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CN117858719A - 使用检查点抑制剂疗法和car t细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法 - Google Patents

使用检查点抑制剂疗法和car t细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法 Download PDF

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CN117858719A
CN117858719A CN202280036816.2A CN202280036816A CN117858719A CN 117858719 A CN117858719 A CN 117858719A CN 202280036816 A CN202280036816 A CN 202280036816A CN 117858719 A CN117858719 A CN 117858719A
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S·苏里亚万西
S·阿格拉沃尔
S·斯里瓦斯塔瓦
T·帕尔汉姆
J·德斯蒂法诺
N·布兰德
R·杜博威
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Original Assignee
Juno Therapeutics Inc
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Abstract

本文提供了组合疗法的方法和用途，所述组合疗法涉及T细胞疗法和检查点抑制剂疗法来治疗患有癌症如淋巴瘤的受试者，以及相关的方法、用途和制品，所述T细胞疗法例如CAR T细胞疗法，所述检查点抑制剂疗法例如抗PD‑1抗体和/或抗LAG3抗体。

Description

使用检查点抑制剂疗法和CAR T细胞疗法的组合进行给药和 治疗的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年3月29日提交的标题为“使用检查点抑制剂疗法和CAR T细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法(METHODS FOR DOSING AND TREATMENT WITH ACOMBINATION OF A CHECKPOINT INHIBITOR THERAPY AND A CAR T CELL THERAPY)”的美国临时申请号63/167,596的优先权，出于所有目的将其内容通过引用以其整体并入。
通过引用并入序列表
本申请是与电子格式的序列表一起提交的。序列表以2022年3月28日创建的名为735042024940SeqList.TXT的文件提供，其大小为41,457字节。将电子格式的序列表的信息通过引用以其整体并入。
技术领域
本公开文本在一些方面涉及组合疗法的方法和用途，所述组合疗法涉及T细胞疗法(例如，CAR T细胞疗法)和检查点抑制剂疗法(例如，抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)来治疗患有癌症如淋巴瘤的受试者，以及相关的方法、用途和制品。所述T细胞疗法包括表达重组受体如嵌合抗原受体(CAR)的细胞。
背景技术
可获得用于治疗癌症的细胞疗法的各种策略，例如，过继细胞疗法，包括涉及施用表达对目的疾病或障碍具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)的细胞的那些策略，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法。在一些情况下，内源性T细胞、工程化T细胞或两者可能是耗竭的且效率较低。因此需要改进的方法，例如，以克服这种耗竭并增加这些方法的功效。提供了满足此类需求的方法和用途。
发明内容
本文提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)施用一定剂量，其量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用所述第一剂量。在一些实施方案中，在第8天施用所述第一剂量。在一些实施方案中，在第15天施用所述第一剂量。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量在为或约160mg与560mg之间。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是为或约240mg或为或约480mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是240mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是360mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是480mg。
在一些实施方案中，约每两周一次(Q2W)施用一定剂量。在一些实施方案中，约每四周一次(Q4W)施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是240mg并且约Q2W施用一定剂量，或者所述PD-1抑制剂的量是480mg并且约Q4W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是240mg并且约Q2W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是360mg并且约Q3W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是480mg并且约Q4W施用一定剂量。
在任何所提供的实施方案中，所述方法还包括约每两周一次(Q2W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括约每三周(Q3W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在任何所提供的实施方案中，所述方法还包括以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的LAG3抑制剂的相同日的每一天施用一定剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约60mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约120mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg与为或约320mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约240mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约400mg与为或约560mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约880mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约960mg的量施用。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是120mg并且约Q2W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是240mg并且约Q4W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是360mg并且约Q3W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是240mg并且约Q4W施用一定剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量是480mg并且约Q4W施用一定剂量。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内施用在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在第8天施用所述第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在第15天施用所述第一周期的剂量。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第一量在为或约160mg与为或约320mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第一量在为或约200mg与为或约280mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第一量是为或约240mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第一量在为或约400mg与为或约560mg之间。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第一量在为或约440mg与为或约520mg之间。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第一量是为或约480mg。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量在为或约400mg与为或约560mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量在为或约440mg与为或约520mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量是为或约480mg。
在一些实施方案中，所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后至少约四周。在一些实施方案中，所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后长达约五周。在一些实施方案中，所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后长达约六周。在一些实施方案中，所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后长达约七周。在一些实施方案中，所述第一周期是施用所述剂量的工程化T细胞后长达约八周。
在一些实施方案中，在第8、22和36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量。
在一些实施方案中，所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量是在第15天施用的一个剂量。
在一些实施方案中，所述第二周期是施用所述剂量的工程化T细胞后长达至少约三个月。在一些实施方案中，所述第二周期是施用所述剂量的工程化T细胞后长达约三个月。
在一些实施方案中，分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
在一些实施方案中，在第8、22和36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。在一些实施方案中，所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量是在第15天施用的一个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
在任何所提供的实施方案中，所述方法还包括约每两周一次(Q2W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括约每三周(Q3W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。在任何所提供的实施方案中，所述方法还包括以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的LAG3抑制剂的相同日的每一天施用一定剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约60mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约120mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg与为或约320mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约240mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约400mg与为或约560mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约880mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约960mg的量施用。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在第一周期期间以第一量施用并且在第二周期期间以第二量施用。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约60mg与为或约320mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约120mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约160mg与为或约320mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约160mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约200mg与为或约280mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约240mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约400mg与为或约560mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约440mg与为或约520mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约880mg与为或约1040mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约920mg与为或约1000mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约960mg。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在为或约400mg与为或约560mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在为或约440mg与为或约520mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量是为或约480mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在为或约880mg与为或约1040mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在为或约920mg与为或约1000mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量是为或约960mg。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约240mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约480mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约480mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约960mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约960mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约960mg。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是480mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是960mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用960mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是480mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是960mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用960mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用含有一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞含有表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，独立地施用第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间(包含端值)施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用一定剂量的PD-1抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用第一剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，施用所述PD-1抑制剂不超过约三个月。在一些实施方案中，在约第80天与约第90天之间施用最终剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第85天施用最终剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约160mg与560mg之间。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量是为或约240mg、或为或约480mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量是240mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量是480mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的至少一个剂量是240mg，并且所述PD-1抑制剂的至少一个剂量是480mg。
在一些实施方案中，施用至少四个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，施用四个剂量、五个剂量或六个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，施用四个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，施用五个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，施用六个剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用所述PD-1抑制剂的每个剂量。
在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约三周或约四周施用第四剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用第四剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第四剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，施用五个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第四剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第五剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、22和36天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8、36、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、43、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述受试者施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用第一剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在约60mg与约540mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在约120mg与约480mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量是约120mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量是约480mg。
在一些实施方案中，施用至少三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，施用三个剂量、四个剂量或六个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，施用三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，施用四个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，施用六个剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
在一些实施方案中，在第一剂量的LAG3抑制剂之后约四周施用第二剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，
在一些实施方案中，以相同的频率施用所述PD-1抑制剂的各个剂量和所述LAG3抑制剂的各个剂量。在一些实施方案中，(i)所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用；和/或(ii)所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，(i)所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用；或(ii)所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，(i)所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用；和(ii)所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的各个剂量的施用频率是所述PD-1抑制剂的各个剂量的施用频率的一半。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量是所述LAG3抑制剂的剂量的两倍。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量与所述LAG3抑制剂的剂量相同。
在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂配制在单一组合物中。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂配制在用于静脉内施用的单一组合物中。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36和71天施用240mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43和71天施用240mg。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第815、29、43、57、71和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用120mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用120mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
本文还提供了PD-1抑制剂和LAG3抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
本文还提供了PD-1抑制剂和LAG3抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。
在一些实施方案中，在第2天与第20天之间向所述受试者施用所述药物。
本文还提供了PD-1抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中：(1)向所述受试者施用至少两个剂量的药物；(2)在第2天与第20天之间(包含端值)向所述受试者施用第一剂量的药物；(3)所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的PD-1抑制剂；以及(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
本文还提供了PD-1抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中：(1)向所述受试者施用至少两个剂量的药物；(2)在第2天与第20天之间(包含端值)向所述受试者施用第一剂量的药物；(3)所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的PD-1抑制剂；以及(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。
在一些实施方案中，在先前剂量的药物之后约两周、约三周或约四周施用所述药物的每个后续剂量。
本文还提供了PD-1抑制剂在制造用于治疗CD19表达型癌症的药物中的用途，其中：(1)向所述受试者施用至少两个剂量的药物；(2)在第2天与第20天之间(包含端值)向所述受试者施用第一剂量的药物；(3)所述药物的每个后续剂量在先前剂量的药物之后约两周、约三周或约四周施用；以及(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
本文还提供了PD-1抑制剂在制造用于治疗CD19表达型癌症的药物中的用途，其中：(1)向所述受试者施用至少两个剂量的药物；(2)在第2天与第20天之间(包含端值)向所述受试者施用第一剂量的药物；(3)所述药物的每个后续剂量在先前剂量的药物之后约两周、约三周或约四周施用；以及(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。
在一些实施方案中，所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的所述PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在施用所述细胞疗法之后向所述受试者施用LAG3抑制剂。
本文还提供了用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
本文还提供了用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，独立地施用第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间施用。在一些实施方案中，在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
本文还提供了用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
本文还提供了用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
本文还提供了用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的PD-1抑制剂；和(ii)在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用第一剂量的PD-1抑制剂。
本文还提供了用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的PD-1抑制剂；和(ii)在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述方法还包括向所述受试者施用LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体含有重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区具有分别含有SEQ IDNO:60、61和62所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变区具有分别含有SEQID NO:63、64和65所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，所述VH区含有SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列；并且所述VL区含有SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂是抗LAG3抗体。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体含有重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区具有分别含有SEQ IDNO:68、69和70所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变区具有分别含有SEQID NO:71、72和73所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，所述VH区含有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列；并且所述VL区含有SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的施用和所述LAG3抑制剂的施用是同时的。在一些实施方案中，向所述受试者同时施用所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂包括施用包含所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂的单一组合物。在一些实施方案中，所述单一组合物包含约480mg的PD-1抑制剂和约160mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约15分钟、为或约30分钟、为或约45分钟、为或约60分钟、为或约75分钟、或为或约90分钟内一起施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约15分钟内一起施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约30分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约45分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约60分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约75分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约90分钟内施用。
在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单独的组合物依序施用。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂的单独施用包括第一组合物和第二组合物，所述第一组合物包含所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂中的一种，并且所述第二组合物包含所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂中的另一种。在一些实施方案中，所述第二组合物的施用在所述第一组合物施用完成后为或约5分钟、为或约10分钟、为或约15分钟、为或约20分钟、为或约25分钟、为或约30分钟、为或约35分钟、为或约40分钟、或为或约45分钟开始。在一些实施方案中，所述第二组合物的施用在所述第一组合物施用完成后为或约15分钟开始。在一些实施方案中，所述第二组合物的施用在所述第一组合物施用完成后为或约30分钟开始。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述PD-1抑制剂。在一些实施方案中，所述第二组合物包含为或约960mg的LAG3抑制剂，并且在施用包含所述PD-1抑制剂的第一组合物后为或约30分钟施用。
在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约15分钟、为或约30分钟、为或约45分钟、或为或约60分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约15分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约30分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约45分钟内施用。
在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约45分钟、为或约60分钟、或为或约75分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约45分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约60分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约75分钟内施用。
在一些实施方案中，所述方法还包括在施用所述剂量的工程化T细胞之前向所述受试者施用淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法在开始施用所述剂量的工程化T细胞之前约7天内完成。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法的施用在开始施用所述剂量的工程化T细胞之前约2至7天内完成。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约200-400mg/m2(包含端值)、任选地为或约300mg/m2的环磷酰胺，和/或为或约20-40mg/m2、任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括施用为或约300mg/m2(包含端值)的环磷酰胺，持续3天。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天并行施用为或约300mg/m2的环磷酰胺和为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
在一些实施方案中，CD19是人CD19。
在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)包含：含有抗体FMC63的可变重链区和可变轻链区的scFv、15个或更少的氨基酸并且包含免疫球蛋白铰链区或其修饰形式的间隔子、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域含有CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域和为4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
在一些实施方案中，所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式含有式X1PPX2P，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸(SEQ ID NO:58)。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式是IgG1铰链或其修饰形式。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式是IgG4铰链或其修饰形式。在一些实施方案中，所述间隔子含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。在一些实施方案中，所述间隔子由以下组成：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列，或与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。
在一些实施方案中，所述间隔子的长度是为或约12个氨基酸。在一些实施方案中，所述间隔子含有SEQ ID NO:1所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子由SEQ ID NO:1所示的序列组成。
在一些实施方案中，所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域含有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:8展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域含有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域含有与SEQ ID NO:8展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述共刺激结构域含有SEQ ID NO:12所示的序列，或是与SEQID NO:12所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。在一些实施方案中，所述共刺激结构域含有SEQ ID NO:12所示的序列。在一些实施方案中，所述共刺激结构域含有与SEQID NO:12展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15所示的序列，或是与SEQ ID NO:13、14或15所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。在一些实施方案中，所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15所示的序列。在一些实施方案中，所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域含有与SEQ IDNO:13、14或15所示的序列展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域含有SEQ ID NO:13所示的序列。在一些实施方案中，所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域含有与SEQ ID NO:13所示的序列展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述scFv含有SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:55的CDRL2序列和SEQ ID NO:56的CDRL3序列以及SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ ID NO:54的CDRH3序列。在一些实施方案中，所述scFv含有SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:36的CDRL2序列和SEQ ID NO:37的CDRL3序列以及SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ ID NO:40的CDRH3序列。在一些实施方案中，所述scFv按N末端至C末端顺序包含含有SEQ ID NO:42所示的序列的VL和含有SEQ IDNO:41所示的序列的VH。在一些实施方案中，所述scFv含有SEQ ID NO:43所示的序列。
在一些实施方案中，所述CAR按N末端至C末端顺序含有：为SEQ ID NO:43所示的scFv的细胞外抗原结合结构域、SEQ ID NO:1所示的间隔子、SEQ ID NO:8所示的跨膜结构域、SEQ ID NO:12所示的4-1BB共刺激信号传导结构域、以及SEQ ID NO:13所示的CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述工程化T细胞的剂量含有CD4+T CAR表达细胞和CD8+CAR表达T细胞。在一些实施方案中，所述工程化T细胞的剂量含有在约5x 107个CAR表达T细胞与约1.1x 108个CAR表达T细胞之间，包含每个端值。在一些实施方案中，所述工程化T细胞的剂量含有约5x 107个CAR表达T细胞。在一些实施方案中，所述工程化T细胞的剂量含有约1x 108个CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，施用所述剂量的工程化T细胞包括施用多种单独的组合物，其中所述多种单独的组合物包括含有所述CD8+CAR表达T细胞的第一组合物和含有所述CD4+CAR表达T细胞的第二组合物。在一些实施方案中，将所述第一组合物和所述第二组合物相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时施用，或者其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用在同一天、相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间、或相隔约0与2小时之间进行。在一些实施方案中，所述第一组合物的施用的开始和所述第二组合物的施用的开始在相隔约1分钟与约1小时之间或相隔约5分钟与约30分钟之间进行。在一些实施方案中，将所述第一组合物和所述第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。在一些实施方案中，将所述第一组合物和所述第二组合物相隔少于2小时施用。在一些实施方案中，将含有所述CD8+CAR表达T细胞的所述第一组合物在含有所述CD4+CAR表达T细胞的所述第二组合物之前施用。在一些实施方案中，静脉内施用所述剂量的工程化T细胞的细胞。
在一些实施方案中，所述T细胞是获自来自所述受试者的样品的原代T细胞，任选地其中所述样品是全血样品、单采术样品或白细胞单采术样品。在一些实施方案中，所述样品是单采术样品。在一些实施方案中，所述样品是白细胞单采术样品。在一些实施方案中，在向所述受试者施用淋巴细胞清除疗法之前，从所述受试者获得所述样品。在一些实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是自体的。在一些实施方案中，所述受试者是人。
在一些实施方案中，所述CD19表达型癌症是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述CD19表达型癌症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，所述CD19表达型癌症是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述CD19表达型癌症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些实施方案中，所述NHL选自：非特指型(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(包括转化的惰性NHL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、EB病毒(EBV)阳性DLBCL NOS、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、以及具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤)。在一些实施方案中，所述NHL选自：非特指型(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(包括转化的惰性NHL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、EB病毒(EBV)阳性DLBCL NOS、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、里希特氏(Richter’s)转化、以及具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤)。
在一些实施方案中，所述NHL是复发性/难治性(R/R)NHL。在一些实施方案中，所述受试者对于CD19表达型癌症的至少两种先前全身治疗线是复发性或难治性的。在一些实施方案中，所述至少两种先前全身治疗线中的至少一种包括CD20靶向剂和蒽环类药物。
在一些实施方案中，所述受试者的ECOG体能状态为0或1。在一些实施方案中，所述受试者的ECOG体能状态为0。在一些实施方案中，所述受试者的ECOG体能状态为1。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞时确定所述受试者的ECOG体能状态。在一些实施方案中，在筛选时确定所述受试者的ECOG体能状态。在一些实施方案中，筛选发生在施用所述剂量的工程化T细胞之前约一周与约两周之间。
在一些实施方案中，所述受试者患有正电子发射断层扫描(PET)阳性疾病。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞时确定所述PET阳性疾病。在一些实施方案中，在筛选时确定所述PET阳性疾病。在一些实施方案中，所述受试者患有计算机断层扫描(CT)可测量疾病。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞时确定所述CT可测量疾病。在一些实施方案中，在筛选时确定所述CT可测量疾病。在一些实施方案中，所述受试者患有PET阳性和CT可测量疾病。在一些实施方案中，筛选发生在施用所述剂量的工程化T细胞之前约一周与约两周之间。
在一些实施方案中，所述受试者的多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2。在一些实施方案中，通过CT扫描测量SPD。在一些实施方案中，所述受试者的多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2(通过CT扫描获得)。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞时确定SPD。在一些实施方案中，在筛选时确定SPD。在一些实施方案中，筛选发生在施用所述剂量的工程化T细胞之前约一周与约两周之间。
附图说明
图1显示在治疗后3个月展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者中由内源性CD3+细胞进行的LAG3表达，表示为平均荧光强度(MFI)。
图2A显示由CAR T细胞进行的LAG3基因表达与CD3+CAR T细胞的最大浓度(Cmax)(细胞/μL)之间的相关性。皮尔森相关系数：-0.70，p＝1.3x 10-7；斯皮尔曼相关系数：-0.71，p＝3.2×10-7。
图2B显示在展现短(<90天)或长(>180天)无进展存活期(PFS)的受试者之间的LAG3基因表达(p＝0.012)。
图3显示在对治疗后9个月展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者进行治疗后2个月由内源性T细胞进行的PD-1基因表达。
图4A显示在对治疗后3个月展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者进行治疗后3个月由CD3+CAR+细胞进行的PD-1表达，如通过PD-1表达的平均荧光强度(MFI)所分析的。
图4B显示在对治疗后3个月展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者进行治疗后3个月由CD4+CAR+细胞进行的PD-1表达，如通过PD-1表达的平均荧光强度(MFI)所分析的。
图4C显示在对治疗后3个月展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者进行治疗后3个月由CD8+CAR+细胞进行的PD-1表达，如PD-1表达的平均荧光强度(MFI)所分析的。
图5A和图5B显示在对治疗后3个月展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者进行治疗后的各个时间点由CD3+CAR+细胞进行的PD-1表达。
图6显示用CAR表达T细胞、示例性抗PD-1抗体以及任选地示例性抗LAG3抗体的组合疗法治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)的示例性给药方案(D：天；R：瑞拉利单抗；N：纳武单抗；LDC：淋巴细胞清除化学疗法)。
图7A显示在每四周给药一次(Q4W)的各种剂量的瑞拉利单抗和纳武单抗下，外周血LAG3受体占用率(RO)。
图7B显示在每四周给药一次(Q4W)的各种剂量的瑞拉利单抗下，预测的肿瘤LAG3受体占用率(RO)。
图7C显示在800mg瑞拉利单抗的给药下，预测的游离可溶性LAG3(sLAG3)随时间的变化。
图8A-图8C显示用CAR表达T细胞、示例性抗PD-1抗体以及任选地示例性抗LAG3抗体的组合疗法治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)的示例性给药方案(D：天；R：瑞拉利单抗；N：纳武单抗；LDC：淋巴细胞清除化学疗法)。对于每个群组，白细胞单采术、LDC和CAR T细胞输注在指定的日期发生。
具体实施方式
本文引用的所有参考文献均通过引用以其整体并入本文。
本文提供了用于治疗患有癌症的受试者的组合疗法，所述组合疗法涉及施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)和检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)来治疗癌症或肿瘤，如淋巴瘤，特别是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些实施方案中，所述T细胞疗法包括特异性地结合与所述癌症的细胞相关、由其表达或存在于其上的抗原的任何此类疗法。在特定实施方案中，所述T细胞疗法是或涉及表达结合CD19的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。在特定实施方案中，所述T细胞疗法是或涉及表达结合CD20的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。在特定实施方案中，所述T细胞疗法是或涉及表达结合CD22的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法包括靶向检查点抑制剂(如PD-1和/或LAG3)的一种或多种抗体。所提供的实施方案包括涉及施用T细胞疗法(例如，CAR表达T细胞)和施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)的组合疗法。因此，在一些实施方案中，所述方法和用途包括在过继细胞疗法中向受试者施用表达基因工程化(重组)细胞表面受体的T细胞与抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体的组合，所述基因工程化(重组)细胞表面受体通常是嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR))，其识别由其所来源的细胞类型表达、与其所来源的细胞类型相关和/或对其所来源的细胞类型具有特异性的抗原。
在一些实施方案中，例如经由过继细胞疗法(如过继T细胞疗法)，向患有待治疗的特定疾病或病症的受试者施用所述T细胞疗法和所述检查点抑制剂疗法的组合。在一些实施方案中，所述方法涉及用一定剂量的抗原受体表达细胞(例如CAR表达细胞)治疗患有CD19表达型癌症(如B细胞恶性肿瘤(例如NHL))的受试者。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及治疗受试者的特定组或子集，例如，被鉴定为患有高风险疾病的受试者。在一些方面，所述方法治疗患有预后不良NHL(如对于标准疗法是复发性或难治性(R/R)的和/或具有不良预后的NHL)的受试者。在一些情况下，对于指明所述疗法的疾病和/或患者群体，对可用疗法、对护理标准、或对参考疗法的总反应率(ORR)小于40％和/或完全反应(CR)小于20％。在一些实施方案中，在化学难治性DLBCL中，具有参考或可用治疗或护理标准疗法的ORR为约26％，并且CR为约8％(Crump等人Outomesin refractory aggressive diffuse large B-cell lymphoma(DLBCL):Results fromthe international SCHOLAR study.ASCO 2016[摘要7516])。在一些方面，所提供的方法、组合物、用途和制品实现改善的且优越的对可用疗法的反应。
CD19是从早期发育直到分化为浆细胞的B细胞上存在的95kDa糖蛋白(Stamenkovic等人,J Exp Med.1988；168(3):1205-10)。它是免疫球蛋白超家族的成员，并且作为B细胞受体的正调节物通过降低B细胞激活的信号传导阈值发挥作用(Brentjens等人,Blood.2011；118(18):4817-28；LeBien等人,Blood.2008；112(5):1570-80)。CD19是一个有吸引力的治疗靶标，因为它是由大多数B细胞恶性肿瘤(包括B细胞NHL)表达的(Davila等人,Oncoimmunology.2012；(9):1577-83)。重要的是，除了B细胞谱系的CD19外，CD19未在造血干细胞或任何正常组织上表达。另外，CD19在循环中没有脱落，这限制了脱靶不良反应(Shank等人,Pharmacotherapy.2017；37(3):334-45)。
在特定实施方案中，本文提供的方法基于针对CD19的CAR T细胞疗法与检查点抑制剂疗法的组合的施用，其中CAR含有针对CD19的scFv抗原结合结构域(例如来自FMC63)。CAR还包含含有来自CD3ζ的信号传导结构域的细胞内信号传导结构域，并且还掺入4-1BB共刺激结构域，所述共刺激结构域与细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性(NT；例如神经学事件(NE))的发生率较低(与含有CD28的构建体相比)相关(Lu等人J Clin Oncol.2018；36:3041)。在一些实施方案中，本文提供的方法包括CD8+和CD4+T细胞子集，所述子集在体外单独转导并扩增，并且以相等(约1:1)目标剂量施用。在一些实施方案中，施用的总CD4+和CD8+CAR+T细胞剂量具有低可变性，这两个参数与先前的研究中的毒性增加相关(Neelapu等人,N Engl Med.2017.377；2531-44；Turtle等人,Sci Transl Med.2016；8:355ra116；Hay等人,Blood.2017；130:2295-306)。
在特定实施方案中，本文提供的方法基于针对CD19的CAR T细胞疗法与检查点抑制剂疗法(包括抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)的组合的施用，其中CAR含有针对CD19的scFv抗原结合结构域(例如来自FMC63)。
在一些实施方案中，所述方法包括向被选择或被鉴定为具有B细胞恶性肿瘤(如NHL)的一定预后或风险的受试者施用所述组合疗法。淋巴瘤(如NHL)可以是多变的疾病。一些患有NHL的受试者可以在不进行治疗的情况下存活，而其他受试者可能需要立即干预。在一些实施方案中，所述方法、用途和制品涉及或用于治疗受试者，涉及例如基于特定疾病类型、诊断标准、先前治疗和/或对先前治疗的反应来选择或鉴定受试者的特定组或子集，例如如所述的任何受试者组。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗已经在用一种或多种先前疗法治疗之后缓解后复发或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的受试者；或对一种或多种先前疗法(例如，一个或多个标准治疗线)已经复发或难治(R/R)的受试者。在一些实施方案中，所述一个或多个先前治疗线中的至少一个包括抗CD20剂和蒽环类药物。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗已经在用两种或更多种先前疗法治疗之后缓解后复发或对于所述两种或更多种先前疗法变为难治性的受试者；或对两种或更多种先前疗法(例如，两个或更多个标准治疗线)已经复发或难治(R/R)的受试者。在一些实施方案中，所述两个或更多个先前治疗线中的至少一个包括抗CD20剂和蒽环类药物。
在特定实施方案中，所提供的组合疗法和方法通过检查点抑制剂疗法减少或防止内源性T细胞、T细胞疗法的细胞(例如CAR T细胞)或两者的耗竭的活性来改善对T细胞疗法的反应。在一些实施方案中，当与检查点抑制剂疗法一起提供时，内源性T细胞、T细胞疗法的细胞(例如，CAR T细胞)或两者由此展现改善的功效，如效应子介导的对抗原表达细胞的杀伤。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法和方法通过检查点抑制剂疗法增加T细胞疗法的所施用细胞(例如CAR T细胞)的扩增和/或持久性的活性来改善对T细胞疗法的反应。因此，在一些实施方案中，当与检查点抑制剂疗法一起提供时，T细胞疗法的细胞(例如CAR T细胞)展现改善的扩增和/或持久性。
在一些方面，所提供的方法、组合物、用途和制品实现了改善的且优越的对可用疗法(包括单独的T细胞疗法或单独的检查点抑制剂疗法)的反应。在一些实施方案中，改善的或优越的反应是与当前护理标准(SOC)比较的。
还提供了组合和制品(如试剂盒)，所述组合和制品含有包含T细胞疗法的组合物和/或包含检查点抑制剂疗法(例如，抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)的组合物，以及此类组合物和组合用于治疗或预防CD19表达型癌症(如B细胞恶性肿瘤(例如非霍奇金淋巴瘤))的用途。
细胞疗法(如基于T细胞的疗法，例如，过继T细胞疗法，包括涉及施用表达对目的癌症具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR))和/或其他重组抗原受体的细胞的那些，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)可以在疾病和障碍(如B细胞恶性肿瘤)的治疗中有效。重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))在T细胞表面上的工程化表达使得能重定向T细胞特异性。在临床研究中，CAR-T细胞(例如抗CD19CAR-T细胞)已经在白血病和淋巴瘤患者中产生了持久的、完全的反应(Porter等人(2015)Sci Transl Med.,7:303ra139；Kochenderfer(2015)J.Clin.Oncol.,33:540-9；Lee等人(2015)Lancet,385:517-28；Maude等人(2014)N Engl J Med,371:1507-17)。
在某些情况下，过继细胞疗法的可行途径可能并不总是完全令人满意。在一些情况下，最佳功效可以取决于所施用细胞识别并结合至靶标(例如，靶抗原)以及发挥各种效应子功能(包括对癌细胞的细胞毒性杀伤和各种因子(如细胞因子)的分泌)的能力。然而，在一些情况下，所施用细胞可能变得耗竭，从而在发挥各种效应子功能(包括对癌细胞的杀伤和细胞因子的分泌)方面变得不太有效。特别地，本文的结果表明，检查点抑制剂疗法可以减少或防止T细胞疗法的细胞耗竭。
在一些方面，如与替代性方法(如仅涉及施用T细胞疗法但不与检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)组合的替代性方法)相比，所提供的组合方法和用途提供或实现改进的或更持久的反应或功效。在一些实施方案中，所述方法凭借在施用T细胞疗法(例如CAR-T细胞)之后(例如8或15天内)施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)而是有利的，从而防止或减少T细胞疗法的所施用细胞的耗竭。在所提供的方法的一些实施方案中，T细胞疗法是CAR表达T细胞(CAR T细胞)，并且进一步发现，可以通过在开始施用T细胞疗法之后的时间窗口中启动检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)的施用来实现防止或减少所施用细胞的耗竭这一有利作用，以最小化或避免检查点抑制剂疗法对T细胞疗法的细胞的有害作用。特别地，检查点抑制剂疗法的施用可以加剧T细胞疗法的细胞的激活诱导的细胞死亡(AICD)。然而，延迟施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)直至AICD在其峰值附近或已经达到其峰值或已经在达到峰值后降低之后的时间可以避免对T细胞疗法的细胞的有害影响，同时显著改进(例如，协同增加)T细胞疗法的细胞(例如CAR-T细胞)对肿瘤的T细胞介导的杀伤。
所提供的方法基于如下观察结果，PD-1的阻断可以改善CAR表达T细胞的抗肿瘤活性，如通过阻断抑制性信号并防止T细胞耗竭或使T细胞从耗竭中恢复，并且这种改善可以通过添加LAG3阻断来进一步增加。在一些实施方案中，PD-1和LAG3阻断的组合展现协同效应。
LAG3是一种在慢性耗竭T细胞上表达的检查点受体蛋白，并且经常与另一种检查点蛋白PD-1在许多肿瘤类型的耐受肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上共表达(Chauvin等人,(2015)125(5):2046-58；Speiser等人,Nat Rev Immunol(2014)14(11):768-74；Sharma等人,Cell(2017)168(4):707-723)。值得注意的是，在本文中观察到，在用CAR T细胞治疗的受试者中，包括PD-1和LAG3的耗竭标记在对疗法无反应或反应较差的受试者中的CAR T细胞和未转导的T细胞两者中上调(参见实施例1)。这些结果证明，检查点抑制剂疗法的施用可以改善对T细胞疗法(如CAR T细胞)的反应。特别地，双重检查点抑制(如抗PD-1抗体和抗LAG3抗体)可导致大于任一单独抗体的作用的增强的T细胞效应子功能。
程序性死亡蛋白-1(PD-1)，也称为分化簇279(CD279)，是一种细胞表面膜受体。PD-1是由激活的T和B淋巴细胞表达的负调节分子。PD-1与其配体即程序性死亡配体1(PD-L1)和2(PD-L2)的结合导致淋巴细胞积激活的下调。对PD-1与其配体之间的相互作用的抑制促进对外来抗原以及自身抗原的免疫反应和抗原特异性T细胞反应。
激活后，T细胞在其表面表达PD-1并分泌干扰素，干扰素又诱导检查点抑制剂(如PD-L1和PD-L2)在肿瘤细胞和旁观者细胞(Hoekstra等人,Nat Cancer(2020)1(3):291-301)上的表达(Garcia Diaz等人,Cell Rep(2017)19(6):1189-1201)。肿瘤细胞(包括淋巴瘤)和肿瘤微环境上的PD-L1和/或PD-L2与T细胞(包括CAR T细胞)上的PD-1的结合导致抑制性检查点信号传导，从而降低细胞毒性，并导致T细胞耗竭(Andorsky,Clin Cancer Res(2011)17(13):4232-44)。
存在用于阻断PD-1/PD-L1途径的各种策略。在一些方面，所述PD-1/PD-L1途径通过PD-1阻断(包括PD-1途径抑制剂，如抗PD-1抗体)而被靶向。已显示PD-1途径抑制剂在患有各种癌症的受试者中是安全且有效的，并且可以用于逆转用CAR T细胞治疗的受试者中的PD-L1介导的免疫抑制。
用于本公开文本的方法中的PD-1途径抑制剂包括但不限于PD-1抑制剂和/或PD-L1抑制剂。
在一些方面，所述PD-1抑制剂和/或PD-L1抑制剂是小分子。
在一些方面，所述PD-1抑制剂和/或PD-L1抑制剂是millamolecule。
在一些方面，所述PD-1抑制剂和/或所述PD-L1抑制剂是大环肽。
在某些方面，PD-1抑制剂和/或PD-L1抑制剂是BMS-986189。
在一些方面，所述PD-1抑制剂是国际公开号WO 2014/151634中披露的抑制剂，将该文献通过引用以其整体并入本文。
在一些方面，所述PD-1抑制剂是INCMGA00012(Insight Pharmaceuticals)。
在一些方面，所述PD-1抑制剂包含本文公开的抗PD-1抗体和PD-1小分子抑制剂的组合。
在一些方面，所述PD-L1抑制剂包含具有式(I)所示的式的millamolecule：
其中R1-R13是氨基酸侧链，Ra-Rn是氢、甲基或与邻位R基团一起形成环，并且R14是-C(O)NHR15，其中R15是氢或任选地被可改善药代动力学特性的另外甘氨酸残基和/或尾部取代的甘氨酸残基。在一些方面，所述PD-L1抑制剂包括国际公开号WO 2014/151634中披露的化合物，将该文献通过引用以其整体并入本文。在一些方面，所述PD-L1抑制剂包括国际公开号WO 2016/039749、WO 2016/149351、WO 2016/077518、WO 2016/100285、WO 2016/100608、WO 2016/126646、WO 2016/057624、WO 2017/151830、WO 2017/176608、WO 2018/085750、WO 2018/237153或WO 2019/070643中披露的化合物，将这些文献中的每一个通过引用以其整体并入本文。
在一些方面，所述PD-L1抑制剂包括国际公开号WO 2015/034820、WO 2015/160641、WO 2018/044963、WO 2017/066227、WO 2018/009505、WO 2018/183171、WO 2018/118848、WO 2019/147662或WO 2019/169123中披露的小分子PD-L1抑制剂，将这些文献中的每一个通过引用以其整体并入本文。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂是可溶性PD-L2多肽。在一些方面，所述可溶性PD-L2多肽是融合多肽。在一些方面，所述可溶性PD-L2多肽包含PD-L2细胞外结构域的配体结合片段。在一些方面，所述可溶性PD-L2多肽还包含半衰期延长部分。在一些方面，所述半衰期延长部分包含免疫球蛋白恒定区或其部分、免疫球蛋白结合多肽、免疫球蛋白G(IgG)、白蛋白结合多肽(ABP)、PAS化部分、HES化部分、XTEN、PEG化部分、Fc区或其任何组合。在一些方面，所述可溶性PD-L2多肽是AMP-224(参见例如，US2013/0017199)。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂是抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂被配制用于静脉内施用。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂以平剂量施用。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂以以下剂量施用：至少约0.25mg至约2000mg、约0.25mg至约1600mg、约0.25mg至约1200mg、约0.25mg至约800mg、约0.25mg至约400mg、约0.25mg至约100mg、约0.25mg至约50mg、约0.25mg至约40mg、约0.25mg至约30mg、约0.25mg至约20mg、约20mg至约2000mg、约20mg至约1600mg、约20mg至约1200mg、约20mg至约800mg、约20mg至约400mg、约20mg至约100mg、约100mg至约2000mg、约100mg至约1800mg、约100mg至约1600mg、约100mg至约1400mg、约100mg至约1200mg、约100mg至约1000mg、约100mg至约800mg、约100mg至约600mg、约100mg至约400mg、约400mg至约2000mg、约400mg至约1800mg、约400mg至约1600mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1200mg、或约400mg至约1000mg。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂以以下剂量施用：约0.25mg、约0.5mg、约0.75mg、约1mg、约1.25mg、约1.5mg、约1.75mg、约2mg,2.25mg、约2.5mg、约2.75mg、约3mg、约3.25mg、约3.5mg、约3.75mg、约4mg、约4.25mg、约4.5mg、约4.75mg、约5mg、约5.25mg、约5.5mg、约5.75mg、约6mg、约6.25mg、约6.5mg、约6.75mg、约7mg、约7.25mg、约7.5mg、约7.75mg、约8mg、约8.25mg、约8.5mg、约8.75mg、约9mg、约9.25mg、约9.5mg、约9.75mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、约760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、约860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、约960mg、约970mg、约980mg、约990mg、约1000mg、约1040mg、约1080mg、约1100mg、约1140mg、约1180mg、约1200mg、约1240mg、约1280mg、约1300mg、约1340mg、约1380mg、约1400mg、约1440mg、约1480mg、约1500mg、约1540mg、约1580mg、约1600mg、约1640mg、约1680mg、约1700mg、约1740mg、约1780mg、约1800mg、约1840mg、约1880mg、约1900mg、约1940mg、约1980mg、或约2000mg。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂以基于重量的剂量施用。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂以以下剂量施用：至少约0.003mg/kg至约25mg/kg、约0.003mg/kg至约20mg/kg、约0.003mg/kg至约15mg/kg、约0.003mg/kg至约10mg/kg、约0.003mg/kg至约5mg/kg、约0.003mg/kg至约1mg/kg、约0.003mg/kg至约0.9mg/kg、约0.003mg/kg至约0.8mg/kg、约0.003mg/kg至约0.7mg/kg、约0.003mg/kg至约0.6mg/kg、约0.003mg/kg至约0.5mg/kg、约0.003mg/kg至约0.4mg/kg、约0.003mg/kg至约0.3mg/kg、约0.003mg/kg至约0.2mg/kg、约0.003mg/kg至约0.1mg/kg、约0.1mg/kg至约25mg/kg、约0.1mg/kg至约20mg/kg、约0.1mg/kg至约15mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约25mg/kg、约5mg/kg至约20mg/kg、约5mg/kg至约15mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约10mg/kg至约15mg/kg、约15mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg、或约20mg/kg至约25mg/kg。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂以以下剂量施用：约0.003mg/kg、约0.004mg/kg、约0.005mg/kg、约0.006mg/kg、约0.007mg/kg、约0.008mg/kg、约0.009mg/kg、约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约2.0mg/kg、约3.0mg/kg、约4.0mg/kg、约5.0mg/kg、约6.0mg/kg、约7.0mg/kg、约8.0mg/kg、约9.0mg/kg、约10.0mg/kg、约11.0mg/kg、约12.0mg/kg、约13.0mg/kg、约14.0mg/kg、约15.0mg/kg、约16.0mg/kg、约17.0mg/kg、约18.0mg/kg、约19.0mg/kg、约20.0mg/kg、约21.0mg/kg、约22.0mg/kg、约23.0mg/kg、约24.0mg/kg、或约25.0mg/kg。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂的剂量以恒定量施用。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂的剂量以可变量施用。例如，在一些方面，所述PD-1途径抑制剂的维持(或后续)剂量可以高于或等于首次施用的负荷剂量。在一些方面，所述PD-1途径抑制剂的维持剂量可以低于或等于所述负荷剂量。
在一些方面，所述PD-1途径抑制剂的剂量约每一周施用一次、约每两周施用一次、约每三周一次、约每四周施用一次、约每五周施用一次、约每六周施用一次、约每七周施用一次、约每八周施用一次、约每九周施用一次、约每十周施用一次、约每十一周施用一次、或约每十二周施用一次。
抗PD-1抗体
本领域已知的抗PD-1抗体可以用于本公开文本的方法中。以高亲和力与PD-1特异性结合的多种人单克隆抗体已经披露于美国专利号8,008,449中。已经证明美国专利号8,008,449中披露的抗PD-1人抗体展现以下特征中的一种或多种：(a)以1x10-7M或更小的KD与人PD-1结合，如使用Biacore生物传感器系统通过表面等离子体共振确定的；(b)基本上不与人CD28、CTLA-4或ICOS结合；(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中增加T细胞增殖；(d)在MLR测定中增加干扰素-γ产生；(e)在MLR测定中增加IL-2分泌；(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合；(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合；(h)刺激抗原特异性记忆应答；(i)刺激抗体应答；以及(j)抑制体内肿瘤细胞生长。可用于本公开文本中的抗PD-1抗体包括与人PD-1特异性结合并且展现前述特征中的至少一种(在一些方面至少五种)的单克隆抗体。
可以用于本公开文本的方法中的其他抗PD-1单克隆抗体已经描述于例如以下文献中：美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509，美国公开号2016/0272708，以及PCT公开号WO 2012/145493、WO 2008/156712、WO 2015/112900、WO 2012/145493、WO 2015/112800、WO 2014/206107、WO 2015/35606、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2017/020291、WO 2017/020858、WO 2016/197367、WO 2017/024515、WO 2017/025051、WO 2017/123557、WO 2016/106159、WO 2014/194302、WO 2017/040790、WO 2017/133540、WO 2017/132827、WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO 2017/106061、WO 2017/19846、WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO 2017/132825和WO 2017/133540，将这些文献中的每一个通过引用以其整体并入。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-1抗体包括纳武单抗(也称为5C4、BMS-936558、MDX-1106和ONO-4538)、派姆单抗(Merck；也称为兰布利珠单抗(lambrolizumab)和MK3475；参见WO 2008/156712)、PDR001(Novartis；也称为斯巴达珠单抗(spartalizumab)；参见WO 2015/112900和美国专利号9,683,048)、MEDI-0680(AstraZeneca；也称为AMP-514；参见WO 2012/145493)、TSR-042(TesaroBiopharmaceutical；也称为ANB011或多塔利单抗(dostarlimab)；参见WO 2014/179664)、西米普利单抗(Regeneron；也称为或REGN2810；参见WO 2015/112800和美国专利号9,987,500)、JS001(TAIZHOU JUNSHIPHARMA；也称为特瑞普利单抗(toripalimab)；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、PF-06801591(Pfizer；也称为萨善利单抗(sasanlimab)；US2016/0159905)、BGB-A317(Beigene；也称为替雷利珠单抗；参见WO2015/35606和US2015/0079109)、BI 754091(Boehringer Ingelheim；参见Zettl M等人,Cancer.Res.(2018)；78(13增刊):摘要4558)、INCSHR1210(Jiangsu Hengrui Medicine；也称为SHR-1210或卡瑞利珠单抗；参见WO 2015/085847；Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、GLS-010(Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals；也称为WBP3055；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、AM-0001(Armo)、STI-1110(Sorrento Therapeutics；参见WO 2014/194302)、AGEN2034(Agenus；参见WO2017/040790)、MGA012(Macrogenics，参见WO 2017/19846)、BCD-100(Biocad；Kaplon等人,mAbs 10(2):183-203(2018))、IBI308(Innovent；也称为信迪利单抗；参见WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO 2017/132825和WO 2017/133540)以及SSI-361(LyvgenBiopharma Holdings Limited，US2018/0346569)。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-1抗体还包括分离的抗体，所述分离的抗体与人PD-1特异性结合并且与本文所公开的任何抗PD-1抗体(例如，纳武单抗)交叉竞争与人PD-1的结合(参见例如，美国专利号8,008,449和8,779,105；WO 2013/173223)。在一些方面，所述抗PD-1抗体与本文所述的任何抗PD-1抗体(例如，纳武单抗)结合相同的表位。
在一些方面，与本文公开的任何抗PD-1抗体(例如，纳武单抗)交叉竞争与人PD-1的结合或与本文公开的任何抗PD-1抗体结合相同表位区域的抗体是单克隆抗体。对于施用至人类受试者，这些交叉竞争抗体是嵌合抗体、工程化抗体或者人源化抗体或人抗体。可以通过本领域熟知的方法来制备和分离这样的嵌合、工程化、人源化或人单克隆抗体。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-1抗体还包括任何上述全长抗体的抗原结合部分。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-1抗体是以高特异性和亲和力结合PD-1，阻断PD-L1和/或PD-L2的结合并抑制PD-1信号传导途径的免疫抑制作用的抗体。在本文公开的任何组合物或方法中，抗PD-1“抗体”包括与PD-1受体结合并展现与完整抗体在抑制配体结合和上调免疫系统上相似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些方面，抗PD-1抗体或其抗原结合部分与纳武单抗交叉竞争与人PD-1的结合。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是全长抗体。在一些方面，所述抗PD-1抗体是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或多特异性抗体。在一些方面，所述多特异性抗体是DART、DVD-Ig或双特异性抗体。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是F(ab')2片段、Fab'片段、Fab片段、Fv片段、scFv片段、dsFv片段、dAb片段或单链结合多肽。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是纳武单抗、派姆单抗、PDR001(斯巴达珠单抗)、MEDI-0680、TSR-042、西米普利单抗、JS001、PF-06801591、BGB-A317、BI 754091、INCSHR1210、GLS-010、AM-001、STI-1110、AGEN2034、MGA012、BCD-100、IBI308或SSI-361，或者包含上述抗体的抗原结合部分。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。纳武单抗是靶向PD-1的人单克隆抗体。纳武单抗被批准用于治疗多个地区的几种类型的癌症，这些地区包括美国(US，2014年12月)、欧盟(EU，2015年6月)和日本(JP，2014年7月)。纳武单抗是完全人IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制剂抗体，其选择性地阻止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)的相互作用，从而阻断抗肿瘤T细胞功能的下调(美国专利号8,008,449；Wang等人,2014CancerImmunol Res.2(9):846-56)。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗是针对人细胞表面受体PD-1的人源化单克隆IgG4(S228P)抗体。派姆单抗描述于例如美国专利号8,354,509和8,900,587中。
在一些方面，派姆单抗以约200mg的平剂量约每2周施用一次。在一些方面，派姆单抗以约200mg的平剂量约每3周施用一次。在一些方面，派姆单抗以约400mg的平剂量约每4周施用一次。在一些方面，派姆单抗以约400mg的平剂量约每6周施用一次。在一些方面，派姆单抗以约300mg的平剂量约每4-5周施用一次。
在一些方面，派姆单抗以约200mg的平剂量在第1天静脉内施用，然后约每3周施用一次。在一些方面，施用派姆单抗长达35个周期。在一些方面，在三周周期的第1天，以约200mg的剂量静脉内施用派姆单抗约30分钟，持续长达35个周期。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是西米普利单抗(REGN2810)。西米普利单抗描述于例如WO 2015/112800和美国专利号9,987,500中。
在一些方面，西米普利单抗以约3mg/kg或约350mg的剂量约每3周静脉内施用一次。
在一些方面，所述抗PD-1抗体是斯巴达珠单抗(PDR001)。斯巴达珠单抗描述于例如WO 2015/112900和美国专利号9,683,048中。
在一些方面，斯巴达珠单抗以约300mg的剂量约每3周静脉内施用一次或以400mg的剂量约每4周静脉内施用一次。
抗PD-L1抗体
在一些方面，所述PD-1/PD-L1途径通过PD-1阻断(包括抗PD-L1抗体)而被靶向。本领域已知的抗PD-L1抗体可以用于本公开文本的方法中。可用于本公开文本的组合物和方法中的抗PD-L1抗体的例子包括美国专利号9,580,507中披露的抗体。已经证明美国专利号9,580,507中披露的抗PD-L1人单克隆抗体展现以下特征中的一种或多种：(a)以1x10-7M或更小的KD与人PD-L1结合，如使用Biacore生物传感器系统通过表面等离子体共振确定的；(b)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中增加T细胞增殖；(c)在MLR测定中增加干扰素-γ产生；(d)在MLR测定中增加IL-2分泌；(e)刺激抗体应答；以及(f)逆转T调节细胞对T细胞效应细胞和/或树突细胞的作用。可用于本公开文本中的抗PD-L1抗体包括与人PD-L1特异性结合并且展现前述特征中的至少一种(在一些方面至少五种)的单克隆抗体。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-L1抗体包括BMS-936559(也称为12A4、MDX-1105；参见例如，美国专利号7,943,743和WO 2013/173223)、阿特珠单抗(Roche；也称为MPDL3280A、RG7446；参见US 8,217,149；还参见Herbst等人(2013)J ClinOncol 31(增刊):3000)、度伐鲁单抗(AstraZeneca；也称为IMFINZITM、MEDI-4736；参见WO2011/066389)、阿维鲁单抗(Pfizer；也称为MSB-0010718C；参见WO 2013/079174)、STI-1014(Sorrento；参见WO 2013/181634)、CX-072(Cytomx；参见WO 2016/149201)；KN035(3D Med/Alphamab；参见Zhang等人,Cell Discov.7:3(2017年3月))、LY3300054(Eli Lilly Co.；参见例如，WO 2017/034916)、BGB-A333(BeiGene；参见Desai等人,JCO 36(15增刊):TPS3113(2018))、ICO 36、FAZ053(Novartis)以及CK-301(CheckpointTherapeutics；参见Gorelik等人,AACR:摘要4606(2016年4月))。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-L1抗体还包括分离的抗体，所述分离的抗体与人PD-L1特异性结合并且与本文公开的任何抗PD-L1抗体(例如，阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗)交叉竞争与人PD-L1的结合。在一些方面，所述抗PD-L1抗体与本文所述的任何抗PD-L1抗体(例如，阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗)结合相同的表位。在某些方面，与本文公开的任何抗PD-L1抗体(例如阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗)交叉竞争与人PD-L1的结合或与本文公开的任何抗PD-L1抗体结合相同表位区域的抗体是单克隆抗体。对于施用至人类受试者，这些交叉竞争抗体是嵌合抗体、工程化抗体或者人源化抗体或人抗体。可以通过本领域熟知的方法来制备和分离这样的嵌合、工程化、人源化或人单克隆抗体。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-L1抗体还包括任何上述全长抗体的抗原结合部分。
可以用于本公开文本的方法中的抗PD-L1抗体是以高特异性和亲和力结合PD-L1，阻断PD-1的结合并抑制PD-1信号传导途径的免疫抑制作用的抗体。在本文公开的任何组合物或方法中，抗PD-L1“抗体”包括与PD-L1结合并展现与完整抗体在抑制受体结合和上调免疫系统上相似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些方面，抗PD-L1抗体或其抗原结合部分与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争与人PD-1的结合。
在一些方面，在本文公开的任何方法中，用抗PD-L1抗体替代抗PD-1抗体。
在一些方面，所述抗PD-L1抗体是全长抗体。
在一些方面，所述抗PD-L1抗体是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或多特异性抗体。在一些方面，所述多特异性抗体是DART、DVD-Ig或双特异性抗体。
在一些方面，所述抗PD-L1抗体是F(ab')2片段、Fab'片段、Fab片段、Fv片段、scFv片段、dsFv片段、dAb片段或单链结合多肽。
在一些方面，所述抗PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、STI-1014、CX-072、KN035、LY3300054、BGB-A333、ICO 36、FAZ053或CK-301，或者包含上述抗体的抗原结合部分。
在一些方面，所述PD-L1抗体是阿特珠单抗。阿特珠单抗是一种完全人源化IgG1单克隆抗PD-L1抗体。在一些方面，阿特珠单抗以约800mg的平剂量约每2周施用一次。在一些方面，阿特珠单抗以约840mg的平剂量约每2周施用一次。
在一些方面，在三周周期的第1天，以约1,200mg的剂量静脉内施用阿特珠单抗。
在一些方面，在三周周期的第1天，以约1,200mg的剂量静脉内施用阿特珠单抗，并且在每个周期的第1天，以约15mg/kg的剂量施用贝伐单抗。
在一些方面，所述PD-L1抗体是度伐鲁单抗。度伐鲁单抗是一种人IgG1κ单克隆抗PD-L1抗体。在一些方面，度伐鲁单抗以约10mg/kg的剂量约每2周施用一次。在一些方面，度伐鲁单抗以约10mg/kg的剂量约每2周施用一次，持续长达12个月。在一些方面，度伐鲁单抗以约800mg/kg的平剂量约每2周施用一次。在一些方面，度伐鲁单抗以约1200mg/kg的平剂量约每3周施用一次。
在一些方面，所述PD-L1抗体是阿维鲁单抗。阿维鲁单抗是一种人IgG1λ单克隆抗PD-L1抗体。在一些方面，阿维鲁单抗以约800mg的平剂量约每2周施用一次。
使用抗PD-1或PD-L1抗体与针对CD19的CAR T疗法的组合的1期研究已经证明可接受的安全性并显示对CAR T药代动力学有潜在有益影响，这表明需要进一步评估这种方法(Siddiqi等人,Blood(2017)129(8):1039-41；Tholouli等人,Ann Oncol(2020)31增刊4；S651)。然而，一些患者对靶向PD-1和/或PD-L1的疗法产生抗性。虽然这种抗性的确切机制在很大程度上是未知的，但是假定抗PD-1和/或抗PD-L1疗法可以引起T细胞上调其他抑制性受体，如TIM3、LAG3和/或CTLA4。
添加LAG3阻断和PD-1阻断与T细胞疗法(例如CAR T细胞)的组合可以通过阻断抑制性信号并防止T细胞耗竭或使T细胞从耗竭中恢复来进一步改善抗肿瘤活性，如在侵袭性NHL中的抗肿瘤活性。淋巴细胞激活基因3蛋白(LAG3；也称为分化簇223(CD223))是在几种免疫细胞类型上表达的检查点受体，这些免疫细胞类型包括激活的CD4+和CD8+T细胞、记忆T细胞、Treg细胞和自然杀伤细胞(Andrews等人,Immunol Rev(2017)276(1):80-96)。当LAG3与其配体(如MHC II类或其他新兴配体(例如FGL1)相互作用时，发生LAG3途径的激活，这触发降低效应T细胞功能的抑制活性(Andrews等人,Immunol Rev(2017)276(1):80-96；Wang等人,Cell(2019)176(1-1):334-347)。LAG3在TIL上的表达增加(尤其是在PD-1表达的背景下)进一步促进T细胞耗竭，导致攻击肿瘤细胞的能力受损和肿瘤生长潜力增加(Andrews等人,(2017)276(1):80-96；Woo等人,Cancer Res(2012)72(4):917-27)。对LAG3途径的抑制可以恢复耗竭的T细胞的效应子功能，这促进促炎细胞因子信号传导，并最终促进抗肿瘤反应。
存在用于LAG3阻断的各种抗LAG3策略，包括LAG3抑制剂，如抗LAG3抗体。用于本公开文本的方法中的LAG3抑制剂包括但不限于LAG3抗体和可溶性LAG3多肽。抗LAG3抗体包括特异性结合LAG3的抗体(即，“抗LAG3抗体”)。
在一些方面，所述LAG3抗体是抗LAG3抗体。
结合LAG3的抗体已经披露于例如国际公开号WO/2015/042246以及美国公开号2014/0093511和2011/0150892中，将这些文献中的每一个通过引用以其整体并入本文。
可用于本公开文本中的示例性LAG3抗体是25F7(描述于美国公开号2011/0150892中)。可用于本公开文本中的另外的示例性LAG3抗体是BMS-986016(瑞拉利单抗)。在一些方面，可用于本公开文本中的抗LAG3抗体与25F7或BMS-986016交叉竞争。在一些方面，可用于本公开文本中的抗LAG3抗体与25F7或BMS-986016结合相同的表位。在一些方面，所述抗LAG3抗体包含25F7或BMS-986016的六个CDR。
可以用于本公开文本的方法中的其他本领域公认的抗LAG3抗体包括US 2011/007023中所述的IMP731(H5L7BW)、WO 2016028672和美国公开号2020/0055938中所述的MK-4280(28G-10，法韦泽利单抗(favezelimab))、Burova E等人,J.Immunother.Cancer(2016)；4(增刊1):P195和美国专利号10,358,495中所述的REGN3767(弗安利单抗(fianlimab))、WO 2017/019894中所述的人源化BAP050、GSK2831781、美国专利号10,711,060和美国公开号2020/0172617中所述的IMP-701(LAG-525；埃拉利单抗(ieramilimab))、aLAG3(0414)、aLAG3(0416)、Sym022、TSR-033、TSR-075、XmAb841(以前为XmAb22841)、MGD013(特泊利单抗(tebotelimab))、BI754111、FS118、P 13B02-30、AVA-017、AGEN1746、RO7247669、INCAGN02385、IBI-110、EMB-02、IBI-323、LBL-007和ABL501。可用于所要求保护的发明中的这些和其他抗LAG3抗体可以在例如以下文献中找到：US10,188,730、WO 2016/028672、WO 2017/106129、WO 2017/062888、WO 2009/044273、WO 2018/069500、WO 2016/126858、WO 2014/179664、WO 2016/200782、WO 2015/200119、WO 2017/019846、WO 2017/198741、WO 2017/220555、WO 2017/220569、WO 2018/071500、WO 2017/015560、WO 2017/025498、WO 2017/087589、WO 2017/087901、WO 2018/083087、WO 2017/149143、WO 2017/219995、US2017/0260271、WO 2017/086367、WO 2017/086419、WO 2018/034227、WO 2018/185046、WO 2018/185043、WO 2018/217940、WO 19/011306、WO 2018/208868、WO 2014/140180、WO 2018/201096、WO 2018/204374和WO 2019/018730。将这些参考文献中的每一个的内容通过引用整体并入。
可以用于本公开文本的方法中的抗LAG3抗体还包括分离的抗体，所述分离的抗体与人LAG3特异性结合并且与本文公开的任何抗LAG3抗体(例如，瑞拉利单抗)交叉竞争与人LAG3的结合。在一些方面，所述抗LAG3抗体与本文所述的任何抗LAG3抗体(例如，瑞拉利单抗)结合相同的表位。
在一些方面，与本文公开的任何抗LAG3抗体(例如，瑞拉利单抗)交叉竞争与人LAG3的结合或与本文公开的任何抗LAG3抗体结合相同表位区域的抗体是单克隆抗体。对于施用至人类受试者，这些交叉竞争抗体是嵌合抗体、工程化抗体或者人源化抗体或人抗体。可以通过本领域熟知的方法来制备和分离这样的嵌合、工程化、人源化或人单克隆抗体。
抗体交叉竞争结合抗原的能力指示所述抗体结合抗原的相同表位区域并且在空间上阻碍其他交叉竞争抗体与该特定表位区域的结合。由于它们结合相同的表位区域，预期这些交叉竞争抗体具有与参考抗体(例如，瑞拉利单抗)非常相似的功能特性。在标准结合测定(如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术)中，可以基于它们交叉竞争的能力容易地鉴定交叉竞争抗体(参见例如WO 2013/173223)。
可以用于本公开文本的方法中的抗LAG3抗体还包括任何上述全长抗体的抗原结合部分。已经充分证明抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段执行。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是全长抗体。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或多特异性抗体。在一些方面，所述多特异性抗体是双亲和重靶向抗体(DART)、DVD-Ig或双特异性抗体。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是F(ab')2片段、Fab'片段、Fab片段、Fv片段、scFv片段、dsFv片段、dAb片段或单链结合多肽。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是BMS-986016(瑞拉利单抗)、IMP731(H5L7BW)、MK4280(28G-10，法韦泽利单抗)、REGN3767(弗安利单抗)、GSK2831781、人源化BAP050、IMP-701(LAG525，埃拉利单抗)、aLAG3(0414)、aLAG3(0416)、Sym022、TSR-033、TSR-075、XmAb841(XmAb22841)、MGD013(特泊利单抗)、BI754111、FS118、P 13B02-30、AVA-017、25F7、AGEN1746、RO7247669、INCAGN02385、IBI-110、EMB-02、IBI-323、LBL-007或ABL501，或者包含上述抗体的抗原结合部分。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是MGD013(特泊利单抗)，其是双特异性PD-1×LAG3DART。在一些方面，特泊利单抗以约300mg或约600mg的剂量约每2或3周静脉内施用一次。在一些方面，特泊利单抗以约300mg的剂量约每2周静脉内施用一次。在一些方面，特泊利单抗以约600mg的剂量约每3周静脉内施用一次。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是REGN3767(弗安利单抗)。在一些方面，弗安利单抗以约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约20mg/kg的剂量约每3周静脉内施用一次。在一些方面，弗安利单抗以约1600mg的剂量约每3周静脉内施用一次。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是LAG525(埃拉利单抗)。在一些方面，埃拉利单抗以约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg或约1300mg的剂量约每2、3或4周静脉内施用一次。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是MK4280(法韦泽利单抗)。在一些方面，法韦泽利单抗以约7mg、约21mg、约70mg、约210mg、约700mg或约800mg的剂量约每3周或约每6周静脉内施用一次。在一些方面，法韦泽利单抗以约200mg的剂量约每3周静脉内施用一次。在一些方面，法韦泽利单抗以约800mg的剂量约每6周静脉内施用一次。在一些方面，法韦泽利单抗以约800mg的平剂量在第1天静脉内施用，然后约每3周施用一次。在一些方面，施用法韦泽利单抗长达35个周期。在一些方面，在三周周期的第1天，以约800mg的剂量静脉内施用法韦泽利单抗约30分钟，持续长达35个周期。
在一些方面，所述LAG3抑制剂是可溶性LAG3多肽。在一些方面，所述可溶性LAG3多肽是融合多肽，例如，包含LAG3的细胞外部分的融合蛋白。在一些方面，所述可溶性LAG3多肽是能够结合MHC II类的LAG3-Fc融合多肽。在一些方面，所述可溶性LAG3多肽包含LAG3细胞外结构域的配体结合片段。
在一些方面，所述LAG3抑制剂被配制用于静脉内施用。
在一些方面，所述LAG3抑制剂以平剂量施用。
在一些方面，所述LAG3抑制剂以以下剂量施用：至少约0.25mg至约2000mg、约0.25mg至约1600mg、约0.25mg至约1200mg、约0.25mg至约800mg、约0.25mg至约400mg、约0.25mg至约100mg、约0.25mg至约50mg、约0.25mg至约40mg、约0.25mg至约30mg、约0.25mg至约20mg、约20mg至约2000mg、约20mg至约1600mg、约20mg至约1200mg、约20mg至约800mg、约20mg至约400mg、约20mg至约100mg、约100mg至约2000mg、约100mg至约1800mg、约100mg至约1600mg、约100mg至约1400mg、约100mg至约1200mg、约100mg至约1000mg、约100mg至约800mg、约100mg至约600mg、约100mg至约400mg、约400mg至约2000mg、约400mg至约1800mg、约400mg至约1600mg、约400mg至约1400mg、约400mg至约1200mg、或约400mg至约1000mg。
在一些方面，所述LAG3抑制剂以以下剂量施用：约0.25mg、约0.5mg、约0.75mg、约1mg、约1.25mg、约1.5mg、约1.75mg、约2mg,2.25mg、约2.5mg、约2.75mg、约3mg、约3.25mg、约3.5mg、约3.75mg、约4mg、约4.25mg、约4.5mg、约4.75mg、约5mg、约5.25mg、约5.5mg、约5.75mg、约6mg、约6.25mg、约6.5mg、约6.75mg、约7mg、约7.25mg、约7.5mg、约7.75mg、约8mg、约8.25mg、约8.5mg、约8.75mg、约9mg、约9.25mg、约9.5mg、约9.75mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、约760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、约860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、约960mg、约970mg、约980mg、约990mg、约1000mg、约1040mg、约1080mg、约1100mg、约1140mg、约1180mg、约1200mg、约1240mg、约1280mg、约1300mg、约1340mg、约1380mg、约1400mg、约1440mg、约1480mg、约1500mg、约1540mg、约1580mg、约1600mg、约1640mg、约1680mg、约1700mg、约1740mg、约1780mg、约1800mg、约1840mg、约1880mg、约1900mg、约1940mg、约1980mg、或约2000mg。
在一些方面，所述LAG3抑制剂以基于重量的剂量施用。
在一些方面，所述LAG3抑制剂以以下剂量施用：至少约0.003mg/kg至约25mg/kg、约0.003mg/kg至约20mg/kg、约0.003mg/kg至约15mg/kg、约0.003mg/kg至约10mg/kg、约0.003mg/kg至约5mg/kg、约0.003mg/kg至约1mg/kg、约0.003mg/kg至约0.9mg/kg、约0.003mg/kg至约0.8mg/kg、约0.003mg/kg至约0.7mg/kg、约0.003mg/kg至约0.6mg/kg、约0.003mg/kg至约0.5mg/kg、约0.003mg/kg至约0.4mg/kg、约0.003mg/kg至约0.3mg/kg、约0.003mg/kg至约0.2mg/kg、约0.003mg/kg至约0.1mg/kg、约0.1mg/kg至约25mg/kg、约0.1mg/kg至约20mg/kg、约0.1mg/kg至约15mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约25mg/kg、约5mg/kg至约20mg/kg、约5mg/kg至约15mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约10mg/kg至约15mg/kg、约15mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg、或约20mg/kg至约25mg/kg。
在一些方面，所述LAG3抑制剂以以下剂量施用：约0.003mg/kg、约0.004mg/kg、约0.005mg/kg、约0.006mg/kg、约0.007mg/kg、约0.008mg/kg、约0.009mg/kg、约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约2.0mg/kg、约3.0mg/kg、约4.0mg/kg、约5.0mg/kg、约6.0mg/kg、约7.0mg/kg、约8.0mg/kg、约9.0mg/kg、约10.0mg/kg、约11.0mg/kg、约12.0mg/kg、约13.0mg/kg、约14.0mg/kg、约15.0mg/kg、约16.0mg/kg、约17.0mg/kg、约18.0mg/kg、约19.0mg/kg、约20.0mg/kg、约21.0mg/kg、约22.0mg/kg、约23.0mg/kg、约24.0mg/kg、或约25.0mg/kg。
在一些方面，所述LAG3抑制剂的剂量以恒定量施用。
在一些方面，所述LAG3抑制剂的剂量以可变量施用。例如，在一些方面，所述LAG3抑制剂的维持(或后续)剂量可以高于或等于首次施用的负荷剂量。在一些方面，所述LAG3抑制剂的维持剂量可以低于或等于所述负荷剂量。
在一些方面，所述LAG3抑制剂的剂量约每一周施用一次、约每两周施用一次、约每三周一次、约每四周施用一次、约每五周施用一次、约每六周施用一次、约每七周施用一次、约每八周施用一次、约每九周施用一次、约每十周施用一次、约每十一周施用一次、或约每十二周施用一次。
在一些方面，所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。瑞拉利单抗(BMS-986016)是在对表达人免疫球蛋白(Ig)基因的转基因小鼠进行免疫接种后分离的完全人淋巴细胞激活基因3蛋白(LAG3)特异性抗体。瑞拉利单抗以高亲和力与T细胞上表达的LAG3受体结合，并阻止该受体与携带其配体(即，II类主要组织相容性复合物(MHC)和纤维蛋白原样蛋白1(FGL-1))的细胞结合(Andrews,Immunol Rev.2017年3月；276(1):80-96；Wang,Cell.2019年1月10日；176(1-1):334-347)。瑞拉利单抗的结合抑制LAG3通过其与体外配体相互作用而介导的负调节功能。
在本文中观察到，对免疫疗法(如用抗PD-1抗体治疗)的抗性可以通过额外阻断LAG3来克服。特别地，本文的结果表明，LAG3受体的接近接合或完全接合(以其可溶性形式和膜结合形式)可以产生改善的反应，包括在对单独的抗PD-1疗法没有反应的患者中。例如，OpdualagTM是由FDA批准的纳武单抗和瑞拉利单抗的固定剂量双重免疫疗法组合治疗，用于治疗具有不可切除或转移性黑色素瘤的成人和12岁或以上的儿科患者。
与T细胞疗法和单独的抗PD-1抗体的组合相比，T细胞疗法与包括抗PD-1抗体和抗LAG3抗体两者的检查点抑制疗法的组合可以改善反应。
本文的观察结果表明，T细胞疗法(例如CAR-T细胞疗法)与PD-1抑制剂和LAG3抑制剂两者的组合是有利的。本文的结果显示，相对较高剂量的抗LAG3抗体(例如480mg或960mg，如480mg每两周一次(Q2W)或960mg每四周一次(Q4W))增加外周血和肿瘤微环境中的LAG3受体占用率。特别地，本文观察到高剂量的抗LAG3抗体瑞拉利单抗(例如960mg Q4W)使外周血中可溶性游离LAG3受体蛋白的量最小化(参见实施例2)。在一些方面，最大化的LAG3受体占用率和/或最小化的可溶性游离LAG3可以改善对T细胞疗法(例如CAR T细胞)的反应。在一些方面，LAG3受体占用率的最大化和可溶性游离LAG3受体的最小化都将改善对T细胞疗法的反应。在一些方面，LAG3在肿瘤微环境和外周血中的接近接合或完全接合通过减少或消除T细胞表达LAG3的可能性来改善临床结局。
在一些方面，尽管受试者展现对PD-1抑制剂的抗性或展现高水平的PD-1，但仍观察到这样的效果。特别地，本文观察到PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体)的组合具有协同作用。在一些实施方案中，用抗PD-1抗体和抗LAG3抗体进行治疗比单独用任一抗体进行治疗更有效，包括在对用抗PD-1抗体进行治疗没有反应的受试者中。因此，在一些实施方案中，与涉及施用PD-1抑制剂而不施用LAG3抑制剂的疗法相比，所提供的组合疗法实现协同作用和活性。
在所提供的实施方案中，所述方法涉及靶向或针对杀伤癌细胞的疗法(例如T细胞疗法，如CAR T细胞疗法)与检查点抑制剂疗法的组合疗法。在一些方面，所述检查点抑制剂疗法抑制一个或多个检查点，例如免疫检查点。在一些实施方案中，所述免疫检查点是PD-1。在一些实施方案中，检查点抑制剂疗法包含抗PD-1抗体或由其组成。在一些实施方案中，所述免疫检查点是LAG3。在一些实施方案中，所述免疫检查点是PD-1。在一些实施方案中，检查点抑制剂疗法包含抗LAG3抗体。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法靶向PD-1和/或LAG3。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法靶向PD-1和LAG3。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂包含抗PD-1抗体和抗LAG3抗体或由它们组成。因此，在一些实施方案中，所述方法涉及CAR T细胞疗法与包含抗PD-1抗体和抗LAG3抗体的检查点抑制剂疗法的组合疗法。在一些情况下，组合疗法是CD19靶向性CAR T细胞疗法、抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)。
在一些方面，尽管肿瘤或疾病或靶细胞本身对T细胞疗法(例如CAR T细胞)或检查点抑制剂疗法(当每种疗法单独施用时)不敏感、耐药和/或在其他方面反应不足，但仍观察到对组合疗法的反应有所改善。在一些实施方案中，所述T细胞疗法的细胞(例如CAR T细胞)具有降低的效应子功能和/或展现出耗竭。在一些方面，T细胞疗法的这种耗竭和/或效应子功能降低可归因于T细胞对一个或多个免疫检查点的表达增加。例如，本文观察到展现较差临床反应的受试者的CAR T细胞具有更高的PD-1和LAG3表达。因此，检查点抑制剂疗法可以降低T细胞疗法的细胞对一个或多个免疫检查点的表达，从而增加这些细胞的效应子功能。在一些实施方案中，与仅涉及施用T细胞疗法或以相同给药方案(例如剂量和频率)给予的检查点抑制剂疗法相比，所提供的组合疗法实现协同作用和活性。
此外，在一些方面，受试者的内源性T细胞具有降低的效应子功能和/或展现出耗竭。在一些方面，内源性T细胞的这种耗竭和/或效应子功能降低可归因于内源性T细胞对一个或多个免疫检查点的表达增加。例如，本文观察到展现较差临床反应的受试者的内源性(即，CAR阴性)T细胞具有更高的PD-1和LAG3表达。因此，检查点抑制剂疗法可以降低内源性T细胞对一个或多个免疫检查点的表达，从而增加这些细胞的效应子功能。在一些实施方案中，与仅涉及施用T细胞疗法或以相同给药方案(例如剂量和频率)给予的检查点抑制剂疗法相比，所提供的组合疗法实现协同作用和活性。
在一些实施方案中，所提供的实施方案涉及在给药方案中在施用T细胞疗法(例如CAR T细胞疗法)之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)。在一些实施方案中，在施用T细胞疗法之后(如在施用用于治疗癌症的T细胞疗法之后约一周与两周之间)开始施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，直到T细胞疗法的细胞引起的激活诱导的细胞死亡(AICD)达到峰值才开始施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，直到施用T细胞疗法之后约一周才施用检查点抑制剂疗法(如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)。在一些情况下，T细胞疗法(例如CAR T细胞疗法)的施用发生在第1天，并且检查点抑制剂疗法的施用在第8天开始。在一些实施方案中，直到施用T细胞疗法之后约两周才施用检查点抑制剂疗法(如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)。在一些情况下，T细胞疗法(例如CAR T细胞疗法)的施用发生在第1天，并且检查点抑制剂疗法的施用在第15天开始。
在一些实施方案中，所述方法包括在施用T细胞疗法(例如抗CD19CAR T细胞)之后向受试者施用PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，独立地施用第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间(包含端值)施用。在一些实施方案中，在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括在施用T细胞疗法(例如抗CD19CAR T细胞)之后向受试者施用PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。在一些实施方案中，所述方法包括施用至少两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂以给药方案施用，所述给药方案包括约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂以包含至少两个剂量的给药方案施用，其中在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量，其中在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的PD-1抑制剂，其中在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。在一些实施方案中，在每个剂量中施用约140mg与580mg之间的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。
在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在每个剂量中施用约240mg的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。在一些实施方案中，在每个剂量中施用约480mg的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。
在一些实施方案中，所述方法包括施用四个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的四个剂量中的每一个是约480mg。在一些实施方案中，在第一剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第二剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二剂量的PD-1抑制剂之后约三周或约四周施用第三剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用第三剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第三剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第三剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用第四剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括施用五个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的至少一个剂量是约240mg，并且PD-1抑制剂的至少一个剂量是约480mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的三个剂量是240mg，并且PD-1抑制剂的随后两个剂量是480mg。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周分别施用第二剂量和第三剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第三剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用第四剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周施用前四个剂量中的每一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第四剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第五剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括施用六个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周分别施用第一剂量和第二剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周施用第二、第三、第五和第六剂量中的每一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第四剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用第五剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，约每两周一次(Q2W)施用PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，施用所述PD-1抑制剂不超过约三个月。在一些实施方案中，所述给药方案持续约3个月。在一些实施方案中，在约第80天与约第90天之间施用最终剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第85天施用最终剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括在第1天向受试者施用T细胞疗法(例如抗CD19CAR T细胞)，然后施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂以包括第一周期和第二周期的给药方案施用。
在一些实施方案中，在约第2天与第20天之间向受试者施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约140mg与约580mg之间的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约240mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约480mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期期间施用至少一个剂量或至少两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用三个剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在约第50天与第65天之间向受试者施用第二周期的第一剂量的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。在一些实施方案中，在第二周期的每个剂量中施用约140mg与约580mg之间的纳武单抗。在一些实施方案中，在第二周期的每个剂量中施用约240mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第二周期的每个剂量中施用约480mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期期间施用至少两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用两个剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，约每两周一次(Q2W)施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，约每四周一次(Q4W)施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂，其中在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂，其中在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的LAG3抑制剂之后约两周、约三周、约四周或约五周施用LAG3抑制剂的每个后续剂量。在一些实施方案中，在施用一定剂量的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)的相同日的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)。
在一些实施方案中，在每个剂量中施用约60mg与1040mg之间的LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，在每个剂量中施用120mg的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在每个剂量中施用约160mg与1040mg之间的LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，在每个剂量中施用160mg的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在每个剂量中施用240mg的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在每个剂量中施用480mg的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在每个剂量中施用960mg的瑞拉利单抗。
在一些实施方案中，所述方法包括施用三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一剂量之后约四周施用第二剂量。在一些实施方案中，在第二剂量之后约四周或约五周施用第二剂量。在一些实施方案中，在第二剂量之后约四周施用第三剂量。在一些实施方案中，在第二剂量之后约五周施用第三剂量。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。
在一些实施方案中，所述方法包括施用四个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一剂量之后约四周施用第二剂量。在一些实施方案中，在第二剂量之后约三周或约四周施用第三剂量。在一些实施方案中，在第二剂量之后约三周施用第三剂量。在一些实施方案中，在第二剂量之后约四周施用第三剂量。在一些实施方案中，在第三剂量之后约三周施用第四剂量。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约480mg。
在一些实施方案中，所述方法包括施用六个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的LAG3抑制剂之后约两周施用第二和第三剂量中的每一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量后约两周施用第二、第三、第五和第六剂量中的每一个。在一些实施方案中，在第三剂量的LAG3抑制剂之后约三周施用第四剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，约每两周一次(Q2W)施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)以包括第一周期和第二周期的给药方案施用。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约160mg与约1040mg之间的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约240mg的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约480mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期的每个剂量中施用约960mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期期间施用至少一个剂量或至少两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用三个剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第二周期的每个剂量中施用约400mg与约1040mg之间的瑞拉利单抗。在一些实施方案中，在第二周期的每个剂量中施用约480mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第二周期的每个剂量中施用约960mg的纳武单抗。在一些实施方案中，在第一周期期间施用至少两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期期间施用两个剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，Q4W施用约480mg纳武单抗和约160mg瑞拉利单抗。
在一些实施方案中，所提供的方法可以加强CAR-T细胞疗法，在一些方面，这可以改善患有癌症的受试者的治疗结局，所述癌症对其他疗法具有抗性或是其他疗法难治的，是侵袭性或高风险癌症，和/或会展现或可能展现对CAR-T细胞疗法(在没有检查点抑制剂疗法的情况下施用时)的相对较低的反应率。在一些方面，根据所提供的方法施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)通过减少或防止CAR T细胞耗竭来增加CAR表达细胞用于治疗癌症(例如B细胞恶性肿瘤，如NHL)的活性。在一些方面，根据所提供的方法施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)通过减少或防止内源性T细胞耗竭来增加内源性T细胞用于治疗癌症(例如B细胞恶性肿瘤，如NHL)的活性。在一些方面，所施用的CAR+T细胞对CD19表达型癌症(例如B细胞恶性肿瘤，如NHL)的抗肿瘤活性得以改善。在一些方面，内源性T细胞对CD19表达型癌症(例如B细胞恶性肿瘤，如NHL)细胞的抗肿瘤活性得以改善。
I.组合疗法
本文提供了治疗方法，其涉及施用T细胞疗法(如工程化细胞或含有工程化细胞(例如CAR T细胞)的组合物)和检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)的组合疗法。在一些实施方案中，所述T细胞疗法(例如CAR T细胞)特异性识别和/或结合与癌症细胞相关、由其表达或存在于其上的抗原。在一些实施方案中，所述抗原是CD19。
还提供了T细胞疗法(如工程化细胞，例如CAR T细胞)和检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)和/或其组合物的组合疗法的方法和用途，包括用于治疗患有疾病或病症的受试者的方法。在一些方面，还提供了T细胞疗法(如工程化细胞(CAR T细胞))和检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)的组合疗法用于治疗疾病或病症的用途。在一些方面，T细胞疗法(如工程化细胞(例如CAR T细胞)或含有工程化细胞的组合物)和检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)的组合疗法的用途与本文所述的任何方法一致。
还提供了组合和制品(如试剂盒)，所述组合和制品含有包含T细胞疗法的组合物和/或包含检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)的组合物，以及此类组合物和组合用于治疗或预防病症(如CD19表达型癌症(例如B细胞恶性肿瘤，如NHL)的用途。
在一些实施方案中，在第1天施用T细胞疗法(例如CD19靶向性CAR T细胞)。在一些实施方案中，方法可以包括在第1天施用T细胞疗法之后(例如，开始施用后2-20天)施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和任选地抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，其中T细胞疗法特异性地结合与CD19表达型癌症(例如B细胞恶性肿瘤，如NHL)的细胞相关、由其表达或存在于其上的抗原。在一些实施方案中，在约第2天与第20天之间(如在第8天或第15天)施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和任选地抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和任选地抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约140mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以约240mg的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以约480mg的量施用。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和任选地抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每两周一次(Q2W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约60mg与为或约320mg之间的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以为或约120mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约140mg与为或约320mg之间的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以为或约240mg的量约每两周施用一次。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和任选地抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每四周一次(Q4W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约380mg与为或约580mg之间的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以为或约480mg的量约每四周施用一次。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约60mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约140mg与为或约1040mg之间的量施用。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每两周一次(Q2W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约60mg与为或约540mg之间的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约120mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约140mg与为或约540mg之间的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约160mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约240mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约360mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约480mg的量约每两周施用一次。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每四周一次(Q4W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约60mg与为或约1040mg之间的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约880mg与为或约1040mg之间的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约120mg的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约160mg的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约240mg的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约360mg的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约480mg的量约每四周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约960mg的量约每四周施用一次。
在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))，所述给药方案包括每三周一次(Q3W)施用检查点抑制剂疗法。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约60mg与为或约1040mg之间的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约880mg与为或约1040mg之间的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约120mg的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约160mg的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约240mg的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约360mg的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约480mg的量约每三周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约960mg的量约每三周施用一次。
在一些实施方案中，在同一天施用抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，在同一天施用约240mg的抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和约120mg的抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，在同一天施用约240mg的抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和约240mg的抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，约480mg的抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和约160mg的抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)在同一天施用。在一些实施方案中，在同一天施用约480mg的抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和约240mg的抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)。在一些实施方案中，在同一天施用约480mg的抗PD-1抗体(例如纳武单抗)和约480mg的抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)。
在一些实施方案中，将PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)作为单一药剂疗法(例如单一疗法)与T细胞疗法(例如CAR T细胞)组合施用于受试者。在一些实施方案中，作为单一疗法施用由单一类型的单独治疗组成，以治疗疾病或病症，除非另有规定。在一些实施方案中，将PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体)作为单一疗法与T细胞疗法一起提供，使得除了提供(1)PD-1抑制剂和(2)免疫疗法或细胞疗法以外，不提供其他治疗来治疗疾病或病症。
在一些实施方案中，所述方法包括在第一周期和第二周期中施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)。在一些实施方案中，在约第2天与第20天之间施用第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在约第8天施用第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在约第15天施用第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在第一周期中施用至少一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15天施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8天和第36天施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用三个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8、22和36天施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15、29和43天施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约140mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约140mg与为或约320mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以为或约240mg的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约380mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，在第一周期的第8、22和36天施用为或约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8天和第36天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15、29和43天施用为或约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在约第50天与第65天之间施用第二周期的第一剂量。在一些实施方案中，在约第57天施用第二周期的第一剂量。在一些实施方案中，在第二周期中施用至少两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期中施用两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期的第57天和第85天施用PD-1抑制剂。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约140mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以在为或约380mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(例如纳武单抗)以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，在第二周期的第57天和第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，将PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)作为与T细胞疗法(例如CAR T细胞)组合的组合疗法施用于受试者。在一些实施方案中，将PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)作为与T细胞疗法的组合疗法提供，使得除了提供(1)PD-1和LAG3抑制剂和(2)T细胞疗法之外，不提供其他治疗来治疗疾病或病症。
在一些实施方案中，所述方法包括在第一周期和第二周期中施用检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))。在一些实施方案中，在约第2天与第20天之间施用第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在约第8天施用第一周期的第一剂量。在一些实施方案中，在约第15天施用第一周期的第一剂量。
在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约140mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约140mg与为或约540mg之间的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约240mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约480mg的量约每两周施用一次。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约880mg与为或约1040mg之间的量约每四周施用一次。
在一些实施方案中，在施用PD-1抑制剂的同一天施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用至少一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15天施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8天和第36天施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8、22和36天施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15、29和43天施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约140mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约140mg与为或约320mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约240mg的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约380mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约880mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约960mg的量施用。在一些实施方案中，在第一周期的第8、22和36天施用为或约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8、22和36天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8天和第36天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第8天和第36天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15、29和43天施用为或约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15、29和43天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期的第15天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在约第50天与第65天之间施用第二周期的第一剂量。在一些实施方案中，在约第57天施用第二周期的第一剂量。在一些实施方案中，在第二周期中施用至少两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期中施用两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期的第57天和第85天施用LAG3抑制剂。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约400mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约380mg与为或约580mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，在第二周期的第57天和第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以在为或约880mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，抗LAG3抗体(例如瑞拉利单抗)以为或约960mg的量施用。在一些实施方案中，在第二周期的第57天和第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述T细胞疗法是过继细胞疗法。在一些实施方案中，所述T细胞疗法是或包括转基因TCR疗法或表达重组受体的细胞疗法(任选地是表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞疗法)。在一些实施方案中，所述疗法靶向CD19。在一些情况下，T细胞疗法包含表达嵌合抗原-受体(CAR)的T细胞，其中CAR的抗原结合结构域结合CD19。在一些实施方案中，所述过继细胞疗法包含对于受试者是自体的细胞。在一些实施方案中，将对于受试者是自体的细胞工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，将CAR表达自体T细胞提供给受试者。在一些实施方案中，所述细胞和用于施用所述细胞的剂量方案可以包括章节II所述的任何一种。
在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法减少或防止细胞疗法的细胞耗竭。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法减少或防止内源性T细胞的耗竭。在一些方面，所述检查点抑制剂疗法降低癌细胞对T细胞疗法的抗性。
在一些实施方案中，所述T细胞疗法(例如CAR表达T细胞)和所述检查点抑制剂疗法被提供为向受试者施用的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物含有治疗有效量的用于组合疗法的一种或两种药剂，例如，用于过继细胞疗法的T细胞和如所述的检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)。在一些实施方案中，所述药物组合物含有亚治疗有效量的用于组合疗法的一种或两种药剂，即用于过继细胞疗法的T细胞和如所述的检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)。在一些实施方案中，所述药剂被配制用于以单独的药物组合物来施用。在一些实施方案中，本文提供的任何药物组合物可以按适合于每种施用途径的剂型来配制。
在一些实施方案中，向患有癌症(例如NHL)或有患癌症(如CD19表达型癌症)风险的受试者或患者施用组合疗法，其包括施用T细胞疗法(包括工程化细胞，如CAR-T细胞疗法)和检查点抑制剂疗法。在一些方面，所述方法治疗所述疾病或病症(例如，改善其一种或多种症状)，如通过减小表达由T细胞疗法识别(例如，由工程化T细胞识别)的抗原的癌症的肿瘤负荷。
为了预防或治疗疾病，PD-1抑制剂、LAG3抑制剂和/或T细胞疗法(例如CAR表达T细胞)的适当剂量可能取决于待治疗疾病的类型、特定的抑制剂、细胞和/或在细胞上表达的重组受体、疾病的严重程度和病程、施用途径、施用PD-1和/或LAG3抑制剂和/或T细胞疗法是用于预防还是治疗目的、先前的疗法、施用频率、受试者的临床病史和对细胞的反应、以及主治医师的决断。在一些实施方案中，以合适的方式一次或在一系列治疗中向受试者施用所述组合物和细胞。描述了用于所提供的组合疗法的示例性剂量方案和时间表。
在一些实施方案中，所述T细胞疗法和所述检查点抑制剂疗法作为另外的组合治疗的一部分进行施用，其可以按任何顺序与另一种治疗干预措施同时或依序施用。在一些情况下，T细胞疗法(如CAR表达T细胞)与另一种疗法在时间上足够接近地共施用，使得免疫疗法增强一种或多种另外的治疗剂的作用，或反之亦然。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之前施用所述细胞。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之后施用T细胞疗法(例如工程化T细胞，如表达CAR的T细胞)。在一些实施方案中，所述组合治疗方法还包括淋巴细胞清除疗法，如施用化学治疗剂。在一些实施方案中，所述组合疗法还包括施用另一种治疗剂，如抗癌剂、检查点抑制剂或另一种免疫调节剂。用途包括组合疗法在此类方法和治疗中的用途、以及此类组合物在制备实施此类组合治疗方法的药物中的用途。在一些实施方案中，所述方法和用途由此治疗受试者的疾病或病症或障碍，如癌症或增殖性疾病。
在一些实施方案中，所述细胞疗法和所述检查点抑制剂疗法在没有任何其他组合治疗的情况下施用。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法是抗PD-1抗体，并且所述细胞疗法和所述检查点抑制剂疗法在没有任何其他组合治疗的情况下施用。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法是抗PD-1抗体和抗LAG3抗体，并且所述细胞疗法和所述检查点抑制剂疗法在没有任何其他组合治疗的情况下施用。
在施用T细胞疗法(如CAR-T细胞疗法)和/或检查点抑制剂疗法之前、期间或之后，在一些实施方案中例如通过许多已知方法中的任何一种测量T细胞疗法的生物活性(例如工程化细胞群的生物活性)。要评估的参数包括工程化细胞破坏靶细胞的能力、T细胞活性的持久性和其他量度，如使用本领域中已知的任何合适的方法(如下文在下文章节II中进一步描述的测定)所测量。在一些实施方案中，通过测定细胞毒性细胞杀伤、一种或多种细胞因子的表达和/或分泌、增殖或扩增(如在用抗原再刺激后)来测量所述细胞(例如，基于T细胞的疗法施用的T细胞)的生物活性。在一些方面，通过评估疾病负荷和/或临床结局(如肿瘤负荷或负担的减小)来测量生物活性。在一些方面，通过评估受试者中嗜中性粒细胞减少症的存在来测量生物活性。在一些实施方案中，可以基于在施用所述组合疗法的一种或两种药剂之前、期间、过程中或之后的测定结果来确定所述组合疗法的一种或两种药剂的施用和/或所述疗法的任何重复施用。
在一些实施方案中，与仅涉及检查点抑制剂疗法的治疗或使用细胞疗法的单一疗法相比，检查点抑制剂疗法与T细胞疗法的组合的组合作用可以是协同的。例如，在一些实施方案中，本文提供的方法、组合物和制品导致所需治疗效果的增加或改进，如对与癌症相关的一种或多种症状的减少或抑制的增加或改进。
在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法增加工程化T细胞(如CAR T细胞)的扩增、增殖或细胞毒性。在一些实施方案中，在向受试者施用检查点抑制剂疗法后在体内观察到扩增、增殖或细胞毒性的增加。在一些实施方案中，工程化T细胞(例如CAR-T细胞)的数量的增加增加了大于或大于约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10.0倍或更多倍。在一些实施方案中，工程化T细胞(例如CAR-T细胞)针对癌细胞的细胞毒性的增加增加了大于或大于约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10.0倍或更多倍。
在特定实施方案中，所述方法涉及将所述细胞的一个或多个剂量施用于所述受试者，所述一个或多个剂量包括特定数量或相对数量的细胞或工程化细胞，如所述组合物内限定比率的两种或更多种亚型(如CD4与CD8T细胞)或其组合物。在一些实施方案中，以有效量施用工程化细胞和检查点抑制剂疗法或包含其的组合物，以实现疾病或障碍的治疗。用途包括T细胞疗法和检查点抑制剂疗法或其组合物在此类方法和治疗中以及在制备药物以实施此类治疗方法中的用途。在一些实施方案中，通过向患有或怀疑患有疾病或病症的受试者施用T细胞疗法和检查点抑制剂疗法或包含其的组合物来执行所述方法。在一些实施方案中，所述方法从而治疗受试者的疾病或病症或障碍。
用于施用用于过继细胞疗法的细胞的通用方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继T细胞治疗方法描述于例如以下文献中：Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev Clin Oncol.8(10):577-85。参见例如，Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
A.检查点抑制剂疗法的施用
本文提供了涉及施用可在施用T细胞疗法(例如，CAR T细胞)之后施用的检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)的组合治疗方法、组合、试剂盒和用途。在一些实施方案中，一种或多种检查点蛋白(如PD-1和/或LAG3)的表达可以增加内源性和/或所施用的T细胞(例如工程化CAR T细胞，例如CAR T细胞)的耗竭。在一些实施方案中，PD-1的表达具有促进内源性和/或所施用的CAR T细胞耗竭的能力，从而使癌细胞的存活增加。在一些实施方案中，LAG3蛋白具有促进内源性和/或所施用的CAR T细胞耗竭的能力，从而使癌细胞的存活增加。在一些实施方案中，个体可以对一种或多种检查点抑制剂(如PD-1抑制剂)免疫。在一些实施方案中，对PD-1阻断的免疫可以通过LAG3抑制来克服。
在一些实施方案中，所述组合疗法中的检查点抑制剂疗法是PD-1的抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)，PD-1在一些情况下参与内源性和/或所施用的T细胞的耗竭。在一些实施方案中，所述组合疗法中的检查点抑制剂疗法是PD-1的抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和LAG3的抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)。在一些情况下，PD-1和/或LAG3的表达参与内源性和/或所施用的T细胞的耗竭。
在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)减少和/或防止内源性T细胞的耗竭。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和/或抗LAG3抗体)减少和/或防止所施用的T细胞(例如工程化T细胞，如CAR T细胞)的耗竭。在一些情况下，对LAG3的抑制克服了对PD-1抑制的抗性或使受试者对PD-l抑制敏感。
在一些实施方案中，所述检查点抑制剂包括抗PD-1抗体(例如纳武单抗)。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体抑制PD-1/PD-L1信号传导。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂包括抗LAG3抗体。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体增加T细胞上LAG3的受体占用率，如在外周血中和/或在肿瘤微环境中。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体降低游离可溶性LAG3的量，如在外周血中。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体与所述PD-1抗体组合提供，以克服对PD-1阻断的抗性。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体，包括但不限于以下文献中描述的那些：PCT专利申请号WO 2006121186和WO 2015112800；美国专利申请号US20150203579、US20180346569和US20130017199；美国专利号7595048、8008449、8354509、8609089、8728474、8735553、8779105、8900587、8952136、9067999、9073994、9683048、9815897和9987500；以及欧洲专利号1537878、2161336、2170959，将这些文献各自通过引用以其整体并入。
示例性抗PD-1抗体包括但不限于纳武单抗、卡瑞利珠单抗、西米普利单抗、多塔利单抗、MEDI-0680、派姆单抗、斯巴达珠单抗、SSI-361和替雷利珠单抗。其他示例性抗PD-1抗体包括但不限于AMP224、AMP-514、JTX-4014、瑞弗利单抗(retifanlimab)、信迪利单抗和特瑞普利单抗。
在一些情况下，抗PD-1抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区包含分别含有SEQ ID NO:60、61和62所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变(VL)区包含分别含有SEQ ID NO:63、64和65所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，所述VH区包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列；并且VL区包含SEQ IDNO:67所示的氨基酸序列。在一些情况下，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂是抗LAG3抗体，包括但不限于以下文献中描述的那些：美国申请号US20110150892；PCT申请号WO 2010019570、WO 2014008218、WO2015116539和WO 2015138920；以及美国专利号9505839和9908936，将这些文献各自通过引用以其整体并入。
示例性抗LAG3抗体包括但不限于瑞拉利单抗、法韦泽利单抗(MK-4280)和埃拉利单抗(LAG525)。其他示例性抗LAG3抗体包括但不限于REGN3767、TSR-033、Sym022、BI754111、FS118。
在一些情况下，抗LAG3抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区包含分别含有SEQ ID NO:68、69和70所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变(VL)区包含分别含有SEQ ID NO:71、72和73所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，所述VH区包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列；并且VL区包含SEQ IDNO:75所示的氨基酸序列。在一些情况下，抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。
1.抗PD-1抗体
a.组合物和配制品
在本文提供的组合治疗方法、组合、试剂盒和用途的一些实施方案中，所述组合疗法可以以一种或多种组合物来施用，例如，含有PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和/或T细胞疗法(例如CAR T细胞疗法)的药物组合物。
在一些实施方案中，所述组合物(例如含有PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)的药物组合物)可以包括载体(如稀释剂、辅助剂、赋形剂或媒介物)，将所述一种或多种抑制剂和/或所述细胞与所述载体一起施用。合适的药物载体的例子描述于E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences”中。此类组合物将含有治疗有效量的PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，通常呈纯化形式)以及合适量的载体以提供用于向患者适当施用的形式。此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油和芝麻油。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。药物组合物可以含有一种或多种稀释剂、一种或多种辅助剂、一种或多种抗粘附剂、一种或多种粘合剂、一种或多种涂层、一种或多种填充剂、一种或多种调味剂、一种或多种颜料、一种或多种润滑剂、一种或多种助流剂、一种或多种防腐剂、一种或多种洗涤剂、一种或多种吸附剂、一种或多种乳化剂、一种或多种药物赋形剂、一种或多种pH缓冲剂或一种或多种甜味剂中的任何一种或多种及其组合。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是液体、固体、冻干粉末、呈凝胶形式和/或其组合。在一些方面，载体的选择部分取决于特定抑制剂和/或施用方法。
药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)；稳定剂和/或防腐剂。含有PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)的组合物也可以是冻干的。
在一些实施方案中，可以将所述药物组合物配制成用于通过本领域技术人员已知的任何途径施用，包括肌内、静脉内、真皮内、病灶内、腹膜内注射、皮下、肿瘤内、硬膜外、经鼻、口服、经阴道、经直肠、外用(topical)、局部(local)、经耳、吸入、经颊(例如，舌下)以及透皮施用或任何途径。在一些实施方案中，也考虑了其他施用方式。在一些实施方案中，施用是通过推注输注，通过注射，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜(posterior juxtascleral)递送。在一些实施方案中，施用是通过肠胃外、肺内和鼻内施用，并且如果需要局部治疗，则通过病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。
在一些实施方案中，组合物还可以与其他生物活性剂一起施用，依序地、间歇地或在同一组合物中。在一些实施方案中，施用还可以包括控释系统，包括控释配制品和装置控释，如借助泵。在一些实施方案中，施用是口服施用。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)通常以单位剂型或多剂型配制和施用。每个单位剂量含有足以产生所需治疗效果的预定量的治疗活性PD-1抑制剂(例如纳武单抗)，与所需的药物载体、媒介物或稀释剂结合。在一些实施方案中，单位剂型包括但不限于含有适量的PD-1抑制剂(例如纳武单抗)的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液或悬浮液以及口服溶液或悬浮液和油水乳液。单位剂型可以容纳在安瓿和注射器中或单独包装的片剂或胶囊中。单位剂型可以按其分数或倍数施用。在一些实施方案中，多剂量形式是包装在单个容器中的待以分离的单位剂型施用的多个相同的单位剂型。多剂量形式的例子包括小瓶、片剂或胶囊瓶或者品脱或加仑瓶。
b.给药
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)和T细胞疗法(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在开始T细胞疗法(例如CAR T细胞)之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在开始施用T细胞疗法(CAR T细胞)之后约1天与约3周之间开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)在开始施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)之后约一周与约两周之间。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在第1天开始施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第2天与第20天之间开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第8天或第15天开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第8天开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第15天开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。
在一些实施方案中，所述方法涉及在T细胞疗法的细胞(例如CAR T细胞)引起的激活诱导的细胞死亡(AICD)达到峰值之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)施用一定剂量，其量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用所述第一剂量。在一些实施方案中，施用所述PD-1抑制剂不超过约三个月。在一些实施方案中，在约第80天与约第90天之间施用最终剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第85天施用最终剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，其中PD-1抑制剂的每个剂量在约160mg与560mg之间。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的每个剂量是为或约240mg或为或约480mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的每个剂量是240mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的每个剂量是480mg。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂的至少一个剂量是240mg，并且PD-1抑制剂的至少一个剂量是480mg。在一些实施方案中，施用至少四个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，施用四个剂量、五个剂量或六个剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用所述PD-1抑制剂的每个剂量。
在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约三周或约四周施用第四剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约三周施用第四剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第四剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，施用五个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的前三个剂量是约240mg，并且所述抑制剂的第四和第五个剂量是约480mg。在一些情况下，在第8、22、36、57和85天施用PD-1抑制剂的五个剂量。在一些情况下，在第15、29、43、57和85天施用PD-1抑制剂的五个剂量。
在一些实施方案中，施用五个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第四剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第五剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、22和36天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8、36、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、43、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、22、36、57、71和85天中的每一天施用240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29、43、57、71和85天中的每一天施用240mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、22和36天中的每一天施用240mg的PD-1抑制剂；并且在第57天和第85天施用480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天中的每一天施用240mg的PD-1抑制剂；并且在第57天和第85天施用480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、36、64和85天中的每一天施用480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、43、64和85天中的每一天施用480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂的量在为或约160mg与560mg之间。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的量是为或约240mg或为或约480mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的量是240mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的量是480mg。在一些实施方案中，约每两周一次(Q2W)施用一定剂量。在一些实施方案中，约每四周一次(Q4W)施用一定剂量。
在一些实施方案中，Q2W施用约240mg的量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，Q4W施用约480mg的量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第一周期和第二周期中施用PD-1抑制剂，如下文进一步所描述的。
1)第一周期
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)和T细胞疗法(例如CAR T细胞)，其中在第一周期和第二周期中施用检查点抑制剂疗法。
在一些实施方案中，在第一周期中施用至少一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用至少两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用至少三个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用三个剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在施用T细胞疗法之后施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约1天与三周之间施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约一周施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约两周施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在约第2天与约第20天之间施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第8天或约第15天施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第8天施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第15天施用第一周期的第一剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、15、22、29、36和/或43天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第22天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第29天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第36天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第43天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8、22和36天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用一定剂量的PD-1。
在一些实施方案中，对于第一周期的每个剂量，施用第一量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的第一量在约100mg与600mg之间、在约100mg与约550mg、在约100mg与约500mg、在约100mg与约450mg、在约100mg与约400mg、在约100mg与约350mg之间、在约100mg与约300mg之间、在约100mg与约250mg之间、在约100mg与约200mg之间、在约100mg与约150mg之间、在约150mg与600mg之间、在约150mg与约550mg之间、在约150mg与约500mg之间、在约150mg与约450mg之间、在约150mg与约400mg之间、在约150mg与约350mg之间、在约150mg与约300mg之间、在约150mg与约250mg之间、在约150mg与约200mg之间、在约200mg与600mg之间、在约200mg与约550mg之间、在约200mg与约500mg之间、在约200mg与约450mg之间、在约200mg与约400mg之间、在约200mg与约350mg之间、在约200mg与约300mg之间、在约200mg与约250mg之间、在约250mg与600mg之间、在约250mg与约550mg之间、在约250mg与约500mg之间、在约250mg与约450mg之间、在约250mg与约400mg之间、在约250mg与约350mg之间、在约250mg与约300mg之间、在约300mg与600mg之间、在约300mg与约550mg之间、在约300mg与约500mg之间、在约300mg与约450mg之间、在约300mg与约400mg之间、在约300mg与约350mg之间、在约350mg与600mg之间、在约350mg与约550mg之间、在约350mg与约500mg之间、在约350mg与约450mg之间、在约350mg与约400mg之间、在约400mg与600mg之间、在约400mg与约550mg之间、在约400mg与约500mg之间、在约400mg与约450mg之间、在约450mg与600mg之间、在约450mg与约550mg之间、在约450mg与约500mg之间、在约500mg与约600mg之间、在约500mg与约550mg之间、或在约550mg与约600mg之间。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂的第一量在约140mg与约580mg之间。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的第一量在约180mg与约540mg之间。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的第一量是约240mg或约480mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的第一量是约240mg。在一些实施方案中，PD-1抑制剂的第一量是约480mg。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量。
在一些实施方案中，在第8、22和36天施用为或约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用为或约240mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体选自：纳武单抗、卡瑞利珠单抗、西米普利单抗、多塔利单抗、MEDI-0680、派姆单抗、斯巴达珠单抗、SSI-361、替雷利珠单抗或其组合。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
2)第二周期
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和任选地LAG3抑制剂)和T细胞疗法(例如CAR T细胞)，其中在第一周期和第二周期中施用检查点抑制剂疗法。
在一些实施方案中，在第二周期中施用至少一个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期中施用至少两个剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期中施用两个剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约六周与十周之间施用第二周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约八周施用第二周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约九周施用第二周期的第一剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在约第50天与约第65天之间施用第二周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第50天施用第二周期的第一剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第78天与第92天之间施用第二周期的第二剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在约第85天施用第二周期的第二剂量的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第57天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第85天施用一定剂量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第57天和第85天施用PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，对于第二周期的每个剂量，施用第二量的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量在约100mg与600mg之间、在约100mg与约550mg、在约100mg与约500mg、在约100mg与约450mg、在约100mg与约400mg、在约100mg与约350mg之间、在约100mg与约300mg之间、在约100mg与约250mg之间、在约100mg与约200mg之间、在约100mg与约150mg之间、在约150mg与600mg之间、在约150mg与约550mg之间、在约150mg与约500mg之间、在约150mg与约450mg之间、在约150mg与约400mg之间、在约150mg与约350mg之间、在约150mg与约300mg之间、在约150mg与约250mg之间、在约150mg与约200mg之间、在约200mg与600mg之间、在约200mg与约550mg之间、在约200mg与约500mg之间、在约200mg与约450mg之间、在约200mg与约400mg之间、在约200mg与约350mg之间、在约200mg与约300mg之间、在约200mg与约250mg之间、在约250mg与600mg之间、在约250mg与约550mg之间、在约250mg与约500mg之间、在约250mg与约450mg之间、在约250mg与约400mg之间、在约250mg与约350mg之间、在约250mg与约300mg之间、在约300mg与600mg之间、在约300mg与约550mg之间、在约300mg与约500mg之间、在约300mg与约450mg之间、在约300mg与约400mg之间、在约300mg与约350mg之间、在约350mg与600mg之间、在约350mg与约550mg之间、在约350mg与约500mg之间、在约350mg与约450mg之间、在约350mg与约400mg之间、在约400mg与600mg之间、在约400mg与约550mg之间、在约400mg与约500mg之间、在约400mg与约450mg之间、在约450mg与600mg之间、在约450mg与约550mg之间、在约450mg与约500mg之间、在约500mg与约600mg之间、在约500mg与约550mg之间、或在约550mg与约600mg之间。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量在约140mg与约580mg之间。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量在约180mg与约540mg之间。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量是约240mg或约480mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量是约240mg。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的第二量是约480mg。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
在一些实施方案中，在第57天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第57天和第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、22和36天施用为或约240mg的PD-1抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用为或约480mg的PD-1抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用为或约240mg的PD-1抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用为或约480mg的PD-1抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体选自：纳武单抗、卡瑞利珠单抗、西米普利单抗、多塔利单抗、MEDI-0680、派姆单抗、斯巴达珠单抗、SSI-361、替雷利珠单抗或其组合。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
2.抗LAG3抗体
a.组合物和配制品
在本文提供的组合治疗方法、组合、试剂盒和用途的一些实施方案中，所述组合疗法可以以一种或多种组合物来施用，例如，含有LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)和/或T细胞疗法(例如CAR T细胞疗法)的药物组合物。
在一些实施方案中，所述组合物(例如含有LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)的药物组合物)可以包括载体(如稀释剂、辅助剂、赋形剂或媒介物)，将所述一种或多种抑制剂和/或所述细胞与所述载体一起施用。合适的药物载体的例子描述于E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences”中。此类组合物将含有治疗有效量的LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，通常呈纯化形式)以及合适量的载体以提供用于向患者适当施用的形式。此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油和芝麻油。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。药物组合物可以含有一种或多种稀释剂、一种或多种辅助剂、一种或多种抗粘附剂、一种或多种粘合剂、一种或多种涂层、一种或多种填充剂、一种或多种调味剂、一种或多种颜料、一种或多种润滑剂、一种或多种助流剂、一种或多种防腐剂、一种或多种洗涤剂、一种或多种吸附剂、一种或多种乳化剂、一种或多种药物赋形剂、一种或多种pH缓冲剂或一种或多种甜味剂中的任何一种或多种及其组合。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是液体、固体、冻干粉末、呈凝胶形式和/或其组合。在一些方面，载体的选择部分取决于特定抑制剂和/或施用方法。
药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)；稳定剂和/或防腐剂。含有LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)的组合物也可以是冻干的。
在一些实施方案中，可以将所述药物组合物配制成用于通过本领域技术人员已知的任何途径施用，包括肌内、静脉内、真皮内、病灶内、腹膜内注射、皮下、肿瘤内、硬膜外、经鼻、口服、经阴道、经直肠、外用(topical)、局部(local)、经耳、吸入、经颊(例如，舌下)以及透皮施用或任何途径。在一些实施方案中，也考虑了其他施用方式。在一些实施方案中，施用是通过推注输注，通过注射，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜递送。在一些实施方案中，施用是通过肠胃外、肺内和鼻内施用，并且如果需要局部治疗，则通过病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。
在一些实施方案中，组合物还可以与其他生物活性剂一起施用，依序地、间歇地或在同一组合物中。在一些实施方案中，施用还可以包括控释系统，包括控释配制品和装置控释，如借助泵。在一些实施方案中，施用是口服施用。
在一些实施方案中，LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)通常以单位剂型或多剂型配制和施用。每个单位剂量含有足以产生所需治疗效果的预定量的治疗活性LAG3抑制剂(例如瑞拉利单抗)，与所需的药物载体、媒介物或稀释剂结合。在一些实施方案中，单位剂型包括但不限于含有适量的LAG3抑制剂(例如瑞拉利单抗)的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液或悬浮液以及口服溶液或悬浮液和油水乳液。单位剂型可以容纳在安瓿和注射器中或单独包装的片剂或胶囊中。单位剂型可以按其分数或倍数施用。在一些实施方案中，多剂量形式是包装在单个容器中的待以分离的单位剂型施用的多个相同的单位剂型。多剂量形式的例子包括小瓶、片剂或胶囊瓶或者品脱或加仑瓶。
在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂配制为单一组合物。在一些实施方案中，向所述受试者同时施用所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂包括施用包含所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂的单一组合物。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约15分钟、为或约30分钟、为或约45分钟、为或约60分钟、为或约75分钟、或为或约90分钟内一起施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约15分钟内一起施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约30分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约45分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约60分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约75分钟内施用。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单一组合物在为或约90分钟内施用。
在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂作为单独的组合物依序施用。在一些实施方案中，配制包含所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂中的一种的第一组合物用于施用，并且配制包含所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂中的另一种的第二组合物用于施用。因此，在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂和所述LAG3的施用包括施用多种单独的组合物。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约15分钟、为或约30分钟、为或约45分钟、或为或约60分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约15分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约30分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约45分钟内施用。
在一些实施方案中，所述第二组合物的施用在所述第一组合物施用完成后为或约5分钟、为或约10分钟、为或约15分钟、为或约20分钟、为或约25分钟、为或约30分钟、为或约35分钟、为或约40分钟、或为或约45分钟开始。在一些实施方案中，所述第二组合物的施用在所述第一组合物施用完成后为或约15分钟开始。在一些实施方案中，所述第二组合物的施用在所述第一组合物施用完成后为或约30分钟开始。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述PD-1抑制剂。在一些实施方案中，所述第二组合物包含为或约960mg的LAG3抑制剂，并且在施用包含所述PD-1抑制剂的第一组合物后为或约30分钟施用。
在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约30分钟、为或约45分钟、为或约60分钟、或为或约75分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约45分钟、为或约60分钟、或为或约75分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约30分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约45分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约60分钟内施用。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约75分钟内施用。
在一些实施方案中，首先施用包含所述PD-1抑制剂的组合物。在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在为或约30分钟内施用。在一些实施方案中，在所述PD-1抑制剂的施用结束后约15分钟与约30分钟之间，开始施用包含所述LAG3抑制剂的组合物。在一些实施方案中，包含所述LAG3抑制剂的组合物在为或约30分钟内施用。因此，在一些实施方案中，包含所述PD-1抑制剂的组合物在约30分钟内施用，并且在所述PD-1抑制剂的施用结束后约15分钟与30分钟之间，在随后的30分钟内施用包含所述LAG3抑制剂的组合物。
b.给药
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)和T细胞疗法(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在开始T细胞疗法(例如CAR T细胞)之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在开始施用T细胞疗法(CAR T细胞)之后约1天与约3周之间开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)在开始施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)之后约一周与约两周之间。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在第1天开始施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第2天与第20天之间开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第8天或第15天开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第8天开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第15天开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。
在一些实施方案中，所述方法涉及在T细胞疗法的细胞(例如CAR T细胞)引起的激活诱导的细胞死亡(AICD)达到峰值之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂和LAG3抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量的PD-1抑制剂和至少两个剂量的LAG3抑制剂，其中：(i)第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和(ii)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)施用一定剂量的PD-1抑制剂和一定剂量的LAG3抑制剂，其量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的量在为或约160mg与560mg之间。
在一些实施方案中，所述方法包括约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括约每两周一次(Q2W)施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括约每四周一次(Q4W)施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括以给药方案向受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的PD-1抑制剂的相同日的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第2天与第20天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天与第15天之间(包含端值)施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，独立地施用第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间(包含端值)施用。在一些实施方案中，在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在约60mg与约540mg之间，包含端值。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在约120mg与约480mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量是约120mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量是约480mg。
在一些实施方案中，施用至少三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，施用三个剂量、四个剂量或六个剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，施用三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一剂量的LAG3抑制剂之后约四周施用第二剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，在第二剂量的LAG3抑制剂之后约五周施用第三剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8、36和71天中的每一天施用约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第二剂量的LAG3抑制剂之后约四周施用第三剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、43和71天中的每一天施用约240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，施用四个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，在第8、36、64和85天中的每一天施用约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、43、64和85天中的每一天施用约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约480mg。在一些实施方案中，在第8、36、64和85天中的每一天施用约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、43、64和85天中的每一天施用约480mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，施用六个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的LAG3抑制剂之后约两周施用第二和第三剂量中的每一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的LAG3抑制剂之后约两周施用第二、第三、第五和第六剂量中的每一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在先前剂量的LAG3抑制剂之后约三周施用第四剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约120mg。在一些实施方案中，在第8、22、36、57、71和85天中的每一天施用约120mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，在第8、22、36、57、71和85天中的每一天施用约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，每两周一次(Q2W)施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约120mg。在一些实施方案中，在第15、29、43、57、71和85天中的每一天施用约120mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。在一些实施方案中，在第15、29、43、57、71和85天中的每一天施用约240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，以相同的频率施用所述PD-1抑制剂的各个剂量和所述LAG3抑制剂的各个剂量。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用，或所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用，并且所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的各个剂量的施用频率是所述PD-1抑制剂的各个剂量的施用频率的一半。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量是所述LAG3抑制剂的剂量的两倍。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂的每个剂量与所述LAG3抑制剂的剂量相同。在一些实施方案中，将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂配制在单一组合物中，如章节I.A.4中所述。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约160mg与为或约320mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约240mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约400mg与为或约560mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约480mg的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约880mg与为或约1040mg之间的量施用。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量以为或约960mg的量施用。
在一些实施方案中，Q2W施用约240mg或约480mg量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，Q2W施用约240mg的量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，Q2W施用约480mg的量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，Q4W施用约960mg的量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第一周期和第二周期中施用LAG3抑制剂，如下文进一步所描述的。
1)第一周期
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)和T细胞疗法(例如CAR T细胞)，其中在第一周期和第二周期中施用检查点抑制剂疗法。
在一些实施方案中，在第一周期中施用至少一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用至少两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用至少三个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第一周期中施用三个剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在施用T细胞疗法之后施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约1天与三周之间施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约一周施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约两周施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在约第2天与约第20天之间施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在约第8天或约第15天施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在约第8天施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在约第15天施用第一周期的第一剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、15、22、29、36和/或43天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第22天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第29天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第36天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第43天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8、22和36天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用一定剂量的LAG3。
在一些实施方案中，对于第一周期的每个剂量，施用第一量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在约100mg与约1050mg之间、在约100mg与约1000mg之间、在约100mg与约900mg之间、在约100mg与约850mg之间、在约100mg与约800mg之间、在约100mg与约750mg之间、在约100mg与约700mg之间、在约100mg与约650mg之间、在约100mg与600mg之间、在约100mg与约550mg之间、在约100mg与约500mg之间、在约100mg与约450mg之间、在约100mg与约400mg之间、在约100mg与约350mg之间、在约100mg与约300mg之间、在约100mg与约250mg之间、在约100mg与约200mg之间、在约100mg与约150mg之间、在约150mg与约1050mg之间、在约150mg与约1000mg之间、在约150mg与约900mg之间、在约150mg与约850mg之间、在约150mg与约800mg之间、在约150mg与约750mg之间、在约150mg与约700mg之间、在约150mg与约650mg之间、在约150mg与600mg之间、在约150mg与约550mg之间、在约150mg与约500mg之间、在约150mg与约450mg之间、在约150mg与约400mg之间、在约150mg与约350mg之间、在约150mg与约300mg之间、在约150mg与约250mg之间、在约150mg与约200mg之间、在约200mg与约1050mg之间、在约200mg与约1000mg之间、在约200mg与约900mg之间、在约200mg与约850mg之间、在约200mg与约800mg之间、在约200mg与约750mg之间、在约200mg与约700mg之间、在约200mg与约650mg之间、在约200mg与600mg之间、在约200mg与约550mg之间、在约200mg与约500mg之间、在约200mg与约450mg之间、在约200mg与约400mg之间、在约200mg与约350mg之间、在约200mg与约300mg之间、在约200mg与约250mg之间、在约250mg与约1050mg之间、在约250mg与约1000mg之间、在约250mg与约900mg之间、在约250mg与约850mg之间、在约250mg与约800mg之间、在约250mg与约750mg之间、在约250mg与约700mg之间、在约250mg与约650mg之间、在约250mg与600mg之间、在约250mg与约550mg之间、在约250mg与约500mg之间、在约250mg与约450mg之间、在约250mg与约400mg之间、在约250mg与约350mg之间、在约250mg与约300mg之间、在约300mg与约1050mg之间、在约300mg与约1000mg之间、在约300mg与约900mg之间、在约300mg与约850mg之间、在约300mg与约800mg之间、在约300mg与约750mg之间、在约300mg与约700mg之间、在约300mg与约650mg之间、在约300mg与600mg之间、在约300mg与约550mg之间、在约300mg与约500mg之间、在约300mg与约450mg之间、在约300mg与约400mg之间、在约300mg与约350mg之间、在约350mg与约1050mg之间、在约350mg与约1000mg之间、在约350mg与约900mg之间、在约350mg与约850mg之间、在约350mg与约800mg之间、在约350mg与约750mg之间、在约350mg与约700mg之间、在约350mg与约650mg之间、在约350mg与600mg之间、在约350mg与约550mg之间、在约350mg与约500mg之间、在约350mg与约450mg之间、在约350mg与约400mg之间、在约400mg与约1050mg之间、在约400mg与约1000mg之间、在约400mg与约900mg之间、在约400mg与约850mg之间、在约400mg与约800mg之间、在约400mg与约750mg之间、在约400mg与约700mg之间、在约400mg与约650mg之间、在约400mg与600mg之间、在约400mg与约550mg之间、在约400mg与约500mg之间、在约400mg与约450mg之间、在约450mg与约1050mg之间、在约450mg与约1000mg之间、在约450mg与约900mg之间、在约450mg与约850mg之间、在约450mg与约800mg之间、在约450mg与约750mg之间、在约450mg与约700mg之间、在约450mg与约650mg之间、在约450mg与600mg之间、在约450mg与约550mg之间、在约450mg与约500mg之间、在约500mg与约600mg之间、在约500mg与约550mg之间、或在约550mg与约600mg之间。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在约140mg与约1040mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在约180mg与约1000mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在约180mg与约300mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是约240mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在约380mg与560mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是约480mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在约840mg与1060mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是约960mg。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；以及(3)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；以及(3)以给药方案向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的PD-1抑制剂的同一天中的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；以及(3)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；以及(3)以给药方案向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的PD-1抑制剂的同一天中的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的每个剂量在第一周期期间以第一量施用并且在第二周期期间以第二量施用。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约160mg与为或约320mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约200mg与为或约280mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约240mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约400mg与为或约560mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约440mg与为或约520mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约880mg与为或约1040mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量在为或约920mg与为或约1000mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第一量是为或约960mg。
在一些实施方案中，在第8、22和36天施用为或约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8、22和36天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用为或约240mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂是抗LAG3抗体。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体选自：瑞拉利单抗、MK-4280和埃拉利单抗或其组合。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。
2)第二周期
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用检查点抑制剂疗法(例如PD-1抑制剂和LAG3抑制剂)和T细胞疗法(例如CAR T细胞)，其中在第一周期和第二周期中施用检查点抑制剂疗法。
在一些实施方案中，在第二周期中施用至少一个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期中施用至少两个剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第二周期中施用两个剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约六周与十周之间施用第二周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约八周施用第二周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在开始施用T细胞疗法之后约九周施用第二周期的第一剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第1天施用T细胞疗法。在一些实施方案中，在约第50天与约第65天之间施用第二周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在约第50天施用第二周期的第一剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在约第78天与第92天之间施用第二周期的第二剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在约第85天施用第二周期的第二剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第57天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第85天施用一定剂量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第57天和第85天施用LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，对于第二周期的每个剂量，施用第二量的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在约300mg与1100mg之间、约300mg与1000mg之间、在约300mg与900mg之间、在约300mg与800mg之间、在约300mg与700mg之间、在约300mg与600mg之间、在约300mg与约550mg之间、在约300mg与约500mg之间、在约300mg与约450mg之间、在约400mg与1100mg之间、在约400mg与1000mg之间、在约400mg与900mg之间、在约400mg与800mg之间、在约400mg与700mg之间、在约400mg与600mg之间、在约400mg与约550mg之间、在约400mg与约500mg之间、在约400mg与约450mg之间、在约500mg与1100mg之间、在约500mg与1000mg之间、在约500mg与900mg之间、在约500mg与800mg之间、在约500mg与700mg之间、在约500mg与约600mg之间、在约500mg与约550mg之间、在约600mg与1100mg之间、在约600mg与1000mg之间、在约600mg与900mg之间、在约600mg与800mg之间、在约600mg与700mg之间、在约700mg与1100mg之间、在约700mg与1000mg之间、在约700mg与900mg之间、在约700mg与800mg之间、在约800mg与1100mg之间、在约800mg与1000mg之间、在约800mg与900mg之间、在约900mg与1100mg之间、在约1000mg与1000mg之间、或在约1000mg与1100mg之间。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在约360mg与约1080mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在约880mg与约1040mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量是约960mg。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量在约360mg与约540mg之间。在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂的第二量是约480mg。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量；以及(3)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间(包含端值)施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约140mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量；以及(3)以给药方案向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的PD-1抑制剂的同一天中的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量；以及(3)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；和(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间(包含端值)的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量；以及(3)以给药方案向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的PD-1抑制剂的同一天中的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第57天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第57天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第57天和第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第57天和第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，在第8、22和36天施用为或约240mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8、22和36天施用为或约480mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用为或约480mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第8天和第36天施用为或约960mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用为或约240mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15、29和43天施用为或约480mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用为或约480mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约480mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，在第15天施用为或约960mg的LAG3抑制剂，并且在第57天和第85天施用为或约960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述LAG3抑制剂是抗LAG3抗体。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体选自：瑞拉利单抗、MK-4280和埃拉利单抗或其组合。在一些实施方案中，所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。
3.给药
在一些实施方案中，以给药方案向受试者施用一定剂量的工程化细胞和检查点抑制剂疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合CD19抑制剂，所述给药方案包括(i)在第1天施用所述剂量的工程化细胞，和(ii)在第一和第二周期中施用PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体)，其中在约第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量，并且在约第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂。
在一些实施方案中，以给药方案向受试者施用一定剂量的工程化细胞和检查点抑制剂疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合CD19抑制剂，所述给药方案包括(i)在第1天施用所述剂量的工程化细胞，和(ii)在第一和第二周期中施用PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体)和LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体)，其中在约第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量，并且在约第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是480mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是960mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的LAG3抑制剂，其中所述第一量是480mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的LAG3抑制剂，其中所述第二量是960mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用960mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36和71天施用240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43和71天施用240mg。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第815、29、43、57、71和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：(i)施用第一量的PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；和(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用120mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用120mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用240mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的PD-1抑制剂；以及(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的LAG3抑制剂。
4.抗PD-1抗体和抗LAG3抗体共配制品
a.组合物和配制品
在本文提供的组合治疗方法、组合、试剂盒和用途的一些实施方案中，所述组合疗法可以以一种组合物来施用，例如，含有PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体，如纳武单抗)和LAG3抑制剂(例如抗LAG3抗体，如瑞拉利单抗)的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物含有纳武单抗和瑞拉利单抗。
在一些实施方案中，所述组合物(例如含有PD-1抑制剂和LAG3抑制剂(例如抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗)的药物组合物)可以包括载体(如稀释剂、辅助剂、赋形剂或媒介物)，将所述抑制剂与所述载体一起施用。合适的药物载体的例子描述于E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences”中。此类组合物将含有治疗有效量的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂(例如抗PD-1抗体和抗LAG3抗体，通常呈纯化形式)以及合适量的载体以提供用于向患者适当施用的形式。此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油和芝麻油。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。药物组合物可以含有一种或多种稀释剂、一种或多种辅助剂、一种或多种抗粘附剂、一种或多种粘合剂、一种或多种涂层、一种或多种填充剂、一种或多种调味剂、一种或多种颜料、一种或多种润滑剂、一种或多种助流剂、一种或多种防腐剂、一种或多种洗涤剂、一种或多种吸附剂、一种或多种乳化剂、一种或多种药物赋形剂、一种或多种pH缓冲剂或一种或多种甜味剂中的任何一种或多种及其组合。在一些实施方案中，所述药物组合物可以是液体、固体、冻干粉末、呈凝胶形式和/或其组合。在一些方面，载体的选择部分取决于特定抑制剂和/或施用方法。
药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)；稳定剂和/或防腐剂。含有PD-1抑制剂和LAG3抑制剂(例如，抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))的组合物也可以是冻干的。
在一些实施方案中，可以将所述药物组合物配制成用于通过本领域技术人员已知的任何途径施用，包括肌内、静脉内、真皮内、病灶内、腹膜内注射、皮下、肿瘤内、硬膜外、经鼻、口服、经阴道、经直肠、外用(topical)、局部(local)、经耳、吸入、经颊(例如，舌下)以及透皮施用或任何途径。在一些实施方案中，也考虑了其他施用方式。在一些实施方案中，施用是通过推注输注，通过注射，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜递送。在一些实施方案中，施用是通过肠胃外、肺内和鼻内施用，并且如果需要局部治疗，则通过病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，所述药物组合物可以被配制用于静脉内(IV)施用。在一些实施方案中，所述药物组合物含有纳武单抗和瑞拉利单抗并且被配制用于IV施用。
在一些实施方案中，组合物还可以与其他生物活性剂一起施用，依序地、间歇地或在同一组合物中。在一些实施方案中，施用还可以包括控释系统，包括控释配制品和装置控释，如借助泵。在一些实施方案中，施用是口服施用。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂和LAG3抑制剂(例如，抗PD-1抗体(如纳武单抗)和抗LAG3抗体(如瑞拉利单抗))通常以单位剂型或多剂型配制和施用。每个单位剂量含有足以产生所需治疗效果的预定量的治疗活性PD-1抑制剂和LAG3抑制剂(例如纳武单抗和瑞拉利单抗)，与所需的药物载体、媒介物或稀释剂结合。在一些实施方案中，单位剂型包括但不限于含有适量的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂(例如纳武单抗和瑞拉利单抗)的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液或悬浮液以及口服溶液或悬浮液和油水乳液。单位剂型可以容纳在安瓿和注射器中或单独包装的片剂或胶囊中。单位剂型可以按其分数或倍数施用。在一些实施方案中，多剂量形式是包装在单个容器中的待以分离的单位剂型施用的多个相同的单位剂型。多剂量形式的例子包括小瓶、片剂或胶囊瓶或者品脱或加仑瓶。
b.给药
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及向受试者施用(1)检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的单一组合物)；和(2)T细胞疗法(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在开始T细胞疗法(例如CAR T细胞)之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在开始施用T细胞疗法(CAR T细胞)之后约1天与约3周之间开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。在一些实施方案中，开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)在开始施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)之后约一周与约两周之间。
在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在第1天开始施用T细胞疗法(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第2天与第20天之间开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第8天或第15天开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第8天开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。在一些实施方案中，所提供的组合治疗方法涉及在约第15天开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。
在一些实施方案中，所述方法涉及在T细胞疗法的细胞(例如CAR T细胞)引起的激活诱导的细胞死亡(AICD)达到峰值之后开始施用检查点抑制剂疗法(例如，包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物)。
在一些实施方案中，所提供的组合疗法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)向所述受试者施用包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含纳武单抗和瑞拉利单抗。在一些实施方案中，约每四周一次(Q4W)向受试者施用包含纳武单抗和瑞拉利单抗的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含480mg纳武单抗和160mg瑞拉利单抗。在一些实施方案中，约每四周一次(Q4W)向受试者施用包含480mg纳武单抗和160mg瑞拉利单抗的组合物。在一些实施方案中，Q4W施用所述组合物，直至出现疾病进展或不可接受的毒性。在一些实施方案中，Q4W施用所述组合物，直至出现疾病进展。在一些实施方案中，Q4W施用所述组合物，直至出现不可接受的毒性。
在一些实施方案中，所述治疗受试者的方法包括：(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；和(2)每四周一次(Q4W)向所述受试者施用480mg的PD-1抑制剂和160mg的LAG3抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的施用是通过静脉内(i.v.)施用包含PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的单一组合物来进行的。
B.细胞疗法的施用
1.T细胞接合疗法
在一些实施方案中，所述T细胞疗法是或包括T细胞接合疗法，所述T细胞接合疗法是或包含能够结合T细胞上表达的表面分子的结合分子。在一些实施方案中，所述表面分子是T细胞的激活组分，如T细胞受体复合物的组分。在一些实施方案中，所述表面分子是CD3或者是CD2。在一些实施方案中，所述T细胞接合疗法是或包含抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述T细胞接合疗法是双特异性抗体，其含有与T细胞的激活组分(例如，T细胞表面分子，例如CD3或CD2)结合的至少一个抗原结合结构域以及与靶细胞上的表面抗原(如肿瘤或癌细胞上的表面抗原，例如如本文所述的所列出抗原中的任一种，例如CD19)结合的至少一个抗原结合结构域。在一些实施方案中，这种抗体与其两个靶标的同时或几乎同时结合可以导致靶细胞与T细胞之间的短暂相互作用，从而导致所述T细胞的激活(例如细胞毒性活性)和随后所述靶细胞的裂解。
在一些实施方案中，双特异性T细胞接合器(BiTE)与所提供的方法、用途、制品结合使用。在一些实施方案中，双特异性T细胞接合器对两种特定抗原(或标记或配体)具有特异性。在一些实施方案中，所述抗原在特定类型的细胞的表面上表达。在特定实施方案中，第一抗原与免疫细胞或工程化免疫细胞相关，并且第二抗原与特定疾病或病症(如癌症)的靶细胞相关。
产生双特异性T细胞接合器的多种方法是已知的，包括两种不同杂交瘤的融合(Milstein和Cuello,Nature 1983；305:537--540)，以及经由异双功能交联剂的化学栓系(Staerz等人Nature 1985；314:628-631)。示例性双特异性抗体T细胞接合分子包括含有以下的那些：通过柔性接头融合的串联scFv分子(参见例如，Nagorsen和Bauerle,Exp CellRes317,1255-1260(2011))；经由例如柔性接头彼此融合的串联scFv分子，并且其还含有由能够稳定缔合的第一和第二亚基构成的Fc结构域(WO 2013026837)；双抗体及其衍生物，包括串联双抗体(Holliger等人,Prot Eng 9,299-305(1996)；Kipriyanov等人,J MolBiol293,41-66(1999))；双亲和重靶向(DART)分子，其可以包括具有C末端二硫桥的双抗体形式；或者包括完整的杂合小鼠/大鼠IgG分子的三功能单抗(triomab)(Seimetz等人,Cancer Treat Rev 36,458-467(2010))。
在某些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器是由多肽构建体编码的分子。在某些实施方案中，所述多肽构建体含有第一组分，所述第一组分包含结合免疫细胞或工程化免疫细胞的激活部分的抗原结合结构域；以及第二组分，所述第二组分包含结合与特定疾病或病症(例如癌症)相关的表面抗原(例如靶标或肿瘤相关抗原(TAA))的抗原结合结构域。在一些实施方案中，所述第一组分和第二组分通过接头偶联。在一些实施方案中，所述第一组分与编码CD33信号肽的前导序列偶联。
在一些实施方案中，所述多肽是从N末端至C末端含有以下的构建体：第一组分，所述第一组分包含结合T细胞的激活部分的抗原结合结构域；肽接头；以及第二组分，所述第二组分包含结合与疾病或病症(例如癌症)相关的表面抗原(例如靶标或肿瘤相关抗原(TAA))的抗原结合结构域。
在一些方面，T细胞的激活组分是T细胞表面分子，如CD3或CD2。在一些实施方案中，所述靶细胞的表面抗原是肿瘤相关抗原(TAA)。在一些方面，所述TAA含有一个或多个表位。在一些实施方案中，所述肽接头是或包含可裂解肽接头。
在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器的第一组分的抗原结合结构域在肿瘤周围接合内源免疫细胞上的受体。在一些实施方案中，所述内源免疫细胞是T细胞。在一些方面，所述内源T细胞受体的接合将所述内源T细胞重定向至所述肿瘤。在一些方面，所述内源T细胞受体的接合将肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)募集至所述肿瘤。在一些方面，所述内源T细胞受体的接合激活内源免疫库。
在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器与其两个靶标(例如免疫细胞和TAA)的同时或几乎同时结合可以导致靶细胞与T细胞之间的短暂相互作用，从而导致T细胞的激活(例如细胞毒性活性、细胞因子释放)和随后的靶细胞裂解。
在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器的第一组分是或包含结合T细胞的激活组分的抗原结合结构域。在一些实施方案中，所述T细胞的激活组分是表面分子。在一些实施方案中，所述表面分子是或包含T细胞抗原。示例性T细胞抗原包括但不限于CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD44、CD45、CD69和CD90。在一些方面，所述双特异性T细胞接合分子与T细胞抗原的结合刺激和/或激活所述T细胞。
在一些实施方案中，所述抗T细胞结合结构域包括选自以下的抗体或其抗原结合片段：Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv、scAb、dAb、单结构域重链抗体和单结构域轻链抗体。
在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器上的T细胞结合结构域是抗CD3结构域。在一些方面，所述抗CD3结构域是scFv。在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器的抗CD3结构域与T细胞上的受体上的CD3复合物的亚基结合。在一些方面，所述受体位于内源T细胞上。在一些实施方案中，所述受体位于工程化免疫细胞上，所述工程化免疫细胞还表达重组受体。T细胞的CD3接合的作用是本领域中熟知的，并且包括但不限于T细胞激活和其他下游细胞信号传导。此类双特异性T细胞接合器中的任一种可以用于本文提供的公开文本中。
在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器的第二组分是肿瘤或癌症抗原，所述第二组分包含结合与疾病或病症相关的表面抗原的抗原结合结构域。在一些实施方案中，由所述双特异性T细胞接合器靶向的抗原包括在要通过过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的情况下表达的那些抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌症、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如B型白血病、T型白血病和髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述抗原包括αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、截短的表皮生长因子蛋白(tEGFR)、表皮生长因子受体III型突变体(EGFRvIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、Lewis Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、肾母细胞瘤1(WT-1)、病原体特异性或病原体表达抗原、或与通用标签相关的抗原，和/或生物素化分子，和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些实施方案中，所述抗原是CD19。
在一些实施方案中，两个抗原结合结构域(包括第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域)包含抗体或抗原结合片段。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括抗原结合的片段(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv)或片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、完全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。该术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类的抗体，包括IgG及其亚类IgM、IgE、IgA和IgD。
在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(Fab、F(ab')2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在其他实施方案中，抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别是IgG1(例如，人IgG1)。在另一个实施方案中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体中结合完整抗体所结合抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和单结构域VH单一抗体；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链中参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个CDR。(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007)。单一VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
单结构域抗体(sdAb)是包含抗体的重链可变结构域的全部或一部分或轻链可变结构域的全部或一部分的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器包含特异性结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原如癌症标记或要靶向的细胞或疾病(如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，如本文所述或已知的任何靶抗原。示例性的单结构域抗体包括sdFv、纳米抗体、VHH或VNAR。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区域或链的那些)，和/或可能并非通过对天然存在的完整抗体进行酶消化产生的片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基都源自非人CDR并且所有或基本上所有FR氨基酸残基都源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其已经经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲代非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
在某些实施方案中，所述抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述scFv是含有重链和轻链的串联scFv。在一些实施方案中，所述重链和轻链通过肽接头来连接。在一些实施方案中，所述接头主要由丝氨酸和甘氨酸构成。在一些方面，重链与轻链的连接形成单一多肽抗原结合结构域。
在某些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器的第一抗原结合结构域是抗CD3scFv。在某些实施方案中，所述双特异性T细胞接合器的第二抗原结合结构域是抗CD19scFv。
在一些方面，所述双特异性T细胞接合器多肽构建体含有接头，所述接头接合第一组分与第二部分，所述第一部分包含结合T细胞的激活部分的抗原结合结构域，所述第二组分包含结合与特定疾病或病症相关的表面抗原(例如靶标或肿瘤相关抗原(TAA))的抗原结合结构域。在一些方面，所述接头是短接头、中等接头或长接头。
在一些实施方案中，所述接头是可切割肽接头。在一些方面，所述可切割接头包括作为蛋白酶底物的序列。在一些实施方案中，所述序列包含可以在体内条件下断裂的键。在一些情形中，所述接头序列由生理环境中存在的蛋白酶选择性裂解。在一些方面，所述环境与肿瘤微环境是分离的。在一些实施方案中，所述蛋白酶发现于肿瘤周围。
在一些实施方案中，所述选择性可切割接头由如下蛋白酶切割，所述蛋白酶是由不与肿瘤共定位的细胞产生的。在一些实施方案中，所述选择性可切割接头不被在肿瘤微环境附近的蛋白酶切割。在一些实施方案中，所述蛋白酶裂解所述接头使所述双特异性T细胞接合分子失活。在一些实施方案中，所述蛋白酶发现于受试者的循环血液中。在一些实施方案中，所述蛋白酶是内在或外在凝血途径的一部分。在一些方面，所述蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。在一些方面，所述蛋白酶包括但不限于凝血酶、因子X、因子XI、因子XII和纤溶酶。
此类示例性双特异性抗体T细胞接合器包括双特异性T细胞接合器(BiTE)分子，其含有通过柔性接头融合的串联scFv分子(参见例如，Nagorsen和Bauerle,Exp CellRes317,1255-1260(2011))、通过例如柔性接头彼此融合的串联scFv分子，并且还含有由能够稳定缔合的第一和第二亚基组成的Fc结构域(WO 2013026837)；双抗体及其衍生物，包括串联双抗体(Holliger等人,Prot Eng 9,299-305(1996)；Kipriyanov等人,J Mol Biol293,41-66(1999))；双亲和重靶向(DART)分子，其可以包括具有C末端二硫桥的双抗体形式；或者包括完整的杂交体小鼠/大鼠IgG分子的三功能单抗(Seimetz等人,Cancer TreatRev 36,458-467(2010))。在一些实施方案中，所述T细胞接合疗法是博纳吐单抗或AMG330。任何此类T细胞接合器可以用于所提供的方法中。
所述免疫系统刺激剂和/或所述T细胞接合疗法可以通过任何合适的方式来施用，例如，通过推注输注，通过注射，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜递送。在一些实施方案中，通过以下方式来施用所述免疫疗法：肠胃外、肺内和鼻内，并且，如果局部治疗需要，则进行病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内、胸腔内、颅内或皮下施用。
在某些实施方案中，施用一个或多个剂量的T细胞接合疗法。在特定实施方案中，施用在或在约0.001μg与约5,000μg之间(包含端值)的T细胞接合疗法。在特定实施方案中，施用在或在约0.001μg与1,000μg之间、0.001μg至1μg之间、0.01μg至1μg之间、0.1μg至10μg之间、0.01μg至1μg之间、0.1μg与5μg之间、0.1μg与50μg之间、1μg与100μg之间、10μg与100μg之间、50μg与500μg之间、100μg与1,000μg之间、1,000μg与2,000μg之间或2,000μg与5,000μg之间的T细胞接合疗法。在一些实施方案中，所述T细胞接合疗法的剂量是或包括在或在约0.01μg/kg与100mg/kg之间、0.1μg/kg与10μg/kg之间、10μg/kg与50μg/kg之间、50μg/kg与100μg/kg之间、0.1mg/kg与1mg/kg之间、1mg/kg与10mg/kg之间、10mg/kg与100mg/kg之间、100mg/kg与500mg/kg之间、200mg/kg与300mg/kg之间、100mg/kg与250mg/kg之间、200mg/kg与400mg/kg之间、250mg/kg与500mg/kg之间、250mg/kg与750mg/kg之间、50mg/kg与750mg/kg之间、1mg/kg与10mg/kg之间、或100mg/kg与1,000mg/kg之间，每个数值均包含端值。在一些实施方案中，所述T细胞接合疗法的剂量为至少或至少约或者为或为约0.1μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、70μg/kg、80μg/kg、90μg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg、700mg/kg、800mg/kg、900mg/kg、或1,000mg/kg。在特定实施方案中，按以下方式来施用所述T细胞接合疗法：口服、静脉内、腹膜内、透皮、鞘内、肌内、鼻内、经粘膜、皮下或经直肠。
2.细胞疗法
在一些实施方案中，所述T细胞疗法是基于细胞的疗法，是或包括施用靶向在病灶(如肿瘤或癌症)表面上表达的分子的细胞，如免疫细胞，例如T细胞。在一些方面，所述细胞疗法是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或表达重组受体的细胞疗法(其是T细胞疗法，任选地是表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞疗法)。在一些实施方案中，所述T细胞疗法包括施用被工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。在一些方面，所述T细胞疗法是过继T细胞疗法，其包含特异性识别和/或靶向与癌症相关的抗原(如与B细胞恶性肿瘤(例如淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤(NHL))相关的抗原)的T细胞。在一些方面，所述T细胞疗法包含用嵌合抗原受体(CAR)工程化的T细胞，所述嵌合抗原受体包含与抗原结合(如特异性地结合)的抗原结合结构域。在一些情况下，由所述T细胞疗法靶向的抗原是CD19。
在一些实施方案中，所述免疫细胞表达T细胞受体(TCR)或其他抗原结合受体。在一些实施方案中，所述免疫细胞表达重组受体，如转基因TCR或嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述细胞对于所述受试者是自体的。在一些实施方案中，所述细胞对于所述受试者是同种异体的。下文描述了用于所提供的方法的示例性的此类细胞疗法(例如T细胞疗法)。
在一些实施方案中，所提供的细胞表达和/或被工程化以表达受体，如重组受体，包括含有配体结合结构域或其结合片段的那些受体；和T细胞受体(TCR)及其组分；和/或功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述重组受体含有特异性结合抗原的细胞外配体结合结构域。在一些实施方案中，所述重组受体是CAR，其含有特异性结合抗原的细胞外抗原识别结构域。在一些实施方案中，所述配体(如抗原)是在细胞表面上表达的蛋白质。在一些实施方案中，所述CAR是TCR样CAR，并且所述抗原是加工过的肽抗原，如细胞内蛋白的肽抗原，其与TCR一样在主要组织相容性复合物(MHC)分子的背景下在细胞表面上被识别。
在一些实施方案中，用于所提供的方法中或与所提供的方法结合施用的细胞含有或被工程化以含有工程化受体，例如工程化抗原受体(如嵌合抗原受体(CAR))或T细胞受体(TCR)。所述组合物包括用于施用(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物向受试者(例如患者)施用所述细胞和组合物的治疗方法。
所述工程化细胞(包括含有重组受体的工程化细胞)描述于下文章节II中。示例性重组受体(包括CAR和重组TCR)以及将所述受体工程化并引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO 2012/129514、WO 2014031687、WO 2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061，美国专利申请公开号US2002131960、US2013287748、US20130149337，美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118，以及欧洲专利申请号EP2537416；和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人,Cancer Discov.2013年4月；3(4):388-398；Davila等人(2013)PLoSONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18(2):160-75。在一些方面，所述基因工程化抗原受体包括CAR，如美国专利号7,446,190中所述的，以及国际专利申请公开号WO/2014055668A1中所述的那些。
靶向CD19的示例性CAR T细胞疗法包括在以下临床试验中研究过或正在研究的那些：NCT02644655、NCT03744676、NCT01087294、NCT03366350、NCT03790891、NCT03497533、NCT04007029、NCT03960840、NCT04049383、NCT04094766、NCT03366324、NCT02546739、NCT03448393、NCT03467256、NCT03488160、NCT04012879、NCT03016377、NCT03468153、NCT03483688、NCT03398967、NCT03229876、NCT03455972、NCT03423706、NCT03497533和NCT04002401，包括FDA批准的产品(利基迈仑赛(lisocabtagenemaraleucel))、TECARTUSTM(布瑞基奥仑塞(brexucabtagene autoleucel))、KYMRIAHTM(替沙仑赛(tisagenlecleucel))和YESCARTATM(阿基仑赛(axicabtagene ciloleucel))。示例性工程化细胞包括但不限于TECARTUSTM、KYMRIAHTM、YESCARTATM、UCART19和ALLO-501。在一些方面，所述工程化细胞包括Marofi等人,Front.Immunol.(2021)12:681984中所述的任一种，将该文献通过引用以其整体并入本文。
用于过继细胞疗法的细胞的施用方法是已知的，并且可以与所提供的方法、组合物和制品以及试剂盒组合使用。例如，过继T细胞治疗方法描述于例如以下文献中：Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev Clin Oncol.8(10):577-85。参见例如，Themeli等人(2013)NatBiotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如过继T细胞疗法)通过自体转移进行，其中从接受所述细胞疗法的受试者或从源自这个受试者的样品分离和/或以其他方式制备所述细胞。因此，在一些方面，所述细胞源自需要治疗的受试者(例如患者)，并且在分离和加工后向同一受试者施用所述细胞。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如过继T细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从将要接受或最终接受所述细胞疗法的受试者以外的受试者(例如第一受试者)分离和/或以其他方式制备所述细胞。在这样的实施方案中，然后向相同物种的不同受试者(例如第二受试者)施用所述细胞。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，第二受试者与第一受试者表达相同的HLA类别或超类型。
所述T细胞疗法的细胞可以在配制用于施用的组合物中施用，或可替代地在配制用于单独施用的多于一种组合物(例如两种组合物)中施用。所述一个或多个剂量的细胞可以包括特定数量或相对数量的细胞或所述工程化细胞，和/或所述组合物内两种或更多种亚型(如CD4与CD8T细胞)的限定比率或组合物。
可以通过任何合适的方式施用所述细胞。按用于实现治疗效果(如降低肿瘤负荷)的给药方案施用所述细胞。给药和施用可以部分取决于施用检查点抑制剂疗法的时间表，所述检查点抑制剂疗法可以在开始施用所述细胞疗法(如T细胞疗法，例如CAR T细胞疗法)之后施用。所述细胞疗法的各种给药时间表包括但不限于在不同时间点单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。
a.组合物和配制品
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞疗法的细胞(其包含用重组抗原受体(例如CAR或TCR)工程化的细胞)是作为组合物或配制品(如药物组合物或配制品)来提供。此类组合物可以根据所提供的方法使用和/或与所提供的制品或组合物一起使用，如用于B细胞恶性肿瘤(例如淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤(NHL))的治疗中。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对施用配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些实施方案中，用药学上可接受的载体配制T细胞疗法(如工程化T细胞(例如CAR T细胞))。在一些方面，载体的选择部分地由特定细胞或药剂和/或通过施用方法确定。因此，存在多种合适的配制品。例如，药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面，使用两种或更多种防腐剂的混合物。该防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如以下文献中：Remington’sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，在组合物中包括缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾以及各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001％至约4％的量存在。用于制备可施用的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；第21版(2005年5月1日)中。
所述配制品可以包括水溶液。所述配制品或组合物还可以含有可用于用细胞或药剂治疗的特定适应症、疾病或病症的超过一种活性成分，其中各自的活性彼此没有不利影响。此类活性成分以有效用于既定目的的量以组合形式适当地存在。因此，在一些实施方案中，所述药物组合物还包括其他药学活性剂或药物，如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。
在一些实施方案中，所述药物组合物含有有效治疗所述疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)的细胞。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗功效。对于数天或更长时间的重复施用，根据病症，重复进行治疗直至发生所希望的对疾病症状的抑制。然而，其他施用方案可能有用并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注施用所述组合物、通过多次推注施用所述组合物或通过连续输注施用所述组合物来递送。
可以使用标准施用技术、配制品和/或装置来施用所述细胞。提供了用于储存和施用所述组合物的配制品和装置，如注射器和小瓶。关于细胞，施用可以是自体的或异源的。例如，免疫反应细胞或祖细胞可以从一名受试者获得，并且将其施用至同一受试者或不同的相容受试者。外周血来源的免疫反应细胞或其后代(例如，体内、离体或体外来源的)可以通过局部注射施用，包括导管施用、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外施用。在施用治疗性组合物(例如，含有遗传修饰的免疫反应细胞的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂施用的那些。在一些实施方案中，肠胃外施用药剂或细胞群。如本文所用的术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹膜内施用。在一些实施方案中，使用通过静脉内、腹膜内或皮下注射的外周全身递送向受试者施用药剂或细胞群。
在一些实施方案中，组合物作为无菌液体制剂提供，例如等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其在一些方面可以缓冲至所选pH。液体制剂一般比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更易于制备。另外，液体组合物稍微更方便施用，特别是通过注射。另一方面，粘性组合物可以在适当的粘度范围内配制，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，所述载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过在溶剂中掺入细胞来制备，所述溶剂如与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。
用于体内施用的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌性。
b.给药
可以将T细胞疗法的细胞通过任何合适的方式施用，例如通过推注输注，通过注射，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜递送。在一些实施方案中，将它们通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给药来施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的单次推注给药来施用。在一些实施方案中，给定剂量通过例如在不超过3天的时间段内细胞的多次推注给药来施用，或通过细胞的连续输注给药来施用。在一些实施方案中，细胞剂量或任何其他疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)的施用经由门诊递送进行。
对于疾病的治疗，适当的剂量可以取决于要治疗的疾病类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、先前疗法、受试者的临床病史和对细胞的反应以及主治医师的决断。在一些实施方案中，以合适的方式一次或在一系列治疗中向受试者施用所述组合物和细胞。
在一些实施方案中，根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物向受试者施用一定剂量的细胞。在一些实施方案中，根据受试者的特定疾病或病症(例如癌症，例如B细胞恶性肿瘤)确定剂量的大小或时间安排。在一些情况下，可以根据所提供的描述凭经验确定用于特定疾病的剂量的大小或时间安排。
在一些实施方案中，细胞的剂量包含在为或约2x105个细胞/kg与为或约2x106个细胞/kg之间，如在为或约4x105个细胞/kg与为或约1x106个细胞/kg之间或在为或约6x105个细胞/kg与为或约8x105个细胞/kg之间。在一些实施方案中，细胞的剂量包含不超过2x105个细胞(例如，抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/千克受试者体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x105个细胞/kg、不超过或不超过约4x105个细胞/kg、不超过或不超过约5x105个细胞/kg、不超过或不超过约6x105个细胞/kg、不超过或不超过约7x105个细胞/kg、不超过或不超过约8x105个细胞/kg、不超过或不超过约9x105个细胞/kg、不超过或不超过约1x106个细胞/kg、或者不超过或不超过约2x106个细胞/kg。在一些实施方案中，细胞的剂量包含至少或至少约或为或约2x105个细胞(例如，抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/千克受试者体重(细胞/kg)，如至少或至少约或为或约3x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约4x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约5x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约6x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约7x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约8x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约9x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约1x106个细胞/kg、或者至少或至少约或为或约2x106个细胞/kg。
在某些实施方案中，向受试者施用以下范围内的细胞或细胞的亚型的单独群体：为或约一百万至为或约1000亿个细胞和/或所述量的细胞/千克体重，如例如100万至为或约500亿个细胞(例如为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约50000万个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞或任何两个前述值所定义的范围)、为或约100万至为或约500亿个细胞(例如为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约50000万个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞或任何两个前述值所定义的范围)，如为或约1000万至为或约1000亿个细胞(例如为或约2000万个细胞、为或约3000万个细胞、为或约4000万个细胞、为或约6000万个细胞、为或约7000万个细胞、为或约8000万个细胞、为或约9000万个细胞、为或约100亿个细胞、为或约250亿个细胞、为或约500亿个细胞、为或约750亿个细胞、为或约900亿个细胞或任何两个前述值所定义的范围)，并且在一些情况下，为或约10000万个细胞至为或约500亿个细胞(例如为或约12000万个细胞、为或约25000万个细胞、为或约35000万个细胞、为或约45000万个细胞、为或约65000万个细胞、为或约80000万个细胞、为或约90000万个细胞、为或约30亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约450亿个细胞)或在这些范围和/或每千克体重的这些范围之间的任何值。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在一些实施方案中，细胞的剂量包含从为或约1x 105至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 105至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 105至为或约1x108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 105至为或约5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 105至为或约1x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 105至为或约5x 106个总CAR表达T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x 106个总CAR表达T细胞、从为或约1x 105至为或约1x 106个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约2.5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约1x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约5x 106个总CAR表达T细胞、从为或约1x 106至为或约2.5x 106个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约2.5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约1x 107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 106至为或约5x 106个总CAR表达T细胞、从为或约5x 106至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约5x 106至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约5x 106至为或约1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约5x 106至为或约5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约5x 106至为或约2.5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约5x 106至为或约1x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 107至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 107至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 107至为或约1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 107至为或约5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约1x 107至为或约2.5x107个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 107至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 107至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 107至为或约1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约2.5x 107至为或约5x 107个总CAR表达T细胞、从为或约5x107至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约5x 107至为或约2.5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约5x 107至为或约1.1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约5x 107至为或约1x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 108至为或约5x 108个总CAR表达T细胞、从为或约1x 108至为或约2.5x108个总CAR表达T细胞、或者从为或约2.5x 108至为或约5x 108个总CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，细胞的剂量包含至少或至少约1x 105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 105个CAR表达细胞、至少或至少约5x 105个CAR表达细胞、至少或至少约1x 106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 106个CAR表达细胞、至少或至少约5x 106个CAR表达细胞、至少或至少约1x 107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 107个CAR表达细胞、至少或至少约5x 107个CAR表达细胞、至少或至少约1x 108个CAR表达细胞、至少或至少约1.1x 108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x 108个CAR表达细胞。
在一些实施方案中，细胞的剂量是细胞的平剂量或细胞的固定剂量，使得细胞剂量不依赖于或基于受试者的体表面积或体重。
在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包括少于为或约5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单个核细胞(PBMC)，例如在为或约1x 106至为或约5x 108个此类细胞的范围内，如为或约2x 106、5x 106、1x107、5x 107、6x107、7x 107、8x 107、9x 107、1x 108、1.1x 108、1.2x 108、1.3x 108、1.4x 108、1.5x 108、2x108、3x 108、4x 108或5x 108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，在受试者是人的情况下，所述剂量包括在为或约1x 106与为或3x 108个之间的总重组受体(例如CAR)表达细胞，例如在为或约1x 107至为或约2x 108个此类细胞的范围内，如为或约1x 107、5x 107、1x 108、1.1x 108或1.5x 108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用从为或约1x 105至为或约5x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从为或约1x 105至为或约1x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从为或约5x 105至为或约1x 107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、或者从为或约1x106至为或约1x 107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞，每个数值均包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约2.5x 107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约5x 107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约6x 107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约7x 107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约8x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约9x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1.1x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1.2x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1.3x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1.4x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1.5x 108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞。
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞或CD4+和CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量(包括在包含CD4+和CD8+T细胞的剂量中)的CD8+T细胞包括在为或约1x 106与为或约1x 108个之间的总重组受体(例如CAR)表达CD8+细胞，例如在为或约5x 106至为或约1x 108个此类细胞的范围内，此类细胞为或约1x 107、2.5x 107、5x 107、7.5x 107、1x 108、1.5x 108、或5x 108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用从为或约1x107至为或约0.75x 108个总重组受体表达CD8+T细胞、从为或约1x 107至为或约2.5x 107个总重组受体表达CD8+T细胞、从为或约1x 107至为或约0.75x 108个总重组受体表达CD8+T细胞，每个数值均包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1x 107、2.5x107、5x 107、6x 107、7x 107、7.5x 107、8x 107、9x107、1x 108、1.1x 108、1.2x 108、1.3x 108、1.4x 108、1.5x 108或5x 108个总重组受体表达CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量(包括在包含CD4+和CD8+T细胞的剂量中)的CD4+T细胞包括在为或约1x 106与为或约1x 108个之间的总重组受体(例如CAR)表达CD4+细胞，例如在为或约5x 106至1x 108个此类细胞的范围内，如为或约1x 107、2.5x 107、5x 107、7.5x 107、1x 108、1.5x 108、或5x 108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用从为或约1x 107至为或约0.75x108个总重组受体表达CD4+T细胞、从为或约1x 107至为或约2.5x 107个总重组受体表达CD4+T细胞、从为或约1x 107至为或约0.75x 108个总重组受体表达CD4+T细胞，每个数值均包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用为或约1x 107、2.5x 107、5x 107 7.5x 107、1x 108、1.5x 108、或5x 108个总重组受体表达CD4+T细胞。在一些实施方案中，细胞的剂量包括施用在约5x 107与约1.1x 108个之间的总重组受体表达CD4+T细胞。
在一些实施方案中，将细胞(例如，重组受体表达T细胞)的剂量作为单一剂量向受试者施用，或者在两周、一个月、三个月、六个月、1年或更长的时间段内仅施用一次。
在过继细胞疗法的情况下，给定“剂量”的施用涵盖施用作为单一组合物和/或单次不间断施用(例如，作为单次注射或连续输注)的给定量或数量的细胞，并且还涵盖在指定时间段中(如在不超过3天中)施用在多种单独组合物或输注中提供的作为分割剂量或作为多种组合物的给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，所述剂量是指定数量的细胞的单次或连续施用，在单个时间点给予或开始。然而，在一些情况下，所述剂量在不超过三天的时间段内以多次注射或输注的方式施用，如每天一次持续三天或两天或者通过在一天的时间内多次输注。
因此，在一些方面，所述剂量的细胞以单一药物组合物施用。在一些实施方案中，所述剂量的细胞以共同含有所述剂量的细胞的多种组合物施用。
在一些实施方案中，术语“分割剂量”是指如下剂量，其被分割使得在超过一天的时间内施用所述剂量。这种类型的给药涵盖在本发明方法中并且被认为是单一剂量。
因此，细胞的剂量可以作为分割剂量施用，例如随时间施用的分割剂量。例如，在一些实施方案中，所述剂量可以在2天或3天内施用于受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天施用25％的剂量并在第二天施用剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天施用33％的剂量，并且在第二天施用剩余的67％。在一些方面，在第一天施用10％的剂量，在第二天施用30％的剂量，并且在第三天施用60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过施用多种组合物或溶液(如第一和第二，任选地更多)来施用，每种组合物或溶液含有所述剂量的一些细胞。在一些方面，任选地在某一时间段内，分开地或独立地施用各自含有不同细胞群和/或细胞亚型的多种组合物。例如，所述细胞群或细胞亚型可以分别包括CD8+和CD4+T细胞，和/或分别包括富集CD8+和CD4+的群体，例如CD4+和/或CD8+T细胞，其各自单独地包括基因工程化以表达所述重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述剂量的施用包括施用第一组合物，所述第一组合物包含一定剂量的CD8+T细胞或一定剂量的CD4+T细胞，以及施用第二组合物，所述第二组合物包含所述剂量的CD4+T细胞和CD8+T细胞中的另一种。
在一些实施方案中，所述组合物或剂量的施用(例如，所述多种细胞组合物的施用)涉及分开施用所述细胞组合物。在一些方面，分开施用同时或按任何顺序依序进行。在一些实施方案中，所述剂量包含第一组合物和第二组合物，并且将第一组合物和第二组合物相隔从为或约0至为或约12小时、相隔从为或约0至为或约6小时或相隔从为或约0至为或约2小时施用。在一些实施方案中，开始施用第一组合物和开始施用第二组合物是相隔不超过或不超过约2小时、不超过或不超过约1小时或不超过或不超过约30分钟，相隔不超过或不超过约15分钟、不超过或不超过约10分钟或不超过或不超过约5分钟进行的。在一些实施方案中，开始和/或完成施用第一组合物和完成和/或开始施用第二组合物是相隔不超过或不超过约2小时、不超过或不超过约1小时或不超过或不超过约30分钟，相隔不超过或不超过约15分钟、不超过或不超过约10分钟或不超过或不超过约5分钟进行的。
在一些实施方案中，在向受试者施用之前将第一组合物与第二组合物混合。在一些实施方案中，在施用之前不久(例如，在为或约6小时、5小时、4小时、3小时、2小时、1.5小时、1小时或0.5小时内)将第一组合物和第二组合物混合，在一些实施方案中，紧接在施用之前将第一组合物和第二组合物混合。
在一些组合物中，第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD4+T细胞。在一些组合物中，第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD8+T细胞。在一些实施方案中，在第二组合物之前施用第一组合物。在一些组合物中，在包含CD4+CAR表达T细胞的第二组合物之前施用包含CD8+CAR表达T细胞的第一组合物。
在一些实施方案中，细胞的剂量或组合物包括限定或目标比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定或目标比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为大约1:1或在大约1:3与大约3:1之间，如大约1:1。在一些方面，具有目标或所需比率的不同细胞群(如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如1:1)的组合物或剂量的施用涉及施用含有一种群体的细胞组合物，然后施用包含另一种群体的单独细胞组合物，其中施用是以或大致以目标或所需比率来进行。在一些方面，以确定比率施用细胞的剂量或组合物导致改善的T细胞疗法的扩增、持久性和/或抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，受试者接受细胞的多个剂量，例如两个或更多个剂量或多个连续剂量。在一些实施方案中，向受试者施用两个剂量。在一些实施方案中，在第一剂量之后大约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天，所述受试者接受连续剂量(例如第二剂量)。在一些实施方案中，在第一剂量后施用多个连续剂量，使得在施用连续剂量后施用另外一个或多个剂量。在一些方面，以另外的剂量向受试者施用的细胞数量与第一剂量和/或连续剂量相同或相似。在一些实施方案中，另外的一个或多个剂量大于先前剂量。
在一些方面，第一和/或连续剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者出现毒性结局(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所施用的细胞和/或重组受体的宿主免疫反应)的可能性或发生率。
在一些方面，第一剂量的施用与连续剂量的施用之间的时间为约9至约35天、约14至约28天或15至27天。在一些实施方案中，连续剂量的施用是在施用第一剂量后大于约14天且小于约28天的时间点。在一些方面，第一剂量与连续剂量之间的时间为约21天。在一些实施方案中，在施用连续剂量后施用另外的一个或多个剂量(例如，连续剂量)。在一些方面，在施用先前剂量后至少约14天且小于约28天施用另外的一个或多个连续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天(例如，在先前剂量之后4、5、6、7、8、9、10、11、12或13天)施用另外的剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天不施用剂量，和/或在先前剂量后超过约28天不施用剂量。
在一些实施方案中，细胞(例如，重组受体表达细胞)的剂量包含两个剂量(例如，双倍剂量)，包含T细胞的第一剂量和T细胞的连续剂量，其中第一剂量和第二剂量中的一个或两个包括T细胞的分割剂量的施用。
在一些实施方案中，细胞的剂量通常足够大以有效降低疾病负荷。
在一些实施方案中，以所需剂量施用所述细胞，所述所需剂量在一些方面包括所需剂量或数量的细胞或一种或多种细胞类型和/或所需比率的细胞类型。因此，在一些实施方案中，细胞的剂量基于细胞总数(或每kg体重的数量)和单独群体或亚型的所需比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞的剂量基于单独群体中的细胞或单独细胞类型的所需总数(或每kg体重的数量)。在一些实施方案中，剂量基于此类特征的组合，此类特征如所需的总细胞数量、所需比率和所需的单独群体中的细胞总数。
在一些实施方案中，以所需剂量的总细胞(如所需剂量的T细胞)的耐受差异或在所述耐受差异之内施用细胞的群体或亚型，如CD8+和CD4+T细胞。在一些方面，所需剂量是所需细胞数量或被施用所述细胞的受试者的每单位体重的所需细胞数量(例如，细胞/kg)。在一些方面，所需剂量等于或高于细胞的最小数量或每单位体重细胞的最小数量。在一些方面，在以所需剂量施用的总细胞中，单独群体或亚型以等于或接近所需输出比率(如CD4+与CD8+比率)存在，例如在这种比率的一定耐受差异或误差内。
在一些实施方案中，细胞以细胞的一种或多种单独群体或亚型的所需剂量(如CD4+细胞的所需剂量和/或CD8+细胞的所需剂量)来施用，或在所述耐受差异内施用。在一些方面，所需剂量是亚型或群体的细胞的所需数量或被施用细胞的受试者的每单位体重的此类细胞的所需数量，例如细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于群体或亚型的细胞的最小数量或每单位体重群体或亚型的细胞的最小数量。
因此，在一些实施方案中，剂量基于总细胞的所需固定剂量和所需比率，和/或基于一种或多种单独亚型或亚群(例如，各自)的所需固定剂量。因此，在一些实施方案中，剂量基于T细胞的所需固定剂量或最小剂量以及CD4+与CD8+细胞的所需比率，和/或基于CD4+和/或CD8+细胞的所需固定剂量或最小剂量。
在一些实施方案中，所述细胞在多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的所需输出比率的耐受范围下或耐受范围内施用。在一些方面，所需比率可以是特定比率或可以是一系列比率。例如，在一些实施方案中，所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞的比率)在为或约5:1与为或约5:1之间(或者大于约1:5且小于约5:1)，或者在为或约1:3与为或约3:1之间(或者大于约1:3且小于约3:1)，如在为或约2:1与为或约1:5之间(或者大于约1:5且小于约2:1)，如为或约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、或1:5。在一些方面，耐受差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％内，包括这些范围之间的任何值。
在特定实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指重组受体(例如CAR)表达细胞的数量。在其他实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指施用的所有细胞、T细胞或外周血单个核细胞(PBMC)的数量或浓度。
在一些方面，剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者出现毒性结局(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所施用的细胞和/或重组受体的宿主免疫反应)的可能性或发生率。
在一些实施方案中，所述方法还包括施用一个或多个另外的剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞和/或淋巴细胞清除疗法，和/或重复所述方法的一个或多个步骤。在一些实施方案中，一个或多个另外的剂量与初始剂量相同。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量不同于初始剂量，例如比初始剂量高，如高2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍，或者比初始剂量低，如低2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍。在一些实施方案中，基于以下确定一个或多个另外的剂量的施用：受试者对初始治疗或任何先前治疗的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者出现毒性结局(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所施用的细胞和/或重组受体的宿主免疫反应)的可能性或发生率。
在一些实施方案中，在施用细胞后，例如通过许多已知方法中的任一种测量工程化细胞群的生物活性。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用任何合适的已知方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方案中，通过测定一种或多种细胞因子(如CD107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量细胞的生物活性。在一些方面，通过评估临床结局(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量生物活性。
3.淋巴细胞清除疗法
在一些方面，所提供的方法还可以包括如在开始施用T细胞疗法(例如CAR表达T细胞)之前或同时施用一种或多种淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法包括施用磷酰胺，如环磷酰胺。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法可以包括施用氟达拉滨。
在一些方面，用免疫细胞清除(例如，淋巴细胞清除)疗法预调理受试者可以改进过继细胞疗法(ACT)的效果。用淋巴细胞清除剂(包括环孢霉素和氟达拉滨的组合)预调理已经有效地改善转移的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在细胞疗法中的功效，包括改善转移细胞的反应和/或持久性。参见例如，Dudley等人,Science,298,850-54(2002)；Rosenberg等人,Clin Cancer Res,17(13):4550-4557(2011)。同样地，在CAR+T细胞的情况下，几项研究已经掺入了淋巴细胞清除剂，最常见的是环磷酰胺、氟达拉滨、苯达莫司汀或其组合，有时伴有低剂量辐射。参见Han等人Journal of Hematology&Oncology,6:47(2013)；Kochenderfer等人,Blood,119:2709-2720(2012)；Kalos等人,Sci Transl Med,3(95):95ra73(2011)；临床试验研究记录号：NCT02315612，NCT01822652。
可以进行这种预调理，目标是降低可能减弱疗法功效的一种或多种不同结局的风险。这些结果包括被称为“细胞因子吸收”的现象，通过所述现象，T细胞、B细胞、NK细胞与TIL竞争稳态的和激活的细胞因子，如IL-2、IL-7和/或IL-15；通过调节性T细胞、NK细胞或免疫系统的其他细胞抑制TIL；负调节物对肿瘤微环境的影响。Muranski等人,Nat ClinPract Oncol.12月；3(12):668-681(2006)。
因此，在一些实施方案中，所提供的方法还涉及向所述受试者施用淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，所述方法包括在开始施用所述剂量的细胞之前向所述受试者施用淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法含有化学治疗剂，如氟达拉滨和/或环磷酰胺。在一些实施方案中，细胞和/或淋巴细胞清除疗法的施用经由门诊递送进行。
在一些实施方案中，所述方法包括在开始施用所述剂量的细胞之前向受试者施用预调理剂，如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可以在第一或后续剂量之前至少2天(如至少3、4、5、6或7天)向所述受试者施用预调理剂。在一些实施方案中，在开始施用所述剂量的细胞之前不超过7天(如在开始施用所述剂量的细胞之前不超过6、5、4、3或2天)，向所述受试者施用预调理剂。在一些实施方案中，在开始施用所述剂量的细胞之前2与7天之间(包含端值)(如2、3、4、5、6或7天)，向所述受试者施用预调理剂。
在一些实施方案中，用在或在约20mg/kg与100mg/kg之间、如在或在约40mg/kg与80mg/kg之间的剂量的环磷酰胺对受试者进行预调理。在一些方面，用或用约60mg/kg的环磷酰胺对受试者进行预调理。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天、每隔一天或每三天施用。在一些实施方案中，每天施用一次环磷酰胺，持续一天或两天。在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含环磷酰胺的情况下，按以下剂量向受试者施用环磷酰胺：在或在约100mg/m2与500mg/m2之间，如在或在约200mg/m2与400mg/m2之间或者250mg/m2与350mg/m2之间，包含端值。在一些情况下，向受试者施用约300mg/m2的环磷酰胺。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天、每隔一天或每三天施用。在一些实施方案中，每天施用环磷酰胺，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前每天向受试者施用约300mg/m2的环磷酰胺，持续3天。
在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨的情况下，按以下剂量向受试者施用氟达拉滨：在或在约1mg/m2与100mg/m2之间，如在或在约10mg/m2与75mg/m2之间、15mg/m2与50mg/m2之间、20mg/m2与40mg/m2之间、24mg/m2与35mg/m2之间、20mg/m2与30mg/m2之间或24mg/m2与26mg/m2之间。在一些情况下，向受试者施用25mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用约30mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方案中，可以将氟达拉滨按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天、每隔一天或每三天施用。在一些实施方案中，每日施用氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前每天向受试者施用约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺与氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可以包括任何剂量或施用时间表(如上述那些)下的环磷酰胺以及任何剂量或施用时间表(如上述那些)下的氟达拉滨。例如，在一些方面，在施用所述剂量的细胞之前，向受试者施用60mg/kg(约2g/m2)的环磷酰胺和3个至5个剂量的25mg/m2氟达拉滨。在一些实施方案中，每天向受试者施用约300mg/m2环磷酰胺和约30mg/m2氟达拉滨，持续3天。在一些实施方案中，预调理施用时间表在开始施用所述剂量的细胞之前2与7天之间(包含端值)，如在2、3、4、5、6或7天结束。
在一个示例性剂量方案中，在接受第一剂量的CAR表达细胞之前，受试者接受环磷酰胺和氟达拉滨(CY/FLU)的淋巴细胞清除预调理化学疗法，在第一剂量的CAR表达细胞之前至少两天且通常在施用细胞之前不超过7天施用所述淋巴细胞清除预调理化学疗法。在预调理治疗之后，向受试者施用所述剂量的如上所述的CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，在输注所述剂量的细胞之前施用预调理剂改善了治疗的结局。例如，在一些方面，预调理以所述剂量改善治疗功效，或者增加重组受体表达细胞(例如CAR表达细胞，如CAR表达T细胞)在受试者中的持久性。在一些实施方案中，预调理治疗提高了无疾病存活率，如在细胞剂量后在一段给定的时间之后活着且没有展现出最少的残留或可分子检测的疾病的受试者的百分比。在一些实施方案中，增加了到中值无病存活的时间。
在向受试者(例如人)施用所述细胞(例如CAR T细胞)后，在一些方面，通过许多已知方法中的任何一种测量工程化细胞群的生物活性。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，所述工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用本领域已知的任何合适的方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方案中，还可以通过测定某些细胞因子(如CD 107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量所述细胞的生物活性。在一些方面，通过评估临床结局(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量生物活性。在一些方面，评估毒性结局、细胞的持久性和/或扩增和/或宿主免疫反应的存在或不存在。
在一些实施方案中，在输注所述剂量的细胞之前施用预调理剂改善了治疗的结局(例如通过改善用所述剂量治疗的功效)，或增加了重组受体表达细胞(例如CAR表达细胞，如CAR表达T细胞)在受试者中的持久性。因此，在一些实施方案中，在作为检查点抑制剂疗法和T细胞疗法的组合的方法中给予的预调理剂的剂量高于或低于在不使用检查点抑制剂疗法的方法中给予的剂量。在一些实施方案中，在作为检查点抑制剂疗法和细胞疗法的组合的方法中给予的预调理剂的剂量高于在不使用检查点抑制剂疗法的方法中给予的剂量。在一些实施方案中，在作为检查点抑制剂疗法和细胞疗法的组合的方法中给予的预调理剂的剂量低于在不使用检查点抑制剂疗法的方法中给予的剂量。
C.受试者
本文提供了例如经由过继细胞疗法(如过继T细胞疗法)，用于向患有待治疗的CD19表达型癌症的受试者施用的细胞、群体和组合物。在一些实施方案中，CD19表达型癌症是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，CD19表达型癌症是白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，CD19表达型癌症是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或NHL的亚型(如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL))。在一些实施方案中，所述癌症是白血病。特别地，所提供的实施方案包括治疗患有CD19表达型癌症(如非霍奇金淋巴瘤)的受试者的方法。因此，在一些实施方案中，本文提供的细胞、群体和组合物用于向患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者施用。
在一些实施方案中，所述受试者患有高风险NHL。在一些实施方案中，所述受试者是深度预治疗的患有NHL的受试者群体。在一些实施方案中，所述受试者对NHL的至少两种先前治疗线已经复发或是难治的。在一些实施方案中，所述受试者对NHL的两种先前治疗线已经复发或是难治的。在一些实施方案中，两种先前治疗线中的至少一种是CD20靶向剂和蒽环类药物。在一些实施方案中，所述受试者未用抗PD-1剂治疗。在一些实施方案中，所述受试者未用抗PD-L1剂治疗。在一些实施方案中，所述受试者未用抗LAG3剂治疗。
在一些实施方案中，所述受试者先前未用基因疗法产品或过继T细胞疗法治疗。在一些实施方案中，所述受试者先前已接受造血干细胞移植(HSCT)，例如，同种异体HSCT或自体HSCT。在一些实施方案中，所述受试者在白细胞单采术的90天内未接受同种异体HSCT。
在一些实施方案中，在施用所述剂量的细胞时或之前，所述受试者不具有除R/R侵袭性NHL之外的恶性肿瘤的既往病史，除非所述受试者已经不患所述疾病大于或等于2年。
在一些方面，NHL可以基于卢加诺分类进行分期(参见例如，Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些情况下，所述分期通过罗马数字I至IV(1-4)来描述，并且影响淋巴系统外器官(结节外器官)的局限期(I或II)淋巴瘤指示为E。I期表示在一个结节或一组相邻结节中受累，或者不具有结节受累的单一结节外病灶(IE)。2期表示涉及膈同侧的两个或更多个结节组，或者依据结节程度具有有限的连续结节外受累的I期或II期(IIE)。III期表示涉及膈两侧的结节或膈上方的结节且脾脏受累。IV期表示涉及另外的非连续淋巴外受累。另外，“巨块病(bulky disease)”可以用于描述胸腔中的大型肿瘤，特别是对于II期肿瘤。疾病程度通过用于亲嗜性(avid)淋巴瘤的正电子发射断层扫描(PET)-计算机断层扫描(CT)以及用于非亲嗜性组织学的CT来确定。在一些任何实施方案中，在施用所述剂量的细胞时或之前，要根据所提供的实施方案治疗的受试者患有正电子发射断层扫描(PET)阳性疾病(例如，多维尔得分为4或5；Barrington等人,J Clin Oncol.(2014)32(27):3048-58)。在任何实施方案的一些中，在施用所述剂量的细胞时或之前，要根据所提供的实施方案治疗的受试者患有计算机断层扫描(CT)可测量疾病(例如根据卢加诺分类)。在任何实施方案的一些中，在施用所述剂量的细胞时或之前，要根据所提供的实施方案治疗的受试者患有PET阳性且CT可测量疾病。在任何实施方案的一些中，在施用所述剂量的细胞时或之前，要根据所提供的实施方案治疗的受试者的多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2(通过CT扫描获得)。在一些实施方案中，所述受试者在施用所述剂量的细胞时或之前具有足够的器官功能。
在一些实施方案中，所述受试者的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0或1。在一些实施方案中，东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态指示物可以用于评估或选择用于治疗的受试者，例如，因先前疗法而具有较差体能的受试者(参见例如，Oken等人(1982)Am J ClinOncol.5:649-655)。ECOG体能状态量表描述患者在其自理能力、日常活动和体能(例如，步行、工作等)方面的机能水平。在一些实施方案中，ECOG体能状态为0指示受试者可以进行正常活动。在一些方面，ECOG体能状态为1的受试者展现体力活动中的一些限制，但是所述受试者能完全走动。在一些方面，ECOG体能状态为2的患者能大于50％走动。在一些情况下，ECOG体能状态为2的受试者也可能能够自理；参见例如等人,(1993)Br J Cancer67(4)773-775。反映ECOG体能状态的标准描述于下表1中：
在一些实施方案中，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的ECOG状态；和/或所述受试者不具有>1的ECOG状态。在一些实施方案中，所述受试者的ECOG状态为0。在一些实施方案中，所述受试者的ECOG状态为1。
在一些实施方案中，所述受试者为至少18岁。在特定实施方案中，在年龄较大的一组受试者(包括大于60岁或更大的受试者)中，所提供的方法可以导致有利结局和低毒性率。
在一些实施方案中，所述疾病或病症是肿瘤或癌症。在一些实施方案中，所述癌症是CD19表达型癌症。在一些方面，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，如淋巴瘤。在一些实施方案中，所述受试者患有或怀疑患有淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
非霍奇金淋巴瘤(NHL)包括恶性肿瘤的异质性组。一些患有NHL的受试者可以在不进行治疗的情况下存活，而其他受试者可能需要立即干预。在一些情况下，可以将患有NHL的受试者分类为可以告知疾病预后和/或推荐的治疗策略的组。在一些情况下，这些组可能是“低风险”、“中度风险”、“高风险”和/或“极高风险”，并且可以根据多种因素将患者如此分类，所述因素包括但不限于遗传异常和/或形态或身体特征。在一些实施方案中，基于NHL的风险对根据所述方法和/或用所述制品或组合物治疗的受试者进行分类或鉴定。在一些实施方案中，所述受试者是具有高风险NHL的受试者。
DLBCL是最常见的淋巴瘤亚型，占所有NHL病例的大约30％。弥漫性大B细胞淋巴瘤是具有几个组织学亚型和分子亚型的异质性疾病。最大的亚组是非特指型(NOS)DLBCL。基于与正常B细胞发育阶段(源细胞(cell of origin)；COO)的生物相似性通过基因表达谱分析进行分子分型有助于将DLBCL进一步划分为生发中心样(GCB)肿瘤、激活的B细胞样(ABC)肿瘤、以及原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)(其是一个独特的临床实体)(Lenz,N Engl JMed.2008年11月27日；359(22):2313-23)。
在GCB组中，特定的高风险组由c-MYC和抗凋亡癌基因BCL2或BCL6的并发染色体重排定义，被称为双打击淋巴瘤(DHL)。另外，在一些情况下，存在c-MYC和抗凋亡癌基因BCL2和BCL6两者的并发重排，其被称为三打击淋巴瘤。DHL代表大约5％的从头(de novo)DLBCL病例，其在用R-CHOP治疗后具有非常差的≤12个月的OS(Camicia,Mol Cancer.2015年12月11日；14(1):207)。更新的数据表明DLBCL中的P53突变或缺失对预后有负面影响(Schiefer,Medicine(Baltimore)2015年12月；94(52):e2388)。在一些实施方案中，所述受试者患有或已被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或双/三打击分子亚型的淋巴瘤。在一些实施方案中，所述淋巴瘤是双打击淋巴瘤，其特征为存在MYC(髓细胞瘤病致癌基因)、BCL2(B细胞淋巴瘤2)和/或BCL6(B细胞淋巴瘤6)基因重排(例如，易位)。在一些实施方案中，所述淋巴瘤是三打击淋巴瘤，其特征为存在MYC、BCL2和BCL6基因重排；参见例如，Aukema等人,(2011)Blood 117:2319-2331。在多个方面，所述疗法被指示用于这样的受试者，和/或说明书指示施用至这个群体内的受试者。在一些实施方案中，基于2016WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，可以将双/三打击淋巴瘤视为具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击)。
尽管滤泡性淋巴瘤(FL)是惰性淋巴瘤类型，但3B级FL被认为是侵袭性淋巴瘤。其临床表现与DLBCL非常相似，并且FL经常经历组织学转化，转化为DLBCL。因此，目前的指南建议根据DLBCL治疗算法(美国国家综合癌症网络(NCCN)2016；Dreyling,Clin CancerRes.2014年10月15日；20(20):5194-206)来治疗3B级FL。这些受试者通常用基于蒽环类药物的化学疗法联合利妥昔单抗(例如，R-CHOP)治疗，并且具有与从头DLBCL相似的预后。
尽管DLBCL的结局总体上有所改善，但大约三分之一的受试者会发展复发性/难治性(R/R)疾病，这仍然是死亡的主要原因。难治性疾病被定义为病变大小的<50％减小或新病变的出现。复发性疾病反映了获得部分或完全反应(PR或CR)之后病变的(重新)出现(Cheson,J Clin Oncol.2007年2月10日；25(5):579-86)。复发/难治性受试者的预后较差，特别是那些对二线化学疗法无反应且中值OS为4.4个月的患者(Van Den Neste,BoneMarrow Transplant.2016年1月；51(1):51-7)。
在一些实施方案中，NHL是组织学证实的侵袭性B细胞NHL。在一些实施方案中，NHL是非特指型(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(包括转化的惰性NHL)、3B级滤泡性淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、EB病毒(EBV)阳性DLBCL NOS、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、或具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤(DHL/THL))。在一些实施方案中，所述受试者在筛选时(例如在施用组合疗法之前)具有升高的疾病负荷。在一些实施方案中，筛选在白细胞单采术之前约一周至约两周之间进行。在一些实施方案中，如果指标病变(例如，多达6个指标病变)的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2(通过CT扫描获得)，则受试者具有升高的疾病负荷。在一些实施方案中，受试者患有里希特氏转化慢性淋巴细胞白血病(tCLL)。在一些实施方案中，受试者患有tCLL并且不具有升高的疾病负荷。
所提供的方法用于治疗对先前疗法已经复发或难治(R/R)的受试者。在一些实施方案中，在施用T细胞疗法和检查点抑制剂疗法的组合疗法之前，所述受试者已经用针对CD19表达型癌症的一种或多种先前疗法进行治疗。在任何所提供的实施方案中，NHL是复发性和/或难治性NHL。在一些实施方案中，NHL是复发性NHL。在一些实施方案中，NHL是难治性NHL。在任何所提供的实施方案中，所述受试者对针对NHL的至少两种先前全身治疗线已经复发或是难治的。在一些实施方案中，所述至少两种先前治疗线中的至少一种包括抗CD20疗法(例如抗CD20抗体)和蒽环类药物。在一些实施方案中，所述至少两种先前治疗线中的一种是造血干细胞移植(HSCT)。在一些实施方案中，所述HSCT不是同种异体HSCT。在一些实施方案中，所述至少两种先前治疗线中的一种不是抗PD-1或抗PD-L1疗法(例如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)。在一些实施方案中，所述至少两种先前治疗线中的一种不是抗LAG3疗法(例如抗LAG3抗体)。在一些实施方案中，患有转化的疾病的受试者已经进行过用于所述转化的疾病(例如DLBCL)的至少两种先前全身治疗线。在一些实施方案中，先前治疗线不是为先前的惰性病症(例如滤泡性淋巴瘤(FL)、CLL)提供的治疗线。在一些实施方案中，如果受试者先前接受过用于惰性疾病的蒽环类药物，则受试者不需要接受过用于DLBCL的蒽环类药物。
在一些实施方案中，所述受试者已经经历超过一种、两种、三种、四种、五种或六种先前疗法。在一些实施方案中，所述受试者已经经历一种先前疗法。在一些实施方案中，所述受试者已经经历约二至四种先前疗法。在一些实施方案中，所述受试者已经经历约五至六种先前疗法。在一些实施方案中，所述受试者已经经历超过六种先前疗法。
在一些实施方案中，所述受试者在用标准疗法治疗后具有不良预后和/或已经经历一个或多个先前治疗线的失败。在一些实施方案中，所述受试者已经进行治疗或先前已经接受除了淋巴细胞清除疗法以外的至少或约至少或约1、2、3、4、5、6或7种用于治疗NHL的其他疗法。在一些实施方案中，所述受试者先前已经用化学疗法或放射疗法治疗。在一些方面，所述受试者对于其他疗法或治疗剂是难治的或无反应的。在一些实施方案中，所述受试者例如在用另一种疗法或治疗性干预(包括化学疗法或放射)治疗后患有持续性或复发性疾病。在一些实施方案中，将组合疗法施用至在先前治疗时已经进展的受试者。在一些实施方案中，将组合疗法施用至已经对先前疗法停止反应的受试者。在一些实施方案中，将组合疗法施用至在先前治疗后已经在缓解后复发的受试者。在一些实施方案中，将组合疗法施用至先前治疗难治的受试者。在一些实施方案中，将组合疗法施用至对先前疗法具有小于最佳反应(例如，完全反应、部分反应或疾病稳定)的受试者。
在一些实施方案中，所提供的方法实施平剂量，例如，CAR+细胞的总数、CAR+CD8+T细胞和/或CAR+CD4+T细胞的总数，如向所治疗的一组受试者(包括体重可变的受试者)中的每一个施用精确或固定剂量的一种或多种此类细胞类型。因此，所提供的方法包括这样的方法，在所述方法中，细胞的剂量是细胞的平剂量或细胞的固定剂量，使得细胞的剂量不关联于或不基于受试者的体表面积或体重。在一些实施方案中，这种方法可以最大程度地减少或降低向受试者施用过多细胞(这可能会增加与施用CAR-T细胞相关的有毒结局的风险)的机会。
在一些实施方案中，T细胞的剂量包含在约5x 107个重组受体(例如CAR)表达T细胞与约1.1x 108个重组受体(例如CAR)表达T细胞之间。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约5x 107个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约6x 107个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约7x 107个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约0.75x 108个重组受体(例如CAR)表达CD8+T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约8x 107个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约9x107个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约1x 108个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约1.1x 108个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含为或约1.5x 108个重组受体(例如CAR)表达T细胞。在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+和CD8+T细胞。在一些实施方案中，细胞数量是作为活细胞的此类细胞的数量。
在过继细胞疗法的情况下，给定“剂量”的施用涵盖施用作为单一组合物和/或单次不间断施用(例如，作为单次注射或连续输注)的给定量或数量的细胞，并且还涵盖在指定时间段中(如在不超过3天中)施用在多种单独组合物或输注中提供的作为分割剂量或作为多种组合物的给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，所述剂量是指定数量的细胞的单次或连续施用，在单个时间点给予或开始。然而，在一些情况下，所述剂量在不超过三天的时间段内以多次注射或输注的方式施用，如每天一次持续三天或两天或者通过在一天的时间内多次输注。
因此，在一些方面，所述剂量的细胞以单一药物组合物施用。在一些实施方案中，所述剂量的细胞以共同含有所述剂量的细胞的多种组合物施用。
在一些实施方案中，术语“分割剂量”是指如下剂量，其被分割使得在超过一天的时间内施用所述剂量。这种类型的给药涵盖在本发明方法中并且被认为是单一剂量。
因此，细胞的剂量可以作为分割剂量施用，例如随时间施用的分割剂量。例如，在一些实施方案中，所述剂量可以在2天或3天内施用于受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天施用25％的剂量并在第二天施用剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天施用33％的剂量，并且在第二天施用剩余的67％。在一些方面，在第一天施用10％的剂量，在第二天施用30％的剂量，并且在第三天施用60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过施用多种组合物或溶液(如第一和第二，任选地更多)来施用，每种组合物或溶液含有所述剂量的一些细胞。在一些方面，任选地在某一时间段内，分开地或独立地施用各自含有不同细胞群和/或细胞亚型的多种组合物。例如，细胞的群体或亚型可以分别包括CD8+和CD4+T细胞，和/或分别富集CD8+和富集CD4+的群体，例如，各自单独地包括基因工程化以表达重组受体的细胞的CD4+和/或CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述剂量的施用包括施用第一组合物，所述第一组合物包含一定剂量的CD8+T细胞或一定剂量的CD4+T细胞，以及施用第二组合物，所述第二组合物包含所述剂量的CD4+T细胞和CD8+T细胞中的另一种。
在一些实施方案中，所述组合物或剂量的施用(例如，所述多种细胞组合物的施用)涉及分开施用所述细胞组合物。在一些方面，分开施用同时或按任何顺序依序进行。在特定实施方案中，单独施用是通过按任何顺序施用以下来依序进行：第一组合物，所述第一组合物包含CD8+T细胞的剂量或CD4+T细胞的剂量，以及第二组合物，所述第二组合物包含所述剂量的CD4+T细胞和CD8+T细胞中的另一种。在一些实施方案中，所述剂量包含第一组合物和第二组合物，并且将第一组合物和第二组合物在彼此相隔48小时内施用，如彼此相隔不超过36小时或彼此相隔不超过24小时内施用。在一些实施方案中，将第一组合物和第二组合物相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时施用。在一些实施方案中，第一组合物的施用的开始和第二组合物的施用的开始相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行。在一些实施方案中，第一组合物的施用的开始和/或完成和第二组合物的施用的完成和/或开始相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。在一些实施方案中，将所述第一组合物和所述第二组合物相隔少于2小时施用。
在一些组合物中，第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD4+T细胞。在一些组合物中，第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD8+T细胞。在一些实施方案中，在第二组合物之前施用第一组合物。在特定实施方案中，在CD4+T细胞之前施用CD8+T细胞。
在一些实施方案中，细胞的所述剂量或组合物包括限定或目标比率的表达重组受体(例如CAR)的CD4+细胞与表达重组受体(例如CAR)的CD8+细胞和/或限定或目标比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间，如大约1:1。在一些方面，具有目标或所需比率的不同细胞群(如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如1:1)的组合物或剂量的施用涉及施用含有一种群体的细胞组合物，然后施用包含另一种群体的单独细胞组合物，其中施用是以或大致以目标或所需比率来进行。在一些方面，以确定比率施用细胞的剂量或组合物导致改善的T细胞疗法的扩增、持久性和/或抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，如与某些替代方法相比，所提供的方法和用途提供或实现如在所治疗的特定受试者组(如患有CD19表达型癌症(如NHL)的患者，包括患有高风险疾病的那些)中改善的或更持久的反应或功效。在一些实施方案中，所述方法凭借施用T细胞疗法(如包括用于过继细胞疗法的细胞(例如，如CAR表达T细胞，例如抗CD19CAR+T细胞)的组合物)和检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)而是有利的。在一些实施方案中，所述方法还包括在施用T细胞疗法之前向受试者施用淋巴细胞清除疗法，例如，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。
D.反应、功效和存活
在一些实施方案中，尽管受试者已经对另一种疗法产生耐药性，但是根据所提供的方法的施用有效治疗了所述受试者。在一些实施方案中，至少30％、至少35％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％或至少80％的根据所述方法治疗的受试者实现完全缓解(CR)。在一些实施方案中，至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少80％或至少90％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，至少或至少约50％的根据所述方法治疗的受试者、至少或至少约60％的受试者、至少或至少约70％的受试者、至少或至少约80％的受试者或者至少或至少约90％的受试者实现CR和/或实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，评估有效治疗的标准包括总体反应率(ORR；在一些情况下也称为客观反应率)、完全反应(CR；在一些情况下也称为完全缓解)、完全反应率(CRR)、反应持续时间(DOR)、无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)。
在一些实施方案中，至少40％、至少50％、至少60％或至少70％的根据本文提供的方法治疗的受试者实现完全缓解(CR；在一些情况下也称为完全反应)、展现超过为或约3个月、6个月或12个月或者超过13个月或者大约14个月的无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)。在一些实施方案中，平均而言，根据所述方法治疗的受试者展现超过为或约6个月、12个月或18个月的中值PFS或OS。在一些实施方案中，所述受试者在治疗后展现至少为或约6、12、18个月或更多个月或更长时间的PFS或OS。
在一些实施方案中，根据所提供的方法治疗的受试者展现至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的CRR。在一些实施方案中，完全反应率(CRR)计算为最佳总体反应(BOR)长达12个月、长达18个月、长达24个月、长达36个月或更长时间的受试者的百分比。
在一些方面，受试者(如患有NHL的受试者)的反应率基于卢加诺标准。(Cheson等人,Blood.2016；128(21):2489-96)。在一些方面，反应评估利用临床、血液学和/或分子方法中的任一种。在一些方面，使用卢加诺标准评估的反应涉及视情况使用正电子发射断层扫描(PET)-计算机断层扫描(CT)和/或CT。PET-CT评价还可包括使用氟脱氧葡萄糖(FDG)用于嗜FDG淋巴瘤。在一些方面，在使用PET-CT评估嗜FDG组织学的反应的情况下，可以使用5分量表。在一些方面，5分量表包含以下标准：1，没有高于背景的摄取；2，摄取≤纵隔；3，摄取>纵隔但≤肝脏；4，摄取中度>肝脏；5，摄取显著高于肝脏和/或新病灶；X，新的摄取区域不可能与淋巴瘤有关。在一些方面，使用卢加诺标准评估的反应涉及视情况使用磁共振成像(MRI)。在一些方面，反应评估可以在施用T细胞疗法后的基线(例如，在本文提供的任何方法之前)、1个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月和/或24个月进行。在一些方面，在施用T细胞疗法后的基线、1个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月和24个月进行反应评估。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的完全反应(CR)涉及在不同可测量位点的完全代谢反应和完全放射学反应。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中当使用PET-CT时，在5分量表上CR被描述为得分为1、2或3，其具有或不具有残留肿块。在一些方面，在脾或骨髓内具有高生理摄取或激活的结节外部位中(例如，对于化学疗法或骨髓集落刺激因子)，摄取可以大于正常纵隔和/或肝脏。在这种情况下，如果在初始受累位点的摄取不大于周围的正常组织，即使所述组织具有高生理摄取，也可以推断为完全代谢反应。
在一些方面，使用CT在淋巴结中评估反应，其中CR被描述为没有患病的淋巴外位点，并且靶淋巴结/淋巴结肿块的病灶的最长横径(LDi)必须复原至≤1.5cm。其他评估部位包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应指示在骨髓中缺乏嗜FDG疾病的证据，并且基于CT的评估应指示正常形态。其他位点可以包括对器官肿大的评估，其应复原至正常。在一些方面，评估未测量病灶和新病灶，其在CR的情况下应不存在(Chessen等人,Blood.2016年11月24日；128(21):2489-96)。
在一些方面，使用卢加诺标准描述的部分反应(PR；在一些情况下也称为部分缓解)涉及在不同可测量位点的部分代谢和/或放射学反应。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中在使用PET-CT时，PR被描述为得分为4分或5分，其具有与基线相比降低的摄取和任何大小的一个或多个残留肿块。在中间时期，此类发现可以指示反应中的疾病。在治疗结束时，此类发现可以指示残留疾病。
在一些方面，使用CT评估淋巴结中的反应，其中PR被描述为多达6个可测量的靶结节和结节外部位的SPD减小≥50％。如果病灶太小而无法在CT上测量，则将5mm×5mm指定为默认值；如果病灶不再可见，则所述值为0mm×0mm；对于>5mm×5mm但小于正常的结节，使用实际测量值进行计算。其他评估位点包括骨髓，其中基于PET-CT的评价应指示残余摄取，所述残余摄取高于正常骨髓中的摄取但与基线相比有所降低(弥漫性摄取与来自所允许化学疗法的反应性变化相容)。在一些方面，如果在结节反应的情境下在骨髓中存在持续的局灶性变化，则应考虑用MRI或活检或间隔扫描进一步评价。在一些方面，其他位点可以包括对器官肿大的评估，其中脾脏的超过正常的长度必须已经复原>50％。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，其在PR的情况下应不存在/正常、复原但不增加。也可以使用基于PET-CT和/或CT的评估来测量无反应/疾病稳定(SD)或疾病进展(PD)。(Chessen等人,Blood.2016年11月24日；128(21):2489-96)。
在一些方面，无进展存活期(PFS)被描述为治疗疾病(如癌症)期间和之后受试者伴随疾病存活但疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观反应(OR)被描述为可测量的反应。在一些方面，客观反应率(ORR；在一些情况下也称为总体反应率)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总存活期(OS)被描述为从诊断日期或疾病(如癌症)治疗开始日期起，被诊断患有所述疾病的受试者仍然存活的时间长度。在一些方面，无事件存活期(EFS)被描述为在癌症治疗结束后，受试者保持没有所述治疗意图预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可以包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。
在一些实施方案中，反应持续时间(DOR)的量度包括从记录到肿瘤反应至疾病进展的时间。在一些实施方案中，用于评估反应的参数可以包括持久反应，例如，在从开始疗法起的一个时间段之后持续存在的反应。在一些实施方案中，持久反应是由在开始疗法后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月的反应率来指示。在一些实施方案中，所述反应可持续大于3个月或大于6个月。
在一些实施方案中，如与通过可比较方法使用替代性给药方案(如其中受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法、其中受试者不接受根据所提供方法的一定剂量的细胞和/或淋巴细胞清除剂的方法、其中受试者接受一定剂量的细胞而不接受检查点抑制剂疗法的方法、和/或使用所提供的制品或组合物的方法)会观察到的降低相比，所述方法降低疾病或病症的负荷(例如，肿瘤细胞数、肿瘤大小、患者存活或无事件存活的持续时间)至更大程度和/或持续更长时间段。在一些方面，评估受试者的存活、特定时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病症的任何症状。在一些实施方案中，指定疾病或病症负荷的量度。
在一些实施方案中，如与其他方法(例如，其中受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法、其中受试者不接受根据所提供方法的一定剂量的细胞和/或淋巴细胞清除剂的方法、其中受试者接受一定剂量的细胞而不接受检查点抑制剂疗法的方法、和/或使用所提供的制品或组合物的方法)相比，所述方法改进受试者的无事件存活率或总存活率。例如，在一些实施方案中，在所述剂量后6个月时通过所述方法治疗的受试者的无事件存活率或概率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些方面，总存活率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些实施方案中，用所述方法治疗的受试者展现出无事件存活、无复发存活或存活达至少6个月或至少1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年或10年。在一些实施方案中，进展的时间得到改善，如进展的时间大于为或约6个月或至少1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年或10年。
在一些实施方案中，如与其他方法(例如，其中受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法、和/或其中受试者不接受根据所提供方法的一定剂量的细胞和/或淋巴细胞清除剂的方法、和/或使用所提供的制品或组合物的方法)相比，在通过所述方法治疗后，复发的概率降低。例如，在一些实施方案中，在第一剂量后6个月时复发的概率小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％或小于约10％。
在一些情况下，确定所施用细胞(例如，过继转移细胞)的药代动力学以评估利用度，例如所施用细胞的生物利用度。用于确定过继转移细胞的药代动力学的方法可以包括从已经被施用工程化细胞的受试者中抽取外周血，并确定所述外周血中所述工程化细胞的数量或比率。用于选择和/或分离细胞的方法可以包括使用嵌合抗原受体(CAR)特异性抗体(例如，Brentjens等人,Sci.Transl.Med.2013年3月；5(177):177ra38)；蛋白L(Zheng等人,J.Transl.Med.2012年2月；10:29)；直接引入CAR中的特定位点中的表位标签如Strep-标签序列，借此使用Strep-标签的结合试剂直接评估CAR(Liu等人(2016)NatureBiotechnology,34:430；国际专利申请公开号WO 2015095895)以及与CAR多肽特异性结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号WO 2014190273)。在一些情况下，外在标记基因可以与工程化细胞疗法结合使用，以允许检测或选择细胞，并且在一些情况下也促进细胞自杀。在一些情况下，截短的表皮生长因子受体(EGFRt)可以与所转导细胞中目的转基因(CAR或TCR)共表达(参见例如，美国专利号8,802,374)。EGFRt可以含有抗体西妥昔单抗或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以用于鉴定或选择已用EGFRt构建体和另一种重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达所述受体的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,Nature Biotech.2016年4月；34(4):430-434)。
在一些实施方案中，可以在施用所述细胞疗法后的时间段确定从患者获得的生物样品(例如，血液)中CAR+T细胞的数量，例如，以确定所述细胞的药代动力学。在一些实施方案中，在所述受试者的血液中或在通过所述方法如此治疗的大多数受试者中可检测的CAR+T细胞(任选地CAR+CD8+T细胞和/或CAR+CD4+T细胞)的数量是大于1个细胞/μL、大于5个细胞/μL或大于10个细胞/μL。在一些实施方案中，获自所述患者的生物样品(例如血液)中的CAR+T细胞的数量可以经由关于CAR转基因的PCR确定。
E.毒性
在一些实施方案中，评估根据所提供的方法治疗的受试者的可能与所施用细胞相关的毒性的一种或多种体征或症状。施用过继T细胞疗法(如用表达嵌合抗原受体的T细胞进行的治疗可)以诱导毒性作用或结局，如细胞因子释放综合征和神经毒性。在一些例子中，此类效果或结局与高水平的循环细胞因子并行，高水平的循环细胞因子可能是观察到的毒性的基础。
在一些方面，毒性结局是细胞因子释放综合征(CRS)或重度CRS(sCRS)，或与细胞因子释放综合征(CRS)或重度CRS(sCRS)相关，或指示细胞因子释放综合征(CRS)或重度CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法和向受试者施用其他生物制品后可发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)。
通常，CRS由例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的过度的全身免疫反应引起。此类细胞可以释放大量炎性介质，如细胞因子和趋化因子。细胞因子可能引发急性炎症反应和/或诱导内皮器官损伤，所述内皮器官损伤可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。重度的危及生命的CRS可能导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他重度的危及生命的毒性可以包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。在一些方面，发热、特别是高热(≥38.5℃或≥101.3°F)与CRS或其风险相关。在一些情况下，CRS的特征或症状类似于感染。在一些实施方案中，在呈现CRS症状的受试者中也考虑感染，并且可以施用通过培养的监测和经验性抗生素疗法。与CRS相关的其他症状可以包括心功能障碍、成人呼吸窘迫综合征、肾和/或肝衰竭、凝血障碍、弥散性血管内凝血和毛细血管渗漏综合征。
可以使用抗炎疗法(如抗IL-6疗法，例如，抗IL-6抗体，例如，托珠单抗)或抗生素或如所述的其他药剂治疗CRS。CRS的结局、体征和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方案中，在特定施用实现或不实现给定的CRS相关结局、体征或症状的情况下，可以指定特定结局、体征和症状和/或其量或程度。
在施用CAR表达细胞的情况下，CRS通常在输注表达CAR的细胞后两周内发生。参见Abramson等人,J Clin Onc.2018；36(15_增刊):7505。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于3天或超过21天时发生。在用JCAR017治疗的非霍奇金淋巴瘤(NHL)受试者中，CRS通常在输注后在两周内发生。参见Abramson等人,Blood 2017；130:581。CRS的发生率和时机可能与在输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS包括干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白介素(IL)-2的血清水平升高。可在CRS中快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。
与CRS相关的示例性症状包括发热、疲劳、恶心、头痛、僵直、寒战、低血压、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑病、ALT/AST升高、肾衰竭、心脏病、低血压、缺氧、肌痛/关节痛、厌食、神经紊乱和死亡。神经系统并发症包括谵妄、癫痫发作样活动、意识错乱、找词困难、失语和/或变得迟钝。与CRS相关的其他结局包括疲劳、恶心、头痛、癫痫发作、心动过速、肌痛、皮疹、急性血管渗漏综合征、肝功能损害和肾衰竭。在一些方面，CRS与一种或多种因子(如血清铁蛋白、d-二聚体、转氨酶、乳酸脱氢酶和甘油三酯)的增加相关，或与低纤维蛋白原血或肝脾肿大相关。与CRS相关的其他示例性体征或症状包括血流动力学不稳定、发热型嗜中性粒细胞减少症、血清C反应蛋白(CRP)增加、凝血参数(例如，国际标准化比率(INR)、凝血酶原时间(PTI)和/或纤维蛋白原)变化、心脏和其他器官功能的变化、和/或绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)。
在一些实施方案中，与CRS相关的结局包括以下中的一种或多种：持续发热，例如指定温度(例如高于为或约38摄氏度)的发热持续两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或持续至少连续三天；高于为或约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如与至少两种细胞因子(例如，由以下组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子(fracktalkine)和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比，例如至少为或约75倍的最大倍数变化，或此类细胞因子中至少一种的例如至少为或约250倍的最大倍数变化；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管活性加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于为或约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫发作)。在一些实施方案中，可以与CRS同时观察到神经毒性(NT)。
示例性CRS相关结局包括增加的或高的一种或多种因子(包括细胞因子和趋化因子和与CRS相关的其他因子)的血清水平。示例性结局还包括一种或多种此类因子的合成或分泌的增加。这种合成或分泌可以由T细胞或与T细胞相互作用的细胞(如先天免疫细胞或B细胞)进行。
已经研发出CRS标准，其显现出与CRS的发作相关联，以预测哪些患者更可能有发生sCRS的风险(参见Davilla等人Science translational medicine.2014；6(224):224ra25；Abramson等人,J Clin Onc.2018；36(15_增刊):7505)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经系统改变、升高的炎性细胞因子的血清水平，所述炎性细胞因子如一组七种细胞因子(IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和GM-CSF)，它们的治疗诱导的升高可能与治疗前肿瘤负荷和sCRS症状二者密切相关。在一些实施方案中，反映CRS分级的标准是下表2中详述的那些。
在一些实施方案中，高剂量血管加压药疗法包括下表3中所述的那些。
在一些实施方案中，毒性结局是重度CRS。在一些实施方案中，毒性结局是重度CRS的不存在(例如中度或轻度CRS)。
在一些实施方案中，可以测量发热和/或C反应蛋白(CRP)的水平。在一些实施方案中，CRS相关血清因子或CRS相关结局包括炎性细胞因子和/或趋化因子的水平和/或浓度的增加，所述炎性细胞因子和/或趋化因子包括Flt-3L、分形趋化因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1、MIP-1、sIL-2Rα或肿瘤坏死因子α(TNFα)。在一些实施方案中，所述因子或结局包括C反应蛋白(CRP)。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平的受试者未患CRS。在一些实施方案中，CRS的量度包括CRP的量度和指示CRS的另一因子。
在一些实施方案中，与重度CRS或3级CRS或更高级CRS(如4级或更高级)相关的结局包括以下中的一种或多种：持续发热，例如指定温度(例如高于为或约38摄氏度)的发热持续两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或持续至少连续三天；高于为或约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如与至少两种细胞因子(例如，由以下组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子(fracktalkine)和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比，例如至少为或约75倍的最大倍数变化，或此类细胞因子中至少一种的例如至少为或约250倍的最大倍数变化；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管活性加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于为或约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫发作)。在一些实施方案中，重度CRS包括需要在重症监护病房(ICU)中进行管理或护理的CRS。
在一些实施方案中，CRS(如重度CRS)包括以下的组合：(1)持续发热(至少38摄氏度的发热至少三天)和(2)CRP的血清水平为至少或至少约20mg/dL。在一些实施方案中，所述CRS涵盖需要使用两种或更多种血管加压药的低血压或需要机械通气的呼吸衰竭。在一些实施方案中，在第二次或后续施用中增加血管加压药的剂量。
在一些实施方案中，重度CRS或3级CRS涵盖丙氨酸转氨酶的增加、天冬氨酸转氨酶的增加、寒战、发热性嗜中性粒细胞减少症、头痛、左心室功能不全、脑病、脑积水和/或震颤。在一些实施方案中，将重度CRS用另外的T细胞耗尽疗法(如环磷酰胺)治疗(Brudno等人,Blood.2016；127(26):3321-30)。
可以指定测量或检测各种结局的方法。
在一些方面，毒性结局是神经毒性或与神经毒性相关。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括意识错乱、谵妄、失语、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫发作(任选地如通过脑电图(EEG)证实)、升高的β淀粉样蛋白(Aβ)水平、升高的谷氨酸水平和升高的氧自由基水平。在一些实施方案中，基于严重程度对神经毒性进行分级(例如，使用1-5级量表(参见例如美国国家癌症研究所—常见毒性标准(National Cancer Institute—Common Toxicity Criteria)第5.00版(NCI CTCAE5.0版))
在一些情况下，神经病学症状可能是sCRS的最早症状。在一些实施方案中，观察到神经病学症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方案中，神经病学变化的持续时间可能在3至23天的范围内。在一些情况下，神经病学变化的恢复是在sCRS的其他症状消退后发生。在一些实施方案中，用抗IL-6和/或一种或多种类固醇治疗不会加速神经病学变化消退的时间或程度。
在一些实施方案中，重度神经毒性包括3级或更高分级神经毒性，如表4所示。
在一些实施方案中，在例如，如根据任何前述实施方案所测量，在确定或确认(如首次确定或确认)所述受试者展现出持续发热时或此前不久的时间，施用用于治疗所述毒性的一种或多种干预或药剂(如靶向毒性的疗法)。在一些实施方案中，在这种确认或确定的某一时间段内，如在这种确认或确定的30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时或8小时内，施用所述一种或多种靶向毒性的疗法。
在一些实施方案中，在根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者中观察到的所得反应在大多数所治疗受试者中与任何毒性的低风险或重度毒性的低风险相关或导致任何毒性的低风险或重度毒性的低风险。在一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％、50％、55％、60％、70％、80％或90％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者未展现出任何分级的CRS或任何分级的神经毒性(NT)。在一些实施方案中，大于或大于约50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者未展现出重度CRS或3级或更高分级的CRS。在一些实施方案中，大于或大于约50％、60％、70％、80％、90％或95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者未展现出重度神经毒性或3级或更高分级的神经毒性，如4级或5级神经毒性。
在一些实施方案中，至少为或约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现早发性CRS或神经毒性和/或不展现开始施用后早于1天、2天、3天或4天的CRS发作。在一些实施方案中，至少为或约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现开始施用后早于3天、4天、5天、6天或7天的神经毒性发作。在一些方面，在根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者之间神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或中值消退时间时或之后。在一些情况下，在根据所述方法治疗的受试者之间神经毒性的中值发作大于为或约8、9、10或11天。
II.细胞疗法和细胞工程化
在一些实施方案中，所述细胞含有或经工程化以含有工程化受体，例如工程化抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。还提供此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富集此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞，如T细胞或CD8+或CD4+细胞。所述组合物包括用于施用(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于向受试者(例如，患者)施用细胞和组合物的治疗方法。
因此，在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程化引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将其与诱导反应(如增殖、存活和/或激活)的刺激物进行组合，例如如通过细胞因子或激活标记的表达测量的，然后转导激活的细胞，并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。
A.重组受体
在一些实施方案中，用于根据所提供的组合治疗方法使用的细胞疗法(例如T细胞疗法)包括施用表达重组受体的工程化细胞，所述重组受体设计为识别和/或特异性地结合与疾病或病症(如癌症(非霍奇金淋巴瘤；NHL))相关的分子，并且在与此类分子结合后引起针对此类分子的反应，如免疫反应。所述受体可以包括嵌合受体，例如嵌合抗原受体(CAR)；和其他转基因抗原受体，包括转基因T细胞受体(TCR)。
1.嵌合抗原受体
在所提供的方法和用途的一些实施方案中，所述工程化细胞(如T细胞)表达嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合受体含有一个或多个结构域，所述一个或多个结构域使提供针对所期望抗原(例如肿瘤抗原)的特异性的配体结合结构域(例如抗体或抗体片段)与细胞内信号传导结构域组合。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是激活细胞内结构域部分，如T细胞激活结构域，从而提供初级激活信号。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域含有或另外含有共刺激信号传导结构域以促进效应子功能。在与分子(例如抗原)特异性结合后，受体通常将免疫刺激信号(如ITAM转导的信号)递送到细胞中，从而促进靶向所述疾病或病症的免疫反应。在一些实施方案中，嵌合受体在被基因工程化至免疫细胞中时，可以调节T细胞活性，并且在一些情况下可以调节T细胞分化或稳态，由此产生在体内具有改善的寿命、存活和/或持久性的基因工程化细胞，如用于过继细胞治疗方法。
示例性抗原受体(包括CAR)以及将此类抗原受体工程化并引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO2012/129514、WO 2014031687、WO 2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061，美国专利申请公开号US2002131960、US2013287748、US20130149337，美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353、和8,479,118，以及欧洲专利申请号EP 2537416；和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人,Cancer Discov.2013年4月；3(4):388-398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18(2):160-75。在一些方面，所述抗原受体包括如美国专利号7,446,190中所述的CAR，以及国际专利申请公开号WO/2014055668A1中所述的那些。CAR的例子包括如在任何上述出版物中披露的CAR，所述出版物例如WO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；和Brentjens等人,SciTransl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号8,389,282。
在一些实施方案中，所述工程化细胞(如T细胞)表达对特定抗原(或标记或配体)(如在特定细胞类型的表面上表达的抗原)具有特异性的重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))。在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原是多肽。在一些实施方案中，其是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，所述抗原在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，所述抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
嵌合受体(如CAR)通常包括细胞外抗原结合结构域，所述细胞外抗原结合结构域是抗体分子的一个或多个抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗原结合结构域是抗体分子的一部分，通常是所述抗体的可变重(VH)链区和/或可变轻(VL)链区，例如，scFv抗体片段。在一些实施方案中，所述抗原结合结构域是单结构域抗体(sdAb)，如sdFv、纳米抗体、VHH和VNAR。在一些实施方案中，抗原结合片段包含通过柔性接头连接的抗体可变区。
嵌合受体(如CAR)通常包括细胞外抗原结合结构域，如抗体分子的一部分，通常是抗体的可变重(VH)链区和/或可变轻(VL)链区，例如，scFv抗体片段。在一些实施方案中，所述CAR含有特异性识别在细胞表面上表达的抗原(如完整抗原)的抗体或抗原结合片段(例如scFv)。
所述抗原受体包括含有细胞外抗原结合结构域(如抗体或抗原结合片段)的CAR，其展现出针对肽-MHC复合物的TCR样特异性，也可以称为TCR样CAR。在一些实施方案中，在一些方面，对TCR样CAR的MHC-肽复合物具有特异性的细胞外抗原结合结构域通过接头和/或一个或多个跨膜结构域与一个或多个细胞内信号传导组分连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以模拟或类似通过天然抗原受体(如TCR)的信号，并且任选地模拟或类似通过这种受体与共刺激受体的组合的信号。
提及“主要组织相容性复合物”(MHC)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机器加工的肽抗原)复合。在一些情况下，MHC分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即MHC-肽复合物，用于呈递具有T细胞上的抗原受体(如TCR或TCR样抗体)可识别的构象的抗原。通常，MHC I类分子是具有跨膜α链(在一些情况下具有三个α结构域)和非共价缔合的β2微球蛋白的异二聚体。通常，MHC II类分子由两种跨膜糖蛋白α和β构成，两者通常都跨越膜。MHC分子可以包括MHC的有效部分，所述有效部分含有抗原结合位点或用于结合肽的位点以及由适当抗原受体识别所必需的序列。在一些实施方案中，MHC I类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，其中MHC-肽复合物由T细胞(如通常是CD8+T细胞，但是在一些情况下是CD4+T细胞)识别。在一些实施方案中，MHC II类分子将源自囊泡系统的肽递送至细胞表面，其中肽通常被CD4+T细胞识别。通常，MHC分子由一组连锁基因座编码，它们在小鼠中统称为H-2，并且在人中统称为人白细胞抗原(HLA)。因此，通常人MHC也可以称为人白细胞抗原(HLA)。
术语“MHC-肽复合物”或“肽-MHC复合物”或其变体是指肽抗原与MHC分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在MHC分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，MHC-肽复合物存在或展示于细胞表面上。在一些实施方案中，MHC-肽复合物可以由抗原受体(如TCR、TCR样CAR或其抗原结合部分)特异性识别。
在一些实施方案中，多肽的肽(如肽抗原或表位)可以与MHC分子缔合，如用于由抗原受体识别。通常，肽源自或基于较长生物分子(如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，肽通常具有约8至约24个氨基酸的长度。在一些实施方案中，对于MHC II类复合物中的识别，肽的长度为从或从约9至22个氨基酸。在一些实施方案中，对于MHC I类复合物中的识别，肽的长度为从或从约8至13个氨基酸。在一些实施方案中，在识别MHC分子(如MHC-肽复合物)背景中的肽后，抗原受体(如TCR或TCR样CAR)产生或触发激活信号至T细胞，从而诱导T细胞反应，如T细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性T细胞反应或其他反应。
在一些实施方案中，TCR样抗体或抗原结合部分是已知的或可通过已知方法产生(参见例如，美国公开申请号US2002/0150914；US2003/0223994；US2004/0191260；US2006/0034850；US2007/00992530；US20090226474；US20090304679；和国际PCT公开号WO 03/068201)。
在一些实施方案中，特异性地结合MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定MHC-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，MHC-肽复合物的肽是能够结合MHC的抗原的表位，所述抗原是例如肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原或如下文所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主施用有效量的免疫原以用于引发免疫反应，其中所述免疫原保持其三维形式，持续足以引发针对所述肽在MHC分子的结合沟中的三维呈递的免疫反应的时间段。然后测定从宿主中收集的血清以确定是否产生了识别MHC分子结合沟中的肽的三维呈递的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分MHC-肽复合物与单独的MHC分子、单独的目的肽以及MHC与无关肽的复合物。然后可以分离所需抗体。
在一些实施方案中，特异性地结合MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，可以产生突变体Fab、scFv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，例如，其中文库的成员在一个或多个CDR的一个或多个残基处发生突变。参见例如，美国公开申请号US20020150914、US2014/0294841；和Cohen CJ.等人(2003)J Mol.Recogn.16:324-332。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括抗原结合的片段(Fab)片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、完全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。该术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类的抗体，包括IgG及其亚类IgM、IgE、IgA和IgD。
在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(Fab、F(ab’)2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在其他实施方案中，抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别是IgG1(例如，人IgG1)。在另一个实施方案中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体中结合完整抗体所结合抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2；双抗体；线性抗体；可变重链(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和单结构域VH单一抗体；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
术语“互补决定区”和“CDR”与“高变区”或“HVR”同义，在一些情况下是已知的，是指抗体可变区内的非连续氨基酸序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且在每个轻链可变区中有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。“框架区”和“FR”是已知的，在一些情况下是指重链和轻链的可变区的非CDR部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。
给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任一种容易地确定，包括以下文献中所述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996),“Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography,”J.Mol.Biol.262,732-745”。(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人,“IMGT uniquenumbering for immunoglobulin and T cell receptor variabledomains and Igsuperfamily V-like domains,”Dev Comp Immunol,2003年1月；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A and Plückthun A,“Yet another numbering scheme forimmunoglobulin variabledomains:an automatic modeling and analysis tool,”JMolBiol,2001年6月8日；309(3):657-70(“Aho”编号方案)；以及Martin等人,“Modelingantibody hypervariable loops:a combined algorithm,”PNAS,1989,86(23):9268-9272(“AbM”编号方案)。
给定CDR或FR的边界可能根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案基于结构比对，而Chothia方案基于结构信息。Kabat和Chothia方案的编号都基于最常见的抗体区域序列长度，其中通过插入字母(例如“30a”)提供插入，并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。AbM方案是Kabat与Chothia定义之间的折衷，是基于Oxford Molecular'sAbM抗体建模软件使用的方案。
下表5列出了如分别通过Kabat、Chothia、AbM和Contact方案鉴定的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3以及CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的示例性位置边界。对于CDR-H1，使用Kabat和Chothia两种编号方案列出残基编号。FR位于CDR之间，例如，FR-L1位于CDR-L1之前，FR-L2位于CDR-L1与CDR-L2之间，FR-L3位于CDR-L2与CDR-L3之间，等等。应注意，因为所示的Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入，所以当使用所示的Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端根据环的长度在H32与H34之间变化。
1-Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes of Health,马里兰州贝塞斯达
2-Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948
因此，除非另有规定，否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的“CDR”或“互补决定区”或单独指定的CDR(例如，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)涵盖如由任何前述方案或其他已知方案所定义的一个(或特定的)互补决定区。例如，在声明特定的CDR(例如，CDR-H3)含有给定VH或VL区氨基酸序列中的相应CDR的氨基酸序列的情况下，应理解，这种CDR具有在可变区内的相应CDR(例如，CDR-H3)的序列，如由任何前述方案或其他已知方案所定义的。在一些实施方案中，指定了特定的CDR序列。使用各种编号方案描述所提供抗体的示例性CDR序列，但应当理解，所提供抗体可以包括如根据任何其他上述编号方案或熟练技术人员已知的其他编号方案所描述的CDR。
同样，除非另有规定，否则给定抗体或其区域如其可变区的FR或单独指定的一个或多个FR(例如，FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4)应理解为涵盖如任何已知方案所定义的一个(或特定)框架区。在一些情况下，指定用于鉴定特定CDR、FR或多个特定FR或CDR的鉴定方案，如通过Kabat、Chothia、AbM或Contact方法或其他已知方案定义的CDR。在其他情况下，给出了CDR或FR的特定氨基酸序列。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链中参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个CDR。(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007)。单一VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，所述CAR包含特异性地结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原如癌症标记或要靶向的细胞或疾病(如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，如本文所述或已知的任何靶抗原。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区域或链的那些)，和/或可能并非通过对天然存在的完整抗体进行酶消化产生的片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基都源自非人CDR并且所有或基本上所有FR氨基酸残基都源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其已经经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲代非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
在一些实施方案中，所述重组受体(如嵌合受体，例如CAR)包括与抗原(或配体)结合(如特异性地结合)的细胞外抗原结合结构域，如抗体或抗原结合片段(例如scFv)。所述嵌合受体靶向的抗原包括在经由过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的背景中表达的那些抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌症、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如B型白血病、T型白血病和髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原是或包含选自αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、表皮生长因子受体III型突变体(EGFR vIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPRC5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、Lewis Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、肾母细胞瘤1(WT-1)、病原体特有的或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任一种。在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原是或包括CD19。在一些实施方案中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，并且所述抗原是CD19。在一些实施方案中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，并且所述抗原是CD19。
在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任一种。在一些实施方案中，由所述受体靶向的抗原是CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在特定方面，所述抗原是CD19。在一些实施方案中，任何此类抗原是在人B细胞上表达的抗原。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段(例如，scFv或VH结构域)特异性地识别抗原(如CD19)。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段源自特异性地结合CD19的抗体或抗原结合片段或者是其变体。在一些实施方案中，所述抗原是CD19。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD19具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD19的抗体或抗体片段是小鼠来源的抗体，如FMC63和SJ25C1。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段是人抗体，例如如美国专利公开号US 2016/0152723中所述。
在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包括源自FMC63的VH和/或VL，其在一些方面可以是scFv。FMC63通常是指针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987).Leucocyte typing III.302)。在一些实施方案中，FMC63抗体包含SEQ ID NO:38和39分别所示的CDR-H1和CDR-H2，和SEQ ID NO:40或54所示的CDR-H3；以及SEQ ID NO:35所示的CDR-L1、SEQ ID NO:36或55所示的CDR-L2和SEQ IDNO:37或56所示的CDR-L3序列。在一些实施方案中，FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，scFv包含含有SEQ ID NO:35的CDR-L1序列、SEQ ID NO:36的CDR-L2序列和SEQ ID NO:37的CDR-L3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:38的CDR-H1序列、SEQ ID NO:39的CDR-H2序列和SEQ ID NO:40的CDR-H3序列的可变重链，或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:41所示的FMC63可变重链区和SEQ ID NO:42所示的FMC63可变轻链区，或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。在一些实施方案中，所述可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，所述接头如SEQ ID NO:59所示。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv由SEQID NO:57所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:57展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包括源自SJ25C1的VH和/或VL，其在一些方面可以是scFv。SJ25C1是针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987).Leucocyte typing III.302)。在一些实施方案中，SJ25C1抗体包含分别在SEQ ID NO:47-49所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及分别在SEQID NO:44-46所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列。在一些实施方案中，SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，scFv包含含有SEQ ID NO:44的CDR-L1序列、SEQ ID NO:45的CDR-L2序列和SEQ ID NO:46的CDR-L3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:47的CDR-H1序列、SEQ ID NO:48的CDR-H2序列和SEQ ID NO:49的CDR-H3序列的可变重链，或具有与其至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的前述任一项的变体。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:50所示的SJ25C1的可变重链区和SEQ ID NO:51所示的SJ25C1的可变轻链区，或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。在一些实施方案中，所述可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，所述接头如SEQ ID NO:52所示。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:53展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些方面，所述重组受体(例如嵌合抗原受体)包括细胞外部分，其含有一个或多个配体(例如抗原)结合结构域(如抗体或其片段)；和一个或多个细胞内信号传导区或结构域(也可互换地称为胞质信号传导结构域或区域)。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scFv。在一些方面，所述嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)的信号传导结构域。在一些方面，所述重组受体(例如CAR)还包括间隔子和/或跨膜结构域或部分。在一些方面，所述间隔子和/或跨膜结构域可以连接含有配体(例如抗原)结合结构域的细胞外部分和一个或多个细胞内信号传导区或结构域。
在一些实施方案中，所述重组受体(如CAR)还包括间隔子，所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰形式，如铰链区(例如，IgG4铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，所述重组受体还包含间隔子和/或铰链区。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的恒定区或部分。在一些方面，所述恒定区的部分用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况下相比，所述间隔子的长度可以提供抗原结合后增强的细胞反应性。在一些例子中，所述间隔子具有为或约12个氨基酸的长度或者具有不超过12个氨基酸的长度。示例性间隔子包括具有以下的那些：至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸、约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸，并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数。在一些实施方案中，间隔子区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括仅IgG4铰链、与CH2和CH3结构域连接的IgG4铰链或与CH3结构域连接的IgG4铰链。示例性间隔子包括但不限于以下文献中所述的那些：Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153；Hudecek等人(2015)Cancer Immunol Res.3(2):125-135；或国际专利申请公开号WO 2014031687，美国专利号8,822,647或公开的申请号US2014/0271635。
在一些实施方案中，所述间隔子仅含有IgG的铰链区，如仅IgG4或IgG1的铰链，如SEQ ID NO:1所示且由SEQ ID NO:2所示的序列编码的仅铰链间隔子。在一些实施方案中，所述间隔子是与CH2和/或CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链。在一些实施方案中，所述间隔子是与CH2和CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:4所示。在一些实施方案中，所述间隔子是仅与CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:3所示。在一些实施方案中，所述间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是IgD的。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:5所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有与SEQ ID NO:1、3、4和5中的任一个展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有与SEQ ID NO:1展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:1所示的序列。
在一些方面，所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链(任选地IgG4铰链)或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链(任选地IgG4铰链)或其修饰形式或由其组成；或(d)由以下项组成或包含以下项：SEQ ID NO:1、3-5、27-34或58所示的氨基酸序列或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体，或(e)包含式X1PPX2P(其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸)或由其组成。
在一些实施方案中，所述抗原受体包含与细胞外结构域直接或间接连接的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括连接细胞外结构域和细胞内信号传导结构域的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含ITAM。例如，在一些方面，所述抗原识别结构域(例如细胞外结构域)通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如模拟通过抗原受体复合物(如TCR复合物)(在CAR的情况下)进行激活和/或经由另一种细胞表面受体传导信号的信号传导组分)连接。在一些实施方案中，所述嵌合受体包含在细胞外结构域(例如scFv)与细胞内信号传导结构域之间连接或融合的跨膜结构域。因此，在一些实施方案中，所述抗原结合组分(例如，抗体)与一种或多种跨膜结构域和细胞内信号传导结构域连接。
在一个实施方案中，使用与受体(例如CAR)中的结构域之一天然地缔合的跨膜结构域。在一些情况下，通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域，以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。
在一些实施方案中，所述跨膜结构域源自天然或合成来源。当来源是天然的时，在一些方面，所述结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括源自以下(即包含其至少一个或多个跨膜区)的那些：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137(4-1BB)或CD154。可替代地，在一些实施方案中，所述跨膜结构域是合成的。在一些方面，所述合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，所述连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域来实现。在一些方面，所述跨膜结构域含有CD28的跨膜部分或其变体。所述细胞外结构域和跨膜可以直接或间接连接。在一些实施方案中，所述细胞外结构域和跨膜结构域通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。
在一些实施方案中，所述受体(例如CAR)的跨膜结构域是人CD28的跨膜结构域(例如人CD28(登录号：P10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域)或其变体，或是包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:8展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述重组受体的含有跨膜结构域的部分包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述重组受体(例如，CAR)包括至少一种或多种细胞内信号传导组分，如细胞内信号传导区或结构域。在一些方面，将T细胞激活描述为由两个类别的胞质信号传导序列来介导：通过TCR起始抗原依赖性初级激活的那些(初级胞质信号传导序列)，以及以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的那些(次级胞质信号传导序列)。在一些方面，所述CAR包括这样的信号传导组分中的一种或两种。所述细胞内信号传导区包括模拟或类似以下的那些：通过天然抗原受体的信号、通过这种受体与共刺激受体的组合的信号、和/或仅通过共刺激受体的信号。在一些实施方案中，短的寡肽或多肽接头(例如，长度在2与10个之间的氨基酸的接头，如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)存在并形成CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间的连接。
在一些实施方案中，在连接CAR后，CAR的胞质结构域或细胞内信号传导区激活免疫细胞(例如，工程化以表达CAR的T细胞)的正常效应子功能或反应中的至少一种。例如，在一些情况下，所述CAR诱导T细胞的功能，如细胞溶解活性或T辅助细胞活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导区的截短部分(例如，如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区(例如包含一个或多个细胞内信号传导结构域)包括T细胞受体(TCR)的胞质序列，并且在一些方面还包括共受体(其在天然背景下与这种受体协同起作用以在抗原受体接合后启动信号转导)和/或此类分子的任何衍生物或变体的那些，和/或具有相同功能能力的任何合成序列。在一些实施方案中，例如包含一个或多个细胞内结构域的细胞内信号传导区包括参与提供共刺激信号的区域或结构域的胞质序列。
在一些方面，所述CAR包括调节TCR复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其称为免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM)。含有ITAM的初级胞质信号传导序列的例子包括源自CD3ζ链、FcRγ、CD3γ、CD3δ和CD3ε的那些。在一些实施方案中，CAR中的一种或多种胞质信号传导分子含有源自CD3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。
在一些实施方案中，所述受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链，例如CD3ζ链。因此，在一些方面，所述抗原结合部分连接至一个或多个细胞信号传导模块。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，所述受体(例如，CAR)还包括一种或多种另外的分子(如Fc受体γ、CD8α、CD8β、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，所述CAR或其他嵌合受体包括CD3-zeta(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8α、CD8β、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，所述细胞内(或胞质)信号传导区包含人CD3链、任选地CD3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的亚型3的112个AA的胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区包含SEQ ID NO:13、14或15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13、14或15展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
在天然TCR的情况下，完全激活通常不仅需要经由TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成次级或共刺激信号的组分也被包括在CAR中。在其他实施方案中，所述CAR不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的CAR在同一细胞中表达，并且提供用于生成次级或共刺激信号的组分。
在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述CAR包括共刺激受体(如CD28、4-1BB、OX40(CD134)、CD27、DAP10、DAP12、ICOS和/或其他共刺激受体)的信号传导结构域和/或跨膜部分。在一些实施方案中，所述CAR包括CD28或4-1BB(如人CD28或人4-1BB)的共刺激区域或结构域。
在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区或结构域包含人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如其41个氨基酸的结构域和/或在天然CD28蛋白的位置186-187处具有LL至GG取代的结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域可以包含SEQ ID NO:10或11所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:10或11展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内区域包含4-1BB的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如人4-1BB(登录号Q07011.1)的42个氨基酸的胞质结构域或其功能变体或部分，如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:12展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内区域包含含有SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的细胞内共刺激信号传导结构域。
在一些方面，同一CAR包括初级(或激活)胞质信号传导区和共刺激信号传导组分二者。
在一些实施方案中，所述激活结构域包括于一个CAR内，而共刺激组分是由识别另一种抗原的另一种CAR提供。在一些实施方案中，CAR包括均在同一细胞上表达的激活或刺激CAR、共刺激CAR(参见WO 2014/055668)。在一些方面，所述细胞包括一种或多种刺激或激活CAR和/或共刺激CAR。在一些实施方案中，所述细胞还包括抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月)，如识别除了与所述疾病或病症相关和/或为所述疾病或病症特有的抗原以外的抗原的CAR，其中通过靶向疾病的CAR递送的激活信号由于抑制性CAR与其配体的结合而有所减小或被抑制，例如以减小脱靶效应。
在一些实施方案中，这两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的连接激活细胞或诱导反应，但是第二抑制性受体与其抗原的连接诱导抑制或减弱该反应的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR(iCAR)的组合。例如，这种策略可以用于例如降低在如下背景中的脱靶效应的可能性，在所述背景中激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在所述疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些方面，所述嵌合受体是或包括抑制性CAR(例如iCAR)，并且包括减弱或抑制免疫反应(如细胞中ITAM和/或共刺激促进的反应)的细胞内组分。此类细胞内信号传导组分的示例是在免疫检查点分子(包括PD-1、CTLA4、LAG3、BTLA、OX2R、TIM-3、TIGIT、LAIR-1、PGE2受体、EP2/4腺苷受体(包括A2AR))上发现的那些组分。在一些方面，工程化细胞包含抑制性CAR，所述抑制性CAR包含这种抑制性分子的信号传导结构域或源自这种抑制性分子的信号传导结构域，使得其用于减弱例如由激活和/或共刺激CAR诱导的细胞反应。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合后仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，例如包括来自共刺激受体(如CD28或CD137)的细胞内信号传导结构域的CAR；在一些方面，第三代CAR在一些方面包含不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
在一些实施方案中，所述CAR包含在胞质部分中的一个或多个(例如，两个或更多个)共刺激结构域和激活结构域(例如初级激活结构域)。示例性CAR包括CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些实施方案中，所述抗原受体还包括标记，和/或表达CAR或其他抗原受体的细胞还包括替代标记，如细胞表面标记，所述替代标记可以用于确认细胞被转导或工程化以表达受体。在一些方面，所述标记包括全部或部分(例如，截短形式)的CD34、NGFR或表皮生长因子受体，如这种细胞表面受体的截短形式(例如，tEGFR)。在一些实施方案中，编码所述标记的核酸与编码接头序列(如可切割的接头序列，例如T2A)的多核苷酸可操作地连接。例如，标记以及任选地接头序列可以是如公开的专利申请号WO 2014031687中所披露的任一种。例如，所述标记可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接接头序列，如T2A可切割接头序列。
截短的EGFR(例如tEGFR)的示例性多肽包含SEQ ID NO:7或16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7或16展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。示例性T2A接头序列包含SEQID NO:6或17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6或17展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述标记是并非在T细胞上天然发现的或并非在T细胞表面上天然发现的分子(例如，细胞表面蛋白)或其部分。在一些实施方案中，所述分子是非自身分子，例如非自身蛋白，即不被将被过继转移细胞的宿主免疫系统识别为“自身”的分子。
在一些实施方案中，所述标记不提供任何治疗功能和/或不产生除了用作基因工程化标记(例如，用于选择成功工程化的细胞)以外的作用。在其他实施方案中，所述标记可以是治疗性分子或以其他方式发挥一些所需作用的分子，如在体内会遇到的细胞的配体，如用于在过继转移和遇到配体时增强和/或减弱细胞反应的共刺激或免疫检查点分子。
在一些实施方案中，所述CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及细胞内信号传导结构域(含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体)。在一些实施方案中，所述CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及细胞内信号传导结构域(含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体)。在一些此类实施方案中，所述受体还包括含有Ig分子(如人Ig分子)的一部分(如Ig铰链，例如IgG4铰链)的间隔子，如仅铰链间隔子。
在一些实施方案中，所述重组受体(例如CAR)的跨膜结构域是或包括人CD28(例如登录号P01747.1)的跨膜结构域或其变体，如包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与SEQID NO:8展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，所述重组受体的含有跨膜结构域的部分包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:8展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少为或约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述重组受体(例如，CAR)的一种或多种细胞内信号传导组分含有人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如在天然CD28蛋白的位置186-187具有LL至GG取代的结构域。例如，所述细胞内信号传导结构域可以包含SEQ IDNO:10或11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10或11展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含4-1BB(例如登录号Q07011.1)的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与SEQID NO:12展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含细胞内共刺激信号传导结构域，所述细胞内共刺激信号传导结构域包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:12展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含含有SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的细胞内共刺激信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述重组受体(例如CAR)的细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的亚型3的112个AA的胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域。例如，在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:13、14或15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13、14或15展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQID NO:13展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述间隔子仅含有IgG的铰链区，如仅IgG4或IgG1的铰链，如SEQ ID NO:1所示且由SEQ ID NO:2所示的序列编码的仅铰链间隔子。在一些实施方案中，所述间隔子是与CH2和/或CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链。在一些实施方案中，所述间隔子是与CH2和CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:4所示。在一些实施方案中，所述间隔子是仅与CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:3所示。在一些实施方案中，所述间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是IgD的。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:5所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有与SEQ ID NO:1、3、4和5中的任一个展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
例如，在一些实施方案中，所述CAR包括抗体(如抗体片段，包括scFv)、间隔子(如含有免疫球蛋白分子的一部分(如铰链区和/或重链分子的一个或多个恒定区)的间隔子，如含有Ig铰链的间隔子)、含有CD28来源的跨膜结构域的全部或部分的跨膜结构域、CD28来源的细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CAR包括抗体或片段(如scFv)、间隔子(如任何含Ig铰链的间隔子)、CD28来源的跨膜结构域、4-1BB来源的细胞内信号传导结构域和CD3ζ衍生的信号传导结构域。
在一些实施方案中，编码此类CAR构建体的核酸分子例如在编码CAR的序列的下游还包括编码T2A核糖体跳跃元件的序列和/或tEGFR序列。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:6或17所示的T2A核糖体跳跃元件或与SEQ ID NO:6或17展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，还可以产生表达抗原受体(例如CAR)的T细胞以表达截短的EGFR(EGFRt)作为非免疫原性选择表位(例如，通过引入编码由T2A核糖体开关隔开的CAR和EGFRt的构建体以从相同构建体表达两种蛋白质)，然后可以使用所述截短的EGFR作为标记来检测此类细胞(参见例如，美国专利号8,802,374)。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:7或16所示的tEGFR序列或与SEQ ID NO:7或16展现至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，肽(如T2A)可导致核糖体跳过2A元件C末端处肽键的合成(核糖体跳跃)，导致2A序列末端与下游的下一个肽之间分开(参见例如，deFelipe.Genetic Vaccines and Ther.2:13(2004)和deFelipe等人Traffic 5:616-626(2004))。已知许多2A元件。可以用于本文公开的方法和核酸中的2A序列的例子包括但不限于来自口蹄疫病毒的2A序列(F2A，例如SEQ ID NO:21)、来自马鼻炎A病毒的2A序列(E2A，例如SEQ ID NO:20)、来自明脉扁刺蛾β四体病毒(Thosea asigna virus)的2A序列(T2A，例如SEQ ID NO:6或17)和来自猪捷申病毒(porcine teschovirus)-1的2A序列(P2A，例如SEQID NO:18或19)，如美国专利公开号20070116690中所述。
在任何实施方案中的一些中，所述CAR按顺序包含对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自的共刺激分子(任选地是或包含4-1BB)的胞质信号传导结构域、以及源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域(任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域)，并且所述CAR任选地还包括在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
在任何实施方案中的一些中，所述CAR按顺序包括对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域(任选地是或包含4-1BB信号传导结构域)、以及源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域(任选地是CD3ζ信号传导结构域)。
在任何实施方案中的一些中，所述CAR按顺序包含对抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、源自共刺激分子的胞质信号传导结构域(任选地是4-1BB信号传导结构域)、以及源自含有ITAM的初级信号传导分子的胞质信号传导结构域(任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域)，或由其组成。在一些方面，所述间隔子是如下多肽间隔子：(a)包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4铰链)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，和/或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度是为或为约12个氨基酸，和/或包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成；或(d)具有以下项或由以下项组成：SEQ ID NO:1的序列、由SEQ ID NO:2编码的序列、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQID NO:34，或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；和/或初级信号传导结构域包含SEQ ID NO:13或14或15或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；和/或scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列，和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列，或者其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:59的接头和VL，和/或scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:1或由其组成；所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域，或包含SEQ ID NO:9或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述scFv含有FMC63的结合结构域或CDR或VH和VL；所述初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:30或由其组成；所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域，或包含SEQ ID NO:9或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述scFv含有FMC63的结合结构域或CDR或VH和VL；所述初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:31或由其组成；所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域，或包含SEQ ID NO:9或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述scFv含有FMC63的结合结构域或CDR或VH和VL；所述初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:33或由其组成；所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域，或包含SEQ ID NO:9或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述scFv含有FMC63的结合结构域或CDR或VH和VL；所述初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:34或由其组成；所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域，或包含SEQ ID NO:9或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体；所述scFv含有FMC63的结合结构域或CDR或VH和VL；所述初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
由施用至受试者的细胞表达的重组受体(如CAR)通常识别或特异性结合在所治疗的疾病或病症或其细胞中表达、与所治疗的疾病或病症或其细胞相关和/或为所治疗的疾病或病症或其细胞所特有的分子。在与分子(例如抗原)特异性结合后，受体通常将免疫刺激信号(如ITAM转导的信号)递送到细胞中，从而促进靶向所述疾病或病症的免疫反应。例如，在一些实施方案中，所述细胞表达与抗原特异性结合的CAR，所述抗原由所述疾病或病症的细胞或组织表达或与所述疾病或病症相关。
2.T细胞受体
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的工程化细胞(如T细胞)是表达T细胞受体(TCR)或其抗原结合部分的细胞，所述抗体或其抗原结合部分识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或T细胞表位。
在一些实施方案中，“T细胞受体”或“TCR”是如下分子，该分子含有可变α和β链(也分别称为TCRα和TCRβ)或可变γ和δ链(也分别称为TCRγ和TCRδ)或其抗原结合部分，并且能够特异性结合与MHC分子结合的肽。在一些实施方案中，TCR呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的TCR一般在结构上相似，但是表达它们的T细胞可以具有不同的解剖位置或功能。TCR可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，发现TCR在T细胞(或T淋巴细胞)的表面上，在此处它通常负责识别结合至主要组织相容性复合物(MHC)分子的抗原。
除非另有说明，否则术语“TCR”应理解为涵盖完整的TCR以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，TCR是完整或全长TCR，包括呈αβ形式或γδ形式的TCR。在一些实施方案中，TCR是这样的抗原结合部分，其少于全长TCR但与在MHC分子中结合的特定肽结合(如与MHC-肽复合物结合)。在一些情况下，TCR的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整TCR的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整TCR结合的肽表位(如MHC-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有TCR的可变结构域(如TCR的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定MHC-肽复合物结合的结合位点。通常，TCR的可变链含有参与肽、MHC和/或MHC-肽复合物的识别的互补决定区。
在一些实施方案中，TCR的可变结构域含有超变环或互补决定区(CDR)，它们通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，TCR的CDR或其组合形成给定TCR分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。TCR链的可变区内的各个CDR通常由框架区(FR)隔开，与CDR相比，所述框架区通常在TCR分子之间展示较低可变性(参见例如，Jores等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia等人,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，CDR3是负责抗原结合或特异性的主要CDR，或者是在给定TCR可变区的用于肽-MHC复合物的加工肽部分的抗原识别和/或用于与其相互作用的三个CDR中最重要的CDR。在一些情况下，α链的CDR1可以与某些抗原肽的N末端部分相互作用。在一些情况下，β链的CDR1可以与肽的C末端部分相互作用。在一些情况下，CDR2对与MHC-肽复合物的MHC部分的相互作用或识别具有最强的作用或者是主要的负责CDR。在一些实施方案中，β链的可变区可以含有另外的高变区(CDR4或HVR4)，其通常参与超抗原结合而非抗原识别(Kotb(1995)Clinical MicrobiologyReviews,8:411-426)。
在一些实施方案中，TCR还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短胞质尾(参见例如，Janeway等人,Immunobiology:The Immune Systemin Health and Disease,第3版,Current Biology Publications,第4:33页,1997)。在一些方面，TCR的每条链可以具有一个N末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于C末端的短胞质尾。在一些实施方案中，TCR与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白质缔合。
在一些实施方案中，TCR链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定TCR链(例如，α链或β链)的细胞外部分可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，如可变结构域(例如，Vα或Vβ；通常为基于Kabat编号的氨基酸1至116，Kabat等人,“Sequences ofProteins of Immunological Interest”,USDept.Health and Human Services,PublicHealth Service National Institutes of Health,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定结构域或Cα，通常为基于Kabat编号的链的位置117至259；或β链恒定结构域或Cβ，通常为基于Kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的TCR的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，其中可变结构域各自含有CDR。TCR的恒定结构域可含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接TCR的两条链。在一些实施方案中，TCR可在每条α和β链中具有另外的半胱氨酸残基，使得TCR在恒定结构域中含有两个二硫键。
在一些实施方案中，所述TCR链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，所述TCR链含有胞质尾。在一些情况下，所述结构允许TCR与其他分子(像CD3)及其亚基缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的TCR可以将蛋白质锚定在细胞膜中并与CD3信号传导设备或复合物的不变亚基缔合。CD3信号传导亚基(例如，CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ链)的细胞内尾含有TCR复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM。
在一些实施方案中，TCR可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者其可以是单链TCR构建体。在一些实施方案中，TCR是含有两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体，所述链是通过例如一个或多个二硫键连接。
在一些实施方案中，TCR可以从一个或多个已知的TCR序列(如Vα,β链的序列)产生，所述一个或多个已知的TCR序列的基本上全长的编码序列是易于获得的。用于从细胞来源获得全长TCR序列(包括V链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码TCR的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码TCR的核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增获得，或者通过公众可获得的TCR DNA序列的合成获得。
在一些实施方案中，TCR是从生物来源获得，如来自细胞(如来自T细胞(例如细胞毒性T细胞))、T细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，T细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，TCR是胸腺选择的TCR。在一些实施方案中，TCR是新表位限制性TCR。在一些实施方案中，T细胞可以是培养的T细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对TCR序列的知识以合成方式产生。
在一些实施方案中，TCR是从通过针对靶多肽抗原或其靶T细胞表位筛选候选TCR文库而鉴定或选择的TCR产生的。TCR文库可以通过扩增来自T细胞的Vα和Vβ库来产生，所述T细胞是从受试者分离，包括存在于PBMC、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，T细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增。在一些实施方案中，TCR文库可以从CD4+或CD8+细胞产生。在一些实施方案中，TCR可以从正常或健康受试者的T细胞来源(即，正常TCR文库)扩增。在一些实施方案中，TCR可以从患病受试者的T细胞来源(即，患病TCR文库)扩增。在一些实施方案中，使用简并引物扩增Vα和Vβ的基因库，如通过在从人获得的样品(如T细胞)中进行RT-PCR。在一些实施方案中，scTv文库可以从天然Vα和Vβ文库组装，其中扩增的产物被克隆或组装以通过接头隔开。取决于受试者和细胞的来源，文库可以是HLA等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，TCR文库可以通过亲本或支架TCR分子的诱变或多样化产生。在一些方面，使TCR经受例如α或β链的定向进化，如通过诱变来进行。在一些方面，TCR的CDR内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰经选择的TCR。在一些实施方案中，可以选择抗原特异性T细胞，如通过筛选以评估针对肽的CTL活性。在一些方面，可以选择例如存在于抗原特异性T细胞上的TCR，如通过对抗原的结合活性(例如特定亲和力或亲合力)来选择。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分是已经修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性(如具有更高的对特定MHC-肽复合物的亲和力)的TCR。在一些实施方案中，通过展示方法实现定向进化，所述展示方法包括但不限于酵母展示(Holler等人(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler等人(2000)Proc Natl AcadSci U S A,97,5387-92)；噬菌体展示(Li等人(2005)Nat Biotechnol,23,349-54)或T细胞展示(Chervin等人(2008)J Immunol Methods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示方法涉及工程化或修饰已知的亲本或参考TCR。例如，在一些情况下，野生型TCR可以用作模板以用于产生诱变的TCR，其中CDR的一个或多个残基被突变，并且选择具有所需改变的特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。
在一些实施方案中，用于产生或产生目的TCR的靶多肽的肽是已知的或者可以容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于在产生TCR或抗原结合部分中使用的肽可以基于目的靶多肽(如下文所述的靶多肽)中HLA限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(Singh和Raghava(2001)Bioinformatics17(12):1236-1237)和SYFPEITHI(参见Schuler等人(2007)Immunoinformatics Methods in MolecularBiology,409(1):75-93 2007)。在一些实施方案中，MHC限制性表位是HLA-A0201，其在所有高加索人的大约39％-46％中表达，并且因此代表用于制备TCR或其他MHC-肽结合分子的MHC抗原的合适选择。
使用计算机预测模型的蛋白酶体和免疫蛋白酶体的HLA-A0201结合基序和切割位点是已知的。用于预测MHC I类结合位点的此类模型包括但不限于ProPred1(更详细地描述于Singh和Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR binding sites.BIOINFORMATICS17(12):1236-1237 2001)和SYFPEITHI(参见Schuler等人SYFPEITHI,Database forSearching and T-Cell Epitope Prediction.in Immunoinformatics Methods inMolecular Biology,第409卷(1):75-93 2007)。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白质或其突变形式(其中一种或多种特性(如结合特征)已经被改变)。在一些实施方案中，TCR可以源自各种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。TCR可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，TCR呈在细胞的表面上表达的细胞结合形式。
在一些实施方案中，TCR是全长TCR。在一些实施方案中，TCR是抗原结合部分。在一些实施方案中，TCR是二聚TCR(dTCR)。在一些实施方案中，TCR是单链TCR(sc-TCR)。在一些实施方案中，dTCR或scTCR具有如WO 03/020763、WO 04/033685、WO 2011/044186中所述的结构。
在一些实施方案中，TCR含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，TCR确实含有对应于胞质序列的序列。在一些实施方案中，TCR能够与CD3形成TCR复合物。在一些实施方案中，任何TCR(包括dTCR或scTCR)可以与在T细胞的表面上产生活性TCR的信号传导结构域连接。在一些实施方案中，TCR在细胞的表面上表达。
在一些实施方案中，dTCR含有第一多肽，其中对应于TCRα链可变区序列的序列与对应于TCRα链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合；和第二多肽，其中对应于TCRβ链可变区序列的序列与对应于TCRβ链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合，所述第一和第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，键可以对应于天然二聚αβTCR中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，链间二硫键不存在于天然TCR中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dTCR多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键两者。在一些实施方案中，TCR含有跨膜序列以锚定至膜。
在一些实施方案中，dTCR含有TCRα链(含有可变α结构域、恒定α结构域和附着于恒定α结构域C末端的第一二聚化基序)和TCRβ链(包含可变β结构域、恒定β结构域和附着于恒定β结构域C末端的第一二聚化基序)，其中第一和第二二聚化基序易于相互作用以在第一二聚化基序的氨基酸与第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将TCRα链与TCRβ链连接在一起。
在一些实施方案中，TCR是scTCR。通常，可以使用已知的方法产生scTCR，参见例如Soo Hoo,W.F.等人PNAS(USA)89,4759(1992)；Wülfing,C.和Plückthun,A.,J.Mol.Biol.242,655(1994)；Kurucz,I.等人PNAS(USA)90 3830(1993)；国际公开PCT号WO96/13593、WO 96/18105、WO 99/60120、WO 99/18129、WO 03/020763、WO 2011/044186；和Schlueter,C.J.等人J.Mol.Biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，scTCR含有引入的非天然链间二硫键以促进TCR链的缔合(参见例如，国际公开PCT号WO 03/020763)。在一些实施方案中，scTCR是非二硫键连接的截短的TCR，其中与其C末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如国际公开PCT号WO 99/60120)。在一些实施方案中，scTCR含有经由肽接头与TCRβ可变结构域共价连接的TCRα可变结构域(参见例如，国际公开的PCT号WO 99/18129)。
在一些实施方案中，scTCR含有由对应于TCRα链可变区的氨基酸序列构成的第一区段、由对应于TCRβ链可变区序列的氨基酸序列构成的第二区段(融合至对应于TCRβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的N末端)以及将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端的接头序列。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与α链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的α链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列β链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的β链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与β链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的TCRβ链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列α链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的α链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR的连接第一和第二TCR区段的接头可以是能够形成单多肽链同时保留TCR结合特异性的任何接头。在一些实施方案中，所述接头序列可例如具有式-P-AA-P-，其中P是脯氨酸并且AA代表氨基酸序列，其中氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，第一和第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，所述接头具有足够的长度以跨越第一区段的C末端与第二区段的N末端之间的距离，或反之亦然，但是不能太长以阻断或减少scTCR与靶配体的结合。在一些实施方案中，所述接头可以含有从或从约10至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26至41个氨基酸残基，例如29、30、31或32个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头具有式-PGGG-(SGGGG)5-P-，其中P是脯氨酸，G是甘氨酸，并且S是丝氨酸(SEQ ID NO:22)。在一些实施方案中，所述接头具有序列GSADDAKKDAAKKDGKS(SEQ ID NO:23)。
在一些实施方案中，scTCR含有共价二硫键，所述共价二硫键将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然TCR中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入scTCR多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键两者。
在含有引入的链间二硫键的dTCR或scTCR的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，用形成天然链间二硫键的一个或多个天然半胱氨酸取代另一残基，如取代丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成引入的二硫键。TCR的示例性非天然二硫键描述于公开的国际PCT号WO 2006/000830中。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合片段对靶抗原以平衡结合常数展现出亲和力，所述平衡结合常数在或在约10-5与10-12M之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，所述靶抗原是MHC-肽复合物或配体。
在一些实施方案中，编码TCR(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过PCR、克隆或其他合适的方式扩增，并且克隆到一种或多种合适的表达载体中。所述表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。
在一些实施方案中，所述载体可以是以下系列的载体：pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pET系列(Novagen，威斯康星州麦迪逊)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，瑞典乌普萨拉)或pEX系列(Clontech，加利福尼亚州帕洛阿尔托)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λG10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。
在一些实施方案中，所述重组表达载体可以使用标准的重组DNA技术来制备。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列，如转录和翻译起始和终止密码子，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌、植物或动物)的类型具特异性，酌情并考虑载体是基于DNA还是基于RNA。在一些实施方案中，载体可以含有非天然启动子，其与编码TCR或抗原结合部分(或其他MHC-肽结合分子)的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子以及在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还设想其他已知的启动子。
在一些实施方案中，为了生成编码TCR的载体，将α和β链从自表达目的TCR的T细胞克隆分离的总cDNA进行PCR扩增，并克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如慢病毒)载体中。
B.工程化细胞的方法
在一些实施方案中，所提供的方法涉及向患有疾病或病症(例如癌症，如NHL)的受试者施用表达重组抗原受体的细胞。用于引入基因工程化组分例如重组受体(例如CAR或TCR)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔来进行。
表达受体并通过所提供的方法施用的细胞包括工程化细胞。基因工程化通常涉及如通过逆转录病毒转导、转染或转化，将编码重组或工程化组分的核酸引入含有细胞的组合物中。
在特定实施方案中，所述工程化细胞通过如下过程来产生，所述过程从一种或多种输入组合物和/或从单个生物样品产生经富集T细胞的输出组合物。在某些实施方案中，所述输出组合物含有表达重组受体(例如CAR，如抗CD19CAR)的细胞。在特定实施方案中，所述输出组合物的细胞适合于作为疗法(例如自体细胞疗法)施用于受试者。在一些实施方案中，所述输出组合物是经富集CD4+或CD8+T细胞的组合物。
在一些实施方案中，用于生成或产生工程化细胞的过程是通过包括以下步骤中的一些或全部的过程：收集或获得生物样品；从生物样品中分离、选择或富集输入细胞；低温保存和储存输入细胞；解冻和/或在刺激条件下孵育输入细胞；将所刺激的细胞进行工程化以表达或含有重组多核苷酸，例如编码重组受体如CAR的多核苷酸；将工程化细胞培育至例如阈值量、密度或扩增；将培育的细胞配制在输出组合物中；和/或低温保存和储存配制的输出细胞，直到细胞被释放用于输注和/或适合于被施用于受试者。在某些实施方案中，所述过程用经富集T细胞的两种或更多种输入组合物(如单独的CD4+组合物和单独的CD8+组合物)进行，所述两种或更多种输入组合物分别从相同的起始或初始生物样品处理和工程化，并以CD4+与CD8+T细胞的限定比率，例如1:1比率重新输注回受试者体内。在一些实施方案中，经富集T细胞是或包含工程化的T细胞，例如，转导以表达重组受体的T细胞。
在特定实施方案中，表达重组受体(例如抗CD19CAR)的工程化细胞的输出组合物由细胞的初始和/或输入组合物产生。在一些实施方案中，所述输出组合物是经富集CD3+T细胞、经富集CD4+T细胞和/或经富集CD8+T细胞的组合物(在下文也分别称为经富集T细胞的组合物、经富集CD4+T细胞的组合物和经富集CD8+T细胞的组合物)。在一些实施方案中，富集CD4+T细胞的组合物含有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD4+T细胞。在特定实施方案中，经富集CD4+T细胞的组合物含有约100％CD4+T细胞。在某些实施方案中，经富集CD4+T细胞的组合物包括或含有少于20％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％CD8+T细胞，和/或不含CD8+T细胞，和/或不含或基本上不含CD8+T细胞。在一些实施方案中，经富集CD4+T细胞的群体基本上由CD4+T细胞组成。在一些实施方案中，富集CD8+T细胞的组合物含有至少75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD8+T细胞，或者含有或含有约100％CD8+T细胞。在某些实施方案中，经富集CD8+T细胞的组合物包括或含有少于20％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％CD4+T细胞，和/或不含CD4+T细胞，和/或不含或基本上不含CD4+T细胞。在一些实施方案中，经富集CD8+T细胞的群体基本上由CD8+T细胞组成。
在一些实施方案中，富集CD3+T细胞的组合物含有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD3+T细胞。在特定实施方案中，经富集CD3+T细胞的组合物含有约100％CD3+T细胞。在某些实施方案中，经富集CD3+T细胞的组合物包括CD4+T细胞和CD8+T细胞，所述T细胞中CD4+T细胞与CD8+T细胞的比率在大约1:3与大约3:1之间，如大约1:1。
在某些实施方案中，用于产生工程化细胞的过程还可以包括以下中的一种或多种：激活和/或刺激细胞，例如输入组合物的细胞；和/或将激活和/或刺激的细胞进行基因工程化，例如以通过转导或转染引入编码重组蛋白的多核苷酸；和/或例如在促进增殖和/或扩增的条件下，培育工程化细胞。在特定实施方案中，所提供的方法可以与收获、收集和/或配制在细胞已经被孵育、激活、刺激、工程化、转导、转染和/或培育之后产生的输出组合物结合使用。
在一些实施方案中，通过用于选择、分离、激活、刺激、扩增、培育和/或配制细胞的过程产生或生成根据所提供的方法使用的工程化细胞，如表达抗CD19CAR的那些。在一些实施方案中，此类方法包括如所描述的任一种。
在一些实施方案中，经富集CD4+T细胞的至少一种单独组合物和经富集CD8+T细胞的至少一种单独组合物是从单一生物样品(例如，来自同一供体(如患者或健康个体)的PBMC或其他白细胞样品)中分离、选择、富集或获得的。在一些实施方案中，经富集CD4+T细胞的单独组合物和经富集CD8+T细胞的单独组合物来源(例如，最初分离、选择和/或富集)于同一生物样品(如从单一受试者获得、收集和/或获取的单一生物样品)。在一些实施方案中，首先使生物样品经历CD4+T细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分，并且进一步使阴性级分经历CD8+T细胞的选择。在其他实施方案中，首先使生物样品经历CD8+T细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分，并且进一步使阴性级分经历CD4+T细胞的选择。在一些实施方案中，如在国际PCT公开号WO2015/164675中所述进行选择方法。在一些方面，首先对生物样品阳性选择CD8+T细胞以生成经富集CD8+T细胞的至少一种组合物，并且然后对阴性级分阳性选择CD4+T细胞以生成经富集CD4+T细胞的至少一种组合物，使得经富集CD8+T细胞的至少一种组合物和经富集CD4+T细胞的至少一种组合物是来自同一生物样品(例如，来自同一供体患者或健康个体)的单独组合物。在一些方面，将经富集T细胞的两种或更多种分开的组合物(例如，至少一种是来自同一供体的经富集CD4+T细胞的组合物，并且至少一种是经富集CD8+T细胞的单独组合物)单独地冷冻(例如低温保护或低温保存)在低温保存介质中。
在一些方面，将来自同一生物样品的经富集T细胞的两种或更多种单独组合物(例如至少一种是经富集CD4+T细胞的组合物并且至少一种是经富集CD8+T细胞的单独组合物)通过与刺激试剂接触(例如通过与用于T细胞激活的CD3/CD28缀合的磁珠一起孵育)进行激活和/或刺激。在一些方面，例如使用编码重组蛋白(例如CAR)的病毒载体对激活/刺激的细胞组合物中的每一种进行工程化、转导和/或转染，以在每种细胞组合物的CD4+T细胞和CD8+T细胞中表达相同的重组蛋白。在一些方面，所述方法包括从细胞组合物中去除刺激试剂，例如磁珠。在一些方面，分别培育含有工程化CD4+T细胞的细胞组合物和含有工程化CD8+T细胞的细胞组合物，例如用于其中的CD4+T细胞和CD8+T细胞群的扩增。在某些实施方案中，例如通过在配制缓冲液中洗涤细胞组合物来收获和/或收集和/或配制来自培育的细胞组合物。在某些实施方案中，将包含CD4+T细胞的配制细胞组合物和包含CD8+T细胞的配制细胞组合物冷冻(例如低温保护或低温保存)在低温保存介质中。在一些方面，每种配制品中的工程化CD4+T细胞和CD8+T细胞源自同一供体或生物样品并表达相同的重组蛋白(例如CAR，如抗CD19CAR)。在一些方面，将单独的工程化CD4+配制品和单独的工程化CD8+配制品以限定比率(例如1:1)施用于有需要的受试者，如同一供体。
在一些方面，从来自受试者的样品选择经富集T细胞的两种或更多种单独组合物(例如，至少一种是经富集CD4+T细胞的组合物并且至少一种是来自同一生物样品的经富集CD8+T细胞的单独组合物)，然后将其以限定比率(例如1:1)组合。在一些实施方案中，通过与刺激试剂接触(例如，通过与用于T细胞激活的CD3/CD28缀合的磁珠一起孵育)来激活和/或刺激富集CD4+和CD8+T细胞的组合的组合物。在一些方面，例如使用编码重组蛋白(例如CAR)的病毒载体对激活/刺激的细胞组合物进行工程化、转导和/或转染，以在所述细胞组合物的CD4+T细胞和CD8+T细胞中表达所述重组蛋白。在一些方面，所述方法包括从细胞组合物中去除刺激试剂，例如磁珠。在一些方面，培育含有工程化CD4+T细胞和工程化CD8+T细胞的细胞组合物，例如用于在其中扩增所述CD4+T细胞群和CD8+T细胞群。在某些实施方案中，例如通过在配制缓冲液中洗涤细胞组合物来收获和/或收集和/或配制来自培育的细胞组合物。在某些实施方案中，在低温保存介质中冷冻(例如，低温保护或低温保存)包含重组受体(例如CAR)工程化CD4+T细胞和CD8+T细胞的配制细胞组合物。在一些方面，所述配制品中的工程化CD4+T细胞和CD8+T细胞源自同一供体或生物样品，并且表达相同重组蛋白(例如，CAR，如抗CD19CAR)。
在一些方面，从来自受试者的样品选择经富集CD3+T细胞的组合物。在一些实施方案中，通过与刺激试剂接触(例如，通过与用于T细胞激活的CD3/CD28缀合的磁珠一起孵育)来激活和/或刺激富集CD3+T细胞的组合物。在一些方面，使用编码重组蛋白(例如CAR)的病毒载体对激活/刺激的细胞组合物进行工程化、转导和/或转染，以表达在所述细胞组合物的T细胞中表达所述重组蛋白。在一些方面，所述方法包括从细胞组合物中去除刺激试剂，例如磁珠。在一些方面，培育含有工程化的CD3+T细胞的细胞组合物，例如，用于扩增其中的T细胞群。在某些实施方案中，例如通过在配制缓冲液中洗涤细胞组合物来收获和/或收集和/或配制来自培育的细胞组合物。在某些实施方案中，在低温保存介质中冷冻(例如，低温保护或低温保存)包含重组受体(例如CAR)工程化CD3+T细胞的配制细胞组合物。在一些方面，所述配制品中工程化的CD3+T细胞表达CAR，如抗CD19CAR。
1.用于基因工程化的细胞和细胞的制备
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的细胞(如T细胞)是已经进行基因工程化以表达本文所述的重组受体(例如CAR或TCR)的细胞。在一些实施方案中，所述工程化细胞在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的情况下使用。在一些实施方案中，所述工程化细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，所述工程化细胞是T细胞，如CD4+和CD8+T细胞、CD4+T细胞或CD8+T细胞。
在一些实施方案中，所述核酸(如编码重组受体的核酸)是异源的，即通常不存在于细胞或从所述细胞获得的样品中，如从另一种生物体或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物体中发现。在一些实施方案中，所述核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
所述细胞通常是真核细胞，如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴细胞，包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。所述细胞通常是原代细胞如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些原代细胞。在一些实施方案中，所述细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个子集，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者，所述细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现有技术，所述细胞是多能的和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞、制备、加工、培养和/或将它们工程化，并在低温保存之前或之后将它们重新引入同一受试者中。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+T细胞的亚型和亚群包括幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)、效应记忆T(TEM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关恒定T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助T细胞)、α/βT细胞和δ/γT细胞。
在一些实施方案中，所述细胞是自然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是单核细胞或粒细胞，例如，骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程化引入的一种或多种核酸，并且由此表达此类核酸的重组或基因工程化的产物。在一些实施方案中，所述核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从所述细胞获得的样品中，如从另一种生物体或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物体中发现。在一些实施方案中，所述核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入编码转基因受体如CAR的核酸的细胞可以从样品(如生物样品，例如从受试者获得或来源于受试者的生物样品)分离。在一些实施方案中，分离出细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其施用细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，所述受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。
因此，在一些实施方案中，所述细胞是原代细胞，例如原代人细胞。所述样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品、以及来源于一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如，用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。所述生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括源自其的处理的样品。
在一些方面，细胞从其中来源或分离的样品是血液或血液来源的样品，或者是或源自单采术或白细胞单采术产物。示例性样品包括全血、外周血单个核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检物、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、黏膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或源自其的细胞。在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的背景下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，所述细胞源自细胞系，例如T细胞系。在一些实施方案中，所述细胞获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。
在一些实施方案中，细胞的分离包括一个或多个制备步骤和/或非基于亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，细胞基于一种或多种特性来分离，所述特性如密度、粘附特性、大小、对特定组分的敏感性和/或耐药性。
在一些例子中，例如通过单采术或白细胞单采术获得来自受试者的循环血液的细胞。在一些情况下，在施用细胞疗法(例如CAR T细胞)之前约2周和约6周之间(如约4周)，从受试者获得单采术或白细胞单采术样品。在一些情况下，在施用细胞疗法(例如CAR T细胞)之前约4周从受试者获得单采术或白细胞单采术样品。在一些方面，所述样品含有淋巴细胞(包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞)、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞以例如去除血浆级分，并将所述细胞置于适当缓冲液或介质中以用于后续的处理步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤所述细胞。在一些实施方案中，洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通式”离心机(例如，Cobe2991细胞处理器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，洗涤后将细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(例如像不含Ca++/Mg++的PBS)中。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并且将细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，选择步骤的至少一部分包括将细胞与选择试剂一起孵育。与一种或多种选择试剂一起孵育(例如作为选择方法的一部分)可以使用一种或多种选择试剂来进行，以用于基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在细胞中或细胞上的表达或存在来选择一种或多种不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的利用一种或多种选择试剂基于此类标记进行分离的方法。在一些实施方案中，所述一种或多种选择试剂导致分离，所述分离是基于亲和力或基于免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，选择包括与一种或多种试剂一起孵育，用于基于一种或多种标记(通常是细胞表面标记)的细胞表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过与特异性地结合至此类标记的抗体或结合配偶体一起孵育，之后通常进行洗涤步骤并分离已结合抗体或结合配偶体的细胞与未结合至抗体或结合配偶体的那些细胞。
在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的基于亲和力的所需选择试剂混合。基于免疫亲和力的选择可以使用任何系统或方法进行，所述系统或方法使得在分离的细胞与特异性结合至细胞上的标记的分子(例如，固体表面(例如颗粒)上的抗体或其他结合配偶体)之间产生有利的能量相互作用。在一些实施方案中，所述方法是使用颗粒(如珠，例如磁珠)进行，所述颗粒包被有对细胞的标记具有特异性的选择剂(例如抗体)。可以将颗粒(例如珠)与细胞在容器(如管或袋)中一起孵育或混合，同时振荡或混合，其中细胞密度与颗粒(例如，珠)的比率是恒定的，以帮助促进能量上有利的相互作用。在其他情况下，所述方法包括选择细胞，其中所述选择的全部或一部分是在离心室的内部空腔中进行，例如在离心旋转下进行。在一些实施方案中，将细胞与选择试剂(如基于免疫亲和力的选择试剂)一起孵育是在离心室中进行。在某些实施方案中，使用在国际专利申请公开号WO2009/072003或US20110003380A1中所述的系统、装置或设备进行分离或分开。在一个例子中，所述系统是如国际公开号WO 2016/073602中所述的系统。
在一些实施方案中，通过在离心室的空腔中实施此类选择步骤或其部分(例如，与抗体涂覆的颗粒(例如磁珠)一起孵育)，用户能够控制某些参数，例如各种溶液的体积、在处理期间溶液的添加及其时间安排，与其他可用方法相比，这可以提供多种优势。例如，在孵育期间减少空腔中液体体积的能力可以增加选择中使用的颗粒(例如珠试剂)的浓度，并由此增加溶液的化学势，而不影响空腔中的细胞总数量。这又可以增强正在处理的细胞与用于选择的颗粒之间的成对相互作用。在一些实施方案中，例如，在与如本文所述的系统、电路和控制相关联时，在室中进行孵育步骤，允许用户在孵育期间的一个或多个所需时间实现对溶液的搅动，这也可以改善相互作用。
在一些实施方案中，选择步骤的至少一部分是在离心室中进行，其包括将细胞与选择试剂一起孵育。在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的基于亲和力的所需选择试剂混合，所述量远少于根据制造商的说明书在管或容器中进行类似选择以用于选择相同数量的细胞和/或相同体积的细胞时通常采用的量。在一些实施方案中，所采用的一种或多种选择试剂的量为根据制造商的说明针对相同数量的细胞和/或相同体积的细胞在基于管或容器的孵育中用于选择细胞的相同的一种或多种选择试剂的量的不超过5％、不超过10％、不超过15％、不超过20％、不超过25％、不超过50％、不超过60％、不超过70％或不超过80％。
在一些实施方案中，对于细胞的选择，例如基于免疫亲和力的选择，将细胞在室空腔中在组合物中孵育，所述组合物还含有具有选择试剂的选择缓冲液，所述选择试剂例如特异性地结合至希望富集和/或耗竭的细胞上(而不是组合物中其他细胞上)的表面标记的分子，例如抗体，其任选地与支架(例如聚合物或表面，例如珠，例如磁珠，例如与对CD3、CD4和/或CD8具有特异性的单克隆抗体偶联的磁珠)偶联。在一些实施方案中，如所描述的，将选择试剂添加至室空腔中的细胞，所添加的量与在振荡或旋转的管中进行选择时，实现相同数量的细胞或相同体积的细胞的大致相同或类似的选择效率通常使用或将需要的选择试剂的量相比显著较小(例如不大于所述量的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％)。在一些实施方案中，在向细胞和选择试剂添加选择缓冲液的情况下进行孵育，以实现例如10mL至200mL(如至少或至少约10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mL或200mL)试剂的孵育的目标体积。在一些实施方案中，将选择缓冲液和选择试剂在添加至所述细胞之前预先混合。在一些实施方案中，将选择缓冲液和选择试剂单独添加至所述细胞。在一些实施方案中，选择孵育是在周期性温和混合条件下进行的，这可有助于促进能量上有利的相互作用，从而允许使用较少的总选择试剂来实现高选择效率。
在一些实施方案中，与选择试剂一起孵育的总持续时间是从或从约5分钟至6小时，如30分钟至3小时，例如，至少或至少约30分钟、60分钟、120分钟或180分钟。
在一些实施方案中，孵育通常在混合条件下进行，如在旋转的存在下，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于使细胞沉淀的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如，为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)，如在样品或室壁或其他容器壁处的一定RCF下，所述RCF从或从约80g至100g(例如，为或约或至少80g、85g、90g、95g或100g)。在一些实施方案中，旋转使用以这种低速旋转和之后的休息时间段的重复间隔来进行，例如旋转和/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9或10秒，例如旋转大约1或2秒，然后休息大约5、6、7或8秒。
在一些实施方案中，这种过程是在与所述室为整体的完全封闭的系统内进行的。在一些实施方案中，这个过程(并且在一些方面还有一个或多个另外的步骤，例如预先洗涤步骤洗涤含有细胞的样品，例如单采术样品)以自动化方式进行，使得将细胞、试剂和其他组分在适当时间吸入和推出所述室并进行离心，以便使用自动化程序在单一封闭系统中完成洗涤和结合步骤。
在一些实施方案中，在孵育和/或混合细胞和一种和/或多种选择试剂后，使所孵育的细胞经历分离，以基于一种或多种特定试剂的存在或不存在来选择细胞。在一些实施方案中，在同一封闭系统中进行分离，其中将细胞与所述选择试剂一起进行孵育。在一些实施方案中，在与所述选择试剂一起孵育后，将所孵育的细胞(包括其中已经结合选择试剂的细胞)转移到系统中用于基于免疫亲和力来分离细胞。在一些实施方案中，用于基于免疫亲和力的分离的系统是或含有磁分离柱。
在一些实施方案中，分离方法包括基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如，表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在细胞中的表达或存在来分离不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，分离是基于亲和力或基于免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，分离包括基于细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性地结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞中分离已结合所述抗体或结合配偶体的细胞。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记进行分离。
分离无需导致特定细胞群或表达特定标记的细胞的100％富集或去除。例如，对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要使不表达所述标记的细胞完全不存在。同样，对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要使所有此类细胞完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中使来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具有特异性)一起孵育。同样，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以同时对多个细胞类型进行阳性选择。
例如，在一些方面，T细胞的特定亚群(如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞(例如，CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+T细胞))通过阳性或阴性选择技术来分离。
在一些实施方案中，通过经由阳性选择富集特定细胞群，或经由阴性选择耗尽特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中，通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成阳性或阴性选择，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达或以相对较高水平(标记高)(标记+)的一种或多种表面标记特异性结合。
在特定实施方案中，使生物样品(例如PBMC或其他白细胞的样品)经历CD4+T细胞的选择，其中同时保留阴性和阳性级分。在某些实施方案中，CD8+T细胞选自阴性级分。在一些实施方案中，使生物样品经受CD8+T细胞的选择，其中同时保留阴性和阳性级分。在某些实施方案中，CD4+T细胞选自阴性级分。
在一些实施方案中，通过阴性选择在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞，如CD14)上表达的标记，将T细胞与PBMC样品分离。在一些方面，CD4+或CD8+选择步骤用于分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对更高程度表达的标记进行阳性或阴性选择，可以将此类CD4+和CD8+群体进一步分类成亚群。
在一些实施方案中，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将CD8+细胞针对幼稚、中央记忆、效应记忆和/或中央记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中央记忆T(TCM)细胞进行富集以增加功效，如以改善施用后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富集TCM的CD8+T细胞与CD4+T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个子集中。可以例如使用抗CD8和抗CD62L抗体将PBMC针对CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中，中枢记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于对表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，通过表达CD4、CD14、CD45RA的细胞的耗尽和表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行富集TCM细胞的CD8+群体的分离。在一个方面，中枢记忆T(TCM)细胞的富集从基于CD4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，所述阴性细胞级分基于CD14和CD45RA的表达进行阴性选择且基于CD62L进行阳性选择。在一些方面这种选择是同时进行的，而在其他方面依序以任一顺序进行。在一些方面，将用于制备CD8+细胞群或亚群的基于CD4表达的相同选择步骤也用于生成CD4+细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分二者都被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。
在特定例子中，使PBMC样品或其他白细胞样品经历CD4+细胞的选择，其中保留阴性和阳性两种级分。然后基于CD14和CD45RA或CD19的表达对阴性级分进行阴性选择，并基于中枢记忆T细胞(如CD62L或CCR7)的标记特征进行阳性选择，其中以任何顺序进行所述阳性和阴性选择。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4+T辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+T细胞。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞是CD62L+且CD45RO+。在一些实施方案中，效应CD4+细胞是CD62L-且CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，抗体或结合配偶体结合至固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)，以允许分离细胞用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分离技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于以下文献中：Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis ResearchProtocols,第2卷:Cell Behavior In Vitro and In Vivo,第17-25页S.A.Brooks和U.Schumacher编辑Humana Press Inc.,Totowa,NJ)。
在一些方面，将要分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒，如顺磁珠(例如，如Dynalbeads或MACS珠))一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与希望分离(例如，希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性结合。
在一些实施方案中，磁性颗粒或珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多在磁分离方法中使用的熟知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在Molday,美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书EP 452342B中所述的那些，将所述专利通过引用特此并入。胶体大小的颗粒(例如在Owen美国专利号4,795,698；和Liberti等人的美国专利号5,200,084中所述的那些)是其他的例子。
孵育通常在如下条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性颗粒或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于样品内的细胞上的话)特异性结合。
在一些方面，将样品置于磁场中，并且具有附着于其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步处理或经历另外的分离步骤。
在某些实施方案中，所述磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，所述磁性颗粒经由对一种或多种标记具特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记细胞而不是珠，然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如，链霉亲和素)包被的磁粒。在某些实施方案中，链霉亲和素包被的磁粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，所述磁响应颗粒保持附着于细胞，所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化；在一些方面，所述颗粒保持附着于所述细胞以向患者施用。在一些实施方案中，从细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体和与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体。在一些实施方案中，所述可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活细胞分选(MACS)(MiltenyiBiotec，加利福尼亚州奥本)进行的。磁激活细胞分选(MACS)系统能够高纯度选择附着有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，MACS以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依序洗脱非靶标和靶标种类。也就是说，附着于磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，所述非靶细胞被标记并从异质细胞群中耗尽。
在某些实施方案中，使用如下系统、装置或设备进行分离或分开，所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、处理、孵育、培养和/或制备步骤中的一个或多个。在一些方面，所述系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中，所述系统是如国际专利申请公开号WO2009/072003或US20110003380A1中所述的系统。
在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动化或可编程方式进行分离、处理、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对处理、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、结局评估和/或调整。
在一些方面，使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤，例如以用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上自动分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和多种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制所述仪器的所有部件并指示所述系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。所述蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述系统的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面，CliniMACS系统使用在无菌无热原溶液中供应的、抗体偶联的可磁化颗粒。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，再将所述管组连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统自动将细胞样品施加到分离柱。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面中，CliniMACS Prodigy系统配备有细胞处理单元，其允许自动洗涤和通过离心来分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产物的宏观层来确定最佳的细胞分级分离终点。例如，外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。CliniMACS Prodigy系统还可以包括集成细胞培育室，其实现细胞培养方案，例如像细胞分化和扩增、抗原负载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；以及Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，经由流式细胞术收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群，其中流体流中携载针对多种细胞表面标记染色的细胞。在一些实施方案中，经由制备规模(FACS)分选来收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电系统(MEMS)芯片结合基于FACS的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如WO 2010/033140；Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；以及Godin等人(2008)JBiophoton.1(5):355-376。在两种情况下，可以用多种标记来标记细胞，从而允许以高纯度分离明确定义的T细胞子集。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测的标记来标记抗体或结合配偶体，以促进用于阳性和/或阴性选择的分离。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具有特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞携载于流体流中，如通过荧光激活细胞分选(FACS)(包括制备规模(FACS))和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，低温保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和后续解冻步骤去除细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任一种。一个例子包括使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻介质。然后用介质将其1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，分离和/或选择产生经富集T细胞，例如CD3+T细胞、CD4+T细胞和/或CD8+T细胞的一种或多种输入组合物。在一些实施方案中，从单一生物样品中分离、选择、富集或获得两种或更多种单独的输入组合物。在一些实施方案中，从单独的生物样品中分离、选择、富集和/或获得单独的输入组合物，所述单独的生物样品从同一受试者收集、获取和/或获得。
在某些实施方案中，所述一种或多种输入组合物是或包括经富集T细胞的组合物，所述组合物包含至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或者为或为约100％的CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述经富集T细胞的输入组合物基本上由CD3+T细胞组成。
在某些实施方案中，所述一种或多种输入组合物是或包括经富集CD4+T细胞的组合物，所述组合物包含至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或者为或为约100％的CD4+T细胞。在某些实施方案中，所述CD4+T细胞的输入组合物包含少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD8+T细胞，和/或不含有CD8+T细胞，和/或不含或基本上不含CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述经富集T细胞的组合物基本上由CD4+T细胞组成。
在某些实施方案中，所述一种或多种组合物是或包括CD8+T细胞的组合物，所述组合物是或包含至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％、或为或约100％的CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述CD8+T细胞的组合物含有少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD4+T细胞，和/或不含有CD4+T细胞，和/或不含或基本上不含CD4+T细胞。在一些实施方案中，所述经富集T细胞的组合物基本上由CD8+T细胞组成。
2.激活和刺激
在一些实施方案中，在基因工程化之前或结合基因工程化来孵育和/或培养细胞。孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或者用于培养或培育细胞的其他容器。在一些实施方案中，在存在刺激条件或刺激剂的情况下孵育所述组合物或细胞。此类条件包括设计用于在群体中诱导细胞的增殖、扩增、激活和/或存活以模拟抗原暴露和/或引发细胞用于基因工程化(如用于引入重组抗原受体)的那些。
所述条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶受体和设计为激活细胞的任何其他药剂))。
在一些实施方案中，刺激条件或刺激剂包括能够刺激或激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如，配体)。在一些方面，所述药剂在T细胞中开启或启动TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体，如对于TCR具有特异性的抗体，例如抗CD3抗体。在一些实施方案中，刺激条件包括一种或多种药剂例如配体，其能够刺激共刺激受体，例如抗CD28。在一些实施方案中，此类药剂和/或配体可以与固体支持物(如珠)和/或一种或多种细胞因子结合。任选地，扩增方法还可以包括向培养基中(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)添加抗CD3和/或抗CD28抗体的步骤。在一些实施方案中，所述刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
例如，刺激条件可以包括使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，M-450CD3/CD28T细胞扩增器)进行孵育。
在一些方面，孵育是根据多种技术，如以下文献中所述的那些技术来进行：Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方式扩增T细胞：向培养起始组合物中添加饲养细胞(如非分裂外周血单个核细胞(PBMC))(例如，使得对于要扩增的初始群体中的每个T淋巴细胞，所得细胞群含有至少约5、10、20或40个或更多个PBMC饲养细胞)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增所述T细胞数量的时间)。在一些方面，非分裂饲养细胞可以包含γ辐射的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线辐射PBMC以防止细胞分裂。在一些方面，在添加T细胞群之前将饲养细胞添加到培养基中。
在一些实施方案中，刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常在或约在37摄氏度。任选地，孵育还可以包括添加非分裂的EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线辐射LCL。在一些方面，LCL饲养细胞以任何合适的量(如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率为至少约10:1)提供。
在实施方案中，通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性T淋巴细胞来获得抗原特异性T细胞(如抗原特异性CD4+T细胞和/或CD8+T细胞)。例如，可以通过从受感染的受试者中分离T细胞并用相同的抗原在体外刺激细胞，针对巨细胞病毒抗原产生抗原特异性T细胞系或克隆。
在一些实施方案中，在一种或多种刺激条件或刺激剂存在下进行的孵育的至少一部分是在离心室的内部空腔中进行，例如在离心旋转下进行，如国际公开号WO 2016/073602中所述的。在一些实施方案中，在离心室中进行的孵育的至少一部分包括与一种或多种试剂混合以诱导刺激和/或激活。在一些实施方案中，将细胞(如选择的细胞)与刺激条件或刺激剂在离心室中混合。在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的一种或多种刺激条件或刺激剂混合，所述刺激条件或刺激剂远小于在细胞培养板或其他系统中进行类似刺激时通常使用的刺激条件或刺激剂。
在一些实施方案中，将刺激剂以一定的量添加至室空腔中的细胞，所述一定的量与例如在周期性振荡或旋转的管或袋中进行选择而不在离心室中混合时，对相同细胞数量或相同细胞体积实现大致相同或类似的选择效率通常使用或将需要的刺激剂的量相比显著较小(例如不大于所述量的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％)。在一些实施方案中，在向细胞和刺激剂中添加孵育缓冲液的情况下进行孵育，以实现例如10mL至200mL(例如至少或至少约或约10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mL或200mL)试剂的孵育的目标体积。在一些实施方案中，在添加细胞之前预先混合孵育缓冲液和刺激剂。在一些实施方案中，将孵育缓冲液和刺激剂单独添加至细胞中。在一些实施方案中，在周期性温和混合条件下进行刺激孵育，这可能有助于促进能量上有利的相互作用，并且从而允许在实现细胞的刺激和激活的同时使用较少的总体刺激剂。
在一些实施方案中，孵育通常在混合条件下进行，如在旋转的存在下，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于使细胞沉淀的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如，为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)，如在样品或室壁或其他容器壁处的一定RCF下，所述RCF从或从约80g至100g(例如，为或约或至少80g、85g、90g、95g或100g)。在一些实施方案中，旋转使用以这种低速旋转和之后的休息时间段的重复间隔来进行，例如旋转和/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9或10秒，例如旋转大约1或2秒，然后休息大约5、6、7或8秒。
在一些实施方案中，例如与刺激剂一起孵育的总持续时间为在或在约1小时与96小时之间、1小时与72小时之间、1小时与48小时之间、4小时与36小时之间、8小时与30小时之间或12小时与24小时之间，如至少或至少约6小时、12小时、18小时、24小时、36小时或72小时。在一些实施方案中，进一步孵育进行如下时间：在或约在1小时与48小时、4小时与36小时、8小时与30小时或12小时与24小时之间，包含端值。
在特定实施方案中，刺激条件包括用一种或多种细胞因子和/或在一种或多种细胞因子存在下孵育、培养和/或培育经富集的T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是重组细胞因子。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，所述一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由T细胞表达的和/或对T细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是或包括细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员包括但不限于白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。
在一些实施方案中，刺激导致例如在转导之前细胞的激活和/或增殖。
3.用于基因工程化的载体和方法
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的工程化细胞(如T细胞)是已经基因工程化以表达本文所述的重组受体(例如CAR或TCR)的细胞。在一些实施方案中，通过引入、递送或转移编码重组受体和/或其他分子的核酸序列来工程化所述细胞。
在一些实施方案中，用于产生工程化细胞的方法包括将编码重组受体(例如，抗CD19CAR)的多核苷酸引入至细胞，例如像经刺激或激活的细胞中。在特定实施方案中，所述重组蛋白是重组受体，如所述的任一种。将编码重组蛋白(如重组受体)的核酸分子引入细胞中可以使用许多已知载体中的任一种进行。此类载体包括病毒和非病毒系统，包括慢病毒和γ逆转录病毒系统，以及基于转座子的系统，如基于PiggyBac或Sleeping Beauty的基因转移系统。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔来进行。在一些实施方案中，工程化产生经富集T细胞的一种或多种工程化组合物。
在某些实施方案中，所述经刺激T细胞的一种或多种组合物是或包括经富集T细胞的两种单独的经刺激组合物。在特定实施方案中，将经富集T细胞的两种单独组合物，例如，已从相同生物样品中选择、分离和/或富集的经富集T细胞的两种单独组合物分别工程化。在某些实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD4+T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD8+T细胞的组合物。在一些实施方案中，将经富集CD4+T细胞和经富集CD8+T细胞的两种单独组合物分别基因工程化。
在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将其与诱导反应(如增殖、存活和/或激活)的刺激物进行组合，例如如通过细胞因子或激活标记的表达测量的，然后转导激活的细胞，并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。在某些实施方案中，通过如下方式完成基因转移：首先将细胞在刺激条件下孵育，如通过所述方法中的任一种。
在一些实施方案中，用于基因工程化的方法通过使组合物的一个或多个细胞与编码重组蛋白(例如，重组受体)的核酸分子接触来进行。在一些实施方案中，接触可以通过离心(如旋转接种，例如离心接种)来实现。此类方法包括如国际公开号WO 2016/073602中所述的那些方法中的任一种。示例性离心室包括由Biosafe SA生产和销售的那些，包括用于和2系统的那些，包括A-200/F和A-200离心室以及用于此类系统的各种试剂盒。示例性室、系统和处理仪器和机柜描述于例如以下文献中：美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和公开的美国专利申请公开号US2008/0171951，以及公开的国际专利申请公开号WO 00/38762，将这些文献中的每一个的内容通过引用以其全文并入本文。用于此类系统的示例性试剂盒包括但不限于由BioSafe SA以产品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1或CS-900.2销售的一次性试剂盒。
在一些实施方案中，接触可以通过离心(如旋转接种，例如离心接种)来实现。在一些实施方案中，可以使含有细胞、载体(例如病毒颗粒)和试剂的组合物旋转，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于沉淀细胞的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)。在一些实施方案中，旋转是以从或从约100g至3200g(例如，为或约或至少或至少约100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g或3200g)的力(例如，相对离心力)来进行，如例如在室或腔室的内壁或外壁处所测量。术语“相对离心力”或RCF通常被理解为在如与旋转轴相比在空间的特定点处，相对于地球的重力，施加在物体或物质(例如细胞、样品或团粒和/或所旋转的室或其他容器中的点)上的有效力。所述值可以使用熟知的公式来确定，所述公式考虑到重力、旋转速度和旋转半径(与旋转轴的距离以及测量RCF的物体、物质或颗粒)。
在一些实施方案中，将系统与其他仪器一起包括和/或置于与其他仪器相关联，所述其他仪器包括用于操作、自动化、控制和/或监测转导步骤以及在系统中执行的一个或多个各种其他处理步骤(例如，可以使用或结合如本文或在国际公开号WO 2016/073602中所述的离心室系统进行的一个或多个处理步骤)的方面的仪器。在一些实施方案中，这种仪器容纳于机柜中。在一些实施方案中，所述仪器包括机柜，所述机柜包括外壳，所述外壳含有控制电路、离心机、罩、电机、泵、传感器、显示器和用户界面。示例性装置描述于美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和US2008/0171951中。
在一些实施方案中，所述系统包含一系列容器，例如袋、管、旋塞、夹子、连接器和离心室。在一些实施方案中，所述容器(如袋)包括一个或多个容器(例如袋)，其在同一容器或单独容器(例如同一袋子或单独袋子)中含有要转导的细胞和病毒载体颗粒。在一些实施方案中，所述系统还包括一个或多个容器(如袋)，所述容器含有介质，例如稀释剂和/或洗涤溶液，在所述方法期间将所述介质抽入室和/或其他部件中以稀释、重悬和/或洗涤组分和/或组合物。所述容器可以连接在系统中的一个或多个位置，例如连接在对应于输入管线、稀释剂管线、洗涤管线、废液管线和/或输出管线的位置。
在一些实施方案中，所述室与离心机相关联，离心机能够实现所述室的旋转，例如围绕其旋转轴旋转。结合细胞的转导和/或在一个或多个其他处理步骤中，旋转可以发生在孵育之前、期间和/或之后。因此，在一些实施方案中，各个处理步骤中的一个或多个在旋转下(例如在特定的力下)进行。所述室通常能够竖直或大致竖直地旋转，使得所述室在离心期间竖直放置，并且侧壁和轴是竖直或大致竖直的，且一个或多个端壁是水平或大致水平的。
在一些实施方案中，在基因工程的至少一部分(例如转导)期间，和/或在基因工程之后，将细胞转移到生物反应器袋组件中，用于培养经基因工程化的细胞，例如用于培育或扩增细胞。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒颗粒(例如源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移到细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol Ther Nucl Acids2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29(11):550-557)。
在一些实施方案中，所述逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)或脾病灶形成病毒(SFFV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体来源于鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，所述逆转录病毒包括源自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。所述逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的几个物种的宿主细胞。在一个实施方案中，要表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多例示性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740、6,207,453、5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques7:980-990；Miller,A.D.(1990)HumanGene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如以下文献中：Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637-1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；和Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505。
在一些实施方案中，病毒载体颗粒含有源自基于逆转录病毒基因组的载体(例如源自基于慢病毒基因组的载体)的基因组。在所提供的病毒载体的一些方面，编码重组受体(如抗原受体，如CAR)的异源核酸被包含在和/或位于载体基因组的5'LTR与3'LTR序列之间。
在一些实施方案中，病毒载体基因组是慢病毒基因组，如HIV-1基因组或SIV基因组。例如，已经通过多次减弱毒力基因生成慢病毒载体，例如，可以使基因env、vif、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是已知的。参见Naldini等人,(1996和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998；美国专利号6,013,516和5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的必要序列，用于选择和用于将核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(“ATCC”；弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道(University Blvd.)10801号20110-2209))获得，或者使用常用技术从已知来源分离。
慢病毒载体的非限制性例子包括源自慢病毒的那些，例如人免疫缺陷病毒1(HIV-1)、HIV-2、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)、HTLV-2或马感染贫血病毒(E1AV)。例如，已经通过多次减弱HIV毒力基因生成慢病毒载体，例如，使基因env、vif、vpr、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是本领域已知的，参见Naldini等人,(1996和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998；美国专利号6,013,516和5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的必要序列，用于选择和用于将核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(“ATCC”；弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道(University Blvd.)10801号20110-2209))获得，或者使用常用技术从已知来源分离。
在一些实施方案中，病毒基因组载体可以含有逆转录病毒(如慢病毒)的5'和3'LTR的序列。在一些方面，病毒基因组构建体可以含有来自慢病毒的5'和3'LTR的序列，并且具体而言可以含有来自慢病毒的5'LTR的R和U5序列以及来自慢病毒的失活或自失活3'LTR。LTR序列可以是来自任何物种的任何慢病毒的LTR序列。例如，它们可以是来自HIV、SIV、FIV或BIV的LTR序列。通常，LTR序列是HIV LTR序列。
在一些实施方案中，病毒载体(如HIV病毒载体)的核酸缺乏另外的转录单元。载体基因组可以含有失活或自失活的3'LTR(Zufferey等人J Virol 72：9873,1998；Miyoshi等人,J Virol 72:8150,1998)。例如，用于产生病毒载体RNA的核酸的3'LTR的U3区中的缺失可以用于产生自失活(SIN)载体。然后可以在逆转录期间将此缺失转移到原病毒DNA的5'LTR。自失活载体通常具有自3'长末端重复序列(LTR)的增强子和启动子序列缺失，所述缺失在载体整合期间被拷贝到5'LTR中。在一些实施方案中，可以消除足够的序列，包括去除TATA盒，以消除LTR的转录活性。这可以防止在转导的细胞中产生全长载体RNA。在一些方面，3'LTR的U3元件含有其增强子序列、TATA盒、Sp1和NF-κB位点的缺失。由于自失活3'LTR，在进入和逆转录之后产生的原病毒含有失活的5'LTR。这可以通过降低动员载体基因组的风险和LTR对附近细胞启动子的影响来提高安全性。可以通过本领域已知的任何方法来构建自失活3'LTR。在一些实施方案中，这不会影响载体滴度或载体的体外或体内特性。
任选地，来自慢病毒5'LTR的U3序列可以在病毒构建体中用启动子序列(如异源启动子序列)替代。这可以增加从包装细胞系回收的病毒的滴度。也可以包括增强子序列。可以使用增加病毒RNA基因组在包装细胞系中的表达的任何增强子/启动子组合。在一个例子中，使用CMV增强子/启动子序列(美国专利号5,385,839和美国专利号5,168,062)。
在某些实施方案中，可以通过将逆转录病毒载体基因组(如慢病毒载体基因组)构建为整合缺陷性来使插入诱变的风险降至最低。可以采用多种途径来产生非整合型载体基因组。在一些实施方案中，可以将一种或多种突变工程化至pol基因的整合酶组分中，使得其编码具有无活性整合酶的蛋白质。在一些实施方案中，可以修饰载体基因组本身以通过例如使一个或两个附接位点突变或缺失来防止整合，或者通过缺失或修饰使3'LTR近端多嘌呤束(PPT)没有功能。在一些实施方案中，可以使用非遗传途径；这些途径包括抑制整合酶的一种或多种功能的药理学药剂。这些方法并不相互排斥；也就是说，可以一次使用多于一种所述方法。例如，整合酶和附接位点两者可以都没有功能，或者整合酶和PPT位点可以没有功能，或者附接位点和PPT位点可以没有功能，或者它们全部都可以没有功能。此类方法和病毒载体基因组是已知的并且是可获得的(参见Philpott和Thrasher,Human GeneTherapy 18:483,2007；Engelman等人J Virol 69:2729,1995；Brown等人J Virol 73:9011(1999)；WO 2009/076524；McWilliams等人,J Virol 77:11150,2003；Powell和Levin JVirol 70:5288,1996)。
在一些实施方案中，载体含有用于在宿主细胞(例如原核宿主细胞)中繁殖的序列。在一些实施方案中，病毒载体的核酸含有用于在原核细胞(如细菌细胞)中繁殖的一个或多个复制起点。在一些实施方案中，包括原核复制起点的载体还可以含有这样的基因，其表达赋予可检测或可选择标记，如抗药性。
所述病毒载体基因组通常以质粒形式构建，其可以转染到包装细胞系或生产细胞系中。可以使用多种已知方法中的任何一种来产生逆转录病毒颗粒，其基因组含有病毒载体基因组的RNA拷贝。在一些实施方案中，至少两种组分参与制备基于病毒的基因递送系统：第一，包装质粒，包括结构蛋白以及产生病毒载体颗粒所必需的酶，第二，病毒载体本身，即，要转移的遗传物质。可以在设计这些组分之一或两者时引入生物安全保护措施。
在一些实施方案中，包装质粒可以含有除了包膜蛋白以外的所有逆转录病毒(如HIV-1)蛋白(Naldini等人，1998)。在其他实施方案中，病毒载体可能缺乏另外的病毒基因(例如与毒力有关的那些，例如vpr、vif、vpu和nef和/或Tat(HIV的主要反式激活因子))。在一些实施方案中，慢病毒载体(例如基于HIV的慢病毒载体)仅包含三种亲本病毒的基因：gag、pol和rev，这减少或消除了野生型病毒通过重组而重构的可能性。
在一些实施方案中，将病毒载体基因组引入包装细胞系中，所述细胞系含有将从病毒载体基因组转录的病毒基因组RNA包装至病毒颗粒中所需的所有组分。可替代地，除了一种或多种目的序列(例如重组核酸)以外，病毒载体基因组可以包含一个或多个编码病毒组分的基因。然而，在一些方面，为了防止基因组在靶细胞中复制，将复制所需的内源病毒基因去除，并且在包装细胞系中单独提供。
在一些实施方案中，用含有产生颗粒所必需的组分的一种或多种质粒载体转染包装细胞系。在一些实施方案中，用含有病毒载体基因组(包括LTR、顺式作用包装序列和目的序列，即编码抗原受体(如CAR)的核酸)的质粒；以及编码病毒酶和/或结构组分(如Gag、pol和/或rev)的一种或多种辅助质粒转染包装细胞系。在一些实施方案中，利用多个载体分离产生逆转录病毒载体颗粒的各种遗传组分。在一些此类实施方案中，向包装细胞提供单独的载体减少了重组事件的可能性，否则可能产生有复制能力的病毒。在一些实施方案中，可以使用具有所有逆转录病毒组分的单个质粒载体。
在一些实施方案中，将逆转录病毒载体颗粒(如慢病毒载体颗粒)假型化以增加宿主细胞的转导效率。例如，在一些实施方案中，将逆转录病毒载体颗粒(如慢病毒载体颗粒)用VSV-G糖蛋白假型化，这提供宽细胞宿主范围，从而扩展可以转导的细胞类型。在一些实施方案中，用编码非天然包膜糖蛋白的质粒或多核苷酸转染包装细胞系，以例如包括嗜异性、多嗜性或双嗜性包膜，如辛德比斯病毒包膜、GALV或VSV-G。
在一些实施方案中，包装细胞系提供将病毒基因组RNA包装至慢病毒载体颗粒中反式作用所需的组分，包括病毒调节蛋白和结构蛋白。在一些实施方案中，包装细胞系可以是能够表达慢病毒蛋白并产生功能性慢病毒载体颗粒的任何细胞系。在一些方面，合适的包装细胞系包括293(ATCC CCL X)、293T、HeLA(ATCC CCL 2)、D17(ATCC CCL 183)、MDCK(ATCC CCL 34)、BHK(ATCC CCL-10)和Cf2Th(ATCC CRL 1430)细胞。
在一些实施方案中，包装细胞系稳定地表达一种或多种病毒蛋白质。例如，在一些方面，可以构建含有gag、pol、rev和/或其他结构基因但不含LTR和包装组分的包装细胞系。在一些实施方案中，可以用编码一种或多种病毒蛋白的核酸分子以及含有编码异源蛋白的核酸分子的病毒载体基因组和/或编码包膜糖蛋白的核酸对包装细胞系进行瞬时转染。
在一些实施方案中，将病毒载体和包装质粒和/或辅助质粒通过转染或感染引入包装细胞系中。包装细胞系产生含有病毒载体基因组的病毒载体颗粒。用于转染或感染的方法是众所周知的。非限制性例子包括磷酸钙、DEAE-葡聚糖和脂质转染方法、电穿孔和显微注射。
在将重组质粒和逆转录病毒LTR和包装序列引入特殊细胞系(例如，通过磷酸钙沉淀)中时，包装序列可以允许待包装至病毒颗粒中的重组质粒的RNA转录，然后所述病毒颗粒可能会被分泌到培养基中。在一些实施方案中，随后收集含有重组逆转录病毒的培养基，任选地将其浓缩，并用于基因转移。例如，在一些方面，在将包装质粒和转移载体共转染至包装细胞系后，从培养基回收病毒载体粒子，并通过本领域技术人员使用的标准方法进行滴定。
在一些实施方案中，可以通过引入质粒以允许产生慢病毒颗粒，而在包装细胞系(如示例性HEK 293T细胞系)中产生逆转录病毒载体，如慢病毒载体。在一些实施方案中，包装细胞被转染和/或含有编码gag和pol的多核苷酸，以及编码重组受体(例如抗原受体，例如CAR)的多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码rev蛋白的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码非天然包膜糖蛋白(例如VSV-G)的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些此类实施方案中，在转染细胞(例如，HEK 293T细胞)后大约两天，细胞上清液含有重组慢病毒载体，可以回收并滴定所述重组慢病毒载体。
所回收和/或产生的逆转录病毒载体颗粒可以用于使用如所述的方法转导靶细胞。一旦进入靶细胞中，病毒RNA就被逆转录，进入细胞核中并稳定整合到宿主基因组中。在病毒RNA整合后一天或两天，可以检测到重组蛋白(例如抗原受体，例如CAR)的表达。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及通过使包含多个细胞的细胞组合物与病毒颗粒接触(例如孵育)来转导细胞的方法。在一些实施方案中，待转染或转导的细胞是或包含从受试者获得的原代细胞，例如从受试者富集和/或选择的细胞。
在一些实施方案中，所述组合物中要转导的细胞的浓度是从或从约1.0x 105个细胞/mL至1.0x 108个细胞/mL，如至少或至少约或约1.0x 105个细胞/mL、5x 105个细胞/mL、1x 106个细胞/mL、5x 106个细胞/mL、1x 107个细胞/mL、5x 107个细胞/mL或1x 108个细胞/mL。
在一些实施方案中，病毒颗粒以病毒载体颗粒拷贝或其感染单位(IU)与待转导的细胞总数的某一比率(IU/细胞)来提供。例如，在一些实施方案中，病毒颗粒在接触期间以为或约或至少为或至少约0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50或60IU的病毒载体颗粒/细胞存在。
在一些实施方案中，病毒载体颗粒的滴度在或在约1x 106IU/mL与1x 108IU/mL之间，如在或在约5x 10 6IU/mL与5x 107IU/mL之间，如至少6x 106IU/mL、7x 106IU/mL、8x106IU/mL、9x 106IU/mL、1x 107IU/mL、2x 107IU/mL、3x 107IU/mL、4x107IU/mL或5x107IU/mL。
在一些实施方案中，可以按小于100(如通常小于60、50、40、30、20、10、5或更小)的感染复数(MOI)来实现转导。
在一些实施方案中，所述方法涉及使细胞与病毒颗粒接触或一起孵育。在一些实施方案中，接触进行30分钟至72小时，如30分钟至48小时、30分钟至24小时或1小时至24小时，如至少或至少约30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、36小时或更长时间。
在一些实施方案中，接触在溶液中进行。在一些实施方案中，使细胞和病毒颗粒以如下体积接触：从或从约0.5mL至500mL，如从或从约0.5mL至200mL、0.5mL至100mL、0.5mL至50mL、0.5mL至10mL、0.5mL至5mL、5mL至500mL、5mL至200mL、5mL至100mL、5mL至50mL、5mL至10mL、10mL至500mL、10mL至200mL、10mL至100mL、10mL至50mL、50mL至500mL、50mL至200mL、50mL至100mL、100mL至500mL、100mL至200mL或200mL至500mL。
在某些实施方案中，用包含结合分子的颗粒对输入细胞进行处理、孵育或接触，所述结合分子结合至或识别由病毒DNA编码的重组受体。
在一些实施方案中，细胞与病毒载体颗粒的孵育导致或产生包含用病毒载体颗粒转导的细胞的输出组合物。
在一些实施方案中，通过电穿孔将重组核酸转移到T细胞中(参见例如Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298；和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，通过转座将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；和Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如在Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,纽约.纽约州中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；以及磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如国际专利申请公开号WO2014055668和美国专利号7,446,190中所述的那些。
在一些实施方案中，可以在扩增期间或之后例如用T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)对细胞(例如，T细胞)进行转染。例如，这种用于引入所需受体的基因的转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使遗传修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如，抗CD3/抗CD28刺激物)，随后用第二类型的刺激物例如经由从头引入的受体进行刺激。这种第二类型的刺激物可以包括呈肽/MHC分子形式的抗原性刺激物、遗传引入的受体的同源(交联)配体(例如，CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如，通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，Cheadle等人,“Chimeric antigen receptors forT-cell based therapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66或Barrett等人,ChimericAntigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine第65卷:333-347(2014)。
在一些情况下，可以使用不需要激活细胞(例如，T细胞)的载体。在一些此类情况下，可以在激活之前选择和/或转导细胞。因此，可以在培养细胞之前或之后将细胞工程化，并且在一些情况下在所述培养的至少一部分的同时或期间将所述细胞工程化。
另外的核酸(例如，用于引入的基因)包括：用于改进治疗功效的那些，如通过促进所转移细胞的活力和/或功能；用于提供用于选择和/或评价细胞(如用于评估体内存活或定位)的遗传标记物的基因；用于改进安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择敏感，如以下文献中所述：Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human Gene Therapy 3:319-338(1992)；还参见Lupton等人的PCT/US91/08442和PCT/US94/05601的公开，所述文献描述了使用通过将显性阳性选择性标记物与阴性选择性标记物融合而衍生的双功能选择性融合基因。参见例如，Riddell等人,美国专利号6,040,177，第14-17栏。
4.工程化细胞的培育、扩增和配制
在一些实施方案中，用于产生例如用于根据所提供的方法、用途、制品或组合物中的任一种的细胞疗法的工程化细胞的方法包括用于培育细胞(例如，在促进增殖和/或扩增的条件下培育细胞)的一个或多个步骤。在一些实施方案中，在基因工程化的步骤(例如通过转导或转染将重组多肽引入细胞)之后，在促进增殖和/或扩增的条件下培育细胞。在特定实施方案中，在刺激条件下孵育细胞并用重组多核苷酸(例如编码重组受体的多核苷酸)转导或转染细胞之后培育细胞。因此，在一些实施方案中，将已通过用编码CAR的重组多核苷酸转导或转染工程化的CAR阳性T细胞的组合物在促进增殖和/或扩增的条件下培育。
在某些实施方案中，工程化T细胞的一种或多种组合物是或包括经富集T细胞的两种单独组合物，如已用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸工程化的经富集T细胞的两种单独组合物。在特定实施方案中，将经富集T细胞的两种单独组合物(例如，从相同生物样品中选择、分离和/或富集的经富集T细胞的两种单独组合物)分别在刺激条件下培育，如在基因工程化(例如通过转导或转染将重组多肽引入细胞)的步骤之后。在某些实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD4+T细胞的组合物，如已用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸工程化的经富集CD4+T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD8+T细胞的组合物，如已用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸工程化的经富集CD4+T细胞的组合物。在一些实施方案中，将经富集CD4+T细胞和经富集CD8+T细胞的两种单独组合物，如已各自用编码重组受体(例如CAR)的多核苷酸分别工程化的经富集CD4+T细胞的组合物和经富集CD8+T细胞的组合物例如在促进增殖和/或扩增的条件下分别培育。
在一些实施方案中，培育是在促进增殖和/或扩增的条件下进行的。在一些实施方案中，此类条件可以经设计以诱导群体中的细胞的增殖、扩增、激活和/或存活。在特定实施方案中，刺激条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他被设计成促进细胞的生长、分裂和/或扩增的药剂))。
在特定实施方案中，在一种或多种细胞因子存在下培育所述细胞。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是重组细胞因子。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，所述一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由T细胞表达的和/或对T细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子(例如重组细胞因子)是或包括细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员包括但不限于白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。在一些实施方案中，所述一种或多种重组细胞因子包括IL-2、IL-7和/或IL-15。在一些实施方案中，在存在如下浓度的细胞因子(例如，重组人细胞因子)的情况下培育所述细胞(例如，工程化细胞)：在1IU/mL与2,000IU/mL之间、在10IU/mL与100IU/mL之间、在50IU/mL与200IU/mL之间、在100IU/mL与500IU/mL之间、在100IU/mL与1,000IU/mL之间、在500IU/mL与2,000IU/mL之间或在100IU/mL与1,500IU/mL之间。
在一些实施方案中，培育是在如下条件下进行，所述条件通常包括适合于原代免疫细胞(如人T淋巴细胞)生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常为或为约37摄氏度。在一些实施方案中，所述经富集T细胞的组合物在25℃至38℃，如30℃至37℃，例如为或约37℃±2℃的温度下孵育。在一些实施方案中，将孵育进行一段时间直至培养(例如培育或扩增)产生所希望的或阈值密度、数量或剂量的细胞。在一些实施方案中，孵育是大于或大于约或持续约或24小时、48小时、72小时、96小时、5天、6天、7天、8天、9天或更长时间。
在特定实施方案中，在封闭系统中进行培育。在某些实施方案中，在无菌条件下在封闭系统中进行培育。在特定实施方案中，在与所提供系统的一个或多个步骤相同的封闭系统中进行培育。在一些实施方案中，将经富集T细胞的组合物从封闭系统中去除并且置于用于培育的生物反应器中和/或与其连接。合适的用于培育的生物反应器的例子包括但不限于GE Xuri W25、GE Xuri W5、Sartorius BioSTAT RM 20|50、Finesse SmartRocker生物反应器系统和Pall XRS生物反应器系统。在一些实施方案中，在培育步骤的至少一部分期间，使用生物反应器灌注和/或混合细胞。
在一些实施方案中，混合是或包括摇摆和/或运动。在一些情况下，生物反应器可以经受运动或摇摆，其在一些方面可以增加氧气传递。使生物反应器运动可以包括但不限于沿着水平轴线旋转、沿着竖直轴线旋转、沿着生物反应器的倾斜(tilted或inclined)的水平轴线的摇摆运动、或其任何组合。在一些实施方案中，在摇摆的情况下进行孵育的至少一部分。可以调节摇摆速度和摇摆角度以实现所希望的搅动。在一些实施方案中，摇摆角度为20°、19°、18°、17°、16°、15°、14°、13°、12°、11°、10°、9°、8°、7°、6°、5°、4°、3°、2°或1°。在某些实施方案中，摇摆角度在6°-16°之间。在其他实施方案中，摇摆角度在7°-16°之间。在其他实施方案中，摇摆角度在8°-12°之间。在一些实施方案中，摇摆速率为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40rpm。在一些实施方案中，摇摆速率在4rpm与12rpm之间，例如在4rpm与6rpm之间并包含端值。
在一些实施方案中，使生物反应器保持等于或接近37℃的温度和等于或接近5％的CO2水平，具有如下稳定空气流量：为、为约或至少0.01L/min、0.05L/min、0.1L/min、0.2L/min、0.3L/min、0.4L/min、0.5L/min、1.0L/min、1.5L/min、或2.0L/min或大于2.0L/min。在某些实施方案中，在灌注的情况下，如以290ml/天、580ml/天和/或1160ml/天的速率(例如，这取决于与培育起始相关的时间安排和/或经培育细胞的密度)进行培育的至少一部分。在一些实施方案中，在摇摆运动(例如以在5°与10°之间(如6°)的角度，以恒定摇摆速度(例如在5与15RPM之间(如6RPM或10RPM)的速度))的情况下进行细胞培养物扩增的至少一部分。
在一些实施方案中，用于制造、生成或产生根据所提供的方法、用途或制品的细胞疗法和/或工程化细胞的方法可以包括在孵育、工程化和培育之前或之后配制细胞(如配制由处理步骤产生的基因工程化细胞)和/或一个或多个如所述的其他处理步骤。在一些实施方案中，一个或多个加工步骤(包括配制细胞)可以在封闭系统中进行。在一些情况下，将细胞在用于制造、生成或产生细胞疗法和/或工程化细胞的一个或多个步骤(例如在离心室和/或封闭系统中进行)中加工可以包括在培养(例如培育和扩增)和/或一个或多个如所述的其他加工步骤之前或之后配制细胞，如配制由转导加工步骤产生的基因工程化细胞。在一些实施方案中，将基因工程化细胞作为单位剂型组合物配制，所述单位剂型组合物包括用于以给定剂量或其部分施用的细胞数量。
在一些实施方案中，提供包含用重组抗原受体(例如，CAR或TCR)工程化的细胞的所述剂量的细胞作为组合物或配制品，如药物组合物或配制品。这种组合物可以根据所提供的方法如在治疗疾病、病症和障碍，或在检测、诊断和预后方法、以及用途和制品中使用。在一些情况下，可以以用于剂量施用(如用于单一单位剂量施用或多剂量施用)的量配制细胞。
在一些实施方案中，可以将细胞配制到容器(如袋或小瓶)中。在一些实施方案中，小瓶可以是输注小瓶。在一些实施方案中，使小瓶配制为具有所述工程化细胞的单一单位剂量，所述单一单位剂量如包括用于以给定剂量或其部分施用的细胞数量。
在一些实施方案中，将细胞配制在药学上可接受的缓冲液中，所述药学上可接受的缓冲液在一些方面可以包括药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，处理包括将介质交换成药学上可接受的或施用于受试者所需的介质或配制缓冲液。在一些实施方案中，处理步骤可以涉及洗涤转导的和/或扩增的细胞以交换药学上可接受的缓冲液中的细胞，所述药学上可接受的缓冲液可以包括一种或多种任选的药学上可接受的载体或赋形剂。包括药学上可接受的载体或赋形剂的此类药物形式的例子可以是下文与将细胞和组合物施用于受试者可接受的形式结合描述的任何形式。在一些实施方案中，药物组合物含有有效治疗或预防疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)的细胞。
在一些实施方案中，配制缓冲液含有低温保存剂。在一些实施方案中，用低温保存剂溶液配制细胞，所述低温保存剂溶液含有1.0％至30％的DMSO溶液，如5％至20％的DMSO溶液或5％至10％的DMSO溶液。在一些实施方案中，低温保存剂溶液是或含有例如含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS、或其他合适的细胞冷冻介质。在一些实施方案中，低温保存剂溶液是或含有例如至少或约7.5％DMSO。在一些实施方案中，处理步骤可以涉及洗涤转导的和/或扩增的细胞以交换在低温保存剂溶液中的细胞。在一些实施方案中，将所述细胞冷冻，例如低温保护或低温保存在介质和/或溶液中，所述介质和/或溶液具有最终浓度为或为约12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％或5.0％的DMSO，或在1％与15％之间、在6％与12％之间、在5％与10％之间、或在6％与8％之间的DMSO。在特定实施方案中，将所述细胞在介质和/或溶液中冷冻(例如，低温保护或低温保存)，所述介质和/或溶液具有最终浓度为或为约5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、或0.25％的HSA，或者在0.1％与5％之间、在0.25％与4％之间、在0.5％与2％之间、或在1％与2％之间的HSA。
在一些实施方案中，使用一个或多个处理步骤进行配制，所述步骤包括洗涤、稀释或浓缩细胞，如培养或扩增的细胞。在一些实施方案中，处理可以包括将细胞稀释或浓缩至所需浓度或数量，如包括用于以给定剂量或其部分用的细胞数量的单位剂型组合物。在一些实施方案中，处理步骤可以包括减小体积，从而根据需要增加细胞的浓度。在一些实施方案中，处理步骤可以包括增加体积，从而根据需要减小细胞的浓度。在一些实施方案中，处理包括向转导的和/或扩增的细胞添加一定体积的配制缓冲液。在一些实施方案中，配制缓冲液的体积是从或从约10mL至1000mL，如至少或至少约或约或50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL或1000mL。
在一些实施方案中，用于配制细胞组合物的此类处理步骤在封闭系统中进行。此类处理步骤的例子可以使用与跟细胞处理系统相关的一个或多个系统或套件结合的离心室(例如由Biosafe SA生产和出售的离心室，包括用于与或Sepax细胞处理系统一起使用的那些)来进行。在国际公开号WO 2016/073602中描述了示例性系统和过程。在一些实施方案中，所述方法包括实现自离心室的内部空腔输送所配制的组合物，所述配制的组合物是在如所述的任何以上实施方案中、在配制缓冲液(如药学上可接受的缓冲液)中配制的所得细胞组合物。在一些实施方案中，将所配制的组合物输送至作为封闭系统的一部分与离心室可操作地连接的容器(如本文所述的生物医学材料器皿的小瓶)。在一些实施方案中，所述生物医学材料器皿被配置用于整合至和或可操作连接至并且/或者被整合至或可操作地连接至进行一个或多个处理步骤的封闭系统或装置。在一些实施方案中，所述生物医学材料器皿在输出管线或输出位置处连接至系统。在一些情况下，所述封闭系统在入口管处连接至生物医学材料器皿的小瓶。与本文所述的生物医学材料器皿一起使用的示例性封闭系统包括和2系统。
在一些实施方案中，如与离心室或细胞处理系统相关联的封闭系统包括多端口输出试剂盒，所述试剂盒含有在管线各末端与端口相关联的多路管歧管，所述端口可以连接至一个或多个容器以供经配制组合物输送。在一些方面，所需数量或多个小瓶可以无菌连接至多端口输出中的一个或多个，通常两个或更多个，如至少3、4、5、6、7、8个或更多个端口。例如，在一些实施方案中，一个或多个容器(例如生物医学材料器皿)可以附接至所述端口或少于全部的所述端口。因此，在一些实施方案中，所述系统可以实现将输出组合物输送至生物医学材料器皿的多个小瓶中。
在一些方面，可以将细胞以用于剂量施用(如用于单一单位剂量施用或多剂量施用)的量输送至多个输出容器(例如，小瓶)中的一个或多个。例如，在一些实施方案中，小瓶可以各自含有以给定剂量或其部分施用的细胞数量。因此，在一些方面，每个小瓶可以含有用于施用的单一单位剂量，或者可以含有所需剂量的一部分，使得多个小瓶中的多于一个，如两个小瓶或3个小瓶一起构成用于施用的剂量。在一些实施方案中，4个小瓶一起构成用于施用的剂量。
因此，所述容器(例如袋或小瓶)通常含有要施用的细胞，例如，其一个或多个单位剂量。单位剂量可以是要施用于受试者的细胞的量或数量，或者是要施用的细胞的数量的两倍(或更多数量)。它可以是要施用于受试者的细胞的最低剂量或最低可能剂量。在一些方面，所提供的制品包括所述多个输出容器中的一个或多个。
在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)单独地包含单位剂量的细胞。因此，在一些实施方案中，每个容器包含相同或大致或基本相同数量的细胞。在一些实施方案中，每个单位剂量含有为或约或至少或至少约1x 106、2x 106、5x 106、1x 107、5x 107或1x 108个工程化细胞、总细胞、T细胞或PBMC。在一些实施方案中，每个单位剂量含有为或约或至少或至少约1x 106、2x 106、5x 106、1x 107、5x 107或1x 108个为CD3+(如CD4+或CD8+)的CAR+T细胞或其活子集。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积是在为或约10mL与为或约100mL之间，如为或约或至少或至少约20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL或100mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积是在为或约1mL与为或约10mL之间，如在为或约1mL与为或约5mL之间。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积是在为或约4mL与为或约5mL之间。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约4.4mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约4.5mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约4.6mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约4.7mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约4.8mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约4.9mL。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的所配制的细胞组合物的体积为或为约5.0mL。
在一些实施方案中，所配制的细胞组合物的浓度是大于为或约0.5x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约1.0x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约1.5x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约2.0x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约2.5x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约2.6x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约2.7x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约2.8x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约2.9x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约3.0x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约3.5x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约4.0x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、大于为或约4.5x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL、或大于为或约5x 106个重组受体表达(例如CAR+)/CD3+细胞或此类活细胞/mL。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD4+T细胞。在一些实施方案中，CD3+细胞是CD8+T细胞。在一些实施方案中，CD3+T细胞是CD4+和CD8+T细胞。
在一些实施方案中，容器(例如袋或小瓶)中的细胞可以是低温保存的。在一些实施方案中，容器(例如小瓶)可以储存在液氮中，直到进一步使用。
在一些实施方案中，例如，根据本文所述的方法、用途和制品，向受试者施用通过所述方法产生的此类细胞或包含此类细胞的组合物，用于治疗疾病或病症。
III.制品和试剂盒
还提供了制品，所述制品含有检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)和用于细胞疗法(例如T细胞疗法)的组分(例如CAR T细胞)、和/或其组合物。所述制品可以包括容器和在所述容器上或与所述容器相关的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由多种材料(如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，所述容器容纳组合物，所述组合物自身或与另一种组合物组合地有效治疗、预防和/或诊断病症。在一些实施方案中，所述容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服施用剂的瓶子或小瓶。标签或包装说明书可以指示将组合物用于治疗疾病或病症。
所述制品可以包括(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包括用于细胞疗法(例如工程化T细胞疗法)的工程化细胞；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括检查点抑制剂疗法，例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体。
在一些实施方案中，所述第一容器包含第一组合物和第二组合物，其中所述第一组合物包含用于免疫疗法的工程化细胞的第一群体(例如CD4+T细胞疗法)，并且所述第二组合物包含工程化细胞的第二群体，其中所述第二群体可以与所述第一群体分开进行工程化(例如CD8+T细胞疗法)。在一些实施方案中，所述第一和第二细胞组合物含有确定比率的工程化细胞(例如CD4+和CD8+细胞)(例如，1:1比率的CD4+:CD8+CAR+T细胞)。
在一些实施方案中，所述第一容器包含第一组合物、第二组合物和第三组合物，其中所述第一组合物包含用于免疫疗法的工程化细胞的第一群体(例如CD4+T细胞疗法)，所述第二组合物包含工程化细胞的第二群体，其中所述第二群体可以与所述第一群体分开进行工程化(例如CD8+T细胞疗法)，并且所述第三组合物包含检查点抑制剂疗法(例如抗PD-1抗体和任选地抗LAG3抗体)。在一些实施方案中，所述第一和第二细胞组合物含有确定比率的工程化细胞(例如CD4+和CD8+细胞)(例如，1:1比率的CD4+:CD8+CAR+T细胞)。
所述制品还可以包括包装说明书，其指示组合物可以用于治疗特定病症。可替代地或另外地，所述制品还可以包括另一种或相同的容器，所述另一种或相同的容器包含药学上可接受的缓冲剂。它还可以包括其他材料，如其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和/或注射器。
IV.定义
除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语、符号以及其他技术和科学术语或用辞意图具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不应被解释为表示与本领域通常理解的含义有实质性差异。
术语“多肽”与“蛋白质”可互换使用以指代氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的受体和其他多肽，例如接头或肽)可以包括氨基酸残基，包括天然和/或非天然氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化和磷酸化。在一些方面，多肽可以含有关于自然或天然序列的修饰，只要蛋白质维持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(例如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(例如通过产生所述蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，被施用一种或多种药剂、细胞、细胞群或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，灵长类动物是猴或猿。受试者可以是雄性或雌性，并且可以处于任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效果或结局或表型的完全或部分改善或减轻。理想的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓解、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或缓解疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结局的影响。
如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减慢、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。在一些实施方案中，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。
如本文所用，当与除了目的条件或参数以外其他都相同的条件相比时，或者可替代地，如与另一种条件相比，“抑制”功能或活性是降低功能或活性。例如，与不存在所述细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速率。
在施用的情境下，药剂(例如药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(例如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如，药物配制品或细胞)的“治疗有效量”是指在所需剂量下和所需时间段中有效实现所需治疗结果(如针对疾病、病症或障碍的治疗)和/或治疗的药代动力学或药效学作用的量。治疗有效量可以根据诸如以下的因素而变化：疾病状态、受试者的年龄、性别和体重和所施用的细胞群。在一些实施方案中，所提供的方法涉及以有效量(例如，治疗有效量)施用细胞和/或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量和持续必要的时间段的情况下能有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以预防有效量将小于治疗有效量。在肿瘤负荷较低的情况下，在一些方面，预防有效量将高于治疗有效量。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的常用误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。
除非上下文另有明确规定，否则如本文所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指代物。例如，“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”意指“至少一个/一种”或“一个/一种或多个/多种”。
在整个本公开文本中，要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应该认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如，在提供值的范围的情况下，应理解，在该范围的上限与下限之间的每个中间值以及在所陈述范围内的任何其他所陈述值或中间值都涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在所述较小范围内，并且也涵盖在所要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述范围包括限制中的一者或两者的情况下，排除了那些包括的限制中的任一者或两者的范围也包括在所要求保护的主题内。无论范围的广度如何，这都适用。
如本文所用，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。
如本文所用，当提及一种或多种特定细胞类型或细胞群时，“富集”是指例如与所述组合物中的总细胞数或组合物体积相比，或者相对于其他细胞类型，如通过基于所述群体或细胞表达的标记的阳性选择，或通过基于在要耗尽的所述细胞群或细胞上不存在的标记的阴性选择，增加所述细胞类型或群体的数量或百分比。所述术语不需要从组合物完全去除其他细胞、细胞类型或群体，并且不需要如此富集的细胞在经富集组合物中以等于或甚至接近100％存在。
如本文所用，细胞或细胞群体针对特定标记呈“阳性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中的可检测存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术(例如通过用特异性地结合至所述标记的抗体染色并检测所述抗体)所检测的表面表达的存在，其中所述染色可通过流式细胞术以如下水平检测到：显著高于在其他都相同的条件下用同种型匹配的对照或荧光减一(FMO)门控对照通过实施相同程序检测到的染色的水平，和/或与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平基本上相似的水平，和/或显著高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平的水平。
如本文所用，细胞或细胞群体对特定标记呈“阴性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中不存在基本上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术(例如通过用特异性地结合至所述标记的抗体染色并检测所述抗体)所检测的表面表达的不存在，其中所述染色未通过流式细胞术以如下水平检测到：显著高于在其他都相同的条件下用同种型匹配的对照或荧光减一(FMO)门控对照通过实施相同程序检测到的染色的水平，和/或显著低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平的水平，和/或与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平基本上相似的水平。
如本文所用，术语“载体”是指能够传播与其连接的另一核酸的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已将其引入的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
V.示例性实施方案
所提供的实施方案包括：
1.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的施用在第2天与第20天之间，包含端值；和
(ii)约每两周一次(Q2W)或约每四周一次(Q4W)施用一定剂量，其量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
2.根据实施方案1所述的方法，其中在第8天与第15天之间包含端值施用所述第一剂量。
3.根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中在第8天施用所述第一剂量。
4.根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中在第15天施用所述第一剂量。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的量在为或约160mg与560mg之间。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的量是为或约240mg或为或约480mg。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的量是240mg。
8.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的量是480mg。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中约每两周一次(Q2W)施用一定剂量。
10.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中约每四周一次(Q4W)施用一定剂量。
11.根据实施方案1-10中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的量是240mg并且约Q2W施用一定剂量，或者所述PD-1抑制剂的量是480mg并且约Q4W施用一定剂量。
12.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)在第一周期内施用在为或约140mg与为或约580mg之间包含端值的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间包含端值施用所述第一周期的第一剂量；和
(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间包含端值的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
13.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)在第一周期内每两周一次(Q2W)或每四周一次(Q4W)施用在为或约140与为或约340mg之间包含端值的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少两个剂量，并且在第2天与第20天之间包含端值施用所述第一周期的第一剂量；和
(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约140mg与为或约580mg之间包含端值的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
14.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)在第一周期内施用在为或约380mg与为或约580mg之间包含端值的第一量的PD-1抑制剂，其中在所述第一周期内施用所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量，并且在第2天与第20天之间施用所述第一周期的第一剂量；和
(ii)在第二周期内约每四周一次(Q4W)施用在为或约380mg与为或约580mg之间包含端值的第二量的PD-1抑制剂，其中在所述第二周期内施用所述第二量的至少两个剂量，并且在第50天与第65天之间施用所述第二周期的第一剂量。
15.根据实施方案12-14中任一项所述的方法，其中在第8天与第15天之间包含端值施用所述第一周期的第一剂量。
16.根据实施方案12-15中任一项所述的方法，其中在第8天施用所述第一周期的第一剂量。
17.根据实施方案12-15中任一项所述的方法，其中在第15天施用所述第一周期的剂量。
18.根据实施方案12、13和15-17中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第一量在为或约160mg与为或约320mg之间，包含端值。
19.根据实施方案12、13和15-18中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第一量在为或约200mg与为或约280mg之间，包含端值。
20.根据实施方案12、13和15-19中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第一量是为或约240mg。
21.根据实施方案14所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第一量在为或约400mg与为或约560mg之间。
22.根据实施方案14或实施方案21所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第一量在为或约440mg与为或约520mg之间。
23.根据实施方案14、21或22中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第一量是为或约480mg。
24.根据实施方案12-23中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第二量在为或约400mg与为或约560mg之间，包含端值。
25.根据实施方案12-24中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第二量在为或约440mg与为或约520mg之间，包含端值。
26.根据实施方案12-25中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的第二量是为或约480mg。
27.根据实施方案12-26中任一项所述的方法，其中所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后至少约四周。
28.根据实施方案12-27中任一项所述的方法，其中所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后长达约五周。
29.根据实施方案12-27中任一项所述的方法，其中所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后长达约六周。
30.根据实施方案12-27中任一项所述的方法，其中所述第一周期是施用第一周期的第一剂量后长达约七周。
31.根据实施方案12-30中任一项所述的方法，其中所述第一周期是施用所述剂量的工程化T细胞后长达约八周。
32.根据实施方案12、13、15、16、18-20、24-27、30和31中任一项所述的方法，其中在第8、22和36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量。
33.根据实施方案12、13、15、16、21-27、30和31中任一项所述的方法，其中在第8天和第36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量。
33.根据实施方案12、13、15、17-20、24-27、29和31中任一项所述的方法，其中在第15、29和43天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量。
34.根据实施方案14、15、17、21-27、29和31中任一项所述的方法，其中所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量是在第15天施用的一个剂量。
35.根据实施方案12-34中任一项所述的方法，其中所述第二周期是施用所述剂量的工程化T细胞后长达至少约三个月。
36.根据实施方案12-35中任一项所述的方法，其中所述第二周期是施用所述剂量的工程化T细胞后长达约三个月。
37.根据实施方案12-36中任一项所述的方法，其中分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
38.根据实施方案12、13、15、16、18-30、32、33和35-37中任一项所述的方法，其中在第8、22和36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
39.根据实施方案12、13、15、16、18-30、33和35-37中任一项所述的方法，其中在第8天和第36天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
40.根据实施方案12、13、15、17-29、33和35-37中任一项所述的方法，其中在第15、29和43天施用所述第一量的PD-1抑制剂的各个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
41.根据实施方案12、14、15、17-29和34-37中任一项所述的方法，其中所述第一量的PD-1抑制剂的至少一个剂量是在第15天施用的一个剂量；并且分别在第57天和第85天施用所述第二量的PD-1抑制剂的第一剂量和第二剂量。
42.根据实施方案1-41中任一项所述的方法，所述方法还包括约每两周一次(Q2W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
43.根据实施方案1-41中任一项所述的方法，所述方法还包括约每四周一次(Q4W)向所述受试者施用一定剂量的LAG3抑制剂。
44.根据实施方案1-43中任一项所述的方法，所述方法还包括以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在施用一定剂量的PD-1抑制剂的相同日的每一天施用一定剂量的LAG3抑制剂。
45.根据实施方案42-44中任一项所述的方法，其中以在为或约160mg与为或约1040mg之间的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
46.根据实施方案42-45中任一项所述的方法，其中以在为或约160mg与为或约320mg之间的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
47.根据实施方案42-46中任一项所述的方法，其中以为或约240mg的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
48.根据实施方案42-45中任一项所述的方法，其中以在为或约400mg与为或约560mg之间的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
49.根据实施方案42-45和48中任一项所述的方法，其中以为或约480mg的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
50.根据实施方案42-45中任一项所述的方法，其中以在为或约880mg与为或约1040mg之间的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
51.根据实施方案42-45和50中任一项所述的方法，其中以为或约960mg的量施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
52.根据实施方案42-45中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量在所述第一周期期间以第一量施用并且在所述第二周期期间以第二量施用。
53.根据实施方案52所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量在为或约160mg与为或约320mg之间。
54.根据实施方案52或实施方案53所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量在为或约200mg与为或约280mg之间。
55.根据实施方案52-54中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约240mg。
56.根据实施方案52所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量在为或约400mg与为或约560mg之间。
57.根据实施方案52或实施方案56所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量在为或约440mg与为或约520mg之间。
58.根据实施方案52、56和57中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg。
59.根据实施方案52所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量在为或约880mg与为或约1040mg之间。
60.根据实施方案52或实施方案59所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量在为或约920mg与为或约1000mg之间。
61.根据实施方案52、59和60中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约960mg。
62.根据实施方案52-61中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第二量在为或约400mg与为或约560mg之间。
63.根据实施方案52-62中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第二量在为或约440mg与为或约520mg之间。
64.根据实施方案52-63中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第二量是为或约480mg。
65.根据实施方案52-61中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第二量在为或约880mg与为或约1040mg之间。
66.根据实施方案52-61和65中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第二量在为或约920mg与为或约1000mg之间。
67.根据实施方案51-61、65和66中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第二量是为或约960mg。
68.根据实施方案52-55和62-64中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约240mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约480mg。
69.根据实施方案52、56-58和62-64中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约480mg。
70.根据实施方案52、56-58和65-67中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约480mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约960mg。
71.根据实施方案52、59-61和65-67中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的第一量是为或约960mg，并且所述LAG3抑制剂的第二量是为或约960mg。
72.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；和
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述LAG3抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的所述LAG3抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
73.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；和
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述LAG3抑制剂，其中所述第一量是480mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的所述LAG3抑制剂，其中所述第二量是960mg并且在第57天和第85天施用。
74.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的所述PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
75.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的所述LAG3抑制剂。
76.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用960mg的所述LAG3抑制剂。
77.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、57和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂。
78.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；和
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述LAG3抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的所述LAG3抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
79.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用；和
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述LAG3抑制剂，其中所述第一量是480mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的所述LAG3抑制剂，其中所述第二量是960mg并且在第57天和第85天施用。
80.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的所述PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
81.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；和
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的所述LAG3抑制剂。
82.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的PD-1抑制剂；和
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用960mg的所述LAG3抑制剂。
83.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、57和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂。
84.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
85.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
86.根据实施方案84或实施方案85所述的方法，其中独立地施用第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间包含端值施用。
87.根据实施方案86所述的方法，其中在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
88.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
89.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
90.根据实施方案84-89中任一项所述的方法，其中在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
91.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
92.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
93.根据实施方案84-87和90-92中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
94.根据实施方案1-93中任一项所述的方法，其中在第8天与第15天之间包含端值施用所述PD-1抑制剂的第一剂量。
95.根据实施方案84-94中任一项所述的方法，其中在第8天施用所述PD-1抑制剂的第一剂量。
96.根据实施方案84-94中任一项所述的方法，其中在第15天施用所述PD-1抑制剂的第一剂量。
97.根据实施方案84-96中任一项所述的方法，其中施用所述PD-1抑制剂不超过约三个月。
98.根据实施方案84-97中任一项所述的方法，其中在约第80天与约第90天之间施用最终剂量的PD-1抑制剂，任选地其中在约第85天施用所述最终剂量的PD-1抑制剂。
99.根据实施方案84-98中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约160mg与560mg之间。
100.根据实施方案84-99中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量是为或约240mg或为或约480mg。
101.根据实施方案84-100中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的至少一个剂量是240mg，并且所述PD-1抑制剂的至少一个剂量是480mg。
102.根据实施方案84-101中任一项所述的方法，其中施用至少四个剂量的PD-1抑制剂。
103.根据实施方案84-102中任一项所述的方法，其中施用四个剂量、五个剂量或六个剂量的PD-1抑制剂。
104.根据实施方案102或实施方案103所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的PD-1抑制剂。
105.根据实施方案104中任一项所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用所述PD-1抑制剂的每个剂量。
106.根据实施方案102-104中任一项所述的方法，其中在先前剂量的PD-1抑制剂之后约三周或约四周施用第四剂量的PD-1抑制剂。
107.根据实施方案102-104和106中任一项所述的方法，其中施用五个剂量的PD-1抑制剂，并且在第四剂量的PD-1抑制剂之后约四周施用第五剂量的PD-1抑制剂。
108.根据实施方案84-107中任一项所述的方法，其中在第8、22和36天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。
109.根据实施方案84-107中任一项所述的方法，其中在第15、29和43天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。
110.根据实施方案84-107中任一项所述的方法，其中在第8、36、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。
111.根据实施方案84-107中任一项所述的方法，其中在第15、43、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。
112.根据实施方案87-111中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用LAG3抑制剂。
113.根据实施方案112所述的方法，其中在第2天与第20天之间包含端值施用所述LAG3抑制剂的第一剂量。
114.根据实施方案84-86和113中任一项所述的方法，其中在第8天与第15天之间包含端值施用所述LAG3抑制剂的第一剂量。
115.根据实施方案84-86、113和114中任一项所述的方法，其中在第8天施用所述LAG3抑制剂的第一剂量。
116.根据实施方案84-86、113和114所述的方法，其中在第15天施用所述LAG3抑制剂的第一剂量。
117.根据实施方案84-86和112-116中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量在约60mg与约540mg之间，包含端值。
118.根据实施方案84-86和112-117中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量在约120mg与约480mg之间。
119.根据实施方案84-86和112-118中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量是约120mg。
120.根据实施方案84-86和112-118中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。
121.根据实施方案84-86和112-118中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量是约480mg。
122.根据实施方案84-86和112-121中任一项所述的方法，其中施用至少三个剂量的LAG3抑制剂。
123.根据实施方案84-86和112-122中任一项所述的方法，其中施用三个剂量、四个剂量或六个剂量的LAG3抑制剂。
124.根据实施方案122或实施方案123所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的LAG3抑制剂。
125.根据实施方案84-86和112-124中任一项所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
126.根据实施方案122-124中任一项所述的方法，其中在第一剂量的LAG3抑制剂之后约四周施用第二剂量的LAG3抑制剂。
127.根据实施方案84-86和112-126中任一项所述的方法，其中以相同的频率施用所述PD-1抑制剂的各个剂量和所述LAG3抑制剂的各个剂量。
128.根据实施方案84-86和112-127中任一项所述的方法，其中(i)所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用；和/或(ii)所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。
129.根据实施方案84-86和112-126中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的各个剂量的施用频率是所述PD-1抑制剂的各个剂量的施用频率的一半。
130.根据实施方案84-86和112-129中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量是所述LAG3抑制剂的剂量的两倍。
131.根据实施方案84-86和112-129中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量与所述LAG3抑制剂的剂量相同。
132.根据实施方案84-86、112-128、130和131中任一项所述的方法，其中将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂配制在单一组合物中，任选地用于静脉内施用。
133.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36和71天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
134.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43和71天施用240mg。
135.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
136.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第815、29、43、57、71和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
137.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的所述PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
138.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的所述PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
139.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用120mg的所述LAG3抑制剂。
140.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用120mg的所述LAG3抑制剂。
141.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
142.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
143.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的所述LAG3抑制剂。
144.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的所述LAG3抑制剂。
145.根据实施方案1-144中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。
146.根据实施方案145所述的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区包含分别含有SEQ ID NO:60、61和62所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变(VL)区包含分别含有SEQ ID NO:63、64和65所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。
147.根据实施方案146所述的方法，其中所述VH区包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列。
148.根据实施方案145-147中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
149.根据实施方案1-148中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂是抗LAG3抗体。
150.根据实施方案149所述的方法，其中所述抗LAG3抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区包含分别含有SEQ ID NO:68、69和70所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变(VL)区包含分别含有SEQ ID NO:71、72和73所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。
151.根据实施方案150所述的方法，其中所述VH区包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，并且所述VL区包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列。
152.根据实施方案149-151中任一项所述的方法，其中所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。
153.根据实施方案1-152中任一项所述的方法，所述方法还包括在施用所述剂量的工程化T细胞之前，向所述受试者施用淋巴细胞清除疗法。
154.根据实施方案153所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法在开始施用所述剂量的工程化T细胞之前约7天内完成。
155.根据实施方案153或实施方案154所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法的施用在开始施用所述剂量的工程化T细胞之前约2至7天内完成。
156.根据实施方案153-155中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。
157.根据实施方案153-156中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约200-400mg/m2包含端值、任选地为或约300mg/m2的环磷酰胺，和/或为或约20-40mg/m2、任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天。
158.根据实施方案153-157中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天并行施用为或约300mg/m2的环磷酰胺和为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
159.根据实施方案1-158中任一项所述的方法，其中CD19是人CD19。
160.根据实施方案1-159中任一项所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含：含有抗体FMC63的可变重链区和可变轻链区的scFv、15个或更少的氨基酸并且含有免疫球蛋白铰链区或其修饰形式的间隔子、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域和为4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
161.根据实施方案160所述的方法，其中所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式包含式X1PPX2P，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸(SEQ ID NO:58)。
162.根据实施方案160或实施方案161所述的方法，其中所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式是IgG1铰链或其修饰形式。
163.根据实施方案160或实施方案161所述的方法，其中所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式是IgG4铰链或其修饰形式。
164.根据实施方案160-163中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQID NO:34所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。
165.根据实施方案160-164中任一项所述的方法，其中所述间隔子由以下组成：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。
166.根据实施方案160-165中任一项所述的方法，其中所述间隔子的长度是为或约12个氨基酸。
167.根据实施方案160-166中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含SEQ IDNO:1所示的序列。
168.根据实施方案160-167中任一项所述的方法，其中所述间隔子由SEQ ID NO:1所示的序列组成。
169.根据实施方案160-168中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域。
170.根据实施方案160-169中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域包含SEQID NO:8所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:8展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
171.根据实施方案160-170中任一项所述的方法，其中所述共刺激结构域包含SEQID NO:12所示的序列，或是与SEQ ID NO:12所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
172.根据实施方案160-171中任一项所述的方法，其中所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域包含SEQ ID NO:13、14或15所示的序列，或是与SEQ ID NO:13、14或15所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
173.根据实施方案160-172中任一项所述的方法，其中所述scFv包含SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:55的CDRL2序列和SEQ ID NO:56的CDRL3序列；以及SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ ID NO:54的CDRH3序列。
174.根据实施方案160-172中任一项所述的方法，其中所述scFv包含SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:36的CDRL2序列和SEQ ID NO:37的CDRL3序列；以及SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ ID NO:40的CDRH3序列。
175.根据实施方案160-174中任一项所述的方法，其中所述scFv按N末端至C末端顺序包含含有SEQ ID NO:42所示的序列的VL和含有SEQ ID NO:41所示的序列的VH。
176.根据实施方案160-175中任一项所述的方法，其中所述scFv包含SEQ ID NO:43所示的序列。
177.根据实施方案160-176中任一项所述的方法，其中所述CAR按N末端至C末端顺序含有：为SEQ ID NO:43所示的scFv的细胞外抗原结合结构域、SEQ ID NO:1所示的间隔子、SEQ ID NO:8所示的跨膜结构域、SEQ ID NO:12所示的4-1BB共刺激信号传导结构域、和SEQ ID NO:13所示的CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域。
178.根据实施方案1-177中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含CD4+T CAR表达细胞和CD8+CAR表达T细胞。
179.根据实施方案1-178中任一项所述的方法，工程化T细胞的所述剂量包含在约5x 107个CAR表达T细胞与约1.1x 108个CAR表达T细胞之间，包含每个端值。
180.根据实施方案1-179中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含约5x 107个CAR表达T细胞。
181.根据实施方案1-179中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含约1x 108个CAR表达T细胞。
182.根据实施方案178至181中任一项所述的方法，其中施用所述剂量的工程化T细胞包括施用多种单独的组合物，其中所述多种单独的组合物包括含有所述CD8+CAR表达T细胞的第一组合物和含有所述CD4+CAR表达T细胞的第二组合物。
183.根据实施方案182所述的方法，其中：
将所述第一组合物和所述第二组合物相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时施用，或者其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用在同一天、相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间或相隔约0与2小时之间进行；和/或
所述第一组合物的施用的开始和所述第二组合物的施用的开始在相隔约1分钟与约1小时之间或相隔约5分钟与约30分钟之间进行。
184.根据实施方案182或实施方案183所述的方法，其中将所述第一组合物和所述第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。
185.根据实施方案182-184中任一项所述的方法，其中将所述第一组合物和所述第二组合物相隔少于2小时施用。
186.根据实施方案182-185中任一项所述的方法，其中在包含所述CD4+CAR表达T细胞的所述第二组合物之前施用包含所述CD8+CAR表达T细胞的所述第一组合物。
187.根据实施方案1至186中任一项所述的方法，其中静脉内施用所述剂量的工程化T细胞的细胞。
188.根据实施方案1-187中任一项所述的方法，其中所述T细胞是获自来自所述受试者的样品的原代T细胞，任选地其中所述样品是全血样品、单采术样品或白细胞单采术样品。
189.根据实施方案188所述的方法，其中在向所述受试者施用所述淋巴细胞清除疗法之前，从所述受试者获得所述样品。
190.根据实施方案1-189中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
191.根据实施方案1-190中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
192.根据实施方案1-191中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是B细胞恶性肿瘤。
193.根据实施方案1-192中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
194.根据实施方案1-193中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
195.根据实施方案1-194中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
196.根据实施方案194或实施方案195所述的方法，其中所述NHL选自：非特指型(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(包括转化的惰性NHL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、EB病毒(EBV)阳性DLBCL NOS、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、里希特氏转化、以及具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤)。
197.根据实施方案194-196中任一项所述的方法，其中所述NHL是复发性/难治性(R/R)NHL。
198.根据实施方案194-197中任一项所述的方法，其中所述受试者对于所述CD19表达型癌症的至少两种先前全身治疗线是复发性或难治性的。
199.根据实施方案198所述的方法，其中所述至少两种先前全身治疗线中的至少一种包括CD20靶向剂和蒽环类药物。
200.根据实施方案1-199中任一项所述的方法，其中所述受试者的ECOG体能状态为0或1。
201.根据实施方案1-200中任一项所述的方法，其中所述受试者患有正电子发射断层扫描(PET)阳性疾病。
202.根据实施方案1-201中任一项所述的方法，其中所述受试者具有计算机断层扫描(CT)可测量疾病。
203.根据实施方案1-202中任一项所述的方法，其中所述受试者的多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2，任选地通过CT扫描获得。
204.PD-1抑制剂和LAG3抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
205.根据实施方案204所述的用途，其中在第2天与第20天之间向所述受试者施用所述药物。
206.PD-1抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中：
(1)向所述受试者施用至少两个剂量的所述药物；
(2)在第2天与第20天之间包含端值向所述受试者施用第一剂量的所述药物；
(3)所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间的所述PD-1抑制剂，包含端值；并且
(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
207.根据实施方案204-206中任一项所述的用途，其中在先前剂量的所述药物之后约两周、约三周或约四周施用所述药物的每个后续剂量。
208.PD-1抑制剂在制造用于治疗CD19表达型癌症的药物中的用途，其中：
(1)向所述受试者施用至少两个剂量的所述药物；
(2)在第2天与第20天之间包含端值向所述受试者施用第一剂量的所述药物；
(3)在先前剂量的所述药物之后约两周、约三周或约四周施用所述药物的每个后续剂量；并且
(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
209.根据实施方案204、205、207和208中任一项所述的用途，其中所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间的所述PD-1抑制剂，包含端值。
210.根据实施方案206-209中任一项所述的用途，其中在施用所述细胞疗法之后向所述受试者施用LAG3抑制剂。
211.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
212.根据实施方案211所述的用于所述用途的组合，其中独立地施用第一剂量的PD-1抑制剂和第一剂量的LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间施用。
213.根据实施方案212所述的用于所述用途的组合，其中在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
214.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
215.根据实施方案211-213中任一项所述的用于所述用途的组合或根据实施方案214所述的用于所述用途的PD-1抑制剂，其中在先前剂量的PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
216.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)在第2天与第20天之间包含端值施用第一剂量的所述PD-1抑制剂；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
217.根据实施方案211-213中任一项所述的用于所述用途的组合或根据实施方案216所述的用于所述用途的PD-1抑制剂，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
218.根据实施方案214-217中任一项所述的用于所述用途的PD-1抑制剂，其中所述方法还包括向所述受试者施用LAG3抑制剂。
VI.实施例
以下实施例被包括在内仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。
实施例1：向患有复发性/难治性非霍奇金淋巴瘤的受试者施用抗CD19CAR表达细 胞
向患有B细胞非霍奇金淋巴瘤的受试者施用含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR T细胞组合物。
具体地，用于施用的自体抗CD19CAR表达治疗性T细胞组合物通过以下方法产生，所述方法包括从来自要治疗的个体受试者的白细胞单采术样品进行基于免疫亲和力(例如，免疫磁性选择)的CD4+和CD8+细胞的富集，所述要治疗的个体受试者包括患有以下疾病的受试者：非特指型弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(NOS；从头的或转化的滤泡性淋巴瘤(tFL))、具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(HGBL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、以及原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)。将分离的CD4+和CD8+T细胞单独激活并用编码抗CD19CAR的病毒载体(例如，慢病毒载体)独立转导，之后以低体积对工程化细胞群进行单独扩增和低温保存。CAR含有源自鼠抗体的抗CD19scFv(源自FMC63的可变区，VL-接头-VH取向)、源自免疫球蛋白的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。病毒载体还含有编码截短的受体的序列，所述序列用作CAR表达的替代标记并且通过T2A核糖体跳跃序列与CAR序列隔开。
在静脉内施用之前解冻低温保存的CD4+和CD8+细胞组合物。通过施用以大约1:1的目标比率施用的经配制CD4+CAR+细胞群和经配制CD8+CAR+群体，将治疗性T细胞剂量作为限定的细胞组合物来施用。
在CAR+T细胞输注之前，受试者接受使用氟达拉滨(flu，30mg/m2/天)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2/天)的淋巴细胞清除化学疗法持续三(3)天。
受试者在淋巴细胞清除之后2-7天接受CAR表达T细胞。向受试者施用如下单剂量或双剂量的CAR表达T细胞(每个单剂量分别经由1:1比率的CD4+CAR表达T细胞与CD8+CAR表达T细胞的单独输注来施用)，并且监测安全性和功效：含有5x 107个总CAR表达T细胞的剂量水平1(DL-1)的单剂量，其中每个剂量的施用相隔大约十四(14)天的DL1的双剂量，或者含有1x 108个总CAR表达T细胞的剂量水平2(DL-2)的单剂量。
所施用组合物的T细胞子集的剂量和数量示于表E1中。
在施用所述剂量的CAR表达T细胞之后，在所治疗的受试者中评估程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)和淋巴细胞激活基因3蛋白(LAG3)两者在T细胞中的表达。
在施用治疗性组合物的受试者中分析由内源性CD3+T细胞进行的淋巴细胞激活基因3(LAG3)蛋白表达。在CAR T细胞治疗后三个月继续展现完全反应(CR)或疾病进展(PD)的受试者中，在所施用的CAR T细胞的扩增峰值(Cmax)时由内源性T细胞(对CAR显示阴性(即CAR-)的CD3+T细胞)进行的LAG3蛋白表达倾向于在治疗后三个月展现PD的受试者中更高，如通过对外周血样品进行流式细胞术所评估的(图1)。
还在施用治疗性组合物的受试者中分析了由所施用的CAR T细胞进行的LAG3基因表达。如图2A所示，观察到由CAR T细胞进行的LAG3基因表达与CAR T细胞的峰值扩增(Cmax)反相关。另外，与具有较短无进展存活期PFS(<90天)的受试者相比，在具有较长无进展存活期(PFS；>180天)的受试者中观察到由内源性T细胞和所施用的CAR T细胞进行的较低LAG3基因表达(p＝0.012；图2B)。
通过FACS将来自患者的PBMC样品分选为CAR+CD3+T细胞和CAR-CD3+T细胞，并通过RNAseq评估这两种细胞群的PD-1基因表达。与在治疗后九个月展现CR的患者相比，在治疗后九个月展现PD的患者中，在CAR T细胞治疗后两个月观察到由内源性T细胞(CD3+CAR-T细胞)进行的PD-1表达更高(图3)。在CAR T细胞治疗后三个月展现CR的受试者中，发现由CART细胞进行的PD-1表达在细胞扩增峰值(Cmax)时降低(p＝0.004；图4A)。对于CD4+CAR+T细胞(p＝0.05；图4B)和CD8+CAR+T细胞(p＝0.03；图4C)观察到相似的结果。
通过对外周血样品进行流式细胞术来评估PD-1蛋白表达。观察到CAR+PD-1+细胞与对CAR T细胞治疗的反应之间的关联随着时间的推移持续存在，如在Cmax、治疗后29天和治疗后60天所评估的，如通过CAR+PD-1+细胞的百分比(图5A)或CAR+细胞上PD-1表达的强度(图5B)所评估的。
总之，结果显示，在施用CAR T细胞的受试者中，包括PD-1和LAG3的耗竭标记在对疗法不响应或不怎么响应的受试者中的所施用的CAR T细胞和内源性T细胞上均上调。这些结果与以下观察结果一致：由内源性T细胞或所施用的CAR T细胞进行的较高LAG3和PD-1表达可能与降低的CAR T扩增和对CAR T细胞疗法的较差反应相关。这些数据支持，添加LAG3阻断和PD-1阻断中的一种或两种与CAR T细胞的施用的组合可以改善对CAR T细胞疗法的反应，如通过阻断抑制性信号并防止T细胞耗竭或使T细胞从耗竭中恢复。
实施例2：用CD19靶向性CAR T细胞、纳武单抗和瑞拉利单抗治疗复发性/难治性非 霍奇金淋巴瘤的方案
向患有复发性/难治性(R/R)侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者施用治疗性CAR T细胞组合物与纳武单抗和瑞拉利单抗的组合疗法，所述治疗性CAR T细胞组合物含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞。
在CAR+T细胞输注之前，从受试者获得用于富集自体CD4+和CD8+T细胞的白细胞单采术样品。在一些情况下，在施用CAR T细胞之前约28天从受试者获得白细胞单采术样品。
具体地，自体抗CD19定向性治疗性T细胞组合物通过以下方法产生，所述方法包括从来自患有复发性/难治性(R/R)侵袭性NHL的成人受试者(例如≥18岁)的白细胞单采术样品进行基于免疫亲和力(例如，免疫磁性选择)的CD4+和CD8+细胞的富集。受试者患有组织学证实的侵袭性B细胞NHL，包括非特指型(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(包括转化的惰性NHL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL 3B)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、EB病毒(EBV)阳性DLBCL NOS、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、里希特氏转化、以及具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤；DHL/THL)。所有受试者均展现东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0或1；正电子发射断层扫描(PET)阳性(例如，多维尔得分为4或5)和计算机断层扫描(CT)可测量疾病(例如，根据卢加诺分类；Cheson等人,(2014)J.Clin.Oncol.32(27)；3059-68)；以及多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2(例如通过CT扫描获得)。具有里希特氏转化的受试者不需要展现多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2。受试者还对所述疾病的至少两种先前全身治疗线(包括CD20靶向剂和蒽环类药物)已经复发或是难治的。
向受试者施用从来自要治疗的个体受试者的白细胞单采术样品富集CD4+和/或CD8+细胞的T细胞组合物。将富集CD4+和/或CD8+T细胞的分离的组合物用抗CD3/抗CD28抗体试剂单独激活并用编码抗CD19CAR的病毒载体(例如，慢病毒载体)单独转导，之后对工程化CD4+和CD8+细胞群中的每一个进行单独扩增和低温保存。CAR含有源自鼠抗体的抗CD19scFv(源自FMC63的可变区，VL-接头-VH取向)、源自免疫球蛋白的连接抗原结合结构域与跨膜结构域的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自人4-1BB的共刺激区和人CD3-ζ细胞内信号传导结构域。病毒载体还含有编码截短的受体的序列，所述序列通过T2A核糖体跳跃序列与CAR序列隔开并且用作CAR表达的替代标记。
在静脉内施用之前将低温保存的细胞组合物分别解冻。向受试者施用1x 108个总CAR表达T细胞的剂量(例如，经由单独输注CD4+CAR表达T细胞和CD8+CAR表达T细胞，以大约1:1的CD4+与CD8+细胞的比率提供)。
受试者接受使用氟达拉滨(Flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法持续3天。在淋巴细胞清除后2-7天(例如淋巴细胞清除后5-7天)，在第1天，受试者接受所述剂量的CAR表达T细胞(例如1x 108个总CAR表达T细胞)。任选地，受试者可以在获得白细胞单采术样品和施用淋巴细胞清除疗法之间接受桥接疗法。
将受试者分配到选自A、B、C、A+1、B+1、C+1、A-1、B-1、C-1、A+2、B+2和C+2的给药群组(图6和表E2)。
基于对LAG3受体占用率和游离可溶性LAG3的分析来设计给药群组。特别地，给药群组被设计为实现外周血和肿瘤LAG3受体占用率的饱和，并且使血液中的游离可溶性LAG3最少。如图7A-图7C所示，发现或预测这些方面可用较高剂量的瑞拉利单抗优化，如每四周一次(Q4W)的960mg瑞拉利单抗。因此，给药组群被设计为达到480mg的纳武单抗和960mg的瑞拉利单抗的剂量。
群组A的受试者在第8、22和36天接受240mg纳武单抗和240mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗。群组B的受试者在第8、22和36天接受240mg纳武单抗和280mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和960mg瑞拉利单抗。群组C的受试者在第8、22和36天接受240mg纳武单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗(不施用瑞拉利单抗)。
群组A+1的受试者在第8天和第36天接受480mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗。群组B+1的受试者在第8天和第36天接受480mg纳武单抗和960mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和960mg瑞拉利单抗。群组C+1的受试者在第8天和第36天接受480mg纳武单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗(不施用瑞拉利单抗)。
群组A-1的受试者在第15、29和43天接受240mg纳武单抗和240mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗。群组B-1的受试者在第15、29和43天接受240mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和960mg瑞拉利单抗。群组C-1的受试者在第15、29和43天接受240mg纳武单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗(不施用瑞拉利单抗)。
群组A+2的受试者在第15天接受480mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和480mg瑞拉利单抗。群组B+2的受试者在第15天接受480mg纳武单抗和960mg瑞拉利单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗和960mg瑞拉利单抗。群组C+2的受试者在第15天接受480mg纳武单抗；并且在第57天和第85天接受480mg纳武单抗(不施用瑞拉利单抗)。
两名受试者被纳入群组C并且仅用纳武单抗治疗，如以下表E2所示。
监测受试者的反应(例如完全反应率；CRR)和剂量限制性毒性(DLT)率。其他终点可以包括健康相关生活质量(HRQoL)；安全性(例如不良事件；AE)；功效，包括无进展存活期(PFS)、总存活期(OS)、总反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)和无事件存活期(EFS)；药代动力学(PK，例如Cmax、Tmax和AUC)；以及药效动力学(PD)，其可以被监测CAR T细胞输注后长达大约24个月或更长时间(例如长达42个月)。可以在CAR T细胞治疗后大约1、3、6、9、12、18和24个月，如通过正电子发射断层扫描(PET)-计算机断层扫描(CT)和/或磁共振成像(MRI)评估反应。
实施例3：用CD19靶向性CAR T细胞、纳武单抗和瑞拉利单抗治疗复发性/难治性非 霍奇金淋巴瘤的替代方案
如在实施例2中所述，向患有复发性/难治性(R/R)侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者施用治疗性CAR T细胞组合物与纳武单抗和瑞拉利单抗的组合疗法，所述治疗性CAR T细胞组合物含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞，不同之处在于将受试者分配到替代给药群组。特别地，将受试者分配到选自A、B、C、D、E、F、A-D15、B-D15、C-D15、D-D15、E-D15和F-D15的给药群组(图8A-图8C和表E3)。
群组A的受试者接受1:2比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率是纳武单抗的给药频率的一半。具体地，在第8、22、36、57、71和85天提供240mg纳武单抗；并且在第8、36和71天提供240mg瑞拉利单抗。
群组A-D15的受试者接受1:2比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率是纳武单抗的给药频率的一半。具体地，在第15、29、43、57、71和85天提供240mg纳武单抗；并且在第15、43和71天提供240mg瑞拉利单抗。
群组B的受试者接受1:1比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第8、22、36、57、71和85天提供240mg纳武单抗；并且在第8、22、36、57、71和85天提供240mg瑞拉利单抗。
群组B-D15的受试者接受1:1比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第15、29、43、57、71和85天提供240mg纳武单抗；并且在第15、29、43、57、71和85天提供240mg瑞拉利单抗。
群组C的受试者接受纳武单抗而不接受瑞拉利单抗。具体地，在第8、22和36天提供240mg纳武单抗；并且在第57天和第85天提供480mg纳武单抗。
群组C-D15的受试者接受纳武单抗而不接受瑞拉利单抗。具体地，在第15、29和43天提供240mg纳武单抗；并且在第57天和第85天提供480mg纳武单抗。
群组D的受试者接受1:2比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第8、22、36、57、71和85天提供240mg纳武单抗；并且在第8、22、36、57、71和85天提供120mg瑞拉利单抗。
群组D-D15的受试者接受1:2比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第15、29、43、57、71和85天提供240mg纳武单抗；并且在第15、29、43、57、71和85天提供120mg瑞拉利单抗。
群组E的受试者接受1:2比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第8、36、64和85天提供480mg纳武单抗；并且在第8、36、64和85天提供240mg瑞拉利单抗。
群组E-D15的受试者接受1:2比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第15、43、64和85天提供480mg纳武单抗；并且在第15、43、64和85天提供240mg瑞拉利单抗。
群组F的受试者接受1:1比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第8、36、64和85天提供480mg纳武单抗；并且在第8、36、64和85天提供480mg瑞拉利单抗。
群组F-D15的受试者接受1:1比率的瑞拉利单抗与纳武单抗，其中瑞拉利单抗的给药频率与纳武单抗相同。具体地，在第15、43、64和85天提供480mg纳武单抗；并且在第15、43、64和85天提供480mg瑞拉利单抗。
a在第57天和第84天，针对群组C和C-D15的剂量加倍至480mg
在CRS或NT≥3级的情况下，必须延迟施用纳武单抗和瑞拉利单抗，直到消退至≤1级缩写：CAR＝嵌合抗原受体；CRS＝细胞因子释放综合征；NT＝神经毒性
监测受试者的反应(例如完全反应率；CRR)和剂量限制性毒性(DLT)率。其他终点可以包括健康相关生活质量(HRQoL)；安全性(例如不良事件；AE)；功效，包括无进展存活期(PFS)、总存活期(OS)、总反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)和无事件存活期(EFS)；药代动力学(PK，例如Cmax、Tmax和AUC)；以及药效动力学(PD)，其可以被监测CAR T细胞输注后长达大约24个月或更长时间(例如长达42个月)。可以在CAR T细胞治疗后大约1、3、6、9、12、18和24个月，如通过正电子发射断层扫描(PET)-计算机断层扫描(CT)和/或磁共振成像(MRI)评估反应。
本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施方案例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不背离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践此类变化，并且此类变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
序列表
<110> 朱诺治疗学股份有限公司
<120> 使用检查点抑制剂疗法和CAR T细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法
<130> 735042024940
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> 63/167,596
<151> 2021-03-29
<160> 75
<170>用于Windows的FastSEQ 4.0版
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 间隔子 (IgG4铰链)
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 间隔子 (IgG4铰链)
<400> 2
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 铰链-CH3 间隔子
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3 间隔子
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> IgD-铰链-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸153-179)
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸114-179)
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸180-220)
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28 (LL至GG)
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 4-1BB (登录号Q07011.1的氨基酸214-255)
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 17
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 18
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 18
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 19
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A
<400> 20
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A
<400> 21
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<220>
<221> 重复
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG重复5次
<400> 22
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro
1 5 10
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 23
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 24
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 25
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 25
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8α信号肽
<400> 26
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 27
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 28
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 29
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 30
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 31
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 32
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 33
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 34
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L1
<400> 35
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 36
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 37
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H1
<400> 38
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H2
<400> 39
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 40
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 41
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 43
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L1
<400> 44
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 45
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 46
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H1
<400> 47
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H2
<400> 48
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 49
Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 50
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 51
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 53
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HC-CDR3
<400> 54
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LC-CDR2
<400> 55
His Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LC-CDR3
<400> 56
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 57
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码scFv的序列
<400> 57
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> Xaa是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(4)
<223> Xaa是半胱氨酸或苏氨酸
<400> 58
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 59
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 59
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 60
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 60
Asn Ser Gly Met His
1 5
<210> 61
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 61
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 62
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 62
Asn Asp Asp Tyr
1
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 63
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 64
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 65
Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr
1 5
<210> 66
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 66
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 67
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 67
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H1
<400> 68
Asp Tyr Tyr Trp Asn
1 5
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H2
<400> 69
Glu Ile Asn His Arg Gly Ser Thr Asn Ser Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 70
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H3
<400> 70
Gly Tyr Ser Asp Tyr Glu Tyr Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L1
<400> 71
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L2
<400> 72
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L3
<400> 73
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 74
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 74
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Arg Gly Ser Thr Asn Ser Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Phe Gly Tyr Ser Asp Tyr Glu Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 75
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 75
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105

Claims (141)

1.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
2.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中独立地施用第一剂量的所述PD-1抑制剂和第一剂量的所述LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间包含端值施用。
4.根据权利要求3所述的方法，其中在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
5.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
6.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
8.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
9.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
10.根据权利要求1-4和7-9中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中在第8天与第15天之间包含端值施用第一剂量的所述PD-1抑制剂。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中在第8天施用第一剂量的所述PD-1抑制剂。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中在第15天施用第一剂量的所述PD-1抑制剂。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中施用所述PD-1抑制剂不超过约三个月。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中在约第80天与约第90天之间施用最终剂量的所述PD-1抑制剂，任选地其中在约第85天施用所述最终剂量的PD-1抑制剂。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约160mg与560mg之间。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量是为或约240mg或为或约480mg。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的至少一个剂量是240mg，并且所述PD-1抑制剂的至少一个剂量是480mg。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中施用至少四个剂量的PD-1抑制剂。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中施用四个剂量、五个剂量或六个剂量的PD-1抑制剂。
21.根据权利要求19或权利要求20所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的PD-1抑制剂。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用所述PD-1抑制剂的每个剂量。
23.根据权利要求19-21中任一项所述的方法，其中在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约三周或约四周施用第四剂量的所述PD-1抑制剂。
24.根据权利要求19-21和23中任一项所述的方法，其中施用五个剂量的所述PD-1抑制剂，并且在第四剂量的所述PD-1抑制剂之后约四周施用第五剂量的所述PD-1抑制剂。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中在第8、22和36天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。
26.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中在第15、29和43天中的每一天施用约240mg的PD-1抑制剂。
27.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中在第8、36、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。
28.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中在第15、43、64和85天中的每一天施用约480mg的PD-1抑制剂。
29.根据权利要求4-28中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用LAG3抑制剂。
30.根据权利要求29所述的方法，其中在第2天与第20天之间包含端值施用第一剂量的所述LAG3抑制剂。
31.根据权利要求1-3和30中任一项所述的方法，其中在第8天与第15天之间包含端值施用第一剂量的所述LAG3抑制剂。
32.根据权利要求1-3、30和31中任一项所述的方法，其中在第8天施用第一剂量的所述LAG3抑制剂。
33.根据权利要求1-3、30和31所述的方法，其中在第15天施用第一剂量的所述LAG3抑制剂。
34.根据权利要求1-3和29-33中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量在约60mg与约540mg之间，包含端值。
35.根据权利要求1-3和29-34中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量在约120mg与约480mg之间。
36.根据权利要求1-3和29-35中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量是约120mg。
37.根据权利要求1-3和29-35中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量是约240mg。
38.根据权利要求1-3和29-35中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的每个剂量是约480mg。
39.根据权利要求1-3和29-38中任一项所述的方法，其中施用至少三个剂量的LAG3抑制剂。
40.根据权利要求1-3和29-39中任一项所述的方法，其中施用三个剂量、四个剂量或六个剂量的LAG3抑制剂。
41.根据权利要求39或权利要求40所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用前三个剂量的LAG3抑制剂。
42.根据权利要求1-3和29-41中任一项所述的方法，其中每两周一次(Q2W)施用所述LAG3抑制剂的每个剂量。
43.根据权利要求39-41中任一项所述的方法，其中在第一剂量的所述LAG3抑制剂之后约四周施用第二剂量的所述LAG3抑制剂。
44.根据权利要求1-3和29-43中任一项所述的方法，其中以相同的频率施用所述PD-1抑制剂的各个剂量和所述LAG3抑制剂的各个剂量。
45.根据权利要求1-3和29-44中任一项所述的方法，其中(i)所述PD-1抑制剂的每个剂量在与所述LAG3抑制剂的剂量的同一天施用；和/或(ii)所述LAG3抑制剂的每个剂量在与所述PD-1抑制剂的剂量的同一天施用。
46.根据权利要求1-3和29-43中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂的各个剂量的施用频率是所述PD-1抑制剂的各个剂量的施用频率的一半。
47.根据权利要求1-3和29-46中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量是所述LAG3抑制剂的剂量的两倍。
48.根据权利要求1-3和29-46中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量与所述LAG3抑制剂的剂量相同。
49.根据权利要求1-3、29-45、47和48中任一项所述的方法，其中将所述PD-1抑制剂和所述LAG3抑制剂配制在单一组合物中，任选地用于静脉内施用。
50.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36和71天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
51.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43和71天施用240mg。
52.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
53.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第815、29、43、57、71和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
54.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第8、22和36天施用；以及
(ii)施用第二量的所述PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
55.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括：
(i)施用第一量的所述PD-1抑制剂，其中所述第一量是240mg并且在第15、29和43天施用；以及
(ii)施用第二量的所述PD-1抑制剂，其中所述第二量是480mg并且在第57天和第85天施用。
56.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、22、36、57、71和85天施用120mg的所述LAG3抑制剂。
57.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用240mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、29、43、57、71和85天施用120mg的所述LAG3抑制剂。
58.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
59.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用240mg的所述LAG3抑制剂。
60.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第8、36、64和85天施用480mg的所述LAG3抑制剂。
61.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的所述PD-1抑制剂；以及
(3)以给药方案向所述受试者施用LAG3抑制剂，所述给药方案包括在第15、43、64和85天施用480mg的所述LAG3抑制剂。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的方法，其中所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区包含分别含有SEQ ID NO:60、61和62所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变(VL)区包含分别含有SEQ ID NO:63、64和65所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述VH区包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列；并且所述VL区包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列。
65.根据权利要求62-64中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
66.根据权利要求1-3和29-65中任一项所述的方法，其中所述LAG3抑制剂是抗LAG3抗体。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述抗LAG3抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变区包含分别含有SEQ ID NO:68、69和70所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链可变(VL)区包含分别含有SEQ ID NO:71、72和73所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述VH区包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列；并且所述VL区包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列。
69.根据权利要求66-68中任一项所述的方法，其中所述抗LAG3抗体是瑞拉利单抗。
70.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，所述方法还包括在施用所述剂量的工程化T细胞之前，向所述受试者施用淋巴细胞清除疗法。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法在开始施用所述剂量的工程化T细胞之前约7天内完成。
72.根据权利要求70或权利要求71所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法的施用在开始施用所述剂量的工程化T细胞之前约2至7天内完成。
73.根据权利要求70-72中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。
74.根据权利要求70-73中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约200-400mg/m2包含端值、任选地为或约300mg/m2的环磷酰胺，和/或为或约20-40mg/m2、任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天。
75.根据权利要求70-74中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天并行施用为或约300mg/m2的环磷酰胺和为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
76.根据权利要求1-75中任一项所述的方法，其中CD19是人CD19。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含：含有抗体FMC63的可变重链区和可变轻链区的scFv、15个或更少的氨基酸并且含有免疫球蛋白铰链区或其修饰形式的间隔子、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域和为4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式包含式X1PPX2P，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸(SEQ ID NO:58)。
79.根据权利要求77或权利要求78所述的方法，其中所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式是IgG1铰链或其修饰形式。
80.根据权利要求77或权利要求78所述的方法，其中所述免疫球蛋白铰链区或其修饰形式是IgG4铰链或其修饰形式。
81.根据权利要求77-80中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含SEQ ID NO:1、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:33或SEQ ID NO:34所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。
82.根据权利要求77-81中任一项所述的方法，其中所述间隔子由以下组成：SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34所示的序列，或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQID NO:34所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的任何前述项的变体。
83.根据权利要求77-82中任一项所述的方法，其中所述间隔子的长度是为或约12个氨基酸。
84.根据权利要求77-83中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含SEQ ID NO:1所示的序列。
85.根据权利要求77-84中任一项所述的方法，其中所述间隔子由SEQ ID NO:1所示的序列组成。
86.根据权利要求77-85中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是CD28的跨膜结构域。
87.根据权利要求77-86中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:8展现至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
88.根据权利要求77-87中任一项所述的方法，其中所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12所示的序列，或是与SEQ ID NO:12所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
89.根据权利要求77-88中任一项所述的方法，其中所述CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域包含SEQ ID NO:13、14或15所示的序列，或是与SEQ ID NO:13、14或15所示的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的其变体。
90.根据权利要求77-89中任一项所述的方法，其中所述scFv包含SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:55的CDRL2序列和SEQ ID NO:56的CDRL3序列；以及SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ ID NO:54的CDRH3序列。
91.根据权利要求77-90中任一项所述的方法，其中所述scFv包含SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:36的CDRL2序列和SEQ ID NO:37的CDRL3序列；以及SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ ID NO:40的CDRH3序列。
92.根据权利要求77-91中任一项所述的方法，其中所述scFv按N末端至C末端顺序包含含有SEQ ID NO:42所示的序列的VL和含有SEQ ID NO:41所示的序列的VH。
93.根据权利要求77-92中任一项所述的方法，其中所述scFv包含SEQ ID NO:43所示的序列。
94.根据权利要求77-93中任一项所述的方法，其中所述CAR按N末端至C末端顺序含有：为SEQ ID NO:43所示的scFv的细胞外抗原结合结构域、SEQ ID NO:1所示的间隔子、SEQ IDNO:8所示的跨膜结构域、SEQ ID NO:12所示的4-1BB共刺激信号传导结构域、和SEQ ID NO:13所示的CD3-ζ(CD3ζ)链的信号传导结构域。
95.根据权利要求1-94中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含CD4+TCAR表达细胞和CD8+CAR表达T细胞。
96.根据权利要求1-95中任一项所述的方法，其中工程化T细胞的所述剂量包含在约5x107个CAR表达T细胞与约1.1x 108个CAR表达T细胞之间，包含每个端值。
97.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含约5x107个CAR表达T细胞。
98.根据权利要求1-97中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含约1x108个CAR表达T细胞。
99.根据权利要求95-98中任一项所述的方法，其中施用所述剂量的工程化T细胞包括施用多种单独的组合物，其中所述多种单独的组合物包括含有所述CD8+CAR表达T细胞的第一组合物和含有所述CD4+CAR表达T细胞的第二组合物。
100.根据权利要求99所述的方法，其中：
将所述第一组合物和所述第二组合物相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时施用，或者其中所述第一组合物的施用和所述第二组合物的施用在同一天、相隔约0与约12小时之间、相隔约0与约6小时之间或相隔约0与2小时之间进行；和/或
所述第一组合物的施用的开始和所述第二组合物的施用的开始在相隔约1分钟与约1小时之间或相隔约5分钟与约30分钟之间进行。
101.根据权利要求99或权利要求100所述的方法，其中将所述第一组合物和所述第二组合物相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟施用。
102.根据权利要求99-101中任一项所述的方法，其中将所述第一组合物和所述第二组合物相隔少于2小时施用。
103.根据权利要求99-102中任一项所述的方法，其中在包含所述CD4+CAR表达T细胞的所述第二组合物之前施用包含所述CD8+CAR表达T细胞的所述第一组合物。
104.根据权利要求1-103中任一项所述的方法，其中静脉内施用所述剂量的工程化T细胞的细胞。
105.根据权利要求1-104中任一项所述的方法，其中所述T细胞是获自来自所述受试者的样品的原代T细胞，任选地其中所述样品是全血样品、单采术样品或白细胞单采术样品。
106.根据权利要求105所述的方法，其中在向所述受试者施用所述淋巴细胞清除疗法之前，从所述受试者获得所述样品。
107.根据权利要求1-106中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
108.根据权利要求1-107中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
109.根据权利要求1-108中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是B细胞恶性肿瘤。
110.根据权利要求1-109中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
111.根据权利要求1-110中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或大B细胞淋巴瘤。
112.根据权利要求1-111中任一项所述的方法，其中所述CD19表达型癌症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
113.根据权利要求111或权利要求112中任一项所述的方法，其中所述NHL选自：非特指型(NOS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(包括转化的惰性NHL)、3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、EB病毒(EBV)阳性DLBCL NOS、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、里希特氏转化、以及具有MYC和BCL2和/或BCL6重排与DLBCL组织学的高分级B细胞淋巴瘤(双/三打击淋巴瘤)。
114.根据权利要求111-113中任一项所述的方法，其中所述NHL是复发性/难治性(R/R)NHL。
115.根据权利要求111-114中任一项所述的方法，其中所述受试者对于所述CD19表达型癌症的至少两种先前全身治疗线是复发性或难治性的。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述至少两种先前全身治疗线中的至少一种包括CD20靶向剂和蒽环类药物。
117.根据权利要求1-116中任一项所述的方法，其中所述受试者的ECOG体能状态为0或1。
118.根据权利要求1-117中任一项所述的方法，其中所述受试者患有正电子发射断层扫描(PET)阳性疾病。
119.根据权利要求1-118中任一项所述的方法，其中所述受试者患有计算机断层扫描(CT)可测量疾病。
120.根据权利要求1-119中任一项所述的方法，其中所述受试者的多达6个指标病变的垂直直径乘积之和(SPD)大于或等于25cm2，任选地通过CT扫描获得。
121.PD-1抑制剂和LAG3抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
122.PD-1抑制剂和LAG3抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。
123.根据权利要求121或权利要求122所述的用途，其中在第2天与第20天之间向所述受试者施用所述药物。
124.PD-1抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中：
(1)向所述受试者施用至少两个剂量的所述药物；
(2)在第2天与第20天之间包含端值向所述受试者施用第一剂量的所述药物；
(3)所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间的所述PD-1抑制剂，包含端值；并且
(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
125.PD-1抑制剂在制造用于治疗患有CD19表达型癌症的受试者的药物中的用途，其中：
(1)向所述受试者施用至少两个剂量的所述药物；
(2)在第2天与第20天之间包含端值向所述受试者施用第一剂量的所述药物；
(3)所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间的所述PD-1抑制剂，包含端值；并且
(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。
126.根据权利要求121-125中任一项所述的用途，其中在先前剂量的所述药物之后约两周、约三周或约四周施用所述药物的每个后续剂量。
127.PD-1抑制剂在制造用于治疗CD19表达型癌症的药物中的用途，其中：
(1)向所述受试者施用至少两个剂量的所述药物；
(2)在第2天与第20天之间包含端值向所述受试者施用第一剂量的所述药物；
(3)在先前剂量的所述药物之后约两周、约三周或约四周施用所述药物的每个后续剂量；并且
(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)。
128.PD-1抑制剂在制造用于治疗CD19表达型癌症的药物中的用途，其中：
(1)向所述受试者施用至少两个剂量的所述药物；
(2)在第2天与第20天之间包含端值向所述受试者施用第一剂量的所述药物；
(3)在先前剂量的所述药物之后约两周、约三周或约四周施用所述药物的每个后续剂量；并且
(4)先前在第1天向所述受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。
129.根据权利要求121-123和126-128中任一项所述的用途，其中所述药物的每个剂量包含在为或约140mg与为或约580mg之间的所述PD-1抑制剂，包含端值。
130.根据权利要求124-129中任一项所述的用途，其中在施用所述细胞疗法之后向所述受试者施用LAG3抑制剂。
131.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
132.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂和LAG3抑制剂的组合，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；
(2)向所述受试者施用PD-1抑制剂；以及
(3)向所述受试者施用LAG3抑制剂。
133.根据权利要求131或权利要求132所述的用于所述用途的组合，其中独立地施用第一剂量的所述PD-1抑制剂和第一剂量的所述LAG3抑制剂，各自在第2天与第20天之间施用。
134.根据权利要求133所述的用于所述用途的组合，其中在同一天施用所述第一剂量的PD-1抑制剂和所述第一剂量的LAG3抑制剂。
135.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
136.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)第一剂量的所述PD-1抑制剂的施用在第2天与第20天之间，包含端值；并且
(ii)所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
137.根据权利要求131-134中任一项所述的用于所述用途的组合或根据权利要求135或权利要求136所述的用于所述用途的PD-1抑制剂，其中在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
138.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，所述嵌合抗原受体结合分化簇19(CD19)；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)在第2天与第20天之间包含端值施用第一剂量的所述PD-1抑制剂；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
139.一种用于在治疗癌症的方法中使用的PD-1抑制剂，所述方法包括：
(1)在第1天向患有CD19表达型癌症的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞的细胞疗法，所述工程化细胞包含表达针对所述癌症的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；以及
(2)以给药方案向所述受试者施用PD-1抑制剂，所述给药方案包括施用至少两个剂量，其中：
(i)在第2天与第20天之间包含端值施用第一剂量的所述PD-1抑制剂；并且
(ii)在先前剂量的所述PD-1抑制剂之后约两周、约三周或约四周施用所述PD-1抑制剂的每个后续剂量。
140.根据权利要求131-134中任一项所述的用于所述用途的组合或根据权利要求138或权利要求139所述的用于所述用途的PD-1抑制剂，其中所述PD-1抑制剂的每个剂量在为或约140mg与为或约580mg之间，包含端值。
141.根据权利要求135-140中任一项所述的用于所述用途的PD-1抑制剂，其中所述方法还包括向所述受试者施用LAG3抑制剂。
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CN117858719A true CN117858719A (zh) 2024-04-09

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Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280036816.2A Pending CN117858719A (zh) 2021-03-29 2022-03-29 使用检查点抑制剂疗法和car t细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法

Country Status (9)

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US (1) US20240181052A1 (zh)
EP (1) EP4313127A1 (zh)
JP (1) JP2024514245A (zh)
KR (1) KR20240005700A (zh)
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AU (1) AU2022246593A1 (zh)
BR (1) BR112023019847A2 (zh)
IL (1) IL307262A (zh)
WO (1) WO2022212400A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024233278A1 (en) * 2023-05-05 2024-11-14 Bio4T2, Llc Combined treatments of car-t cells and checkpoint inhibitors

Family Cites Families (168)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4452773A (en) 1982-04-05 1984-06-05 Canadian Patents And Development Limited Magnetic iron-dextran microspheres
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
EP0452342B1 (en) 1988-12-28 1994-11-30 MILTENYI, Stefan Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
WO1996013593A2 (en) 1994-10-26 1996-05-09 Procept, Inc. Soluble single chain t cell receptors
WO1996018105A1 (en) 1994-12-06 1996-06-13 The President And Fellows Of Harvard College Single chain t-cell receptor
US20020150914A1 (en) 1995-06-30 2002-10-17 Kobenhavns Universitet Recombinant antibodies from a phage display library, directed against a peptide-MHC complex
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
DE19608753C1 (de) 1996-03-06 1997-06-26 Medigene Gmbh Transduktionssystem und seine Verwendung
WO1997034634A1 (en) 1996-03-20 1997-09-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain fv constructs of anti-ganglioside gd2 antibodies
US6123655A (en) 1996-04-24 2000-09-26 Fell; Claude Cell separation system with variable size chamber for the processing of biological fluids
WO1999018129A1 (en) 1997-10-02 1999-04-15 Sunol Molecular Corporation Soluble single-chain t-cell receptor proteins
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
EP1066380B1 (en) 1998-05-19 2001-11-14 Avidex Ltd Soluble t cell receptor
JP2002524081A (ja) 1998-09-04 2002-08-06 スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 前立腺−特異的膜抗原に特異的な融合受容体およびその使用
US6410319B1 (en) 1998-10-20 2002-06-25 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
DE69919029T2 (de) 1998-12-24 2005-09-08 Biosafe S.A. Vorrichtung zur bluttrennung, insbesondere zur konzentrierung von hematopoietischen stammzellen
HU228477B1 (en) 1999-08-23 2013-03-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
US20040191260A1 (en) 2003-03-26 2004-09-30 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof
WO2001094944A2 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof
ATE338124T1 (de) 2000-11-07 2006-09-15 Hope City Cd19-spezifische umgezielte immunzellen
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
CA2457652C (en) 2001-08-31 2012-08-07 Avidex Limited Soluble t cell receptor
US7939059B2 (en) 2001-12-10 2011-05-10 California Institute Of Technology Method for the generation of antigen-specific lymphocytes
US6992176B2 (en) 2002-02-13 2006-01-31 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease
CA2476625A1 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Dyax Corp. Mhc-peptide complex binding ligands
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
DE60334303D1 (de) 2002-07-03 2010-11-04 Tasuku Honjo Immunpotenzierende zusammensetzungen
NZ539225A (en) 2002-10-09 2006-09-29 Avidex Ltd Single chain recombinant T cell receptors
AU2003288675B2 (en) 2002-12-23 2010-07-22 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses therefor
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
WO2005116072A2 (en) 2004-05-27 2005-12-08 Weidanz Jon A Antibodies as t cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
US20090226474A1 (en) 2004-05-27 2009-09-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
US20090304679A1 (en) 2004-05-27 2009-12-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
JP5563194B2 (ja) 2004-06-29 2014-07-30 イムノコア リミテッド 改変ｔ細胞レセプターを発現する細胞
ES2345837T3 (es) 2005-03-23 2010-10-04 Biosafe S.A. Sistema integrado para la recogida, el procesamiento y el trasplante de subgrupos de celulas, incluyendo celulas madre adultas, para medicina regenerativa.
AU2006244885B2 (en) 2005-05-09 2011-03-31 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
JP4663394B2 (ja) 2005-05-11 2011-04-06 ダイセルポリマー株式会社 難めっき性被覆剤及びめっきの前処理方法
KR101888321B1 (ko) 2005-07-01 2018-08-13 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체
SI2856876T1 (en) 2007-03-30 2018-04-30 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred T lymphocytes
WO2008156712A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 N. V. Organon Antibodies to human programmed death receptor pd-1
EP2044949A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Immutep Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response
HUE034888T2 (hu) 2007-12-07 2018-03-28 Miltenyi Biotec Gmbh Sejtfeldolgozási rendszerek és eljárások
US8479118B2 (en) 2007-12-10 2013-07-02 Microsoft Corporation Switching search providers within a browser search box
LT2222861T (lt) 2007-12-11 2018-03-26 The University Of North Carolina At Chapel Hill Retrovirusiniai vektoriai modifikuoti polipurino atkarpa
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
US20120164718A1 (en) 2008-05-06 2012-06-28 Innovative Micro Technology Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device
JP5173594B2 (ja) 2008-05-27 2013-04-03 キヤノン株式会社 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
EA023148B1 (ru) 2008-08-25 2016-04-29 Эмплиммьюн, Инк. Композиции на основе антагонистов pd-1 и их применение
HRP20211788T1 (hr) 2008-08-26 2022-02-18 City Of Hope Postupak i pripravci za poboljšanje anti-tumorskog efektorskog funkcioniranja t stanica
EP4331604B1 (en) 2008-12-09 2025-03-05 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
US20110007023A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Sony Ericsson Mobile Communications Ab Display device, touch screen device comprising the display device, mobile device and method for sensing a force on a display device
WO2011044186A1 (en) 2009-10-06 2011-04-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Human single-chain t cell receptors
WO2011056894A2 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Jensen Michael C TRUNCATED EPIDERIMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR (EGFRt) FOR TRANSDUCED T CELL SELECTION
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
SI3279215T1 (sl) 2009-11-24 2020-07-31 Medimmune Limited Usmerjena vezavna sredstva proti B7-H1
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
AU2012230780B2 (en) 2011-03-23 2016-10-27 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
KR20140033029A (ko) 2011-04-01 2014-03-17 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 에이치엘에이 에이2에 의해 제공된 더블유티1 펩타이드에 특이적인 티 세포 수용체 유사 항체
LT2699264T (lt) 2011-04-20 2018-07-10 Medimmune, Llc Antikūnai ir kitos molekulės, kurios jungiasi prie b7-h1 ir pd-1
US8398282B2 (en) 2011-05-12 2013-03-19 Delphi Technologies, Inc. Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element
WO2013026837A1 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
MX359234B (es) 2011-11-11 2018-09-20 Hutchinson Fred Cancer Res Inmunoterapia de celulas t objetivadas en ciclina a1 para cancer.
ES2808152T3 (es) 2011-11-28 2021-02-25 Merck Patent Gmbh Anticuerpos anti-PD-L1 y usos de los mismos
ES2774160T3 (es) 2012-02-13 2020-07-17 Seattle Childrens Hospital D/B/A Seattle Childrens Res Institute Receptores de antígenos quiméricos biespecíficos y usos terapéuticos de los mismos
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
NZ702108A (en) 2012-05-03 2016-09-30 Hutchinson Fred Cancer Res Enhanced affinity t cell receptors and methods for making the same
EP2850102A1 (en) 2012-05-15 2015-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
KR20220084444A (ko) 2012-05-31 2022-06-21 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 Pd-l1에 결합하는 항원 결합 단백질
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
CA3177394A1 (en) 2012-08-20 2014-02-27 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
EP2903637B1 (en) 2012-10-02 2019-06-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
US9405601B2 (en) 2012-12-20 2016-08-02 Mitsubishi Electric Corporation In-vehicle apparatus and program
LT2970464T (lt) 2013-03-15 2020-08-25 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-lag-3 surišantys baltymai
US9308236B2 (en) 2013-03-15 2016-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic inhibitors of the PD-1/PD-L1 and CD80(B7-1)/PD-L1 protein/protein interactions
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
PT2992017T (pt) 2013-05-02 2021-01-29 Anaptysbio Inc Anticorpos dirigidos contra a morte programada 1 (pd-1)
AU2014268364A1 (en) 2013-05-24 2015-12-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
CA2913977C (en) 2013-05-31 2022-11-29 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
KR102276644B1 (ko) 2013-09-04 2021-07-13 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역조절제로서 유용한 화합물
AU2013400609B9 (en) 2013-09-13 2020-03-05 Beigene Switzerland Gmbh Anti-PD1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
SMT201900332T1 (it) 2013-09-20 2019-07-11 Bristol Myers Squibb Co Combinazione di anticorpi anti-lag-3 e anticorpi anti-pd-1 per il trattamento di tumori
UA119659C2 (uk) 2013-12-12 2019-07-25 Шанхай Хенжуй Фармасьютикал Ко., Лтд. Антитіло до pd-1, його антигензв'язуючий фрагмент та їхнє медичне застосування
RU2729463C2 (ru) 2013-12-20 2020-08-06 Фред Хатчинсон Кансэр Рисёч Сентер Меченые химерные эффекторные молекулы и их рецепторы
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
KR20220147714A (ko) 2014-01-28 2022-11-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 혈액 악성종양을 치료하기 위한 항-lag-3 항체
ME03558B (me) 2014-03-14 2020-07-20 Novartis Ag Molekuli anti-lag-3 antiтela i njihove upotrebe
US9850225B2 (en) 2014-04-14 2017-12-26 Bristol-Myers Squibb Company Compounds useful as immunomodulators
KR102447958B1 (ko) 2014-04-23 2022-09-27 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 치료용 면역 세포 집단의 단리, 배양 및 유전자 조작 방법
SG11201609370QA (en) 2014-05-13 2016-12-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
EP3191113B1 (en) 2014-09-11 2019-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic inhibitors of the pd-1/pd-l1 and cd80 (b7-1)/pd-l1 protein/protein interactions
US9732119B2 (en) 2014-10-10 2017-08-15 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
PT3757206T (pt) 2014-11-05 2024-05-21 Juno Therapeutics Inc Métodos de transdução e processamento de células
US9856292B2 (en) 2014-11-14 2018-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
US9861680B2 (en) 2014-12-18 2018-01-09 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
US9944678B2 (en) 2014-12-19 2018-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
CA3175979A1 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Pd-1 Acquisition Group, Llc Anti-pd-1 antibodies
MA41463A (fr) 2015-02-03 2017-12-12 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre le gène d'activation 3 des lymphocytes (lag-3)
US20160222060A1 (en) 2015-02-04 2016-08-04 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
MA42971A (fr) 2015-03-13 2018-08-15 Cytomx Therapeutics Inc Anticorps anti-pdl1, anticorps anti-pld1 activables, et leurs procédés d'utilisation
US9809625B2 (en) 2015-03-18 2017-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
WO2016197367A1 (en) 2015-06-11 2016-12-15 Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. Novel anti-pd-l1 antibodies
CA2993177A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind lag3
ES2878188T3 (es) 2015-07-29 2021-11-18 Novartis Ag Terapias de combinación que comprenden moléculas de anticuerpos contra LAG-3
TWI762879B (zh) 2015-07-30 2022-05-01 美商宏觀基因股份有限公司 Pd-1結合分子和其使用方法
WO2017020291A1 (en) 2015-08-06 2017-02-09 Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. Novel anti-pd-l1 antibodies
CA2994631A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Novel fusion polypeptide specific for lag-3 and pd-1
WO2017024465A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
SG10201914109VA (en) 2015-08-11 2020-02-27 Wuxi Biologics Cayman Inc Novel anti-pd-1 antibodies
WO2017024515A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Cayman) Inc. Novel anti-pd-1 antibodies
AR105654A1 (es) 2015-08-24 2017-10-25 Lilly Co Eli Anticuerpos pd-l1 (ligando 1 de muerte celular programada)
PE20181322A1 (es) 2015-09-01 2018-08-14 Agenus Inc Anticuerpo anti-pd1 y sus metodos de uso
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
US10745382B2 (en) 2015-10-15 2020-08-18 Bristol-Myers Squibb Company Compounds useful as immunomodulators
WO2017086367A1 (ja) 2015-11-18 2017-05-26 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
KR102194188B1 (ko) 2015-11-18 2020-12-24 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Pd1 및/또는 lag3 결합제
CN106699889A (zh) 2015-11-18 2017-05-24 礼进生物医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其治疗用途
US11649293B2 (en) 2015-11-18 2023-05-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for enhancing humoral immune response
WO2017087901A2 (en) 2015-11-19 2017-05-26 Sutro Biopharma, Inc. Anti-lag3 antibodies, compositions comprising anti-lag3 antibodies and methods of making and using anti-lag3 antibodies
EA201891178A1 (ru) 2015-12-14 2019-01-31 Макродженикс, Инк. Биспецифичные молекулы, обладающие иммунореактивностью в отношении pd-1 и ctla-4, и способы их применения
CN109069570A (zh) 2015-12-16 2018-12-21 默沙东公司 抗lag3抗体和抗原结合片段
WO2017123557A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Armo Biosciences, Inc. Interleukin-10 in production of antigen-specific cd8+ t cells and methods of use of same
CN111491361B (zh) 2016-02-02 2023-10-24 华为技术有限公司 确定发射功率的方法、用户设备和基站
WO2017132827A1 (en) 2016-02-02 2017-08-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
SG10201601719RA (en) 2016-03-04 2017-10-30 Agency Science Tech & Res Anti-LAG-3 Antibodies
US10143746B2 (en) 2016-03-04 2018-12-04 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
US10358463B2 (en) 2016-04-05 2019-07-23 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
MX2018014102A (es) 2016-05-18 2019-04-29 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti pd-1 y anti-lag3 para el tratamiento de cancer.
SMT202100213T1 (it) 2016-06-20 2021-05-07 F Star Delta Ltd Molecole leganti che legano pd-1 e lag-3
CN109311993B (zh) 2016-06-20 2022-12-20 F-星治疗有限公司 Lag-3结合元件
RU2757813C2 (ru) 2016-06-23 2021-10-21 Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд. Антитело против lag-3, его антигенсвязывающий фрагмент и их фармацевтическое применение
BR112019000247A2 (pt) 2016-07-08 2019-04-16 Bristol-Myers Squibb Company derivados de 1,3-di-hidróxi-fenila úteis como imunomoduladores
US20190151365A1 (en) * 2016-07-28 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies of chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors
CA3033904A1 (en) 2016-08-15 2018-02-22 National University Corporation Hokkaido University Anti-lag-3 antibody
US10144706B2 (en) 2016-09-01 2018-12-04 Bristol-Myers Squibb Company Compounds useful as immunomodulators
TWI843168B (zh) 2016-10-11 2024-05-21 美商艾吉納斯公司 抗ｌａｇ－３抗體及其使用方法
SG10201912940WA (en) 2016-10-13 2020-02-27 Symphogen As Anti-lag-3 antibodies and compositions
UY37463A (es) 2016-11-02 2018-05-31 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Proteínas de unión
US10988507B2 (en) 2016-11-07 2021-04-27 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
EP3558970B1 (en) 2016-12-20 2021-09-01 Bristol-Myers Squibb Company Compounds useful as immunomodulators
US11046675B2 (en) 2017-03-27 2021-06-29 Bristol-Myers Squibb Company Substituted isoquionline derivatives as immunomudulators
MA49038B1 (fr) 2017-04-05 2025-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticorps bispécifiques se liant particulièrement à pd1 et lag3
SI3606954T1 (sl) 2017-04-05 2022-10-28 F. Hoffmann - La Roche Ag Protitelesa proti LAG3
SG11201909395TA (en) 2017-04-27 2019-11-28 Tesaro Inc Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
BR112019022873A8 (pt) 2017-05-02 2023-04-11 Merck Sharp & Dohme Formulação, e, vaso ou dispositivo de injeção.
US11339218B2 (en) 2017-05-10 2022-05-24 Zhejiang Shimai Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies against LAG3 and uses thereof
EP3630292A2 (en) 2017-05-24 2020-04-08 Sutro Biopharma, Inc. Pd-1/lag3 bi-specific antibodies, compositions thereof, and methods of making and using the same
WO2018237153A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators acting as antagonists of pd-1
US10844121B2 (en) 2017-07-13 2020-11-24 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd Antibodies binding LAG-3 and uses thereof
CN111163798A (zh) 2017-07-20 2020-05-15 诺华股份有限公司 用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途
EP3692053A1 (en) 2017-10-03 2020-08-12 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
WO2019147662A1 (en) 2018-01-23 2019-08-01 Bristol-Myers Squibb Company 2,8-diacyl-2,8-diazaspiro[5.5]undecane compounds useful as immunomodulators
ES2933601T3 (es) 2018-03-01 2023-02-10 Bristol Myers Squibb Co Compuestos útiles como inmunomoduladores

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