CN102590511A - 基于igfbp-2自身抗体或其与igfbp-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒及应用 - Google Patents
基于igfbp-2自身抗体或其与igfbp-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102590511A CN102590511A CN2012100329397A CN201210032939A CN102590511A CN 102590511 A CN102590511 A CN 102590511A CN 2012100329397 A CN2012100329397 A CN 2012100329397A CN 201210032939 A CN201210032939 A CN 201210032939A CN 102590511 A CN102590511 A CN 102590511A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- igfbp
- tumour
- autoantibody
- kit
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 202
- 102000004372 Insulin-like growth factor binding protein 2 Human genes 0.000 title claims abstract description 175
- 108090000964 Insulin-like growth factor binding protein 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 175
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title abstract description 38
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims abstract description 56
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims abstract description 56
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 47
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 96
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 claims description 41
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 13
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 abstract description 12
- 208000022131 polyp of large intestine Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010002224 anaplastic astrocytoma Diseases 0.000 abstract 1
- 208000029340 primitive neuroectodermal tumor Diseases 0.000 abstract 1
- 208000037062 Polyps Diseases 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 25
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 208000017819 hyperplastic polyp Diseases 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000030883 malignant astrocytoma Diseases 0.000 description 6
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 2
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001044940 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 206010061523 Lip and/or oral cavity cancer Diseases 0.000 description 2
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000037842 advanced-stage tumor Diseases 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 102000050770 human IGFBP2 Human genes 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 208000020717 oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 2
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000021233 14-3-3 theta Human genes 0.000 description 1
- 108091011161 14-3-3 theta Proteins 0.000 description 1
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027271 40S ribosomal protein SA Human genes 0.000 description 1
- 208000004804 Adenomatous Polyps Diseases 0.000 description 1
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000023665 Barrett oesophagus Diseases 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 201000005409 Gliomatosis cerebri Diseases 0.000 description 1
- 101000694288 Homo sapiens 40S ribosomal protein SA Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N N-phenyl amine Natural products NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005890 Neuroma Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010220 Pearson correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000003460 anti-nuclear Effects 0.000 description 1
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000022033 carcinoma of urethra Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000013332 literature search Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 208000011645 metastatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 206010073131 oligoastrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003698 tetramethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 201000006134 tongue cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了基于IGFBP-2自身抗体或其与IGFBP-2的联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，包括检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组，或者包括能够检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组和能够检测样品中IGFBP-2的第二试剂组，以及IGFBP-2自身抗体的检测或其与IGFBP-2的联合检测在制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用。本发明中IGFBP-2自身抗体的检测能够诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤，特别是能够诊断早中期胶质瘤及具有癌变风险的高级别结直肠息肉和/或结直肠肿瘤I-II级，IGFBP-2自身抗体与IGFBP-2的联合检测能够诊断不同级别的肿瘤和监测肿瘤从低级别向高级别进展的各个阶段，如能够诊断和鉴别星形胶质细胞瘤、间变星形细胞瘤和/或胶质母细胞瘤，和结直肠肿瘤I-IV级。
Description
技术领域
本发明涉及基于IGFBP-2自身抗体(IGFBP-2-Abs)的检测或其与IGFBP-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，以及IGFBP-2自身抗体的检测或其与IGFBP-2的联合检测在制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用。具体而言，本发明中对IGFBP-2自身抗体的检测能够诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤，特别是能够诊断早中期胶质瘤及具有癌变风险的高级别结直肠息肉和/或结直肠肿瘤I-II级，对IGFBP-2自身抗体与IGFBP-2的联合检测能够诊断不同级别的肿瘤和监测肿瘤从低级别向高级别进展的各个阶段，如能够诊断和鉴别星形胶质细胞瘤、间变星形细胞瘤和/或胶质母细胞瘤，和结直肠肿瘤I-IV级。
背景技术
手术切除是治疗早期肿瘤最有效的手段。然而因为肿瘤早期没有明显症状，且没有有效的早期肿瘤筛查方法，所以大多数肿瘤病人在就诊时已具有不可切除，不能治愈的肿瘤。医学影像和内视镜技术可能提高肿瘤的早诊，但是其高昂的费用和复杂的技术要求限制了它们的应用。然而，血液检测是早期筛查和诊断肿瘤的一种简便而经济实用的方法。
文献报道，恶性肿瘤患者能够产生对其肿瘤携带的肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)的自身抗体，因此，肿瘤相关抗原的自身抗体具有肿瘤诊断的价值，尤其在对早癌的诊断。因为外周血中肿瘤相关抗原的自身抗体出现能够在标准的临床检查前报道恶变的发生(1-4)。研究最多的是p53自身抗体(p53-Abs)。其已在临床诊断出肿瘤之前的患癌高危个体血清中检测到。例如：重度吸烟者和患有长期慢性阻塞性肺病的患者得肺癌之前(5)，巴雷特食管病人患食道癌之前(6)，具有口腔癌前病变的病人患口腔癌之前都能检测到p53自身抗体(7)。有肝硬化的病人在后来发展成肝癌之前，能检测到抗核自身抗体(8)。最近发现，抗annexin I，14-3-3theta和LAMR1 的自身抗体，在没有肺肿瘤状发生和临床确诊之前一年的高危患者血清中被检测到(9)。
胰岛素样生长因子结合蛋白-2(Insulin-like growth factor binding protein-2，IGFBP-2)是一种分泌性蛋白，其编码基因如基因ACCESSION NM_000597，VERSION NM_000597.2 GI：55925575所示。最近报道，IGFBP-2是一种肿瘤抗原，能够在乳腺癌，宫颈癌，和结肠癌患者体内诱导T细胞和B细胞免疫反应(10-11)。IGFBP-2在30％-80％的多种恶性肿瘤中过表达，如脑胶质瘤，结直肠肿瘤，前列腺癌，宫颈癌，乳腺癌，及甲状腺癌；而且IGFBP-2过表达程度与肿瘤级别相关(12-17)。IGFBP-2能促进癌细胞转移和侵袭，并且能通过调控PI3K/Akt/PTEN信号传导通路促进肿瘤发展(18-21)。常有报道外周血中IGFBP-2的浓度与恶性肿瘤的复发，转移和预后相关。但是，IGFBP-2在早癌患者血中浓度与正常人差别不大。因此，IGFBP-2诊断早癌不理想，如：脑胶质瘤(22-25)。
因此，目前需要发现敏感性和/或特异性更高、能够诊断早期肿瘤和/或能够诊断和监测肿瘤的发展的肿瘤检测标记物。
发明内容
本发明首次证明了IGFBP-2自身抗体(IGFBP-2-Abs)能够作为早期肿瘤诊断标志物、同时IGFBP-2-Abs和IGFBP-2联合检测能有效诊断各期肿瘤，监测肿瘤从低级别向高级别进展，即肿瘤的早、中、晚期，从而解决了上述问题。
本发明的一个目的在于提供基于IGFBP-2自身抗体的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒包括检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组，并且所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤。
本发明的另一个目的在于提供基于IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒包括能够检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组和能够检测样品中IGFBP-2的第二试剂组，并且所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤的进展。
其中，所述IGFBP-2自身抗体选自由抗IGFBP-2的IgG自身抗体、抗IGFBP-2的IgA自身抗体、抗IGFBP-2的IgM自身抗体、抗IGFBP-2的IgD自身抗体和抗IGFBP-2的IgE自身抗体组成的组，优选为抗IGFBP-2的IgG自身抗体和抗IGFBP-2 的IgM自身抗体，最优选为抗IGFBP-2的IgG自身抗体。
其中，所述第一试剂组包括使用通过常规间接ELISA法或短肽标签捕获ELISA法测定IGFBP-2自身抗体的试剂；所述第二试剂组包括通过直接ELISA法测定IGFBP-2的试剂。
其中，所述癌或肿瘤为胶质瘤或结直肠肿瘤。
在基于IGFBP-2自身抗体的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒中，所述早期肿瘤为星形胶质细胞瘤和间变星形细胞瘤，或者为结直肠肿瘤I-II级，所述高级别腺瘤为高级别结直肠息肉。
在基于IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒中，所述肿瘤为星形胶质细胞瘤、间变星形细胞瘤和/或胶质母细胞瘤；或者为结直肠肿瘤I-IV级。
其中，所述样品选自由血液、血浆、血清、组织液、细胞间液、脑脊髓液、滑液、胸膜液、淋巴液和唾液组成的组，优选选自由血液、血清、血浆、组织液和淋巴液组成的组，还更优选选自由血液、血清和血浆组成的组，最优选为血清。
本发明的又一目的在于提供IGFBP-2自身抗体的检测在诊断肿瘤以及制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤。
本发明的还一个目的在于提供IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测在诊断肿瘤以及制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤的进展。
本发明中对IGFBP-2自身抗体的检测能够诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤，特别是能够诊断早中期胶质瘤(例如星形胶质细胞瘤和间变星形细胞瘤)及具有癌变风险的高级别结直肠息肉和/或结直肠肿瘤I-II级，对IGFBP-2自身抗体与IGFBP-2的联合检测能够诊断不同级别的肿瘤和监测肿瘤从低级别向高级别进展的各个阶段，如能够诊断和鉴别星形胶质细胞瘤(即，胶质瘤II级)、间变星形细胞瘤(即胶质瘤III级)和/或胶质母细胞瘤(即，胶质瘤IV级)，以及结直肠肿瘤I-IV级。
附图说明
图1.血清抗IGFBP-2的IgG自身抗体。A-D，比较正常对照与肿瘤、脑胶质瘤 及其不同分期，结直肠息肉，结直肠肿瘤及其不同级别。血清IGFBP-2-Abs浓度的中值和四分位数的范围见箱线图。N，被试验者的数量；点，离群样本。肿瘤包括脑胶质瘤，结直肠息肉和结直肠肿瘤。CRC：结直肠肿瘤；A：星形胶质瘤；AA：间变星形胶质瘤；GBM：胶质母细胞瘤；Polyp：结直肠息肉。
图2.使用IGFBP-2-Abs建立的ROC曲线：用于辨别正常对照与肿瘤、胶质瘤及各期、结直肠肿瘤及各级别的结直肠肿瘤。肿瘤包括脑胶质瘤，结直肠息肉和结直肠肿瘤。
图3.血清IGFBP-2浓度比较：正常对照组与胶质瘤病人组(A)，结直肠息肉病人及结直肠肿瘤病人(B)。血清IGFBP-2的中值和四分位数的范围见箱线图。N，被试者的数量；点，离群样本。
图4.散点图和ROC曲线显示联合检测血清IGFBP-2和IGFBP-2-Abs辨别正常对照组和肿瘤病人(A)，正常对照组和胶质瘤病人(B)，及正常对照组和结直肠肿瘤病人(C)时的诊断价值。肿瘤病人包括胶质瘤，结直肠息肉和结直肠肿瘤病人。
图5.血清稀释度与450nm时的OD值之间的关系。间接ELISA检测一例IGFBP-2-Abs阳性的高级别息肉病人血清的IGFBP-2-Abs浓度。
图6.星形胶质瘤和高级别息肉组织的IGFBP-2表达免疫组化代表性结果(左)和免疫组化结果汇总(右)。A-C，星形脑胶质瘤；D-F，高级别息肉。阳性细胞被染成棕色。放大倍数：星形细胞瘤200倍，息肉100倍。实例表示IGFBP-2不表达(A，D)，低表达(B，E)和高表达(C，F)。
具体实施方式
以下对本发明进行详细说明。
本发明人发现，IGFBP-2的过表达与肿瘤的恶性程度呈正相关，在高级别肿瘤中，IGFBP-2的浓度显著高于低级别肿瘤和正常对照组，即IGFBP-2的表达随着肿瘤的进展而升高，因此，IGFBP-2可用作中晚期肿瘤的诊断标志物；但与之相反，发明人意外地发现，在早期肿瘤患者的体液特别是血清、血液、血浆中，IGFBP-2-Abs浓度显著高于晚期肿瘤患者，即IGFBP-2-Abs随着肿瘤从早期(包括癌变前息肉，特别是高级别息肉和多发增生性息肉)到晚期进展呈下降的趋势，因此，IGFBP-2-Abs能够作为早中期肿瘤、特别是早期肿瘤诊断的标志物。由此对 IGFBP-2-Abs和IGFBP-2进行联合检测，能有效诊断各期肿瘤，监测肿瘤发展的各个阶段。
具体而言，如果检测的结果中IGFBP-2浓度显著高于预设阈值，且IGFBP-2-Abs呈阴性，则往往预示着中晚期肿瘤；如果IGFBP-2的检测值与预设阈值相当或略高，且IGFBP-2-Abs呈阳性，则往往预示着早期肿瘤；如果IGFBP-2显著高于预设阈值，且IGFBP-2-Abs呈阳性，则往往预示着中期肿瘤。阴性、阳性以及检测值的高低可以基于预设阈值而确定，预设阈值可以利用取正常对照的平均值，也可以由本领域技术人员基于具体肿瘤根据具体要求进行设定，通常而言，预设阈值越高，检测的敏感性越低，而检测的特异性越高。
基于上述原理，形成了本发明。
本发明的一个目的在于提供一种诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤的方法，所述方法包括检测取自受试对象的样品中的IGFBP-2-Abs。
本发明的另一个目的在于提供一种诊断不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤的进展的方法，所述包括检测取自受试对象的样品中的IGFBP-2-Abs和IGFBP-2。
本发明的另一个目的在于提供一种监测肿瘤的复发的方法，所述方法包括检测取自受试对象的样品中的IGFBP-2-Abs和IGFBP-2。
本发明的另一个目的在于提供基于IGFBP-2自身抗体的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒包括检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组，并且所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤。
本发明的另一个目的在于提供基于IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒包括能够检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组和能够检测样品中IGFBP-2的第二试剂组，并且所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤的进展。
本发明的又一目的在于提供IGFBP-2自身抗体的检测在诊断肿瘤以及制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤。
本发明的还一个目的在于提供IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测在诊断肿瘤以及制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断 不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤从低级别向高级别的进展。
定义
“检测”的含义包括定量检测和定性检测。定性检测的实例包括仅仅测定IGFBP-2自身抗体和/或IGFBP-2是否存在，测定确定IGFBP-2自身抗体和/或IGFBP-2是否大于基线水平，以及测定比较测试样品与另一个样品(例如，对照样品)中IGFBP-2自身抗体和/或IGFBP-2的水平。定量检测的实例包括测定IGFBP-2自身抗体和/或IGFBP-2的浓度和/或水平。
“测试样品”取自生物体例如哺乳动物，进一步优选取自于人。测试样品的实例包括血液、血浆、血清、组织液、细胞间液、脑脊髓液、滑液、胸膜液、淋巴液和唾液，优选包括血液、血清、组织液、血浆和淋巴液，还更优选包括血液、血清和血浆组成的组，最优选为血清。
“肿瘤”包括原发性癌和转移性癌。举例而言，本发明的肿瘤诊断试剂或试剂盒能够诊断的肿瘤包括，但不限于结直肠肿瘤、胶质瘤、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、头颈癌、子宫内膜癌、胆道癌、肾癌、尿道癌、颈癌、甲状腺癌、脑癌、口癌、子宫癌、腹癌、舌癌、肛门癌、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、黑素瘤和肉瘤。这些肿瘤，可以在其发展的各个期间，包括第一阶段和第二阶段被诊断出来。本发明的肿瘤诊断试剂或试剂盒可以区分患有肿瘤、患有良性瘤和未患肿瘤的个体。
“高级别腺瘤”为肠镜组织学检查结果显示病变组织带有绒毛状成分、大于或等于1厘米或高级别上皮内瘤变(dysplasia)。
本发明的肿瘤诊断试剂或试剂盒中对IGFBP-2-Abs的检测特别适用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤，尤其是胶质瘤或结直肠肿瘤。举例而言，本发明的肿瘤诊断试剂或试剂盒特别适用于诊断鉴别星形胶质细胞瘤(即，胶质瘤II级)和/或间变星形细胞瘤(即胶质瘤III级)，或者高级别结直肠息肉和/或结直肠肿瘤I级、II级。IGFBP-2-Abs与IGFBP-2联合检测更能用于诊断不同级别的肿瘤(包括癌前息肉，特别是具有癌变风险的高级别息肉和多发增生性息肉)，监测肿瘤从低级别向高级别的进展。
“IGFBP-2自身抗体”或“IGFBP-2-Abs”是指肿瘤或肿瘤受试对象中产生的针对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的抗体，该自身抗体选自由抗IGFBP-2的IgG 自身抗体、抗IGFBP-2的IgA自身抗体、抗IGFBP-2的IgM自身抗体、抗IGFBP-2的IgD自身抗体和抗IGFBP-2的IgE自身抗体组成的组，优选为抗IGFBP-2的IgG自身抗体和抗IGFBP-2的IgM自身抗体，最优选为抗IGFBP-2的IgG自身抗体
检测方法和所用试剂
对于本发明的第一试剂组和第二试剂组没有特别限制，只要第一试剂组能够检测样品中胰岛素样生长因子结合蛋白-2自身抗体、第二试剂组能够检测样品中IGFBP-2即可。优选的是，所述第一试剂组包括使用通过常规间接ELISA法或短肽标签捕获ELISA法测定IGFBP-2自身抗体的试剂，所述第二试剂组包括通过直接ELISA法测定IGFBP-2的试剂。
以下举例而言分别对检测IGFBP-2自身抗体和IGFBP-2的方法进行描述，但所列举的方法仅是说明目的，并不意味着检测方法和试剂受这些实例的限制。
检测IGFBP-2自身抗体的方法
检测IGFBP-2自身抗体的方法不受特别限制，只要其能够检测IGFBP-2自身抗体即可。这些方法是本领域已知的，其中优选使用间接ELISA法和短肽标签捕获ELISA法。
间接ELISA法
间接ELISA法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体。
当使用间接ELISA法时，第一试剂组可以包括IGFBP-2蛋白(包括重组IGFBP-2蛋白)、用于建立标准曲线的IGFBP-2抗体(如人IgG及其它Ig抗体)、酶标记的抗IGFBP-2抗体(通常为酶标记的抗人IgG抗体或酶标记的抗其它Ig抗体)以及所述酶的底物。更具体而言，酶标记的抗IGFBP-2抗体可以为羊抗人IgG-辣根过氧化物酶，酶底物可以为四甲基联苯胺(TMB)。
短肽标签捕获ELISA法
当使用短肽标签捕获ELISA法时，第一试剂组可以包括带有各种短肽标记的重组IGFBP-2蛋白(如：his-IGFBP-2蛋白)、用于建立标准曲线的IGFBP-2抗体(如人IgG及其它Ig抗体)、抗各种短肽抗体(如：抗his标签的抗体)、酶标记的抗IGFBP-2抗体(通常为酶标记的抗人IgG抗体或酶标记的抗其它Ig蛋白抗体)以及所述酶的底物。
间接免疫荧光法
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(FITC)、四乙基罗丹明(rhodamine，RIB200)、四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)等与相应抗体(或抗原)以化学的方法结合，将荧光标记抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体-抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已知的抗体(或抗原)即可推知另一个未知抗原(或抗体)的存在。
在检测本发明的IGFBP-2自身抗体时，通常使用间接免疫荧光法(IIF)，其原理是以荧光素标记抗球蛋白抗体，抗体与相应抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用，从而推知抗体的存在。第一试剂组可以包括IGFBP-2蛋白(包括重组IGFBP-2蛋白)和荧光素标记的抗球蛋白抗体(通常为荧光素标记的抗人IgG抗体或荧光素标记的抗其它Ig蛋白抗体)。
检测IGFBP-2的方法
检测IGFBP-2的方法不受特别限制，只要其能够检测IGFBP-2自身抗体即可。这些方法是本领域已知的，其中优选使用直接ELISA法。
直接ELISA法
当使用直接ELISA法时测定IGFBP-2时，第二试剂组包括未标记和/或酶标记的抗IGFBP-2抗体、IGFBP-2蛋白或重组IGFBP-2蛋白及所述酶的底物。
直接免疫荧光法(DIF)
直接免疫荧光法是利用荧光素如异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明等标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。
当使用直接免疫荧光法时，第二试剂组包括荧光素标记的IGFBP-2抗体(如人IgG及其它Ig抗体)。
斑点杂交法(Dot blot assay)
将稀释的血清点在硝酸纤维膜上，用抗体和膜上的抗原杂交，分析斑点的亮度用ChemiDocXRS图像系统(Bio-Rad)，根据标准曲线计算抗原浓度。
有益效果
本发明中对IGFBP-2自身抗体的检测能够诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤，特别是能够诊断早中期胶质瘤(例如星形胶质细胞瘤和间变星形细胞瘤)及具有癌变风险的高级别结直肠息肉和/或结直肠肿瘤I-II级，对IGFBP-2自身抗体与IGFBP-2的联合检测能够诊断不同级别的肿瘤和监测肿瘤从低级别向高级别进展的各个阶段，如能够诊断和鉴别星形胶质细胞瘤(即，胶质瘤II级)、间变星形细胞瘤(即胶质瘤III级)和/或胶质母细胞瘤(即，胶质瘤IV级)，以及结直肠肿瘤I-IV级。
实施例
以下通过实施例更为详细地说明本发明，但这并不意味着本发明的保护范围受这些实施例限制。
本发明实施例的概述如下。
研究病人和研究方法：使用脑胶质瘤和结直肠肿瘤为研究模型。检测了260个肿瘤病人(145个胶质瘤病人，45个结直肠息肉病人和70个结直肠肿瘤病人)的血清IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体浓度。使用ROC曲线来评估诊断能力。
研究结果：与正常对照组的血清IGFBP-2-Abs浓度(均值：11ng/ml，中值：0ng/ml，范围：0-212ng/ml)相比，血清IGFBP-2自身抗体浓度(IGFBP-2-Abs)在肿瘤中显著升高(均值：82ng/ml，中值：17ng/ml，范围：0-1387ng/ml)(P＜0.0001)，而且在早癌患者血清中其浓度更高，与血清IGFBP-2的浓度相反。IGFBP-2-Abs能够有效地区分正常对照与病理分级II和III级胶质瘤患者[AUC：0.821-0.864；95％置信区间(CI)＝0.762-0，936；P＜0.0001]，而且还能将正常对照与临床分期I和II期结直肠肿瘤有效地分开(AUC：0.668；95％CI＝0.566-0.770；P＝0.002)，同时还能预示有患结直肠肿瘤高风险的高级别结直肠息肉(AUC：0.72；95％CI＝0.630-0.811；P＜0.0001)。诊断病理分级II和III级胶质瘤的敏感度达到66％-84％，特异度达到81％。IGFBP-2和IGFBP-2-Abs联合检测分别提高了诊断各级别肿瘤(AUC：0.823)，脑胶质瘤(AUC：0.800)和结直肠肿瘤(AUC：0.917)诊断效率。
结论：我们的研究结果首次证实了IGFBP-2-Abs可以用于早癌的检测，且其与血清IGFBP-2联合检测能够提高肿瘤的诊断率。
下面对该实施例进行详细描述。
材料与方法
患者资料与样本
前瞻性收集401例血液样本。所有患者和正常对照者的血样收取均通过医院伦理委员会的批准、患者和正常者签署知情同意书。胶质瘤患者血清和肿瘤组织样本来源于2008-2010年北京天坛医院收治的患者，共计145例。根据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)脑胶质瘤分级标准，收集II级星形细胞瘤(Astrocytomas，As)78例、III级间变星形细胞瘤(Anaplastic astrocytomas，AAs)37例和IV级胶质母细胞瘤(Glioblastomas，GBMs)30例。健康人对照(141例)、结直肠息肉(45例：9例多发增生性息肉、7例非高级别腺瘤和29例高级别腺瘤)和结直肠癌血清样本(70例：38例I-II期结直肠癌，32例III-IV期结直肠癌)取自北京世纪坛医院2009-2010年收治的患者。为避免入组时选择性的偏见，凡是未有患癌历史的健康人和新诊断的原发脑胶质瘤、结直肠息肉和结直肠癌患者均可纳入研究对象。
抽取餐前的正常人和餐前、手术前或肠镜检查前的患者血液样本，3,000rpm离心10分钟，上层血清分装并保存在-70℃冰箱直到使用。高级别腺瘤定义为肠镜组织学检查结果显示病变组织带有绒毛状成分、大于或等于1厘米或高级别上皮内瘤变(Dysplasia)。
63例星形细胞瘤组织和32例高级别息肉(23例高级别腺瘤和9例多发增生性息肉)分别来源于手术和肠镜检的病变组织，随后对组织标本进行福尔马林固定、石蜡包埋及免疫组化分析。
间接ELISA法测定血清中抗IGFBP-2的IgG自身抗体
血清中抗IGFBP-2的IgG自身抗体用间接ELISA法检测。实验主要流程是：用50mM碳酸缓冲液(Sigma-Aldrich Corp.，St.Louis，MO)稀释的1.0ug/ml重组人IGFBP-2蛋白(R&D Systems Inc.，Minneapolis，MN)包埋具有超高效结合表面的immulon 4HBX免疫微量滴定板(Dynex Technologies，Inc.，Chantilly，VA)，空白对照组用碳酸缓冲液包埋，每孔50ul。滴定板的最后两列加入做一系列稀释的人IgG抗体(浓度：25，100，250，500，1,000ng/ml)(Invitrogen Ltd.，Paisley，UK)用于建立标准曲线。根据不同的人IgG抗体的浓度(25ng/ml-1,000ng/ml)，计算出该检测方法对应的的变异系数为0.0998-0.012。
用磷酸盐缓冲液(PBS)中制备的5％牛血清白蛋白液(BSA)封板，每孔加入50ul，室温下封闭2小时。随后用用PBS稀释的0.1％吐温-20清洗4次，然后向每孔加入50ul用1％BSA/PBS稀释的血清((1/10稀释)，轻轻振荡后室温温育2小时。清洗4次后，每孔加入50ul稀释度为1∶30,000的羊抗人IgG-辣根过氧化物酶(HRP)(Invitrogen Ltd.，Paisley，UK)室温温育1小时。清洗4次后，每孔加入100ul四甲基邻苯胺(TMB)(Invitrogen Ltd.，Paisley，UK)显色，在波长640nm下读数。当250ng/ml标准品的O.D读数达到0.35时，向每孔加入100ul1N盐酸(HCl)终止反应，立刻在波长为450nm处读数。血清O.D值的计算方法为重组人IGFBP-2蛋白包埋孔的O.D值减去用碳酸盐缓冲液包埋孔的O.D值。根据标准曲线计算血清中IGFBP-2自身抗体的浓度。每份样品重复两孔，样本重复检测两次。
可溶性的IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体可能在血清中形成复合物，有可能影响IGFBP-2自身抗体的检测。但是发生的可能性很小，因为抗体在可溶性和固定化抗原都存在的情况下，与固定化抗原形成更加稳定的复合物，尤其是在血清稀释后。为排除可溶性的IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体在血清中形成复合物的可能性，我们用一例间接ELISA法测得的IGFBP-2自身抗体阳性的息肉患者的血清做稀释度实验。将血清进行一系列浓度的稀释(1/10，1/50，1/100，1/200)，检测O.D值，结果显示稀释度和O.D值之间有负相关的线性关系(参见图5)，表明血清中存在的IGFBP-2蛋白对IGFBP-2自身抗体的检测没有影响。根据稀释度实验的结果，间接ELISA法检测IGFBP-2自身抗体的敏感度可达2ng/ml。
直接ELISA法测定血清IGFBP-2
血清IGFBP-2用商业化的抗IGFBP-2多克隆抗体预包被的IGFBP-2ELISA板检测(RapidBio Lab，Calabasas，CA，USA)，实验方法参见公司说明，同我们以前报道(22)。IGFBP-2标准品的浓度分别为0，2.5，10，25，50，and 100ng/ml，用来构建标准曲线。该实验方法检测的灵敏度可达2.5ng/ml。待检血清40倍稀释，每份样品重复两孔，样本重复检测两次。IGFBP-2均值用于统计分析。
免疫组化分析
IGFBP-2免疫组化的实验方法同我们以前报道(22)。肿瘤组织切片用IGFBP-2 单克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA)免疫组化染色。选取5个深染区域确定IGFBP-2表达阳性细胞率。0代表没有阳性细胞，+代表阳性细胞率＜30％，++代表阳性细胞率31-60％，+++代表阳性细胞率＞60％。
统计分析
统计分析使用SPSS 13.0软件完成。正常人和患者数据用方差检验的分析方法。健康对照和患者的IGFBP-2自身抗体和血清IGFBP-2蛋白水平的差异用标准非参数Mann-Whitney U检验。血清IGFBP-2抗体水平和临床参数(如年龄、性别、肿瘤级别等)的相关性采用单变量线性回归分析。单或多变量Cox regression分析和Kaplan-Meier plotting分析IGFBP-2抗体和抗原与预后的相关性。ROC曲线分析用来确定血清IGFBP-2抗体和抗原单独诊断肿瘤和预测预后的特异性和敏感性，曲线下方的面积(AUC值)用卡方检验分析。随后的multi-sensor神经网络分析及ROC分析用来评估血清IGFBP-2抗体和抗原联合诊断肿瘤和预测预后的特异性和敏感性。血清IGFBP-2抗体水平与肿瘤组织IGFBP-2表达水平和与免疫因子血清水平的相关性采用Pearson相关性分析。P值小于0.05认为具有统计学意义。
结果
肿瘤患者血清IGFBP-2-Abs浓度升高，且早期高于晚期
各实验组的基本信息汇总于表1.由于入组策略的原因，不同实验组在性别和年龄的分布存在差异。但是，通过回归分析我们发现性别和年龄的分布差异并不明显地影响不同实验组血清IGFBP-2-Abs浓度(见表1)，说明不同实验组间血清IGFBP-2-Abs浓度差异不是由性别和年龄的差异引起。
表1
我们发现，与对照组正常人(Control)的血清IGFBP-2-Abs的浓度(均值：11ng/ml，中值：0ng/ml，范围：0-212ng/ml)相比，肿瘤组病人血清IGFBP-2-Abs浓度显著升高(均值：82ng/ml，中值：17ng/ml，范围：0-1387ng/ml)(P＜0.0001，图1A)。脑胶质瘤组(Glioma)(均值：128ng/ml，中值：24ng/ml，范围：0-1359ng/ml，P＜0.0001)，结直肠息肉组(Colorectal polyps)(均值：32ng/ml，中值：14ng/ml，范围：0-212ng/ml，P＜0.0001)和结直肠肿瘤组(CRC)(均值：22ng/ml，中值：1ng/ml，范围：0-161ng/ml，P＝0.001)的患者血清IGFBP-2-Abs浓度显著高于对照组血清IGFBP-2-Abs的浓度(图1B)。脑胶质瘤组IGFBP-2-Abs浓度明显高于结直肠息肉组和结直肠肿瘤组。
将脑胶质瘤组按照WHO2007-中中枢神经系统肿瘤分类标准进行分类和结直肠肿瘤组按照美国癌症联合会(AJCC)的分级标准进行分类，我们惊喜地发现早癌组病人的血清IGFBP-2-Abs浓度显著高于晚癌组(图1C-D)。星形胶质细胞瘤(A)病人(均值：171ng/ml，中值：25ng/ml)和间变星形细胞瘤(AA)(均值：120ng/ml，中值：46ng/ml)病人的血清IGFBP-2-Abs浓度显著高于胶质母细胞瘤(GBM)病人组(均值：23ng/ml，中值：0ng/ml)(A：P＝0.001，AA：P＜0.0001)和正常对照组(P＜0.0001for A and AA)，但是在GBM病人组和正常对照组之间，血清IGFBP-2-Abs浓度仅有微小的变化(P＝0.064)(图1C)。同样地，结直肠息肉病人(polyps)组(均值：32ng/ml，中值：14ng/ml)和结直肠肿瘤I-II级(CRCI-II)病人组(均值：30ng/ml，中值：5ng/ml)的血清IGFBP-2-Abs浓度高于结直肠肿瘤III-IV级(CRC III-IV)病人组(均值：17ng/ml，中值：0ng/ml)(polyps：P＜0.0001；CRCI-II：P＝0.089)和正常对照组(polyps和CRC I-II：P＜0.0001)。但是在CRCIII-IV病人组和正常对照组之间，血清IGFBP-2-Abs浓度没有差别(P＝0.135)(图1D)。
血清IGFBP-2-Abs作为诊断早癌的生物标志物
我们采用血清IGFBP-2-Abs的浓度进行ROC曲线分析，用于分辨病人和正常人。使用血清IGFBP-2-Abs作为诊断生物标志物来诊断所有肿瘤病人、脑胶质瘤病人和结直肠肿瘤病人，其AUC值分别是0.729(95％CI＝0.679-0.779；P＜0.0001)、0.783(95％CI＝0.729-0.836；P＜0.0001)和0.632(95％CI＝0.550-0.774；P＝0.002)(图3A-D)。按肿瘤级别对脑胶质瘤分类后，使用血清IGFBP-2-Abs诊断不同级别胶质瘤病人时，诊断A、AA和GBM的AUC值分别是0.82(95％CI＝0.762-0.880；P＜0.0001)、0.864(95％CI＝0.792-0.936；P＜0.0001)和0.583(95％CI＝0.464-0.701；P＝0.156)(图3E)，表明与诊断GBM相比，血清IGFBP-2-Abs能够更准确地诊断A和AA。
按肿瘤分期标准对CRC分类后，血清IGFBP-2-Abs诊断CRC I-II和CRCIII-IV时的AUC值分别是0.668(95％CI＝0.566-0.770；P＝0.002)和0.590(95％CI＝0.477-0.703；P＝0.113)(图3I)，这说明血清IGFBP-2-Abs在一定程度上能诊断CRC I-II，但是不能诊断CRC III-IV。而诊断polyps时，AUC值是0.72(95％CI＝0.630-0.811，P＜0.0001)(图3I)，揭示polyps中存在部分有发展成CRC的高风险患者。
血清IGFBP-2-Abs浓度的阈值设定成11ng/ml时(正常对照的均值)，诊断A的敏感度是66％，特异度是81％，阳性预测值和阴性预测值分别是65％和81％；诊断AA时，敏感度是81％，特异度是81％，阳性预测值和阴性预测值分别是53％和94％；诊断CRC I-II时，敏感度是40％，特异度是81％，阳性预测值和阴性预测值分别是39％和83％。当血清IGFBP-2-Abs浓度的阈值设定成130ng/ml时，诊断A的敏感度是25％，特异度是99％，阳性预测值和阴性预测值分别是91％和71％；诊断AA时，敏感度是32％，特异度是99％，阳性预测值和阴性预测值分别是86％和85％。
血清IGFBP-2和血清IGFBP-2-Abs联合检测提高肿瘤诊断效率
前面已经提及，IGFBP-2的过表达与肿瘤的恶性程度呈正相关(12-17)。因此，我们也检测了401例血清中IGFBP-2的浓度。发现在高级别肿瘤中，IGFBP-2的浓度显著高于低级别肿瘤和正常对照组(胶质瘤组：P＝＜0.005；polyp组和CRC组：P ＜0.0001)(图3A-B)。因为IGFBP-2在肿瘤的发生和发展中起着非常重要的作用，那么，血清IGFBP-2和IGFBP-2-Abs联合检测应该能提高肿瘤的诊断率。
如图4所示，血清IGFBP-2和IGFBP-2-Abs联合检测有效地把被实验者分成三组：一组IGFBP-2和IGFBP-2-Abs的浓度都较低，二组IGFBP-2-Abs的浓度高，三组IGFBP-2的浓度高。ROC曲线分析表明将血清IGFBP-2和IGFBP-2-Abs联合检测时，其诊断肿瘤(AUC：0.823；95％CI＝0.78-0.866)(图4A)，胶质瘤(AUC：0.800；95％CI＝0.749-0.852)(图4B)和CRC(AUC：0.917；95％CI＝0.870-0.964)(图4C)的能力大大提高；而单独检测IGFBP-2或IGFBP-2-Abs时，其诊断能力要小很多：诊断肿瘤(AUC：0.672or 0.730)，诊断胶质瘤(AUC：0.551or 0.784)以及诊断CRC(AUC：0.916or 0.622)。
星形胶质细胞瘤和高级别结直肠息肉病人血清IGFBP-2-Abs与其肿瘤组织IGFBP-2表达的关系
血清抗IGFBP-2的自身抗体的存在应该反映患者对其肿瘤组织中IGFBP-2过表达产生的抗体免疫反应，特别是具有相对较强免疫能力的早癌病人。因此，我们采用免疫组化检测了IGFBP-2在63例星形胶质细胞瘤和32例高级别结直肠息肉组织中的表达(图6)。图6中免疫组化结果汇总于表2和表3。
表2星形胶质细胞瘤的免疫组化结果
| 表达 | 无 | 低 | 高 | 非常高 | |
| 强度 | 0 | + | ++ | +++ | 数量 |
| 数量 | 17 | 29 | 13 | 4 | 63 |
高(非常高+高)表达：27％；低表达：46％
表3高级别息肉组织的免疫组化结果
| 表达 | 无 | 低 | 高 | 非常高 | |
| 强度 | 0 | + | ++ | +++ | 数量 |
| 数量 | 14 | 7 | 7 | 4 | 32 |
高(非常高+高)表达：34％；低表达：22％
我们发现，73％(46/63)的星形胶质细胞瘤表达较低水平(46％)到较高水平(27％)的IGFBP-2。在这46例中，71％(33/46)的患者血清IGFBP-2-Abs浓度高于前面设定的阈值(11ng/ml)。相似地，56％(18/32)的高级别大结直肠息肉表达较低(22％)到较高(34％)水平的IGFBP-2。在这18例表达IGFBP-2的病人中(7例高级别结直肠腺瘤和9例多发增生性息肉)，50％(9/18)的IGFBP-2-Abs浓度高于前面设定的阈值(11ng/ml)。
讨论
IGFBP-2在30％-80％的多种恶性肿瘤中过表达(12-17)，而过表达IGFBP-2预示患者预后差(22-25)，表明诊断IGFBP-2过表达的恶性肿瘤的必要性。本研究首次报道血清IGFBP-2-Abs诊断早期脑胶质瘤和结直肠肿瘤，甚至可能预测癌变前息肉及与血清IGFBP-2联合检测诊断不同级别肿瘤的价值。
星形脑胶质瘤是一种弥散、侵润性低级别脑胶质瘤(LGGs)，比其他两种侵润性低级别LGGs(少枝胶质细胞瘤，oligodendrogliomas，和少枝星形胶质细胞瘤，oligoastrocytomas)的恶性程度更大(27)。核磁共振成像(MRI)仍是诊断临床症状出现的星形脑胶质瘤的标准方法，但是大多数病人最初并没有临床症状表现。我们在星形脑胶质瘤病人血清检测到IGFBP-2-Abs的发现表明了采用血清检测手段检测血清IGFBP-2-Abs用于诊断星形胶质瘤的潜力。而且，在间变星形胶质细胞瘤患者血清中，IGFBP-2-Abs浓度继续升高，因此，检测IGFBP-2-Abs还可能用来监测星形脑胶质瘤向间变星形脑胶质瘤的进展。在胶质母细胞瘤病人血清中IGFBP-2-Abs浓度降低，这可能是由于这类病人增加的免疫抑制所造成。
超过95％的结直肠肿瘤是由腺瘤性息肉发展而来，而且高级别腺瘤和多发增生性息肉有更大的恶性潜能(28-29)。本研究发现IGFBP-2-Abs浓度在结直肠息肉病人血清中显著高于正常对照。50％的高级别息肉组织表达从低到高的IGFBP-2，而这些患者血清的IGFBP-2-Abs的浓度都高于11ng/ml阈值(正常对照组IGFBP-2-Abs浓度均值)。这一发现表明，IGFBP-2-Abs不仅能用来诊断早期脑胶质瘤，而且还可能预示癌前病变的高级别腺瘤和多发增生性息肉。
我们的结果显示，尽管结直肠肿瘤病人血清IGFBP-2浓度高于胶质瘤病人，但是胶质瘤病人的血清IGFBP-2-Abs浓度明显高于结直肠肿瘤病人。这说明与结直肠肿 瘤相比，脑胶质瘤表达的IGFBP-2具有更好的免疫原性。这一现象可能与肿瘤的微环境和肿瘤细胞诱发的免疫抑制机制相关(30)，也可能是不同肿瘤相关抗原在不同类型的肿瘤发展中所起的作用不同而造成的。P53自身抗体在乳腺癌，结肠癌，口腔癌，肺癌和胃癌中被报道存在，并与高级别肿瘤和较差预后相关(31)。但是，p53自身抗体在III和IV级胶质瘤病人的血清中却不存在(32)。这可能是由于血脑屏障和p53蛋白主要是细胞内定位所造成，然而分泌性的IGFBP-2蛋白更可能被免疫系统识别。
使用肿瘤相关抗原的自身抗体诊断肿瘤时，相对较低的敏感度是大家主要关注的问题(31)。在我们的星形胶质瘤病例中，73％的病人过表达IGFBP-2，其中，71％的病人血清的IGFBP-2-Abs浓度高于11ng/ml，提示IGFBP-2-Abs能有效地诊断大多数星形胶质瘤病例。肿瘤相关抗原的自身抗体的特异性一般较高，这是因为在正常人中这样的自身抗体几乎不存在，使得其能够成为诊断肿瘤的可依赖的生物标志物(31)。IGFBP-2-Abs的阈值设为11ng/ml和130ng/ml时，诊断星形胶质瘤的特异性分别是81％和99％。我们的文献检索发现，除了肿瘤以外还没有在其他疾病中发现IGFBP-2过表达的一致报道。
我们以前报道在胶质母细胞瘤病人肿瘤切除后，血浆IGFBP-2浓度降低，但是复发后，IGFBP-2浓度重新升高(22)。因此，将血清IGFBP-2和IGFBP-2-Abs结合检测不仅能增强对不同级别肿瘤的诊断能力，而且还能用来监测肿瘤的复发和进展。
综上所述，我们首次提供IGFBP-2-Abs能够作为早癌诊断标志物、同时IGFBP-2-Abs和IGFBP-2联合检测能有效诊断各期肿瘤的实验证据。
参考文献
1.Sahin U，Tureci O，Schmitt H et al.人类肿瘤引发宿主多种特异性免疫反应Human neoplasms elicit multiple specific immune responses in the autologous host.Proc Natl Acad Sci U S A 1995；92：11810-1183.
2.Finn OJ.免疫反应作为癌症检测的生物标志物及更多Immune response as a biomarker for cancer detection and a lot more.N Engl J Med 2005；353：1288-1290.
3.Wang XJ，Yu JJ，Sreekumar A et al.前列腺癌的自身抗体指纹Autoantibody Signatures in Prostate Cancer.N Engl J Med 2005；353：1224-1235.
4.Tan EM.，自身抗体作为发现肿瘤发生过程中异常细胞的机制的标志物Autoantibodies as reporters identifying aberrant cellular mechanisms in tumorigenesis.J Clin Invest 2001；108：1411-1415.
5.Lubin R，Zalcman G，Bouchet L et al.血清p53抗体作为肺癌的早期标志物Serum p53 antibodies as early markers of lung cancer.Nat Med 1995；1：701-702.
6.Cawley HM，Meltzer SJ et al.巴雷特食管或食管癌患者的抗p53抗体能预预警癌诊断。Anti-P53 antibodies in patients with Barrett’s esophagus or esophageal carcinoma can predate cancer diagnosis.Gastroenterology 19981；15：19-27.
7.Ralhan R，Nath N，Agarwal S et al.循环p53抗体作为口腔癌早诊标志物：与P53改变的相关性。Circulating p53 antibodies as early markers of oral cancer：correlation with p53 alterations.Clin Cancer Res 1998；4：2147-2152.
8.Imai H，Chan EKL，Kiyosawa K et al.肝细胞肝癌的抗体识别携带剪切体因子功能域的独特核抗原。Novel nuclear autoantigen with splicing factor motifs identified with antibody from hepatocellular carcinoma.J Clin Invest 1993；92：2419-2426.
9.Qiu J，Choi G，Li L et al.annexin I，14-3-3theta和LAMR1的自身抗体在的出现在肺癌诊断前的血清中出现。Occurrence of autoantibodies to，14-3-3theta and LAMR1in prediagnostic lung cancer sera.J Clin Oncol 2008；26：5060-5066.
10.Park KH，Gad E，Goodell V et al.胰岛素样生长因子结合蛋白-2是乳腺癌免疫修饰的靶点Insulin-like growth factor-binding protein-2 is a target for the immunomodulation of breast cancer.Cancer Res 2008；68：8400-8409.
11.Kalli KR，Krco CJ，Hartmann LC et al.HLA-DR变性表位库在癌患者中检测出胰岛素样生长因子结合蛋白2特异性的免疫反应。An HLA-DR-degenerate epitope pool detects insulin-like growth factor binding protein 2-specific immunity in patients with cancer.Cancer Res 2008；68：4893-4901.
12.Fuller GN，Rhee CH，Hess KR et al.胰岛素样生长因子结合蛋白2在胶质母细胞瘤中的重新激活表达：平行性基因表达谱分析揭示。Reactivation of insulin-like growth factor binding protein 2 expression in glioblastoma multiforme：a revelation by parallel gene expression profiling.Cancer Res 1999；59：4228-4232.
13.Miraki-Moud F，Jenkins PJ，Fairclough PD et al.胰岛素样生长因子结合蛋白2在伴发或无肢端肥大症的结肠癌患者血清和肿瘤组织中表达升高。Increased levels of insulin-like growth factor binding protein-2 in sera and tumours from patients with colonic neoplasia with and without acromegaly.Clin Endocrinol(Oxf)2001；54：499-508
14.Thrasher JB，Tennant MK，Twomey PA et al.前列腺组织中胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3的免疫组织化学定位：临床相关性研究Immunohistochemical localization of insulin-like growth factor binding proteins 2 and 3 in prostate tissue：clinical correlations.J Urol 1996；155：999-1003
15.Busund LT，Richardsen E，Busund R et al.与良性病灶相比，胰岛素样生长因子结合蛋白-2在乳腺癌组织中呈现显著高表达Significant expression of IGFBP2 inbreast cancer compared with benign lesions.J Clin Pathol 2005；58：361-366.
16.Wang H，Rosen DG，Wang H et al.胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-5在不同组织学分类的卵巢癌中的差异性调节Insulin-like growth factor-binding protein 2 and 5are differentially regulated in ovarian cancer of different histologic types.Mod Pathol 2006；1149-1156
17.Boulle N，Logie A，Gicquel C et al.胰岛素样生长因子II和胰岛素样生长因子结合蛋白-2的水平升高与散发性肾上腺皮质瘤恶性度关联分析Increased levels of insulin-like growth factor II(IGF-II)and IGF-binding protein-2 are associated with malignancy in sporadic adrenocortical tumors.J Clin Endocrinol Metab 1998；83；1713-1720.
18.Song SW，Fuller GN，Khan A et al.IIp45作为胰岛素样生长因子结合蛋白-2的新型结合蛋白，能拈抗由胰岛素样生长因子2引起的促进胶质瘤细胞侵袭的作用IIp45，a novel IGFBP-2 binding protein，antagonizes IGFBP-2 stimulation of glioma cellinvasion.Proc Natl Acad Sci 2003；100：13970-13975.
19.Wang GK，Hu L，Fuller GN et al.胰岛素样生长因子结合蛋白-2和整合素alpha5的相互作用对胰岛素样生长因子结合蛋白-2诱导的细胞运动具有核心作用。An interaction between insulin-like growth factor-binding protein 2(IGFBP2)and integrin alpha5 is essential for IGFBP2-induced cell mobility.J Biol Chem 2006；281；14085-14091.
20.Lee EJ，Mircean C，Shmulevich I et al.胰岛素样生长因子结合蛋白-2促进卵巢癌细胞侵袭Insulin-like growth factor binding protein 2 promotes ovarian cancer cell invasion.Mol Cancer 2005；4：7-12.
21.Mehrian-Shai R，Chen CD，Shi T et al.胰岛素样生长因子结合蛋白是胶质母细胞瘤和前列腺癌中PTEN状态和PI3K/AKT通路激活的一个候选分子标志。Insulin growth factor-binding protein 2 is a candidate biomarker for PTEN status and PI3K/Akt pathway activation in glioblastoma and prostate cancer.Proc Natl Acad Sci U S A 2007；104：5563-5568.
22.Lin Y.Jiang T，Zhou K et al.血浆胰岛素样生长因子结合蛋白-2水平预测高级别胶质瘤病人的临床转归Plasma IGFBP-2 levels predict clinical outcomes of patients with high-grade gliomas.Neuro Oncol 2009；11：468-76.
23.Shariat SF，Lamb DJ，Kattan MW et al.术前血浆胰岛素样生长因子I、胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3水平对前列腺癌侵袭、进展和转移的相关性Association of preoperative plasma levels of insulin-like growth factor I and insulin-like growth factor binding proteins-2 and-3 with prostate cancer invasion，progression，and metastasis.J Clin Oncol 2002；20：833-841.
24.Baron-Hay S，Boyle F，Ferrier A，Scott C.升高的血清胰岛素样生长因子结合蛋白-2作为卵巢癌预后的标志Elevated serum insulin-like growth factor binding protein-2 as a prognostic marker in patients with ovarian cancer.Clin Cancer Res 2004；10；1796-806.
25.Liou JM，Shun C T，Liang JT et al.血浆中胰岛素样生长因子结合蛋白-2水平作为结直肠癌诊断和预后的分子标志Plasma insulin-like growth factor-binding protein-2 levels as diagnostic and prognostic biomarker of colorectal cancer.J ClinEndocrinol Metab 2010；95：1717-1725.
26.Patton A，Mullenix MC，Swanson SJ et al.一种酸解离桥酶联免疫吸附法用于在抗原存在的情况下检测抗治疗蛋白的抗体An acid dissociation bridging ELISA for detection of antibodies directed against therapeutic proteins in the presence of antigen.J Immunol Methods 2005；304：189-195.
27.Bourne TD，Schiff D.低级别胶质瘤的分子发现，临床管理及转归的进展Update on molecular findings，management and outcome in low-grade gliomas.Nat Rev Neurol 2010；6：695-701
28.Bujanda L，Cosme A，Gil I et al.恶性结直肠息肉Malignant colorectal polyps.World J Gastroenterol 2010；16：3103-3111.
29.Boparai KS，Mathus-Vliegen EM，Koornstra JJ et al.在对增生性息肉综合症患者的随访时发现结直肠癌患病风险增加：多中心列队研究Increased colorectal cancer risk during follow-up in patients with hyperplastic polyposis syndrome：a multicentrecohort study.Gut 2010；59：1094-1100.
30.Comtesse N，Zippel A，Walle S et al.对良性肿瘤的复杂体液免疫应答：频繁的对特异抗原的抗体应答作为诊断标志Complex humoral immune response against a benign tumor：frequent antibody response against specific antigens as diagnostictargets.Proc Natl Acad Sci U S A2005；102：9601-9606.
31.Soussi T.不同类型癌症病人血清p53抗体：综述。p53 Antibodies in the sera of patients with various types ofcancer：a review.Cancer Res 2000；60：1777-1788
32.Rainov NG，Dobberstein KU，Fittkau M et al.胶质瘤病人血清中不存在p53自身抗体。Absence of p53 autoantibodies in sera from glioma patients.Clin Cancer Res 1995；1：775-781.
Claims (10)
1.基于IGFBP-2自身抗体的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒包括检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤。
2.基于IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒包括能够检测样品中IGFBP-2自身抗体的第一试剂组和能够检测样品中IGFBP-2的第二试剂组，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤的进展。
3.如权利要求1或2所述的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述IGFBP-2自身抗体选自由抗IGFBP-2的IgG自身抗体、抗IGFBP-2的IgA自身抗体、抗IGFBP-2的IgM自身抗体、抗IGFBP-2的IgD自身抗体和抗IGFBP-2的IgE自身抗体组成的组，优选为抗IGFBP-2的IgG自身抗体和抗IGFBP-2的IgM自身抗体，最优选为抗IGFBP-2的IgG自身抗体。
4.如权利要求1或2所述的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述第一试剂组包括使用通过常规间接ELISA法或短肽标签捕获ELISA法测定IGFBP-2自身抗体的试剂；所述第二试剂组包括通过直接ELISA法测定IGFBP-2的试剂。
5.如权利要求1或2所述的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述肿瘤为胶质瘤或结直肠肿瘤。
6.如权利要求1所述的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述早期肿瘤为星形胶质细胞瘤和间变星形细胞瘤，或者为结直肠肿瘤I-II级，所述高级别腺瘤为高级别结直肠息肉。
7.如权利要求2所述的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述肿瘤为星形胶质细胞瘤、间变星形细胞瘤和/或胶质母细胞瘤；或者结直肠肿瘤I-IV级。
8.如权利要求1或2所述的肿瘤诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述样品选自由血液、血浆、血清、组织液、细胞间液、脑脊髓液、滑液、胸膜液、淋巴液和唾液组成的组，优选选自由血液、血清、血浆、组织液和淋巴液组成的组，还更优选选自由血液、血清和血浆组成的组，最优选为血清。
9.IGFBP-2自身抗体的检测在制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述诊断试剂或试剂盒用于诊断早期肿瘤或具有癌变风险的高级别腺瘤。
10.IGFBP-2和IGFBP-2自身抗体的联合检测在制备肿瘤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述肿瘤诊断试剂或试剂盒用于诊断不同级别的肿瘤和/或监测肿瘤的进展。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210032939.7A CN102590511B (zh) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | 基于igfbp-2自身抗体或其与igfbp-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210032939.7A CN102590511B (zh) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | 基于igfbp-2自身抗体或其与igfbp-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102590511A true CN102590511A (zh) | 2012-07-18 |
| CN102590511B CN102590511B (zh) | 2014-07-23 |
Family
ID=46479440
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210032939.7A Expired - Fee Related CN102590511B (zh) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | 基于igfbp-2自身抗体或其与igfbp-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102590511B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110333352A (zh) * | 2019-08-07 | 2019-10-15 | 基因科技（上海）股份有限公司 | 肿瘤相关自身抗体及肿瘤标志物联合检测试剂盒 |
| CN110658343A (zh) * | 2019-10-12 | 2020-01-07 | 中山大学附属第六医院 | 免疫球蛋白的检测试剂在制备结直肠癌诊断剂的应用 |
| CN110687283A (zh) * | 2019-08-26 | 2020-01-14 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 自身抗体在诊断和/或治疗肿瘤中的应用 |
| CN114703181A (zh) * | 2021-03-05 | 2022-07-05 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 羊卵巢成熟相关的基因及其应用 |
| CN116449010A (zh) * | 2023-04-12 | 2023-07-18 | 致远医疗投资(广州)有限责任公司 | Fam111b在胶质瘤的诊断或预后中的应用及相关的计算机可读介质 |
| CN118425516A (zh) * | 2024-06-29 | 2024-08-02 | 南昌大学第一附属医院 | 自身抗体的检测试剂在制备诊断胶质瘤的产品中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000069454A1 (en) * | 1999-05-17 | 2000-11-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Suppression of endogenous igfbp-2 to inhibit cancer |
| WO2001053837A1 (en) * | 2000-01-18 | 2001-07-26 | Diagnostic Systems Laboratories, Inc. | Insulin-like growth factor system and cancer |
| WO2002090580A1 (en) * | 2001-05-03 | 2002-11-14 | National Cancer Centre Of Singapore Pte Ltd | Identifying liver cancer by detecting aberrant expression of insulin like growth factor binding protein |
| CN102066410A (zh) * | 2007-11-01 | 2011-05-18 | 梅约医学教育与研究基金会 | Hla-dr结合肽和它们的应用 |
-
2012
- 2012-02-14 CN CN201210032939.7A patent/CN102590511B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000069454A1 (en) * | 1999-05-17 | 2000-11-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Suppression of endogenous igfbp-2 to inhibit cancer |
| WO2001053837A1 (en) * | 2000-01-18 | 2001-07-26 | Diagnostic Systems Laboratories, Inc. | Insulin-like growth factor system and cancer |
| WO2002090580A1 (en) * | 2001-05-03 | 2002-11-14 | National Cancer Centre Of Singapore Pte Ltd | Identifying liver cancer by detecting aberrant expression of insulin like growth factor binding protein |
| CN102066410A (zh) * | 2007-11-01 | 2011-05-18 | 梅约医学教育与研究基金会 | Hla-dr结合肽和它们的应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ALLAN FLYVBJERG等: "Elevated Serum Insulin-Like Growth Factor-Binding Protein 2 (IGFBP-2) and Decreased IGFBP-3 in Epithelial Ovarian Cancer: Correlation with Cancer Antigen 125 and Tumor-Associated Trypsin Inhibitor", 《THE JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM》, vol. 82, no. 7, 31 July 1997 (1997-07-31) * |
| DEEPALI SACHDEV等: "Disrupting insulin-like growth factor signaling as a potential cancer therapy", 《MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS》, 31 January 2007 (2007-01-31) * |
| NATHALIE BOULLE等: "Increased Levels of Insulin-Like Growth Factor II (IGF-II) and IGF-Binding Protein-2 Are Associated with Malignancy in Sporadic Adrenocortical Tumors", 《THE JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM 》, vol. 83, no. 5, 1 May 1998 (1998-05-01) * |
| 何涛等: "IGFBP-2结构功能与肿瘤关系研究进展", 《西部医学》, vol. 20, no. 4, 31 December 2008 (2008-12-31) * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110333352A (zh) * | 2019-08-07 | 2019-10-15 | 基因科技（上海）股份有限公司 | 肿瘤相关自身抗体及肿瘤标志物联合检测试剂盒 |
| CN110687283A (zh) * | 2019-08-26 | 2020-01-14 | 中国医学科学院肿瘤医院 | 自身抗体在诊断和/或治疗肿瘤中的应用 |
| CN110658343A (zh) * | 2019-10-12 | 2020-01-07 | 中山大学附属第六医院 | 免疫球蛋白的检测试剂在制备结直肠癌诊断剂的应用 |
| CN110658343B (zh) * | 2019-10-12 | 2023-02-14 | 中山大学附属第六医院 | 免疫球蛋白的检测试剂在制备结直肠癌诊断剂的应用 |
| CN114703181A (zh) * | 2021-03-05 | 2022-07-05 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 羊卵巢成熟相关的基因及其应用 |
| CN116449010A (zh) * | 2023-04-12 | 2023-07-18 | 致远医疗投资(广州)有限责任公司 | Fam111b在胶质瘤的诊断或预后中的应用及相关的计算机可读介质 |
| CN116449010B (zh) * | 2023-04-12 | 2024-03-12 | 致远医疗投资(广州)有限责任公司 | Fam111b在胶质瘤的诊断或预后中的应用及相关的计算机可读介质 |
| CN118425516A (zh) * | 2024-06-29 | 2024-08-02 | 南昌大学第一附属医院 | 自身抗体的检测试剂在制备诊断胶质瘤的产品中的应用 |
| CN118425516B (zh) * | 2024-06-29 | 2024-08-30 | 南昌大学第一附属医院 | 自身抗体的检测试剂在制备诊断胶质瘤的产品中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102590511B (zh) | 2014-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brand et al. | Serum biomarker panels for the detection of pancreatic cancer | |
| Zhong et al. | Association of serum levels of CEA, CA199, CA125, CYFRA21-1 and CA72-4 and disease characteristics in colorectal cancer | |
| Qin et al. | Utility of serum CA19-9 in diagnosis of cholangiocarcinoma: in comparison with CEA | |
| Colas et al. | Molecular markers of endometrial carcinoma detected in uterine aspirates | |
| Han et al. | Serum dickkopf-1 is a novel serological biomarker for the diagnosis and prognosis of pancreatic cancer | |
| CN102590511B (zh) | 基于igfbp-2自身抗体或其与igfbp-2联合的检测的肿瘤诊断试剂或试剂盒及应用 | |
| Shimura et al. | Urinary ADAM12 and MMP-9/NGAL complex detect the presence of gastric cancer | |
| Cho-Chung | Autoantibody biomarkers in the detection of cancer | |
| Cao et al. | Evaluation of serum D-dimer, fibrinogen, and CA19-9 for postoperative monitoring and survival prediction in resectable pancreatic carcinoma | |
| Dudeja et al. | Premalignant cystic neoplasms of the pancreas | |
| Li et al. | Elevated serum antibodies against insulin-like growth factor-binding protein-2 allow detecting early-stage cancers: evidences from glioma and colorectal carcinoma studies | |
| Dong et al. | Serum level of ANGPTL4 as a potential biomarker in renal cell carcinoma | |
| Jiang et al. | Plasma Inter‐Alpha‐Trypsin Inhibitor Heavy Chains H3 and H4 Serve as Novel Diagnostic Biomarkers in Human Colorectal Cancer | |
| Bausch et al. | Plectin-1 is a biomarker of malignant pancreatic intraductal papillary mucinous neoplasms | |
| Canbay et al. | Kisspeptin-54 levels are increased in patients with colorectal cancer | |
| De Paz et al. | Prognostic roles of SCC antigen, CRP and CYFRA 21-1 in oral cavity squamous cell carcinoma | |
| Anastasi et al. | Is CA72‐4 a Useful Biomarker in Differential Diagnosis between Ovarian Endometrioma and Epithelial Ovarian Cancer? | |
| Giorgadze et al. | Lymphatic and blood vessel density in the follicular patterned lesions of thyroid | |
| Schönemeier et al. | Urinary peptide analysis differentiates pancreatic cancer from chronic pancreatitis | |
| ES2865272T3 (es) | Cromogranina A como un marcador del cáncer de vejiga | |
| Fan et al. | Development of a multiplexed tumor-associated autoantibody-based blood test for the detection of colorectal cancer | |
| Savin et al. | Thyroid peroxidase and galectin-3 immunostaining in differentiated thyroid carcinoma with clinicopathologic correlation | |
| Jia et al. | Overexpression of IFITM 3 predicts poor prognosis in stage IIA esophageal squamous cell carcinoma after I vor L ewis esophagectomy | |
| Leman et al. | Evaluation of colon cancer–specific antigen 2 as a potential serum marker for colorectal cancer | |
| Mamone et al. | MRI of mucinous pancreatic cystic lesions: a new updated morphological approach for the differential diagnosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BEIJING BRAIN MAJOR DISEASE RESEARCH INSTITUTE Effective date: 20140625 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Song Wei Inventor after: Jiang Tao Inventor after: Li Yuchen Inventor after: Zhang Jing Inventor before: Song Wei Inventor before: Li Yuchen |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: SONG WEI LI YUCHEN TO: SONG WEI JIANG TAO LI YUCHEN ZHANG JING |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20140625 Address after: 100142, Fu Cheng Road, Beijing, Haidian District, No. 52 Applicant after: BEIJING INSTITUTE FOR CANCER RESEARCH Applicant after: BEIJING INSTITUTE FOR BRAIN DISORDERS Address before: 100142, Fu Cheng Road, Beijing, Haidian District, No. 52 Applicant before: BEIJING INSTITUTE FOR CANCER RESEARCH |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140723 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |