CN114306755B - 一种后巩膜加固术用生物补片及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种后巩膜加固术用生物补片及其制备方法，所述后巩膜加固术用生物补片由海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合而成。本发明提供的后巩膜加固术用生物补片，以真皮网状层与小肠粘膜下层为基材，将海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合在一起，从而制备出具有良好的生物相容性，便于细胞长入，同时具有较好的力学性能的后巩膜加固术用生物补片，在后巩膜加固术的临床应用中，能够达到与原巩膜组织的融合和增厚巩膜组织的目的。

Description

一种后巩膜加固术用生物补片及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物材料技术领域，具体而言，涉及一种后巩膜加固术用生物补片及其制备方法。

背景技术

高度近视一般认为是近视度数大于600度的近视，高度近视的眼轴通常不断伸长，引起近视度数进行性增加。

近年来，高度近视人群的比例快速增加，高度近视主要是由于巩膜损伤和巩膜局部扩张造成的；目前近视的临床治疗手段主要是采用后巩膜加固术；后巩膜加固术是指将一定的加固材料置于眼球后极部巩膜，支撑眼球的后极部，经过一系列的生物学反应，加强高度近视眼球后部薄弱的巩膜，提高后巩膜的强度增强巩膜的抗变形能力，阻止眼轴进一步延长，防止高度近视眼视功能进一步恶化。

在后巩膜加固术中，加固材料的选择、制作及使用对手术效果及愈后有很重要的影响。为取得较好的治疗效果，要求加固材料具有良好的生物相容性、柔韧性以及较强的抗拉伸能力。临床上的加固材料可以分为生物材料和非生物材料两类，其中生物材料由于具有良好的生物相容性而受到了广泛的青睐；目前小肠粘膜下层是常用于后巩膜加固术的生物材料，但是小肠粘膜下层结构致密，细胞难以长入，限制了其在后巩膜加固术中的应用。

发明内容

本发明解决的问题是小肠粘膜下层用于后巩膜加固术时细胞难以长入。

为解决上述问题，本发明提供一种后巩膜加固术用生物补片，由海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合而成。

可选地，所述真皮网状基质上设置有微孔结构。

本发明的另一目的在于提供一种如上所述的后巩膜加固术用生物补片的制备方法，包括如下步骤：

S1：选取动物的真皮网状层和小肠粘膜下层，并分别对所述真皮网状层和所述小肠粘膜下层进行脱脂处理；

S2：分别对脱脂后的所述真皮网状层以及脱脂后的所述小肠粘膜下层进行脱细胞处理，得到真皮网状层基质以及小肠粘膜下层基质；

S3：将所述小肠粘膜下层基质剪碎，放入含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，搅拌，得到小肠粘膜下层基质溶液；

S4：将所述真皮网状层基质浸于所述小肠粘膜下层基质溶液中，进行冷冻干燥，得到复合材料；

S5：对所述复合材料进行交联处理，得到后巩膜加固术用生物补片。

可选地，步骤S1中分别对所述真皮网状层和所述小肠粘膜下层进行脱脂处理包括：分别将所述真皮网状层与所述小肠粘膜下层置于脱脂溶液中浸泡6h～12h；所述脱脂溶液选自丙酮、无水乙醇、乙二醇乙醚、异丙醇中的至少一种。

可选地，分别对脱脂后的所述真皮网状层以及脱脂后的所述小肠粘膜下层进行脱细胞处理包括：

S21：分别将脱脂后的所述真皮网状层以及脱脂后的所述小肠粘膜下层置于脱细胞溶液中，室温下摇床震荡20h～24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2～3h，取出，分别记为第一真皮网状层与第一小肠粘膜下层；

S22：分别将所述第一真皮网状层以及所述第一小肠粘膜下层放入酶溶液中于1℃～10℃下浸泡20h～24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2～3h，取出，分别得到所述真皮网状层基质与所述小肠粘膜下层基质。

可选地，步骤S21中所述脱细胞溶液选自体积分数为0.5％的Triton X-100溶液或质量体积分数为0.1％的SDS溶液。

可选地，步骤S22中所述的酶溶液为质量体积分数为0.25％的胰蛋白酶溶液或浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液。

可选地，步骤S3中含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，胃蛋白酶的质量分数为0.1％～0.5％，乙酸的体积分数为1％～5％；步骤S3中所述小肠粘膜下层基质溶液中小肠粘膜下层基质的质量分数为1％～5％。

可选地，对所述复合材料进行交联处理包括：将所述复合材料置于交联处理液中，于温度范围15℃～25℃条件下，摇床震荡1～5天后，冷冻干燥，得到所述后巩膜加固术用生物补片。

可选地，所述复合材料以0.05g/mL～0.2g/mL的比例加入到所述交联处理液；所述交联处理液的溶剂为浓度范围为40％～95％的酒精，交联剂为京尼平、戊二醛或EDC中的一种，所述交联剂的质量体积分数范围为0.2％～2％，所述交联处理液的PH为5.0～7.0。

可选地，步骤S1中对所述真皮网状层进行脱脂处理前还包括：对所述真皮网状层进行打孔处理。

与现有技术相比，本发明提供的后巩膜加固术用生物补片具有如下优势：

本发明提供的后巩膜加固术用生物补片，以真皮网状层与小肠粘膜下层为基材，将海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合在一起，从而制备出具有良好的生物相容性，便于细胞长入，同时具有较好的力学性能的后巩膜加固术用生物补片，在后巩膜加固术的临床应用中，能够达到与原巩膜组织的融合和增厚巩膜组织的目的。

附图说明

图1为本发明中海绵状小肠粘膜下层基质的微观形貌图；

图2为本发明中真皮网状层基质的微观形貌图；

图3为本发明实施例1制备的后巩膜加固术用生物补片的微观形貌图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为解决小肠粘膜下层用于后巩膜加固术时细胞难以长入的问题，本发明提供一种后巩膜加固术用生物补片的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

S1：选取动物的真皮网状层和小肠粘膜下层，并分别对真皮网状层和小肠粘膜下层进行脱脂处理；

S2：分别对脱脂后的真皮网状层以及脱脂后的小肠粘膜下层进行脱细胞处理，得到真皮网状层基质以及小肠粘膜下层基质；

S3：将小肠粘膜下层基质剪碎，放入含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，搅拌，优选搅拌时间为24h～96h，得到小肠粘膜下层基质溶液；

S4：将真皮网状层基质浸于小肠粘膜下层基质溶液中，进行冷冻干燥，得到复合材料；

S5：对复合材料进行交联处理，得到后巩膜加固术用生物补片。

本申请优选选取成熟的猪、羊或牛的真皮网状层和小肠粘膜下层；通过分别对真皮网状层和小肠粘膜下层进行脱脂处理与脱细胞处理后，分别得到真皮网状层基质与小肠粘膜下层基质。

其中小肠粘膜下层主要由胶原蛋白组成，同时，小肠粘膜下层还含有TGF-β、bFGF、VEGF，从而以小肠粘膜下层为基材，使得制备的后巩膜加固术用生物补片具有良好的生物相容性，并且能够促进成纤维细胞与血管内皮细胞的增殖与生长，促进胶原蛋白的增生与血管的形成；又由于小肠粘膜结构致密，且小肠粘膜下层的厚度只有25μm～100μm，直接将小肠粘膜下层基质用于生物补片，细胞难以长入；此外，真皮网状层胶原纤维较粗，弹性纤维较多，粗大的胶原蛋白纤维束纵横交错，呈致密三维网状结构，具有较强的韧性和弹性；

本申请优选用无菌剪刀将得到的小肠粘膜下层基质剪碎，制备为小肠粘膜下层基质溶液；将真皮网状基质层浸于小肠粘膜下层基质溶液中，冷冻干燥，得到海绵状的小肠粘膜下层基质与真皮网状基质层构成的复合材料；本申请优选冷冻干燥的温度为-60℃，压力为1Pa；进一步对复合材料进行交联处理，使得海绵状的小肠粘膜下层基质与真皮网状基质层结合为整体结构，得到后巩膜加固术用生物补片。

需要指出的是，本申请中对真皮网状层以及小肠粘膜下层进行脱脂处理与脱细胞处理的步骤相同，但是对真皮网状层与小肠粘膜下层进行脱脂处理与脱细胞处理的过程是分别单独进行的。

本发明提供的后巩膜加固术用生物补片的制备方法，以真皮网状层与小肠粘膜下层为基材，将海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合在一起，从而制备出具有良好的生物相容性，便于细胞长入，同时具有较好的力学性能的后巩膜加固术用生物补片，在后巩膜加固术的临床应用中，能够达到与原巩膜组织的融合和增厚巩膜组织的目的。

本申请优选选取动物的真皮网状层包括选取健康成熟动物的动物皮，对动物皮进行脱毛、消毒处理，用鼓式取皮机切取0.1mm～2mm厚的真皮网状层基质；其中，使用鼓式取皮机切取真皮网状层基质时，首先切除皮下组织，使动物皮厚为1mm～4mm，然后切除表皮与真皮乳突层，制得厚为0.1mm～2mm的真皮网状层基质；本申请通过将皮下组织、表皮和真皮乳头层全部切除，只留下真皮网状层，从而避免了去除表皮的操作和表皮无法去除干净导致脱细胞不彻底的问题，同时，真皮网状层是真皮层中主要的致密结缔组织成分，其胶原纤维较粗，弹性纤维较多，细胞成分较少，粗大的胶原蛋白纤维束纵横交错呈致密三维网状结构，并具有较强的韧性和弹性，因此在脱细胞处理之后，仍然能保持较好的力学性能和其三维网状结构，从而能够得到更好的满足临床需求的脱细胞真皮网状层基质的生物巩膜支架。

具体的，本申请步骤S1中分别对真皮网状层和小肠粘膜下层进行脱脂处理包括：分别将真皮网状层与小肠粘膜下层置于脱脂溶液中浸泡6h～12h；其中对真皮网状层与小肠粘膜下层进行脱脂处理的脱脂溶液可以相同，也可以不同；本申请优选对真皮网状层与小肠粘膜下层进行脱脂处理的脱脂溶液均选自丙酮、无水乙醇、乙二醇乙醚、异丙醇中的至少一种。

同样，对脱脂后的真皮网状层与脱脂后的小肠粘膜下层进行脱细胞处理的过程可以相同，也可以不同；为简化制备过程，本申请优选两个脱细胞处理过程相同，但是两个脱细胞处理过程单独进行；具体的，优选分别对脱脂后的真皮网状层以及脱脂后的小肠粘膜下层进行脱细胞处理包括：

S21：分别将脱脂后的真皮网状层以及脱脂后的小肠粘膜下层置于脱细胞溶液中，室温下摇床震荡20h～24h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡2～3h，取出，分别记为第一真皮网状层与第一小肠粘膜下层；

S22：分别将第一真皮网状层以及所述第一小肠粘膜下层放入酶溶液中于1℃～10℃下浸泡20h～24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2～3h，取出，分别得到真皮网状层基质与小肠粘膜下层基质。

本申请优选步骤S21中的脱细胞溶液为体积分数为0.5％(v/v)的Triton X-100溶液或质量体积分数为0.1％(w/v)的SDS溶液；步骤S22中的酶溶液为质量体积分数为0.25％的胰蛋白酶溶液或浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液。

本申请优选步骤S3中含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，胃蛋白酶的质量分数为0.1％～0.5％，乙酸的体积分数为1％～5％；且步骤S3中制备的小肠粘膜下层基质溶液中，小肠粘膜下层基质的质量分数为1％～5％。

本申请优选对复合材料进行交联处理包括：将复合材料置于交联处理液中，于温度范围15℃～25℃条件下，摇床震荡1～5天后，冷冻干燥，得到后巩膜加固术用生物补片。

具体的，交联处理过程中，复合材料以0.05g/mL～0.2g/mL的比例加入到交联处理液；本申请优选交联处理液的溶剂为40％～95％的酒精，交联剂为京尼平、戊二醛或EDC中的一种，交联剂的质量体积分数范围为0.2％～2％，交联处理液的PH为5.0～7.0。

此外，由于真皮网状层是真皮层中主要的致密结缔组织成分，结构较为致密，缺乏微孔结构，不利于成纤维细胞与血管内皮细胞的长入，从而影响与原巩膜组织的融合和胶原蛋白的形成；因此，本申请提供的后巩膜加固术用生物补片的制备方法，步骤S1中对真皮网状层进行脱脂处理前还可包括：对真皮网状层进行打孔处理；通过对真皮网状层进行打孔处理，增加其内部的孔径，允许成纤维细胞与血管内皮细胞的长入，从而到达与原巩膜组织的融合，增厚原巩膜组织的目的；本申请中的打孔方法可以为机械打孔或激光打孔。

进一步的，本申请提供的后巩膜加固术用生物补片的制备方法，在交联处理后，还可包括：

S6：将步骤S5得到的后巩膜加固术用生物补片裁剪为长为40mm～80mm，宽为5mm～20mm的长条形生物补片；

S7：对步骤S6得到的长条形生物补片进行密封包装，并进行灭菌处理。

其中灭菌方法可以为钴60辐射、电子束辐照或环氧乙烷灭菌处理，经灭菌处理后即可得到可供临床使用的后巩膜加固术用生物补片。

本发明的另一目的在于提供一种后巩膜加固术用生物补片，该生物补片通过如上所述的后巩膜加固术用生物补片的制备方法制备。

本发明提供的后巩膜加固术用生物补片，以真皮网状层与小肠粘膜下层为基材，将海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合在一起，从而制备出具有良好的生物相容性，便于细胞长入，同时具有较好的力学性能的后巩膜加固术用生物补片，在后巩膜加固术的临床应用中，能够达到与原巩膜组织的融合和增厚巩膜组织的目的。

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施例做详细的说明。

实施例1

本实施例提供一种后巩膜加固术用生物补片的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1：选取健康成熟猪的猪皮，对猪皮进行脱毛、消毒处理，用鼓式取皮机首先切除皮下组织，使猪皮厚为2.5mm，然后切除表皮与真皮乳突层，制得厚为1mm厚的真皮网状层；

将真皮网状层置于丙酮中浸泡9h，得到脱脂后的真皮网状层；

选取成熟猪的小肠空肠部分，经反复冲洗、消毒后，纵行剖开，刮去小肠的粘膜层以及浆膜层和肌层，得到小肠粘膜下层；

将小肠粘膜下层置于丙酮中浸泡9h，得到脱脂后的小肠粘膜下层；

S2：将脱脂后的真皮网状层置于体积分数为0.5％的Triton X-100溶液中，室温下摇床震荡22h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡2.5h，取出，记为第一真皮网状层；

将第一真皮网状层放入质量体积分数为0.25％的胰蛋白酶溶液中于5℃下浸泡22h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2.5h，取出，得到真皮网状层基质；

将脱脂后的小肠粘膜下层置于体积分数为0.5％的Triton X-100溶液中，室温下摇床震荡22h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡2.5h，取出，记为第一小肠粘膜下层；

将第一小肠粘膜下层放入质量体积分数为0.25％的胰蛋白酶溶液中于5℃下浸泡22h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2.5h，取出，得到小肠粘膜下层基质；

S3：将小肠粘膜下层基质用无菌剪刀剪碎，放入含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，其中胃蛋白酶的质量分数为0.3％，乙酸的体积分数为3％；搅拌60h，得到质量分数为3％的小肠粘膜下层基质溶液；

S4：将小肠粘膜下层基质溶液倒入培养皿中，将步骤S2得到的真皮网状基质浸于小肠粘膜下层基质溶液中，于-60℃、1Pa条件下进行冷冻干燥，得到海绵状的小肠粘膜下层基质与真皮网状层基质构成的复合材料；

S5：将复合材料在温度为20℃条件下，置于溶剂为酒精，交联剂为京尼平，且京尼平的质量体积分数为1.1％，PH为6.0的交联处理液中，摇床震荡3天，对复合材料进行交联处理，最后进行冷冻干燥，得到后巩膜加固术用生物补片；

S6：将步骤S5得到的后巩膜加固术用生物补片裁剪为长为60mm，宽为13mm的长条形生物补片；

S7：对步骤S6得到的长条形生物补片进行密封包装，并通过钴60辐射进行灭菌处理，得到可供临床使用的后巩膜加固术用生物补片。

参见图1～图3所示，分别对单独的海绵状的小肠粘膜下层基质、单独的真皮网状层基质，以及本实施例制备的后巩膜加固术用生物补片进行检测，从图中可看出，本实施例制备的后巩膜加固术用生物补片由海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合而成。

本实施例制备的生物补片具有良好的生物相容性，便于细胞长入，同时具有较好的力学性能，在后巩膜加固术的临床应用中，能够达到与原巩膜组织的融合和增厚巩膜组织的目的。

实施例2

本实施例提供一种后巩膜加固术用生物补片的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1：选取健康成熟牛的牛皮，对牛皮进行脱毛、消毒处理，用鼓式取皮机首先切除皮下组织，使牛皮厚为4mm，然后切除表皮与真皮乳突层，制得厚为2mm厚的真皮网状层；

将真皮网状层置于异丙醇中浸泡12h，得到脱脂后的真皮网状层；

选取成熟牛的小肠空肠部分，经反复冲洗、消毒后，纵行剖开，刮去小肠的粘膜层以及浆膜层和肌层，得到小肠粘膜下层；

将小肠粘膜下层置于异丙醇中浸泡12h，得到脱脂后的小肠粘膜下层；

S2：将脱脂后的真皮网状层置于质量体积分数为0.1％的SDS溶液溶液中，室温下摇床震荡24h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡3h，取出，记为第一真皮网状层；

将第一真皮网状层放入浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液中于10℃下浸泡24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡3h，取出，得到真皮网状层基质；

将脱脂后的小肠粘膜下层置于质量体积分数为0.1％的SDS溶液中，室温下摇床震荡24h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡3h，取出，记为第一小肠粘膜下层；

将第一小肠粘膜下层放入浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液中于10℃下浸泡24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡3h，取出，得到小肠粘膜下层基质；

S3：将小肠粘膜下层基质用无菌剪刀剪碎，放入含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，其中胃蛋白酶的质量分数为0.5％，乙酸的体积分数为5％；搅拌96h，得到质量分数为5％的小肠粘膜下层基质溶液；

S4：将小肠粘膜下层基质溶液倒入培养皿中，将步骤S2得到的真皮网状基质浸于小肠粘膜下层基质溶液中，于-60℃、1Pa条件下进行冷冻干燥，得到海绵状的小肠粘膜下层基质与真皮网状层基质构成的复合材料；

S5：将复合材料在温度为25℃条件下，置于溶剂为酒精，交联剂为戊二醛，且戊二醛的质量体积分数为2％，PH为7.0的交联处理液中，摇床震荡5天，对复合材料进行交联处理，最后进行冷冻干燥，得到后巩膜加固术用生物补片；

S6：将步骤S5得到的后巩膜加固术用生物补片裁剪为长为80mm，宽为20mm的长条形生物补片；

S7：对步骤S6得到的长条形生物补片进行密封包装，并通过电子束辐照进行灭菌处理，得到可供临床使用的后巩膜加固术用生物补片。

本实施例的检测过程及结果参见实施例1中相关内容。

实施例3

本实施例提供一种后巩膜加固术用生物补片的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1：选取健康成熟羊的羊皮，对羊皮进行脱毛、消毒处理，用鼓式取皮机首先切除皮下组织，使羊皮厚为1mm，然后切除表皮与真皮乳突层，制得厚为0.1mm厚的真皮网状层；

将真皮网状层置于异丙醇中浸泡6h，得到脱脂后的真皮网状层；

选取成熟牛的小肠空肠部分，经反复冲洗、消毒后，纵行剖开，刮去小肠的粘膜层以及浆膜层和肌层，得到小肠粘膜下层；

将小肠粘膜下层置于异丙醇中浸泡6h，得到脱脂后的小肠粘膜下层；

S2：将脱脂后的真皮网状层置于质量体积分数为0.1％的SDS溶液溶液中，室温下摇床震荡20h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡2h，取出，记为第一真皮网状层；

将第一真皮网状层放入浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液中于1℃下浸泡20h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2h，取出，得到真皮网状层基质；

将脱脂后的小肠粘膜下层置于质量体积分数为0.1％的SDS溶液中，室温下摇床震荡20h，取出，放入无菌PBS(磷酸缓冲溶液)中，摇床震荡2h，取出，记为第一小肠粘膜下层；

将第一小肠粘膜下层放入浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液中于1℃下浸泡20h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2h，取出，得到小肠粘膜下层基质；

S3：将小肠粘膜下层基质用无菌剪刀剪碎，放入含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，其中胃蛋白酶的质量分数为0.1％，乙酸的体积分数为1％；搅拌24h，得到质量分数为1％的小肠粘膜下层基质溶液；

S4：将小肠粘膜下层基质溶液倒入培养皿中，将步骤S2得到的真皮网状基质浸于小肠粘膜下层基质溶液中，于-60℃、1Pa条件下进行冷冻干燥，得到海绵状的小肠粘膜下层基质与真皮网状层基质构成的复合材料；

S5：将复合材料在温度为15℃条件下，置于溶剂为酒精，交联剂为戊二醛，且戊二醛的质量体积分数为0.2％，PH为5.0的交联处理液中，摇床震荡1天，对复合材料进行交联处理，最后进行冷冻干燥，得到后巩膜加固术用生物补片；

S6：将步骤S5得到的后巩膜加固术用生物补片裁剪为长为40mm，宽为5mm的长条形生物补片；

S7：对步骤S6得到的长条形生物补片进行密封包装，并通过电子束辐照进行灭菌处理，得到可供临床使用的后巩膜加固术用生物补片。

本实施例的检测过程及结果参见实施例1中相关内容。

虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员，在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，由海绵状的小肠粘膜下层基质与具有致密三维网状结构的真皮网状基质复合而成；所述真皮网状基质上设置有微孔结构；

所述的后巩膜加固术用生物补片的制备方法包括如下步骤：

S1：选取动物的真皮网状层和小肠粘膜下层，并分别对所述真皮网状层和所述小肠粘膜下层进行脱脂处理；

S2：分别对脱脂后的所述真皮网状层以及脱脂后的所述小肠粘膜下层进行脱细胞处理，得到真皮网状层基质以及小肠粘膜下层基质；

S3：将所述小肠粘膜下层基质剪碎，放入含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，搅拌，得到小肠粘膜下层基质溶液；

S4：将所述真皮网状层基质浸于所述小肠粘膜下层基质溶液中，进行冷冻干燥，得到复合材料；

S5：对所述复合材料进行交联处理，得到后巩膜加固术用生物补片；

步骤S1中对所述真皮网状层进行脱脂处理前还包括：对所述真皮网状层进行打孔处理。

2.如权利要求1所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，步骤S1中分别对所述真皮网状层和所述小肠粘膜下层进行脱脂处理包括：分别将所述真皮网状层与所述小肠粘膜下层置于脱脂溶液中浸泡6h～12h；所述脱脂溶液选自丙酮、无水乙醇、乙二醇乙醚、异丙醇中的至少一种。

3.如权利要求1所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，分别对脱脂后的所述真皮网状层以及脱脂后的所述小肠粘膜下层进行脱细胞处理包括：

S21：分别将脱脂后的所述真皮网状层以及脱脂后的所述小肠粘膜下层置于脱细胞溶液中，室温下摇床震荡20h～24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2～3h，取出，分别记为第一真皮网状层与第一小肠粘膜下层；

S22：分别将所述第一真皮网状层以及所述第一小肠粘膜下层放入酶溶液中于1℃～10℃下浸泡20h～24h，取出，放入无菌PBS中，摇床震荡2～3h，取出，分别得到所述真皮网状层基质与所述小肠粘膜下层基质。

4.如权利要求3所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，步骤S21中所述脱细胞溶液选自体积分数为0.5％的Triton X-100溶液或质量体积分数为0.1％的SDS溶液。

5.如权利要求3所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，步骤S22中所述的酶溶液为质量体积分数为0.25％的胰蛋白酶溶液或浓度为2.5U/mL的Dispasel酶溶液。

6.如权利要求1所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，步骤S3中含有胃蛋白酶的乙酸水溶液中，胃蛋白酶的质量分数为0.1％～0.5％，乙酸的体积分数为1％～5％；步骤S3中所述小肠粘膜下层基质溶液中小肠粘膜下层基质的质量分数为1％～5％。

7.如权利要求1～6任一项所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，对所述复合材料进行交联处理包括：将所述复合材料置于交联处理液中，于温度范围15℃～25℃条件下，摇床震荡1～5天后，冷冻干燥，得到所述后巩膜加固术用生物补片。

8.如权利要求7所述的后巩膜加固术用生物补片，其特征在于，所述复合材料以0.05g/mL～0.2g/mL的比例加入到所述交联处理液；所述交联处理液的溶剂为浓度范围为40％～95％的酒精，交联剂为京尼平、戊二醛或EDC中的一种，所述交联剂的质量体积分数范围为0.2％～2％，所述交联处理液的PH为5.0～7.0。

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