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CN110693897B - 油茶肉质果多糖在制备防治ⅱ型糖尿病药物或保健品中的应用 - Google Patents

油茶肉质果多糖在制备防治ⅱ型糖尿病药物或保健品中的应用 Download PDF

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CN110693897B CN201911154271.1A CN201911154271A CN110693897B CN 110693897 B CN110693897 B CN 110693897B CN 201911154271 A CN201911154271 A CN 201911154271A CN 110693897 B CN110693897 B CN 110693897B
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Abstract

本发明公开了油茶肉质果多糖在制备防治Ⅱ型糖尿病药物或保健品中的应用。油茶肉质果多糖是从油茶肉质果中提取纯化而得到的一种纯天然的植物多糖。通过制备糖尿病小鼠动物实验，用油茶肉质果多糖给药3个月后，小鼠血糖明显下降，糖耐量和胰岛素耐量曲线下面积明显更低，HE、PAS染色、免疫组化、透射电镜结果、肾脏的抗氧化、抗炎和肾脏肥大及代谢情况的一系列肾脏病理性检测分析，显示糖尿病小鼠肾脏的一系列病理性改变均得到改善。因此，通过实验证明油茶肉质果多糖具有较好的防治Ⅱ型糖尿病及其肾脏保护作用。

Description

油茶肉质果多糖在制备防治Ⅱ型糖尿病药物或保健品中的应用
技术领域
本发明属于中医药领域，涉及以油茶肉质果为原料提取纯化出油茶肉质果多糖及其在制备成防治Ⅱ型糖尿病药物或保健品中的应用。
背景技术
糖尿病已经成为继心血管疾病和癌症之后的第三大致死性疾病。在我国20岁以上的人群中，糖尿病总体患病率为11.6％，估计有1.139亿成年人患糖尿病。糖尿病的发病率在全球范围内均呈逐渐上升的趋势，以Ⅱ型糖尿病的发病比率上升最为明显。胰岛β细胞功能障碍和数量减少是Ⅱ型糖尿病的主要发病机制。再生和恢复胰岛β细胞数量从而恢复胰岛β细胞功能是Ⅱ型糖尿病治疗的根本。
糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病常见的并发症，是糖尿病全身性微血管病变表现之一，临床特征为蛋白尿、渐进性肾功能损害高血压、水肿，晚期出现严重肾功能衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一。DN的基本病理特征为肾小球基底膜均匀肥厚，同时伴有肾小球系膜细胞基质增加，肾小球囊和肾小球系膜细胞呈结节性肥厚及渗透性增加。
油茶肉质果是由一类外担菌(Exobasidium Vexans Massee)侵染油茶(Camelliaoleifera Abel)后膨大引起的，可作为野生水果直接食用。研究表明，油茶肉质果内富含糖类、脂类、蛋白质、氨基酸，维生素等营养成分，且其内的微量元素远高于常见水果,有良好的保健作用。朱必凤等人发现油茶肉质果及肉质叶提取物(包括水溶性物质和醇溶性物质)能够明显的降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的血糖,与传统中西医结合降血糖药物消渴丸的降血糖效果相当,同时也可降低糖尿病小鼠肝脏脂质过氧化物丙二醛(MDA)的生成,提高其抗氧化酶系统的活力。从油茶其他部位提取的油茶多糖(Polysaccharides fromCamellia Oleifera，CPs)包括油茶饼多糖、油茶叶多糖、油茶果皮多糖，油茶果壳多糖，具有多种生物活性，包括抑菌、调节免疫、抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抑制α葡萄糖苷酶等作用，油茶饼多糖还具有降血糖活性，患糖尿病的小鼠口服给以油茶饼多糖后，摄食量、饮水量、排尿量均有所减少，体重增加，空腹血糖值下降，脏器指数下降，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)活性明显增强，MDA含量显著减少。
目前，糖尿病的治疗方法包括注射胰岛素和口服降血糖药物，但是这些方法在临床应用过程中也会导致某些副作用，例如高剂量的应用胰岛素和口服降血糖药物可以引起低血糖、肝脏损伤、乳酸中毒和腹泻等。因此，寻找自然界中存在的，无毒的抗糖尿病药物是非常必要的。
发明内容
本发明的目的是以油茶肉质果为原料，用水提醇沉法提取油茶肉质果多糖，通过动物实验，发现油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的胰岛功能有修复作用，对糖尿病小鼠的肾脏有保护作用。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
油茶肉质果多糖在制备防治Ⅱ型糖尿病药物或保健品中的应用。
进一步地，药物或保健品为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、膏剂、口服液剂中的一种。
进一步地，油茶肉质果多糖的制备包括如下步骤：
(1)将油茶肉质果烘干，粉碎，加水浸泡过夜，沸水提取2～3次，合并提取液；
(2)在步骤1制得的提取液中加入乙醇进行醇沉，用Sevage法去除蛋白，脱色，透析，得油茶肉质果多糖。
更进一步地，步骤1中加水浸泡，加水体积为油茶肉质果重量的20～40倍。
更进一步地，步骤1中沸水提取方式为搅拌提取或者回流提取。
更进一步地，步骤1中沸水提取时间为1h～3h。
更进一步地，步骤2中乙醇进行醇沉时，乙醇的量为步骤1制得的提取液体积比的2～8倍，乙醇的浓度为75％～100％。
本发明的有益效果：
本发明与现有技术相比，油茶肉质果药材资源丰富，制备油茶肉质果多糖工艺简单、成本低，无任何毒副作用，口感好，具有良好的开发价值。此外，本发明发掘了油茶肉质果多糖适用于防治Ⅱ型糖尿病及其肾脏保护作用，疗效确切，在制备防治糖尿病药物或保健品具有良好的药用价值，并为油茶肉质果多糖进一步深入开发提供研究基础。
附图说明
附图1是给药前和给药后1、2、3月及停药后1月的小鼠的空腹血糖变化。
附图2是停药后1月的小鼠空腹糖耐量和曲线下面积变化。
附图3是停药后1周的小鼠空腹胰岛素耐量和曲线下面积变化。
附图4是光学显微镜下(400×)小鼠肾皮质HE染色结果图。
附图5是光学显微镜下(400×)小鼠肾皮质PAS染色结果图。
附图6是小鼠肾脏FN的表达。
附图7是小鼠肾脏IV型胶原的表达。
附图8是小鼠肾皮质透射电镜观察结果图。
附图9是小鼠肾脏IL-6和α的表达。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1：油茶肉质果多糖的制备
(1)将油茶肉质果烘干、粉碎待用。称取30g干燥的油茶肉质果于2L的圆底烧瓶中,加入900mL纯净水常温浸泡过夜，于99℃±1℃温度条件下水提2h，再用四层纱布过滤，过滤出来的药渣99±1℃重复水提2h，合并提取液。
(2)在步骤1制得的提取液中，加入500mL的无水乙醇进行沉淀，离心收集沉淀，用Sevage法去除蛋白、脱色、透析，得油茶肉质果多糖(CFFP)粗品，采用蒽酮-硫酸法，并用紫外分光光度计，测定油茶肉质果多糖含量为40.30％。
实施例2：Ⅱ型糖尿病的小鼠动物试验
1.实验方案
1.1药物配制
取上述制备得到的油茶肉质果多糖，用水配制成含油茶肉质果多糖浓度分别为12.5mg/mL和25mg/mL的油茶肉质果多糖溶液，另外将二甲双胍片研磨成粉后配制成浓度为20mg/mL的二甲双胍溶液。
1.2Ⅱ型糖尿病动物模型的建立
50只10周龄的C57小鼠购买于湖南斯莱克实验动物有限公司，饲养于赣南医学院实验动物中心，实验操作遵循赣南医学院动物实验的伦理规则，随机分为5组，每组10只，其中1组为正常对照组，以正常饲料喂养，其余4组利用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型，于给药后72h和一周后，分别测定小鼠尾尖空腹血糖，两次血糖值均大于16.7mmol/L，即判定为造模成功。
1.3分组与给药
将造模成功后的小鼠分为四组，加上对照组，最终得到以下5个实验组小鼠：
组一：正常对照组(Con)，灌胃生理盐水；
组二：糖尿病模型组(DM)，灌胃生理盐水；
组三：低剂量给药组(CFFP1，含油茶肉质果12.5mg/ml),灌胃油茶肉质果多糖(剂量：125mg/kg,b.w.)；
组四：高剂量给药组(CFFP2，含油茶肉质果25mg/ml)，灌胃油茶肉质果多糖(剂量：250mg/kg,b.w.)；
组五：二甲双胍组(Met，含二甲双胍20mg/ml)，灌胃二甲双胍(剂量：200mg/kg,b.w)。
小鼠每天称重，并以不同溶液给药3个月，分别在给药后的第1至3个月测小鼠的随机血糖，3个月给药停止后的一个月再检测随机血糖。
1.4空腹糖耐量实验
停药一月后，小鼠禁食4h，五组小鼠按剂量灌胃一次，20min后进行糖耐量实验。将葡萄糖用生理盐水配制成浓度为25g/ml葡萄糖溶液，再按剂量为2.0g/kg腹腔注射葡萄糖溶液，即每g小鼠注射的葡萄糖体积为8μl。注射葡萄糖后0min、30min、60min、120min尾部取血，测定血糖，绘制曲线，并计算血糖曲线下面积AUC，AUC(mg·h/dL)计算公式如下：
AUC＝(BG 0+BG 30)×15/60+(BG 30+BG 60)×15/60+(BG 60+BG 120)×30/60,
BG 0、BG 30、BG 60、BG 120分别代表给以葡萄糖后0min、30min、60min、120min时的血糖。
1.5空腹胰岛素耐量实验
停药一周后，动物禁食4h，进行胰岛素耐量实验。皮下注射胰岛素0.4U/Kg,于注射后0min、40min，90min尾部取血，测定血糖，绘制曲线，并计算血糖曲线下面积AUC(mg·h/dL)计算公式如下：
AUC＝(BG 0+BG 40)×20/60+(BG 90+BG 40)×25/60，BG 0、BG 40、BG 90分别代表胰岛素注射后0min、40min、90min的血糖。实验过程中注意观察小鼠有无低血糖反应，若发现小鼠低血糖反应立即给小鼠注射葡萄糖溶液。
1.6肾脏组织学检查
结束小鼠活体测试实验后，将小鼠处死并解剖，取肾组织，固定于10％福尔马林中用于组织学检查。肾组织用石蜡包埋，切成厚度为4μm的薄片，分别用苏木精伊红(HE)染色和过碘酸-希夫(PAS)染色，光学显微镜下进行观察。
1.7肾组织免疫组化检测
将实验方案1.6中的4μm厚的切片脱蜡后用于免疫染色，观察小鼠肾皮质中胞外基质纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的堆积情况。
1.8肾皮质透射电镜检查
结束小鼠活体测试实验后，将小鼠处死并解剖，迅速取出肾脏，去除髓质，取皮质，修整肾皮质至0.5-1mm3体积，PBS冲洗干净，吸水纸蘸干，浸入2.5％戊二醛。使用戊二醛-锇酸双重固定法，包埋组织、超薄切片。最后在透射电镜下观察小鼠肾小球基底膜及足细胞的改变情况。
1.9肾脏的抗氧化实验
结束小鼠活体测试实验后，将小鼠处死并解剖，迅速取出肾脏,用商品化的试剂盒检测小鼠肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)，丙二醛(MDA)的含量，研究油茶肉质果多糖在肾脏中的抗氧化作用。
1.10肾脏的抗炎实验
结束小鼠活体测试实验后，将小鼠处死并解剖，分离出肾皮质，通过免疫组织化学和实时qPCR检测IL-6和TNFα的炎性介质的分泌，研究油茶肉质果多糖在肾脏中的抗炎作用。
1.11肾脏肥大及代谢实验
动物处死前，称体重(BW)，将小鼠处死然后快速取材，具体分两步进行首先，心脏采血，离心(5000rpm，4℃，10min)，分离血清于-80℃保存，用于测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)等血液指标。其次，取双肾，新鲜肾组织取出后，PBS冲洗干净，吸水纸蘸干，并精确称重(KW)，计算肾重体重比(KW/BW)，即KW/BW＝肾重(mg)/体重(g)。
2.实验结果
2.1空腹糖耐量实验结果
给药前和给药后1、2、3个月及停药后1月的小鼠的空腹血糖变化，图中*表示与对照组比较，P<0.05；#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。对照组小鼠血糖始终维持在稳定的基线水平，糖尿病模型组小鼠血糖始终大于20mmol/L；给药前，糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组，小鼠血糖无明显差异，均显著高于对照组，其血糖水平表明糖尿病小鼠造模成功；给药1个月后，各组小鼠血糖与给药前均无明显变化；给药2个月后，与糖尿病模型组相比，低剂量组、高剂量组和二甲双胍组小鼠血糖明显下降，但仍显著高于对照组；给药3个月后，低剂量组小鼠血糖仍高于对照组但是较给药2月后有所下降，而高剂量组和二甲双胍组血糖已降至正常水平；停药1个月后，给药组各组小鼠血糖无明显升高。该结果表明油茶肉质果多糖和二甲双胍一样具有明显的降血糖作用，尤其是高剂量组降血糖作用更为明显，且停止给药一个月后血糖几乎无反弹，表明油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠胰岛功能的损伤具有修复作用。
2.2空腹胰岛素耐量实验结果
停药后1月的小鼠的空腹糖耐量实验结果如图2所示。图(A)小鼠空腹葡萄糖耐量；图(B)计算曲线下面积结果；图中*表示与糖尿病模型组相比，P<0.05。由图(A)可知，各组小鼠血糖水平先升高后下降。对照组血糖始终维持在正常水平，30min时达峰值；糖尿病模型组血糖始终明显高于正常水平，60min时达峰值；低剂量组、高剂量组和二甲双胍组30min时血糖达峰值，之后逐渐下降，60min时已明显低于糖尿病模型组，且高剂量组与二甲双胍组下降程度相当。由图(B)可知，计算曲线下面积AUC，对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组的AUC均明显低于糖尿病模型组，且高剂量组与二甲双胍组下降程度相当。该结果表明油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的糖耐量有改善作用。
2.3小鼠空腹胰岛素耐量结果
停药后1周小鼠的空腹胰岛素耐量，实验结果如图3所示。图(A)小鼠空腹胰岛素耐量；图(B)计算曲线下面积结果；图中*表示与糖尿病模型组相比，P<0.05。由图(A)可知，注射胰岛素后，各组小鼠血糖水平先降低后升高，各个时间点，对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组均明显低于糖尿病模型组，且高剂量组与二甲双胍组下降程度相当。计算曲线下面积，由图(B)可知，对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组的AUC均明显低于糖尿病模型组，且高剂量组与二甲双胍组下降程度相当。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的胰岛素耐量有改善作用。
2.4肾脏组织学检查结果
(1)小鼠肾皮质HE染色结果
HE染色观察小鼠肾小球的形态变化，光学显微镜放大倍数×400，结果如图4所示，可见糖尿病模型组的肾小球皱缩，肾小球基底膜增厚，而对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组要明显好于糖尿病模型组，且高剂量组与二甲双胍组下降程度相当。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的肾小球形态有保护作用。
(2)小鼠肾皮质PAS染色结果
PAS染色观察小鼠肾小球中系膜基质的堆积情况，结果如图5所示。图(A)肾小球中系膜基质的堆积情况，光学显微镜放大倍数×400；图(B)肾小球中系膜基质的定量分析；图中*表示与对照组比较，P<0.05；#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。由图可知，糖尿病模型组肾小球中可见明显的系膜基质堆积，而对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组要明显好于糖尿病模型组，且高剂量组稍好于二甲双胍组。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的肾小球中系膜基质堆积有改善作用。
2.5肾皮质免疫组化检查结果
免疫组化观察小鼠肾皮质中胞外基质纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的堆积情况，如图6所示。图(A)免疫组化法检测肾组织FN蛋白水平，光学显微镜放大倍数×400；图(B)免疫组化法中FN蛋白表达分析；图(C)Westernblotting观察CFFP对FN蛋白表达的影响；图(D)FN蛋白定量分析；图(E)实时定量PCR检测CFFP对FN基因表达的影响；图中*表示与对照组比较，P<0.05；#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。由图可知，糖尿病模型组FN和ColⅣ的堆积较多，而对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组要明显好于糖尿病模型组，且高剂量组好于二甲双胍组，与对照组更为接近。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的肾皮质免疫组化有保护作用。
免疫组化观察小鼠肾脏IV型胶原的表达，如图7所示。图(A)免疫组化法检测肾Ⅳ型胶原蛋白水平；图(B)免疫组化法中Ⅳ型胶原蛋白定量分析；图(C)采用Westernblotting方法检测CFFP对IV型胶原蛋白表达的影响；图(D)与对照组比Ⅳ型胶原表达水平的变化；图(E)用Masson染色法检测胶原纤维；图(F)对肾皮质中积累的胶原纤维进行统计分析；图(G)用实时PCR技术检测CFFP对Ⅳ型胶原基因的表达的影响；图中*表示与对照组比较，P<0.05；#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。由图可知，糖尿病模型组IV型胶原的堆积较多，而对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组要明显好于糖尿病模型组，且高剂量组好于二甲双胍组与对照组更为接近。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的IV型胶原的堆积有改善作用。
2.6肾皮质透射电镜观察结果
透射电镜观察小鼠肾小球基底膜(GBM)及足细胞的改变，如图8所示。图(A)展示了具有代表性的显微照片放大倍数×10，000；图(B)测量了GBM厚度(nm)，并以柱形图表示。图中*表示与对照组比较，P<0.05；#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。由图8并结合图4可知，糖尿病模型组小鼠肾小球基底膜局部增厚，部分足细胞脱落，足突出现融合，而对照组、低剂量组、高剂量组和二甲双胍组要明显好于糖尿病模型组，且高剂量组好于二甲双胍组与对照组更为接近。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠的肾小球基底膜(GBM)和足突渗出均有所改善。
2.7肾脏的抗氧化实验结果
油茶肉质果多糖通过增加超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)的产物，减少丙二醛(MDA)在小鼠肾脏中的积累，减轻糖尿病小鼠肾脏的氧化应激。如表1所示，油茶肉质果多糖组和二甲双胍组的GSH、SOD活性明显高于糖尿病模型组，而MDA水平低于糖尿病模型组，且高剂量组与二甲双胍组效果相当与对照组更为接近。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠，增强了肾脏的抗氧化作用。
表1
Figure BDA0002284390980000101
*P<0.05表示与对照组相比，P<0.05，#表示与糖尿病模型组相比，P<0.05。
2.8肾脏的抗炎实验结果
高血糖伴糖尿病也会引起炎症反应，然后伤害肾脏。用油茶肉质果给药3个月后，分离出肾皮质，通过免疫组织化学和实时qPCR检测IL-6和TNFα的炎性介质的分泌，如图9所示。图(A)为免疫组化法检测肾组织IL-6蛋白水平；图(B)肾皮质IL-6的定量分析；图(C)采用RT-qPCR方法检测肾皮质IL-6mRNA的表达；图(D)免疫组化法检测肾组织TNFα蛋白水平；图(E)定量分析肾皮质免疫组化中TNFα含量；图(F)采用RT-qPCR方法检测肾皮质肿瘤坏死因子(α)mRNA的表达；图中*表示与对照组比较，P<0.05；#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。由图可知，糖尿病模型组IL-6和TNFα的表达远高于对照组，而油茶肉质果组和二甲双胍组低于糖尿病模型组，其中高剂量组和二甲双胍组与对照组接近。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠，增强了肾脏的抗炎作用。
2.9肾脏肥大及代谢参数实验结果
肾/体重比被认为是肾脏肥大的重要指标之一，同时血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)均能反映肾功能，测定各组小鼠肾/体重比、Scr和BUN指标，结果如表2所示。由表2可知，与糖尿病模型组相比，油茶肉质果组和二甲双胍组的肾/体重比、Scr和BUN指标均低于糖尿病模型组，其中油茶肉质果高剂量组和二甲双胍组与对照组接近。该结果表明，油茶肉质果多糖对Ⅱ型糖尿病小鼠，均能减轻肾脏肥大，能够下调Scr和BUN的含量。
表2
Figure BDA0002284390980000111
*表示与对照组比较，P<0.05。图中#表示与糖尿病模型组比较，P<0.05。

Claims (6)

1.油茶肉质果多糖在制备防治II型糖尿病肾病药物中的应用，所述油茶肉质果多糖的制备包括如下步骤：
(1)将油茶肉质果烘干，粉碎，加水浸泡过夜，沸水提取2～3次，合并提取液；
(2)在步骤(1)制得的提取液中加入乙醇进行醇沉，用Sevage法去除蛋白，脱色，透析，得油茶肉质果多糖。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、膏剂、口服液剂中的一种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中加水浸泡，加水量为油茶肉质果重量体积比的20～40倍。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中沸水提取方式为搅拌提取或者回流提取。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中沸水提取时间为1h～3h。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤(2)中乙醇进行醇沉时，乙醇的量为步骤(1)制得的提取液体积比的2～8倍，乙醇的浓度为75％～100％。
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CN102885847B (zh) * 2011-07-19 2014-03-12 中南林业科技大学 油茶饼粕多糖的用途
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