CN110878119B - 一种阿巴帕肽的固相合成方法 - Google Patents
一种阿巴帕肽的固相合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110878119B CN110878119B CN201811037529.5A CN201811037529A CN110878119B CN 110878119 B CN110878119 B CN 110878119B CN 201811037529 A CN201811037529 A CN 201811037529A CN 110878119 B CN110878119 B CN 110878119B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- leu
- fmoc
- solid
- synthetic resin
- asp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 5u8924t11h Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O3)C=C[C@H](C)[C@@H](C(C)C)O4)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 0.000 title claims abstract description 6
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 229950008167 abamectin Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 title abstract description 4
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 27
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 44
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 25
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims description 25
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 21
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 21
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 18
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 16
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium chloride Substances Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 claims description 8
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 8
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 claims description 4
- -1 Asp amino acid Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 claims description 4
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 3
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XXMFJKNOJSDQBM-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroacetic acid;hydrate Chemical compound [OH3+].[O-]C(=O)C(F)(F)F XXMFJKNOJSDQBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 claims description 2
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims description 2
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 17
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 51
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 51
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 9
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 7
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 238000000861 blow drying Methods 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 6
- FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(4-carboxyphenyl)phenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)C(O)=O)C=C1 FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 5
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 description 4
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 4
- YDNMHDRXNOHCJH-UHFFFAOYSA-N 3-aminopyrrolidine-2,5-dione Chemical compound NC1CC(=O)NC1=O YDNMHDRXNOHCJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 description 3
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 1
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[[4-[2-[bis(4-methylphenyl)methylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC(OCC(=O)NC(C=2C=CC(C)=CC=2)C=2C=CC(C)=CC=2)=CC=1)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHGNHOOVYPHPNJ-UHFFFAOYSA-N Amigdalin Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OCC1OC(OCC2OC(OC(C#N)C3=CC=CC=C3)C(OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C2OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C1OC(=O)C(F)(F)F ZHGNHOOVYPHPNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 238000003547 Friedel-Crafts alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 1
- BVISQZFBLRSESR-XSCWXTNMSA-N abaloparatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC(C)(C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)C1=CN=CN1 BVISQZFBLRSESR-XSCWXTNMSA-N 0.000 description 1
- 108010038051 abaloparatide Proteins 0.000 description 1
- 229950001959 abaloparatide Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- NIHNNTQXNPWCJQ-UHFFFAOYSA-N o-biphenylenemethane Natural products C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3C2=C1 NIHNNTQXNPWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 1
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及一种阿巴帕肽的固相合成方法,具体公开了一种通过使用本发明的Asp上的Fmoc保护基脱除剂脱除Fmoc保护基,所述的脱除剂为AlCl3的NMP溶液及吲哚;本发明的方法有效地降低杂质含量,提高产率。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域,具体涉及一种阿巴帕肽的固相合成方法
背景技术
阿巴帕肽(Abaloparatide)是由Radius Health公司研制的一种新型甲状旁腺激素相关肽,用于伴有骨折高风险的绝经后女性骨质疏松症的治疗。2017年4月28日在美国上市,商品名为TYMLOS。特立帕肽与阿巴帕肽都是甲状旁腺激素相关肽(PTHrP),但阿巴帕肽能够更好的降低骨折率和高钙血症发生率。
阿巴帕肽由34个氨基酸组成,分子式为C174H300N56O49,分子量为3961。其肽序如下所示:
H-Ala1-Val-Ser-Glu-His-Gln-Leu-Leu-His-Asp-Lys11-Gly-Lys-Ser-Ile-Gln-Asp-Leu-Arg-Arg-Arg21-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Aib-Lys-Leu31-His-Thr-Ala-NH2
原研专利US5969095主要采用Boc策略固相逐步偶联法进行合成,需要强酸HF裂解,危险系数高。专利CN201510136475中合成全保护多肽片段需要大量昂贵的2-CTC树脂,生产成本高。CN108047329优先合成Fmoc-Thr(OtBu)-Ala-OH、Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH、Fmoc-Ala-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Glu(OtBu)-OH等小片段后进行固相偶联,虽然能减少Gly、Ala增加杂质及Arg缺损杂质的产生,但优先合成小片段杂质增加工艺复杂性。而且,阿巴帕肽序列中第10和17位是两个天冬氨酸,在多肽合成中固相依序偶联完天冬氨酸后,用20%哌啶DMF溶液脱保护时通常易产生天冬酰亚胺杂质及加哌啶杂质,反应式如下所示:
如上所示反应式,哌啶作为一种碱用于脱除N端Fmoc保护基时容易发生天冬酰亚胺副反应。文献报道在20%哌啶DMF溶液中加入1%HOBt虽然能有效的降低该副反应的发生(Org.Lett.,Vol.14,No.20,2012),但仍然无法避免该杂质的产生。
发明内容
针对现有技术缺陷,为了避免杂质的生成,需要一种新的合成方法。
本发明一个方面提供了一种阿巴帕肽的具体制备方法,其包括如下步骤:
步骤1:按Fmoc保护策略依序偶联合成Fmoc-Asp(OtBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Aib-Lys(Boc)-Leu-His(Trt)-Thr(tBu)-Ala--固相合成树脂;
步骤2:在惰性气体保护下,加AlCl3的NMP溶液及吲哚,脱除Asp上的Fmoc保护基;
步骤3:继续按Fmoc保护策略依次偶联合成Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gly-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Aib-Lys(Boc)-Leu-His(Trt)-Thr(tBu)-Ala-固相合成树脂;
步骤4:在惰性气体保护下,加AlCl3的NMP溶液及吲哚,脱除Asp上的Fmoc保护基;
步骤5:继续按Fmoc保护策略依次偶联获得全保护的阿巴帕肽-固相合成树脂;
步骤6:加入裂解剂,裂解固相合成树脂以及侧链保护基,得到阿巴帕肽;
任选地,步骤7:反相色谱制备纯化获得精肽。
步骤1、3、5中Fmoc保护策略为:在固相合成树脂或者多肽-固相合成树脂上偶联Fmoc保护的氨基酸;脱除末端的Fmoc保护基,然后再偶联下一位Fmoc保护的氨基酸,直至完成。
在本发明的技术方案中,在固相合成树脂使用前将固相合成树脂用溶剂进行溶胀,所选溶剂包括DMF、NMP、二氯甲烷等,优选DMF。
在本发明的技术方案中,脱除非Asp氨基酸末端的Fmoc保护基的脱除剂为20%的哌啶/DMF溶液。
在本发明的技术方案中,在固相合成树脂或者多肽-固相合成树脂上偶联Fmoc保护的氨基酸的方法为以偶联剂活化,将待偶联氨基酸与固相合成树脂或者多肽-固相合成树脂进行偶联至反应完成。
在本发明的技术方案中,偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物或DIPEA和化合物A和化合物B的组合物,其中化合物A为HOAt或HOBt,化合物B为PyAOP、PyBOP、HATU、HBTU或TBTU,优选为DIPCDI和化合物A的组合物。进一步地,偶联剂中各成分的比例以摩尔比计为DIPCDI:A=1.2:1.1,DIPEA:A:B=2.0:1.1:1.0。
在本发明的技术方案中,每种氨基酸进行偶联反应的时间通常为1.5-4小时,优选2-3小时;温度优选为室温(即20±5℃),也可在适当提高或降低的温度下进行。
在本发明的技术方案中,所述的固相合成树脂为氨基固相合成树脂,优选为RinkAmide AM Resin、Rink Amide MBHA Resin或Rink Amide Resin。
在本发明的技术方案中,所述的固相合成树脂的替代度为0.1-1.0mmol/g,优选0.2-0.8mmol/g,更优选0.2-0.4mmol/g。
在本发明的技术方案中,所述步骤2和步骤4中脱除,脱除Asp上的Fmoc保护基的脱除试剂为AlCl3的有机溶液,且AlCl3的有机溶液中添加了吲哚,所述AlCl3用量为反应底物3倍摩尔当量,吲哚的用量为反应底物1倍摩尔当量。所述有机溶液使用的有机溶剂为NMP。
在本发明的技术方案中,所述步骤2和步骤4中脱除,脱除Asp上的Fmoc保护基后以有机溶剂洗涤再用DMF洗涤;溶剂为能够溶解AlCl3的溶剂,优选甲苯、水、乙醇、乙醚和四氯化碳。脱保护时间通常为2-4小时,优选3小时。温度优选为室温(即20±5℃),也可在适当提高或降低的温度下进行。
在本发明的技术方案中,步骤6中所用裂解液为TFA、H2O、EDT、苯甲醚、苯甲硫醚、苯酚的不同比例混合物,优选R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2)。
在本发明的技术方案中,步骤7所述纯化步骤采用反相高压液相色谱法。进一步地,所述反相高压液相色谱法包括:以反相十八烷基硅烷为固定相,以0.1%三氟乙酸水溶液/乙腈为流动相,收集目的峰馏分,浓缩冻干。
本发明通过在偶联肽序中两个Fmoc-Asp(OtBu)-OH后,用AlCl3的NMP溶液替换DBLK溶液脱进行脱保护反应。以AlCl3替代有机碱哌啶进行脱保护,能很好的降低碱作用下的天冬酰亚胺副反应,从而提高粗肽纯度,降低纯化难度,提高产品收率。加入吲哚可以捕获芴烯,从而促进脱Fmoc保护基完全,减少单独用AlCl3甲苯溶液脱Fmoc保护基不完全造成的缺损肽杂质。
不希望被理论束缚,但是通过本发明的方案以及对比组的实验可知,本发明的技术方案取得了预料不到技术效果。发明人认为有可能由于AlCl3的甲苯溶液能有效地脱除N端Fmoc保护基(Eur.J.Org.Chem.2000(4),573-575),而本发明采用AlCl3应用于阿巴帕肽序列中Asp的Fmoc保护基脱除,以AlCl3替代有机碱哌啶进行脱保护,能很好的避免碱作用下的天冬酰亚胺副反应,从而提高粗肽纯度,降低纯化难度,提高产品收率。文献中AlCl3甲苯溶液在液相反应中的转化率仅为86~95%之间,在固相反应脱除保护基时,由于非均相反应,使得脱保护效果更差,使得该方法无法应用于固相多肽合成。本发明以溶解性更好的氮甲基吡咯烷酮(NMP)作溶剂,加入少量吲哚作捕获剂,吲哚可通过傅克烷基化反应及吲哚环氮上孤对电子双重作用对芴正离子进行捕获,从而提高AlCl3固相脱保护反应效率,使Fmoc保护基脱除完全,又避免了天冬酰亚胺副反应的发生。
有益效果
本发明的方法杂质含量大幅下降,且收率和纯度显著提高;制备方法简单,原料成本低。
附图说明
图1为精肽质谱图。
图2为天冬酰亚胺杂质质谱图。
具体实施方式
实施例1
称取Rink Amide resin(50g,替代度为0.3mmol/g)加入到固相反应柱中,用DMF洗涤2次,再用DMF溶胀树脂30分钟,加入DBLK脱保护(5min+7min),树脂用DMF洗涤6次。称取Fmoc-Ala-OH(23.348g,75mmol)和HOBT(12.159g,90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解,冰水浴冷却至0~5℃,加入DIPCDI(12.75mL,75mmol)活化5min,将此活化液加入到反应柱中,室温鼓氮气鼓泡2小时,以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次,加入DBLK脱保护5min+7min,DMF洗涤树脂6次,茚三酮检测树脂有颜色。重复此常规偶联操作,从C端至N端依序偶联氨基酸,氨基酸用量为5eqv,每次偶联两小时。在肽序第17位偶联完第一个Fmoc-Asp(OtBu)-OH后用DMF洗涤树脂3次,将反应底物3倍摩尔当量的AlCl3和反应底物1倍摩尔当量的捕获剂吲哚溶于3-5倍树脂体积的NMP溶剂中,搅拌溶清后,加入反应柱内,氮气鼓泡3小时后真空抽除反应液,用NMP洗三次后再用DMF洗三次。然后按常规方法继续偶联至第二个Fmoc-Asp(OtBu)-OH,用DMF洗涤树脂3次,加入反应底物3倍摩尔当量的AlCl3的NMP溶液及反应底物1倍摩尔当量的捕获剂吲哚,氮气鼓泡3小时后真空抽除反应液,用NMP洗三次后再用DMF洗三次。继续常规偶联完所有氨基酸,用甲醇收缩,真空抽干得到肽树脂146.2g。加入到2L烧瓶内,加入预冻至-15℃的R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2,1L),室温搅拌4小时,过滤树脂,收集滤液。用少量TFA洗涤树脂,合并滤液。将滤液缓慢加入10L冰乙醚中沉淀。离心,冰乙醚洗涤5次,氮气吹干得到粗肽66.66克,粗肽纯度80.86%,未检出天冬酰亚胺杂质。粗肽用高效液相纯化,得精肽32.7g,纯度99.73%,收率54.5%,质谱信息为3959(见图1)。
实施例2:对比实施例(甲苯作溶剂)
将实施例1中的NMP换成甲苯作溶剂,加入1eqv的吲哚作为捕获剂进行脱保护得到肽树脂136.6g。加入到2L烧瓶内,加入预冻至-15℃的R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2,1L),室温搅拌4小时,过滤树脂,收集滤液。用少量TFA洗涤树脂,合并滤液。将滤液缓慢加入10L冰乙醚中沉淀。离心,冰乙醚洗涤5次,氮气吹干得到粗肽59.52克,粗肽纯度68.2%,未检出天冬酰亚胺杂质。经检测,纯度低是由于脱保护不完全导致缺损杂质较多。粗肽用高效液相纯化,得精肽25.2g,纯度98.83%,收率42.0%。
实施例3:对比实施例(NMP作溶剂,不加捕获剂吲哚)
将实施例1中用3eqv AlCl3的NMP溶液,但不加人吲哚作为捕获剂进行脱保护得到肽树脂106.2g。加入到2L烧瓶内,加入预冻至-15℃的R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2,1L),室温搅拌4小时,过滤树脂,收集滤液。用少量TFA洗涤树脂,合并滤液。将滤液缓慢加入10L冰乙醚中沉淀。离心,冰乙醚洗涤5次,氮气吹干得到粗肽47.48克,粗肽纯度41.43%。经检测,纯度低是由于脱保护不完全导致缺损杂质较多。粗肽用高效液相纯化,得精肽10.3g,纯度98.89%,收率17.2%。
实施例4:对比实施例(20%DBLK脱保护)
称取Rink Amide resin(50g,替代度为0.3mmol/g)加入到固相反应柱中,用DMF洗涤2次,再用DMF溶胀树脂30分钟,加入DBLK脱保护(5min+7min),树脂用DMF洗涤6次。称取Fmoc-Ala-OH(23.348g,75mmol)和HOBT(12.159g,90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解,冰水浴冷却至0~5℃,加入DIPCDI(12.75mL,75mmol)活化5min,将此活化液加入到反应柱中,室温鼓氮气鼓泡2小时,以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次,加入DBLK脱保护5min+7min,DMF洗涤树脂6次,茚三酮检测树脂有颜色。重复此常规偶联操作,从C端至N端依序偶联氨基酸,氨基酸用量为5eqv,每次偶联两小时。两次偶联完Fmoc-Asp(OtBu)-OH后均用DBLK脱保护5min+7min,DMF洗涤树脂6次。偶联完所有氨基酸后用甲醇收缩,真空抽干得到肽树脂145.8g。得到的肽树脂145.8g加入到2L烧瓶内,加入预冻至-15℃的R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2,1L),室温搅拌4小时,过滤树脂,收集滤液。用少量TFA洗涤树脂,合并滤液。将滤液缓慢加入10L冰乙醚中沉淀。离心,冰乙醚洗涤5次,氮气吹干得到粗肽63.49克,粗肽纯度48.79%,天冬酰亚胺杂质纯度为18.70%,杂质质谱信息位3941(参见图2)。粗肽用高效液相纯化,得精肽15.52g,纯度98.27%,收率25.8%。
实施例5:对比实施例(20%DBLK+1%HOBt脱保护)
称取Rink Amide resin(50g,替代度为0.3mmol/g)加入到固相反应柱中,用DMF洗涤2次,再用DMF溶胀树脂30分钟,加入DBLK脱保护(5min+7min),树脂用DMF洗涤6次。称取Fmoc-Ala-OH(23.348g,75mmol)和HOBT(12.159g,90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解,冰水浴冷却至0~5℃,加入DIPCDI(12.75mL,75mmol)活化5min,将此活化液加入到反应柱中,室温鼓氮气鼓泡2小时,以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次,加入DBLK脱保护5min+7min,DMF洗涤树脂6次,茚三酮检测树脂有颜色。重复此常规偶联操作,从C端至N端依序偶联氨基酸,氨基酸用量为5eqv,每次偶联两小时。两次偶联完Fmoc-Asp(OtBu)-OH后20%DBLK溶液中加入1%HOBt,加入到固相反应柱中脱保护5min+7min,DMF洗涤树脂6次。偶联完所有氨基酸后用甲醇收缩,真空抽干得到肽树脂144.9g。得到的肽树脂144.9g加入到2L烧瓶内,加入预冻至-15℃的R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2,1L),室温搅拌4小时,过滤树脂,收集滤液。用少量TFA洗涤树脂,合并滤液。将滤液缓慢加入10L冰乙醚中沉淀。离心,冰乙醚洗涤5次,氮气吹干得到粗肽62.69克,粗肽纯度67.24%,天冬酰亚胺杂质纯度为6.70%。粗肽用高效液相纯化,得精肽19.38g,纯度98.70%,收率32.3%。
实施例6:对比实施例(AlCl3甲苯溶液脱保护)
称取Rink Amide resin(50g,替代度为0.3mmol/g)加入到固相反应柱中,用DMF洗涤2次,再用DMF溶胀树脂30分钟,加入DBLK脱保护(5min+7min),树脂用DMF洗涤6次。称取Fmoc-Ala-OH(23.348g,75mmol)和HOBT(12.159g,90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解,冰水浴冷却至0~5℃,加入DIPCDI(12.75mL,75mmol)活化5min,将此活化液加入到反应柱中,室温鼓氮气鼓泡2小时,以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次,加入DBLK脱保护5min+7min,DMF洗涤树脂6次,茚三酮检测树脂有颜色。重复此常规偶联操作,从C端至N端依序偶联氨基酸,氨基酸用量为5eqv,每次偶联两小时。两次偶联完Fmoc-Asp(OtBu)-OH后加入3eqv AlCl3甲苯溶液脱保护3小时,DMF洗涤树脂6次。偶联完所有氨基酸后用甲醇收缩,真空抽干得到肽树脂125.4g。得到的肽树脂125.4g加入到2L烧瓶内,加入预冻至-15℃的R裂解试剂(TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2,1L),室温搅拌4小时,过滤树脂,收集滤液。用少量TFA洗涤树脂,合并滤液。将滤液缓慢加入10L冰乙醚中沉淀。离心,冰乙醚洗涤5次,氮气吹干得到粗肽42.29克,粗肽纯度27.24%。粗肽用高效液相纯化,得精肽6.71g,纯度98.70%,收率11.2%。
Claims (13)
1.一种阿巴帕肽的制备方法,其包括如下步骤:
步骤1:按Fmoc保护策略依序偶联合成Fmoc-Asp(OtBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Aib-Lys(Boc)-Leu-His(Trt)-Thr(tBu)-Ala--固相合成树脂;
步骤2:在惰性气体保护下,加AlCl3的NMP溶液及吲哚,脱除Asp上的Fmoc保护基;
步骤3:继续按Fmoc保护策略依次偶联合成Fmoc-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gly-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Aib-Lys(Boc)-Leu-His(Trt)-Thr(tBu)-Ala-固相合成树脂;
步骤4:在惰性气体保护下,加AlCl3的NMP溶液及吲哚,脱除Asp上的Fmoc保护基;
步骤5:继续按Fmoc保护策略依次偶联获得全保护的阿巴帕肽-固相合成树脂;
步骤6:加入裂解剂,裂解固相合成树脂以及侧链保护基,得到阿巴帕肽;
任选地,步骤7:反相色谱制备纯化获得精肽。
2.根据权利要求1中的制备方法,步骤2和步骤4中脱除Asp上的Fmoc保护基的脱除试剂中,所述AlCl3用量为反应底物的3倍摩尔当量,吲哚的用量为反应底物的1倍摩尔当量。
3.根据权利要求1中的制备方法,步骤2和步骤4中脱除Asp上的Fmoc保护基后,以有机溶剂洗涤再用DMF洗涤;洗涤用有机溶剂为能够溶解AlCl3的溶剂。
4.根据权利要求1中的制备方法,步骤1、3、5中Fmoc保护策略为:在固相合成树脂或者多肽-固相合成树脂上偶联Fmoc保护的氨基酸;脱除末端的Fmoc保护基,然后再偶联下一位Fmoc保护的氨基酸,直至完成。
5.根据权利要求4中的制备方法,脱除非Asp氨基酸末端的Fmoc保护基的脱除剂为20%的哌啶/DMF溶液。
6.根据权利要求4所述的制备方法,在固相合成树脂或者多肽-固相合成树脂上偶联Fmoc保护的氨基酸的方法为以偶联剂活化,将待偶联氨基酸与固相合成树脂或者多肽-固相合成树脂进行偶联至反应完成。
7.根据权利要求6所述的制备方法,偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物或DIPEA和化合物A和化合物B的组合物,其中化合物A为HOAt或HOBt,化合物B为PyAOP、PyBOP、HATU、HBTU或TBTU。
8.根据权利要求7所述的制备方法,偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物。
9.根据权利要求7所述的制备方法,偶联剂中各成分的比例以摩尔比计为DIPCDI:A=1.2:1.1,DIPEA:A:B=2.0:1.1:1.0。
10.根据权利要求1所述的制备方法,步骤6中所用裂解液为TFA、H2O、EDT、苯甲醚、苯甲硫醚、苯酚的不同比例混合物。
11.根据权利要求10所述的制备方法,步骤6中所用裂解液为R裂解试剂,所述R裂解试剂为TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT=90:5:3:2。
12.根据权利要求1所述的制备方法,步骤7所述纯化步骤采用反相高压液相色谱法。
13.根据权利要求12所述的制备方法,所述反相高压液相色谱法包括:以反相十八烷基硅烷为固定相,以0.1%三氟乙酸水溶液/乙腈为流动相,收集目的峰馏分,浓缩冻干。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811037529.5A CN110878119B (zh) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 |
PCT/CN2018/114526 WO2020047994A1 (zh) | 2018-09-06 | 2018-11-08 | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811037529.5A CN110878119B (zh) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110878119A CN110878119A (zh) | 2020-03-13 |
CN110878119B true CN110878119B (zh) | 2021-05-07 |
Family
ID=69722979
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811037529.5A Active CN110878119B (zh) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110878119B (zh) |
WO (1) | WO2020047994A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113880936B (zh) * | 2021-12-07 | 2022-03-29 | 浙江湃肽生物有限公司南京分公司 | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 |
CN114478749A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-05-13 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种阿巴帕肽的纯化方法 |
CN116023467A (zh) * | 2022-12-28 | 2023-04-28 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103172704A (zh) * | 2011-12-20 | 2013-06-26 | 苏州中科天马肽工程中心有限公司 | 一种抗肿瘤小肽FpAT的制备方法 |
CN106167457A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-11-30 | 北京大学 | 新型的天冬氨酸衍生物,它的制备方法及其在固相多肽合成中的用途 |
CN106317162A (zh) * | 2015-06-29 | 2017-01-11 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种n-磷酰化多肽的制备方法 |
CN106554391A (zh) * | 2015-09-29 | 2017-04-05 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种海洋生物肽Xen2174的合成方法 |
CN108047329A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-05-18 | 润辉生物技术(威海)有限公司 | 一种阿巴帕肽的制备方法 |
GB2559761A (en) * | 2017-02-16 | 2018-08-22 | Corthotec Ltd | Composition for improved bone fracture healing |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8314208B2 (en) * | 2006-02-10 | 2012-11-20 | Cem Corporation | Microwave enhanced N-fmoc deprotection in peptide synthesis |
US20120157563A1 (en) * | 2010-08-16 | 2012-06-21 | Cem Corporation | Water soluble solid phase peptide synthesis |
DK2886531T3 (en) * | 2013-12-19 | 2016-09-05 | Merck Patent Gmbh | aspartic acid |
CN106146648B (zh) * | 2015-03-26 | 2020-06-12 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种甲状旁腺激素类似物的合成方法 |
JP6788376B2 (ja) * | 2016-05-13 | 2020-11-25 | 株式会社カネカ | アスパラギン酸残基を含むペプチドの製造方法 |
CN107474107B (zh) * | 2017-05-18 | 2023-01-17 | 江苏恩华药业股份有限公司 | Glyx-13的制备方法及用于制备glyx-13的化合物 |
-
2018
- 2018-09-06 CN CN201811037529.5A patent/CN110878119B/zh active Active
- 2018-11-08 WO PCT/CN2018/114526 patent/WO2020047994A1/zh active Application Filing
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103172704A (zh) * | 2011-12-20 | 2013-06-26 | 苏州中科天马肽工程中心有限公司 | 一种抗肿瘤小肽FpAT的制备方法 |
CN106317162A (zh) * | 2015-06-29 | 2017-01-11 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种n-磷酰化多肽的制备方法 |
CN106554391A (zh) * | 2015-09-29 | 2017-04-05 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种海洋生物肽Xen2174的合成方法 |
CN106167457A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-11-30 | 北京大学 | 新型的天冬氨酸衍生物,它的制备方法及其在固相多肽合成中的用途 |
GB2559761A (en) * | 2017-02-16 | 2018-08-22 | Corthotec Ltd | Composition for improved bone fracture healing |
CN108047329A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-05-18 | 润辉生物技术(威海)有限公司 | 一种阿巴帕肽的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
New Strategies for an Efficient Removal of the 9-Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) Protecting Group in the Peptide Synthesis;A. Leggio et al;《Eur. J. Org. Chem》;20000201;第2000卷(第4期);573-575 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110878119A (zh) | 2020-03-13 |
WO2020047994A1 (zh) | 2020-03-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11518794B2 (en) | Synthesis method for liraglutide with low racemate impurity | |
CN104650219B (zh) | 片段缩合制备利拉鲁肽的方法 | |
CN109627317B (zh) | 片段缩合制备索马鲁肽的方法 | |
US7348404B2 (en) | Solid-phase peptide synthesis and agent for use in such synthesis | |
CN104387454B (zh) | 一种片段缩合制备曲普瑞林的方法 | |
CN110878119B (zh) | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 | |
CN104371008B (zh) | 片段缩合制备特利加压素的方法 | |
WO2017097194A1 (zh) | 一种全固相制备卡贝缩宫素的方法 | |
CN109575109B (zh) | 片段缩合制备地加瑞克的方法 | |
CN107056894B (zh) | 一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法 | |
CN113754753B (zh) | 一种索玛鲁肽的合成方法 | |
CN105273062B (zh) | 片段缩合制备比伐卢定的方法 | |
CN113121673B (zh) | 一种固液结合法制备依降钙素的方法 | |
US9150615B2 (en) | Process for the preparation of leuprolide and its pharmaceutically acceptable salts | |
CN104447960A (zh) | 一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法 | |
CN108070030B (zh) | 洛塞那肽及其类似物的制备方法 | |
CN104530198B (zh) | 一种片段缩合制备醋酸去氨加压素的方法 | |
CN110642936B (zh) | 一种制备特立帕肽的方法 | |
CN110922453A (zh) | 一种戈舍瑞林的合成方法 | |
CN113321723A (zh) | 一种胸腺法新的制备方法 | |
CN110922452B (zh) | 一种戈舍瑞林的合成方法 | |
CN114478708A (zh) | 一种加尼瑞克的片段固相合成方法 | |
WO2021103458A1 (zh) | 一种地加瑞克的固相合成方法 | |
CN113801199A (zh) | 一种卡贝缩宫素的全固相合成方法 | |
CN112812172B (zh) | 一种利西拉来的制备工艺 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |