CN114457009A - 一种干细胞提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
一种干细胞提取物的制备方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114457009A CN114457009A CN202011242968.7A CN202011242968A CN114457009A CN 114457009 A CN114457009 A CN 114457009A CN 202011242968 A CN202011242968 A CN 202011242968A CN 114457009 A CN114457009 A CN 114457009A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cell
- cell extract
- preparing
- stem cells
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 72
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 claims abstract description 15
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 11
- 201000002996 androgenic alopecia Diseases 0.000 claims description 6
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 6
- 206010068168 androgenetic alopecia Diseases 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 4
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 2
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940045110 chitosan Drugs 0.000 claims description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 2
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 claims description 2
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 2
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 claims 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 claims 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 230000003803 hair density Effects 0.000 description 4
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 4
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 3
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 3
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 3
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 2
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 2
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002677 5-alpha reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 235000003840 Amygdalus nana Nutrition 0.000 description 1
- 244000296825 Amygdalus nana Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006242 Breast enlargement Diseases 0.000 description 1
- 206010006313 Breast tenderness Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 1
- 208000021473 Ejaculation disease Diseases 0.000 description 1
- VAPSMQAHNAZRKC-PQWRYPMOSA-N Epristeride Chemical compound C1C=C2C=C(C(O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)NC(C)(C)C)[C@@]1(C)CC2 VAPSMQAHNAZRKC-PQWRYPMOSA-N 0.000 description 1
- 208000010228 Erectile Dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010024419 Libido decreased Diseases 0.000 description 1
- 235000011432 Prunus Nutrition 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000001804 debridement Methods 0.000 description 1
- 210000003785 decidua Anatomy 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 229960004199 dutasteride Drugs 0.000 description 1
- JWJOTENAMICLJG-QWBYCMEYSA-N dutasteride Chemical compound O=C([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)N[C@@H]4CC3)C)CC[C@@]21C)NC1=CC(C(F)(F)F)=CC=C1C(F)(F)F JWJOTENAMICLJG-QWBYCMEYSA-N 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 229950009537 epristeride Drugs 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229960004039 finasteride Drugs 0.000 description 1
- DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N finasteride Chemical compound N([C@@H]1CC2)C(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)NC(C)(C)C)[C@@]2(C)CC1 DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003741 hair volume Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000014774 prunus Nutrition 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/08—Antiseborrheics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/066—Lysis of microorganisms by physical methods
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种干细胞提取物的制备方法及其应用。本发明基于干细胞的修复和再生能力，提供一种干细胞提取物的制备工艺，制备方法简单，使用便捷，在治疗脱发和糖尿病创面具有极大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种干细胞提取物的制备方法及其应用。
背景技术
干细胞具有自我更新和分化的特性，是组织工程的万能种子细胞，可分泌多种生长因子（HGF、VEGF、IGF、PDGF）促进组织再生和修复。同时由于干细胞的低免疫原性，在进行同种异体移植时生物相容性极好，在治疗脱发和糖尿病创面方面都有大量的临床应用。
脱发患者包括雄激素脱发、油脂性脱发和病理性脱发。雄激素脱发（AGA）是最常见的脱发类型，在50岁以上人群中，50%男性和45%女性都会发生不同程度的AGA。虽然脱发并不危及人的生命安全，但是会影响人的外貌和自尊，造成极大的心理负担。目前经国内外药监局批准治疗AGA的药物主要是甾体类5α-还原酶抑制剂，代表药物为非那雄胺、度他雄胺和依立雄胺，此类药物可以有效地控制男性型秃发患者头发的继续脱落，但是会引起不良反应包括性欲减退、勃起功能障碍、射精量减少、射精障碍、皮疹、乳房增大或压痛等。2019年英国进行的一项干细胞治疗脱发项目中，将毛囊干细胞与盐水混合并注入头皮，结果显示休眠毛囊细胞被触发进入新生长阶段，显著增加头发密度。
中国的糖尿病患者有1.4亿人，糖尿病患者容易发生皮肤溃疡，15-25%的患者会发展成糖尿病足。糖尿病创面属于慢性创面，可能存在多种病原微生物、炎症介质等构成不利于干细胞修复的微环境，同时糖尿病患者以中老年为主，体内的干细胞数量和活性都出现下降，以致组织修复能力下降。目前国内外有大量临床数据，证实通过在溃疡四周采取点阵注射或者静脉回输的方式，都可以促进病变和坏死的皮肤、血管、神经等组织进行再生修复，促进伤口愈合。
但是在以往的临床研究中，都是通过微针或注射的方式将活的干细胞移植到体内，易造成局部感染，且干细胞存活率低，要达到良好的疗效需要重复注射多次，给患者带来不便和痛苦。
因此，本领域亟待开发新型的干细胞提取物和应用方法，以推进干细胞技术的临床应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种干细胞提取物制备方法及其应用，能够有效治疗脱发和糖尿病创面。
本发明的技术方案是这样实现的：
1.分离间充质干细胞。使用组织块培养、酶消化培养，从人来源的脐带、胎盘、脂肪、骨髓、牙髓、外周血、脐带血、尿液、宫内膜、经血中分离得到间充质干细胞，加入10%胎牛血清的DMEM培养基进行培养，细胞接种密度为1-5×105cells/cm2，三天后清洗掉未贴壁细胞，当间充质干细胞融合度达到80-90%，加入0.05%的胰酶消化，按1:3比例进行传代培养。
2.鉴定间充质干细胞。通过流式鉴定其表面干细胞标记物CD44，CD29，CD105呈阳性，内皮细胞标记物CD31，CD45呈阴性。
2.在收集干细胞前2天更换培养基为无血清培养，收集P2-P5代干细胞10e7-10e8，使用1-10 mLPBS重悬细胞，对收获的干细胞进行流式检测。
3获得干细胞提取物。使用组织匀浆或者超声破碎技术将干细胞进行细胞破碎，显微镜下观察破碎情况。
4.浓缩和过滤干细胞提取物。将破碎后的干细胞经超速离心机进行离心，转速在800-150000g，使用生理盐水重悬沉淀物，并进行除菌过滤。
5.制备干细胞提取物终产品。将无菌处理后的干细胞提取物，按体积比例（v/v）0.5-10%加入无菌的水、生理盐水、PBS、葡萄糖溶液等溶液中的1种或多种制备成液体制剂，或者加入水凝胶（胶原、海藻酸盐、壳聚糖、玻尿酸）制成凝胶敷料。
6.干细胞提取物终产品的临床应用。将干细胞提取物终产品涂抹或喷洒在脱发或糖尿病创面部位，每日1-4次，持续使用4-48周。
本发明的优点在于：
1）干细胞提取物制备工艺简便易行，易于放大和规模化生产。
2）相较于活的干细胞，干细胞提取物更易无菌处理，储存、运输更加方便。
3）避免有创操作，使用便捷，适合个人家庭使用。
附图说明
下面对间充质干细胞提取物的制备和应用进行说明。
图1是本发明所述的间充质干细胞流式细胞检测结果。表面干细胞标记物CD45，CD69，CD105呈阳性，内皮细胞标记物CD31，CD45呈阴性。
图2 是使用干细胞提取物喷雾治疗前后脱发患者的头发增量照片。
图3是使用干细胞提取物凝胶治疗前后糖尿病足患者的创口部位照片。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例进行进一步的说明。
实施例1 一种干细胞提取物制备方法，包括以下步骤：
1.实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可以从商业途径得到。
2.脐带间充质干细胞的分离和鉴定
1）在健康产妇知情情况下获得脐带30 cm，在手术室采集后即使用无菌PBS浸泡并运送到实验室，75%酒精浸泡1分钟并冲洗后放在10 cm平皿中，无菌PBS冲洗3次。
2）将脐带剪成5 cm小段，用镊子撕开脐带并小心去除血管（包括2根动脉、1根静脉），小心将脐带撕成细丝。
3）将细丝转移到50 mL离心管中，加入10mLPBS混匀后，将手术剪插入离心管进行快速剪碎。
4）将剪碎的组织块接种在10cm直径的培养皿中，放置在培养箱进行培养。等待组织块附着部分有细胞爬出贴壁生长时，洗去组织块，更换培养基，继续培养72小时。
5）取出培养皿观察，继续培养到细胞融合度80%，加入胰酶消化并传代。
6）使用流式细胞仪检测间充质干细胞的表面干细胞标记物CD44，CD29，CD105的表达。
3.间充质干细胞的制备
在收集干细胞前2天更换培养基为无血清培养，收集P2-P5代干细胞10e7-10e8，使用1-10 mLPBS重悬细胞。
4. 获得干细胞提取物
使用超声破碎技术将干细胞进行细胞破碎，显微镜下观察破碎情况。
5.浓缩和过滤干细胞提取物
将破碎后的干细胞经超速离心机进行离心，转速50000g，使用生理盐水重悬沉淀物，并经0.22微米滤膜进行除菌过滤。
6.干细胞提取物终产品
将无菌处理后的干细胞提取物，按提取物浓度1%（v/v）比例加入无菌的生理盐水，并装入真空喷雾瓶中。
实施例2 一种干细胞提取物制备方法，包括以下步骤：
1.实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可以从商业途径得到。
2. 胎盘间充质干细胞的分离和鉴定
1）在健康产妇知情情况下获得胎盘，在手术室采集后即使用无菌PBS浸泡并运送到实验室，75%酒精浸泡1分钟并冲洗后，无菌PBS冲洗3次。
2）小心剥离胎盘蜕膜，用剪刀和镊子撕成细条状。
3）将细条状组织转移到50 mL离心管中，加入10mLPBS混匀后，将手术剪插入离心管进行快速剪碎。
4）向离心管加入10 mL 0.1%的I型胶原酶，将离心管放置在摇速90 rpm，温度37℃的恒温摇床上进行消化2小时。
5）取出离心管，此时组织块已消化，液体呈现粘稠状态，使用巴氏吸管进行吹打，并使用80目钢筛过滤，收集滤过液中细胞。
6）将滤过液进行离心，转速1200 rpm，离心5分钟，使用PBS离心洗涤2次。
7）将离心后的细胞平均接种到4个25 cm2培养瓶中，在CO2培养箱37℃培养，24小时后观察无细胞污染现象，继续培养48小时。
8）取出培养瓶观察，有少量细胞贴壁，继续培养到细胞融合度80%，加入胰酶消化并传代。
3.间充质干细胞的制备
在收集干细胞前2天更换培养基为无血清培养，收集P2-P5代干细胞10e7-10e8，使用1-10 mLPBS重悬细胞。
4. 获得干细胞提取物
使用超声破碎技术将干细胞进行细胞破碎，显微镜下观察破碎情况。
5.浓缩和过滤干细胞提取物
将破碎后的干细胞经超速离心机进行离心，转速10000g，使用生理盐水重悬沉淀物，并经0.22微米滤膜进行除菌过滤。
6.干细胞提取物终产品
将无菌处理后的干细胞提取物，按提取物浓度5%（v/v）比例加入无菌的海藻酸钠溶液（质量浓度1.5%），并装入真空瓶中。
实施例3 干细胞提取物治疗脱发
1.患者分组。将脱发患者20人分为2组，实验组10人，安慰剂组10人，分别使用实施例1制备的干细胞提取物喷雾和安慰剂生理盐水。
2.使用方法，将安慰剂或干细胞提取物喷洒在脱发部位，每日2次，持续使用16周。
3.效果评估，每8周对患者进行效果评估，包括头发密度、副作用。头发密度的评估按照7等级进行：-3，明显降低；-2，中等降低；-1，轻微降低；0，无变化；1，轻微增加；2，中等增加；3，明显增加。副作用包括瘙痒、红肿。
4.使用结果分析，在使用8周的过程中，试验组有1人出现使用部位瘙痒现象，安慰剂组无过敏现象。使用毛囊检测仪对使用前后的头发状态进行检测和拍照，对比发现，使用干细胞提取物的10名患者有4人的头发密度显著增加（具体情况见图2），3人中等增加，2人轻微增加，1人中等降低，而使用安慰剂的10名患者有3人无变化，5人轻微降低，2人明显降低。
实施例4 干细胞提取物治疗糖尿病足
患者李先生，年龄54岁，糖尿病史9年，1年前左足内侧出现溃疡面，面积约8cm×4cm，对创面进行清创后，早晚使用实施例2制备的干细胞提取物凝胶各1次，连续使用7周。
治疗效果观察，从第2周开始溃疡创口面快速愈合；第5周创口基本愈合，可见粉色部分新生皮肤；第7周治疗结束时创口完全愈合。
本发明仅以实施例1-4为例进行描述，并不意味着对本发明构成限制，参照本发明的描述，其他来源的间充质干细胞以及实施例的其他变形，对于本领域的技术人员是可预料的，这样的变形不会脱离所属权利要求限定的范围及精神。
Claims (8)
1.一种干细胞提取物制备方法及其应用，其特征在于，实现此发明主要包括以下步骤：（1）分离和鉴定间充质干细胞；（2）在培养瓶（皿）或生物反应器中，培养间充质干细胞；（3）使用机械方法破碎间充质干细胞，收获干细胞提取物；（4）制备含有干细胞提取物的终产品；（5）干细胞提取物终产品的临床应用。
2.根据权利要求1所述的干细胞提取物制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞包括脐带、胎盘、脂肪、骨髓、牙髓、外周血、脐带血、尿液、宫内膜、经血来源的间充质干细胞。
3.根据权利要求1所述的干细胞提取物制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞分离方法包括组织块培养和酶消化培养。
4.根据权利要求1所述的干细胞提取物制备方法，其特征在于，所述细胞破碎所使用仪器包括组织匀浆仪和超声波细胞破碎仪。
5.根据权利要求1所述的干细胞提取物制备方法，其特征在于，所述的离心机转速在800-150000g。
6.根据权利要求1所述的干细胞提取物制备方法，其特征在于，所述的干细胞提取物终产品制备方法，包括按体积比例（v/v）0.5-10%加入的无菌的水、生理盐水、PBS、葡萄糖溶液等溶液中的1种或多种制备成液体制剂，或者加入水凝胶（胶原、海藻酸盐、壳聚糖、玻尿酸）制成凝胶敷料。
7.一种应用权利要求1所述的干细胞提取物制备方法在脱发治疗中的应用，所述的脱发患者包括雄激素脱发、油脂性脱发和病理性脱发。
8.一种应用权利要求1所述的干细胞提取物制备方法在糖尿病创面治疗中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011242968.7A CN114457009A (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 一种干细胞提取物的制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011242968.7A CN114457009A (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 一种干细胞提取物的制备方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114457009A true CN114457009A (zh) | 2022-05-10 |
Family
ID=81404598
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011242968.7A Pending CN114457009A (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 一种干细胞提取物的制备方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114457009A (zh) |
-
2020
- 2020-11-09 CN CN202011242968.7A patent/CN114457009A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107158035A (zh) | 含有高浓度人间充质干细胞外泌体提取物的治疗褥疮外用凝胶及其制备方法 | |
| CN101954124B (zh) | 含基底膜的组织工程皮肤的构建方法 | |
| WO2019161591A1 (zh) | 间充质干细胞的分离培养方法及冻存、复苏方法 | |
| KR20070122316A (ko) | 주사용 인체 연조직 충전제 및 이의 제조 방법 | |
| CN104622771A (zh) | 一种含自体脂肪干细胞的生物美容面膜的制备方法及其产品 | |
| CN106367389A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞因子的制备方法及应用 | |
| CN111826340A (zh) | 一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞外泌体的制备方法及其应用 | |
| CN105820998A (zh) | 临床回输级细胞治疗用人脂肪干细胞ADSCs分离提取培养方法 | |
| WO2024120208A1 (zh) | 一种促进毛发生长的脐带间充质干细胞定向分泌组的制备方法和应用 | |
| CN110623917A (zh) | 一种包载干细胞复合因子的美容及皮肤修复透明质酸钠凝胶 | |
| CN102233144A (zh) | 一种利用组织工程技术进行皮下组织再生的方法 | |
| CN106581067A (zh) | 药物组合物及其局部用途 | |
| CN106701670A (zh) | 一种增强间充质干细胞分泌生物活性因子能力及培养液中活性因子的提取方法 | |
| CN112870445A (zh) | 一种软组织修复材料的制备方法及应用 | |
| CN114672456B (zh) | 利用超声刺激提高脂肪干细胞分泌胞外囊泡效率的方法及应用 | |
| CN115120708A (zh) | 一种用于治疗糖尿病足的干细胞凝胶 | |
| CN113813289B (zh) | 基于脐带间充质干细胞外泌体的毛囊生成促进液制备方法 | |
| CN110731969A (zh) | 一种间充质干细胞的制备及在制备疼痛药中的应用 | |
| CN110693911A (zh) | 经血源性子宫内膜干细胞制剂及其制备方法和应用 | |
| CN109771694A (zh) | 自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料的制备方法及应用 | |
| CN108066750A (zh) | 干细胞及其分泌物用于治疗皮肤烧烫伤的新用途 | |
| CN111840330B (zh) | 一种防脱发修复组合物及应用 | |
| CN114457009A (zh) | 一种干细胞提取物的制备方法及其应用 | |
| CN115814045A (zh) | 一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用 | |
| CN115418341A (zh) | 成纤维细胞向毛乳头细胞转分化的方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20220510 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |