CN111574498A - 基于来那度胺靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备与应用 - Google Patents
基于来那度胺靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111574498A CN111574498A CN202010278517.2A CN202010278517A CN111574498A CN 111574498 A CN111574498 A CN 111574498A CN 202010278517 A CN202010278517 A CN 202010278517A CN 111574498 A CN111574498 A CN 111574498A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- cancer
- egfr protein
- formula
- protein degradation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 35
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 10
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 title abstract description 10
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 title description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 title description 8
- -1 small molecule compound Chemical class 0.000 title description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 71
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 claims abstract description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 20
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical group CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 16
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 9
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 9
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 208000030045 thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 19
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 102100022103 Histone-lysine N-methyltransferase 2A Human genes 0.000 description 5
- 108050002855 Histone-lysine N-methyltransferase 2A Proteins 0.000 description 5
- MVZGYPSXNDCANY-UHFFFAOYSA-N N-[4-[3-chloro-4-[(3-fluorophenyl)methoxy]anilino]-6-quinazolinyl]-2-propenamide Chemical compound FC1=CC=CC(COC=2C(=CC(NC=3C4=CC(NC(=O)C=C)=CC=C4N=CN=3)=CC=2)Cl)=C1 MVZGYPSXNDCANY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 4
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 4
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 4
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 3
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 3
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 3
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- BNWCETAHAJSBFG-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-bromoacetate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CBr BNWCETAHAJSBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000015367 CRBN Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000941994 Homo sapiens Protein cereblon Proteins 0.000 description 2
- TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N N-benzyloxycarbonyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucinal Chemical compound CC(C)C[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N 0.000 description 2
- 102000006275 Ubiquitin-Protein Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010083111 Ubiquitin-Protein Ligases Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006663 ubiquitin-proteasome pathway Effects 0.000 description 2
- FANCTJAFZSYTIS-IQUVVAJASA-N (1r,3s,5z)-5-[(2e)-2-[(1r,3as,7ar)-7a-methyl-1-[(2r)-4-(phenylsulfonimidoyl)butan-2-yl]-2,3,3a,5,6,7-hexahydro-1h-inden-4-ylidene]ethylidene]-4-methylidenecyclohexane-1,3-diol Chemical compound C([C@@H](C)[C@@H]1[C@]2(CCCC(/[C@@H]2CC1)=C\C=C\1C([C@@H](O)C[C@H](O)C/1)=C)C)CS(=N)(=O)C1=CC=CC=C1 FANCTJAFZSYTIS-IQUVVAJASA-N 0.000 description 1
- SHAHPWSYJFYMRX-GDLCADMTSA-N (2S)-2-(4-{[(1R,2S)-2-hydroxycyclopentyl]methyl}phenyl)propanoic acid Chemical compound C1=CC([C@@H](C(O)=O)C)=CC=C1C[C@@H]1[C@@H](O)CCC1 SHAHPWSYJFYMRX-GDLCADMTSA-N 0.000 description 1
- KAFZOLYKKCWUBI-HPMAGDRPSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-3-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-(3-cyclohexylpropanoylamino)-4-methylpentanoyl]amino]-5-methylhexanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]butanediamide Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(C)C)C(=O)N[C@@H](CN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(N)=O)C(=O)CCC1CCCCC1 KAFZOLYKKCWUBI-HPMAGDRPSA-N 0.000 description 1
- QKLXBIHSGMPUQS-FGZHOGPDSA-M (3r,5r)-7-[4-(4-fluorophenyl)-2,5-dimethyl-1-phenylpyrrol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound CC1=C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)C(C=2C=CC(F)=CC=2)=C(C)N1C1=CC=CC=C1 QKLXBIHSGMPUQS-FGZHOGPDSA-M 0.000 description 1
- VIMMECPCYZXUCI-MIMFYIINSA-N (4s,6r)-6-[(1e)-4,4-bis(4-fluorophenyl)-3-(1-methyltetrazol-5-yl)buta-1,3-dienyl]-4-hydroxyoxan-2-one Chemical compound CN1N=NN=C1C(\C=C\[C@@H]1OC(=O)C[C@@H](O)C1)=C(C=1C=CC(F)=CC=1)C1=CC=C(F)C=C1 VIMMECPCYZXUCI-MIMFYIINSA-N 0.000 description 1
- VGNCBRNRHXEODV-XXVHXNRLSA-N (6r,7r)-1-[(4s,5r)-4-acetyloxy-5-methyl-3-methylidene-6-phenylhexyl]-6-dodecoxy-4,7-dihydroxy-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,5-tricarboxylic acid Chemical compound C([C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)C(=C)CCC12[C@H](O)[C@H](C(O2)(C(O)=O)C(O)(C(O1)C(O)=O)C(O)=O)OCCCCCCCCCCCC)C1=CC=CC=C1 VGNCBRNRHXEODV-XXVHXNRLSA-N 0.000 description 1
- IGVKWAAPMVVTFX-BUHFOSPRSA-N (e)-octadec-5-en-7,9-diynoic acid Chemical compound CCCCCCCCC#CC#C\C=C\CCCC(O)=O IGVKWAAPMVVTFX-BUHFOSPRSA-N 0.000 description 1
- OVDGUTHABMXVMI-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-4-(propylamino)benzoic acid Chemical compound CCCNC1=CC=C(C(O)=O)C=C1[N+]([O-])=O OVDGUTHABMXVMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000036364 Cullin Ring E3 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000035519 G0 Phase Effects 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229940125907 SJ995973 Drugs 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 102000018478 Ubiquitin-Activating Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010091546 Ubiquitin-Activating Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010005705 Ubiquitinated Proteins Proteins 0.000 description 1
- YLEIFZAVNWDOBM-ZTNXSLBXSA-N ac1l9hc7 Chemical compound C([C@H]12)C[C@@H](C([C@@H](O)CC3)(C)C)[C@@]43C[C@@]14CC[C@@]1(C)[C@@]2(C)C[C@@H]2O[C@]3(O)[C@H](O)C(C)(C)O[C@@H]3[C@@H](C)[C@H]12 YLEIFZAVNWDOBM-ZTNXSLBXSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- SRVFFFJZQVENJC-IHRRRGAJSA-N aloxistatin Chemical compound CCOC(=O)[C@H]1O[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCCC(C)C SRVFFFJZQVENJC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- OSVHLUXLWQLPIY-KBAYOESNSA-N butyl 2-[(6aR,9R,10aR)-1-hydroxy-9-(hydroxymethyl)-6,6-dimethyl-6a,7,8,9,10,10a-hexahydrobenzo[c]chromen-3-yl]-2-methylpropanoate Chemical compound C(CCC)OC(C(C)(C)C1=CC(=C2[C@H]3[C@H](C(OC2=C1)(C)C)CC[C@H](C3)CO)O)=O OSVHLUXLWQLPIY-KBAYOESNSA-N 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010569 immunofluorescence imaging Methods 0.000 description 1
- 238000010249 in-situ analysis Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000003541 multi-stage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- XZMHJYWMCRQSSI-UHFFFAOYSA-N n-[5-[2-(3-acetylanilino)-1,3-thiazol-4-yl]-4-methyl-1,3-thiazol-2-yl]benzamide Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC(NC=2SC=C(N=2)C2=C(N=C(NC(=O)C=3C=CC=CC=3)S2)C)=C1 XZMHJYWMCRQSSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 229960003278 osimertinib Drugs 0.000 description 1
- DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N osimertinib Chemical compound COC1=CC(N(C)CCN(C)C)=C(NC(=O)C=C)C=C1NC1=NC=CC(C=2C3=CC=CC=C3N(C)C=2)=N1 DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229940124823 proteolysis targeting chimeric molecule Drugs 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N remdesivir Chemical compound NC1=NC=NN2C1=CC=C2[C@]1([C@@H]([C@@H]([C@H](O1)CO[P@](=O)(OC1=CC=CC=C1)N[C@H](C(=O)OCC(CC)CC)C)O)O)C#N RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明为基于来那度胺靶向降解EGFR蛋白小分子化合物及其制备与应用，提供了一种式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物及其制备方法与应用，本发明基于来那度胺设计具有靶向EGFR蛋白降解嵌合小分子，体外抗肿瘤活性测试及体外EGFR蛋白降解活性表明，所述化合物表现出了良好的抗肿瘤活性和EGFR蛋白降解水平，可用于预防或/和治疗多种癌症，在医药领域具有良好的应用前景；
Description
技术领域
本发明涉及一种靶向并降解EGFR蛋白的化合物及其制备方法和应用。
背景技术
泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome systerm，UPS)是细胞内蛋白质降解的主要途径，参与细胞内80％以上蛋白质的降解，UPS属于一个多步骤反应过程，有多种不同蛋白质参与，蛋白质先被泛素(多肽)标记，然后被蛋白酶体识别和降解。
该系统由泛素、泛素活化酶E1、泛素结合酶E2、泛素连接酶E3、蛋白酶体及其底物(蛋白质)构成。UPS特异性降解蛋白质的过程分两个阶段：(1)蛋白底物泛素化：泛素分子由APP提供能量，被E1激活转移到E2，然后经E3与特异性蛋白底物结合；(2)蛋白底物降解：被泛素化的蛋白分子能够被蛋白酶体识别，并进入蛋白酶体降解成短链的多肽分子。
蛋白水解靶向嵌合分子(Proteolysis Targeting Chimeras，PROTACs)是利用一种双功能小分子将目标蛋白和细胞内的E3拉近，从而导致目标蛋白质的降解。PROTACs包含三部分功能结构：(1)可以与蛋白底物相结合的部分；(2)能够与E3相结合的部分；(3)前两部分的连接链(Linker)。细胞内PROTACs可以同时与靶蛋白及E3结合，使本来不能与E3结合的靶蛋白泛素化，进而被蛋白酶体识别并降解(Angew.Chem.Int.Ed.Engl,2016,55(6),1996-1973)。
研究证明，来那度胺可以与CRBN蛋白结合，CRBN蛋白为CUL4-RBX1-DDB1-Cereblon(CRL4CRBN)E3泛素连接酶复合物的底物受体蛋白，结合后通过泛素-蛋白酶体途径进行蛋白水解(Nature,2014,512(7512):49-53)；
当前，在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达，EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演变进程中起重要作用，胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达。EGFR已成为有效的抗肿瘤靶点，多个EGFR抑制剂已经上市用于多种癌症的治疗。但是目前所用的EGFR抑制剂抑制效果有限，且已存在一定的耐药问题，因此，开发出一种可降解EGFR蛋白的化合物具有极其重要的临床应用价值。
发明内容
本发明目的在于提供一种靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物及其制备方法和应用，该化合物不仅具有优异的EGFR蛋白降解作用和抗肿瘤活性，且对人体毒副作用小，可用于制备新型抗肿瘤药物。
本发明的技术方案如下：
一种式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物或其药学上可接受的盐、水合物：
式(I)中，n为1-6的整数，X为O或CH2；优选的，n为2-4的整数，X为O；优选的化合物降解EGFR蛋白效果更好，其抗肿瘤活性也更强。
本发明优选的化合物结构式如表1所示：
表1
本发明所述的化合物为一种蛋白水解靶向嵌合分子(PROTACs)，其包括可以与EGFR蛋白底物相结合的部分、可以与E3结合的部分以及连接链，利用这种双功能小分子可以将目标蛋白和细胞内的E3拉近，从而使本来不能与E3结合的EGFR靶蛋白泛素化，进而被蛋白酶体识别并降解。
本发明还提供了式(I)所示化合物的制备方法，所述制备方法为：
室温(20～30℃)下，将化合物(II)、化合物(III)在有机溶剂中混合，然后升温至80-90℃反应10-14h，之后反应液经后处理，得到产物(I)；
所述化合物(II)、化合物(III)的物质的量之比为1：0.8-1.0；
所述有机溶剂为N,N-二异丙基乙胺或N,N-二甲基甲酰胺，有机溶剂的体积用量以化合物(II)的质量计为20～40mL/g；
所述后处理的方法为：反应结束后，待反应液降至室温，加入水，用二氯甲烷萃取，合并有机相，经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后进行柱层析分离，以二氯甲烷：甲醇(v/v15:1-10:1)的混合溶剂为洗脱剂，收集含目标化合物的洗脱液，蒸除溶剂并干燥，得到产物(I)。
反应式如下：
此外，本发明还包括药物组合物，该组合物含有通式(I)化合物或其药学上可接受的盐、水合物和药物上可接受的赋形剂。所述药物上可接受的赋形剂是指任何可用于药物领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。
本发明所述式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、水合物可应用于制备预防或/和治疗癌症的药物。
本发明通过免疫荧光、免疫印迹分析等实验，证实该小分子化合物可以很好的结合EGFR蛋白，并通过泛素蛋白酶体途径降解EGFR蛋白。
本发明化合物可用于与EGFR蛋白酶活性异常表达相关的疾病中的应用，通过体外活性筛选，我们发现本发明化合物具有抗肿瘤活性，因此本发明还公开了上述化合物在制备预防或/和治疗癌症的药物中的应用。所述的癌症为乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、甲状腺乳头状癌、卵巢癌、黑色素瘤、白血病或非小细胞肺癌。优选为非小细胞癌，实验表明该化合物抗非小细胞癌活性极高。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明基于来那度胺设计具有靶向EGFR蛋白降解嵌合小分子，体外抗肿瘤活性测试及体外EGFR蛋白降解活性表明，所述化合物表现出了良好的抗肿瘤活性和EGFR蛋白降解水平，可用于预防或/和治疗多种癌症，在医药领域具有良好的应用前景。
附图说明
图1Western blot分析EGFR蛋白降解情况；
注：图1A给药10μM，24h；图1B给药6h；图1C给药0.3μM；图1D分别预先加入蛋白酶抑制剂MG-132(10μM)和来那度胺(10μM)处理PC9细胞2h后，再分别加入0.1μM化合物2-20，同时设置AZD9291(0.1μM)和来那度胺(10μM)阴性对照组。
图2Hoechst33342核染结果。
图3高内涵Cell Cycle程序分析方法及过程。
图4高内涵分析结果示意图例。
图5不同浓度ALL-2化合物24h时对细胞周期的影响。
图6 Hoechest33342标记所有细胞核。
图7 FITC-Annexin V标记凋亡细胞。
图8 PI标记坏死细胞图。
图9 3个波长通道叠加图。
图10不同浓度ALL-2化合物24h时对细胞凋亡的影响。
图11化合物ALL-2的免疫荧光图。
图12为实施例2得到的化合物ALL-1的核磁谱图。
图13为实施例3得到的化合物ALL-2的核磁谱图。
图14为实施例4得到的化合物ALL-3的核磁谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
本发明中涉及的缩写词意义为：Boc为叔丁氧羰基，DMF为二甲基甲酰胺，DIPEA为二异丙基乙胺，四丁基溴化铵为四丁基溴化铵，EA为乙酸乙酯，Et为乙基，Me为甲基，M即摩尔，PE为石油醚，pH为苯基，THF为四氢呋喃，TFA为三氟乙酸，TLC为薄层色谱，NSCLC为非小细胞肺癌，WT为野生型。
以下合成路线描述了本发明通式(I)化合物的制备，本发明的化合物都是通过这些路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。
按照本发明的通式(I)化合物，合成路线中的具体步骤如下所示：
实施例1：E3配体小分子化合物的制备(化合物6)
(1)化合物2的制备
化合物2a的制备：
将二甘醇(7.0g,66.0mmol)溶于10mL二氯甲烷溶液，加入三乙胺(13.3g,132.2mmol)，冰浴下加入对甲苯磺酰氯(15.1g,79.1mmol)。加毕，反应液在室温搅拌12h。6mol/L HCl调节溶液pH＝7，二氯甲烷萃取(3×30mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析得黄色液体产物，产率40％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),4.19–4.09(m,2H),3.62(ddd,J＝12.1,5.4,4.1Hz,4H),3.48(dd,J＝5.3,3.8Hz,2H),2.40(s,3H).
化合物2b的制备：
将二缩三乙二醇(5.0g,33.3mmol)溶于10mL二氯甲烷，加入三乙胺(6.7g,66.6mmol)，冰浴冷却下加入对甲苯磺酰氯(8.9g,46.6mmol)。加毕，反应液在室温下搅拌12h。6.0mol/L HCl调节溶液pH＝7，二氯甲烷萃取(3×30mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析得黄色液体产物，产率48％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝7.7Hz,2H),4.24–4.07(m,2H),3.72–3.66(m,4H),3.65–3.51(m,6H),2.44(s,3H).
化合物2c的制备：
将三缩四乙二醇(5.0g,25.8mmol)溶于20mL二氯甲烷，滴加三乙胺(3.9g,38.7mmol)，加入对甲苯磺酰氯(6.0g,36.1mmol)，反应液在室温搅拌12h。4mol/L HCl调节溶液pH＝7，二氯甲烷萃取(3×30mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析得黄色液体产物，产率为35％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.48–7.16(m,2H),4.31–3.96(m,2H),3.70–3.61(m,4H),3.60–3.58(m,4H),3.56–3.51(m,6H),2.39(s,3H).
(2)化合物3的制备
化合物3a的制备：
将化合物2a(2.954g,11.3mmol)溶于10mL甲苯，室温下加入四丁基溴化铵(0.181g,0.56mmol)、KOH(1.01g,18.1mmol)、溴乙酸叔丁酯(2.7g,13.6mmol)。室温下搅拌反应12h，减压浓缩除去甲苯，加入5mL水，二氯甲烷萃取(3×20mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析得白色固体，产率73％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.37–7.31(m,2H),4.19–4.14(m,2H),3.98(s,1H),3.72–3.67(m,2H),3.67–3.59(m,4H),2.44(s,3H),1.47(s,9H).
化合物3b的制备：
将化合物2b(3.73g,12.3mmol)溶于10mL甲苯，室温下加入四丁基溴化铵(0.198g,0.6mmol)、KOH(1.1g,20.0mmol)、溴乙酸叔丁酯(2.9g,14.7mmol)。室温下搅拌反应12h，减压浓缩除去甲苯，加入5mL水，二氯甲烷萃取(3×20mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析得白色固体，产率71％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.58-7.07(m,3H),4.19-4.12(m,2H),4.01(s,2H),3.73-3.63(m,6H),3.60(s,4H),2.45(s,3H),1.47(s,9H).
化合物3c的制备：
将化合物2c(1.275g,3.3mmol)溶于10mL甲苯溶液中，室温下加入四丁基溴化铵(0.053g,0.17mmol)、KOH(0.296g,5.3mmol)、溴乙酸叔丁酯(0.76g,3.9mmol)。室温下搅拌反应12h，减压浓缩除去甲苯，加入5mL水，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经柱层析纯化得黄色液体，产率60％。
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.73(d,J＝8.3Hz,2H),7.30-7.27(m,2H),4.10-4.08(m,2H),3.96(s,2H),3.66-3.62(m,6H),3.61-3.60(m,4H),3.52-3.50(m,4H),2.39(s,3H),1.41(s,9H).
(3)化合物4的制备
化合物4a的制备：
将化合物3a(2.271g,6.1mmol)溶于5mL丙酮中，室温下加入碘化钠(1.28g,8.5mmol)，滴加完毕后转移至70℃下回流并搅拌反应6h。减压浓缩，加入10mL水，用20mL乙酸乙酯萃取3次，无水硫酸钠干燥，合并有机相。得粗品黄色液体，产率92％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ4.04(s,2H),3.77(d,J＝7.1Hz,2H),3.75–3.68(m,4H),3.28(t,J＝6.9Hz,2H),1.48(s,9H).
化合物4b的制备：
将化合物3b(0.30g,0.72mmol)溶于5mL丙酮中，室温下加入碘化钠(0.15g,1.0mmol)。滴加完毕后转移至70℃下回流搅拌反应6h。减压浓缩，加入5mL水，用10mL乙酸乙酯萃取3次，无水硫酸钠干燥，合并有机相。得粗品黄色液体，粗产率97％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ4.03(s,2H),3.76(dd,J＝7.3,6.5Hz,2H),3.72-3.69(m,4H),3.67(s,4H),3.26(dd,J＝7.3,6.5Hz,2H),1.47(s,9H).
化合物4c的制备：
将化合物3c(1.0g,2.2mmol)溶于5mL丙酮中，室温下加入碘化钠(0.462g,3.3mmol)。滴加完毕后加热70℃下搅拌反应6h。减压浓缩，加入5mL水，用10mL乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，合并有机相，得粗品黄色液体，产率94％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ4.02(s,2H),3.76(dd,J＝7.3,6.5Hz,2H),3.74–3.68(m,4H),3.67(d,J＝4.3Hz,8H),3.27(dd,J＝7.3,6.5Hz,2H),1.48(s,9H).
(4)化合物5的制备
化合物5a的制备：
将化合物4a(1.252g,3.8mmol)溶于3mL二氯甲烷中，滴加三氟乙酸(8.65g,75.8mmol)，滴加完毕后转移至室温下搅拌反应2h。减压浓缩，加入5mL水，用1mol/L NaOH溶液调节pH＝10，水相用10mL二氯甲烷洗涤2次，再用6mol/L HCl调节水相pH＝2，调节完毕后用15mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。得无色液体，产率78％。
化合物5b的制备：
将化合物4b(0.229g,0.6mmol)溶于3mL二氯甲烷中，滴加三氟乙酸(1.7g,12.2mmol)，滴加完毕后转移至室温下搅拌反应2h。减压浓缩，加入5mL水，用1mol/L NaOH溶液调节pH＝10,水相用10mL二氯甲烷洗涤2次，用6mol/L HCl调节水相pH＝2，调节完毕后用15mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。得无色液体，产率80％。
化合物5c的制备：
将化合物4c(0.871g,2.08mmol)置于6mL二氯甲烷中，室温下加入三氟乙酸(4.7g,41.6mmol)。滴加完毕后室温搅拌2h。减压浓缩，加入5mL水，用1mol/L NaOH溶液调节pH＝10，用10mL二氯甲烷洗涤2次，水相用6mol/L HCl溶液调节pH＝2，用10mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。得无色液体，产率77％。
(5)化合物6的制备
化合物6a的制备：
将化合物5a(0.600g,2.2mmol)置于25mL圆底烧瓶中，置换空气，氩气保护，冰浴下滴加草酰氯(1.53g,10.9mmol)。滴加完毕后转移至室温下搅拌反应2h。减压浓缩，滴加3mLN,N-二甲基甲酰胺，加入来那度胺(0.54g,2.08mmol)，室温下搅拌反应1h。加入10mL水，用20mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，经柱层析得白色固体产物，产率42％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.77(s,1H),8.55(s,1H),7.76(dd,J＝7.6,1.0Hz,1H),7.69(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),7.50(t,J＝7.7Hz,1H),5.22(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.46(s,2H),4.19(d,J＝1.4Hz,2H),3.85–3.80(m,2H),3.79(t,J＝6.4Hz,2H),3.76–3.70(m,2H),3.24(td,J＝6.5,1.5Hz,2H),2.92–2.71(m,2H),2.37(qd,J＝13.0,5.2Hz,1H),2.20(dtd,J＝13.0,5.2,2.6Hz,1H).
化合物6b的制备：
将化合物5b(0.228g,0.72mmol)置于25mL圆底烧瓶中，置换空气，氩气保护，冰浴下滴加草酰氯(0.502g,3.58mmol)。滴加完毕后转移至室温下搅拌反应2h。减压浓缩，滴加3mL N,N-二甲基甲酰胺，加入来那度胺(0.297g,1.15mmol)，室温下反应1h，加入5mL水，用10mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，经柱层析得白色固体产物，产率50％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.94(s,1H),8.51(s,1H),7.77(dd,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.66(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.7Hz,1H),5.22(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.46(s,2H),4.18(d,J＝2.1Hz,2H),3.82(ddd,J＝5.0,2.7,1.2Hz,2H),3.79–3.73(m,2H),3.73–3.66(m,2H),3.65–3.56(m,4H),3.11(td,J＝6.7,3.7Hz,2H),2.92–2.73(m,2H),2.36(td,J＝13.0,5.2Hz,1H),2.27–2.15(m,1H).
化合物6c的制备：
将化合物5c(307mg,0.84mmol)置于圆底烧瓶中，置换空气,氩气保护，冰浴下滴加草酰氯(0.502g,3.58mmol),滴加完毕后，转移至室温反应2h，减压浓缩，加入N,N-二甲基甲酰胺溶液，加入来那度胺(218mg,0.84mmol)，室温下反应1h,加入5mL水，用20mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，经柱层析得白色固体，产率47％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.10(s,1H),8.99(s,1H),7.72(dd,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.66(d,J＝7.9Hz,1H),7.46(t,J＝7.7Hz,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.42(d,J＝2.1Hz,2H),4.15(d,J＝3.4Hz,2H),3.78-3.76(m,2H),3.71-3.70(m,2H),3.68–3.62(m,4H),3.63–3.57(m,2H),3.54–3.47(m,4H),3.16(t,J＝6.8Hz,2H),2.83–2.73(m,2H),2.36-2.27(m,1H),2.16-2.11(m,1H).
实施例2：PROTACs化合物ALL-1的制备
将实施例1制得的化合物6a(140mg,0.26mmol)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入化合物7(141mg,0.29mmol)、N,N-二异丙基乙胺(101mg,0.78mmol)，加热90℃反应8h。加入10mL水，用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得黄色固体，产率53％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.74(s,1H),9.56(d,J＝12.0Hz,1H),8.91(s,1H),8.78(d,J＝11.5Hz,1H),8.37(dd,J＝5.4,2.6Hz,1H),8.15–7.99(m,1H),7.77(s,1H),7.70(dd,J＝7.6,4.7Hz,1H),7.64(d,J＝7.9Hz,1H),7.47–7.34(m,3H),7.17(dd,J＝5.3,3.3Hz,1H),6.72(s,1H),6.42(dd,J＝16.9,1.8Hz,1H),5.69(dd,J＝9.9,1.8Hz,1H),5.13(dt,J＝13.4,4.6Hz,1H),4.38(d,J＝5.5Hz,2H),4.07(d,J＝2.2Hz,2H),3.95(s,3H),3.84(s,3H),3.75–3.51(m,8H),2.94(s,3H),2.83–2.65(m,5H),2.62(d,J＝7.1Hz,4H),2.40–2.28(m,4H),2.13–2.09(m,1H)ppm.
实施例3：PROTACs化合物ALL-2的制备
将实施例1制得的化合物6b(200mg,0.35mmol)溶于5mL N,N-二异丙基乙胺中，加入化合物7(186mg,0.38mmol)、N,N-二异丙基乙胺(136mg,1.05mmol)，加热90℃反应8h。加入10mL水，用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得黄色固体，产率62％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.79(s,1H),9.59(s,1H),8.98(d,J＝17.9Hz,2H),8.38(d,J＝5.3Hz,1H),8.12–8.01(m,1H),7.79(s,1H),7.75–7.67(m,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,1H),7.41–7.35(m,1H),7.29–7.25(m,3H),7.18(d,J＝5.3Hz,1H),6.76(s,1H),6.42(dd,J＝16.6,1.9Hz,1H),5.73–5.65(m,1H),5.16(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.39(s,2H),4.08(d,J＝8.5Hz,2H),3.96(s,3H),3.85(s,3H),3.67(dt,J＝5.3,2.6Hz,2H),3.61–3.49(m,5H),3.42(dt,J＝16.3,5.6Hz,5H),2.91(s,3H),2.83–2.71(m,2H),2.63(s,3H),2.52(s,2H),2.29–2.26(m,4H),2.20–2.06(m,1H)ppm.
实施例4：PROTACs化合物ALL-3的制备
将实施例1制得的化合物6c(153mg,0.25mmol)溶于5mL N,N-二异丙基乙胺中，加入化合物7(132mg,0.27mmol)、N,N-二异丙基乙胺(104mg,0.8mmol)，加热90℃反应8h。加入10mL水，用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得黄色固体，产率56％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.80(s,1H),9.63(t,J＝21.2Hz,1H),9.03(d,J＝5.1Hz,1H),8.38(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),8.11–7.99(m,1H),7.81(s,1H),7.72(dd,J＝7.7,2.1Hz,2H),7.46(td,J＝7.7,3.3Hz,1H),7.42–7.35(m,1H),7.29–7.24(m,3H),7.19(dd,J＝5.4,2.7Hz,1H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),6.44(dd,J＝16.8,1.9Hz,1H),5.70(dd,J＝9.8,2.1Hz,1H),5.17(ddd,J＝13.4,5.2,2.5Hz,1H),4.41(d,J＝2.2Hz,2H),4.19–4.03(m,2H),3.97(s,3H),3.86(s,3H),3.69(q,J＝4.7,3.1Hz,3H),3.61(q,J＝4.4,3.4Hz,2H),3.59–3.42(m,7H),3.38(s,4H),3.01–2.88(m,3H),2.86–2.71(m,3H),2.66(s,5H),2.40–2.26(m,4H),2.15(dtd,J＝12.7,5.2,2.6Hz,1H).
实施例5：活性测定：
(1)MTT法测定PROTACs化合物对肿瘤细胞增殖抑制活性
本次活性筛选研究主要涉及以下几种非小细胞肺癌细胞株，其名称及特点如下表2所示：
表2 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系种类及突变位点
将处于对数生长期的肿瘤细胞(H1975、PC9、PC9-IR、HCC827)分别以5×103、5×103、5×103、1×104个细胞接种于96孔板，培育24h，加入不同浓度PROTACs化合物后，细胞在37℃、5％CO2条件下继续培养72小时，每孔加入20uL MTT(5mg/mL)溶液继续培养4h，加入150μL DMSO，震荡10min后通过酶标仪测定其在490nm波长处的OD值并计算IC50，具体结果如下表3所示，化合物ALL-1～ALL-3均具有良好的细胞抑制活性，其中化合物ALL-2的活性最佳，对PC9、PC9-IR、HCC827和H1975细胞的IC50值分别为0.413μM、0.536μM、1.344μM、0.657μM，而化合物ALL-1和ALL-3对以上各细胞的抑制活性也在2μM以下。
表3 PROTACs化合物在NSCLC细胞中的IC50值
(2)Western Blot测定EGFR蛋白降解作用
ALL-2化合物处理PC9细胞48h后，用预冷的PBS洗涤2次，加入适量含1×PMSF和1×cOmplete的RIPA裂解液收集细胞，冰上裂解细胞30min后，4℃，12000r/min，30min离心，取上清，即细胞总蛋白。用BCA法定量检测蛋白量，用5×蛋白上样缓冲液稀释蛋白后100℃变性5min。蛋白在SDS—PAGE电泳分离，转膜，封闭2h，一抗4℃孵育过夜。TBST洗膜，二抗1:2000孵育2h，洗膜，化学发光后显影。实验结果表明(图1A和D)，化合物ALL-1～ALL-3对PC9和H1975细胞中EGFR均具有很好的降解效果，并且是通过泛素化途径进行的；时效和量效实验结果(图1B和C)也表明化合物ALL-2在6h时，0.3μM就能产生很好的EGFR蛋白降解效果。
(3)高内涵原位分析细胞周期
将处于对数生长期的PC9肿瘤细胞以5×103个/孔接种于96孔板，培育24h，加入不同浓度ALL-2化合物后，细胞在37℃、5％CO2条件下继续培养24小时。弃去原培养基，PBS洗2次，每孔加入100μLHoechst33342(5μg/mL，培养基配制)，避光15分钟后弃去，再用PBS洗2次，每孔再加入50μL含FITC-Annexin V和PI的缓冲液，避光孵育15分钟后立即用高内涵进行显微成像，物镜为10×，设置孔板类型和扫描范围，扫描视野设定为3×3，荧光波长通道选择为DAPI(蓝色)、FITC(绿色)、Cy3(橘黄色)，对每孔扫描，每孔采集5个视野，结束后通过Cell Cycle和Cell health程序进行分析，具体结果如图所示(图5和图10)。给药24h后，ALL-2化合物主要是将细胞阻断在G0/G1期，进而影响细胞的生理活动，并且在0.5μM时就就开始发挥药理作用，40％的细胞就已经开始进入早期凋亡状态；同时间下，并随着浓度的增加晚期凋亡和坏死的细胞也相对增加。
(4)高内涵进行免疫荧光成像分析
PC9细胞培养方法如上(3)步骤所示，给药1μM,5h后弃除培养基，PBS洗2次，0.3％Triton X-100(PBS配制)室温通透10min，PBS浸洗2次，每次3min，加1％BSA，室温封闭30min；弃封闭液，PBS洗2次，每孔加50μL稀释好的EGFR一抗于4℃孵育过夜；第二天PBS洗2次，每孔再加50μL FITC标记山羊抗兔IgG，避光室温孵育1h，PBS洗2次，DAPI复染核5min，PBS再洗2次后于高内涵仪器进行荧光显微成像。结果如图(图11)，绿色表示FITC标记的EGFR蛋白，蓝色为DAPI染色的细胞核，ALL-2化合物分别作用6h和24h后，细胞内的EGFR均已产生降解效果。
Claims (9)
1.一种式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物：
式(I)中，n为1-6的整数，X为O或CH2。
2.如权利要求1所述式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物，其特征在于，n为2-4的整数，X为O。
3.如权利要求1所述式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物药学上可接受的盐或水合物。
4.如权利要求1所述式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：
室温下，将化合物(II)、化合物(III)在有机溶剂中混合，然后升温至80-90℃反应10-14h，之后反应液经后处理，得到产物(I)；
所述化合物(II)、化合物(III)的物质的量之比为1：0.8-1.0；
所述有机溶剂为N,N-二异丙基乙胺或N,N-二甲基甲酰胺；
反应式如下：
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，有机溶剂的体积用量以化合物(II)的质量计为20～40mL/g。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述后处理的方法为：反应结束后，待反应液降至室温，加入水，用二氯甲烷萃取，合并有机相，经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后进行柱层析分离，以二氯甲烷：甲醇体积比15:1-10:1的混合溶剂为洗脱剂，收集含目标化合物的洗脱液，蒸除溶剂并干燥，得到产物(I)。
7.一种药物组合物，其特征在于，该组合物含有如权利要求1所述式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物或其药学上可接受的盐、水合物和药物上可接受的赋形剂。
8.如权利要求1所述式(I)所示的靶向泛素化诱导EGFR蛋白降解的化合物在制备预防或/和治疗癌症的药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的癌症为乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、甲状腺乳头状癌、卵巢癌、黑色素瘤、白血病或非小细胞肺癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010278517.2A CN111574498A (zh) | 2020-04-10 | 2020-04-10 | 基于来那度胺靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010278517.2A CN111574498A (zh) | 2020-04-10 | 2020-04-10 | 基于来那度胺靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111574498A true CN111574498A (zh) | 2020-08-25 |
Family
ID=72120563
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010278517.2A Pending CN111574498A (zh) | 2020-04-10 | 2020-04-10 | 基于来那度胺靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111574498A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112430229A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-03-02 | 福建医科大学 | 一种靶向降解parp蛋白的化合物及其制备方法与应用 |
| CN113214203A (zh) * | 2020-12-16 | 2021-08-06 | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） | 基于ezh2蛋白降解的小分子化合物及其应用 |
| CN113861213A (zh) * | 2021-10-14 | 2021-12-31 | 上海中医药大学 | 一种具有stat3降解活性的川楝素protac化合物及其制备方法和应用 |
| CN114890995A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-12 | 华侨大学 | 淫羊藿素PROTACs及其制备方法和应用 |
| CN114940674A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-26 | 杭州医学院 | 基于crbn配体诱导fgfr3-tacc3降解的化合物及其制备方法和应用 |
| CN115385859A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-25 | 西安交通大学 | 一种可细胞内自组装的蛋白降解剂及其制备方法和应用 |
| CN115403561A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-29 | 西安交通大学 | 一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂及其制备方法和应用 |
| CN115466266A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-12-13 | 山东中医药大学 | mTOR蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用 |
| CN116693505A (zh) * | 2023-07-28 | 2023-09-05 | 中国药科大学 | 一种靶向降解egfr蛋白的化合物及其制法和应用 |
-
2020
- 2020-04-10 CN CN202010278517.2A patent/CN111574498A/zh active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112430229A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-03-02 | 福建医科大学 | 一种靶向降解parp蛋白的化合物及其制备方法与应用 |
| CN112430229B (zh) * | 2020-11-24 | 2023-03-21 | 福建医科大学 | 一种靶向降解parp蛋白的化合物及其制备方法与应用 |
| CN113214203A (zh) * | 2020-12-16 | 2021-08-06 | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） | 基于ezh2蛋白降解的小分子化合物及其应用 |
| CN113861213A (zh) * | 2021-10-14 | 2021-12-31 | 上海中医药大学 | 一种具有stat3降解活性的川楝素protac化合物及其制备方法和应用 |
| CN113861213B (zh) * | 2021-10-14 | 2024-03-29 | 上海中医药大学 | 一种具有stat3降解活性的川楝素protac化合物及其制备方法和应用 |
| CN115466266A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-12-13 | 山东中医药大学 | mTOR蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用 |
| CN115466266B (zh) * | 2022-02-28 | 2023-11-07 | 山东中医药大学 | mTOR蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用 |
| CN114940674A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-26 | 杭州医学院 | 基于crbn配体诱导fgfr3-tacc3降解的化合物及其制备方法和应用 |
| CN114940674B (zh) * | 2022-04-28 | 2023-12-22 | 杭州医学院 | 基于crbn配体诱导fgfr3-tacc3降解的化合物及其制备方法和应用 |
| CN114890995A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-12 | 华侨大学 | 淫羊藿素PROTACs及其制备方法和应用 |
| CN115403561A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-29 | 西安交通大学 | 一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂及其制备方法和应用 |
| CN115385859A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-25 | 西安交通大学 | 一种可细胞内自组装的蛋白降解剂及其制备方法和应用 |
| CN115385859B (zh) * | 2022-08-22 | 2024-03-08 | 西安交通大学 | 一种可细胞内自组装的蛋白降解剂及其制备方法和应用 |
| CN115403561B (zh) * | 2022-08-22 | 2024-03-08 | 西安交通大学 | 一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂及其制备方法和应用 |
| CN116693505A (zh) * | 2023-07-28 | 2023-09-05 | 中国药科大学 | 一种靶向降解egfr蛋白的化合物及其制法和应用 |
| CN116693505B (zh) * | 2023-07-28 | 2023-10-27 | 中国药科大学 | 一种靶向降解egfr蛋白的化合物及其制法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111574498A (zh) | 基于来那度胺靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备与应用 | |
| US10774070B2 (en) | 2-(pyridin-3-yl)-pyrimidine derivatives as RET inhibitors | |
| CN105254615B (zh) | 苯胺嘧啶衍生物及其在制备抗恶性肿瘤药物中的用途 | |
| CN109928956B (zh) | 一种靶向泛素化降解egfr蛋白的化合物及其药物组合物和应用 | |
| ES2702707T3 (es) | Inhibidores de DNA-PK | |
| CN113603676B (zh) | 基于厄洛替尼靶向降解egfr蛋白小分子化合物及其制备方法和应用 | |
| CN110372669B (zh) | 一种基于crbn配体诱导egfr降解的化合物及其制备方法、药物组合物和应用 | |
| MXPA05011332A (es) | Derivados de 4-anilino-quinazolina como agentes antiproliferativos. | |
| CN110204532B (zh) | 一种靶向egfr蛋白降解的化合物及其制备方法和应用 | |
| JP2021512087A (ja) | Ｅｒｂｂ／ｂｔｋ阻害剤 | |
| CN110194762B (zh) | 酞嗪酮类衍生物、其制备方法和用途 | |
| CN116322697A (zh) | 一种喹唑啉化合物及其药物组合物 | |
| CN112300082B (zh) | 一种苯基哌嗪喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐、制法与用途 | |
| CN112979618A (zh) | 一种靛玉红衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN111643676B (zh) | 一种双特异性二聚体、双特异性二聚体-药物偶联物及其应用 | |
| CN109803976B (zh) | 含有n-杂环卡宾配体的钯(ii)配合物、合成、以及在癌症治疗中的应用 | |
| CN111233809B (zh) | 一种Millepachine-CA-4衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN115477639A (zh) | 一种以fgfr1为靶点的多取代嘧啶类化合物及其制备方法和用途 | |
| Bouzian et al. | Design and evaluation of novel inhibitors for the treatment of clear cell renal cell carcinoma | |
| CN113149980A (zh) | 一类靶向puf60的叔丁氧羰基类小分子有机化合物及其衍生物及其应用 | |
| CN106279101B (zh) | 苯并吡唑联吡啶类化合物、包含此类化合物的药物组合物及其用途 | |
| CN114957249B (zh) | 一种不可逆共价结合cdk抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN114890928B (zh) | 一种异硫氰酸酯衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN114702544B (zh) | 一种氨基甾体化合物及其制备方法和应用 | |
| WO2019056376A1 (zh) | 酸敏感的吉非替尼-氟硼二吡咯衍生物及其制备方法和在医药上的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200825 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |