CN1268351C - 糖类吸收抑制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供对预防、缓和糖尿病以及防止肥胖极为有效的、来源于月见草种子的糖类吸收抑制剂及其制备方法。本发明所述糖类吸收抑制剂的特征在于以月见草种子的醇提取物作为有效成分。上述月见草种子最好为脱脂月见草种子。上述月见草种子的提取溶剂为乙醇，优选70～85%(v/v)的含水乙醇。另外本发明所述糖类吸收抑制剂的特征在于以来源于月见草种子的多酚为有效成分。上述多酚最好选自没食子酸、鞣花酸、儿茶酸、黄棓酰单宁、矢车菊苷配质、原花色素中的1种或2种以上。本发明所述的糖类吸收抑制剂的制备方法的特征在于包含下述A～C步骤：A.压榨月见草种子，分离油成分，获得压榨残渣的步骤；B.将上述压榨残渣通过脂溶性有机溶剂进行脱脂，获得脱脂产物的步骤；C.将上述脱脂产物进行醇提取，将该提取液进行浓缩或干燥的步骤。

Description

糖类吸收抑制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及糖类吸收抑制剂及其制备方法，该糖类吸收抑制剂对例如糖尿病的预防及减肥等有效。

背景技术

食物中含有的多糖类(淀粉、糖原等)通过唾液及胰液中的α-淀粉酶水解，被分解为麦芽糖及异麦芽糖等低聚糖。然后，在小肠内由α-葡糖苷酶等二糖类分解酶分解为葡萄糖并吸收。

如上所述，α-淀粉酶以及α-葡糖苷酶在体内作为糖类消化酶起着重要的作用，这些酶活性影响着血糖值。因而，在糖尿病以及肥胖的预防和治疗中，对这些酶活性进行控制是非常重要的。

糖尿病分为胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(II型糖尿病)2种，其中90％为后者。

后者(II型糖尿病)发病原因是由于营养过剩导致胰岛素作用不足(例如组织中的胰岛素敏感性降低、胰脏的胰岛素分泌不足等)，从而导致糖、脂类代谢异常。

非胰岛素依赖型糖尿病(II型糖尿病)基本上是首先通过饮食疗法、运动疗法而非药物治疗来进行控制，但即使进行这样的自我管理也未必可以纠正代谢的异常，容易发生药物依赖性。

但是，药物有副作用以及受使用量、使用限制所限的问题。另外，这些药物几乎都是由单一的物质混合而成，因此，在单一物质的副作用、加之长期服用所引起的安全性方面都存在着问题。

纠正这样的糖类代谢异常的来源于植物的物质，目前已知的有从武靴叶(ギムネマ)、番石榴叶、巴拿巴木(バナバ)叶、桑叶等得到的提取物。这些来源于植物的提取物，从安全性角度考虑，适合应用于食品、医药品等，因此对其进行了有效成分等的研究。

在这样的背景之下，本发明的发明者们对来源于各种植物的提取物进行了多酚含量、类SOD活性等的调查，直至发现了月见草种子的乙醇提取物。

然后进行了各种试验，发现了该提取物中含有对抑制糖类吸收有效的各种多酚。

本发明的目的在于提供来源于月见草种子的糖类吸收抑制剂及其制备方法，该糖类吸收抑制剂对于糖尿病的预防、缓和以及防止肥胖极为有效。

发明的公开

本发明糖类吸收抑制剂的特征在于：以经脱脂处理的来源于月见草种子的压榨残渣的溶剂提取物为有效成分，含有存在于该有效成分中的多酚即鞣花酸、没食子酸、黄棓酰单宁、儿茶酸作为必要成分。

本发明糖类吸收抑制剂的特征在于：上述来源于月见草种子的脱脂压榨残渣的提取溶剂为乙醇。

本发明糖类吸收抑制剂的特征在于：上述来源于月见草种子的压榨残渣的提取溶剂为70-85％(v/v)的含水乙醇。

本发明糖类吸收抑制剂的特征在于：脱脂处理用脂溶性有机溶剂进行。本发明的药品的特征在于含有上述糖类吸收抑制剂。

本发明的饮料食品的特征在于含有上述糖类吸收抑制剂。

从发明者们的实验可知：已知的植物提取物(番石榴、巴拿巴木、桑树)虽然对葡糖苷酶具有强的抑制作用，但对于淀粉酶的酶抑制活性则不是很高。

而本发明所述来源于月见草种子的提取物(多酚)对于淀粉酶及葡糖苷酶均显示强的酶抑制作用。特别是脱脂月见草种子的乙醇提取物，其抑制活性强，且安全性高，适合添加到糖尿病预防或减肥用的药品或饮料食品中。

月见草是月见草属(oenothera genus)的1～2年生草本或多年生草本植物。偶见茎部木质化，呈灌木状。代表品种有以下四种。

①Oenothera laciniata

②Oenothera striata

③Oenothera biennis

④Oenothera erythrosepala

本发明中对月见草的种类并无限定，可以使用任何一种。

对于月见草，从其种子中采集的月见草油已被熟知。月见草油中含有较多γ-亚麻酸，具有对肥胖、糖尿病、血胆甾醇过多、饮酒过量、高龄、维生素B₆缺乏有效的功效。另外，月见草油对于病毒感染时发生的亚油酸向γ-亚麻酸的转换抑制、气喘、特应性湿疹患者的治疗也有效。

对于月见草种子的脂溶性成分，已对其生理活性有过研究，但对于脂溶性成分以外的物质的生理活性则未见报告。

另外，在月见草油的制备过程中产生的压榨残渣，目前除了一部分作为饲料使用之外，多作为工业废弃物处理。

本发明中，对于月见草种子的脂溶性成分以外的成分赋予了新的用途，同时可以从月见草油分离后的压榨残渣中提取有效成分。从压榨残渣中提取附加价值高的有效成分，使资源得到有效利用，这是极有意义的事情。

使用醇作为上述月见草种子的提取溶剂，是为了更有效地提取抑制糖类吸收的有效成分(多酚)。特别优选使用乙醇。使用乙醇，在有效地提取有效成分(多酚)的同时，对于外用、食用等任何用途，都可以安全地使用提取物。除此之外，根据用途也可以使用甲醇、丁醇等进行提取。

提取溶剂乙醇的浓度，优选70～85％(v/v)的含水乙醇。如果乙醇浓度小于70％(v/v)，则多酚成分的提取量不足；如果超过85％(v/v)，则种子的油成分容易进入溶剂中。

为了提高多酚的含有率，乙醇提取可以以各种浓度反复进行。

另外，月见草种子中，优选使用脱脂月见草种子。这是由于去除种子中的油成分，则多酚可在脱脂产物中被浓缩。脱脂方法可以采用例如压榨月见草种子，分离油成分，然后将压榨物的残留油成分通过脂溶性有机溶剂进行提取分离的方法。

脱脂用的脂溶性有机溶剂可以使用己烷。这是因为可以将提取出的油成分作为食用油使用的同时，便于将脱脂月见草种子的提取物应用于食品材料等。在将提取物用于食品以外的用途的情况下，则不限于己烷，也可以使用其它非极性溶剂。

上述来源于月见草种子的多酚优选通过乙醇、含水乙醇、水等溶剂提取。根据本发明者们的调查，提取物中含有没食子酸、鞣花酸、儿茶酸、黄棓酰单宁。

本发明的药品适用于糖尿病预防，即适用于非胰岛素依赖型糖尿病(II型糖尿病)的预防或改善。另外也可以作为减肥用药品的有效成分。例如：可以以软、硬胶囊或片剂、颗粒剂、微粒剂、散剂的形态经口给药。另外，非经口给药的场合，可以通过局部组织给药、皮内、皮下、肌肉以及静脉注射等方式给药。

给药量根据给药方法、病情、患者的年龄等不同而变化，成人通常可以按每日有效成分0.5～5000mg、儿童通常0.5～3000mg左右给药。

多酚成分的浓度可以根据剂型适当改变。通常，经口或经粘膜吸收给药的情况下，约为0.3～15.0％重量；非经口给药的情况，约为0.01～10％重量。上述给药量只是一个举例，可以根据各种状况而适当变化。

本发明的饮料食品，可以是例如以糖果点心类(香口胶、糖果、焦糖、巧克力、甜饼、小食品、果冻、软糖、片状糖等)、面类(荞麦、乌冬、拉面等)、乳制品(牛奶、冰淇淋、酸奶等)、调味料(酱、酱油等)、汤类、饮料(果汁、咖啡、红茶、茶、碳酸饮料、运动饮料等)为主的一般食品、保健食品(片剂、胶囊等)、辅助营养食品(营养口服液等)。这些饮料食品中可适当添加来源于月见草种子的提取物(多酚)。

另外，也可添加于快餐食品中。例如：可将月见草种子的乙醇提取物与粉末状纤维素一同进行喷雾干燥或冷冻干燥后，制成粉末、颗粒、打片、溶液等，容易地添加到饮料食品中。

附图简述

图1表示对正常大鼠给予月见草种子提取物和淀粉后的血糖值变化图；图2表示对正常大鼠给予月见草种子提取物和蔗糖后的血糖值变化图。图3为本发明提取物的HPLC图。图4为对健康正常者进行的饮食负荷试验。图5为对糖尿病患者进行的饮食负荷试验。

发明实施的最佳方式

以下，对本发明的实施例进行说明。

[糖类吸收抑制剂的制备]

原料使用在月见草油制备过程中获得的压榨残渣。

首先，破碎压榨残渣，用己烷进行回流，除去压榨残渣中残留的油成分，获得脱脂产物。然后，将该脱脂产物用70％(v/v)的含水乙醇进行回流，将乙醇提取液干燥后，制成糖类吸收抑制剂(实施例1)。

[对α-淀粉酶的抑制作用]

对于实施例1(月见草种子提取物)，使用市售的淀粉酶测定试剂盒(和光纯药工业(株)社制造“アミラ一ゼテストワコ一”)，求出对α-淀粉酶的抑制活性(％)。α-淀粉酶使用来源于人体唾液的α-淀粉酶。测定方法如下所示。

向0.02ml酶溶液中加入0.01ml样品溶液，在37℃温度下保温5分钟后，添加1ml底物缓冲液，在37℃温度下保温60分钟。之后，在沸水中保温10分钟，停止反应。加入1ml显色试剂，测定规定色素的吸光度(660nm)。

根据该测定值算出酶活性(％)，通过以下计算公式，求出抑制活性(％)。酶活性是以在样品非共存的条件下所测定的吸光度为基准(100％)计算的。

抑制活性(％)＝100-酶活性(％)

以来源于植物的番石榴叶提取物(比较例1)、巴拿巴木叶提取物(比较例2)、桑叶提取物(比较例3)作为比较例，通过同样的方法求出了它们的抑制活性(％)。结果如表1所示。

[表1]

区分	提取物	浓度(mg/ml)	抑制活性(％)
				实施例1比较例1比较例2比较例3	月见草种子番石榴叶巴拿巴木叶桑叶	1.01.01.01.0	1000800

如表1所示，实施例1与番石榴叶提取物(比较例1)、巴拿巴木叶提取物(比较例2)、桑叶提取物(比较例3)相比，对α-淀粉酶的抑制活性高。

对于实施例1(月见草种子提取物)，以同样的方法测定不同浓度的酶活性，在求出对α-淀粉酶(来源于人唾液)的IC50(50％抑制浓度)时，浓度为0.5mg/ml。

另外，对实施例1(月见草种子提取物)、没食子酸、鞣花酸、儿茶酸、以及黄棓酰单宁按照同样的方法，在求出对来源于猪胰脏的α-淀粉酶(SIGMA社制造)的IC50(50％抑制浓度)时，如下所示，显示了优异的抑制活性。

化合物                          IC50(mg/ml)

实施例1(月见草种子提取物)       0.01

没食子酸                        0.4

鞣花酸                          ＞0.1

儿茶酸                          0.8

黄棓酰单宁                      0.02

[对α-葡糖苷酶的抑制作用]

下面按照下述测定方法，求出了实施例1(月见草种子提取物)对α-葡糖苷酶的抑制活性(％)。α-葡糖苷酶溶液，是在市售大鼠肠道丙酮粉末(SIGMA社制造)中加入9倍量的0.1M马来酸缓冲液(pH6.0)，在冰中用玻璃均化器均化后，将离心分离后的上清液稀释20倍后使用。测定方法如下所示。

向0.05ml酶溶液中加入0.01ml样品溶液，依次再加入0.64ml的0.1M马来酸缓冲液、0.3ml的0.33mM 4-甲基伞形基(umbelliferyl)-α-D-葡糖苷，在37℃温度下保温30分钟。

之后，加入3ml甘氨酸缓冲液(pH10.3)，停止反应。用荧光光度计(激发波长366nm、荧光波长450mm)对游离的4-甲基伞形基团进行定量。根据该定量值算出酶活性，按照下述计算公式求出抑制活性(％)。酶活性以样品非共存条件下所测定的4-甲基伞形基的定量值为基准(100％)算出。

抑制活性(％)＝100-酶活性(％)

以来源于植物的番石榴叶提取物(比较例1)、巴拿巴木叶提取物(比较例2)、桑叶提取物(比较例3)作为比较例，以同样的方法求出它们的抑制活性(％)。结果如表2所示。

[表2]

区分	提取物	浓度(mg/ml)	抑制活性(％)
				实施例1比较例1比较例2比较例3	月见草种子番石榴叶巴拿巴木叶桑叶	0.10.10.10.1	65777696

如表2所示可知，虽然实施例1(月见草种子提取物)比番石榴叶提取物(比较例1)、巴拿巴木叶提取物(比较例2)、桑叶提取物(比较例3)的α-葡糖苷酶的抑制活性低，但仍然对α-葡糖苷酶具有优异的抑制活性。

另外，对实施例1(月见草种子提取物)、没食子酸、鞣花酸、儿茶酸、以及黄棓酰单宁按照同样的方法测定不同浓度的酶活性，在求出对α-葡糖苷酶的IC50(50％抑制浓度)时，如下所示，显示了优异的抑制活性。

化合物                             IC50(mg/ml)

实施例1(月见草种子提取物)          0.1

没食子酸                           0.8

鞣花酸                             0.08

儿茶酸                             0.8

黄棓酰单宁                         0.04

通过这些实验结果，可以判断实施例1(月见草种子提取物)对α-淀粉酶和α-葡糖苷酶两者均显示抑制活性，可有效抑制糖类的分解。

[对正常大鼠的糖耐量试验]

下面，在下述条件下，对实施例1(月见草种子提取物)在动物体内的糖类吸收抑制作用进行试验。

将5周龄的wister系雄性大鼠(Clear Japan，Inc.)进行1周的预备饲养后，将6周龄～8周龄的大鼠用于试验。将其断食24小时，按0.5k/kg体重将试料用蒸馏水溶解，再按2g/kg体重将糖类(淀粉、蔗糖)用蒸馏水溶解，同时用胃内探针灌胃。

为了调查试料给予后的血糖值的变化，在试料给予前、给予30分钟后、给予60分钟后、给予120分钟后、给予180分钟后由尾静脉采血。作为对照，将与试料等量的蒸馏水和糖类(淀料、蔗糖)按2g/kg体重给予大鼠，并按同样条件采血。

将采得的血液进行离心分离，测定该上清液的血糖值。血糖值的测定采用了市售的葡萄糖测定试剂盒(和光纯药工业(株)社制造“グルコ一スB-テストワコ一”)。结果如图1及图2所示。

如图1及图2所示，在对照组，60分钟之内，血糖值急速上升，而给予了实施例1(月见草种子提取物)的大鼠的血糖值则上升缓慢。

[应用例：应用于饮料食品]

下面表示对糖尿病预防以及减肥有效的饮料食品添加例。下表中，“月见草种子提取物”是将与上述实施例1相同的提取条件下获得的月见草种子的乙醇提取物进行干燥，制成粉末后的物质。

添加例1：香口胶

砂糖                 53.0％重量

胶基                 20.0

葡萄糖               10.0

糖烯                 16.0

香料                 0.5

月见草种子提取物     0.5

                     100.0％重量

添加例2：软糖

还原糖烯             40.0％重量

细粒糖               20.0

葡萄糖                   20.0

凝胶                     4.7

水                       9.68

梅子果汁                 4.0

梅子香料                 0.6

色素                     0.02

月见草种子提取物         1.0

                         100.0％重量

添加例3：糖果

砂糖                     50.0％重量

糖烯                     33.0

水                       14.4

有机酸                   2.0

香料                     0.2

月见草种子提取物         0.4

                         100.0％重量

添加例4：软胶囊

粗米胚芽油               87.0％重量

乳化剂                   12.0

月见草种子提取物         1.0

                         100.0％重量

添加例5：清凉饮料

果糖葡萄糖液糖           30.0％重量

乳化剂                   0.5

月见草种子提取物         0.05

香料                     微量

精制水                  余量

                        100.0％重量

添加例6：片剂

乳糖                     54.0％重量

结晶纤维素               30.0

淀粉分解物               10.0

甘油脂肪酸酯             5.0

月见草种子提取物         1.0

                         100.0％重量

添加例7：片状糖果

砂糖                     76.4％重量

葡萄糖                   19.0

蔗糖脂肪酸酯             0.2

月见草种子提取物         0.5

精制水                   3.9

                         100.0％重量

这里，通过实施例1和类似方法得到的提取物的组成都含有鞣花酸、没食子酸、黄棓酰单宁、儿茶酸。

本发明的月见草提取物成分的分析结果如表3所示。

表3

样品	没食子酸	儿茶酸	鞣花酸	PGG*1
					月见草提取物批号：R-006	2.7％	1.6％	0.5％	2.3％

^*1：黄棓酰单宁

另外，HPLC图如图1所示。由以上结果可知，本发明的提取物含有没食子酸、儿茶酸、鞣花酸、PGG。

以现在的技术不能制造出从月见草种子提取物中仅除去了特定成分的试料，因而只能以各种成分的混合物的形式进行性能试验。

对健康正常者在饮食后的血糖值上升抑制效果进行试验，结果如图2所示。

是男子7名、女子1名的试验结果。由该结果可知，对于月见草摄取组，可抑制其在饮食后30分钟的血糖值上升。

另外，对于以空腹时血糖值110mg/dl-180mg/dl的轻度糖尿病患者为试验对象的月见草提取物摄取组，其饮食后的血糖值上升与空白摄取组相比得到了有效抑制。

表4实施饮食负荷试验时的胰岛素值的推移(μU/dl)

	负荷前	30分钟	60分钟	90分钟	120分钟
						对照	13.3±15.0	28.4±23.9	40.0±31.1	43.6±28.1	50.1±30.0
月见草提取物	12.7±9.8	22.4±14.5	35.8±33.1	43.7±35.9	42.7±31.4
						组间显著性差异	n.s.	n.s.	n.s.	n.s.	n.s.

可知月见草提取物具有抑制饮食负荷后的急剧血糖上升的效果。作为抑制血糖值急剧上升的结果，胰岛素急剧的分泌增加也得到缓解，对于胰岛素分泌差的糖尿病患者等，月见草提取物显示出可减轻其胰岛素分泌负担的效果。

产业上的可利用性

通过抑制入口的淀粉、糖类的消化，即通过阻碍人体所具备的糖类分解酶α-淀粉酶、α-葡糖苷酶的作用，控制摄入人体内的糖量，特别是降低饮食后的血糖值，被认为是抑制II型糖尿病危险的机理。

该机理不仅是控制胰岛素分泌的直接的预防，更是极其安全、无副作用的机理，从代替医疗逐渐成为趋势的最近的预防医学的角度来看，可认为发现月见草提取物具有通过该机理进行的作用是具有进步性的。

另外，从糖尿病患者的临床试验也可知，月见草提取物并不是直接刺激胰岛素的分泌，由动物和人血中糖量的降低可知，月见草提取物明显阻碍糖类的吸收。

如上述说明，根据本发明，可以有效抑制糖类的吸收。

另外，根据本发明，由于可减缓因糖类的吸收而导致的血糖值的上升，因而对糖尿病、肥胖的预防、治疗极为有效。

并且，本发明是从作为食用油原料的月见草种子中提取有效成分，因而安全性高，无副作用之忧。

Claims (12)

1.糖类吸收抑制剂，其特征在于：以经脱脂处理的来源于月见草种子的压榨残渣的溶剂提取物为有效成分，含有存在于该有效成分中的多酚即鞣花酸、没食子酸、黄棓酰单宁、儿茶酸的全部作为必要成分，并且所述有效成分的提取溶剂为含水乙醇、乙醇、甲醇、丙酮。

2.权利要求1的糖类吸收抑制剂，其特征在于所述提取溶剂为体积比70-85％的含水乙醇。

3.权利要求1的糖类吸收抑制剂，其特征在于脱脂处理用脂溶性有机溶剂进行。

4.权利要求2的糖类吸收抑制剂，其特征在于脱脂处理用脂溶性有机溶剂进行。

5.药品，该药品含有权利要求1的糖类吸收抑制剂。

6.药品，该药品含有权利要求2的糖类吸收抑制剂。

7.药品，该药品含有权利要求3的糖类吸收抑制剂。

8.药品，该药品含有权利要求4的糖类吸收抑制剂。

9.饮料食品，该饮料食品含有权利要求1的糖类吸收抑制剂。

10.饮料食品，该饮料食品含有权利要求2的糖类吸收抑制剂。

11.饮料食品，该饮料食品含有权利要求3的糖类吸收抑制剂。

12.饮料食品，该饮料食品含有权利要求4的糖类吸收抑制剂。

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