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CN113648427B - 透明质酸-es2-af肽偶联物及其制备方法和应用 - Google Patents

透明质酸-es2-af肽偶联物及其制备方法和应用 Download PDF

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CN113648427B CN202110961783.XA CN202110961783A CN113648427B CN 113648427 B CN113648427 B CN 113648427B CN 202110961783 A CN202110961783 A CN 202110961783A CN 113648427 B CN113648427 B CN 113648427B
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Abstract

本申请提供透明质酸‑ES2‑AF肽偶联物及其制备方法和应用，所述透明质酸‑ES2‑AF肽偶联物包含ES2‑AF肽和透明质酸(HA)，和由4‑羧基苯甲醛(CBA)与己二酸二酰肼(ADH)形成的连接桥，其中，所述连接桥将ES2‑AF肽和透明质酸相连。本发明提供的透明质酸‑ES2‑AF肽偶联物具有良好的稳定性和生物活性，与ES2‑AF肽以及HA‑ES2‑AF偶联物相比，其稳定性更高，生物活性更强，因此具有良好的实际应用之价值。

Description

透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用
技术领域
本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息旨在增加对本发明总体背景的理解，而该公开不应必然被视为承认或以任何形式暗示该信息已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
内皮抑素(Endostatin，ES，“IVRRADRAAVP”)最初是从培养的鼠血管内皮细胞瘤细胞系的上清液中分离出来的，一种新型的含有183个氨基酸、分子量为20kDa血管生成抑制剂，具有抑制肿瘤血管生成的能力，表现出强大的抗内皮细胞活性，包括抑制内皮细胞增殖、迁移、粘附等。引入VEGF受体1的选择性拮抗六肽Anti-Flt1(“GNQWFI”)可以更好地靶向于肿瘤血管内皮细胞的VEGF受体，抑制内皮细胞迁移和管腔形成。现有ES-2与Anti-Flt1通过五个甘氨酸连接架桥化学固相合成的ES2-AF肽可以通过多靶点共同作用更好的抑制肿瘤血管生成。虽然ES2-AF肽链延长，但仍因体内半衰期短较短体、稳定性较差等缺点，而应用受到限制。
发明内容
为了改善现有技术的不足，本发明提供了一种透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用。本发明通过以己二酸二酰肼(Adipic acid dihydrazide,ADH)与4-羧基苯甲醛(4-Carboxybenza-ldehyde,CBA)相连得到的衍生物作为酸敏感连接桥，该连接桥简称为ADH-CBA，将化学固相合成的抗血管内皮生成的ES2-AF肽连接到亲水性的透明质酸(Hyaluronic acid,HA)分子骨架上，从而成功制备得到透明质酸-ES2-AF肽偶联物，其具有良好的稳定性和生物活性，因此具有良好的实际应用价值。
具体地，本发明提供了下述的技术特征，以下技术特征的一个或多个的结合构成本发明的技术方案。
在本发明的第一方面，本发明提供了一种透明质酸-ES2-AF肽偶联物，其包含ES2-AF肽和透明质酸(HA)，和由4-羧基苯甲醛(CBA)与己二酸二酰肼(ADH)形成的连接桥(即ADH-CBA)，其中，所述连接桥将ES2-AF肽和透明质酸相连。
在本发明的实施方式中，所述连接桥中，4-羧基苯甲醛与己二酸二酰肼以酰胺键相连。
在本发明的实施方式中，所述连接桥与透明质酸通过酰胺键相连，所述连接桥与ES2-AF肽通过亚胺或甲亚胺键相连。
在本发明的实施方式中，所述ES2-AF肽的序列如SEQ ID NO.1(IVRRADRAAVPGGGGGGNQWFI)所示。
在本发明的一些较优的实施方式中，ES2-AF的分子量为2254.53Da，HA的分子量为57000Da。
本发明所述透明质酸-ES2-AF肽偶联物的结构简式为HA～ADH-CBA～ES2-AF，简称为HEA。在本发明的实施方式中，本发明所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物可以结构简式的形式表示，也可以HEA表示。
在本发明的实施方式中，本发明采用ADH-CBA作为连接桥连接ES2-AF肽和透明质酸，使ES2-AF肽在肿瘤微环境中的酸性条件下可以从HEA偶联物中释放出来，成为游离状态，快速到达肿瘤周围内皮细胞发挥抗血管生成作用。
在本发明的第二方面，本发明提供了一种制备上述第一方面中所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物的方法，其包括：己二酸二酰肼与透明质酸进行酰胺化反应连接至透明质酸上，得到HA-ADH偶联物，4-羧基苯甲醛与HA-ADH偶联物中己二酸二酰肼的游离氨基进行酰胺化反应，得到HA-ADH-CBA偶联物，加入ES2-AF肽，ES2-AF肽的氨基与HA-ADH-CBA偶联物中4-羧基苯甲醛中的醛基进行席夫碱反应，即得。
在本发明的实施方式中，每步反应后可进行纯化的步骤。本领域技术人员可通过本领域的已知方法对本发明的偶联物选择适宜的纯化方法。作为示例，在本发明的一些实施方式中，本发明提供了一种较优的纯化方法，其包括进行透析和冻干。比如，在一些具体地实施方式中，可采用透析袋法进行透析，将反应产物倒入预处理的透析袋中，用水或者乙醇/水混合液透析一至多次后，除去杂质，进行滤膜过滤后预冻，然后放入冷冻干燥机中冻干，即可。
其中，在纯化得到HEA后，经超声处理，在溶解介质中可形成分散良好、粒度均一的球型结构。
进一步地，在本发明所述的制备透明质酸-ES2-AF肽偶联物方法，包括：
制备HA-ADH偶联物：将HA溶解于水中，加入ADH和EDCI完全溶解后调节pH至酸性，反应完成后，再调节pH至中性，反应产物经纯化即得HA-ADH偶联物；
制备HA-ADH-CBA偶联物：将CBA溶于二甲亚砜中，加入EDCI和NHS作为催化剂活化CBA中的羧基；将HA-ADH溶解于水中，缓慢加入上述CBA溶液继续反应，反应完成后，反应产物经纯化后即得HA-ADH-CBA偶联物；
制备HEA偶联物：将HA-ADH-CBA溶解于缓冲液(pH＝7.4)和二甲亚砜混合液中，加入ES2-AF，室温反应过夜，反应完成后，反应产物经纯化即得HEA偶联物；经过超声法处理，在溶解介质中可以形成分散良好、粒度均一的球型结构。
在制备HA-ADH偶联物的过程中，调节pH至酸性具体为加入酸性溶液(如HCl)调节pH至4.75左右；调节pH至中性具体为加入碱性溶液(如NaOH)调节pH至7.0左右；加入己二酸二酰肼溶液后反应时间控制为6h左右；反应产物纯化步骤包括透析和冻干步骤。
在制备HA-ADH-CBA偶联物的过程中，活化时间控制为2h；缓慢加入上述4-羧基苯甲醛溶液继续反应，反应时间控制为12h；反应产物纯化步骤包括透析、冻干。
在制备HEA偶联物的过程中，所述缓冲液为枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液或磷酸氢二钠-磷酸二氢钾，加入ES2-AF后，反应时间控制为12h；反应产物纯化步骤包括透析、干燥；超声功率为40W，时间为5min。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含上述第一方面中所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物。
在本发明的第四方面，本发明提供了一种药物制剂，其包含上述第一方面中所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物和至少一种药学上可接受的辅料或药物载体。
在本发明的一些实施方式中，本发明所述药物组合物或药物制剂可以胃肠道给药或非胃肠道给药，所述剂型包括但不限于可注射埋植剂、乳剂、脂质体、微囊剂、微球剂、纳米粒等。
常用的药学上可接受的辅料为赋形剂，比如溶剂、粘合剂、填充剂、润湿剂等，这些可在制备成特定的剂型时选择加入。如有需要，还可加入调味剂、着色剂、稳定剂、润滑剂等其他辅料。本领域技术人员可使用本领域公知的技术将本发明的HEA配制成药物组合物或药物制剂。比如可根据由沈阳药科大学主编的现代药物制剂丛书进行药物制剂的制备。以及，除本发明中提到的，合适的药用辅料还可以是本领域已知的其他类型，例如作者Paul JSheskey等人编著的《药用辅料手册》(Handbook of Parmaceutical Excipients)中所记载的，该书目前已修订至第八版，第一版公开于1986年，第八版公开于2017年。
所述药物载体可以是药学上可接受的溶剂、悬浮剂或载体，用于将药物活性成分递送至动物或人体内。载体可以是液体或固体，并按照计划的给药方式进行选择。蛋白和脂质体也是药物载体。
在本发明的第五方面，本发明提供了上述第一方面中所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物或上述第三方面中所述的药物组合物或上述第四方面中所述的药物制剂在制备治疗与新生血管生成相关的疾病的药物和/或抗肿瘤药物中的用途。
在本发明中，所述与新生血管生成相关疾病包括但不限于糖尿病视网膜病变、老年性黄斑病变和关节炎等；所述肿瘤包括但不限于包括黑色素瘤、乳腺肿瘤、肺部肿瘤、结肠肿瘤、卵巢肿瘤和肾脏肿瘤。
在肿瘤发生过程中，需要大量的血管来递送氧气和营养物质来维持肿瘤细胞的快速生长。如果想要抑制肿瘤的发生与发展需要切断其营养供给，即抑制新生血管的形成，最终达到饿死肿瘤的目的。糖尿病视网膜病变(Diabeticretinopathy，DR)是一种糖尿病常见的并发症之一。研究表明，视网膜新生血管的形成是DR疾病的主要致病原因之一，因此，抑制新生血管的生成就可以有效抑制DR的发生。
在本发明一些实施方式中，所述治疗与新生血管生成相关的疾病的药物为抗新生血管生成的药物、抑制内皮细胞迁移的药物和/或抑制内皮细胞管腔形成的药物。
在本发明的第六方面，本发明提供了一种治疗与新生血管生成相关的疾病的方法，其包括向受试者施用有效剂量的本发明的HEA偶联物或包含该偶联物的药物组合物或药物制剂。其中，所述治疗与新生血管生成相关的疾病包括抗新生血管生成、抑制内皮细胞迁移的药物和/或抑制内皮细胞管腔形成。
所述“受试者”是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。所述治疗有效量是指包括本发明化合物在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其他医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。
相较于现有技术，本发明的优势在于：本发明中的透明质酸-ES2-AF肽偶联物与ES2-AF肽相比，增强了ES2-AF肽的抗血管生成和抗肿瘤活性，整合透明质酸分子的靶向性，使获得偶联物生物活性更强、靶向性更高、稳定性更强；并且与发明人前期合成的HA-CO-NH-(ES2-AF)相比，因连接桥的改变使HEA表现出更强的生物活性，表现出更好的应用潜力。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。以下，结合附图来详细说明本申请的实施方案，其中：
图1：实施例1中HEA偶联物的核磁共振氢谱图；
图2：实施例1中HEA偶联物粒径形态图；
图3：实验例1中ES2-AF、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物对内皮细胞增殖的抑制作用结果；
图4：实验例2中ES2-AF、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物对内皮细胞迁移的抑制作用结果；
图5：实验例3中ES2-AF、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物对内皮细胞管腔形成的抑制作用结果；
图6：实验例4中HEA偶联物对内皮细胞的靶向亲和力研究结果。
图7：实验例5中HEA偶联物环境响应性释放行为评价结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本申请所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本申请所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本申请方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明所述的ES2-AF肽的序列信息如SEQ ID NO.1(IVRRADRAAVPGGGGGGNQWFI)所示，分子量为2254.53Da，其已在中国专利CN107261124A中公开，可按照该专利中的方法获得，同时，本发明下述实验例中涉及的HA-ES2-AF偶联物即为按照CN107261124A实施例2中所述的方法制备得到。在此，中国专利CN107261124A中的公开的内容以引用的形式并入本申请。
实施例1：透明质酸-ES2-AF肽偶联物(HA～ADH-CBA～ES2-AF，HEA)的制备
制备步骤如下：
(1)取适量HA溶于去离子水中，获得HA溶液，依次加入5倍当量的ADH、EDCI，搅拌溶解，随后调节反应溶液的pH值至4.75，室温反应6h，反应完成后调节pH至7.00，将反应溶液装入透析袋(截留分子量为3500Da)中，用去离子水透析两天，每天三次，除去未反应的物质，0.22μm滤膜过滤后，预冻放入冷冻干燥机中冻干，获得HA-ADH偶联物。
(2)取适量HA-ADH溶解于去离子水中，获得HA-ADH溶液，另外称取适量的CBA溶于二甲亚砜中，向其中分别加入EDCI和NHS作为催化剂，比例为5：1，反应2h，最后滴加到完全溶解的HA-ADH中,室温反应12h，之后装入透析袋(截留分子量500)中，用乙醇/水(V:V＝1:4)混合液透析三次后，再继续用去离子水透析三次，除去未反应的杂质。0.22μm滤膜过滤后，预冻放入冷冻干燥机中冻干，获得HA-ADH-CBA偶联物。
(3)取适量的HA-ADH-CBA偶联物溶于缓冲液(pH＝7.4)和DMSO混合液(V：V＝1:1)中，加入1当量的抗新生血管生成肽ES2-AF，室温反应12h，pH 7.4缓冲液透析三次，除去未反应的杂质。0.22μm滤膜过滤后，预冻放入冷冻干燥机中冻干，获得HEA偶联物。经过超声法处理，在溶解介质中可以形成分散良好、粒度均一的球型结构。
采用1H NMR鉴定HA，HA-ADH，HA-ADH-CBA，HEA结构，结果如图1所示，已成功制备出HEA偶联物。球形结构，如结果如图2所示。
实验例1：ES2-AF肽、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物对内皮细胞增殖的抑制作用比较
实验过程如下：
(1)实验药物：ES2-AF肽、实施例1制备的HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物，三组药物中ES2-AF肽浓度一致。
(2)实验方法：采用CCK-8法探究制剂以及HEA偶联物对内皮细胞增殖的影响。即取处于对数生长期的EAhy926内皮细胞，消化离心重悬后，稀释成5×104个/mL，取100μL/孔接种于96孔板，过夜贴壁后，加入ES2-AF终浓度为5、50、250、500、1000μg/mL的ES2-AF、HEA和HA-ES2-AF溶液。将只含有DMEM培养基的孔设置为空白对照组，有细胞且不加含药培养基的孔作为为阴性对照组。置于培养箱中继续孵育24h后，弃去培养基，每孔加入100μL含20％CCK-8的基本培养基，继续孵育1-2h至颜色变为橙色后取出，利用酶标仪设置波长为450nm后测定每孔的吸收值(OD)。利用以下公式计算细胞抑制率：
细胞抑制率(％)＝(空白对照组-实验组)/空白对照组×100％，
抑制内皮细胞增殖实验结果见图3。由图可以看出，ES2-AF、HEA和HA-ES2-AF对EAhy926细胞的增殖均有明显的抑制作用，随着肽浓度的增加，抑制率也呈剂量依赖性增加。同时发现，随着浓度的增加，与ES2-AF和HA-ES2-AF相比，HEA的抑制作用更强。
实验例2：ES2-AF肽、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物对内皮细胞迁移的抑制作用比较
实验过程如下：
(1)实验药物：ES2-AF肽、实施例1制备的HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物，三组药物中ES2-AF肽浓度一致。
(2)实验方法：采用细胞划痕实验探究制剂对内皮细胞迁移的影响。所用200μL黄色枪头需要提前放4℃冰箱预冷，取处于对数生长期的EAhy926细胞，消化离心重悬后，稀释成2×105个/mL，取1mL/孔接种于6孔板，过夜贴壁后，使用遇冷的黄色枪头在细胞表面轻轻划三条平行的直线，PBS清洗掉多余的细胞，每孔加入ES2-AF终浓度为5、50、250、500、1000μg/mL的ES2-AF、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物，将有细胞且不加含药培养基的孔只置为阴性对照组，继续孵育24h，分别在0h和24h时置于倒置荧光显微镜下观察拍照，利用软件Image J进行后续数据处理。
抑制内皮细胞迁移实验结果见图4。由图中可以看出，ES2-AF、HEA和HA-ES2-AF偶联物均能显著降低细胞的迁移，随着浓度的增加，与ES2-AF和HA-ES2-AF偶联物相比，HEA抑制内皮细胞迁移的能力更强。
实验例3：ES2-AF肽、实施例1制备的HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物对内皮细胞管腔形成的抑制作用比较
实验过程如下：
(1)实验药物：ES2-AF肽、实施例1制备的HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物，两组药物中ES2-AF肽浓度一致。
(2)实验方法：采用管腔形成实验探究制剂对EAhy926细胞抗新生血管生成的影响。所用枪头和96孔板需要提前放4℃过夜预冷，Matrigel基质胶也提前放入4℃融化。取50μL/孔基质胶均匀铺入96孔板，轻轻拍打除去气泡以便后续观察。细胞孵育箱孵育40min，待基质胶完全凝固，取处于对数生长期的EAhy926细胞，消化离心重悬后，稀释成4×105个/mL，100μL/孔进行接种。加入ES2-AF终浓度为5、250、1000μg/mL的ES2-AF肽、HEA偶联物和HA-ES2-AF偶联物，将有细胞且不加含药培养基的孔只置为阴性对照组，培养6h后，置于倒置荧光显微镜下观察细胞血管网的生成情况并拍照，利用软件Image J进行数据统计，随后作图分析。
抑制管腔形成实验结果见图5。由图可知，ES2-AF、HEA和HA-ES2-AF偶联物均能抑制内皮细胞EAhy926的小管形成，且随着浓度的增大，抑制能力增强。与ES2-AF和HA-ES2-AF偶联物相比，HEA抑制内皮细胞管腔形成的能力更强
实验例4：实施例1制备的HEA偶联物对内皮细胞靶向亲和力的研究
实验过程如下：
(1)实验药物：阿霉素(Doxorubicin,DOX)、DOX标记的实施例1制备的HEA(DOX-HEA)偶联物，两组DOX浓度一致。
(2)实验方法：即取0.1mg HEA溶解于pH 7.4的缓冲溶液中，使其浓度为4mg/mL，随后将1.5当量DOX·HCl加入上述溶液，室温反应过夜，之后装入透析袋(截留分子量3500Da)，pH 7.4缓冲液透析至无色，冻干，得到DOX荧光标记的偶联物DOX-HEA。
通过受体饱和法阻断配体-受体介导的内吞行为，利用各组的荧光强弱验证透明质酸-ES2-AF肽偶联物是否具有透明质酸受体靶向亲和力，具体操作步骤如下：
即分别取处于对数生长期的EAhy926细胞，消化离心重悬后，稀释成10×104个/mL，取1mL分别接种于共聚焦小皿，过夜贴壁后，PBS清洗三遍，加入终浓度2μg/mL的游离DOX或DOX标记的HEA。将高浓度HA溶液提前孵育2h的细胞作为受体阻断组，将细胞继续孵育1、2或4h后，弃去培养基，PBS清洗三遍，用1mL的4％多聚甲醛在室温下固定30min，PBS继续清洗三遍，加入适量DAPI染色10min，弃去染料，用PBS清洗干净再加入1mL PBS用于浸润细胞，最后，将细胞置于共聚焦显微镜下观察摄取情况并进行拍照。
对内皮细胞靶向亲和力实验结果见图6。由图可知，各组随时间的延长而摄取量增加HA提前孵育，受体被饱和，，摄取量显著减少，因此绿色荧光明显降低，证明了HEA偶联物对内皮细胞靶向亲和力。
实验例5：实施例1制备的HEA偶联物对环境响应性释放行为评价
实验过程如下：
(1)实验药物：ES2-AF肽、实施例1制备的HEA偶联物
(2)实验方法：为验证合成的HEA在酸性环境中是否具有响应性，利用荧光分光光度法检测ES2-AF的累计释放量。分别取ES2-AF浓度为500μg/mL HEA的1mL分别放在含有不同pH(7.4，6.8，5.0)的10mL的缓冲液中，进行体外模拟酸敏感实验。将各溶液放置在37℃的摇床中孵育，然后在不同的时间点(0、0.5、1、2、4、6、8、12、24、36、48、60、72h)对释放介质进行取样，每次取出0.5mL后，补加等量新鲜释放介质。利用多功能酶标仪，使用荧光分光光度法进行ES2-AF含量测定并绘制的时间-释放度曲线。
偶联物环境响应性释放行为评价结果见图7。由图可知，pH＝7.4的中性环境下基本几乎没有ES2-AF的释放，随着酸性的增强，累计释放速率增大，说明HEA偶联物具有较好的酸敏感响应性，可以在肿瘤微环境中快速释放，发挥更好的作用效果。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东大学
<120> 透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用
<130> 202124814
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<400> 1
Ile Val Arg Arg Ala Asp Arg Ala Ala Val Pro Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Asn Gln Trp Phe Ile
20

Claims (10)

1.一种透明质酸-ES2-AF肽偶联物，其特征在于，其包含ES2-AF肽和透明质酸，和由4-羧基苯甲醛与己二酸二酰肼形成的连接桥，其中，所述连接桥将ES2-AF肽和透明质酸相连；所述连接桥中，4-羧基苯甲醛与己二酸二酰肼以酰胺键相连；
所述连接桥与透明质酸通过酰胺键相连，所述连接桥与ES2-AF肽通过亚胺键相连；
所述ES2-AF肽的序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种制备权利要求1所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物的方法，其特征在于，己二酸二酰肼与HA进行酰胺化反应连接至HA上，得到HA-ADH偶联物，4-羧基苯甲醛与HA-ADH偶联物中ADH的游离氨基进行酰胺化反应，得到HA-ADH-CBA偶联物，加入ES2-AF肽，其与HA-ADH-CBA偶联物中CBA端进行席夫碱反应，即得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，每步反应后进行纯化的步骤。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述纯化包括进行透析和冻干。
5.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物。
6.一种药物制剂，其包含权利要求1所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物和至少一种药学上可接受的辅料。
7.权利要求1所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物或权利要求5所述的药物组合物或权利要求6所述的药物制剂在制备治疗与新生血管生成相关的疾病的药物和/或抗肿瘤药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，所述与新生血管生成相关疾病包括糖尿病视网膜病变、老年性黄斑病变和关节炎。
9.根据权利要求7所述的用途，所述治疗与新生血管生成相关的疾病的药物为抗新生血管生成的药物、抑制内皮细胞迁移的药物和/或抑制内皮细胞管腔形成的药物。
10.根据权利要求7所述的用途，所述肿瘤包括黑色素瘤、乳腺肿瘤、肺部肿瘤、结肠肿瘤、卵巢肿瘤和肾脏肿瘤。
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pH响应型纳米药物载体的释药机制及性能研究进展;李祥子;胡平静;朱振铎;朱国兴;沈小平;汪茗;孙玉;冯德香;;无机化学学报(第08期) *

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