CN114605418B

CN114605418B - 一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物及其合成方法与应用

Info

Publication number: CN114605418B
Application number: CN202210255220.3A
Authority: CN
Inventors: 夏娟; 武康雄; 梁承远; 辛亮; 张少军; 李京忆; 田蕾; 范明明; 韩俊杰
Original assignee: Affiliated Hospital of Guangdong Medical University
Current assignee: Affiliated Hospital of Guangdong Medical University
Priority date: 2022-03-15
Filing date: 2022-03-15
Publication date: 2023-09-05
Anticipated expiration: 2042-03-15
Also published as: CN114605418A

Abstract

本发明公开了一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物及其合成方法与应用，属于医药化学领域。该类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物还涉及所述化合物的药学上可接受的盐；其合成途径包含两条路线：合成路线Ⅰ是在非质子溶剂、有机碱和催化剂的条件下进行酸胺缩合得到；合成路线Ⅱ是以离子液体作为溶剂，在催化剂的作用下合成得到。本发明还具体公开了其在抗肿瘤药物中的应用，通过活性筛选，具有较好的抗肿瘤活性，特别是有望在制备抗血液肿瘤药物中得到推广应用。

Description

一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物及其合成方法与应用

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物及其合成方法与应用。

背景技术

恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，极大地危害人类的健康，并将成为新世纪人类的第一杀手。恶性肿瘤包括实体瘤(如肺癌、肝癌、胃癌、肠癌等)和血液肿瘤(如白血病、淋巴瘤等)，两者疾病的发生发展和治疗方式有着较为显著的不同，其中白血病和淋巴瘤是较常见的两种血液肿瘤。

依鲁替尼(Ibrutinib)是一种口服的布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂类首创新药，用于治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)和套细胞淋巴瘤(MCL)。该药通过与靶蛋白BTK活性位点半胱氨酸残基(Cys-481)选择性地共价结合，不可逆性地抑制BTK，从而有效地阻止肿瘤从B细胞迁移到适应于肿瘤生长环境的淋巴组织。

大量研究表明芳基丙烯酸类化合物具有良好的抗肿瘤活性，其中，最具代表性的化合物是肉桂酸。肉桂酸对于多种肿瘤细胞具有抑制生长增殖、诱导分化的作用。肉桂酸可以刺激过氧化物酶增殖活化受体(PPAR)活化，抑制癌基因及蛋白酶的表达，破坏肿瘤细胞侵袭能力，刺激T细胞对肿瘤细胞产生免疫反应。同时，肉桂酸能阻碍甲羟戊酸途径，从而抑制肿瘤细胞生长调节蛋白的合成，阻断肿瘤细胞增殖。基于芳基丙烯酸类化合物自身具有抗肿瘤活性，且具有分子量小、价格低廉的特点，在抗肿瘤药物设计中常与其他具有抗肿瘤活性的结构进行拼合，以求协同发挥抗肿瘤活性，这种生物活性片段拼接策略使得芳基丙烯酸类化合物在药物化学研究中得到广泛应用。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物及其合成方法与应用，用于抗肿瘤药物的制备。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物，为式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐，以及所述的式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物；

所述式Ⅰ化合物的结构式为：

其中，R₁为氢原子或氰基取代；

R为其中R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、卤素原子、硝基、甲氧基、三氟甲基或二甲氨基。

优选地，代表性化合物选自如下化合物：

优选地，所述药学上可接受的盐为依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富马酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的盐。

本发明还公开了合成上述具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物的方法，合成路线Ⅰ是在非质子溶剂、有机碱和催化剂条件下，各取代芳基丙烯酸类化合物与3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺进行酸胺缩合制得依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物；合成路线Ⅱ是直接以各取代芳基丙烯酸类化合物和3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺为原料，离子液体作为溶剂，在催化剂的作用下合成制得依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物。

优选地，合成路线Ⅰ的具体制备过程如下：

1)将各取代芳基丙烯酸类化合物、催化剂和有机碱溶于非质子溶剂中，置于反应器中，室温下搅拌活化；

2)活化完全后，将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺溶于非质子溶剂，加入至步骤1)的反应器中搅拌反应；

3)薄层色谱法跟踪反应至完全，将反应液减压浓缩除去溶剂，所得粗产物经洗涤、萃取、收集有机相，分离纯化，干燥得到目标产物。

进一步优选地，步骤1)中的催化剂为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N，N'-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N'-二异丙基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶或1-羟基苯并三唑；有机碱为三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉；非质子溶剂为二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。

优选地，合成路线Ⅱ的具体制备过程如下：

1)将各取代芳基丙烯类化合物、3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺以及硅钼酸加入到反应器中，溶解，通入氮气保护，在25-60℃下，搅拌反应；

2)薄层色谱法跟踪反应至完全，将反应液萃取、减压浓缩和重结晶纯化，干燥得到目标产物。

进一步优选地，步骤1)中的3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺和各取代芳基丙烯酸类化合物的摩尔比为1:(1-1.4)。

本发明还公开了上述具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物在制备抗肿瘤药物的制剂中的应用。

优选地，所述肿瘤为血液系统肿瘤疾病。

进一步优选地，所述血液系统肿瘤疾病为急性T细胞白血病。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物，通过体外抗肿瘤活性实验发现，本发明合成的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物的优选化合物6、10和14在1μM浓度下对于Jurkat细胞的增殖抑制率分别为24.13％、23.14％和25.73％，优于阳性对照药物依鲁替尼的增殖抑制率19.98％；通过细胞形态学观察发现，经以上化合物处理的Jurkat细胞增殖数量显著减少，细胞发生了明显的形态学变化，出现如细胞皱缩等死亡特征；对于Daudi细胞，大部分依鲁替尼肉桂酰胺类化合物在10μM浓度下的增殖抑制能力与阳性对照药物依鲁替尼相近，部分抑制率在90％以上；观察经不同浓度化合物处理的Daudi细胞形态，随着化合物给药浓度的增大，细胞排列逐渐稀疏，出现细胞固缩、体积缩小等死亡特征。抗肿瘤活性实验验证了本发明提供的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物有潜力作为新型抗肿瘤药物应用于制备抗肿瘤药物的制剂中，特别是血液肿瘤药物的制备中，进一步为急性T细胞白血病。

本发明提供的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物的合成方法，两种合成方法利用芳基丙烯酸类化合物对3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺(依鲁替尼中间体化合物19)进行结构改造，获得了一类新型依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物，其中合成方法Ⅱ使用离子液体作为溶剂还尚未见报道，本发明提供的制备方法操作安全性高、反应条件温和并且成本低廉，制得的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物产率较高，在62.66％-83.74％之间，适用于工业化生产。

附图说明

图1为本发明中化合物1在氘代氯仿中的核磁氢谱图；

图2为本发明中化合物1在氘代氯仿中的核磁碳谱图；

图3是本发明中化合物8在氘代氯仿中的核磁氢谱图；

图4是本发明中化合物8在氘代氯仿中的核磁碳谱图；

图5是本发明中化合物10在氘代氯仿中的核磁氢谱图；

图6是本发明中化合物10在氘代氯仿中的核磁碳谱图；

图7是本发明中化合物11在氘代氯仿中的核磁氢谱图；

图8是本发明中化合物11在氘代氯仿中的核磁碳谱图；

图9是本发明中依鲁替尼肉桂酰胺类化合物在浓度为1μM和10μM时对U937细胞的细胞毒作用图；

图10是本发明中依鲁替尼肉桂酰胺类化合物在浓度为1μM和10μM时对Jurkat细胞的细胞毒作用图；

图11是本发明中依鲁替尼肉桂酰胺类化合物在浓度为1μM和10μM时对Daudi细胞的细胞毒作用图；

图12为本发明中化合物6、10、14与阳性对照药物依鲁替尼对Jurkat细胞的形态学影像图；其中，a为化合物6(10μM)，b为化合物6(1μM)，c为化合物10(10μM)，d为化合物10(1μM)，e为化合物14(10μM)，f为化合物14(1μM)，g为阳性对照药物依鲁替尼(10μM)，h为阳性对照药物依鲁替尼(1μM)；

图13为本发明中化合物10、13、14与阳性对照药物依鲁替尼对Daudi细胞的形态学影像图；其中，a为化合物10(10μM)，b为化合物10(1μM)，c为化合物13(10μM)，d为化合物13(1μM)，e为化合物14(10μM)，f为化合物14(1μM)，g为阳性对照药物依鲁替尼(10μM)，h为阳性对照药物依鲁替尼(1μM)。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

下面结合附图1-13对本发明做进一步详细描述：

本发明提供的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物的结构式如式Ⅰ所示：

其中，R₁为氢原子或氰基取代；

R为其中R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、卤素原子、硝基、甲氧基、三氟甲基或二甲氨基；术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。

本发明提供的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物还包括式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物。

本发明提供的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物涉及所述化合物的药学上可接受的盐，所述药学上可接受的盐为依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富马酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的盐；所述的药学上可接受的盐优选具有如下结构式:

本发明提供的合成上述具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物的合成路线如下所示：

合成路线Ⅰ是在非质子溶剂、有机碱和催化剂条件下，各取代芳基丙烯酸类化合物与3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺(化合物19)进行酸胺缩合得到；合成路线Ⅱ是直接以各取代芳基丙烯酸类化合物和依鲁替尼中间体(化合物19)为原料，离子液体作为溶剂，在催化剂的作用下合成得到；

其中，化合物19的结构如下图所示：

本发明提供的所述化合物的合成路线Ⅰ如下所示：

为了实现上述合成路线Ⅰ，本发明的合成步骤如下：

(1)将取代芳基丙烯酸类化合物、催化剂和有机碱溶于非质子溶剂中，置于反应器中，室温下搅拌活化1h；

其中，所述催化剂为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N，N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)、N,N'-羰基二咪唑(CDI)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-羟基苯并三唑(HOBT)或4-吡咯烷基吡啶(4-PPY)，进一步优选为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)；所述有机碱为三乙胺(TEA)、N，N-二异丙基乙胺(DIEA)、N-甲基吗啉(NMM)、吗啉或吡啶，进一步优选为N，N-二异丙基乙胺(DIEA)；所述非质子溶剂为二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或乙腈，进一步优选为二氯甲烷；

(2)活化完全后，将化合物19溶于非质子溶剂，滴加加入至步骤(1)的反应器中搅拌反应8-12h；

(3)薄层色谱法跟踪反应至完全，将反应液减压浓缩除去溶剂，所得粗产物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化，干燥得到目标产物。

本发明提供的所述化合物的合成路线Ⅱ如下所示：

为了实现上述合成路线Ⅱ，本发明的合成步骤如下：

(1)将取代芳基丙烯类化合物、化合物19以及催化剂硅钼酸加入到反应器中，使用离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐溶解，通入氮气保护，在25-60℃温度下，搅拌反应4-8h；

其中，所述化合物19和各取代芳基丙烯酸类化合物的摩尔比为1:(1-1.4)，进一步优化为1:(1-1.2)；反应温度进一步优选为30℃，反应时间进一步优选为5h；

(2)薄层色谱法跟踪反应至完全，将反应液通过萃取和减压浓缩的方法除去催化剂和离子液体，然后重结晶纯化，干燥得到目标产物。

1.合成化合物1-15的具体实施例

代表性化合物的结构式、编号如下：

下面给出上述化合物合成的实施例，化合物的结构经NMR表征。

实施例1

化合物1：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-苯基丙-2-烯-1-酮的制备

将74.1mg(0.5mmol)肉桂酸溶于3mL二氯甲烷后置于反应器中，向其中加入HATU380.2mg(1mmol)和DIEA 260μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的二氯甲烷，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应8小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液减压浓缩除去二氯甲烷，所得固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，后经干燥得到216.3mg目标产物化合物1，产率为83.74％。化合物1在氘代氯仿中的核磁氢谱如图1所示，核磁碳谱如图2所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),7.70(d,J＝8.2Hz,3H),7.60–7.37(m,7H),7.27–7.17(m,3H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.96(t,J＝19.3Hz,1H),5.95–5.74(m,1H),5.09–4.87(m,1.5H),4.61(d,J＝12.8Hz,0.5H),4.45–4.15(m,1H),3.92(t,J＝11.8Hz,0.5H),3.58–3.22(m,1H),3.11(t,J＝13.3Hz,0.5H),2.59–2.25(m,2H),2.21–2.03(m,1H),1.88–1.73(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.88,158.61,157.58,156.32,155.04,154.19,144.09,143.08,135.25,129.99,129.61,129.21,128.77,127.77,126.12,124.08,119.57,119.14,117.24,98.58,56.31,51.46,38.61,30.80,28.35.

实施例2

化合物2：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(2-氟苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将99.7mg(0.6mmol)2-氟肉桂酸、193.3mg(0.5mmol)化合物19与8.6mg(5μmol)硅钼酸依次置于150mL反应器中，加入71.5mL离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐充分溶解后，通入N₂保护，在30℃下搅拌反应5h。薄层色谱法跟踪反应至完全，撤去保护装置。将反应混合体系置于分液漏斗中，振荡，静置分层，将离子液体层与酯层分离，所得酯层为肉桂酸酯类衍生物粗品。用50mL甲醇进行重结晶干燥即得212.1mg目标产物化合物2，总收率为79.35％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.39(s,1H),7.80–7.66(m,3H),7.59–7.39(m,4H),7.23–7.03(m,8H),6.04-5.79(m,1H),5.01–4.91(m,1.5H),4.57(d,J＝13.0Hz,0.5H),4.37–4.12(m,1H),3.92(t,J＝11.8Hz,0.5H),3.49(t,J＝12.6Hz,0.5H),3.30(t,J＝13.1Hz,0.5H),3.11(t,J＝12.3Hz,0.5H),2.69–2.27(m,2H),2.16–2.04(m,1H),1.88–1.74(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.96,161.32,158.64,157.44,156.42,155.03,154.18,144.10,143.29,129.96,128.77,128.09,127.56,126.09,124.67,124.32,123.17,119.59,119.15,118.84,115.47,98.67,56.50,51.48,38.63,30.79,28.36.

实施例3

化合物3：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-氟苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将83.1mg(0.5mmol)4-氟肉桂酸溶于3mL二氯甲烷后置于反应器中，向其中加入HATU 380.2mg(1mmol)和TEA 210μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的二氯甲烷，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应8小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液减压浓缩除去二氯甲烷，所得固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，后经干燥得到211.9mg目标产物化合物3，产率为79.28％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.39(s,1H),7.82–7.59(m,3H),7.46–7.39(m,4H),7.25–7.15(m,3H),7.15–7.00(m,4H),6.86(t,J＝18.6Hz,1H),6.00–5.76(m,1H),5.00–4.90(m,1.5H),4.58(d,J＝12.4Hz,0.5H),4.38–4.13(m,1H),3.92(t,J＝11.7Hz,0.5H),3.47(t,J＝12.4Hz,0.5H),3.36–3.21(m,0.5H),3.07(t,J＝12.1Hz,0.5H),2.59–2.26(m,2H),2.08(d,J＝13.6Hz,1H),1.89–1.73(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.78,161.12,158.54,157.34,156.34,155.09,154.29,144.11,142.36,131.22,130.10,128.59,127.65,126.08,123.99,119.56,119.14,118.42,115.43,98.56,56.26,51.57,38.64,30.75,28.38.

实施例4

化合物4：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(3，4-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将92.1mg(0.5mmol)3，4-二氟肉桂酸溶于3mL二氯甲烷后置于反应器中，向其中加入HATU 380.2mg(1mmol)和NMM 170μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的二氯甲烷，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应10小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液减压浓缩除去二氯甲烷，所得固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到218.1mg目标产物化合物4，产率为71.57％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.41(s,1H),7.61–7.40(m,3H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.25–7.13(m,3H),7.13–7.00(m,4H),6.83-6.75(m,2H),5.96–5.80(m,1H),5.02–4.89(m,1.5H),4.56(d,J＝12.8Hz,0.5H),4.39–4.10(m,1H),3.92(t,J＝11.6Hz,0.5H),3.48(t,J＝12.7Hz,0.5H),3.38–3.20(m,0.5H),3.10(t,J＝12.0Hz,0.5H),2.63–2.26(m,2H),2.10(d,J＝13.5Hz,1H),1.89–1.74(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.88,158.62,157.44,156.32,155.01,154.22,149.43,148.72,144.13,143.02,132.46,128.73 127.67,126.14,125.92,125.14,124.08,119.56,119.22,118.53,112.83,98.66,56.43,51.36,38.65,30.73,28.35.

实施例5

化合物5：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(3，4，5-三氟苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将121.3mg(0.6mmol)3，4，5-三氟肉桂酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺后置于反应器中，向其中加入EDCI 191.7mg(1mmol)、HOBT 135.1mg(1mmol)和DIEA 260μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应10小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到230.3mg目标产物化合物5，产率为80.72％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.40(s,1H),7.61–7.40(m,2H),7.42(t,J＝8.3Hz,2H),7.25–7.15(m,3H),7.12–7.01(m,3H),6.84-6.74(m,3H),5.99–5.80(m,1H),5.00–4.88(m,1.5H),4.55(d,J＝12.7Hz,0.5H),4.40–4.10(m,1H),3.91(t,J＝11.4Hz,0.5H),3.48(t,J＝12.6Hz,0.5H),3.40–3.21(m,0.5H),3.10(t,J＝12.2Hz,0.5H),2.62–2.26(m,2H),2.11(d,J＝13.5Hz,1H),1.86–1.75(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.82,159.53,158.61,157.43,156.23,154.94,154.13,144.12,143.29,139.33,134.02,128.63,127.77,126.10,124.09,119.65,119.14,118.56,108.42,98.66,56.53,51.53,38.55,30.68,28.33.

实施例6

化合物6：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将129.7mg(0.6mmol)4-三氟甲基肉桂酸、193.3mg(0.5mmol)化合物19与8.6mg(5μmol)硅钼酸依次置于150mL反应器中，加入71.5mL离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐充分溶解后，通入N₂保护，在25℃下反应8h。薄层色谱法跟踪反应至完全，撤去保护装置。将反应混合体系置于分液漏斗中，振荡，静置分层，将离子液体层与酯层分离，所得酯层为肉桂酸酯类衍生物粗品。用50mL甲醇进行重结晶干燥即得218.5mg目标产物化合物6，总收率为74.76％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.40(s,1H),7.80–7.57(m,3H),7.47–7.39(m,4H),7.27–7.14(m,3H),7.15–7.01(m,4H),6.83(t,J＝18.7Hz,1H),6.05–5.79(m,1H),5.01–4.90(m,1.5H),4.56(d,J＝12.6Hz,0.5H),4.37–4.13(m,1H),3.96(t,J＝11.8Hz,0.5H),3.48(t,J＝12.0Hz,0.5H),3.35–3.24(m,0.5H),3.0(t,J＝12.0Hz,0.5H),2.63–2.29(m,2H),2.09(d,J＝13.5Hz,1H),1.88–1.73(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.03,158.63,157.34,156.35,155.09,154.21,144.01,143.26,138.52,130.29,129.03,128.79,127.78,126.09,125.06,124.69,123.98,119.52,119.24,118.84,98.50,56.39,51.46,38.57,30.81,28.30.

实施例7

化合物7：N-(2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙基)-N-甲基-3-(4-硝基苯基)丙烯酰胺的制备

将115.9mg(0.6mmol)4-硝基肉桂酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺后置于反应器中，向其中加入DCC 206.3mg(1mmol)和DMAP 12.2mg(0.1mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应12小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到209.4mg目标产物化合物7，产率为76.21％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),8.20–8.00(m,4H),7.60–7.37(m,5H),7.28–7.16(m,3H),7.14(d,J＝8.2Hz,2H),6.96(t,J＝19.2Hz,1H),5.96–5.76(m,1H),5.09–4.86(m,1.5H),4.62(d,J＝12.7Hz,0.5H),4.46–4.15(m,1H),3.93(t,J＝11.8Hz,0.5H),3.60–3.22(m,1H),3.11(t,J＝13.4Hz,0.5H),2.59–2.25(m,2H),2.21–2.03(m,1H),1.88–1.73(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.94,158.60,157.43,156.45,155.06,154.17,147.10,144.06,143.12,141.24,129.09,128.80,127.77,126.18,124.11,123.81,119.55,119.24,118.45,98.89,56.51,51.58,38.58,30.81,28.37.

实施例8

化合物8：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-(二甲氨基)苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将114.7mg(0.6mmol)4-(二甲氨基)肉桂酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺后置于反应器中，向其中加入DIC 126.2mg(1mmol)、HOBT 135.1mg(1mmol)和DIEA 260μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应10小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到214.3mg目标产物化合物8，产率为76.59％。化合物8在氘代氯仿中的核磁氢谱如图3所示，核磁碳谱如图4所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,3H),7.54-7.36(m,4H),7.21(t,J＝6.6Hz,3H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.83–6.64(m,3H),5.97–5.72(m,1H),5.08–4.90(m,1.5H),4.66(d,J＝12.7Hz,0.5H),4.47–4.17(m,1H),3.85(t,J＝10.0Hz,0.5H),3.50–3.21(m,1H),3.12–3.02(m,6.5H),2.48–2.30(m,2H),2.07(d,J＝13.7Hz,1H),1.90-1.75(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.61,158.53,157.80,156.36,155.50,154.34,151.35,143.93,143.60,129.98,129.34,127.84,126.21,124.04,123.18,119.53,119.16,118.85,111.61,98.58,56.35,51.52,40.21,38.61,30.62,28.27.

实施例9

化合物9：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将98.0mg(0.55mmol)4-甲氧基肉桂酸溶于3mL乙腈后置于反应器中，向其中加入HATU 380.2mg(1mmol)和TEA 210μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的乙腈，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应10小时，TLC监测。反应结束后，所得反应液减压浓缩除去乙腈，将固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到217.7mg目标产物化合物9，产率为79.64％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.39(s,1H),7.74–7.56(m,5H),7.42(t,J＝7.8Hz,2H),7.26–6.97(m,5H),6.93-6.74(m,3H),6.05–5.73(m,1H),5.06–4.89(m,1.5H),4.62(d,J＝12.3Hz,0.5H),4.44–4.11(m,1H),4.07-3.81(m,3.5H),3.51–3.22(m,1H),3.12(t,J＝13.4Hz,0.5H),2.56–2.20(m,2H),2.06(d,J＝12.9Hz,1H),1.89–1.74(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.93,159.83,158.63,157.44,156.26,155.01,154.13,144.13,143.43,130.27,128.85,127.85,127.46,126.05,124.09,119.54,119.14,118.32,114.22,98.56,56.32,55.76,51.48,38.57,30.77,28.26.

实施例10

化合物10：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮的制备

将145.7mg(0.7mmol)3，4-二甲氧基肉桂酸、193.3mg(0.5mmol)化合物19与8.6mg(5μmol)硅钼酸依次置于150mL反应器中，加入71.5mL离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐充分溶解后，通入N₂保护，在30℃下反应8h。薄层色谱法跟踪反应至完全，撤去保护装置。将反应混合体系置于分液漏斗中，振荡，静置分层，将离子液体层与酯层分离，所得酯层为肉桂酸酯类衍生物粗品。用50mL甲醇进行重结晶干燥即得231.0mg目标产物化合物10，总收率为80.12％。化合物10在氘代氯仿中的核磁氢谱如图5所示，核磁碳谱如图6所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.38(s,1H),7.71–7.59(m,3H),7.42(t,J＝7.7Hz,2H),7.24–6.97(m,7H),6.93–6.71(m,2H),6.04–5.76(m,1H),5.01–4.89(m,1.5H),4.61(s,0.5H),4.42–4.14(m,1H),4.01-3.84(m,6.5H),3.52–3.22(m,1H),3.04(s,0.5H),2.49–2.31(m,2H),2.07(d,J＝13.5Hz,1H),1.87–1.72(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.08,158.61,157.78,156.30,155.06,154.08,150.54,149.07,144.05,143.53,129.99,128.24,127.61,126.10,124.10,121.84,119.57,119.14,114.88,111.05,109.95,98.65,56.51,55.96,51.42,38.62,30.82,28.36.

实施例11

化合物11：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(呋喃-2-基)丙-2-烯-1-酮的制备

将82.9mg(0.6mmol)3-(2-呋喃基)丙烯酸溶于3mL乙腈后置于反应器中，向其中加入EDCI 191.7mg(1mmol)、HOBT 135.1mg(1mmol)和TEA 210μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的乙腈，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应12小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液减压浓缩除去乙腈，所得固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到187.2mg目标产物化合物11，产率为73.89％。化合物11在氘代氯仿中的核磁氢谱如图7所示，核磁碳谱如图8所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.39(s,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,2H),7.56–7.37(m,4H),7.24–7.15(m,3H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),6.84(dd,J＝41.1,15.2Hz,1H),6.52(dd,J＝35.5,14.0Hz,2H),6.09–5.77(m,1H),5.04–4.88(m,1.5H),4.60(d,J＝14.8Hz,0.5H),4.38–4.11(m,1H),4.03–3.87(m,0.5H),3.52–3.20(m,1H),3.05(t,J＝11.6Hz,0.5H),2.53–2.25(m,2H),2.16–2.01(m,1H),1.87–1.71(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.56,158.60,157.87,156.35,155.05,153.89,151.66,144.04,143.91,130.00,128.75,127.84,126.18,124.90,124.08,119.58,119.15,114.55,112.20,98.53,56.32,51.51,38.64,30.80,28.36.

实施例12

化合物12：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(噻吩-2-基)丙-2-烯-1-酮的制备

将92.5mg(0.6mmol)(E)-3-(噻吩-2-基)丙烯酸溶于3mL二氯甲烷后置于反应器中，向其中加入EDCI 191.7mg(1mmol)、HOBT 135.1mg(1mmol)和DIEA 260μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的二氯甲烷，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应8小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液减压浓缩除去二氯甲烷，所得固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到183.9mg目标产物化合物12，产率为70.37％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.40(s,1H),7.70(d,J＝8.3Hz,2H),7.58–7.36(m,4H),7.25–7.16(m,4H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),6.53(dd,J＝35.6,14.0Hz,2H),6.10–5.78(m,1H),5.05–4.89(m,1.5H),4.60(d,J＝13.4Hz,0.5H),4.38–4.12(m,1H),3.96(t,J＝11.5Hz,0.5H),3.52–3.19(m,1H),3.06(t,J＝11.5Hz,0.5H),2.52–2.25(m,2H),2.16–2.01(m,1H),1.86–1.73(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.86,158.62,157.52,156.32,155.00,154.19,144.10,140.33,132.92,130.55,129.63,129.03,128.77,127.63,126.13,124.87,124.11,119.59,119.14,98.59,56.36,51.54,38.59,30.76,28.35.

实施例13

化合物13：4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-氧代-2-(噻吩-2-基)丁-2-烯腈的制备

将130.4mg(0.6mmol)(Z)-3-氰基-3-(噻吩-2-基)丙烯酸钾、193.3mg(0.5mmol)化合物19与8.6mg(5μmol)硅钼酸依次置于150mL反应器中，加入71.5mL离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐充分溶解后，通入N₂保护，在60℃下反应4h。薄层色谱法跟踪反应至完全，撤去保护装置。将反应混合体系置于分液漏斗中，振荡，静置分层，将离子液体层与酯层分离，所得酯层为肉桂酸酯类衍生物粗品。用50mL甲醇进行重结晶干燥即得171.6mg目标产物化合物13，总收率为62.66％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.39(s,1H),7.86(d,J＝8.3Hz,2H),7.62–7.33(m,6H),7.25–7.15(m,3H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),6.09–5.77(m,1H),5.05–4.68(m,1.5H),4.58(d,J＝13.2Hz,0.5H),4.3 6–4.11(m,1H),3.95(t,J＝11.5Hz,0.5H),3.51–3.21(m,1H),3.06(t,J＝11.6Hz,0.5H),2.54–2.25(m,2H),2.16–1.99(m,1H),1.86–1.71(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.87,158.63,157.52,156.28,155.04,154.19,144.12,140.05,136.66,130.58,128.77,128.34,127.75,127.19,126.13,124.52,124.12,119.62,119.14,118.87,98.57,56.36,51.54,38.61,30.79,28.38.

实施例14

化合物14：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(吡啶-4-基)丙-2-烯-1-酮的制备

将89.5mg(0.6mmol)3-(吡啶-4-)丙烯酸溶于3mL乙腈后置于反应器中，向其中加入HATU 380.2mg(1mmol)和DIEA 260μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的乙腈，滴加加入到上述反应器中，后在室温下搅拌反应10小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液减压浓缩除去乙腈，所得固体残留物经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到195.2mg目标产物化合物14，产率为75.44％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.73-8.66(m,2H),8.41(s,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,3H),7.60–7.37(m,4H),7.30–7.17(m,3H),7.14(d,J＝8.0Hz,2H),6.96(t,J＝19.4Hz,1H),5.95–5.74(m,1H),5.09–4.87(m,1.5H),4.61(d,J＝12.8Hz,0.5H),4.45–4.15(m,1H),3.92(t,J＝11.8Hz,0.5H),3.56–3.23(m,1H),3.11(t,J＝13.4Hz,0.5H),2.60–2.25(m,2H),2.20–2.03(m,1H),1.89–1.73(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.82,158.62,157.42,156.32,155.02,154.19,149.66,144.53,144.03,143.26,128.99,127.67,126.16,125.46,124.09,123.03,119.54,119.14,98.57,56.34,51.47,38.62,30.78,28.37.

实施例15

化合物15：1-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(萘-1-基)丙-2-烯-1-酮的制备

118.9mg(0.6mmol)(E)-3-(萘-1-基)丙烯酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺，加入HATU 380.2mg(1mmol)和DIEA 260μL(1.5mmol)，室温下搅拌活化1小时后备用。将193.3mg(0.5mmol)化合物19溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，滴加加入到上述反应器中，在室温下搅拌反应10小时，TLC监测。反应结束后，将所得反应液经饱和氯化钠水溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，收集有机相，柱层析分离纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇(V：V)＝10：1为流动相)，干燥得到222.3mg目标产物化合物15，产率为78.46％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.00-7.90(m,4H),7.75–7.62(m,2H),7.60–7.37(m,5H),7.27–7.17(m,3H),7.10(d,J＝8.0Hz,2H),6.96(t,J＝18.9Hz,1H),5.96–5.74(m,1H),5.09–4.88(m,1.5H),4.61(d,J＝12.9Hz,0.5H),4.45–4.12(m,1H),3.93(t,J＝11.8Hz,0.5H),3.89–3.21(m,1H),3.12(t,J＝13.4Hz,0.5H),2.60–2.25(m,2H),2.20–2.03(m,1H),1.88–1.72(m,1H).

¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.89,158.61,157.44,156.30,155.01,154.27,144.09,143.91,133.67,132.89,132.04,129.07,128.77,128.31,127.77,126.97,126.37,126.08,125.94,124.04,123.83,122.95,119.57,119.14,118.83,98.55,56.33,51.47,38.62,30.77,28.39.

2.化合物抗肿瘤细胞增殖测定及其对肿瘤细胞的形态学影响

测定原理：化合物抑制肿瘤细胞增殖能力可以用CCK-8方法测得。CCK-8是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。WST-8在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯存在的情况下，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒(formazan)。细胞增殖越多越快，颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析测定。

实验材料：CCK-8试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司，C0038)；阳性对照药物依鲁替尼(上海麦克林生化科技有限公司)；U937(人组织细胞淋巴瘤细胞)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞)和Daudi(人Burkitt’s淋巴瘤细胞细胞)，三种细胞均购自于美国ATCC库。

细胞培养和给药：在37℃含有5％CO₂的潮湿空气的培养箱中，细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中。化合物用DMSO配制成母液浓度为1mM的溶液置于-20℃冰箱，根据实验需要稀释成相应浓度。

实验方法：取对数生长期状态良好细胞，计数，制成5×10⁴细胞/mL的悬液，将细胞悬液接种于96孔板中，每孔100μL，置于37℃，5％CO₂条件下培养24h后，然后向96孔板中加入含不同浓度化合物的培养基10μL，化合物浓度梯度设置为1μM和10μM。每组设置3个复孔，另设空白对照组(不加药)和阳性对照组(依鲁替尼)。置于37℃，5％CO₂恒温培养箱中，孵育24h后，每孔中分别加入10μL的CCK-8溶液，继续在培养箱中培养1h。最后通过酶标仪在波长450nm下检测96孔板的吸光度值(OD值)，并在光学显微镜下观察化合物对肿瘤细胞的形态学影响。按以下公式计算细胞增殖抑制率。

细胞增殖抑制率(％)＝(1-实验组平均OD/空白对照组平均OD值)×100％

本发明制备的依鲁替尼肉桂酰胺类化合物的抗肿瘤细胞增殖能力的结果，如表1所示：

表1：依鲁替尼肉桂酰胺类化合物的抗肿瘤细胞增殖抑制率

由表1可以看出，本发明制备的依鲁替尼肉桂酰胺类化合物对U937细胞、Jurkat细胞、Daudi细胞均表现出不同程度的增殖抑制活性，且在10μM浓度下的抑制率较优，呈现浓度依赖的抑制活性。对于U937细胞，化合物1-15的增殖抑制能力均低于阳性对照药物依鲁替尼(图9)；对于Jurkat细胞，在1μM浓度下，化合物6、10和14的增殖抑制率分别为24.13％，23.14％和25.73％，要优于阳性对照药物依鲁替尼(Ibrutinib)的增殖抑制率19.98％(图10)。细胞形态学观察发现，经以上化合物处理的Jurkat细胞增殖数量显著减少，细胞也发生了明显的形态学变化，出现如细胞皱缩等死亡特征(图12)；对于Daudi细胞，在10μM浓度下，大部分依鲁替尼肉桂酰胺类化合物的增殖抑制能力与阳性对照药物依鲁替尼相近，部分抑制率在90％以上；而在低浓度下，化合物10、13和14的增殖抑制能力较优(图11)。观察经不同浓度化合物处理的Daudi细胞形态，随着化合物给药浓度的增大，细胞排列逐渐稀疏，出现细胞固缩、体积缩小等死亡特征(图13)。

上述实验结果表明，本发明提供的依鲁替尼肉桂酰胺类化合物可以抑制不同类型肿瘤细胞的增殖和迁移，且对Jurkat细胞和Daudi细胞的抑制能力更强，从而可应用于抗急性T细胞白血病和人Burkitt’s淋巴瘤药物的制备。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims

1.一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物，其特征在于，为式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐；

所述式Ⅰ化合物的结构式为：

其中，R₁为氰基取代；

R为或/>。

2.根据权利要求1所述的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物，其特征在于，代表性化合物的结构式如下：

。

3.根据权利要求1所述的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物，其特征在于，所述药学上可接受的盐为依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富马酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的盐。

4.合成权利要求1-3任意一项所述的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物的方法，其特征在于，合成路线Ⅰ是在非质子溶剂、有机碱和催化剂条件下，各取代芳基丙烯酸类化合物与3-（4-苯氧基苯基）-1-（哌啶-3-基）-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺进行酸胺缩合制得依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物；合成路线Ⅱ是直接以各取代芳基丙烯酸类化合物和3-（4-苯氧基苯基）-1-（哌啶-3-基）-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺为原料，离子液体作为溶剂，在催化剂的作用下合成制得依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物；

其中，所述各取代芳基丙烯酸类化合物的结构式为；其中，R₁为氰基取代；R为/>或/>。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，合成路线Ⅰ的具体制备过程如下：

1）将各取代芳基丙烯酸类化合物、催化剂和有机碱溶于非质子溶剂中，置于反应器中，室温下搅拌活化；

2）活化完全后，将3-（4-苯氧基苯基）-1-（哌啶-3-基）-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺溶于非质子溶剂，加入至步骤1）的反应器中搅拌反应；

3）薄层色谱法跟踪反应至完全，将反应液减压浓缩除去溶剂，所得粗产物经洗涤、萃取、收集有机相，分离纯化，干燥得到目标产物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1）中的催化剂为2-（7-偶氮苯并三氮唑）-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N，N'-二环己基碳二亚胺、1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N'-二异丙基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶或1-羟基苯并三唑；有机碱为三乙胺、N，N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉；非质子溶剂为二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，合成路线Ⅱ的具体制备过程如下：

1）将各取代芳基丙烯酸类化合物、3-（4-苯氧基苯基）-1-（哌啶-3-基）-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺以及硅钼酸加入到反应器中，溶解，通入氮气保护，在25-60 ℃下，搅拌反应；

2）薄层色谱法跟踪反应至完全，将反应液萃取、减压浓缩和重结晶纯化，干燥得到目标产物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤1）中的3-（4-苯氧基苯基）-1-（哌啶-3-基）-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶-4-胺和各取代芳基丙烯酸类化合物的摩尔比为1:（1-1.4）。

9.权利要求1-3任意一项所述的一类具有抗肿瘤活性的依鲁替尼丙烯酰胺类衍生物在制备抗肿瘤药物的制剂中的应用，其特征在于，所述肿瘤为血液系统肿瘤疾病，所述血液系统肿瘤疾病为急性T细胞白血病。