[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CN111264299B - 利用海鲜菇生物合成有机硒的方法 - Google Patents

利用海鲜菇生物合成有机硒的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111264299B
CN111264299B CN202010072347.2A CN202010072347A CN111264299B CN 111264299 B CN111264299 B CN 111264299B CN 202010072347 A CN202010072347 A CN 202010072347A CN 111264299 B CN111264299 B CN 111264299B
Authority
CN
China
Prior art keywords
selenium
hypsizygus marmoreus
culture medium
hypsizygus
marmoreus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010072347.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111264299A (zh
Inventor
郭岩彬
胡婷
赵桂慎
丁惠
惠改芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Agricultural University
Original Assignee
China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Agricultural University filed Critical China Agricultural University
Priority to CN202010072347.2A priority Critical patent/CN111264299B/zh
Publication of CN111264299A publication Critical patent/CN111264299A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111264299B publication Critical patent/CN111264299B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00Cultivation of mushrooms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00Cultivation of mushrooms
    • A01G18/20Culture media, e.g. compost
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L31/00Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728Fungi, e.g. yeasts
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种利用海鲜菇生物合成有机硒的方法。本发明提供一株通过紫外诱变获得的能够将培养基中无机硒高效转化为有机硒的海鲜菇突变株,保藏编号为CCTCC M 2019981。海鲜菇的出菇和生长时间短、栽培条件可控、添加硒量可控、生长状态稳定。本发明优选将硒酸钠、亚硒酸钠和纳米硒作为添加形态,在浓度达40mg/kg条件下对海鲜菇子实体的生物量没有影响,而在一定程度上能够促进海鲜菇子实体的产量提高,硒甲基硒代半胱氨酸最高能达到总硒含量的39.4%。栽培过程中,海鲜菇菌丝生长快速,短时间内充满菌袋,海鲜菇颜色白嫩、产量高,为硒甲基硒代半胱氨酸等有机硒的制备提供有力手段。

Description

利用海鲜菇生物合成有机硒的方法
技术领域
本发明涉及微生物学领域,具体地说,涉及一种利用海鲜菇生物合成有机硒的方法。
背景技术
海鲜菇,属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑菇科、玉蕈属,是一种肉质鲜美、口感极佳的大型木质腐生真菌。海鲜菇含有丰富的氨基酸,其中赖氨酸和精氨酸的含量高于一般菇类,有助于青少年益智增高。海鲜菇的提取物具有多种生理活性成分,其中的真菌多糖、嘌呤、腺苷能增强免疫力,促进抗体形成,预防衰老、抗癌防癌,还能延缓衰老等。同时,海鲜菇还是一种低热量、低脂肪的保健食品。
硒是人体必需的微量元素,人体不能自发合成硒,只能通过食物来摄入,以保证达到硒的必需摄入量,维持机体健康。自然环境中硒主要分无机硒和有机硒两大类,有机硒较无机硒具有更高的生物活性,更易被动物消化吸收。同时,有机硒(包括硒甲基硒代半胱氨酸MeSeCys、硒代蛋氨酸SeMet、硒代胱氨酸SeCys2等)具有预防某些癌症的作用。MeSeCys还被认为是对人类最有利的补硒膳食来源,一些研究表明MeSeCys在动物疾病模型中表现出的化学预防更有效率。MeSeCys在临床上可用于治疗硒缺乏病,作为营养素补充剂,并可作为食品添加剂,应用于食品的营养强化。目前报道的MeSeCys中主要是通过化学合成,参见CN200710051362.3和CN200910115585.0等,而未见利用生物合成方法获得MeSeCys。大量研究发现MeSeCys广泛存在于大蒜、洋葱和椰菜等植物中,而在食用菌中所占比例不大。本发明提供一株能够将培养基中无机硒高效转化为MeSeCys的大型食用真菌海鲜菇菌株,并对海鲜菇合成MeSeCys的条件进行了优化,从而获得高MeSeCys含量的子实体。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用海鲜菇生物合成有机硒(特别是MeSeCys)的方法。
本发明的另一目的是提供一种新型的有机硒(特别是MeSeCys)的生物合成载体,利用高营养品质的大型真菌海鲜菇作为生物安全性高的富硒载体获得高有机硒含量的子实体。
为了实现本发明目的,第一方面,本发明提供一种海鲜菇HM1(Hypsizygusmarmoreus HM1),其是在海鲜菇H023基础上,通过紫外诱变获得的能够将培养基中无机硒高效转化为有机硒的突变菌株(HM1)。现已保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国武汉,武汉大学,邮编430072,保藏编号CCTCC M 2019981,保藏日期2019年11月28日。
第二方面,本发明提供含有海鲜菇HM1的食品、药品、保健品或化妆品。
第三方面,本发明提供含有海鲜菇HM1的组合物。
第四方面,本发明提供海鲜菇的栽培培养基,由粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮和麦麸按重量比36-43:28-32:12-16:12-16(优选重量比为40:30:15:15)混合后,并用石灰粉调pH至8,混合均匀后装袋经高压灭菌而成,所述栽培培养基的水分含量为70-80%。
前述的栽培培养基,灭菌条件为:120-123℃灭菌2-3h(优选121℃灭菌2h)。
第五方面,本发明提供一种利用海鲜菇生物合成有机硒的方法,向所述栽培培养基中添加硒源,然后接入海鲜菇HM1,在温度17±1℃,相对湿度90±5%,CO2含量1500±100mg/L的条件下暗培养70-80天(优选80天),培养结束后,收集海鲜菇子实体,从子实体中分离得到有机硒。
本发明中,所述硒源为无机硒,优选硒酸盐(如硒酸钠)、亚硒酸盐(如亚硒酸钠)和纳米硒中的至少一种。纳米硒的制备可参见ZL201410520106.4,ZL201610946282.3,ZL201610566900.1,ZL201510047365.4,ZL201610952997.X,ZL201610946230.6,但不局限于上述专利中述及的方法。
所添加的硒源在栽培培养基中的浓度为0.5-40.0mg/kg,优选0.5mg/kg,1.0mg/kg,2.5mg/kg,5.0mg/kg,10.0mg/kg,20.0mg/kg,40.0mg/kg。
所述有机硒包括但不限于硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸,优选硒甲基硒代半胱氨酸。
借由上述技术方案,本发明至少具有下列优点及有益效果:
本发明将多种无机硒作为海鲜菇的添加硒源,并选择从低到高的硒浓度进行海鲜菇的富硒栽培,获得了可作为直接日常食用的含硒海鲜菇子实体以及可作为MeSeCys提取原料的高有机硒比例的子实体。海鲜菇的出菇和生长时间短、栽培条件可控、添加硒量可控、生长状态稳定。优选地,本发明将硒酸钠、亚硒酸钠和纳米硒作为添加形态,在浓度达40mg/kg条件下对海鲜菇子实体的生物量没有影响,而在一定程度上能够促进海鲜菇子实体的产量提高,硒甲基硒代半胱氨酸最高能达到总硒含量的39.4%。栽培过程中,海鲜菇菌丝生长快速,短时间内充满菌袋,海鲜菇颜色白嫩、产量高(图1)。为有机硒制备提供有力手段。
附图说明
图1为本发明海鲜菇HM1栽培生长的形态。
图2为本发明实施例1中HM023菌种对硒酸盐和亚硒酸盐耐受。
图3为本发明实施例1中不同菌种海鲜菇菌落在PDA平板上的生长菌落形态。
图4为本发明实施例1中在含有5ml/L的亚硒酸钠的PDA平板上各海鲜菇菌种生长菌落。
图5为本发明实施例2中硒酸钠处理下海鲜菇生物量。其中,不同小写字母a、b、c表示差异显著,p<0.05。
图6为本发明实施例2中硒酸钠处理下子实体中硒形态。
图7为本发明实施例3中亚硒酸钠处理下海鲜菇生物量。其中,不同小写字母a、b、c表示差异显著,p<0.05。
图8本发明实施例3中亚硒酸钠处理下子实体中硒形态。
图9本发明实施例4中化学纳米硒处理下海鲜菇生物量。其中,不同小写字母a、b、c表示差异显著,p<0.05。
图10本发明实施例4中化学纳米硒处理下子实体中硒形态。
图11本发明实施例5中生物纳米硒处理下海鲜菇生物量。其中,不同小写字母a、b、c表示差异显著,p<0.05。
图12本发明实施例5中生物纳米硒处理下子实体中硒形态。
具体实施方式
本发明提供一种利用海鲜菇生物合成有机硒(特别是硒甲基硒代半胱氨酸)的方法,利用粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮、麦麸重量比为40:30:15:15,添加石灰粉调pH至8,水分含量为80%制作而成的栽培培养基,将硒酸盐、亚硒酸盐和化学纳米硒的浓度梯度设置为0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg,每个培养袋装入2.0kg混料,121℃高温、高压灭菌2h。从保存菌种的试管中取5mm大小均匀的菌饼接种于盛有150mL液体PDA培养基的500mL锥形摇瓶中,21-23℃条件下170-180r/min振荡培养4天为一级菌种。从长满菌丝球的一级菌种摇瓶中用无菌移液器吸取5mL菌种转移到500mL含有150mL的PDA液体培养基的摇瓶中,进行二级菌种培养,二级菌种在21-23℃条件下170-180r/min振荡培养3天,取10mL的二级菌液接种接种到灭菌好的栽培袋中。栽培培养条件:温度设置为17±1℃,相对湿度为90±5%,CO2的量为1500±100mg/L,黑暗培养80天。成熟后收获海鲜菇子实体,测定其产量,进行冻干处理后粉碎,分析其有机硒形态和含量。
本发明中,有机硒测定方法:采用高效液相色谱和电感耦合等离子体质谱联用(HPLC-ICPMS)方法进行检测,具体方法可参见Hu T,Liang Y,Zhao G.,Wu W.,Li H andGuo Y*.2019.Selenium biofortification and antioxidant activity in Cordycepsmilitaris supplied with selenate,selenite,or selenomethionine.BiologicalTrace Element Research.187:553-561.Doi:10.1007/s12011-018-1386-y;以及Ting Hu,Li Li,Gaifang Hui,Junjie Zhang,Huafen Li,Wenliang Wu,Xuehong Wei,YanbinGuo.2019.Selenium biofortification and its effect on multi-element change inAuricularia auricular.Food Chemistry 295:206–213.DOI:10.1016/j.foodchem.2019.05.101。主要步骤包括:将海鲜菇冷冻干燥后粉碎,取0.2g,用2mg mL-1蛋白酶XIV在37℃ 150rpm转速条件下酶解24h,然后8000g离心5min去除细胞碎片,上清用0.22μm滤器过滤后,用液相色谱柱Hamilton RPR-X100(Flexa;PekinElmer,USA)分离,流动相采用40mM(NH4)2HPO4,流速1mL min-1,用电感耦合等离子体质谱(ICPMS)为检测器检测不同形态硒。用硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸、硒酸盐、亚硒酸盐为标准样品。该方法检测准确性高,1μg/L的硒形态均能有效检出;硒回收率高达80%以上。
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段,所用原料均为市售商品。
实施例1菌株选育及富硒载体的获得
将中国农业大学食用菌研究室保存的海鲜菇菌种H023在PDA培养基上培养14天,从菌落生长边缘取5mm的菌饼分别接种在硒酸钠、亚硒酸钠含量在1.0mg/kg,5.0mg/kg和20.0mg/kg的平板上,21℃培养10天,测量菌落直径,结果显示,H023在5.0mg/kg亚硒酸钠处理下菌落生长明显受到抑制;在25.0mg/kg硒酸钠处理下明显抑制了H023菌丝生长(图2)。
将中国农业大学食用菌研究室保存的海鲜菇菌种H023在PDA培养基上培养14天,从菌落生长边缘取5mm的菌饼分别接种10个PDA平板上培养2天后,放置到30W的紫外灯管下25cm照射3min,黑暗培养24h后再进行第2次照射,重复照射3次。将诱变的菌株培养7天后从菌落的边缘取5mm的菌饼接种到PDA培养基上21℃培养14天,测量菌落直径。其中HM1,HM3,HM4,HM7生长与对照菌株H023无差异(图3)。
将HM1,HM3,HM4,HM7,H023菌株接种到含有5mg/L的硒酸钠和亚硒酸钠的PDA平板上,每个处理10个平皿,21℃培养10天,测量菌落直径,结果显示,HM1和HM3菌种菌落直径与不含硒的PDA平板生长无显著性差异,并显著高于H023在含5mg/L的硒酸钠和亚硒酸钠的PDA平板上的菌落直径(图4)。将HM1和HM3两个菌种分别在5mg/L的硒酸钠和亚硒酸钠的栽培培养基(花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮、麦麸的重量比为40:30:15:15,水分含量为80%)中栽培,结果显示,HM1在5mg/L的硒酸钠和亚硒酸钠的栽培培养基中培养海鲜菇鲜重分别增加了7.9%和11.6%,但HM3菌株产量分别降低了15%和12%。HM1菌株为优选菌株,保存至中国典型培养物保藏中心,菌株编号为CCTCC M 2019981。
实施例2硒酸钠处理富硒栽培
利用粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮、麦麸的重量比为40:30:15:15,利用石灰粉调pH至8,水分含量为80%,硒酸盐浓度梯度设置为0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg,每个培养袋装入2.0kg混料,121℃高温、高压灭菌锅2h。冷却至室温后,接种菌种。从保存菌种的试管中取5mm大小均匀的菌饼接种于盛有150mL液体PDA培养基的500mL锥形摇瓶中,21-23℃条件下170-180r/min振荡培养4天为一级菌种。从长满菌丝球的一级菌种摇瓶中用无菌移液器吸取5mL菌种转移到500mL含有150mL的PDA液体培养基的摇瓶中,进行二级菌种培养,二级菌种在21-23℃条件下170-180r/min振荡培养3天,取10mL的二级菌液接种接种到灭菌好的栽培袋中。培养条件:温度设置为17±1℃,相对湿度为90±5%,CO2的量为1500±100mg/L,黑暗培养80天。收集海鲜菇子实体,测产量,冻干,磨碎,测定子实体中的硒形态。不同浓度硒酸钠处理条件下海鲜菇子实体的生物量分别为454.5±11.52,360.0±38.0,374.2±40.2,366.8±59.6,374.3±20.6,367.6±39.4,342.5±32.3g/棒(鲜重),对照组(不添加硒酸钠)海鲜菇生物量为379.6±44.0g/棒(图5)。不同浓度硒酸钠处理条件下,海鲜菇子实体中总硒含量分别为0.7±0.1,1.3±0.1,3.8±0.2,5.3±0.9,7.0±0.6,13.6±2.8,29.7±4.1mg/kg,MeSeCys占总硒比例15.9-23.9%。当硒酸盐浓度达到40mg/kg时,子实体中的硒形态如图5所示。随着硒酸钠添加浓度的增加,海鲜菇子实体中硒含量随之增加。海鲜菇子实体中硒形态主要以MeSeCys、SeMet和SeCys2三种形式存在,且海鲜菇子实体没有无机硒残留,有机硒比例100%(图6)。在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg硒酸钠处理下,海鲜菇子实体中SeCys2,未知硒形态,MeSeCys和SeMet所占比例分别为:11.9%,0.5%,14.9%和72.7%;10.5%,0.4%,15.4%和73.7%;6.9%,0.6%,15.8%和76.7%;5.5%,0.5%,16.9%和77.1%;4.9%,0.6%,17.4%和77.1%;5.9%,0.6%,16.9%和76.6%;3.1%,1.8%,18.8%和76.3%。其中MeSeCys在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg硒酸钠处理的子实体中的含量分别为0.1mg/kg,0.2mg/kg,0.6mg/kg,0.9mg/kg,1.2mg/kg,2.3mg/kg和5.6mg/kg。
实施例3亚硒酸钠处理富硒栽培
利用粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮、麦麸的重量比为40:30:15:15,利用石灰粉调pH至8,水分含量为80%,亚硒酸盐浓度梯度设置为0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg,每个培养袋装入2.0kg混料,121℃高温高压灭菌锅2h。冷却至室温后,接种菌种。从保存菌种的试管中取5mm大小均匀的菌饼接种于盛有150mL液体PDA培养基的500mL锥形摇瓶中,21-23℃条件下170-180r/min振荡培养4天为一级菌种。从长满菌丝球的一级菌种摇瓶中用无菌移液器吸取5mL菌种转移到500mL含有150mL的PDA液体培养基的摇瓶中,进行二级菌种培养,二级菌种在21-23℃条件下170-180r/min振荡培养3天,取10mL的二级菌液接种接种到灭菌好的栽培袋中。培养条件:温度设置为17±1℃,相对湿度为90±5%,CO2的量为1500±100mg/L,黑暗培养80天。收集海鲜菇子实体,测产量,冻干,磨碎,测定子实体中的硒形态。亚硒酸钠处理条件下海鲜菇子实体的生物量为397.4±44.0,434.3±64.9,405.0±67.1,405.4±65.7,414.9±38.2,432.9±44.5,404.8±67.2,397.4±81.0g/棒(鲜重),明显高于对照组(不添加硒酸钠)海鲜菇生物量379.6±44.0g/棒(图7)。不同浓度亚硒酸钠处理条件下,海鲜菇子实体中总硒含量分别为0.4±0.1,0.8±0.2,1.5±0.1,1.9±0.2,3.5±0.2,6.4±0.3,12.8±3.1mg/kg,MeSeCys占总硒比例33.7-43.9%。当亚硒酸盐浓度达到40mg/kg时,子实体中的硒形态如图8所示。随着亚硒酸钠添加浓度的增加,海鲜菇子实体中硒含量随之增加。海鲜菇子实体中硒形态主要以MeSeCys、SeMet、SeCys2和少量Se(IV)四种形式存在(图8)。在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg亚硒酸钠处理下,海鲜菇子实体中SeCys2,未知硒形态,MeSeCys、Se(IV)和SeMet所占比例分别为:13.8%,0.2%,34.8%,0和51.2%;12.0%,0.7%,33.8%,0.1%和53.4%;10.5%,0.5%,36.9%,0.4%和51.7%;10.5%,0.5%,36.9,0.4%和51.7%;7.9%,0.7%,35.0%,0.9%和55.5%;3.8%,1.4%,36.9%,2.3%和55.6%;2.8%,1.7%,39.4%,4.4%和51.7%。其中MeSeCys在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg亚硒酸钠处理的子实体中的含量分别为0.2mg/kg,0.3mg/kg,0.5mg/kg,0.7mg/kg,1.3mg/kg,2.4mg/kg和5.0mg/kg。
实施例4化学纳米硒处理富硒栽培
本实施例中使用的化学纳米硒,其制备方法可参见ZL201410520106.4实施例1。
利用粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮、麦麸的重量比为40:30:15:15,利用石灰粉调pH至8,水分含量为80%,化学纳米硒浓度梯度设置为0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg,每个培养袋装入2.0kg混料,121℃高温、高压灭菌锅2h。冷却至室温后,接种菌种。从保存菌种的试管中取5mm大小均匀的菌饼接种于盛有150mL液体PDA培养基的500mL锥形摇瓶中,21-23℃条件下170-180r/min振荡培养4天为一级菌种。从长满菌丝球的一级菌种摇瓶中用无菌移液器吸取5mL菌种转移到500mL含有150mL的PDA液体培养基的摇瓶中,进行二级菌种培养,二级菌种在21-23℃条件下170-180r/min振荡培养3天,取10mL的二级菌液接种接种到灭菌好的栽培袋中。培养条件:温度设置为17±1℃,相对湿度为90±5%,CO2的量为1500±100mg/L,黑暗培养80天。收集海鲜菇子实体,测产量,冻干,磨碎,测定子实体中的硒形态。化学纳米硒处理条件下海鲜菇子实体的生物量为379.6±44.0,340.1±54.9,367.6±53.7,387.6±27.0,374.8±43.7,391.5±40.5,449.3±18.0,450.0±4.2g/棒(鲜重),对照组(不添加硒酸钠)海鲜菇生物量为379.6±44.0g/棒(图9)。不同浓度硒酸钠处理条件下,海鲜菇子实体中总硒含量分别为0.6±0.1,1.0±0.1,1.8±0.1,2.7±0.2,4.2±0.4,7.2±0.7,15.0±0.3mg/kg,MeSeCys占总硒比例18.9-30.2%。当化学纳米硒浓度达到40mg/kg时,子实体中的硒形态如图10所示。随着化学纳米硒添加浓度的增加,海鲜菇子实体中硒含量随之增加。海鲜菇子实体中硒形态主要以MeSeCys、SeMet、SeCys2和少量Se(IV)四种形式存在(图10)。在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg化学纳米硒处理下,海鲜菇子实体中SeCys2,未知硒形态,MeSeCys、Se(IV)和SeMet所占比例分别为:7.4%,0,22.5%,0和70.1%;7.1%,0,20.6%,0和72.3%;7.1%,0,20.6%,0和72.3%;5.5%,0.4%,21.9%,0.1%和72.1%;4.8%,0.3%,22.7%,0.4%和71.8%;2.5%,0.3%,23.8%,1.5%和71.9%;2.2%,0.4%,22.3%,3.4%和71.7%。其中MeSeCys在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg化学纳米硒处理的子实体中的含量分别为0.1mg/kg,0.2mg/kg,0.4mg/kg,0.6mg/kg,1.0mg/kg,1.7mg/kg和3.3mg/kg。
实施例5生物纳米硒处理富硒栽培
本实施例中使用的生物纳米硒,其制备方法可参见ZL201610946282.3实施例1。
利用粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮、麦麸的重量比为40:30:15:15,利用石灰粉调pH至8,水分含量为80%,生物纳米硒浓度梯度设置为0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg,每个培养袋装入2.0kg混料,121℃高温、高压灭菌锅2h。冷却至室温后,接种菌种。从保存菌种的试管中取5mm大小均匀的菌饼接种于盛有150mL液体PDA培养基的500mL锥形摇瓶中,21-23℃条件下170-180r/min振荡培养4天为一级菌种。从长满菌丝球的一级菌种摇瓶中用无菌移液器吸取5mL菌种转移到500mL含有150mL的PDA液体培养基的摇瓶中,进行二级菌种培养,二级菌种在21-23℃条件下170-180r/min振荡培养3天,取10mL的二级菌液接种接种到灭菌好的栽培袋中。培养条件:温度设置为17±1℃,相对湿度为90±5%,CO2的量为1500±100mg/L,黑暗培养80天。收集海鲜菇子实体,测产量,冻干,磨碎,测定子实体中的硒形态。生物纳米硒处理条件下海鲜菇子实体的生物量为382.6±41.0,385.7±42.4,391.2±24.8,397.0±20.6,391.1±16.7,402.9±26.2,423.1±22.1,438.3±26.1g/棒(鲜重),对照组(不添加硒酸钠)海鲜菇生物量为376.6±34.2g/棒(图11)。不同浓度硒酸钠处理条件下,海鲜菇子实体中总硒含量分别为0.5±0.1,1.0±0.2,1.8±0.1,2.6±0.2,4.3±0.4,7.3±0.5,15.5±0.6mg/kg,MeSeCys占总硒比例18.8-32.1%。当生物纳米硒浓度达到40mg/kg时,子实体中的硒形态如图12所示。随着生物纳米硒添加浓度的增加,海鲜菇子实体中硒含量随之增加。海鲜菇子实体中硒形态主要以MeSeCys、SeMet、SeCys2和少量Se(IV)四种形式存在(图12)。在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg生物纳米硒处理下,海鲜菇子实体中SeCys2,MeSeCys、Se(IV)和SeMet所占比例分别为:8.8%,23.6%,0和67.6%;7.0%,22.7%,0和70.3%;7.0%,20.8%,0和72.2%;4.4%,22.9%,0和72.7%;2.7%,24.0%,0和73.3%;2.8%,24.0%,0和73.3%;2.5%,24.8%,0和71.5%。其中MeSeCys在0.5,1.0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0mg/kg生物纳米硒处理的子实体中的含量分别为0.1mg/kg,0.2mg/kg,0.4mg/kg,0.6mg/kg,1.0mg/kg,1.8mg/kg和3.8mg/kg。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之做一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (11)

1.海鲜菇HM1(Hypsizygus marmoreus HM1),其特征在于,保藏编号为CCTCC M2019981。
2.含有权利要求1所述海鲜菇HM1的食品、药品、保健品或化妆品。
3.含有权利要求1所述海鲜菇HM1的组合物。
4.利用海鲜菇生物合成有机硒的方法,其特征在于,向海鲜菇HM1栽培培养基中添加硒源,然后接入权利要求1所述海鲜菇HM1,在温度17±1℃,相对湿度90±5%,CO2含量1500±100mg/L的条件下暗培养70-80天,培养结束后,收集海鲜菇子实体,从子实体中分离得到有机硒;
所述海鲜菇HM1栽培培养基由粒度大小均匀的花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮和麦麸按重量比36-43:28-32:12-16:12-16混合后,并用石灰粉调pH至8,混合均匀后装袋经高压灭菌而成,所述栽培培养基的水分含量为70-80%。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述栽培培养基中花旗松木屑、玉米棒子、大豆皮和麦麸的重量比为40:30:15:15。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,灭菌条件为:120-123℃灭菌2-3h。
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述硒源为无机硒。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述硒源为硒酸盐、亚硒酸盐和纳米硒中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所添加的硒源在栽培培养基中的浓度为0.5-40.0mg/kg。
10.根据权利要求4-9任一项所述的方法,其特征在于,所述有机硒包括硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸。
11.根据权利要求10所述的方法,其特征在于,所述有机硒为硒甲基硒代半胱氨酸。
CN202010072347.2A 2020-01-21 2020-01-21 利用海鲜菇生物合成有机硒的方法 Active CN111264299B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010072347.2A CN111264299B (zh) 2020-01-21 2020-01-21 利用海鲜菇生物合成有机硒的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010072347.2A CN111264299B (zh) 2020-01-21 2020-01-21 利用海鲜菇生物合成有机硒的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111264299A CN111264299A (zh) 2020-06-12
CN111264299B true CN111264299B (zh) 2021-05-14

Family

ID=71001193

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010072347.2A Active CN111264299B (zh) 2020-01-21 2020-01-21 利用海鲜菇生物合成有机硒的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111264299B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114073214B (zh) * 2021-11-25 2022-11-18 云南云硒食用菌开发有限公司 一种富硒平菇的培育和栽培方法
CN114747758A (zh) * 2022-04-02 2022-07-15 宜春飞龙实业有限公司 一种硒营养强化剂及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108676059A (zh) * 2018-05-23 2018-10-19 福建省顺昌县饶氏佰钰食品有限公司 一种利用海鲜菇提取硒多糖蛋白的方法及其应用
CN109867730A (zh) * 2019-03-21 2019-06-11 常熟理工学院 海鲜菇多糖螯合硒的制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104221712B (zh) * 2014-09-03 2016-05-18 江西星火菌业科技发展有限责任公司 海鲜菇及其栽培方法
CN104663246B (zh) * 2015-03-11 2017-11-10 王伟利 富硒高钙食用菌菇的生产方法
CN109452091A (zh) * 2018-12-14 2019-03-12 马山县山山农业科技有限公司 富硒食用菌增产培养基的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108676059A (zh) * 2018-05-23 2018-10-19 福建省顺昌县饶氏佰钰食品有限公司 一种利用海鲜菇提取硒多糖蛋白的方法及其应用
CN109867730A (zh) * 2019-03-21 2019-06-11 常熟理工学院 海鲜菇多糖螯合硒的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
富硒食用菌研究进展;胡婷等;《食用菌学报》;20190331;第26卷(第1期);第68-76页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111264299A (zh) 2020-06-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102667507B1 (ko) 균사체화된 고단백 식품 조성물의 제조 방법 및 용도
CA2359338C (en) Bacillus subtilis takemi and use thereof
CN102511847A (zh) 螺旋藻提取物的制备方法
JP2003289814A (ja) 有効微生物及び漢方薬を用いた養殖海産魚類の生理活性増大・成長発育促進用の飼料添加剤及びその製造方法
CN105077029A (zh) 富锌大麦苗晚餐代餐粉及其制备方法
CN109337895B (zh) 一种优质高产富硒猴头菇菌种的生产方法
CN104285820A (zh) 一株富硒蛹虫草菌种及其应用
CN102559523A (zh) 一种富硒酵母、富硒酵母酶解物及其制备方法
CN107164237A (zh) 富硒蛹虫草及其栽培方法与应用
CN113637594B (zh) 一种多脂鳞伞菌株yx1、培养方法及其应用
KR20200091788A (ko) 발효된 곡물 분말 및 버섯 배지를 이용하여 균사체 분말을 제조하는 방법
CN111264299B (zh) 利用海鲜菇生物合成有机硒的方法
JP2010104249A (ja) 栄養添加剤用の液体培養物
CN105309750A (zh) 一种高含量牛樟芝真菌活性多糖和三萜精粉及其副产品的综合利用生产工艺
CN105132311B (zh) 利用谷胱甘肽废液生产功能微生物的方法
TWI408226B (zh) 高麥角硫因含量杏鮑菇菌絲體之液態培養
CN109294940A (zh) 玉米乳杆菌诱变菌及高产乳酸的用途
CN111134231A (zh) 一株漳州芽孢杆菌及利用其发酵桑叶粉的方法
CN111436528A (zh) 一种基于微生物发酵的竹粉饲料制备方法
KR101420392B1 (ko) 양만장 에너지 절감을 위한 뱀장어용 사료 및 사료첨가제
CN111493292A (zh) 一种以海洋生物和/或海产品加工废弃物为原料制备精膏的方法
KR100910657B1 (ko) 신규한 락토바실러스 브츠네리 및 이의 용도
CN109337833A (zh) 诱变的肠膜明串珠菌的生物制剂及其用途
CN103849575B (zh) 一种单细胞蛋白的生产方法
CN113197258A (zh) 富硒藤茶及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant