CN112689641B

CN112689641B - 具有皮肤美白活性的肽以及其用途

Info

Publication number: CN112689641B
Application number: CN201980038477.XA
Authority: CN
Inventors: 郑镕池; 金银美; 李应智; J·D·金
Original assignee: Caregen Co Ltd
Current assignee: Caregen Co Ltd
Priority date: 2019-08-20
Filing date: 2019-10-10
Publication date: 2023-11-07
Anticipated expiration: 2039-10-10
Also published as: US11654097B2; EP3800193A1; JP2022500345A; EP3800193A4; EP3800193B1; KR102265432B1; KR20210022407A; JP7284316B2; JP2022106946A; KR20210072747A; US20220183949A1; WO2021033831A1; JP7073482B2; CN117304263A; BR112020024339A2; KR102299411B1; ES2937058T3; CN117304262A; JP7343654B2; KR102299412B1

Abstract

本申请涉及具有皮肤美白活性的肽以及其用途，提供：一种肽，其由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成；一种用于皮肤美白的组合物，其包括所述肽；一种化妆品组合物，其包括所述用于皮肤美白的组合物；以及一种用于预防或治疗黑素过多沉着疾病的药物组合物，其包括所述用于皮肤美白的组合物。

Description

具有皮肤美白活性的肽以及其用途

技术领域

本申请涉及具有皮肤美白活性的肽以及其用途。

背景技术

除了根据人种、地区、性别，以及年龄的区别，确定肤色的因素基本上包括黄褐斑、雀斑，以及通过露出于紫外线的美黑，还包括整体上的色素沉着、粉刺、伤疤、角质的分布状态和血液循环、压力，以及健康状态等。在所述因素中，已知色素沉着为确定肤色的主要因素。

影响肤色的色素包括黑素、类黑素、胡萝卜素、血红蛋白，以及类胡萝卜素等，皮肤、毛发，以及眼睛的各种颜色取决于这些色素。其中，确定肤色的最重要的色素为黑素，具体地，肤色取决于黑素的量和分布。黑素在表皮下的称为黑素细胞(Melanocyte)的细胞中生成，并且由于皮肤的新陈代谢移动到角质表面且被脱离。与肤色无关，黑素细胞的数几乎相同，只是因为黑素的产量、类别，以及分布上的区别发生肤色的区别。

在皮肤中，酪氨酸(Tyrosine)由于称为酪氨酸酶(Tyrosinase)的人体内的酶转换成二氢苯丙氨酸(dihydroxyphenylalanine；DOPA)，并且通过一系列的氧化过程最终产生黑素，其为黑褐色的聚合物。当黑素的产量过多时，会导致黄褐斑、雀斑，斑纹等的色素过多沉着，从而在美容上导致不好的结果。目前，随着休闲人口的增加导致享受屋外活动的人数的增加，对防止由紫外线引起的黑素沉着的需求也在增加。

在这样的技术背景下，正在从多个角度上进行开发通过对黑素生成细胞活性的阻碍、对酪氨酸酶活性的阻碍等机制防止黑素过多生成的美白剂的研究(韩国公开专利第10-2019-0109722号)，但还是微不足道。

发明内容

技术问题

一方面提供一种肽，其由序列号1、序列号2，或序列号3所氨基酸序列组成。

另一方面提供一种用于皮肤美白的组合物，其包括由序列号1、序列号2，序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分。

另一方面提供一种化妆品组合物，其包括所述用于皮肤美白的组合物。

另一方面提供一种用于预防或治疗黑素过多沉着疾病的药物组合物，其包括所述用于皮肤美白的组合物。

本申请的其他目的以及优点将基于所附的权利要求书和附图以及下面的详细描述被理解得更加明确。对于没有记载于本说明书中的内容而言，凡是本申请所属的技术领域或与其类似的技术领域的普通技术人员都能够充分认知并类推的，故省略说明。

技术方案

在本申请中披露的各描述以及实施形式可以被应用于其他描述以及实施形式。换言之，在本申请中披露的各种技术特征的所有组合属于本申请的范畴。并且，本申请的范围并不限于在下文中记载的具体描述。

一方面提供由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽。

在本说明书中使用的术语“肽”可以是指氨基酸残基通过肽结合互相结合来形成的线性的分子。所述肽是可以根据本领域公知的化学合成方法，尤其是根据固相合成技术(solid-phase synthesis techniques；Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85:2149-54(1963)；Stewart，等人.，固相肽合成，第二版，Pierce Chem.Co.:Rockford,111(1984))或液相合成技术(美国注册专利第5,516,891号)制备的。本发明人为了开发一种具有生物学上有效的活性的肽倾注了努力，结果，查明了由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽。在此，所述生物学上有效的活性可以是指显示选自以下的特性中的任何一种以上：(a)抑制黑素的生成；(b)抑制酪氨酸酶的活性；以及(c)抑制Rab27a、黑素亲和素、肌球蛋白VA、黑素细胞诱导转录因子、酪氨酸酶，或酪氨酸酶相关蛋白1的表达。因此，所述肽用于皮肤美白、预防或治疗黑素过多沉着疾病。

为了获得化学稳定性、强化的药理特性(半衰期、吸收性、滴定度，效能等)、改变的特异性(例如，广泛的生物学活性谱)，减轻的抗原性，在所述肽的N-或C-末端上可以结合保护基。在一个具体实施例中，所述肽的N-末端结合于选自以下项目的任何一个保护基：乙酰基(acetyl group)、芴甲氧羰基(fluorenylmethoxycarbonyl group)、甲酰基(formylgroup)、棕榈酰基(palmitoyl group)、肉豆蔻基(myristyl group)、硬脂基(stearylgroup)、丁氧羰基(butoxycarbonyl group)、烯丙氧羰基(allyloxycarbonyl group)、以及聚乙二醇(polyethylene glycol:PEG)；并且/或者所述肽的C-末端结合于选自以下项目中的任何一个保护基：氨基(amino group,-NH₂)、叔烷基(tertiary alkyl group)以及叠氮化物(azide,-NHNH₂)。并且，所述肽也可以选择性地进一步包括导向序列、标签(tag)、标记的残基、半衰期，或为了提高肽稳定性的特定目的而制造的氨基酸序列。

在本说明书中使用的术语“稳定性”不仅可以指从体内蛋白酶的攻击保护所述肽的体内稳定性，还可以指存储稳定性(例如，常温存储稳定性)。

其他方面提供：一种化妆品组合物，其包括包括序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列的肽作为有效成分；一种药物组合物，其包括包括序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列的肽作为有效成分；以及一种包括序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列的肽的用途，其用于制备化妆品或药物组合物或作为化妆品或药物组合物使用。

另一方面提供一种用于皮肤美白的组合物，其包括由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分。

在关于所述肽的描述中提起的术语或技术特征中，与已经提起的术语或技术特征相同的术语或技术特征如上所述。

在本说明书中使用的术语“皮肤美白”可以被解释为不但阻碍黑素的合成来使皮肤色调明亮而且改善由于紫外线、激素，或遗传的皮肤的色素过多沉着。在此，所述皮肤的色素过度沉着可以包括雀斑、黄褐斑、老年性黑斑、褐色斑，或老年斑，但不限于此。

在本说明书中使用的术语“改善”可以是指对状态的减轻或至少减少与治疗有关的参量如症状的程度的所有行为。

现有的功能性肽尽管具有有效的生物学活性，由于肽本身的尺寸，具有不能有效地导入靶组织或细胞中或因短的半衰期在短时间内在体内中消灭的问题。相反，根据一实施例的用于美白的组合物包括由10个以下的氨基酸组成的肽作为有效成分，因此，有效成分的皮肤浸透率等非常优异，例如，在局部地涂布在皮肤上时，可以得到有效的皮肤美白效果。

根据一实施例，所述肽可以显著地抑制黑素的生成和酪氨酸酶的活性。并且，所述肽可以抑制黑素生成相关因子即Rab27a、黑素亲和素(Melanophilin；Mlph)、肌球蛋白VA(myosin VA)、黑素细胞诱导转录因子(melanocyte inducing transcription factor；MITF)、酪氨酸酶(Tyrosinase)，或酪氨酸酶相关因子1(Tyrosinase-related protein1；TRP1)的表达。所以，所述肽可以被使用为用于皮肤美白的化妆品组合物的有效成分。

另一方面提供一种用于皮肤美白的化妆品组合物，其包括由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分。

所述化妆品组合物可以包括所述肽的化妆品学上有效量(cosmeticallyeffective amount)；和/或化妆品学上可接受的载体，但不限于此。

在本说明书中使用的术语“化妆品学上的有效量”是指足以实现所述化妆品组合物的皮肤美白效能的量。

所述肽和化妆品学上可接受的载体的重量比例如可以是500：1至1：500，作为一个例子，所述重量比可以是450：1至1：450、400：1至1：400、350：1至1：350、300：1至1：300、250：1至1：250、200：1至1：200、150：1至1：150、100：1至1：100、80：1至1：80、60：1至1：60、40：1至1：40，20：1至1：20、10：1至1：10、8：1至1：8、6：1至1：6、4：1至1：4，或2：1至1：2，但不限于此。

所述化妆品组合物可以被制成在本领域中通常制备的任何剂型，例如，溶液、悬浮液、乳浊液、面团、凝胶、面霜、乳液、粉末、肥皂、包括表面活性剂的洗涤剂、油、粉体型粉底、乳浊液型粉底、蜜蜡型粉底，以及发胶等，但不限于此。例如，所述化妆品组合物可以被制成柔软化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、清洁膏、洗面奶、清洁水、面膜、发胶或粉底的剂型。

当所述化妆品组合物的剂型为面团、面霜或凝胶时，可以使用动物油、植物油、蜜蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌等作为载体成分。

当所述化妆品组合物的剂型为粉末或发胶时，可以使用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚胺酸粉末作为载体成分，例如，当所述化妆品组合物为发胶时，可以进一步包括诸如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚的推进体。

当所述化妆品组合物的剂型为溶液或乳浊液时，可以使用溶剂、溶解剂或乳浊剂作为载体成分，例如可以包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇油、丙三醇脂肪族酯、聚乙二醇或山梨聚糖的脂肪酸酯。

在所述化妆品组合物的剂型为悬浮液时，可以使用诸如水、乙醇或丙二醇的液相稀释剂、诸如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇酯的悬浮剂、微晶质纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等作为载体成分。

当所述化妆品组合物的剂型为包括表面活性剂的洗涤剂时，可以使用脂肪族醇硫酸盐、脂肪族醇醚硫酸盐、琥珀酸单酯、羟乙磺酸盐、咪唑啉衍生物、牛黄酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪族酰胺醚硫酸盐、椰壳聚糖、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或或乙氧基化的丙二醇脂肪酸酯等作为载体成分。

除了作为有效成分的肽和载体成分之外，包括在所述化妆品中的成分包括通常使用于化妆品组合物中的成分，例如可以包括如抗氧化剂、稳定剂、溶解剂、维生素、颜料以及香料的常规辅助剂。

另一方面提供一种皮肤美白方法，其包括将包括由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分的化妆品组合物涂布在个体的皮肤上。

在关于所述化妆品组合物的描述中提起的术语或技术特征中，与已经提起的术语或技术特征相同的术语如上所述。

在本说明书中使用的术语“应用的”、“施用的”，以及“涂布的”可以互换使用，并且可以是指引起根据一实施例的组合物的到所需部位的至少一部分的局部化，或可以是指根据施用径路将根据一实施例的组合物配置于个体内。

另一方面提供一种用于预防或治疗黑素过多沉着疾病的药物组合物，其包括由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分。

在本说明书中，术语“预防”是指通过施用所述组合物抑制或迟延疾病的发生的所有行为。

在本说明书中，术语“治疗”是指向具有疾病或有发生疾病的危险的个体提供包括所述个体的状态(例如，一个以上的症状)的改善、疾病进行的迟延、症状发生的迟延或症状进行的钝化等的效果的任意形式的治疗。因此，所述“治疗”和“预防”不是指症状的治愈或完全的除去。

所述“个体”是指需要治疗疾病的对象，更具体地指人或非人类的灵长类、小鼠(mouse)、狗、毛、马，以及牛等的哺乳类。

作为需要通过所述药物组合物预防或治疗的对象疾病，“黑素过多沉着疾病”可以是统称黑素被过多地生成并沉着于皮肤的疾病，例如可以是黄褐斑、雀斑、老年性雀斑样痣，或日光性斑痣(solar lentigines)，但不限于此。

所述药物组合物可以包括所述肽的药物有效量(pharmaceutically effectiveamount)；和/或药学上可接受的载体，但不限于此。

在本说明书中使用的术语“药物有效量”可以是指足以实现所述药物组合物的对黑素过多沉着疾病的预防或治疗效能的量。

所述肽和药学上可接受的载体的重量比例如可以是500：1至1：500，作为一个例子，所述重量比可以是450：1至1：450，400：1至1：400、350：1至1：350、300：1至1：300、250：1至1：250、200：1至1：200、150：1至1：150、100：1至1：100、80：1至1：80、60：1至1：60、40：1至1：40、20：1至1：20、10：1至1：10、8：1至1：8、6：1至1：6、4：1至1：4，或2：1至1：2，但不限于此。

所述药学上可接受的载体是在制备剂型时通常使用的，包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶质纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟苯甲脂、丙基羟苯酸酯、滑石、硬脂酸镁以及矿物油等，但不限于此。合适的药学上可接受的载体以及制剂详细地记载于Remington'sPharmaceutical Sciences(第19版，1995年)。

除了所述组分之外，所述药物组合物可以进一步包括润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂，保存剂等，但不限于此。

所述药物组合物可以通过口服或肠胃外地施用，优选可以肠胃外地施用，在肠胃外地施用时，可以通过注入于肌肉、注入于静脉内、注入于皮下、注入于腹腔、局部施用，经皮施用等施用的，但不限于此。

所述药物组合物的施用量可以为每一天0.0001至1000μg、0.001至1000μg、0.01至1000μg、0.1至1000μg，1.0至1000μg，但不限于此，并且可以根据制剂化方法、施用方式、患者年龄、体重、性别、病状、饮食、施用时间、施用路径、排泄速度以及反应敏感性等的因素不同地进行处方。

所述药物组合物是根据在本发明所属的技术领域中的普通技术人员能够容易实施的方法，通过使用药学上可接收的载体和/或赋形剂制剂化来制成單位容量形式或注入于大容量容器内来制备。

所述剂型可以是在油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形式，或者可以是提取剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂的形式，并且可以进一步包括分散剂和/或稳定剂。

另一方面包括预防或治疗黑素过多沉着疾病的方法，其包括将包括由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分的治疗学上有效量的药物组合物施用于个体。

在关于所述药物组合物的描述中提起的术语或技术特征中，与已经提起的术语或技术特征相同的术语或技术特征如上所述。

另一方面提供一种用于皮肤美白的食物组合物，其包括由序列号1、序列号2，或序列号3的氨基酸序列组成的肽作为有效成分。

作为包括在所述食物组合物中的肽的含量是可以根据食品的形式、所需要的用途等可以合适且非限制性地选择的，例如，可以以整体食品重量的0.01至15重量％添加。并且，基于100ml，可以以0.02至10g，优选地以0.3至1g的比例添加健康饮料组合物。

有益效果

根据一方面的肽不仅显著地抑制黑素的生成和酪氨酸酶的活性，而且抑制与黑素生成有关的因素的表达，从而显示优异的皮肤美白效果。

根据一方面的肽不仅显著地抑制黑素的生成和酪氨酸酶的活性，而且抑制黑素生成相关因子的表达，因此可以被应用于减轻或改善皮肤的黑素过多沉着疾病。

因此，根据一方面的肽可以被使用为用于皮肤美白的组合物或用于预防或治疗黑素过多沉着疾病的药物组合物的有效成分。

附图说明

图1示出将由序列号1的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认黑素产生的减少的结果。

图2示出将由序列号2的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认黑素产生的减少的结果。

图3示出将由序列号3的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认黑素产生的减少的结果。

图4示出将由序列号1的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认酪氨酸酶活性的减少的结果。

图5示出将由序列号2的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认酪氨酸酶活性的减少的结果。

图6示出将由序列号3的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞后确认酪氨酸酶活性的减少的结果。

图7示出将由序列号1的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认黑素生成相关基因即Rab27a、肌球蛋白VA、黑素细胞诱导转录因子、酪氨酸酶相关蛋白1，以及酪氨酸酶的表达的结果。

图8示出将由序列号2的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中确认对黑素生成相关基因即黑素亲和素、黑素细胞诱导转录因子、以及酪氨酸酶的表达的抑制的结果。

图9示出将由序列号3的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认对黑素生成相关基因即Rab27a、肌球蛋白VA、黑素亲和素、黑素细胞诱导转录因子、酪氨酸酶，以及蓝氨酸酶相关蛋白1的表达的抑制的结果。

图10示出将由序列号1的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认对黑素生成相关蛋白即黑素亲和素、酪氨酸酶，以及黑素细胞诱导转录因子的表达的抑制的结果。

图11示出将由序列号2的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认对黑素生成相关蛋白即酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1，以及黑素细胞诱导转录因子的表达的抑制的结果。

图12示出将由序列号3的氨基酸序列组成的肽添加到B16F10细胞中后确认对黑素生成相关蛋白即黑素亲和素、Rab27a、酪氨酸酶，以及黑素细胞诱导转录因子的表达的抑制的结果。

具体实施方式

在下文中，通过实施例更加详细地描述本发明。但是，这些实施例仅用于示例性地描述本发明，而本发明的范围并不限于这些实施例。

实施例1、肽的合成

通过使用自动肽合成仪(Milligen 9050，密理博，美国)来合成记载于以下的[表1]中的具有序列号1的氨基酸序列的肽，并使用C18逆相高性能液相色谱(HighPerformance Liquid Chromatography；HPLC)(沃特世(Waters Associates)，美国)来纯粹分离所合成的肽。使用ACQUITY UPLC BEH300 C18(2.1mm×100mm，1.7μm，Waters Co,美国)作为柱。

[表1]

序列号	序列(N端→C端)
		1	LRKRKRRFWVL
2	FHFIPNW
		3	WPFLRP

实施例2、确认对黑素生成的抑制效果

将小鼠黑素瘤细胞即B16F10细胞以5×10⁴细胞/孔的密度接种于6孔板，并将其培养16小时。接着，在以包括2％的血清的培养基代替培养基后，添加200ng/ml的α-促黑素细胞激素(α-melanocyte-stimulating hormones；α-MSH)以促进黑素的生成，同时，分别添加10μM、50μM、100μM，或200μM的由序列号1、2，或3的氨基酸序列组成的肽，并将其培养72小时。接着，使用1N的NaOH溶解所培养的细胞，并测量在450nm处的吸光度。使用未处理组(Con)作为对照组，使用仅添加α-促黑素细胞激素的组作为阴性对照组，并使用添加已知为皮肤美白剂的熊果苷(Arbutin)(200μM，500μM)以及á-促黑素细胞激素的组作为阳性对照组。

结果，确认如图1至图3所示，因添加由序列号1、2，或3的氨基酸序列组成的肽，黑素的生成浓度依赖性地减少。

实施例3、确认对酪氨酸酶活性的抑制效果

将小鼠黑素瘤细胞即B16F10细胞以5×10⁴细胞/孔的密度接种于6孔板，并将其培养16小时。接着，以包括2％的血清的培养基代替培养基，并向该培养基投入200ng/ml的α-MSH，同时，分别添加1μM、10μM、20μM、40μM、60μM、80μM，或160μM的由序列号1、2，或3的氨基酸序列组成的肽，并将其培养72小时。将所述6孔板置于冰上并用冰凉的PBS洗涤后，向其添加含有1％的triton X-100的0.1M的磷酸钠缓冲液(pH 6.8，溶解缓冲液)来溶解细胞。然后，将存在于所述孔板中的细胞刮除(scrapping)并聚集在1.5ml的软管中，并对其进行涡旋(Vortexing)并以15,000rpm离心分离10分钟来获得上清。接着，定量上清内的蛋白并调整上清包括一定量的蛋白，向其添加缓冲液，并将总90μL的试料分株在96孔板上。并且，在所述板中，如以下的表2所示准备试验试料、Blank试料，阳性对照组试料。

[表2]

	试验试料	Blank试料	阳性对照组试料
				试料	90μl	-	-
缓冲液	-	90μl	90μl
				蘑菇酪氨酸酶(0.1mg/ml)	-	-	10μl

接着，将20μL的10mM L-DOPA添加到各试料中，并将在37℃下培养一个小时后，测量在475nm处的吸光度。使用未处理组(Con)作为对照组，使用仅添加α-促黑素细胞激素的组作为阴性对照组，并使用添加熊果苷(200μM，或500μM)和α-促黑色细胞激素的组作为阳性对照组。

结果，确认如图4至图6所示，因添加由序列号1、2，或3的氨基酸序列组成的肽，酪氨酸酶的活性浓度依赖性地受抑制。

实施例4、确认对黑素生成相关基因的表达的抑制效果

将小鼠黑素瘤细胞即B16F10细胞以5×10⁴细胞/孔的密度接种于6孔板，并将其培养16小时。接着，以包括2％的血清的培养基代替培养基，并向该培养基添加200ng/ml的α-促黑素细胞激素，同时，分别添加10μM、50μM、100μM，或200μM的由序列号1、2，或3的氨基酸序列组成的肽，并将其培养72小时。在从所述培养的细胞中提取信使核糖核酸(messengerribonucleic acid(RNA)；mRNA)，然后通过使用cDNA synthesis kit&PCR pre-mix(Intron，韩国)来对所述提取的mRNA进行反转录来合成各自的互补脱氧核糖核酸(complementary deoxyribonucleic acid(DNA)；cDNA)。然后，通过使用所述互补脱氧核糖核酸和Rab27a、黑素亲和素(Melanophilin；Mlph)、肌球蛋白VA、黑素细胞诱导转录因子、酪氨酸酶，以及酪氨酸酶相关蛋白1引物来进行聚合酶链锁反应(polymerase chainreaction；PCR)。使用与实施例2中所使用的相同的组作为对照组、阴性对照组以及阳性对照组，并且，在本实施例中所使用的引物的核苷酸序列如以下的表3。

[表3]

结果确认，如图7所示，通过添加由序列号1的氨基酸序列组成的肽抑制黑素生成相关基因即Rab27、肌球蛋白VA、黑素细胞诱导转录因子、酪氨酸酶相关蛋白1，以及酪氨酸酶的表达。并且确认，如8所示，通过添加由序列号2的氨基酸序列组成的肽抑制黑素生成相关基因即黑素亲和素、黑素细胞诱导转录因子，以及酪氨酸酶。并且确认，如图9所示，通过添加由序列号3的氨基酸序列组成的肽抑制黑素生成相关基因即Rab27a、肌球蛋白VA、黑素亲和素、黑素细胞诱导转录因子，酪氨酸酶，以及酪氨酸酶相关蛋白1的表达。

实施例5、确认对黑素生成相关蛋白的表达的抑制效果

将小鼠黑素瘤细胞即B16F10细胞以5×10⁴细胞/孔的密度接种于6孔板，并将其培养16小时。接着，以包括2％的血清的培养基代替培养基，并向该培养基添加200ng/ml的α-促黑素细胞激素，同时，分别添加10μM、50μM、100μM，或200μM的由序列号1、2、3的氨基酸序列组成的肽，并将其培养72小时。接着，在溶解所培养的细胞后，通过使用对黑素亲和素、Rab27a、酪氨酸酶、黑素细胞诱导转录因子、以及酪氨酸酶相关蛋白-1的抗体(圣克鲁斯生物技术，美国)来进行蛋白免疫印迹。使用与实施例2所使用的相同的对照组、阴性对照组，以及阳性对照组。

结果确认，如图10所示，通过添加由序列号1的氨基酸序列组成的肽抑制黑素生成相关蛋白的黑素亲和素、Rab27a、酪氨酸酶，以及黑素细胞诱导转录因子的表达。并且确认，如图11所示，通过添加由序列号2的氨基酸序列组成的肽抑制黑素生成相关蛋白的酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1，以及黑素细胞诱导转录因子的表达。并且确认，如图12所示，通过添加由序列号3的氨基酸序列组成的肽抑制黑素生成相关蛋白即黑素亲和素、Rab27a、酪氨酸酶，以及黑素细胞诱导转录因子的表达。

综合所述实验结果可知，根据一实施例的由序列号1、2，或3的氨基酸序列的肽具有皮肤美白效能。

上述的对本发明的描述仅是示例性的，本发明所述的技术领域的普通技术人员应当可以理解在不改变本发明的技术思想或必要特征的情况下也可以将本发明变形为其他具体形式。因此，在上文中描述的实施例在所有方面应当被理解为示例性的，而不是限制性的。

序列表

<110> CAREGEN CO., LTD.

<120> 具有皮肤美白活性的肽以及其用途

<130> PX060016PCT

<150> KR 2019-0101880

<151> 2019-08-20

<160> 17

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽 1

<400> 1

Leu Arg Lys Arg Lys Arg Arg Phe Trp Val Leu

1 5 10

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽 2

<400> 2

Phe His Phe Ile Pro Asn Trp

1 5

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽 3

<400> 3

Trp Pro Phe Leu Arg Pro

1 5

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Rab27a_F

<400> 4

gaaaatagcg ccaagcaccc 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Rab27a_R

<400> 5

cctctttcac tgccctctgg 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Mlph_F

<400> 6

acgatgtcag gggcaaacat 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Mlph_R

<400> 7

ctcctctgtg tcagcactgg 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 肌球蛋白 VA_F

<400> 8

ttctacattg tgggcgccat 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 肌球蛋白 VA_R

<400> 9

tcctccaggt tggtcaatcg 20

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> MITF_F

<400> 10

ccagcctggc gatcatgtca t 21

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> MITF_R

<400> 11

ggtctggaca ggagttgctg 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 酪氨酸酶_F

<400> 12

ggccagcttt caggcagagg 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 酪氨酸酶_R

<400> 13

tggtgcttca tgggcaaaat 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TRP1_F

<400> 14

tctgtgaagg tgtgcaggag 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TRP1_R

<400> 15

ccgaaacaga gtggaaggtt 20

<210> 16

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GAPDH_F

<400> 16

ggtgtgaacg gatttggccg tattg 25

<210> 17

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GAPDH_R

<400> 17

ccgttgaatt tgccgtgagt ggagt 25

Claims

1.一种肽，其由序列号1所示的氨基酸序列组成。

2.修饰的肽，其为由序列号1所示的氨基酸序列组成的肽在N-末端结合于选自以下项目中的任何一个保护基而形成的：乙酰基、芴甲氧羰基、甲酰基、棕榈酰基、肉豆蔻基、硬脂基、丁氧羰基、烯丙氧羰基及聚乙二醇。

3.修饰的肽，其为由序列号1所示的氨基酸序列组成的肽在C-末端结合于选自以下项目中的任何一个保护基而形成的：氨基、叔烷基及叠氮化物。

4.一种用于皮肤美白的组合物，其包括：

根据权利要求1所述的肽或根据权利要求2或3所述的修饰的肽作为有效成分，及

化妆品学上可接受的载体或药学上可接受的载体。

5.由序列号1所示的氨基酸序列组成的肽在制备皮肤美白用化妆品组合物中的用途。

6.由序列号1所示的氨基酸序列组成的肽在制备用于预防或治疗黑素过多沉着疾病的药物组合物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其中所述黑素过度沉着疾病为黄褐斑、雀斑、老年性雀斑样痣或日光性斑痣。