CN109453146B - 抗病原微生物的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗病原微生物的组合物及其制备方法和应用，其中抗病原微生物的组合物主要由百里香酚、甘油、增溶剂和水制备而成；所述增溶剂为选自聚氧乙烯蓖麻油衍生物和聚甘油脂肪酸酯组合物中的至少一种。该药物中百里香酚在上述增溶剂和甘油的作用下均匀分散在水基体系中，稳定性好，通过百里香酚和增溶剂的协同增效作用，能够有效杀灭病原微生物，预防病原微生物感染以，及加速病原微生物感染的炎症消失，可用于动物局部组织的消毒，还可以防止奶头乳头皲裂，特别适用于奶牛乳房炎的预防和治疗。

Description

抗病原微生物的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及消毒剂技术领域，特别是涉及一种抗病原微生物的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

奶牛乳房炎是由多种病原微生物感染引起的，是奶牛最常见、危害最严重的疾病之一，它不仅影响产奶量，造成经剂损失，而且影响奶的品质，危及人类健康。随着中国奶牛业的高速发展，高产、稳产是奶牛养殖业的根本目标，奶牛乳房炎的防治成为奶牛养殖业的重中之重。

目前奶牛乳房炎的治疗方法主要有抗生素疗法和中药疗法。其中抗生素疗法是比较直接也是最有效的治疗方法，常见的药物有四环素、链霉素、青霉素、磺胺类药物等，但是，长期使用抗生素容易使病原菌产生耐药性，且抗生素会残留在病牛体内，污染奶源，药物残留带来的食品安全问题已经引起了人们的广泛关注，许多国家已分布相关条例限制抗生素在畜禽上使用。中药来源于植物、动物，不容易让致病菌产生耐药性，而且在奶牛体内代谢比较快，不会残留在体内，进而也不会影响奶源，但是，目前治疗奶牛乳房炎的中药疗法主要是将中药煎煮后罐服，存在操作复杂、见效慢等缺点。

百里香酚具抑菌、抗氧化和抗炎等作用，具有一定的香味，百里香酚除用作香料、食品添加剂外，还可以作为医疗药品，用于口腔杀菌，也可用来处理伤口，贮存解剖标本，还可作为驱虫剂和抗氧化剂。百里香酚常温下为白色晶体或无色半透明晶体，熔点：51.5℃，沸点：233-235℃，极易溶于乙醇、乙醚、醋酸、氯仿和苯。目前医药领域主要用于洗浴液、杀菌消毒药、抗氧化剂等使用，但是一般都会将其溶解于乙醇中进行制剂制备和使用。由于奶牛乳头为皮肤敏感部位，而且奶牛乳头药浴液会进入牛奶中，最终为人所食用，因此一般奶牛乳头药浴液都会要求无刺激、基本无毒。

发明内容

基于此，提供一种抗病原微生物的组合物，能够有效的杀灭病原微生物。

一种抗病原微生物的组合物，按重量百分比计，主要由百里香酚、甘油、增溶剂和水制备而成；所述增溶剂选自聚氧乙烯蓖麻油衍生物和聚甘油脂肪酸酯组合物中的至少一种。

本发明上述抗病原微生物的组合物低毒、刺激性小，对环境无污染，且对人和动物安全，其通过特定类型的增溶剂和甘油对百里香酚起到良好的增溶作用，使百里香酚能够均匀稳定的分散于组合物体系中，同时，该特定增溶剂对百里香酚的杀菌效果还具有增效作用，使组合物能够有效地杀灭病原微生物。其中，百里香酚具抑菌、抗氧化和抗炎等作用，由于百里香酚具有亲脂性，能够进入细胞膜引起磷脂双分子层结构紊乱，影响蛋白质的表达和柠檬酸代谢通路，从而造成菌体死亡，可以抑制如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、荧光假单胞菌、热坏死丝菌等大部分病原微生物；以聚氧乙烯蓖麻油衍生物或/和聚甘油脂肪酸酯组合物为增溶剂可以促进百里香酚的溶解，增强其亲脂性，促进其对病原体的杀灭作用；甘油一方面可以作为溶解百里香酚的溶剂，此外其具有良好的滋润皮肤的作用，可以防止奶牛乳头皲裂。

在其中一个实施例中，在所述组合物中，按重量百分比计，所述百里香酚的含量为0.01％～10％，所述甘油的含量为0.1％～20％，所述增溶剂的含量为0.1％～10％。

进一步地，所述甘油和所述百里香酚的质量比为(5～20):1；所述增溶剂和所述百里香酚的质量比为(3～10)：1。

在其中一个实施例中，所述聚氧乙烯蓖麻油衍生物选自聚氧乙烯35氢化蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油和聚氧乙烯60氢化蓖麻油中的至少一种；所述聚甘油脂肪酸酯组合物选自聚甘油-6辛酸酯、聚甘油-4葵酸酯和聚甘油-3椰油酸酯中的至少一种。

较优地，所述增溶剂为聚氧乙烯60氢化蓖麻油。

聚氧乙烯氢化60蓖麻油可以使百里香酚很好的溶解在水中，从而形成透明的液体制剂；但可以避免使用乙醇，减少组合物的刺激性，使用时还可以促进百里香酚的吸收，提高药效。

在其中一个实施例中，所述组合物的制备原料还包括胆木提取物，在所述组合物中，按重量百分比计，所述百里香酚的含量为0.5％～5％、所述胆木提取物的含量为0.5％～5％、所述甘油的含量为3％～20％、所述增溶剂的含量为0.1％～5％。

可以理解的，所述组合物的制备原料还可以包括除胆木提取物之外的其他具有消炎功效的植物提取物，较优地，如胆木提取物。

胆木提取物具有清热解毒，消炎、消肿止痛之功效，可以促进百里香酚的杀菌作用，起到预防由病原微生物感染引起的炎症，以及加速由病原微生物感染引起的炎症消失。

在其中一个实施例中，所述百里香酚和所述胆木提取物的质量量比为(1～3):1。

在其中一个实施例中，在所述组合物中，按重量百分比计，所述百里香酚的含量为1％～5％、所述胆木提取物的含量为0.5％～1％、所述甘油的含量为5％～15％、所述增溶剂的含量为1％～5％。

本发明上述抗病原微生物的组合物，其功能成分百里香酚和胆木提取物在甘油和增溶剂的增溶作用下均匀分散并溶解在水中，形成稳定、均匀透明的液体制剂；百里香酚和胆木提取物均匀分散在水基体系中，可以进一步的起到协同增效杀菌作用，使杀菌效果得到提高，能够有效杀灭病原微生物，起到预防由病原微生物感染引起的炎症，以及加速病原微生物感染的炎症消失。同时，百里香酚和胆木提取物在增溶剂的作用下能够很好的溶解在水中，可以避免使用乙醇等有机溶剂，降低药物刺激性；甘油对皮肤还有良好的滋润作用，可以防止奶牛乳头皲裂。

本发明另一目的在于提供一种上述抗病原微生物的组合物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

按照所述抗病原微生物的组合物的原料组成，将所述百里香酚与所述甘油、所述增溶剂混合均匀，得到第一混合物；

将所述胆木提取物和/或所述水加入到所述第一混合物中，搅拌混匀，即可。

进一步，在制备第一混合物过程中，可以加热，加热温度在10℃～60℃，以此加快或促进溶解。

上述制备方法，操作简单、安全，所需要的设备简单，所得产品质量稳定，易于工业化生产。

本发明又一目的在于提供一种上述抗病原微生物的组合物的应用，其特征在于，用于非治疗性目的地杀灭病原微生物。

上述抗病原微生物组合物能够有效的杀灭病原微生物，因此，可用于制备杀灭病原微生物的药物，起到预防病原微生物感染的作用。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明一实施方式的一种抗病原微生物的组合物，按重量百分比计，主要由以下原料制成：0.01％～10％的百里香酚、0.1％～20％甘油、0.1％～10％增溶剂和余量水；其中，增溶剂选自聚氧乙烯蓖麻油衍生物和聚甘油脂肪酸酯组合物中的至少一种。

在一实施例中，聚氧乙烯蓖麻油衍生物选自聚氧乙烯35氢化蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油和聚氧乙烯60氢化蓖麻油中的至少一种；聚甘油脂肪酸酯组合物选自聚甘油-6辛酸酯、聚甘油-4葵酸酯和聚甘油-3椰油酸酯中的至少一种。

较优地，增溶剂为聚氧乙烯60氢化蓖麻油。聚氧乙烯60氢化蓖麻油可以使百里香提取物(即百里香酚)非常好的溶解在水基质中，且所得混合体系的稳定性高；同时聚氧乙烯氢化蓖麻油还可以增加上述药物对病原微生物感染的防治效果。

在一实施例中，所述甘油和所述百里香酚的质量比为(5～20):1，增溶剂和所述百里香酚的质量比为(3～10)：1。

在一实施例中，胆木提取物为胆木的水或乙醇提取物。

具体地，胆木提取物为胆木叶、枝、干、皮和/或根经水或乙醇溶液浸提后的干燥粉剂。

较优地，胆木提取物为胆木叶的水提取物干燥粉剂。

具体地制备方法为：取胆木叶，切碎后粉碎成粗粉，加水煎煮、过滤，滤液浓缩后减压干燥。

在一实施例中，所述百里香酚选自百里香精油、牛至精油和丁香罗勒油中的至少一种。

可以理解，百里香酚可以以纯化形式添加到上述药物中；或者，可以将包含百里香酚的百里香油或百里香提取物等包含有百里香酚的活性物添加到上述药物中，同时确保百里香酚以所需有效浓度存在于本申请的药物中。百里香油或百里香提取物获自百里香、牛至和丁香罗勒等植物。

较优地，百里香酚以百里香植物提取物的形式添加。

在一实施例中，抗病原微生物的组合物的制备原料还包括胆木提取物，按重量百分比计，组合物主要由以下原料制成：0.5％～5％的百里香酚、0.5％～5％的胆木提取物、3％～20％的甘油、0.1％～5％增溶剂和余量水。

在一实施例中，百里香酚和所述胆木提取物的质量比为(1～3):1。

进一步地，百里香酚与胆木提取物的质量比为(2～3)：1。

在一个实施例中，按重量百分比计，抗病原微生物的组合物主要由以下原料制成：1％～5％的百里香酚、0.5％～1％的胆木提取物、5％～15％的甘油、1％～5％增溶剂和余量水。

本发明上述抗病原微生物的组合物低毒、刺激性小，对环境无污染，且对人和动物安全，其中百里香酚和胆木提取物在增溶剂和甘油的增溶作用下形成均匀的混合体系，并通过百里香酚和胆木提取物协同作用，能够有效地杀灭病原微生物。其中，百里香酚具抑菌、抗氧化和抗炎等作用，由于百里香酚具有亲脂性，能够进入细胞膜引起磷脂双分子层结构紊乱，影响蛋白质的表达和柠檬酸代谢通路，从而造成菌体死亡，可以抑制如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、荧光假单胞菌、热坏死丝菌等大部分病原微生物；胆木提取物具有清热解毒，消炎、消肿止痛之功效，可以促进百里香酚的杀菌作用，起到预防由病原微生物感染引起的炎症，加速由病原微生物感染引起的炎症消失。

本发明另一目的在于提供一种上述抗病原微生物的组合物的组合物的制备方法，包括以下步骤：

按照上述抗病原微生物的组合物的原料配比，将百里香酚、甘油和增溶剂混合均匀，得到第一混合物；

将胆木提取物和/或水加入到第一混合物中，搅拌混匀，即可。

上述制备方法通过严格控制各组分的混合顺序，使各组分充分溶解并混合均匀，避免因混合不当导致某些组分特别是百里香酚不能很好的溶解在水基质中，从而影响药效和稳定性。而且上述方法操作简单、安全，所需要的设备简单，所得产品质量稳定，易于工业化生产。

具体地，在室温下，将百里香酚与甘油、增溶剂混合均匀，得到第一混合物；

然后将胆木提取物加入到第一混合物中，边加边搅拌，混合均匀后，加入水，搅拌至胆木提取物完全溶解，即可。

进一步，在制备第一混合物过程中，可以加热，加热温度在10℃～60℃，以此加快或促进溶解。

本发明又一实施方式在于提供一种上述抗病原微生物的组合物的应用，将上述抗病原微生物的组合物用于制备杀灭病原微生物的药物。

上述抗病原微生物的组合物能够有效的杀灭病原微生物，因此，可用于制备杀灭病原微生物的药物，起到预防病原微生物感染的作用。

在一个实施例中，将上述抗病原微生物的组合物用于制备杀灭病原微生物的药物，可用于动物局部组织的消毒。如此，可以杀灭动物局部组织表面的病原微生物，预防病原微生物感染。

具体的，动物局部组织包括但不限于乳房、口腔、阴道、子宫、耳道、四肢等局部组织。可以理解，所谓的动物还包括人，所谓的消毒可以为动物局部组织的清洗、药浴、涂抹、喷雾等方式的消毒，以杀灭动物局部组织表面的病原微生物，预防病原微生物感染动物。

较优地，上述抗病原微生物的组合物及药物特别适于奶牛乳房、乳头的清洗消毒，以预防乳房炎的发生。

在一个实施例中，上述抗病原微生物的组合物还可用于宠物的清洁消毒和种蛋消毒等。

在一个实施例中，消毒的具体操作方法可以是表面清洗、喷雾、滴入、涂抹和药浴等。

以下为具体实施例

实施例1

抗病原微生物的组合物的配方为：百里香酚1wt％、甘油5wt％、高效增溶剂115C(聚氧乙烯60氢化蓖麻油)5wt％和余量水。

(1)精确称取各原料组分，其中，百里香植物提取物购自symris公司，百里香酚的含量为99％。

(2)在常温常压下，将配方量的百里香酚和甘油、高效增溶剂115C混合均匀，得混合物。

(3)向步骤(2)制备的混合物中缓慢加入配方量的水，边加边搅拌，直至完全溶解即可。

实施例2

抗病原微生物的组合物的配方为：百里香酚3wt％、甘油10wt％、胆木叶水提取物1wt％、高效增溶剂115C(聚氧乙烯60氢化蓖麻油)3wt％和余量水。

(1)精确称取各原料组分，其中，百里香植物提取物购自symris公司，百里香酚的含量为99％，胆木水提取物购自西安天瑞生物技术有限公司，以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计≥3.82％)以下实施例相同。

(2)在常温常压下，将配方量的百里香酚和甘油、高效增溶剂115C混合均匀，得混合物。

(3)将配方量的胆木水提取物加入步骤(2)的混合物中。

(4)向步骤(3)制备的混合物中缓慢加入配方量的水，边加边搅拌，直至完全溶解即可。

实施例3

抗病原微生物的组合物的配方为：百里香酚1wt％、胆木叶水提取物0.5wt％、甘油5wt％、高效增溶剂115C(聚氧乙烯60氢化蓖麻油)1wt％和余量水。

(1)精确称取各原料组分。

(2)在常温常压下，将配方量的百里香酚和甘油、高效增溶剂115C混合均匀，得混合物；

(3)将配方量的胆木水提取物加入步骤2)的混合物中；

(4)向步骤3)制备的混合物中缓慢加入配方量的水，边加边搅拌，直至完全溶解即可。

实施例4

实施例4与实施例1基本相同，不同之处在于，实施例4的药物的配方为：百里香酚5wt％、胆木叶水提取物1wt％、甘油15wt％、高效增溶剂115C(聚氧乙烯60氢化蓖麻油)5wt％和余量水。

对比例1

对比例1与实施例1基本相同，不同之处在于，对比例1以烷基苯磺酸钠代替高效增溶剂115C。

对比例2

对比例2与实施例1基本相同，不同之处在于，对比例2的配方为：1wt％百里香酚、5wt％甘油和余量水。制备过程中发现，所得药物制剂溶解不完全。

对比例3

对比例3与实施例2基本相同，不同之处在于，对比例3的配方为：3wt％百里香酚、1wt％胆木提取物、0.5wt％高效增溶剂115C和余量水。制备所得药物制剂呈浑浊状。

实施例5

实施例5与实施例2基本相同，不同之处在于，实施例5的药物的配方为：百里香酚3wt％、甘油10wt％、胆木提取物1wt％、聚氧乙烯35氢化蓖麻油3wt％和余量水。

实施例6

实施例6与实施例2基本相同，不同之处在于，实施例6的药物的配方为：百里香酚3wt％、甘油10wt％、胆木提取物1wt％、聚甘油-4葵酸酯3wt％和余量水。

实施例7

实施例7与实施例2基本相同，不同之处在于，实施例7的药物的配方为：百里香酚0.5wt％、甘油3wt％、胆木提取物0.5wt％、聚氧乙烯氢化60蓖麻油0.2wt％和余量水。

效果证明性试验

一、稳定性试验

1、试验样品：实施例和对比例制备的抗病原微生物的组合物。

2、试验方案：参照《中华人民共和国兽药典(2015年版)》(一部)附录9001——原料药物与制剂稳定性试验指导原则进行影响因素试验、加速试验。具体试验方案和结果如下：

1)影响因素试验方案和结果:

取试验样品，按市售包装，分别置于高温(60℃)和强光(4500±500Lx)两个条件进行高温和强光影响因素试验，放置10天，分别于0天、5天、10天进行百里香酚含量检测和溶液性状观察，以此为指标考察试验样品的稳定性，检测结果见下表1。

表1影响因素试验结果

2)加速试验方案和结果：

取试验样品，按市售包装，在40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在试验期间第0个月、1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，进行百里香酚含量检测和溶液性状观察，以此为指标考察试验样品的稳定性，检测结果见下表2。

表2加速试验结果

二、刺激性试验

1、试验样品：

实施例1和实施例2的抗病原微生物的组合物，由佛山市南海东方澳龙制药有限公司研制；0.9％氯化钠注射液，规格：500mL，批号A10082202，由贵州天地药业有限责任公司生产。

2、试验动物：

新西兰兔，32只，普通级，体重约2kg，24只雌性8只雄性，由广东省医学实验动物中心提供。动物购回后环境适应饲养3d，采用自然光照，试验期间饲喂全价兔料，饮水充足、不受限制，室温控制在26℃，相对湿度为40％～70％。

3、试验设计

1)、皮肤刺激性试验

将16只新西兰兔随机分成完整皮肤组(Ⅰ组)及破损皮肤组(Ⅱ组)，每组4只，雌雄各半，再随机各取一半动物进行实施例1和实施例2的动物试验。Ⅰ组试验开始前24h将动物脊椎两侧对称部位用电动剃毛刀各剃出面积为3cm×3cm的无毛区，皮肤脱毛后检查去毛区是否因去毛而受伤，皮肤受伤的不进行完好皮肤的刺激性试验。Ⅱ组破损皮肤的制作，系采用一次性消毒7号针头将去毛消毒皮肤按“#”字形(间隔1cm)划破皮肤表皮层，以渗血为度，左右两侧皮肤的破损程度基本一致。左侧为实施例1用药区，取0.5m L直接涂布于左侧已去毛的皮肤上，然后用两层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定，右侧为生理盐水对照区。贴敷时间至少4h，贴敷结束后，除去受试物并用温水或无刺激性溶剂清洁给药部位。连续给药3d，在每次去除药物后1h和再次贴敷前，观察、记录红斑及水肿、涂敷部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄情况及其发生时间与消退时间，并参照下表3皮肤刺激性反应评分标准进行评分，采用同体右侧自身对比。末次涂敷后，在去除药物后30～60min，24h、48h和72h肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。对多次给药的皮肤刺激性试验，首先计算每一观察时间点的各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按下表4进行刺激强度评价。

表3皮肤刺激反应评分标准

表4皮肤刺激强度评价标准

分值	评价
		0～0.49	无刺激性
0.5～2.99	轻度刺激性
		3.0～5.99	中度刺激性
6.0～8.0	强刺激性

2)、阴道黏膜刺激性试验

取雌性新西兰兔12只，分为染毒1组、染毒2组和对照组，每组4只。染毒1组和染毒2组分别阴道灌注实施例1和实施例2的抗病原微生物组合物2mL，对照组动物用生理盐水做同样处理。染毒后24h，采用空气栓塞法安乐处死动物，剖腹取出完整的阴道，纵向剖开，肉眼观察是否有充血、水肿等表现。有充血、水肿等表现的阴道放入10％福尔马林溶液中固定24h以上，选取阴道的两端和中央3个部位的组织制片，HE染色后，进行组织病理学检查。按下表5黏膜刺激反应评分标准进行评分，将每一个观察时间每一动物的黏膜刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得最后分值。按下表6黏膜刺激强度分级标准进行刺激强度分级，以判断其刺激程度。

表5阴道粘膜刺激反应评分标准

表6阴道黏膜刺激强度评价标准

平均值	评价
		0～0.4	无刺激性
0.5～1.5	轻度刺激性
		1.51～2.5	中度刺激性
＞2.5	重度刺激性

4、试验结果

1)、皮肤刺激性试验结果新西兰兔在3d给药期及给药结束后3d内，每日观察皮肤给药部位。结果显示，完整皮肤组和破损皮肤组的实施例1和实施例2给药部位皮肤(左侧)和生理盐水对照部位(右侧)均未发现有红斑和水肿形成，按规定评分标准为0分；亦未发现色素沉着、药源性出血及皮肤粗糙等异常反应。受试动物的活动、采食、饮水、排粪、排尿、体重及外观等亦未出现异常。按照国家有关皮肤刺激性试验皮肤反应评分及反应强度评价标准，实施例1对新西兰兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性反应，具体结果参见下表7。

表7实施例2对新西兰兔皮肤刺激性的评价

2)、阴道黏膜刺激性试验结果用药期间，染毒1组、染毒2组和对照组新西兰兔全身状况均未见异常，阴道口也未见明显充血、红肿及异常分泌物流出。肉眼观察取出的阴道组织，各组均未见阴道黏膜充血、水肿及出血点，阴道黏膜刺激平均分为0，按照国家有关阴道黏膜刺激反应评分及反应强度评价标准，实施例1、实施例2的抗病原微生物组合物对新西兰兔一次性阴道黏膜刺激强度为无刺激性，具体结果参见下表8。阴道黏膜组织病理学检查无异常。

表8实施例1对新西兰兔阴道黏膜肉眼观察刺激反应强度

结果表明，实施例1和实施例2的抗病原微生物的组合物对皮肤和阴道黏膜均无刺激性，提示本发明的应用安全性良好，临床使用安全，符合乳房注入给药要求，值得临床上进一步推广应用。

三、临床疗效试验

1、试验样品：实施例1～7和对比例1～3的抗病原微生物的组合物。

2、试验动物：

选取河北某大型奶牛养殖厂临床型乳房炎自然发病病例共计120头。体温、全身症状明显，食欲差；乳区发红、肿胀，并有硬块；触诊有热、痛反应；乳中有絮片、凝块，或呈水样；牛奶混合物中SCC(体细胞)﹥20万/mL，CMT(加州乳房炎检测法)测试强阳性；奶产量减少等临床型乳房炎症状。

3、试验方法

1)给药方法：分成12组，1～10组为试验组，在对患牛早、晚挤完奶后，清洗乳区，使用本发明实施例1进行乳头药浴消毒，试验药物组每个发病乳区每隔12h灌注100mL相对应的试验药物实施例，连续给药7天；11组为预防对照组，在对患牛早、晚挤完奶后，清洗乳区，使用本发明实施例1进行乳头药浴消毒，试验药物组每个发病乳区每隔12h灌注100mL相对应的试验药物实施例1，连续用药7天，7天后不继续使用实施例1进行乳头药浴消毒；12组为对照组，不给药组。

2)、疗效评价指标

A、治愈：全身症状消失，食欲恢复正常；患病乳区红、肿、热、痛等症状完全消失，乳汁外观恢复正常，泌乳量明显回升；乳中SCC﹤20万个/mL；乳区奶样未检出致病菌。

B、有效：全身症状基本消失，食欲恢复正常；患病乳区红、肿、热、痛等症状明显改善或减轻；乳汁外观基本正常，泌乳量有一定程度恢复；乳中SCC一定程度降低；乳区奶样中致病菌﹤1000cfu/mL。

C、无效：全身症状未消失甚至加重；患病乳区症状无明显改善甚至加重；乳汁外观更加异常，奶产量未恢复甚至泌乳停止；或者停药后两周内复发；乳中乳中SCC基本无变化；乳区奶样中致病菌数量﹥1000cfu/mL。

3)、复发率监测

对治愈后的奶牛进行停药后1周内的乳区临床症状及奶样致病菌监测。

4、试验结果：

1)、疗效评价结果

2)、复发率监测结果

停药后1周内观察，2组(实施例2)和4组(实施例4)试验组中，10头奶牛治愈的9头均无复发，另1头出现复发，实施例1和3治愈后的奶牛有2头复发，实施例5和6治愈后的奶牛有3头复发，实施例7治愈后的奶牛有4头复发；对比例1和2治愈后的奶牛均复发，治愈率为0，对比例3治愈后的奶牛仅1头没有复发。第11组(预防对照组)在以上药物停药后一周内，不继续使用实施例1药物进行乳头药浴消毒，出现治愈后奶牛的复发为5头；第12组(空白对照组)在以上试验停药后1周内，对其进行用药治疗，使用本发明实施例1的抗病原微生物组合物，经使用1周后，其乳房炎临床症状明显改善，有效率达到80％以上。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种抗病原微生物的组合物，其特征在于，由百里香酚、甘油、增溶剂、胆木提取物和水制备而成；

在所述组合物中，按重量百分比计，所述百里香酚的含量为3% ~ 5%、所述胆木提取物的含量为0.5% ~ 5%、所述甘油的含量为10% ~15%、所述增溶剂的含量为3% ~ 5%，余量为水；

所述增溶剂选自聚氧乙烯蓖麻油衍生物和聚甘油脂肪酸酯组合物中的至少一种；

所述聚氧乙烯蓖麻油衍生物选自聚氧乙烯35氢化蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油和聚氧乙烯60氢化蓖麻油中的至少一种；所述聚甘油脂肪酸酯组合物选自聚甘油-6辛酸酯、聚甘油-4葵酸酯和聚甘油-3椰油酸酯中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的抗病原微生物的组合物，其特征在于，所述百里香酚选自百里香精油、牛至精油和丁香罗勒油中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的抗病原微生物的组合物，其特征在于，所述增溶剂为聚氧乙烯60氢化蓖麻油。

4.根据权利要求1所述的抗病原微生物的组合物，其特征在于，所述百里香酚与所述胆木提取物的质量比为（1~3）:1。

5.根据权利要求1所述的抗病原微生物的组合物，其特征在于，所述百里香酚与所述胆木提取物的质量比为（2~3）:1。

6.根据权利要求1所述的抗病原微生物的组合物，其特征在于，在所述组合物中，按重量百分比计，所述百里香酚的含量为3%、所述胆木提取物的含量为1%、所述甘油的含量为10%、所述增溶剂的含量为3%，余量为水。

7.权利要求1~6任一项所述的抗病原微生物的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

按照所述抗病原微生物的组合物的原料组成，将所述百里香酚与所述甘油、所述增溶剂混合均匀，得到第一混合物；

将所述胆木提取物和/或所述水加入到所述第一混合物中，搅拌混匀，即可。

8.权利要求1~6任一所述的抗病原微生物的组合物的应用，其特征在于，用于制备杀灭病原微生物的药物。