H) , 7,15-7,3 (m, 1H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 17,84, 18,25, 19,50, 20,06, 20,29,

28,42, 28,62, 31,96, 32,16, 55,45, 55,65, 57,53, 57,92,

82,72, 113,75, 114,00, 115,43, 115,65, 122,26, 122,32,

131,29, 131,50, 146,46, 146,65, 170,88, 171,48, 173,39,

173,65.

Ci₈H₂₆N₂O₃C1₂ (MW = 389, 33) ;

hmotová spektroskopie (MH⁺) 389.

9 9 9

- Ί6

Příklad 6

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinamidu Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a L-valinu ve formě hydrochloridu amidu (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky, která má teplotu tání 156-158 °C. Reakční produkt byl čištěn by silikagelovou chromatografii použitím 90:10:1 směsi CH₂C1₂ : MeOH: NH4OH.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (DMSO-d₆) : 8 = 0,6-0,9 (m, 6H) , 1,2-1,4 (překrývající se d, 3H), 1,8-2,0 (m, 1H), 3,9-4,2 (m, 2H), 6,3-6,4 (m, 1H) , 6,35-6,4 (m, 1H) , 6,7-6,8 (m, 1H) , 7,07,15 (m, 1H), 7,2-7,3 (m, 1H) , 7,4 (bs, 1H) , 7,8 (d, J = 10) a 8,0 (d, J = 10) (celkově 1H v poměru 3:2).

¹³C-nmr (DMSO-d₆) : δ= 17,8, 18,2, 19,00, 19,25, 19, 6, 19, 7, 31,16, 31,20, 51,9, 52,7, 57,11, 57,4, 113,46, 113,58,

113,67, 113,85, 117,20, 117,45, 130,64, 130,76, 131,53,

131,56, 148,25, 148,45, 173,06, 173,11, 173,38, 173,51. Ci₄H₁₉N₃O2Cl2 (MW = 331);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 332.

Příklad 7

Syntéza N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alaninu ve formě N-(lhydroxy-3-methyl-2-butyl) amidu

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a valinolu (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakční produkt byl

« • · · • · 99

9 9

9 99

9 9 · · * ♦ · 9 čištěn silikagelovou chromatografii použitím 45:55 směsi EtOAc/hexany a 90:10:1 CH₂Cl₂:MeOH:NH₄OH.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (DMSO-d₆) : δ = 0,86 (d, J = 7, 3H) , 0,91 (d, J = 7, 3H) , 1,50 (d, J = 7, 3H), 1,8-2,0 (m, IH) , 2,6 (bs, IH) ,

3,5-3,8 (m, 4H), 4,1 (bs, IH), 6,45 (dd, J = 2,8, 8,7, IH), 6,7 (d, J = 2,8, IH), 6,8 (bd, IH), 7,2 (d, J = 5, IH). ¹³C-nmr (DMSO-d₆) : δ = 19,3, 20. 1, 20,2, 29,5, 55,8, 57,4,

64,1, 113,7, 115,7, 122,4, 131,4, 133,5, 146,6, 174,6. C₁₄H₂oN₂0₂Cl2 (MW = 319,23);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 319.

Příklad 8

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-valinu ve formě Ν,Ν-dimethyl amidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím N,Ndimethylamidu valinu (z Příkladu D uvedeného výše) a N(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 145- 160 °C).

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ = 7,38 (m, IH) , 7,14 (m, IH) , 6,66 (m,

IH), 6,41 (m, IH), 4,78 (m, IH), 3,88 (m, IH), 3,10 a 3,09 (s,s, 3H), 2,94 a 2,90 (s,s, 3H) , 1,96 (m, IH) , 1,43 (m 3H), 0,88a 0,67 (m, 6H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 6, 173,1, 171,4, 171, 3, 146, 3, 146,0, 132,7, 132.6, 130,52, 130,46, 120,9, 120,8, 114,5,

113,4, 113,0, 54,25, 54,15, 53,4, 53,2, 37,4, 35,6, 31,4,

31,3, 19, 50, 19, 46, 19,2, 17,5, 17,0.

Ci₆H23N₃O₂C1₂ (MW = 360,29);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 360.

Φ · · » φ φ φ φ • ΦΦΦ • φ φ « « φ φ φ φ • φ φ ·

Příklad 9

Syntéza Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-Lvalinu ve formě N-methylamidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-methylamidu L-valinu (z Příkladu E uvedeného výše) a N-(3,4dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 145-160 °C).

NMR data byla následující:

^-nmr (DMSO-d₆) δ = 8,10 a 7,90 (m, 2H), 7,23 (m, IH) ,

6,76 a 6,69 (m, IH) , 6,57 (m, IH) , 6,34 (m, IH) , 3,90-4,14 (m, 2H), 2,57 a 2,56 (s, s, 3H) , 1,88 (m, IH) , 1,27 (m,

3H), 0,65-0,86 (m, 6H).

¹³C-nmr (DMSO-d₆) : δ = 173, 1, 171,2, 171, 1, 148,1, 147,9,

131,19, 131,16, 130,4, 130,2, 116,8, 113,5, 113,2, 113,1,

57.5, 57,3, 52,2, 51,5, 30,9, 30,8, 25,4, 19,2, 19,1, 18,8,

18.6, 18,2, 17,9.

C15H21N3O2CI2 (MW = 346,26);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 346.

Příklad 10

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-alaninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HC1) a použitím L- alaninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké • · ··

·· · • · vrstvě (Rf = 0,24 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografií použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

¹H-nmr	(CDC1₃) : δ = 7,15 (m,	2H), 6,63 (dd,	IH), 6	/40 (m,
IH), 4,	50 (m, 2H) , 3,75 (m,	IH), 3,67 (s, 1,	,5H), 3	,61 (s,
1,5H) ,	1,45 (d, 3H), 1,31 (m,	3H) .
¹³C-nmr	(CDC1₃) : δ = 173,5,	173,2, 173,0,	172,8,	146,3,
146,2,	132,6, 130, 6, 130,5,	121,2, 114,9,	114,7,	113,3,
113,0,	54,6, 54,5, 52,43, 52	,39, 47,9, 47,8,	19,3,	19. 1,

17,9, 17,8.

Ci₃Hi6N₂O₃Cl2 (MW = 319,19);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 319.

Příklad 11

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-L-leucinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím L-leucinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 120-132 °C). Reakce byla monitorována chrojnatograf ií na tenké vrstvě (Rf = 0,49 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografií použitím 1:1 směsi EtOAc .-hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 7,18 (d, IH) , 6,95 (bd, IH) , 6,69 (d, IH) , 6,43 (dd, IH) , 4,58 (m, IH) , 4,32 (d, IH) , 3,75 (m, IH), 3,61 (s, 3H), 1,54 (m, 6H), 0,90 (m, 6H).

···· ·· ·· 4 · · 4 • 4 ·· 4 4 4444 • ·· · · · · 4 944 444

4 4 4 44 44 ·· 99 444 444 44 44 ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174. 1, 173, 4, 146, 8, 133,3, 131,2,

122.2, 115,7, 114,1, 55,5, 52,9, 51,1, 41,6, 25,5, 23,4,

22.2, 20,0.

Ci₆H₂₂N₂O₃Cl2 (MW = 361,27);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 361,1.

Příklad 12

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-L-fenylalaninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím L-fenylalaninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 122-124,5 °C) . Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,47 v 1:1 směsi

EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující: ^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,21 (m,	4H), 7,05	(m,	2H) , 6,91(d,
IH) , 6,64 (d, IH), 6,38 (dd,	IH), 4,84	(q,	IH) , 4,05 (s,
IH), 3,71 (m, 4H), 3,20 (m,	IH), 3,04	(m,	IH), 1,37 (d,
3H) .
¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173,6,	172,1, 146	,5,	136,2, 133,4,
131,2, 129,7, 129,1, 127,7,	122,3, 115,6,	113,9, 55,4,
53, 3, 53,0, 38,1, 19, 9.

C₁₉H₂₀N₂O₃Cl₂ (MW = 395,29); hmotová spektroskopie (MH⁺) 395.

Příklad 13 • 9

Syntéza Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl-D,L-alanyl]-L-isoleucinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D {bez promývání IN HCI) a použitím L-isoleucinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 95,5-101,5 °C) . Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,62 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ =	7,21	(d,	1H),	6,98	(m,	1H) ,	6,70	(m,
1H), 6,45 (m, 1H) ,	4,55	(m,	1H) ,	4,11	(m,	1H) ,	3,79	(m,
1H), 3,72 (s, 1,5H),	3, 67	(s,	1,5H)	, 1,87	(m,	1H) ,	1,51	(d,

3H) , 1, 10 (m, SH) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 8, 173, 4, 172,9, 172,4, 146, 6,

146.4, 133,6, 133,4, 131,30, 131,28, 122,5, T254, 115,8,

115.4, 114,1, 113,8, 56,9, 56,8, 55,7, 55,5, 52,8, 52,7,

38,3, 38,2, 25,6, 25,5, 20,2, 20,0, 16,05, 16,03, 12,1, 12,0.

Ci₆H₂2N2O₃C1₂ (MW = 361,27).

Hmotová spektroskopie (M⁺) 361,1.

Příklad 14

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-(S)-2aminopentanové kyseliny ve formě methylesteru Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím L- norvalinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sennchem) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A • · • · · · • · · · · • · ♦ · ·· ·· · uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné lá.tky (teplota tání = 150-153 °C) . Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,57 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) :	δ = 7,21	(d, IH),	6,95	(d,	IH) ,	6,70	(d,
IH), 6,47	(dd,	IH), 4,57	(m, IH),	4,13	(bd,	IH) ,	3, 78	(m,
IH) , 3,67	(s,	3H), 1,81	(m, IH) ,	1, 62	(m,	IH),	1,51	(d,

3H), 1,30 (m, 2H), 0,9 (t, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 8, 173, 0, 146, 6, 133,4, 131, 3,

122,4, 115,7, 114,1, 55,6, 52,9, 52,4, 34,8, 20,2, 19,2,

14,2.

C~~HaeN₂O₃Cl₂ (MW = 347,24);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 347.

Příklad 15

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-(S)-2aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HC1) a použitím L norleucinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4- dichlorfenyl)alaninu (z Příkladu Ά uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 163-165 °C) . Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,55 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

φ φ • φ φ φ φ φ φφφ φ

φ φ φφ • φ φ φ φ · ·· • · φ φ ^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,18 (d, ΙΗ, J = 8,7 Hz), 6,99 (bd, IH, J = 8,2 Hz), 6,69 (d, IH, J = 2,7 Hz), 6,45 (dd, IH, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz), 4,53 (m, IH) , 4,23 (d, IH, J = 4,2 Hz), 3,77 (m, IH) , 3,66 (s, 3H) , 1,83 (m, IH) , 1,62 (m, IH), 1,48 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,27 (m, 4H), 0,85 (t, 3H). ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 9, 173, 1, 146,7, 133,4, 131,2,

122,3, 115,7, 114,1, 55,5, 52,9, 52,6, 32,4, 28,0, 22,8,

20,1, 14,4.

Ci₆H22N₂O₃Cl2 (MW = 361,27);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 361.

Příklad 16

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-tryptophanu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím L- tryptophanu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 54-66 °C). Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,43 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografií použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující: ^lH-nmr (CDC1₃) : δ = 8,15	(s, 0,5H),	7,98 (bs, 0,5H),	7,51
(d,	0,5H), 7,12 (m, 6H),	6, 60	(d,	0,5H), 6,53	(dd,	IH) ,
6,24	(m, IH), 4,88 (m, IH)	, 3,90	(d,	0,5H), 3,70	(m, 4,	5H) ,
3,32	(m, IH), 3,22 (m, IH)	, 1,40	(m,	3H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 81 173, 61 172,81 172,41 146, 41

146.31 136,61 133,31 133,21 131,21 131,1, 128,21 127,71

123.31 122,81 122,051 122,021 120,31 120,21 119,0, 118,71 • · · · ·· · ·· <· • · • ·· • ·

115,51 115,41 113,81 113,31 112,11 111,91 110,21 109,91

55,31 55,11 53,5, 53,1, 53,Ot 52,91 27,91 27,71 19,81 19,6. C21H21N3O3CI2 (MW = 434,33);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 434.

Příklad 17

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-aspartové kyseliny ve formě β-(terč.-butylesteru) a-methylesteru Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCl) a použitím L-aspartové kyseliny ve formě hydrochloridu β(terc.-butylesteru) α-methylesteru (Bachem) a N- (3,4— dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,56 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

¹H-i	nmr	(CDCI3)	: δ =	7,52	(d,	0,5H),	, 7,	42 (d,	0,5H)	, 7,13
(m,	IH)	, 6, 66	(d, 0,	5H),	6, 60	(d, 0,	5H) ,	6,40	(m, IH)	, 4,16
(m,	IH)	, 4,40	(d, 0,	5H) ,	4,31	(d, 0,	5H) ,	3,75	(m, IH)	, 3,69
(s,	1,5	Η) , 3,6	2 (s,	1,5H)	, 2,	88 (m,	IH) ,	2,62	(m, IH)	, 1,47
(m,	3H)	, 1,32	(s, 4,	5H) ,	1,21	(s, 4,	5H) .
¹³C-	•nmr	(CDCI3)	1 : δ =	= 174	,0,	173,7,	171	,7, 171,4, 1	70,30,
170	,27,	146,7,	146,	6, 133,4,	133,3	, 13	1,2, :	131,1,	122,0,
115	,6,	115,1,	114,0,	113,	4, 8.	2,4, 55	,4,	55,2,	53,24,	53,19,
49,	0, 4	8,7, 37	,9, 37	,8, 2	8,4,	28,2,	19, 9	, 19,8	_e

C₁₈H₂₄N₂O₅Cl2 (MW = 419,31); hmotová spektroskopie (MH⁺) 418.

Příklad 18 ·· • · · • · ·

999 • · · · · • · · ·

Syntéza Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-aspartové kyseliny ve formě a-methylesteru

Terč.-butylesterová skupina Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D, Lalanyl]-L- aspartové kyseliny ve formě P~(terc.butylesteru) α-methylesteru (z Příkladu 17 uvedeného výše) byla odstraněna postupem podle obecné procedury F a tím se získala sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 53,5-56 °C). Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,54 v 1:1 směsi EtOAc:hexany).

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,59 (d, IH) , 7,18 (m, IH) , 6,79 (d,

0,5 Η) , 6,69 (d, 0,5H), 6,58 (m, 0,5H), 6,47 (m, 0,5H), 4.W (m, IH), 3,82 (m, IH), 3,73 (s, 1,5H), 3,68 (s, 1,5H), 3,04 (m, IH), 2,79 (m, 0,5H), 2,73 (m, 0,5H), 1,49 (m, 3H). ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 175,7, 175, 6, 175, 14, 175, 07, 171, 1, 171,0, 145,0, 144,6, 133,6, 133,5, 131,44, 131,40, 124,2,

123,4, 55,9, 55,4, 53,8, 53,7, 49,05, 49,00, 36,1, 19,2,

19,1.

C₁₄H₁₆N₂O₅C1₂ (MW = 363,20);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 363.

Příklad 19

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-Νε-BOC-L-lysinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,4dichlorfenyl) -D, L- alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a Νε-BOC-L-lysinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Bachem) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje.

·· * · 4 4 ·

4 444 444 • 4 «

444 «4 ··

Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,23 v 45 % směsi ethylacetát/hexany).

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,22 (m, 4H) , 6,63 (q, 1H) , 6,43 (m,

1H), 4,72 (t, 0,5H), 4,63 (t, 0,5H), 4,53 (m, 1H), 4,42 (q, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,68 (s, 1,5H), 3,62 (d, 1,5H), 3,00 (m, 2H), 1,90-1,05 (m, 4H), 1,48 (d, 3H), 1,42 (s, 9H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174,2, 173, 9, 173,1, 172,8, 156,7,

156,6, 146,8, 146,7, 133,4, 133,3, 131,2, 131,1, 121,9,

121,8, 115,5, 115,1, 114,0, 113,8, 79,7, 79,6, 60,9, 55,2,

55,1, 53,0, 52,9, 52,4, 52,1, 40,6, 40,5, 32,3, 32,2, 30,1, 28,9, 22,8, 21,6, 19, 9, 14,7.

Příklad 20

Syntéza N-[N-benzothiazol-6-yl)-D,L-alanyl]—(S)—2— aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru

Krok A: Syntéza N-(N-benzothiazol-6-yl)-D,L-alaninu

Roztok 1 gram 6-aminobenzothiazolu (Lancaster) v 60 ml dichlormethanu byl zpracováván 0,63 gramy pyridinu a potom 2,1 gramy anhydridu kyseliny trifluoroctové při teplotě okolí. Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin a během této doby byla původně horká reakční směs ochlazena na teplotu okolí. Směs byla promývána 5 % vodným roztokem kyseliny citrónové, sušena nad MgSO₄ a rozpouštědla byla odstraněna a tím se získal kvantitativní výtěžek 6aminobenzotriazol trifluoracetamidu ve formě krémově zabarvené pevné látky, která byla používána okamžité v následující reakci.

09 90 ·· 9009

9 9 0 9

9 909 009 • 9 9 »99 9» 00 ·0 • · · · · • 0 ·· • 0 0 0 9 • · 9 ·

99 «

Dávka 300 mg 6-aminobenzotriazol trifluoracetamidu byla rozpuštěna v 35 ml THF a přidána do 1,2 ekvivalentu KH při teplotě okolí. Roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 5 hodin, ochlazen a byl přidán krystal 18-koruna-6 (Aldrich) spolu s 331 mg ethyl-2-brompropionátu (Aldrich) a výsledná směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu 36 hodin. Reakční směs byla ochlazena, rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku a residuum bylo rozpuštěno v ethylacetátu. Organické složky byly promývány vodou. pH vodné vrstvy bylo upraveno na pH 5 a vrstva byla extrahována ethylacetátem. Organické složky byly sloučeny, sušeny nad MgSOí a rozpouštědla byla odstraněna. Surový materiál byl čištěn preparativní chromatografií na tenké vrstvě použitím směsi dichlormethan/methanol (94:4) a tím se získal N-(benzothiazol-6-yl)-D,L-alanin ve formě ethylesteru (Rf = 0,5). Tento materiál byl zpracováván methanolem a 5 ekvivalenty uhličitanu draselného při teplotě zpětného toku a potom byl ochlazen a rozpouštědla byla odstraněna. Residuum bylo vyjmuto ve vodě a ethylacetátu. Vodná vrstva byla upravena na pH 2 a extrahována ethylacetátem. Ethylacetátové extrazty byly sušenz a rozpouštědla byla odstraněna a tím se získal N(benzothiazol-6-yl)-D,L-alanin.

Krok B: Syntéza N-[N-benzothiazol-6-yl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru

Postupem podle obecné reakčního rozpouštědla, promývání IN HC1) a procedury D (použitím DMF jako ethylacetátu pro extrakci a bez použitím L-norleucinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(benzothiazol-6-yl)

Φ· ·· 9 9

9 9 9 99 99 • · ·· · · • · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 ·· ··* *·· • ·· · • 4 • 9 99 9

D,L-alaninu (z Kroku A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,28 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 8,74 (s, IH) , 7,91 (s, IH, J = 8,8 Hz), 7,15 (m, IH), 7,06 (d, 0,5H, J = 2,3 Hz), 7,00 (d, 0,5H, J = 2,3 Hz), 6,87 (m, IH), 4,58 (m, IH), 4,20 (bs, 2H), 3,87 (m, IH), 3,70 (s, 1,5H), 3,59 (s, 1,5H), 1,30 (m, 10H) ,

0,84 (t, 1,5H, J = 6,9 Hz), 0,60 (t, 1,5H, J = 6,9H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174,3, 174,0, 173,4, 173,0, 151,1,

151,0, 147,2, 145,5, 145,3, 136,2, 136,1, 124,4, 124,2,

116, 1, 115, 9, 104,6, 103, 9, 56,2, 55, 69, 53,0, 52,9, 52,5,

52,2, 32,42, 32,36, 28,0, 27,7, 22,8, 22,6, 20,3, 20,1,

14,4, 14,2.

Ci₇H₂₃N₃O₃S₂ (MW = 349, 46);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 350.

Příklad 21

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-lysinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury F a použitím N-[N-(3,4dichlorfenyl)-D,L- alanyl]-Νε-BOC-L-lysinu ve formě methylesteru (z Příkladu 19 uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografii použitím 89:10:1 směsi CH₂C1₂: MeOH: NH4OH.

NMR data byla následující:

• ·· · * · · · · · · · tt tttttt · · · ·· ·

4 4 · tt · · · ······ • · · · · · · · ¹H-nmr (CDC1₃, 2 diastereomery): δ = 7,21 (d, 1H), 7,09

(bd,	1H)	, 6, 68	(q,	1H), 6,46	(m, 1H) , 4,56 (m, 1H) ,	4,22
(bs,	1H)	, 3,78	(m,	1H), 3,70	(s, 1,5H), 3,67 (s, 1,	r 5H) ,
2,66	(t,	1H) ,	2, 54	(t, 1H),	1,80 (m, 1H), 1,62 (m,	1H) ,
1,51	(d,	1,5H),	1,50	(d, 1,5H)	, 1,32 (m, 2H), 1,11 (m,	1H) .

¹³C-nmr (CDC1₃ - 2 diastereomery): δ = 174,8, 174,3, 173,1,

172,8, 171,8, 146,9, 146,7, 133,3, 133,1, 131,2, 131,1,

121,7, 121,5, 115,2, 115, 1, 113, 9, 113,8, 60, 9, 55, 0, 54,9,

53,1, 53,0, 52,5, 52,3, 32,1, 32,09, 32,05, 31,8, 23,1,

22,9, 21,6, 19,9, 19,8 a 14,7.

Ci₆H₂₃N₃O₃Cl₂ (MW = 376,28).

Příklad 22

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-tyrosinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím L-tyrosinu ve formě methylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D, Lalaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu jako směs stereoisomerů okolo alaninu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,29 v 10 % směsi MeOH/CH2Cl₂ a čištění bylo prováděno mžikovou chromatografií (10 % směs methanol/methylenchlorid).

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) :	δ = 7,22 -	7,50 (m, 7H), 6,36	(dd, 0,5H),
6,28 (dd, 0,5H)	, 4,83 (m	1H), 4,04 (dd, 1H)	, 3,73 (s,
1,5H), 3,70 (m,	1H), 3,68	(s, 1,5H), 3,14 (dd,	0,5H), 2,97
(m, 1,5H), 1,43	(d, 1,5H),	1,35 (d, 1,5H).
¹³C-nmr (CDC1₃) :	δ = 174,20,	174,08, 172,75, 172,	26, 156,10,

155,99, 146,45, 146,32, 133,50, 133,38, 131,39, 131,26,

130,81, 130,67, 127,43, 127,00, 122,41, 122,22, 116,15,

116,12, 115,68, 115,39, 113,94, 113,46, 55,47, 55,08,

53,54, 53,18, 37,62, 37,44, 19,91, 19,87.

C19H20N2O4CI2 (MW = 411,28).

Příklad 23

Syntéza N-[N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-alaninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D,L- alaninu (z Příkladu B uvedeného výše) a L-alaninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografií použitím 50 % ethylacetát/hexan.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDCI3) : δ = 1,3-1,55 (tři soubory doubletů při

1,34, 1,39 a 1,48, všechny J = 7, celkově 6H), 3,7-3,9 (m se singlety na 3,67 a 3,72, 4H), 4,3-4,4 (m, IH), 4,5-4,65 (m, IH), 6,4-6,6 (m, 2H), 6,73 (s, IH), 6,95-7,1 (m, IH). ¹³C-nmr (CDCI3) : δ = 15,52, 15,59, 16,75, 16,87, 45,29,

45,39, 50,02, 51,89, 51,99, 108,9, 109,2, 109,5, 116,14,

116,19, 132,96, 133,96, 133,05, 145,67, 145,76, 170,13,

170,32, 170,40, 170,63.

Ci₃H₁₆N₂O₃Cl₂ (MW = 319,19).

Hmotová spektroskopie (M⁺) 319.

Příklad 24

Syntéza N-[N-(3,5-dichlorfenyl)-L-alanyl]-(S)-2aminopentanové kyseliny ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D, L- alaninu (z Příkladu B uvedeného výše) a L-norvalinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sennchem) byla připravena sloučenina z názvu. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografii použitím 50 % směsi ethylacetát/hexan.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ = 0,92 (t, J = 7, 3H) , 1,2-1,4 (m, 2H) ,

1,50 (d, J = 7, 3H), 1,5-1,7 (m, IH) , 1,75-1,9 (m, IH) ,

3,69 (s, 3H), 3,75-3,9 (m, IH), 4,2 (bs, IH), 4,5-4,65 (m, IH), 6,5 (bs, 2H), 6,73 (s, IH), 6,85 (bs, IH) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 14,2, 19,25, 20,13, 34,8, 52,4, 53,0,

55,2, 112,7, 119,5, 136,1, 148,7, 173,0, 173,5.

C15H20N2O3CI2 (MW = 347,24).

Hmotová spektroskopie (M⁺) 346.

Příklad 25

Syntéza N-[N-(3,5-dichlorfenyl)-L-alanyl]-L-fenylalaninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D,L- alaninu a L-fenylalaninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu. Reakční produkt byl čištěn silikagelovou chromatografii- použitím 50 % směsi ethylacetát/hexan.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ = 1,40 (d, J = 7, 3H) , 3,10 (dd, J = 7,14, IH), 3,23 (dd, J= 5,14, IH), 3,74 (s, 3H), 3,75-3,9 (m, IH), 4,0 (bs, IH), 4,8- 4,95 (m, IH) , 6,45 (bs, 2H) , 6,73 (s, 2H), 7,0-7,2 (m, 2H), 7,2-7,3 (m, 5H).

·· 0 0 0 · · · · · • ·· ♦ · · · 0 · 00 0 0 0 00 0 0 000 0 • 00 00 0 0 0 000000 no 0000 00 00 — — ·« _M 000 000 00 00 ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 19, 4, 37,5, 52,4, 52,7, 54,5, 112,0,

118,9, 127,1, 128,5, 129,1, 135,5, 135,6, 148,0, 171,4,

172,6.

Ci₉H₂oN₂0₃C1₂ (MW = 395,29);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 394.

Příklad 26

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-aspartové kyseliny ve formě β-(methylester) a-methylesteru Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím L- aspartové kyseliny ve formě β-(methylester) amethylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 1 13,5-118 °C). Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,2 9 v 1:1 směsi EtOAc: hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografií použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,47 (bd, 1H), 7,20 (m, 1H) , 6,69 (d,

0,5H), 6,60 (d, 0,5H), 6,44 (m, 1H) , 4,83 (m, 1H) , 4,25 (bs, 0,5H), 4,18 (bs, 0,5H), 3,79 (m, 1H) , 3,72 (s, 1,5H),

3,67 (s, 1,5H), 3,65 (s, 1,5H), 3,48 (s, 1,5H), 3,00 (m,

1H), 2,79 (m, 1H), 1,50 (m, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174,0, 173, 6, 172,0, 171, 7, 171,4,

171,3, 146,6, 146,4, 133,43, 133,37, 131,22, 131,20, 122,2, 122,0, 115,5, 115,0, 114,1, 113,6, 55,4, 55,2, 53,46,

53,44, 52,7, 52,5, 48,8, 48,7, 36,4, 36,3, 19,9, 19,7. C₁₅H₁₈N₂O₅C1₂ (MW = 377,23);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 377.

Příklad 27

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(N'-1-benzyl)L-histidin ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HC1) a použitím 1-benzyl-L-histidinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4- dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání - 49-51 °C).

Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,21 v 5 % směsi methanol/methylenchlorid) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 5 % směsi methanol:methylenchlorid jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

¹H-nmr	(CDCI3)	: δ = 8,22 (d, 0,5H),	7,8	8 (d, 0,5H), 7,29
(m, 3H)	, 7,08	(m, 4H) , 6,65 (d, 0,5H)	, 6,	44 (m, 2,5H), 4,90
(s, IH)	, 4,86	(s, IH), 4,62 (m, IH),	4,47	(m, IH) , 3,72 (m,
IH), 3,	61 (s,	1,5H), 3,47 (s, 1,5H),	2, 95	(m, 2H), 1,42 (d,
3H) .
¹³C-nmr	(CDCI3	): δ = 174,0, 173,9,	172	, 4, 172,0, 146, 9,
138,1,	137,9,	137,6, 136,7, 136,5,	133	,1, 133,0, 131,0,
130,9,	129,6,	129,5, 128,84, 128,79,	127,	74, 127,71, 121,1,
121,0,	117,3,	115,3, 115,1, 113,9, 11	3,6,	54,9, 54,8, 53,2,

52,9, 52,8, 52,7, 51,3, 51,2, 30,2, 29,8, 19,8.

C23H24N4O3CI2 (MW = 475, 38);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 475.

Příklad 28

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-glutamové kyseliny ve formě β-(methylester) a-methylesteru Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HC1) a použitím L- glutamové kyseliny ve formě hydrochloridu β·· ·· · · ·· ··

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · · ·« · « · · 9 9

9 9 9 9 9 9 9 999 999

9 9 9 9 9 9 9

- ·· ·· ...... ·· ·· (methylester) α-methylesteru (Bachem) a N- (3,4dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,52 a 0,59 v 1:1 směsi EtOAc: hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,25 (m, 2H) , 6,69 (m, 1H) , 6,45 (m, 1H), 4,54 (m, 1H) , 3,78 (m, 1H) , 3,70 (s, 1,5H), 3,65 (s, 1,5H), 2,10 (m, 4H), 1,49 (d, 3H), 1,40 (s, 9H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174,2, 173, 9, 172, 8, 172,7, 172,5, 172,3, 146,6, 146,5, 133,5, 133,3, 131,3, 131,2, 122,16, 122,14, 115,7, 115,4, 114,0, 113,6, 81,6, 81,5, 55,4, 55,2, 53,1, 53,0, 52,3, 51,9, 32,0, 31,7, 28,6, 27,6, 27,3, 20,0, 19,8 .

C₁₉H26N2O₅Cl2 (MW = 433,34);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 432.

Příklad 29

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-glutamové kyseliny ve formě a-methylesteru

Terč.-butylesterová skupina N-[N-(3,4dichlorfenyl)alanyl]glutamové kyseliny ve formě β(methylester) α-methylesteru (z Příkladu 28 uvedeného výše) byla odstraněna postupem podle obecné procedury F (NaHCO₃promývání bylo vynecháno a produkt byl získán z ethylacetátové fáze) a tím se získala sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 42-45 °C) . Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,42 a 0,50 v 10 % směsi methanol/methylenchlorid).

• · • · ·

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,57 (bs, IH) , 7,25 (d, IH) , 6,75 (d, IH), 6,51 (m, IH), 4,67 (m, IH) , 3,91 (m, IH) , 3,76 (s, 1,5H), 3,69 (s, 1,5H), 2,50-2,15 (m, 3H), 2,10-1,85 (m,

IH), 1,51 (bs, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ= 177,98, 177,73, 175, 17, 174,94, 172, 64, 172,26, 146,60 ,146,45, 133,52, 133,33, 131,41, 131,27, 122,32, 122,28, 115,68, 155,47, 113,98, 113,59, 55,37,

55.17, 53,35, 53,29, 52,20, 51,85, 30,68, 30,26, 227,29,

27.18, 19,86, 19,77.

Ci5H₁₈N₂O₅Cl₂ (MW = 377,23).

Příklad 30

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-L-leucineamidu Postupem podle obecné procedury D a použitím hydrochloridu L-leucinamidu (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu. Tato sloučenina byla potom čištěna sloupcovou chromatografii, vymývána nejprve 1:1 směsí EtOAc/hexan, potom 5 % MeOH v methylenchloridu.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃)	: δ = 7,32	(d, 8,6, IH),	7,17 (d,	8,7,	IH) ,
6,66 (d, 2,7,	IH), 6,54	(s, IH), 6,41	(dd, 2,7,	8,7,	IH) ,
6,13 (s, IH)	, 4,48 (m,	IH), 4,33	(d, 5,3,	IH) ,	3,83
(kvint., 6,9,	IH), 1,58	(m, 3H) , 1,44	(d, 7,0,	3H) ,	0,89
(d, 6,0, 3H),	0,85 (d, 5,	9, 3H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174,5, 173, 9, 146, 0, 132,8, 130,7,

121,5, 114,7, 113,3, 54,3, 51,1, 40,8, 24,8, 22,9, 21,7,

19, 2 .

C₁₅H₂iN₃O₂Cl2 (MW = 346, 26). Hmotová spektroskopie (M⁺) 346.

• · > ftft · • ftft ftftft • ftft · • · ·· • · · · • · · · • ft ftft • ftftft ftft ftft

Příklad 31

Syntéza Ν- [N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(3, 5-dijod) -Ltyrosinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím 3,5-dijod-Ltyrosinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Bachem) a N(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu jako směs stereoisomerů okolo alaninu. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,29 v 10 % směsi MeOH/CH₂Cl₂) a čištění bylo prováděno mžikovou chromatografii (10 % směs methanol/methylenchlorid).

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃ - částečně čistý diastereomer A) δ = 7,37 (s, 2H), 7,19 (d, 1H), 6,99 (bd, 1H) , 6,65 (d, 1H) , 6,40 (m,

1H), 5,78 (s, 1H), 4,73 (q, 1H) , 3,72 (m, 1H) , 0,70 (s,

3H) .

¹³C-nmr	(CDC1₃ -	dva diastereomers) : δ = 173, 86,	171,87,
171,41,	171,37,	170,90, 153,48, 150,74, 146,37,	146,30,
141,01,	140,09,	138,39, 133,50, 133,45, 132,14,	131,62,
131,34,	131,28,	122,80, 122,62, 121,82, 115,59,	115,78,
115,72,	115,47,	114,54, 113,79, 113,21, 82,92,	77,08,
61,01,	55,69, 53	,32, 53,28, 53,18, 53,14, 52,97,	52,90,

52, 76, 36, 37, 36, 15, 21, 67, 20,20, 20, 11, 19, 76, 14,79. Ci₉Hi₈N₂O₄C1₂I₂ (MW = 663, 08); hmotová spektroskopie (MH⁺) = 663.

Příklad 32

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(3-jod)-Ltyrosínu ve formě methylesteru • · · • · · φφφ ··· • · • φ ·Φ φ φ · · · φ · ·· φ φ φ · · φ · · · φφ φφ ·

Postupem podle obecné procedury D a použitím 3-jod-Ltyrosinu ve formě hydrochloridu methylesteru (připraveného postupem podle obecné procedury K a použitím 3-jod-Ltyrosinu (Aldrich)) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu jako směs stereoisomerů okolo alaninu. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,29 v 10 % směsi MeOH/CH₂Cl₂ a čištění bylo prováděno mžikovou chromatografii (10 % methanol/methylenchlorid).

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,37 - 7,20 (m, 3H) , 6, 97 - 6, 60 (m, 3H), 6,42 (dd, 1,5H), 6,32 (dd, 1,5H), 5,52 (bs, 0,5H),

5,43 (bs, 0,5H), 4,80 (m, IH) , 3,94 (dd, IH) , 3,73 (s,

1,5H),	3,70 (s,	1,5H), 3,12 (dd, 0,5H), 2,94 (m, 1,5H),
1,48 (d	, 1,5H),	1,43 (d, 1,5H).
¹³C-nmr	(CDC1₃) :	δ = 173,56, 171,80, 171033, 154,52, 154,47,
145,69,	139,15,	138,74, 132,88, 132,71, 130,83, 130,61,
130,40,	130,26,	129,14, 128,81, 121,76, 121,73, 115.N,
114,97,	114,86,	113,20, 112,71, 84,96, 84,68, 54,85, 54,65,

52,78, 52,60, 52,57, 52,51, 36,29, 36,08, 19,40, 19,27. Ci9H₁₉N₂O₄Cl₂I (MW = 537,18); hmotová spektroskopie (MH⁺) = 538.

Příklad 33

Postupem podle obecných proceduře a příkladů uvedených výše může být připravena následující sloučenina:

Ν-[N-(4-chlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-fenylalaninu ve formě methylesteru

Příklad 34

00 00 • 0 · 0 · 0

0 0 0 0

0 000 000

Syntéza Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)glycyl]-(S)-2-aminopentanové kyseliny ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,4dichlorfenyl)glycinu (z Příkladu 1 uvedeného výše) a Lnorvalinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sennchem) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,32 v 50 % směsi ethylacetát/hexany) a čištěni bylo prováděno silikagelovou chromatografií použitím směsi ethylacetát/hexany jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ = 7,21 (d, J = 8,7, IH) , 6,94 (d, J =

7,8, IH), 6,68 (d, J= 2,6, IH) , 6,4 (m, IH), 4,6 (m, 2H) , 3,79 (d, J = 2,6, 2H), 3,71 (s, 3H) , 1,7 (m, 2H) , 1,2 (m, 2H), 0,88 (t, J = 7,3, '1,3, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 3, 170,2, 147,2, 133,6, 131,3,

122,2, 115,0, 113,6, 53,0, 52,3, 48,8, 34,8, 19,2, 14,1. Ci₄Hi₈N₂O₃C1₂ (MW = 333,22);

hmotová spektroskopie (MH⁺) = 334.

Příklad 35

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-Νε-(hexanoyl)L-lysinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-[N-(3,4dichlorfenyl)- D,L-alanyl]-L-lysinu ve formě methylesteru (z Příkladu 21 uvedeného výše) a hexanové kyseliny (Aldrich) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,38 v 60 % CH2CH2/IO % hexany/ 27 % EtOAc/ 3 % MeOH) a čištění bylo prováděno mžikovou chromatografií použitím 60 % CH₂Cl₂/10 % hexany/ 27 % EtOAc/ 3 % MeOH jako vymývacího rozpouštědla.

• · ·· ·· • · ·· • · · — gg — ·· ·· ·· ·

9

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) :	δ = 7,70 (d), 7,25 (m), 7,15	(m),	6, 68	(m),
6,42 (m) , 5,95	(bs) , 5,79 (bs), 4,70 (bs),	4,50	(m),	3, 80
(m), 3,78 (s),	3,72 (s), 3,45 (m), 3,20 (m),	3,05	(m),	2,12
(m), 1,98 (m) ,	1,80 (m) , 1,60 (m) , 1,45 (m) ,	1,30	(m) ,	1,10
(m) .
¹³C-nmr (CDC1₃)	: δ = 175,6, 174,4, 174,0,	173,	9, 173,7,

173,1,	156,	6, 146, 9, 146,8,	133,5, 133,2, 131,2, 131,1,
121,7,	115,	4, 115, 23, 115,	1, 114,0, 113,9,	79, 6, 55,1,
54,9,	54,8,	53,0, 52,9, 52,4,	52,0, 42,6, 40, 9,	39,4, 37,1,
32,1,	31,7,	30, 3, 29, 4, 28,9,	28,5, 26, 9, 25, 9,	25, 9, 23,0,

19,9, 19,7.

C₂2H33N₃O₄C1₂ (MW = 474,43);

hmotová spektroskopie (MH⁺) = není k disposici.

Příklad 36

Syntéza fenylalaninamidu Postupem podle fenylalaninamidu

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-Lobecné procedury D a použitím (Bachem) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,Lalaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 177-179 °C) . Tato sloučenina byla potom čištěna rozetřením s chlorformem.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (DMSO-d₆) δ = 8,0-8,2

7,30 (	m, 7H) ,	7,65-7,72 (m,
(m, IH) , 3,82 1,25 (m, 3H).	(m, IH), 2,95
¹³C-nmr	(cdci₃;	): δ = 173,0,
137,7,	131,1,	130,3, 129,21,

(d, IH)	, 7,45	(m, IH), 7,05-
IH), 6,	24-6,51	(m, 2H), 4,45
(m, IH)	, 2,78	(m, IH), 1,05-
172,9,	172,8,	172,7, 147,9,
129,15,	128,0,	127, 9, 126,21,

·· ··

- 100

126,19, 116,8, 113,5, 113,0, 51,8, 37,92, 37,86, 18,9, 18,6. Ci₈H₁₉N₃O₂Cl2 (MW = 380,28); hmotová spektroskopie (MH⁺) 380.

112,6, 53,4, 53,3, 52,0,

Příklad 37

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexan-(N-methyl)-amidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-methyl amidu L-norleucinu (připraven kopulací BOC-L-norleucinu (Bachem) methylaminem (Aldrich) postupem podle obecné procedury E, následovaným odstraněním BOC skupiny použitím obecné procedury F) a N- (3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu byla připravena sloučenina z názvu. Tato sloučenina byla potom čištěna promýváním vodným uhličitanem draselným.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CD₃OD) δ = 6,99 (t, IH) , 6,48 (d, 10,8, IH) , 6,32 (d, 8,7, IH), 4,09 (m, IH) , 3,68 (q, 7,0, 0,5H), 3,59 (q,

7,1, 0,5H), 2,50 (s, 1,5H), 2,47 (s, 1,5H), 1,28-1,60 (m, 2H), 1,23 (t, 6,5, 3H), 0,80-1,20 (m, 4H) , 0,68 ¹³C-nmr (CD₃OD) : δ = 176,6 (překrývající se), 174,54, 174,51, 148,8, 148,5, 133,6, 133,5, 131,7, 131,6, 121,0,

120,8, 115,2, 115,1, 114,5, 114,2, 55,3, 54,7, 54,3, 54,1, 33,3 (překrývající se), 29,0, 28,8, 26,3, 26,2, 23,4, 23,3, 19,0 (překrývající se), 14,3, 14,2.

Ci₆H23N₃O₂C1₂ (MW = 360,29);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 360.

Příklady 38 a 39

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-βcyklohexylalaninu ve formě methylesteru

101 ·· ·» * · · · • · «· • · ♦ · · • · · « ·· ·· • ·· · · • · · · · » • · · · · • · «44 444 • 4 4 »44 «4 »4

Postupem podle obecné procedury D a použitím β cyklohexylalaninu ve formě methylesteru (připraven from β cyklohexylalaninu (Bachem) použitím obecné procedury K) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu byla sloučenina z názvu, jako směs diastereomerů kolem alaninu, připravena ve formě oleje. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,27 (druhý isomer) a 0,30 (první isomer) v 35 % EtOAc/hexany) a čištění bylo prováděno mžikovou chromatografií (35 % EtOAc/hexany).

NMR data byla následující (první isomer - Příklad 38): ¹H-nmr (CD₃OD) δ = 7,21 (d, 1H) , 6,81 (bd, 1H) , 6,70 (d,

1H), 6,46 (dd, 1H) , 4,62 (m, 1H) , 4. 19 (d, 1H) , 3,77 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 1,65 - 0,90 (m, 10H), 1,50 (d, 3H). ¹³C-nmr (CD₃OD) : δ= 173,78, 173, 48, 146, 62, 133, 45, 131,26, 122,51, 115,84, 114,17, 55,64, 52,91, 50,47, 40,18, 34,81, 34,04, 32,88, 26,86, 26,71, 26,55, 20,13.

NMR data byla následující (druhý Isomer - Příklad 39): ^xH-nmr (CD₃OD) δ = 7,23 (d, 1H) , 6,83 (bd, 1H) , 6,67 (d,

1H), 6,45 (dd, 1H), 4,63 (m, 1H) , 4,10 (d, 1H) , 3,69 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 1,65 - 0,90 (m, 10H), l,51(d, 3H).

¹³C-nmr (CD₃OD) : δ= 173, 98, 173, 56, 146, 38, 133, 65, 131,34, 122,49, 115,35, 113,78, 55,39, 52,95, 50,21, 40,26, 34,61,

34,10, 32,68, 26, 82, 26, 64, 26, 41, 19, 98.

Ci₉H₂₆N₂O₃C1₂ (MW = 401,34);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 401.

Příklad 40

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-(S)-2aminohexanamidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím Lnorleucinamidu • ·

102

získaného z BOC-L-norleucinamidu (z Příkladu F uvedeného výše použitím obecné procedury F) a N-(3,4-dichlorfenyl)D,L-alaninu byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 156-161 °C).

NMR data byla následující:

¹H-nmr	(CD3OD)	δ = 6,49 (m,	IH), 6,32 (m, IH) , 1,14 (m,
IH), 3	,54- 3,71	(m, IH), 0,80	-1,62 (m, 9H), 0,68 (m, 1,5H),
0,58 (	m, 1,5H).
¹³C-nmr (CD₃OD) :	δ = 176,63,	176,56, 148,8, 148,5, 133,6,
133,5,	131,7,	131,6, 120,8,	115,2, 115,1, 114,4, 114,2,
55,3,	54,7, 53,	9, 53,7, 33,4,	33,3, 29, 0, 28,6, 23, 4, 23, 3,

19,03, 18,99, 14,3, 14,2.. C15H21N3O2CI2 (MW = 346,26); hmotová spektroskopie (MH⁺) 346.

Příklad 41

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexan-(N, N-dimethyl)-amidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím L-norleucin N,N-dimethylamidu (připraven kopulací BOC-L-norleucinu (Bachem) s dimethylaminem (Aldrich) použitím obecné procedury E, následovanou odstraněním BOC skupiny použitím obecné procedury F) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 137-160 °C). Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (0,20 a 0,24 (5 % MeOH v CH2CI2) a čištění této sloučeniny bylo prováděno precipitací z vody.

NMR data byla následující:

• · ¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 0,77 (m, 3H) , 1,11 (m, 1H) , 1,24 (m, 3H), 1,47 (m, 3H), 1, 40-1,80 (m, 2H), 2,92 a 2,94 (two s, 3H) , 3,07 (s, 3H), 3,84 (m, 1H), 4,32 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,90 (m, 1H), 6,44 (m, 1H) , 6,65 (s, 1H), 7,17 (m, 1H) , 7,35 (m, 1H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 13, 8, 13, 9, 19, 3, 19,4, 22,38, 22,45, 27,06, 27,14, 32,3, 32,5, 35,7 (possibly překrývající se), 37,0, 37,1, 48,6, 48,8, 54,3, 54,5, 113,1, 113,5, 114,4,

114,7, 121,1, 121,3, 130,6 (překrývající se), 132,7, 132,9, 146,0, 146,2, 171,4, 171,5, 172,6, 172.

Ci₇H25N₃O₂C1₂ (MW = 374,31);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 374.

Příklad 42

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-methioninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím L-methioninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu jako směs diastereomerů. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,35 v 43 % EtOAc/hexany) a čištění této sloučeniny bylo prováděno mžikovou chromatografii s 43 % směsí

EtOAc/hexany.

NMR data byla následující:

^lH-nmr (CDC1₃) : δ = 7,21 (d, 2H) , 6,68 (m, 1Η) , 6,43 (m,

1Η), 4,68 (m, 1Η) , 4,21 (dd, 1H) , 3,79 (m, 1Η) , 3,73 (s,

1,5H), 3,68 (s, 1,5H), 2,46 (m, 1Η) , 2,31 (t, 1Η), 2,23 1,88 (m, 2H), 2,06 (s, 1,5H), 1,93 (s, 1,5H), 1,50 (d, 3Η). ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ= 174,09, 173,81, 172,73, 172,38, 146,60, 146,47, 133,43, 131,37, 131,27, 122,36, 122,33, 115,65, • 0 ·

• ·

104

115,31, 114,05, 113,65, 55,48, 55,32, 53,19, 53,16, 51,99 51,68, 31,74, 31,64, 30,62, 30,42, 20,10, 19,92, 16,08

15,91.

Ci5H₂oN₂0₂Cl2S (MW = 379, 31);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 379.

Příklad 43 Syntéza

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexan-(N,N-dimethyl)-amidu

Postupem podle obecné procedury E a použitím L-norleucin N,N-dimethylamidu (připraven kopulací BOC-L-norleucinu (Bachem) s dimethylaminem (Aldrich) použitím obecné procedury E, následovanou odstraněním BOC skupiny použitím obecné procedury F) a N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu B uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,25-0,30 v 3 % směsi methanol/dichlormethan) a čištění této sloučeniny bylo prováděno chromatografií se 3 % směsí methanol/dichlormethan.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDCI3) : δ = 0,8-0,95 (překrývající se t, 3H) , 1,21,8 (m, obsahující překrývající se d při 1,45 a 1,48, 9H),

2,95 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), - 3,8-3,9 (m, 1H), 4,3-4,4 (m, 1H), 4,8-4,95 (m, 1H), 6,45 (s, 2H), 6,6-6,7 (m, 1H). C17H25N3O2CI2 (MW = 374,31).

Příklad 44 Syntéza

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexanamidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D,L- alaninu (z Příkladu B uvedeného výše) a L-norleucinamidu (z Příkladu F uvedeného výše) byla

105 • · připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatograf ií na tenké vrstvě (Rf = 0,15 v 3 % směsi methanol/dichlormethan) a čištění této sloučeniny bylo prováděno chromatografií na tenké vrstvě s 3 % směsí methanol/ dichlormethan.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CD₃OD) : δ = 0,9 (t, J = 7, 3H) , 1,2-1,4 (m, 2H),

1,45 (d, J = 7, 3H), 1,5-1,7 (m, IH) , 1,75-1,9 (m, IH) , 3,9-4,0 (m, IH), 4,1-4,3 (m, IH), 4,3-4,4 (m, IH) , 6,5 (bs, 2H) , 6,6 (bs, IH) .

Ci₅H₂iN₃O₂C1₂ (MW = 346,26).

Příklad 45

Syntéza Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexan-(N-methyl)- amidu

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D,L- alaninu a L-norleucin N-methylamidu (připraveného kopulací BOC-L- norleucine (Bachem) s methylaminem (Aldrich) použitím obecné procedury E, následovanou odstraněním BOC skupiny použitím obecné procedury F) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,25 v 3 % methanol/dichlormethan) a čištění této sloučeniny bylo prováděno chromatografií na tenké vrstvě s 3 % směsí methanol/dichlormethan.

NMR data byla následující:

/-nrar (CD₃OD) : δ = 0,9 (t, J =; 7, 3H) , 1,2-1,4 (m, 2H) , 1,45 (d, J = 7, 3H), 1,5-1,7 (m, IH) , 1,75-1,9 (m, IH) , 2,6-2,7 (m with s at 2,7, 4H), 3,8-4,0 (m, IH), 4,1-4,3 (m, 2H) , 6, 5 (bs, 2H), 6,6 (bs, IH) .

Ci₆H₂₃N₃O₂C1₂ (MW = 360,29).

·0 ♦

0 0 · • 000 000

106

000

Příklad 46

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-L-histidinu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCI) a použitím L-histidinu ve formě dihydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alaninu byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 5560 °C) . Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,52 v 10 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění této sloučeniny bylo prováděno mžikovou chromatografií s 50 % směsí EtOAc/hexany.

NMR data byla následující:

¹H-nrr	ir (CDC1₃) :	δ = 8,14 (bd, J = 7,02 Hz,	0,5H),	7,79	(bd,
7,57	Hz, 0,5H),	7,33 (s, IH), 7,14 (m, IH)	, 6,73	(s, 0,	5H) ,
6, 69	(s, 0,5H)	, 6,59 (m, IH), 6,47 (m,	0,5H),	6,37	(m,
0, 5H)	, 4,74 (m,	IH) , 4,33 (m, IH), 3,79	(m, IH)	, 3,69	(s,
1,5H)	, 3,62 (s,	1,5H), 3,05 (m, 2H) , 1,47	(d, J	= 7,02	Hz,

3H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ= 174,35, 174,15, 172, 45, 172,08, 146, 80, 146,67, 135,48, 135,07, 134,65, 133,24, 133,12, 131,13,

131,04, 121,54, 121,49, 115,96, 115,78, 115,38, 115,05,

113,90, 113,72, 61,04, 54,98, 53,11, 52,97, 52,71, 29,71,

19,43, 21,68, 19,86, 19,84, 14,77.

Ci₆H₁₈N₄O₃C1₂ (MW = 385,25);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 385.

Příklad 47

Syntéza Ν-[N-(chinolin-3-yl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru

107 ·· ·· • · · • · ·· ··· ··

Postupem podle obecné procedury G, následované hydrolýzou popsanou v obecné proceduře C byl připraven N-(chinolin-3yl)-D,L-alanin. Tato sloučenina byla potom kopulována s Lnorleucinem ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) použitím obecné procedury D a tím se získala sloučenina z názvu ve formě oleje. Poslední reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,76 v 10 % směsi methanol/methylenchlorid a 0,07 v 1:1 směsi EtOAc:hexany) a produkt byl čištěn mžikovou chromatografii použitím 10 % směsi methanol/methylenchlorid jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ =	8,53 (t, J = 2,8 Hz,	IH), 7,95	(m,	IH) ,
7,63 (m, IH), 7,46	(m, 2H), 7,20 (m, IH)	, 7,10 (d,	J =	2,75
Hz, 0,5H), 7,01 (d,	J = 2,75 Hz, 0,5H),	4,60 (m,	2H) ,	3,94
(m, IH) , 3,71 (s,	1,5H), 3,54 (s, 1,	5H), 1,90-	-0,80	(m,

12H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 82, 173,50 , 173, 40, 172, 96, 143, 65, 143,60, 143,39, 143,32, 140,34, 140,26, 129,57, 129,49,

127,86, 127,78, 126,94, 126,78, 126,54, 113,39, 112,65,

55,69, 55,46, 53,00, 52,86, 52,62, 52,28, 32,42, 32,35,

28,03, 27,79, 22,78, 22,62i 20,22, 20,01, 14,41, 14,12. C19H25N3O3 (MW = 343,43) .

Příklad 48

Syntéza Ν-[N-(benzothiazol-2-yl)-L-alanyl]-(S) -2aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru Postupem podle obecné procedury B a použitím 2chlorbenzothiazolu (Aldrich) a L-alaninu (Aldrich) byl připraven N-(benzothiazol-2-yl)-L-alanin. Tato sloučenina byla potom kopulována s L-norleucinem ve formě

- 108

hydrochloridu methylesteru (Sigma) použitím obecné procedury D (bez promývání v HCI) a tím se získala sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 99120 °C) . Poslední reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,42 v 1:1 směsi EtOAc: hexany) a produkt byl čištěn preparativní deskovou chromatografií použitím 1:1 směsi EtOAc:hexany a 5:95 MeOH:dichlormethan jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla	následuj ící:
¹H-nmr	(CDCI3)	: δ = 7,66-7,03	(m, 6H), 4,69 (m, 1H) , 4,58
(m, 1H)	, 3,72	(s, 1,9H), 3,61	(s, 1,1H), 1,91-1,50 (m, 5H),
1,32-1,	08 (m,	4H), 0,87- 0,65	(m, 3H) .
¹³C-nmr	(CDCI3) : δ = 175,8,	170,3, 166,8, 160,2, 152,3,
148,4,	132,1,	131,1, 126,8,	126,5, 124,5, 122,6, 122,0,
121,4,	120,9,	119,4, 54,3, 54,2, 53,0, 52,9, 3,5, 28,1,

28,0, 23,9, 22,9, 19, 0, 18,8, 14,2.

C17H23N3O3S (MW = 349, 46);

hmotová spektroskopie (MH⁺ 350) .

Příklad 49

Syntéza N-[N-(3,5-difluorfenyl)-D,L-alanyl]-L-alaninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury E a použitím L-alaninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,5difluorfenyl)-D,L-alaninu (z Příkladu C uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 93-95 °C). Reakce byla monitorována chromatograf ií na tenké vrstvě (Rf = 0,4 v 3 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění této sloučeniny bylo prováděno mžikovou chromatografií s 3 % směsí methanol/methylenchlorid.

·· ·· • » · • · ·· • · · • · · ·· · ·

109 ·· ·· • · · · • · · · • ·· · ·· · • ·

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 6,9 (q), 6,25 (t) , 6,10 (q) , 5,3 (s) ,

4,6 (m) , 4,25 (m) , 33,7-3,8 (m) , 1,8 (s) , 1,5 (d) , 1,4 (q) , 1,25 (s) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ= 173,78, 173,51, 173,44, 173,27, 166,24, 166,09, 163,04, 162,83, 149,41, 149,37, 97,47, 97,34,

97,20, 97,09, 96,82, 95,08, 95,03, 94,73, 94,69, 94,39,

94,34, 55,27, 55,22, 53,10, 53,02, 48,46, 48,35, 19,99,

19,87, 18,72, 18,66.

C₁₃Hi₆N₂O₃F₂ (MW = 286,3);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 287.

Příklad 50

Syntéza N-[N-(3,5-difluorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru Postupem podle obecné procedury E a použitím L-norleucinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) a N-(3,5difluorfenyl)-D,L-alaninu byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 93-95 °C).

Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,6 v 3 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění této sloučeniny bylo prováděno mžikovou chromatografii s 3 % směsí methanol/methylenchlorid.

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 6,95 (d) , 6,85 (d) , 6,25 (t) , 6,15 (t) ,

4,6 (m) , 4,3 (m) , 3,8 (m) , 3,75 (s) , 3,70 (s) , 1,8 (m) ,

1,65 (m) , 1,55 (d) , 1,3 (m) , 1,1 (m) , 0,85 (t), 0,80 (t) . ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 173, 64, 173, 42, 173, 35, 173, 04, 149, 38,

149,23, 97,52, 97,21, 97,14, 96,83, 95,10, 95,05, 94,75,

110

94,70, 94,41, 77,61, 77,19, 55,34, 55,25, 52,97, 52,87,

52,58, 52,25, 32,41, 27,96, 27,74, 22,79, 22,68, 20,05,

19,87, 14,39, 14,25.

Ci₆H22N2O₃F2 (MW = 328,3).

Hmotová spektroskopie (M⁺) 329.

Příklad 51

Syntéza N-[N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alanyl]-(S)-2aminohexanamidu

Postupem podle obecné procedury D (použitím DMF jako rozpouštědla a ethylacetátu pro extrakci a bez promývání IN HC1) a použitím L-norleucinamidu (připraven z BOC-Lnorleucinamide (z Příkladu F uvedeného výše) použitím obecné procedury F) a N-(3,4-dichlorfenyl)-L-alaninu připraveného z 3,4-dichloranilinu (Aldrich) a isobutyl-R(+)-laktátu (Aldrich) použitím obecné procedury J, následované hydrolýzou použitím obecné procedury C) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 184-186 °C). Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,48 v 12 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění této sloučeniny bylo prováděno preparativní deskovou chromatografii použitím 12 % směsi methanol/methylenchlorid jako vymývacího rozpouštědla.

NMR data byla následující:

¹H-nrar (CD₃OD) : δ = 6, 97 (d, J = 8,79 Hz, IH) , 6,51 (d, J = 2>68 Hz, IH), 6,32 (dd, J = 8,73 Hz, J = 2,68 Hz, IH) , 4,14 (m, IH), 3,67 (q, J = 6,96 Hz, IH), 1,40 (m, 10H), 0,70 (m, 3H)

111 ¹³C-nmr (CDC1₃) : δ= 177,19, 177,11, 149,41, 134,05, 132,13, 121,38, 115,82, 114,96, 55,26, 54,48, 33,92, 29,54, 23,95, 19,58, 14,83.

C15H21N3O2CI2 (MW = 346,26);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 346.

Příklad 52

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexan-(N-benzyl)-amidu

Postupem podle obecné procedury H uvedené výše a použitím Ν-[N-(3,4- dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2-aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru (z Příkladu 15 uvedeného výše) a benzylaminu (Aldrich) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 141-146 °C) . Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě na silikagelu (Rf - 0,32 v 5 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění bylo prováděno preparativní deskovou chromatografií (silikagel s použitím směsi 5 % methanol/methylenchlorid jako vymývacího rozpouštědla).

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC13) : δ = 7,6 (m, 2H) , 7,2 (m, 6H) , 6,6 (m, IH) , 6,3 (m, IH), 4,47 (m, 4H), 3,75 (m, IH), 1,28 (m, 12H). ¹³C-nmr (CDC13) : δ= 174,56, 174,50, 172,39, 172,32, 146,78, 146,65, 138,38, 133,43, 133,38, 131,22, 129,21, 128,06,

121,98, 121,72, 121,66, 115,21, 115,08, 113,73, 113,55,

54.94, 54,36, 53,60, 53,22, 43,95, 33,10, 32,98, 28,24,

27.95, 22,96, 22,90, 19,78, 19,70, 14,49, 14,41.

C22H21CI2N3O2 (MW = 436, 39);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 436.

Příklad 53 • Β ·· • · · · • · ·· • · · * · • · · ·

ΒΒ ··

112

Β ΒΒ ·· • Β ΒΒΒ· • Β · · ·

Β Β · · · · · ·

Β · ·

Β Β·· ·· ··

Syntéza Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2-amino-2fenylethanolu

Postupem podle obecné procedury E a použitím N-(3,4dichlorfenyl)-D, L- alaninu (z Příkladu A uvedeného výše) a (S)-(+)-2-fenylglycinolu (Aldrich) byla připravena sloučenina z názvu ve formě pevné látky (teplota tání = 6670 °C) . Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě na silikagelu (Rf = 0,25 v 5% směsi methanol/methylenchlorid) a čištění bylo prováděno mžikovou sloupcovou chromatografii (silikagel s použitím směsi 5 % methanol/methylenchlorid jako vymývacího rozpouštědla).

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,4-7,1 (m, 6H) , 6,75 (d, J = 3 Hz, IH) , 6,5- 6,4 (m, IH) , 5 (m, IH) , 4,2-4,0 (m, J = 4 Hz, IH), 3,8 (2H), 1,7 (s, IH), 1,55 (m, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 174, 146, 139, 134, 131, 8, 129, 5,

128,5, 127, 123, 116, 114, 112, 67, 56,5, 55,5, 20. Ci₆H₁₈C1₂N₂O₂ (MW = 341);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 342.

Příklady 54 a 55

Syntéza Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-fenylglycyl]-L-alaninu ve formě methylesteru

Postupem podle obecné procedury E a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D,L-fenylglycinu (z Příkladu J uvedeného výše) a L-alaninu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf = 0,95 v 3 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění této sloučeniny ft· bylo prováděno rekrystalizací z EtOAc, hexanu a etheru. Byla získány dvě částečně oddělené diastereomerické směsi. NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃ - 75 % isomer A/25 % isomer Β): δ = 7,45-7,35 (m, 5H), 6,7 (m, 2H), 6,47 (m, 2H), 5,1-5,0 (dd, J = 3 Hz, 1H) , 4,75 (d, J = 3,5 Hz, 1H) , 4,65-4,5 (m, 7,2 Hz 1H) ,

3, 75-3, 68 (2 s v poměru 3:1, 3H), 1,43-1,3 (2 d v poměru

3:1, J = 7,2 Hz, 3H).

¹³C-nmr (CDC1₃ - 75 % isomer A/25 % isomer Β) : δ = 173,27,

170,24, 148,61, 138,23, 136,07, 136,00, 130,11, 129,60, 129,58, 127,83, 127,69, 119,10, 112,68, 112,56, 78,03, 63,27, 53,20, 48,94, 18,85.

¹H-nmr (CDC1₃, 25 % isomer A/75 % isomer Β): δ = 7,45-7,35 (m, 5H), 6,7 (m, 2H), 6,47(m, 2H), 5,1-5,0 (2xd, J = 3 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 3,5 Hz, 1H) , 4,65-4,5 (m, J = 7,2 Hz, 1H) , 3, 75-3, 68 (2 s v poměru 1:3, 3H) , 1,43-1,3 (2 d v poměru 1:3, J = 7,2 Hz, 3H).

¹³C~nmr (CDCI3 - 25 % isomer A/75% isomer Β) : δ = 173,27,

170,24, 148,61, 138,23, 136,07, 136,00, 130,11, 129,60,

129,58 127,83, 127,69, 119,10, 112,68, 112,56, 78,03,

63,27, 53,20, 48,94, 18,85.

Ci₈H₁₈N₂O₃C1₂ (MW = 381,26);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 381.

Příklad 56

Syntéza Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexanol

Postupem podle obecné procedury I uvedené výše a použitím Ν-[N-(3,4- dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2-aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru (z Příkladu 15 uvedeného výše) byla připravena sloučenina z názvu ve formě oleje.

Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě na silikagelu (Rf = 0,16 a 0,17 v 5 % směsi methanol/methylenchlorid) a čištění bylo prováděno preparativní deskovou chromatografii (silikagel s použitím směsi 5 % methanol/methylenchlorid jako vymývacího rozpouštědla) ..

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CD₃OD) : δ =	7,20	(d, IH),	6,79 (m,	IH), 6,68 (dd,
IH) , 6,43 (d, IH),	4,42	(bd, 0,6H)	z 4,30	(bd, 0,4H), 3,89
(m, IH) , 3,75 (m,	IH),	3,70-3,40	(m, 2H)	, 1, 60-0, 95 (m,
9H), 0,90-0,70 (m,	3H)
¹³C-nmr (CD₃OD) : δ =	174,42, 174,17,	146,06,	145, 96, 132, 89,

132,85, 130,74, 130,69, 121,64, 121,49, 114,98, 114,70,

113,14, 113,08, 65,42, 65,11, 55,00, 54,76, 51,69, 51,48,

30,67, 30,59, 28,16, 28,00, 22,48, 22,36, 19,44, 13,92,

13,82.

C₁₅H₂₂C1₂N₂O₂ (MW = 333,26);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 333.

Příklad 57

Syntéza N-[N-(3,5-dichlorfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2-amino-2fenylethanol

Postupem podle obecné procedury E a použitím N-(3,5dichlorfenyl)-D,L- alaninu (z Příkladu B uvedeného výše) a (S)-(+)-2-fenylglycinolu (Aldrich), může být připravena sloučenina z názvu.

Příklad 58

Syntéza N-[N-(3,5-dichlorfenyl)-L-alanyl]-L-fenylglycin ve formě terč.-butylesteru • 0 • · · · • 0 0 · • 00 0 0 0 0

Φ 0 0 0 0 • · · ·

- 115

Postupem podle obecné procedury D (bez promývání IN HCl) a použitím N-(3,5-dichlorfenyl)-L-alaninu (připraven from

3,5-dichloranilinu (Aldrich) a isobutyl-R-(+)-laktátu (Aldrich) použitím obecné procedury J, následované hydrolýzou použitím obecné procedury C) a L-fenylglycinu ve formě hydrochloridu terč.-butylesteru (Bachem) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,39 v 25 %

EtOAc/hexany) a čištění této sloučeniny bylo prováděno preparativní deskovou chromatografií použitím 25 % směsi

EtOAc/hexany.

NMR data byla následující:

^xH-nmr (CDC1₃) : δ = 7,55 (d, J = 7,39 Hz, IH) , 7,30 (s,

5H) , 6,73 (t, J = 1,68 Hz, IH) , 6,46 (d, J = 1,71 Hz, 2H) , 5,45 (d, J = 7,45 Hz, IH), 4,47 (d, J = 5,19 Hz, IH), 3,82 (m, IH), 1,40 (d, J = 6,96 Hz, 3H), 1,34 (s, 9H).

^X3C-nmr (CDC1₃) : δ= 173,23, 169, 92, 148,93, 137,43, 136, 07, 129,40, 128,85, 127,40, 119.N, 112,48, 83,42, 57,37, 54,70, 28,29, 19,79.

C21H24N2O3CI2 (MW = 423, 34);

hmotová spektroskopie (MH⁺) 423.

Příklad 59

Syntéza N-[N-(3,5-di-(trifluormethyl)fenyl)-L-alanyl]-Lfenylglycinu ve formě terč.-butylesteru

Postupem podle obecné procedury D a použitím N-[3,5-di(trifluormethyl)fenyl]-L-alaninu (z Příkladu G uvedeného výše) a L-fenylglycinu ve formě hydrochloridu terc.butylesteru (Bachem) byla připravena sloučenina z názvu. Reakce byla monitorována chromatografií na tenké vrstvě (Rf = 0,46 v 25 % směsi EtOAc/hexany).

• · φ · « · · φ • φ ·· ·· • · • ·

- 116

NMR data byla následující:

^-nmr (CDC1₃) : δ = 7,39 (d, J = 7,39 Hz, IH) , 7,29 (s,

5H), 6,96 (s, 2H), 5,45 (d, J = 7,51 Hz, IH) , 4,69 (d, J = ; 5,31 Hz, IH), 3,95 (m, IH) , 1,48 (d, J= 6,96 Hz, 3H) , 1,33 (s, 9H) .

¹³C-nmr (CDC1₃) : δ = 172,7, 169, 9, 147,9, 137,3, 132, 8,

132,4, 129,42, 129,34, 129,31, 128,9, 127,4, 127,2, 127,

122,1, 113,50, 113,47, 112,34, 112,29, 112,24, 83,5, 57,3,

54,6, 28,34, 28,30, 28,2, 19,8.

C23H24N₂O₃F₆ (MW = 490,45).

Příklad 60

Syntéza N-[N-(3,5-dimethoxyfenyl)-D,L-alanyl]-(S)-2aminohexanové kyseliny ve formě methylesteru Postupem podle obecné procedury E (promývání zředěným HCl a extrakcí EtOAc) a použitím N-(3,5-dimethoxyfenyl)-D,Lalaninu (z Příkladu H uvedeného výše) a L-norleucinu ve formě hydrochloridu methylesteru (Sigma) byla připravena sloučenina z názvu ve formě lehce žlutého oleje. Reakce byla monitorována chromatografii na tenké vrstvě (Rf =0,3 v 30 % směsi EtOAc/hexany).

NMR data byla následující:

¹H-nmr (CDC1₃) : δ = 0,6-0,9 (dva triplety při 0,72 a 0,82, J = 7 Hz, 3H), 1,0-1,9 (m, 9H), 3,6-3,7 (čtyři singlety při 3, 60, 3, 65, 3, 66 a 3,67, 10H) , 3,7-3,8 (m, IH) , 4,6-4,7 (m, IH), 5,7-5,95 (m, 3H), 7,1-7,3 (m, IH).

¹³C-nmr (CDCI3) : δ = 14,21, 14,35, 19, 8, 20, 0, 22,69, 22,74,

27,8, 28,0, 32,20, 32,45, 52,18, 52,57, 52,65, 52,78,

55,31, 55,52, 55,59, 55,63, 91,6, 91,8, 92,86, 93,24,

149,02, 149,27, 162,11, 162,18, 173,02, 173,44, 174,47,

174,82.

• · • ·

- 117 • ·

C18H28N2O5 (MW = 352,43) .

Příklad 61

Buněčné prohledávání pro detekci inhibitorů tvorby βamyloidu

Množství sloučenin obecného vzorce I uvedeného výše bylo testováno na jejich schopnost inhibice vytváření β-amyloidu v buňkách, obsahujících švédskou mutaci. Tato prohledávací analýza používala buňky (K293 = linie lidských ledvinových buněk), které byly stabilně transfektovány genem amyloidového prekursorového proteinu 751 (APP751), obsahujícího dvojitou mutaci Lys₆5iMet₆52 na Asn65iLeu₆52 (při číslování APP751) způsobem, který byl popsán v publikaci mezinárodní patentové přihlášky č. 94/10569⁸ a v Citron a kol.¹¹. Tato mutace je obecně nazývána švédskou mutací a buňky, označené jako „293 751 SWE, byly vloženy na destičky Corning s 96 jamkami v množství 1,5-2,5 x 10⁴buněk na jamku v Dulbeccově minimálním esenciálním mediu s přídavkem 10% fetálního hovězího séra. Počet buněk je důležitý k tomu, aby bylo dosaženo ELISA výsledků pro βamyloid v lineární oblasti analýzy (přibližně od 0,2 do 2,5 ng na ml).

Po inkubací přes noc při teplotě 37 °C v inkubátoru ekvilibrovaném 10% oxidem uhličitým byla média odstraněna a nahrazena 200 μΐ sloučeniny obecného vzorce I (lék), obsahující médium, na jamku pro dvouhodinové předběžné působení a buňky byly inkubovány výše uvedeným způsobem. Zásobní roztoky léku byly připraveny v 100%

118 • · · · φφ Φ· • ΦΦΦ φ φ φ φ φ φ « · φ φφφ· · φ •Φ φφ φφφ «φφ φ · · ΦΦΦ dimethylsulfoxidu, tak aby při konečné koncentraci léku, použité při zpracování, koncentrace dimethylsulfoxidu nepřekročila 0,5% a byla ve skutečnosti obvykle rovna 0,1%.

Na konci periody předběžného působení byla média opět odstraněna a nahrazena médiem, obsahujícím čerstvý lék výše uvedeným způsobem a buňky byly inkubovány po dobu dalších dvou hodin. Po tomto zpracování byly destičky centrifugovány v přístroji Beckman GPR při 1200 otáčkách za minutu po dobu pěti minut při teplotě okolí na peletové buněčné zbytky ze zpracovaného média. Z každé jamky bylo 100 μΐ zpracovaného média nebo jeho vhodného zředění přeneseno na ELISA destičku pokrytou protilátkou 266 [P. Seubert, Nátuře (1992), 359: 325-327] proti aminokyselinám 13-28 β-amyloidového peptidu, která je popsána v publikaci mezinárodní patentové přihlášky č. 94/10569⁸ a uchováváno při teplotě 4 °C přes noc. ELISA test, používající označené protilátky 6C6 [P. Seubert, Nátuře (1992), 359: 325-327] proti aminokyselinám 1-16 β-amyloidového peptidu byl proveden následující den pro určení množství vytvořeného βamyloidového peptidu.

Cytotoxické účinky sloučenin byly měřeny modifikací způsobu, který popsali Hansen a kol.,¹². K buňkám, které zůstaly v tkáňové kultuře na destičce bylo přidáno 25 μΐ zásobního roztoku (5 mg/ml) 3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) do konečné koncentrace 1 mg/ml. Buňky byly inkubovány při teplotě 37 °C po dobu jedné hodiny a buněčná aktivita byla zastavena přidáním stejného objemu MTT lýzového pufru (20% hmotn./obj. dodecylsulfátu sodného v 50% dimethylformamidu, pH 4,7).

• · » · · I ► · · « • · 9 ·

- 119 > · · ( » · · ( • · · · · < • « • · ·

Úplná extrakce byla dosažena protřepáváním přes noc při teplotě okolí. Byl měřen rozdíl OD₅₆2nm a OD₆₅onm v mikrodestičkové čtečce Molecular Device UV_max jako indikátor buněčné životaschopnosti.

Výsledky ELISA analýzy β-amyloidového peptidu byly upraveny podle standardní křivky a vyjádřeny jako ng/ml βamyloidového peptidu. Pro normalizaci na cytotoxicitu, byly tyto výsledky děleny výsledky MTT a vyjádřeny jako procento výsledku proti kontrolnímu vzorku bez léku. Všechny výsledky představují střední hodnotu a standardní odchylku z alespoň šesti opakovaných pokusů.

Testované sloučeniny byly analyzovány na aktivitu pro inhibici vytváření β-amyloidového peptidu v buňkách, používajíce tento test. Výsledky tohoto testu ukazují, že každá ze sloučenin podle předloženého vynálezu, která byla testována, snižuje vytváření β-amyloidového peptidu o alespoň 30% ve srovnání s kontrolním vzorkem.

Příklad 62

In vivo potlačení uvolňování a/nebo syntézy β-amyloidu

Tento příklad ilustruje, jak sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být testovány na in vivo potlačení uvolňování a/nebo syntézy β-amyloidu. Pro tyto experimenty byly použity 3 až 4 měsíce staré PDAPP myši [Games a kol., (1995) Nátuře 373:523-527]. V závislosti na tom, která sloučenina byla testována, byla sloučenina obvykle připravena s koncentrací 5 nebo 10 mg/ml. Vzhledem k nízké rozpustnosti sloučenin, mohly být podávány s různými

120 • · · Φ ·Φ ·· ·«·· • · · · · φ φ · · φ

9 9 9 9 · 9 9 999 999

9 9 9 Φ ' Φ · 9 vehikuly, jako je kukuřičný olej (Safeway, South San Francisco, CA) ; 10% EtOH v kukuřičném oleji (Safeway) ; 2hydroxypropyl-p-cyklodextrin (Research Biochemicals International, Natick MA) ; a karboxymethyl-celulóza (Sigma Chemical Co., St. Louis MO). Konkrétně pro příklad 141 byla vehikulem karboxymethyl-celulóza (Sigma).

Myším byla podána dávka subkutánně pomocí jehly velikosti 26 a po 3 hodinách byla zvířata usmrcena CO₂ narkózou a krev byla odebrána srdeční punkcí, používajíce 1 cc 25G 5/8 tuberkulin stříkačku/jehlu, potřenou roztokem 0,5 M EDTA, pH 8,0. Krev byla vložena do Becton-Dickinsonovy vakuové trubice, obsahující EDTA a odstřeďovány po dobu 15 minut při 1500 g a při teplotě 5 °C. Potom byly odebrány myší mozky a kortex a hippocampus byly disektovány a uloženy na led.

1. Mozkový test

Pro přípravu hippocampální a kortikální tkáně pro enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA) byla každá oblast mozku homogenizována v 10 objemech ledového guanidinového pufru (5,0 M guanidin-HCl, 50 mM Tris-HCl, pH 8,0) používajíce motorizovaný drtič Kontes (Fisher, Pittsburgh PA) . Homogenáty byly jemně homogenizovány na rotující platformě po dobu tří až čtyř hodin při teplotě okolí a uchovávány při teplotě -20 °C kvantitativním stanovením β-amyloidu.

Mozkové homogenáty byly zředěny 1:10 ledovým kaseinovým pufrem [0,25% kaseinu, fosforečnanově pufrovaný fyziologický roztok (PBS), 0,05% azidu sodného, 20 gg/ml aprotininu, 5 mM EDTA, pH 8,0, 10 gg/ml leupeptinu] , čímž ·

9 9 9 9 ·

- 121 • 9 · 9 ·

9 9«

9 9 9 9

9 9 9 • · »· · se snížila konečná koncentrace guanidinu na 0,5 M před centrifugací při 16, 000 g po dobu 20 minut při teplotě 4 ’C. Byly připraveny β-amyloidové standardy (aminokyseliny 1-40 nebo 1-42), takže konečná kompozice se rovnala 0,5 M guanidinu v přítomnosti 0,1% albuminu hovězího séra (BSA).

Totální β-amyloidová sendvičová ELISA, určující jak βamyloid (aminokyseliny 1-40) tak i β-amyloid (aminokyseliny 1-42) spočívala ve dvou monoklonálních protilátkách (mAb) proti β-amyloidu. Zachycovací protilátka, 266 [P. Seubert, Nátuře (1992), 359: 325-327], je specifická na aminokyseliny 13 -28 β-amyloidu. Protilátka 3D6 (JohnsonWood a kol., PNAS USA (1997) 94: 1550-1555], která je specifická na aminokyseliny 1-5 β-amyloidu, byla biotinylována a sloužila jako druhá (indikační) protilátka v testu. 3D6 biotinylační procedura používá protokol výrobce (Pierce, Rockford IL) pro NHS-biotinové označení imunoglobulinů s výjimkou, že byl použit pufr 100 mM hydrogenuhličitan sodný, pH 8,5. 3D6 protilátka nerozpoznává vylučovaný amyloidový prekursorový protein (APP) nebo APP plné délky, ale detekuje pouze β-amyloidové druhy aspargové kyseliny aminového konce. Test měl dolní mez citlivosti přibližně 50 pg/ml (11 pM) a nevykazoval žádnou křížovou reaktivitu na endogenní myší β-amyloidový peptid v koncentracích až do 1 ng/ml.

Konfigurace sendvičového testu ELISA určujícího hladinu βamyloidu (aminokyseliny 1-42) používá monoklonální protilátku 21F12 [Johnson-Wood a kol., PNAS USA (1997) 94: 1550-1555] (která rozpoznává aminokyseliny 33-42 β122 ·· ·· · · ·· ·· · « · · ·· ·· · · · · • · · · · · »tt·· ····· · · · ··· ··· ···· ·· ·· amyloidu) jako první (zachytávací) protilátku. Biotinylovaná 3D6 je také indikační protilátka v tomto testu, který má dolní mez citlivosti přibližně 125 pg/ml (28 pM).

266 a 21F12 zachytávací monoklonální protilátky byly naneseny v koncentraci 10 gg/ml na 96 jamkové imunotestovací destičky (Costar, Cambidge MA) přes noc při teplotě okolí. Destičky byly potom odsáty a blokovány 0,25% lidským sérovým albuminem v PBS pufru po dobu alespoň 1 hodiny při teplotě okolí, potom uchovávány vysušené při teplotě 4 °C až do použití. Destičky byly před použitím rehydratovány promývacím pufrem (Tris-pufrovaný fyziogický roztok, 0,05% Tween 20). Vzorky a standardy byly přidány na destičky a inkubovány přes noc při teplotě 4 °C. Destičky byly promývány 3 krát promývacím pufrem mezi každým krokem testu. Biotinylované 3D6, zředěné na 0,5 gg/ml v kaseinovém inkubačním pufru (0,25% kasein, PBS, 0,05% Tween 20, pH 7,4) byly inkubovány v jamkách po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. Avidin-HRP (Vector, Burlingame CA) zředěný 1:4000 v kaseinovém inkubačním pufru byl přidán do jamek po dobu 1 hodiny při teplotě okolí. Byl přidán kolorimetrický substrát, Slow ΤΜβ-ELISA (Pierce, Cambridge MA) a ponechán reagovat po dobu 15 minut, poté byla enzymatická reakce zastavena přidáním 2 N H₂SO₄. Reakční produkt byl kvantifikován, používajíce zařízení Molecular Devices V_max(Molecular Devices, Menlo Park CA), měřením rozdílu absorpce při 450 nm a 650 nm.

2. Krevní test

EDTA plasma byla zředěna 1: 1 ve vzorkovacím ředidle (0,2

123 * · 9 · · · • 9 9 9 9 9 9 9 9

9 99 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 99 99 9 99 9 9· 9 9 g/1 fosforečnan sodný . H₂0 (monobazický) , 2,16 g/1 fosforečnan sodný . 7H₂O (dibázický), 0,5 g/1 thimerosal, 8,5 g/1 chlorid sodný, 0,5 ml TritonX-405, 6,0 g/1 hovězí sérový albumin prostý globulinu a voda). Vzorky a standardy ve vzorkovacím ředidle byly testovány používajíce totální β-amyloidový test (266 zachytávací protilátky /3D6 indikační protilátky), popsaný výše pro mozkový test s výjimkou že bylo použito vzorkovací ředidlo namísto kaseinového ředidla.

Ve srovnání s výše uvedeným popisem mohou být odborníky provedeny různé modifikace a změny kompozic a způsobů. Všechny takové modifikace spadají do rozsahu připojených patentových nároků.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce III:

ve kterém:

R¹ je zvolen ze souboru, zahrnujícího (a) fenyl, (b) substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce II:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a

128 ►· · » ·· vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení arylového nebo heteroarylového atomu k atomu uhlíku;

R³ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heteroaryl, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkinyl a heterocyklický systém;

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího

129 ♦ · · 0000 ·

0000 0 00 0 · 00 · 0 0 0Q0 0 00000 00 0

0 0« ·0 0 0000

0000 *» 00 0 0 00 00 (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl, (c) alkoxy nebo thioalkoxy, (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR'R, kde R’ a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y' , kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a Y' je zvolen ze souboru, zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol, -OC(O)R⁵, -SSR⁵, SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje • φ • · φ ···

130 φφφφ φ φ φφ φφ benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(O)OCH₃.

a s další dodatečnou podmínkou, že jsou vyloučeny následující známé sloučeniny:

pokud R¹ představuje fenyl, R² představuje methyl, X představuje -C(O)NH<3>, potom R³ nepředstavuje methyl, isopropyl, iso-butyl; a pokud R¹ představuje fenyl, R² představuje methyl, X představuje -C(O)NH₂, potom R³ nepředstavuje benzyl.
2. Sloučenina podle nároku 1, ve které R¹ představuje fenyl, 2-naftyl, chinolin-3-yl, benzothiazol-6-yl a 5indolyl.
3. Sloučenina podle nároku 1, ve které R¹ představuje substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, skupinu kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl·, thioalkoxy a ve kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

131

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku.
4. Sloučenina podle nároku 1, ve které R¹ představuje substituovaný 2-naftyl, substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl.
5. Sloučenina podle nároku 1, ve které R¹ představuje substituovaný heteroaryl, obsahující 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy, thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho k připojení heteroarylů ke skupině -NH.
6. Sloučenina podle nároku 3, ve které R¹ představuje 4substituovaný, 3,5-disubstituovaný nebo 3,4-disubstituovaný fenyl.
7. Sloučenina podle nároku 4, ve které R¹ představuje 3,5disubstituovaný fenyl.
8. Sloučenina podle nároku 5, ve které 3,5-disubstituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 3,5-dichlorfenyl, 3,5-difluorfenyl, 3,5-di(trifluormethyl)fenyl a 3,5dimethoxyfenyl.

Φ Φ Φ

Φ ΦΦΦΦ • ·

132 • · 9

Φ Φ Φ

Φ ΦΦΦ Φ Φ

ΦΦΦ • ΦΦΦ Φ Φ
9. Sloučenina podle nároku 4, ve které R¹ představuje 3,4disubstituovaný fenyl.
10. Sloučenina podle nároku 7, ve které 3,4-disubstituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 3,4-dichlorfenyl,

3,4-difluorfenyl, 3-(trifluormethyl)-4-chlorfenyl, 3-chlor4-kyanofenyl, 3-chlor-4-jodfenyl a 3,4-methylendioxyfenyl.
11. Sloučenina podle nároku 4, ve které R¹ představuje 4substituovaný fenyl.
12. Sloučenina podle nároku 9, ve které 4-substituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 4-azidofenyl, 4bromfenyl, 4-chlorfenyl, 4-kyanofenyl, 4-ethylfenyl, 4fluorfenyl, 4-jodfenyl, 4-(fenylkarbonyl)fenyl a 4-(lethoxy)ethylfenyl.
13. Sloučenina podle nároku 1, ve které R¹ představuje 2methylchinolin-6-yl.
14. Sloučenina podle nároku 1, ve které R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku a aryl.
15. Sloučenina podle nároku 12, ve které R²'je zvolen ze souboru, zahrnujícího methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, -CH2CH2SCH3 a fenyl.
16. Sloučenina podle nároku 1, ve které R³ představuje alkylovou skupinu.

133 φ » • ··
17. Sloučenina podle nároku 14, ve které alkylová skupina je zvolena ze souboru, zahrnujícího methyl, ethyl, npropyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl a sek.-butyl.
18. Sloučenina podle nároku 1, ve které R³ představuje substituovanou alkylovou skupinu.
19. Sloučenina podle nároku 16, ve které substituovaná alkylová skupina je zvolena ze souboru, zahrnujícího ahydroxyethyl, -CH₂-cyklohexyl, benzyl, p-hydroxybenzyl, 3jod-4-hydroxybenzyl, 3,5-dijod-4-hydroxybenzyl, -CH₂-indol~

3- yl, - (CH₂) 4-NH-BOC, -(CH₂)₄-NH₂, -CH₂- (1-N-benzyl-imidazol4- yl), -CH₂-ímidazol-4-yl, -CH₂CH₂SCH₃, - (CH₂) ₄NHC (0) (CH₂) ₃CH₃a - (CH₂) _yC (0) OR⁵, kde y je 1 nebo 2 a R⁵ představuje atom vodíku, methyl nebo terc.-butyl.
20. Sloučenina podle nároku 1, ve které X představuje C(0)Y, ve kterém Y je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkoxy a thioalkoxy.
21. Sloučenina podle nároku 18, ve které Y je alkoxy zvolený ze souboru, zahrnujícího methoxy, ethoxy, npropoxy, iso-propoxy, n-butoxy, iso-butoxy a terč.-butoxy.
22. Sloučenina podle nároku 1, ve které X představuje C(O)Y a Y představuje -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má od 2 do 8 atomů uhlíku, popřípadě obsahující 1 až 2 dodatečné heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a • · · · φ · φ φ · φ • · · ·

134 • φ • φ * φ φφφ atom dusíku a popřípadě substituovanou jedním nebo více skupinami alkyl nebo alkoxy.
23. Sloučenina podle nároku 20, ve které Y je zvolen ze souboru, zahrnujícího amino (-NH₂), N-(iso-butyl)amino, Nmethylamino, N,N-dimethylamino a N-benzylamino.
24. Sloučenina podle nároku 1, ve které X představuje CH₂OH.
25. Sloučenina podle nároku 1, ve které sloučenina obecného vzorce I je zvolena ze souboru, zahrnujícího:

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-iso-butylamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]threonin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, ethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, terč.-butylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, amid

N-(3,4-dichlorfenyl)alanin, N-(l-hydroxy-3-methyl-2-butyl) amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N,N-dimethylamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-methylamid

135

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]isoleucin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tryptophan, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, amethylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, 3-(terc.~ butylester) a-methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-N-BOC-lysin, methylester

N-[N-benzothiazol-6-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]lysin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tyrosin, methylester

0 0 ·· • 0 0

0 000

0 0

0 0 0000 00 • 0

136

N-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

N-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

N-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, β-(methylester) a-methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-1-benzylhistidin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, y-(terc.butylester) a-methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, amid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, amethylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3,5-dijod)tyrosin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3-jod)tyrosin, methylester

N-[N-(3,5-dichlorfenyl)glycyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-Νε-(hexanoyl)lysin, methylester

137 • · ♦ ·*· • ·· · ··

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-β-cyklohexylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(Ν,Ν-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]methionin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(Ν,Ν-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]histidin, methylester

Ν-[N-(chinolin-3-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(benzothiazol-2-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]alanin, methylester • * · · · · · · · · • · ·· · · · · · · · ·

Ν-[Ν-(3,5-difluorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

N~[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-benzyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)fenylglycinyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.butylester

Ν-[N-(3,5-di-(trifluormethyl)fenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.-butylester

Ν-[N-(3,5-dimethoxyfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
26. Sloučenina pro použití jako léčivo pro inhibici uvolňování β-amyloidového peptidu a/nebo jeho syntézy v buňce, obecného vzorece I:

139

X ve kterém:

R¹ je zvolen ze souboru, zahrnujícího (a) fenyl, (b) substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce II:

R^b‘ ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku • φ φ φφφ

140 φφφφφ φφφφφ φφφφ φφ φφ φφ φφ φφ (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení arylového nebo heteroarylového atomu k atomu uhlíku;

R³ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heteroaryl, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkinyl a heterocyklický systém;

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl, (c) alkoxy nebo thioalkoxy, • · ··· · ·

141 ·· (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R’ a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y’, kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a Y’ je zvolen ze souboru, zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol, -OC(O)R⁵, -SSR⁵, SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(0)OCH₃.
27. Sloučenina nebo směs sloučenin pro použití jako léčivo pro prevenci vzniku Alzheimerovy nemoci u pacienta s rizikem vzniku Alzheimerovy nemoci podle nároku 1, obecného vzorce I:

• 9 9

9 9 «

- 142 • 9 ·· • · · • 999 > · · · · ••«9 99 9« ve kterém:

R¹ je zvolen ze souboru, zahrnujícího (a) fenyl, (b) substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce II:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že • Β

- 143 • Β ·· • · ·

Β ΒΒΒ Β Β • · ··«· ··

ΒΒ ··

Β · · ·

Β · ·

Β · Β ···

Β · ·

ΒΒ ΒΒ

ΒΒ

Β Β · Β > Β Β Β

Β Β Β Β Β • Β Β ·

ΒΒ> ΒΒ pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení arylového nebo heteroarylového atomu k atomu uhlíku;

R³ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heteroaryl, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkinyl a heterocyklický systém;

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl,

144 • · ·· • · • · «·* · ·♦ • · · (c) alkoxy nebo thioalkoxy, (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y' , kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a Y' je zvolen ze souboru, zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol, -OC(O)R⁵, -SSR⁵, SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(O)OCH₃.
28. Sloučenina nebo směs sloučenin pro použití jako léčivo pro inhibici dalšího zhoršování Alzheimerovy nemoci podle nároku 1, obecného vzorce I:

• ·

- 145 ve kterém:

R¹ je zvolen ze souboru, zahrnujícího (a) fenyl, (b) substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce II:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl·, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že • »

- 146 » ·» • · • · ·· • · · · tt · • · » tttt· • *·· tt · · · • · · ♦ · ‘ ‘tt .6 I pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení arylového nebo heteroarylového atomu k atomu uhlíku;

R³ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heteroaryl, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkinyl a heterocyklický systém;

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl, • ·

- 147 • « 0 (c) alkoxy nebo thioalkoxy, (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y’ , kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a Y' je zvolen ze souboru, zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol, -OC(O)R⁵, -SSR⁵, SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(O)OCH₃.
29. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 26, 27 nebo 28, kdy R¹ představuje fenyl, 2-naftyl, chinolin-3-yl, benzothiazol-6-yl a 5-indolyl.

• · 0 0

148 «· ·0 • ·0 « • 0 0 1

0 0 0 <1 » 0 4 « • Φ Ά 0
30. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 26, 27 nebo 28, kdy R¹ představuje substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, skupinu kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a ve kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku.
31. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 26, 27 nebo 28, kdy R¹ představuje substituovaný 2-naftyl, substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl.

* ♦ • · 9 9 ··♦ 99 9 ·

149 • ·· ·

9 9
32. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 26, 27 nebo 28, kdy R¹ představuje substituovaný heteroaryl, obsahující 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy, thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho k připojení heteroarylu ke skupině -NH.
33. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 32, kdy R¹ představuje 4-substituovaný, 3,5-disubstituovaný nebo

3.4- disubstituovaný fenyl.
34. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 33, kdy R¹ představuje 3,5-disubstituovaný fenyl.
35. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 34, kdy

3.5- disubstituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 3,5-dichlorfenyl, 3,5-difluorfenyl, 3,5di(trifluormethyl)fenyl a 3,5-dimethoxyfenyl.
36. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 33, kdy R¹ představuje 3,4-disubstituovaný fenyl.
37. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 36, kdy 3,4-disubstituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 3,4-dichlorfenyl, 3,4-difluorfenyl, 3(trifluormethyl)-4-chlorfenyl, 3-chlor-4-kyanofenyl, 3chlor-4-jodfenyl a 3,4-methylendioxyfenyl.
38. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 33, kdy R¹ představuje 4-substituovaný fenyl.

• *

9 9

- 150 • φ φ φ • φ φ φ

9 9 φ Φ φ ₉

9 9 φ •Φ ΦΦ
39. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 38, kdy 4-substituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 4azidofenyl, 4-bromfenyl, 4-chlorfenyl, 4-kyanofenyl, 4ethylfenyl, 4-fluorfenyl, 4-jodfenyl, 4(fenylkarbonyl)fenyl a 4-(1-ethoxy)ethylfenyl.
40. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy R¹ představuje 2-methylchinolin-6-yl.
41. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku a aryl.
42. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 41, kdy R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího methyl, ethyl, npropyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, -CH₂CH₂SCH₃ a fenyl.
43. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy R³ představuje alkylovou skupinu.
44. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 43, kdy alkylová skupina je zvolena ze souboru, zahrnujícího methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl a sek.-butyl.
45. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy R³ představuje substituovanou alkylovou skupinu.

• 9

00 00

0 0 9 0

9 9 0 «

9 9 9 0

9 0 9 9 *· 99

0 0

9 9 • 9

9 ·

- 151 • 9 0» » 0 I

9 9

9 9

0 9 9 0

9 0

0000 09
46. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 45, kdy substituovaná alkylová skupina je zvolena ze souboru, zahrnujícího α-hydroxyethyl, -CH2-cyklohexyl, benzyl, phydroxybenzyl, 3-jod-4-hydroxybenzyl, 3,5-dijod-4hydroxybenzyl, -CH₂-indol-3-yl, - (CH2) 4-NH-BOC, -(CH₂)4-NH₂, -CH₂-(l-N-benzyl-imidazol-4-yl), -CH₂-imidazol-4-yl, CH2CH2SCH3, -(CH₂)₄NHC(O) (CH₂)₃CH3 a - (CH₂) _yC (0) OR⁵, kde y je

1 nebo 2 a R⁵ představuje atom vodíku, methyl nebo terc.butyl.
47. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy X představuje -C(O)Y, ve kterém Y je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkoxy a thioalkoxy.
48. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 47, kdy

Y je alkoxy zvolený ze souboru, zahrnujícího methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy, iso-butoxy a terč.-butoxy.
49. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy X představuje -C(O)Y a Y představuje -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má od 2 do

8 atomů uhlíku, popřípadě obsahující 1 až 2 dodatečné heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a popřípadě substituovanou jedním nebo více skupinami alkyl nebo alkoxy.
50. Sloučenina pro použití jako léčivo podle nároku 49, kdy

Y je zvolen ze souboru, zahrnujícího amino (~NH₂) , N-(isoΒ Β ··

Β Β

ΒΒΒΒ

Β Β

- 152 butyl)amino, N-methylamino, Ν,N-dimethylamino a Nbenzylamino.
51. Sloučenina pro použiti jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy X představuje -CH2OH.
52. Sloučenina pro použiti jako léčivo podle nároků 26, 27 nebo 28, kdy sloučenina obecného vzorce I je zvolena ze souboru, zahrnujícího:

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-iso-butylamid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]threonin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, ethylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, terč.-butylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, amid

N-(3,4-dichlorfenyl)alanin, N-(l-hydroxy-3-methyl-2-butyl) amid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N,N-dimethylamid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-methylamid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, methylester • «I

153

9 99 9 9 9 • ·· · · »· *

9 9 9 9 9 9 9 »

9 9 999 99 9 9 9 • * · · · · *

9 9 99 99 99

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]isoleucin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tryptophan, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, amethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, β-(terc.butylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-N-BOC-lysin, methylester

N-[N-benzothiazol-6-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]lysin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

154 ·· ··

Φ Φ Φ 4

Φ Φ Φ 1

Φ · Φ 4

Ν-[Ν-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, β-(methylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-1-benzylhistidin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, y-(terc.butylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucín, amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, amethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3,5-dijod)tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3-jod)tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)glycyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-Νε-(hexanoyl) lysin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, amid ♦ · • · • · ··

- 155 - ·..· ..· ·.

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-β-cyklohexylalanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N,N-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]methionin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N,N-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]histidin, methylester

Ν-[N-(chinolin-3-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(benzothiazol-2-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

- 156 • · * · · ·· · •••φ ♦·♦·

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-benzyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)fenylglycinyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanol

Ν- [N- (3,5-d'ichlorfenyl) alanyl] -2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-fenylglycin, terc.butylester

Ν-[N-(3,5-di-(trifluormethyl)fenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.-butylester

Ν-[N-(3,5-dimethoxyfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
53. Farmaceutická kompozice, obsahující farmaceuticky inertní nosič a farmaceuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I:

• · ·· • ·

157 ve kterém:

R¹ je zvolen ze souboru, zahrnujícího (a) fenyl, (b) substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce II:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku

0 0 0

0 0 0

158 * 0 ·

0 0 00 (c) 2-naftyl, (d) 2-naftyl substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl, (e) heteroaryl, a (f) substituovaný heteroaryl, nesoucí 1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího skupiny alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy a thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení heteroarylu ke skupině -NH ;

R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do '4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, aryl, heteroaryl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl, za předpokladu, že substituenty nejsou ortho (přilehlé) k připojení arylového nebo heteroarylového atomu k atomu uhlíku;

R³ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heteroaryl, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkinyl a heterocyklický systém;

X představuje -C(O)Y, kde Y je zvolen ze souboru, zahrnuj ícího (a) alkyl, (b) substituovaný alkyl s tou podmínkou, že substituce na uvedeném substituovaném alkylu nezahrnuje skupiny ahalogenalkyl, α-diazoalkyl nebo α-OC(0)alkyl, (c) alkoxy nebo thioalkoxy,

159 • ··· • · · ♦ · · · · · · ···« ·· ·· ·· ·· ·· (d) substituovanou skupinu alkoxy nebo substituovanou skupinu thioalkoxy, (e) hydroxy, (f) aryl, (g) heteroaryl, (h) heterocyklický systém, (i) -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R’ a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má 2 až 8 atomů uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 2 další heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a s popřípadnou substitucí jednou nebo více alkylovými nebo alkoxy skupinami, a pokud R³ obsahuje alespoň 3 atomy uhlíku, X může také být CR⁴R⁴Y’ , kde každý R⁴ je nezávisle zvolen ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém a Y' je zvolen ze souboru, zahrnujícího hydroxyl, amino, thiol, -OC(O)R⁵, -SSR⁵, SSC(O)R⁵, kde R⁵ je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl a heterocyklický systém, a s tou podmínkou, že pokud R¹ představuje 3,4dichlorfenyl, R² představuje methyl a R³ představuje benzyl, odvozený od D-fenylalaninu, potom X nepředstavuje C(0)OCH₃.
54. Farmaceutická kompozice podle nároku 53,vyznačující se tím, že R¹ představuje fenyl, 2-naftyl, chinolin-3-yl, benzothiazol-6-yl a 5-indolyl.

- 160 • · · 9 · • 9 99 9 9 • · 9 9 9 9

9 9 9 · ·

9 99 9 9 9 · · • · · 9 · 9 • · 9 9 9 9

999*9 99 9

9 9 9 9 9

99 99 99
55. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R¹ představuje substituovanou fenylovou skupinu obecného vzorce:

ve kterém R^c je zvolen ze souboru, zahrnujícího acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azido, skupinu kyano, atom halogenu, atom vodíku, skupiny nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy a ve kde R^b a R^c jsou k sobě kondenzovány a vytvářejí heteroaryl nebo heterocyklický kruh s fenylovým kruhem,

R^b a R^b' jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, skupiny nitro, kyano, trihalogenmethyl, alkoxy a thioalkoxy s tou podmínkou, že pokud R^c je atom vodíku, potom R^b a R^b' jsou buď oba atom vodíku nebo oba substituenty jiné než atom vodíku.
56. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R¹ představuje substituovaný 2-naftyl, substituovaný v polohách 4, 5, 6, 7 a/nebo 8 pomocí 1 až 5 substituentů, zvolených ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, atom halogenu, skupiny kyano, nitro, trihalogenmethyl, thioalkoxy, aryl a heteroaryl.
57. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R¹ představuje substituovaný heteroaryl, obsahující • *

0 0 00 • 0

161

1 až 3 substituenty, zvolené ze souboru, zahrnujícího alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, kyano, atom halogenu, skupiny nitro, heteroaryl, thioalkoxy, thioaryloxy, za předpokladu, že uvedené substituenty nejsou ortho k připojení heteroarylu ke skupině -NH.
58. Farmaceutická kompozice podle nároku 55, vyznačující se tím, že R¹ představuje 4-substituovaný, 3,5-disubstituovaný nebo 3,4-disubstituovaný fenyl.
59. Farmaceutická kompozice podle nároku 56, vyznačující se tím, že R¹ představuje 3,5-disubstituovaný fenyl.
60. Farmaceutická kompozice podle nároku 57, vyznačující se tím, že 3,5-disubstituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 3,5-dichlorfenyl, 3,5-difluorfenyl, 3,5di(trifluormethyl)fenyl a 3,5-dimethoxyfenyl.
61. Farmaceutická kompozice podle nároku 56, vyznačující se tím, že R¹ představuje 3,4-disubstituovaný fenyl.
62. Farmaceutická kompozice podle nároku 59, vyznačující se tím, že 3,4-disubstituovaný fenyl je zvolen ze souboru, zahrnujícího 3,4-dichlorfenyl, 3,4-difluorfenyl, 3(trifluormethyl)-4-chlorfenyl, 3-chlor-4-kyanofenyl, 3chlor-4-jodfenyl a 3,4-methylendioxyfenyl.
63. Farmaceutická kompozice podle nároku 56, vyznačující se tím, že R¹ představuje 4-substituovaný fenyl.
64. Farmaceutická kompozice podle nároku 61, vyznačující se tím, že 4-substituovaný fenyl je zvolen ze souboru, φφφ φ

162 φ φ φ • ΦΦΦ φ zahrnujícího 4-azidofenyl, 4-bromfenyl, 4-chlorfenyl, 4kyanofenyl, 4-ethylfenyl, 4-fluorfenyl, 4-jodfenyl, 4(fenylkarbonyl)fenyl a 4-(1-ethoxy)ethylfenyl.
65. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R¹ představuje 2-methylchinolin-6-yl.
66. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkyl, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylthioalkoxy, obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku a aryl.
67. Farmaceutická kompozice podle nároku 64, vyznačující se tím, že R² je zvolen ze souboru, zahrnujícího methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, -CH₂CH₂SCH₃a fenyl.
68. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R³ představuje alkylovou skupinu.
69. Farmaceutická kompozice podle nároku 66, vyznačující se tím, že alkylová skupina je zvolena ze souboru, zahrnujícího methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl a sek.-butyl.
70. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že R³ představuje substituovanou alkylovou skupinu.
71. Farmaceutická kompozice podle nároku 68, vyznačující se tím, že substituovaná alkylová skupina je zvolena ze souboru, zahrnujícího α-hydroxyethyl, -CH₂-cyklohexyl,

- 163 ·« »· ·· ·· ·* »* • · · · · 9 · ···· • ··· « · · · · · · 4 • · » · · · ··· · 4 · » 4 ··· e · · ··«· ··«· ·· ·· ·· ·· »e benzyl, p-hydroxybenzyl, 3-jod-4-hydroxybenzyl, 3,5-dijod4-hydroxybenzyl, -CH₂-indol-3-yl, - (CH₂) ₄-NH-BOC, -(CH₂)₄NH₂, —CH₂—(l-N-benzyl-imidazol-4-yl), -CH₂-imidazol-4-yl, CH₂CH₂SCH₃, -(CH₂)₄NHC(O) (CH₂)₃CH₃ a - (CH₂) _yC (0) OR⁵, kde y je 1 nebo 2 a R⁵ představuje atom vodíku, methyl nebo terc.butyl .
72. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že X představuje -C(O)Y, ve kterém Y je zvolen ze souboru, zahrnujícího alkoxy a thioalkoxy.
73. Farmaceutická kompozice podle nároku 70, vyznačující se tím, že Y je alkoxy zvolený ze souboru, zahrnujícího methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy, isobutoxy a terč.-butoxy.
74. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že X představuje -C(O)Y a Y představuje -NR'R, kde R' a R jsou nezávisle zvoleny ze souboru, zahrnujícího atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklický systém a kde R' a R jsou spojeny, aby vytvářely cyklickou skupinu, která má od 2 do 8 atomů uhlíku, popřípadě obsahující 1 až 2 dodatečné heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom kyslíku, atom síry a atom dusíku a popřípadě substituovanou jedním nebo více skupinami alkyl nebo alkoxy.
75. Farmaceutická kompozice podle nároku 72, vyznačující se tím, že Y je zvolen ze souboru, zahrnujícího amino (-NH₂), N-(iso-butyl)amino, N-methylamino, N,N-dimethylamino a Nbenzylamino.

164 • ai ·· *0 00 ·· *0

0·· 000« 0000 «••0 « · 0 · · · « 4

00 000 000000 00 0

0 0« 0 0 0 0 0 0 0

0000 00 00 «0 »♦ C«
76. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že X představuje -CH₂OH.
77. Farmaceutická kompozice podle nároku 53, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce I je zvolena ze souboru, zahrnuj ícího:

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-iso-butylamid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]threonin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, ethylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, terč.-butylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, amid

N-(3,4-dichlorfenyl)alanin, N-(l-hydroxy-3-methyl-2-butyl) amid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N,N-dimethylamid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]valin, N-methylamid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, methylester

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

165 φφφφ φφ φφ φφ φφ φφ

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]isoleucin, methylester

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tryptophan, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, amethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, P~(terc.butylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-N-BOC-lysin, methylester

N-[N-benzothiazol-6-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]lysin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, methylester

166

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]aspartová kyselina, β-(methylester) oc-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-1-benzylhistidin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, y-(terc.butylester) a-methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]leucin, amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]glutamová kyselina, amethylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3,5-dijod)tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-(3-jod)tyrosin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)glycyl]-2-aminopentanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-Νε-(hexanoyl)lysin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]fenylalanin, amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid • » • ·

167

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-β-cyklohexylalanin, methylester

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N,N-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyljmethionin, methylester

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N,N-dimethyl)amid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-methyl)-amid

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]histidin, methylester

Ν-[N-(chinolin-3-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(benzothiazol-2-yl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,5-difluorfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanamid

- 168

Ν-[Ν-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexan-(N-benzyl)-amid

N-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)fenylglycinyl]alanin, methylester

Ν-[N-(3,4-dichlorfenyl)alanyl]-2-aminohexanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-2-amino-2-fenylethanol

Ν-[N-(3,5-dichlorfenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.butylester

Ν-[N-(3,5-di-(trifluormethyl)fenyl)alanyl]-fenylglycin, terč.-butylester

Ν-[N-(3,5-dimethoxyfenyl)alanyl]-2-aminohexanová kyselina, methylester a jejich farmaceuticky přijatelné soli.