CN110088103B

CN110088103B - 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的四氢吡啶并嘧啶化合物

Info

Publication number: CN110088103B
Application number: CN201780078270.6A
Authority: CN
Inventors: 程战领; 王建华; 王敏; 杨松
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2016-11-03
Filing date: 2017-11-01
Publication date: 2022-04-12
Anticipated expiration: 2037-11-01
Also published as: EP3535262B1; CN110088103A; US10968217B2; EP3535262A1; US20200062747A1; JP2019533696A; JP7068295B2; WO2018083106A1

Abstract

本发明提供了具有通式(I)的新化合物，包含所述化合物的组合物以及使用所述化合物的方法，其中R¹、R²和Z如文中所定义。

Description

用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的四氢吡啶并嘧啶化合物

本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，并且特别涉及可用于治疗乙型肝炎病毒感染的HBsAg(HBV表面抗原)抑制剂和HBV DNA生成的抑制剂。

发明领域

本发明涉及具有药物活性的新的四氢吡啶并嘧啶化合物、它们的制备、包含它们的药物组合物以及它们作为药物的潜在用途。

本发明涉及式I的化合物或其可药用盐或对映体，

其中R¹、R²和Z如下所述。

乙型肝炎病毒(HBV)是有包膜的、部分双链的DNA病毒。紧凑的3.2kb HBV基因组由四个重叠的开放阅读框(ORF)组成，其编码核、聚合酶(Pol)、包膜和X-蛋白。Pol ORF是最长的并且包膜ORF位于其内，而X和核ORF与Pol ORF重叠。HBV的生命周期有两个主要事件：1)由松弛环状(RC DNA)生成闭合环状DNA(cccDNA)，和2)前基因组RNA(pgRNA)逆转录生成RCDNA。在宿主细胞感染之前，HBV基因组以RC DNA的形式存在于病毒体内。已经确定HBV病毒体能够通过非特异性结合至存在于人肝细胞表面的带负电荷的蛋白聚糖(Schulze,A.,P.Gripon&S.Urban.Hepatology,46,(2007),1759-68)和经由HBV表面抗原(HBsAg)特异性结合至肝细胞牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)受体(Yan,H.等人,J Virol,87,(2013),7977-91)而进入到宿主细胞中。一旦病毒体进入细胞，病毒核和衣壳化的RC DNA通过宿主因子经由核定位信号，通过Impβ/Impα核转运受体转运到细胞核中。在细胞核内，宿主DNA修复酶将RC DNA转化为cccDNA。cccDNA充当所有病毒mRNA的模板，因此，它是受感染个体中HBV持久性的原因。由cccDNA生成的转录物被分成两类：前基因组RNA(pgRNA)和亚基因组RNA。亚基因组转录物编码三种包膜(L、M和S)和X蛋白，并且pgRNA编码前核、核和Pol蛋白(Quasdorff,M.&U.Protzer.J Viral Hepat,17,(2010),527-36)。HBV基因表达或HBV RNA合成的抑制导致HBV病毒复制和抗原生成的抑制(Mao,R.等人,PLoS Pathog,9,(2013),e1003494；Mao,R.等人,J Virol,85,(2011),1048-57)。例如，IFN-α显示通过减少从HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)微型染色体的pgRNA和亚基因组RNA的转录而抑制HBV复制和病毒HBsAg生成。(Belloni,L.等人,J Clin Invest,122,(2012),529-37；Mao,R.等人,J Virol,85,(2011),1048-57)。所有HBV病毒mRNA均被封端并多聚腺苷酸化，然后输出至细胞质进行翻译。在细胞质中，新病毒体的组装被引发并且新生的pgRNA与病毒Pol一起包装，从而可以开始经由单链DNA中间体将pgRNA逆转录成RC DNA。含有RC DNA的成熟核壳体被细胞脂质以及病毒L、M和S蛋白包封，然后感染性HBV颗粒通过在细胞内膜出芽释放(Locarnini,S.Semin Liver Dis,(2005),25Suppl 1,9-19)。有趣的是，也生成非感染性颗粒，其在数量上远远超过感染性病毒体。这些空的、包封的颗粒(L、M和S)被称为亚病毒颗粒。重要的是，由于亚病毒颗粒与感染性颗粒具有相同的包膜蛋白，因此推测它们可作为宿主免疫系统的诱饵并且已被用于HBV疫苗。S、M和L包膜蛋白由含有3个不同起始密码子的单个ORF表达。所有三种蛋白在它们的C-末端共享一个226aa序列，即S-结构域。M和L具有额外的pre-S结构域，分别为Pre-S2以及Pre-S2和Pre-S1。然而，具有HBsAg表位的是S-结构域(Lambert,C.&R.Prange.Virol J,(2007),4,45)。

病毒感染的控制需要宿主先天免疫系统的密切监视，其可以在感染后数分钟至数小时内产生响应以影响病毒的初始生长，并且限制慢性和持久感染的发展。尽管目前有基于IFN和核苷(核苷酸)类似物的治疗，但是乙型肝炎病毒(HBV)感染仍然是世界范围内的主要健康问题，其涉及估计约3亿5千万慢性携带者，他们具有更高的肝硬化和肝细胞癌的风险。

肝细胞和/或肝内免疫细胞响应于乙型肝炎病毒感染而分泌抗病毒细胞因子在被感染肝脏的病毒清除中起关键作用。然而，由于病毒采用了多种逃避策略来对抗宿主细胞识别系统和随后的抗病毒响应，慢性感染的患者仅显示出弱的免疫响应。

许多观察结果显示若干HBV病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号转导系统并随后干扰干扰素(IFN)抗病毒活性而对抗最初的宿主细胞响应。其中，HBV空亚病毒颗粒(SVP，HBsAg)的过度分泌可能参与在慢性感染患者(CHB)中观察到的免疫耐受状态的维持。持续暴露于HBsAg和其他病毒抗原可以导致HBV-特异性T细胞缺失或导致进行性的功能受损(Kondo等人,Journal of Immunology(1993),150,4659–4671；Kondo等人,Journal ofMedical Virology(2004),74,425–433；Fisicaro等人,Gastroenterology,(2010),138,682-93)。此外，还报道了HBsAg通过直接相互作用而抑制免疫细胞如单核细胞、树突细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞的功能(Op den Brouw等人,Immunology,(2009b),126,280-9；Woltman等人,PLoS One,(2011),6,e15324；Shi等人,J Viral Hepat.(2012),19,e26-33；Kondo等人,ISRN Gasteroenterology,(2013),文章编号935295)。

HBsAg定量是用于慢性乙型肝炎的预后和治疗响应的重要生物标志物。然而，在慢性感染患者中很少观察到HBsAg消失和血清转化的实现，其仍然是治疗的终极目标。当前疗法如核苷(核苷酸)类似物是抑制HBV DNA合成但不降低HBsAg水平的分子。即使采用延长的治疗，核苷(核苷酸)类似物所显示的HBsAg清除率也与自然观察到的那些相当(在-1％-2％之间)(Janssen等人,Lancet,(2005),365,123-9；Marcellin等人,N.Engl.J.Med.,(2004),351,1206-17；Buster等人,Hepatology,(2007),46,388-94)。

已经公布了一些关于HBsAg抑制剂的专利申请，包括新的二氢喹嗪酮类化合物(WO2015/113990,WO 2015/173164)、新的哒嗪酮和三嗪酮类化合物(WO2016/023877)、新的6,7-二氢苯并[a]喹嗪-2-酮衍生物(WO/2016/071215)、新的四氢吡啶并嘧啶和四氢吡啶并吡啶类化合物(WO2016/107832)和新的2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸衍生物(WO2016/128335)，表明该领域正在进行一些早期的探索性尝试。但是，没有被批准的商业产品。因此，仍然存在靶向HBsAg来治疗HBV的医学需求(Wieland,S.F.&F.V.Chisari.JVirol,(2005),79,9369-80；Kumar等人,J Virol,(2011),85,987-95；Woltman等人,PLoSOne,(2011),6,e15324；Op den Brouw等人,Immunology,(2009b),126,280-9)。

发明概述

本发明的目的是新的式I化合物，它们的制备，基于本发明化合物的药物及其制备以及式I化合物作为HBV抑制剂以及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的用途。式I化合物显示出优异的抗HBV活性。

本发明涉及式I的化合物或其可药用盐或对映体，

其中

R¹是C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、卤代C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基或氢；

R²是苯并噻吩基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异

唑基、

唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基或噻吩基，其中所述苯并噻吩基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异

唑基、

唑基、苯基、吡啶基、噻唑基或噻吩基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、氰基、卤代C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、卤素、羟基、羟基C_1-6烷氧基、羟基C_1-6烷基、硝基和苯基C_1-6烷基；

Z是CH或N。

发明详述

定义

本文所用的单独的或在组合中的术语“C_1-6烷基”表示包含1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、叔丁基等。具体的“C_1-6烷基”是甲基、乙基、异丙基和叔丁基。

单独的或在组合中的术语“C_3-7环烷基”是指包含3-7个碳原子、特别是3-6个碳原子的饱和碳环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。具体的“C_3-7环烷基”基团是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

单独的或在组合中的术语“C_1-6烷氧基”表示基团C_1-6烷基-O-，其中“C_1-6烷基”如以上所定义；例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。具体的“C_1-6烷氧基”基团是甲氧基、乙氧基和丙氧基。

术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。

术语“卤代C_1-6烷基”是指C_1-6烷基基团，其中C_1-6烷基基团的至少一个氢原子被相同或不同的卤原子、特别是氟原子替代。卤代C_1-6烷基的实例包括一氟-、二氟-或三氟-甲基、-乙基或-丙基，例如3,3,3-三氟丙基、3,3-二氟丙基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。具体的“卤代C_1-6烷基”基团是二氟甲基或三氟甲基。

术语“卤代C_1-6烷氧基”是指C_1-6烷氧基基团，其中C_1-6烷氧基基团的至少一个氢原子被相同或不同的卤原子、特别是氟原子替代。卤代C_1-6烷氧基的实例包括一氟-、二氟-或三氟-甲氧基、-乙氧基或-丙氧基，例如氟丙氧基、二氟丙氧基、三氟丙氧基、氟乙氧基、二氟乙氧基、三氟乙氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基。具体的“卤代C_1-6烷氧基”基团是3-氟丙氧基、3,3-二氟丙氧基、3,3,3-三氟丙氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基。

单独的或在组合中的术语“氰基”是指基团-CN。

术语“卤代吲唑基”是指被卤素取代一次、两次或三次的吲唑基基团。卤代吲唑基的例子包括但不限于，氟吲唑基、氯吲唑基、溴吲唑基、二氟吲唑基、二氯吲唑基、二溴吲唑基、氟氯吲唑基、氟溴吲唑基、氯溴吲唑基、三氟吲唑基和二氟氯吲唑基。具体的“卤代吲唑基”基团是氟卤代吲唑基。

术语“卤代苯基”是指被卤素取代一次、两次或三次的苯基基团。卤代苯基的例子包括但不限于，氟苯基、氯苯基、溴苯基、二氟苯基、二氯苯基、二溴苯基、氟氯苯基、氟溴苯基、氯溴苯基、三氟苯基和二氟氯苯基。具体的“卤代苯基”基团是氟苯基或氯苯基。

术语“对映体”是指化合物的两种彼此互为不能重叠的镜像的立体异构体。

本发明的化合物可以以它们的可药用盐的形式存在。术语“可药用盐”是指保留了式I化合物的生物学效力和特性并且由适宜的无毒有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规的酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括例如衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，以及衍生自有机酸例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等的那些。碱加成盐包括衍生自铵、钾、钠和季铵氢氧化物，例如，四甲基氢氧化铵的那些。将药物化合物化学修饰成盐是制药化学家所熟知的一种用来提高化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性的技术。其例如描述于Bastin R.J.等人,Organic Process Research&Development(有机工艺研发)2000,4,427-435。特别是式I化合物的钠盐。

包含一个或多个手性中心的通式I的化合物可以以外消旋体、非对映体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映异构体盐。

HBsAg的抑制剂

本发明提供了(i)具有通式I的化合物或其可药用盐或对映体:

其中

R²是苯并噻吩基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异

唑基、

唑基、

Z是CH或N。

本发明的另一个实施方案是(ii)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中

R¹是氢或C_1-6烷基；

R²是苯并噻吩基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异

唑基、

唑基、苯基、吡啶基、噻唑基或噻吩基，其中所述苯并噻吩基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异

唑基、

唑基、苯基、吡啶基、噻唑基或噻吩基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、氰基、卤代C_1-6烷基、卤素、羟基、硝基和苯基C_1-6烷基；

Z是CH或N。

本发明的另一个实施方案是(iii)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中

R¹是氢、甲基或乙基；

R²是苯并噻吩基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异

唑基、

唑基、

唑基、苯基、吡啶基、噻唑基或噻吩基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：乙氧基、甲氧基、甲氧基乙氧基、甲氧基丙氧基、甲基、氰基、三氟甲基、溴、氯、氟、羟基、硝基和苯基甲基；

Z是CH或N。

本发明的另一个实施方案是(iv)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中R¹是C_1-6烷基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。

本发明的另一个实施方案是(v)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中R¹是甲基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。

本发明的另一个实施方案是(vi)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中R²是吲唑基、苯基、噻唑基或噻吩基，所述吲唑基、苯基、噻唑基或噻吩基是未取代的或被一个或两个独立地选自C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、卤素和苯基C_1-6烷基的取代基取代，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。

本发明的另一个实施方案是(vii)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中R²是吲唑基、苯基、噻唑基或噻吩基，所述吲唑基、苯基、噻唑基或噻吩基是未取代的或被一个或两个独立地选自甲氧基、甲氧基丙氧基、甲基、氯、氟和苯基甲基的取代基取代；并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。

本发明的另一个实施方案是(viii)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中

R¹是C_1-6烷基或氢；

R²是吲唑基、C_1-6烷氧基吲唑基、卤代吲唑基、(苯基C_1-6烷基)吲唑基、(C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基)卤代苯基、C_1-6烷氧基(C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基)苯基、噻唑基、C_1-6烷基噻唑基、二C_1-6烷基噻唑基、C_1-6烷氧基噻吩基或C_1-6烷基噻吩基；

Z是CH或N。

本发明的另一个实施方案是(ix)式I的化合物或其可药用盐或对映体，其中

R¹是甲基或氢；

R²是吲唑基、甲氧基吲唑基、氟吲唑基、(苯基甲基)吲唑基、(甲氧基丙氧基)氯苯基、甲氧基(甲氧基丙氧基)苯基、噻唑基、甲基噻唑基、二甲基噻唑基、甲氧基噻吩基或甲基噻吩基；

Z是CH或N。

本发明的具体式I化合物是如下化合物：

[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮；

4-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-羰基]苄腈；

(4-硝基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

苯基-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-氯苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[3-(三氟甲基)苯基]甲酮；

(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-氟-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,4-二氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-氟-3-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3-氟-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-乙氧基-3-氟-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[3-氟-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3,4,5-三甲氧基苯基)甲酮；

(3,5-二乙氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3-氯-5-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,5-二甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-氟-3-甲基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,4-二甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3-氯-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-羟基-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[3-甲氧基-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(5-甲基-2-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3-氟-4-甲基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(5-甲氧基-2-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,5-二氟-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(6-甲基-3-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-甲基-2-噻吩基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(5-甲基异

唑-3-基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,4-二甲氧基苯基)-[(5S)-5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,4-二甲氧基苯基)-[(5S)-5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(6-甲氧基-3-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3,5-二氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(3-氟-5-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(4-甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮；

(5-氯-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3-噻吩基)甲酮；

(4-甲基

唑-5-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

1H-吲哚-6-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

1H-吲唑-5-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

苯并噻吩-2-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(2-噻吩基)甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3-甲基-2-噻吩基)甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-噻唑-2-基-甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(2-甲基噻唑-5-基)甲酮；

(5-溴-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-噻唑-5-基-甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮；

1H-咪唑-2-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(1-甲基咪唑-2-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(5-甲氧基-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)噻唑-2-基]甲酮；

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-

唑-2-基-甲酮；

(4,5-二甲基噻唑-2-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮；

(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮；

1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮；

(5-氟-1H-吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮；

(1-苄基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮；和

(5-甲氧基-1H-吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮；

或其可药用盐或对映体。

更具体地，本发明涉及如下式I化合物：

或其可药用盐或对映体。

合成

本发明的化合物可以通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物的合适方法以及它们的起始原料在以下流程和实施例中提供。除非另有指明，所有取代基，特别是R¹、R²和Z如上所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学领域的普通技术人员熟知的含义。

化合物Ia的通用合成路线(流程1)

流程1

式Ia的化合物可以按照流程1制备。

将化合物II与DMFDMA一起在适宜的溶剂例如CAN、DMF中加热生成中间体III。将中间体III与化合物IV在碱例如甲醇钠、碳酸钾或碳酸氢钠的存在下偶联生成化合物V。将Boc基团在酸性条件下脱保护生成化合物VI。将化合物VI与酸VII在HATU和碱例如DIPEA或TEA的存在下偶联生成化合物I。

本发明还涉及制备式I化合物的方法，其包括如下步骤之一：

(a)将式(A)的化合物

与式(B)的化合物

在偶联剂和碱的存在下偶联；

其中R¹、R²和Z如上所定义。在步骤(a)中，偶联剂可以是例如HATU，碱可以是例如DIPEA或TEA。

按照上述方法制备的式I化合物也是本发明的目的之一。

本发明的化合物还显示出良好的安全性和PK特性。

药物组合物和给药

本发明还涉及用作治疗活性物质的式I的化合物。

另一个实施方案提供含有本发明的化合物和治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明的化合物来制备这些组合物和药物的方法。在一个实施例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度下、在适当pH下并以所需的纯度与生理学可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体)混合而配制成盖仑制剂给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但通常优选约3至约8的范围。在一个实施例中，式(I)的化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中配制。在另一个实施方案中，式(I)的化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。

组合物以符合良好医学实践的方式进行配制、定剂量和给药。在此上下文中考虑的因素包括被治疗的具体病症、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、病症的病因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排和执业医师已知的其他因素。要给药的化合物的“有效量”将受这些考虑控制，并且是抑制HBsAg所需的最低量。例如，这样的量可以低于对正常细胞或作为整体的哺乳动物而言是有毒的量。

在一个实施例中，每个剂量胃肠外给药的本发明化合物的药物有效量将在约0.01至100mg/kg，或者约0.01至100mg/kg患者体重/天的范围内，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型如片剂和胶囊优选含有约0.1至约1000mg的本发明化合物。

本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括经口、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外及鼻内给药，以及在期望用于局部治疗时，病变内给药。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。

本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。这些组合物可以含有药物制剂中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性物质。

典型制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂进行制备。合适的载体和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于药物产品(即药物)的生产。

适合的口服剂型的实例是包含约0.1至1000mg本发明的化合物、约0至2000mg无水乳糖、约0至2000mg交联羧甲基纤维素钠、约0至2000mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约0至2000mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP的溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂。气雾剂制剂的一个实例可以通过将例如0.1至1000mg的本发明化合物溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液中，在需要时添加张力剂例如盐如氯化钠而制备。所述溶液可以过滤，例如使用0.2微米滤器过滤，以除去杂质和污染物。

因此，一个实施方案包括包含式I的化合物或其立体异构体或可药用盐的药物组合物。在另一个实施方案中，包括包含式I的化合物或其立体异构体或可药用盐以及可药用载体或赋形剂的药物组合物。

以下实施例A和B举例说明了本发明的典型组合物，但是其仅仅是作为本发明的代表。

实施例A

式I的化合物可以以本身已知的方式作为活性成分用于生产具有以下组成的片剂：

实施例B

式I的化合物可以以本身已知的方式作为活性成分用于生产具有以下组成的胶囊：

适应症和治疗方法

本发明的化合物可以抑制HBsAg生成或分泌并且抑制HBV基因表达。因此，本发明的化合物可用于治疗或预防HBV感染。

本发明涉及式I的化合物用于抑制HBsAg生成或分泌的用途。

本发明涉及式I的化合物用于抑制HBV DNA生成的用途。

本发明涉及式I的化合物用于抑制HBV基因表达的用途。

本发明涉及式I的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。

式I化合物用于制备可用于治疗或预防与HBV感染相关的疾病的药物的用途是本发明的一个目的。

本发明特别涉及式I化合物用于制备用于治疗或预防HBV感染的药物的用途。

另一个实施方案包括一种用于治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的式I的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药、缀合物或可药用盐。

实施例

通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。

文中使用的缩写如下:

μL: 微升

μm: 微米

μM: 微摩尔/升

IC₅₀: 半数最大抑制浓度

LC/MS: 液相色谱/质谱

M: 摩尔浓度

MHz: 兆赫兹

min: 分钟

hr(s): 小时

mM: 毫摩尔/升

MS(ESI): 质谱(电喷雾解离)

NMR: 核磁共振

obsd. 实测值

rt: 室温

Pd/C: 钯/活性碳

δ: 化学位移

HATU: 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化六氟磷酸盐

DIPEA: N,N-二异丙基胺

MTBE: 甲基叔丁基醚

DMFDMA N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛

CAN 硝酸铈铵

DMF N,N-二甲基甲酰胺

EA 乙酸乙酯

通用实验条件

中间体和最终化合物通过快速色谱使用以下仪器之一进行纯化：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge组件；ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL

粒度：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒度：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工股份有限公司(Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd)的ZCX，孔：200-300或300-400。

中间体和最终化合物通过使用X Bridge^TM Perp C₁₈(5μm,OBD^TM30×100mm)柱或SunFire^TM Perp C₁₈(5μm,OBD^TM 30×100mm)柱的反相柱制备型HPLC纯化。

手性分离在Thar 350制备型SFC上用ChiralPak AD-10u(200x50mm I.D.)进行，流动相A为CO₂，B为乙醇。

LC/MS光谱使用Acquity Ultra Performance LC-3100质量检测器或AcquityUltra Performance LC-SQ检测器获得。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：

酸性条件：A：0.1％甲酸的H₂O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；

碱性条件：A：0.05％NH₃·H₂O的H₂O溶液；B：乙腈；

中性条件：A：H₂O；B：乙腈。

质谱(MS)：通常仅报告指示母核质量的离子，并且除非另有说明，引述的质量离子是正质量离子(M+H)⁺。

微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty或CEM Discover中进行。

NMR谱图使用Bruker Avance 400MHz获得。

所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，试剂在从商业供应商处获得后不经进一步纯化直接使用。

制备实施例

实施例1

[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮

步骤1：3-(二甲基氨基亚甲基)-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备

将4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(15.0g,0.075mol)和DMFDMA(9.87g,0.0829mol)在DMF(100mL)中的混合物于90℃下搅拌加热过夜。然后将形成的混合物真空浓缩并用水(100mL)稀释。将形成的混合物用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机层用水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色油状3-(二甲基氨基亚甲基)-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯粗品(13g)，将其直接用于下一步骤。

步骤2：2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯的制备

将3-(二甲基氨基亚甲基)-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(10g,39.37mmol)、吡啶-2-甲脒盐酸盐(6.2g,39.37mmol)和CH₃ONa(4.25g,78.74mmol)在乙醇(100mL)中的混合物于100℃下搅拌加热过夜。将形成的混合物真空浓缩并将残余物溶于EA。将形成的溶液用水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到橙色油状2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯粗品(12g)黄色固体状，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤3：2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备

将2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(9g,28.85mmol)和氯化氢的1,4-二

烷溶液(4M,15mL)的混合物在室温下搅拌3小时。将形成的混合物真空浓缩得到黄色固体状2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐粗品(9g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤4：[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮的制备

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(100mg,0.405mmol)、4-(三氟甲基)苯甲酸(115mg,0.607mmol)、HATU(308mg,0.81mmol)和DIPEA(262mg,2.02mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮(15mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.67-8.97(m,2H),8.54(d,1H),7.91(td,1H),7.73-7.82(m,2H),7.62(d,2H),7.40-7.53(m,1H),4.53-5.13(m,2H),3.68-4.30(m,2H),3.01-3.42(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:385。

实施例2

4-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-羰基]苄腈

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(100mg,0.405mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-氰基-苯甲酸(89mg,0.607mmol)、HATU(308mg,0.81mmol)和DIPEA(262mg,2.02mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(10mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-(2-吡啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-羰基)-苄腈(15mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.89(br.s.,1H),8.79(d,1H),8.67(d,1H),8.21(t,1H),7.91(d,2H),7.67-7.77(m,3H),5.00-5.12(m,1H),4.77(br.s.,1H),4.18(br.s.,1H),3.72-3.92(m,1H),3.02-3.29(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:342。

实施例3

(4-硝基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(150mg,0.607mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-硝基苯甲酸(203mg,1.21mmol)、HATU(461mg,1.214mmol)和DIPEA(392mg,3.036mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-硝基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(17mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.87-8.97(m,1H),8.70-8.79(m,1H),8.29-8.43(m,3H),7.97(t,1H),7.82(d,2H),7.53(dd,1H),4.95(br.s.,1H),4.67(br.s.,1H),4.06(br.s.,1H),3.67(br.s.,1H),3.07(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:362。

实施例4

苯基-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(200mg,0.943mmol,实施例1中步骤3的产物)、苯甲酸(230mg,1.887mmol)、HATU(717mg,1.887mmol)和DIPEA(610mg,4.717mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到苯基-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(190mg)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.84(d,1H),8.72(br.s.,1H),8.50(d,1H),7.87(td,1H),7.39-7.51(m,6H),4.97(br.s.,2H),3.83(br.s.,2H),3.19(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:317。

实施例5

(4-氯苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(200mg,0.943mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-氯苯甲酸(294mg,1.887mmol)、HATU(717mg,1.887mmol)和DIPEA(610mg,4.717mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-氯苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(63mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.78-8.92(m,1H),8.71(br.s.,1H),8.51(d,,1H),7.88(td,1.8Hz,1H),7.40-7.48(m,5H),4.61-5.08(m,2H),3.86(br.s.,2H),3.20(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:351。

实施例6

[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[3-(三氟甲基)苯基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(200mg,0.943mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-(三氟甲基)苯甲酸(359mg,1.887mmol)、HATU(717mg,1.887mmol)和DIPEA(610mg,4.717mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[3-(三氟甲基)苯基]甲酮(100mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(d,1H),8.64-8.80(m,1H),8.58(d,1H),7.91-8.04(m,1H),7.73-7.80(m,2H),7.59-7.71(m,2H),7.52(dd,1H),4.57-5.11(m,2H),3.74-4.20(m,2H),2.97-3.32(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:385。

实施例7

(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(150mg,0.46mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氟-4-甲氧基-苯甲酸(156mg,0.92mmol)、HATU(350mg,0.92mmol)和DIPEA(297mg,2.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氟-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(13mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.88(d,1H),8.68(br.s.,1H),8.53(d,1H),7.91(td,1.8Hz,1H),7.40-7.51(m,1H),7.22-7.35(m,2H),6.97-7.12(m,1H),4.90(br.s.,2H),3.85-4.06(m,5H),3.22(t,,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:365。

实施例8

(4-氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(150mg,0.46mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-氟苯甲酸(129mg,0.92mmol)、HATU(350mg,0.92mmol)和DIPEA(297mg,2.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(15mg)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.81-8.91(m,1H),8.58-8.78(m,1H),8.52(d,1H),7.89(td,1H),7.47-7.55(m,2H),7.40-7.46(m,1H),7.17(t,2H),4.90(br.s.,2H),3.90(br.s.,2H),3.20(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:335。

实施例9

(4-氟-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(150mg,0.46mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-氟-3-甲氧基-苯甲酸(156mg,0.92mmol)、HATU(350mg,0.92mmol)和DIPEA(297mg,2.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-氟-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(40mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.74(d,2H),8.52(d,1H),8.00(td,1H),7.55(ddd,1H),7.18-7.34(m,2H),7.11(ddd,1H),4.95(br.s.,2H),3.71-4.23(m,5H),3.18(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:365。

实施例10

(3,4-二氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(150mg,0.46mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,4-二氟苯甲酸(145mg,0.92mmol)、HATU(350mg,0.92mmol)和DIPEA(297mg,2.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3,4-二氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(60mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.65-8.88(m,2H),8.55(d,1H),8.03(td,1H),7.50-7.62(m,2H),7.32-7.49(m,2H),4.97(br.s.,2H),3.72-4.26(m,2H),3.19(t,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:353。

实施例11

(4-氟-3-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(1g,3.067mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-氟-3-羟基-苯甲酸(0.718g,4.6mmol)、HATU(2.33g,6.13mmol)和DIPEA(1.98g,15.34mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(50mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-氟-3-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(18mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.69-8.94(m,2H),8.44-8.61(m,1H),8.02(td,1H),7.56(dd,1H),7.19(dd,1H),7.08(d,1H),6.98(d,,1H),4.93-5.11(m,2H),3.83-4.16(m,2H),3.18(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:351。

实施例12

(3-氟-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(1g,3.067mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氟-4-羟基-苯甲酸(0.718g,4.6mmol)、HATU(2.33g,6.13mmol)和DIPEA(1.98g,15.34mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(50mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氟-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(20mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.81-8.93(m,1H),8.60-8.76(m,1H),8.46-8.59(m,1H),7.92(td,1H),7.46(ddd,1H),7.26-7.32(m,1H),7.20(dd,1H),7.08-7.15(m,1H),4.90(br.s.,2H),3.95(br.s.,2H),3.15(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:351。

实施例13

(4-乙氧基-3-氟-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将(3-氟-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(150mg,0.428mmol,实施例12)、溴乙烷(47mg,0.428mmol)和K₂CO₃(118mg,0.857mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-乙氧基-3-氟-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(12mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.87(d,1H),8.68(br.s.,1H),8.52(d,1H),7.88(td,1H),7.43(td,1H),7.18-7.35(m,2H),6.96-7.12(m,1H),4.90(br.s.,2H),4.19(q,2H),3.97(br.s.,2H),3.22(t,2H),1.51(t,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:379。

实施例14

[3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将(3-氟-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(150mg,0.428mmol,实施例12)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(119mg,0.857mmol)和K₂CO₃(177mg,1.286mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(20mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.81-8.90(m,1H),8.68(br.s.,1H),8.52(d,1H),7.88(td,1H),7.43(ddd,1H),7.18-7.35(m,2H),7.02-7.16(m,1H),4.89(br.s.,2H),4.22-4.35(m,2H),3.96(br.s.,2H),3.82(dd,2H),3.48(s,3H),3.22(t,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:409。

实施例15

[3-氟-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将(3-氟-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(150mg,0.428mmol,实施例12)、1-溴-3-甲氧基-丙烷(131mg,0.857mmol)和K₂CO₃(118mg,0.857mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[3-氟-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(35mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(dt,1H),8.68(br.s.,1H),8.52(d,1H),7.88(td,1H),7.43(ddd,1H),7.19-7.33(m,2H),7.00-7.15(m,1H),4.84-4.98(m,2H),4.21(t,2H),3.86-4.06(m,2H),3.60(t,2H),3.38(s,3H),3.22(s,2H),2.13(t,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:423。

实施例16

[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3,4,5-三甲氧基苯基)甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,4,5-三甲氧基苯甲酸(390mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3,4,5-三甲氧基苯基)甲酮(125mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.84(d,1H),8.68(br.s.,1H),8.50(d,1H),7.87(td,1H),7.41(ddd,1H),6.64-6.76(m,2H),4.89(br.s.,2H),3.69-4.14(m,11H),3.22(t,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:407。

实施例17

(3,5-二乙氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,5-二乙氧基苯甲酸(387mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3,5-二乙氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(175mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.80-8.94(m,1H),8.72(d,1H),8.51(d,1H),7.87(td,1H),7.41(ddd,1H),6.45-6.62(m,3H),4.58-5.05(m,2H),3.71-4.13(m,6H),3.05-3.32(m,2H),1.28-1.55(m,6H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:405。

实施例18

(3-氯-5-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氯-5-甲氧基-苯甲酸(343mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氯-5-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(98mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.84(d,1H),8.60-8.77(m,1H),8.50(d,1H),7.86(td,1H),7.40(ddd,1H),6.98-7.07(m,2H),6.80-6.93(m,1H),4.48-5.04(m,2H),3.55-4.20(m,5H),3.18(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:381。

实施例19

(3,5-二甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,5-二甲氧基苯甲酸(335mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3,5-二甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(153mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.83(dd,1H),8.57-8.76(m,1H),8.49(d,1H),7.85(td,1H),7.39(ddd,1H),6.49-6.64(m,3H),4.51-5.08(m,2H),3.63-4.25(m,8H),2.99-3.34(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:377。

实施例20

(4-氟-3-甲基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-氟-3-甲基-苯甲酸(283mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物室温搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-氟-3-甲基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(106mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.83(dd,1H),8.65(br.s.,1H),8.49(d,1H),7.85(td,1H),7.37-7.43(m,1H),7.31-7.37(m,1H),7.24-7.31(m,1H),7.07(t,1H),4.87(br.s.,2H),3.58-4.17(m,2H),3.18(br.s.,2H),2.17-2.47(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:349。

实施例21

(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氯-4-甲氧基-苯甲酸(343mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(113mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.84(dd,1H),8.65(br.s.,1H),8.50(d,1H),7.87(td,1H),7.50-7.63(m,1H),7.36-7.46(m,2H),6.91-7.07(m,1H),4.87(br.s.,2H),3.80-4.04(m,5H),3.11-3.29(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:381。

实施例22

(3,4-二甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,4-二甲氧基苯甲酸(335mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3,4-二甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(20mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(dd,1H),8.68(br.s.,1H),8.52(d,1H),7.88(td,1H),7.43(ddd,1H),7.05-7.16(m,2H),6.88-6.99(m,1H),4.91(br.s.,2H),3.75-4.18(m,8H),3.23(t,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:377。

实施例23

(3-氯-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(1g,3.07mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氯-4-羟基-苯甲酸(0.835g,4.6mmol)、HATU(2.33g,6.13mmol)和DIPEA(1.98g,15.33mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(10mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氯-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(20mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.69-8.96(m,3H),8.44(td,1H),7.91(ddd,1H),7.56(d,1H),7.37(dd,1H),6.96-7.12(m,1H),4.93-5.03(m,2H),3.86-4.11(m,2H),3.16-3.28(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:367。

实施例24

[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将(3-氯-4-羟基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(100mg,0.273mmol,实施例23)、1-溴-3-甲氧基-丙烷(84mg,0.546mmol)和Cs₂CO₃(266mg,0.82mmol)在DMF(5mL)中的混合物于100℃加热过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(110mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.87(d,1H),8.68(br.s.,1H),8.53(d,1H),7.90(td,1H),7.52-7.63(m,1H),7.44(dd,1H),7.34-7.41(m,1H),6.95-7.06(m,1H),4.85-4.98(m,2H),4.16-4.25(m,2H),3.88-4.03(m,2H),3.59-3.68(m,2H),3.38(s,3H),3.15-3.27(m,2H),2.14(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:439。

实施例25

(4-羟基-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(1g,3.06mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-羟基-3-甲氧基-苯甲酸(0.774g,4.6mmol)、HATU(2.33g,6.14mmol)和DIPEA(1.982g,15.34mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(10mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-羟基-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(20mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(d,1H),8.68(br.s.,1H),8.52(d,1H),7.89(td,1H),7.37-7.50(m,1H),6.85-7.16(m,3H),5.88-6.11(m,1H),4.91(br.s.,2H),3.94(s,5H),3.11-3.37(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:363。

实施例26

[3-甲氧基-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将(4-羟基-3-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(100mg,0.276mmol,实施例25)、1-溴-3-甲氧基-丙烷(84.5mg,0.552mmol)和Cs₂CO₃(269mg,0.829mmol)在DMF(5mL)中的混合物于100℃加热过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[3-甲氧基-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(65mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(dd,1H),8.67(br.s.,1H),8.52(d,1H),7.88(td,1H),7.42(ddd,1H),7.02-7.13(m,2H),6.96(d,1H),4.82-5.01(m,2H),4.13-4.27(m,2H),3.90(s,5H),3.60(s,2H),3.38(s,3H),3.13-3.30(m,2H),2.07-2.23(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:435。

实施例27

(5-甲基-2-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、5-甲基吡啶-2-甲酸(252mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物倒入水(5mL)中并将形成的混合物用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(5-甲基-2-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(44mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.80-8.87(m,1H),8.71-8.78(m,1H),8.47-8.63(m,2H),8.01(t,1H),7.83(d,1H),7.64(d,1H),7.51-7.59(m,1H),5.03(s,2H),4.18(br.s.,1H),3.93(t,1H),3.22(t,2H),2.46(s,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:332。

实施例28

(3-氟-4-甲基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氟-4-甲基-苯甲酸(283mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氟-4-甲基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(43mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.85(dd,1H),8.58-8.78(m,1H),8.50(d,1H),7.87(td,1H),7.41(ddd,1H),7.25-7.34(m,1H),7.10-7.23(m,2H),4.90(br.s.,2H),3.89(br.s.,2H),3.01-3.36(m,2H),2.14-2.52(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:349。

实施例29

(5-甲氧基-2-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、5-甲氧基吡啶-2-甲酸(282mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(5-甲氧基-2-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(16mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.84(br.s.,1H),8.76(d,1H),8.49-8.68(m,1H),8.28-8.41(m,1H),8.02-8.18(m,1H),7.76(d,1H),7.60-7.69(m,1H),7.54(dd,1H),5.02(s,2H),4.00-4.25(m,2H),3.97(s,3H),3.25(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:348。

实施例30

(3,5-二氟-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,5-二氟-4-甲氧基-苯甲酸(346mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3,5-二氟-4-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(62mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:9.01(d,1H),8.89(dd,2H),8.73(td,1H),8.15(ddd,1H),7.24(d,2H),4.93-5.08(m,2H),3.79-4.15(m,5H),3.19-3.28(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:383。

实施例31

(6-甲基-3-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、6-甲基吡啶-3-甲酸(252mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(6-甲基-3-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(19mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.81-8.91(m,1H),8.59-8.78(m,2H),8.41-8.56(m,1H),7.81-7.94(m,1H),7.74(dd,1H),7.36-7.50(m,1H),7.17-7.35(m,1H),4.95(br.s.,2H),3.67-4.10(m,2H),3.21(br.s.,2H),2.51-2.77(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:332。

实施例32

(4-甲基-2-噻吩基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-甲基噻吩-2-甲酸(262mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-甲基-2-噻吩基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(25mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.71-8.82(m,2H),8.52-8.65(m,1H),8.09(td,1H),7.58-7.69(m,1H),7.35-7.48(m,1H),7.25-7.33(m,1H),4.96-5.13(m,2H),4.04-4.24(m,2H),3.20(s,2H),2.33(s,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:337。

实施例33

(5-甲基异

唑-3-基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、5-甲基异

唑-3-甲酸(234mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(5-甲基异

唑-3-基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(39mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.83-8.94(m,1H),8.45-8.78(m,2H),8.23(s,1H),7.88-8.08(m,1H),7.43-7.60(m,1H),6.34-6.47(m,1H),5.22(s,1H),5.01(s,1H),4.26(t,1H),4.09-4.22(m,1H),3.12-3.36(m,2H),2.39-2.64(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:322。

实施例34

(-)-(3,4-二甲氧基苯基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

步骤1：5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯的制备

向2-甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.00g,14.1mmol)的DMF(20mL)溶液中加入DMFDMA(1.84g,15.47mmol)。将形成的混合物于90℃搅拌加热过夜。冷却至室温后，将形成的反应混合物真空浓缩并将残余物溶于EtOH(50mL)。向溶液中加入吡啶-2-甲脒盐酸盐(2.2g,14.1mmol)和甲醇钠(1.05g,19.4mmol)。于100℃下搅拌加热过夜后，将形成的混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物用水(15mL)稀释然后用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯粗品(2.5g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤2：5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶的制备

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯和2,2,2-三氟乙酸(15mL)在DCM(30mL)中的混合物室温搅拌3小时。将形成的混合物真空浓缩得到5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶的三氟乙酸盐粗品(2.6g)。

步骤3：(-)-(3,4-二甲氧基苯基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮的制备

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.882mmol)、3,4-二甲氧基苯甲酸(321mg,1.76mmol)、HATU(670mg,1.76mmol)和DIPEA(570mg,4.41mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩，将残余物依次通过制备型HPLC和SFC纯化得到淡黄色固体状(-)-(3,4-二甲氧基苯基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(35mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.89(br.s.,1H),8.71(br.s.,1H),8.54(d,1H),7.92(t,1H),7.39-7.52(m,1H),7.00-7.14(m,2H),6.94(d,1H),5.62-6.01(m,1H),3.94(d,6H),2.87-3.70(m,4H),1.67(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:391.[a]_D ²⁰＝-0.286°(14mg/mL,甲醇)。

实施例35

(-)-(3,4-二甲氧基苯基)-[5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

步骤1：2-乙基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1-甲酸苄酯的制备

将4-甲氧基吡啶(10g,91.7mmol)和CbzCl(15.6g,91.7mmol)在THF(100mL)中的混合物冷却至-23℃。然后向冷却的混合物中滴加EtMgBr(30.6mL,91.7mmol)。将形成的混合物于-23℃搅拌30分钟，然后倒入10％HCl中并在15℃下继续搅拌20分钟。将形成的混合物用MTBE(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤然后真空浓缩。将残余物进一步通过快速柱纯化(洗脱剂：PE/EA＝1:1,v:v)得到绿色油状2-乙基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1-甲酸苄酯(24.8g)。

步骤2：2-乙基-4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯的制备

将2-乙基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1-甲酸苄酯(24.7g,95.34mmol)和Zn(30.4g,0.477mol)在AcOH(250mL)中的混合物于80℃搅拌加热12小时。将形成的混合物真空浓缩。将残余物溶于EA(500mL)并过滤。将滤液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色油状2-乙基-4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯粗品(28.5g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤3：3-(二甲基氨基亚甲基)-2-乙基-4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯的制备

将2-乙基-4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯(28.5g,粗品)和DMFDMA(300mL)的混合物于100℃搅拌加热12小时。将形成的混合物真空浓缩得到黄色油状3-(二甲基氨基亚甲基)-2-乙基-4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯粗品(30g,粗品)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤4：5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯的制备

向3-(二甲基氨基亚甲基)-2-乙基-4-氧代-哌啶-1-甲酸苄酯粗品(30g,粗品)的MeOH(300mL)溶液中加入吡啶-2-甲脒盐酸盐(15g,95mmol)和K₂CO₃(29g,163mmol)。将形成的混合物于50℃搅拌12小时然后真空浓缩。将残余物溶于DCM(500mL)并将溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝40/1,v:v)得到绿色油状5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯(15g)。

步骤5:5-乙基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶的制备

向5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯(5g,13.4mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入Pd/C(10％,0.5g)并将形成的混合物在氢气氛下室温搅拌12小时然后过滤。将滤液真空浓缩得到黑色油状5-乙基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶(3.2g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。

步骤6:(-)-(3,4-二甲氧基苯基)-[5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮的制备

将5-乙基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶(400mg,1.67mmol)、3,4-二甲氧基苯甲酸(455mg,2.5mmol)、HATU(1267mg,3.33mmol)和DIPEA(1078mg,8.33mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩，将残余物依次通过制备型HPLC和SFC纯化得到淡黄色固体状(-)-(3,4-二甲氧基苯基)-[5-乙基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(16mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.62(br.s.,2H),8.00(br.s.,1H),7.54(br.s.,1H),6.75-7.14(m,3H),5.91(br.s.,1H),4.99(br.s.,1H),4.15(d,1H),3.77-4.04(m,6H),2.49-3.72(m,5H),1.17(br.s.,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:405.[a]_D ²⁰＝-10.000°(2mg/mL,甲醇)。

实施例36

(6-甲氧基-3-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、6-甲氧基吡啶-3-甲酸(282mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA萃取3次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(6-甲氧基-3-吡啶基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(90mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.89(d,1H),8.70(br.s.,1H),8.54(d,1H),8.38(d,1H),7.86-8.03(m,1H),7.77(dd,1H),7.39-7.53(m,1H),6.85(d,1H),4.93(br.s.,2H),3.83-4.21(m,5H),3.25(s,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:348。

实施例37

(3,5-二氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3,5-二氟苯甲酸(291mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA萃取3次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3,5-二氟苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(50mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.37-8.96(m,3H),7.90(td,1H),7.45(ddd,1H),6.79-7.14(m,3H),4.97(br.s.,2H),3.82(br.s.,2H),3.20(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:353。

实施例38

(3-氟-5-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、3-氟-5-甲氧基-苯甲酸(313mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(3-氟-5-甲氧基-苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(90mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.85(d,1H),8.60-8.79(m,1H),8.51(d,1H),7.88(td,1H),7.42(dd,1H),6.56-6.89(m,3H),4.52-5.10(m,2H),3.84(s,5H),3.19(br.s.,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:365。

实施例39

(4-甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶盐酸盐(300mg,0.92mmol,实施例1中步骤3的产物)、4-甲氧基苯甲酸(280mg,1.84mmol)、HATU(699mg,1.84mmol)和DIPEA(595mg,4.6mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水(5mL)中并用EA萃取3次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4-甲氧基苯基)-[2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(55mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(dd,1H),8.58-8.73(m,1H),8.52(d,1H),7.89(td,1H),7.38-7.54(m,3H),6.92-7.04(m,2H),4.90(br.s.,2H),3.77-4.07(m,5H),3.21(t,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:347。

实施例40

[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮

步骤1：5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯的制备

将2-甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.3g,10.8mmol)和DMFDMA(5mL)的混合物加热至100℃ 2小时。将混合物真空浓缩。将残余物溶于EtOH(50mL)并加入嘧啶-2-甲脒盐酸盐(3.55g,22.4mmol)和K₂CO₃(3.86g,27.9mmol)，然后将混合物于90℃加热过夜。冷却至室温后，将形成的混合物真空浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20:1,v:v)得到黄色固体状5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(2.5g)。

步骤2：5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备

向5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(2.5g,7.64mmol)的DCM(30mL)溶液中加入CF₃COOH(10ml)。将形成的混合物室温搅拌2小时然后真空浓缩。将残余物用饱和NaHCO₃水溶液稀释并用CHCl₃和ⁱPrOH的混合物(50mL,v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色油状5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(400mg)。

步骤3：3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸的制备

向3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸甲酯(2.44g,9.43mmol)在THF(10mL)、MeOH(30mL)和水(5mL)中的溶液中加入NaOH(1.13g,28.3mmol)。将形成的混合物室温搅拌过夜，然后用1N HCl酸化至pH＝2并用DCM(50mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色固体状3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸(1.8g)。

步骤4：[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮的制备

将5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(279mg,1.23mmol)、3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸(250mg,1.02mmol)、HATU(583mg,1.53mmol)和DIPEA(396mg,3.07mmol)在DMF(10ml)中的混合物在室温下搅拌10小时。将反应混合物倒入H₂O(50mL)中并用DCM和甲醇的混合物(v/v＝4/1)(50mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮(114mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.04(d,2H),8.70-8.92(m,1H),7.49-7.53(m,1H),7.46(s,1H),7.32(s,1H),7.01(d,1H),5.68-6.25(m,1H),4.19(s,2H),3.62(s,2H),3.37(s,3H),3.05-3.32(m,2H),1.83-2.21(m,4H),1.66(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:454。

实施例41

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮

向4-甲基噻吩-2-甲酸(214mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮(45mg)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.76(m,1H),8.60(s,1H),8.42(m,1H),7.79(m,1H),7.33(m,1H),7.13(s,1H),7.00(s,1H),5.65(br s,1H),4.56(br s,1H),3.45(br s,1H),3.05-3.25(m,2H),2.20-2.24(m,3H),1.38-1.44(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:351。

实施例42

(5-氯-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

向5-氯噻吩-2-甲酸(245mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(5-氯-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(16mg)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.73-8.81(m,1H),8.60(s,1H),8.36-8.47(m,1H),7.74-7.84(m,1H),7.29-7.37(m,1H),7.12(d,1H),6.85(d,1H),5.62(br s,1H),4.53(br d,1H),3.47(brs,1H),3.05-3.24(m,2H),1.60(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:371。

实施例43

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮

向5-甲基噻吩-2-甲酸(214mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将有机层合并，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到米白色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮(60mg)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.86(m,1H),8.69(s,1H),8.51(d,1H),7.88(m,1H),7.42(m,1H),7.25(s,1H),6.78(dd,1H),5.75(br s,1H),4.68(br s,1H),3.54(br s,1H),3.14-3.35(m,2H),2.54-2.57(m,3H),1.69(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:351。

实施例44

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3-噻吩基)甲酮

向噻吩-3-甲酸(193mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到米白色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3-噻吩基)甲酮(55mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.76(d,1H),8.60(br s,1H),8.41(d,1H),7.79(m,1H),7.52(dd,1H),7.30-7.36(m,2H),7.15-7.20(m,1H),5.80(br s,1H),4.20(br s,1H),3.26-3.53(m,1H),3.02-3.19(m,2H),1.51-1.61(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:337。

实施例45

(4-甲基

唑-5-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

向4-甲基

唑-5-甲酸(191mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到淡红色固体状(4-甲基

唑-5-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(40mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.86(d,1H),8.71(br s,1H),8.51(d,1H),7.85-7.93(m,2H),7.43(m,1H),5.80(br s,1H),4.31-4.63(m,1H),3.44-3.78(m,1H),3.13-3.34(m,2H),2.49(s,3H),1.70(br s,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:336。

实施例46

1H-吲哚-6-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

向1H-吲哚-6-甲酸(243mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到白色固体状1H-吲哚-6-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(40mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.06(br s,1H),8.85(d,1H),8.48-8.69(m,1H),7.89(t,1H),7.70(d,1H),7.55(s,1H),7.39-7.46(m,1H),7.33-7.35(m,1H),7.19(dd,1H),6.60(br s,1H),5.94(br s,1H),4.02-4.47(br s,1H),3.38-3.55(m,1H),3.15-3.27(m,1H),3.02-3.15(m,1H),1.65(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:370。

实施例47

1H-吲唑-5-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

向1H-吲唑-5-甲酸(244mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到白色固体状1H-吲唑-5-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(30mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.96(br d,1H),8.82-8.92(m,1H),8.61-8.82(m,1H),8.16(s,1H),8.11(t,1H),7.92-8.08(m,1H),7.67(d,1H),7.51(m,1H),5.95(br s,1H),3.96-4.23(m,1H),3.57-3.75(m,1H),3.27-3.38(m,2H),3.03-3.19(m,1H),1.72(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:371。

实施例48

苯并噻吩-2-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

向苯并噻吩-2-甲酸(267mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将混合物室温搅拌8小时。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，将残余物通过快速色谱纯化得到淡红色粉末状苯并噻吩-2-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(30mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.72(br s,1H),8.63(d,1H),8.43(d,1H),7.87-7.93(m,1H),7.82-7.87(m,2H),7.67(s,1H),7.42-7.48(m,1H),7.33-7.39(m,2H),5.68(br s,1H),4.50(brs,1H),3.61(br s,1H),3.01-3.18(m,2H),1.64(br d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:387。

实施例49

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(2-噻吩基)甲酮

向噻吩-2-甲酸(193mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(2-噻吩基)甲酮(120mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.76(dd,1H),8.60(s,1H),8.44(d,1H),7.81(m,1H),7.43(dd,1H),7.30-7.38(m,2H),7.03(dd,1H),5.66(br s,1H),4.53(br s,1H),3.46(br s,1H),3.04-3.25(m,2H),1.60(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:337。

实施例50

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3-甲基-2-噻吩基)甲酮

向3-甲基噻吩-2-甲酸(214mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(3-甲基-2-噻吩基)甲酮(120mg)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.72-8.80(m,1H),8.60(s,1H),8.44(d,1H),7.82(m,1H),7.36(m,1H),7.20-7.27(m,1H),6.82(d,1H),5.65(br s,1H),4.28(br s,1H),3.42(br t,1H),2.98-3.18(m,2H),2.19(s,3H),1.56(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:351。

实施例51

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-噻唑-2-基-甲酮

向噻唑-2-甲酸(194mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-噻唑-2-基-甲酮(102mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.78(br d,1H),8.65(d,1H),8.44(br d,1H),7.85-7.93(m,1H),7.80(m,1H),7.52(d,1H),7.34(dd,1H),6.77-6.87(m,0.5H),5.77-5.88(m,1H),4.88-4.99(m,0.5H),3.49-3.61(m,0.5H),3.10-3.35(m,2.5H),1.70(d,1H),1.55-1.66(d,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:338。

实施例52

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(2-甲基噻唑-5-基)甲酮

向2-甲基噻唑-5-甲酸(215mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将混合物室温搅拌8小时。将混合物倒入水(50mL)中并将水溶液用EA(100mL)萃取两次。将有机层合并，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(2-甲基噻唑-5-基)甲酮(40mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.76(d,1H),8.61(br s,1H),8.43(d,1H),7.78-7.84(m,2H),7.34(m,1H),5.64(br s,1H),4.47(br s,1H),3.50(br s,1H),3.05-3.23(m,2H),2.69(s,3H),1.60(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:352。

实施例53

(5-溴-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

向5-溴噻吩-2-甲酸(312mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-溴-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(160mg)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.03(s,1H),8.86(d,1H),8.66(d,1H),8.41(m,1H),7.90(m,1H),7.44(d,1H),7.33(d,1H),5.68(br s,1H),4.45(br s,1H),3.64(br s,1H),3.27(br s,1H),3.05(br dd,1H),1.64(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:415。

实施例54

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-噻唑-5-基-甲酮

向噻唑-5-甲酸(194mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-噻唑-5-基-甲酮(28mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.30(s,1H),9.02(br s,1H),8.77-8.94(m,1H),8.62(m,1H),8.32-8.40(m,2H),7.85(m,1H),5.74(br s,1H),4.17-4.39(br s,1H),3.54-3.84(br s,1H),3.15-3.44(br s,1H),2.98-3.13(m,1H),1.64(d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:338。

实施例55

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮

向5-甲基噻唑-2-甲酸(215mg,1.5mmol)、5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(227mg,1.0mmol,实施例34中步骤2的产物)的无水DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)。将形成的混合物室温搅拌8小时，然后倒入水(50mL)中并用EA(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到白色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(35mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.90(br d,1H),8.73(br s,1H),8.54(brd,1H),7.93(m,1H),7.60(br d,1H),7.43-7.50(m,1H),6.83-6.95(m,0.5H),5.82-5.97(m,1H),4.94-5.06(m,0.5H),3.48-3.71(m,0.5H),3.16-3.46(m,2.5H),2.52-2.57(m,3H),1.74(d,1H),1.62-1.70(m,2H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:352。

实施例56

1H-咪唑-2-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(100mg,442μmol,实施例34中步骤2的产物)、1H-咪唑-2-甲酸(74.3mg,663μmol)、HATU(336mg,884μmol)和DIPEA(171mg,1.33mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物倒入水中并用DCM(30ml)萃取两次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，将残余物通过制备型HPLC纯化得到米白色固体状1H-咪唑-2-基-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(76mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.59-8.81(m,2H),8.36-8.48(m,1H),7.84-7.97(m,1H),7.36-7.49(m,1H),6.99-7.28(m,2H),6.78-6.94(m,0.3H),5.50-5.88(m,1.2H),4.80-5.01(m,0.5H),3.23-3.69(m,1.5H),3.03(br d,1.5H),1.45-1.77(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:321。

实施例57

(1-甲基咪唑-2-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(100mg,442μmol,实施例34中步骤2的产物)、1-甲基咪唑-2-甲酸(83.6mg,663μmol)、HATU(336mg,884μmol)和DIPEA(171mg,1.33mmol)在DMF(5mL)中的混合物室温搅拌过夜。将形成的混合物倒入水中并用DCM(30mL)萃取两次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(1-甲基咪唑-2-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(69mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.51-8.80(m,2H),8.33-8.43(m,1H),7.80-7.92(m,1H),7.34-7.47(m,1H),7.07-7.18(m,1H),6.97(d,1H),5.66-5.86(m,1H),4.66-4.75(m,0.4H),4.49-4.60(m,0.6H),3.74(s,3H),3.48-3.63(m,0.7H),3.23-3.41(m,1H),2.88-3.15(m,1.3H),1.56(br d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:335。

实施例58

(5-甲氧基-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(100mg,442μmol,实施例34中步骤2的产物)、5-甲氧基噻吩-2-甲酸(105mg,663μmol)、HATU(336mg,884μmol)和DIPEA(171mg,1.33mmol)在DMF(5mL)中的混合物室温搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水中并用DCM(30mL)萃取两次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(5-甲氧基-2-噻吩基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(102mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.78-8.89(m,1H),8.61-8.73(m,1H),8.22-8.35(m,1H),7.83-7.96(m,1H),7.41-7.54(m,1H),7.23-7.32(m,1H),6.28-6.38(m,1H),5.49-5.62(m,1H),4.33-4.49(m,1H),3.86(s,3H),3.43-3.63(m,1H),3.06-3.21(m,1H),2.84-2.99(m,1H),1.54(br d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:367。

实施例59

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)噻唑-2-基]甲酮

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(130mg,575μmol,实施例34中步骤2的产物)、4-(三氟甲基)噻唑-2-甲酸(170mg,862μmol)、HATU(437mg,1.15mmol)和DIPEA(223mg,1.72mmol)的混合物室温搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水中并用DCM(30mL)萃取两次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-[4-(三氟甲基)噻唑-2-基]甲酮(130mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.92(s,2H),8.81(br d,1H),8.60-8.69(m,1H),8.40(s,1H),8.02-8.10(m,1H),6.43-6.61(m,0.4H),5.76-5.93(m,0.6H),5.42-5.59(m,0.6H),4.73-4.79(m,0.4H),3.62-3.77(m,0.6H),3.27-3.51(m,1H),3.08-3.20(m,1.4H),1.52-1.82(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:406。

实施例60

[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-

唑-2-基-甲酮

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(100mg,442μmol,实施例34中步骤2的产物)、

唑-2-甲酸(75mg,663μmol)、HATU(336mg,884μmol)和DIPEA(171mg,1.33mmol)的混合物室温搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水中并用DCM(30mL)萃取两次。将有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-

唑-2-基-甲酮(88mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.58-8.80(m,2H),8.36-8.48(m,1H),7.98-8.06(m,1H),7.82-7.95(m,1H),7.39-7.50(m,1H),7.28-7.37(m,1H),6.16-6.28(m,0.4H),5.70-5.82(m,0.6H),5.03-5.15(m,0.5H),4.78-4.88(m,1H),3.55-3.70(m,0.5H),3.33-3.47(m,0.4H),3.23-3.32(m,0.6H),2.97-3.12(m,1H),1.51-1.76(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:322。

实施例61

(4,5-二甲基噻唑-2-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮

将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶三氟乙酸盐(100mg,442μmol,实施例34中步骤2的产物)、4,5-二甲基噻唑-2-甲酸(69.5mg,442μmol)、HATU(336mg,884μmol)和DIPEA(171mg,1.33mmol)的混合物室温搅拌过夜。然后将形成的混合物倒入水中并用DCM(30mL)萃取两次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状(4,5-二甲基噻唑-2-基)-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲酮(28mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:8.54-8.79(m,2H),8.33-8.47(m,1H),7.88(br d,1H),7.36-7.49(m,1H),6.56-6.74(m,0.3H),5.49-5.81(m,1.2H),4.62-4.77(m,0.5H),3.45-3.69(m,0.6H),3.27-3.44(m,0.4H),2.91-3.20(m,2H),2.32(d,6H),1.48-1.77(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:366。

实施例62

(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮

将1-甲基-1H-吲唑-3-甲酸(264mg,1.5mmol)、5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(227mg,1.0mmol,实施例40中步骤2的产物)、HATU(762mg,2.0mmol)和DIPEA(258mg,2.0mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌10小时。将形成的混合物倒入水(50mL)中并用EA(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮(65mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ:9.05(br d,2H),8.79-9.00(m,1H),8.07(d,1H),7.61-7.68(m,2H),7.49(br t,1H),7.29(br s,1H),6.29-6.44(br s,0.4H),5.96-6.10(m,0.6H),5.22(m,0.6H),5.02(br s,0.4H),4.20(s,3H),3.64-3.81(m,1H),3.35-3.61(m,1H),3.13-3.31(m,1H),1.69-1.93(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:386。

实施例63

1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮

将1H-吲唑-3-甲酸(243mg,1.5mmol)、5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(227mg,1.0mmol,实施例40中步骤2的产物)、DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物搅拌10小时。将形成的混合物倒入水(50mL)中并用EA(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮(50mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.01(brd,3H),8.05(br d,1H),7.60-7.69(m,2H),7.44(br t,1H),7.24(d,1H),6.22(br s,0.4H),5.95(br d,0.6H),5.14(br d,0.6H),4.86(br s,0.4H),3.70(br t,1H),3.18-3.30(m,1H),3.00-3.10(m,1H),1.55-1.86(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:371。

实施例64

(5-氟-1H-吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮

将5-氟-1H-吲唑-3-甲酸(270mg,1.5mmol)、5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(227mg,1.0mmol,实施例40中步骤2的产物)、DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物搅拌10小时。将形成的混合物倒入水(50mL)中并用EA(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状5-氟-1H-吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮(6mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.00(br d,3H),7.62-7.77(m,3H),7.35(br t,1H),6.29(br s,0.4H),5.93(br d,0.6H),5.23(br d,0.6H),4.73-4.94(br s,0.4H),3.70(br t,1H),3.24(br s,1H),3.00-3.10(m,1H),1.65-1.86(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:390。

实施例65

(1-苄基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮

将1-苄基-1H-吲唑-3-甲酸(378mg,1.5mmol)、5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(227mg,1.0mmol,实施例40中步骤2的产物)、DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物搅拌10小时。将形成的混合物倒入水(50mL)中并用EA(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状(1-苄基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮(80mg)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.02(br d,2H),8.53-8.87(m,1H),8.20(br d,1H),7.34-7.46(m,3H),7.21-7.34(m,6H),6.21-6.35(br s,0.4H),6.07(br d,0.6H),5.54-5.70(m,2H),5.28(br d,0.6H),5.12(brs,0.4H),3.41-3.67(m,1H),3.27-3.39(m,1H),3.17-3.27(m,1H),1.72(br d,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:462。

实施例66

(5-甲氧基-1H-吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮

将5-甲氧基-1H-吲唑-3-甲酸(288mg,1.5mmol)、5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(227mg,1.0mmol,实施例40中步骤2的产物)、DIPEA(258mg,2.0mmol)和HATU(762mg,2.0mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物搅拌10小时。将形成的混合物倒入水(50mL)中并用EA(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状(5-甲氧基-1H-吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)甲酮(30mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.00(br d,3H),7.64(t,1H),7.55(d,1H),7.43(s,1H),7.08(br d,1H),6.25-6.37(br s,0.4H),5.93(br d,0.6H),5.23(br d,0.6H),4.84(br s,0.4H),3.81(s,3H),3.59-3.76(m,1H),3.24(m,1H),3.00-3.10(m,1H),1.56-1.86(m,3H)。MS实测值：(ESI⁺)[(M+H)⁺]:402。

生物学实施例

实施例67材料和方法

HBV细胞系

将组成性表达HBV的细胞系HepG2.2.15细胞(Acs等.Proc Natl Acad Sci USA,84,(1987),4641-4)在保持在5％CO₂、37℃的DMEM+Glutamax-I培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)中培养，所述培养基补充有10％胎牛血清(Invitrogen)和最终浓度为200mg/L的G418(Invitrogen)。

HBsAg试验

将HepG2.2.15细胞一式两份地以1.5x10⁴个细胞/孔接种到白色96孔板中。将细胞用化合物在DMSO中的三倍系列稀释液处理。在所有孔中的最终DMSO浓度为1％，并将DMSO用作无药物对照。

使用HBsAg化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，中国郑州，目录号：CL0310-2)来半定量地测量分泌的HBV抗原的水平。对于该检测，使用50μL/孔培养上清液并用HBsAg化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，中国郑州，目录号：CL0310-2)对HBsAg进行定量，将50μL的上清液转移至CLIA测定板并将50μL的酶结合试剂添加到每个孔中。将板密封并在室温下温和搅拌1小时。弃去上清液-酶-混合物并将孔用300μL的PBS洗涤6次。通过将CLIA板正面向下放置在吸水纸巾上将残余液体除去。向每个孔中添加25μL的底物A和B。在温育10分钟后使用照度计(Mithras LB940MultimodeMicroplate Reader)测量发光度。生成剂量-响应曲线并使用E-WorkBook Suite(IDBusiness Solutions Ltd.,Guildford,UK)外推IC₅₀值。IC₅₀定义为相比于无药物对照，HBsAg分泌减少50％时的化合物浓度。

按照本文的描述测试式I化合物抑制HBsAg的能力。在以上试验中测试实施例化合物并发现其具有低于50μM的IC₅₀。发现式I的特定化合物具有低于5.0μM的IC₅₀。发现式I的更为特定的化合物具有低于0.50μM的IC₅₀。HBsAg试验的结果在表1中给出。

表1:在HBsAg试验中的活性数据

HBV DNA试验

该试验采用实时qPCR(TaqMan)直接测量细胞上清液中的细胞外HBV DNA拷贝数。将HepG2.2.15细胞接种于96孔微量滴定板中，然后用完全培养液(DMEM,Glutamax,10％FBS,1％青霉素/链霉素,250μg/mL Genetycin,最终DMSO浓度为1％)处理。只使用靠内的孔以减少细胞培养过程中观察到的“边缘效应”，靠外的孔中充满完全培养液以使样品的蒸发减至最小。1小时后，将HepG2.2.15细胞用各种浓度的试验化合物一式两份地进行处理(根据测得的HBsAg IC₅₀，使用5μM、2μM或0.5μM的最高浓度，进行1/3的连续稀释(总共稀释10次))。在首次加入试验化合物6天后，收集细胞培养上清液；用自动化系统(Magnapure)进行DNA提取，然后用实时qPCR/TaqMan试验检测HBV DNA拷贝数。从HBV DNA水平的降低计算抗病毒活性(IC₅₀)。

按照本文的描述测试本发明化合物抑制HBV DNA的能力。在以上试验中测试实施例化合物并发现其具有低于50μM的IC₅₀。HBV DNA试验的结果在表2中给出。

表2:在HepG2.2.15细胞中抗HBV DNA生成的活性

实施例号	IC<sub>50</sub>(μM)
		58	41.9
59	48.5