CN117741008A - 一种采用高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法 - Google Patents
一种采用高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，包括采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以磷酸溶液‑有机溶剂为流动相。本发明方法处理步骤简单，专属性好，准确度高，重复性好。
Description
技术领域
本发明涉及医药分析化学领域，涉及一种采用高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法。
背景技术
阿莫奈韦是一种解旋酶-引物酶抑制剂（HPISs），通过抑制疱疹病毒解旋酶-引物酶复合物依赖的ATPase活性来抑制疱疹病毒的DNA复制，用于带状疱疹及复发性单纯疱疹。阿莫奈韦具体结构式如下：
。
阿莫奈韦片（商品名Amenalief）由日本Maruho Co.Ltd研发，于2017年7月在日本批准上市，暂未在其他国家上市。
对阿莫奈韦片中活性成分阿莫奈韦含量的准确测定是保证阿莫奈韦片疗效和质量的关键。目前，中国药典（ChP2020）、美国药典（USP2023）、日本药典（JP18）、欧洲药典（EP11）均未收载阿莫奈韦原料药及制剂，无文献及专利报道阿莫奈韦片含量的分析方法。且阿莫奈韦含有酰胺键，酰胺键烯醇化产生一对能互变的顺反异构体，在高效液相色谱中表现为双峰或船型峰，峰型不佳；另外，本品为片剂，制备供试品溶液时需要使供试品充分崩解、API被充分提取，需要筛选合适的稀释剂及样品处理方式。因此，开发一种处理步骤简单、峰型好、运行时间合适、重现性好、准确度高的阿莫奈韦含量的测定方法具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，该方法运行时间短，峰形佳，重现性好，准确度高，且能降低其对液相色谱的要求，能够简单、快速、准确地检测出阿莫奈韦片中阿莫奈韦的含量，能够保证对阿莫奈韦片的质量控制。
为了实现上述目的，本发明提供如下方案。
本发明提供了一种高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，包括采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以磷酸溶液-有机溶剂为流动相，进行等度洗脱；其中有机溶剂选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的至少两种。
本方法所述流动相为磷酸溶液-乙腈-甲醇，流动相磷酸溶液-乙腈-甲醇的体积比为（50~60）：（30~40）：10，优选体积比为60:30:10或50:40:10。
进一步地，上述本发明的方法，磷酸溶液浓度为0.01%~0.5%，优选为0.2%。
进一步地，上述本发明的方法，柱温为25℃~40℃，优选为25℃。
进一步地，上述本发明的方法，流速为0.7~1.5mL/min，检测波长为210~250nm，进样量为1~10μL。
进一步地，上述本发明的方法，流速为0.8mL/min，检测波长为215nm，进样量为5μL。
进一步的，上述本发明的方法，色谱柱规格为：内径为4.6mm，长度为150mm，填料粒径为3.5μm。优选为Agilent ZORBAX SB-C18。
在一具体实施方案中，上述本发明的方法，具体包括如下步骤：
S1、溶液配制：
样品溶液配制：取阿莫奈韦片，研磨成细粉，取细粉适量置于容量瓶中，加溶剂后振摇并超声，定容，摇匀并过滤，备用；
对照品溶液配制：称取阿莫奈韦对照品，加入溶剂，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.01~0.10mg/mL的对照品溶液；
S2、进样检测：分别取步骤S1的所述样品溶液和对照品溶液进样，采用高效液相色谱法进行色谱分析，按外标法以峰面积计算样品溶液中阿莫奈韦的含量。
上述具体实施方案中，溶液配制中溶剂为40%乙腈水溶液。
本发明采用高效液相色谱法可准确检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦的含量，且样品处理步骤简单，专属性好，检测结果准确度高、重复性好。
附图说明
图1 为实施例1中对照品溶液色谱图；
图2 为实施例2中对照品溶液色谱图；
图3 为实施例3中对照品溶液色谱图；
图4 为实施例4中对照品溶液色谱图；
图5 为实施例5中对照品溶液色谱图；
图6 为实施例6中空白溶液色谱图；
图7 为实施例6中对照品溶液色谱图；
图8 为实施例6中供试品溶液色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明和理解本发明的精神实质，但不以任何方式限制本发明的保护范围。
若如无特别说明，实施例中所使用的试剂均可容易地从商业公司获取。
实施例中，乙腈为色谱纯，甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸为分析纯，高效液相色谱仪为岛津；分析天平为Sartorius，采用的试剂及仪器均可通过常规渠道购买，在此不再赘述。
实施例1
本实施例主要考察流动相比例对峰型的影响：
S1、取阿莫奈韦对照品，加入40%乙腈水溶液，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.06mg/ml的对照品溶液；
S2、设定高效液相色谱法的参数为：以0.2%磷酸-乙腈-甲醇（60:20:20）体系作为流动相，在30min内进行等度洗脱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合色谱柱（推荐AgilentZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm），采用紫外检测器，检测波长215nm，柱温为25℃，流速为1.0ml/min，进样量为5μL。
利用高效液相色谱法检测步骤S1得到的阿莫奈韦对照品，为船型峰，见图1。故需筛选更合适的色谱条件。
实施例 2
本实施例主要考察流动相比例及柱温对峰型的影响：
S1、取阿莫奈韦对照品，加入40%乙腈水溶液，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.06mg/ml的对照品溶液；
S2、设定高效液相色谱法的参数为：以0.2%磷酸-乙腈-甲醇（60:10:30）体系作为流动相，在30min内进行等度洗脱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合色谱柱（推荐AgilentZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm），采用紫外检测器，检测波长215nm，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，进样量为5μL。
利用高效液相色谱法检测步骤S1得到的阿莫奈韦对照品，主峰后有一鼓包，见图2。需继续筛选更合适的色谱条件。
实施例3
本实施例提供了一种以磷酸-乙腈-甲醇体系作为流动相用于测定一种阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，具体包括以下步骤：
S1、取阿莫奈韦对照品，加入40%乙腈水溶液，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.06mg/ml的对照品溶液；
S2、设定高效液相色谱法的参数为：以0.2%磷酸-乙腈-甲醇（60:30:10）体系作为流动相，在30min内进行等度洗脱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合色谱柱（推荐AgilentZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm），采用紫外检测器，检测波长215nm，柱温为25℃，流速为1.3ml/min，进样量为5μL。
利用高效液相色谱法检测步骤S1得到的阿莫奈韦对照品，峰形佳，见图3。
实施例4
本实施例提供了一种以磷酸-乙腈-甲醇体系作为流动相用于测定一种阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，具体包括以下步骤：
S1、取阿莫奈韦对照品，加入40%乙腈水溶液，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.06mg/ml的对照品溶液；
S2、设定高效液相色谱法的参数为：以0.2%磷酸-乙腈-甲醇（50:40:10）体系作为流动相，在30min内进行等度洗脱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合色谱柱（推荐AgilentZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm），采用紫外检测器，检测波长215nm，柱温为25℃，流速为1.0ml/min，进样量为5μL。
利用高效液相色谱法检测步骤S1得到的阿莫奈韦对照品，峰形佳，见图4。
实施例5
本实施例提供了一种以磷酸-乙腈-甲醇体系作为流动相用于测定一种阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，具体包括以下步骤：
S1、取阿莫奈韦对照品，加入40%乙腈水溶液，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.06mg/ml的对照品溶液；
S2、设定高效液相色谱法的参数为：以0.2%磷酸-乙腈-甲醇（60:30:10）体系作为流动相，在30min内进行等度洗脱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合色谱柱（推荐AgilentZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm），采用紫外检测器，检测波长215nm，柱温为40℃，流速为1.3ml/min，进样量为5μL。
利用高效液相色谱法检测步骤S1得到的阿莫奈韦对照品，峰形佳，见图5。
实施例6
本实施例提供了一种以磷酸-乙腈-甲醇体系作为流动相用于测定一种阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，具体包括以下步骤：
S1、取阿莫奈韦对照品，加入40%乙腈水溶液，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.06mg/ml的对照品溶液；
S2、设定高效液相色谱法的参数为：以0.2%磷酸-乙腈-甲醇（60:30:10）体系作为流动相，在30min内进行等度洗脱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合色谱柱（推荐AgilentZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm），采用紫外检测器，检测波长215nm，柱温为40℃，流速为1.3ml/min，进样量为5μL。
S3、取阿莫奈韦片，研磨成细粉，取细粉适量置于容量瓶中，加溶剂后振摇并超声，定容，摇匀并过滤，备用；
利用高效液相色谱法检测步骤S3得到的供试品溶液，获得供试品溶液中阿莫奈韦的峰面积，并计算样品含量。计算结果如表1。
表1含量检测结果
配制不同浓度的对照品溶液进样，并与对照品溶液的浓度进行标准曲线拟合，得到的标准曲线公式为y=46596x+2463，r=0.999，结果表明阿莫奈韦在浓度范围内呈现良好的线性关系；
表2 线性试验结果
本发明提供的前处理步骤简单，专属性好，能准确测定阿莫奈韦的含量。由上表可知，本发明提供的检测方法检测结果准确度高，重复性好。
取空白溶液、对照品溶液及供试品溶液各进样一针，记录色谱图；结果见图6、图7、图8所示。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明，任何在本发明的精神实质的基础上进行简单的变通或修饰，也属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种高效液相色谱法检测阿莫奈韦片中阿莫奈韦含量的方法，包括采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸溶液-有机溶剂为流动相，进行等度洗脱；其中有机溶剂选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的至少两种。
2.根据权利要求1所述的方法，所述流动相为磷酸溶液-乙腈-甲醇。
3.根据权利要求2所述的方法，流动相磷酸溶液-乙腈-甲醇体积比为（50~60）：（30~40）：10，优选体积比为60:30:10或50:40:10。
4.根据权利要求3所述的方法，所述磷酸溶液浓度为0.01%~0.5%，优选为0.2%。
5.根据权利要求1所述的方法，柱温为25℃~40℃，优选为25℃。
6.根据权利要求1所述的方法，流速为0.7~1.5mL/min，检测波长为210~250nm，进样量为1~10μL。
7.根据权利要求6所述的方法，流速为0.8mL/min，检测波长为215nm，进样量为5μL。
8.根据权利要求7所述的采用方法，其特征在于，所述色谱柱规格为：内径为4.6mm，长度为150mm，填料粒径为3.5μm，优选为Agilent ZORBAX SB-C18。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1、溶液配制：
样品溶液配制：取阿莫奈韦片，研磨成细粉，取细粉适量置于容量瓶中，加溶剂后振摇并超声，定容，摇匀并过滤，备用；
对照品溶液配制：称取阿莫奈韦对照品，加入溶剂，稀释定容配制成含阿莫奈韦0.01~0.10mg/mL的对照品溶液；
S2、进样检测：分别取步骤S1的所述样品溶液和对照品溶液进样，采用高效液相色谱法进行色谱分析，按外标法以峰面积计算样品溶液中阿莫奈韦的含量。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，溶液配制中所述溶剂为40%乙腈水溶液。
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