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CN118497028A - 一株抑制黄曲霉生长的地衣芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株抑制黄曲霉生长的地衣芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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CN118497028A
CN118497028A CN202410391558.0A CN202410391558A CN118497028A CN 118497028 A CN118497028 A CN 118497028A CN 202410391558 A CN202410391558 A CN 202410391558A CN 118497028 A CN118497028 A CN 118497028A
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CN
China
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bacillus licheniformis
aspergillus flavus
nxu
inhibiting
strain
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CN202410391558.0A
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张力莉
程雨辰
任文义
张洁
刘小女
常帅飞
何金童
马煜斌
康燕
李海波
李彩琴
杜佳文
徐晓锋
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Ningxia University
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Ningxia University
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Abstract

本发明公开了一株抑制黄曲霉生长的地衣芽孢杆菌及其应用，具体涉及微生物防治技术领域，本发明从奶牛瘤胃中筛选得到一株黄曲霉拮抗菌，即地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)NXU98，保藏编号为CGMCC No.27652，通过试验验证发现，该地衣芽孢杆菌菌株能够拮抗黄曲霉，同时耐高温、耐酸碱能力强，此外，地衣芽孢杆菌添加至青贮中能有效降低好氧细菌繁殖，因此，本发明筛选得到的地衣芽孢杆菌可以应用于预防青贮发酵过程中的黄曲霉污染。

Description

一株抑制黄曲霉生长的地衣芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物防治技术领域，具体是一株抑制黄曲霉生长的地衣芽孢杆菌及其应用。
背景技术
黄曲霉作为自然界中常见的一种半知菌类腐生真菌，由于温度、湿度、光照等多种因素的影响，极易污染农作物、谷物等，从而造成巨大的经济损失和食品安全问题。黄曲霉毒素是黄曲霉在生长代谢过程中产生的一类含有双呋喃环和氧杂萘邻酮结构的有毒次级代谢产物，目前分离发现了20余种AF的表现形式。其中，AFB1因其极强的致癌性、致畸性、致突变性和肝损伤等毒性作用，被世界卫生组织列为一级致癌物。
目前，黄曲霉的防治措施主要有物理防治、化学防治和生物防治。物理防治主要为紫外线照射法、微波处理法、加热法、脱胚处理(用于玉米)、漂洗法、吸附剂法等，但容易对谷物的营养成分造成破坏或脱毒效率低。化学方法采用强酸、强碱或强氧化剂处理饲料以破坏饲料中的黄曲霉毒素结构，从而去除饲料中的黄曲霉毒素，但极易产生副产物和试剂残留。生物防治则是利用微生物的转化作用，或者微生物产生的酶来降解黄曲霉毒素，由于其具有专一性、处理条件温和、无毒副作用、无残留等特点，是未来黄曲霉毒素去除的非常重要的研究方向之一。
地衣芽孢杆菌是革兰氏阳性嗜热细菌，具有超强的耐高温、耐胆碱、耐酸等特征。在恶劣环境时，常以孢子形式存在。作为目前兴起的一种新型益生菌，地衣芽孢杆菌在霉菌毒素生物防控与绿色防控方面具有很大潜力，它能够在内环境中快速夺得氧气，创造厌氧环境，为乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌等有益菌提供良好的生存环境。而不同环境下，地衣芽孢杆菌的种类及抑菌功效均会发生改变。瘤胃作为反刍动物特有的消化器官，含有丰富的微生物种类，从瘤胃中筛选该菌种可以在研发新型抗生药物的同时确定其生物安全性。
发明内容
为解决上述背景技术中提出的问题，本发明提供了一株抑制黄曲霉生长的地衣芽孢杆菌及其应用，具有针对目前生物防治剂研发现状，本申请对黄曲霉菌的抑生长效果显著，能够应用于饲料发酵中的优点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一株地衣芽孢杆菌NXU98，该地衣芽孢杆菌NXU98已于2023年06月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.27652。
本发明还提供一种抑制黄曲霉的菌剂，包含所述的地衣芽孢杆菌NXU98或其代谢产物。
优选地，所述菌剂的活性成分包括地衣芽孢杆菌活菌体、地衣芽孢杆菌固体培养物或地衣芽孢杆菌液体培养液。
本发明还提供所述的地衣芽孢杆菌或者所述的菌剂的应用，所述应用包括如下任一项：
S1、抑制黄曲霉生长；
S2、预防饲料发酵过程中黄曲霉污染。
优选地，所述抑制黄曲霉生长包括破坏黄曲霉孢子和菌株结构。
优选地，所述饲料包括青贮玉米。
本发明还提供所述的地衣芽孢杆菌NXU98或者所述的菌剂在制备饲料添加剂中应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明筛选得到一种地衣芽孢杆菌NXU98，能够抑制黄曲霉生长，细胞形态为杆状。
2、本发明的地衣芽孢杆菌NXU98抗逆能力强，经90℃处理20min存活率为34.13％；pH9.0时存活率为9.69％。
3、本发明的地衣芽孢杆菌NXU98能够显著破坏黄曲霉菌株结构。
4、本发明的地衣芽孢杆菌NXU98能够明显抑制青贮发酵过程中黄曲霉毒素污染。
附图说明
图1为本发明中地衣芽孢杆菌NXU98普通营养琼脂培养特征示意图；
图2为本发明中地衣芽孢杆菌NXU98的革兰氏染色镜检结果示意图；
图3为本发明地衣芽孢杆菌16S rRNA基因序列分析结果示意图；
图4为本发明基于地衣芽孢杆菌16SrRNA基因序列构建的遗传进化树示意图；
图5为本发明地衣芽孢杆菌NXU98的基因组信息示意图；
图6为本发明地衣芽孢杆菌NXU98对黄曲霉菌株的抑菌结果图；
图7为本发明实施例2的示意图，平板中的标记分别表示：BL-JT-1，NXU98菌株菌体；BL-FJ-1，发酵液；BL-SQ-1，无菌上清液；
图8为本发明地衣芽孢杆菌NXU98菌株培养物和发酵上清液对黄曲霉菌株形态抑制作用的光镜图(LM)和透射电镜图(TEM)。
具体实施方式
下面结合附图及具体事例对本发明进行详细说明。其中技术手段为本领域技术人员常规手段，所用材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1:一株抑制黄曲霉的地衣芽孢杆菌NXU98的分离筛选及鉴定
本发明是从奶牛瘤胃中筛选得到的一株具有较强耐热、耐酸、抗氧化能力的兼性厌氧细菌，其表面粗糙皱褶、边缘不整齐的污白色菌落，在长时间培养后菌落边缘呈毛发状，颜色加深，且菌落表面具有粘性液体。我们对该待检菌株进行了分离培养和纯化，以及染色镜检、生化试验、分子鉴定、基因组测序及抑菌试验等。
一、菌株的分离鉴定
1.分离培养和纯化
预先配置500ml的富集培养基，并将所述富集培养基、试管架以及洗干净的亨氏滚管于121℃高压下灭菌15min后置于无菌操作台；
采样当天在500ml的塑料瓶中充满CO2，并将采集的500ml瘘管荷斯坦奶牛瘤胃液置于所述塑料瓶中，并将盛满瘤胃液的塑料瓶置于保温箱中恒温带回实验室；
将所述富集培养基分装到所述亨氏滚管中，并使每管中的富集培养基占管容积的1/3，封好瓶盖和瓶塞，使用1ml无菌注射器接种1ml所述瘤胃液于所述亨氏滚管内，混匀后置于细菌培养箱，并在37℃条件下进行培养；
配置500ml的分离筛选培养基，在121℃高压下灭菌15min后置于无菌操作台，并待温度在55℃-65℃时，分装在一次性培养皿中，每个培养皿倒25ml-35ml，待培养基温度降至室温并凝固；
将LB琼脂培养基分装到体积为30ml的亨氏管中，用无菌水将瘤胃液梯度稀释(10-1，10-3，10-6，10-9)，使用1ml无菌注射器接种稀释瘤胃液于滚管内，使用封口膜进行封口，在细菌培养箱37℃条件下进行培养，观察发现有表面粗糙皱褶、边缘不整齐的污白色菌落生长，将其进行平板划线纯化，见图1。
LB肉汤培养基购自青岛海博生物技术有限公司。
2.革兰氏染色镜检
选取表面粗糙皱褶、边缘不整齐的污白色菌落于玻片上，经革兰氏染色、显微镜油镜观察，发现该菌株成长杆状，单个、成对或链状排列的革兰氏阳性菌，结果见图2。
3.生理试验
将纯化培养的菌株在微生物培养箱80℃培养两个小时，再次接种菌株到纯化培养基，确定其耐热性。
购买H i B i o-ID糖发酵试剂盒(H i Carbo'M Kit(KB009A/KB009B1/KB009C)),试剂盒含35项糖发酵检查，其中A盒和B盒各含12项糖发酵试验，C盒含11项糖发酵试验和1个对照试验。每孔接种50μl培养5h左右菌液在细菌培养箱39℃培养48小时。通过微生物发酵反应，培养基颜色发生变化。结合常见细菌手册和伯杰氏细菌手册进行初步鉴定(如表1所示)。
表1地衣芽孢杆菌的35项糖发酵
4.分子鉴定
1)细菌DNA提取
取纯化的细菌培养液1-5ml，10,000rpm(～11,500×g)离心1min，弃去上清液。向沉淀中加入200μl缓冲液GA，振荡至菌体悬浮。向管中加入20μl Proteinase K溶液，混匀后加入220μl缓冲液GB，振荡15s，70℃静置10min，待溶液呈清亮后，加入220μl无水乙醇，充分振荡15s后装入吸附柱CB3中，12,000rpm(～13,400×g)离心30s，倒掉废液，将CB3放入收集管中。向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD，12,000rpm(～13,400×g)离心30s，倒掉废液，将CB3放入收集管中。向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW，12,000rpm(～13,400×g)离心30s，倒掉废液，将CB3放入收集管中。重复上述步骤后，将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(～13,400×g)离心2min，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲剂TE，室温放置2-5min，12,000rpm(～13,400×g)离心2min，得到的上清液即为DNA模板。
2)16S rRNA的PCR扩增及测序分析：
使用引物27F和1492R进行PCR扩增16S rDNA。引物序列：27F:AGAGTTTGATCMTGGCTCAG,1492R:TACGGTTACCTTGTTACGACTT。反应条件：95℃预变性3min；95℃变性15s，60℃退火15s，72℃延伸15s，共35个循环；72摄氏度延伸10min。
将PCR扩增后的产物使用1％琼脂糖凝胶检测，并采用凝胶回收试剂盒进行回收纯化处理，交于上海生工生物技术有限公司对细菌进行高通量测序。16S rDNA序列在核糖体数据库http://rdp.cme.msu.edu/indexjsp上比对，从物种界门纲目科属种分类水平对细菌再次进行鉴定。发现其与地衣芽孢杆菌CCMMB933、810菌株16S核糖体RNA基因相似度99％，与地衣芽孢杆菌CCMMB928、925、885菌株16S核糖体RNA基因相似度100％(图3)，证实待测菌为地衣芽抱杆菌。将待测菌16S rRNA基因测序结果(seql)基于16SrRNA基因序列构建的遗传进化树见图4。
5.基因组测序
1)DNA纯化与检测
利用TBS380或Nanodrop2500检测基因组DNA浓度，保证进行后续实验的DNA质量足够高(无降解，OD260/280＝1.8-2.0，总量不少于10μg)。
2)单分子测序建库
利用G-tubes方法将基因组DNA处理成8-10k的片段；末端补平，两端分别连接环状单链：单链两端分别与双链正负链连接上，得到一个类似哑铃(“套马环”)的结构，称为SMRTBell。
3)单分子测序
将文库单链环退火，结合到固定的ZMW(zero-mode waveguides，零模波导孔)底部的聚合酶上，结合完成即可上机测序。
使用Circos软件绘制基因组圈图，圈图的最外面一圈为基因组大小的标识；第二圈和第三圈为正链、负链上的CDS，不同的颜色表示CDS不同的COG的功能分类；第四圈为rRNA和tRNA；第五圈为GC含量，向外的红色部分表示该区域GC含量高于全基因组平均GC含量，峰值越高表示与平均GC含量差值越大，向内的蓝色部分表示该区域GC含量低于全基因组平均GC含量，峰值越高表示与平均GC含量差值越大；最内一圈为GC-Skew值，具体算法为G-C/G+C，可以辅助判断前导链和后滞链，一般前导链GC skew>0，后滞链GC skew<0，也可以辅助判断复制起点(累计偏移最小值)和终点(累计偏移最大值)，尤其对环状基因组最为重要(图5)。
实施例2:一株抑制黄曲霉的地衣芽孢杆菌NXU98的抗逆性
将10mL种子液分别于30、50、70和90℃水浴20min,用生理盐水以10倍梯度稀释到合适浓度，取100μL菌液涂布在已经凝固的LB肉汤培养基中，倒置在37℃培养箱中培养12h。将活化的菌液接种于5mL不同pH(3.0、5.0、7.0、9.0、11.0)的LB肉汤培养基中处理2h，倒平板后37℃培养12h。将活化的菌液接种于5mL不同pH(3.0,5.0,7.0,9.0,11.0)处理2h，倒平板后37℃培养12h。每组实验重复三次，采用平板计数法计数并计算细菌的存活率。
式中：N0表示对照组活菌数(CFU/m L)；N1表示实验组活菌数(CFU/m L)。如图7所示，结果显示：地衣芽孢杆菌NXU98在90℃水浴锅中处理20min存活率34.13％，pH9.0处理2h存活率为9.69％。
实施例3:一株抑制黄曲霉的地衣芽孢杆菌NXU98的抑菌作用
1.NXU98菌株发酵液的制备
将NXU98菌株接种至含有30ml LB培养基的50mL无酶无菌离心管中，37℃，140rpm振震荡培养24h，即为NXU98菌株的发酵液。
2.NXU98菌株菌体的制备
将NXU98菌株接种至含有30ml LB培养基的50mL无酶无菌离心管中，37℃，140rpm振震荡培养24h，发酵液于4℃、4000×g离心1h，离心得到的沉淀即为菌体。
3.NXU98无菌滤液的制备
将NXU98菌株接种至含有30mL LB培养基的50mL无酶无菌离心管中，37℃，140rpm振荡培养24h，4℃，10000×g离心15min，上层清液用孔径为0.22um的滤膜过滤，4℃过夜再次离心即得到NXU98菌株的无菌滤液。
4.对峙平板法测定抑菌效果
在含不同发酵液、无菌滤液和菌体的各PDA平板中央接入直径为7mm的黄曲霉菌，以加无菌液体培养基的PDA平板为空白对照，置于30℃生化培养箱中暗培养每个处理重复5次。待病原真菌菌落长到对照平板的2/3时测量菌落直径的大小。结果表明，菌体和发酵上清液的抑菌效果显著高于培养液(图6)。
5.NXU98菌株光镜及透射电镜对真菌超微结构的观察
将经过菌体、发酵液和发酵上清液处理的真菌通过3％戊二醛固定后进行后续试验。
4.1试剂配制
1％锇酸母液：1g四氧化锇安瓶彻底清洁，用滤纸包裹，砸碎安瓶后立即放入母液瓶中，倒入50ml纯水，密闭瓶口混匀，移至4℃冰箱密闭、避光存放，临用前，取等体积锇酸母液和0.2M PBS(PH≈7.4)混匀，即为1％锇酸工作液。
3％戊二醛固定液：取120ml 25％戊二醛，加入2.97g的NaH2PO4·2H2O和29g的Na2HPO4·12H2O，使用UP水定容至1000ml，搅拌至完全溶解，混匀即可。
脱水试剂：取无水丙酮用纯化水稀释配成30％、50％、70％、80％、90％和95％丙酮溶液。
Epon-812包埋剂：准确量取45ml Epon-812、30ml DDSA与25ml MNA并混合，持续搅拌30min，一边搅拌，一边逐滴加入2mlDMP-30，继续搅拌10min，分装待用。
表2试验所需试剂
名称 批号 规格 生产厂家
磷酸二氢钠 1010580101700 500g/瓶 福晨(天津)化学试剂有限公司
磷酸氢二钠 1010590101700 500g/瓶 福晨(天津)化学试剂有限公司
戊二醛(AR级) 20230828 100ml/瓶 国药集团化学试剂有限公司
饿酸 GP18456 1g/支 北京中镜科仪技术有限公司
丙酮(AR级) - 500ml/瓶 西陇科学股份有限公司
醋酸双氧铀 GS02624 25g/瓶 北京中镜科仪技术有限公司
柠檬酸铅 GA10701-1 100g/瓶 北京中镜科仪技术有限公司
4.2试验方法
固定：样品经3％戊二醛预固定(客户固定)，1％四氧化锇再固定。
脱水：丙酮逐级脱水，脱水剂浓度梯度为30％→50％→70％→80％→90％→95％→100％(100％浓度换3次)。
渗透：脱水剂和Epon-812包埋剂，按照比例分别为3:1、1:1、1:3，依次渗透。
包埋：Epon-812纯包埋剂包埋。
超薄切片：采用超薄切片机制备约60～90nm超薄切片，展片，再捞至铜网。
染色：先用醋酸铀染色10～15min，再用柠檬酸铅染色1～2min，室温下染色，最后镜检。
表3试验仪器
名称 型号 生产厂家
纯水超纯水系统 UPR-II-15TNZ 四川优普超纯科技有限公司
高精密电子天平 BN-200 中国台湾巨林樱花企业监制
台式高速微量离心机 D3024 大龙兴创实验仪器(北京)股份公司
生物显微镜 BA210Digital 麦克奥迪实业集团有限公司
超薄切片机 UC7rt LEICA
组织脱水机 EM TP LEICA
透射电子显微镜 JEM-1400FLASH 日本电子(JEOL)
4.3图像采集
采用日本电子公司(JEOL)生产的JEM-1400FLASH透射电子显微镜对铜网进行图像采集，每张铜网先于低倍下观察全部组织，选择要观察的区域采集图片，观察具体结构(见图8)
实施例4:一株地衣芽孢杆菌NXU98在青贮玉米发酵过程中的应用选择蜡熟期的玉米青贮，粉碎至1.5-2.0cm，混合均匀，以20L塑料桶作为青贮容器，对照组不添加地衣芽孢杆菌，三个试验组接种不同浓度的地衣芽孢杆菌(0.8×106、1.6×106和3.2×106CFU/gDM)，人工压实(550±30kg/m3)，在可控室温下保存发酵(20±1℃)。在发酵第3、7、14、28、56天分别取样，进行黄曲霉毒素测定(表2)。
称取2g±0.05g粉碎样本于50ml离心管中，加10ml样本提取液，震荡5min，室温4000r/min离心10min；取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；取50μL进行分析。
百分吸光率计算：标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准液(0ppb)的吸光度值，再乘以100％，即
A表示标准溶液或样本溶液的平均吸光度值，A0表示0ppb标准溶液的平均吸光度值
标准曲线的绘制与计算：以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度(ppb)的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
表4全株玉米青贮发酵阶段霉菌毒素的变化
如表4所示，添加不同浓度的地衣芽孢杆菌对青贮发酵过程中AFB1均具有抑制作用，且添加量为3.2×106CFU/g DM时抑制能力最强。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一株地衣芽孢杆菌NXU98，其特征在于：该地衣芽孢杆菌NXU98已于2023年06月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.27652。
2.一种抑制黄曲霉的菌剂，其特征在于：包含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌NXU98或其代谢产物。
3.如权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂的活性成分包括地衣芽孢杆菌活菌体、地衣芽孢杆菌固体培养物或地衣芽孢杆菌液体培养液。
4.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌或者权利要求2-3任一项所述的菌剂的应用，其特征在于，所述应用包括如下任一项：
S1、抑制黄曲霉生长；
S2、预防饲料发酵过程中黄曲霉污染。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述抑制黄曲霉生长包括破坏黄曲霉孢子和菌株结构。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述饲料包括青贮玉米。
7.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌NXU98或者权利要求2-3任一项所述的菌剂在制备饲料添加剂中应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110171722A1 (en) * 2010-01-11 2011-07-14 National Taiwan University Bacillus Licheniformis and Method for Detoxification of Zearalenone
KR20140012411A (ko) * 2012-07-20 2014-02-03 순창군 장류의 유해 미생물에 대한 항균 활성 및 바이오제닉 아민 분해 활성이 있는 바실러스 리케니포미스 ｓｃｋ ｂ１１ 균주 및 이의 용도
CN113717908A (zh) * 2021-11-02 2021-11-30 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种地衣芽孢杆菌及其应用
WO2022128812A1 (en) * 2020-12-17 2022-06-23 Basf Se Spore compositions, production and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110171722A1 (en) * 2010-01-11 2011-07-14 National Taiwan University Bacillus Licheniformis and Method for Detoxification of Zearalenone
KR20140012411A (ko) * 2012-07-20 2014-02-03 순창군 장류의 유해 미생물에 대한 항균 활성 및 바이오제닉 아민 분해 활성이 있는 바실러스 리케니포미스 ｓｃｋ ｂ１１ 균주 및 이의 용도
WO2022128812A1 (en) * 2020-12-17 2022-06-23 Basf Se Spore compositions, production and uses thereof
CN113717908A (zh) * 2021-11-02 2021-11-30 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种地衣芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张丽芳: "解淀粉芽孢杆菌及其在防控花生黄曲霉毒素污染中的应用", 花生学报, vol. 52, no. 1, 19 January 2023 (2023-01-19) *

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