CN112014555B - 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 - Google Patents
一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112014555B CN112014555B CN202010893094.5A CN202010893094A CN112014555B CN 112014555 B CN112014555 B CN 112014555B CN 202010893094 A CN202010893094 A CN 202010893094A CN 112014555 B CN112014555 B CN 112014555B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- reagent
- solution
- alkaline phosphatase
- creatine kinase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 title claims abstract description 30
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title abstract description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title abstract description 25
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims abstract description 25
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 54
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 41
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 19
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims description 13
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- BGXNGARHYXNGPK-UHFFFAOYSA-N 2-[1-[(4-methoxyphenyl)methylsulfanyl]cyclohexyl]acetic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CSC1(CC(O)=O)CCCCC1 BGXNGARHYXNGPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 10
- FFJCNSLCJOQHKM-CLFAGFIQSA-N (z)-1-[(z)-octadec-9-enoxy]octadec-9-ene Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC FFJCNSLCJOQHKM-CLFAGFIQSA-N 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 7
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 7
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical group CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QYYMDNHUJFIDDQ-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-2-methyl-1,2-thiazol-3-one;2-methyl-1,2-thiazol-3-one Chemical group CN1SC=CC1=O.CN1SC(Cl)=CC1=O QYYMDNHUJFIDDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 6
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 6
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- OOIBFPKQHULHSQ-UHFFFAOYSA-N (3-hydroxy-1-adamantyl) 2-methylprop-2-enoate Chemical compound C1C(C2)CC3CC2(O)CC1(OC(=O)C(=C)C)C3 OOIBFPKQHULHSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PQXKWPLDPFFDJP-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethyloxirane Chemical compound CC1OC1C PQXKWPLDPFFDJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011244 Acrocallosal syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 2
- 208000019905 acrocephalosyndactyly Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 206010051895 acute chest syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013022 formulation composition Substances 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 208000037891 myocardial injury Diseases 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100022785 Creatine kinase B-type Human genes 0.000 description 1
- 102100022786 Creatine kinase M-type Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N HEPPSO Chemical compound OCCN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101001047117 Homo sapiens Creatine kinase B-type Proteins 0.000 description 1
- 101001047110 Homo sapiens Creatine kinase M-type Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
- G01N2333/9123—Phosphotransferases in general with a nitrogenous group as acceptor (2.7.3), e.g. histidine kinases
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供的一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述酶标抗体缓冲液的配方为：50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。所述试剂R1为采用所述的酶标抗体缓冲液稀释抗CK‑MB抗体‑碱性磷酸酶标记物获得的工作液。本发明在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；对非特异性吸附有着较好的抵抗效果。
Description
技术领域
本发明属于免疫检测技术领域，涉及一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒。
背景技术
急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常危及生命。本病在欧美最常见，美国每年约有150万人发生心肌梗死。中国近年来呈明显上升趋势，每年新发至少50万，现患至少200万。
肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)，也称为肌酸磷酸激酶。CK是由M和B两个亚基组成的二聚体，有三种同工酶即CKMM、CKMB、CKBB，不同肌肉内同工酶的比例不同。CK-MB主要分布于心肌细胞中，在心肌损伤后3～4小时上升，24小时达到最高点，3天内可恢复正常。CK-MB是当今最广泛的心肌损伤标志物之一，CK-MB对判断心肌坏死也有较高的特异性，由于检测窗口期相对较短，CK-MB测定也适于诊断再发心肌梗死，如检测到CK-MB升高则预示着心肌坏死，是ACS患者评估中的重要预后指标，尤其是NSTE-ACS患者，入院后CK-MB浓度与30天病死率呈正相关性，CK-MB浓度低于参考范围上限者30天病死率为1.8％，浓度为参考范围上限1～2倍者为3.3％，而浓度大于参考范围上限10倍者为8.3％，CK-MB在心肌疾病中，尤其是心肌梗死的诊断、治疗过程中有着举足轻重，甚至不可替代的作用。
在体外诊断试剂中，试剂的稳定性与抗干扰能力都是必不可少的，如在CN103278623A提到，试剂可在37℃条件下放置7天仍保持活性不变，并且其对于CK-MM与CK-BB的特异性交叉反应有较好的抗干扰能力，试剂性能优越。但当前的临床背景下，试剂盒所需抗干扰能力应该更强，如患者体内存在的类风湿因子(RF)和人抗鼠抗体(HAMAs)均会对检测结果产生影响，而且单一的37℃条件稳定性并不能适用于日常临床诊断。
由此可见，目前试剂盒需要更高特异性，并在有临床分析价值的试剂储存条件下具备长期的有效活性。
因此，如何制备一种稳定性好、能抗非特异性吸附的酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，成为亟待解决的技术问题。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，稳定性好：在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；在抗干扰方面，非离子表面活性剂对于非特异性吸附有着较好的抵抗效果。
本发明通过以下技术方案实现：
本发明的目的之一在于提供一种酶标抗体缓冲液，所述酶标抗体缓冲液的配方为：
50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；
其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。
进一步地，所述Tetronic701和聚氧乙烯油醚的质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。
进一步地，所述缓冲液选自：Tris、HEPES、MES、MOPSO缓冲液中的一种；所述防腐剂选自：叠氮化钠、ProClin-300中的一种。
进一步地，所述保护剂为牛血清白蛋白、PEG-1000、甘氨酸中的一种；所述无机盐为MgCl2或/和ZnCl2。
进一步地，所述稳定剂为4-氨基安替比林中的一种；所述阻断剂为小鼠IgG。
本发明的目的之二在于提供一种肌酸激酶同工酶测定用试剂R1，所述试剂R1为采用所述的酶标抗体缓冲液稀释抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物获得的工作液。
进一步地，所述抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物为采用碱性磷酸酶、CK-MB抗体和戊二醛进行反应获得，具体包括：
将CK-MB抗体溶解于PBS溶液中，获得浓度为0.5～2mg/ml的CK-MB抗体溶液；
将所述CK-MB抗体溶液中加入碱性磷酸酶，混匀后加入戊二醛，反应完全后透析除去未反应的戊二醛，获得抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物；所述碱性磷酸酶与所述抗CK-MB抗体的质量比为(8～12)：1，所述戊二醛的终浓度为0.1～0.4％。
本发明的目的之三在于提供一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂M和所述的试剂R1。
进一步地，所述试剂M为磁微粒缓冲液溶解包被抗CK-MB抗体的磁微粒获得的工作液；所述包被抗CK-MB抗体的磁微粒的制备方法为：
将磁珠微粒清洗重悬，获得磁微粒溶液；
使用活化液将所述磁微粒溶液活化，获得活化磁微粒溶液；
将所述活化磁微粒溶液包被CK-MB抗体，获得包被抗CK-MB抗体的磁微粒。
本发明的目的之四在于提供一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒的制备方法，采用所述的配方制得。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本发明提供的一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，通过改良化学发光试剂盒中酶标抗体缓冲液，进而改良了试剂R1的配方，从而达到同时提高稳定性和抗非特异性干扰的能力；所述酶标抗体缓冲液中，本申请人通过实验发现：1,2-亚乙二次氮四丙醇与环氧乙烷和甲基环氧丙烷的聚合物(Tetronic 701)与聚氧乙烯(20)油醚作为两种非离子表面活性剂，与蛋白酶之间存在特殊的相互作用，其相互作用力在恰当的条件下(即本发明的配方组成和pH条件下)可以提高酶的稳定性与抗非特异性吸附的能力。最终制备得到的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，稳定性好：在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；在抗干扰方面，非离子表面活性剂对于非特异性吸附有着较好的抵抗效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1是本发明实施例1的试剂盒测定值与Roche试剂盒测定的浓度值做相关性分析图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本发明实施例提供的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
根据本发明的典型实施方式之一，提供一种酶标抗体缓冲液，所述酶标抗体缓冲液的配方为：
50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；
其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。
本发明通过改良化学发光试剂盒中酶标抗体缓冲液，进而改良了试剂R1的配方，从而达到同时提高稳定性和抗非特异性干扰的能力；所述酶标抗体缓冲液中，本申请人通过实验发现：1,2-亚乙二次氮四丙醇与环氧乙烷和甲基环氧丙烷的聚合物(Tetronic 701)与聚氧乙烯(20)油醚作为两种非离子表面活性剂，与蛋白酶之间存在特殊的相互作用，其相互作用力在恰当的条件下(即本发明的配方组成和pH条件下)可以提高酶的稳定性与抗非特异性吸附的能力。最终制备得到的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，稳定性好：在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；在抗干扰方面，非离子表面活性剂对于非特异性吸附有着较好的抵抗效果。
非离子型表面活性剂、双离子表面活性剂两类电中性表面活性剂，在溶液中以相对较弱的作用力与蛋白质结合，如疏水作用力、氢键等，这类相互作用通常不会引起蛋白质构象的强烈改变。而且表面活性剂与蛋白质的相互作用不但和类型有关，还和浓度相关。同样的表面活性剂在不同的浓度下，与蛋白质的相互作用也不一样。选择合适的表面活性剂与适应浓度可以提高蛋白酶的稳定性。Tetronic 701的HLB值为1～7，和水完全互溶，是一种无物理和化学危险性的非离子表面活性剂；聚氧乙烯(20)油醚是一种亲水性非离子表面活性剂，HLB值为15，可溶于水。
本实施例中，
所述Tetronic701和聚氧乙烯油醚的质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。
所述缓冲液选自：Tris、HEPES、MES、MOPSO缓冲液中的一种；所述防腐剂选自：叠氮化钠、ProClin-300中的一种。
所述保护剂为牛血清白蛋白、PEG-1000、甘氨酸中的一种；所述无机盐为MgCl2或/和ZnCl2。
所述稳定剂为4-氨基安替比林中的一种；所述阻断剂为小鼠IgG。一般情况下，患者体内存在的或者检测时动物来源实验用药物组分中存在的HAMA会干扰很多免疫学检测方法，引起假阴(阳)性检测结果。小鼠IgG能够有效屏蔽HAMA对样本测试产生的干扰，从而改善样本测试的准确度。
作为优选的实施方式，所述Tetronic701和聚氧乙烯油醚的质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。本申请人发现两者同时以质量比为(0.8-1.2)：(0.8-1.2)加入，在效果上比只加其中1种效果会好一些。所述质量比过高或过低均不利于稳定性的提高。
根据本发明另一种典型的实施方式，提供一种肌酸激酶同工酶测定用试剂R1，所述试剂R1为采用所述的酶标抗体缓冲液稀释抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物获得的工作液。
所述抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物为采用碱性磷酸酶、CK-MB抗体和戊二醛进行反应获得，具体包括：
步骤S11、将CK-MB抗体溶解于PBS溶液中，获得浓度为0.5～2mg/ml的CK-MB抗体溶液；
步骤S12、将所述CK-MB抗体溶液中加入碱性磷酸酶，混匀后加入戊二醛，反应完全后透析除去未反应的戊二醛，获得抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物；所述碱性磷酸酶与所述抗CK-MB抗体的质量比为(8～12)：1，所述戊二醛的终浓度为0.1～0.4％。
所述碱性磷酸酶与所述抗CK-MB抗体的质量比为(8-12):1，当质量比增大，碱性磷酸酶用量过多时，造成系统背景值升高，且高值样本光子值超出仪器测值上限，影响高值样本测试精密度；当质量比减小，抗体过多时，未标记的游离抗体与碱性磷酸酶-抗CK-MB抗体复合物竞争抗原位点，降低了低端样本灵敏度。
所述戊二醛的终浓度为0.1-0.4％。戊二醛浓度过高可使非特异性反应增加，而浓度过低又影响灵敏度。
本实施例中所用的CK-MB抗体(肌酸激酶同工酶抗体)来源是鼠、羊或者兔。所述肌酸激酶同工酶抗体是单克隆抗体。
根据本发明另一种典型的实施方式，提供一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂M和所述的试剂R1。
作为优选的实施方式，所述试剂M为磁微粒缓冲液溶解包被抗CK-MB抗体的磁微粒获得的工作液；所述包被抗CK-MB抗体的磁微粒的制备方法为：
步骤S21、将磁珠微粒清洗重悬，获得磁微粒溶液；
步骤S22、使用活化液将所述磁微粒溶液活化，获得活化磁微粒溶液；
步骤S23、将所述活化磁微粒溶液包被CK-MB抗体，获得包被抗CK-MB抗体的磁微粒。
其中，所述步骤S21中，获得磁微粒溶液包括：取磁珠微粒，用缓冲液清洗多次后，再用缓冲液重悬，获得浓度为1-4mg/ml获得磁微粒溶液，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、碳酸盐缓冲液、MES缓冲液和硼酸缓冲液中的一种或多种。
所述步骤S22中，所述活化液采用EDC，所述EDC与所述磁微粒的质量比为1:(90-110)，优选为1:100；当质量比增大，EDC使用量过多时，磁微粒活化率升高，活化的磁微粒浓度升高容易引起磁微粒发生聚沉；当质量比减小，磁微粒过多时，磁微粒活化率降低，导致抗体包被率降低。
所述步骤S23中，所述CK-MB抗体与磁微粒质量比为1:(480-520)，优选为1:500。当质量比增大，抗体量过多时，未包被在磁微粒上的抗体形成游离的抗体，容易降低M试剂长期稳定性；当质量比减小，磁微粒过多时，磁微粒之间容易发生非特异性吸附，继而增加测试系统背景值。
将所述活化磁微粒溶液包被CK-MB抗体，具体包括：向活化磁微粒溶液中加入CK-MB抗体，混匀后，加入封闭液进行封闭，混匀后磁分离移除上清液，获得包被抗CK-MB抗体的磁微粒，再加入磁微粒缓冲液混匀获得包被抗CK-MB抗体的磁微粒试剂M。
本发明提供一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒的检测原理为：
肌酸激酶同工酶测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)应用双抗体夹心法。测定时，将试剂M(包被了抗CK-MB抗体的磁性粒子工作液)及试剂R1(为碱性磷酸酶标记的抗CK-MB抗体)与样本进行混合。样本中的CK-MB与抗CK-MB抗体结合形成一种抗CK-MB抗体-CK-MB-抗CK-MB抗体酶标记物的磁性粒子免疫复合物。清洗去除游离的酶标记抗体后，加入化学发光底物到免疫复合物中。通过全自动化学发光免疫分析仪检测到酶反应产生的发光信号，检测到的发光强度与样本中CK-MB浓度相关，全自动化学发光免疫分析仪可计算出样本中CK-MB的浓度值。
下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒进行详细说明。
本实施例的提供一种CK-MB定量测定试剂盒，其包括校准品、质控品、抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物试剂R1和包被抗CK-MB抗体的磁微粒试剂M。
1、CK-MB校准品、CK-MB质控品的配制方法如下：
用校准品缓冲液溶解CK-MB抗原，配置CK-MB校准品和质控品，校准品包含已知浓度的CK-MB，CK-MB浓度在0-200pmol/L范围内。在具体实施方案中，校准品中CK-MB浓度分别为0、5、10、50、100、200pmol/L，质控品中CK-MB浓度分别为5pmol/L、100pmol/L；其中，校准品缓冲液是通过在4-(2-羟乙基)哌嗪-1-2-羟基丙磺酸(HEPPSO)缓冲液中加入0.5％-3％的山梨醇、0.5％-3％的海藻糖、0.5％-1％的牛血清白蛋白、150-300mmol/L氯化钠和0.03-0.1％ProClinTM 300，pH为6.0-8.0，搅拌溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；
2、抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物试剂R1
用酶标抗体的缓冲液溶解CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物。
其中，CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物是取10mg碱性磷酸酶溶于含有1mg抗CK-MB抗体的1ml PBS(0.01mol/L pH7.0)中，待完全溶解后，添加4ml 1％戊二醛溶液，使戊二醛的最终浓度为0.2％，透析除去多余的戊二醛后，4℃保存。
其中，所述酶标抗体缓冲液的配方为：
称取12.114gTris、5gNaCl、1gPC-300、0.1％Tetronice 701、0.019gMgCl2、0.02706gZnCl2、10gBSA、10g Glycine、50gPEG-1000、10g小鼠IgG溶于800mL超纯水中，调节pH至6.5，定容至1L。
3、包被抗CK-MB抗体的磁微粒试剂M
用包被抗体的磁微粒的缓冲液溶解包被抗CK-MB抗体的磁微粒；所述包被抗CK-MB抗体的磁微粒的制备方法为：
①清洗：取适量磁珠微粒，用0.1mol/L MES清洗3次，再用0.1mol/L MES重悬磁珠微粒，使其浓度为2mg/ml；
②活化：取现配EDC溶液，按EDC与磁微粒质量比1:100的比例向重悬好的磁微粒中加入EDC溶液，涡旋混匀后，室温水平混匀20min；
③包被：按CK-MB抗体与磁微粒质量比为1:500的包被比例，向活化好的磁微粒中加入需包被的CK-MB抗体，涡旋混匀后，室温水平混匀12h；
④封闭：向上述磁微粒中加入5％BSA溶液，室温水平混匀2h；
⑤保存：磁分离移除上清液，加入磁珠保存液中混匀。
实施例2
本实施例中R1试剂中将“0.1％Tetronice 701”更换为“0.2％聚氧乙烯(20)油醚”，其它组分和工艺与实施例1相同。
实施例3
本实施例中R1试剂中将“0.1％Tetronice 701”更换为“总质量分数为0.1％，质量比为1：1的Tetronice 701和聚氧乙烯(20)油醚”，其它工艺和组分与实施例1相同。
实施例4
本实施例中R1试剂中将“0.1％Tetronice 701”更换为“总质量分数为0.1％，质量比为0.8：1.2的Tetronice 701和聚氧乙烯(20)油醚”，其它工艺和组分与实施例1相同。
实施例5
本实施例中R1试剂中将“0.1％Tetronice 701”更换为“总质量分数为0.1％，质量比为1.2：0.8的Tetronice 701和聚氧乙烯(20)油醚”，其它工艺和组分与实施例1相同。
实施例6
本实施例中R1试剂中将“0.1％Tetronice 701”更换为“总质量分数为0.1％，质量比为0.5：1.2的Tetronice 701和聚氧乙烯(20)油醚”，其它工艺和组分与实施例1相同。
实施例7
本实施例中R1试剂中将“0.1％Tetronice 701”更换为“总质量分数为0.1％，质量比为1.2：0.5的Tetronice 701和聚氧乙烯(20)油醚”，其它工艺和组分与实施例1相同。
对比例1
本对比例中R1试剂中的酶标抗体缓冲液为：称取12.114gTris、5gNaCl、1gPC-300、1g T-20、0.019gMgCl2、0.02706gZnCl2、10gBSA、10g Glycine、50gPEG-1000、10g小鼠IgG溶于800mL超纯水中，调节pH至6.5，定容至1L。
对比例2
在对比例1的基础上，去除T-20，其它组分和工艺与对比例1相同。
对比例3
按照CN103278623A的方法制备R1试剂。M试剂为CN103278623A所述的磁珠工作液。
试验例1
1、按试剂盒说明书操作，对一定浓度的血清样本进行测定，记录样本浓度。后将血清样本分别与不同浓度的抗干扰物质按9:1的比例混合，分别进行测定后记录混合样本浓度；评价干扰物浓度为1.0g/L胆红素、干扰物浓度为30g/L甘油三脂、干扰物浓度为10.0g/L血红蛋白时，干扰度小于10％。
表1-抗干扰能力评价
由表1的数据可以看出，抗干扰性能较好的试剂盒为实施例1、实施例2、对比例3；其中Tetronic 701与聚氧乙烯(20)油醚对于抗蛋白质非特异性吸附有着较好的效果，所以实施例1、实施例2具备良好的抗干扰效果。且实施例3-5中Tetronic701和聚氧乙烯油醚两者以质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)同时添加，抗干扰能力比实施例1-2较强，且实施例3中以质量比为1：1同时添加，抗干扰能力最强。但实施例6-7中质量比不在(0.8～1.2)：(0.8～1.2)范围内，稳定性较差。
2、稳定性评价
用制备的各个试剂盒在37℃和2～8℃条件下放置不同时间后对同一支血清质控品进行测试，以第0个月的测试值为参照，查看第3、6、9、12个月后测试值与第0个月的测值比，对同一支质控品测值比应在85％～115％范围内。结果如表2：
表2-稳定性评价数据(2～8℃)
由表2的数据可知，在2～8℃条件下，实施例1、实施例2、实施例3稳定性较好，其在2～8℃下可稳定保存12个月。
3、表面活性剂浓度筛选
按照试剂盒2、3的制备方法，分别制备含有0.1％、1％，2％的Tetronic 701和含有0.1％、1％，2％的聚氧乙烯(20)油醚等六个试剂盒，分析表活浓度对试剂R1的稳定性影响。以第0个月的测试值为参照，查看第3、6、9、12个月后测试值与第0个月的测值比，对同一支血清样本测值比应在85％～115％范围内。结果如表3：
表3-表面活性剂浓度筛选
由表3的数据可知，分别对两种表面活性剂浓度进行优化，0.1％～1％Tetronic701为优选，稳定性好。0.1％～1％聚氧乙烯(20)油醚稳定性也较好。
4、线性检测
将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度样本必须接近线性范围的下限。按照试剂盒操作说明，每个浓度的样本进行三次重复测试，计算平均值，将结果平均值和稀释比例按照最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r，结果应该符合线性范围为0.3ng/mL～300.0ng/mL，线性相关系数r应大于等于0.9900。结果如表4所示：
表4-线性数据
由表4的数据可知：本发明的试剂盒检测线性相关系数r≥0.9900，线性检测合格；
5、与Roche相关性和测值偏差
按照试剂盒2的制备方法制备试剂盒，以Roche试剂盒作为对比例进行100份样本的测试，分别查看试剂盒2与罗氏试剂盒测值的测值偏差，测值≥4.5ng/mL测值相对偏差应＜15％，测值<4.5ng/mL，绝对偏差应≤0.5；测值线性相关性应＞0.975。结果如表5：
表5-与Roche试剂比对的阴阳符合率
由表5的数据可知：试剂盒1与Roche试剂盒进行比对的测值偏差合格率为96％，在100例样本测试中出现4例偏差较大的值，试剂盒1与Roche试剂盒整体线性相关性为0.9923。
综上可知，为获得良好性能的肌酸激酶同工酶检测试剂R1，解决当前试剂开发较为欠缺的试剂2～8℃长期稳定性与抗干扰性能，本发明对R1试剂的稀释液进行了优化。在Tetronic 701与聚氧乙烯(20)油醚的作用下，试剂R1的稳定性提升明显，相对CN103278623A能在37℃下稳定7天，在对表活的适用浓度进行优化后，本发明使用0.5％Tetronic 701作为添加剂时在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好。在抗干扰方面，非离子表面活性剂对于非特异性吸附有着较好的抵抗效果。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (6)
1.一种碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体缓冲液，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体缓冲液的配方为：
50 mM～150 mM缓冲液，5 g/L～10 g/L电解质，0.1%～1%防腐剂，0.1%～2%表面活性剂，2 mM～20 mM无机盐，0.3 g/L～1 g/L稳定剂，0.1%～3%阻断剂，0.1%～1%保护剂，pH值为6.4～6.6；
其中，所述表面活性剂为Tetronic701和聚氧乙烯（20）油醚；
所述Tetronic701和聚氧乙烯（20）油醚的质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)；
所述缓冲液为Tris缓冲液；所述防腐剂为ProClin-300；
所述保护剂为牛血清白蛋白；所述无机盐为MgCl2和ZnCl2；
所述稳定剂为4-氨基安替比林；所述阻断剂为小鼠IgG，所述电解质为NaCl。
2.一种肌酸激酶同工酶测定用试剂R1，其特征在于，所述试剂R1为采用权利要求1所述的碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体缓冲液稀释抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物获得的工作液。
3.根据权利要求2所述的一种肌酸激酶同工酶测定用试剂R1，其特征在于，所述抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物为采用碱性磷酸酶、CK-MB抗体和戊二醛进行反应获得，具体包括：
将CK-MB抗体溶解于PBS溶液中，获得浓度为0.5～2mg/ml的CK-MB抗体溶液；
将所述CK-MB抗体溶液中加入碱性磷酸酶，混匀后加入戊二醛，反应完全后透析除去未反应的戊二醛，获得抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物；所述碱性磷酸酶与所述抗CK-MB抗体的质量比为(8～12)：1，所述戊二醛的终浓度为0.1～0.4%。
4.一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂M和权利要求2-3任一所述的肌酸激酶同工酶测定用试剂R1。
5.根据权利要求4所述的一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，其特征在于，所述试剂M
为磁微粒缓冲液溶解包被抗CK-MB抗体的磁微粒获得的工作液；所述包被抗CK-MB抗体的磁微粒的制备方法为：
将磁珠微粒清洗重悬，获得磁微粒溶液；
使用活化液将所述磁微粒溶液活化，获得活化磁微粒溶液；
将所述活化磁微粒溶液包被CK-MB抗体，获得包被抗CK-MB抗体的磁微粒。
6.一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒的制备方法，其特征在于，采用权利要求4-5任一所述的配方制得。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010893094.5A CN112014555B (zh) | 2020-08-31 | 2020-08-31 | 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010893094.5A CN112014555B (zh) | 2020-08-31 | 2020-08-31 | 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112014555A CN112014555A (zh) | 2020-12-01 |
| CN112014555B true CN112014555B (zh) | 2023-08-08 |
Family
ID=73503987
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010893094.5A Active CN112014555B (zh) | 2020-08-31 | 2020-08-31 | 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112014555B (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3532626A1 (de) * | 1985-09-12 | 1987-03-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines partners einer immunreaktion |
| US5248620A (en) * | 1990-07-25 | 1993-09-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Non-ionic block copolymers of propylene oxide and ethylene oxide |
| US5895765A (en) * | 1997-06-30 | 1999-04-20 | Bayer Corporation | Method for the detection of an analyte by immunochromatography |
| CN102435738A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 肌酸激酶同工酶(ck-mb)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN105548584A (zh) * | 2015-12-15 | 2016-05-04 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种测定人体载脂蛋白a1含量的试剂盒 |
| CN106771133A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-05-31 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种组合物及其作为酶标复合物保存液的应用 |
| CN107957495A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-24 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种ck-mb检测试剂盒及其使用方法 |
| CN109085333A (zh) * | 2018-08-22 | 2018-12-25 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种类风湿因子抗原的制备、检测试剂盒及制备方法 |
| CN109212180A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-15 | 广东菲鹏生物有限公司 | 用于小分子抗原与碱性磷酸酶标记结合物的保存液及其制备方法 |
| CN110907639A (zh) * | 2019-12-05 | 2020-03-24 | 四川新健康成生物股份有限公司 | 血清淀粉样蛋白a检测试剂盒及其制备方法 |
| CN111417856A (zh) * | 2017-11-29 | 2020-07-14 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抑制靶干扰作用的抗药物抗体测定法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2685830C (en) * | 2007-05-24 | 2012-12-18 | Abbott Laboratories | Immunoassays exhibiting reduced cross-reactivity with hydrophobic drug analyte metabolites |
-
2020
- 2020-08-31 CN CN202010893094.5A patent/CN112014555B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3532626A1 (de) * | 1985-09-12 | 1987-03-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines partners einer immunreaktion |
| US5248620A (en) * | 1990-07-25 | 1993-09-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Non-ionic block copolymers of propylene oxide and ethylene oxide |
| US5895765A (en) * | 1997-06-30 | 1999-04-20 | Bayer Corporation | Method for the detection of an analyte by immunochromatography |
| CN102435738A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 肌酸激酶同工酶(ck-mb)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN105548584A (zh) * | 2015-12-15 | 2016-05-04 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种测定人体载脂蛋白a1含量的试剂盒 |
| CN106771133A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-05-31 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种组合物及其作为酶标复合物保存液的应用 |
| CN107957495A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-24 | 南通伊仕生物技术股份有限公司 | 一种ck-mb检测试剂盒及其使用方法 |
| CN111417856A (zh) * | 2017-11-29 | 2020-07-14 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抑制靶干扰作用的抗药物抗体测定法 |
| CN109085333A (zh) * | 2018-08-22 | 2018-12-25 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种类风湿因子抗原的制备、检测试剂盒及制备方法 |
| CN109212180A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-15 | 广东菲鹏生物有限公司 | 用于小分子抗原与碱性磷酸酶标记结合物的保存液及其制备方法 |
| CN110907639A (zh) * | 2019-12-05 | 2020-03-24 | 四川新健康成生物股份有限公司 | 血清淀粉样蛋白a检测试剂盒及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王楠等.人肌酸激酶同工酶MB（质量法）化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价.《现代免疫学》.2014,第第34卷卷(第第34卷期),摘要，第419页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112014555A (zh) | 2020-12-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4302536A (en) | Colorimetric immunoassay process | |
| WO1986004421A1 (en) | Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen | |
| JP2000509486A (ja) | １段階オールインワン乾燥試薬イムノアッセイ | |
| CN111551730B (zh) | 荧光微球封闭液及应用该封闭液的试剂盒 | |
| CN111057150B (zh) | 一种乳胶微球及其应用以及糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
| CN112014575B (zh) | 一种cyfra21-1测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN112014577B (zh) | 一种提高gpc3检测灵敏度的试剂盒及其制备方法 | |
| CN111965342A (zh) | 一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法、试剂及试剂盒 | |
| EP3564673B1 (en) | L-fabp immunoassay method and assay reagent used in said method | |
| CN113049835A (zh) | 联合检测试剂盒及检测方法、免疫分析系统 | |
| CN112014555B (zh) | 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 | |
| CN110596405A (zh) | 胶乳增强免疫比浊法检测心型脂肪酸结合蛋白含量的试剂盒 | |
| CN112710854B (zh) | 一种抗干扰、稳定的血清总胆红素（酶法）测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN114152740A (zh) | 一种酶促化学发光试剂盒、制备方法及检测方法 | |
| CN110865182B (zh) | 一种阻断剂及其在免疫检测中的应用 | |
| CN114200129B (zh) | 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒 | |
| CN115201181A (zh) | 一种排除磁微粒化学发光检测中血细胞干扰的方法 | |
| EP4375646A1 (en) | Zinc transporter 8 antibody chemiluminescence immunoassay kit and preparation method thereof | |
| JP5294257B2 (ja) | ヘモグロビンの測定方法および測定用キット | |
| CN114371292A (zh) | 一种检测可溶性st2蛋白的试剂盒 | |
| JP6943371B2 (ja) | 尿中の急性腎障害マーカーの測定方法 | |
| JPH11118806A (ja) | ヘモグロビンの安定化方法 | |
| CN117025548B (zh) | 鼠抗SARS-CoV-2 Spike蛋白杂交瘤细胞株、抗体、试剂盒及应用 | |
| Capusa et al. | Bone marrow macrophage iron content and sideroblast count in iron-and ESA-naïve patients with CKD-related anemia | |
| CN113125748B (zh) | 一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |