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CN116474120A - 重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用 - Google Patents

重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用 Download PDF

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CN116474120A
CN116474120A CN202310344412.6A CN202310344412A CN116474120A CN 116474120 A CN116474120 A CN 116474120A CN 202310344412 A CN202310344412 A CN 202310344412A CN 116474120 A CN116474120 A CN 116474120A
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CN
China
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mrna
aging
reprogramming factor
composition
reprogramming
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CN202310344412.6A
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王刚
于寅
杨帆
盛强龙
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Hangzhou Helin Biomedical Co ltd
Zhenhe Medicine Hangzhou Co ltd
Original Assignee
Zhenhe Medicine Hangzhou Co ltd
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Abstract

本申请涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用。本申请的重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用，通过化学修饰的mRNA作为非病毒的基因递送载体，避免了采用病毒载体固有的安全隐患，并且mRNA不进入细胞核，不会整合基因组，避免了DNA载体固有的肿瘤发生安全隐患，同时，有利于降低成本；由于化学修饰的mRNA为瞬时表达，有利于控制体内半衰期，提高抗衰老效果；通过调整第一mRNA和第二mRNA的摩尔比例，实现了不同重编程因子的比例控制，提高了抗衰老效果。

Description

重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用
技术领域
本申请涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用。
背景技术
表观遗传学的信息丢失是衰老发生、发展和转归的主要驱动力量之一，研究证明细胞中的重编程因子可以通过表观遗传学重编程，恢复丢失的表观遗传信息，从而部分逆转皮肤、心脏、肾脏、大脑、骨质疏松、卵巢以及睾丸等器官衰老，提高器官损伤修复的能力，延长实验动物寿命，是生物学的重大概念突破。
但是，有效抗衰老的表观遗传重编程的程度和持续时间有着非常严格要求，所以“表观遗传重编程抗衰老概念”和“转化为临床实践手段”之间存在鸿沟，至今基本还是空白，原因如下：首先，表观遗传重编程抗衰老需要在有效性和安全性之间找到平衡：抗衰老表观遗传重编程程度需要在40％-60％(平均57％)之间，太少不足以达到抗衰老的效果，太多会导致细胞性质发生变化从而发生癌变。其次，表观遗传学重编程的时间必须是间断而持续式，也不能一次持续的时间太长，否则会超过表观遗传重编程的60％而导致细胞性质发生变化而出现癌变。再次，传统抗衰老治疗以提高机体整体功能和延长寿命为唯一目标，效果难以或者无法定量，特定器官的原位抗衰老可以以特定器官功能和损伤后修复的效果进行定量评价，而后达到提高机体整体功能和延长寿命的目标，所以特定器官的原位抗衰老相比传统抗衰老，高度有利，但是目前特定器官的原位抗衰老研究基本空白。
背景技术中，仅有的特定器官水平的原位抗衰老案例是：在小鼠模型上，使用AAV(adeno-associated virus，腺病毒相关)病毒载体编码Oct4、Sox2、Klf4，在眼球原位完成部分逆转视神经衰老。但是上述方法还是无法桥接“表观遗传重编程抗衰老概念”和“转化为临床实践手段”之间存在的鸿沟，该方法在表观遗传重编程抗衰老的安全性和有效性存在难以克服的障碍，上述方法存在如下固有障碍：首先，AAV病毒载体，无论如何人工改造其都具有病毒属性，例如有一定的致死性过敏的发生率，有整合基因组而导致肿瘤风险等，这个是其固有的，传统安全隐患。其次，AAV病毒载体AAV编码Oct4、Sox2、Klf4重编程因子表达的时间大部分时间会在一年以上，如此长时间的持续表达Oct4、Sox2、Klf4重编程因子，会导致否则会超过表观遗传学重编程的60％而导致细胞性质发生变化而出现癌变，出现AAV病毒载体的新的安全隐患。再次，首次暴露于AAV病毒载体的宿主，会在数周内产生针对AAV的抗体，导致无法重复使用AAV作为载体进行基因治疗，而表观遗传抗衰老的基本前提就是反复多次，波浪冲击式进行表观遗传重编程，才可能达到抗衰老的效果，所以AAV病毒载体编码Oct4、Sox2、Klf4的表观遗传重编程抗衰老有效性有限。最后，AAV病毒载体治疗成本高昂，一个疗程治疗成本费用在百万美金之上。
发明内容
本申请的目的在于提供一种重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用，以解决上述技术问题。
第一方面，本申请提供一种重编程因子抗衰老mRNA组合物，包括：
编码Oct4转录因子的第一mRNA；
至少一种编码目标重编程因子的第二mRNA；
其中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的核苷酸进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述第一mRNA与所述第二mRNA的摩尔比为2～8。
可选地，所述目标重编程因子为Sox2转录因子、Klf4转录因子、c-Myc转录因子、Lin28转录因子或Glis1转录因子。
可选地，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的尿嘧啶进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少50％的尿嘧啶。
可选地，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的胞嘧啶进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少50％的胞嘧啶。
可选地，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的100％的尿嘧啶以及利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的100％的胞嘧啶。
可选地，所述第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；
每个所述第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个所述第二mRNA还包括信号肽序列。
可选地，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物还包括：
编码RNA依赖性RNA聚合酶的第三mRNA；
其中，所述第三mRNA的摩尔量为所述第一mRNA和所述第二mRNA的摩尔量之和的1～8倍。
可选地，所述RNA依赖性RNA聚合酶为甲病毒属突变型复制酶，所述突变型复制酶产生nsP2区域的第259位的突变以及nsP2区域的第650位的突变。
第二方面，本申请提供一种抗衰老制剂，包括重编程因子抗衰老mRNA组合物、二水合柠檬酸钠以及氯化钠，其中，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物为上述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物中所述第一mRNA和所述第二mRNA的质量之和、所述二水合柠檬酸钠的质量以及所述氯化钠的质量之比为1～2：1～4：4～8。
第三方面，本申请提供一种上述的重编程因子抗衰老mRNA组合物的制备方法，其特征在于，包括：
合成第一mRNA；
合成至少一个第二mRNA；
其中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的核苷酸进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述第一mRNA与所述第二mRNA的摩尔比为2～8。
第四方面，本申请提供上述的重编程因子抗衰老mRNA组合物或上述的抗衰老制剂在制备细胞重编辑试剂中的用途、在制备器官损伤后修复剂中的用途、在制备抗衰老药物中的用途。
本申请的重编程因子抗衰老mRNA组合物、制备方法及应用，通过化学修饰的mRNA作为非病毒的基因递送载体，避免了采用病毒载体固有的安全隐患，并且mRNA不进入细胞核，不会整合基因组，避免了DNA载体固有的肿瘤发生安全隐患，同时，有利于降低成本；由于化学修饰的mRNA为瞬时表达，有利于控制体内半衰期，提高抗衰老效果；通过调整第一mRNA和第二mRNA的摩尔比例，实现了不同重编程因子的比例控制，提高了抗衰老效果。
附图说明
图1a为本申请实施例1的抗衰老制剂的皮肤表达示意图；
图1b为本申请实施例1的抗衰老制剂与对比水剂的目标蛋白荧光强度对比图。
图1c为本申请实施例1的抗衰老制剂与对比水剂的目标蛋白荧光强度对比图。
图2为本申请实施例2的抗衰老制剂与对比水剂的心脏局部注射效果对比图。
图3为本申请实施例2与对比例1的iPS克隆数对比图。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图，对发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
mRNA组合物实施例
本申请实施例提供了一种重编程因子抗衰老mRNA组合物，包括：第一mRNA和至少一种第二mRNA，其中，第一mRNA编码Oct4转录因子，第二mRNA编码目标重编程因子，目标重编程因子为除Oct4转录因子外的其他重编程因子。
在本实施例中，可以包括一个第二mRNA。
在本实施例中，可以包括多个第二mRNA，多个第二mRNA分别编码第一个目标重编程因子、第二个目标重编程因子，…，第N个目标重编程因子，N为自然数。
其中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的核苷酸进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰。
其中，所述第一mRNA与所述第二mRNA的摩尔比为2～8。
本实施例的重编程因子抗衰老mRNA组合物，通过化学修饰的mRNA作为非病毒的基因递送载体，避免了采用病毒载体固有的安全隐患，并且mRNA不进入细胞核，不会整合基因组，避免了DNA载体固有的肿瘤发生安全隐患，同时，有利于降低成本；由于化学修饰的mRNA为瞬时表达，有利于控制体内半衰期，提高抗衰老效果；通过调整第一mRNA和第二mRNA的摩尔比例，实现了不同重编程因子的比例控制，提高了抗衰老效果。
在本实施例中，第一mRNA和至少一种第二mRNA进入细胞后，可以通过细胞中的RNA依赖性RNA聚合酶实现Oct4转录因子以及至少一种目标重编程因子的复制。
作为一种实施方式，当包括多种第二mRNA时，不同的第二mRNA的摩尔量可以相同。
作为一种实施方式，所述目标重编程因子为Sox2转录因子、Klf4转录因子、c-Myc转录因子、Lin28转录因子或Glis1转录因子。
在一些实施方式中，可以包括五种第二mRNA，分别为编码Sox2转录因子的第二mRNA、编码Klf4转录因子的第二mRNA、编码c-Myc转录因子的第二mRNA、编码Lin28转录因子的第二mRNA以及编码Glis1转录因子的第二mRNA。
进一步地，Oct4转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，Sox2转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，Klf4转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，c-Myc转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，Lin28转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，Glis1转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
作为一种实施方式，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的尿嘧啶进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少50％的尿嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷置、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少60％的尿嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少70％的尿嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少80％的尿嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少90％的尿嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少100％的尿嘧啶。
在一些实施方式中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的胞嘧啶进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少50％的胞嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少60％的胞嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少70％的胞嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少80％的胞嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少90％的胞嘧啶。
进一步地，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少100％的胞嘧啶。
本实施方式中，以天然修饰尿嘧啶核苷酸为中心联合天然修饰胞嘧啶核苷酸以及分别至少50％比例替代的特征性方案，增强了重编程因子抗衰老mRNA组合物的稳定性，降低了重编程因子抗衰老mRNA组合物的免疫原性。
在一些实施方式中，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的100％的尿嘧啶以及利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的100％的胞嘧啶。
作为一种实施方式，所述第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列。
每个所述第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个所述第二mRNA还包括信号肽序列。在第二mRNA中，所采用的目标重编程因子编码序列不同，信号肽序列的位置可能不同，信号肽序列的位置可以根据目标重编程因子编码序列进行确定。
在本实施方式中，5’UTR序列包括如SEQ ID NO.9所示的核酸序列对应的RNA序列，3’UTR序列包括如SEQ ID NO.10所示的核酸序列对应的RNA序列。
在本实施方式中，信号肽序列为核定位信号肽(Nuclear localization signalpeptide)序列，Oct4转录因子以及各目标重编程因子在核定位信号肽的作用下靶向至细胞核中。
作为一种实施方式，本实施例的重编程因子抗衰老mRNA组合物还包括：第三mRNA，第三mRNA编码RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，其中，所述第三mRNA的摩尔量为所述第一mRNA和所述第二mRNA的摩尔量之和的1～8倍。
在本实施方式中，可以通过第三mRNA编码的RNA依赖性RNA聚合酶实现Oct4转录因子以及至少一种目标重编程因子的复制。
在一些实施方式中，第三mRNA编码的RNA依赖性RNA聚合酶为甲病毒属突变型复制酶，所述突变型复制酶产生nsP2区域的第259位的突变以及nsP2区域的第650位的突变。具体地，所述突变型复制酶包括依次连接的nsP1区域(537个氨基酸)、nsP2区域(799个氨基酸)、nsP3区域(482个氨基酸)以及nsP4区域(1254个氨基酸)，所述突变型复制酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述突变型复制酶的两个突变点分别产生在SEQ ID NO.7所示的796位点(丝氨酸S突变为脯氨酸P)以及在SEQ ID NO.7所示的1187位点(精氨酸R突变为天冬氨酸D)。
在本实施方式中，通过对甲病毒属复制酶产生特异性的突变，降低甲病毒属复制酶的活性，可以通过第三mRNA编码的RNA依赖性RNA聚合酶实现Oct4转录因子以及至少一种目标重编程因子的有限自我复制，避免产生细胞毒性。
在一些实施方式中，所述第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、复制酶5’端特异性序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列、复制酶3’端特异性序列和3’UTR序列。
每个所述第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、复制酶5’端特异性序列、目标重编程因子编码序列、复制酶3’端特异性序列和3’UTR序列，每个所述第二mRNA还包括信号肽序列。
在本实施方式中，复制酶5’端特异性序列包括如SEQ ID NO.11所示的核酸序列对应的RNA序列，复制酶3’端特异性序列包括如SEQ ID NO.8所示的核酸序列对应的RNA序列。
抗衰老制剂实施例
本申请实施例提供一种抗衰老制剂，包括重编程因子抗衰老mRNA组合物、二水合柠檬酸钠以及氯化钠，其中，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物为上述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物中所述第一mRNA和所述第二mRNA的质量之和、所述二水合柠檬酸钠的质量以及所述氯化钠的质量之比为1～2：1～4：2～10。
作为一种实施方式，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物中所述第一mRNA和所述第二mRNA的质量之和、所述二水合柠檬酸钠的质量以及所述氯化钠的质量之比为1～2：1～4：4～8。
在本实施例中，抗衰老制剂可以为水剂，第一mRNA和第二mRNA的质量浓度为1～2mg/mL，二水合柠檬酸钠的质量浓度为1～4mg/mL，氯化钠的质量浓度为4～8mg/mL，水剂的pH值为6～8。
作为一种实施方式，当抗衰老制剂中重编程因子抗衰老mRNA组合物包括第三mRNA时，第三mRNA的摩尔量为第一mRNA和第二mRNA的摩尔量之和的1～8倍。
作为一种实施方式，对于逆转皮肤衰老的应用，可以利用皮内注射等局部注射方式以注射上述的抗衰老制剂水剂，以将100ug～1000ug的第一mRNA和第二mRNA导入，第一mRNA和第二mRNA导入至皮肤中的总量为100ug～1000ug。
作为一种实施方式，上述的抗衰老制剂水剂，对于心脏可以采用心脏局部注射，对于骨关节可以采用骨关节腔注射，对于肾脏可以采用皮肤或者静脉注射，对于脊髓和大脑可以采用脑脊液注射，从而达到逆转特定器官衰老和增强特定器官损伤再修复的功能。
制备方法实施例
本申请实施例提供一种重编程因子抗衰老mRNA组合物的制备方法，包括：
合成第一mRNA；
合成至少一个第二mRNA；
其中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的核苷酸进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述第一mRNA与所述第二mRNA的摩尔比为2～8。
作为一种实施方式，合成第一mRNA可以包括如下步骤：
提供第一mRNA的第一DNA转录模板，第一DNA转录模板按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；
在RNA聚合酶的作用下，对所述第一DNA转录模板进行体外转录，得到第一mRNA。
在一些实施方式中，体外转录以三磷酸核苷混合物及其化学修饰物为原料，化学修饰物包括N1-甲基假尿苷和5-甲基胞嘧啶，或者，化学修饰物包括N1-甲基假尿苷和5-羟甲基胞嘧啶。
作为一种实施方式，合成第二mRNA可以包括如下步骤：
提供第二mRNA的第二DNA转录模板，第二DNA转录模板按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个第二mRNA还包括信号肽序列；
在RNA聚合酶的作用下，对所述第二DNA转录模板进行体外转录，得到第二mRNA。
在一些实施方式中，体外转录以三磷酸核苷混合物及其化学修饰物为原料，化学修饰物包括N1-甲基假尿苷和5-甲基胞嘧啶，或者，化学修饰物包括N1-甲基假尿苷和5-羟甲基胞嘧啶。
用途实施例
本申请实施例提供了上述的重编程因子抗衰老mRNA组合物或上述的抗衰老制剂在制备细胞重编辑试剂中的用途、在制备器官损伤后修复剂中的用途、在制备抗衰老药物中的用途。
在一些实施方式中，采用离体人体全层皮肤模型，利用皮内注射等局部注射方式，导入该编码重编程因子的mRNA组合物，进而使该编码重编程因子，使得皮肤器官的衰老基因P16表达下调，氧自由基基因-锰超氧化物歧化酶2(SOD2)基因下调，细胞外基质青年化重朔即基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因，基质金属蛋白酶9(MMP-9)基因下调，胶原酶VI I表达上调组蛋白3赖氨酸9三甲基化(H3K9me3)上调，说明化学修饰mRNA编码重编程因子成功原位诱导皮肤表观遗传学重编程40～60％，达到至少部分逆转皮肤衰老的效果。
在一些实施方式中，在成体小鼠左前降支结扎心肌梗塞模型，通过受累区域局部心脏直接注射，使心肌梗塞区域缩小50％，说明化学修饰mRNA编码重编程因子成功原位诱导心肌细胞表观遗传重编程40～60％，达到至少部分逆转心脏衰老的效果，促使成体小鼠心肌细胞进入细胞复制，原位再生受损心脏。
此外，骨关节，肾脏，脊髓，卵巢，睾丸，大脑，骨质疏松等器官原位诱导表观遗传重编程40～60％，达到至少逆转相应器官衰老的效果。
实施例1:
化学修饰mRNA编码重编程因子原位诱导离体人体全层表观遗传重编程，至少原位部分逆转皮肤衰老。
步骤1：制备重编程因子抗衰老mRNA组合物
在本实施例中，重编程因子抗衰老mRNA组合物包括编码Oct4转录因子的第一mRNA、编码Sox2转录因子的第二mRNA、编码Klf4转录因子的第二mRNA、编码c-Myc转录因子的第二mRNA、编码Lin28转录因子的第二mRNA以及编码Glis1转录因子的第二mRNA。
其中，五种第二mRNA的摩尔量相同，第一mRNA的摩尔量与五种第二mRNA的摩尔量和之比为2～6。
第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；各第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个第二mRNA还包括信号肽序列。
步骤2：制备抗衰老制剂水剂
抗衰老制剂水剂中第一mRNA和第二mRNA的质量浓度为1～2mg/mL，二水合柠檬酸钠的质量浓度为1～4mg/mL，氯化钠的质量浓度为4～8mg/mL，水剂的pH值为6～8。
步骤3：离体人体皮肤培养
采用45-65岁腹部外科手术剩余皮肤，1小时内去除脂肪组织，保留皮肤全层，并修整为约2平方厘米的全层皮肤，培养在10％胎牛血清DMEM培养基，培养基液面不超过真皮层(表皮层不接触培养基)。
步骤4：处理组皮内注射
将上述包含重编程因子mRNA组合物的抗衰老制剂水剂100ug～1000ug，导入离体皮肤。
对照组皮内注射等量的对比水剂，其中，对比水剂包括质量浓度为1～2mg/mL的第四mRNA、质量浓度为1～4mg/mL的二水合柠檬酸钠以及质量浓度为4～8mg/mL的氯化钠，对比水剂的pH值为6～8，第四mRNA编码mCherry荧光蛋白，第四mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、mCherry报告基因对应的RNA序列和3’UTR序列。
步骤5：结果观察
注射后第6天，取皮肤全层组织，按常规制备组织切片，并完成免疫荧光染色，目标蛋白为：衰老基因P16蛋白，氧自由基基因-锰超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白，细胞外基质青年化重朔即基质金属蛋白酶-1(MMP-1)蛋白，基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白，胶原酶VII蛋白，组蛋白3赖氨酸9三甲基化(H3K9me3)蛋白，免疫荧光显微镜拍照后，Imagine J软件分析相应蛋白荧光强度。
请参阅图1a、图1b和图1c所示，编码重编程因子Oct4,Sox2,Klf4,cMyc,Lin28和Glis1化学修饰mRNA制剂皮内注射后可达到人体皮肤全层，并在离体人体全层皮肤原位诱导表观遗传重编程，成体心肌细胞进入细胞复制，至少部分逆转皮肤衰老。
在本实施例中，采用离体人体全层皮肤模型，利用皮内注射等局部注射方式，导入该编码重编程因子的mRNA组合物，进而使该编码重编程因子，使得皮肤器官的衰老基因P16表达下调，氧自由基基因-锰超氧化物歧化酶2(SOD2)基因下调，细胞外基质青年化重朔即基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因，基质金属蛋白酶9(MMP-9)基因下调，胶原酶VII表达上调组蛋白3赖氨酸9三甲基化(H3K9me3)上调，说明化学修饰mRNA编码重编程因子成功原位诱导皮肤表观遗传学重编程40～60％，达到至少部分逆转皮肤衰老的效果。
实施例2:
化学修饰mRNA编码重编程因子至少原位逆转心脏衰老治疗小鼠心肌梗塞。
步骤1：制备重编程因子抗衰老mRNA组合物
在本实施例中，重编程因子抗衰老mRNA组合物包括编码Oct4转录因子的第一mRNA、编码Sox2转录因子的第二mRNA、编码Klf4转录因子的第二mRNA、编码c-Myc转录因子的第二mRNA、编码Lin28转录因子的第二mRNA以及编码Glis1转录因子的第二mRNA。
其中，五种第二mRNA的摩尔量相同，第一mRNA的摩尔量与五种第二mRNA的摩尔量和之比为2～6。
第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；各第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个第二mRNA还包括信号肽序列。
步骤2：制备抗衰老制剂水剂
抗衰老制剂水剂中第一mRNA和第二mRNA的质量浓度为1～2mg/mL，二水合柠檬酸钠的质量浓度为1～4mg/mL，氯化钠的质量浓度为4～8mg/mL，水剂的pH值为6～8。
步骤3：心脏局部注射
常规建立小鼠心脏左前降支结扎心肌梗塞模型，后立即实施受累心脏采用心脏局部注射上述包含重编程因子mRNA组合物的抗衰老制剂水剂100ug～1000ug。
对照组心脏局部注射等量的对比水剂，其中，对比水剂包括质量浓度为1～2mg/mL的第四mRNA、质量浓度为1～4mg/mL的二水合柠檬酸钠以及质量浓度为4～8mg/mL的氯化钠，对比水剂的pH值为6～8，第四mRNA编码mCherry荧光蛋白，第四mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、mCherry报告基因对应的RNA序列和3’UTR序列。
步骤4：结果观察
注射后第49天取样，常规马森三色染色法(Masson's trichrome stain)，拍照，Imagine J软件分析心梗区域的面积。
请参阅图2所示，编码细胞重编程因子Oct4,Sox2,Klf4,cMyc,Lin28，Glis1化学修饰mRNA在成体小鼠模型原位诱导表观遗传重编程，成体心肌细胞进入细胞复制，至少部分逆转心肌梗塞。
实施例3
步骤1：制备重编程因子抗衰老mRNA组合物
在本实施例中，重编程因子抗衰老mRNA组合物包括编码Oct4转录因子的第一mRNA、编码Sox2转录因子的第二mRNA、编码Klf4转录因子的第二mRNA、编码c-Myc转录因子的第二mRNA、编码Lin28转录因子的第二mRNA以及编码Glis1转录因子的第二mRNA。
其中，五种第二mRNA的摩尔量相同，第一mRNA的摩尔量与五种第二mRNA的摩尔量和之比为2～8。
第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；各第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个第二mRNA还包括信号肽序列。
步骤2：制备抗衰老制剂水剂
抗衰老制剂水剂中第一mRNA和第二mRNA的质量浓度为1～2mg/mL，二水合柠檬酸钠的质量浓度为1～4mg/mL，氯化钠的质量浓度为4～8mg/mL，水剂的pH值为6～8。
步骤3：转染小鼠胚胎成纤维细胞
将上述包含重编程因子mRNA组合物的抗衰老制剂水剂100ug～1000ug，导入小鼠胚胎成纤维细胞。
对比例1
步骤1：制备重编程因子抗衰老mRNA组合物
在本实施例中，重编程因子抗衰老mRNA组合物包括编码Oct4转录因子的第一mRNA、编码Sox2转录因子的第二mRNA、编码Klf4转录因子的第二mRNA、编码c-Myc转录因子的第二mRNA、编码Lin28转录因子的第二mRNA以及编码Glis1转录因子的第二mRNA。
其中，五种第二mRNA的摩尔量相同，第一mRNA的摩尔量与五种第二mRNA的摩尔量和之比为1:1。
第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；各第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个第二mRNA还包括信号肽序列。
步骤2：制备抗衰老制剂水剂
抗衰老制剂水剂中第一mRNA和第二mRNA的质量浓度为1～2mg/mL，二水合柠檬酸钠的质量浓度为1～4mg/mL，氯化钠的质量浓度为4～8mg/mL，水剂的pH值为6～8。
步骤3：转染小鼠胚胎成纤维细胞
将上述包含重编程因子mRNA组合物的抗衰老制剂水剂100ug～1000ug，导入小鼠胚胎成纤维细胞。
实施例3与对比例1结果观察请参阅图3所示，实施例3中第一mRNA与第二mRNA的摩尔比为2～8，对比例1中第一mRNA与第二mRNA的摩尔比为1:1，将二者摩尔比控制在2～8，能够显著提高iPS克隆数量，有利于增强重编程效果。
以上所述的仅是本申请的实施方式，在此应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请创造构思的前提下，还可以做出改进，但这些均属于本申请的保护范围。

Claims (11)

1.一种重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，包括：
编码Oct4转录因子的第一mRNA；
至少一种编码目标重编程因子的第二mRNA；
其中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的核苷酸进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述第一mRNA与所述第二mRNA的摩尔比为2～8。
2.根据权利要求1所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述目标重编程因子为Sox2转录因子、Klf4转录因子、c-Myc转录因子、Lin28转录因子或Glis1转录因子。
3.根据权利要求1所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的尿嘧啶进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少50％的尿嘧啶。
4.根据权利要求3所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的胞嘧啶进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述化学修饰包括利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶，置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的至少50％的胞嘧啶。
5.根据权利要求4所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述化学修饰包括利用N1-甲基假尿苷、假尿嘧啶或甲基尿嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的100％的尿嘧啶以及利用5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶置换所述第一mRNA或所述第二mRNA中的100％的胞嘧啶。
6.根据权利要求2所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述第一mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、信号肽序列、Oct4转录因子编码序列和3’UTR序列；
每个所述第二mRNA按照5’→3’方向依次包括如下元件：5’UTR序列、目标重编程因子编码序列和3’UTR序列，每个所述第二mRNA还包括信号肽序列。
7.根据权利要求1～6任一项所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物还包括：
编码RNA依赖性RNA聚合酶的第三mRNA；
其中，所述第三mRNA的摩尔量为所述第一mRNA和所述第二mRNA的摩尔量之和的1～8倍。
8.根据权利要求7所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，其特征在于，所述RNA依赖性RNA聚合酶为甲病毒属突变型复制酶，所述突变型复制酶产生nsP2区域的第259位的突变以及nsP2区域的第650位的突变。
9.一种抗衰老制剂，其特征在于，包括重编程因子抗衰老mRNA组合物、二水合柠檬酸钠以及氯化钠，其中，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物为如权利要求1～8任一项所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物，所述重编程因子抗衰老mRNA组合物中所述第一mRNA和所述第二mRNA的质量之和、所述二水合柠檬酸钠的质量以及所述氯化钠的质量之比为1～2：1～4：4～8。
10.一种如权利要求1所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物的制备方法，其特征在于，包括：
合成第一mRNA；
合成至少一个第二mRNA；
其中，所述第一mRNA或所述第二mRNA中部分或全部的核苷酸进行了能够提高所述第一mRNA或所述第二mRNA在生物体内稳定性的化学修饰，所述第一mRNA与所述第二mRNA的摩尔比为2～8。
11.如权利要求1～8中任一项所述的重编程因子抗衰老mRNA组合物或如权利要求9所述的抗衰老制剂在制备细胞重编辑试剂中的用途、在制备器官损伤后修复剂中的用途、在制备抗衰老药物中的用途。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116870197A (zh) * 2023-08-15 2023-10-13 臻赫医药(杭州)有限公司 促组织细胞增生重编程因子制剂及用途
CN116898988A (zh) * 2023-08-15 2023-10-20 臻赫医药(杭州)有限公司 皮肤重编程因子制剂、生物材料及用途
WO2024213176A1 (zh) * 2023-04-14 2024-10-17 臻赫医药(杭州)有限公司 重编程因子抗衰老表达系统、生物材料及用途

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102115760A (zh) * 2009-12-30 2011-07-06 高丽大学校产学协力团 使体细胞重编程以形成诱导全能干细胞的组合物,和用其形成诱导全能干细胞的方法
US20170037376A1 (en) * 2013-11-15 2017-02-09 Guangzhou Institutes Of Biomedicine And Health, Chinese Academy Of Sciences Method for preparing induced pluripotent stem cell, composition used in method, and uses thereof
CN107099499A (zh) * 2016-06-03 2017-08-29 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 将消化道来源上皮细胞重编程为内胚层干/祖细胞的小分子化合物组合、重编程试剂盒
CN110804582A (zh) * 2019-10-29 2020-02-18 广州再生医学与健康广东省实验室 一种体细胞重编程的方法及其应用
CN111356444A (zh) * 2017-10-31 2020-06-30 摩登纳特斯有限公司 用于递送编码vegf-a多肽的经修饰的rna的脂质纳米颗粒
CN113846113A (zh) * 2021-09-09 2021-12-28 臻赫医药(杭州)有限公司 一种有限自我复制mRNA分子系统、制备方法及应用
WO2023288287A2 (en) * 2021-07-15 2023-01-19 Turn Biotechnologies, Inc. Synthetic, persistent rna constructs and methods of use for cell rejuvenation and for treatment

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3690056T5 (da) * 2014-01-31 2024-08-26 Factor Bioscience Inc Fremgangsmåder og produkter til fremstilling og indgivelse af nukleinsyre
IL298524B2 (en) * 2015-06-12 2024-03-01 Lonza Walkersville Inc Methods for nuclear reprogramming using synthetic transcription factors
WO2023288285A1 (en) * 2021-07-15 2023-01-19 Turn Biotechnologies, Inc. Polycistronic expression vectors
CN114533864A (zh) * 2022-02-21 2022-05-27 苏州祥龙生物医药科技有限公司 基于重编程因子的抗衰老疫苗及其制备方法
CN116426573A (zh) * 2023-04-14 2023-07-14 臻赫医药(杭州)有限公司 重编程因子抗衰老表达系统、生物材料及用途

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102115760A (zh) * 2009-12-30 2011-07-06 高丽大学校产学协力团 使体细胞重编程以形成诱导全能干细胞的组合物,和用其形成诱导全能干细胞的方法
US20170037376A1 (en) * 2013-11-15 2017-02-09 Guangzhou Institutes Of Biomedicine And Health, Chinese Academy Of Sciences Method for preparing induced pluripotent stem cell, composition used in method, and uses thereof
CN107099499A (zh) * 2016-06-03 2017-08-29 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 将消化道来源上皮细胞重编程为内胚层干/祖细胞的小分子化合物组合、重编程试剂盒
CN111356444A (zh) * 2017-10-31 2020-06-30 摩登纳特斯有限公司 用于递送编码vegf-a多肽的经修饰的rna的脂质纳米颗粒
CN110804582A (zh) * 2019-10-29 2020-02-18 广州再生医学与健康广东省实验室 一种体细胞重编程的方法及其应用
WO2023288287A2 (en) * 2021-07-15 2023-01-19 Turn Biotechnologies, Inc. Synthetic, persistent rna constructs and methods of use for cell rejuvenation and for treatment
CN113846113A (zh) * 2021-09-09 2021-12-28 臻赫医药(杭州)有限公司 一种有限自我复制mRNA分子系统、制备方法及应用
WO2023035372A1 (zh) * 2021-09-09 2023-03-16 臻赫医药(杭州)有限公司 一种有限自我复制mRNA分子系统、制备方法及应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TIEMANN, U: "Optimal Reprogramming Factor Stoichiometry Increases Colony Numbers and Affects Molecular Characteristics of Murine Induced Pluripotent Stem Cells", CYTOMETRY PARTA, vol. 79, no. 6, 4 May 2011 (2011-05-04), pages 1 *
WARREN, L: "Highly Efficient Reprogramming to Pluripotency and Directed Differentiation of Human Cells with Synthetic Modified mRNA", CELL STEM CELL, vol. 7, no. 5, 5 November 2010 (2010-11-05), pages 618 *
刘特: "非编码RNA表观遗传学", 31 May 2019, 同济大学出版社, pages: 76 *
李佳佳;马利兵;陈秀莉;籍凤宇;: "诱导性多能干细胞构建策略及其提高重编程效率的方法", 生物技术通报, no. 07, 26 July 2012 (2012-07-26), pages 2 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024213176A1 (zh) * 2023-04-14 2024-10-17 臻赫医药(杭州)有限公司 重编程因子抗衰老表达系统、生物材料及用途
WO2024212336A1 (zh) * 2023-04-14 2024-10-17 臻赫医药(杭州)有限公司 重编程因子抗衰老表达系统、生物材料及用途
CN116870197A (zh) * 2023-08-15 2023-10-13 臻赫医药(杭州)有限公司 促组织细胞增生重编程因子制剂及用途
CN116898988A (zh) * 2023-08-15 2023-10-20 臻赫医药(杭州)有限公司 皮肤重编程因子制剂、生物材料及用途

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