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CN101060854A - 具有抗糖尿病作用的蛋白质水解物 - Google Patents

具有抗糖尿病作用的蛋白质水解物 Download PDF

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CN101060854A CNA2005800390938A CN200580039093A CN101060854A CN 101060854 A CN101060854 A CN 101060854A CN A2005800390938 A CNA2005800390938 A CN A2005800390938A CN 200580039093 A CN200580039093 A CN 200580039093A CN 101060854 A CN101060854 A CN 101060854A
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Abstract

本发明提供了具有降低处于高血糖状态的受试者血糖水平的作用，并用于降低该受试者血糖水平的组合物(血糖升高抑制剂)。而且，本发明提供了由于前述作用而用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病，尤其是糖尿病和糖尿病并发症的组合物(用于由高血糖症引起的疾病的预防性或改善性组合物，抗糖尿病药物)。

Description

具有抗糖尿病作用的蛋白质水解物
技术领域
本发明涉及通过诱导胰岛素分泌或通过增加糖尿病受试者或处于临床前期(临界性糖尿病)的受试者的胰岛素受体来增强胰岛素敏感性而显示出预防或缓解高血糖状态的作用(抑制血糖升高的作用)的组合物(血糖升高抑制剂、胰岛素分泌促进剂)。而且，本发明涉及用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病尤其是糖尿病和糖尿病并发症的组合物。在本说明书中，这些组合物有时被总称为抗糖尿病组合物。
而且，本发明涉及降低处于高血糖状态的受试者血糖水平的方法，还涉及通过促进胰岛素分泌的作用和抑制血糖升高的作用来预防或治疗由高血糖症引起的疾病(具体是糖尿病和糖尿病并发症)的方法。
背景技术
在活体中，通过胰岛素的降血糖作用和肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和类似物的升血糖作用之间的平衡来控制血糖水平。具体地，胰岛素抑制肝脏内的糖原分解和糖异生，以阻止葡萄糖的产生并减少肝脏向血液中释放的葡萄糖量，同时，胰岛素增加葡萄糖在骨骼肌和白色脂肪组织中的摄取，从而降低血糖水平。相反，肾上腺素、胰高血糖素等促进肝脏中的糖原分解和糖异生，并促进葡萄糖从其中的释放，从而增加血糖水平。
糖尿病是一种代谢性疾病，其中由于胰岛素作用的急性或慢性下降引起持续的高血糖状态，导致糖代谢、脂质代谢、氨基酸代谢等的紊乱。
糖尿病被分为胰岛素依赖型或非胰岛素依赖型。饮食疗法和口服降血糖药物对于治疗胰岛素依赖性糖尿病是无效的，由于胰岛素分泌能力的下降或缺乏，胰岛素依赖性糖尿病仅可通过胰岛素治疗。相反，对于非胰岛素依赖型糖尿病(占糖尿病患者的90％)，尽管胰岛素的作用较正常人弱，但其治疗并不一定需要胰岛素。通常采用食物疗法和运动疗法，如果效果不佳，则可同时采用使用降血糖药物的化学疗法。
如上所述，糖尿病是一种由持续高血糖状态造成的代谢紊乱所引起的疾病，它是一种很棘手的疾病，可能伴随眼、肾、神经系统、心血管系统、皮肤等处的许多并发症。通常认为当血糖水平被控制在正常水平附近时就可以消除这些并发症(Saishin Igaku Daijiten，1988，1211页，Ishiyaku Publishers Inc.，日本)。
缓解高血糖状态的已知药物制剂包括胰岛素制剂、磺酰脲制剂、双胍制剂、改善胰岛素抵抗的制剂、a-葡糖苷酶抑制剂等。胰岛素制剂是用于胰岛素依赖型糖尿病的治疗药物，尽管它们可靠地降低血糖水平，却有引起低血糖症的风险。磺酰脲制剂是通过刺激胰腺β-细胞促进内源性胰岛素分泌而降低血糖水平的药物。无论血糖水平如何，由于诱发胰岛素分泌，它们可引起低血糖症副作用。双胍制剂是通过抑制肝脏糖异生、增加骨骼肌和类似部位内糖消耗、并抑制糖的肠吸收来降低血糖水平的药物，其优势是在正常人体或糖尿病患者中均不会引起低血糖症。但是，双胍制剂的问题在于经常引起比较严重的乳酸性酸中毒。改善胰岛素抵抗的制剂(例如噻唑烷衍生物和类似物)是通过强化胰岛素的作用、并活化胰岛素受体激酶来降低血糖水平的药物。但是，已经被指出有消化系统症状、水肿等副作用，而且红细胞、血细胞比容和血红蛋白的量减少，LDH的量增加(Atarashii TonyobyoChiryoyaku(New Diabetic Medicines)，90-99页，1994，Iyaku(Medicineand Drug)Journal Co.，Ltd.，Japan)。a-葡糖苷酶抑制剂通过延缓糖类在胃肠道的消化和吸收而表现出抑制餐后血糖水平增加的作用，但问题在于如胃胀、腹鸣、腹泻等方面的副作用(Joslin′s Diabetes mellitus，第13版，521-522页)。
因此可以这样说，有效治疗或预防糖尿病及其并发症的方法并没有完全建立。
附图说明
图1显示了球蛋白水解产物(制备实施例1)的凝胶过滤色谱图。
图2显示了制备实施例2(3)中进行的反相(酸性)色谱的结果(色谱图)。
图3显示了制备实施例2(4)中进行的反相(中性)色谱的结果(色谱图)。
发明内容
本发明的一个目的是提供药物组合物、食品组合物和饲料组合物，其具有促进胰岛素分泌的作用或抑制血糖升高的作用。本发明的另一个目的是提供这种组合物，作为治疗或预防糖尿病或其并发症的组合物。
本发明者进行了广泛研究以实现上述目的，并发现将球蛋白水解产物给予人为诱发高血糖症的小鼠时，其血糖水平显著地下降，高血糖症得以改善。而且，本发明者确认，球蛋白水解产物的活性成分是包含在其中的肽(VVYP)，抑制血糖升高的作用归因于其促进胰岛素分泌的作用。
而且，本发明者确认，在血糖水平正常的受试者中没有观察到球蛋白水解产物或肽(VVYP)抑制血糖水平升高的作用和促进胰岛素分泌的作用，而在糖尿病患者和处于临床前期的临界性糖尿病患者中特异性地观察到这些作用。
基于这些发现，本发明者证实，球蛋白水解产物或肽(VVYP)抑制和改善高血糖症(降低被视为血糖过高的血糖水平)，并可以用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病，如糖尿病及其并发症。本发明是基于这些发现完成的。
具体地，本发明包括下面的实施方式。
1.一种抗糖尿病药物，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
2.一种血糖升高抑制剂，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
3.一种胰岛素分泌促进剂，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
4.一种特殊保健用食品，其具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并优选以此功能加以使用，所述食品包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
5.一种饲料，其具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并优选以此功能加以使用，所述饲料包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
6.一种预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
7.根据第6项的预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物，其中所述由高血糖症引起的疾病是糖尿病或糖尿病并发症，如糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍。
8.根据第6项的预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物，其中所述由高血糖性症引起的疾病是II型糖尿病或其并发症。
9.一种抑制受试者血糖水平增加的方法，其包括将有效量的球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽给予患有由高血糖症引起的疾病的受试者或处于该疾病临床前期的受试者的步骤。
10.根据第9项的抑制受试者血糖水平增加的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是糖尿病或糖尿病并发症，如糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍。
11.根据第9项的抑制受试者血糖水平增加的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是II型糖尿病或其并发症。
12.一种预防或治疗受试者由高血糖症引起的疾病的方法，其包括将有效量的球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽给予患有由高血糖症引起的疾病的受试者或处于该疾病临床前期的受试者的步骤。
13.根据第12项的预防或治疗受试者由高血糖症引起的疾病的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是糖尿病或糖尿病并发症，如糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍。
14.根据第12项的预防或治疗受试者由高血糖症引起的疾病的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是II型糖尿病或其并发症。
15.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备抗糖尿病药物中的用途。
16.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备血糖升高抑制剂中的用途。
17.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备胰岛素分泌促进剂中的用途。
18.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备特殊保健用食品中的用途，所述的特殊保健用食品具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并通常以此功能加以使用。
19.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备饲料中的用途，所述的饲料具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并通常以此功能加以使用。
20.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物中的用途。
具体实施方式
本发明的药物组合物、食品组合物和饲料组合物的特征是含有球蛋白水解产物或肽(VVYP)作为活性成分。
(1)药物组合物
血糖升高抑制剂、胰岛素分泌促进剂和预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物包括在本发明的药物组合物的范围内。这种血糖升高抑制剂的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地预防或改善糖尿病患者或临床前期糖尿病患者即临界性糖尿病患者中的高血糖症(抑制血糖升高)。这种胰岛素分泌促进剂的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地促进糖尿病患者或临界性糖尿病患者中的胰岛素分泌。而且，这种预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地发挥血糖升高抑制作用或胰岛素分泌促进作用。
球蛋白水解产物，即，本发明的药物组合物活性成分的一种形式，是球蛋白如血红蛋白、肌红蛋白等的水解产物。可作为球蛋白来源的动物类型不受限制，可以使用许多种类的动物，如牛、猪、羊、人、马等。
可以使用含有大量肌红蛋白的家畜肉、鱼肉和类似物作为球蛋白来源。
球蛋白的水解和其它过程可以根据WO89/06970所述的方法实施。通常使用一种或多种水解酶如酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性磷酸酶进行水解。
球蛋白水解方法的一个具体例子是将含有球蛋白的原料以5-30wt％(固体含量)的量分散在水中，用酸或碱将pH调节至适于蛋白酶的最佳条件，单次或分批加入蛋白酶，使该酶在20-70℃下反应3-48小时。
使用由此获得的蛋白水解产物作为本发明的具有抑制血糖升高作用或促进胰岛素分泌作用的球蛋白水解产物。它可在干燥后使用，或在向其中加入补充剂如羧甲基纤维素、糊精或类似物，然后干燥/固化后使用。
肽(VVYP)，即本发明的药物组合物活性成分的另一种形式，包含在前述的球蛋白水解产物中，其量为大约1wt.％，因此可以从前述球蛋白蛋白直接产物中分离/纯化出来。肽(VVYP)的分离或纯化，除球蛋白之外，可以使用例如，鱼肉蛋白、鱼粉和类似动物蛋白；玉米蛋白(玉米醇溶蛋白)、大豆蛋白和类似植物蛋白的水解产物作为起始原料进行。
本文所述的分离或纯化方法可以通过与已知的蛋白和肽纯化方法相同的方式进行。例如，可以获得含有肽(VVYP)的馏分，如果需要，然后通过使用盐析、透析、离子交换树脂、超滤、反相色谱或类似方法，或以适当的组合方式使用这些方法，可以从该馏分中分离出肽(VVYP)。关于这些纯化方法中提到的反相色谱，优选酸性条件下的反相色谱和中性条件下的反相色谱组合进行。
可以根据已知的蛋白测定方法如茚三酮法测定馏分的蛋白含量。分离出的馏分中所含肽的氨基酸序列可以通过已知方法(氨基酸分析)确定。从而可以证实由Val-Val-Tyr-Pro氨基酸序列组成的本发明目标肽的存在。除根据前述方法分离或纯化的肽(VVYP)之外，包含它的馏分也可以用作本发明药物组合物的活性成分，只要该馏分表现出抑制血糖升高的作用或促进胰岛素分泌的作用。
可以根据已知的肽合成法从化学上合成肽(VVYP)。肽合成法的例子有叠氮化物法、酰氯法、酸酐法、混合酸酐法、DCC法、活化酯法、羰基咪唑法、氧化还原法、DCC-添加剂(HOMB、HOBt、HOSu)法(Schreder，Luhke，The Peptide，第1卷，1966，Academic Press，NewYork，USA；Izumiya等人，Peptide Synthesis，Maruzen Co.，Ltd.(1975)；等)和类似方法。这些肽合成法包括固相合成法和液相合成法。
关于这些肽合成法，对于具有侧链官能团的氨基酸如酪氨酸和苏氨酸，优选对其侧链官能团进行保护。已知的可在此使用的保护基为，例如，苄氧羰基(Cbz-)、叔丁氧羰基(Boc-)、苄基(Bz-)等。在生成本发明肽的过程中可以根据已知的方法脱去这些保护基。
本发明的药物组合物可完全由球蛋白水解产物或肽(VVYP)组成。当药物组合物与其他物质组合进行制备时，球蛋白水解产物或肽(VVYP)的量不受限制，只要它足以发挥抑制血糖升高的作用或促进胰岛素分泌的作用。通常，本发明的药物组合物与药理学可接受的载体和添加剂组合在一起进行制备。
载体的例子是赋形剂、稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、崩解抑制机、吸收促进剂、润滑剂、助溶剂、缓冲剂、乳化剂、悬浮剂和和根据药物组合物(制剂)给药的剂型通常使用的类似载体。添加剂的例子是稳定剂、防腐剂、缓冲剂、等渗调节剂、螯合剂、pH调节剂、表面活性剂、着色剂、合成香料、调味剂、增甜剂和根据制剂给药的剂型通常使用的类似添加剂。
药物组合物的单位剂量形式(药物制剂的剂型)可以根据给药途径加以适当选择。药物组合物大体上可以分成口服药物、经肺药物、经鼻药物、舌下药物、胃肠外药物(注射、滴注)或类似物。药物组合物可以根据已知方法混合、成形或制备成为固体剂型如片剂、丸剂、分散剂、粉剂、颗粒剂、胶囊等；液体剂型如溶液、悬液、乳液、糖浆剂、酏剂等。药物组合物可以制备成干燥产物的形式，当使用时通过加入适当载体成为液体。可以根据已知方法将药物组合物制备成任何这些形式。
本发明的药物组合物中球蛋白水解产物或肽(VVYP)的比例不受限制。通常，药物组合物形成的制剂中，含有大约0.1至大约80wt.％、优选大约5wt.％至大约60wt.％、更优选大约20wt.％至大约50wt.％的球蛋白水解产物，或大约0.001至大约80wt.％、优选大约0.01wt.％至大约10wt.％的肽(VVYP)。
以此方式得到的药物组合物的剂量可以根据药物组合物的使用目的(用于抑制血糖升高、促进胰岛素分泌、预防或治疗由高血糖症引起的疾病等)；药物组合物的给药方法；给药方式；患者的年龄、体重、症状(糖尿病的严重程度)；和其他因素来加以适当确定。通常，优选球蛋白水解产物给予成人的用药量为每天大约100至大约2000mg，或者肽(VVYP)给予成人的用药量为每天大约1至大约20mg。
药物组合物并非只能以单一剂量给药，可以每天分3至4次剂量给药。前述剂型的药物制剂以适合该剂型的途径给药，例如，可注射剂型的药物制剂可以经静脉内、肌肉内、皮下、皮内、腹膜内或类似方式给药；固体剂型的药物制剂可以口服或类似方式给药。
如以下实施例所证明，本发明的药物组合物由于含有球蛋白水解产物或肽(VVYP)，具有促进胰岛素分泌的作用，改善由于胰岛素作用减弱或缺乏引起的高血糖状态，从而发挥降血糖作用。因此，本发明的药物组合物被用作预防或治疗由胰岛素作用减弱或缺乏造成的高血糖状态引起的各种疾病的组合物。
糖尿病和糖尿病并发症包括在这些疾病中。目标的糖尿病优选为非胰岛素依赖性II型糖尿病。本文讨论的糖尿病并发症是指由糖尿病(优选非胰岛素依赖性II型糖尿病)直接或间接进展发生的全身和局部疾病。具体的例子是糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍等。
(2)食品组合物
根据本发明提供的食品组合物包括具有抑制血糖升高功能并优选以此功能进行使用的特殊保健用食品(包括被批准用于特殊保健用途的食品)；具有促进胰岛素分泌功能并优选以此功能进行使用的特殊保健用食品(包括被批准用于特殊保健用途的食品)；和由于具有血糖升高抑制作用或胰岛素分泌促进作用而用于预防或治疗高血糖症引起的疾病的特殊保健用食品(包括被批准用于特殊保健用途的食品)。
前述具有抑制血糖升高功能的特殊保健用食品的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地预防或改善糖尿病患者或临界性糖尿病患者的高血糖症(抑制血糖升高)。食品的包装和广告可以带有该作用(抑制血糖升高作用)的介绍。具有促进胰岛素分泌功能的特殊保健用食品的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地促进糖尿病患者或临界性糖尿病患者的胰岛素分泌。食品的包装和广告可以带有该作用(促进胰岛素分泌)的介绍。用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病的特殊保健用食品的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地发挥抑制血糖升高的作用或促进胰岛素分泌的作用。食品的包装和广告可以带有该作用(抗糖尿病作用)的介绍。
本发明的食品组合物可以完全由球蛋白水解产物或肽(VVYP)组成。当食品组合物与其他物质组合进行制备时，球蛋白水解产物或肽(VVYP)的量不受限制，只要其足以表现出抑制血糖升高的作用或促进胰岛素分泌的作用。本发明的食品组合物可以与可在食品中使用的载体和添加剂组合进行制备。这些食品组合物包括通过将球蛋白水解产物或肽(VVYP)与食品可接受载体和添加剂混合制备的片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂、分散剂、粉剂、溶液(饮料)等形式的补充剂和类似物。本发明的食品组合物还包括含有球蛋白水解产物或肽(VVYP)的产品，其可以采取普通食品和饮料的形式。
这些食品和饮料的例子包括乳饮料、乳酸菌饮料、含果汁的软饮料、碳酸饮料、果汁饮料、植物汁饮料、植物/水果饮料、酒精饮料、粉末饮料、咖啡饮料、红茶饮料、绿茶饮料、大麦茶饮料和类似饮料；蛋奶布丁、牛奶布丁、法式苏菲布丁(soufflé puddings)、含果汁的布丁和类似布丁，果冻、bavarois、酸奶和类似甜点；冰淇淋、冻牛乳、奶冰(lacto-ice)、牛奶冰淇淋、含果汁的冰淇淋、软式冰淇淋(softcream)、冰棒(ice candies)、冰冻果子露(冰糕)、冰冻甜点(frozenconfection)和类似的冷冻甜食；口香糖、泡泡糖、和类似的口香糖(棒状口香糖(stick gum)、糖衣片口香糖)；巧克力豆(marble chocolate)和类似的包衣巧克力、草莓巧克力、蓝莓巧克力、甜瓜巧克力(melonchocolate)和类似口味的巧克力，和类似巧克力；水果硬糖(包括夹心糖、奶油球、糖豆(marbles)等)，软糖(包括饴糖、牛轧糖、橡皮糖(gummy candy)、果汁软糖等)、水果糖(drop)、太妃糖和类似焦糖；硬饼干(hard biscuit)、饼干、脆饼(okaki)(米饼(rice cracker))、鲜贝(sembei)(米饼)和类似的烘焙甜食(上述所有均为甜食)；清汤(consommósoup)、浓汤和类似的汤；草莓酱、蓝莓酱、橘子果酱、苹果酱、杏子酱、蜜饯、类似果酱；红葡萄酒和类似果酒；浆状樱桃、杏、苹果、草莓和桃、和类似的加工水果；火腿、香肠、烤猪肉和类似的加工家畜肉；鱼火腿、鱼肠、鱼片、kamaboko(蒸鱼酱(steamedfish paste))、chikuwa(烤鱼酱(baked fish paste))、hanpen(蒸鱼糜(minced and steamed fish))、satsumaage(炸鱼丸)、datemaki(omeletwrapper)、鲸咸肉和类似的加工海产品；乌冬面(udon)(小麦面条)、凉面(hiyamugi)、索面(somen)(细面条)、荞麦面(soba)(荞麦面条)、中式面条(Chinese noodle)、意大利式细面条、通心面、bifun(米粉)、harusame(凉粉条)、馄饨和类似的面条；和各种类型的配菜、面筋饼(wheat gluten cake)、鱼松粉(denbu)和类似的各种其它加工食物产品。本发明的食物组合物优选是饮料或甜食的形式。
食品组合物中活性成分(球蛋白水解产物或肽(VVYP))的量或者食品组合物的使用量不受限制，可以根据食品组合物的类型、所需改善作用的程度和其它因素在很大的范围内加以适当选择。尽管食品组合物使用量的变化取决于食品组合物的类型，但对于体重60kg的人来说，可以适当地选自以球蛋白水解产物计的大约100至大约2000mg/60kg的范围，或选自以肽(VVYP)计的大约1至大约20mg/60kg的范围。
本发明的食品组合物由于含有球蛋白水解产物或肽(VVYP)，具有促进胰岛素分泌的作用，改善由胰岛素作用减弱或缺乏引起的高血糖状态，从而发挥降血糖作用。因此，本发明的食品组合物被用作预防或治疗胰岛素作用减弱或缺乏所致高血糖状态引起的各种疾病。
(3)饲料组合物
根据本发明提供的饲料组合物包括具有抑制血糖升高功能的饲料；具有促进胰岛素分泌功能的饲料；和由于具有抑制血糖升高作用或促进胰岛素分泌作用而用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病的饲料。这些饲料优选地可以用作尤其是犬、猫和类似动物的宠物食品。前述具有抑制血糖升高功能的饲料的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地预防或改善糖尿病动物或临界性糖尿病动物的高血糖症(抑制血糖升高)。具有促进胰岛素分泌功能的饲料的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地促进糖尿病动物或临界性糖尿病动物的胰岛素分泌。用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病的饲料的特征是含有一定量的球蛋白水解产物或肽(VVYP)，其量能有效地表现出抑制血糖升高的作用或促进胰岛素分泌的作用。
这些饲料组合物包括通过将球蛋白水解产物或肽(VVYP)与可用于饲料的载体和添加剂混合制成的饲料，其形式为片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂、分散剂、粉剂、溶液等。本发明的饲料组合物还包括采取普通饲料形式的含有球蛋白水解产物或肽(VVYP)的产品。
饲料组合物中所含活性成分(球蛋白水解产物或肽(VVYP))的量或饲料组合物的剂量不受限制，可以根据饲料组合物的类型、所需改善作用的程度和其它因素在很大的范围内加以适当选择。尽管饲料组合物剂量的变化取决于饲料组合物的类型，但对于10kg体重的动物，可以适当地选自以球蛋白水解产物计的大约50至大约1000mg/10kg的范围，或选自以肽(VVYP)计的大约0.5至大约10mg/10kg的范围。
                    实施例
以下给出的制备实施例和试验实施例更详细地对本发明进行说明，但本发明的范围不限于这些实施例。在下列试验实施例中，除非特别指出，“％”代表“重量百分比(wt％)”。
制备实施例1制备球蛋白水解产物
以下详细描述使用牛红细胞制备球蛋白水解产物的方法。
向100kg新鲜的牛红细胞中加250升水，进行充分的溶血。用磷酸将pH调节至2.8后，将2.6×107单位来自黑曲霉(Aspergillus niger)的酸性蛋白酶加入到溶液中，在50℃下反应3小时。
反应后，反应溶液在80℃下加热30分钟终止反应。此后，将氢氧化钙的悬浮水溶液加入至反应溶液中，将pH调节至6.5。然后，加入10kg硅藻土，混合物用压滤器过滤。将得到的滤液喷雾干燥，从而产生23kg粉末状球蛋白水解产物。通过在下列条件下进行的凝胶过滤色谱考察球蛋白水解产物的分子量分布。
<凝胶过滤色谱>
仪器：高效液相色谱仪(Shimadzu Corporation，LC-6A型)
柱：PolyHYDROXYETHYL A，5μm，9.4×200mm，PolyLC Inc.制造。
洗脱液：50mM甲酸
流速：0.5ml/min
检测：221nm处的UV吸收
图1显示了根据上述凝胶过滤色谱获得的球蛋白水解产物的凝胶过滤色谱图。
制备实施例2抑制血TG水平升高的肽的馏分和纯化
本发明的肽通过以下方法获得：(1)离子交换，(2)超滤，(3)在酸性条件下通过反相柱色谱分离，和(4)在中性条件下通过反相色谱分离。
(1)离子交换
将制备实施例1中得到的含13.7g球蛋白水解产物的10％水溶液加入到弱酸性阳离子交换树脂(Amberlite IRC50，H+型，Organo Co.，Ltd.)中，搅拌1小时进行吸收。从而分离出未被吸收的馏分。
(2)超滤
使用搅拌力超滤装置(Advantec制造，UHP 90K)和超滤膜(Advantec制造，UIIH-1，分子量筛截：1000)对前述离子交换得到的未吸收馏分进行超滤。收集保留在超滤膜上的液体(残液)。对由此得到的馏分进行酸水解，根据茚三酮法进行定量。向检测试管中每3至5mg蛋白加入1ml终浓度为6N的盐酸，在大气压下将试管密封，并将其在110℃下加热22小时，进行酸水解。前述的茚三酮法如下进行。将水解后样品的pH用氢氧化钠调节至5.0。然后使样品与溶解在0.2M柠檬酸盐缓冲液(pH5.0)中的茚三酮试剂在100℃下反应15分钟。测量570nm处的吸光度。分别地，L-亮氨酸水溶液(75、150、225和300nmol/ml)作为标准溶液进行茚三酮反应。从测得的吸光度得到标准曲线，计算样品中与L-亮氨酸相当的氨基的量。定量结果显示于表1。基于起始球蛋白水解产物的产率也显示于表1。
(3)反相(酸性)色谱
对上述超滤后获得的滤液在下列条件下进行反相(酸性)色谱。
<反相(酸性)色谱>
仪器：高效液相色谱仪(Shimadzu Corporation，LC-10A型)
柱：SuperPac Pep-S，15μm，22.5×250mm，Pharmacia制造)
洗脱液：含0.1％三氟乙酸的乙腈水溶液
乙腈的线性浓度梯度为2-35％；乙腈浓度以1％/min的速率变化
流速：5 ml/min
温度：40℃
检测：220nm处的UV吸收
馏分时间：53.8-54.5分钟(馏分A)
图2显示了通过上述反相(酸性)色谱获得的色谱图。
对由此获得的馏分进行酸水解，然后通过氨基酸分析进行定量。向检测试管中每3至5mg蛋白加入1ml盐酸(最终浓度为6N HCl)，在大气压下将检测试管密封，并将其在110℃下加热22小时，进行酸水解。氨基酸分析在下列条件下进行。
<氨基酸分析>
仪器：高效液相色谱仪(Shimadzu Corporation，LC-6A型)
柱：Shim-pack ISC-07/S1504 Na，7μm，4.0×150mm，ShimadzuCorporation制造
洗脱液：氨基酸流动相试剂盒(Na型)，Shimadzu Corporation制造
流速：0.3ml/min
温度：55℃
反应溶液1：分析试剂盒OPA试剂，Shimadzu Corporation制造
检测：荧光吸收(Ex 348nm，Em 450nm)
使用旋转蒸发器浓缩、干燥酸水解的溶液，并使其结块，并进一步减压干燥12小时以上，从而完全去除盐酸。将生成物溶解在0.2M柠檬酸盐缓冲液(pH2.2)中，使得所含各种氨基酸的比例为大约100nmol/ml。该溶液通过0.45μm滤膜过滤，将10μl滤液装柱。对于标准溶液，将混合有18种成分的H-型氨基酸标准溶液(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.)用0.2M柠檬酸盐缓冲液(pH2.2)稀释25倍，将10μl稀释的溶液装柱(各种氨基酸均为1nmol/10μl)。计算氨基酸的峰面积，使用Chromatopac C-R4A(Shimadzu Corporation)进行分析，根据样品峰面积/标准溶液峰面积的比例计算氨基酸的量。结果显示于表1。基于球蛋白水解产物的产率也显示于表1。
(4)反相(中性)色谱
进一步对上述反相(酸性)色谱洗脱、分馏得到的馏分在下列条件下进行反相(中性)色谱。
<反相(中性)色谱>
仪器：高效液相色谱仪(Shimadzu Corporation，LC-10A型)
柱：SuperPac Pep-S，15μm，22.5×250mm，Pharmacia制造)
洗脱液：含20mM醋酸铵缓冲液(pH6.5)的乙腈水溶液
乙腈的线性浓度梯度为0-25％；乙腈浓度以0.5％/min的速率变化
流速：5ml/min
温度：40℃
检测：220nm处的UV吸收
分馏时间：41.7-43.2分钟(馏分B)，45.8-51.0分钟(馏分C)。
图3显示了通过上述反相(中性)色谱获得的色谱图。对得到的馏分进行上文(3)中的定量，然后进行鉴定。根据各氨基酸相对总氨基酸含量的比例计算出氨基酸组成。结果显示馏分B为VTL(Val-Thr-Leu)，馏分C为VVYP(Val-Val-Tyr-Pro)。与血红蛋白氨基酸序列匹配，证实血红蛋白中存在有这些馏分。定量结果和基于球蛋白水解产物的产率均显示于表1。
表1
肽     蛋白量(g)     产率(％)
球蛋白水解产物     13.70     100.0
离子交换+超滤     4.24     30.9
反相色谱
馏分A     0.39     0.28
馏分B VTL     0.009     0.06
馏分C VVYP     0.006     0.04
试验实施例1对血糖水平升高的抑制作用(小鼠)
使用制备实施例1中获得的球蛋白水解产物和制备实施例2(4)中获得的馏分C肽(VVYP)进行糖耐量试验，以研究其对血糖水平升高的抑制作用。
70只雄性ICR小鼠(8周龄)，禁食过夜，分成7组，每组由10只小鼠组成。使用口腔探头，每组小鼠灌胃给予5mg试验组1)、10mg(试验组2)或50mg(试验组3)的球蛋白水解产物；1μg(试验组4)、2μg(试验组5)或10μg(试验组6)的肽(VVYP)；或0.2ml(对照组)的水。球蛋白水解产物和肽(VVYP)溶解在0.2ml水中后进行使用。给药后，立即使用口腔探头以类似方式灌胃给予0.2ml葡萄糖溶液(0.25g/ml葡萄糖水溶液)。在给予葡萄糖溶液后30、60、90和120分钟，从尾静脉采血，使用试剂盒(Glucose CII Test Wako，Wako PureChemical Industries，Ltd.，Osaka)根据变旋酶/GOD法测定血糖水平。
给予葡萄糖溶液后120分钟试验组和对照组的血糖水平(AUC：曲线下面积，mg/dL·120min)显示于表2。在表2中，“相对于对照的百分比”是指试验组血糖水平相对于对照组血糖水平的比例，对照组为100％(下文中同样如此应用)。
表2
组别    剂量(用量/鼠)     血糖水平(mg/dL·120min)   相对于对照的百分比
对照组    -     1768±360   100％
试验组1试验组2试验组3    球蛋白水解产物5mg10mg50mg     1654±4701596±500888±204*   94％90％50％
试验组4试验组5试验组6    肽(VVYP)1μg2μg10μg     1537±486892±210*644±140**   87％54％40％
*p＜0.05
**p＜0.01
从表中可以看出，球蛋白水解产物和肽(VVYP)以依赖剂量的方式显著地抑制小鼠的血糖水平升高。肽(VVYP)降低血糖的活性比球蛋白水解产物强1000倍以上。由于球蛋白水解产物所含肽(VVYP)的比例为大约1％，球蛋白水解产物产生降低血糖作用的活性成分(有效成分)之一推测是肽(VVYP)。
试验实施例2对血糖水平升高的抑制作用(日本人)
使用制备实施例1中得到的球蛋白水解产物对人体(日本人)进行糖耐量试验(7-天休药期，单盲法交叉试验)(糖尿病受试者：12名II型糖尿病患者，空腹血糖水平为200mg/dl或更高；正常受试者：10名正常受试者，空腹血糖水平为100mg/dl或更低；平均体重：68kg)，以研究球蛋白水解产物对血糖水平升高的抑制作用。
受试者(糖尿病受试者和正常受试者)由于前一天晚上开始禁食而处于饥饿状态，给予其1000mg、1500mg或3000mg(试验组)的球蛋白水解产物，或3000mg(对照组)的乳酪蛋白。给药后立即给予葡萄糖溶液(75g/200ml)。在给予葡萄糖溶液后60、90和120分钟后采血，使用试剂盒(Glucose CII Test Wako，Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.，Osaka)根据变旋酶/GOD法测定血糖水平。
在给予葡萄糖溶液后120分钟试验组和对照组受试者的血糖水平(AUC：曲线下面积，mg/dL·120min)显示于表3。
表3
受试者 剂量     血糖水平(mg/dL·120min)   相对于对照的百分比
正常受试者(n＝10) 对照组        0mg     4575±680   100％
试验组球蛋白水解产物1000mg球蛋白水解产物1500mg球蛋白水解产物3000mg 4212±7544198±7703745±759** 92％92％82％
糖尿病受试者(n＝12) 对照组        0mg     12675±1860   100％
试验组球蛋白水解产物1000mg球蛋白水解产物1500mg球蛋白水解产物3000mg 11431±228810862±2203*8773±2480** 90％86％69％
*p＜0.05
**p＜0.01
从表中可以看出，以3000mg的球蛋白水解产物给药对II型糖尿病受试者和正常受试者均显示出统计学上显著的抑制血糖水平升高的作用。但根据临床应用，球蛋白水解产物对糖尿病受试者较正常受试者显示出更明显、更有效的作用。
因此，球蛋白水解产物被认为能显著地抑制患有II型(非胰岛素依赖性)糖尿病的受试者血糖的升高。根据上述试验实施例1的结果，相信球蛋白水解产物的主要成分(活性成分)是肽(VVYP)，预计肽(VVYP)抑制患有II型(非胰岛素依赖性)糖尿病的患者血糖升高的活性较球蛋白水解产物高大约5000倍。
试验实施例3升高血胰岛素水平的作用(日本人)
12名受试者(日本人，平均体重：67kg)给予其量为1000和3000mg的制备实施例1中获得的球蛋白水解产物和其量为1000mg的安慰剂(乳酪蛋白)，休药期为7天(单盲法交叉试验)。给予每种物质后，采血测定血胰岛素和血三碘甲腺原氨酸水平。具体地，受试者从前一晚要禁食12小时以上。在试验当天，在给药之前即刻采血，给药后6小时内每小时进行采血，以测定血胰岛素和血三碘甲腺原氨酸水平。使用“Glazyme Insulin-EIA TEST”(Wako Pure Chemical Industries.Ltd.，Osaka)测定血胰岛素水平。血三碘甲腺原氨酸水平的测定委托ShionogiBiomedical Laboratories(Osaka)(根据CLIA法)进行。
在给予试验物质(1000mg和3000mg球蛋白水解产物和安慰剂)后3小时的血胰岛素水平(mU/L·3h)和血三碘甲腺原氨酸水平(ng/L·3h)显示于表4。
表4
摄入安慰剂     摄入球蛋白水解产物
    1000mg     3000mg
血胰岛素水平(mU/L·3h) 8.7±1.1     10.1±1.6     15.6±2.1*
100％     116％     179％
血三碘甲腺原氨酸水平(ng/L·3h) 0.38±0.10 0.22±0.08 0.33±0.07
*p＜0.05
从表中可看出，给予3000mg球蛋白水解产物对血三碘甲腺原氨酸水平没有产生很大差异，但血胰岛素水平(胰岛素分泌速率)显著增加。这一事实确定了球蛋白水解产物在对甲状腺功能没有不良影响的情况下对人体(日本人)胰岛素分泌速率具有特异性促进作用。而且，鉴于表中给出的结果，推测试验实施例2中显示的球蛋白水解产物抑制人体(日本人)血糖升高的作用是其促进胰岛素分泌的作用所引起的，并且，鉴于试验实施例1的结果，推测球蛋白水解产物的活性成分(有效成分)推测是肽(VVYP)。
试验实施例4增加血胰岛素水平的作用(西方人)
17名西方人(7名肥胖受试者，10名正常受试者，平均体重：82kg)给予500、1000和2000mg制备实施例1中制备的球蛋白水解产物和安慰剂(1000mg乳酪蛋白)，休药期为7天(单盲法交叉试验)。给予每种物质后，采血测定血胰岛素和血糖水平。具体地，给予受试者奶油汤(含有41g碳水化合物和67g脂肪)，同时给予试验物质。在给药之前即刻采血(0)，至给药后4小时内每小时进行采血，以测定血胰岛素和血糖水平。
使用“Glazyme Insulin-EIA TEST”(Wako Pure Chemical Industries.Ltd.，Osaka)测定血胰岛素水平。使用试剂盒(Glucose CII Test Wako，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Osaka)根据变旋酶/GOD法测定血糖水平。
将试验物质(500mg、1000mg和2000mg球蛋白水解产物和安慰剂)给予肥胖受试者和正常受试者后4小时的血胰岛素水平(AUC：曲线下面积，？mU/L·4h)和血糖水平(？mg/dL·4h)显示于表5。
表5
球蛋白水解产物对血胰岛素水平的作用
受试者 试验物质 剂量    胰岛素  血糖水平
(mg)    (？mU/L·4h)  (？mg/dL·4h)
肥胖受试者 安慰剂 0    47.9±7.1  100％  42.2±9.6  100％
球蛋白水解产物 500    73.4±10.5  153％ P＜0.05  40.9±6.7  97％
1000    85.2±12.8  178％ P＜0.01  24.2±4.9  57％ P＜0.05
2000    64.9±4.4  136％ P＜0.05  30.0±5.2  71％ P＜0.05
正常受试者 安慰剂 0    51.2±3.6  100％  38.7±11.3  100％
球蛋白水解产物 500    55.7±5.4  109％  34.1±8.2  88％
1000    40.2±2.7  79％ P＜0.01  39.6±7.3  102％
2000    42.4±2.7  83％ P＜0.01  38.8±6.4  100％
从表中可以看出，通过给予球蛋白水解产物，肥胖受试者的血胰岛素水平(胰岛素分泌速率)明显增加，血糖水平的升高相应地得到抑制。当球蛋白水解产物以1000mg的量给药时，该效应非常显著。相反，在正常受试者中没有观察到血胰岛素水平(胰岛素分泌速率)的升高(促进)。正常受试者而是显示出下降的趋势。
在对日本人受试者进行的试验实施例3中，3000mg球蛋白水解产物的给药量显示的促进血胰岛素水平(胰岛素分泌速率)的作用比1000mg球蛋白水解产物的给药量要强。相反，在对西方人进行的本试验实施例中，1000mg球蛋白水解产物的给药量显示的促进血胰岛素水平的作用(促进胰岛素分泌作用)比2000mg球蛋白水解产物的给药量要强。鉴于这一事实，球蛋白水解产物可以用作日本糖尿病患者的有效改善或预防组合物，其效果预计比对于西方糖尿病患者更好。
试验实施例5降低血糖水平的作用(西方人)
对30名BMI为30或更高的肥胖受试者(年龄18至65岁)进行12周的肥胖治疗计划(饮食疗法、运动疗法)。其中17名随机选择的受试者在家中每天摄入一次含1.5g制备实施例1中制备的球蛋白水解产物的低热量食物(试验组)。剩余的13名受试者在家中每天摄入一次不含球蛋白水解产物的低热量食物(对照组)。此家庭保健37周后，测定试验组和对照组的试验受试者的空腹血糖水平和体重，将测定结果与家庭保健之前测定的结果进行比较。使用试剂盒(Glucose CII TestWako，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Osaka)根据变旋酶/GOD法测定血糖水平。表6显示了试验组和对照组的试验受试者相对于家庭保健开始之前的空腹血糖水平变化均数。
表6
受试者数目     体重变化(kg)     血糖水平变化(mg/dL)
对照组   13     -3.7±7.2     +9.0±14.1
试验组(球蛋白水解产物给药组) 17 -3.9±9.4 -7.3±16.8
从表中可以看出，球蛋白水解产物给药组和非球蛋白水解产物给药组(对照组)的试验受试者均显示出体重低于家庭保健开始之前的体重。而且，球蛋白水解产物给药组显示出的血糖水平显著降低。鉴于试验实施例4的结果，推测本试验实施例中显示的球蛋白水解产物降低血糖的作用推测是促进胰岛素分泌引起的。
试验实施例6安全性试验
将实施例2中制备的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro(SEQ.ID.No.1)的肽口服给予雄性和雌性ICR小鼠，其用量为10g/kg(最高容许剂量)或更高，没有一例死亡，从而表明该肽的安全性。
实施例1制备含肽(VVYP)的食品
(1)制备奶粉
将10毫克制备实施例2中制备的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro(SEQ.ID.No.1)的肽加入到100g婴儿奶粉配方中，从而得到具有促进胰岛素分泌或抑制血糖升高功能的奶粉。
(2)制备巧克力
将50毫克制备实施例2中制备的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro(SEQ.ID.No.1)的肽加入到100g巧克力中，从而得到具有促进胰岛素分泌或抑制血糖升高功能的巧克力。
(3)制备绿茶饮料
将80千克绿茶叶加入到300l热水(80℃)中，在该温度下提取4分钟。将得到的提取物冷却并离心。收集清亮的上清液作为绿茶提取物。向此提取物中加入0.4kg维生素C，然后加入50g制备实施例2中制备的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro(SEQ.ID.No.1)的肽。加入热水至最终体积为1000l。混合物加热至85℃或更高的温度，装入金属罐，蒸馏灭菌(125℃，5分钟)，从而得到绿茶饮料。
(4)制备口香糖
使用以下配方制备口香糖。
<口香糖配方>
香糖胶基    25.0重量份
蔗糖        63.8重量份
玉米糖浆    10.0重量份
甘油        1.0重量份
肽(VVYP)    0.2重量份
总计        100.0重量份
首先将香糖胶基、糖、玉米糖浆和甘油混合。然后加入制备实施例2中制备的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro(SEQ.ID.No.1)的肽，使用混合机在50℃下将该混合物进行均匀捏合。冷却后，通过轧辊对混合物进行压模，从而得到含有肽(VVYP)作为活性成分的口香糖棒，每根棒中该肽的比例为5mg。
实施例2制备含球蛋白水解产物的食品(1)补充剂
根据标准方法将下列成分捏合、成粒、干燥和压片，得到含有球蛋白水解产物作为活性成分的片剂，每片(200mg)中该球蛋白水解产物的含量为25wt.％(50mg)。这些片剂用作具有球蛋白水解产物药理学作用(抗糖尿病作用、抑制血糖水平升高作用、促进胰岛素分泌作用)的补充剂。
<片剂配方>                      (每片)
球蛋白水解产物(制备实施例1)     50mg
微晶纤维素                      140mg
蔗糖脂肪酸酯                    10mg
总计                            200mg
实施例3制备含有本发明肽的饲料
将制备实施例2中制备的氨基酸序列为Val-Val-Tyr-Pro(SEQ.ID.No.1)的肽以0.1wt.％的比例加入到含有维生素、矿物质和类似物质的预混合物中。将该混合物以10wt.％的比例加入到市售的犬用食品中，从而得到具有促进胰岛素分泌或抑制血糖升高功能的犬用食品。
                工业应用性
根据本发明，可以制造由于其中包含有球蛋白水解产物或肽(VVYP)作为活性成分而发挥降低血糖或促进胰岛素分泌作用的药物组合物、食品组合物和饲料组合物。这些组合物由于具有降低血糖或促进胰岛素分泌的作用，在糖尿病和临界性糖尿病受试者中表现出降低高血糖性血糖水平的作用。因此，本发明的组合物可以有效用于预防或治疗由高血糖症引起的疾病，尤其是糖尿病和糖尿病并发症。
                    序列表
<110>爱沐健制药株式会社
<120>具有抗糖尿病作用的蛋白质水解物
<130>P05-98
<150>US 60/627843
<151>2004-11-15
<160>1
<210>1
<211>4
<212>PRT
<400>1
Val Val Tyr Pro
  1              4

Claims (20)

1.一种抗糖尿病药物，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
2.一种血糖升高抑制剂，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
3.一种胰岛素分泌促进剂，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
4.一种特殊保健用食品，其具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并优选以此功能加以使用，所述食品包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
5.一种饲料，其具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并优选以此功能加以使用，所述饲料包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
6.一种预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物，其包括活性成分球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽。
7.根据权利要求6的预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物，其中所述由高血糖症引起的疾病是糖尿病或糖尿病并发症，如糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍。
8.根据权利要求6的预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物，其中所述由高血糖性症引起的疾病是II型糖尿病或其并发症。
9.一种抑制受试者血糖水平增加的方法，其包括将有效量的球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽给予患有由高血糖症引起的疾病的受试者或处于该疾病临床前期的受试者的步骤。
10.根据权利要求9的抑制受试者血糖水平增加的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是糖尿病或糖尿病并发症，如糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍。
11.根据权利要求9的抑制受试者血糖水平增加的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是II型糖尿病或其并发症。
12.一种预防或治疗受试者由高血糖症引起的疾病的方法，其包括将有效量的球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽给予患有由高血糖症引起的疾病的受试者或处于该疾病临床前期的受试者的步骤。
13.根据权利要求12的预防或治疗受试者由高血糖症引起的疾病的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是糖尿病或糖尿病并发症，如糖尿病性酸中毒、糖尿病性黄瘤、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性酮症、糖尿病性昏迷、糖尿病性胃功能紊乱、糖尿病性坏疽、糖尿病性溃疡、糖尿病性腹泻、糖尿病性微血管病变、糖尿病性子宫体硬化症、糖尿病性心肌病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性大疱、糖尿病性白内障、糖尿病性皮肤病、糖尿病性硬化症、糖尿病性视网膜病变、糖尿病脂性渐进性坏死或糖尿病性血循环障碍。
14.根据权利要求12的预防或治疗受试者由高血糖症引起的疾病的方法，其中所述由高血糖症引起的疾病是II型糖尿病或其并发症。
15.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备抗糖尿病药物中的用途。
16.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备血糖升高抑制剂中的用途。
17.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备胰岛素分泌促进剂中的用途。
18.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备特殊保健用食品中的用途，所述的特殊保健用食品具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并通常以此功能加以使用。
19.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备饲料中的用途，所述的饲料具有抑制血糖升高的功能或提高胰岛素分泌的功能，并通常以此功能加以使用。
20.球蛋白水解产物或Val-Val-Tyr-Pro肽在制备预防或治疗由高血糖症引起的疾病的组合物中的用途。
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