CN117209472A

CN117209472A - Kif18a抑制剂

Info

Publication number: CN117209472A
Application number: CN202310683603.5A
Authority: CN
Inventors: 张学军; 臧杨; 李群; 赵心; 雷四军; 胡文兵; 李莉娥; 杨俊�
Original assignee: Hubei Bio-Pharmaceutical Industrial Technological Institute Inc; Humanwell Healthcare Group Co ltd; Wuhan Humanwell Innovative Drug Research and Development Center Ltd Co
Current assignee: Hubei Bio-Pharmaceutical Industrial Technological Institute Inc; Humanwell Healthcare Group Co ltd; Wuhan Humanwell Innovative Drug Research and Development Center Ltd Co
Priority date: 2022-06-10
Filing date: 2023-06-09
Publication date: 2023-12-12

Abstract

本发明提供了一种式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；该化合物具有较好的KIF18A抑制作用，

Description

KIF18A抑制剂

本申请要求享有于2022年6月10日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202210657626.4，名称为“KIF18A抑制剂”的在先申请以及2022年9月19日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202211139874.6，名称为“KIF18A抑制剂”的在先申请的优先权。所述在先申请的全文通过引用的方式结合于本文中。

技术领域

本发明属于医药领域，具体地，本发明涉及到一种KIF18A抑制剂。

背景技术

KIF18A是一种有丝分裂驱动蛋白，在细胞分裂过程中调节染色体定位，在一部分人类癌症中过表达。具有染色体不稳定性(CIN)特征的TP53突变不稳定非整倍体癌细胞依赖KIF18A运动活性来阻止致死性多极细胞分裂。KIF18A基因属于驱动蛋白-8亚家族并且是一个正端定向马达。KIF18A被认为影响着丝粒微管的正端的动力学以控制正确的染色体定位和纺锤体张力。人KIF18A的耗尽在HeLa宫颈癌细胞中导致更长的纺锤体，在中期增加的染色体振荡(chromosome oscillation)以及有丝分裂纺锤体组装检查点的激活(MI Mayret al，Current Biology[当代生物学]17,488-98,2007)。KIF18A在多种类型的癌症中过表达，包括但不限于结肠癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌和卵巢癌。此外，在癌细胞系中，基因缺失或敲除或KIF18A抑制影响有丝分裂纺锤体装置。特别地，已发现抑制KIF18A来诱导有丝分裂细胞停滞，其可以通过凋亡、有丝分裂灾变或多相驱动致死性或分裂间期中有丝分裂滑脱后的死亡来促进有丝分裂细胞死亡。

目前尚无KIF18A抑制途径治疗包括癌症在内的众多病症的药物上市。因此，开发新的可抑制KIF18A活性的化合物对于疾病的治疗具有积极意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的化合物，其可被用作KIF18A抑制剂。

在本发明的第一方面，提供了式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：

其中，

X⁴为N或-CR⁸；

X⁵为N或-CR⁹；

X⁶为-CR¹⁰；

L为-NR³-C(＝O)-或-C(＝O)-NR³-；且

X⁵为N时，X⁴必须为N；

M不存在，或者选自被R^c所取代的C₁-C₆亚烷基；

R¹选自CN或基团-ZR¹²，其中，Z独立地选自-C_0-6烷基-、-C＝N(OH)-、-C_0-6烷基-S-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-S(＝O)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-SO₂-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹¹-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹¹SO₂-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-SO₂NR¹¹-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹¹SO₂NR¹¹-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-O-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-C(＝O)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-C(＝O)-O-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-(C＝O)NR¹¹-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹¹(C＝O)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-S(＝O)(＝NH)-C_0-6烷基-、-C-((C＝O)-O-R¹¹)₂-、-C_0-6烷基-NR¹¹-S(＝O)(＝NH)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-S(＝O)(＝N⁺(CH₃)₂)-、-NR¹¹SO₂NR¹¹-C(＝O)-O-、-P-、-C_0-6烷基-P(＝O)(R¹¹)-、-C_0-6烷基-P(＝O)₂；或者所述基团-ZR¹²为-N＝S(＝O)-(R¹²)₂，其中两个R¹²对可以可替代地与它们各自附接的硫原子组合以形成含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元或6元单环；

R²为卤素或基团-Y-R¹³，其中Y为-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-S(＝O)(＝NH)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-S-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-S(＝O)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-SO₂-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹³-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹³SO₂-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-SO₂NR¹³-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹³SO₂NR¹³ _-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-O-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-C(＝O)-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-C(＝O)-O-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-(C＝O)NR¹³-C_0-6烷基-、-C_0-6烷基-NR¹³(C＝O)-C_0-6烷基-、-SO₂N(C_1-6烷基-O-C_1-6烷基)-；或者-Y-R¹³为-N＝S(＝O)-(R¹³)₂，其中，两个R¹³对可以可替代地与它们各自附接的硫原子组合以形成含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元或6元单环；

R³选自氢、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-8环烷基、卤代C_3-8环烷基；

R⁴选自氢、CN、卤素、C_1-6烷基；

R⁵选自氢、卤素、CN、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-8环烷基、卤代C_3-8环烷基、-O-C_1-8烷基或-O-R^5a；其中，R^5a为含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环；或者可替代地，R²和R⁵可以与它们各自附接的碳原子组合形成与苯环稠合的饱和的或部分饱和的5元或6元单环；其中所述5元或6元单环含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子，并且进一步地，其中所述5元或6元单环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-NR^aR^a、或氧代；

R⁶、R⁸、R⁹分别独立地选自氢、卤素、CN、C_1-8烷基、卤代C_3-8环烷基、C_1-4卤代烷基或C_3-8环烷基；

R⁷为氢、卤素、CN、C_1-8烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-8环烷基、卤代C_3-8环烷基、-O-C_1-8烷基或R^7a；或者可替代地，R²和R⁷可以与它们各自附接的碳原子组合形成与苯环稠合的饱和的或部分饱和的5元或6元单环；其中所述5元或6元单环含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子，并且进一步地，其中所述5元或6元单环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-NR^aR^a或氧代；

并且，所述R⁴，R⁵和R⁷中至少有一个为CN；

R¹⁰为氢、卤素、CN、羟基、C_1-8烷基、C_3-8环烷基、卤代C_3-8环烷基、C_1-4卤代烷基、-O-R^10a或-O-R^10b；

R¹¹为氢、R^11a或R^11b；

R¹²为氢、卤素、OH、CN、R^12a或R^12b；

R¹³为氢、卤素、CN、R^13a或R^13b；

R^7a、R^10a、R^11a、R^12a和R^13a分别独立地选自由以下组成的组：含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-C(＝O)R^b、-C(＝O)OR^a、-C(＝O)NR^aR^a、-C(＝NR^a)NR^aR^a、-OC(＝O)R^b、-OC(＝O)NR^aR^a、-OC_2-6烷基NR^aR^a、-OC_2-6烷基OR^a、-SR^a、-S(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aR^a、-N(R^a)C(＝O)R^b、-N(R^a)C(＝O)OR^b、-N(R^a)C(＝O)NR^aR^a、-N(R^a)C(＝NR^a)NR^aR^a、-N(R^a)S(＝O)₂R^b、-N(R^a)S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^a C₂-C₆烷基NR^aR^a、-NR^aC_2-6烷基OR^a、-C_1-6烷基NR^aR^a、-C_1-6烷基OR^a、-C_1-6烷基N(R^a)C(＝O)R^b、-C_1-6烷基OC(＝O)R^b、-C_1-6烷基C(＝O)NR^aR^a、-C_1-6烷基C(＝O)OR^a、R¹⁴和氧代；

R^10b、R^11b、R^12b和R^13b分别独立地选自由以下组成的组：被选自由以下组成的组的0、1、2、3、4或5个基团取代的C_1-6烷基：卤素、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-C(＝O)OR^a、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、NH₂、NH(CH₃)、N(CH₃)₂、以及饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元或6元单环；

R¹⁴独立地选自由以下组成的组：含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-C(＝O)R^b、-C(＝O)OR^a、-C(＝O)NR^aR^a、-C(＝NR^a)NR^aR^a、-OC(＝O)R^b、-OC(＝O)NR^aR^a、-OC_2-6烷基NR^aR^a、-OC_2-6烷基OR^a、-SR^a、-S(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aR^a、-N(R^a)C(＝O)R^b、-N(R^a)C(＝O)OR^b、-N(R^a)C(＝O)NR^aR^a、-N(R^a)C(＝NR^a)NR^aR^a、-N(R^a)S(＝O)₂R^b、-N(R^a)S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aC_2-6烷基NR^aR^a、-NR^aC_2-6烷基烷基OR^a、-C_1-6烷基NR^aR^a、-C_1-6烷基OR^a、-C_1-6烷基N(R^a)C(＝O)R^b、-C_1-6烷基OC(＝O)R^b、-C_1-6烷基C(＝O)NR^aR^a、-C_1-6烷基C(＝O)OR^a和氧代；

R^x选自由以下组成的组：氢、

或者R^x为被选自由以下组成的组的0、1、2、3、4或5个基团取代的C_2-8烷基：卤素、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-C(＝O)OR^a、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、NH₂、NH(CH₃)、N(CH₃)₂或R¹⁵ⁿ；

或者R^x为被选自由以下组成的组的0、1、2、3、4或5个基团取代的苯基或不饱和的5元单环：卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、-C(＝O)OR^a、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、NH₂、NH(CH₃)、N(CH₃)₂或R¹⁵ⁿ；其中，所述的5元单环含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子；

R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R^15e、R^15f、R^15g、R^15h、R¹⁵ⁱ、R^15j、R^15k、R^15l、R^15m中的每一个各自独立地为氢、卤素、R^15o或R^15p；

或可替代地，R^15a和R^15b对、R^15c和R^15d对、R^15e和R^15f对、R^15g和R^15h对、R¹⁵ⁱ和R^15j对、以及R^15k和R^15l对中的每一个可以独立地与它们各自附接的碳原子组合以形成螺接到R^x环的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元、6元单环；其中所述3元、4元、5元、6元单环含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子，并且进一步地，其中所述3元、4元、5元、6元单环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-NR^aR^a或氧代；

或者又可替代地，R^15a和R^15b对、R^15c和R^15d对、R^15e和R^15f对、R^15g和R^15h对、R¹⁵ⁱ和R^15j对、以及R^15k和R^15l对中的每一个可以独立地组合形成双键；

R¹⁵ⁿ、R^15o分别独立地选自由以下组成的组：含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2、3或4个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-C(＝O)R^b、-C(＝O)OR^a、-C(＝O)NR^aR^a、-C(＝NR^a)NR^aR^a、-OC(＝O)R^b、-OC(＝O)NR^aR^a、-OC_2-6烷基NR^aR^a、-OC_2-6烷基OR^a、-SR^a、-S(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aR^a、-N(R^a)C(＝O)R^b、-N(R^a)C(＝O)OR^b、-N(R^a)C(＝O)NR^aR^a、-N(R^a)C(＝NR^a)NR^aR^a、-N(R^a)S(＝O)₂R^b、-N(R^a)S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^a C₂-C₆烷基NR^aR^a、-NR^aC_2-6烷基OR^a、-C_1-6烷基NR^aR^a、-C_1-6烷基OR^a、-C_1-6烷基N(R^a)C(＝O)R^b、-C_1-6烷基OC(＝O)R^b、-C_1-6烷基C(＝O)NR^aR^a、-C_1-6烷基C(＝O)OR^a和氧代；

R^15p为被选自由以下组成的组的0、1、2、3、4或5个基团取代的C_1-8烷基：卤素、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-C(＝O)OR^a、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、NH₂、NH(CH₃)、N(CH₃)₂；

R^a独立地选自氢或R^b；

R^b独立地选自C_1-6烷基、苯基或苄基，其中所述C_1-6烷基被选自以下的0、1、2或3个取代基取代：卤素、羟基、-OC_1-6烷基、-NH₂、-NHC_1-6烷基、-OC(＝O)C_1-6烷基或-N(C_1-6烷基)C_1-6烷基；并且所述苯基或苄基被选自以下的0、1、2或3个取代基取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-3卤代烷基、-OH、-OC_1-6烷基、-NH₂、-NHC_1-6烷基、-OC(＝O)C_1-6烷基或-N(C_1-6烷基)C_1-6烷基；

R^c表示不存在，或独立地选自卤素、羟基、氨基、氰基、羰基、氧代、羧基、C_2-6烯基、C_1-6烷基、C_1-6氘代烷基、C_2-6炔基、C_1-4卤代烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-4烷氧基、-COO-C_1-6烷基、-C(O)NR^c1R^c2；其中，所述R^c1和R^c2各自独立地为氢、C_1-6烷基。

在本发明的第二方面，提供了式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：

其中，

X⁴为N或-CR⁸；

X⁵为N或-CR⁹；

X⁶为-CR¹⁰；

L为-NR³-C(＝O)-或-C(＝O)-NR³-；且

X⁵为N时，X⁴必须为N；

M不存在，或者选自被R^c所取代的C₁-C₆亚烷基；

R⁴选自CN；

R⁵选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-8环烷基、卤代C_3-8环烷基、-O-C_1-8烷基或-O-R^5a；其中，R^5a为含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环；或者可替代地，R²和R⁵可以与它们各自附接的碳原子组合形成与苯环稠合的饱和的或部分饱和的5元或6元单环；其中所述5元或6元单环含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子，并且进一步地，其中所述5元或6元单环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-NR^aR^a、或氧代；

R¹¹为氢、R^11a或R^11b；

R¹²为氢、卤素、OH、CN、R^12a或R^12b；

R¹³为氢、卤素、CN、R^13a或R^13b；

R^10b、R^11b、R^12b和R^13b分别独立地选自由以下组成的组：被选自由以下组成的组的0、1、2、3、4或5个基团取代的C_1-6烷基：卤素、CH₂F、CHF₂、CF₃、-C(＝O)OR^a、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、NH₂、NH(CH₃)、N(CH₃)₂、以及饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元或6元单环；

R^x选自由以下组成的组：氢、

R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R^15e、R^15f、R^15g、R^15h、R¹⁵ⁱ、R^15j、R^15k、R^15l、R^15m中的每一个为氢、卤素、R^15o或R^15p；

R^a独立地选自氢或R^b；

在本发明中，所述的如式I所示的杂环类化合物中某些取代基的定义可如下所述，未提及的取代基的定义均如上任一方案所述。

在本发明一优选实施方案中，所述R^15c、R^15d、R^15e、R^15f、R^15g、R^15h、R¹⁵ⁱ和R^15j中的每一个为H、卤素、C_1-6烷基或C_1-4卤代烷基；并且R^15a和R^15b对中的每一个与它们各自附接的碳原子组合形成螺接到R^x环的饱和3元、4元或5元单环；其中所述环含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子。

在本发明一优选实施方案中，所述R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j中的每一个各自独立地为H、甲基或乙基；并且R^15a和R^15b对中的每一个与它们各自附接的碳原子组合形成螺接到R^x环的环丙基、环丁基或环戊基。

在本发明一优选实施方案中，所述基团选自较佳地，所述基团选自

在本发明一优选实施方案中，所述基团选自

本领域技术人员可以理解，根据本领域中使用的惯例，在本申请的结构式中，用于描绘化学键，所述化学键为部分或取代基与核心结构或骨架结构相连的点。

在本发明一优选实施方案中，所述R³为氢或甲基。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：

其中，X⁴、X⁵和X⁶的定义如本发明第一方面中所述；R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j的定义如本发明第一方面中所述；M和L的定义如本发明第一方面中所述。

其中，X⁴、X⁵和X⁶的定义如本发明第二方面中所述；R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第二方面中所述；R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j的定义如本发明第二方面中所述；M和L的定义如本发明第二方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，X⁴、X⁵和X⁶的定义如本发明第一方面中所述；R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，X⁴、X⁵和X⁶的定义如本发明第二方面中所述；R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第二方面中所述；R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j的定义如本发明第二方面中所述；M的定义如本发明第二方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，X⁴、X⁵和X⁶的定义如本发明第一方面中所述；R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，X⁴、X⁵和X⁶的定义如本发明第一方面中所述；R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，R¹、R²、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，R¹、R²、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第二方面中所述；M的定义如本发明第二方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，R¹、R²、R⁵、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶的定义如本发明第二方面中所述；M的定义如本发明第二方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自如下结构：其中，R¹、R²、R⁴、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。

其中，R¹、R²、R⁴、R⁶和R⁷的定义如本发明第二方面中所述；M的定义如本发明第二方面中所述。

其中，R¹、R²、R⁴、R⁶和R⁷的定义如本发明第一方面中所述；M的定义如本发明第一方面中所述。

在本发明一优选实施方案中，所述R²选自：F、Cl、Br或基团-Y-R¹³，其中Y为键、-NH-、-NH-(CH₂)_0-4-、-O-(CH₂)_0-4-、-S-、-S＝O-、-S(＝O)_2-、-S(＝O)(＝NH)-、-SO₂NH-、-C(＝O)-；并且R¹³为含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2或3个相同或不同的基团取代：F、Cl、Br、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OH、-OC_1-4卤代烷基、CN、R¹⁴和氧代；或R¹³为被选自下列0、1、2、3、4或5个相同或不同的取代基取代的C_1-6烷基，所述取代基为F、Cl、Br、-OH、-OC_1-4卤代烷基或CN；其中，所述R¹⁴的定义如本发明第一方面中所述；

较佳地，Y为键，R¹³为含有0或1个N原子和0或1个O原子的饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环；其被选自以下的0、1、2或3个相同或不同的基团取代：F、Cl、Br、-C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、-OH、CN、-C_1-3烷基-OH；

较佳地为F、Cl、Br、甲基、-OH、-OCH₃、CN、-CH₂OH、三氟甲基；或者，

Y为-NH-、-NH-(CH₂)_0-4-、-O-(CH₂)_0-4-或-SO₂NH-；R¹³为含有0或1个N原子和0或1个O原子的饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环；其被选自以下的0、1、2或3个相同或不同的基团取代：氟、甲基、三氟甲基、-CN、-OH、CH₂OH；

或者，Y为键、-NH-、-NH-(CH₂)_0-4-、-O-(CH₂)_0-4-或-SO₂NH-；R¹³为被选自下列0、1、2、3、4或5个相同或不同的取代基取代的C_1-6烷基，所述取代基为-OH、甲基、F。

在本发明一优选实施方案中，所述R²选自：

在本发明一优选实施方案中，所述M不存在或者选自-NH-、-CH₂-、

在本发明一优选实施方案中，所述Z选自键、-NH-、-NHSO₂-、-SO₂NH-、-S(＝O)(＝

NH)-、-S-、-S(＝O)-、-SO₂-、-O-、-P-、-P(＝O)CH₃-、-P(＝O)₂、-(C＝O)-、-(C＝O)NH-或-NH(C＝O)-。

在本发明一优选实施方案中，所述R¹²选自(a)氢；(b)被选自F、Cl、Br、-OH、-OCH₃或环丙基的0、1、2或3个基团取代的C_1-6烷基；或(c)含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环，其被选自以下的0、1、2或3个基团取代：F、Cl、Br、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-6烷基OH、-OH、-OCH₃、-NH₂或氧代。

在本发明一优选实施方案中，所述R¹²选自(a)氢；(b)被-OH、-OCH₃取代的C_1-6烷基；或(c)环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、1,3,4-氧杂噻嗪烷基、被-OH取代的C_3-8环烷基。

在本发明一优选实施方案中，所述R¹选自

在本发明一优选实施方案中，所述R⁴选自氢、甲基、F或CN。

在本发明一优选实施方案中，所述R⁵选自氢、甲基、F或CN。

在本发明一优选实施方案中，所述R⁶选自氢。

在本发明一优选实施方案中，所述R⁷选自氢、F、Cl、Br、CN、甲基、甲氧基、环丙基；或者R²和R⁷与它们各自附接的碳原子组合形成

在本发明一优选实施方案中，所述R⁸选自氢、F、Cl、Br、环丙基、-(C＝O)CH₃或CF₃。

在本发明一优选实施方案中，所述R⁹选自氢或F。

在本发明一优选实施方案中，所述R¹⁰选自氢、F或甲基。

在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的杂环类化合物选自下列任一化合物：

本发明第三方面，提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括：如本发明第一方面中所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和药学上可接受的载体。

本发明第四方面，提供了如本发明第一方面中所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的用途，或本发明第三方面所述的药物组合物的用途，所述用途包括：抑制KIF18A；和/或，预防和/或治疗KIF18A相关的疾病；和/或，制备用于抑制KIF18A，和/或预防和/或治疗KIF18A相关的疾病的药物、药物组合物或制剂。

较佳的，所述KIF18A相关的疾病包括：癌症、银屑病、特应性皮炎、自身免疫性疾病或炎症性肠病的增生性障碍。

较佳地，所述癌症选自间皮瘤、神经母细胞瘤、直肠癌、结肠癌、熟悉的腺瘤性息肉病和遗传性非息肉性结直肠癌、食道癌、唇癌、喉癌、下咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌、肾癌、肾实质癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、睾丸癌、乳腺癌、泌尿癌、黑色素瘤、脑瘤、淋巴瘤、头颈癌、急性淋巴白血病、慢性淋巴白血病、急性髓样白血病、慢性粒细胞白血病、肝细胞癌、胆囊癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底肉瘤、畸胎瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤因肉瘤和浆细胞瘤。

较佳地，所述自身免疫性疾病选自类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病、皮肌炎、多发性肌炎、莱特尔综合征、自身免疫性淋巴增生综合征、多发性硬化症、重症肌无力和脑脊髓炎。

较佳地，所述炎症性肠病选自溃疡性结肠炎或克罗恩病。

在本发明第五方面，提供一种抑制KIF18A，或预防和/或治疗KIF18A相关的疾病的方法，包括步骤：给需要的对象施用本发明第一方面所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

术语和定义

除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。

除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。

应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明主题作任何限制。在本申请中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。

可在参考文献(包括Carey and Sundberg"ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY4THED."Vols.A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/VIS光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。

当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH₂O等同于OCH₂。如本文所用，表示基团的连接位点。如本文所用，“R₁”、“R1”和“R¹”的含义相同，可相互替换。对于R₂等其它其他符号，类似定义的含义相同。

本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。

除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。

本申请说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被理解为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“1～6的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5和6的每一个整数。当该数值范围被理解为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“1～10的数”应当被理解为不仅记载了1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。

在本申请中，饱和的、部分饱和的或不饱和的”包括被氢饱和的取代基、完全被氢不饱和的取代基和部分被氢饱和的取代基。

在本申请中，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘；优选氟或氯。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语"氰基"表示-CN。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语"氨基"表示-NH₂。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”意指仅由碳原子和氢原子组成、具有例如1至6个碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基和己基。烷基可以是未取代的或被一个或多个合适的取代基取代。烷基也可以是富含碳和/或氢的同位素(即氘或氚)的天然丰度烷基的同位素异构体。

术语“C_α-β烷基”是指在支链或线性关系或这三者的任意组合中包含最小α个和最大β个碳原子的烷基，其中α和β表示整数，亦可用“C_α-C_β烷基”的形式表示。在该部分描述的烷基还可以含有一个或两个双键或三键。C₀烷基的指定表示直连键。C_1-6烷基的实例包括但不限于以下：

单独或以组合的“苯并基团”是指二价基团C₄H₄＝，其中一个表示是-CH＝CH-CH＝CH-，当邻位附接到另一环时形成苯状环，例如四氢萘、吲哚等。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“C_α-β卤代烷基”是指如上所述的烷基，其中，任意数量(至少一个)的附接到烷基链的氢原子被氟、氯、溴或碘替代。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“环烷基”是指一种环状烷基。术语“m-n元环烷基”或者“C_m-C_n环烷基”应理解为表示具有m至n个原子的饱和、不饱和或部分饱和的碳环。例如，“3-15元环烷基”或者“C₃-C₁₅环烷基”是指含有3至15，3至9，3至6或3至5个碳原子的环状烷基，它可能包含1至4个环。“3-10元环烷基”则含有3-10个碳原子。包括单环、二环、三环、螺环或桥环。未取代的环烷基的实例包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基和金刚烷基，或者是双环烃基如十氢化萘环。环烷基可以被一个或多个取代基取代。在一些实施方案中，环烷基可以是与芳基或杂芳环基稠合的环烷基。术语“环烷基”可以和术语“碳环基”交换使用。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂环烷基”是指其中一个或多个(在一些实施方案中为1至3个)碳原子被杂原子取代的环烷基，所述杂原子例如但不限于N、O、S和P。术语“m-n元杂环烷基”或者“C_m-C_n杂环烷基”应理解为表示具有m至n个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环，其中杂环原子选自N、O、S、P，优选地选自N、O或S。例如，术语“4-8元杂环烷基”或者“C₄-C₈杂环烷基”应理解为表示具有4至8个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环，其中1、2、3、或4个环原子选自N、O、S、P，优选地选自N、O或S。“4-10元杂环基”则是表示具有4至10个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环。在一些实施方案中，杂环烷基可以是与芳环基或杂芳环基稠合的杂环烷基。当诸如4-8元或4-10元的前缀用于表示杂环烷基时，碳的数目也意味着包括杂原子。包括单环、二环、三环、螺环或桥环。杂环烷基的示例为：吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、四氢吡啶基、四氢吡咯基、氮杂环丁烷基、噻唑烷基、唑烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基等。术语“杂环烷基”可以和术语“杂烷环”交换使用。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷氧基”是指基团-O-R^Q，其中，R^Q为如上文所定义的“烷基”。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“氧代”是指亚甲基上的两个氢被氧取代，也即亚甲基被羰基替代，表示＝O。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“硫代”是指亚甲基上的两个氢被硫取代，表示＝S。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“芳基”是指具有6到20个碳原子的单环或多环碳环，其中至少一个环是芳香环。当其中一个环是非芳香环时，该基团可通过芳香环连接，也可通过非芳香环连接。芳基的实例包括但不限于：苯基、萘基、四氢萘基、2,3-二氢化茚基、联苯基、菲基、蒽基和苊基。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂芳环”是指单环或多环碳环，其中至少一个环原子为独立地选自氧、硫和氮的杂原子，其余的环原子为C，其中至少一个环是芳香环。该基团可为碳基团或杂原子基团(也即其可为C-连接的或N-连接的，只要其是可能的即可)。当其中一个环是非芳香环时，该基团可通过芳香环连接，也可通过非芳香环连接。杂芳基的实例包括但不限于：咪唑基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、N-甲基吡咯基和四氢喹啉。术语“杂芳环”可以和术语“杂芳香环”、“杂芳基”或“杂芳环基”交换使用。

在单独或作为其他取代基一部分时，术语“双环”指具有两个连接环的基团。双环可以为碳环(所有环原子为碳原子)或杂环(除了碳原子之外，环原子包括例如1、2或3个杂原子，例如N、O或S)。这两个环都可以是脂肪族的(例如萘烷和降冰片烷)，或可以是芳香族(例如萘)，或脂肪族和芳香族的组合(例如四氢化萘)。

双环包括(a)螺环化合物，其中两个环只共享一个单原子(螺原子，其通常为季碳)。螺环化合物的实例包括但不限于：

也包含单螺环烷基与杂环烷基共用螺原子的螺环烷基，非限制性实例包括：

(b)稠合的双环化合物，其中两个环共享两个相邻原子。换句话说，环共享一个共价键，即桥头原子直接连接(例如α-崖柏烯和萘烷)。稠合的双环的实例包括但不限于：

和(c)桥联的双环化合物，其中两个环共享三个或更多个原子，并通过包含至少一个原子的桥将两个桥头原子隔开。例如，降冰片烷，也称为双环[2.2.1]庚烷，可以被认为是一对环戊烷环，每个环共享它们的五个碳原子中的三个。桥联的双环的实例包括但不限于：

在单独或作为其他取代基一部分时，NR^aR^a基团可以以的形式存在，或者也可以包括其中两个R^a基团一起形成环，该环任选地包含N、O或S原子，并且也可以包括以下基团，例如：

在单独或作为其他取代基一部分时，基团N(C_α-β烷基)C_α-β烷基(其中α和β如上文定义)包括其中两个C_α-β烷基基团一起形成环(任选地包含N、O或S原子)的取代基，并且包括以下基团，例如：

本文提供的化合物，包括可用于制备本文提供的化合物的中间体，其含有反应性官能团(例如但不限于羧基，羟基和氨基部分)，还包括其保护的衍生物。“受保护的衍生物”是其中一个或多个反应性位点被一个或多个保护基团(也称为保护基团)封闭的那些化合物。合适的羧基部分保护基包括苄基，叔丁基等，以及同位素等。合适的氨基和酰氨基保护基包括乙酰基，三氟乙酰基，叔丁氧基羰基，苄氧基羰基等。合适的羟基保护基包括苄基等。其他合适的保护基团是本领域普通技术人员所熟知的。

在本申请中，“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。

在本申请中，术语“盐”或“药学上可接受的盐”，包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。

术语“胺盐”是指用酸中和烷基伯胺、仲胺或叔胺得到的产物。所述酸包括本申请中所述的无机酸或有机酸。

术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。

依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀D和L或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或L表示化合物是左旋的。前缀为(+)或D的化合物是右旋的。

当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(R)和(S)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。

术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。

术语“溶剂化物”指本发明化合物或其盐包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂，当溶剂为水时，则为水合物。

术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。

在本申请中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

在本申请中，“药学上可接受的载体”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。

术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。

术语“治疗”指治疗性疗法。涉及具体病症时，治疗指：(1)缓解疾病或者病症的一种或多种生物学表现，(2)干扰(a)导致或引起病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现，(3)改善与病症相关的一种或多种症状、影响或副作用，或者与病症或其治疗相关的一种或多种症状、影响或副作用，或(4)减缓病症或者病症的一种或多种生物学表现发展。

术语“预防”是指获得或发生疾病或障碍的风险降低。

术语“患者”是指根据本发明的实施例，即将或已经接受了该化合物或组合物给药的任何动物，哺乳动物为优。术语“哺乳动物”包括任何哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于牛、马、羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、猴、人等，以人类为优。

术语“治疗有效量”是指在给予患者时，足以有效治疗本文所述的疾病或病症的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物、病症及其严重度、以及欲治疗患者的年龄而变化，可由本领域技术人员根据需要进行调整。

各步骤的反应，反应温度可因溶剂、起始原料、试剂等适宜选择，反应时间也可因反应温度、溶剂、起始原料、试剂等适宜选择。各步骤反应结束后，目标化合物可按常用方法自反应体系中进行分离、提纯等步骤，如过滤、萃取、重结晶、洗涤、硅胶柱层析等方法。在不影响下一步反应的情况下，目标化合物也可不经过分离、纯化直接进入下一步反应。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

有益效果

本发明人经过广泛而深入地研究，意外地开发了一种化合物或其药学上可接受的盐及制备方法和用途。

本发明提供了式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，所述式I化合物对KIF18A具有显著的抑制作用，具备较高的安全性和成药性质。

本发明提供了制备I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的方法及中间体，所述方法操作简单、收率高、纯度高，可用于医药工业化生产。

具体实施方式

以下结合具体实施例，进一步说明本发明。需理解，以下的描述仅为本发明的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本发明保护范围的限制。在充分理解本发明的基础上，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本发明的技术方案作出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本发明的保护范围之中的。

本申请具有如下定义：

符号或单位：

IC₅₀：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度

M：mol/L，例如正丁基锂(14.56mL，29.1mmol，2.5M的正己烷溶液)表示摩尔浓度为2.5mol/L的正丁基锂的正己烷溶液

N：当量浓度，例如2N盐酸表示2mol/L盐酸溶液

试剂：

DMSO：二甲基亚砜

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

CuI：碘化亚铜

EtOH：乙醇

DCM：二氯甲烷

HATU：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯

TBAF：四丁基氟化铵

PE：石油醚

EA：乙酸乙酯

中间体A1：4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸的制备

中间体A1的合成路线如下：

在室温下，向2-氟-4-碘苯甲酸(A1-1)(8.0g，30.1mmol)的二甲基亚砜(160mL)溶液中加入6-氮杂螺[2.5]辛烷盐酸盐(5.77g，39.1mmol)和碳酸钾(12.5g，90.2mmol)，反应在氮气保护下于140℃反应18h。反应完成后，在室温下向反应液中加入水(800mL)稀释，然后用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，水相用稀盐酸(2M)调节至pH＝6，有固体析出，过滤，滤饼干燥得到4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(中间体A1)(9.0g，收率83.8％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.06(s,1H),7.76-7.69(m,2H),3.11-3.08(t,4H),1.54(s,4H),0.41(s,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):358.0[M+H]⁺。

中间体A2：4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸甲酯的制备

中间体A2的合成路线如下：

第一步：2-氟-4-碘代苯甲酸甲酯(A2-2)的合成

将2-氟-4-碘苯甲酸(A2-1)(10g，37.6mmol)加至甲醇(100mL)中，室温加入氯化亚砜(8.94g，75mmol)，加热至60℃反应4h。LCMS显示原料反应完，浓缩干，加入乙酸乙酯(100mL)溶解，饱和碳酸钠水溶液调节pH至碱性，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到2-氟-4-碘代苯甲酸甲酯(A2-2)粗品，直接用于下一步反应。

第二步：4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸甲酯(A2)的合成

将上一步2-氟-4-碘代苯甲酸甲酯(A2-2)粗品(0.9g，2.188mmol)加至100mL二甲基亚砜中，再加入6-氮杂螺环[2.5]辛烷盐酸盐(11.1g，75mmol)，碳酸钾(26g，188mmol)，加热至140℃反应8h。LCMS显示原料反应完，反应液倒入水(300mL)中，乙酸乙酯萃取(300mL×2)，有机相用饱和氯化钠洗涤三次(300mL×3)，浓缩有机相，残留物过柱子(PE:EA(V/V)＝10:1)得到4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸甲酯(A2)(10.5g，产率75％)。

LC-MS,M/Z(ESI):372.0[M+H]⁺。

实施例1：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(化合物1)的制备

目标化合物1的合成路线如下：

第一步：3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基苯甲腈(1-2)的合成

将3-氟-5-硝基苯甲腈(2g，0.01mol)，4,4-二氟哌啶(2.2g，0.02mol)和碳酸钾(3.3g，0.03mol)加到N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，80℃下搅拌2h，加入水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝50:1)得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基苯甲腈(1.8g，产率50％)。

第二步：3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯甲腈(1-3)的合成

将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基苯甲腈(1.5g，5.62mmol)，铁粉(1g，16.2mmol)，饱和的氯化铵溶液(5mL)加到乙醇(15mL)中，80℃下反应2h。加入水(60mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯甲腈(800mg，产率50％)。

LC-MS,M/Z(ESI):238.1[M+H]⁺。

第三步：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(1-4)的合成

将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(285mg，0.8mmol)加到二氯甲烷(10mL)中，再向其中滴加二氯亚砜(2.85mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.05mL)，室温下搅拌2h，然后浓缩干得到粗品，粗品用二氯甲烷(10mL)溶解，再加入3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯甲腈(200mg，0.8mmol)和二异丙胺(2mL)，室温反应14h。加入水(30mL)稀释，用二氯甲烷(10mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(150mg，产率51％)。

LC-MS,M/Z(ESI):577.1[M+H]⁺。

第四步：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(化合物1)的合成

将N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(150mg，0.26mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，再加入2-羟基乙烷-1-磺酰胺(72mg，0.58mmol)，甲基甘氨酸(10mg，0.10mmol)，碘化亚铜(11mg，0.05mmol)，碳酸钾(160mg，1.16mmol)，加热至120℃反应1h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(化合物1)(50mg，产率30％)。

LC-MS,M/Z(ESI):574.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),10.09(s,1H),7.77-7.75(m,1H),7.70(s,1H),7.50(m,1H),7.13(s,1H),7.02(m,1H),6.99(m,1H),3.77(m,2H),3.46(m,4H),3.34(m,3H),2.97(m,4H),2.06(m,4H),1.49(m,4H),0.32(s,4H)。

实施例2：N-(3-氰基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物10)的制备

目标化合物10的合成路线如下所示：

第一步：3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-硝基苯甲腈(10-1)的合成

将盐酸3,3-二氟吡咯烷(1.04g,7.22mmol)溶解在DMSO(10mL)中，加入K₂CO₃(2.50g,18.1mmol)，在25℃下搅拌5min。再加入3-氟-5-硝基苯甲腈(1-1)(1.00g,6.02mmol)，在80℃下反应12h。监测反应完毕后，向反应液加入水(90mL)淬灭，有棕色沉淀析出，过滤得到棕色固体。棕色固体用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1-2:1)，纯化得到3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-硝基苯甲腈(10-1)(586mg,产率38.4％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.84(s,1H),7.54(t,1H),7.00(s,1H),3.78(t,2H),3.66(t,2H),2.55-2.66(m,2H).

第二步：3-氨基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯甲腈(10-2)的合成

将3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-硝基苯甲腈(10-1)(586mg,2.31mmol)溶解在EtOH(10mL)中。九水合硫化钠(2.78g,11.6mmol)溶解在H₂O(10mL)中,在25℃下加入反应液中。在80℃下反应3h。监测反应完毕后，向反应液中加入水(10mL)，EtOH减压除去，并用DCM(20mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到棕色固体。棕色固体用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇(V/V)＝20:1-5:1)，纯化得到3-氨基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯甲腈(10-2)(172mg,产率33.3％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.36(s,1H),6.21(s,1H),5.99(t,1H),3.64(t,2H),3.50(t,2H),2.45-2.55(m,2H).

LC-MS,M/Z(ESI):224.1[M+H]⁺.

第三步：N-(3-氰基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(10-3)的合成

将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(303mg,848μmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在25℃下依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(443mg,2.31mmol)，4-二甲氨基吡啶(18.8mg,154μmol)和3-氨基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯甲腈(10-2)(172mg,771μmol)到反应液中。在25℃下反应10h。监测反应完毕后，向反应液中加入水(20mL)，并用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩后得到黄色固体，黄色固体用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝20:1-5:1)，纯化得到N-(3-氰基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(10-3)(223mg,产率51.5％)。

LC-MS,M/Z(ESI):563.2[M+H]⁺.

第四步：N-(3-氰基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物10)的合成

将N-(3-氰基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(10-3)(223mg,397μmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺(198mg,1.59mmol)，碘化亚铜(75.5mg,397μmol)，肌氨酸(35.3mg,397μmol)和碳酸钾(164mg,1.19mmol)在25℃下氮气保护下溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中。在100℃下反应18小时。监测反应完毕后，向反应液中加入水(50mL)，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到棕色固体。棕色固体通过制备板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1,R_f＝0.4)，得到N-(3-氰基-5-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物10)(60.0mg,产率27.0％)。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.88(d,1H),7.44(s,1H),7.18(s,1H),7.11(s,1H),7.01(dd,1H),6.61(s,1H),3.85(t,2H),3.73(t,2H),3.49(t,2H),3.26(t,2H),2.97-3.00(m,4H),2.43-2.48(m,2H)，1.50-1.56(m,4H),0.33(s,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):560.3[M+1]⁺。

实施例3：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-(2-羟乙基磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(化合物19)的制备目标化合物19的合成路线如下所示：

第一步：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-硝基苄腈(19-3)的合成

向2-氟-4-硝基苄腈(2g，12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入4,4-二氟哌啶(2.6g，21.6mmol)和碳酸钾(8.3g，60mmol)，在120℃下反应18h。向反应液中加入水(200mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(50mL×3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-硝基苄腈(2.5g，产率77.7％)。

第二步：4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)苄腈(19-4)的合成

向2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-硝基苄腈(19-3)(2.5g，9.4mmol)的乙醇(20mL)和水(5mL)溶液中加入铁粉(2.6g，47mmol)和氯化铵(5.0g，94mmol)，回流反应2h。向反应液中加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，过滤，滤液浓缩后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。有机相用饱和食盐水(50mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/3)纯化得到4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)苄腈(2.1g，产率94.6％)。

LC-MS,M/Z(ESI):238.3[M+H]⁺。

第三步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(19-5)的合成

将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(300mg，0.8mmol)溶于二氯亚砜(3mL)中，70℃条件下反应1h。将反应液浓缩得到棕色油状物。将棕色油状物溶于二氯甲烷(3mL)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(414mg，3.2mmol)和4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)苄腈(19-4)(380mg，1.6mmol)，室温反应18h。将反应液浓缩得到粗品，粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/2)纯化得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(300mg，产率62％)。

LC-MS,M/Z(ESI):577.4[M+H]⁺。

第四步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-(2-羟乙基磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(化合物19)的合成

向N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(19-5)(300mg，0.5mmol)和2-羟基乙磺酰胺(125mg，1.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入2-(二甲氨基)乙酸(10mg，0.1mmol)，碘化亚铜(10mg，0.05mmol)和碳酸钾(138mg，1mmol)，在130℃反应3h。将反应液倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过反相制备(柱子:PhenomenexSynergi C₁₈100*25mm*4μm；溶剂：A＝水+0.1体积％甲酸(99％)，B＝乙腈；梯度：5％-95％，7分钟)得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-4-(2-羟乙基磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(化合物19)(68.3mg，产率22.9％)。

LC-MS,M/Z(ESI):574.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.86(s,1H),10.13(s,1H),7.79(d,1H),7.75–7.67(m,2H),7.46(dd,1H),7.15(d,1H),7.03(dd,1H),4.96(s,1H),3.76(t,2H),3.35(s,1H),3.30(dd,5H),3.01–2.90(m,4H),2.17(ddd,4H),1.51(s,4H),0.34(s,4H).

实施例4：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物20)的制备目标化合物20的合成路线如下所示：

第一步：4-溴-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基-苯甲腈(20-2)的合成

将4-溴-2-氟-6-甲基-苯甲腈(2.00g，9.34mmol)溶解在二甲基亚砜(20mL)中，加入碳酸钾(3.87g,28.0mmol)和4,4-二氟哌啶(1.19g,9.81mmol)，缓慢升温至90℃反应2小时。将反应液倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯(200mL)萃取，有机相用水(100mL)洗涤5次，收集有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝50:1-1:1)得到4-溴-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基-苯甲腈(2.0g，产率67.9％)。

第二步：(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(20-3)的合成

将4-溴-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基-苯甲腈(20-2)(2.00g,6.25mmol)和氨基甲酸叔丁酯(1.49g，12.7mmol)溶解在1,4-二氧六环(30mL)中，加入2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基联苯(605mg，17.4μmol)，醋酸钯(142mg，635μmol)和碳酸钾(2.63g,19.0mmol)，然后加热至110℃反应5小时。将反应液倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯(200mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝50:1-1:1)得到(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，产率67.2％)。

第三步：4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基苯甲腈(20-4)的合成

将(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(20-3)(1.5g,4.27mmol)溶解在盐酸甲醇溶液中(4M，5mL)，然后在氮气保护下20℃搅拌反应2小时。将反应液浓缩得到粗品，用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝20:1-3:1)得到4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基苯甲腈盐酸盐(950mg,产率88.5％)。

LC-MS,M/Z(ESI):252.2[M+H]⁺。

第四步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(20-5)的合成

将4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基苯甲腈(300mg,1.2mmol)，4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(中间体A1)(428.6mg，1.2mmol)和1-甲基-1H-咪唑(295.6mg,3.6mmol)加到乙腈(6mL)中，20℃下搅拌5min。将N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(400.9mg,1.6mmol)加入到反应中，在20℃下反应2h。加入50mL水，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(450mg，产率64％)。

LC-MS,M/Z(ESI):591.2[M+H]⁺。

第五步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物20)的合成

将N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(20-5)(200mg，1.2mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再加入2-羟基乙烷-1-磺酰胺(150mg，0.8mmol)，反式环己二甲氨(14.2mg，0.1mmol)，碘化亚铜(19mg，0.1mmol)，磷酸钾(254.7mg，1.2mmol)，加热至120℃反应3h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相浓缩干，残留物用反相柱分离(柱子:Phenomenex SynergiC18100*25mm*4μm；溶剂：A＝水+0.1体积％甲酸(99％)，B＝乙腈；梯度：5％-95％，7分钟)得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物20)(140mg，产率79.4％)。

LC-MS,M/Z(ESI):588.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80(s,1H),7.78(d,1H),7.51(d,1H),7.43–7.37(m,1H),7.15(d,1H),7.02(dd,1H),3.76(t,2H),3.33(s,2H),3.25(t,4H),2.96(t,4H),2.43(s,3H)，2.16(tt,4H),1.51(t,4H),0.34(s,4H)。

实施例5：N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物21)的制备目标化合物21的合成路线如下所示：

第一步：(3-氯-5-氰基-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(21-2)的合成

将3,5-二氯-4-氟苯甲腈(4.1g，21.6mmol)，氨基甲酸叔丁酯(3.03g，25.9mmol)，醋酸钯(489mg，2.16mmol)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(1.55g，3.24mmol)和碳酸铯(14.1g，43.2mmol)在25℃下N₂保护下溶解在1,4-二氧六环(40mL)中，100℃下反应16小时。反应完毕后，向反应液加入水(50mL)淬灭，1,4-二氧六环减压除去，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，浓缩后得到粗品，粗品通过反相制备分离(柱子:Phenomenex Synergi C18 100*25mm*4μm；溶剂：A＝水+0.05％氨水(99％)，B＝乙腈；梯度：5％-95％，7分钟)纯化得到(3-氯-5-氰基-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(773mg，产率13.2％)。

LC-MS,M/Z(ESI):269.1[M-H]⁺。

第二步：(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(21-3)的合成

将(3-氯-5-氰基-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(21-2)(773mg，2.86mmol)，4,4-二氟哌啶盐酸盐(540mg，3.42mmol)，醋酸钯(64.1mg，286μmol)，2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基联苯(204mg，428μmol)和碳酸铯(2.79g，8.57mmol)在25℃下N₂氛围下溶解在1,4-二氧六环(20mL)中，100℃下反应18小时。监测反应完毕后，向反应液加入水(50mL)淬灭，1,4-二氧六环减压除去，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，浓缩后得到粗品，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝20:1-5:1)得到(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(710mg，产率69.9％)。

LC-MS,M/Z(ESI):356.2[M+H]⁺。

第三步：3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯甲腈(21-4)的合成

将(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(21-3)(690mg，1.94mmol)溶解在盐酸1,4-二氧六环溶液(14mL，4.0M)中，在25℃下反应12小时。监测反应完毕后，向反应液中加入水(15mL)，用2M氢氧化钠水溶液(50mL)调碱使得体系的pH大于14，并用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，通过柱层析(石油醚:二氯甲烷(V/V)＝10:1-0:1)纯化得到3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯甲腈(100mg,产率20.2％)。

LC-MS,M/Z(ESI):256.2[M+H]⁺。

第四步：N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(21-5)的合成

将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(155mg，434μmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在25℃下依次加入草酰氯(358mg，2.82mmol)，N,N-二甲基甲酰胺(31.7mg，434μmol)到体系中。体系迅速变黄冒泡，在25℃下反应1小时。监测反应完毕后，浓缩后得到4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰氯(163mg,产率100％)，直接用于进一步反应。

将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰氯(163mg，434μmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，在25℃下依次加入3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯甲腈(21-4)(100mg，392μmol)，三乙胺(79.3mg，784μmol)到体系中。在25℃下反应12小时。监测反应完毕后，向反应液中加入水(50mL)，并用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后，通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1-2:1)纯化得到N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(83.0mg,产率35.7％)。

LC-MS,M/Z(ESI):595.1[M+H]⁺。

第五步：N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物21)的合成

将N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物21-5)(70.0mg，0.12mmol)，2-羟基乙磺酰胺(59.0mg，0.47mmol)，肌氨酸(10.5mg，0.12mmol)，碘化亚铜(22.4mg，0.12mmol)和碳酸钾(48.8mg,0.35mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，反应在氮气保护下于110℃反应10小时。反应完成后，将反应液用水(25mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取，用饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，然后通过反相高效液相色谱法进行分离，分离方法为(柱子：YMC Triart C₁₈ 150*25mm*5um；溶剂：A＝水+0.05％体积三氟乙酸(99.0％)，B＝乙腈；梯度：62％-82％，10分钟)，然后冻干得到N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物21)(3.0mg，产率4％)。

LC-MS,M/Z(ESI):592.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.54(s,1H),8.12(d,1H),7.39(s,1H),7.27(d,1H),7.23(d,1H),3.97(t,2H),3.40(t,2H),3.29-3.31(m,4H),3.12(s,4H),2.14-2.24(m,4H),1.67(s,4H),0.45(s,4H).

实施例6：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-氟苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物22)的制备

第一步：4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-氟苯甲腈(22-2)的合成

将4-氨基-2,6-二氟苯甲腈(22-1)(5g，32.4mmol)加至50mL二甲基亚砜中，再加入4,4-二氟哌啶(7.86g，64.9mmol)，碳酸钾(22.42g，162mmol)，加热至110℃反应16h，LCMS显示原料反应完，加入200mL水稀释，用乙酸乙酯(300mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(PE:EA＝1:1)得到4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-氟苯甲腈(22-2)(3.6g，产率43.5％)。

LC-MS,M/Z(ESI):256.1[M+H]⁺

第二步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(22-3)的合成

将4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-氟苯甲腈(22-2)(0.31g，1.21mmol)加至4mL四氢呋喃中，再加入4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸甲酯(中间体A2)(0.3g，0.808mmol)，叔丁醇钾(2.4mL，1mol/L)，室温反应3h，LCMS显示原料反应完，加入5mL水稀释，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(PE:EA(V/V)＝3:1)得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(22-3)(300mg，产率62.5％)。

LC-MS,M/Z(ESI):595.1[M+H]⁺

第三步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-氟苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物22)的合成

将N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(22-3)(0.3g，0.51mmol)加至5mL N,N-二甲基甲酰胺中，再加入2-羟基乙烷-1-磺酰胺(126mg，1.0mmol)，N,N-二甲基甘氨酸(104mg，1.0mmol)，碘化亚铜(96mg，0.51mmol)，碳酸钾(279mg，2.02mmol)，加热至130℃反应1h。LCMS显示原料反应完，加入5mL水稀释，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(PE:EA(V/V)＝1:1)得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-氟苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物22)(100mg，产率33.5％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.92(s,1H),7.74(s,1H),7.52(s,1H),7.24(s,1H),7.12(s,1H),7.00(d,1H),3.74(t,2H),3.32-3.35(m,6H),2.94(t,4H),2.11-2.18(m,4H),1.48(m,4H),0.32(s,4H)。

LC-MS,M/Z(ESI):592.2[M+H]⁺

实施例7：N-(2-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物23)的制备目标化合物23的合成路线如下：

第一步：2-氨基-4-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯腈(23-2)的合成

向2-氨基-4-溴-6-氟苯腈(1.0g，4.7mmol)的DMF(10mL)溶液中加入4,4-二氟哌啶盐酸盐(1.65g，10.8mmol)，碳酸铯(8.8g，27mmol)，然后在100℃条件下反应18h。将反应液倒入水(50mL)，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到2-氨基-4-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯腈(23-2)(120mg，产率8％)。

LC-MS,M/Z(ESI):316.2[M+H]⁺。

第二步：2-氨基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯腈(23-3)的合成

将2-氨基-4-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯腈(23-2)(120mg，0.4mmol)，甲基硼酸(45mg，0.8mmol)，Pd(dppf)Cl₂(28mg，40μmol)，Na₂CO₃(120mg，1.2mmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)中，体系中加入0.5mL水，氮气保护下体系被加热至100℃条件下搅拌过夜。将反应液倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品，粗品经过柱层析产物2-氨基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯腈(23-3)(95mg，产率100％)。

LC-MS,M/Z(ESI):252.2[M+H]⁺

第三步：N-(2-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(23-4)的合成

向2-氨基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯腈(23-3)(95mg，0.4mmol)和4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(0.11g，0.4mmol)中缓慢加入N,N,N',N′-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(167.5mg，5.7mmol)和N-甲基咪唑(93mg，11.4mmol)加入乙腈中，然后在100℃条件下搅拌过夜。浓缩得到粗品，粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到N-(2-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(23-4)(80mg，产率34.0％)。

LC-MS,M/Z(ESI):591.2[M+H]⁺

第四步：N-(2-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物23)的合成

向N-(2-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(23-4)(80mg，0.14mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入2-羟基乙磺酰胺(40mg，0.32mmol)，2-(二甲氨基)乙酸(3mg，0.032mmol)，碘化亚铜(3mg，0.016mmol)和碳酸钾(66mg，0.48mmol)，置换三次氮气，然后在120℃条件下搅拌2h。将反应液倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过反相制备(柱子:Phenomenex Synergi C18100*25mm*4μm；溶剂：A＝水+0.1体积％甲酸(99％)，B＝乙腈；梯度：5％-95％，7分钟)得到N-(2-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物23)(30mg，产率37.7％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.72(s,1H),8.09(d,1H),7.89(s,1H),7.00(dd,1H),6.80(b,1H),6.63(s,1H),4.14(t,2H),3.36(t,2H),3.29(t,4H),3.10(t,4H),2.40(s,3H),2.27-2.17(m,4H),0.89-0.83(m,4H),0.36(s,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):588.2[M+H]⁺

实施例8：N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物24)的制备目标化合物24的合成路线如下：

第一步：3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(24-2)的合成

向3-溴-4-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(1.0g，3.6mmol)的1,4-二氧六环(10mL)溶液中加入4,4-二氟哌啶盐酸盐(0.7g，4.4mmol)，碳酸铯(3.5g，10.8mmol)，醋酸钯(82mg，0.36mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(422mg，0.73mmol)，然后氮气保护在100℃条件下反应18h。将反应液倒入水(50mL)，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(24-2)(400mg，产率34.9％)。

LC-MS,M/Z(ESI):315.2[M+H]⁺

第二步：3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-5-硝基苯甲酰胺(24-3)的合成

向3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(24-2)(400mg，1.3mmol)中加入NH₃/MeOH(15mL，105mmol)溶液，然后加入闷罐中，体系被加热至100℃条件下搅拌36小时。将反应液浓缩至干得产物3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-5-硝基苯甲酰胺(24-3)(350mg，产率91.9％)。

LC-MS,M/Z(ESI):300.1[M+H]⁺

第三步：3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯甲酰胺(24-4)的合成

向3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-5-硝基苯甲酰胺(24-3)(350mg，1.3mmol)中加入Pd/C(35mg，10％)和MeOH(15mL)溶液，氢气氛围下搅拌3小时。将反应液过滤除去钯碳，滤液浓缩至干得产物3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯甲酰胺(24-4)(315mg，产率100％)。

LC-MS,M/Z(ESI):270.1[M+H]⁺

第四步：3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯腈(24-5)的合成

向3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯甲酰胺(24-4)(315mg，1.2mmol)中加入甲苯(10mL)，然后加入TBAF(30mg，0.12mmol)和苯硅烷(760mg，7.0mmol)，体系被加热至100℃条件下搅拌0.5小时。将反应液浓缩得到粗品，经过柱层析纯化得到固体产物3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯腈(24-5)(200mg，产率68.1％)。

LC-MS,M/Z(ESI):252.1[M+H]⁺

第五步：N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(24-6)的合成

向3-氨基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯腈(24-5)(95mg，0.4mmol)和4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(0.11g，0.4mmol)的四氢呋喃溶液中加入叔丁醇钾(64mg，0.6mmol)，然后室温搅拌过夜。浓缩得到粗品，粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(24-6)(25mg，产率11.2％)。

LC-MS,M/Z(ESI):591.2[M+H]⁺

第六步：N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物24)的合成

向N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(24-6)(25mg，0.04mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入2-羟基乙磺酰胺(6.4mg，0.05mmol)，2-(二甲氨基)乙酸(3mg，0.032mmol)，碘化亚铜(3mg，0.016mmol)和碳酸钾(66mg，0.48mmol)，置换三次氮气，然后在120℃条件下搅拌2h。将反应液倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过反相制备(柱子:Phenomenex Synergi C18100*25mm*4μm；溶剂：A＝水+0.1体积％甲酸(99％)，B＝乙腈；梯度：5％-95％，7分钟)得到N-(5-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物24)(2.2mg，产率8.8％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.63(s,1H),8.20(d,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),7.17(s,1H),7.03-6.99(m,1H),5.34(b,1H),4.16(t,2H),3.35(t,2H),3.10(t,4H),3.03(t,4H),2.34(s,3H),2.22-2.14(m,4H),0.89-0.83(m,4H),0.36(s,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):588.2[M+H]⁺

实施例9：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物25)的制备目标化合物25的合成路线如下：

第一步：1-(3-溴-2-氟-5-硝基苯基)-4,4-二氟哌啶(25-2)的合成

向1，3-二溴-2-氟-5-硝基苯(5.0g，16.7mmol)的1,4-二氧六环(50mL)溶液中加入4,4-二氟哌啶盐酸盐(3.2g，20.1mmol)，碳酸铯(10.9g，33.4mmol)，醋酸钯(375mg，1.7mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.9g，3.2mmol)，然后氮气保护在80℃条件下反应18h。将反应液倒入水(200mL)，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(50mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到1-(3-溴-2-氟-5-硝基苯基)-4,4-二氟哌啶(25-2)(900mg，产率15.7％)。

LC-MS,M/Z(ESI):339.0[M+H]⁺

第二步：3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟-5-硝基苯腈(25-3)的合成

向1-(3-溴-2-氟-5-硝基苯基)-4,4-二氟哌啶(25-2)(350mg，1.0mmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液中加入CuCN(185mg，2.0mmol)，然后氮气保护在微波加热至140℃反应1h。反应液冷却后过柱纯化得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟-5-硝基苯腈(25-3)(250mg，产率84.9％)。LC-MS,M/Z(ESI):286.1[M+H]⁺

第三步：5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯腈(25-4)的合成

将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟-5-硝基苯腈(25-3)(250mg，0.9mmol)，联硼酸(471mg，5.3mmol)和醋酸铜(15.9mg，0.09mmol)加入到乙腈(3mL)中，体系氮气保护下体系被加热至40℃条件下搅拌过夜。浓缩得到粗品，粗品经过柱层析得到5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯腈(25-4)(100mg，产率44.7％)。

LC-MS,M/Z(ESI):256.1[M+H]⁺

第四步：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(25-5)的合成

向5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氟苯腈(25-4)(50mg，0.2mmol)和4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(84mg，0.2mmol)中的乙腈(2mL)溶液中缓慢加入N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(82mg，0.3mmol)和N-甲基咪唑(32mg，0.4mmol)，然后室温搅拌过夜。浓缩得到粗品，粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(25-5)(100mg，产率85.9％)。

LC-MS,M/Z(ESI):595.1[M+H]⁺

第四步：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物25)的合成

向N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(25-5)(100mg，0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入2-羟基乙磺酰胺(40mg，0.32mmol)，2-(二甲氨基)乙酸(3mg，0.032mmol)，碘化亚铜(3mg，0.016mmol)和碳酸钾(66mg，0.48mmol)，置换三次氮气，然后在120℃条件下搅拌2h。将反应液倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品。粗品经过反相制备(柱子:Phenomenex Synergi C18100*25mm*4μm；溶剂：A＝水+0.1体积％甲酸(99％)，B＝乙腈；梯度：5％-95％，7分钟)得到N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-氟苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰胺)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物25)(50.1mg，产率50.4％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.79(s,1H),8.16(d,1H),7.83(d,1H),7.44(s,1H),7.31(s,1H),7.06(d,1H),4.12(s,2H),3.33-3.29(m,6H),3.05(s,4H),2.20-2.13(m,4H)，1.62(s,4H)，0.44(s,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):592.2[M+H]⁺

实施例10：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物26)的制备目标化合物26的合成路线如下：

第一步：2-溴-3-氟-5-硝基苯甲腈(26-2)的合成

将2-溴-3-氟苯甲腈(2g，10mmol)溶解到浓硫酸(15mL)中，0℃下向其中滴加5mL浓硝酸，室温反应2h，将反应液慢慢滴加到200mL水中，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(体积比：石油醚:乙酸乙酯＝100:1)得到2-溴-3-氟-5-硝基苯甲腈(26-2)(1.5g，产率60％)。

LC-MS,M/Z(ESI):245.2[M+H]⁺

第二步：3-氟-2-甲基-5-硝基苯甲腈(26-3)的合成

将2-溴-3-氟-5-硝基苯甲腈(26-2)(1.5g，6mmol)，甲基硼酸(1.8g，30mmol),[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(1.0g，1.4mmol),碳酸钾(2.2g，18mmol)溶解在1,4-二氧六环(20mL)和水(4mL)中，100℃下反应2h，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(体积比：石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到3-氟-2-甲基-5-硝基苯甲腈(26-3)(1g，产率92％)。

LC-MS,M/Z(ESI):181.2[M+H]⁺

第三步：3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基-5-硝基苯甲腈(26-4)的合成

将3-氟-2-甲基-5-硝基苯甲腈(26-3)(1g，5mmol)，碳酸铯(3.25g，10mmol),4,4-二氟哌啶(1g，8mmol)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，60℃下搅拌2h，加入50mL水稀释，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有机相浓缩得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基-5-硝基苯甲腈(26-4)(1.2g，产率80％)。

LC-MS,M/Z(ESI):282.2[M+H]⁺

第四步：5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯甲腈(26-5)的合成

将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基-5-硝基苯甲腈(26-4)(1.2g，4mmol),铂/钒/炭(240mg，20％w/w)溶解到乙酸乙酯(10mL)中，在氢气球下，室温搅拌12h，硅藻土过滤，有机相浓缩得到5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯甲腈(26-5)(1.0g，产率92％)。

LC-MS,M/Z(ESI):252.2[M+H]⁺

第五步：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(26-6)的合成

将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(285mg，0.8mmol)加到二氯甲烷(10mL)中，再向其中滴加二氯亚砜(2.85mL)和两滴N,N-二甲基甲酰胺，室温下搅拌2h，然后浓缩干得到粗品，粗品用10mL二氯甲烷溶解，再加入5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-甲基苯甲腈(26-5)(0.4g，1.6mmol)，30℃下搅拌12h。然后加入50mL水稀释，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(体积比：石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(26-6)(220mg，产率52％)。

LC-MS,M/Z(ESI):591.2[M+H]⁺

第六步：N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物26)的合成

将N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯甲酰胺(220mg，0.4mmol)加入到3mL N,N-二甲基甲酰胺中，再加入2-羟基乙烷-1-磺酰胺(100mg，0.8mmol)，反式环己二甲氨(15mg，0.04mmol)，碘化亚铜(20mg，0.08mmol)，磷酸钾(170mg，0.8mmol)，加热至130℃反应1h。加入10mL水稀释，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到N-(3-氰基-5-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-甲基苯基)-4-((2-羟乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物26)(80mg，产率36％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.61(s,1H),10.14(s,1H),7.88-7.84(m,2H),7.45(m,1H),7.20(s,1H),7.03(m,1H),3.76(m,2H),3.32(m，4H),2.98(m,6H),2.49(m,3H),2.16(m,4H),1.51(m,4H),0.32(m,4H)。

LC-MS,M/Z(ESI):588.2[M+H]⁺

实施例11：N-(3-氰基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)-4-((2-羟基乙基)磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物27)的制备目标化合物27的合成路线如下：

第一步：3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5-硝基苯甲腈(27-1)的合成

将3-氟-5-硝基-苯甲腈(1-1)(1.00g,6.02mmol)和3,3-二氟吖丁啶盐酸盐(1.01g,7.83mmol)，碳酸钾(2.50g，18.06mmol)加入到二甲基亚砜(10.0mL)溶液中。在100℃下搅拌12h。反应完成后，将反应液用水(50.0mL)淬灭，乙酸乙酯(120mL)萃取，用饱和食盐水(120mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝20:1-15:1)得到3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5-硝基苯甲腈(27-1)(750mg,产率52.1％)。

LC-MS,M/Z(ESI):240.3[M+H]⁺。

第二步：3-氨基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈的合成

将3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5-硝基-苯甲腈(27-1)(600mg,2.51mmol)，铁粉(700mg,12.5mmol)，氯化铵(335mg,6.27mmol)加入到甲醇(10.0mL)与水(1.00mL)的混合溶液中。在60℃下搅拌12h。待反应完成后，将反应液用水(50.0mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取，用饱和食盐水(25mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到3-氨基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(27-2)(400mg，粗品)。

LC-MS,M/Z(ESI):210.2[M+H]⁺。

第三步：N-(3-氰基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(27-3)的合成

将2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸(341mg，956μmol)溶于二氯甲烷(5.00mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(371mg，2.87mmol,499μL)，HATU(1.09g,2.87mmol)，在25℃下搅拌2小时。之后在混合物中加入3-氨基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(27-2)(200mg，956μmol)，在25℃下搅拌10h。将反应液用水(25mL)淬灭，乙酸乙酯(25mL)萃取，用饱和食盐水(25mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用制备板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:1)得到N-(3-氰基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(280mg,收率29.4％)。

LC-MS,M/Z(ESI):549.0[M+H]⁺。

第四步：N-(3-氰基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物27)的合成

将N-(3-氰基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(100mg,182μmol)，2-羟基乙磺酰胺(34.2mg,274μmol)，2-(甲基氨基)乙酸(8.12mg,91.2μmol)，碘化亚铜(17.37mg,91.2μmol)和碳酸钾(75.6mg,547μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5.00mL)溶液中，反应在氮气保护下于110℃反应12h。反应完成后，将反应液用水(50.0mL)淬灭，乙酸乙酯(180mL)萃取，用饱和食盐水(180mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，然后通过反相高效液相色谱法进行分离，分离方法为(柱子：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4um；溶剂：A＝水+0.05％体积三氟乙酸(99.0％)，B＝乙腈；梯度：43％-73％，9分钟)，然后冻干得到N-(3-氰基-5-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物27)(50mg,产率46.7％)。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.04(d,1H),7.55(s,1H),7.41(br s,1H),7.21-7.23(m,2H),6.72(s,1H),4.32(t,4H),3.96(t,2H),3.39(t,2H),3.24-3.31(m,4H),1.70-1.72(m,4H),0.49(s,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):546.2[M+H]⁺。

实施例12：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-5-氟-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物28)的制备目标化合物28的合成路线如下：

第一步：2,5-二氟-4-碘苯甲腈(28-2)的合成

在0℃下，向4-氨基-2,5-二氟苯甲腈(28-1)(10.0g,64.9mmol)的盐酸(100mL)溶液中，缓慢加入亚硝酸钠(5.37g,77.9mmol)，反应在0℃反应半小时，然后慢慢加入碘化钾(16.2g,97.3mmol)，反应在0℃反应3小时。将反应液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，收集有机相，用盐水(100mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得到2,5-二氟-4-碘苯甲腈(28-2)(8.90g,产率51.7％)。

第二步：5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲腈(28-3)的合成

向2,5-二氟-4-碘苯甲腈(28-2)(5.00g,18.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(50.0mL)溶液中加入碳酸钾(754mg,5.46mmol)和6-氮杂螺[2.5]辛烷盐酸盐(2.93g,19.8mmol)，反应在100℃反应6小时。将反应液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(100mL*3)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲腈(28-3)(5.40g,产率80.3％)。

LC-MS,M/Z(ESI):357.0[M+H]⁺

第三步：5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(28-4)的合成

向5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲腈(28-3)(1.40g,3.93mmol)的乙二醇(10.0mL)溶液中加入氢氧化钠(2.80g,70.0mmol)的水(10.0mL)溶液，反应在130℃反应10小时。将反应液倒入水(50.0mL)中，用甲基叔丁基醚(20.0mL)萃取，水相用1M的盐酸调至pH＝2，然后用二氯甲烷(30.0mL*3)萃取，收集有机相，用盐水(50.0mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝50:1-10:1)得到5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(28-4)(1.00g,产率67.8％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO_d₆)δ7.93(d,1H),7.84(d,1H),3.04-3.10(m,4H),2.33(brd,2H),1.06(s,2H),0.40-0.58(m,4H).

LC-MS,M/Z(ESI):376.0[M+H]⁺

第四步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(28-5)的合成

将5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(28-4)(550mg,1.47mmol)和草酰氯(558mg,4.40mmol)溶于二氯甲烷(5.00mL)中，然后加入一滴N,N-二甲基甲酰胺在25℃反应1小时。将反应液浓缩，加入4-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基苯甲腈(350mg,1.22mmol)和三乙胺(246mg,2.43mmol)一起溶于1,4-二氧六环(5.00mL)中，在80℃反应2小时。将反应液倒入水(50.0mL)中，用乙酸乙酯(100mL)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:0-10:1)得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(28-5)(340mg,产率45.9％)。

LC-MS,M/Z(ESI):609.2[M+H]⁺

第五步：N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-5-氟-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物28)的合成

将N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-5-氟-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(28-5)(150mg,247μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中，加入2-羟基乙烷-1-磺酰胺(30.9mg,247μmol)，再加入碘化亚铜(23.5mg,123μmol)，肌氨酸(11.0mg,123μmol)和碳酸钾(102mg,740μmol)，然后在氮气保护下100℃搅拌反应2小时。将反应液倒入水(20.0mL)中，用乙酸乙酯(20.0mL)萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过高效液相色谱法分离纯化(柱子：Waters Xbridge 150*25mm*5um；溶剂：A＝水+0.05体积氨水(30％)，B＝乙腈；梯度：13％-43％，35分钟)，冻干得到N-(4-氰基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-甲基苯基)-5-氟-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(化合物28)(50.0mg,产率33.5％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,)δ12.5(s,1H),7.62(d,1H),7.51(s,1H),7.40(d,1H),7.36(s,1H),3.77(t,2H),3.2-3.3(m,6H),2.94(br t,4H),2.44(s,3H),2.1-2.2(m,4H),1.55(br s,4H),0.36(s,4H)

LC-MS,M/Z(ESI):606.3[M+H]⁺

以下目标化合物参照化合物1的合成方法类似制备得到。

测试例1.化合物抑制肿瘤细胞OVCAR3细胞增殖试验

将NIH:OVCAR-3(ATCC,Cat No.HTB-161,购买于Co-Bier)细胞接种于T75培养瓶中,在含20％FBS的RPMI 1640培养基中培养3天,以备后续培养及接种于96孔板进行细胞增殖试验。

3000cells/100μL/well的密度接种OVCAR3细胞于96孔细胞板，并将细胞板置于培养箱培养18小时(37℃,5％CO₂)。第二天开始药物处理,向培养板培养基中加入100μL/well梯度稀释的待测化合物溶液(每种药物起始浓度均为10μM，稀释液为DMSO，稀释比为1:3，每种药物稀释九个梯度点)或DMSO(阴性对照),另设置不接种细胞株只加入培养基的空白组，加完药物后将培养板继续置于培养箱中孵育3天(37℃,5％CO₂)。第四天板检测,向每孔中加入100μL CellTiter-Glo(Promega G9243)试剂,震荡5分钟后室温静置5分钟,利用酶标仪(PerkinElmer2104)测定各孔的化学发光信号值。细胞增殖抑制率＝(1-(化合物组-空白组)/(DMSO组-空白组))×100％，使用GraphPad Prism8软件计算各化合物的IC₅₀值。

表1.化合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用

化合物编号	IC₅₀(nM)
		化合物1	7
化合物10	860
		化合物19	18
化合物20	20
		化合物21	129
化合物23	65
		化合物25	95
化合物28	320

实验结果表明：OVCAR3细胞增殖试验结果表明,本发明化合物能明显抑制OVCAR3细胞增殖。

测试例2.化合物对KIF18A酶活性抑制试验

本测试所使用的重组蛋白KIF18A(驱动蛋白结构域：aa 1-467)由Invitrogen公司的Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达，所得蛋白经纯化后用于本测试(Seki,M.etal.2003Nucleic Acids Res.)。KIF18A酶活定量检测使用ADP-Glo^TM激酶检测试剂盒(Promega Inc)完成，相关操作严格遵循产品说明书，现简述如下：

反应体系由待测化合物、重组蛋白KIF18A(aa 1-467)，ATP(Promega Inc)及实验缓冲液组成。待测化合物用DMSO(Sigma Inc)配制成0.5mM储备液，并使用DMSO进行梯度稀释。实验缓冲液由15mM Tris，10mM MgCl₂(Sigma Inc),0.01％Pluronic F-68(LifeTechnologies Inc)，1μM紫杉醇(Cytoskeleton Inc),30μg/mL猪微管蛋白(CytoskeletonInc)以及2％DMSO的水溶液组成。向制备的实验缓冲液(50μL)中，加入KIF18A蛋白(终浓度为80nM)和不同浓度的化合物(1μL)，并在室温下孵育15min；随后向反应混合物中添加ATP(终浓度为80μM)，并在室温下孵育3hr。反应结束后，在384孔板(Grenier Inc)中加入5μL的ADP-Glo^TM试剂和2.5μL的反应混合物，混合均匀后，用铝箔封口膜密封并在室温下避光孵育40min；最后，向反应孔中再各加入10μL ADP-Glo^TM检测试剂，室温避光孵育40min。所有反应结束后，利用酶标仪(Molecular Device_SpectraMax Id5)读取各孔发光值，并计算抑制率。抑制率计算公式如下:抑制率＝(1-(化合物组-空白组)/(阴性对照组-空白组))×100％，并根据不同浓度化合物的抑制率，在GraphPad Prism8软件中计算出待测化合物的IC₅₀值。

表2.化合物对KIF18A酶活的抑制作用

测试化合物	IC₅₀(nM)
		化合物1	0.1
化合物10	8
		化合物19	0.9
化合物20	4
		化合物21	6
化合物22	2
		化合物25	4

KIF18A酶活性抑制实验表明，本发明化合物对KIF18A酶具有很好的抑制活性。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种如式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：

其中，

X⁴为N或-CR⁸；

X⁵为N或-CR⁹；

X⁶为-CR¹⁰；

L为-NR³-C(＝O)-或-C(＝O)-NR³-；且

X⁵为N时，X⁴必须为N；

M不存在，或者选自被R^c所取代的C₁-C₆亚烷基；

R⁴选自氢、CN、卤素、C_1-6烷基；

并且，所述R⁴、R⁵和R⁷中至少有一个为CN；

R¹¹为氢、R^11a或R^11b；

R¹²为氢、卤素、OH、CN、R^12a或R^12b；

R¹³为氢、卤素、CN、R^13a或R^13b；

R^7a、R^10a、R^11a、R^12a和R^13a分别独立地选自由以下组成的组：含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2或3个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-C(＝O)R^b、-C(＝O)OR^a、-C(＝O)NR^aR^a、-C(＝NR^a)NR^aR^a、-OC(＝O)R^b、-OC(＝O)NR^aR^a、-OC_2-6烷基NR^aR^a、-OC_2-6烷基OR^a、-SR^a、-S(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aR^a、-N(R^a)C(＝O)R^b、-N(R^a)C(＝O)OR^b、-N(R^a)C(＝O)NR^aR^a、-N(R^a)C(＝NR^a)NR^aR^a、-N(R^a)S(＝O)₂R^b、-N(R^a)S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aC₂-C₆烷基NR^aR^a、-NR^aC_2-6烷基OR^a、-C_1-6烷基NR^aR^a、-C_1-6烷基OR^a、-C_1-6烷基N(R^a)C(＝O)R^b、-C_1-6烷基OC(＝O)R^b、-C_1-6烷基C(＝O)NR^aR^a、-C_1-6烷基C(＝O)OR^a、R¹⁴和氧代；

R^x选自由以下组成的组：氢、

R¹⁵ⁿ、R^15o分别独立地选自由以下组成的组：含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2、3或4个基团取代：卤素、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^a、-OC_1-4卤代烷基、CN、-C(＝O)R^b、-C(＝O)OR^a、-C(＝O)NR^aR^a、-C(＝NR^a)NR^aR^a、-OC(＝O)R^b、-OC(＝O)NR^aR^a、-OC_2-6烷基NR^aR^a、-OC_2-6烷基OR^a、-SR^a、-S(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aR^a、-N(R^a)C(＝O)R^b、-N(R^a)C(＝O)OR^b、-N(R^a)C(＝O)NR^aR^a、-N(R^a)C(＝NR^a)NR^aR^a、-N(R^a)S(＝O)₂R^b、-N(R^a)S(＝O)₂NR^aR^a、-NR^aC₂-C₆烷基NR^aR^a、-NR^aC_2-6烷基OR^a、-C_1-6烷基NR^aR^a、-C_1-6烷基OR^a、-C_1-6烷基N(R^a)C(＝O)R^b、-C_1-6烷基OC(＝O)R^b、-C_1-6烷基C(＝O)NR^aR^a、-C_1-6烷基C(＝O)OR^a和氧代；

R^a独立地选自氢或R^b；

2.一种如式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：

其中，R⁴选自CN；

X⁴、X⁵、X⁶、L、M、R¹、R²、R⁵、R⁶和R⁷具有权利要求1所述的定义。

3.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R^15c、R^15d、R^15e、R^15f、R^15g、R^15h、R¹⁵ⁱ和R^15j中的每一个为H、卤素、C_1-6烷基或C_1-4卤代烷基；并且R^15a和R^15b对中的每一个与它们各自附接的碳原子组合形成螺接到R^x环的饱和3元、4元或5元单环；其中所述环含有0、1、2或3个N原子和0、1或2个选自O和S的原子。

4.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j中的每一个各自独立地为H、甲基或乙基；并且R^15a和R^15b对中的每一个与它们各自附接的碳原子组合形成螺接到R^x环的环丙基、环丁基或环戊基。

5.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述基团选自

较佳地，所述基团选自

6.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述基团选自

7.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R³为氢或甲基。

8.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述化合物选自如下结构：

其中，X⁴、X⁵和X⁶具有权利要求1所述的定义；

R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷具有权利要求1所述的定义；

R^15a、R^15b、R^15c、R^15d、R¹⁵ⁱ和R^15j具有权利要求1所述的定义；

M和L具有权利要求1所述的定义。

9.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述化合物选自如下结构：

其中，X⁴、X⁵和X⁶具有权利要求1所述的定义；

R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷具有权利要求1所述的定义；

M具有权利要求1所述的定义。

10.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述化合物选自如下结构：

其中，X⁴、X⁵和X⁶具有权利要求1所述的定义；

R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷具有权利要求1所述的定义；

M具有权利要求1所述的定义。

11.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述化合物选自如下结构：

其中，

R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷具有权利要求1所述的定义；

M具有权利要求1所述的定义。

12.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R²选自：F、Cl、Br或基团-Y-R¹³，其中Y为键、-NH-、-NH-(CH₂)_0-4-、-O-(CH₂)_0-4-、-S-、-S＝O-、-S(＝O)₂-、-S(＝O)(＝NH)-、-SO₂NH-、-C(＝O)-；并且R¹³为含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其被选自以下的0、1、2或3个相同或不同的基团取代：F、Cl、Br、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-OH、-OC_1-4卤代烷基、CN、R¹⁴和氧代；或R¹³为被选自下列0、1、2、3、4或5个相同或不同的取代基取代的C_1-6烷基，所述取代基为F、Cl、Br、-OH、-OC_1-4卤代烷基或CN；其中，所述R¹⁴具有权利要求1所述的定义；

13.如权利要求1或权利要求8～12中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R²选自：

14.如权利要求8～11中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述M不存在或者选自-NH-、-CH₂-、

15.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述Z选自键、-NH-、-NHSO₂-、-SO₂NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-S-、-S(＝O)-、-SO₂-、-O-、-P-、-P(＝O)CH₃-、-P(＝O)₂、-(C＝O)-、-(C＝O)NH-或-NH(C＝O)-。

16.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R¹²选自(a)氢；(b)被选自F、Cl、Br、-OH、-OCH₃或环丙基的0、1、2或3个基团取代的C_1-6烷基；或(c)含有0、1、2或3个N原子和0或1个选自O和S的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环，其被选自以下的0、1、2或3个基团取代：F、Cl、Br、C_1-6烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-6烷基OH、-OH、-OCH₃、-NH₂或氧代。

17.如权利要求16所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R¹²选自(a)氢；(b)被-OH、-OCH₃取代的C_1-6烷基；或(c)环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、1,3,4-氧杂噻嗪烷基、被-OH取代的C_3-8环烷基。

18.如权利要求1或8～11中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R¹选自

19.如权利要求1或权利要求8～11中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R⁴选自氢、甲基、F或CN。

20.如权利要求1或权利要求8～11中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R⁵选自氢、甲基、F或CN。

21.如权利要求1或权利要求8～11中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R⁶选自氢。

22.如权利要求1或权利要求8～11中任一项所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R⁷选自氢、F、Cl、Br、CN、甲基、甲氧基、环丙基；或者R²和R⁷与它们各自附接的碳原子组合形成

23.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R⁸选自氢、F、Cl、Br、环丙基、-(C＝O)CH₃或CF₃。

24.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R⁹选自氢或F。

25.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述R¹⁰选自氢、F或甲基。

26.如权利要求1所述的式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，所述化合物包括：

27.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：如权利要求1-26中任一所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和药学上可接受的载体。

28.一种如权利要求1-26中任一所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的用途，或权利要求27所述的药物组合物的用途，所述用途包括：

抑制KIF18A；

和/或，预防和/或治疗KIF18A相关的疾病；

和/或，制备用于抑制KIF18A，和/或预防和/或治疗KIF18A相关的疾病的药物、药物组合物或制剂。

29.如权利要求28所述的用途，其特征在于，所述KIF18A相关的疾病包括：癌症、银屑病、特应性皮炎、自身免疫性疾病或炎症性肠病的增生性障碍。

30.如权利要求29所述的用途，其特征在于，所述癌症选自间皮瘤、神经母细胞瘤、直肠癌、结肠癌、熟悉的腺瘤性息肉病和遗传性非息肉性结直肠癌、食道癌、唇癌、喉癌、下咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌、肾癌、肾实质癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、睾丸癌、乳腺癌、泌尿癌、黑色素瘤、脑瘤、淋巴瘤、头颈癌、急性淋巴白血病、慢性淋巴白血病、急性髓样白血病、慢性粒细胞白血病、肝细胞癌、胆囊癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底肉瘤、畸胎瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤因肉瘤和浆细胞瘤。

31.如权利要求29所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病选自类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病、皮肌炎、多发性肌炎、莱特尔综合征、自身免疫性淋巴增生综合征、多发性硬化症、重症肌无力和脑脊髓炎。

32.如权利要求29所述的用途，其特征在于，所述炎症性肠病选自溃疡性结肠炎或克罗恩病。