[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CZ307851B6 - Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění - Google Patents

Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění Download PDF

Info

Publication number
CZ307851B6
CZ307851B6 CZ2017-84A CZ201784A CZ307851B6 CZ 307851 B6 CZ307851 B6 CZ 307851B6 CZ 201784 A CZ201784 A CZ 201784A CZ 307851 B6 CZ307851 B6 CZ 307851B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
trehalose
molecular hydrogen
mmol
inflammatory
hydrogen
Prior art date
Application number
CZ2017-84A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ201784A3 (cs
Inventor
Jitka Čejková
ÄŚestmĂ­r ÄŚejka
Šárka Kubinová
Irena Vacková
Original Assignee
Ústav experimentální medicíny AV ČR, v. v. i.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ústav experimentální medicíny AV ČR, v. v. i. filed Critical Ústav experimentální medicíny AV ČR, v. v. i.
Priority to CZ2017-84A priority Critical patent/CZ307851B6/cs
Priority to EP18754040.6A priority patent/EP3582787A4/en
Priority to PCT/CZ2018/000009 priority patent/WO2018149426A1/en
Publication of CZ201784A3 publication Critical patent/CZ201784A3/cs
Publication of CZ307851B6 publication Critical patent/CZ307851B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7016—Disaccharides, e.g. lactose, lactulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Vynález se týká léčebného přípravku, obsahujícího molekulární vodík H, se zvýšeným antioxidačním účinkem, určeného k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění. Podstata vynálezu spočívá v tom, že molekulární vodík Hje kombinován s trehalózou. Kombinace molekulárního vodíku Ha trehalózy, zejména ve formě přípravků obsahujících molekulární vodík Ha trehalózu, může být použita k prevenci a léčení širokého spektra zánětlivých a degenerativních onemocnění. Zvláště účinné je použití k léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění předního i zadního segmentu oka.

Description

Oblast techniky
Vynález se týká léčebného přípravku, obsahujícího molekulární vodík H2, se zvýšeným antioxidačním účinkem, určeného k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění.
Dosavadní stav techniky
Oxidační stres vyvolává a rozvíjí zánětlivá onemocnění a hraje významnou úlohu v nádorových i degenerativních onemocněních a při stárnutí. Oxidační stres vzniká nerovnováhou mezi reaktivními kyslíkovými produkty (ROS) a kapacitou antioxidačních systémů, kdy jsou ROS nedostatečně rozkládány. Následkem je oxidační poškození buněk, způsobené peroxidací lipidů, oxidačními změnami v proteinech a oxidačním poškozením DNA. Oxidační stres hraje svoji negativní roli v každém lékařském odvětví. Např. v očním lékařství oxidační stres vyvolává a rozvíjí zánět rohovky, je příčinou mnoha druhů katarakty, uveitidy, retinopathie u předčasně narozených dětí, stařecké makulámí degenerace a některých druhů glaukomu.
Obzvláštní úlohu má oxidační stres v ischemicko - reperfuzním poškození. Ischemicko reperfuzní poškození je příčinou akutního oxidačního stresu s kritickými následky. K tomuto poškození dojde tehdy, když jsou tkáně poškozeny náhlým nedostatkem kyslíku (tzv. ischémie) a následně dojde k obnovení jeho přísunu (tzv. reperfuze). Vyskytuje se např. při infarktu myokardu, při onemocnění ledvin, jater, ale i rohovky a sítnice a dalších orgánů, jako např. při traumatickém poškození páteře a míchy, doprovázeném poruchami hybnosti. Podávání vysokých dávek antioxidantů nebo protizánětlivých léčiv často nevykazuje přesvědčivý efekt a v řadě případů se vyskytly i závažné nežádoucí sekundární projevy.
V některých studiích bylo navrženo, pro jeho protizánětlivé účinky, terapeutické použití molekulárního vodíku H2. Malé molekuly molekulárního vodíku H2 rychle penetrují poškozenými tkáněmi a buňkami až do buněčného jádra. Tam pak rozkládají reaktivní oxyradikály.
V patentu US 9050278 je popsán prostředek pro zachycování škodlivých reaktivních kyslíkových produktů, sestávající z roztoku obsahujícího molekulární vodík H2. Je uvedeno jeho použití pro léčení ischemického reperfuzního poškození tkáně.
Z patentové přihlášky US 2007148256 je znám farmaceutický přípravek na bázi roztoku obsahujícího molekulární vodík a koloidní částice drahých kovů, které katalyzují rozklad molekulárního vodíku H2 na atomární vodík H.
V humánní medicíně je hojně využívána trehalóza, například pro zabránění úbytku vody v buňkách (dehydrataci), proti vystavení buněk nadměrnému teplu, chladu nebo oxyradikálům, proti hypoxii až anoxii a proti hypoxicko - reoxygenačnímu poškození.
Například z patentu EP 580 444 je známo použití roztoku trehalózy k uchování orgánů pro transplantaci.
Z přihlášky EP 2 848 683 AI je známo při podávání suspenze kmenových buněk skrze cévní řečiště přidávat do této suspenze trehalózu.
- 1 CZ 307851 B6
Podstata vynálezu
Vynález je založen na myšlence, použít molekulární vodík H2 v kombinaci s jiným protizánětlivým a antioxidačním činidlem. Pokusy bylo zjištěno, že antioxidační účinky molekulárního vodíku H2 se synergicky zvyšují v přítomnosti trehalózy.
Podstata vynálezu tedy spočívá v tom, že molekulární vodík H2 je kombinován s trehalózou, která je účinným protistresovým, protizánětlivým a antioxidačním faktorem. Kombinace molekulárního vodíku H2 a trehalózy, zejména ve formě přípravků obsahujících molekulární vodík H2 a trehalózu, může být použita k prevenci a léčení širokého spektra zánětlivých a degenerativních onemocnění.
Léčebný přípravek podle jednoho aspektu vynálezu obsahuje 0,15 až 0,8 mmol vodíku LL a 0,5 až 500 mmol trehalózy na litr farmaceutického roztoku, s výhodou 5 až 300 mmol trehalózy na litr farmaceutického roztoku. Vodným základem farmaceutického roztoku může být lýziologický roztok, pufr PBS, voda pro injekce (aqua pro injectione) a nebo jiné farmakologicky přijatelné médium. Léčebný přípravek podle vynálezu může být realizován také jako vodný roztok trehalózy obohacený molekulárním vodíkem H2, určený k perorálnímu podávání.
Ačkoliv výhodný léčebný přípravek podle vynálezu obsahuje 0,15 až 0,8 mmol vodíku H2 a pro některé aplikace je nej výhodnější ve formě roztoku nasyceného molekulárním vodíkem H2 nebo téměř nasyceného molekulárním vodíkem H2, který obsahuje přibližně 0,6 až 0,8 mmol H2/I, je nutno poznamenat, že v rámci rozsahu vynálezu je možné podávat vodík H2 a trehalózu odděleně. Vynález tedy zahrnuje kombinaci molekulárního vodíku H2 s trehalózou k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění, přičemž trehalóza může, ale nemusí být aplikována ve formě roztoku obsahujícího rozpuštěný molekulární vodík H2. Trehalóza může být s vodíkem H2 kombinována i tak, že je vodík H2 inhalován, případně vodík H2 může být součástí medicinálních plynů při anestézii (narkóze). Trehalóza pak je podávána topicky, perorálně nebo injekčně.
Léčebný přípravek podle vynálezu samozřejmě může být aplikován ve spojení s jinou vhodnou léčbou. Bylo zjištěno, že antioxidační účinky molekulárního vodíku H2 a trehalózy se mohou uplatnit zejména při léčení aplikací mezenchymálních kmenových buněk (MSCs, Mesenchymal Stem Cells).
Léčebný přípravek podle dalšího provedení vynálezu obsahuje suspenzi mezenchymálních kmenových buněk ve farmaceutickém roztoku obsahujícím 0,15 až 0,8 mmol molekulárního vodíku H2 a 0,5 až 500 mmol trehalózy na litr farmaceutického roztoku, s výhodou 5 až 300 mmol trehalózy na litr farmaceutického roztoku a v tomto provedení vynálezu nej výhodněji 10 až 300 mmol trehalózy na litr farmaceutického roztoku.
Jak je výše uvedeno, léčebný přípravek podle vynálezu obsahuje trehalózu nej výhodněji ve farmaceutickém roztoku nasyceném nebo téměř nasyceném molekulárním vodíkem H2. Stav nasycení odpovídá obsahu molekulárního vodíku H2 přibližně 0,8 mmol na litr farmaceutického roztoku.
Synergický účinek přípravku podle vynálezu ve spojení s kmenovými buňkami je nutno přičítat také tomu, že léčebný přípravek má na kmenové buňky antioxidační a antialergický efekt a reguluje buněčné geny. Tím se zvyšuje regenerační účinek kmenových buněk na tkáně.
Léčebný přípravek podle vynálezu je určen, jak je výše uvedeno, k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění. Zvláště účinné však je jeho použití k léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění předního i zadního segmentu oka (zvláště oční rohovky a sítnice).
-2CZ 307851 B6
Předmětem vynálezu tedy specificky je také léčebný přípravek k léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění oční rohovky, který obsahuje vodík a trehalózu ve farmaceutickém roztoku. Obdobně jak je uvedeno výše, také pro toto specifické určení léčebný přípravek s výhodou obsahuje 0,15 až 0,8 mmol molekulárního vodíku H2, nejvýhodněji 0,6 až 0,6 mmol molekulárního vodíku H2, a 0,5 až 500 mmol trehalózy, s výhodou 5 až 300 mmolu trehalózy, nejvýhodněji 10 až 300 mmolu trehalózy na litr farmaceutického roztoku. S výhodou je léčebný přípravek tvořen farmaceutickým roztokem, který je nasycen molekulárním vodíkem H2.
Další provedení vynálezu pak spočívá v použití přípravku podle vynálezu ve spojení s kmenovými buňkami k léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění oční rohovky.
V konkrétní realizaci přitom mohou kmenové buňky být s výhodou použity na nosiči z nanovláken. Další provedení vynálezu tak spočívá v použití přípravku podle vynálezu jako podpůrného léčiva při léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění oční rohovky pomocí mezenchymálních kmenových buněk nanesených nebo inkubovaných na nanovláknech.
Nový přístup k potlačení oxidačního stresu a tím prevenci tkáňového poškození podle vynálezu je založen na působení malé molekuly molekulárního vodíku H2, která umožňuje rychlou penetraci poškozenými tkáněmi a buňkami. Vodík H2 proniká v buňkách k mitochondriím a až do buněčného jádra, přičemž rozkládá hydroxylové radikály a peroxynitrit, vznikající reakcí mezi superoxidem a oxidem dusnatým. Vodík H2 může pronikat hematoencefalickou bariérou, která odděluje vnitřní prostředí mozku od cévního systému. Podobně vodík H2, na rozdíl od jiných antioxidantů, proniká hematookulámí bariérou. Vodík H2 s buňkami a tkáněmi nijak nereaguje ani ve vysoké koncentraci. V kombinaci s trehalózou, která je účinným protistresovým, protizánětlivým a antioxidačním faktorem a je též zcela netoxická i ve vysoké koncentraci, umožňuje optimální ovlivnění buněk a tkání. Trehalóza při hypoxii chrání buňky před poškozením tím, že zabraňuje degradaci proteinů, stabilizuje buněčné membrány. Trehalóza má také protizánětlivé a antioxidační účinky. Ovlivňuje expresi buněčných genů. To je obzvláště důležité u některých neurodegenerativních onemocnění, kdy jsou buněčné geny narušeny.
Výsledným působením vodíku H2 a trehalózy je prevence nebo účinná suprese oxidačního stresu, redukce zánětu a buněčných apoptóz, což je následováno rychlou regenerací tkání a urychleným hojením. U hypoxicko - reperfuzního poškození působí kombinace vodíku H2 s trehalózou profylakticky i terapeuticky a to jak v akutních, tak i chronických fázích. Jestliže je kombinace vodíku H2 s trehalózou podána zavčas při lézi způsobené hypoxii, vodík H2 zabraňuje tvorbě ROS při následné reperfuzi. Kombinace vodíku 112 s trehalózou minimalizuje tvorbu jizevnaté tkáně. Tento účinek má obzvláštní význam v oční rohovce, kde tvorba jizvy znamená ztrátu rohovkové průhlednosti. V případech, kdy je kombinace vodíku H2 s trehalózou v roztoku doplněná kmenovými buňkami, především mesenchymálními (MSCs), je účinnost léčebného přípravku potencována jejich antioxidační, protizánětlivou a regenerační aktivitou.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1: Potlačení oxidačního stresu při poleptání oka za použití přípravku podle vynálezu
Králičí oči byly experimentálně poleptány 0,25N roztokem NaOH (nakapáním 10 kapek na oko během 1 minuty, králíci byli v celkové anestézii) a králíci byli rozděleni do pěti vzorků. Okamžitě po poleptání byly u části králíků oči opakovaně proplachovány léčebným přípravkem vytvořeným nasycením 280mM roztoku trehalózy v pufru PBS vodíkem H2 (obsah II2 odpovídající stavu nasycení byl přibližně 0,8 mmolu/1). Sycení farmaceutického roztoku molekulárním vodíkem bylo prováděno, po rozpuštění trehalózy v pufru PBS, prostřednictvím použití komerčně dostupné chemické patrony Dr. H. Hayashťs originál HydrogenRich Water Stick™ nebo probubláním vodíku. Stav nasycení může být zjišťován sondou pro měření koncentrace molekulárního vodíku v roztoku nebo nepřímo prostřednictvím měření oxidačně
-3 CZ 307851 B6 redukčního potenciálu, stav nasycení pak odpovídá hodnotě -600 mV. Proplachování poleptaných očí pokračovalo dalších pět dnů (5x denně). Oči u druhého vzorku byly podobně proplachovány jenom pufrem PBS nasyceným vodíkem H2, u třetího vzorku jenom pufrem PBS s trehalózou, a u čtvrtého vzorku byly oči po poleptání proplachovány pouze pufrem PBS. Pátá část králíků tvořila vzorek, který byl ponechán bez jakéhokoliv léčení. Byla vždy měřena středová tloušťka rohovky pomocí ultrazvukového pachymetru po celou dobu pokusu (1 x denně) a oči byly fotograficky dokumentovány. Pokus skončil 20. den po poleptání. Králíci byli v narkóze usmrceni a oči vyšetřeny biochemicky a imunohistochemicky. Výsledky ukázaly, že poleptané oči ošetřované pufrem PBS, stejně jako oči zcela neléčené, byly závažně poškozeny oxidačním stresem, který se vyskytl okamžitě po poleptání. Oxidační stres byl detekován přímo analýzou reaktivních kyslíkových forem (ROS) v tkáních dihydriethidiem a nepřímo nerovnováhou mezi expresí i aktivitou antioxidačních a prooxidačních enzymů v rohovkovém epitelu. Průhlednost očí byla ztracena. V rohovce byly imunohistochemicky i biochemicky stanoveny prozánětlivé cytokiny, peroxynitrit a malondialdehyd, markéry oxidačního stresu a peroxidace lipidů. V rohovkách léčených trehalózou nebo vodíkem H2, byla zjištěna suprese výskytu prozánětlivých cytokinu, peroxynitritu i malondialdehydu.
Nejlepší výsledky však byly získány s léčebným přípravkem, obsahujícím kombinaci vodíku H2 s trehalózou. Tento léčebný přípravek zamezil v rohovce vzniku oxidačního stresu a jeho následků. Rohovky se zhojily s navrácením průhlednosti. Optické vlastnosti předního očního segmentu byly obnoveny.
Orientačními pokusy bylo zjištěno, že léčebný přípravek podle vynálezu poskytuje nejlepší výsledky při koncentraci od 5 nebo 10 do 300 mmolů trehalózy v litru farmaceutického roztoku a při obsahu od 0,6 mmolu molekulárního vodíku H2 na litr tohoto farmaceutického roztoku do nasycení molekulárním vodíkem H2.
Není-li uvedeno jinak, v následujících příkladech byl jako léčebný přípravek podle vynálezu použit 280mM roztok trehalózy v pufru PBS, při pokojové teplotě nasycený vodíkem H2.
Příklad 2: Potlačení oxidačního stresu po ozáření oka UV zářením za použití přípravku podle vynálezu
Králičí oko bylo opakovaně ozařováno UBV zářením (tj. středněvlnným UV zářením) s energií 1,01 J/cm2, 1 x za den, po dobu 4 dnů. Po každém ozáření bylo oko vyplachováno po dobu 5 minut pufrem PBS nasyceným vodíkem H2 a obsahujícím trehalózu v koncentraci 280 mmol/1. Tato skupina králíků byla porovnávána (oči byly fotograficky dokumentovány a tloušťka rohovek měřena ultrazvukovým pachymetrem) během ozařování se skupinou králíků, kterým nebyly proplachovány oči léčebným přípravkem. U této skupiny byly po čtvrtém ozáření rohovky neprůhledné, bělavě zkalené, hydratované s počínající neovaskularizací v limbální krajině. Naopak u očí ozařovaných a proplachovaných pufrem PBS s trehalózou a vodíkem H2, byly rohovky průhledné, pouze jemně opalescentní, bez neovaskularizace a zvýšené rohovkové hydratace a bez zvýšených tlouštěk rohovek.
Příklad 3: Léčení oka poškozeného UV zářením za použití přípravku podle vynálezu
Králičí oko bylo opakovaně ozařováno UVB zářením (1,01 J/cm2, 1 x za den, po dobu 4 dnů). Poté byli králíci rozdělení na čtyři skupiny. V první skupině byly oči léčeny přípravkem obsahujícím nasycený vodíkem H2 a obsahujícím trehalózu v koncentraci 500 mmol/1. Ve druhé skupině byly oči léčeny pufrem PBS nasyceným vodíkem H2, ve třetí skupině byly léčeny pufrem PBS s trehalózou a ve čtvrté skupině byly oči ošetřovány pouze pufrem PBS. Léčení spočívalo v kapání příslušných roztoků na povrch oka (5x denně) po dobu tří týdnů. Poté byli králíci ze všech skupin v narkóze utraceni a oči vyšetřeny mikroskopicky a biochemicky. Výsledky ukázaly, že králičí oči s neprůhlednými ztluštělými rohovkami po opakovaném UVB ozařování se nejlépe zhojily s navrácením transparence po léčení přípravkem, obsahujícím trehalózu a vodík H2.
-4CZ 307851 B6
Přípravek obsahující samotný vodík H2 nebo přípravek obsahující samotnou trehalózu způsobil částečný návrat rohovkové průhlednosti. Rohovky, hojené samotným pufrem PBS zůstaly na konci pokusu bělavě zkalené a vaskularizované.
Příklad 4: Léčení oka poškozeného UV zářením pomocí mezenchymálních kmenových buněk za použití přípravku podle vynálezu
Králičí oko bylo opakovaně ozařováno UVB zářením (1,01 J/cm2, 1 x za den, po dobu 4 dnů). Po každém ozáření bylo oko vyplachováno po dobu 5 minut pufrem PBS nasyceným vodíkem H2. Po skončení ozařování byla na oko našita nanovlákna s MSCs (MSCs v tomto příkladu byly kmenové buňky z králičí kostní dřeně, které byly předem inkubovány na nanovláknech). Na našité nanovlákno s MSCs byl nakapán (20 kapek v průběhu 2 minut) pufr PBS s trehalózou a vodíkem H2 (koncentrace vodíku H2 byla 0,8 mmol/1 a koncentrace trehalózy byla 280 mmol/1). Poté bylo oko zašito a ponecháno bez dalšího léčení po dobu 5 dnů. Po těchto 5 dnech bylo oko rozešito a nanovlákna odstraněna. Dále bylo oko ponecháno bez léčení po dobu 3 týdnů. Hojení oka bylo sledováno makroskopicky, fotograficky a pomocí měření centrální tloušťky rohovky ultrazvukovým pachymetrem. Po uplynutí 3 týdnů byli králíci zabiti a oči vyšetřeny mikroskopicky a biochemicky. Pokusná skupina králíků takto léčená byla porovnávána s jinými skupinami se stejně ozářenými rohovkami králíků, ale zcela neléčenými, nebo léčenými pouze nanovlákny, nebo léčenými roztokem pufru PBS s trehalózou. V těchto skupinách byli pokusní králíci zabiti též 3 týdny po poškození. Výsledky prokázaly, že neléčené oči byly ulcerovány, oči léčené léčebným přípravkem s trehalózou a vodíkem H2 byly zhojeny bez vředů a neprůhledných jizev, transparence rohovek se navrátila. Oči, léčené pomocí MSCs transferovaných na nanovláknech, na které byl nakapán léčebný přípravek s trehalózou a vodíkem H2, se zhojily nejrychleji a s nejmenšími reziduálními změnami transparence.
Příklad 5: Léčení glaukomu za použití přípravku podle vynálezu
U glaukomu zvýšený nitrooční tlak způsobuje redukci v tloušťce sítnice mechanizmem ischemicko-reperfuzního poškození a následného působení ROS. Při administraci (kapáním na povrch oka) kapek fyziologického roztoku nasyceného H2 a obsahujícího 280 mmol/1 trehalózy v králičím modelu se snížilo poškození buněk a došlo k redukci buněčných apoptóz a výskytu malondialdehydu a peroxinitritu, markérů oxidačního stresu a peroxidace lipidů. Kontrolní kapky fyziologického roztoku nepřinesly žádný pozitivní výsledek. Samotný H2 nebo samotná trehalóza ve fyziologickém roztoku přinesly částečný pozitivní výsledek: supresi oxidačního stresu. Nejlepší výsledky byly pozorovány po kapkách, obsahujících kombinaci H2 s trehalózou.
Příklad 6: Léčení poškození sítnice vlivem ischemicko-reperfuzního poškození za použití přípravku podle vynálezu
Poškození sítnice vlivem hypoxicko-reperfuzního poškození při zvýšení nitroočního tlaku způsobuje neuronální obtíže vlivem ROS. Experimentálně vyvolaná ischemie sítnice zvýšením nitroočního tlaku způsobila již po 24 hod. tvorbu ROS a apoptózu retinálních buněk. Měřením tloušťky sítnice bylo zjištěno její ztenčené v průběhu několika dnů po ischemii. Léčebný přípravek aplikovaný na povrh oka podstatně snížil počet apoptotických sítnicových buněk, redukoval ROS a zabránil ztenčování sítnice. Léčebný přípravek podle vynálezu prokázal antioxidační a neuroprotektivní účinek.
Zvýšený účinek aplikace léčebného přípravku podle vynálezu na povrh oka byl pozorován v pokusech, ve kterých byla pokusným zvířatům podáván k pití hmotnostně 3 % (88 mmol/1) roztok trehalózy ve vodě, nasycený molekulárním vodíkem H2.
Příklad 7: Léčení poškození míchy po traumatu páteře za použití přípravku podle vynálezu
-5 CZ 307851 B6
Poškození míchy po úrazu páteře vede k aktivaci astrocytů, způsobené oxidačním stresem po hypoxicko-reperfuzním poškození, doprovázejícím páteřní trauma. Reaktivní astroglioza je doprovázena nadměrnou tvorbou prozánětlivých cytokinu v astrocytech a jejich uvolněním do okolí. Tím se potencuje zánět. Léčebný přípravek podle vynálezu injikovaný intravenozně snížil nebo zcela zabránil nadměrnému zánětlivému procesu v místě poškození a výrazně zlepšil posttraumatickou hybnost.
Příklad 8: Léčení zánětlivých onemocnění za použití přípravku podle vynálezu
Orientačními pokusy na zvířatech bylo zjištěno, že léčebný přípravek podle vynálezu napomáhá k léčení zánětlivých onemocnění včetně posttraumatické zánětlivé reakce po poškození nebo úrazu. Léčebný přípravek podle vynálezu injikovaný intravenozně snížil nebo zcela zabránil nadměrnému zánětlivému procesu v místě poškození.
Obdobné výsledky byly získány na zvířecích modelech pro zánětlivá onemocnění pojivových tkání, především onemocnění kloubů a úst (jako parodontu, závěsného aparátů zubů).
Bylo pozorováno, že pití roztoku trehalózy ve vodě, nasyceného molekulárním vodíkem íL, zvyšovalo účinek léčení.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (7)

1. Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění, vyznačující se tím, že obsahuje molekulární vodík H2 a trehalózu v roztoku, obsahujícím 0,15 až 0,8 mmol molekulárního vodíku H2 na litr roztoku a 0,5 až 500 mmol trehalózy na litr roztoku.
2. Léčebný přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje molekulární vodík H2 a trehalózu ve farmaceutickém roztoku, obsahujícím 5 až 300 mmol, s výhodou 10 až 300 mmol trehalózy na litr farmaceutického roztoku.
3. Léčebný přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje molekulární vodík H2 a trehalózu ve farmaceutickém roztoku, obsahujícím 0,6 až 0,8 mmol molekulárního vodíku H2 na litr farmaceutického roztoku, s výhodou ve farmaceutickém roztoku nasyceném molekulárním vodíkem H2.
4. Léčebný přípravek podle některého z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že základem farmaceutického roztoku je fyziologický roztok nebo pufr PBS nebo voda pro injekce.
5. Léčebný přípravek podle některého z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje kmenové buňky, s výhodou mezenchymální kmenové buňky.
6. Léčebný přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že obsahuje suspenzi kmenových buněk ve farmaceutickém roztoku obsahujícím molekulární vodík H2 a trehalózu.
7. Použití léčebného přípravku podle kteréhokoliv z předcházejících nároků k léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění oční rohovky a/nebo sítnice.
CZ2017-84A 2017-02-14 2017-02-14 Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění CZ307851B6 (cs)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2017-84A CZ307851B6 (cs) 2017-02-14 2017-02-14 Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění
EP18754040.6A EP3582787A4 (en) 2017-02-14 2018-02-13 PHARMACEUTICAL PREPARATION FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF INFLAMMATORY AND DEGENERATIVE DISEASES
PCT/CZ2018/000009 WO2018149426A1 (en) 2017-02-14 2018-02-13 Pharmaceutical preparation for the prevention and treatment of inflammatory and degenerative diseases

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2017-84A CZ307851B6 (cs) 2017-02-14 2017-02-14 Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ201784A3 CZ201784A3 (cs) 2018-08-22
CZ307851B6 true CZ307851B6 (cs) 2019-06-26

Family

ID=66951704

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2017-84A CZ307851B6 (cs) 2017-02-14 2017-02-14 Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP3582787A4 (cs)
CZ (1) CZ307851B6 (cs)
WO (1) WO2018149426A1 (cs)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114470164A (zh) * 2022-02-28 2022-05-13 浙江卫未生物医药科技有限公司 一种毛囊干细胞（orsc）制剂及其在神经损伤中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ30239U1 (cs) * 2016-10-14 2017-01-10 Ústav experimentální medicíny AV ČR, v. v. i. Prostředek obsahující kmenové buňky k léčení zánětlivých onemocnění, posttraumatických reakcí a degenerativních onemocnění

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3253131B2 (ja) 1992-07-24 2002-02-04 洋巳 和田 移植臓器用溶液
JP4653945B2 (ja) 2003-10-24 2011-03-16 ミズ株式会社 薬理機能水、およびその用途
WO2007021034A1 (ja) * 2005-08-19 2007-02-22 Shigeo Ohta 生体内の有害な活性酸素及び／又はフリーラジカル除去剤
WO2009104822A1 (ja) * 2008-02-21 2009-08-27 株式会社マイトス 水素分子を含む網膜虚血性疾患治療薬
JP5432322B2 (ja) 2012-05-08 2014-03-05 株式会社大塚製薬工場 トレハロース含有肺塞栓形成予防用哺乳動物細胞懸濁液
CN110464709A (zh) * 2012-08-10 2019-11-19 德克萨斯州大学系统董事会 用于治疗中风的神经保护性脂质体组合物和方法
EP3256136A4 (en) * 2015-02-09 2018-11-21 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Ophthalmic compositions and methods for reducing oxidative damage to an eye lens

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ30239U1 (cs) * 2016-10-14 2017-01-10 Ústav experimentální medicíny AV ČR, v. v. i. Prostředek obsahující kmenové buňky k léčení zánětlivých onemocnění, posttraumatických reakcí a degenerativních onemocnění

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anonym: „Body Balance – molekulární vodíková terapie – Nejúčinější antioxidant" https://www.restartzdravi.cz/Molekularni-vodikova-terapie-a6_19.htm (poslední aktualizace 31.7.2017) *
C. Cejka a kol.: „Molecular Hydrogen Effectively Heals Alkali-Injured Cornea via Suppression of Oxidative Stress" Oxidative Medicine and Cellular Longevity Vol. 2017, Article ID 8906027 (https://doi.org/10.1155/2017/8906027) *
C.-R. Yang a R.K. Yu: „Intracerebral Transplantation of Neural Stem Cells Combined with Trehalose Ingestion Alleviates Pathology in a Mouse Model of Huntington´s Disease" J Neurosci Res. 87(1) 26-33 (2009) doi:10.1002/jnr.21817 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3895944/) *
H. Kawasaki a kol.: „Hydrogen gas treatment prolongs replicative lifespan of bone marrow multipotential stromal cells in vitro while preserving differentiation and paracrine potential" Biochemical and Biophysical Research Communication 397, s. 608-613 (2010) *
K. Dohi a kol.: „Molecular Hydrogen in Drinking Water Protects against Neurodegenerative Changes Induced by Traumatic Brain Injury" PLOS ONE 9(9) 2014 e108034 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4176020/) *
R. Echigo: "Trehalose treatment suppresses inflammation, oxidative stress, and vasospam induced by experimental subarachnoid hemorrhage" Journal of Translation Medicine 10:80 (2012) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3422174/pdf/1479-5876-10-80.pdf *
S. Ohta: „Recent Progress Toward Hydrogen Medicine: Potential of Molecular Hydrogen for Preventive and Therapeutic Application" Current Pharmaceutical Design 17, 2241-2252 (2011) *
V. Giuliano a J.P. Watson: „Trehalose – a natural sugar that could possibly be consumed for health and longevity" (http://www.anti-agingfirewalls.com/2014/06/18/trehelose-a-natural-sugar-that-could-possibly-be-consumed-for-health-and-longevity/) (publikováno v roce 2014) *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3582787A1 (en) 2019-12-25
EP3582787A4 (en) 2020-12-23
WO2018149426A1 (en) 2018-08-23
CZ201784A3 (cs) 2018-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Duan et al. Protection and treatment of sensorineural hearing disorders caused by exogenous factors: experimental findings and potential clinical application
CN110062621B (zh) 氨基酸组合物及其用途
EP2385835B1 (de) Verwendung von deuteriumoxid zur behandlung viraler erkrankungen des auges
CA3000985A1 (en) Method for treating neurodegenerative diseases
RU2414218C1 (ru) Глазные капли для лечения дистрофических заболеваний и травм глаз
KR20160132380A (ko) 비경구 투여를 위한 멜라토닌 기반 제제
Chakraborty et al. A mitochondrial basis for Huntington’s disease: therapeutic prospects
Xiong et al. Piceatannol-3′-O-β-D-glucopyranoside attenuates colistin-induced neurotoxicity by suppressing oxidative stress via the NRF2/HO-1 pathway
WO2008046407A2 (de) Verwendung von deuteriumdioxid zur behandlung von hyperproliferativen erkrankungen der haut
WO2009099405A2 (en) Antibacterial compositions and methods of treatment
CZ307851B6 (cs) Léčebný přípravek k prevenci a léčení zánětlivých a degenerativních onemocnění
US6384084B2 (en) Histochrome and its therapeutic use in ophthalmology
JPH04275231A (ja) 事故結果として多外傷を有する危険な患者に於て、臓器拒絶の予防及び（又は）処置に、スーパーオキシドジスムターゼを使用する方法
US9649337B2 (en) Cerium oxide nanoparticles for the treatment and prevention of stroke and cardiovascular disease
EP2200585B1 (de) Verwendung von deuteriumoxid zur behandlung von virus-basierten erkrankungen der haut
CN109453146B (zh) 抗病原微生物的组合物及其制备方法和应用
RU2508123C1 (ru) Фармацевтическая композиция для местного применения при лечении воспалительных заболеваний глаз и способ ее использования
JP7312340B2 (ja) 水素を含む加齢黄斑変性治療用組成物
TW589182B (en) Use of 1-(aminoalkyl)-3-quinoxaline-2-on derivatives for the preparation of compositions acting as antioxidants
RU2733392C1 (ru) Комбинированное офтальмологическое средство
KR20140107389A (ko) 상피의 관통 및 세포의 생물학적 이용률을 증가시키도록 화학적으로 개질된 광역학적 치료용 조성물
JP7338895B2 (ja) 皮膚創傷や熱傷の治療のための薬剤
CN111317745B (zh) 水溶性富勒烯结构在制备治疗帕金森病的药物中的应用
US20210161993A1 (en) Method for accelerated healing of burn wounds
BRPI1001009A2 (pt) composições micro e nanoestruturadas para aplicação ocular no tratamento de ceratocone