CN117205191A - 甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途 - Google Patents
甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117205191A CN117205191A CN202311413658.0A CN202311413658A CN117205191A CN 117205191 A CN117205191 A CN 117205191A CN 202311413658 A CN202311413658 A CN 202311413658A CN 117205191 A CN117205191 A CN 117205191A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methylbenzoquinone
- hypertrophic scars
- preparation
- preventing
- drug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- VTWDKFNVVLAELH-UHFFFAOYSA-N 2-methylcyclohexa-2,5-diene-1,4-dione Chemical compound CC1=CC(=O)C=CC1=O VTWDKFNVVLAELH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 45
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 title claims abstract description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 230000037387 scars Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 11
- 241001501039 Blaps Species 0.000 claims description 6
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims description 6
- 230000035161 fibroblast apoptotic process Effects 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000010408 film Substances 0.000 claims description 4
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 4
- -1 tincture Substances 0.000 claims description 4
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 3
- 241001425800 Pipa Species 0.000 claims description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 229940040145 liniment Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000865 liniment Substances 0.000 claims description 2
- 239000011505 plaster Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 11
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 abstract 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 12
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 12
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 12
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 9
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 6
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 6
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 6
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 6
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 5
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 5
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 4
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 4
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 4
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 238000013042 tunel staining Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000911513 Homo sapiens Uncharacterized protein FAM215A Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 240000007711 Peperomia pellucida Species 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 241001303601 Rosacea Species 0.000 description 2
- 102100026728 Uncharacterized protein FAM215A Human genes 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- HJUFTIJOISQSKQ-UHFFFAOYSA-N fenoxycarb Chemical compound C1=CC(OCCNC(=O)OCC)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 HJUFTIJOISQSKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 201000004700 rosacea Diseases 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 1
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 241000254107 Tenebrionidae Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000000893 fibroproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124600 folk medicine Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002647 laser therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000012450 pharmaceutical intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000004215 skin function Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。本发明首次通过实验发现甲基苯醌能够促进成纤维细胞的凋亡，降低IL‑8、IL‑β、ColⅠ、ColⅢ等纤维化相关基因表达，从而有效治疗增生性瘢痕，这表明甲基苯醌具有作为增生性瘢痕治疗药物的潜力，为临床治疗提供更多的选择。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。
背景技术
增生性瘢痕(Hypertrophicscar，HS)是创伤、烧伤和外科手术的常见后果，是一种由创伤后异常愈合引起的纤维增生性疾病，其特征是细胞外基质成分过度沉积和成纤维细胞(Fibroblast，Fb)的侵袭性增殖。HS的发展会导致皮肤功能受损和不良的美容效果。目前有几种治疗方案可供选择，包括手术切除、激光治疗和皮质类固醇注射，但HS形成的复杂机制使这些治疗方案在临床环境中不能令人满意。因此，迫切需要开发新的治疗方法。
HS的发病机制复杂，但普遍认为主要原因是Fb的异常激活和细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)的合成。Fb的激活包括从相对静止的状态到激活和过度产生ECM的状态的转变，这种激活在正常伤口愈合过程中是暂时的，但在HS形成过程中持续存在。因此，控制靶向活化的Fb并抑制其纤维化行为是控制HS形成的主要策略。
云南民间常用药物喙尾琵琶甲已被证明具有显著的抗瘢痕作用。然而，目前对于喙尾琵琶甲的物质基础的研究尚不完善，目前对于喙尾琵琶甲抗瘢痕作用的活性物质尚缺乏相关报道。甲基苯醌(2-Methylcyclohexa-2，5-diene-1，4-dione，CAS：553-97-9)是喙尾琵琶甲的活性成分之一，现有技术中甲基苯醌主要用途是作为颜料、染料和医药中间体等。对于甲基苯醌的抗瘢痕作用，现有技术中未见到任何报道。
发明内容
针对现有技术的问题，本发明提供甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。
甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。
优选的，所述药物用于促进成纤维细胞凋亡、抑制纤维化相关基因表达。
本发明还提供含有甲基苯醌的喙尾琵琶甲提取物在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。
优选的，所述药物用于促进成纤维细胞凋亡、抑制纤维化相关基因表达。
优选的，所述喙尾琵琶甲为Blaps rynchopetera Fairmaire。
本发明还提供一种用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物，它是以甲基苯醌或含有甲基苯醌的喙尾琵琶甲提取物作为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
优选的，所述药物采用如下重量份的原料制成：
甲基苯醌0.5-1.5份、
白凡士林29.5-30.5份、
液体石蜡9份。
优选的，所述药物用于促进成纤维细胞凋亡、抑制纤维化相关基因表达。
优选的，所述喙尾琵琶甲为Blaps rynchopetera Fairmaire。
优选的，所述的制剂为溶液剂、喷干粉、软膏、乳膏、凝胶剂、酊剂、擦剂、醑剂、粉剂、油剂、糊剂、硬膏剂、涂膜剂或气雾剂。
本发明中，所述“喙尾琵琶甲”为Blaps rynchopetera Fairmaire，是鞘翅目(Coleoptera)拟步甲科(Tenebrionidae)琵琶甲属(Blaps)药用昆虫。
本发明通过实验发现甲基苯醌能够促进成纤维细胞的凋亡，降低IL-8、IL-β、ColⅠ、ColⅢ等纤维化相关基因表达，从而有效治疗增生性瘢痕，这表明甲基苯醌具有作为增生性瘢痕治疗药物的潜力，为临床治疗提供更多的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为实施例1中术后第49天愈合的伤口和HS组织的大体视图；
图2为实施例1中各组HE染色、Masson染色、VG染色、天狼星红染色对比；
图3为实施例1中各组瘢痕增生指数对比，其中，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图4为实施例1中各组Tunel染色及WB对比；
图5为各组促纤维化基因表达对比，其中，与模型组比较，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。
具体实施方式
以下实施例和实验例中，未具体说明的试剂和原料均为市售品。
实施例1甲基苯醌对增生性瘢痕的治疗作用
一、实验方法
1、兔耳增生性瘢痕(HS)模型的复制
普通级日本大耳白兔10只，体重3.0-3.3kg，兔龄3-4月，雌雄不拘，不含孕兔，双侧兔耳完整，普通级环境饲养，房间温度18-26℃，室内相对湿度60-80％，自由饮食，单只单笼饲养。所有白兔均来源于昆明医科大学实验动物中心，实验动物生产许可证号SCXK(滇)K2020-0004，本实验已通过云南中医药大学伦理委员会审批，伦理审批号R-062022157。
将3只兔子留作空白组，不作任何处理，正常喂食，其余兔子每耳选定6个位点，每个位点中心至少间隔2cm。将兔子固定于固定器中，暴露头部，剃毛器剔除毛发，酒精棉球消毒皮肤，25％乌拉坦4ml/kg耳缘静脉缓慢注射，麻醉成功后用角膜环钻分别在选定位点钻出环形伤口，每个伤口间隔1cm，深度达软骨表面，用镊子和剪刀去除皮肤，用刀片和剪刀去除软骨膜，保留软骨，止血，手术后3天内注意观察出血和分泌物，及时清洁伤口，之后自由饮水、进食，任伤口自然愈合。用药当天及用药后第7、14、21d拍照，观察创面愈合及瘢痕增生、退化情况及质地、色泽等改变。
2、实验设计与药物管理
对于术后愈合不佳，感染坏死的伤口予以剔除，伤口处形成明显高出正常皮肤且不超出创面范围的瘢痕组织，视为造模成功。将造模成功的兔子分为模型组和甲基苯醌组，模型组采用白凡士林和液体石蜡比例为8：2的混合均匀膏剂涂抹，甲基苯醌组采用甲基苯醌粉末(成都埃法生物科技有限公司，Purity：98％，AFBL006)：白凡士林：液体石蜡比例为1：30：9的混合均匀的柠檬黄色膏剂涂抹，每日3次，每次间隔3-4h，每次用量0.1-0.3g，均匀覆盖HS表面即可，每周拍照一次观察瘢痕变化，连续用药21d后20％乌拉坦麻醉过量致死。使用12mm角膜环钻切取范围包含HS边缘少量正常皮肤、深度包含软骨的兔耳HS组织，每组总量的一半用10％中性甲醛固定，作病理染色，另一半液氮速冻后-80℃冰箱保存，作RT-qPCR及WB检测。
3、组织学检查
将HS沿长轴切开然后石蜡包埋、切成4μm厚度的组织切片，进行苏木精和伊红(H&E)染色、马森三色(Masson)染色、VG染色、天狼星红染色及Tunel绿光染色。固定完成后，天狼星红染色在偏光下观察，以推断HS的纤维化的程度；Tunel染色在荧光显微镜(日本尼康，NIKON ECLIPSE C1)下观察，以判断Fb的凋亡情况；其他染色在正置光学显微镜(日本尼康，NIKON ECLIPSE E100)下观察胶原的含量、分布及排列情况。
4、瘢痕增生指数HI
使用HS的H&E染色载玻片计算瘢痕增生指数(HI)以量化瘢痕增殖的程度。HI的计算方法：将HE染色切片置于40×光镜下，视野包含瘢痕最高点、软骨表面，使用显微测量系统测量瘢痕最高点到软骨表面的距离A和正常皮肤到软骨表面的距离B，A/B即得HI。
5、RNA的提取和RT-qPCR
在转子-定子均质器的帮助下，使用天根总RNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司，北京，Cat：DP49，Lot：X0713)在术后第49days从组织中分离RNA。将2μl总RNA配合Promega逆转录试剂盒(Promega，USA，0004478178)配制成20μl的总体积进行逆转录，在42℃15min、70℃15min、4℃min中培养逆转录成cDNA。逆转完成后将2μl cDNA模板配合Promega荧光定量试剂盒(Promega，USA，0000531173)配置成20μl的总体积进行定量扩增。荧光定量PCR仪(Archimed X6，鲲鹏(徐州)科学仪器有限公司)的反应条件设置如下：95℃15s、55℃30s、72℃30s进行40个循环。检测的目标基因有Collagen I(COL I)、CollagenIII(COL I)、IL-8、IL-1β基因的表达量检测，基因序列附在表1中。每个感兴趣的基因都被归一化为管家基因β-actin，每个重复测定3次，并且相对于对照样品比较倍数变化(通过ΔΔCq法)。
表1用于定量聚合酶链反应分析的引物
6、Western blot
6.1总蛋白的提取
分别按照动物实验的分组方式，用预冷的PBS洗涤组织样本两次，每100μl压缩体积的组织样本加入1ml添加了PMSF的RIPA(P0013C)、1.5mol/L Tris HCl(pH6.8)(ST768)、1.5mol/L Tris HCl(pH8.8)(ST789)(Beyotime，ShangHai，China)，充分裂解后，4℃12000r离心5min，立即吸取上清至一预冷的Eppendorf管中，即为抽提得到的细胞蛋白，冻存于-80℃备用。通过BCA法进行蛋白定量，最后加入5×loading buffer沸水浴10min，样品制备完成，可以-20℃保存。
6.2凝胶电泳及转膜
根据待测蛋白分子量的不同，配制8％或10％的分离胶和4％的压缩胶，灌制SDS-PAGE凝胶。加入适量提前预冷的1×电泳缓冲液后，将之前生物标记的样品或细胞内总蛋白提取物加入泳道中(预染蛋白Maker和样品)。80V稳压电泳约30min，待样品进入分离胶后，调整电压为120V继续电泳。待目的条带到达合适位置时(参照预染蛋白Maker的位置)，结束电泳。按照目的蛋白的大小切下相应位置的凝胶，切下的凝胶放入转膜缓冲液中，其余凝胶弃去。比照凝胶大小剪PVDF膜(0.45μm)(IPFL85R)(Millipore，Schwalbach，Germany)，置于甲醇中活化1min，随后放入转膜缓冲液中浸泡，滤纸一并放入转膜缓冲液中浸泡15min。按照PVDF膜≥凝胶≥滤纸的原则制作转膜“三明治”，确保去除气泡后开始恒压转膜。转完成后，用丽春红s染液染膜5min，随后TBST清洗2次，观察膜上的蛋白。
6.3显影
用TBST将膜上的残余液体洗干净，然后用封口机将膜置于自封袋中，封好三边后，加入用TBST稀释至适当浓度的一抗(一抗稀释浓度见表2)，尽可能排出气泡，封闭袋口，4℃过夜。剪开自封袋，用TBST洗膜3次，每次10min。然后将膜置于封闭袋中，加入适量适当浓度的二抗(1:5 000)，封闭袋口，室温下孵育1h。剪开自封袋，用TBST洗膜3次，每次10min。等体积混合化学发光试剂A液和B液(ECL发光液)(A38555)(Thermo Fisher Scientific，Pittsburgh，PA，USA)；将膜蛋白面向下与此混合液充分接触；用GE发光成像工作站进行图像采集。
表2Antibodies and dilution
7、统计学方法
用GraphPad Prism 9.0(GraphPad Software，Inc.)软件处理数据，数据以表示。数据满足正态分布，若方差均匀，则采用ANOVA检验和Bonferroni校正进行多重比较。若方差不均匀，则采用Welch‘s ANOVA检验中的Dunnett’s T_3进行多重比较。若数据不满足正态分布，则使用Kruskal-Wallis检验中的Dunn‘s进行多重比较，当P<0.05时，认为数据的差异有统计学意义。
二、实验结果
1、甲基苯醌减少了HS的形成
大体观察，伤口在术后第21d完全重新上皮化。空白组无明显变化，与空白组相比，模型组中观察到局部HS高耸于周围未受损伤的皮肤之上，质地坚硬，颜色为淡红色。甲基苯醌组除少量药物导致的色素沉着外，形成的HS较模型组更平坦、柔软、更不明显(图1)。该实验结果表明，2.5％的甲基苯醌膏剂能改善HS的大体视图，使HS的外观更扁平。
2、甲基苯醌对HS组织学特征的影响
用药后第21d，10×H&E染色显示，空白组表皮和真皮层平整、无增生，与空白组相比，模型组瘢痕的表皮和真皮明显增生，高于未受伤的邻近皮肤水平，而甲基苯醌治疗后的增生组织高度明显降低；400×H&E染色显示，空白组胶原排列整齐，组织内散在分布少量Fb；模型组胶原排列紊乱，组织内大量炎性细胞浸润，Fb大量增殖呈活跃状态；甲基苯醌组胶原排列较无序，有少量炎性细胞浸润，Fb增殖较少。
400×Masson染色显示，空白组胶原(呈蓝色)排列整齐、有序；模型组胶原排列稀疏、紊乱，旋涡状结节较多；甲基苯醌组的胶原排列较稀疏，旋涡状结节较少。
200×VG染色显示，空白组表皮(呈黄色)层最薄，胶原(呈红色)排列最整齐，着色最深；模型组表皮层最厚，胶原排列紊乱稀疏，甲基苯醌治疗组表皮层较正常组厚，较模型组薄，胶原排列较空白组紊乱，较模型组有序。
天狼星红染色偏光镜显示，空白组以Ⅲ型胶原为主(呈绿色)，散在分布少量Ⅰ型胶原(呈红色或黄色)；模型组以Ⅰ型胶原为主，散在分布少量Ⅲ型胶原；甲基苯醌组的Ⅰ型和Ⅲ型胶原呈交错形态，Ⅰ型胶原较空白组增多，较模型组减少，Ⅲ型胶原较模型组明显增多，较空白组较少(图2)。
以上病理染色也在微观角度上表明了甲基苯醌能减少Fb的过度增殖、使HS的表皮变薄，更趋近于正常皮肤，令胶原排列更薄、更有序，使Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原的比例降低，使HS更加柔软有弹性。
3、甲基苯醌减轻了HS的HI
HI量化了HS增殖的程度。与空白组相比，模型组和治疗组的HI均升高；与模型组相比，甲基苯醌组的HI显著降低(图3)。以上结果表明，在定量评估形成的HS组织的厚度时，甲基苯醌明显降低了HS的厚度，并且组间差异显着。
4、甲基苯醌促进了HS的细胞凋亡
Tunel染色显示，空白组和模型组凋亡细胞(呈绿色)较少，而甲基苯醌组较多。此外，WB结果显示，模型组的促凋亡相关蛋白Bax及Cleaved casepase 3低于空白组，抗凋亡蛋白Bcl-2水平高于空白组，而甲基苯醌组的促凋亡相关蛋白Bax及Cleaved casepase 3的水平明显高于较其他两组，抗凋亡蛋白Bcl-2水平明显低于其他两组(图4)。
以上结果表明，甲基苯醌能促进Fb的凋亡。
5、甲基苯醌对HS基因表达的影响
与空白组相比，模型组和甲基苯醌组的IL-8、IL-1β、ColⅠ、ColⅢ等促HS的基因表达均升高；与模型组相比，甲基苯醌组的促HS的基因表达显著降低(图5)。
以上结果表明，甲基苯醌降低了IL-8、IL-β、ColⅠ、ColⅢ等促纤维化基因的表达。
通过上述实施例的结果可以看到，甲基苯醌能够促进成纤维细胞的凋亡，降低IL-8、IL-β、ColⅠ、ColⅢ等纤维化相关基因表达，从而有效治疗增生性瘢痕。因此，甲基苯醌具有作为增生性瘢痕治疗药物的潜力，具有很好的应用前景。
Claims (10)
1.甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物用于促进成纤维细胞凋亡、抑制纤维化相关基因表达。
3.含有甲基苯醌的喙尾琵琶甲提取物在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途。
4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于，所述药物用于促进成纤维细胞凋亡、抑制纤维化相关基因表达。
5.按照权利要求3所述的用途，其特征在于，所述喙尾琵琶甲为Blaps rynchopeteraFairmaire。
6.一种用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物，其特征在于，它是以甲基苯醌或含有甲基苯醌的喙尾琵琶甲提取物作为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
7.按照权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物采用如下重量份的原料制成：
甲基苯醌0.5-1.5份、
白凡士林29.5-30.5份、
液体石蜡9份。
8.按照权利要求6所述的药物，其特征在于：所述药物用于促进成纤维细胞凋亡、抑制纤维化相关基因表达。
9.按照权利要求6所述的药物，其特征在于，所述喙尾琵琶甲为Blaps rynchopeteraFairmaire。
10.按照权利要求6所述的药物，其特征在于，所述的制剂为溶液剂、喷干粉、软膏、乳膏、凝胶剂、酊剂、擦剂、醑剂、粉剂、油剂、糊剂、硬膏剂、涂膜剂或气雾剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311413658.0A CN117205191A (zh) | 2023-10-27 | 2023-10-27 | 甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311413658.0A CN117205191A (zh) | 2023-10-27 | 2023-10-27 | 甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117205191A true CN117205191A (zh) | 2023-12-12 |
Family
ID=89042783
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311413658.0A Pending CN117205191A (zh) | 2023-10-27 | 2023-10-27 | 甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117205191A (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4808339A (en) * | 1982-04-13 | 1989-02-28 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Benzoquinone derivatives |
| CN101010077A (zh) * | 2004-06-23 | 2007-08-01 | 罗伯特·F·霍夫曼 | 靶向的氧化性治疗制剂在烧伤治疗中的用途 |
| US20150164943A1 (en) * | 2013-12-17 | 2015-06-18 | Mary Kay Inc. | Applicator devices for skin care products |
| CN104998249A (zh) * | 2015-06-28 | 2015-10-28 | 中国人民解放军第四军医大学 | Sip1及其衍生物在制备预防和治疗增生性瘢痕药物中的应用 |
| US20180071547A1 (en) * | 2015-03-17 | 2018-03-15 | Inderm | Methods of Providing Skin Care Using Phototherapy |
| CN107898813A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-04-13 | 大理大学 | 喙尾琵琶甲的活性防御液及其获取方法和应用 |
| US20240254481A1 (en) * | 2019-08-14 | 2024-08-01 | Lonza Sales Ag | Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6 |
-
2023
- 2023-10-27 CN CN202311413658.0A patent/CN117205191A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4808339A (en) * | 1982-04-13 | 1989-02-28 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Benzoquinone derivatives |
| CN101010077A (zh) * | 2004-06-23 | 2007-08-01 | 罗伯特·F·霍夫曼 | 靶向的氧化性治疗制剂在烧伤治疗中的用途 |
| US20150164943A1 (en) * | 2013-12-17 | 2015-06-18 | Mary Kay Inc. | Applicator devices for skin care products |
| US20180071547A1 (en) * | 2015-03-17 | 2018-03-15 | Inderm | Methods of Providing Skin Care Using Phototherapy |
| CN104998249A (zh) * | 2015-06-28 | 2015-10-28 | 中国人民解放军第四军医大学 | Sip1及其衍生物在制备预防和治疗增生性瘢痕药物中的应用 |
| CN107898813A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-04-13 | 大理大学 | 喙尾琵琶甲的活性防御液及其获取方法和应用 |
| US20240254481A1 (en) * | 2019-08-14 | 2024-08-01 | Lonza Sales Ag | Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 贾力扬，等: "喙尾琵琶甲化学成分及药理应用的研究进展", 中医药学报, vol. 46, no. 06, 31 December 2018 (2018-12-31), pages 1 * |
| 赵文斌，等: "傣药咪多领(云南琵琶甲)对兔耳增生性瘢痕TGF-β1 mRNA表达的影响", 云南中医中药杂志, vol. 37, no. 01, 20 January 2016 (2016-01-20), pages 71 - 73 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2533458C2 (ru) | Композиции, содежащие берберин или его аналоги для лечения кожных заболеваний, связанных с розацеа или с покраснением лица | |
| JP7469400B2 (ja) | 創傷治癒を促進するための局所製剤 | |
| KR20030009454A (ko) | 진세노사이드Ｒｂ1으로 된 피부조직 재생촉진제 | |
| TWI308492B (zh) | ||
| AU2009244315A1 (en) | Estrogenic extracts for use in treating vaginal and vulvar atrophy | |
| Zheng et al. | The effect of topical ramipril and losartan cream in inhibiting scar formation | |
| CN110903348A (zh) | 一种促进伤口愈合的小肽及其应用 | |
| TWI580440B (zh) | The Application of Surface to Cosmetics | |
| US20230193276A1 (en) | Composition of drug targets and method of using thereof | |
| EP3747440A1 (en) | Method for destroying cellular mechanical homeostasis and promoting regeneration and repair of tissues and organs, and use thereof | |
| Huang et al. | AZD6738 decreases intraocular pressure and inhibits fibrotic response in trabecular meshwork through CHK1/P53 pathway | |
| H Mustafa et al. | Enhancing cutaneous wound healing: The therapeutic potential of topical curcumin extract in a rat model | |
| KR101818734B1 (ko) | 피뿌리풀 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 상처를 치료하기 위한 조성물 및 개체의 상처를 치료하는 방법 | |
| Soares et al. | Evaluation of the healing potential of Nile tilapia skin collagen in traumatic oral ulcers in male rats | |
| CN117205191A (zh) | 甲基苯醌在制备用于预防和/或治疗增生性瘢痕的药物中的用途 | |
| CN115991758B (zh) | 一种促进糖尿病创面愈合的珍珠粉多肽及其应用 | |
| CN103071058A (zh) | 一种石斛提取物及其应用 | |
| CN110511930B (zh) | Sal-miR-58及其在抑制血管炎性反应和动脉瘤形成中的用途 | |
| CN103372046A (zh) | 促进伤口愈合的医药组合物与接骨木属（蒴藋属）植物或菘蓝属植物用于制备促进伤口愈合之药物的用途 | |
| CN115192589A (zh) | 一种新异甘草苷在制备银屑病治疗药物中的应用 | |
| CN104606177B (zh) | 左旋(r)沙丁胺醇制剂在治疗皮肤及粘膜创伤溃疡的药物应用 | |
| JP6561135B2 (ja) | 狼毒抽出物またはその分画物を含む、傷を治療するための組成物、及び個体の傷を治療する方法 | |
| CN112691123A (zh) | 五谷虫涂膜剂的制备方法及其在糖尿病大鼠皮肤创伤愈合方面的应用 | |
| CN113929750B (zh) | 一种具有修复皮肤屏障功能的多肽及其应用 | |
| KR102646259B1 (ko) | 칼펩틴을 함유하는 화상 후 비후성 반흔 형성 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |