CN1680423A

CN1680423A - 作为抗炎剂的雄甾烷系列化合物的中间体及其制备方法

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Publication number: CN1680423A
Application number: CNA2005100670269A
Authority: CN
Inventors: K·比加迪克; S·J·库特; R·K·尼斯
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2000-08-05
Filing date: 2001-08-03
Publication date: 2005-10-12
Anticipated expiration: 2021-08-03
Also published as: LU91429I2; US7498321B2; EP2348032A2; JP2010077145A; CN1294141C; NO20030550D0; EP1305329B2; HK1056180B; CN1294142C; CN1468252A; IL154148A; DK2348032T3; NZ523958A; PT2348032E; SI2348032T1; EA005992B1; EP1305330A1; CY1107899T1; AU7576001A; NO2008006I1

Abstract

按照本发明的一个方面，提供一种式(I)的化合物的中间体式(II)化合物的制备方法。也提供了一些中间体新型化合物。

Description

作为抗炎剂的雄甾烷系列化合物的中间体及其制备方法

本申请是申请日为2001年8月3日的发明创造名称为“作为抗炎剂的6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羧基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17-硫代羧酸S-氟甲酯”的中国专利申请(国家申请号为No.01816662.8，国际申请号为PCT/GB01/03495)的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种新的抗炎和抗过敏的雄甾烷系列化合物并涉及其制备方法。本发明也涉及含有所述化合物的药用制剂和其治疗用途，特别是治疗炎性疾病和过敏性疾病中的用途。

背景技术

具有抗炎特性的糖皮质激素是众所周知的并广泛用于治疗炎性疾病或如哮喘和鼻炎的疾病。例如，美国专利4335121公开6α，9α-二氟-17α-(1-氧代丙氧基)-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲酯(通用名称为氟替卡松丙酸酯)及其衍生物。糖皮质激素的用途，特别是对孩子而言，由于潜在的副作用一般限制在一定的范围内。对于人们所担心的糖皮质激素副作用包括抑制下丘脑垂体肾上腺(HPA)轴，影响孩子的骨生长和中老年人的骨密度，眼睛并发症(白内障形成和青光眼)和皮肤萎缩。某些糖皮质激素化合物也具有复杂的代谢途径，其中产生的活性代谢物可使此类化合物的药效学和药代动力学难于理解。虽然现代的类固醇比最初采用的那些要安全得多，但生产具有预言的药代学和药效学性质、具有吸引人的副作用和方便的治疗方案的具有优良的抗炎性质的新分子仍然是一个研究的目标。

发明内容

我们已经确定了能充分地满足这些目的的一类新糖皮质激素化合物。

因此，按照本发明的一个方面，提供一种式(I)化合物及其溶剂合物。

式(I)化合物的化学名称为6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲酯。

按照本发明此后涉及的化合物包括式(I)化合物及其溶剂合物，特别是药学上可接受的溶剂合物。

式(I)化合物潜在地具有有益的抗炎或抗过敏作用，特别是局部给药，例如通过它结合糖皮质激素受体的能力和经该受体的非正常反应证明了这一点。因此，式(I)化合物用于治疗炎性和/或过敏性疾病。

在大鼠和人及体外系统中，化合物(I)经历高效的肝代谢产生作为唯一的主要代谢物的17β-羧酸(X)。已经合成了所述代谢物并证明在体外功能糖皮质激素分析中比所述母体化合物活性低＞1000倍。

这种有效的肝代谢通过大鼠体内数据反映，所述数据已经证明血浆清除以接近肝血流动的速率进行以及＜1％的口服生物利用度，与广泛的第一遍(first-pass)新陈代谢一致。

人肝细胞的体外代谢研究已经证明化合物(I)以一种相同的方式代谢为氟替卡松丙酸酯，但是化合物(I)转化为无活性的酸代谢物比氟替卡松丙酸酯快大约5倍。预期这种十分有效的肝失活使人全身的接触减少到最少从而导致改善安全曲线(profile)。

吸入的类固醇也通过肺吸收并且该吸收途径显著影响全身的接触。因此减少肺吸收可提供改进的安全曲线。式(I)化合物的研究显示，在干燥的粉末传递到麻醉猪的肺中后接触的式(I)化合物显著低于接触的氟替卡松丙酸酯。

当每天给药一次时，相信一条改善的安全曲线使式(I)化合物显示所需的抗炎作用。对患者而言认为每天一次的给药方式比每天两次的给药方式明显更加方便，氟卡替松丙酸酯通常采用每天两次的给药方式。

本发明化合物对其有效的疾病的实例包括皮肤疾病如湿疹、牛皮癣、过敏性皮炎、神经性皮炎、瘙痒和超敏性反应；鼻子、咽喉或肺部的炎性疾病如哮喘(包括过敏引起的哮喘反应)、鼻炎(包括枯草热)、鼻息肉、慢性阻塞性肺病、间质性肺部疾病和纤维变性；炎性肠疾病如溃疡性结肠炎和节段性回肠炎；及自体免疫性疾病如风湿性关节炎。

本发明的化合物也可用于治疗结膜和结膜炎。

本领域的技术人员将理解此中涉及的治疗延伸到预防以及已确定的疾病的治疗。

如上所述，式(I)化合物用于人药或兽药，特别是作为一种抗炎和抗过敏剂。

因此，作为本发明的另一方面提供式(I)化合物或其生理学上可接受的溶剂合物用于人药或兽药，特别是用于治疗患炎性和/或过敏性疾病的患者的治疗，尤其是对于每天一次的治疗。

按照本发明的另一个方面，提供式(I)化合物或其生理学上可接受的溶剂合物在制备治疗患炎性和/或过敏性疾病的患者的药物中的用途，尤其是在制备用于每天一次治疗的药物中的用途。

在另外一个或备选的方面，提供一种治疗患炎性和/或过敏性疾病的人或动物患者的方法，该方法包括给予所述人或动物患者有效量的式(I)化合物或其生理学上可接受的溶剂合物，尤其是每天给药一次。

按照本发明的化合物可以进行配制，以便以任何常规的方式给药，因此本发明的范围也包括含有式(I)化合物或其生理学上可接受的溶剂合物，如果需要，以及一种或多种生理学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物。适宜每天给药一次的药用组合物具有特别重要的意义。

另外，提供一种制备此类含有混合的成分的药用组合物的方法。

例如，按照本发明的化合物可以配制为口服给药、口腔给药、舌下给药、胃肠外给药、局部或直肠给药，尤其是局部给药。

此中使用的局部给药包括通过吹入和吸入给药。对于局部给药，各种类型制剂的实例包括软膏、洗液、乳膏、凝胶体、泡沫、通过透皮贴剂传递的制剂、散剂、喷雾剂、气雾剂、胶囊或用于吸入器或吹入器的药筒或滴剂(滴眼剂或滴鼻剂)、用于喷雾的溶液/悬浮液、栓剂、阴道栓剂、保留灌肠剂和可咀嚼的或可吮吸的片剂或药丸(如治疗口疮性溃疡)或脂质体或微包囊制剂。

肺部局部给药的便利组合物包括干燥的粉末组合物和喷雾组合物。

例如，局部传递到肺部的干燥粉末组合物可以以胶囊或用于明胶的吸入器或吹入器的药筒形式存在。为了吸入本发明的化合物，制剂通常含有一种粉末混合物和一种适宜的粉末基质如乳糖和淀粉。每粒胶囊或药筒通常可含有在20μg-10mg之间的式(I)化合物。作为选择，本发明所述化合物可以不含赋形剂。所述制剂的包装可为适于单位剂量或多剂量传递。在多剂量传递的情况下，所述制剂可以以预计的量(如在Diskus中，见GB 2242134或Diskhaler，见GB2178965，2129691和2169265)或计量使用(如在Turbuhaler，见EP 69715)。单位剂量装置的一个实例为Rotahaler(见GB 2064336)。所述Diskus吸入装置包含一个底部薄片形成的伸长带，沿着它的长度具有很多个隔开的凹孔，以及一个盖片(lid sheet)，密封地但是可剥落地密封于其上，以限定多个容器(a plurality of containers)，其中每个容器含有可吸入制剂，该制剂含有最好与乳糖混合的式(I)化合物。最好，所述带是十分地柔韧以便将其绕成一卷。所述盖片和底部薄片最好具有多个彼此未密封的前端部分(leading end portions)，并且使至少一个前端部分与卷绕装置相连。而且，在底部和盖片之间的密封条最好延伸到其整个宽度。盖片最好在纵向上由所述底部薄片的第一个末端从底部薄片上剥落。

非加压并适合作为干燥粉末经口腔局部对肺部局部给药的药用制剂(尤其是那些没有赋形剂或用稀释剂或载体如乳糖或淀粉，最特别的是用乳糖配制的制剂)是特别重要的。

例如，喷雾组合物可配制为水溶液或悬浮液或使用适当的液化抛射剂的由加压包，如计量剂量的吸入器传递的气雾剂。适宜于吸入的气雾剂组合物可为悬浮液或溶液并且通常含有式(I)化合物和适宜的抛射剂如氟化碳或含氢的氯氟化碳或它们的混合物，特别是氢氟化烷烃，具体地说为1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷或它们的混合物。所述气雾剂组合物可任选含有本领域众熟知的另外的制剂赋形剂如表面活性剂如油酸或卵磷脂和助溶剂如乙醇。一个举例的制剂为没有赋形剂的并且基本上由式(I)化合物(最好为非溶剂化形式如式1)(任选与另一种治疗活性成分组合)和选自1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷和它们的混合物的抛射剂组成。按照WO94/21229所述，另一个制剂实例包含微粒状的式(I)化合物、选自1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷和它们的混合物的抛射剂和一种悬浮剂，该悬浮剂可溶于所述抛射剂中，如一种低聚乳酸(oligolactic acid)或其衍生物。优选的抛射剂为1，1，1，2-四氟乙烷。按照本说明书其它地方所述，式(I)化合物没有与1，1，1，2-四氟乙烷形成溶剂合物。加压的制剂通常被保留在一个用阀(如一个计量阀)关闭的小筒中(如铝罐)并且该小筒被装配到一个配有接口管的传动装置上。

加压的气雾剂最好不含有微粒状的药物、抛射剂和一种含有水添加剂(即除初生制剂(nascent formulation)中的水外，另外加入的水)的稳定剂。加压气雾剂制剂也最好不含有微粒状的药物、抛射剂和一种含有氨基酸、其衍生物或其混合物的稳定剂。

通过吸入给予的药物希望具有一种可控制的粒径。吸入支气管系统的最佳粒径通常为1-10μm，优选2-5μm。当吸入到达细导气管时，具有20μm以上粒径的微粒大大。为了达到所述粒径，通过常规的方式如通过粉碎可减小所产生的式(I)化合物微粒的粒径。通过风力分粒或筛选分离所需的部分。最好，所述微粒为晶粒，例如通过下述方法制备，所述方法包括在一个连续流动室中，在超声辐射的存在下，将在一种液体溶剂中作为药物的式(I)化合物的流动溶液与所述药物的流动的液体反溶剂(antisolvent)混合(如国际专利申请PCT/GB99/04368中所述)，或通过另一种方法制备，该方法包括让在一种液体溶剂中的所述物质的溶液流和所述药物的液体反溶剂流按切线方向进入一个圆柱的混合室中，所述混合室有一个轴向出口，由此使所述流通过形成涡流而充分地混合并因此引起所述物质的结晶微粒沉淀(如在国际专利申请PCT/GB00/04327中所述)。当采用一种如乳糖的赋形剂时，通常所述赋形剂的微粒粒径将比所吸入的本发明范围内的药物粒径的大。当所述赋形剂为乳糖时，通常为粉碎的乳糖，其中不超过85％的乳糖微粒将具有60-90μm的MMD并且不到15％将具有小于15μm的MMD。

局部对鼻给药的制剂(如治疗鼻炎)包括加压的气雾剂制剂和通过加压泵对鼻给药的水性制剂。非加压并适合于局部对鼻腔给药的制剂是特别重要的。为此目的，所述制剂最好含有水作为稀释剂或载体。对肺部或鼻给药的水性制剂可以包括常规的赋形剂如缓冲剂、张力改进剂等。水性制剂也可通过雾化对鼻给药。

其它可能的陈述包括如下：

例如，软膏、乳膏和凝胶可用水性基质或油性基质与其它适宜的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂进行配制。例如，这样的基质可包括水和/或油如液体石蜡或植物油如花生油或蓖麻油，或溶剂如聚乙二醇。按照基质的性质可以使用的增稠剂和胶凝剂包括软石蜡、硬脂酸铝、十六醇十八醇混合物、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、羧基聚亚甲基和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油酯和/或非离子乳化剂。

洗剂可用水性基质或油性基质配制并且一般也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂或增稠剂。

借助任何适宜的粉末基质，例如，滑石粉、乳糖或淀粉可形成外用的粉末剂。可用水性基质或非水基质配制滴剂，所述滴剂也包括一种或多种分散剂、增溶剂、悬浮剂或防腐剂。

如果适当，本发明的所述制剂可通过加入适宜的缓冲剂进行缓冲。

按照本发明，在局部使用的组合物中式(I)的活性化合物的比例取决于所制备制剂的具体类型，但是通常在0.001到10％重量的范围内。可是通常对于大多数类型的制剂来说，所使用的比例最好在0.005到1％并优选0.01到0.5％的范围内。然而，在吸入或吹入的粉末中，使用的比例通常在0.1到5％的范围内。

优选设计的气雾剂制剂能使每个计量剂量或“喷出”的气雾剂含有1μg-2000μg，如20μg-2000μg，优选约20μg-500μg的式(I)化合物。给药可以每天一次或每天几次，例如2、3、4或8次，例如每次给予1、2或3个剂量。式(I)化合物优选每天给药一次或两次，更优选每天一次。气雾剂总的日剂量通常在10μg-10mg如100μg-10mg，优选200μg-2000μg的范围内。

可通过每天施用一次或多次将局部制剂给予患部；可方便地在皮肤上使用封闭敷裹(occlusive dressings)。可以通过一个粘性的贮药库体系来实现连续或延长释药。

例如，对于内用药，按照本发明的化合物可以用常规的方式配制，以用于口服、胃肠外或直肠给药。口服给药的制剂包括糖浆剂、酏剂、散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂，适宜时，所述制剂典型地含有常规的赋形剂如贴合剂、填充剂、滑润剂、崩解剂、湿润剂、悬浮剂、乳化剂、防腐剂、缓冲盐、调味剂、着色剂和/或甜味剂。然而，优选的单位剂型如下所述。

内用制剂的优选剂型为单位剂型，即片剂和胶囊剂。此类单位剂型含有0.1mg到20mg，优选含有2.5到10mg的本发明化合物。

在需要进行全身肾上腺皮质治疗的情况下，通常可通过内用给予按照本发明的化合物。

概括地说，对于内用，制剂可以含有0.05到10％的活性成分，这取决于有关的制剂类型。日剂量可在0.1mg到60mg，如5-30mg之间变化，这取决于所治疗的疾病和所需治疗的持续时间。

缓慢释放或肠溶包衣制剂可能是有利的，特别是对于炎性肠道疾病的治疗。

按照本发明的药用组合物也可与另一种治疗活性剂，例如β₂肾上腺素受体激动剂、抗组胺或抗过敏剂联合使用。因此，在另一方面，本发明提供一种包含式(I)化合物或其生理学上可接受的溶剂合物与另一种治疗活性剂，如β₂肾上腺素受体激动剂、抗组胺或抗过敏剂的联合疗法。

β₂肾上腺素受体激动剂的实例包括沙美特罗(如作为外消旋物或单一的对映体如R-对映体)、沙丁胺醇、福莫特罗、沙甲胺醇、非诺特罗或特布他林及其盐，例如沙美特罗的xinafoate盐、沙丁胺醇的硫酸盐或游离碱或福莫特罗的反丁烯二酸盐。抗组胺剂的实例包括美沙吡林或氯雷他定。

例如，其它适当的联合用药包括其它抗炎性剂如NSAIDs(如色甘酸钠、萘多罗米钠、PDE4抑制剂、白三烯拮抗剂、iNOS抑制剂、类胰蛋白酶和弹性蛋白酶E抑制剂、β-2整联蛋白(integrin)拮抗剂和腺苷2a激动剂)或抗感染剂(如抗生素、抗病毒剂)。

特别重要的是式(I)化合物与磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂的联合使用。用于本发明的这一方面的所述PDE4-特异性抑制剂可为已知的抑制该PDE4酶的任何化合物或发现为起一种PDE4抑制剂作用的任何化合物，并且所述化合物仅仅为PDE4抑制剂，而不是抑制PDE家族的其它成员及PDE4的化合物。通常优选使用具有大约0.1或更大的IC₅₀比率的PDE4抑制剂，所述比率即高亲和力结合咯利普兰的PDE4催化形式的IC₅₀除以低亲和力结合咯利普兰的IC₅₀。为了本公开的目的，低亲和力结合R和S咯利普兰的cAMP催化位点称为“低亲和力”结合位点(LPDE 4)，而高亲和力结合咯利普兰的该催化位点的其它形式称为“高亲和力”结合位点(HPDE 4)。术语“HPDE 4”不应该与术语“hPDE4”混淆，“hPDE4”用于表示人PDE4。进行最初的实验以便建立和确证[³H]-咯利普兰结合分析。在以下详细描述的结合分析中给出了该工作的详细资料。

用于本发明的优选的PDE4抑制剂将为那些具有有益的治疗比率的化合物，即优先抑制cAMP催化活性的化合物，其中所述酶为低亲和力结合咯利普兰的形式，因此降低显然与抑制高亲和力结合咯利普兰的形式有关的副作用。阐述这点的另外方式为优选的化合物具有大约0.1或更大的IC₅₀比率，即高亲和力结合咯利普兰的PDE4催化形式的IC₅₀除以低亲和力结合咯利普兰形式的IC₅₀的比率。

该标准的进一步改进在于其中PDE4抑制剂具有大约0.1或更大的IC₅₀比率，，以1μM[³H]-cAMP作为底物，所述比率为与1nM[³H]R-咯利普兰竞争结合到高亲和力结合咯利普兰的PDE4形式上的IC₅₀值与抑制低亲和力结合咯利普兰的形式的该PDE4催化活性的IC₅₀值的比率。

使用的PDE4抑制剂的实例为：

(R)-(+)-1-(4-溴苄基)-4-[(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮；

3-(环戊基氧基-4-甲氧基苯基)-1-(4-N′-[N2-氰基-S-甲基-异硫脲基]苄基)-2-吡咯烷酮；

顺4-氰基-4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)环己-1-羧酸]；

顺-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己-1-醇]；

(R)-(+)-[4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)吡咯烷-2-亚基(pyrrolidine-2-ylidene)]乙酸乙酯；和

(S)-(-)-[4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)吡咯烷-2-亚基]乙酸乙酯。

最优选那些具有大于0.5的IC₅₀比率的PDE4抑制剂，并且特别是那些具有大于1.0的比率的化合物。优选的化合物为顺4-氰基-4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)环己烷-1-羧酸，2-甲酯基-4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-酮和顺-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-醇]；这些是优选结合到低亲和力结合位点并具有0.1或更大的IC₅₀比率的化合物。

其它重要的化合物包括：

1996年9月3日授权的美国专利5,552,438中阐述的化合物；该专利和其公开的化合物通过引用全文结合到本文中。公开于美国专利5,552,438的特别重要的化合物为顺-4-氰基-4-[3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-羧酸(也称为cilomalast)及其盐、酯、药物前体或物理形式；来自Astra(Hofgen，N等，第15 EFMC Int Symp Med Chem(Sept6-10，Edinburgh)1998，Abst P.98)的AWD-12-281；命名为NCS-613(INSERM)的一种9-苄基腺嘌呤衍生物；来自Chiroscience和Schering-Plough的D-4418；确定为CI-1018(PD-168787；Parke-Davis/warner-Lambert)的苯并二氮杂PDE4抑制剂；Kyowa Hakko公开于WO 9916766的苯并间二氧杂环戊烯衍生物；来自Napp(Landells，L.J.等Eur Resp J [Annu Cong Eur Resp Soc(Sept 19-23，Geneva)1998]1998，12(Suppt.28)：Abst P2393)的V-11294A；罗氟司特(CAS参考号162401-32-3)和来自Byk-Gulden的pthalazinone(WO 9947505)；或确定为T-440的化合物(Tanabe Seiyaku；Fuji，K.等.J Pharmacol Exp Ther，1998，284(1)：162)。

磷酸二酯酶和咯利普兰结合分析

分析方法1A

确定分离的人单核细胞PDE4和hrPDE(人重组PDE4)主要以低亲和力的形式存在。因此，受试化合物抑制PDE4的低亲和力形式的活性可用采用1μM[³H]-cAMP作为底物的PDE4催化活性的标准分析法进行评价(Torphy等，J.of Biol.Chem.，267卷，3号，1798-1804页，1992)。

使用大鼠大脑高速上清液作为蛋白质源并且将[³H]-咯利普兰的两种对映体制备为25.6Ci/mmol的特异性活性。由公开的程序修改标准分析条件以便符合PDE分析条件，除了最后的cAMP之外：50mMTris HCl(pH7.5)，5mM MgCl₂，50μM 5′-AMP和1nM[³H]-咯利普兰(Torphy等，J.of Biol.Chem.，267卷，3号，1798-1804页，1992)。在30℃进行该分析1小时。终止该反应并且用一个Brandel细胞收集器分离结合的配体与游离的配体。在与那些用于测量低亲和力PDE活性的条件相同的条件下，除了不存在[³H]-cAMP之外，评估高亲和力结合位点的竞争。

分析方法1B

测量磷酸二酯酶活性

按照供应商(Amersham Life Sciences)所述用[³H]cAMP SPA或[³H]cGMP SPA酶分析法分析PDE活性。在室温下，在0.1ml含有以下成分(终浓度)的反应缓冲液中，在96孔平皿中进行该反应：50mMTris HCl，pH7.5，8.3mM MgCl₂，1.7mM EGTA，[³H]cAMP或[³H]cGMP(大约2000dpm/pmol)，酶和各种浓度的抑制剂。使该分析进行1小时并且在硫酸锌的存在下通过加入50μl SPA硅酸钇珠终止该分析。振摇该平皿并使其在室温下放置20分钟。通过闪烁光谱测定法评价放射标记产品的形成。

[ ³ H]R-咯利普兰结合分析

通过修改的Schneider和及其同事的方法进行[³H]R-咯利普兰结合分析，见Nicholson等，Trends Pharmacol.Sci.，Vol.12，19-27页(1991)和McHale等，Mol.Pharmacol.，Vol.39，109-113(1991)。R-咯利普兰结合到PDE4的所述催化位点，见Torphy等，Mol.Pharmacol.，Vol.39，376-384页(1991)。因此，[³H]R-咯利普兰结合的竞争提供独立的未标记竞争物的PDE4抑制剂效力的证实。在30℃下，在0.5μl含有以下成分(终浓度)的缓冲液中进行该分析1小时：50mM Tris HCl，pH7.5，5mM MgCl₂，0.05％牛血清白蛋白，2nM[³H]R-咯利普兰(5.7×104dpm/pmol)和各种浓度的非放射性标记的抑制剂。通过加入2.5ml冰冷却的反应缓冲液(没有[³H]-R-咯利普兰)中止反应和通过Whatman GF/B过滤器快速真空过滤(Brandel细胞收集器)，所述过滤器一直浸在0.3％聚乙烯亚胺中。用另外7.5ml冷缓冲液洗涤该滤器、干燥并经液体闪烁光谱测定法计数。

因此，在另一方面本发明提供一种含有式(I)化合物或其生理上可接受的溶剂合物与一种PDE4抑制剂的组合。

涉及以上的组合可方便地存在用于形成一种药用制剂，因此含有一种如上定义的组合与一种生理学上可接受的稀释剂或载体的药用制剂代表了本发明的另外一个方面。

此类组合的各化合物可顺序或同时以分离的或组合的药用制剂给药。本领域的那些技术人员将容易地确定已知治疗剂的适宜剂量。

令人惊讶的是，已经证实式(I)化合物显然倾向于与通常使用的有机溶剂形成溶剂合物。此类溶剂合物基本上是化学计量的，如式(I)化合物与溶剂的比率接近1∶1，如按照Applicant’s分析已经确定所述比率在0.95-1.05∶1范围内。例如，我们用溶剂如丙酮、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAc)、四氢呋喃(THF)、N-甲基-2-吡咯烷酮、异丙醇和甲基乙基酮制备溶剂合物。然而式(I)化合物的溶剂化是不可预测的，因为以前我们已经发现，即使用异丙醇形成一种溶剂合物但用乙醇或甲醇似乎不能形成溶剂合物。另外，用1，1，1，2-四氟乙烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲苯、甲基异丁基酮(MIBK)或水似乎也不能形成溶剂合物。然而由于许多有机溶剂的毒性，为了使式(I)化合物能够以非溶剂化形式产生，有必要开发最后阶段的特殊处理条件(后面讨论)。因此，按照本发明的另一方面，提供一种非溶剂化形式的式(I)化合物。

令人惊讶的是，我们也发现非溶剂化形式的式(I)化合物可以存在许多多晶型的形式。准确地说我们已经鉴别可通过X-射线粉末衍射(XRPD)鉴别的多晶型形式，将其命名为形式1、形式2和形式3。形式3看来是形式2的不稳定的较次要的(minor)多晶型变型(modification)。

广义地说，所述形式在它们的XRPD图中的特征如下：

形式1：峰在大约18.9度2θ

形式2：峰在大约18.4和21.5度2θ

形式3：峰在大约18.6和19.2度2θ

在21-23度2θ的范围内，形式3出现一个单峰而形式2出现一个双峰。在所有的情况中都存在一个7度2θ的峰，然而该峰在形式2和3的情形下比形式1的情形下以高得多的强度存在。

所述多晶型的XRPD图在图1中显示有重叠。在环境温度下、在一种含水浆状物中形式2向形式1随时间的转换显示于图2中。在形式2向形式1的转换中，形式2(标记为B)在大约18.4度2θ的特征峰的丢失，在大约7度2θ(标记为A)的峰的强度显著降低和在大约18.9度2θ的形式1的特征峰(标记为C)的出现是特别值得注意的。

形式3对温度的依赖显示于图4中。所述温度按照显示于图5的分布图变化。从图4可以看出，在30-170℃的温度范围内，形式3首先转换为形式2，然后在170-230℃的温度范围内转化为形式1。在形式3向形式2的转化中，在21-23度2θ范围内的一个峰分裂为在同样范围内的两个峰并且在大约18.6度2θ的峰左移到大约18.4度2θ是特别值得注意的。在形式2向形式1的转换中，可观察到在前面段落中那些值得注意的类似变化。

形式1的差式扫描量热法(DSC)和热重量分析法(TGA)分布图显示于图3中。所述分布图的特征在于，在大约280-300℃(典型地接近298℃)的转变与在DSC中的吸热活动和在TGA中的化学降解转变一致。在进行实验的条件下，形式2和形式3的DSC分布图本质上没有差异，因此DSC对于鉴别3种形式来说，是一种不适宜的技术。在图3中，TGA和DSC分布图在大约298℃以下缺乏活性意味着该物质在正常操作温度下显示好的物理和化学稳定性。

按照实施例所示，在某些有机溶剂中已经测定了形式1和3溶解的焓并且因此评估了从形式3到形式1的5.1-6.7kJ/mol的转变焓。

因此我们优选非溶剂化形式1的式(I)化合物，因为在环境温度下该形式显示是热力学上最稳定的并且也显示对不需要的湿气吸附作用是最不易受影响的(见实施例部分的结果)。然而在其它条件下可优选形式2(或形式3)。

虽然不优选使用溶剂化形式的式(I)化合物，然而我们惊讶地发现某些溶剂化形式具有特别吸引人的物理化学性质，所述性质使它们能在非溶剂化形式的式(I)化合物的制备中用作中间体(如在最后一步除去溶剂)。例如，我们发现某些化学计量的溶剂合物可以以高结晶度的形式作为固体分离。因此作为本发明的一个方面，我们也提供：

作为甲基乙基酮溶剂合物的式(I)化合物

作为异丙醇溶剂合物的式(I)化合物

作为四氢呋喃溶剂合物的式(I)化合物

作为丙酮溶剂合物的式(I)化合物

详细地说我们提供结晶形式的固体的前述溶剂合物。这些溶剂合物的另外一个特别的优点为所述溶剂合物的去溶剂化(如通过加热)导致非溶剂化形式的形成如优选的形式1。前述的溶剂合物具有相当低的毒性并且适宜用于工业规模的生产。作为DMF溶剂合物的式(I)化合物也可以以结晶形式的固体分离，它对用于非溶剂化形式1的前处理(onward processing)也具有重要意义。

可通过此后描述的方法制备式(I)化合物及其溶剂合物，这组成本发明的另一方面。

一种按照本发明的制备式(I)化合物或其溶剂合物的方法，该方法包括使式(II)的硫代酸或其盐的烷基化。

在该方法中，式(II)化合物可与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L的化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物在标准条件下反应。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。

按照此后所述，优选使用为盐的式(II)化合物，特别是与二异丙基乙胺所成的盐。

在一个制备式(I)化合物的优选方法中，任选在一种相转移催化剂的存在下用溴氟甲烷处理式(II)化合物或其盐。一种优选的溶剂为任选在水的存在下的乙酸甲酯，或更优选乙酸乙酯。水的存在改善原料和产品的溶解性并且相转移催化剂的使用导致反应速率增加。可以使用的相转移催化剂的实例包括(但不限于)溴化四丁基铵、氯化四丁基铵、溴化苄基三丁基铵、氯化苄基三丁基铵、溴化苄基三乙基铵、氯化甲基三丁基铵和氯化甲基三辛基铵。THF也成功地用作该反应的溶剂，其中相转移催化剂的存在又提供一种显著加快的反应速率。存在于一种有机溶剂中的产品优选先用酸的水溶液如稀HCl洗涤，以便移去胺化合物如三乙基胺和二异丙基乙胺，然后用碱的水溶液如碳酸氢钠洗涤，以便移去任何未反应的前体式(II)化合物。按照此后所述，如果蒸馏在乙酸乙酯溶液中产生的式(I)化合物并加入甲苯，则结晶析出非溶剂化形式1。

例如，使用G.H.Phillipps等，(1994)Journal of MedicinalChemistry，37，3717-3729所述的方法可从相应的式(III)的17α-羟基衍生物制备式(II)化合物。

例如，所述步骤典型地包括在有机碱如三乙基胺的存在下，加入适宜进行酯化作用的试剂如2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选2-呋喃甲酰卤化物如2-呋喃甲酰氯(至少采用相当于式(III)化合物的2倍摩尔量)。第二摩尔的2-呋喃甲酰氯与式(III)化合物的硫代酸部分反应并且必须除去，如通过与胺如二乙胺反应除去。

然而该方法有缺点，在该方法中被副产物2-呋喃甲酰基二乙基酰胺污染的得到的式(II)化合物不容易纯化。因此我们发明了进行该转化的几种改良方法。

首先在所述改良方法中，我们发现通过使用更大极性的胺如二乙醇胺、获得更高水溶性副产物(在2-呋喃甲酰基二乙醇酰胺的情形中)，使式(II)化合物或其盐能够高纯度地产生，因为所述副产物可通过水洗涤有效地除去。

因此按照本发明的这一方面，我们提供一种制备式(II)化合物的方法，该方法包括：

(a)使式(III)化合物与活化的2-呋喃甲酸衍生物按照每摩尔式(III)化合物至少2摩尔的所述活化衍生物的量反应，得到式(IIA)化合物；

和(b)通过使步骤(a)的产物与一种能够形成水溶性2-呋喃甲酰胺(furoyl amide)的有机伯胺或仲胺碱反应，从式(IIA)化合物中移除硫连接的2-呋喃甲酰基部分。

在该方法的两个特别便利的实施方案中，我们也提供有效纯化终产物的方法，该方法包括

(c1)当将步骤(b)的产物溶解于基本上水不混溶的有机溶剂中时，通过用水洗液洗去步骤(b)产生的酰胺副产物纯化式(II)化合物，或者

(c2)当将步骤(b)的产物溶解于一种水可混溶的溶剂中时，通过用一种含水介质处理步骤(b)的产物，以沉淀出纯的式(II)化合物或其盐来纯化式(II)化合物。

在步骤(a)中，活化的2-呋喃甲酸衍生物可优选为2-呋喃甲酸的一种活化酯，但是更优选为一种2-呋喃甲酰基卤，尤其是2-呋喃甲酰氯。该反应的适宜溶剂为乙酸乙酯或乙酸甲酯(优选乙酸甲酯)(当进行步骤(c1)时)或丙酮(当进行步骤(c2)时)。通常将存在一种有机碱如三乙胺。在步骤(b)中，所述有机碱优选为二乙醇胺。所述碱可适当溶解于溶剂如甲醇中。通常步骤(a)和(b)将在降低的温度如在0和5℃之间进行。在步骤(c1)中，所述水洗液可为水，然而盐水的使用得到较高的产率并因此优选盐水。在步骤(c)中，所述含水介质例如为稀释的酸的水溶液如稀HCl。

按照本发明的有关方面，我们提供一种制备式(II)化合物的备选方法，该方法包括：

(a)使式(III)化合物与2-呋喃甲酸的活化衍生物以每摩尔式(III)化合物至少2摩尔的活化衍生物的量反应，以便得到式(IIA)化合物；和

(b)通过使步骤(a)的产物与另外一摩尔的式(III)化合物反应，从使(IIA)化合物中除去硫连接的2-呋喃甲酰基部分，以获得二摩尔式(II)化合物。

在步骤(a)中，2-呋喃甲酸的活化衍生物可优选为2-呋喃甲酸的一种活化酯，但是更优选为2-呋喃甲酰基卤，尤其是2-呋喃甲酰氯。该步骤的适宜溶剂为丙酮。通常将存在一种有机碱如三乙胺。在步骤(b)中，适宜的溶剂为DMF或二甲基乙酰胺。通常将存在一种有机碱如三乙胺。通常步骤(a)和(b)将在降低的温度如在0和5℃之间进行。可通过用酸处理并用水洗涤分离所述产物。

上述方法是十分有效的，该方法不产生任何呋喃甲酰胺(furoylamide)副产物(因此还特别提供环境优势)因为过量摩尔的呋喃甲酰基部分通过与另外摩尔的式(II)化合物反应形成另外一摩尔的式(II)化合物而被消耗。

另外在刚刚描述的两种方法中，式(III)化合物转化为式(II)化合物的其它一般条件将是本领域技术人员所熟知的。

然而，按照优选的设置条件，我们发现式(II)化合物可便利地以固体结晶盐的形式分离。优选的盐为与碱如三乙胺、2，4，6-三甲基吡啶、二异丙基乙胺或N-乙基哌啶形成的盐。式(II)化合物的此类盐形式比游离的硫代酸更加稳定、更容易过滤和干燥并且可以更高的纯度分离。最优选的盐为与二异丙基乙胺形成的盐。所述三乙胺盐也是重要的。

可依照描述于GB 2088877B的方法制备式(III)化合物。

也可通过一种包括以下步骤的方法制备式(III)化合物：

步骤(a)包括氧化一种含有式(V)化合物的溶液。优选在一种包括甲醇、水、四氢呋喃、二噁烷或二甘醇二甲醚的溶剂的存在下进行步骤(a)。为了提高产率和产量，优选的溶剂为甲醇、水或四氢呋喃，而更优选水或四氢呋喃，特别是水和四氢呋喃作为溶剂。二噁烷和二甘醇二甲醚也是优选的溶剂，可任选(和优选)与水一起使用。优选所述溶剂以相对于原料量(1wt.)的3-10体积，更优选在4-6体积，特别是5体积的量存在。优选所述氧化剂以相对于原料量的1-9摩尔当量的量存在。例如，当采用50％w/w的高碘酸水溶液时，所述氧化剂可以以相对于原料量(1wt)的1.1-10wt，更优选1.1-3wt，特别是1.3wt的量存在。所述氧化步骤优选包括使用化学氧化剂。更优选所述氧化剂为高碘酸或碘酸或其盐。最优选所述氧化剂为高碘酸或高碘酸钠，尤其为高碘酸。作为选择(或另外)，所述氧化步骤可包括任何适宜的氧化反应，这也是适宜的，如利用空气和/或氧的氧化反应。当所述氧化反应利用空气和/或氧时，在所述反应中使用的溶剂应优选为甲醇。步骤(a)优选包括在室温或稍温热，例如大约25℃下孵化所述试剂2小时。通过加入一种反溶剂从该反应混合物中重结晶分离式(IV)化合物。对式(IV)化合物的一种适宜的反溶剂为水。令人惊讶的是，我们发现在通过加入反溶剂如水使式(IV)化合物沉淀时控制其条件是非常理想的。当用冷却的水(如0-5℃温度的水/冰混合物)进行所述重结晶时，虽然可以期望更好的反溶剂性质，我们发现所产生的结晶产物是很大的(voluminous)，类似一种软凝胶体并且很难过滤。不受理论的限制，我们相信这种低密度的产物在该晶格内含有大量的溶剂化的溶剂。相反当使用大约10℃或更高温度(如环境温度)的条件时，产生一种十分容易过滤的坚硬度(consistency)类似沙子的颗粒产物。在这些条件下，典型地结晶作用在大约1小时后开始并且通常在几小时(如2小时)内完成。不受理论的限制，我们相信该粒状产物在该晶格内含有很少或不含溶剂化的溶剂。

步骤(b)典型地包括在一种适宜的溶剂如二甲基甲酰胺的存在下，加入一种适宜将羧酸转化为硫代羧酸的试剂，如使用硫化氢气体与一种适宜的偶合剂如羰基二咪唑(CDI)。

一种制备式(II)化合物的备选方法包括在适宜的溶剂如DMF的存在下，用一种适宜将羧酸转化为硫代羧酸的试剂如使用硫化氢气体与适宜的偶合剂如CDI处理式(X)化合物。式(X)化合物可通过类似于此中所述的方法制备。

一种制备式(I)化合物或其溶剂合物的备选方法包括使式(VI)化合物与氟源反应。

适宜的氟源的实例包括氟化物(如氟化钠)或更优选HF。优选的试剂为HF水溶液。可使用一种如THF或DMF的溶剂。

通过一种包括以下的方法可制备式(VI)化合物：

(a)使式(VII)化合物或其盐烷基化；

(b)使式(VIII)化合物与一种环氧化物试剂反应；或

(c)使式(IX)化合物酯化

在方法(a)中，可以采用类似于上述那些将式(II)化合物转化为式(I)化合物的条件。式(VII)化合物典型地将与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。

方法(b)优选以两步进行：(i)形成一种卤代醇，尤其是溴代醇(如通过与溴代烷(bormodan)或相当的试剂反应)，随后(ii)用碱如氢氧化钠处理以便使环闭合。步骤(i)的产物为一种式(IXA)化合物，该化合物为一种新的中间体，如果需要可以分离，

其中X为卤素，尤其是Br。

在方法(c)中，一种适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。该反应可在升高的温度如大约60℃下进行或在一种酰化作用催化剂如二甲基氨基吡啶(DMAP)的存在下于环境温度进行。

通过包括酯化式(XI)化合物的方法制备式(VII)化合物。

可以采用类似于上述那些转化式(III)化合物为式(II)化合物的条件。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。式(XI)化合物是已知的(J Labelled Compd Radiopharm(1997)39(7)567-584)。

通过一种包括以下的方法可制备式(VIII)化合物：

(a)使式(XII)化合物或其盐烷基化；

(b)使式(XIII)化合物酯化；

在方法(a)中，可以采用类似于上述那些转化式(II)化合物为式(I)化合物的条件。式(XII)化合物典型地将与其中L为离去基团(如卤素原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。

在方法(b)中，可以采用类似于以上采用的将那些式(IX)化合物转化为式(VI)化合物的条件。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。

通过采用已经描述的类似方法(如通过与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应)，使相应的硫代酸(XI)和(XIV)(如下定义)烷基化可制备式(IX)和(XIII)化合物。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。所述硫代酸(XI)是已知的化合物(J Labelled CompdRadiopharm(1997)39(7)567-584)。

通过一种包括酯化式(XIV)化合物或其盐的方法可制备式(XII)化合物。

可用类似于已经描述的方法进行本方法。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。

例如，通过类似于上述转化式(IV)化合物为式(III)化合物的方法可从相应的羧酸制备式(XIV)化合物。上述相应的羧酸是已知的(Upjohn，WO 90/15816)。

另一个制备式(I)化合物或其溶剂合物的替代方法包括使其中11-β-羟基基团被保护或掩蔽的式(I)化合物去保护或去掩蔽。首先此方法包括使式(XV)化合物去保护，

其中P为羟基保护基团。

羟基保护基团P的实例描述于JFW McOmie(Plenum Press 1973)编辑的《有机化学中的保护基团》中或Theodora W Green(John Wileyand Sons，1991)的《有机合成中的保护基团》中。

适宜的羟基保护基团P的实例包括选自以下的基团：碳酸盐、烷基(如叔丁基或甲氧基甲基)、芳烷基(如苄基、对硝基苄基、二苯甲基或三苯甲基)、杂环基团如四氢吡喃基、酰基(如乙酰基或苄基)和甲硅烷基如三烷基甲硅烷基(如叔丁基二甲基甲硅烷基)。通过常规的技术可除去羟基保护基团。因此，例如通过用碱处理可除去碳酸盐并且通过溶剂分解如在酸性或碱性条件下水解可除去烷基、甲硅烷基、酰基和杂环基团。类似地可通过溶剂分解如在酸性条件下的水解除去芳烷基基团如三苯甲基。芳烷基基团如苄基或对硝基苄基可通过在贵金属催化剂如披钯碳的存在下氢解而裂解。对硝基苄基也可通过光解而裂解。

所述11-β-羟基基团可被掩蔽作为羰基基团。因此第二个这样的方法包括式(XVI)化合物的还原。

如通过用一种氢化物还原试剂如氢硼化物如氢硼化钠处理可还原得到式(I)化合物。

11-酮(XVI)也可以被掩蔽。式(XVI)化合物的掩蔽衍生物的实例包括(i)酮缩醇衍生物如通过用醇如甲醇、乙醇或乙-1，2-二醇处理式(XVI)化合物形成的酮缩醇，(ii)酮缩二硫醇(dithioketal)衍生物如通过用硫醇如甲硫醇、乙硫醇或1，2-二硫乙醇处理式(XVI)化合物形成的酮缩二硫醇，(iii)酮缩一硫醇衍生物如通过用如1-羟基-2-硫乙醇处理式(XVI)化合物形成的酮缩一硫醇，(iv)通过用一种醇胺如麻黄碱处理式(XVI)化合物形成的衍生物，(v)通过用胺处理式(XVI)化合物形成的亚胺，(vi)通过用羟基胺处理式(XVI)化合物形成的肟。我们要求保护作为本发明的一个方面的式(XVI)化合物的此类衍生物。

这些掩蔽衍生物可通过常规的方法转化回到所述酮，如通过用稀酸处理将酮缩醇、亚胺和肟转化为羰基并且通过P.C.Bulman Page等(1989)，Tetrahedron，45，7643-7677和此中的参考文献所描述的各种方法将酮缩二硫醇转化为酮。

通过一种包括以下的方法可制备式(XV)化合物

(a)使式(XVII)化合物或其盐烷基化，

其中P为羟基保护基团；

或(b)使式(XVIII)化合物酯化；

在步骤(a)中，可以采用类似于上述式(II)化合物转化为式(I)化合物的那些条件。式(XVII)化合物典型地将与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。

在步骤(b)中，可以采用类似于上述那些转化式(IX)化合物为式(VI)化合物的条件。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如一种活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺的存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。

通过用类似于已经描述的方法(如通过与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应)使相应的硫代酸烷基化制备式(XVIII)化合物。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。所述相应的硫代酸是已知的化合物或可通过标准方法进行制备。作为选择，可通过保护相应的羟基衍生物制备式(XVIII)化合物。

通过包括酯化式(XIX)化合物或其盐的方法，可制备式(XVII)化合物，

其中P为羟基保护基团。

可用类似于已经描述的那些转化式(III)化合物为式(II)化合物的方法进行本方法。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺的存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。

通过保护相应的羟基衍生物(III)，首先保护所述硫代酸，然后去保护，可制备式(XIX)化合物。

通过一种包括以下的方法可制备式(XVI)化合物

(a)使式(XX)化合物或其盐或它的其中11-羰基基团被掩蔽的衍生物烷基化；或

(b)使式(XXI)化合物或其中11-羰基基团被掩蔽的衍生物酯化。

在步骤(a)中，可以采用类似于上述那些将式(III)化合物转化为式(II)化合物的条件。式(XX)化合物典型地将与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。

在步骤(b)中，可以采用类似于上述那些将式(IX)化合物转化为式(VI)化合物的条件。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。

可通过用类似于已经描述的方法(如通过与其中L为离去基团(如卤原子、甲磺酰基或甲苯磺酰基等)的式FCH₂L化合物，如一种适宜的氟甲基卤化物，在标准条件下反应)使相应的硫代酸烷基化，可制备式(XXI)化合物或其其中11-酮基基团被掩蔽的衍生物。所述氟甲基卤化物试剂优选为溴氟甲烷。所述相应的硫代酸是已知的化合物或可通过类似于以前描述的那些方法由相应的羧酸制备。

可通过包括酯化式(XXII)化合物或其中11-酮基基团被掩蔽的衍生物的方法制备式(XX)化合物。

可用类似于已经描述的那些方法进行本方法。例如，适宜的试剂将为2-呋喃甲酸的活化衍生物如活化的酯或优选为在一种有机碱如三乙胺存在下的2-呋喃甲酰基卤化物如2-呋喃甲酰氯。

可通过氧化相应的羟基衍生物(IV)，随后掩蔽该酮基并接着转化所述羧酸基团为硫代酸(见例如将式(IV)化合物转化为(III))制备式(XXII)化合物及其其中11-酮基被掩蔽的衍生物。

另一种备选的制备式(I)化合物或其溶剂合物的方法包括使式(XXIII)化合物，

其中L为离去基团(如不为氟化物的卤化物如氯化物、碘化物或磺酸酯如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯(triflate)与一种氟源反应。

所述氟源优选为氟化物离子如KF。所述转化的进一步的详细资料可通过参考G.H.Phillipps等，(1994)Journal of Medicinal Chemistry，37，3717-3729或J Labelled Compd Radiopharm(1997)39(7)567-584而获得。

可通过类似于那些此中所述的方法制备式(XXIII)化合物。要求保护作为本发明的一个方面的相应的新中间体式(VI)、(VIII)、(IX)、(IXA)、(XV)和(XVI)，其中的-CH₂F基团可用-CH₂L基团代替(其中L为除氟以外的离去基团)。

制备式(I)化合物或其溶剂合物的另一个可选择的方法包括其中3-羰基基团被保护或掩蔽的式(I)化合物的衍生物的去保护或去掩蔽。

用上述与掩蔽11-羰基位置有关的类似方法掩蔽所述3-羰基基团。因此所述3-羰基可作为酮缩醇、酮缩一硫醇、酮缩二硫醇、与醇胺形成的衍生物、肟或亚胺被掩蔽。通过常规的方法恢复该羰基基团如通过用稀酸处理将酮缩醇转化为羰基和通过P.C.Bulman Page等(1989)，Tetrahedron，457643-7677及此中参考文献所述的各种方法将酮缩二硫醇转化为酮基。

某些中间体化合物是新的，作为本发明的一个方面，我们提供这些化合物以及它们的适宜的盐和溶剂合物。

按照以上所述，作为本发明的一个特别的方面，我们提供一种制备非溶剂化形式的式(I)化合物的方法，该方法包括：

(a)在非溶剂化的溶剂如乙醇、甲醇、水、乙酸乙酯、甲苯、甲基异丁基酮或它们的混合物的存在下，使式(I)化合物结晶；或

(b)如通过加热使溶剂化形式(如与丙酮、异丙醇、甲基乙基酮、DMF和四氢呋喃形成的溶剂化形式)的式(I)化合物去溶剂化。

在步骤(b)中，所述去溶剂化作用通常在超过50℃的温度下，优选在超过100℃的温度下进行。通常加热将在真空下进行。

也提供通过前述的方法可获得的非溶剂化形式的式(I)化合物。

作为本发明的一个特别的方面，也提供一种制备非溶剂化形式1多晶型的式(I)化合物的方法，该方法包括将式(I)化合物溶解在甲基异丁基酮、乙酸乙酯或乙酸甲酯中并通过加入一种非溶剂化的反溶剂如异辛烷或甲苯产生非溶剂化形式1的式(I)化合物。

按照本方法第一个优选的实施方案，可将式(I)化合物溶解于乙酸乙酯中并且通过加入甲苯作为反溶剂可获得为非溶剂化形式1多晶型的式(I)化合物。为了提高产率，所述乙酸乙酯溶液最好为热的并且一旦加入甲苯，即蒸馏该混合物以减少乙酸乙酯的含量。

按照本方法的第二个优选实施方案，可将式(I)化合物溶解于甲基异丁基酮中并且通过加入异辛烷作为反溶剂可获得非溶剂化形式1多晶型的式(I)化合物。

也提供通过前述方法可获得的为非溶剂化形式1多晶型的式(I)化合物。

一种制备为非溶剂化形式2多晶型的式(I)化合物的方法，该方法包括将非溶剂化形式的式(I)化合物溶解于甲醇或干燥的二氯甲烷中并且使非溶剂化形式2多晶型的式(I)化合物重结晶。通常将式(I)化合物溶解于热甲醇或干燥的二氯甲烷中并让其冷却。

也提供通过前述方法可获得的非溶剂化形式2多晶型的式(I)化合物。

一种制备为非溶剂化形式3多晶型的式(I)化合物的方法，该方法包括在水(通常为1-3％体积的水)的存在下，将式(I)化合物或其溶剂合物(特别是丙酮溶剂合物)溶解于二氯甲烷中并使为非溶剂化形式3多晶型的式(I)化合物重结晶。

也提供通过前述方法可获得的非溶剂化形式3多晶型的式(I)化合物。

式(I)化合物和/或其溶剂合物或多晶型物的优点可包括所述物质似乎显示具有极好的抗炎性质的事实、具有可预计的药动学和药效学行为，具有引人注目的副作用模式(profile)并且与病人的常规治疗方案一致。另外的优点可包括所述物质具有所需的物理和化学性质，这些性质使其容易生产和储存。

附图说明

图1：非溶剂化式(I)化合物的形式1、形式2和形式3多晶型的XRPD分布的重叠

图2：非溶剂化式(I)化合物的形式1、形式2及形式1与形式2多晶型的50∶50混合物的XRPD分布图加上形式1与形式2的50∶50混合物的时间依赖分布图的重叠。

图3：非溶剂化式(I)化合物的形式1多晶型的DSC和TGA分布图

图4：在5个时间点获得的式(I)化合物非溶剂化形式3的温度依赖XRPD的分布图

图5：图4的XRPD实验的温度和时间分布图

以下非限制性实施例阐述本发明：

具体实施方式

概要

在400MHz记录¹H-NMR光谱并以相对于四甲基硅烷的ppm表示化学位移。使用以下缩写表示各种信号的峰裂数：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、dd(二个双峰)、ddd(三个双峰)、dt(二个三峰)和b(宽峰)。Biotage涉及含有在快速12i色谱模块上进行的KP-Sil的预先填充硅胶柱。LCMS在Supelcosil LCABZ+PLUS柱(3.3cm×4.6mm ID)上进行用0.1％HCO₂H和0.01M乙酸铵水溶液(溶剂A)，及0.05％HCO₂H、5％水的乙腈(溶剂B)溶液洗脱，使用以下洗脱梯度以3ml/分的缓慢流速洗脱：0-0.7分钟0％B，0.7-4.2分钟100％B，4.2-5.3分钟0％B，5.3-5.5分钟0％B。在Fisons VG Platform分光计上使用电喷射正和负模式(ES+ve和ES-ve)记录质谱。

用Netzsch STA449C和使用一个具有氮气流和10℃/分的热梯度的未密封面板的热分析器获得DSC和TGA分布图。

用一台Hiden Lgasorb水吸附作用微量天平获得湿气吸附作用特征。该程序提供相对湿度(RH)从0-90％RH的逐步增加，然后以10％RH的幅度减少到0％RH。

显示于图1和2中的XRPD分析在一台Phillips X’pert MPD粉末衍射计(序号DY667)上进行。所述方法运行从2到45度2θ，步长0.02度2θ且每步有1秒收集时间。显示于图4的XRPD分析采用相同的仪器，具有一个Anton Parr TTK热附件，使用从2到35度2θ，步长0.04度2θ及每步1秒收集时间的运行方法。

中间体

中间体1：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸

在＜5℃下，用2-呋喃甲酰氯(11.24ml，114mmol)的无水二氯甲烷(100ml)溶液处理6α，9α-二氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(按照描述于GB 2088877B的方法制备)(18g，43.64mmol)的无水二氯甲烷(200ml)和三乙胺(15.94ml，114mmol)溶液近40分钟。在＜5℃下搅拌该溶液30分钟，通过过滤收集所产生的固体，顺序用3.5％碳酸氢钠水溶液、水、1M盐酸和水洗涤并于60℃在真空下干燥，得到一种乳白色固体。所述二氯甲烷滤液顺序用3.5％碳酸氢钠水溶液、水、1M盐酸、水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发得到一种乳白色固体，将其与以上分离的固体合并。将合并的固体(26.9g)悬浮在丙酮(450ml)中并搅拌。加入二乙胺(16.8ml，162mmol)并在室温下搅拌该混合物4.5小时。浓缩该混合物并通过过滤收集沉淀并用少量丙酮洗涤。合并洗液和滤液，浓缩并上样到硅胶Biotage柱上，该柱用24∶1的氯仿∶甲醇洗脱。合并含有较强极性成分的流分并蒸发得到一种乳白色固体。将其与以上分离的固体合并并且在真空下干燥得到一种浅米白色固体(19.7g)。将其溶解于温水中，用浓盐酸调节pH到2并用乙酸乙酯提取该混合物。干燥(Na₂SO₄)该有机提取液并蒸发，在50℃干燥后得到标题化合物，为一种乳白色固体(18.081g，82％)：LCMS保留时间3.88分钟，m/z 507MH⁺，NMRδ(CDCl₃)包括7.61(1H，m)，7.18-7.12(2H，m)，6.52(1H，dd，J4，2Hz)，6.46(1H，s)，6.41(1H，dd，J10，2Hz)，5.47和5.35(1H，2m)，4.47(1H，bd，J 9Hz)，3.37(1H，m)，1.55(3H，s)，1.21(3H，s)，1.06(3H，d，J 7Hz).

中间体1：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(第一个备选方法)

将6α，9α二氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(按照描述于GB 2088877B的方法制备)(1wt，49.5g)在丙酮(10vol)中的搅拌悬浮液冷却到0-5℃并用三乙胺(0.51wt，2.1eq)处理，保持温度在5℃以下并在0-5℃搅拌5分钟。然后用20分钟以上的时间加入2-呋喃甲酰氯(0.65wt，2.05eq)，维持反应温度在0-5℃。在0-5℃搅拌该反应30分钟，然后用HPLC分析样品。然后用约15分钟的时间加入二乙醇胺(1.02wt，4eq)的甲醇(0.8vol)溶液，随后加入甲醇(0.2vol)线性洗液并在0-5℃搅拌该反应物1小时。再次用HPLC对该反应物进行取样分析，然后温热到大约20℃并用水(1.1wt)处理。然后用HCl(SG1.18(11.5M)，1vol)的水(10vol)溶液处理该反应混合物20分钟，维持反应温度在25℃以下。在20-23℃搅拌该悬浮液至少30分钟，然后过滤。用水(3×2vol)洗涤滤饼。在大约60下，真空中干燥该产物过夜，得到标题化合物，为一种白色固体(58.7g，96.5％)。

中间体1：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(第二个备选方法)

将6α，9α-二氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(按照描述于GB 2088877B的方法制备)(1wt，49.5g)在丙酮(10vol)中的搅拌悬浮液冷却到0-5℃并用三乙胺(0.51wt，2.1eq)处理，保持温度在5℃以下并在0-5℃搅拌5分钟。然后用20分钟以上的时间加入2-呋喃甲酰氯(0.65wt，2.05eq)，维持反应温度在0-5℃。在0-5℃搅拌该反应混合物至少30分钟并用水(10vol)稀释，维持反应温度在0-5℃的范围内。通过过滤收集所产生的沉淀并顺序用丙酮/水(50/502vol)和水(2×2vol)洗涤。在大约55℃下，真空中干燥该产物过夜，得到6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-基S-(2-呋喃基羰基)硫代酸酐，为一种白色固体(70.8g，98.2％)(NMRδ(CD₃CN)0.99(3H，d)(J＝7.3Hz)，1.24(3H，s)，1.38(1H，m)(J＝3.9Hz)，1.54(3H，s)，1.67(1H，m)，1.89(1H，宽峰d)(J＝15.2Hz)，1.9-2.0(1H，m)，2.29-2.45(3H，m)，3.39(1H，m)，4.33(1H，m)，4.93(1H，宽峰s)，5.53(1H，ddd)，(J＝6.9，1.9Hz；J_HF＝50.9Hz)，6.24(1H，m)，6.29(1H，dd)(J＝10.3，2.0Hz)，6.63(2H，m)，7.24-7.31(3H，m)，7.79(1H，dd)(J＝＜1Hz)，7.86(1H，dd)(J＝＜1Hz)).将一部分该产物(0.56g)与6α，9α-二氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(0.41g)以1∶1摩尔比在DMF(10体积重量(wrt)于加入的总类固醇)中混合。用三乙胺(大约2.1当量)处理该反应混合物并在大约20℃搅拌该混合物约6小时。将含有过量浓HCl(0.5vol)的水(50vol)加入到该反应混合物中并通过过滤收集所产生的沉淀。用水(2×5vol)洗涤滤垫并在约55℃下真空中干燥过夜，得到标题化合物，为一种白色固体(0.99g，102％)。

中间体1A：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基 -3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸二异丙基乙胺盐

用三乙胺(35ml)处理6α，9α-二氟-11β，17α-二羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(按照描述于GB 2088877B的方法制备)(49.5g)在乙酸甲酯(500ml)中的搅拌悬浮液，维持反应温度在0-5℃范围内。加入2-呋喃甲酰氯(25ml)并在0-5℃搅拌该混合物1小时。加入二乙醇胺(52.8g)的甲醇(50ml)溶液并0-5℃搅拌该混合物至少2小时。加入稀盐酸(约1M，550ml)，维持反应温度在15℃以下并在15℃搅拌该混合物。分离有机相并用乙酸甲酯(2×250ml)回提水相。合并所有的有机相，顺序用盐水(5×250ml)洗涤并用二异丙基乙胺(30ml)处理。在大气压下通过蒸馏浓缩该反应混合物到约250ml体积并冷却到25-30℃(所需产品的结晶通常在蒸馏/随后冷却期间发生)。加入叔丁基甲基醚(TBME)(500ml)，进一步冷却该浆状物并在0-5℃老化至少10分钟。过滤产物，用冷却的TBME(2×200ml)洗涤并于约40-50℃在真空下干燥(75.3g，98.7％)。NMR(CDCl₃)δ：7.54-7.46(1H，m)，7.20-7.12(1H，dd)，7.07-6.99(1H，dd)，6.48-6.41(2H，m)，6.41-6.32(1H，dd)，5.51-5.28(1H，dddd ²J_H-F50Hz)，4.45-4.33(1H，bd)，3.92-3.73(3H，bm)，3.27-3.14(2H，q)，2.64-2.12(5H，m)，1.88-1.71(2H，m)，1.58-1.15(3H，s)，1.50-1.38(15H，m)，1.32-1.23(1H，m)，1.23-1.15(3H，s)，1.09-0.99(3H，d).

中间体1B：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基 -3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸三乙胺盐

用三乙胺(1.05摩尔当量，8.6ml)处理中间体1(30g)在乙酸乙酯(900ml)中的搅拌悬浮液并在约20℃搅拌该混合物1.5小时。过滤沉淀，用乙酸乙酯(2×2vol)洗涤并在45℃下于真空中干燥18小时，得到标题化合物，一种白色固体(28.8g，80％)。NMR(CDCl₃)δ：7.59-7.47(1H，m)，7.23-7.13(1H，dd)，7.08-6.99(1H，d)，6.54-6.42(2H，m)，6.42-6.32(1H，dd)，5.55-5.26(1H，dddd ²J_H-F50Hz)，4.47-4.33(1H，bd)，3.88-3.70(1H，bm)，3.31-3.09(6H，q)，2.66-2.14(5H，m)，1.93-1.69(2H，m)，1.61-1.48(3H，s)，1.43-1.33(9H，t)，1.33-1.26(1H，m)，1.26-1.15(3H，s)，1.11-0.97(3H，d).

实施例

实施例1：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲酯非溶剂化形式1

将中间体1(2.5g，4.94mmol)的悬浮液溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(25ml)中并加入碳酸氢钠(465mg，5.53mmol)。在-20℃搅拌该混合物并加入溴氟甲烷(0.77ml，6.37mmol)并在-20℃搅拌该混合物2小时。加入二乙胺(2.57ml，24.7mmol)并在-20℃搅拌该混合物30分钟。将该混合物加入到2M盐酸(93ml)中并搅拌30分钟。加入水(300ml)并通过过滤收集沉淀，用水洗涤并在50℃下真空中干燥，得到一种白色固体，将其从丙酮/水中重结晶(以得到6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯)并在50℃下真空中干燥，得到标题化合物(2.351g，88％)：LCMS保留时间3.66分钟，m/z 539MH⁺，NMRδ(CDCl₃)包括7.60(1H，m)，7.18-7.11(2H，m)，6.52(1H，dd，J 4.2Hz)，6.46(1H，s)，6.41(1H，dd，J10，2Hz)，5.95和5.82(2H dd，J 51，9Hz)，5.48和5.35(1H，2m)，4.48(1H，m)，3.48(1H，m)，1.55(3H，s)，1.16(3H，s)，1.06(3H，d，J 7Hz).

药理学活性

体外药理学活性

用糖皮质激素激动剂活性的体外功能分析评估药理学活性，所述糖皮质激素激动剂活性通常预示了体内的抗炎或抗过敏活性。

对于本部分的实验，使用非溶剂化形式1的式(I)化合物。

所述功能分析以K.P.Ray等，Biochem J.(1997)，328，707-715所述为基础。在37℃用适宜剂量的试验化合物处理用报道基因稳定地转染的A549细胞1小时，所述基因含有来自偶合于sPAP(分泌碱性磷酸酶)的ELAM基因启动子的NF-κB效应元件。然后用肿瘤坏疽死子(TNF，10ng/ml)刺激细胞16小时，此时用标准的比色分析法测量产生的碱性磷酸酶的量。建立剂量响应曲线，从该曲线估计EC₅₀值。

在该试验中，实施例1的化合物显示EC₅₀值＜1nM。

糖皮质激素受体(GR)可以以至少两种不同的机理发挥其功能，即通过直接将GR结合到基因启动子的特定序列上向上调节基因表达，以及通过其直接与GR的相互作用向下调节基因表达，该表达受其它转录因子(如NFκB或AP-1)驱动。

在上述各种方法中，为了监测这些功能，两种报道质粒已经产生并通过转染分别被引入A549人肺上皮细胞内。在合成启动子的控制下第一个细胞系含有萤火虫荧光素酶报道基因，当用TNFα刺激时所述合成启动子对转录因子NFκB的激活作出特异性响应。在合成启动子的控制下，第二个细胞系含有renilla荧光素酶报道基因，所述合成启动子包含共同(consensus)糖皮质激素响应元件的3个拷贝，并且对糖皮质激素的直接刺激作出响应。通过以1∶1的比率在96孔平板中混合两种细胞系(每孔40000个细胞)并在37℃生长过夜，以同时测量反式激活和反式阻抑。将试验化合物溶解于DMSO中并以0.7％的DMSO终浓度将其加入到所述细胞中。在培养1小时后加入0.5ng/ml TNFα(R&D Systems)并在37℃下另外15小时后，按照生产商的说明用Packard Firelite试剂盒测量萤火虫和renilla荧光素酶水平。建立剂量效应曲线，从该曲线估计EC₅₀值。

	反式激活(GR)ED₅₀(nM)	反式阻抑(NFκB)ED₅₀(nM)
	反式激活(GR)ED₅₀(nM)	反式阻抑(NFκB)ED₅₀(nM)	式(I)化合物	0.06	0.20
代谢物(X)	＞250	＞1000	式(I)化合物	0.06	0.20
代谢物(X)	＞250	＞1000	氟替卡松丙酸酯	0.07	0.16

体内药理学活性

以卵清蛋白致敏的Brown Norway大鼠嗜酸性粒细胞增多模型评估体内的药理学活性。设计该模型以模拟过敏原诱导的肺嗜酸性粒细胞增多，一种在哮喘肺炎中的主要成分。

对于本部分的实验，使用为非溶剂化形式1的式(I)化合物。

在卵白蛋白刺激前30分钟在经气管内(IT)给予在盐水中的悬浮液后，化合物(I)在该模型中产生肺嗜酸性粒细胞增多的依赖剂量的抑制。在单次给予30μg化合物(I)后达到显著的抑制并且该响应显著(p＝0.016)大于等剂量的氟替卡松丙酸酯在同样研究中所观察到的响应(化合物(I)的69％抑制对氟替卡松丙酸酯的41％抑制)。

在胸腺退化的大鼠模型中，每日3次经IT给予100μg的化合物(I)与在同样研究中给予等剂量的氟替卡松丙酸酯相比，明显地使胸腺的重量减轻更小(p＝0.004)(化合物(I)减轻胸腺重量67％对氟替卡松丙酸酯减轻胸腺重量78％)。

综合这些结果显示化合物(I)比氟替卡松丙酸酯具有更优越的治疗指数。

在大鼠和人肝细胞中的体外代谢

将化合物(I)与大鼠或人肝细胞一起培养显示所述化合物是以与氟替卡松丙酸酯相同方式进行代谢，17-β羧酸(X)是产生的唯一重要的代谢产物。对于将化合物(I)与人肝细胞一起培养(37℃，10μM药物浓度，来自3个患者的肝细胞，0.2和0.7百万个细胞/ml)时该代谢物出现的速率的研究显示化合物(I)代谢比氟替卡松丙酸酯快5倍：

患者数量	细胞密度(百万细胞/ml)	17-β酸代谢物产生(pmol/h)
		17-β酸代谢物产生(pmol/h)		化合物(I)	氟替卡松丙酸酯
		1	0.2	化合物(I)	氟替卡松丙酸酯	48.9	18.8
1	0.7	1	0.2	73.3	35.4	48.9	18.8
1	0.7	2	0.2	73.3	35.4	118	9.7
2	0.7	2	0.2	903	23.7	118	9.7
2	0.7	3	0.2	903	23.7	102	6.6
3	0.7	3	0.2	580	23.9	102	6.6

对于化合物(I)平均代谢物产生102-118pmol/h而对于氟替卡松丙酸酯是18.8-23.0pmol/h。

在大鼠中静脉(IV)或口服给药后的药动学

对雄性Wistar Han大鼠口服给予(0.1mg/kg)和静脉给予(0.1mg/kg)化合物(I)并且测定药动学参数。化合物(I)显示可以忽略口服生物利用度(0.9％)和47.3ml/min/kg的血浆清除率，接近肝血流(氟替卡松丙酸酯的血浆清除率为45.2ml/min/kg)。

在猪中气管内干燥粉末给药后的药动学

气管内给予麻醉猪(2)一种作为在乳糖(10％w/w)中的干燥粉末混合物的化合物(I)(1mg)和氟替卡松丙酸酯(1mg)的均匀混合物。在给药8小时后采集系列血样。在抽取后测定化合物(I)和氟替卡松丙酸酯的血浆水平并用LC-MS/MS方法分析，对于化合物(I)和氟替卡松丙酸酯，所述方法的低限量分别为10和20pg/ml。使用这些方法在给药后最多2小时化合物(I)是可以计量的而氟替卡松丙酸酯在给药后最多8小时是可以计量的。两种化合物在给药后15分钟内观察到最大血浆浓度。IV给药(0.1mg/kg)所获得的血浆半衰期数据用于计算化合物(I)的AUC(0-inf)值。这补偿了IT给药后仅限于2小时内的化合物(I)的血浆分布并消除了因化合物(I)和氟替卡松丙酸酯之间有限数据的任何偏差。

与氟替卡松丙酸酯比较，C_max和AUC(0-inf)值显示显著地降低系统对化合物(I)的接触：

	Cmax(pg/ml)		AUC(0-inf)(hr.pg/ml)
	Cmax(pg/ml)		AUC(0-inf)(hr.pg/ml)			猪1	猪2	猪1	猪2
式(I)化合物	117	81	254	221		猪1	猪2	猪1	猪2
式(I)化合物	117	81	254	221	氟替卡松丙酸酯	277	218	455	495

在麻醉猪中静脉给予0.1mg/kg的两种化合物的混合物后，式(I)化合物和氟替卡松丙酸酯的药动学参数是相同的。在本实验的猪模型中，这两种糖皮质激素的清除率类似。

实施例1：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1(第一种备选方法)

用一种相转移催化剂(氯化苄基三丁基铵，10mol％)处理中间体1A(12.61g，19.8mmol；等于10g中间体1)在乙酸乙酯(230ml)和水(50ml)中的流动性悬浮液，冷却到3℃并用溴氟甲烷(1.10ml，19.5mmol，0.98当量)处理，用预先冷却(0℃)的乙酸乙酯(EtOAc)(20ml)洗涤。搅拌该悬浮液过夜，让其温热到17℃。分离水层，连续用1M HCl(50ml)、1％w/v NaHCO₃(3×50ml)溶液和水(2×50ml)洗涤有机相。在大气压下蒸馏乙酸乙酯溶液直到蒸馏物达到大约73℃的温度，此时加入甲苯(150ml)。在大气压下继续蒸馏直到所有残留的乙酸乙酯全部除去(蒸馏温度大约为103℃)。冷却所产生的悬浮液，在＜10℃老化并过滤。用甲苯(2×30ml)洗涤滤垫并在真空下于60℃干燥该产物至恒重，得到标题化合物(8.77g，82％)。

实施例1：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1(第二种备选方法)

将6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯丙酮溶剂合物(如按照实施例11制备)(50.0g)在丙酮(1500ml)和水(75ml)中的悬浮液加热至回流。通过热过滤(Whatman 54滤纸)使产生的混合物澄清，在此期间在该滤液中一些固体结晶。将另外的丙酮(200ml)加入到该滤液中，在回流下得到一种明亮的溶液。在大气压下蒸馏该溶液直到注意到混浊，同时回流(收集大约750ml溶剂)。将甲苯(1000ml)加入到该热溶液中并继续在大气压下蒸馏，在大约98℃的温度下得到结晶。继续蒸馏溶剂直到达到105℃的反应温度(收集约945ml溶剂)。将该混合物冷却至环境温度，进一步冷却并在＜10℃老化10分钟。过滤该产物，用甲苯(150ml)洗涤并吸收干燥。在真空下于大约60℃干燥该产物16小时，得到标题化合物，为一种密集的白色固体(37.8g，83.7％)。

实施例1产物的XRPD图式显示于图1中。DSC和TGA的分布图显示于图3中。

实施例2：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

非溶剂化形式2

将6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯(例如按照实施例1第一种方法制备)(6.0g)在二氯甲烷(180ml)中的悬浮液加热到回流，得到一种明亮的溶液。通过热过滤(Whatman 54滤纸)使该溶液澄清并在大气压下蒸馏该溶液(收集约100ml溶剂)，在回流下得到结晶。在回流下保持该混合物约30分钟并缓慢地冷却到环境温度。进一步冷却该混合物并在10-20℃老化2小时。冷却该浆状物到10℃以下并滤出该产物、吸收干燥并在真空下于大约60℃干燥该产物过夜，得到一种白色固体(4.34g，71％)。

6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式2的更纯的样品可通过6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯(例如按照实施例1第一种方法制备)在甲醇(60个体积，在大气压下蒸馏到大约37.5个体积)中的冷却结晶作用获得。通过过滤分离该产物并在真空下于60℃烘箱干燥16小时，得到一种白色的静电固体(4.34g，71％)。

实施例2产物的XRPD图样显示于图1中。

实施例3：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

非溶剂化形式3

将6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯丙酮溶剂合物(如按照实施例11制备)(20.0g)在二氯甲烷(800ml，40体积)和水(10ml，0.5体积)中的悬浮液加热到回流，得到一种明亮的溶液。通过热过滤(Whatman54滤纸)使该溶液澄清，在此期间在该滤液中有一些固体结晶，加热至回流使其充分地溶解。在大气压下蒸馏该溶液(收集约400ml溶剂)并让其冷却到环境温度。进一步冷却该混合物并在＜10℃老化10分钟。过滤该产物，吸收干燥并在真空下于大约60℃干燥该产物过夜，得到一种白色固体(12.7g，70％)。

实施例3产物的XRPD图样显示于图1和图4中。

实施例4：非溶剂化的6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯的形式 1、2和3的相互转化

在环境温度下使形式1和形式2在水中的混合物成为浆状物，这显示所述成分随着时间被完全转化为形式1。XRPD结果显示于图2中。通过使形式1和形式2在乙醇中的混合物在环境温度下成为浆状物获得类似的结果。从这些结果可以得出结论，这两种形式中形式1是热力学上更稳定的多晶型物形式。

如图4所示进行关于形式3的热XRPD研究。温度和时间分布图显示于图5中并且5个示于图4的迹线在示于图5的平衡点获得。所述结果指出形式3随着温度升高首先转化为形式2，然后转化到形式1。

实施例5：非溶剂化的6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯的形式 1、2和3的湿气吸附作用

当接触逐步增加然后减少的湿气时，通过监测固体的重量变化测定所述三种形式的湿气吸附特征。获得的结果如下：

形式1：在25℃下、0-90％的相对湿度范围内，吸收0.18％w/w湿气。

形式2：在25℃下、0-90％的相对湿度范围内，吸收1.1-2.4％w/w湿气。

形式3：在25℃下、0-90％的相对湿度范围内，吸收1.2-2.5％w/w湿气。

实施例6：非溶剂化的6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯的形式1 和3的溶解焓

在25℃下测定在DMSO和乙腈中的溶解焓。结果如下：

	形式1	形式3
	形式1	形式3	乙腈	+13.74	+8.62
DMSO	+1.46	-5.21	乙腈	+13.74	+8.62

(结果为kJ/mol)

从这些结果可以确定从形式3到形式1的转换焓为大约5.1-6.7kJ/mol。假定转换熵是小的，因为两种形式皆为非溶剂化，所述转换焓可与自由转换能量相等。因此，这些数据提示形式1在25℃是热力学上最稳定的形式。

实施例7：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

甲基乙基酮溶剂合物

将6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯(例如按照实施例1制备)(400mg)在甲基乙基酮(3.2ml)中的悬浮液加热到回流，得到一种澄清的溶液。在大气压下蒸馏掉一部分溶剂(约1ml)并冷却该混合物到大约20℃。滤出该结晶的产物，在真空下于约20℃干燥，得到标题化合物，为一种白色固体(310mg，68％)。NMRδ(CDCl₃)包括描述于实施例1的母体化合物的峰和以下的另外的溶剂峰：2.45(2H，q)，2.14(3H，s)，1.06(3H，t).

实施例8：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

异丙醇溶剂合物

将6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯(例如按照实施例1制备)(150mg)的异丙醇(15ml)溶液放置大约8周的一段时间以便缓慢结晶。通过过滤分离所产生的短粗的结晶，得到标题化合物，为一种白色固体。NMRδ(CDCl₃)包括描述于实施例1的母体化合物的峰和以下的另外的溶剂峰：4.03(1H，m)，1.20(6H，d).

实施例9：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基- 3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

四氢呋喃溶剂合物

将6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯(例如按照实施例1制备)(150mg)在THF(20vol)中的悬浮液温热以便得到一种澄清的溶液。让溶剂缓慢地蒸发6天的时间，得到标题化合物，为一种白色固体。作为选择，将所述THF溶液滴加到碳酸氢钾(2％w/w)的水(50vol)溶液中并通过过滤收集沉淀的产物，得到标题化合物，为一种白色固体。NMRδ(CDCl₃)包括描述于实施例1的母体化合物的峰和以下另外的

溶剂峰：3.74(4H，m)，1.85(4H，m).

四氢呋喃溶剂合物(选择性的方法)

用一种相转移催化剂(溴化四丁基铵，典型地在8和14mol％之间)处理6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸三乙胺盐(例如按照中间体1B制备)(1.2g)在THF(10ml)中的流动悬浮液，冷却到约3℃并用溴氟甲烷(0.98当量)处理。搅拌该悬浮液2-5小时，让其温热到17℃。将该反应化合物倾注到水(30vol)中，在约10℃下搅拌约30分钟并过滤。用水(4×3vol)洗涤所收集的固体并在真空下于60℃在烘箱中干燥该产物过夜，得到标题化合物，为一种白色固体(0.85g，87％)。

实施例10：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基 -3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

DMF溶剂合物

用碳酸氢钾(0.89g，8.88mmol)处理中间体1(4.5g，8.88mmol)在DMF(31ml)中的混合物并将该混合物冷却到-20℃。在0℃下加入溴氟甲烷(0.95g，8.50mmol，0.98eqv)的DMF(4.8ml)溶液并在-20℃搅拌该混合物4小时。然后在-20℃搅拌该混合物另外30分钟，加入到2M盐酸(100ml)中并在0-5℃搅拌另外30分钟。通过真空过滤收集沉淀，用水洗涤并在50℃下干燥，得到标题化合物(4.47g，82％)。NMRδ(CD₃OD)包括描述于实施例1的母体化合物的峰和以下另外的溶剂峰：7.98(1H，bs)，2.99(3H，s)，2.86(3H，s).

实施例11：6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基 -3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯

丙酮溶剂合物

用碳酸氢钾(0.202wt，1.02eq)处理中间体1(530.1g，1wt)的二甲基甲酰胺(DMF)(8vol)溶液并将该混合物冷却到-17±3℃同时搅拌。然后加入溴氟甲烷(BFM)(0.22wt，0.99eq)并在-17±3℃搅拌该反应物至少2小时。然后在5±3℃用约10分钟以上的时间将该反应混合物加入到水(17vol)中，随后加入水(1vol)线性洗液。在5-10℃搅拌该悬浮液至少30分钟，然后过滤。用水(4×4vol)洗涤该滤饼(6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯的DMF溶剂合物)并在滤器上抽干该产物。将该潮湿的滤饼送回容器中，加入丙酮(5.75vol)并在回流下加热2小时。将该混合物冷却到52±3℃并加入水(5.75vol)，保持温度在52±3℃。然后冷却该混合物到20±3℃，过滤并在真空下于60±5℃干燥过夜，得到所述的标题化合物，为一种白色固体(556.5g，89％)。NMRδ(CDCl₃)包括描述于实施例1的母体化合物的峰和以下另外的溶剂峰：2.17(6H，s).

实施例12：含有6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α- 甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1 的干燥粉末组合物

按照以下制备一种干燥的粉末制剂：

6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1(按照实施例1，第一种备选方法制备并粉碎到3μm的MMD)：0.20mg

粉碎的乳糖(其中不超过85％的微粒具有60-90μm的MMD，不少于15％的微粒具有小于15μm的MMD)：12mg

一种可剥离的泡罩包装条(blister strip)含有60个眼泡，每个泡眼填充一种按照刚刚描述制备的制剂。

实施例13：含有6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α- 甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1 的气雾剂

按照以下用一种制剂填充铝罐：

6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1(按照实施例1，第一种备选方法制备并粉碎到3μm的MMD)：250μg

1，1，1，2-四氟乙烷：至50μl

(每次喷射(actuation)的量)

适宜于120次喷射的总量并且该罐装配了一个适于每次喷射分送50μl的计量阀。

实施例14：含有6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α- 甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1 的滴鼻制剂

按照以下制备一种鼻内传递给药的制剂：

6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯非溶剂化形式1(按照实施例1，第一种备选方法制备并粉碎)：10mg

多乙氧基醚20 0.8mg

脱水山梨醇单月桂酸酯 0.09mg

磷酸二氢钠二水合物 94mg

无水磷酸氢二钠 17.5mg

氯化钠 48mg

软化水到10ml

将该制剂填充到一个能够传递多计量剂量的喷雾泵(Valois)中。

整篇说明书和以下的权利要求，除非本文要求，否则术语“包括(comprise)”和变换的说法如“comprises”和“comprising”均指包括并将理解为意味包括说明的整体或整体的步骤或基团，但不排除任何其它整体或整体的步骤或基团或步骤。

在本说明书中所描述的专利和专利申请通过引用结合到本文中。

Claims

1.一种制备式(II)化合物的方法，

该方法包括：

(a)使式(III)化合物与活化的2-呋喃甲酸衍生物按照每摩尔式(III)化合物至少2摩尔的所述活化衍生物的量反应，以得到式(IIA)化合物；和

(b)通过使步骤(a)的产物与一种能够形成水溶性2-呋喃甲酰胺的有机伯胺或仲胺碱反应从式(IIA)化合物中除去硫连接的2-呋喃甲酰基部分。括步骤：

(c1)当将步骤(b)产物溶解于基本上水不能溶混的有机溶剂中时，通过用水洗液洗去步骤(b)产生的酰胺副产物纯化式(II)化合物，或

(c2)当将步骤(b)产物溶解于一种水可溶混的溶剂中时，通过用一种含水溶媒处理步骤(b)产物以沉淀出纯的式(II)化合物或其盐来纯化式(II)化合物。

3.一种制备式(II)化合物的方法，该方法包括：

(a)使式(III)化合物与2-呋喃甲酸的活化衍生物以每摩尔式(III)化合物至少2摩尔的活化衍生物的量反应，以得到式(IIA)化合物；和

(b)通过使步骤(a)的产物与另外一摩尔的式(III)化合物反应，从式(IIA)化合物中除去硫连接的2-呋喃甲酰基部分以获得两摩尔式(II)化合物，

其中式(II)、式(III)、式(IIA)化合物如权利要求1所定义。

4.一种式(IIA)的化合物

5.一种式(VII)的化合物或其盐

6.一种式(VIII)的化合物

7.一种式(IX)的化合物

8.一种式(IXA)的化合物，

其中X为卤素。

9.一种式(XII)的化合物

或其盐。

10.一种式(XVII)的化合物

或其盐，其中P为羟基保护基团。

11.一种式(XX)的化合物或其盐或衍生物，

其中11-羰基被掩蔽。

12.一种式(XIII)的化合物

13.一种式(XIV)的化合物

或其盐。

14.一种式(XXI)的化合物或衍生物，

其中11-羰基基团被掩蔽。

15.一种式(XXII)的化合物或衍生物，

其中11-羰基基团被掩蔽。

16.一种式(X)的化合物