CN101903009B

CN101903009B - 含有脱硫生物素及其衍生物的局部组合物和治疗皮肤的方法

Info

Publication number: CN101903009B
Application number: CN200880121698.5A
Authority: CN
Inventors: D·S·普特谢林特塞夫; X·罗; S·W·陈
Original assignee: Avon Products Inc
Current assignee: Avon Products Inc
Priority date: 2007-12-21
Filing date: 2008-11-19
Publication date: 2014-04-02
Anticipated expiration: 2028-11-19
Also published as: MX2010006987A; US8450353B2; BRPI0820815A2; EP2229137A4; US20100267792A1; EP2229137A1; WO2009085443A1; HK1145983A1; JP6038200B2; AR069527A1; CA2708538C; CN101903009A; CA2708538A1; JP2011507866A; JP2015120728A

Abstract

提供了用于治疗皮肤弹性降低症状的局部组合物和方法，其包括脱硫生物素和某些脱硫生物素类似物。这些化合物能有效刺激LOXL-1活性并因此可以提高弹性蛋白重塑以及改善细纹、皱纹、皮肤下垂和其他弹性蛋白功能下降的症状。

Description

含有脱硫生物素及其衍生物的局部组合物和治疗皮肤的方法

发明领域

本发明涉及含有脱硫生物素及其衍生物和异构体的局部组合物，以及该组合物用于治疗、逆转和/或预防皮肤衰老迹象(包括皮肤中的细纹和皱纹)的方法。

发明背景

面部皱纹(不管是细的表面纹还是深的皱褶)的逐渐产生是积累的皮肤损伤和衰老的典型早期迹象。由于过量暴露于阳光和其他因素、过度活动的面部表情肌、烟草制品的频繁使用、营养差或皮肤病症，可能加速了皮肤过早衰老和产生皱纹。细的表面纹逐渐变成较深的皱、由于重复的皮肤折叠加深了面部表情和随着成熟产生的深的褶是明显的变化，这些可能结合起来而呈现出不太理想的外观。可以利用几种入侵性的技术，其中将物质注入或植入肌肉暂时变弱的皮肤区域中或作为皮肤体积填充剂，然而，非入侵性的治疗在历史上只有很少的成功。与面部皱或褶的成因无关，用于减少或消除这些问题的安全而有效的治疗非常难以实现。

皮肤弹性对于改善损伤(如下垂、降低的皮肤紧致性和年轻外观)以及改善细纹和皱纹的外观是至关重要的。所有这些都是由弹性蛋白促成的，弹性蛋白是一种像橡皮圈那样作用的蛋白聚合物，其重复拉伸和收缩，而没有遭遇任何损伤。

通过弹性蛋白原单体的交联形成弹性蛋白聚合物。尽管存在多如五种可以催化该过程的酶，但尚未确切地知道该交联是怎样得到调控的。Li和同事们报道了这些酶中的一种，赖氨酰氧化酶样1(LOXL1)是弹性蛋白纤维重新塑造所必需的。Liu和同事们预测通过胞外基质蛋白纤蛋白-5将这种酶募集至弹性蛋白的部位。然后，LOXL1装填弹性蛋白原单体(TE)，用于结合成较大的聚合物。Liu发现了LOXL1是防止组织(如动脉和肺)中年龄相关的弹性丧失必需的(Liu等(2004)Elastic fiber homeostasis requires lysyl oxidase-like1 protein(弹性纤维体内平衡需要赖氨酰氧化酶样1蛋白)。NatGenet.36(2)：178-82)。

Noblesse等表明了LOXL1存在于正常皮肤和皮肤等价模型(SE)中的真皮和表皮中。LOXL的超结构定位表示其与弹性蛋白阳性物质相连。研究者假设了LOXL在弹性纤维形成中具有作用(Noblesse E等(2004)Lysyl oxidase-like and lysyl oxidase are present in thedermis and epidermis of a skin equivalent and in human skin andare associated to elastic fibers(赖氨酰氧化酶样和赖氨酰氧化酶存在于皮肤等价物和人皮肤的真皮和表皮中并且与弹性纤维相连)。J Invest Dermatol.122(3)：621-30)。

Pascual和同事们表明了弹性蛋白合成标记(包括LOXL1)的水平随着年龄降至明显的程度(Pascual等(2008)Down-regulation oflysyl oxydase-like in aging and venous insufficiency(赖氨酰氧化酶样在衰老过程中的下调和静脉不足)。Histol Histopathol.23(2)：179-86)。

Li和Liu的美国专利公开No.2005/0188427公开了治疗患有与弹性纤维丧失相关病症(如松弛或有皱纹的皮肤)的患者的方法，其包括将治疗有效量的LOXL1增强剂给药于患者。据说LOXL1增强剂是LOXL1多肽或其活性片段，或编码LOXL1多肽或其活性片段的核酸。据说LOXL1增强剂还包括通过该公开文本中公开的筛选方法鉴定的小分子或其他治疗化合物。

从19世纪40年代中期开始就已知脱硫生物素是细菌和霉菌中的生物素前体(参见Leonian and Lilly(1945)Conversion ofDesthiobiotin Into Biotin or Biotinlike Substances by SomeMicroorganisms(脱硫生物素通过一些微生物转化成生物素或生物素样物质)。J Bacteriol.49(3)：291-297)。通过除脱硫原子从生物素衍生了脱硫生物素。其可以替代一些微生物中的生物素，但对于其他微生物的生长没有作用或具有抑制作用。该化合物具有以下结构：

美国专利US 4,243,665描述了低浓度的某些生物素衍生物在牙齿护理中的用途。该专利是基于这样的想法：如脱硫生物素这样的化合物可以耗尽引起龋齿的微生物的生物素。

Lever Brothers Corp.的美国专利US4,529,587描述了某些生物素拮抗剂用于降低皮脂合成的用途。这些化合物具有如下的通式结构：

并且被描述为阻断涉及脂质合成的生物素依赖性酶，特别是它们对抗乙酰基-SCoA-羧化酶的作用。据说该组合物可用于减少表面的“油脂”而不使皮肤脱脂。

对减轻衰老迹象(包括下垂、降低的弹性、细纹和皱纹，特别是脸部、颈部、手部等皮肤上的)的化妆品组合物仍然存在需求。

因此，本发明的目的是提供改良的组合物和用于改善皮肤外观的方法，包括通过减少细纹和皱纹的外观。

发明概述

已经令人惊讶地发现脱硫生物素能有效减少、逆转、改善和/或防止由降低的皮肤弹性引起的皮肤衰老迹象，包括细纹和/或皱纹、皮肤下垂和相关的皮肤衰老迹象的外观、深度或严重程度。

通常，组合物和方法可用于治疗与弹性纤维丧失相关的任何皮肤状况。认为这些益处至少部分地是由于化合物刺激LOXL-1产生的能力所引起的。换句话说，本发明的化合物是LOXL-1增强剂。

在本发明的一个方面中，提供了治疗与降低的皮肤弹性相关的皮肤状况(如细纹、皱纹和下垂皮肤的外观)的方法，其包括将包含有效量的通式I的化合物及其局部可接受的盐和前药的化妆品组合物局部施用于需要的皮肤上：

其中：

n是1至22的整数，通常为1至3至18，并且优选5至12；

X₀、X₁、X₂、X₃和X₄各自独立地选自O、S和NR^N，其中R^N表示氢、低级烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)、COR₃、CO₂R₃、SO₂R₃、PO₃(R₃)₂和CH(OR₃)₂；其中R₃在每次出现时独立地选自H、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基及其组合；X₂和X₃优选是NR^N，并且更优选是NH；并且X₀、X₁和X₄优选是0；

R₁选自H、烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷基芳基(例如，苄基)、烷氧基烷基、羧酰氨基烷基及其组合；

R₂选自H、烷基、链烯基、炔基、芳基、烷基芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、硫代烷氧基及其组合。

通式I的化合物优选能够提高LOXL1活性(“LOXL1增强剂”)，并且在某些实施方案中，进一步能够刺激肌原纤维蛋白-1。

在本发明的相关方面中，提供了治疗与降低的皮肤弹性相关的皮肤状况的方法，这些皮肤状况如细纹或皱纹的外观、皮肤下垂或萎缩、扩大的毛孔、失去皮肤弹性或饱满性或丧失皮肤颜色或色调，该方法包括将有效量的包含具有以下结构的化合物(或其局部可接受的盐或酯)的组合物局部施用于需要的皮肤上：

通过参考以下的本发明详述将更好地理解本发明的这些和其他方面。

详述

已经惊讶地发现脱硫生物素能够刺激LOXL1酶的产生或提高LOXL1酶的活性。LOXL1是皮肤中弹性蛋白维持和重新塑造中必需的酶。鉴于该发现以及其他的，预期脱硫生物素及其某些衍生物可用于抵抗皮肤衰老迹象，包括减少细纹和皱纹、下垂和相关的皮肤衰老迹象。

如在此所用的，“％重量”或“％wt”指的是相对于组合物(即，包括在施用于皮肤之前加入的任何载体、介质、溶剂、润肤剂、填充剂或其他成分)总重的成分的重量百分比，除非另外指出。

无论何时参照范围来确定术语，该范围都将被理解为明确地公开了其中的每个要素。作为非限制性实例，C_1-4烷基将被理解为表示并公开了C₁、C₂、C₃或C₄烷基。

在两个或多个取代基称为“独立地选自”一组列举的可替换物的情况中，意味着每个取代基可以是该组中的任何要素，与其他取代基的特性无关。

本发明提供了用于局部施用的组合物，其包含有效量的LOXL1增强剂，如脱硫生物素及其结构上相关的化合物或其盐，用于治疗、逆转、改善和/或防止皮肤衰老迹象。这样的皮肤衰老迹象包括但不限于以下的：

(a)治疗、减少和/或预防细纹或皱纹；

(b)缩小皮肤毛孔大小；

(c)改善皮肤厚度、丰满度和/或紧实度；

(d)改善皮肤柔顺度和/或柔软度；

(e)改善肤色、光亮度和/或透明度；

(f)改善前胶原和/或胶原产生；

(g)改善弹性蛋白的保持和重塑；

(h)改善皮肤纹理和/或促进恢复原有纹理；

(i)改善皮肤屏障修复和/或机能；

(j)改善皮肤轮廓的外观；

(k)恢复皮肤光泽和/或亮度；

(l)补充皮肤中必需的营养素和/或成分；

(m)改善因衰老和/或绝经而减退的皮肤外观；

(n)改善皮肤润湿性；和/或

(o)增强皮肤弹性和/或回弹性。

在实践中，将本发明的组合物施用于需要治疗的皮肤上。即，遭受任何上述属性的缺陷或丧失的皮肤，或者将受益于任何上述皮肤属性改善的皮肤。

在某些优选实施方案中，本发明的组合物和方法针对预防、治疗和/或改善皮肤中的细纹和/或皱纹。在这种情况下，将组合物施用于需要治疗的皮肤上，即具有皱纹和/或细纹的皮肤。优选地，将组合物直接施用于细纹和/或皱纹上。这些组合物和方法适于治疗任何皮肤，包括但不限于，脸部、颈部和/或手部的皮肤表面上的细纹和/或皱纹。

LOXL1增强化合物通常具有通式I的结构及其局部可接受的盐和前药：

其中：

n是1至22的整数，通常为1至3至18，并且优选为5至12；

X₀、X₁、X₂、X₃和X₄各自独立地选自O、S和NR^N，其中R^N表示氢、低级烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)、COR₃、CO₂R₃、SO₂R₃、PO₃(R₃)₂和CH(OR₃)₂；其中R₃选自H、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基及其组合；X₂和X₃优选地是NR^N，并且更优选地是NH；并且X₀、X₁和X₄优选是0；

R₁选自H、烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷基芳基(例如，苄基)、烷氧基烷基、羧基氨基烷基及其组合；并且在X₀和X₁都是0的情况中，R₁优选是H(以由此来限定羧酸)或烷基(以由此来限定酯)；

R₂选自H、烷基、链烯基、炔基、芳基、烷基芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、硫代烷氧基及其组合；优选地R₂是H或低级烷基，如甲基、乙基、丙基等。

在此所用的术语“烷基”，除非另外指出，包括直链、支链或环状(也鉴定为环烷基)的，伯、仲或叔烃，包括但不限于C₁至C₁₈的那些，更特别地是C_1-6。烷基的说明性实例是甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、1-甲基丁基、1，1-二甲基丙基、戊基、环戊基、异戊基、新戊基、环戊基、己基、异己基和环己基。除非另外指出，烷基可以是未取代的或由一个或多个杂原子或部分取代的，这些杂原子或部分选自卤素、羟基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、酰氨基、酯、脲、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、氧、氧杂、硫代、磺酰、酯、酰胺、膦酰基、氧膦基、硫酯、肟或任何其他没有抑制该化合物药物活性的官能团。优选的取代包括卤素(氟、氯、溴和碘)、氧、氧杂、氨基、烷基氨基和二烷基氨基。

芳基取代基包括但不限于苯基、联苯、萘基等，每个任选由如上所述的杂原子或官能团来取代。杂环基团可以是在环中含有一个或多个杂原子(例如，N、O或S)的芳族或非芳族烃环。优选的杂芳环将是5-元或6-元环，每个任选地包含连接环的其他杂原子或官能团，如上所述。五元杂环的非限制性实例包括但不限于吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、噁唑烷、噻唑烷、1，3-二噁烷、1，3-氧硫杂环戊烷、1，3-二硫杂环戊烷、咪唑烷、吡唑烷、吡咯、呋喃、噻吩、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、吡唑、1，3，4-噁二唑、1，2，4-噁二唑、1，3，4-噻二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-三唑、1，2，3-三唑等。六元杂环的非限制性实例包括但不限于2H-呋喃、四氢呋喃、哌啶、1，4-二噁烷、吗琳、哌嗪、1，4-二噻烷、硫吗啉、吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶、1，2，3-三嗪、1，2，4-三嗪、1，3，5-三嗪、1，2，3，4-四嗪和五嗪，这些仅仅是一些实例。

在R₁和R₂可以是指定基团(例如，烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基等)的“组合”的情况中，明确地包括包含两个或多个所示基团的取代基，如例如，烷基-芳基、芳基-烷基等。

通式I的五元环具有至少一个立构中心，由连接X₂的碳原子上的星号表示，并且在R₂不是氢的情况下，可以具有另外的立构中心，也是用星号表示的。每个立构中心可以独立地是R或S构型。因此，R₂不是氢时，通式I的化合物将呈现为(R，R)、(S，S)、(R，S)或(S，R)非对映异构体，将每一个都认为是本发明分开的实施方案，连同这些立体异构体的混合物。在R₂为氢的情况下，通式I的化合物将是R或S，其中每一个都是本发明分开的实施方案，连同R和S的外消旋混合物。

在一个实施方案中，X₂和X₃各自表示NR^N，并且X₄是氧，如通式I-a所表示的：

其中n、R₁、R₂、R^N、X₀和X₁如上所述。在该实施方案中，在每次出现时，R^N优选是氢或低级烷基。在本发明的优选实施方案中，在每次出现时，R^N是氢，并且R₂是低级烷基，优选甲基。在本发明的优选实施方案中，X₀和X₁各自表示氧。在另一个实施方案中，X₀是氧、硫或NR^N，优选氧，并且X₁是基团NR^N。

在优选的实施方案中，X₀和X₁各自表示氧，并且该化合物具有通式I-b的结构：

其中n、R₂、X₂、X₃和X₄如上所定义。在该实施方案中，化合物是羧酸(R₁是氢)或酯。尽管R₁优选是氢，但也预期了根据本发明的酯将是有利的。例如，可以选择R₁来改变化合物的亲油性，预期高级酯(例如，R₁是C_6-11烷基)更亲油。在R₁是氢的情况下，将理解可以通过选择合适的羧基保护剂而将化合物作为前药来传送，羧基保护剂在体内被水解，以提供羧酸。

在某些实施方案中，根据通式I-b，X₄是O或S，优选O；X₂和/或X₃是NR^N，更常见为NH。在一个实施方案中，X₄是O，并且X₂和X₃各自为NH。在某些实施方案中，X₂和X₃是NH，而X₄是O。

在根据通式I、I-a和I-b的某些实施方案中，“n”至3、4、5、6、7、8、9或10。在通式I、I-a和I-b中，本发明优选n是5。

在通式I、I-a和I-b中，R₂最常见为直链或支链烷基，特别是C_1-18烷基，任选地包含一个或多个杂原子。在某些实施方案中，R₂是C_1-16、C_1-14、C_1-C_1-12、C_1-10、C_1-8、C_1-6、C_1-4或C_1-2。通常，R₂将是C₁、C₂、C₃、C₄或C₅烷基，直链或支链。在某些特定的实施方案中，R₂是甲基或乙基。

R₁和R₂通常(独立地)是氢或直链或支链烷基，特别是C_1-18烷基。在某些实施方案中，R₁是C_1-16、C_1-15、C_1-14、C_1-13、C_1-12、C_1-11、C_1-10、C_1-9、C_1-8、C_1-7、C_1-6、C_1-5或更低，如C₁、C₂、C₃、C₄或C₅烷基，直链或支链。在某些特定的实施方案中，R₁和/或R₂是甲基或乙基。在其他特定的实施方案中，R₁和/或R₂是氢。

R₁或R₂可以包含形式-(CH₂)_a-R^*的线性烷基部分，其中“a”是1至6的整数，包括，例如，-CH₂-R^*、-CH₂CH₂-R^*、-CH₂CH₂CH₂-R^*或-CH₂CH₂CH₂CH₂-R^*；通式-O(CH₂)_a-R^*的线性烷氧基部分，其中“a”是1至6的整数，包括例如，-OCH₂-R^*、-OCH₂CH₂-R^*或-OCH₂CH₂CH₂-R^*；形式-O(CH₂)_aO-R^*的基团，其中“a”如上所定义；-(CH₂CH₂O)_a-R^*或-(CH₂)_bO(CH₂)_c-R^*、-(CH₂)_bS(CH₂)_c-R^*或-(CH₂)_bNR^N(CH₂)_c-R^*形式的部分，其中“b”和“c”独立地是0(零)到6的整数，并且R^N如上所定义。在每个情况中，R^*是低级烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)、氢、羟基、巯基、-(CHO)-、羧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基。

R₁和R₂还可以独立地选自碳环或杂环。碳环可以独立地是饱和、不饱和的或是芳环。碳环通常为3至8个碳，更常见为3至7个碳，最常见为5至6个碳(例如，环戊基或环己基)，各自任选地是取代的。杂环还独立地是饱和的、不饱和的或芳环的。杂环通常为3至8元环，更常见为3至7元环，并优选5或6元环。杂环可以在环中含有一个或多个选自氮、硫或氧原子的杂原子。

本发明优选的化合物具有根据通式Ic的结构：

其中n是4至6(优选5)；R₂是甲基、乙基、丙基或丁基，或苯基(优选甲基)；和R₁是氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、苯基或苄基(优选氢)。

在特定的实施方案中，化合物是脱硫生物素，其具有如下结构：

化合物可以作为(R，R)、(R，S)、(S，R)或(S，S)立体异构体存在，或作为这些立体异构体中的两种或多种存在。通式II包括化合物L-脱硫生物素、D-脱硫生物素和DL-脱硫生物素。优选地，甲基连接的立体中心是S构型的，而另一个立体中心是R构型的，如下所示：

通式II的化合物是D-脱硫生物素(CAS注册号No.533-48-2)，也称为(+)-脱硫生物素或d-脱硫生物素。

在此所述的化合物可以以局部可接受的(例如，无毒和/或无刺激性)仍然保持化合物生物活性的盐或复合物的形式存在。盐可以是无机或有机酸或碱加成盐。合适的酸式盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、环戊丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷硫酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷硫酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。尤其可提及盐酸盐。碱加成盐包括与诸如锌、钙、铋、钡、镁、锰、锂、铝、铜、钴、镍、镉、钠、钾等的金属阳离子

形成的那些，或与从氨、N，N-二苄基乙二胺、D-葡萄糖胺、四乙铵或乙二胺等形成的阳离子形成的那些。任何含氮基团可以使用低级烷基卤化物来四级化，这些低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基溴化物，这些仅仅为一些实例。

脱硫生物素及其类似物(例如，通式I的化合物)的合适前药包括具有通式IIIa或IIIb结构的那些：

在结构IIIa中，X₃是N，并且X₄是OR₁或NR^NR₁；其中R^N、R₁、R₂和X₂如上所定义。在结构IIIb中，X₂是N，并且X₄是OR₁或NR^NR₁；其中R^N、R₁、R₂和X₃如上所定义。前药在体内水解成通式I的化合物。

根据本发明的局部组合物可以配制成用于局部施用的各种形式并将包含约0.0001％重量至约10％重量的化合物。在某些实施方案中，组合物包含约0.001％重量至约5％重量，或约0.01％重量至约2.5％重量的化合物。在某些实施方案中，组合物包含0.001％至约1.5％重量或约0.01％至约0.5％重量的化合物。

通常将组合物配制成乳剂(包括油包水或水包油乳剂)、洗液、霜剂、精华、喷雾、气溶胶、饼状物、膏剂、香精、凝胶、糊剂、贴剂、笔状物、湿纸巾、面膜、棒状物或其他适于局部施用的形式。

组合物可以包括化妆品上可接受的载体。合适的载体可以采用本领域已知的适于施用于皮肤上的任何形式并可以包括水；植物油；矿物油；酯类，如棕榈酸辛酯、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚类，如二辛醚和二甲基异山梨醇；醇类，如乙醇和异丙醇；脂肪醇类，如鲸蜡醇、十六/十八醇、硬脂醇和二苯基醇；异链烷烃，如异辛烷、异十二烷和异十六烷；硅酮油，如环聚甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚硅氧烷及其衍生物，优选有机修饰的衍生物；烃油，如矿物油、矿脂、异二十烷和聚异丁烯；多元醇，如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇；蜡，如蜂蜡和植物蜡；或前述的任意组合物或混合物。在一个实施方案中，载体包含脂质体。

组合物可以任选地包含其他化妆品活性物质和赋形剂，包括，但不限于，填充剂、乳化剂、抗氧化剂、表面活性剂、成膜剂、螯合剂、胶凝剂、增稠剂、润肤剂、润湿剂、保湿剂、维生素、矿物质、粘度和/或流变性改良剂、防晒剂、角质软化剂、脱色剂、类维生素A、激素化合物、α-羟酸、α-酮酸、抗分枝杆菌剂、抗真菌剂、抗微生物剂、抗病毒剂、镇痛剂、脂质化合物、抗过敏剂、H1或H2抗组胺剂、抗炎剂、抗刺激剂、抗肿瘤剂、免疫系统加强剂、免疫系统抑制剂、抗痤疮剂、麻醉剂、防腐剂、驱虫剂、冷肤化合物、护肤剂、皮肤渗透增强剂、磨砂剂(exfollient)、润滑剂、芳香剂、着色剂、脱色剂、色素淡化剂、防腐剂、稳定剂、药剂、光稳定剂、防晒剂及其混合物。除了上述物质之外，本发明的化妆品组合物还可以含有用于治疗皮肤病征的任何其他化合物。

组合物可以包含其他具有抗衰老益处的活性成分。包括一种或多种其他LOXL1增强剂是理想的，因为预期使用这样的组合可以获得协同的改善作用。其他合适的抗衰老成分包括，但不限于，某些植物制剂，如Butea Frondosa提取物、硫代二丙酸(TDPA)、类维生素A、α-含氧酸和乙醇酸，这些仅仅为一些实例。

提供了治疗皮肤弹性下降症状的方法，其包括将有效量的在此所述的任一种化合物或其盐局部施用于需要的个体皮肤上。通常，以包含化妆品上可接受载体(其表示与施用于人皮肤相适的载体(例如，安全的))的组合物形式来提供本发明的化合物。

组合物理想地提高了皮肤中的LOXL1活性。优选地，本发明的组合物具有刺激肌原纤维蛋白-1的附加活性。在某些实施方案中，没有给予毛囊(如，头皮的毛囊)。在某些实施方案中，宿主未患有皮脂产生增加。在某些实施方案中，皮肤未患有皮脂产生增加。用本发明的化合物可以改善或治疗的皮肤损伤包括皮肤弹性下降的任何迹象，如细纹和/或皱纹、脆弱或变薄的皮肤、下垂的皮肤、缺乏光泽的皮肤、疲乏的皮肤、干燥的皮肤、皮肤敏感、黑眼圈、饱满性的皮肤、不规则的皮肤色素沉着和黄褐斑。

将本发明的组合物局部施用于皮肤上可以增强和改善皮肤的美学外观。该方法对于治疗皮肤的光老化和内在老化的迹象特别有用，包括细纹和皱纹、皮肤色调和色彩、皮肤下垂和萎缩、变大的毛孔、皮肤变薄、降低的回弹性和饱满性。

本发明还提供了通过将包含本发明组合物的组合物局部施用于受影响的部位来治疗衰老皮肤的方法，持续足以减轻、改善皮肤弹性下降的皮肤学迹象的时间段。通常将组合物每24小时施用于皮肤1至3次，持续获得所需结果需要的时间。治疗方案可以包括每日施用，持续至少一周、至少两周、至少四周、至少八周或至少十二周。该方法包括治疗与年龄和内在皮肤衰老相关的皮肤变化。预期该方法对于UV损伤皮肤的治疗特别有用。

在一个实施方案中，治疗皮肤皱纹(例如，在颈、脸、手上)的方法包括将有效量的包含脱硫生物素或其盐和/或酯的化妆品组合物局部施用于皱纹上并持续足以减轻皱纹严重程度或深度的时间。

在另一个实施方案中，治疗皮肤下垂(例如，在脸或颈上)的方法包括将有效量的包含脱硫生物素或其盐和/或酯的化妆品组合物局部施用于下垂皮肤上并持续足以减轻下垂程度的时间。

在另一个实施方案中，治疗变薄皮肤的方法包括将有效量的包含脱硫生物素或其盐和/或酯的化妆品组合物局部施用于变薄皮肤上并持续足以减轻下垂程度的时间。

在另一个实施方案中，治疗变大毛孔的方法包括将有效量的包含脱硫生物素或其盐和/或酯的化妆品组合物局部施用于变大的毛孔上并持续足以减轻下垂程度的时间。

1.实施例

1.1实施例1：通过DL-脱硫生物素刺激LOXL1活性

已经发现酶赖氨酰氧化酶样-1(“LOXL1”)为弹性蛋白聚合物更新的重要调控剂，该弹性蛋白聚合物是使结缔组织(包括皮肤)具有弹性特性的胞外基质组分。认为青春期后不再产生弹性蛋白，青春期后弹性蛋白纤维的保持是与抗弹性蛋白酶-弹性蛋白酶活性竞争的结果。随着年龄增长，注意到竞争活性不平衡，导致含有弹性蛋白的组织丧失弹性。就皮肤而言，该弹性丧失最常见地是作为皱纹被观察到。

尽管并不了解更新/降解(即，抗弹性蛋白酶/弹性蛋白酶活性)的准确机制，但已经确定LOXL1为“抗弹性蛋白酶”因子，其通过弹性蛋白原单体聚合而介导弹性蛋白纤维的更新(参见，例如，Kaganet等，2003，J.Cell.Biochem.，88：660-672；和Li等，2004，Nat.Genet.36：178-182，在此将每篇的全部内容引入作为参考)。因此，能够增强LOXL1转录和/或翻译或LOXL1活性的物质将增强“抗弹性蛋白酶”活性，促进弹性蛋白纤维更新并实现含弹性蛋白组织的弹性改善。使用荧光素酶报告基因系统测试了DL-脱硫生物素诱导LOXL1表达的能力。发现了向包含LOXL1调控元件的培养物中添加DL-脱硫生物素可诱导明显超过对照的报告基因表达。

1.1.1材料和方法

载体构建、转染和表达：

通过本领域技术人员已知的标准方法和根据制造商的说明将LOXL1基因的启动子片段分离并克隆至pGL3荧光素酶报告基因质粒(Promega)中。使用LipofectAMINE^TM LTX试剂(Invitrogen)按照制造商的指示将LOXL1/pGL3载体和不含有调控元件的对照载体pRL-NULL(Promega)共转染至人纤维肉瘤系HT1080中。

使经转染的细胞恢复24h。随后用含有各种浓度的DL-脱硫生物素的新鲜培养基代替该培养基，并将经转染的细胞再培养24小时。

随后用PBS洗涤培养物并将其暴露于100μl细胞裂解缓冲液/25cm²培养区域中并在室温下轻轻振荡30分钟。随后立即将含有细胞裂解物的培养烧瓶置于-80℃。

报告基因活性的测定：

按照制造商的说明(双荧光素酶(Dual-

报告基因分析系统，Promega)测定报告基因萤火虫荧光素酶的活性。简而言之，相对于来自海肾(Renilla reniformis)的编码第二荧光素酶基因的对照载体的活性来测定该报告基因的活性。比较来自测试和对照培养物的基因的相对活性以测定调控序列活性的百分比改变。

1.1.2结果

因为pGL3载体缺少调控荧光素酶基因所必需的启动子片段，因此该基因的表达是通过克隆的调控元件来控制的，在该情形中为LOXL1基因的调控元件。在重复三次的测试中，已经发现添加0.001％DL-脱硫生物素可以使得报告基因的表达增强90％(p＜0.05，与载体对照相比较)。因此表明DL-脱硫生物素是LOXL1表达的阳性调控剂，表明对弹性蛋白更新具有次级效应。

1.2.实施例2：通过DL-脱硫生物素刺激肌原纤维蛋白-1

肌原纤维蛋白-1是340kDa的蛋白，其是皮肤中微纤维的成分。肌原纤维蛋白微纤维广泛分布于微纤维中，并且它们给予了结缔组织长距离的弹性。它们指导弹性微纤维形成过程中的弹性蛋白原沉积并形成用于成熟弹性纤维的外层覆盖物。肌原纤维蛋白-1的成熟引起马方氏综合症，这是一种与严重的大动脉、眼睛和其他由于缺乏弹性纤维引起的异常相关的遗传病(Kielty等，Adv.in Protein Chemistry，vol 70，p.405，2004)。提高肌原纤维蛋白-1表达的活性剂将进一步提高“抗弹性蛋白酶”活性，促进弹性蛋白纤维的更新和实现含弹性蛋白组织弹性的改善。通过定量RT-PCR来测试DL-脱硫生物素诱导肌原纤维蛋白-1表达的能力。发现了将DL-脱硫生物素加入人成纤维细胞培养物中能诱导明显超过对照的肌原纤维蛋白-1mRNA表达。

1.2.1方法和材料

细胞处理：

将正常的人真皮成纤维细胞以10⁶细胞/100mm涂布于培养平板中的10ml标准生长培养基中，并在37℃和10％CO₂下进行培养。

大约24小时后，将稀释于新鲜生长培养基中的测试活性物质和溶剂对照给予细胞并在37℃下培养48小时。48小时培养后，除去细胞培养基，并加入1ml

试剂来裂解每个平板中的细胞。将每个平板中细胞刮出，通过移液管吸放几次并收集于1.5ml离心管中。将细胞裂解物在15至30℃下培养5分钟，使核蛋白复合物完全分裂，然后储存在-80℃下用于RNA分离。

RNA分离和RT PCR：

使用标准程序分离RNA并溶解于无RNase的水中并存储于-80℃下。使用Agilent 2100 Bioanalyzer测定总RNA的浓度。RNA6000 Nano-芯片表明RNA样品是完整的。

按照Applied Biosystems，CA提供的制造商说明来进行逆转录酶(RT)反应。RT步骤后，将反应物存储于-20℃下，用于QPCR分析。在20μl的总体积下进行QPCR。使用了Applied Biosystems(AB)Universal PCR主混合物。制备该混合物以含有10μl TaqmanUniversal PCR混合物、1μl引物和探针混合物、2μl RT产物和7μl去离子水。肌原纤维蛋白-1和GAPDH引物以及探针购自AppliedBiosystems，并且肌原纤维蛋白-1的ID为Hs00171191-ml，人GAPDH的ID为4352934E。用于QPCR的温度特征为50℃2分钟，95℃10分钟，1个循环，然后95℃15秒钟，60℃1分钟，40个循环。

1.2.2结果

结果：

QPCR结果显示了与溶剂对照相比较，用0.001％DL-脱硫生物素的处理将肌原纤维蛋白-1基因表达提高了47.55％(p＜0.05)。

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Claims

1.化合物D-脱硫生物素或其局部可接受的盐在制备适合局部施用于皮肤上的用于局部治疗一种或多种与弹性蛋白丧失相关的皮肤衰老迹象的化妆品组合物中的用途，其中所述一种或多种皮肤衰老迹象选自皱纹和/或细纹，皮肤下垂或萎缩，皮肤变薄，毛孔增大，皮肤色调或色彩丧失，及其组合中的一种或多种。

2.根据权利要求1的用途，其中所述化合物占所述化妆品组合物重量的0.001％重量至5％重量。