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CN101848733A - 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物 - Google Patents

用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物 Download PDF

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CN101848733A CN200880108065A CN200880108065A CN101848733A CN 101848733 A CN101848733 A CN 101848733A CN 200880108065 A CN200880108065 A CN 200880108065A CN 200880108065 A CN200880108065 A CN 200880108065A CN 101848733 A CN101848733 A CN 101848733A
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Y·史
T·L·雷伦
坂上正浩
K·尼可森
P·R·拜伦
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Abstract

本发明描述了将TNFα肺部递送到患有其中TNFα是有害的疾病的受试者以使该疾病得到治疗的方法。本发明还包括实现TNFα抑制剂在受试者中系统循环的方法，所述方法包括通过吸入将TNFα抑制剂给予到受试者的中心肺区域或外周肺区域，使得TNFα抑制剂的系统循环得以实现。

Description

用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2007年7月13日提交的美国临时申请系列号60/959,426的优先权，该临时申请整体结合到本文中。
发明背景
由于许多治疗性生物制品(例如150KD抗体)的分子量大，治疗上有效的给药途径通常限于侵入性注射，这往往会带来痛苦，尤其是考虑到这么一个事实：依靠治疗性生物制品的患者所治疗的常常是慢性疾病。因此，仍需要痛苦较少但却有效的将治疗性生物制品递送到患者的方法。
发明概述
本发明提供将TNFα抑制剂系统递送到受试者的方法，其中所述递送方法能降低往往伴随注射出现的疼痛。本发明还提供将TNFα抑制剂局部递送到受试者的肺以治疗肺部疾病的方法。
本发明包括治疗患有其中TNFα活性是有害的疾病的受试者的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂肺部递送给受试者，使得其中TNFα是有害的疾病得到治疗。本发明还包括实现TNFα抑制剂在受试者中系统循环的方法，所述方法包括通过吸入将TNFα抑制剂给予到受试者的中心和外周肺区域，使得TNFα抑制剂的系统循环得以实现。本发明进一步提供实现TNFα抑制剂在受试者中系统循环的方法，所述方法包括通过吸入将TNFα抑制剂给予到受试者的外周肺区域，使得TNFα抑制剂的系统循环得以实现。
本发明还包括治疗受试者的肺部疾病的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂肺部递送给受试者，其中所述肺部给药包括将TNFα抑制剂局部递送到受试者的肺。
TNFα抑制剂可配制在适合于吸入的组合物中，包括例如可吸入粉末、含抛射剂的气溶胶和不含抛射剂的可吸入溶液剂。在一个实施方案中，通过干粉吸入器(DPI)将可吸入粉末给予受试者。在一个实施方案中，通过定量吸入器(MDI)将含抛射剂的气溶胶给予受试者。在一个实施方案中，通过喷雾器将不含抛射剂的可吸入溶液剂给予受试者。
在一个实施方案中，本发明进一步包括实现某些用于肺部递送TNFα抑制剂的药代动力学参数。例如，在一个实施方案中，本发明包括对TNFα抑制剂实现Tmax小于或等于约4天的方法。在另一个实施方案中，将TNFα抑制剂分配到受试者的中心肺区域，使得实现P/C比约为0.3。在仍另一个实施方案中，将TNFα抑制剂分配到受试者的外周肺区域，使得实现P/C比约为1.3。
在还另一个实施方案中，实现TNFα抑制剂的最大血清浓度(Cmax)为至少约2.3mg/L。在一个实施方案中，实现TNFα抑制剂的Cmax为至少约4.2mg/L。在另一个实施方案中，实现TNFα抑制剂的Cmax为至少约5mg/L。在仍另一个实施方案中，在给予TNFα抑制剂后实现至少一个选自以下的药代动力学特性：Tmax小于或等于约4天、绝对生物利用度(F％)为至少约0.99％，和Cmax为至少约2.3mg/L。在一个实施方案中，在给予TNFα抑制剂后实现Tmax为约2至约4天。在一个实施方案中，在给予TNFα抑制剂后实现Cmax为约2.3至约5.9mg/L。
本发明还包括适合于将TNFα抑制剂递送到受试者的肺的药物组合物。本发明提供包含TNFα抗体和药物可接受载体的药物组合物，其中所述药物组合物适合于由受试者吸入，且选自可吸入粉末或干粉组合物、含抛射剂的气溶胶和不含抛射剂的可吸入溶液剂或混悬剂。在一个实施方案中，药物可接受载体包含乳糖粉末或葡萄糖粉末。
本发明进一步提供包含TNFα抑制剂的、适合于肺部给予TNFα抑制剂的装置或容器。本发明提供用以将TNFα抑制剂肺部给予受试者的干粉吸入器(DPI)装置，所述DPI装置包括装着包含TNFα抑制剂的可吸入粉末或干粉组合物的贮存器，和用以将可吸入粉末或干粉组合物通过吸入引入到受试者的构件(means)。在一个实施方案中，DPI装置是单剂量或多剂量吸入器。在另一个实施方案中，DPI装置是预定量的(pre-metered)或装置定量的(device-metered)。
本发明还提供用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的定量吸入器(MDI)装置，所述MDI装置包括装着包含TNFα抑制剂的气溶胶和抛射剂的压力罐，和用于将气溶胶通过吸入引入到受试者的构件。
本发明进一步提供与用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的喷雾器装置一起使用的容器，所述容器装着包含TNFα抑制剂的不含抛射剂的可吸入溶液剂或混悬剂。
本发明还包括对在肺泡巨噬细胞上表达的吞噬受体的结合降低的修饰TNFα抗体或其抗原结合部分。本发明也包括对新生Fc受体(FcRN)的结合增强的修饰TNFα抗体或其抗原结合部分。在一个实施方案中，将修饰TNFα抗体缀合到能增加TNFα抗体从受试者的肺上皮转运到受试者的血流的化合物。在另一个实施方案中，修饰TNFα抗体包含在Fc结构域当中的能增加TNFα抗体与FcRn的结合亲和力的突变和/或缺失，包括例如在Fc结构域当中的选自238、256、307、311、312、380和382的氨基酸位置处的至少一个突变。
在一个实施方案中，受试者是人。
在一个实施方案中，受试者患有其中TNFα活性是有害的疾病，包括例如自身免疫疾病、脊柱关节病、肠病、皮肤病和肺病。
在一个实施方案中，自身免疫疾病是类风湿性关节炎或青年期类风湿性关节炎。
在一个实施方案中，脊柱关节病是强直性脊椎炎或牛皮癣关节炎。
在一个实施方案中，肠病是节段性回肠炎。
在一个实施方案中，皮肤病是牛皮癣。
在一个实施方案中，肺病是慢性阻塞性肺病或哮喘。
在一个实施方案中，TNFα抑制剂是TNFα抗体，或其抗原结合部分，或融合蛋白。
在一个实施方案中，融合蛋白是依那西普。
在一个实施方案中，TNFα抗体或其抗原结合部分选自英夫利昔单抗、戈利木单抗和阿达木单抗。
在一个实施方案中，TNFα抗体或其抗原结合部分是选自人源化抗体、嵌合抗体、人抗体和多价抗体的抗体。
在一个实施方案中，人TNFα抗体或其抗原结合部分以1x10-8M或更低的Kd和1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Kd和Koff速率常数都通过表面等离振子共振进行测定；和在标准的体外L929测定中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。
在一个实施方案中，人TNFα抗体或其抗原结合部分具有以下特性：以1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Koff速率常数通过表面等离振子共振进行测定；具有这样的轻链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成；和具有这样的重链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或者从SEQID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成。
在一个实施方案中，人TNFα抗体或其抗原结合部分包含具有这样的CDR3结构域的轻链可变区(LCVR)，所述CDR3结构域包含SEQID NO：3的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换修饰而成；和包含具有这样的CDR3结构域的重链可变区(HCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换修饰而成。
在一个实施方案中，人TNFα抗体或其抗原结合部分包含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
在一个实施方案中，本发明的方法和组合物包含至少约40mg的TNFα抗体或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物包含约40-160mg的TNFα抗体或其抗原结合部分。
附图说明
结合附图阅读下文对优选实施方式的描述，将更完全地理解本发明的前述的和其他的目标、特征和优点以及本发明本身，附图中：
图1显示在猴肺的气管支气管(TB)和中心(C)和外周(P)肺叶区域中所进行的区域组织解剖，以确定两种不同的(浅和深)吸入模式后的肺区域分布。
图2图示在4只猴子中以标称10mg/kg的肺沉积剂量进行两种模式的吸入后，血清阿达木单抗浓度对时间的曲线。每条曲线代表被分配来通过浅(实心符号)和深(空心符号)吸气程序将阿达木单抗气溶胶接受到肺中的每只动物个体。
图3图示在2只猴子中以10mg/kg的剂量进行静脉注射后，血清阿达木单抗浓度对时间的曲线。每条曲线代表每只动物个体。
图4显示FD-150S在猴子中以2.5mg/kg的标称剂量结合操纵插管深度和气溶胶大小进行(a)浅和(b)深吸气程序后的肺区域分布。数据代表3只动物在肺的气管支气管(TB)、中心(C)和外周(P)区域的平均沉积％。
发明详述
I.定义
术语“肺部给予(肺部给药)”或“肺部递送”指通过吸入经由受试者的肺给予TNFα抑制剂。
本文所用的术语“吸入”指摄取空气到肺中。在具体的实施例中，摄取可通过在吸入的同时自给予包含TNFα抑制剂的制剂来进行，或者通过经由呼吸器给予到例如使用呼吸器的患者来进行。针对制剂使用的术语“吸入”与“肺部给予”同义。
本文所用的术语“中心肺区域”或“中心气道”指处于喉的远端的传导气道或过渡气道，其在气体交换方面作用极少或没有作用。在人类中，中心气道包括气管、主支气管、肺叶支气管、肺段支气管、小支气管、细支气管、末端细支气管和呼吸细支气管。中心气道因此占肺中气道分支的前16-19阶段(generation)，其中气管是阶段零(0)，肺泡囊是阶段23(Wiebel(1963)Morphometry of the Human Lung，Berlin：Springer-Verlag，pp.1-151)。中心气道负责空气的整体移动，与之相对，肺的外周主要负责空气和血液之间的气体交换。在一个实施方案中，通过浅吸入将TNFα抑制剂靶向中心肺区域。
本文所用的“外周肺区域”或“外周气道”指肺的处于中心气道远端的气道。
术语“Cmax”指药剂在给予后在受试者中观察到的最大或峰值血清或血浆浓度。
术语“Tmax”指出现Cmax的时间。
术语“生物利用度”或“F％”指在给予给定剂型后被吸收并进入系统循环的剂量的分数或百分数。药剂的剂量可通过静脉内途径之外的任何途径给予，优选经由肺部递送来给予
本文所用的术语“P/C比”或“P/C”指药剂(例如TNFα抑制剂沉积到肺的外周相比于沉积到中心肺区域的相对分布的量度。
本文所用的术语“气溶胶”指在空气中的固体和/或液体混悬剂。具体地讲，气溶胶指本发明制剂颗粒化并悬浮在空气中。根据本发明，气溶胶制剂是包含适合于气溶胶化(即颗粒化并悬浮在空气中)以供吸入或肺部给予的互补抑制性蛋白质(complement inhibitory protein)的制剂。
本文所用的术语“人TNFα”(本文缩写为hTNFα，或者简称hTNF)意在指作为17KD分泌形式和26KD膜缔合形式存在的人细胞因子，其生物活性形式由非共价结合的17KD分子的三聚体组成。hTNFα的结构在例如以下文献中有进一步的描述：Pennica，D.等人(1984)Nature 312：724-729；Davis，J.M.等人(1987)Biochemistry 26：1322-1326和Jones，E.Y.等人(1989)Nature 338：225-228。术语人TNFα意在包括重组人TNFα(rhTNFα)，其可通过标准的重组表达方法制备，或者商业购买(R&D Systems，目录号210-TA，Minneapolis，MN)。TNFα也称TNF。
术语“TNFα抑制剂”包括能干扰TNFα活性的药剂。该术语还包括本文描述的抗TNFα人抗体和抗体部分以及在美国专利号6,090,382、6,258,562、6,509,015中和在美国专利申请系列号09/801185和10/302356中描述的那些抗TNFα人抗体和抗体部分的每一个。在一个实施方案中，用于本发明的TNFα抑制剂是抗TNFα抗体或其片断，包括英夫利昔单抗(
Figure GPA00001066684000071
Johnson and Johnson；描述于美国专利号5,656,272，该专利通过引用并入本文)、CDP571(人源化的单克隆抗TNF-αIgG4抗体)、CDP 870(人源化的单克隆抗TNF-α抗体片断)、抗TNF dAb(Peptech)、CNTO 148(戈利木单抗；Medarex andCentocor，参见WO 02/12502)和阿达木单抗(
Figure GPA00001066684000072
AbbottLaboratories，人抗TNF mAb，在US 6,090,382被描述为D2E7)。另外的可用于本发明的TNF抗体描述于美国专利号6,593,458、6,498,237、6,451,983和6,448,380，每个专利通过引用并入本文。在另一个实施方案中，TNFα抑制剂是TNF融合蛋白，例如依那西普(
Figure GPA00001066684000073
Amgen；描述于WO 91/03553和WO 09/406476，每个专利通过引用并入本文)。在另一个实施方案中，TNFα抑制剂是重组TNF结合蛋白(r-TBP-I)(Serono)。
本文所用的术语“抗体”意在指由四条多肽链即通过二硫键互相连接的两条重(H)链和两条轻(L)链构成的免疫球蛋白分子。每条重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由CH1、CH2和CH3三个结构域构成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域即CL构成。VH区和VL区可进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的超可变区，这些超可变区当中散布着更为保守的被称为构架区(FR)的区域。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。本发明的抗体在美国专利号6,090,382、6,258,562和6,509,015中有进一步的详细描述，所述每个专利通过引用全文并入本文。
本文所用的术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片断”(或者简称“抗体部分”)，指抗体的一个或多个保持特异性结合抗原(例如hTNFα)的能力的片断。已证实抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片断来执行。结合片断包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fabc、Fv、单链、和单链抗体。被涵盖在抗体的“抗原结合部分”这个术语当中的结合片断的实例，包括(i)Fab片断，即由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片断；(ii)F(ab′)2片断，即包含两个在铰链区通过二硫键连接的Fab片断的二价片断；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片断；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片断；(v)dAb片断(Ward等人(1989)Nature 341：544-546)，其由VH或VL结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片断的两个结构域即VL和VH是由不同的基因编码的，但可用重组方法通过合成接头将它们连接起来，所述合成接头能使它们被制备成单一蛋白质链，其中VL区和VH区配对以形成单价分子(也称单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。这种单链抗体也意在被涵盖在抗体的“抗原结合部分”这个术语当中。其他形式的单链抗体如双抗体(diabody)也被涵盖在内。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域被表达在单一多肽链上，但使用的是短得不会让同一条链上的两个结构域之间发生配对的接头，从而迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，产生出两个抗原结合位点(参见例如Holliger等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448；Poljak等人(1994)Structure2：1121-1123)。可用于本发明的抗体部分在美国专利号6,090,382、6,258,562和6,509,015中有进一步的详细描述，所述每个专利通过引用全文并入本文。
此外，抗体或其抗原结合部分可以是更大的免疫黏附分子的一部分，所述免疫黏附分子是由所述抗体或抗体部分与一种或多种其他的蛋白质或肽的共价或非共价缔合所形成。这种免疫黏附分子的实例包括使用链霉亲和素核心区来制备四聚scFv分子(Kipriyanov，S.M.等人(1995)Human Antibodies and Hybridomas 6：93-101)和使用半胱氨酸残基、标记肽和C末端聚组氨酸标签(tag)来制备二价和生物素酰化的scFv分子(Kipriyanov，S.M.等人(1994)Mol.Immunol.31：1047-1058)。抗体部分如Fab片断和F(ab′)2片断可用常规技术从完整抗体制备，例如分别对完整抗体进行木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化来制备。此外，如本文所述，抗体、抗体部分和免疫黏附分子可用标准重组DNA技术来获得。
本文所用的“保守氨基酸置换”是其中一个氨基酸残基被具有相似侧链的另一个氨基酸残基替代的置换。具有相似侧链的氨基酸残基的家族在本领域中已有定义，所述侧链包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
“嵌合抗体”指其中重链和轻链各自的氨基酸序列的一部分与衍自特定物种或属于特定类别的抗体中的相应序列同源，而所述链的剩余区段与来自另一物种的相应序列同源。在一个实施方案中，本发明涉及嵌合抗体或其抗原结合片断，其中轻链和重链的可变区都模拟衍自一种哺乳动物物种的抗体的可变区，而恒定区与衍自另一物种的抗体中的序列同源。在本发明的一个优选的实施方案中，嵌合抗体是通过将来自小鼠抗体的CDR移植到人抗体的构架区上来制备。
“人源化抗体”指这样的抗体，其包含至少一条包含基本上来自人抗体链(称为接纳体(acceptor)免疫球蛋白或抗体)的可变区构架残基的链，和至少一个基本上来自非人抗体(例如小鼠)的互补决定区(CDR)。除了CDR的移植外，人源化抗体通常进行进一步的变更以改进亲和力和/或免疫原性。
术语“多价抗体”指包含超过一个抗原识别位点的抗体。例如，“二价”抗体具有两个抗原识别位点，而“四价”抗体具有四个抗原识别位点。术语“单特异性”、“双特异性”、“三特异性”、“四特异性”等指多价抗体中存在的不同抗原识别位点特异性的数目(不同于抗原识别位点的数目)。例如，“单特异性”抗体的抗原识别位点都结合同一表位。“双特异性”或“双元特异性”抗体具有至少一个结合第一表位的抗原识别位点和至少一个结合不同于第一表位的第二表位的抗原识别位点。“多价单特异性”抗体具有全部都结合同一表位的多个抗原识别位点。“多价双特异性”抗体具有多个抗原识别位点，其中一些结合第一表位，另一些结合不同于第一表位的第二表位。
本文所用的术语“人抗体”意在包括具有衍自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，尤其是CDR3。但是，本文所用的术语“人抗体”并不意在包括其中衍自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列已被移植到人构架序列上的抗体。
本文所用的术语“重组人抗体”意在包括所有通过重组手段制备、表达、产生或分离的人抗体，如用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组组合人抗体文库分离的抗体(下文进一步描述)、从转人免疫球蛋白基因的转基因动物(例如小鼠)分离的抗体(参见例如Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287)，或者通过任何其他涉及到将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的手段制备、表达、产生或分离的抗体。这种重组人抗体具有衍自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。但是，在某些实施方案中，这种重组人抗体经受体外诱变(或者当使用转人Ig序列的转基因动物时，经受体内体细胞诱变)，从而重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列是这样的序列：虽然衍自于和关联于人种系VH序列和VL序列，但可能并不天然存在于体内人抗体种系库(germline repertoire)当中。
这种嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和双元特异性抗体可通过本领域公知的重组DNA技术产生，例如使用以下专利和文献中描述的方法制备：PCT国际申请号PCT/US86/02269；欧洲专利申请号184,187；欧洲专利申请号171,496；欧洲专利申请号173,494；PCT国际公开号WO 86/01533；美国专利号4,816,567；欧洲专利申请号125,023；Better等人(1988)Science 240：1041-1043；Liu等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3439-3443；Liu等人(1987)J.Immunol.139：3521-3526；Sun等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：214-218；Nishimura等人(1987)Cancer Res.47：999-1005；Wood等人(1985)Nature 314：446-449；Shaw等人(1988)J.Natl.Cancer Inst.80：1553-1559)；Morrison(1985)Science 229：1202-1207；Oi等人(1986)BioTechniques 4：214；美国专利号5,225,539；Jones等人(1986)Nature321：552-525；Verhoeyan等人(1988)Science 239：1534；和Beidler等人(1988)J.Immunol.141：4053-4060；Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)，US 5,530,101，US 5,585,089，US5,693,761，US 5,693,762，Selick等人，WO 90/07861和Winter，US5,225,539。
本文所用的“分离抗体”意在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如特异性结合hTNFα的分离抗体基本上不含特异性结合hTNFα之外的抗原的抗体。但是，特异性结合hTNFα的分离抗体可具有对其他抗原如来自其他物种的TNFα分子的交叉反应性。此外，分离抗体可基本上不含其他的细胞材料和/或化学物质。
本文所用的“中和抗体”(或者“中和hTNFα活性的抗体)意在指其与hTNFα的结合导致hTNFα的生物活性的抑制的抗体。hTNFα生物活性的这个抑制可通过测量hTNFα生物活性的一个或多个指标进行评估，所述指标例如hTNFα诱导的细胞毒性体外或体内、hTNFα诱导的细胞激活和hTNFα与hTNFα受体的结合。hTNFα生物活性的这些指标可通过本领域公知的几种标准体外或体内测定法中的一种或多种进行评估(参见美国专利号6,090,382)。优选地，抗体中和hTNFα活性的能力是通过对hTNFα诱导的L929细胞的细胞毒性的抑制进行评估。作为hTNFα活性的另外的或另选的参数，也可评估抗体抑制ELAM-1在HUVEC上的hTNFα诱导表达的能力，所述表达是作为hTNFα诱导的细胞激活的量度。
本文所用的术语“表面等离振子共振”指这么一种光学现象，它使得能够例如使用BIAcore系统(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden和Piscataway，NJ)，通过测定生物传感器基质当中的蛋白质浓度的变化来分析实时生物特异性相互作用。更多的描述参见美国专利6,258,562的实施例1以及
Figure GPA00001066684000121
等人(1993)Ann.Biol.Clin.51：19；
Figure GPA00001066684000122
等人(1991)Biotechniques11：620-627；Johnsson等人(1995)J.Mol.Recognit.8：125；和Johnnson等人(1991)Anal.Biochem.198：268。
本文所用的术语“Koff”意在指抗体从抗体/抗原复合物解离的解离速率常数(off rate constant)。
本文所用的术语“Kd”意在指特定的抗体-抗原相互作用的解离常数。
本文所用的术语“IC50”意在指抑制所关心的最大生物终点(例如细胞毒性活性的中和)的50％所需的抑制剂的浓度。
本文所用的术语“剂量”指给予受试者的TNFα抑制剂的量。
本文所用的术语“投与”指给予物质(例如抗TNFα抗体)以实现治疗目标例如治疗其中TNFα活性是有害的疾病。
“投与方案”描述的是TNFα抑制剂的治疗安排，例如长时间的和/或贯穿整个治疗过程的治疗安排。在一个实施方案中，投与方案包括在第0星期通过肺部给药来给予第一剂量的TNFα抑制剂，然后以每两星期一次的投与方案通过肺部给药来给予第二剂量的TNFα抑制剂。
本文所用的术语“每两星期一次的投与方案”、“每两星期一次的投与”和“每两星期一次的给药”指将物质例如抗TNFα抗体给予受试者以实现治疗目标的时间进程，例如贯穿整个治疗过程。每两星期一次的投与方案不意在包括每星期一次的投与方案。优选地，物质每9-19天给予一次，更优选地每11-17天给予一次，甚至更优选地每13-15天给予一次，最优选地每14天给予一次。在一个实施方案中，每两星期一次的投与方案在治疗的第0星期在受试者中开始。在一个实施方案中，每两星期一次的投与包括其中在第0星期开始每隔一星期将TNFα抑制剂的剂量给予受试者的投与方案。在一个实施方案中，每两星期一次的投与包括其中对于给定的时间周期，例如4个星期、8个星期、16，个星期、24个星期、26个星期、32个星期、36个星期、42个星期、48个星期、52个星期、56个星期等等，连续地每隔一星期将TNFα抑制剂的剂量给予受试者的投与方案。每两星期一次的投与方法在US 20030235585中也有描述，该专利通过引用并入本文。
术语“多可变剂量(multiple-variable dose)”包括TNFα抑制剂的被给予受试者以进行医疗性治疗的不同剂量。“多可变剂量方案”或“多可变剂量疗法”描述的是基于在整个治疗过程中的不同时间点给予不同量的TNFα抑制剂的治疗安排。多可变剂量方案在PCT申请号PCT/US05/12007和US 20060009385中有描述，这两个专利通过引用并入本文。
如在词语“第一药剂与第二药剂组合”中出现的术语“组合”包括共给予第一药剂和第二药剂，所述两种药剂例如可溶于或混杂于同一药物可接受的载体中，或者是给予第一药剂后再给予第二药剂，或者是给予第二药剂后再给予第一药剂。因此，本发明包括组合医疗性治疗和组合药物组合物的方法，其中一种或两种所述药剂通过肺部给药进行递送。
如在词语“伴随医疗性治疗”中出现的术语“伴随”包括在第二药剂的存在下给予药剂。伴随医疗性治疗方法包括其中共给予第一、第二、第三药剂或额外药剂的方法。伴随医疗性治疗方法还包括其中在第二药剂或额外药剂存在下给予第一药剂或额外药剂的方法，其中第二药剂或额外药剂例如可之前已给予。伴随医疗性治疗方法可由不同的参与者(actor)逐步执行。例如，一个参与者可将第一药剂给予受试者，第二参与者可将第二药剂给予受试者，且给予步骤可同时执行，或者几乎同时执行，或者在隔开的时间执行，只要第一药剂(和额外药剂)在第二药剂(和额外药剂)的存在下随后给予。参与者和受试者可以是相同的个体(例如人)。
本文所用的术语“组合疗法”指给予两种或更多种治疗物质，例如抗TNFα抗体和另一药物。所述其他药物可以与抗TNFα抗体伴随给予、在给予抗TNFα抗体之前给予或者在给予抗TNFα抗体之后给予。
在本发明情形中所用的术语“治疗”意在包括用于治疗其中TNFα活性是有害的疾病的医疗性治疗以及预防性或抑制性措施。例如，术语“治疗”可包括在其中TNFα活性是有害的疾病发作之前或之后肺部给予TNFα抑制剂，从而预防或除去疾病或病症的征候。作为另一个实例，在其中TNFα活性是有害的疾病出现临床表现之后给予TNFα抑制剂，以抗击与其中TNFα活性是有害的疾病有关的症状和/或并发症和病症，这也构成对疾病的“治疗”。此外，在疾病发作之后和在临床症状和/或并发症发展了之后给予药剂，其中该给予能影响疾病或病症的临床参数并或许能改善疾病，这也构成对其中TNFα活性是有害的疾病的“治疗”。
“需要治疗”的对象包括已经患有其中TNFα活性是有害的疾病的哺乳动物(如人)，包括其中要预防疾病或病症的那些对象在内。
本发明的各个方面在本文中有更详细的描述。
II.肺部给药的方法和组合物
TNFα抑制剂例如TNFα抗体的肺部给予提供了比更为传统的药物递送方式例如皮下和静脉内递送有利的另选递送方式。通过吸入TNFα抑制剂以治疗疾病，受试者能够避免针注射伴随的疼痛，但仍能实现TNFα抑制剂的系统循环，从而得到治疗效果。
因此，本发明涉及通过肺部给药将TNFα抑制剂例如TNFα抗体给予受试者的方法和组合物。本发明还涉及治疗患有其中TNFα活性是有害的疾病的受试者的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂肺部给予受试者，使得其中TNFα是有害的疾病得到治疗。
本发明还提供某些能导致TNFα抑制剂例如TNFα抗体的成功肺部递送的药代动力学参数，使得TNFα抑制剂达到治疗上期望的血清水平。在一个实施方案中，TNFα抑制剂(例如TNFα抗体)是通过吸入到受试者进行递送，使得达到小于或等于约4天的Tmax。在另一个实施方案中，TNFα抑制剂的吸入导致至少约2.3mg/l的TNFα抑制剂最大血清浓度(Cmax)。在一个实施方案中，达到至少约2.3mg/l、2.4mg/l、2.5mg/l、2.6mg/l、2.7mg/l、2.8mg/l、2.9mg/l、3.0mg/l、3.1mg/l、3.2mg/l、3.3mg/l、3.4mg/l、3.5mg/l、3.6mg/l、3.7mg/l、3.8mg/l、3.9mg/l、4.0mg/l、4.1mg/l、4.2mg/l、4.3mg/l、4.4mg/l、4.5mg/l、4.6mg/l、4.7mg/l、4.8mg/l、4.9mg/l、和5.0mg/l、5.1mg/l、5.2mg/l、5.3mg/l、5.4mg/l、5.5mg/l、5.6mg/l、5.7mg/l、5.8mg/l、5.9mg/l和6.0mg/l的Cmax。包括在本发明中的能导致TNFα抑制剂(例如人TNFα抗体)在通过肺部途径接受了TNFα抑制剂的受试者的血清中达到治疗水平的其他药代动力学特性，包括小于或等于约4天的Tmax、约2至约4天的Tmax、至少约0.99％的绝对生物利用度(F％)、约2.3至约5.9mg/L的Cmax和至少约2.3mg/L的Cmax。
本发明还包括将TNFα抑制剂肺部递送给受试者，使得实现TNFα抑制剂的系统循环，其中所述TNFα抑制剂是递送到中心肺区域或递送到外周肺区域。根据本发明方法，TNFα抑制剂(例如TNFα抗体)经由肺部给药达到的系统循环可通过中心肺区域、外周肺区域或者这两个肺区域来实现。因此，在一个实施方案中，本发明涉及实现TNFα抑制剂在受试者中的系统循环的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂通过吸入给予到受试者的中心肺区域，使得TNFα抑制剂的系统循环得以实现。在另一个实施方案中，本发明涉及实现TNFα抑制剂在受试者中的系统循环的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂通过吸入给予到受试者的外周肺区域，使得TNFα抑制剂的系统循环得以实现。
在一个实施方案中，使受试者对TNFα抑制剂的吸入定向到受试者的中心肺区域，以实现TNFα抑制剂的系统循环。已有研究提示，可能是载体介导Fc融合蛋白从肺气道吸收到系统(Bitonti等人(2004)PNAS 101：9763)。据认为，这个吸收是通过它的特异性结合转运蛋白即新生恒定区片断(Fc)受体(FcRn)介导的胞吞转运作用，同时从其中FcRn定位似乎更丰富的支气管气道占优势(Bitonti等人(2004))。WO04/004798(2004)描述了Fc融合蛋白(包括EPO-Fc)向中心肺区域的气溶胶递送。本发明描述了实现在中心气道成功递送TNFα抑制剂(TNFα抗体)的方法，从而证明可通过吸入将TNFα抗体给予受试者。
在一个实施方案中，将受试者对TNFα抑制剂的吸入定向到受试者的外周肺区域，以实现TNFα抑制剂的系统循环。已证实外周肺区域对于通过吸入递送的药剂的吸收是有利的，因为外周肺区域具有最大数量的可用于进行吸收的表面积(参见Yu等人(1997)Crit RevTherapeutic Drug Carrier Systems 14：395)。
P/C比代表作为药剂向外周肺的有效给予的量度的渗透指数。在一个实施方案中，本发明提供实现TNFα抑制剂的系统循环的方法，其中将TNFα抑制剂分配到受试者的中心肺区域，使得达到约0.3的P/C比。在一个实施方案中，本发明提供实现TNFα抑制剂的系统循环的方法，其中将TNFα抑制剂分配到受试者的外周肺区域，使得达到约1.3的P/C比。
肺部给予可通过本领域技术人员公知的合适方法来完成。TNFα抑制剂的肺部给予要求在吸入过程中将生物活性物质从递送装置分配到受试者的口腔中。出于本发明的目的，通过吸入气溶胶或其他合适的制剂来给予包含TNFα抑制剂的组合物，所述其他合适的制剂是从药物组合物的含水或非水溶液或悬浮液形式或者固体或干粉形式(视所用的递送装置而定)获得。这种递送装置是本领域公知的，包括但不限于喷雾器、定量吸入器和干粉吸入器，或者任何其他可以将药物组合物作为含水或非水溶液或悬浮液或者作为固体或干粉形式进行分配的适当递送机制。
通过肺部给药将TNFα抑制剂(包括TNFα抗体或其抗原结合部分在内)递送到受试者的方法(包括将递送定向到中心和/或外周肺区域在内)，包括但不限于干粉吸入器(DPI)、定量吸入器(MDI)装置和喷雾器。
干粉吸入器(DPI)装置
在一个实施方案中，通过干粉吸入器(DPI)将TNFα抑制剂(包括TNFα抗体或其抗原结合部分在内)递送到受试者。DPI是用来利用受试者的吸气将干粉而不是雾滴递送到肺，以递送固体或干粉形式的药剂(如TNFα抑制剂)。DPI是用来吸进(吸入)TNFα抑制剂，使得它直接进入受试者的肺。DPI是不含抛射剂的装置，其中供递送的药剂与本领域公知的合适载体掺合在一起。用于DPI装置的单位剂量的药剂往往是硬胶囊的干粉泡眼圆片(dry powder blister disc of hardcapsule)。DPI产生出可分散且稳定的被吸入的干粉制剂，包括喷雾干燥制剂、喷雾冷冻干燥制剂和微粉化粉碎制剂。DPI装置已被用来递送大分子药剂，包括胰岛素、干扰素(IFN)和生长激素(GH)。
DPI装置的实例包括但不限于以下：
Figure GPA00001066684000181
吸入器(Alkermes)，其包括小型的、呼吸致动的系统，可将多孔粉末从胶囊进行递送(参见WO 99/66903和WO 00/10541)。多孔颗粒具有1-5μm的空气动力学直径，由喷雾干燥制备。AIRTM吸入器已被用来递送沙丁胺醇、肾上腺素、胰岛素和hGH。
Figure GPA00001066684000182
(AstraZeneca)也是一种可用于本发明的方法中的DPI，在EP 0799067中有描述，该专利通过引用并入本文。这种DPI装置是吸气流驱动的多剂量干粉吸入器，其中的多剂量贮存器能提供最多达200个剂量的药物制剂，剂量范围从几微克到0.5mg。TurboHalerTM的实例包括
Figure GPA00001066684000183
(也称
Figure GPA00001066684000184
)，其能递送布地奈德(为抗炎糖皮质类固醇，适应用于每日一次或两次进行哮喘的维持治疗)、
Figure GPA00001066684000185
(福莫特罗，为速效且长效的β2激动剂，用于每日一次或两次进行哮喘的维持治疗)和
Figure GPA00001066684000186
(布地奈德/福莫特罗)，其在单个吸入器中含有皮质类固醇布地奈德和速效和长效支气管扩张药福莫特罗。
EclipseTM(Aventis)代表呼吸致动的可回收使用的胶囊装置，能够递送最多达20mg制剂。粉末从胶囊吸取到涡流室中，随着受试者吸气，涡流室中的旋转球帮助粉末解聚(参见US6230707和WO9503846)。
另一种可用于本发明的方法和组合物的DPI装置包括
Figure GPA00001066684000187
(Aventis)，其将准确剂量计量和良好分散的特点集于一个装置中，从而在具有数字剂量计数器、已取剂量指示器和锁定机制的容易使用的分立袖珍型装置中提供一月疗法。该装置能够递送最多达20mg的剂量。
Figure GPA00001066684000191
在US5678538和WO2004026380中有描述。
另一种可用于本发明的方法和组合物的DPI装置包括BangOlufsen呼吸致动吸入器，这是使用最多达60个剂量的泡眼条(blisterstrip)的呼吸致动吸入器。剂量只有在通过新的触动机制进行吸入过程中才被造成可供利用。该装置装备有剂量计数器，很有可能在所有剂量已被使用后抛弃(参见EP1522325)。
在WO 94/19042(Bespak)中描述的主动式DPI(也可用作MDI-下文说明)包括这么一种装置，其为自身包含单元(self contained unit)，采用碳纤维刷刚毛状电极将粉末和气溶胶分散成细粉/颗粒/雾滴。随着患者吸气，使1-10千伏通过电极，以分散粉末/气溶胶。采用由压电膜构成的呼吸传感器来引发放电，所述压电膜能响应通道中的空气压力变化发生弯曲，从而产生代表被感测的吸入的信号。
Figure GPA00001066684000192
(Boehringer Ingelheim GmbH)是单剂量DPI装置，其可递送最多达30mg的在胶囊中的配方药物(参见WO2004024156)。这个装置的一个实例是
Figure GPA00001066684000193
(噻托溴铵)，其将该18mcg剂量的3.6mcg递送到肺。
PADD DPI(Britannia Pharmaceuticals)是一种加压气溶胶干粉递送装置，能够递送最多达100mg制剂。该系统采用由表面活性磷脂、二棕榈酰磷酯酰胆碱(DPPC)和磷脂酰甘油(PG)构成的、制备成细粉形式的新型制剂。PADD装置能提供抛射剂驱动的装置所能提供的最高有效载荷(参见US6482391)。
另一种可用于本发明的方法和组合物的DPI装置包括
Figure GPA00001066684000194
吸入器(Chiesi)，其为呼吸致动的多剂量(100个剂量)干粉吸入器(参见US5351683)。药物的干粉储存在贮存器中，该贮存器透明并作清楚标记，以指示何时递送了第100个剂量。Pulvinal吸入器已被用来递送呼吸道药物，如沙丁胺醇
Figure GPA00001066684000195
倍氯米松
Figure GPA00001066684000196
以及布地奈德和福莫特罗。
又一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括NEXTDPITM，这是一种具有多剂量容量、防潮且能进行剂量计数的装置。该装置无论取向如何(如倒置)都可使用，仅在达到适当的呼吸流时才投与(参见EP1196146、US6528096、WO0178693、WO0053158)。
DirectHalerTM(Direct-Haler A/S)也可用于本发明的方法和组合物(参见US 5,797,392)。这个装置是由聚丙烯制成的单剂量、预定量、预充装、可弃式DPI装置。这个装置长72mm，透明，单剂量，该DPI装置类似吸管，已被用来递送布地奈德和福莫特罗的制剂。
Accuhaler/DiskusTM(GlaxoSmithKline)是可弃式小型DPI装置，能存放最高达60个剂量，这些剂量装在双面箔泡眼条中以防潮(参见GB2242134)。它已被用来递送氟替卡松丙酸酯/沙美特罗羟萘甲酸盐、氟替卡松丙酸酯、沙美特罗羟萘甲酸盐和沙丁胺醇。
另外，所述方法可包括
Figure GPA00001066684000202
(Hovione)，其为基于胶囊的、可再充装可再使用的被动干粉吸入器，能存放最高达14个胶囊。
Figure GPA00001066684000203
为笔状，尺寸为长约11cm、直径2cm。该吸入器本身是防潮的(参见US5673686)。
在一个实施方案中，用于本发明的DPI装置是(Innovata PLC)，其为大贮存器呼吸致动多剂量装置(参见US5437270)。它用来以多种药物治疗哮喘和COPD，所述药物包括沙丁胺醇
Figure GPA00001066684000205
倍氯米松
Figure GPA00001066684000206
和盐酸丙卡特罗
Figure GPA00001066684000207
以及布地奈德和福莫特罗。另一种可用于本发明的包含贮存器的DPI装置包括
Figure GPA00001066684000208
(Innovata PLC)，其为固定组合疗法多剂量DPI(参见WO0139823)。它具有两个单独的贮存器，所述贮存器将两个单独的制剂输送到单独的计量室，药物同时从计量室递送到患者；这个方法克服了共配制的问题。
Figure GPA00001066684000209
因此理想地适用于给哮喘和COPD递送固定组合疗法。
在一个实施方案中，用于本发明的DPI装置是S2单位剂量(Innovata PLC)，其为可再使用的或可弃式单剂量DPI，可供高浓度递送很多种治疗剂。它的分散机制意味着患者不需要怎么用劲就能确保药物良好地递送到患者的肺，这是一个对于系统药物递送特别有益的特征。S2容易使用，具有被动引擎，因此不需要电池或动力源(参见AU3320101)。
又一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括
Figure GPA00001066684000211
DPI(LAB International)，其为呼吸致动和不依赖于流速的多剂量(最多达200)DPI装置。该装置由独特的水分平衡药物贮存器加上受专利保护的供进行持续投与的体积剂量计量系统所组成(参见US6132394)。
在一个实施方案中，用于DPI装置是
Figure GPA00001066684000212
(Mannkind Corp.，参见WO0107107)，其包括摄取部件、混合部件和口器。口器通过回转接头连接到混合部件。摄取室包括具有楔形活塞杆和弹簧的活塞，以及一个或多个用来调节空气流动通过装置的透过孔口。混合部件存放着含有干粉药剂的带孔胶囊，并此后在摄取部件与口器成某一角度时打开和关闭胶囊。混合部分是对经过混合室的空气赋予气旋流的文丘里室(Venturi chamber)。口器包括压舌板以及接触使用者嘴唇以告知使用者DPI处于正确位置的突出体。用于治疗糖尿病的
Figure GPA00001066684000213
胰岛素系统是由胰岛素的干粉
Figure GPA00001066684000214
制剂(参见US2004096403)和据以将粉末吸入到深肺中的
Figure GPA00001066684000215
吸入器组成。待以微颗粒形式递送的药物粉末制剂具有0.5-10微米之间的大小范围，优选在2-5微米之间，其由在大于6.4的pH下释放药物的材料形成。
又一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括XcelovairTM(Meridica/Pfizer)且具有60个5-20mg范围内的预定量密封剂量。该装置提供在40℃/75％RH的加速条件下的防潮性。分散系统使细颗粒部分的递送最大化，以达到最高达50％的细颗粒质量。
又一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括
Figure GPA00001066684000216
DPI(Microdose Technologies)，其是一种小型电子DPI装置，使用压电振动器(超声频率)来使药物粉末(小分子或大分子、纯化学物质或者最高达3mg药物的药物和乳糖混合物)在铝泡眼(单剂量或多剂量)中解聚(参见US6026809)。它已被用于胰岛素的肺部递送。
在一个实施方案中，用于本发明的DPI装置是Nektar Pulmonary
Figure GPA00001066684000221
(Nektar)，其被设计来有效地从包装移除粉末，粉碎颗粒和产生适合深肺递送的气溶胶烟雾(参见AU4090599、US5740794)。它被设计来使得气溶胶化颗粒能够在患者呼吸时从装置传输到深肺，从而降低在咽喉和上气道中的损失。使用压缩气体来使粉末气溶胶化。这种DPI装置被用于
Figure GPA00001066684000222
可吸入胰岛素(Pfizer、Sanofi-Aventis和Nektar)，以及用来给予托普霉素、亮丙立德和单链抗体。本发明还包括Nektar Dry Powder
Figure GPA00001066684000223
(Nektar)，其为手掌大小，容易使用，在与Nektar Pulmonary
Figure GPA00001066684000224
组合使用时能提供从标准胶囊的便利投与和不依赖于流速的肺沉积(参见US2003094173)。Nektar DPI适于大分子或小分子，对于较大有效载荷(2-50mg)来说是理想的。这种可弃式装置被设计来供短期使用。这种装置已被用来递送用于患囊性纤维变性的患者体内的肺感染(ling infection)的托普霉素吸入粉末和用于治疗真菌感染的吸入式两性霉素B。
本发明还包括OrielTM DPI，其为采用压电膜和非线性振动来使粉末制剂气溶胶化的主动式DPI(参见WO0168169)。
另外，
Figure GPA00001066684000225
(0rion Pharma)也可用于本发明的方法和组合物。
Figure GPA00001066684000226
是用于肺和鼻递送的多剂量干粉吸入器，对于局部肺递送来说能提供良好的性能(参见WO02102444)，不过对敏感药物不能提供防潮。包括Beclomet
Figure GPA00001066684000228
/Atomide
Figure GPA00001066684000229
(二丙酸倍氯米松)和Buventol
Figure GPA000010666840002210
/Salbu(沙丁胺醇)。
本发明还包括
Figure GPA000010666840002212
(Pulmotec)，其应用MAG(机械气溶胶产生)技术来进行不含CFC的干粉吸入。MAG技术是基于机械气溶胶产生的原理，其中吸入剂量是以机械方式从高度压缩的固体产生。已被用来递送布地奈德
Figure GPA00001066684000232
又一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括Accu-BreatheTM单剂量DPI(Respirics)，其为在达到预定的呼吸流速时递送剂量的单剂量装置(参见WO03035137，US6561186)。这种DPI装置使用新型的二元胶囊包装系统，能够递送多个制剂。
本发明还包括Acu-BreatherTM多剂量DPI(Respirics)，其使用aclar/PVC防潮泡眼筒(blister cartridge)，该泡眼筒能够存放25-50mg的粉末(分别为30剂量和15剂量装置)，和能够同时存放和递送两种不同的药物制剂(参见US6561186)。该装置使用i-PointTM技术，该技术使得可以在达到预定的呼吸流速时释放药物。调整流速(工厂设置)，可以将药物递送定向到下气道或上气道。该装置还具有累计剂量计数器。
本发明还包括
Figure GPA00001066684000233
(Schering-Plough)，其为具有精密的剂量计数特征的多剂量装置，能够进行14-200次致动(US5829434)。制剂包装在含有干燥剂的筒中。包括这个DPI装置的产品包括AsmanexTwisthaler(糠酸莫米松)。
另一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括
Figure GPA00001066684000234
DPI(SkyePharma)，其为在单次使用或可更换的筒中含有最多达300个单独剂量的多剂量装置(参见US6182655、WO97/20589)。投与机制可处理从200mcg到5mg的单独剂量。该装置由呼吸驱动，不需要在呼吸和致动之间协调。这个DPI装置被包括在Foradil(富马酸福莫特罗)。
本发明还包括
Figure GPA00001066684000236
(Meda AB)，其为带有剂量计数器的可再充装、多剂量、呼吸致动的干粉吸入器(US5840279、US6071498、WO9700703)。这个装置与含有最多达300个单剂量的本体药物(bulkdrug)粉末的再充装筒一起使用。Novolizer被包括在以下各药物中：布地奈德200μg
Figure GPA00001066684000237
沙丁胺醇100μg
Figure GPA00001066684000238
Fomoterol
Figure GPA00001066684000241
布地奈德
Figure GPA00001066684000242
400μg。
另一种可用于本发明方法和组合物的DPI装置包括BlisterInhalerTM(Meda AB)，其为带有剂量计数器的可再充装、多剂量、呼吸致动的干粉吸入器(US5881719、WO9702061)。这个装置与含有最多达300个单剂量的本体药物粉末的再充装筒一起使用。这个装置能够递送湿敏化合物(例如蛋白质和肽)。
其他的DPI装置包括：
Figure GPA00001066684000243
(Aventis和Rhone-PoulencRorer；为单剂量吸入器，采用明胶胶囊来存放微粉化药物，包括用于治疗支气管哮喘的色甘酸钠)；单位剂量DPI(Bespak；为用于递送单位剂量的粉末药物的装置，其中该装置具有在罐/贮存器中的粉末药物制剂、入口阀、膜、柱塞和刺穿尖头；参见US2003178440)；(GlaxoSmithKline；为用于局部肺递送的装置(4-8个剂量)-参见US 5,035,237)；
Figure GPA00001066684000245
(GlaxoSmithKline；为采用胶囊的单次使用装置(参见US5673686，US5881721)；
Figure GPA00001066684000246
(LABInternational；为用于干粉药物的呼吸致动可弃式单剂量吸入装置，由递送区域和口器之间的空气输送管(空气/粉末混合器)组成的一个组件制成)；AirMaxTM(Ivax；多剂量贮存器吸入器，其中剂量是由使用者压下加载弹簧的按钮时被压缩的少量空气进行计量；参见US5503144)；AerolizerTM(Novartis)，其为其中药物储存在胶囊中并通过用涂覆特富龙的钢钉刺穿胶囊壁来释放的单剂量干粉吸入器；参见US6488027，US3991761)；Rexam DPI(Rexam Pharma；参见US5651359和EP0707862；为设计来与胶囊一起使用的单剂量、可再使用的装置)；珠粒多剂量吸入器(Valois；WO0035523、US6056169、US2005087188；为基于Elan/Dura/Quadrant许可的装置引擎的多剂量DPI肺部递送装置)；
Figure GPA00001066684000247
(Ventura；WO 02/089880；为采用低压空气使最多达5mg干粉制剂气溶胶化以从肺进行系统递送应用的单剂量呼吸致动DPI)；和
Figure GPA00001066684000248
(Ventura；GB2407042；为装着具有供局部递送药物到肺的一月剂量的泡眼条的被动可弃式DPI)。
适用于本文的方法的市售干粉吸入器的其他实例包括
Figure GPA00001066684000251
干粉吸入器(Fisons)和
Figure GPA00001066684000252
(Glaxo SmithKline)。另参见WO 93/00951、WO 96/09085、WO 96/32152以及美国专利号5,458,135、5,785,049和5,993,783中描述的干粉递送装置，所述专利通过引用并入本文。
在一个实施方案中，本发明提供用于将TNFα抑制剂肺部递给予受试者的干粉吸入器(DPI)装置，其中所述DPI装置包括装着包含TNFα抑制剂的可吸入粉末或干粉组合物的贮存器，和用以将可吸入粉末或干粉组合物通过吸入引入到受试者的构件。本发明还提供包含TNFα抑制剂并通过干粉吸入器(DPI)给予受试者的可吸入粉末。
用于本发明的DPI装置可以是单剂量吸入器或多剂量吸入器。另外，用于本发明的DPI装置还可以是预定量的或者装置定量的。
定量吸入器(MDI)装置
在一个实施方案中，将TNFα抑制剂(包括TNFα抗体或其抗原结合部分)通过定量吸入器(MDI)装置递送到受试者。MDI装置使用抛射剂来将可再现的计量的药物剂量递送到肺，装置中装着药物或药剂、抛射剂(例如氢氟烷烃(HFA))、表面活性剂(例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酸、甘油三酯、甘油单酯、大豆卵磷脂、脂肪酸和烷基聚糖苷)以及溶剂。MDI装置往往是紧凑型加压分配器，包括罐、计量阀和隔片。MDI装置所给予的计量通常以mg计且体积在约25-100mL的范围内。另外，MDI装置能防篡改(tamper-proof)，因此是有利的。
不含CFC的MDI产品的实例包括
Figure GPA00001066684000253
HFA(Ivax)、
Figure GPA00001066684000254
(Boehringer-Ingelheim)、
Figure GPA00001066684000255
(3M)、
Figure GPA00001066684000256
(GSK)、
Figure GPA00001066684000257
(3M)、
Figure GPA00001066684000258
HFA(GSK)、
Figure GPA00001066684000259
HFA(3M/Sepracor)、SalamolCFC-Free(Ivax)、
Figure GPA000010666840002511
(Boehringer-Ingelheim)、
Figure GPA000010666840002512
(Boehringer-Ingelheim)、
Figure GPA000010666840002513
Forte(Rhone/Aventis)和
Figure GPA000010666840002514
(GSK)。
MDI装置的实例包括但不限于以下：
在一个实施方案中，本发明提供用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的MDI装置，其中所述MDI装置是
Figure GPA00001066684000261
(3M)(参见US6120752)。用来递送治疗剂的
Figure GPA00001066684000262
装置的实例包括
Figure GPA00001066684000263
(氟尼缩松)、
Figure GPA00001066684000264
(硫酸奥西那林)、
Figure GPA00001066684000265
(异丙托溴铵)、(硫酸沙丁胺醇/异丙托溴铵)、
Figure GPA00001066684000267
(醋酸吡布特罗)、
Figure GPA00001066684000269
(硫酸沙丁胺醇)、
Figure GPA000010666840002610
(二丙酸倍氯米松)和
Figure GPA000010666840002611
HFA(盐酸左旋沙丁胺醇)。
另一种可用于本发明方法和组合物MDI装置的包括MD TurboTM(Accentia Bio)，其为与MDI一起使用来改进患者协调和递送的呼吸致动辅助装置，其可将超过90％的分配定量吸入器转化成呼吸致动的剂量计数吸入器。它的特征包括：使MDI致动与患者的呼吸协调的i-Point技术(预定的呼吸压力激活)；追踪吸入器中的剩余剂量数的剂量计数机制；多功能性，因为它能接受多种目前批准的MDI产品；和容易使用——两步操作递送剂量。
在一个实施方案中，本发明提供用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的MDI装置，其中该MDI装置是
Figure GPA000010666840002612
(Activaero GmbH)，其为由机械阀/气球控制的用于MDI的连续吸入流装置。该装置能降低吸入流速以改进气溶胶在儿童中的投与。它的特征包括：通过机械阀控制的连续吸入流；气球对吸入体积的限制；高胸内沉积可再现剂量；纯机械驱动，无电子装置；和视觉控制吸入。
EZ
Figure GPA000010666840002613
也可用于本发明的方法和组合物。EZ
Figure GPA000010666840002614
(AirPharma)是设计来与大多数定量吸入器一起使用的便携式药物递送系统。EZ由于透明贮存袋在药物被吸入时会坍缩，因此具有治疗何时完成的视觉信号。它的特征包括：可坍缩——提供患者正在正确吸入和正在接受他们的药物的视觉提示；便携且紧凑——容易装入口袋中；耐用——被设计可维持至少1年；适合所有的定量吸入器；提供有面罩或不提供面罩。
在一个实施方案中，
Figure GPA00001066684000271
(Bang and Olufsen Medicom AS)用于本发明。
Figure GPA00001066684000272
是具有累计剂量计数装置和辅助点火机制的MDI，这使得它更容易为患者使用。它的特征还包括单剂量计数器。
在一个实施方案中，本发明包括Active DPI/MPI装置(Bespak)，其为采用多个碳纤维刷刚毛状电极将粉末和气溶胶分散成细粉/颗粒/雾滴的装置(参见WO9419042)。随着患者吸气，使1-10千伏通过电极，以分散粉末/气溶胶。采用由压电膜构成的呼吸传感器来引发放电，所述压电膜能响应通道中的空气压力变化发生弯曲，从而产生代表被感测的吸入的信号。与加压分配容器一起装配的计量阀，该阀门包括在界定计量室的的阀体内可同轴滑动的阀杆，在阀体和阀杆之间密封的内部密封件和外部密封件，和位于阀体上用于相对加压分配容器的颈部密封的垫圈，其中内部密封件、外部密封件或垫圈中的至少一者是与阀体的至少一部分共模制而形成。
在一个实施方案中，本发明提供用于将TNFα抑制剂肺部递送给受试者的MDI装置，其中该MDI装置是用于递送计量的气溶胶的装置，所述气溶胶包含在由氢氟烷烃(HFA)组成的抛射剂中的活性成分溶液(参见WO0149350；Chiesi)。
可用于本发明的MDI装置的其他实例包括：US 6,170,717(GlaxoSmithKline)中描述的MDI吸入器；
Figure GPA00001066684000273
MDI(Ivax；WO0193933，US5447150)；MDI呼吸协调吸入器和呼吸致动吸入器(Kos；CA2298448和WO2004082633；呼吸协调吸入器由模制塑料制成，设计用来接受标准的罐筒，和用于使用HFA抛射剂递送生物物质如胰岛素的装置)；TempoTM(MAP Pharma；US6095141、US6026808和US6367471；为采用标准的气溶胶MDI罐和计量阀的MDI，装在提供气溶胶流动控制室和同步激发机制的紧凑装置中)；XceloventTM(Meridica/Pfizer；WO9852634；为也具有计量计数器特征的呼吸操作装置)；和增加剂量MDI(Nektar WO2004041340；为能够使用HFA抛射剂递送2mg-5mg的配方药物的装置；该装置采用另外的压力源(加压器)来补偿致动过程中降低的汽压，这使得可以有效地将较大剂量气溶胶化)；WO03053501中描述的MDI(Vectura；为使得可以通过使用具有特定尺寸(0.30mm或更小)的激光钻孔孔口的致动器对HFA中的药物溶液制剂的输出特性进行优化的装置；致动器使得可以使用乙醇含量高和乙醇-活性成分比高的溶液制剂，因此可以使用在溶液制剂中溶解性差的活性成分，和使得可以使用基本上不含低挥发性成分的溶液制剂)。
因此，本发明还包括用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的定量吸入器(MDI)装置，该MDI装置包括装着包含TNFα抑制剂和抛射剂的气溶胶的加压罐，和用于将气溶胶通过吸入引入到受试者的机构。
喷雾器/液体吸入器
在一个实施方案中，用喷雾器或液体吸入器将TNFα抑制剂(TNFα抗体或其抗原结合部分)递送到受试者。通常，喷雾器使用压缩空气将药物作为湿气溶胶或雾滴递送，因此要求药物可溶于水。与MDI或DPI装置相比，喷雾器装置能递送相对较大的剂量，对于递送到深肺(外周肺区域)特别有效。喷雾器不需要抛射剂，喷雾器包括喷射式喷雾器(空气喷射式喷雾器和液体喷射式喷雾器)和超声波喷雾器。
喷雾器的实例包括AkitaTM(Activaero GmbH)(参见US2001037806、EP1258264)。AkitaTM是基于能提供对患者呼吸模式的完全控制的Pari′s LC Star的桌面喷雾器吸入系统(重量：7.5kg，外形尺寸(BxWxH)：260x 170x 270)。该装置能以非常高的递送速度在不到10分钟内向肺和肺外周递送高达500mg药物溶液。65％的喷雾颗粒小于5微米，1.8巴下的质量平均空气动力学直径(MMAD)为3.8微米。最小充填体积为2mL，最大体积为8mL。呼吸流速(200mL/秒)和喷雾器压力(0.3-1.8巴)由智能卡设定。该装置能在肺功能测试的基础上对每个患者进行个别调整。
可用于本发明方法和组合物的喷雾器的另一个实例包括
Figure GPA00001066684000291
Go/Pro/Lab喷雾器(AeroGen)。
Figure GPA00001066684000292
喷雾器是基于OnQTM技术，即由含有超过1000个精确成形的楔形洞的独特拱形孔板和围绕的振动元件构成的电子微型泵(直径为3/8英寸且极薄)。
Figure GPA00001066684000293
Go是家庭用便携式单元，而
Figure GPA00001066684000294
Pro是医院和流动诊疗所使用的可再使用和可高压灭菌的装置，
Figure GPA00001066684000295
Lab是用于临床前气溶胶研究和吸入研究的装置。该系统的特征包括：能优化和定制气溶胶液滴大小；以精确控制的液滴大小低速递送气溶胶，以帮助在呼吸系统中的定向药物递送；投药灵活；配合含有固定体积的药物溶液或悬浮液或者用于一般用途喷雾器的市售溶液的定制单剂量安瓿；持续、呼吸致动或可编程；和适应于各类患者的需要，包括儿童和老人；单个或多个患者使用。
AerocurrentTM(AerovertRx corp)也可用于本发明的方法和组合物(参见WO2006006963)。这种喷雾器是具有可弃式预充装或使用者充装的药物筒的便携式振动筛网喷雾器。
StaccatoTM(Alexza Pharma)也可用于本发明的方法和组合物(参见WO03095012)。StaccatoTM技术的关键在于使药物气化而又不发生热降解，这是通过快速加热一薄层的药物来实现。在不到半秒钟时间里，药物被加热到足以将固体药物膜转变成蒸气的温度。该吸入器由三个核心组件组成：加热基板、涂覆在基板上的一薄层药物和患者用以进行吸入的气道。该吸入器是呼吸致动的，最大递送剂量为20-25mg且MMAD在1-2微米范围内。
Figure GPA00001066684000296
(Aradigm)也可用于本发明的方法和组合物(参见WO9848873、US5469750、US5509404、US5522385、US5694919、US5735263、US5855564)。是一种手持式电池操作装置，其采用活塞机制来将制剂从Strip排出。该装置监测患者的呼吸气流，仅当达到最佳呼吸模式时才启动。该装置能将约60％的剂量作为喷射剂量递送，且50-70％的喷射剂量进入深肺，受试者间的差异小于25％。
也可用于本发明的方法和组合物的喷雾器装置的另一个实例包括
Figure GPA00001066684000301
(Boehringer)。
Figure GPA00001066684000302
是一种通过扭转装置基部来起动的多剂量贮存器系统，所述扭转使弹簧压缩而将计量体积的制剂从药物筒转移到投药室。当装置开动时，弹簧被释放，将微型活塞压入投药室中，推动溶液通过uniblock，该uniblock由具有两个细小出口喷嘴通道的过滤器结构组成。
Figure GPA00001066684000303
所产生的MMAD为2nm，该装置适合于传统用来治疗呼吸道疾病的低剂量药物。
TNFα抑制剂还可用Collegium NebulizerTM(Collegium Pharma)来递送，这是由药物沉积在膜上构成的喷雾器系统。剂型在用复溶溶剂复溶后用Collegium Nebulizer通过口腔或鼻腔吸入给予患者。
也可用于本发明方法和组合物的喷雾器装置的另一个实例包括626(Respironics)。该626是家庭护理用的基于压缩机的喷雾器。该626能递送0.5-5微米的粒径。
用于本发明的喷雾器可包括Adaptive Aerosol
Figure GPA00001066684000305
技术(Respironics)，它能给患者递送精确和可再现的吸入药物剂量，不管患者的年龄、体重或者呼吸模式差异如何。
Figure GPA00001066684000306
系统将电子装置和传感器并入手持件(handpiece)当中，通过检测吸气和呼气过程中的压力变化来监测患者的呼吸模式。传感器确定在第一部分吸气期间何时脉动药物的气溶胶递送。在整个治疗过程中，传感器监测前三次呼吸并适应患者的吸气和呼气模式。由于系统仅在患者通过口器呼吸时递送药物，这些装置使得患者可以在治疗中歇息而不浪费药物。
Figure GPA00001066684000308
系统喷雾器的实例包括和
Figure GPA000010666840003010
Figure GPA000010666840003011
Adaptive Aerosol Delivery
Figure GPA000010666840003012
(Respironics)是由便携式压缩机驱动的气动气溶胶化系统。
Figure GPA000010666840003013
技术监测患者的呼吸模式(通常每10毫秒)，并根据所用的系统而定，释放一阵阵的气溶胶化药物到吸入的特定部分，或者计算在吸入过程中从“静置气溶胶雾”抽吸的剂量(参见EP 0910421，通过引用并入本文)。
ProDos
Figure GPA00001066684000311
(Respironics)是由“ProDose DiscTM”系统(Respironics)控制的喷雾系统。ProDos
Figure GPA00001066684000312
是由便携式压缩机驱动的气动气溶胶系统，其中待递送的剂量由插入到该系统中的含微芯片的盘片控制，除了别的以外，所述盘片还对系统指示所要递送的剂量。ProDose DiscTM是含有微芯片的塑料盘片，插入到ProDose
Figure GPA00001066684000313
系统中，对该系统指示递送什么剂量、剂量的数目，这可与包括药物批号和有效期在内的各种控制数据一起发送(参见EP1245244，通过引用并入本文)。
Figure GPA00001066684000314
可通过Prodose
Figure GPA00001066684000315
递送，以控制绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)所致肺感染，特别是囊性纤维变性。
Figure GPA00001066684000316
作为喷雾用粉末供应，临用时复溶。
I-neb
Figure GPA00001066684000317
是手持式
Figure GPA00001066684000318
系统，能递送精确和可再现的药物剂量到患者的呼吸模式，而不需单独的压缩机(″I-Neb″)。I-neb
Figure GPA00001066684000319
是建立在基于电子筛网的气溶胶化技术(Omron)和控制向患者呼吸模式中的投药的
Figure GPA000010666840003110
技术的组合基础上的小型化吸入器。该系统大约为手提电话的大小，重量低于8盎司。I-neb
Figure GPA000010666840003112
已被用于递送(伊洛前列素)(CoTherix/Schering AG)。
可用于本发明方法和组合物的喷雾器的另一个实例是AriaTM(Chrysalis)。Aria是基于毛细管气溶胶产生系统。通过将药物制剂泵送经过小的电加热的毛细管形成气溶胶。制剂从毛细管出来时，被周围空气迅速冷却而产生MMAD在0.5-2.0um范围内的气溶胶。
另外，TouchSprayTM喷雾器(Odem)也可用来按照本发明递送TNF抑制剂。TouchSprayTM喷雾器是使用打孔膜的手持式装置，所述膜以超声波频率振动接触贮存器流体而产生气溶胶雾。振动动作将流体喷射流抽吸穿过膜上的洞，从而使喷射流破碎成药物雾。液滴的大小由洞的形状/大小以及药物溶液的表面化学和组成来控制。这个装置据报道能将83％的计量剂量递送到深肺。TouchSprayTM喷雾器的细节在美国专利号6659364中描述，该专利通过引用并入本文。
另外的可用于本发明的喷雾器包括这样的喷雾器，其为便携式单元，使用两个单向阀，当患者吸气时能使气溶胶输出最大化，当患者呼气时能使气溶胶输出最小化(参见PARI喷雾器(PARI GmbH)。挡板让最佳大小的颗粒离开喷雾器。结果是大部分的颗粒在可呼吸范围内，从而导致药物向肺的递送得到改进。这种喷雾器可设计用于特定的患者人群，如用于三岁以下的患者的喷雾器(PARI BABYTM)和用于老年患者的喷雾器(
Figure GPA00001066684000321
和
Figure GPA00001066684000322
)。
另外的可用于本发明的喷雾器是
Figure GPA00001066684000323
喷雾器(PARI GmbH)，其使用振动膜技术将药物溶液以及悬浮液或胶态分散液气溶胶化(TouchSprayTM；ODEM(英国))。
Figure GPA00001066684000324
喷雾器能够处理0.5ml-5ml的流体体积，且能产生具有极高密度的活性药物、精确限定的液滴大小和高比例的在尽可能短的时间中递送的可呼吸液滴。已用
Figure GPA00001066684000325
喷雾器递送的药物包括氨曲南和利多卡因。有关
Figure GPA00001066684000326
喷雾器的更多细节在US 6962151中描述，该专利通过引用并入本文。
另外的可用于本发明的喷雾器包括
Figure GPA00001066684000327
电子喷雾器(Omron)和MysticTM喷雾器(Ventaira)。
Figure GPA00001066684000328
喷雾器非常小，使用振动筛网技术来有效递送溶液药物。Microair装置具有7mL容量，能产生5微米左右的药物颗粒MMAD大小。有关
Figure GPA00001066684000329
喷雾器的更多细节参见美国专利申请号2004045547，该专利申请通过引用并入本文。MysticTM喷雾器使用强电场来将液体破碎成几乎单分散的带电颗粒的喷雾。MysticTM系统包括容纳单元、剂量计量系统、气溶胶产生喷嘴和电压转换器，它们共同提供多剂量或单位剂量递送选择。MysticTM装置是呼吸致动的，已被用于Corus 1030TM(盐酸利多卡因)、
Figure GPA000010666840003210
(盐酸多柔比星)、Acuair(丙酸氟替卡松)、NCE(ViroPharm)和NCE(Pfizer)。有关MysticTM喷雾器的更多细节可见于美国专利号6397838，该专利通过引用并入本文。
因此，在一个实施方案中，本发明提供与用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的喷雾器装置一起使用的容器，所述容器装有包含TNFα抑制剂的不含抛射剂可吸入溶液或悬浮液。
可按照设计来实现疗效的投药方案，将TNFα抑制剂通过吸入给予受试者。在一个实施方案中，可使用两星期一次的投药方案，采用本文所述的方法治疗其中TNFα活性是有害的疾病，这在美国申请号10/163657中进一步描述。也可使用多种可变剂量治疗方法来治疗其中TNFα活性是有害的疾病，这在PCT申请号PCT/US05/012007中进一步描述。
药物组合物
可将用于本发明方法的抗体、抗体部分或其他TNFα抑制剂掺入到适合于肺部给予受试者的药物组合物中。
根据吸入方式和治疗应用，用于本发明方法和组合物的组合物可以为多种形式。在一个实施方案中，本发明提供包含TNFα抗体和药物可接受载体的药物组合物，其中所述药物组合物适合受试者吸入。因此，TNFα抑制剂配制在适合吸入的药物组合物中。适合吸入的药物组合物的实例包括但不限于可吸入粉末或干粉组合物、含抛射剂的气溶胶和不含抛射剂的可吸入溶液或悬浮液。这种药物组合物可按照上述装置进行给予。例如，可通过干粉吸入器(DPI)将包含TNFα抑制剂的可吸入粉末给予受试者。在另一个实施例中，可通过定量吸入器(MDI)将包含TNFα抑制剂的含抛射剂的气溶胶给予受试者。在又一个实施例中，可通过喷雾器将包含TNFα抑制剂的不含抛射剂可吸入溶液给予受试者。其他合适的制品包括但不限于雾状物(mist)制品、蒸气(vapor)制品或喷雾(spray)制品，只要包含蛋白质组合物的颗粒在与对递送装置所述的大小范围相一致的大小范围内递送，例如干粉形式的药物组合物。
因此，旨在用于本发明方法的包含TNFα抗体或其抗原结合部分的液体药物组合物，可作为液体溶液或悬浮液在递送装置中使用，或者先用本领域公知的冷冻干燥或喷雾干燥技术加工成干粉形式。包含TNFα抑制剂(如TNFα抗体)的粉末也可用本领域公知的其他方法制备，包括结晶法或沉淀法(参见例如描述于US 5,525,519、US5,599,719、US 5,578,709、US 5,554,730、US 6,090,925、US 5,981,719、US 6,458,387的干粉微球体(PROMAXX；Baxter)，每个专利都通过引用并入本文)。
在递送装置中使用液体溶液或悬浮液的情况中，喷雾器、定量吸入器或其他合适的递送装置以单一剂量或多个分剂量通过肺部吸入将药物有效量的组合物，作为具有与以上对干粉形式所述相同的粒径范围的液滴给予受试者的肺。
在液体药物组合物先冷冻干燥再用于本发明的递送方法的情况中，可将冷冻干燥的组合物粉碎，以获得由在以上所述的期望大小范围内的颗粒组成的微细干粉。在使用喷雾干燥来获得干粉形式的液体药物组合物的情况中，在能导致产生由在以上所述的期望大小范围内的颗粒组成的基本上无定形微细干粉的条件下进行该过程。同样，如果原始药物组合物已经为冷冻干燥形式，可将组合物粉碎以获得干粉，供随后制备成适合肺部吸入的气溶胶或其他制剂。在原始药物组合物为喷雾干燥形式的情况中，组合物优选已进行了制备，使得它已经为具有适当粒径的干粉形式，供根据本发明的肺部给药方法作为含水或非水溶液或悬浮液或干粉形式进行分配。有关制备干粉形式的药物组合物的方法，参见例如WO 96/32149、WO 97/41833、WO98/29096以及美国专利号5,976,574、5,985,248和6,001,336；这些专利通过引用并入本文。
然后将所得的干粉形式的组合物装入适当的递送装置中，供随后制备成通过肺部吸入递送到受试者的气溶胶或其他合适制剂。在干粉形式的药物组合物要制备成含水或非水溶液或悬浮液并进行分配的情况中，使用定量吸入器或其他适当的递送装置。将药物有效量的干粉形式的组合物以适合肺部吸入的气溶胶或其他制剂进行给予。装入递送装置中的干粉形式的组合物的量，足以使得可以将药物有效量的组合物通过吸入递送到受试者。因此，装入递送装置中的干粉形式的量，要补偿装置在保存和递送干粉形式的组合物过程中可能的损失。将干粉形式装入递送装置中之后，如上所述的正确大小的颗粒悬浮在气溶胶抛射剂中。加压的非水悬浮液在受试者进行吸入时，就从递送装置释放到受试者的气道中。递送装置以单一剂量或多个分剂量通过肺部吸入将药物有效量的组合物递送到受试者的肺。气溶胶抛射剂可以是用于此目的的任何常规物质，如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1，1，1，2-四氟乙烷或者它们的组合。可将表面活性剂添加到药物组合物中，以降低含蛋白质的干粉对从中分配气溶胶的递送装置的壁的粘附。用于此预定用途的合适表面活性剂包括但不限于失水山梨醇三油酸酯、大豆卵磷脂和油酸。适合于将干粉形式的蛋白质组合物作为非水悬浮液进行肺部递送的装置是可市售获得的。这种装置的实例包括Ventolin定量吸入器(Glaxo Inc.，Research Triangle Park，N.C.)和Intal吸入器(Fisons，Corp.，Bedford，Mass.)。另参见美国专利号5,522,378、5,775,320、5,934,272和5,960,792中描述的递送装置，这些专利通过引用并入本文。
在固体或干粉形式的药物组合物要以干粉形式进行递送的情况中，优选使用干粉吸入器或其他适当的递送装置。优选通过以常规方式将干粉形式的药物组合物分散在流动空气或其他生理上可接受气流中，将其制备成干粉气溶胶。适合于按照本文所述的方法使用的干粉吸入器的实例在上文已有描述。
可将包含TNFα抑制剂的干粉形式的药物组合物复溶成含水溶液，以供随后使用喷雾器、定量吸入器或其他合适的递送装置作为含水溶液气溶胶进行递送。在喷雾器的情况中，存放在流体贮存器当中的含水溶液被转变成含水喷雾，在任何特定时间只有其中一小部分离开喷雾器而递送到受试者。剩余的喷雾流回到喷雾器中的流体贮存器，重新被气溶胶化成含水喷雾。这个过程重复到流体贮存器完全分配完为止，或者到气溶胶化喷雾的给予结束为止。喷雾器的实例在上文描述。
当将包含TNFα抑制剂的药物组合物加工成固体或干粉形式以供随后作为气溶胶进行递送时，理想的是有载体材料存在以充当增量剂或稳定剂。这样，本发明公开了包含TNFα抑制剂的稳定化的冷冻干燥或喷雾干燥药物组合物，供用于本发明方法。这些组合物还可包含至少一种增量剂、至少一种其量足以使蛋白质在干燥过程中稳定化的物质，或者两者。所谓“稳定化(的)”是指在进行冷冻干燥或喷雾干燥以获得固体或干粉形式的组合物后，TNFα抑制剂能保持它的单聚或多聚形式以及它的质量、纯度和效价方面的其他关键性质。
用作增量剂的优选载体材料包括甘氨酸、甘露糖醇、丙氨酸、缬氨酸或它们的任何组合，最优选甘氨酸。取决于所用的药剂，增量剂在制剂中的存在量在0％至约10％(w/v)的范围。当增量剂是甘氨酸时，它的存在量在约0％至约4％的范围，优选约0.25％至约3.5％，更优选约0.5％-3.0％，甚至更优选约1.0％至约2.5％，最优选约2.0％。当增量剂是甘露糖醇时，它的存在量在约0％至约5.0％的范围，优选约1.0％至约4.5％，更优选约2.0％至约4.0％，最优选约4.0％。当增量剂是丙氨酸或缬氨酸时，它的存在量在约0％至约5.0％的范围，优选约1.0％至约4.0％，更优选约1.5％至约3.0％，最优选约2.0％。
优选用作稳定剂的载体材料包括任何糖或糖醇或任何氨基酸。优选的糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水苏糖、山梨糖醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖或者它们的任何组合，优选蔗糖。当稳定剂是糖时，它的存在量在约0％至约9.0％(w/v)的范围，优选约0.5％至约5.0％，更优选约1.0％至约3.0％，最优选约1.0％。当稳定剂是氨基酸时，它的存在量在约0％至约1.0％(w/v)的范围，优选约0.3％至约0.7％，最优选约0.5％。
这些稳定化的冷冻干燥或喷雾干燥组合物可任选包含甲硫氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐之一(如EDTA二钠)或者其他的螯合剂，它们能保护TNFα抑制剂以免发生甲硫氨酸氧化。甲硫氨酸在稳定化的冷冻干燥或喷雾干燥药物组合物中的存在浓度为约0至约10.0mM，优选约1.0至约9.0mM，更优选约2.0至约8.0mM，甚至更优选约3.0至约7.0mM，还更优选约4.0至约6.0mM，最优选约5.0mM。EDTA的存在浓度为约0至约10.0mM，优选约0.2mM至约8.0mM，更优选约0.5mM至约6.0mM，甚至更优选约0.7mM至约4.0mM，还更优选约0.8mM至约3.0mM，甚至更优选约0.9mM至约2.0mM，最优选约1.0mM。
稳定化的冷冻干燥或喷雾干燥组合物可用缓冲剂进行配制，缓冲剂能使药物组合物当在液相中时其pH维持在可接受的范围内，所述在液相中时例如是在配制过程中或者在干燥形式的组合物复溶之后。优选地，pH在约pH 4.0至约pH 8.5的范围，更优选约pH 4.5至约pH 7.5，甚至更优选约pH 5.0至约pH 6.5，还更优选约pH 5.6至约pH 6.3，最优选约pH 5.7至约pH 6.2。合适的pH包括约4.0、约4.5、约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6.0、约6.1、约6.2、约6.3、约6.4、约6.5、约6.6、约6.7、约6.8、约6.9、约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4、约7.5，最高至约8.5。最优选地，pH为约5.8。
合适的缓冲剂包括但不限于柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂，更具体地为柠檬酸钠/柠檬酸。或者，可以使用能将pH维持在约pH 4.0至约8.5的范围内的咪唑或组氨酸或其他碱/酸。对缓冲剂加以选择，使得它们与干燥过程相容，在加工过程中和保存时不会影响蛋白质的质量、纯度、效价和稳定性。
任何设想用于本发明方法的包含TNFα抑制剂的药物组合物都可与至少一种表面活性剂进行配制，所述表面活性剂的量足以增强包含TNFα抑制剂的吸入颗粒的吸收，以获得用于按照本文所述的方法进行肺部吸入的可吸收组合物。
任何能增强包含TNFα抑制剂的药物组合物以本文公开的方式进行吸收的表面活性剂，都可用来获得这些可吸收的含蛋白质药物组合物。适合用于增强吸入的TNFα抑制剂的吸收的表面活性剂包括但不限于：聚氧乙烯山梨糖醇酯，如聚山梨醇酯80(Tween 80)和聚山梨醇酯20(Tween 20)；聚氧丙烯-聚氧乙烯酯，如泊洛沙姆(Poloxamer)188；聚氧乙烯醇，如Brij35；聚山梨醇酯表面活性剂与磷脂如磷脂酰胆碱及衍生物(二棕榈酰衍生物、二油酰衍生物、二豆蔻酰衍生物或者混合衍生物，如1-棕榈酰，2-油酰等等)、二豆蔻酸甘油酯及磷脂甘油系列的其他成员的混合物；溶血磷脂酰胆碱及其衍生物；聚山梨醇酯与溶血卵磷脂或胆固醇的混合物；聚山梨醇酯表面活性剂与脱水山梨糖醇表面活性剂(如脱水山梨糖醇单油酸酯、二油酸酯、三油酸酯或者这个类别的其他酯)的混合物；泊洛沙姆表面活性剂；胆汁盐和它们的衍生物，如胆酸钠、脱氧胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠等；TNFα抑制剂与胆酸盐和磷脂的混合胶束；Brij表面活性剂(如Brij35-PEG923)月桂醇等)。表面活性剂的添加量在约0.005％至约1.0％(w/v)的范围，优选约0.005％至约0.5％，更优选约0.01％至约0.4％，甚至更优选约0.03％至约0.3％，最优选约0.05％至约0.2％。
本发明的药物组合物可包括根据所要治疗的疾病的合适剂量。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含约40mg TNFα抗体或其抗原结合部分的这么一个剂量。或者，本发明的药物组合物包含约40-160mg TNFα抗体或其抗原结合部分的这么一个剂量。在另一个实施方案中，药物组合物包含超过160mg的剂量。
要指出的是，剂量数值可随所要减轻的病症的类型和严重程度而异。还要理解，对于任何特定的受试者，应根据个体需要和给予组合物或监管组合物的给予的人员的专业判断，随时间推移调整具体的剂量方案，而且本文给出的剂量范围仅仅是示例性的，并不意在限制要求权利保护的组合物的范围或实施。
治疗组合物通常必须在制造和储存条件下是无菌和稳定的。组合物可配制成溶液剂、微乳剂、分散体、脂质体或者其他适合高药物浓度的有序结构。可通过将活性化合物(即抗体、抗体部分或其他TNFα抑制剂)以需要的量与以上列举成分中的一种或几种成分的组合一起掺入在适当的溶剂中，然后进行过滤灭菌，来制备无菌可吸入溶液剂。通常，通过将活性化合物掺入到含有基本的分散介质和选自以上所列举成分的所需其他成分的无菌载体中来制备分散体。可通过使用包衣如卵磷脂，在分散体的情形中通过维持所需的粒径，和通过使用表面活性剂，来维持溶液剂的适当流动性。可通过在组合物中包括能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸盐和明胶，来造成可吸入组合物的延长吸收。
在一个实施方案中，如PCT/IB03/04502和美国专利申请号20040033228(这两个专利申请通过引用并入本文)中所述，将用于本发明方法的抗体或抗体部分掺入到药物制剂中。这个制剂包括50mg/ml抗体D2E7(阿达木单抗)的这么一个浓度。
还可将辅助的活性化合物掺入到组合物中供肺部递送。在某些实施方案中，用于本发明方法的抗体或抗体部分与一种或多种另外的治疗剂共配制和/或共给予。例如，可将本发明的抗hTNFα抗体或抗体部分，与一种或多种能结合与TNFα相关疾病有关的其他靶标的另外抗体例如能结合其他细胞因子或能结合细胞表面分子的抗体、一种或多种细胞因子、可溶性TNFα受体(参见例如PCT公开号WO 94/06476)和/或一种或多种能抑制hTNFα的产生或活性的化学物质(如PCT公开号WO 93/19751中所描述的亚环已烷基(cyclohexane-ylidene))或者它们的任何组合进行共配制和/或共给予。此外，可将本发明的一种或多种抗体与前述治疗剂中的两种或更多种进行组合使用。这种组合疗法可有利地采用较低剂量的所给予治疗剂，从而避免可能的副作用、并发症或者患者使用各种单一疗法时的低水平响应。
本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明抗体或抗体部分。“治疗有效量”指在必要的剂量下和经过必要的时间，能有效达到期望的治疗结果的量。抗体、抗体部分或其他TNFα抑制剂的治疗有效量可根据各种因素而变，如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及抗体、抗体部分或其他TNFα抑制剂在个体中引发期望的响应的能力。治疗有效量也是抗体、抗体部分或其他TNFα抑制剂的治疗有益效果超过其任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”指在必要的剂量下和经过必要的时间，能有效达到期望的预防结果的量。通常，由于预防剂量是在疾病之前或疾病前期在受试者中使用，因此预防有效量会低于治疗有效量。
本发明还涉及供肺部给予TNF抑制剂(例如抗体)的包装药物组合物或药盒。在本发明的一个实施方案，药盒包含TNFα抑制剂(如抗体)以及指导TNFα抑制剂的肺部给药的说明书，其中所述TNFα抑制剂处于适合吸入的制剂中。说明书可描述何时(例如在第0星期、第2星期、第4星期等)应将不同剂量的TNFα抑制剂通过吸入给予受试者以进行治疗。
本发明的另一个方面涉及装有包含TNFα抑制剂(如抗体)和药物可接受载体的药物组合物，以及装有一种或多种各自包含另外治疗剂和药物可接受载体的药物组合物的药盒。
或者，所述包装或药盒可含有TNFα抑制剂，而可在包装中或者通过伴随的信息促进TNFα抑制剂的使用，以治疗本文所述的疾病。包装药物或药盒还可包括第二药剂(如本文所述)，其与指导第二药剂与第一药剂(如本文所述)的使用的说明书一起包装或一起促销。
III.TNF抑制剂
用于本发明方法和组合物的TNFα抑制剂包括任何干扰TNFα活性的药剂。在一个优选的实施方案中，TNFα抑制剂能中和TNFα活性，特别是与节段性回肠炎、RA、PsA、JRA、AS和牛皮癣以及相关并发症和症状有关的有害TNFα活性。
在一个实施方案中，用于本发明的TNFα抑制剂是TNFα抗体(本文也称抗TNFα抗体)或其抗原结合片断，包括嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。可用于本发明的TNFα抗体的实例包括但不限于英夫利昔单抗(
Figure GPA00001066684000411
Johnson and Johnson；描述于美国专利号5,656,272，该专利通过引用并入本文)、CDP571(人源化的单克隆抗TNF-αIgG4抗体)、CDP 870(人源化的单克隆抗TNF-α抗体片断)、抗TNF dAb(Peptech)、CNTO 148(戈利木单抗；Medarex andCentocor，参见WO 02/12502)和阿达木单抗(
Figure GPA00001066684000412
AbbottLaboratories，人抗TNF单克隆抗体，在US 6,090,382中描述为D2E7)。另外的可用于本发明的TNF抗体在美国专利号6,593,458、6,498,237、6,451,983和6,448,380中有描述，每个专利通过引用并入本文。
可用于本发明方法和组合物的TNFα抑制剂的其他实例包括依那西普(
Figure GPA00001066684000413
描述于WO 91/03553和WO 09/406476)、可溶性TNF受体I型、PEG化可溶性TNF受体I型(PEGs TNF-R1)、p55TNFR1gG(Lenercept)和重组TNF结合蛋白(r-TBP-I)(Serono)。
在一个实施方案中，术语“TNFα抑制剂”排除英夫利昔单抗。在一个实施方案中，术语“TNFα抑制剂”排除阿达木单抗。在另一个实施方案中，术语“TNFα抑制剂”排除阿达木单抗和英夫利昔单抗。
在一个实施方案中，术语“TNFα抑制剂”排除依那西普和任选排除阿达木单抗、英夫利昔单抗以及阿达木单抗和英夫利昔单抗。
在一个实施方案中，术语“TNFα抗体”排除英夫利昔单抗。在一个实施方案中，术语“TNFα抗体”排除阿达木单抗。在另一个实施方案中，术语“TNFα抗体”排除阿达木单抗和英夫利昔单抗。
在一个实施方案中，本发明涉及以高亲和力和低解离速率结合人TNFα且具有高的中和容量的分离人抗体或其抗原结合部分。优选地，用于本发明的人抗体是重组中和性人抗hTNFα抗体。本发明最优选的重组中和性抗体在本文中称为D2E7，也称
Figure GPA00001066684000414
或阿达木单抗(D2E7VL区的氨基酸序列在SEQ ID NO：1中显示，D2E7VH区的氨基酸序列在SEQ ID NO：2中显示)。D2E7(阿达木单抗/
Figure GPA00001066684000415
)的性质已描述于Salfeld等人的美国专利号6,090,382、6,258,562和6,509,015中，这些专利通过引用并入本文。本发明的方法还可用嵌合的和人源化的鼠抗hTNFα抗体来执行，所述鼠抗hTNFα抗体已进行了治疗类风湿性关节炎方面的临床试验(参见例如Elliott，M.J.等人(1994)Lancet 344：1125-1127；Elliot，M.J.等人(1994)Lancet 344：1105-1110；Rankin，E.C.等人(1995)Br.J.Rheumatol.34：334-342)。
在一个实施方案中，本发明方法包括肺部给予D2E7抗体和抗体部分、D2E7相关抗体和抗体部分、或者具有与D2E7相当的性质的其他人抗体和抗体部分，所述性质例如以低的解离动力学和高的中和容量对hTNFα的高亲和力结合。在一个实施方案中，本发明提供用这样的分离人抗体或其抗原结合部分进行治疗，所述分离人抗体或其抗原结合部分以1x10-8M或更低的Kd和1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，这两个参数都是通过表面等离振子共振进行测定，并在标准的体外L929测定中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。更优选地，分离人抗体或其抗原结合部分以5x10-4s-1或更低的Koff从人TNFα解离，或者甚至更优选地以1x10-4s-1或更低的Koff从人TNFα解离。更优选地，分离人抗体或其抗原结合部分在标准的体外L929测定中以1x10-8M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性，甚至更优选地以1x10-9M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性，还更优选地以1x10-10M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。在一个优选的实施方案中，抗体是分离人重组抗体或其抗原结合部分。
本领域公知，抗体重链和轻链CDR3结构域在抗体对抗原的结合特异性/亲和力方面起到重要作用。因此，在另一方面，本发明涉及肺部给予这样的人抗体，其对于与hTNFα的缔合具有缓慢的解离动力学，且具有在结构上与D2E7相同或相关的轻链和重链CDR3结构域。D2E7VL CDR3的位置9可被Ala或Thr占据而基本上不影响Koff。因此，D2E7VL CDR3的共有基序包含以下氨基酸序列：Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A)(SEQ ID NO：3)。另外，D2E7VH CDR3的位置12可被Tyr或Asn占据而基本上不影响Koff。因此，D2E7VHCDR3的共有基序包含以下氨基酸序列：V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N)(SEQ ID NO：4)。此外，如美国专利号6,090,382的实施例2所证明，D2E7重链和轻链的CDR3结构域可用单丙氨酸残基置换(在VL CDR3当中的位置1、4、5、7或8处，或者在VH CDR3当中的位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处)处理而基本上不影响Koff。还另外，技术人员会认识到，鉴于D2E7VL和VH CDR3结构域可用丙氨酸置换进行处理，在CDR3结构域当中还可能进行其他氨基酸置换并同时仍保持抗体的低解离速率常数，特别是用保守氨基酸进行的置换。优选地，在D2E7VL和/或VH CDR3结构域当中作出不超过1-5个保守氨基酸置换。更优选地，在D2E7VL和/或VH CDR3结构域当中作出不超过1-3个保守氨基酸置换。另外，保守氨基酸置换不应在对于与hTNFα的结合关键的氨基酸位置处作出。D2E7VL CDR3的位置2和5以及D2E7VH CDR3的位置1和7似乎对于与hTNFα的相互作用是关键的，因此保守氨基酸置换优选不在这些位置作出(不过如上所述，在D2E7VL CDR3的位置5处进行丙氨酸置换是可接受的)(参见美国专利号6,090,382)。
因此，在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分优选具有以下特性：
a)以1x10-3s-1或更低的Koff速率常数(通过表面等离振子共振进行测定)从人TNFα解离；
b)具有这样的轻链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成；
c)具有这样的重链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成。
更优选地，抗体或其抗原结合部分以5x10-4s-1或更低的Koff从人TNFα解离。甚至更优选地，抗体或其抗原结合部分以1x10-4s-1或更低的Koff从人TNFα解离。
在又一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分优选含有具有这样的CDR3结构域的轻链可变区(LCVR)，所述CDR3结构域包含SEQID NO：3的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换修饰而成；和含有具有这样的CDR3结构域的重链可变区(HCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换修饰而成。优选地，LCVR还具有包含SEQ IDNO：5的氨基酸序列的CDR2结构域(即D2E7VL CDR2)，HCVR还具有包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR2结构域(即D2E7VHCDR2)。甚至更优选地，LCVR还具有包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR1结构域(即D2E7VL CDR1)，HCVR还具有包含SEQ IDNO：8的氨基酸序列的CDR1结构域(即D2E7VH CDR1)。VL的构架区优选来自VκI人种系家族，更优选来自A20人种系Vk基因，最优选来自美国专利号6,090,382的图1A和1B中所述的D2E7VL构架序列。VH的构架区优选来自VH3人种系家族，更优选来自DP-31人种系VH基因，最优选来自美国专利号6,090,382的图2A和2B中所述的D2E7VH构架序列。
因此，在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分优选含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)(即D2E7VL)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)(即D2E7VH)。在某些实施方案中，抗体包含重链恒定区，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。优选地，重链恒定区是IgG1重链恒定区或IgG4重链恒定区。此外，抗体可包含轻链恒定区，其可为κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。优选地，抗体包含κ轻链恒定区。或者，抗体部分可以是例如Fab片断或单链Fv片断。
在另外其他的实施方案中，本发明包括含有D2E7相关VL和VHCDR3结构域的分离人抗体或其抗原结合部分的用途。例如，具有轻链可变区(LCVR)或重链可变区(HCVR)的抗体或其抗原结合部分，所述轻链可变区(LCVR)具有包含选自以下的氨基酸序列的CDR3结构域：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26，所述重链可变区(HCVR)具有包含选自以下的氨基酸序列的CDR3结构域：SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：35。
用于本发明方法和组合物的TNFα抗体可用来进行肺部给药。在一些实施方案中，将TNFα抗体或其抗原结合片断进行化学修饰以提供期望的效果。例如，可通过任何本领域公知的PEG化反应进行本发明抗体和抗体片断的PEG化，所述PEG化反应例如描述于以下参考文献和专利(各自通过引用并入本文)：Focus on Growth Factors3：4-10(1992)；EP 0 154 316；和EP 0 401 384。优选地，PEG化是通过与反应性聚乙二醇分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰基化反应或烷基化反应进行。优选用于本发明抗体和抗体片断的PEG化的水溶性聚合物是聚乙二醇(PEG)。本文所用的“聚乙二醇”意在涵盖任何形式的已被用来对其他蛋白质进行衍生化的PEG，如单(Cl-ClO)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇。
制备本发明的PEG化抗体和抗体片断的方法通常会包括以下步骤：(a)使抗体或抗体片断与聚乙二醇(如PEG的活性酯或醛衍生物)在能使抗体或抗体片断连接到一个或多个PEG基团的条件下进行反应，和(b)获得反应产物。要根据已知的参数和期望的结果选择最佳的反应条件或酰基化反应，这对本领域普通技术人员会是显而易见的。
PEG化的抗体和抗体片断通常可用于肺部给药。通常，与非PEG化的抗体和抗体片断相比，PEG化的抗体和抗体片断的半寿期延长。PEG化的抗体和抗体片断可各自单独应用，一起应用，或者与其他药物组合物组合应用。
在本发明的又一个实施方案中，TNFα抗体或其片断可加以改变，其中抗体的恒定区进行修饰，以相对于未修饰的抗体而言降低至少一种恒定区介导的生物效应子功能。为修饰本发明的抗体以使它显示出对Fc受体的结合降低，可将抗体的免疫球蛋白恒定区区段在其中为Fc受体(FcR)相互作用所必需的特定区域处进行突变(参见例如Canfield，S.M.和S.L.Morrison(1991)J.Exp.Med.173：1483-1491；和Lund，J.等人(1991)J.of Immunol.147：2657-2662)。抗体的FcR结合能力的降低还可降低依赖于FcR相互作用的其他效应子功能，如调理作用和吞噬作用和抗原依赖性细胞毒性。例如，可对用于本发明供进行肺部给药的TNFα抗体或其抗原结合部分的恒定区进行修饰，使得抗体对在肺泡巨噬细胞上表达的吞噬受体的结合降低。
在另一个实施例中，可将用于本发明供进行肺部给药的TNFα抗体或其抗原结合部分，与能结合FcR但不结合FcRn的药剂组合给予。这种组合疗法将依靠使FcR途径饱和而提高TNFα抗体或其抗原结合部分的生物利用度。
在又一个实施方案中，本发明包括肺部给予与新生Fc受体(FcRN)的结合得到增强的经修饰TNFα抗体或其抗原结合部分。为提高与新生FcRn的结合所作的修饰，可包括将TNFα抗体缀合到能提高TNFα抗体从受试者的肺上皮到受试者的血流的转运的化合物。另外的修饰还可包括使TNFα抗体或其抗原结合部分突变，其中TNFα抗体包含在Fc结构域当中的能提高TNFα抗体与FcRn的结合亲和力的突变和/或缺失。抗体当中可进行修饰的位置的实例包括但不限于Fc结构域当中在选自238、256、307、311、312、380和382的氨基酸位置处的至少一个突变(Shields等人(2001)J Biol Chem 276：6591)。
可将用于本发明方法的抗体或抗体部分衍生化或连接到另一功能分子(例如另一肽或蛋白质)。因此，本发明的抗体和抗体部分意在包括本文所述的人抗hTNFα抗体的衍生化形式和其他修饰形式，包括免疫黏附分子。例如，可将本发明的抗体或抗体部分功能性连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或别的方式)到一个或多个其他的分子实体，如另一抗体(例如双特异性抗体或双抗体)、可检测物质、细胞毒性剂、药剂和/或能介导抗体或抗体部分与另一分子(如链霉亲和素核心区或聚组氨酸标签)的缔合的蛋白质或肽。
一种类型的衍生化抗体是通过将两个或更多个抗体(同类型或不同类型，例如以产生双特异性抗体)进行交联来产生。合适的交联剂包括具有两个被适当间隔基隔开的独特反应性基团的异型双功能交联剂(例如m-马来酰亚胺基苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)，或者同型双功能交联剂(例如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)。这种交联剂可获自Pierce Chemical Company，Rockford，IL。
可据以将本发明的抗体或抗体部分衍生化的有用的可检测物质包括荧光化合物。示例性的荧光可检测物质包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体还可用可检测酶如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、葡糖氧化酶等来衍生化。当抗体用可检测酶衍生化时，它是通过加入酶能用来产生可检测的反应产物的另外试剂来进行检测。例如，当存在可检测物质辣根过氧化物酶时，过氧化氢和二氨基联苯胺的加入导致产生可检测的有色反应产物。抗体还可用生物素衍生化，通过间接测量亲和素或链霉亲和素结合情况进行检测。
用于本发明方法和组合物的抗体或抗体部分，可通过在宿主细胞中重组表达免疫球蛋白轻链基因和重链基因来制备。为重组表达抗体，用一个或多个携带编码抗体的免疫球蛋白轻链和重链的DNA片断的重组表达载体转染宿主细胞，使得轻链和重链在宿主细胞中被表达并优选分泌到培养宿主细胞的培养基中，从所述培养基可回收抗体。使用标准的重组DNA方法来获得抗体重链基因和轻链基因，将这些基因整合到重组表达载体中并将载体导入到宿主细胞中，所述方法如描述于以下文献和专利中：Sambrook，Fritsch和Maniatis(编辑)，Molecular Cloning；A Laboratory Manual，Second Edition，Cold SpringHarbor，N.Y.，(1989)，Ausubel，F.M.等人(编辑)Current Protocols inMolecular Biology，Greene Publishing Associates，(1989)以及Boss等人的美国专利号4,816,397。
为表达阿达木单抗(D2E7)或阿达木单抗(D2E7)相关抗体，首先获得编码轻链和重链可变区的DNA片断。这些DNA可通过用聚合酶链反应(PCR)扩增和修饰种系轻链和重链可变序列来获得。人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列是本领域公知的(参见例如“Vbase”人种系序列数据库；另参见Kabat，E.A.等人(1991)Sequences ofProteins of Immunological Interest，Fifth Edition(有免疫学意义的蛋白质的序列(第五版))，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Publication No.91-3242；Tomlinson，I.M.等人(1992)″TheRepertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about FiftyGroups of VH Segments with Different Hypervariable Loops(人种系VH序列库揭示大约50组具有不同超可变环的VH区段)″J.Mol.Biol.227：776-798；和Cox，J.P.L.等人(1994)″A Directory of HumanGerm-line V78 Segments Reveals a Strong Bias in their Usage(人种系V78区段的目录揭示它们的用法的强烈偏好)″Eur.J.Immunol.24：827-836；每个文献的内容通过引用明确并入本文)。为获得编码D2E7或D2E7相关抗体的重链可变区的DNA片断，通过标准的PCR扩增人种系VH基因的VH3家族的成员。最优选地，扩增DP-31VH种系序列。为获得编码D2E7或D2E7相关抗体的轻链可变区的DNA片断，通过标准的PCR扩增人种系VL基因的VκI家族的成员。最优选地，扩增A20VL种系序列。可使用标准的方法，根据以上引述的参考文献中公开的核苷酸序列，设计适用于扩增DP-31种系VH序列和A20种系VL序列的PCR引物。
一旦获得种系VH片断和VL片断，可将这些序列突变以编码本文公开的D2E7或D2E7相关氨基酸序列。首先将种系VH和VL DNA序列所编码的氨基酸序列与D2E7或D2E7相关VH和VL氨基酸序列进行比较，以鉴定D2E7或D2E7相关序列中与种系不同的氨基酸残基。然后，使用遗传密码来确定应作出哪些核苷酸变化，将种系DNA序列的适当核苷酸进行突变，使得突变的种系序列编码D2E7或D2E7相关氨基酸序列。种系序列的诱变是通过标准的方法进行，如PCR介导诱变(其中经诱变的核苷酸掺入到PCR引物中，使得PCR产物含有突变)或者定点诱变。
此外，应指出的是，如果通过PCR扩增所获得的“种系”序列在构架区中编码不同于真实种系构造的氨基酸差异(即扩增的序列中与真实种系序列相比较的差异，例如由于体细胞突变所致)，可能需要将这些氨基酸差异改回到真实种系序列(即构架残基“回复突变”到种系构造)。
一旦获得编码D2E7或D2E7相关VH区段和VL区段的DNA片断(如上所述，通过种系VH基因和VL基因的扩增和诱变)，可通过标准的重组DNA技术进一步操纵这些DNA片断，例如以将可变区基因转变成全长抗体链基因、转变成Fab片断基因或者转变成scFv基因。在这些操纵中，将编码VL或VH的DNA片断可操作地连接到编码另一蛋白质(如抗体恒定区或柔性接头)的另一DNA片断。在这个情形中所用的术语“可操作地连接”意指将两个DNA片断连接，使得这两个DNA片断所编码的氨基酸序列保持符合读框。
可通过将编码VH的DNA可操作地连接到编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子，将编码VH区的分离DNA转变成全长重链。人重链恒定区基因的序列是本领域公知的(参见例如Kabat，E.A.等人(1991)Sequence of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition(有免疫学意义的蛋白质的序列(第五版))，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Publication No.91-3242)，涵盖这些区域的DNA片断可通过标准的PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但最优选IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片断重链基因，可将编码VH的DNA可操作地连接到仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。
可通过将编码VL区的DNA可操作地连接到编码轻链恒定区CL的另一DNA分子，将编码VL区的分离DNA转变成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域公知的(参见例如Kabat，E.A.等人(1991)Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest，Fifth Edition(有免疫学意义的蛋白质的序列(第五版))，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Publication No.91-3242)，涵盖这些区域的DNA片断可通过标准的PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但最优选是κ恒定区。
为产生scFv基因，可将编码VH和VL的DNA片断可操作地连接到编码柔性接头(例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3)的另一片断，使得VH序列和VL序列可表达成连续单链蛋白质，其中VL区和VH区由柔性接头连接(参见例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；McCafferty等人，Nature(1990)348：552-554)。
为表达用于本发明的抗体或抗体部分，将如上所述获得的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入到表达载体中，使得基因被可操作地连接到转录和翻译控制序列。在这个情形中，术语“可操作地连接”意指抗体基因被连接到载体，使得载体中的转录和翻译控制序列发挥它们调节抗体基因的转录和翻译的预定功能。表达载体和表达控制序列选择成与所用的表达宿主细胞相容。可将抗体轻链基因和抗体重链基因插入到单独的载体中，或者更通常是将两个基因插入到同一表达载体中。抗体基因是通过标准的方法插入到表达载体中(例如抗体基因片断上的互补限制位点和载体的连接，或者如果不存在限制位点的话就是平端连接)。在插入D2E7或D2E7相关轻链或重链序列之前，表达载体可能已经携带抗体恒定区序列。例如，一种将D2E7或D2E7相关VH序列和VL序列转变成全长抗体基因的方法，是将它们分别插入到已经编码重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得VH区段可操作地连接到载体当中的CH区段，VL区段可操作地连接到载体当中的CL区段。另外地或作为另一种选择，重组表达载体可编码促进抗体链从宿主细胞的分泌的信号肽。可将抗体链基因克隆到载体中，使得信号肽符合读框地连接到抗体链基因的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或者异源信号肽(即来自不是免疫球蛋白的蛋白质的信号肽)。
除了抗体链基因之外，本发明的重组表达载体还携带控制抗体链基因在宿主细胞中的表达的调节序列。术语“调节序列”意在包括启动子、增强子和其他控制抗体链基因的转录或翻译的表达控制元件(例如聚腺苷酸化信号)。这种调节序列描述于例如Goeddel；GeneExpression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)。本领域技术人员会认识到，表达载体的设计，包括调节序列的选择在内，可取决于诸如所要转化的宿主细胞的挑选、所需蛋白质的表达水平等的因素。用于哺乳动物宿主细胞表达的优选调节序列包括指导哺乳动物细胞中的高水平蛋白质表达的病毒元件，如衍自以下病毒的启动子和/或增强子：巨细胞病毒(CMV)(如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒。有关病毒调节元件及其序列的更多描述，参见例如Stinski的美国专利号5,168,062、Bell等人的美国专利号4,510,245和Schaffner等人的美国专利号4,968,615。
除了抗体链基因和调节序列之外，用于本发明的重组表达载体还可携带另外的序列，如调节载体在宿主细胞中的复制的序列(例如复制起点)和可选择标记基因。可选择标记基因能便于对其中已引入了载体的宿主细胞的选择(参见例如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017，这些专利均属Axel等人)。例如，通常可选择标记基因能给其中已引入了载体的宿主细胞赋予对药物(如G418、潮霉素或甲氨喋呤)的抗性。优选的可选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于甲氨喋呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞)和neo基因(用于G418选择)。
为表达轻链和重链，通过标准的技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。术语“转染”意在涵盖多种多样的常用来将外源DNA引入到原核生物或真核生物宿主细胞中的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。虽然理论上可以在原核生物或真核生物宿主细胞中表达本发明的抗体，但最优选的是在真核生物细胞(最优选哺乳动物细胞)中表达抗体，因为这种真核生物细胞特别是哺乳动物细胞比原核生物细胞更有可能装配和分泌正确折叠和具有免疫活性的抗体。已报道说对于生产高产率的活性抗体而言，用原核生物表达抗体基因是不够有效(Boss，M.A.和Wood，C.R.(1985)Immunology Today 6：12-13)。
用于表达本发明的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220，与DHFR可选择标记一起使用，例如如R.J.Kaufman和P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621中所描述)、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体引入到了哺乳动物宿主细胞中，将宿主细胞培养一段时间以生产抗体，所述一段时间足以让抗体在宿主细胞中表达，或者更优选地，让抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中。可用标准的蛋白质纯化方法从培养基回收抗体。
宿主细胞还可用来产生完整抗体的部分，如Fab片断或scFv分子。应理解，上述程序的各种变化方案也在本发明的范围内。例如，可能需要用编码本发明抗体的轻链或重链(但不是轻链和重链两者)的DNA转染宿主细胞。还可使用重组DNA技术来除去编码对于与hTNFα的结合而言不必需的轻链和重链之一或两者的DNA的一些或全部。从这种截短的DNA分子表达的分子也被本发明的抗体所涵盖。另外，可通过用标准的化学交联方法将本发明的抗体交联到第二抗体产生出双功能抗体，其中一条重链和一条轻链是本发明的抗体，而另一条重链和轻链对hTNFα之外的抗原有特异性。
在用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合部分的优选系统中，通过磷酸钙介导转染将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体当中，抗体重链基因和轻链基因各自可操作地连接到驱动这些基因的高水平转录的CMV增强子/AdMLP启动子调节元件。重组表达载体还携带DHFR基因，该基因使得可以用甲氨喋呤选择/扩增对转染了载体的CHO细胞进行选择。将选择到的转化宿主细胞进行培养以让抗体重链和轻链表达，并从培养基回收完整的抗体。使用标准的分子生物学技术来制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化细胞、培养宿主细胞和从培养基回收抗体。
鉴于以上所述，可用来重组表达用于本发明的抗体和抗体部分的核酸、载体和宿主细胞组合物，包括包含人TNFα抗体阿达木单抗(D2E7)的核酸以及包含所述核酸的载体。编码D2E7轻链可变区的核苷酸序列在SEQ ID NO：36中显示。LCVR的CDR1结构域涵盖核苷酸70-102，CDR2结构域涵盖核苷酸148-168，CDR3结构域涵盖核苷酸265-291。编码D2E7重链可变区的核苷酸序列在SEQ ID NO：37中显示。HCVR的CDR1结构域涵盖核苷酸91-105，CDR2结构域涵盖核苷酸148-198，CDR3结构域涵盖核苷酸295-330。技术人员会认识到，可使用遗传密码和标准的分子生物学技术，从编码D2E7LCVR和HCVR的核苷酸序列衍生出编码D2E7相关抗体或其部分(例如CDR结构域，如CDR3结构域)的核苷酸序列。
除了D2E7或其抗原结合部分或者本文公开的D2E7相关抗体之外，可通过筛选使用从得自人淋巴细胞的mRNA制备的人VL和VHcDNA进行制备的重组组合抗体文库，优选scFv噬菌体展示文库，来分离的本发明重组人抗体。制备和筛选这些文库的方法是本领域公知的。除了市售的用于产生噬菌体展示文库的试剂盒(例如Pharmacia的重组噬菌体抗体系统(Recombinant Phage Antibody System)，目录号27-9400-01；和Stratagene的SurfZAPTM噬菌体展示试剂盒，目录号240612)之外，特别适用于产生和筛选抗体展示文库的方法和试剂的实例可见于例如Ladner等人美国专利号5,223,409；Kang等人PCT公开号WO 92/18619；Dower等人PCT公开号WO 91/17271；Winter等人PCT公开号WO 92/20791；Markland等人PCT公开号WO92/15679；Breitling等人PCT公开号WO 93/01288；McCafferty等人PCT公开号WO 92/01047；Garrard等人PCT公开号WO 92/09690；Fuchs等人(1991)Bio/Technology 9：1370-1372；Hay等人(1992)HumAntibod Hybridomas 3：81-65；Huse等人(1989)Science 246：1275-1281；McCafferty等人，Nature(1990)348：552-554；Griffiths等人(1993)EMBO J 12：725-734；Hawkins等人(1992)J Mol Biol 226：889-896；Clackson等人(1991)Nature 352：624-628；Gram等人(1992)PNAS89：3576-3580；Garrard等人(1991)Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res 19：4133-4137；和Barbas等人(1991)PNAS 88：7978-7982。
在一个优选的实施方案中，为分离对hTNFα具有高亲和力和低解离速率常数的人抗体，首先采用Hoogenboom等人PCT公开号WO93/06213中描述的表位印迹方法，用对hTNFα具有高亲和力和低解离速率常数的鼠抗hTNFα抗体(例如MAK 195，其杂交瘤的保藏号为ECACC 87 050801)来选择具有相似的hTNFα结合活性的人重链序列和轻链序列。用于这个方法的抗体文库优选是如McCafferty等人PCT公开号WO 92/01047；McCafferty等人，Nature(1990)348：552-554；和Griffiths等人，(1993)EMBO J12：725-734中所述制备和筛选的scFv文库。scFv抗体文库优选用重组人TNFα作为抗原来筛选。
一旦选出初始的人VL区段和VH区段，就进行“混合和匹配”实验以选择优选的VL/VH配对组合，在所述实验中，将不同配对的初始选择VL区段和VH区段进行hTNFα结合力的筛选。另外，为进一步改进hTNFα结合亲和力和/或降低hTNFα结合解离速率常数，可按与造成抗体在天然免疫应答过程中的亲和力成熟的体内体细胞突变过程相似的过程，将优选的VL/VH配对的VL区段和VH区段进行随机突变，优选是在VH和/或VL的CDR3区中突变。这个体外亲和力成熟可通过用分别与VH CDR3或VL CDR3互补的PCR引物扩增VH区和VL区来实现，所述引物已在某些位置被“掺入”了四种核苷酸碱基的随机混合物，使得所得的PCR产物编码其中已在VH和/或VL CDR3区中引入了随机突变的VH区段和VL区段。可筛选这些随机突变的VH区段和VL区段的hTNFα结合能力，并可选择出显示对hTNFα结合的高亲和力和低解离速率的序列。
从重组免疫球蛋白展示文库筛选和分离本发明的抗hTNFα抗体后，可从展示包(display package)(例如从噬菌体基因组)回收编码选定抗体的核酸，并通过标准的重组DNA技术亚克隆到其他表达载体中。如果需要，可进一步操纵核酸以产生本发明的其他抗体形式(例如与编码另外的免疫球蛋白结构域(如另外的恒定区)的核酸连接)。为表达通过筛选组合文库分离到的重组人抗体，将编码该抗体的DNA克隆到重组表达载体中，并引入到哺乳动物宿主细胞中，如上文所更详细描述的。
分离对hTNFα有高亲和力和低解离速率常数的人中和抗体的方法描述于美国专利号6,090,382、6,258,562和6,509,015，每个专利都通过引用并入本文。
IV.用本发明治疗的病症
本文所用的术语“TNFα活性是有害的病症”用以包括这样的疾病和其它病症，其中TNFα在患有该病症的受试者中的存在已被证实或者被怀疑造成该病症的病理生理学或者是促成该疾病的恶化的因素。因此，TNFα活性有害的病症为预计抑制TNFα活性可缓解其症状和/或发展的病症。例如，可以根据可例如使用如上所述抗-TNFα抗体检测的患有该病症的受试者的生物流体中TNFα浓度增加(例如受试者血清、血浆、滑膜液等中的TNFα浓度增加)来验证这类病症。存在大量TNFα活性有害的病症的实例，包括但不限于自身免疫疾病，例如类风湿性关节炎(RA)或青年期类风湿性关节炎(JRA)，脊柱关节病，例如强直性脊椎炎(AS)或牛皮癣关节炎(PsA)，肠病，例如节段性回肠炎，皮肤病，例如牛皮癣，和肺病，例如COPD或哮喘。
以下描述有关TNF病症的额外细节。
A.自身免疫疾病
在一个实施方案中，本发明包括自身免疫疾病的治疗。TNFα抗体如阿达木单抗可用于治疗自身免疫疾病。这类自身免疫性疾病的实例包括类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎和痛风性关节炎、变态反应、多发性硬化、自身免疫性糖尿病、自身免疫性葡萄膜炎和肾病综合征。自身免疫性疾病其它的实例包括多系统自身免疫性疾病和自身免疫性听觉缺失。自身免疫疾病的其他实例描述于美国申请号10/622932，该申请通过引用结合到本文中。
类风湿性关节炎
TNFα涉及激活组织炎症和导致类风湿性关节炎中的关节破坏(例如，参见Moeller，A.等(1990)Cytokine 2：162-169；Moeller等的美国专利US 5,231,024；Moeller，A.的欧洲专利公开号EP260 610B1；Tracey和Cerami，文献同上；Arend，W.P.和Dayer，J-M.(1995)Arth.Rheum.38：151-160；Fava，R.A.，等(1993)Clin.Exp.Immunol.94：261-266)。
青少年类风湿性关节炎
肿瘤坏死因子涉及幼年型关节炎的病理生理学，包括青少年类风湿性关节炎(Grom等(1996)Arthritis Rheum.39：1703；Mangge等(1995)Arthritis Rheum.8：211)。在一个实施方案中，本发明的TNFα抗体用于治疗青少年类风湿性关节炎。本文所用的术语“青少年类风湿性关节炎”或“JRA”指的是发生在16岁以前可以导致关节或结缔组织损害的慢性炎性疾病。JRA也称作青少年慢性多发关节炎和斯提耳病。JRA在16岁或16岁以下儿童中导致关节炎症和四肢强直6周以上。炎症导致关节中发红、肿胀、发热和疼痛。任何关节均可以受到影响并且炎症可以限制受侵害关节的运动。一种类型的JRA也可以影响内脏器官。
通常根据涉及的关节数量、症状和存在或不存在某些通过血试验测定的抗体将JRA分成三种类型。这些分类有助于临床医师确定疾病将如何发展，并且是否侵害到内脏器官或皮肤。JRA的分类包括如下：
a.少关节JRA，其中患者具有四个或四个以下关节受侵害。少关节为最常见的JRA形式，并且一般影响大关节，诸如膝。
b.多关节HRA，其中五个或五个以上关节受侵害。最常见的是涉及小关节，诸如那些在手和足中的小关节，但该病也可以影响大关节。
c.全身性JRA的特征在于关节肿胀、发热、浅色皮疹并且还可能影响内脏器官，诸如心脏、肝、脾和淋巴结。全身性JRA也称作斯提耳病。在这些儿童中有少数在许多关节中发生关节炎并且可以具有持续至成人期严重性关节炎。
B.脊椎关节病
在一个实施方案中，本发明包括治疗脊椎关节病。本文所用的术语“脊椎关节病(spondyloarthropathy)”或“脊椎关节病(spondyloarthropathies)”用于指影响脊柱关节的几种疾病中的任意一种，其中这类疾病共有共同的临床、放射学和组织学特征。许多脊椎关节病共有遗传特征，即它们与HLA-B27等位基因相关。在一个实施方案中，术语脊椎关节病用于指影响脊柱关节的几种疾病中的任意一种，不包括强直性脊柱炎，其中这类共有共同的临床、放射学和组织学特征。脊椎关节病的实例包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎/脊椎炎、肠病性关节炎、反应性关节炎或莱特尔综合征和分化不良型脊椎关节病。用于研究脊椎关节病的动物模型的实例包括ank/ank转基因小鼠、HLA-B27转基因大鼠(参见Taurog等(1998)，TheSpondylarthritides.Oxford：Oxford University Press)。
处于患脊椎关节病风险中的受试者的实例包括患有关节炎的人。脊椎关节病可伴随其它形式的关节炎，包括类风湿性关节炎。在本发明的一个实施方案中，用TNFα抑制剂通过肺部给予该TNFα抑制剂治疗患有脊柱关节病的受试者。可用TNFα抑制剂治疗的脊椎关节病的实例如下所述：
强直性脊椎炎(AS)
在一个实施方案中，本发明包括用TNFα抑制剂例如TNFα抗体或其抗原结合部分来治疗强直性脊椎炎。肿瘤坏死因子涉及强直性脊柱炎的病理生理学(参见Verjans等(1991)Arthritis Rheum.34：486；Verjans等(1994)Clin Exp Immunol.97：45；Kaijtzel等(1999)HumImmunol.60：140)。强直性脊柱炎(AS)为涉及一个或多个椎骨的炎症的炎性病症。AS为影响中轴骨骼和/或周围关节(包括脊柱椎骨与骶髂关节之间的关节和脊柱与骨盆之间的关节)的慢性炎性疾病。AS最终可以导致受侵害的椎骨融合或长在一起。包括AS在内的脊椎关节病可伴随牛皮癣性关节炎(PsA)和/或炎症性肠病(IBD)，包括溃疡性结肠炎和节段性回肠炎。
AS的早期表现可以根据放射照相试验，包括CT扫描和MRI扫描来确定。AS的早期表现通常包括骶髂关节炎(scroiliitis)和根据软骨下骨皮质边缘的模糊和随后的侵蚀和硬化所证实的骶髂(sacroliac)关节改变。还注意到疲劳为AS的常见症状(Duffy等(2002)ACR 66th Annual Scientific Meeting Abstract)。
牛皮癣关节炎
在一个实施方案中，本发明包括用TNFα抑制剂例如TNFα抗体或其抗原结合部分来治疗牛皮癣关节炎。肿瘤坏死因子涉及牛皮癣性关节炎(PsA)的病理生理学(Partsch等(1998)Ann Rheum Dis.57：691；Ritchlin等(1998)J Rheumatol.25：1544)。如本文所指出，牛皮癣TNFα涉及激活组织炎症和导致类风湿性关节炎中的关节破坏(例如，参见Moeller，A.等(1990)Cytokine 2：162-169；Moeller等的美国专利US 5,231,024；Moeller，A.的欧洲专利公开号EP260 610B1；Tracey和Cerami，文献同上；Arend，W.P.和Dayer，J-M.(1995)Arth.Rheum.38：151-160；Fava，R.A.，等(1993)Clin.Exp.Immunol.94：261-266)。TNFα还涉及促进胰岛细胞死亡和介导糖尿病中的胰岛素抵抗(例如，参见Tracey和Cerami，文献同上；PCT公开号WO 94/08609)。TNFα还涉及介导对少突胶质细胞的细胞毒性并且诱导多发性硬化中的炎性斑片(例如，参见Tracey和Cerami，文献同上)。嵌合和人源化鼠抗-hTNFα抗体已经进行了用于治疗类风湿性关节炎的临床测试(例如，参见Elliott，M.J.，等(1994)Lancet 344：1125-1127；Elliot，M.J.，等(1994)Lancet 344：1105-1110；Rankin，E.C.，等(1995)Br.J Rheumatol.34：334-342)。
牛皮癣性关节炎指的是与牛皮癣相关的慢性炎症性关节炎，其中牛皮癣是一种在身体上产生红斑的常见慢性皮肤病。在20位患有牛皮癣的个体中约有1位随该皮肤病发生关节炎，并且在约75％的病例中，牛皮癣先于关节炎发生。PsA自身以各种方式表现，从轻度到重度关节炎，其中关节炎通常影响手指和脊柱。当脊柱受影响时，症状与如上所述的强直性脊柱炎的那些症状相似。TNFα抗体或其抗原结合片段可以用于治疗PsA。
PsA有时与残毁性关节炎相关。残毁性关节炎指的是特征在于骨质侵蚀过度的病症，骨质侵蚀过度会导致巨大的侵蚀性畸形，可断去关节。
PsA的特征性射线照相特征包括关节侵蚀、关节空间窄化、骨质增生(包括关节周围和骨干骨膜炎)、骨质溶解(包括“杯中笔(pencil incup)”)变形和肢端骨质溶解、关节强直、骨刺形成和脊椎炎(Wassenberg等.(2001)Z Rheumatol 60：156)。与类风湿性关节炎(RA)不同的是，涉及PsA的关节往往是不对称的，且可以是少关节的；骨质疏松是非典型的。尽管早期PsA中的侵蚀变化如同在RA中那么不显眼，但随着疾病的进展，由于邻近侵蚀处的骨膜骨形成，这些变化变得不规则和界限不清。在严重的病症中，侵蚀变化可发展成发生“杯中笔”变形或大量骨质溶解(Gold等.(1988)Radiol Clin North Am26：1195；Resnick等.(1977))J Can Assoc Radiol 28：187)。通过放射照相术在腕骨中和在手的掌指关节(MCP)、近端指间关节(PIP)和远端指间关节(DIP)中见到不对称侵蚀，但DIP关节往往首先受侵害。在指骨丛脉中和在腱和韧带与骨头的连接部位可见畸形。DIP侵蚀变化的存在可提供能支持PsA的诊断的既灵敏又有特异的放射照相发现。而且，手往往比足更频繁地受影响，两者比例近乎2∶1。
脊柱关节病的其他实例描述于美国申请号10/622932，该申请通过引用结合到本文中。
C.皮肤和指甲病症
在一个实施方案中，本发明包括治疗皮肤和指甲病症。本文所用的术语“TNFα活性有害的皮肤和指甲病症”用以包括这样的皮肤和/或指甲病症，其中TNFα在患有该疾病的受试者中的存在已被证实或者被怀疑造成该疾病的病理生理学或者是促成该疾病(例如牛皮癣)的恶化的因素。因此，TNFα活性有害的皮肤和指甲病症为预计抑制TNFα活性可缓解其症状和/或发展的病症。下文进一步讨论本发明的抗体、抗体部分和其它TNFα抑制剂在治疗具体皮肤和指甲病中的应用。在某些实施方案中，将本发明的抗体、抗体部分或其它TNFα抑制剂与如下所述的另一种治疗剂联合给予受试者。在一个实施方案中，将TNFα抗体与另一种治疗剂联合给予受试者以治疗牛皮癣。
牛皮癣
肿瘤坏死因子涉及牛皮癣的病理生理学(Takematsu等(1989)Arch Dermatol Res.281：398；Victor和Gottlieb(2002)J Drugs Dermatol.1：264)。牛皮癣被描述为皮肤炎症(刺激和发红)，其特征在于发红频繁发作、瘙痒和皮肤上增厚、干燥、银屑。特别地，有涉及表皮增殖的原发性和继发性改变、皮肤的炎性反应和调节分子(诸如淋巴因子和炎性因子)的表达的损害形成。牛皮癣性皮肤在形态上的特征在于表皮细胞更新增加、表皮增厚、角质化异常、炎性细胞浸润入表皮和多形核白细胞和淋巴细胞浸润入表皮层，导致基底细胞周期增加。牛皮癣通常涉及指甲，通常表现为孔蚀、指甲分离、增厚和脱色。牛皮癣通常伴随其它炎性病症，例如关节炎，包括类风湿性关节炎，炎症性肠病(IBD)和节段性回肠炎。
牛皮癣的证据最通常地可以在躯干、肘、膝、头皮、皮肤褶或指甲上观察到，但它可以影响皮肤的任何或所有部分。一般来说，新皮肤细胞需要花约一个月才能从下层升至表面。在牛皮癣中，该过程仅需几天，导致死亡的皮肤细胞累加并且形成厚鳞屑。牛皮癣的症状包括：皮肤干燥或发红的斑片，其上覆盖有银色鳞屑，皮肤隆起斑片，伴随有红色边缘，这些红色边缘可裂化和变疼痛，且通常位于肘、膝、躯干、头皮和手上；皮肤损害，包括脓疱、皮肤裂化和皮肤发红；关节疼痛或可能与关节炎(例如牛皮癣性关节炎)相关的疼痛。
牛皮癣的治疗通常包括局部用皮质类固醇、维生素D类似物和局部或口服类视黄醇或它们的组合。在一个实施方案中，将本发明的TNFα抑制剂与这些常用疗法之一联合给予或者在这些常用疗法之一的存在下给予。还可以与TNFα抑制剂联用以治疗牛皮癣的额外治疗剂在下文中更具体地描述。
银屑病的诊断通常基于皮肤外观。另外，可能需要皮肤活组织检查或皮肤斑片的刮除术和培养来排除其它皮肤病。如果存在关节疼痛且持久，那么可用X射线来检查牛皮癣性关节炎。
在本发明的一个实施方案中，将TNFα抑制剂用于治疗牛皮癣，包括慢性斑块状牛皮癣，滴状牛皮癣、皮褶性牛皮癣、脓疱性牛皮癣、寻常型天疱疮、红皮病型牛皮癣、伴随炎症性肠病(IBD)的牛皮癣和伴随类风湿性关节炎(RA)的牛皮癣。本发明治疗方法中包括的具体类型的牛皮癣包括慢性斑块状牛皮癣，滴状牛皮癣、皮褶性牛皮癣和脓疱性牛皮癣。牛皮癣和其他类型的皮肤和指甲病症的其他实例描述于美国申请号10/622932，该申请通过引用结合到本文中。
D.肺病
在一个实施方案中，本发明提供治疗受试者中的肺病的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂肺部递送给受试者，其中肺部给药包括将TNFα抑制剂局部递送到受试者的肺。可按照本发明的局部递送方法治疗的肺病的实例包括但不限于COPD和哮喘。因此，术语“局部”在本文中针对肺使用。
TNFα涉及很多种肺病的病理生理学，包括诸如特发性间质性肺病和慢性阻塞性气道病症的肺病(参见例如Piquet PF等.(1989)J ExpMed.170：655-63；Whyte M，等.(2000)Am J Respir Crit Care Med.162：755-8；Anticevich SZ，等.(1995)Eur J Pharmacol.284：221-5)。本发明提供用于患有这类肺病的受试者的TNFα活性的方法，该方法包括对受试者给予抗体、抗体部分或其它TNFα抑制剂，使得患有特发性间质性肺病或慢性阻塞性气道病症的受试者的TNFα活性受到抑制。TNFα活性有害的特发性间质性肺病和慢性阻塞性气道病症的实例在下文中进一步讨论。
1.特发性间质性肺病
在一个实施方案中，本发明的TNFα抗体用于治疗患有特发性间质性肺病的受试者。特发性间质性肺病以三种方式影响肺：首先，肺组织以某种已知或未知的方式受损；其次，肺中的气囊壁发炎；最终，在间质中开始瘢痕形成(或纤维化)(或气囊之间的组织)，并且肺变硬。以下描述特发性间质性肺病的实例。
a.特发性肺纤维变性(IPF)
肿瘤坏死因子涉及特发性肺纤维化(IPF)的病理生理学(参见Piquet等(1989)J Exp Med.170：655；Whyte等(2000)AmJ RespirCrit Care.Med 162：755Corbett等(2002)Am J Respir Crit Care Med.165：690)。例如，已经发现IPF患者在巨噬细胞和II型上皮细胞中TNF表达水平升高(Piquet等(1993)Am J Pathol 143：651；Nash等(1993)Histopathology 22：343；Zhang等(1993)J Immunol 150：4188)。某些遗传多态现象也与TNF表达增加相关，并且涉及在IPF和硅肺病中起作用(Whyte等，文献同上；Corbett等，文献同上)。
术语“特发性肺纤维化”或“IPF”指的是一组特征在于炎症和最终在深部肺组织瘢形成痕而导致呼吸急促的病症。IPF中小泡(气囊)及其支持结构(间质)的瘢痕形成最终导致功能肺泡单位损失和氧从空气中转运至血液减少。IPF也称作弥散性实质肺病；肺泡炎；隐原性纤维化肺泡炎(CFA)；特发性肺炎(IPP)；和普通性间质性肺炎(UIP)。IPF通常与UIP同义使用(“IPF/UIP”)，因为UIP为IPF病理诊断中观察到的最常见的细胞模式。
患有IPF的患者通常表现出某些症状，包括干咳、胸痛和/或呼吸急促。常用于治疗IPF的药物为泼尼松和环磷酰胺，不过仅部分患者能因持续使用这些药物而有所改善(American Thoracic Society(2000)Am.J.Respir.Crit.Care Med.161：646)。给氧和肺移植是其它治疗选择。在一个实施方案中，可将本发明的TNFα抗体与另一种治疗剂(例如氧)联合给予受试者以治疗特发性肺纤维化。
2.慢性阻塞性气道病症
一个实施方案中，将本发明的TNFα抗体用于治疗患有慢性阻塞性气流障碍的受试者。在这些疾病中，气流阻塞可以是慢性而持续的或者猝发而反复的。气流阻塞通常通过用力呼气的肺量测定法测定，该测定法记录最大呼气过程中呼出的体积与时间之比。在没有阻塞气流的受试者中，完全用力呼气通常需要3-4秒。在其中气流受阻的阻塞性气流障碍患者中，通常需要达15-20秒，并且可能受到憋气时间的限制。在第一秒呼气中的正常用力呼气量(FEV I)容易测定并且基于年龄、性别和身高可准确预测。FEV1与用力肺活量之比(FEV1/FVC)在一般情况下超过0.75。记录用力呼气过程中气流与体积和随后的“用力吸气--流量循环”也是有用的，主要用于区分上气道与下气道狭窄。慢性阻塞性气道病症的实例如下所述。
a.哮喘
肿瘤坏死因子涉及哮喘的病理生理学(Anticevich等(1995)EurJPharmacol.284：221-5；Thomas等1995.Am J Respir Crit Care Med.152：76-80；Thomas和Heywood(2002)Thorax.57：774-8)。例如，已经发现急性哮喘发作与肺中性白细胞增多症和BAL TNF水平升高有关(Ordonez等(2000)Am J Respir Crit Care Med 161：1185)。已经发现哮喘症状的严重程度与室尘中的内毒素水平有关。在大鼠中，抗-TNF抗体可以减少内毒素诱导的气道改变(Kips等(1992)Am Rev Respir Dis 145：332)。
本文所用的术语“哮喘”指的是气道炎症导致肺的气流进入和排出受限的病症。哮喘也称作支气管哮喘、运动诱发的哮喘-支气管和反应性气道病(RAD)。在某些情况中，哮喘与变态反应相关和/或为家族性的。哮喘包括特征在于短期内支气管气道直径或口径泛发性波动而导致肺功能改变的病症。导致的对气流的阻力增加使受侵害受试者产生症状，包括气喘(呼吸困难)、胸部紧压感觉或“紧缩感”和喘鸣。
按照NIH原则表征患有哮喘的患者，将其描述为轻度间歇性的、中度持续性的和重度持续性的(参见NAEPP Expert Panel ReportGuidelines for the Diagnosis and Management of Asthma-Update onSelected Topics 2002.JACI 2002；110：S141-S209；Guidelines for theDiagnosis and Management of Asthma.NIH Publication 97-4051，1997年7月)。通常使用吸入皮质类固醇治疗经诊断患有中度持续性哮喘的患者。通常使用高剂量的吸入皮质类固醇和口服皮质类固醇治疗经诊断患有重度持续性哮喘的患者。
b.慢性阻塞性肺病(COPD)
肿瘤坏死因子涉及慢性阻塞性肺病的病理生理学(Keatings VM.(2000)Chest.118：971；Sakao S.等(2001)Am J Respir Crit Care Med.163：420；Sakao S.等(2002)Chest.122：416)。术语“慢性阻塞性肺疾患”或“COPD”在本文中可以互换使用，指的是特征在于气流受限从而气囊不同程度地扩大和肺组织破坏的一组肺病。术语COPD包括慢性支气管炎(粘液分泌过多从而杯状细胞粘膜下腺增生)、慢性阻塞性支气管炎或肺气肿(气道实质破坏)或这些病症的组合。肺气肿和慢性支气管炎为最常见形式的慢性阻塞性肺疾患。将COPD定义为不可逆的气流阻塞。
在COPD中，慢性炎症导致小气道和肺实质固定性狭窄和肺泡壁破坏(肺气肿)。其特征在于肺泡巨噬细胞、中性白细胞和细胞毒性T淋巴细胞数量增加并且释放多种炎性介体(脂质、趋化因子、细胞因子、生长因子)。这种炎症导致纤维化，造成小气道狭窄和肺实质破坏。还存在高水平的氧化应激，它可以使这种炎症扩大。
V.额外的治疗剂
TNFα抑制剂如但不限于抗体或其抗原结合部分，可与已知能有效地敏锐管理患有其中TNFα活性有害的病症包括但不限于RA、AS、PsA、JRA、牛皮癣和哮喘)的受试者的额外治疗剂联合通过肺部递送进行给药。
TNFα抗体或其抗原结合部分可单独使用或者组合使用以治疗这些疾病。应认识到，抗体可单独使用或者与额外的药剂(例如治疗剂)组合使用，所述额外的药剂由技术人员为其预定目的进行选择。例如，该额外的药剂可以是本领域公认可用于治疗由本发明抗体治疗的疾病或病症的治疗剂。该额外的药剂还可以是对治疗组合物赋予有利品质的药剂，例如影响组合物的粘度的药剂。
还应认识到，要包括于本发明的组合是可用于它们的预定目的的那些组合。以下给出的药剂目的在于进行示例性说明，并不意在限制本发明。属本发明的一部分的组合可以是本发明抗体和至少一种选自以下所列药剂的额外药剂。组合还可包括超过一种额外药剂，例如两种或三种额外药剂，如果该组合使得所形成的组合物能执行其预定功能。
本文所述的结合蛋白可与额外的治疗剂，如改变病情抗风湿药(Disease Modifying抗Rheumatic Drug，DMARD)或非甾体类抗炎药物(NSAID)或类固醇或它们的任何组合进行组合使用。DMARD的优选实例有羟氯喹、来氟米特、甲氨喋呤、胃肠外金、口服金和柳氮磺吡啶。非甾体抗炎药(也称NSAIDS)的优选实例还包括诸如布洛芬的药物。其他优选组合有皮质类固醇(包括泼尼松龙)；当将类固醇与本发明的抗TNFα抗体组合来治疗患者时，可通过使所需的类固醇剂量递减使类固醇的公知副作用降低或者甚至消除。本发明的抗体或抗体部分可组合使用的类风湿性关节炎治疗剂的非限制性实例包括以下：细胞因子抑制性抗炎药物(CSAIDs)；其他人细胞因子或生长因子的抗体或拮抗剂，所述细胞因子或生长因子例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、IL-23、干扰素、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF。本发明的抗体或其抗原结合部分可与抗细胞表面分子(如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA)或者它们的配体(包括CD154(gp39或CD40L))的抗体进行组合。
优选的治疗剂组合可在自身免疫和随后的炎症级联中的不同点进行干扰；优选的实例包括TNF拮抗剂，如可溶性p55或p75TNF受体及其衍生物(p75TNFR1gG(EnbrelTM)或p55TNFR1gG(Lenercept))，嵌合的、人源化的或人的TNF抗体或其片断，包括英夫利昔单抗(
Figure GPA00001066684000671
Johnson and Johnson；描述于美国专利No.5,656,272，该专利通过引用并入本文)、CDP571(人源化单克隆抗TNF-αIgG4抗体)、CDP 870(人源化单克隆抗TNF-α抗体片断)、抗TNF dAb(Peptech)、CNTO 148(戈利木单抗；Medarex和Centocor，参见WO 02/12502)和阿达木单抗(
Figure GPA00001066684000672
Abbott Laboratories，人抗TNF mAb，在US 6,090,382中描述为D2E7)。可用于本发明的额外TNF抗体在美国专利No.6,593,458、6,498,237、6,451,983和6,448,380中有描述，每个专利通过引用并入本文。出于同样的理由，包括TNFα转换酶(TACE)抑制剂、IL-1抑制剂(白细胞介素-1转换酶抑制剂，IL-1RA等)在内的其他组合也可以是有效的。其他优选的组合包括白细胞介素11。又另一个优选的组合是自身免疫应答的可平行于、依赖于或协同于TNFα功能而起作用的其他关键参与者；特别优选的是IL-18拮抗剂，包括IL-18抗体或可溶性IL-18受体，或者IL-18结合蛋白。已证实TNFα和IL-18具有重叠但不同的功能，两者的拮抗剂的组合可能是最有效的。又另一个优选的组合是非衰竭性抗CD4抑制剂。还其他的优选组合包括共刺激途径CD80(B7.1)或CD86(B7.2)的拮抗剂，包括抗体、可溶性受体或拮抗性配体在内。
本发明的抗体或其抗原结合部分还可与诸如以下的药剂进行组合：甲氨喋呤、6-MP、硫唑嘌呤柳氮磺吡啶、美沙拉嗪、奥沙拉嗪氯喹/羟氯喹、青霉胺、金硫苹果酸盐(肌肉内注射和口服)、硫唑嘌呤、秋水仙碱、皮质类固醇(口服、吸入和局部注射)、β-2肾上腺素受体激动剂(沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗)、黄嘌呤(荼碱、氨茶碱)、色甘酸、奈多罗米、酮替芬、异丙托和氧托、环胞菌素、FK506、雷帕霉素、麦考酚酸莫酯、来氟米特、NSAIDs(例如布洛芬)、皮质类固醇(如泼尼松龙)、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗血栓剂、补体抑制剂、肾上腺素能剂、干扰促炎细胞因子如TNFα或IL-1的信号转导的药剂(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)、IL-1β转换酶抑制剂、TNFα转换酶(TACE)抑制剂、T细胞信号转导抑制剂如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物(例如可溶性p55或p75TNF受体以及衍生物p75TNFRIgG(EnbrelTM和p55TNFRIgG(Lenercept))、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)、抗炎细胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ)、塞来考昔、叶酸、硫酸羟氯喹、罗非考昔、依那西普、英夫利昔单抗、萘普生、伐地考昔、柳氮磺吡啶、甲基泼尼松龙、美洛昔康、醋酸甲基泼尼松龙、金硫苹果酸钠、阿司匹林、曲安萘德、丙氧氨酚/apap、叶酸盐、萘丁美酮、双氯芬酸、吡罗昔康、依托度酸、双氯芬酸钠、噁丙嗪、羟考酮hcl、重酒石酸氢可酮/apap、双氯芬酸钠/米索前列醇、芬太尼、anakinra、人重组曲马多hcl、双水杨酸酯、舒林酸、维生素B12/fa/吡哆辛、对乙酰氨基酚、阿仑膦酸钠、泼尼松龙、硫酸吗啡、盐酸利多卡因、吲哚美辛、葡糖胺sulf/软骨素、阿密曲替林hcl、磺胺嘧啶、羟考酮hcl/对乙酰氨基酚、奥洛他定hcl、米索前列醇、萘普生钠、奥美拉唑、环磷酰胺、利妥昔单抗、IL-1TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18BP、抗IL-18、抗IL15、BIRB-796、SCI0-469、VX-702、AMG-548、VX-740、罗氟司特、IC-485、CDC-801和Mesopram和ActemraTM(tocilizumab)、抗白细胞介素-6(IL-6)受体人源化单克隆抗体。优选的组合包括甲氨喋呤或来氟米特，和在中度或严重的类风湿性关节炎病症中，还包括环胞菌素。
也可与TNFα抗体或其抗原结合部分组合使用以治疗类风湿性关节炎的非限制性额外药剂包括但不限于以下：非甾体抗炎药物(NSAIDs)；细胞因子抑制性抗炎药物(CSAIDs)；CDP-571/BAY-10-3356(人源化抗TNFα抗体；Celltech/Bayer)；cA2/英夫利昔单抗(嵌合抗TNFα抗体；Centocor)；75kdTNFR-IgG/依那西普(75kD TNF受体-IgG融合蛋白；Immunex；参见例如Arthritis &Rheumatism(1994)Vol.37，S295；J.Invest.Med.(1996)Vol.44，235A)；55kdTNF-IgG(55kD TNF受体-IgG融合蛋白；Hoffmann-LaRoche)；IDEC-CE9.1/SB 210396(非衰竭性灵长源抗CD4抗体；IDEC/SmithKline；参见例如Arthritis & Rheumatism(1995)Vol.38，S185)；DAB 486-IL-2和/或DAB 389-IL-2(IL-2融合蛋白；Seragen；参见例如Arthritis & Rheumatism(1993)Vol.36，1223)；抗Tac(人源化抗IL-2Rα；Protein Design Labs/Roche)；IL-4(抗炎细胞因子；DNAX/Schering)；IL-10(SCH 52000；重组IL-10，抗炎细胞因子；DNAX/Schering)；IL-4；IL-10和/或IL-4激动剂(例如激动抗体)；IL-1RA(IL-1受体拮抗剂；Synergen/Amgen)；
Figure GPA00001066684000691
(Amgen)；TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF结合蛋白；参见例如Arthritis &Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S284；Amer.J.Physiol.-Heart and Circulatory Physiology(1995)Vol.268，pp.37-42)；R973401(磷酸二酯酶IV型抑制剂；参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S282)；MK-966(COX-2抑制剂；参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S81)；Iloprost(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S82)；甲氨喋呤；沙利度胺(参见例如Arthritis &Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S282)和沙利度胺相关药物(例如Celgen)；来氟米特(抗炎和细胞因子抑制剂；参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S131；Inflammation Research(1996)Vol.45，pp.103-107)；氨甲环酸(纤溶酶原激活的抑制剂；参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S284)；T-614(细胞因子抑制剂；参见例如Arthritis &Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S282)；前列腺素E1(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S282)；Tenidap(非甾体抗炎药物；参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S280)；萘普生(非甾体抗炎药物；参见例如Neuro Report(1996)Vol.7，pp.1209-1213)；美洛昔康(非甾体抗炎药物)；布洛芬(非甾体抗炎药物)；吡罗昔康(非甾体抗炎药物)；双氯芬酸(非甾体抗炎药物)；吲哚美辛(非甾体抗炎药物)；柳氮磺吡啶(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S281)；硫唑嘌呤(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S281)；ICE抑制剂(白细胞介素-1β转换酶的抑制剂)；zap-70和/或lck抑制剂(酪氨酸激酶zap-70或lck的抑制剂)；VEGF抑制剂和/或VEGF-R抑制剂(血管内皮细胞生长因子或血管内皮细胞生长因子受体的抑制剂；血管发生的抑制剂)；皮质类固醇抗炎药物(例如SB203580)；TNF-转化酶抑制剂；抗IL-12抗体；抗IL-18抗体；白细胞介素-11(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S296)；白细胞介素-13(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S308)；白细胞介素-17抑制剂(参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)Vol.39，No.9(supplement)，S120)；金；青霉胺；氯喹；苯丁酸氮芥；羟氯喹；环胞菌素；环磷酰胺；全淋巴照射；抗胸腺细胞球蛋白；抗CD4抗体；CD5-毒素；口服给予的肽和胶原；氯苯扎利二钠；细胞因子调节剂(CRAs)HP228和HP466(Hougbten Pharmaceuticals，Inc.)；ICAM-1反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals，Inc.)；可溶性补体受体1(TP10；T Cell Sciences，Inc.)；泼尼松；orgotein；多硫酸糖胺聚糖；二甲胺四环素；抗IL2R抗体；海洋和植物脂质(鱼和植物种子脂肪酸；参见例如DeLuca等.(1995)Rheum.Dis.Clin.North Am.21：759-777)；金诺芬；苯基丁氮酮；甲氯芬那酸；氟芬那酸；静脉内注射免疫球蛋白；齐留通；阿扎立平；霉酚酸(RS-61443)；他克莫司(FK-506)；西罗莫司(雷帕霉素)；氨普立糖(therafectin)；克拉屈滨(2-氯脱氧腺苷)；甲氨喋呤；抗病毒剂；和免疫调节剂。
在一个实施方案中，将TNFα抗体或其抗原结合部分与以下药剂之一联合给药以治疗类风湿性关节炎：KDR的小分子抑制剂(ABT-123)、Tie-2的小分子抑制剂；甲氨喋呤；泼尼松；塞来考昔；叶酸；硫酸羟氯喹；罗非考昔；依那西普；英夫利昔单抗；来氟米特；萘普生；伐地考昔；柳氮磺吡啶；甲泼尼龙；布洛芬；美洛昔康；醋酸甲泼尼龙；硫代苹果酸金钠；阿司匹林；硫唑嘌呤；曲安奈德；萘磺酸右丙氧芬(propxyphene napsylate)/apap；叶酸盐；萘丁美酮；双氯芬酸；吡罗昔康；依托度酸；双氯酚酸钠；奥沙普秦；羟考酮hcl；氢可酮酒石酸氢盐/apap；双氯芬酸钠/米索前列醇；芬太尼；人重组阿那白滞素；曲马多hcl；双水杨酯；舒林酸；维生素B12/fa/吡哆醇；对乙酰氨基酚；阿仑膦酸钠；泼尼松龙；硫酸吗啡；盐酸利多卡因；吲哚美辛；硫酸葡糖胺/软骨素；环胞菌素；阿米替林hcl；磺胺嘧啶；羟考酮hcl/对乙酰氨基酚；奥洛他定hcl；米索前列醇；甲氧萘丙酸钠；奥美拉唑；麦考酚酸吗乙酯；环磷酰胺；美罗华；IL-1TRAP；MRA；CTLA4-IG；IL-18BP；ABT-874；ABT-325(抗-IL 18)；抗-IL 15；BIRB-796；SCIO-469；VX-702；AMG-548；VX-740；罗氟司特；IC-485；CDC-801；和mesopram。在另一个实施方案中，将TNFα抗体或其抗原结合部分与以上所述的用于治疗类风湿性关节炎的药剂之一联合给药以治疗TNFα相关病症。
本发明的抗体或抗体部分可组合使用的用于炎性肠病的治疗剂的非限制性实例包括以下：布地奈德；表皮生长因子；皮质类固醇；环胞菌素、柳氮磺吡啶；对氨基水杨酸；6-巯嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂肪加氧酶抑制剂；美沙胺；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓噁烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1β单克隆抗体；抗IL-6单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基咪唑化合物；其他的人细胞因子或生长因子(例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF)的抗体或拮抗剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可与抗细胞表面分子(如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90)或者它们的配体的抗体进行组合。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与诸如以下的药剂进行组合：甲氨喋呤、环胞菌素、FK506、雷帕霉素、麦考酚酸莫酯、来氟米特、NSAIDs(例如布洛芬)、皮质类固醇(如泼尼松龙)、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗血栓剂、补体抑制剂、肾上腺素能剂、干扰促炎细胞因子如TNFα或IL-1的信号转导的药剂(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)、IL-1β转换酶抑制剂、TNFα转换酶抑制剂、T细胞信号转导抑制剂如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物(例如可溶性p55或p75TNF受体、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)和抗炎细胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ)。
可与抗体或抗原结合部分进行组合的用于节段性回肠炎的治疗剂的优选实例包括以下：TNF拮抗剂例如抗TNF抗体、D2E7(PCT公开No.WO 97/29131；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、CDP 571、TNFR-Ig构建物、(p75TNFRIgG(ENBREL)和p55TNFRIgG(LENERCEPT))抑制剂和PDE4抑制剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可与皮质类固醇(例如布地奈德和地塞米松)进行组合。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与诸如柳氮磺吡啶、5-氨基水杨酸和奥沙拉嗪的药剂以及能干扰促炎细胞因子(如IL-1)的合成或作用的药剂(例如IL-1β转换酶抑制剂和IL-1ra)进行组合。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与T细胞信号转导抑制剂(例如酪氨酸激酶抑制剂6-巯嘌呤)一起使用。本发明的抗体或其抗原结合部分可与IL-11组合。本发明的抗体或其抗原结合部分可与以下药剂组合：美沙拉秦、泼尼松、硫唑嘌呤、巯嘌呤、英夫利昔单抗、甲泼尼龙琥珀酸钠、地芬诺酯/硫酸阿托品、盐酸洛哌丁胺、甲氨喋呤、奥美拉唑、叶酸盐、环丙沙星/葡萄糖-水、氢可酮酒石酸氢盐/apap、盐酸四环素、氟轻松、甲硝唑、硫柳汞/硼酸、考来烯胺/蔗糖、盐酸环丙沙星、硫酸莨菪碱、盐酸哌替啶、盐酸咪达唑仑、氢考酮hcl/对乙酰氨基酚、盐酸异丙嗪、磷酸钠、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、塞来考昔、聚卡波非、萘磺酸右丙氧芬、氢化可的松、多种维生素、巴柳氮二钠、磷酸可待因/apap、考来维仑hcl、维生素B12、叶酸、左氧氟沙星、甲基泼尼松龙、那他珠单抗和干扰素γ。
本发明的抗体或抗体部分可组合使用的用于多发性硬化的治疗剂的非限制性实例包括以下：皮质类固醇；泼尼松龙；甲基泼尼松龙；硫唑嘌呤；环磷酰胺；环胞菌素；甲氨喋呤；4-氨基吡啶；替扎尼定；干扰素-β1a(AVONEX；Biogen)；干扰素-β1b(BETASERON；Chiron/Berlex)；干扰素α-n3)(Interferon Sciences/Fujimoto)、干扰素-α(Alfa Wassermann/J&J)、干扰素β1A-IF(Serono/Inhale Therapeutics)、Peg干扰素α2b(Enzon/Schering-Plough)、共聚物1(Cop-1；COPAXONE；Teva Pharmaceutical Industries，Inc.)；高压氧；静脉注射免疫球蛋白；克拉屈滨；其他的人细胞因子或生长因子以及它们的受体(例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-23、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF)的抗体或拮抗剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可与细胞表面分子(如CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90)或其配体的抗体进行组合。The本发明的抗体或其抗原结合部分还可以诸如以下的药剂进行组合：甲氨喋呤、环胞菌素、FK506、雷帕霉素、麦考酚酸莫酯、来氟米特、NSAIDs(例如布洛芬)、皮质类固醇(如泼尼松龙)、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗血栓剂、补体抑制剂、肾上腺素能剂、干扰促炎细胞因子如TNFα或IL-1的信号转导的药剂(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)、IL-1β转换酶抑制剂、TACE抑制剂、T细胞信号转导抑制剂(如激酶抑制剂)、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体以及它们的衍生物(例如可溶性p55或p75TNF受体、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)和抗炎细胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-13和TGFβ)。
本发明抗体或其抗原结合部分可组合使用的用于多发性硬化的治疗剂的优选实例包括干扰素-β(例如IFNβ1a和IFNβ1b)；copaxone、皮质类固醇、胱天蛋白酶抑制剂(例如胱天蛋白酶-1的抑制剂)、IL-1抑制剂、TNF抑制剂以及CD40配体和CD80的抗体。
本发明所用的抗体或其抗原结合部分还可与诸如以下的药剂进行组合：阿仑单抗、屈大麻酚、Unimed、达克珠单抗、米托蒽醌、盐酸扎利罗登、fampridine、醋酸格拉替雷、那他珠单抗、sinnabidol、a-immunokine NNSO3、ABR-215062、AnergiX.MS、趋化因子受体拮抗剂、BBR-2778、calagualine、CPI-1189、LEM(脂质体包囊米托蒽醌)、THC.CBD(大麻激动剂)MBP-8298、mesopram(PDE4抑制剂)、MNA-715、抗IL-6受体抗体、neurovax、吡非尼酮allotrap 1258(RDP-1258)、sTNF-R1、talampanel、特立氟胺、TGF-beta2、替利莫肽、VLA-4拮抗剂(例如TR-14035、VLA4Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen)、干扰素γ拮抗剂、IL-4激动剂。
抗体或抗原部分可组合使用的用于心绞痛的治疗剂的非限制性实例包括以下：阿司匹林、硝酸甘油、单硝酸异山梨酯、琥珀酸美托洛尔、阿替洛尔、酒石酸美托洛尔、阿罗地平磺酸盐、盐酸地尔硫卓(dilitiazem hydropchloride)、二硝酸异山梨酯、氯吡格雷重硫酸盐、硝苯地平、阿托伐他汀钙、氯化钾、呋塞米、辛伐他汀、维拉帕米hcl、地高辛、普萘洛尔hcl、卡维地洛、赖诺普利、螺内酯(sprionolactone)、氢氯噻嗪、马来酸依那普利、nadolol、雷米普利、依诺肝素钠、肝素钠、缬沙坦、盐酸索他洛尔、非诺贝特、依折麦布、布美他尼、洛沙坦钾、赖诺普利/氢氯噻嗪、非洛地平、卡托普利、富马酸比索洛尔。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于强直性脊椎炎的治疗剂的非限制性实例包括以下：布洛芬、双氯芬酸和米索前列醇、萘普生、美洛昔康、吲哚美辛、双氯芬酸、塞来考昔、罗非考昔、柳氮磺吡啶、甲氨喋呤、硫唑嘌呤、米诺环素、泼尼松、依那西普、英夫利昔单抗。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于哮喘的治疗剂的非限制性实例包括以下：沙丁胺醇、沙美特罗/氟替卡松、孟鲁司特钠、丙酸氟替卡松、布地奈德、泼尼松、沙美特罗羟萘甲酸盐、盐酸左旋沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇/异丙托、泼尼松龙磷酸钠、曲安萘德、二丙酸倍氯米松、异丙托溴铵、阿奇霉素、醋酸吡布特罗、泼尼松龙、无水荼碱、甲基泼尼松龙琥珀酸钠、克拉霉素、扎鲁司特、富马酸福莫特罗、流感病毒疫苗、甲基泼尼松龙、三水阿莫西林、氟尼缩松、过敏症注射剂、色甘酸钠、非索非那定、氟尼缩松/薄荷醇、阿莫西林/克拉维酸、左氟沙星、吸入器辅助装置、愈创甘油醚、地塞米松磷酸钠、盐酸莫西沙星、盐酸强力霉素、愈创甘油醚/d-美沙芬、p-麻黄素/cod/氯屈米、加替沙星、盐酸西替力嗪、糠酸莫米松、昔美酸沙美特罗、苯佐那酯、头孢氨苄、pe/氢可酮/氯屈米、西替力嗪hcl/伪麻黄碱、苯肾上腺素/cod/异丙嗪、可待因/异丙嗪、头孢丙烯、地塞米松、愈创甘油醚/伪麻黄碱、氯屈米/氢可酮、奈多罗米钠、硫酸特布他林、肾上腺素、甲基泼尼松龙、硫酸奥西那林。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于COPD的治疗剂的非限制性实例包括以下：硫酸沙丁胺醇/异丙托铵、异丙托溴铵、沙美特罗/氟替卡松、沙丁胺醇、沙美特罗、昔萘酸盐、丙酸氟替卡松、泼尼松、无水茶碱、甲泼尼龙琥珀酸钠、孟鲁司特钠、布地奈德、富马酸福莫特罗、曲安奈德、左氧氟沙星、愈创甘油醚、阿奇霉素、倍氯米松二丙酸盐、左沙丁胺hcl、氟尼缩松钠、阿莫西林三水合物、加替沙星、扎鲁司特、糠酸莫米松、阿莫西林/克拉维酸钾、氟尼缩松/薄荷醇、氯苯那敏/氢可酮、硫酸间羟异丙肾上腺素、甲泼尼龙、麻黄碱/cod/氯苯那敏、醋酸吡布特罗、麻黄碱/氯雷他定、硫酸特布他林、噻托溴铵、(R，R)-福莫特罗、TgAAT、西洛司特和罗氟司特。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于HCV的治疗剂的非限制性实例包括以下：干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-αconl、干扰素-α-n1、PEG化干扰素-α-2a、PEG化扰素-α-2b、利巴韦林、Peg干扰素alfa-2b+利巴韦林、熊去氧胆酸、甘草酸、胸腺法新、Maxamine、VX-497和任何用来通过干预以下靶标治疗HCV的化合物：HCV聚合酶、HCV蛋白酶、HCV解旋酶、HCV IRES(内部核糖体进入位点)。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于特发性肺纤维变性的治疗剂的非限制性实例包括以下：泼尼松、硫唑嘌呤、沙丁胺醇、秋水仙碱、硫酸沙丁胺醇、地高辛、γ干扰素、甲基泼尼松龙sod succ、劳拉西泮、呋塞米、赖诺普利、硝化甘油、螺内酯、环磷酰胺、溴化异丙托、放射菌素d、阿替普酶、丙酸氟替卡松、左氟沙星、硫酸奥西那林、硫酸吗啡、羟考酮hcl、氯化钾、曲安萘德、无水他克莫司、钙、干扰素-α、甲氨喋呤、麦考酚酸莫酯、干扰素-γ-1β。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于心肌梗塞的治疗剂的非限制性实例包括以下：阿司匹林、硝酸甘油、酒石酸美多洛尔、依诺肝素钠、肝素钠、氯吡格雷重硫酸盐、卡维地洛、阿替洛尔、硫酸吗啡、琥珀酸美托洛尔、华法林钠、赖诺普利、单硝酸异山梨酯、地高辛、呋塞米、辛伐他汀、雷米普利、替奈普酶、马来酸依那普利、托塞米、瑞替普酶、洛沙坦钾、喹那普利hcl/magcarb、布美他尼、阿替普酶、依那普利拉、盐酸胺碘酮、替罗非班hclm-水合物、盐酸地尔硫卓、卡托普利、厄贝沙坦、缬沙坦、盐酸普萘洛尔、福辛普利钠、盐酸利多卡因、依替巴肽、头孢唑啉钠、硫酸阿托品、氨基己酸、螺内酯、干扰素、盐酸索他洛尔、氯化钾、多库酯钠、多巴酚丁胺hcl、阿普唑仑、普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、盐酸咪达唑、哌替啶盐酸盐、硝酸异山梨酯、肾上腺素、盐酸多巴胺、比伐卢定、罗苏伐他汀、依泽替米贝/辛伐他汀、阿伐麦布、卡立泊来德。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于牛皮癣的治疗剂的非限制性实例包括以下：KDR的小分子抑制剂(ABT-123)、Tie-2的小分子抑制剂、卡泊三烯、丙酸氯倍米松、曲安奈德、丙酸卤倍他索、他扎罗汀、甲氨喋呤、氟轻松、加强的二丙酸倍他米松、氟轻松、丙酮化合物、阿维A、焦油洗发剂、戊酸倍他米松、糠酸莫米松、酮康唑、丙吗卡因/氟轻松、戊酸氢化可的松、氟羟可舒松、脲、倍他米松、丙酸氯倍他索/软化剂、丙酸氟替卡松、阿奇霉素、氢化可的松、增湿配方、叶酸、地奈德、煤焦油、双醋二氟拉松、依那西普叶酸盐、乳酸、甲氧沙林、hc/铋subgal/znox/resor、醋酸甲泼尼龙、泼尼松、遮光剂、哈西奈德、水杨酸、地蒽酚、氯可托龙戊酸酯、煤提取物、煤焦油/水杨酸、煤焦油/水杨酸/硫、去羟米松、地西泮、软化剂、氟轻松/软化剂、矿物油/蓖麻油/na lact、矿物油/花生油、石油/肉豆蔻酸异丙酯、补骨脂素、水杨酸、皂/三溴沙仑、硫柳汞/硼酸、塞来考昔、英夫利昔单抗、环胞菌素、alefacept、依法珠单抗、他克莫司、吡美莫司、PUVA、UVB、柳氮磺吡啶。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于牛皮癣关节炎的治疗剂的非限制性实例包括以下：甲氨喋呤、依那西普、罗非考昔、塞来考昔、叶酸、柳氮磺吡啶、萘普生、来氟米特、醋酸甲基泼尼松龙、吲哚美辛、硫酸羟氯喹、泼尼松、舒林酸、加强的二丙酸倍他米松、英夫利昔单抗、甲氨喋呤、叶酸盐、曲安萘德、双氯芬酸、二甲亚砜、吡罗昔康、双氯芬酸钠、酮洛芬、美洛昔康、甲基泼尼松龙、萘丁美酮、托美丁钠、卡泊三烯、环胞菌素、双氯芬酸钠/米索前列醇、氟轻松、硫酸葡糖胺、金硫苹果酸钠、重酒石酸氢可酮/apap、布洛芬、利塞膦酸钠、磺胺嘧啶、硫鸟嘌呤、伐地考昔、alefacept、依法珠单抗。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于再狭窄的治疗剂的非限制性实例包括以下：西罗莫司、紫杉醇、依维莫司、他克莫司、ABT-578、对乙酰氨基酚。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于坐骨神经痛的治疗剂的非限制性实例包括以下：氢可酮酒石酸氢盐/apap、罗非考昔、环苯扎林hcl、甲泼尼龙、萘普生、布洛芬、氢考酮hcl/对乙酰氨基酚、塞来考昔、伐地考昔、醋酸甲泼尼龙、泼尼松、磷酸可待因/apap、曲马多hcl/对乙酰氨基酚、美他沙酮、美洛昔康、美索巴莫、盐酸利多卡因、双氯酚酸钠、加巴喷丁、地塞米松、卡拉普多、酮咯酸氨丁三醇、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、地西泮、萘丁美酮、氢考酮hcl、替扎尼定hcl、双氯酚酸钠/米索前列醇、萘磺酸右丙氧芬/apap、asa/氢考酮/氢考酮ter、布洛芬/氢可酮bit、曲马多hcl、依托度酸、右丙氧芬hcl、阿米替林hcl、卡拉普多/磷酸可待因/asa、硫酸吗啡、多种维生素、萘普生钠、枸橼酸奥芬那君和替马西泮。
抗体或抗原部分可在本发明的方法和组合物中组合使用的用于SLE(狼疮)的治疗剂的优选实例包括以下：NSAIDS(例如双氯芬酸、萘普生、布洛芬、吡罗昔康、吲哚美辛)；COX2抑制剂(例如塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔)；抗疟疾剂(例如羟氯喹)；类固醇(例如泼尼松、泼尼松龙、布地奈德、地塞米松)；细胞毒素(例如硫唑嘌呤、环磷酰胺、麦考酚酸莫酯、甲氨喋呤)；PDE4的抑制剂或嘌呤合成抑制剂(例如Cellcept)。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与以下药剂进行组合：柳氮磺吡啶、5-氨基水杨酸、奥沙拉嗪、Imuran以及干扰促炎细胞因子(如IL-1)的合成、产生或作用的药剂(例如胱天蛋白酶抑制剂，如IL-1β转换酶抑制剂和IL-1ra)。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与以下药剂一起使用：T细胞信号转导抑制剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)或者靶向T细胞激活分子的分子(例如CTLA-4-IgG或抗B7家族抗体、抗PD-1家族抗体)。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与以下药剂进行组合：IL-11或抗细胞因子抗体(例如芳妥珠单抗(抗IFNg抗体))或者抗受体抗体(例如抗IL-6受体抗体)和抗B细胞表面分子的抗体。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与以下药剂一起使用：LJP 394(阿贝莫司)、消耗或灭活B细胞的药剂(例如利妥昔单抗(抗CD20抗体)、lymphostat-B(抗BlyS抗体)、TNF拮抗剂(例如抗TNF抗体)、D2E7(PCT公开号WO 97/29131；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、CDP 571、TNFR-Ig构建物、(p75TNFRIgG(ENBREL)和p55TNFRIgG(LENERCEPT))。
上述治疗剂的任何一个可以单独地或者互相组合，与通过肺部给药的TNFα抗体或其抗原结合部分组合在一起给予受试者。额外的药剂还可通过任何本领域技术人员公知的方法给予，包括但不限于腹膜内(包括静脉内或皮下)给予、口服给予和肺部给予。
以下实施例进一步说明本发明，这些实施例不应解释为限制本发明。本申请中引述的所有参考文献、专利和公布的专利申请的内容都通过引用并入本文。
实施例1：通过肺部递送途径系统递送TNFα抑制剂
阿达木单抗在食蟹猴中的吸入药代动力学
以下研究采用食蟹猴描述了阿达木单抗通过吸入实现治疗上期望的系统水平的可行性。本研究的一个主要目标是确定通过肺部途径给予的阿达木单抗的药代动力学。这包括将阿达木单抗的雾化气溶胶以10mg/kg的量通过两种不同的吸入方式给予经麻醉、经气管插管换气的猴子的肺，然后对阿达木单抗的吸入药代动力学进行血清测定表征。另外，用经荧光团标记的非可吸收葡聚糖(FD-150S)的标记气溶胶以相同方式给予，然后从不同的肺部区域直接回收该标记气溶胶，来确定通过每种吸入方式实现的肺部区域分布。
研究概要
本研究使用了非人灵长类动物食蟹猴，测定了在分别定向于中心气道和外周气道的两种不同吸入方式(浅吸入和深吸入)之后的血清阿达木单抗浓度曲线(profile)和药代动力学。这种定向是通过适当选择吸气换气方案以及气管插管深度和雾化气溶胶大小来实现。目标肺沉积剂量为10mg/kg阿达木单抗，并测量其血清浓度16天。用经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖(FD-150S)的标记气溶胶以相同方式给予，然后直接测量每个解剖区域中的肺沉积情况，来测定在每种吸入方式之后的肺部区域分布情况。
阿达木单抗的雾化似乎具有稳固性(robust)，没有造成明显的降解。所有的动物都耐受气溶胶，没有显示出局部或系统不适、并发症或异常的迹象。在所有的动物中，阿达木单抗在吸入后都明显达到系统循环，在2-4天的Tmax时Cmax达2.31-5.91mg/l，平均系统半寿期(T1/2)为13.3+6.7天。在动力学上，阿达木单抗的肺部吸收不是速率决定步骤；终末半寿期反映了从系统循环的清除。但是要指出的是，曲线显示在10-12天抗体水平突然下降，这可能是因为抗人应答(anti-humanresponse)所致。在这些吸入之后，药代动力学分析得出绝对生物利用度(F％)的数值为0.99-4.18％。不过，尽管成功定向了中心(C)和外周(P)肺部区域(分别由0.31和1.35的P/C比体现)，但各吸入方式之间的F％值差异并不显著。因此，很可能的是上支气管递送产生了与深肺递送一样多的阿达木单抗肺部吸收，这据推测是依靠FcRn介导的机制实现。
总之，与皮下注射相比，阿达木单抗血清浓度达到了在人体中的治疗上期望水平即5mg/l，Tmax为相对较快的2-4天。
I.材料和方法
大体上说，将动物在麻醉状态下进行口腔气管插管并进行BirdMark 7A呼吸机管路(respirator circuit)换气。通过在线Aeronebs将(50mg/ml阿达木单抗)在该管路中雾化成4.6和2.1μm溶液气溶胶，并以10mg/kg的目标肺沉积剂量分别以浅呼吸和深呼吸方案给予肺部。然后，通过经确证的ELISA测定阿达木单抗的血清浓度16天，以表征吸入药代动力学，与静脉注射曲线作比较。用经FITC标记的葡聚糖(FD150)的标记气溶胶，通过直接测量其在中心和外周肺部区域中的肺沉积情况，来分别测定这两种吸入方式的肺部区域分布情况。
I.A材料
本研究中使用了阿达木单抗(D2E7；
Figure GPA00001066684000811
50mg/ml)和参考标准品。每个小瓶含有于0.8mL缓冲溶液中的40mg阿达木单抗，不经稀释直接使用。注意，将2-4个小瓶进行组合以制备喷雾器的投送溶液，旨在实现每只猴子10mg/kg的肺沉积剂量，如下所述。分别通过离子交换HPLC(IE-HPLC)联合280nm紫外检测与特异性和灵敏性ELISA这样的经确证方法，测定非生物样品和生物样品中的抗体。
经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖(FD-150S；重均分子量＝150KD)购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)，用作非可吸收标记以测定在本研究所用两种不同吸入方式之后的肺部区域分布情况。其投与溶液是在5mM无菌磷酸缓冲盐水(PBS；pH 7.4)中以20mg/ml制备，分析工作应用到经确证的凝胶渗透色谱法(GPC)联合荧光检测(激发波长和发射波长分别为490和520nm)。对于精密度和准确度＜5％以及7-600ng/ml线性响应范围，该方法对于非生物样品和生物样品都得到充分确证。用来制备缓冲溶液如PBS和IE-HPLC流动相的化学品购自Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)，为最高分析级。
I.B动物
本研究共使用了七只雄性食蟹猴(收到时的体重为2.6-3.0kg)。每只猴子单独关养在严格控制温度、湿度和黑暗-光照循环周期的屋子中。猴子按照经批准的由兽医师和兽医技术员执行的每日强化计划(daily enrichment plan)得到精心保养和适应。动物经训练会将前臂或腿伸出笼框，这样在药代动力学研究中可以在动物清醒条件下采血样。食物或水没有限制。
在七只猴子中，有一只专门进行七个预试验，在这些预试验中，对本研究所采用的两种不同吸入方式即浅吸入和深吸入(分别为INH-S和INH-D)进行了测试和优化。同时，其余六只动物在以下两个时相研究中分别分成三组和两组：吸入或静脉注射后阿达木单抗药代动力学，和用FD-150S测定肺部区域分布情况。每个时相的分组情况在表1中说明。
表1：6只猴子的实验分组
Figure GPA00001066684000821
INH-S，浅吸入；INH-D，深吸入；IV，静脉注射；FD-150S，经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖(分子量：150KDa)
目标剂量：阿达木单抗为10mg/kg，FD-150S为2.5mg/kg
I.C阿达木单抗在猴子中的药代动力学：吸入药代动力学
对动物(体重3.0-3.8kg；对于INH-S和INH-d，n＝2；表1)肌肉内联合注射硫酸阿托品0.1mg/kg(0.4mg/ml；American Regent)、盐酸氯胺酮10.0mg/kg(
Figure GPA00001066684000822
100mg/ml；Phoenix Pharmaceuticals)和赛拉嗪1.0mg/kg(
Figure GPA00001066684000823
20mg/ml；Phoenix Pharmaceuticals)使其麻醉，以便通过吸入将阿达木单抗递送到肺部。在稳定的麻醉下，用有囊气管(ET)导管(内径3.0mm，外径4.2mm；Hudson RespiratoryCare)进行口腔气管插管，并用气动Bird Mark 7A呼吸机(VIASYSHealthcare)进行换气。在整个过程中每隔大约10分钟监测它们的生命体征，如心率、血压、体温和氧饱和百分率(SpO2)以及对眼睑刺激的眨眼反应，以确保充分麻醉和无异常情况。将能产生不同大小的阿达木单抗气溶胶的两种类型的Aeroneb Lab微泵喷雾器(Aerogen，Galway，爱尔兰)与Mark 7A呼吸机管路联机使用。因此，通过有差别地采用如下表2中所示的气管插管深度、呼吸机设置和气溶胶大小，可定向于浅和深肺部区域分布，同时保持可比较的10mg/kg肺剂量。
由于初步研究预测到喷雾器所装载的阿达木单抗有30-40％将在这个系统中沉积到肺中，故将1.5-2.8ml的50mg/ml阿达木单抗溶液(相当于75-140mg)充入喷雾器中，并在表2所示的每个呼吸机设置下进行气溶胶化，使得可达到10mg/kg的目标肺沉积剂量。在雾化过程中，非沉积的、被放出的阿达木单抗气溶胶用一次性在线过滤器(
Figure GPA00001066684000831
Tyce Healthcare)收集在呼吸机管路的出口。虽然雾化在6-10分钟时因喷雾杯干燥而终止，但换气还再继续进行5分钟；然后拔去气管(ET)导管，此时动物从麻醉中恢复意识，这通常是在诱导麻醉后1小时。
表2：定向于浅和深肺部区域分布的实验设置
Figure GPA00001066684000832
1对以连续气流气溶胶化到呼吸机管路中并以15l/分钟的真空流速收集在下一代制药撞击器(Next Generation Pharmaceutical Impactor)中的阿达木单抗测得的质量平均空气动力学直径(MMAD)。
在给药结束时，用100ml的PBS回收残留在喷雾器、呼吸机管路和放出过滤器(exhalation filter)中的阿达木单抗，并用IE-HPLC方法测定。因此，每个实验中阿达木单抗的“实际”肺沉积剂量，是通过喷雾器中的装载质量(50mg/ml乘以1.5-2.8ml装载体积)减去该残余阿达木单抗来估计。在吸入后，在以下不同时间点抽取静脉血样(1.2ml)：0.5、1、2、3、6、12和24小时，然后是2、4、6、8、10、12、14和16天。注意，这个血液采样是从通常在吸入后1小时从麻醉中恢复后的清醒动物进行的。在24℃下2,800g离心10分钟获得血清样品，于-70℃下保存以备通过ELISA进行阿达木单抗测定分析。血清测定相对于分组设盲。在每个研究过程中及研究之后，对动物仔细监测任何与插管或阿达木单抗暴露有关的呼吸并发症的迹象。这包括观察粘膜颜色、呼吸、行为和食欲是否正常和/或是否不存在咳嗽或呼吸困难。
I.D阿达木单抗在猴子中的药代动力学：静脉内注射药代动力学
按与上述的吸入药代动力学研究相同的方式，将动物(体重4.1和3.6kg；对于静脉内注射，n＝2；表1)进行麻醉和口腔气管插管。在正常生命体征下观察到充分的麻醉后，分别将0.82和0.72ml的50mg/ml阿达木单抗溶液经外侧隐静脉在3分钟内进行静脉内注射，达到10mg/kg的剂量。在注射后的不同时间点，即0.5、1、2、4、6、12和24小时，然后是2、4、6、8、10、12、14和16天，抽取静脉血样(1.2ml)，其血清于-70℃下保存以备分析。所用的采样和保存方法与如上所述的方法相同。同样每日对动物进行监测，以确保不存在异常。
I.E数据分析
图2和3中所述的血清阿达木单抗曲线各自代表每个动物个体，这使得可以计算以下药代动力学参数：通过数据观察，计算最大血清浓度(Cmax)和达到Cmax的时间(Tmax)；通过对4-8天之间的曲线进行自然对数线性回归，计算终末速率常数(λ)和半寿期(T1/2＝0.693/λ)；通过梯形法，计算到第8天时的血清浓度-时间曲线下面积(AUC0-8天)，并由AUC0-8天加外推的AUC得到无穷大时间的曲线下面积(AUC0-∞)；由剂量/AUC0-∞得到总身体系统清除率(CL)；由CL乘以平均停留时间(MRT)得到稳态下的表观分布容积(vss)，而MRT是从血清阿达木单抗曲线由力矩分析计算得到。
应指出的是，由于阿达木单抗的系统半寿期极长(14天)，且在第10天之后其血清浓度出乎意料地下降(图2和3)，在这些参数估计值中有一些进行了折中，如下所讨论。因此，分别用经剂量归一化的AUC0-8天和AUC0-∞这两种方式计算阿达木单抗吸入后的绝对生物利用度(F％)，分别表示为F％0-8天和F％0-∞。
I.F.在猴子中吸入后的肺部区域分布
实验是在约30天的足够冲失时间(washout period)后进行，目的是使可能的相互作用和/或并发症减至最低。按与上述的吸入药代动力学研究相同的方式，将动物(体重3.2-4.3kg；对于INH-S和INH-D，n＝3；表1)进行麻醉及口腔气管插管和换气，包括两种不同的吸入方式(浅和深)(表2)。在正常生命体征下观察到充分的麻醉后，将装载在喷雾器中的2.0ml的20mg/ml FD-150S溶液(PBS；pH 7.4)在呼吸机管路中气溶胶化6-8分钟至干，并据此按表2所述的浅和深呼吸方案以2.5mg/kg的目标剂量给予动物。非沉积的、被放出的FD-150S由过滤器收集在呼吸机管路的出口。在结束给予时，用250ml的PBS回收残留在喷雾器、呼吸机管路和放出过滤器(exhalation filter)中的FD-150S，然后通过经确证的荧光-GPC进行测定。因此，每个实验中FD-150S的“实际”肺沉积剂量，是通过喷雾杯中所充入的初始装载FD-150S(40mg/ml；20mg/ml乘以2.0ml)减去该残余FD-150S来估计。
在给予后紧接着，仍在氯胺酮/赛拉嗪/阿托品的麻醉下，以0.5ml/kg的剂量静脉内注射(390mg/ml戊巴比妥钠和50mg/ml苯妥英钠，Virbac AH)，使动物安乐死。打开它们的胸腔，然后通过手术整体切除肺叶、气管和支气管，于-70℃下冷冻以备分析。如下开始进行肺部区域分布的测定：对气管、支气管以及每个肺叶的内部和外部区域(即中心和外周区域，如图1中所示)进行区域组织解剖；每个肺叶按重量解剖成两半，称为中心区域和外周区域。用生物匀浆机(Biospec Products)将每个解剖组织在10体积PBS中匀浆，然后在10℃下2,800g离心15分钟。适当稀释后，用0.2μm针头过滤器(15mm；再生纤维素；Corning)过滤上清液，通过经确证的荧光-GPC分析FD-150S。将从7个肺叶的内部区域和外部区域(图1)分别回收的FD-150S进行组合，以分别得到中心和外周肺叶沉积。然后，由外周肺沉积质量除以从中心肺、气管和支气管回收的FD-150S的总和，计算出每种吸入方式的外周-中心(P/C)分布比。
II.结果
将阿达木单抗喷雾到呼吸机管路并由下一代制药撞击器(NextGeneration Pharmaceutical Impactor)收集，然后进行气溶胶大小表征证实了该抗体具有稳固性，没有造成明显的降解，这由它们的IE-HPLC色谱曲线与参考标准品相比没有改变得到证明。所有动物都很耐受气溶胶，不管处理方式如何都没有显示局部或系统不良反应的迹象。在进行给予的麻醉期间监测的所有生命体征都稳定在麻醉的正常范围，例如心率为90-125次/分钟、血压为115-180mmHg、体温为36.0-37.6℃，SpO2为83-99％。整个期间没有不适、并发症或异常的迹象。对在肺部区域分布研究中每只动物切除的肺进行肉眼检验，结果外观正常，没有水肿或粘膜颜色变化。
总体而言，所有动物都耐受阿达木单抗气溶胶，没有局部或系统不适、并发症或异常的迹象。阿达木单抗的肺沉积剂量为10.3-14.0mg/kg，在2-4天的Tmax时Cmax达2.3-5.9mg/l，平均系统半寿期为13.3+6.7天。它的肺吸收在动力学上不是速率决定步骤，所显示的终末半寿期与静脉内注射后的终末半寿期一致。但是，血清曲线显示在吸入后和注射后10-12天抗体水平突然下降，这可能是因为抗人应答所致。因此，用10天的血清数据进行药代动力学分析，得出吸入后的绝对生物利用度(F％)为1.0-4.2％。值得注意的是，尽管两种吸入方式都成功定向了中心(C)和外周(P)肺部区域(分别由0.31和1.35的FD150P/C比体现)，但在两种吸入方式之间任何药代动力学参数的差异都不显著。
II.A阿达木单抗在猴子中的药代动力学
两种不同吸入方式后血清阿达木单抗浓度对时间曲线和得出的药代动力学参数分别在图2和表3显示。估计的肺沉积剂量在10.3-14.0mg/kg的范围(表3)，这成功地与10mg/kg的目标剂量相一致。在所有动物中，抗体都明显达到系统循环，而Cmax在2.31-5.91mg/l的范围内(3.88+1.57mg/l；表3)，仍比人体中的所需抗体水平即5mg/l(阿达木单抗包装插页上的处方信息)稍低或相当。值得注意的是，发现Tmax在2-4天出现，较迟，这暗示不管什么吸入方式阿达木单抗从肺的吸收都相当慢。相反，在猴子中进行的促红细胞生成素(Epo)和卵泡刺激激素(FSH)的吸入Fc-融合蛋白的类似研究报道说Tmax＜2天，较短(Bitonti等人.(2004)；Low等人.(2005)Hum Reprod20：1805-1813)。
有趣的是，各曲线一致地显示在10-12天血清浓度突然下降，导致在吸入12天后抗体水平低于定量限度，可以忽略(图3)。这个下降或许是在猴子中可能产生的对阿达木单抗的抗人免疫应答的结果。的确，类似的观察结果明显在接受静脉内注射的动物中继续出现，如图3所示。为此，随后的药代动力学分析如λ、T1/2、AUC和F％测定仅采用到第8天时为止所获得的血清数据，尽管在进行曲线外推时可能有所折中。即便如此，从4-8天的数据得到的四只猴子的平均T1/2为13.3+6.7天(6.8-20.4天；表3)，这个数值与人的数值(14天)(Humira处方信息；包装插页)相当。
阿达木单抗以10mg/kg进行静脉内注射后的血清浓度曲线在图3中显示，得出的药代动力学参数列于表4。虽然到第10天时曲线似乎是双相的(bi-phasic)，但之后观察到类似的抗体水平意外下降。尽管如此，到第8天为止从血清数据得到的T1/2为14.7天和10.8天(表4)，这两个数值与吸入曲线所见的数值(表3)差别不显著。因此很可能阿达木单抗从肺的吸收在动力学上不是限速步骤，而相反，它从系统循环的清除在动力学上是最慢的。值得注意的是，图3所示的静脉内曲线得出0.12和0.13ml/hr/kg的较低CL、18.9和19.4ml/kg的较小Vss；在人体中的相应数值已报道为0.17ml/hr/kg和67-68ml/kg(Humira处方信息；包装插页)。
由于在10天之后血清阿达木单抗浓度出乎意料地下降到可忽略的水平(见图2和3)，进一步分析这些曲线的选项限于以下两个之一：使用到第8天为止的数据而不考虑8天后的分布，或者另加进行动力学外推以得到8天后到无穷大时间的数据。相应地，基于这两个选项测得的AUC和F％的数值在表3和4中显示。注意，对吸入进行的F％计算还考虑了在每只动物进行剂量归一化，假定阿达木单抗在猴子中的药代动力学为线性。结果，不管数据处理方式如何，F％都估计在0.99至4.18％的范围(表3)。
II.B浅和深肺部区域分布的作用
本研究所采用的两种不同吸入方式后的肺部区域分布和FD-150S在表5和图4中显示。6只猴子中的肺沉积剂量在2.18-3.82mg/kg的范围(2.90+0.72mg/kg；表5)，与2.5mg/kg的目标剂量相当一致。此外，该分析得出在该肺沉积剂量范围内回收率＞90％(93.7+3.3％；表5)，这提示我们的肺沉积剂量估计方法是正确的，所得的肺部区域分布数据很可能代表阿达木单抗的实际分布。因此，浅和深呼吸方案加上操纵插管深度和气溶胶大小(表2)的确分别造成较大的(～60％)中心和外周肺部区域分布，如表5和图4所示。
表6总结了从表5所示数据计算的在浅吸入和深吸入后阿达木单抗的平均生物利用度(F％)及肺部区域分布的PC比。在两种吸入方式之间这些F％数值的差异并不突出，没有明显区别，尽管分别在0.31和1.35的P/C比下获得成功的中心和外周肺递送；在两种情况中，每一组两只动物的平均F％范围在1.7-2.6％。因此，很可能上支气管气道递送产生的阿达木单抗肺部吸收与深肺递送一样多，据推测是由FcRn介导的机制所致。表3：在4只猴子中以10mg/kg的标称剂量进行两种吸入方式后到第8小时为止，从血清阿达木单抗浓度对时间曲线得出的药代动力学参数。曲线在图2中显示。
Figure GPA00001066684000891
LDD，肺沉积剂量；Cmax，观测的最大血清浓度；Tmax，观测的达到Cmax的时间；T1/2，系统半寿期；AUC0-8hr，到第8小时为止血清浓度对时间曲线下方面积(AuC)；AuC0-∞，到无穷大时间的AuC；F％0-8hr，从AUC0-8hr计算的绝对生物利用度；F％0-∞，从AUC0-∞计算的绝对生物利用度。
表4：在2只猴子中以10mg/kg的剂量进行静脉内注射后到第8小时为止，从血清阿达木单抗浓度对时间曲线得出的药代动力学参数。曲线在图3中显示。
Figure GPA00001066684000892
T1/2，系统半寿期；CL，系统总身体清除；Vss，稳态下的表观体积分布；AUC0-8hr，到第8小时为止血清浓度对时间曲线下方面积(AUC)；AUC0-∞，到无穷大时间的AUC。
表5：在6只猴子中以2.5mg/kg的标称剂量进行两种吸入方式后FD-150S的肺部区域分布。
Figure GPA00001066684000893
LDD，肺沉积剂量；TB，气管支气管；C，中心肺叶；P，外周肺叶
％回收＝[从整个肺回收的总FD-150S]/[肺沉积剂量]x100
％分布＝[从每个肺部区域切片回收的FD-150S]/[从整个肺回收的总FD-150S]x100
为强调与之前对Epo-Fc融合蛋白的发现(Bitonti等人.2004)有关的问题，在猴子中进行浅和深吸入后从阿达木单抗(图2)和Epo-Fc(Bitonti等人.(2004))的血清浓度曲线计算经剂量归一化的AUC0-∞(AUC0-∞除以肺沉积剂量)。这些总结于表7。值得注意的是，在浅吸入后这些Fc-分子的经剂量归一化的AUC0-∞相似(分别为8.3和6.3kg·天/l；表7)，这提示它们的吸收动力学几乎相当，据推测是由FcRn介导的机制所致。因此，这些Fc-分子的肺吸收动力学的差异更确切地存在于外周肺区域的吸收动力学，对于Epo-Fc显示极微的吸收，尽管肺膜通常显示有利的药物吸收特征。显然，这个推论假定了阿达木单抗与Epo-Fc之间有类似的系统处置动力学，由于它们的系统半寿期相似(分别为14天和16天)，这很可能事实如此(Bitonti等人.(2004)；Humira包装插页)。
表6：在猴子中浅和深吸入后阿达木单抗的平均绝对生物利用度(F％)及它们的肺部区域分布的P/C比。
Figure GPA00001066684000901
P/C比，外周-中心肺分布比；F％0-8hr和F％0-∞，分别从AUC0-8hr和AUC0-∞计算的绝对生物利用度数值
表7：在猴子中浅和深吸入后从阿达木单抗(图2)和Epo-Fc[2]的血清浓度曲线计算的经剂量归一化的AUC0-∞
Figure GPA00001066684000902
经剂量归一化的AUC0-∞＝[AUC0-∞]/[肺沉积剂量](kg·天/l)
III.结论
以10mg/kg吸入阿达木单抗在相对较快的Tmax即2-4天就达到其治疗上所需的血清水平即4mg/l，尽管F％为较低的1.0-4.2％。上支气管气道递送似乎产生与深肺递送一样多的阿达木单抗肺部吸收，这据推测是依靠FcRn介导的机制实现。以上在猴子中进行的研究证明，虽然阿达木单抗的肺部递送在2-4天的相对较快Tmax实现了与人体中的皮下方案所需的抗体水平相当的系统抗体水平(2.31-5.91mg/l；表3)，但其绝对生物利用度(F％)仍较低，为0.99-4.18％。这似乎与最近的发现相一致，包括本文描述的那些最近发现，这提示FcRn介导的从肺部的胞转吸收是一个高亲和力和低容量系统，因此它在大鼠中的速度保持＜100ng/hr(Kim等人.(2004)Am J Physiol 287：L616；Sakagami等人.(2006)Pharm Res 23：270；和Sakagami等人.(2006)Respiratory Drug Delivery X，1：57)。此外，在气道中，肺泡巨噬细胞显示会吞噬IgG和Fc-分子，可能还包括阿达木单抗，这进一步减少了供肺部吸收的库存，从而造成低F％(Lonbry等人.(2004)Am JPhysiol 286：L1002)。正在显现的证据提示，TNFα是有希望的哮喘治疗靶标，已证实抑制它能改善患者的气道超反应性和肺功能(Russo等人.(2005)Clin Sci(Lond)109：135；Howarth等人.(2005)Thorax60：1012；Berry等人.(2005)Proc Am Throacic Sco 2：A569)。在这个情况中，为了以较低的系统水平实现最大化的长时间局部作用，单独的阿达木单抗会是有利的。
总之，将阿达木单抗给予了食蟹猴的肺部，并在定向于中心和外周气道的两种不同吸入方式之后表征了其血清药代动力学。在所有动物中，阿达木单抗通过吸入明显达到了系统循环，在2-4天产生的2.31-5.91mg/l的Cmax，然后是13.3+6.7天的平均系统T1/2。在动力学上，阿达木单抗的肺部吸收不是速率决定步骤；终末半寿期反映了从系统循环的清除。但是要注意，曲线在10-12天显示抗体水平突然下降，这可能是因为抗人应答所致。药代动力学分析得出在这些吸入之后绝对生物利用度(F％)数值为0.99-4.18％。阿达木单抗被成功定向于中心(C)和外周(P)肺区域，这体现在P/C比分别为0.31和1.35。两种吸入方式之间F％值的差异并不显著。因此，很可能上支气管递送产生了与深肺递送一样多的阿达木单抗肺部吸收，这据推测是由FcRn介导的机制所致。即便如此，由于肺沉积剂量为10mg/kg，与皮下注射(Humira包装插页)相比，血清浓度在2-4天的相对较快Tmax就达到在人体中的治疗上所需水平即5mg/l。
实施例2：供肺部递送的Tnfα抑制剂的稳固性
气溶胶化阿达木单抗
Figure GPA00001066684000921
的L929抗原中和生物测定
以下研究用L929抗原中和生物测定描述了阿达木单抗经喷雾以供吸入递送的稳固性。进行这个研究是为了确保阿达木单抗的生物活性不被喷雾所损害。
将能产生2.1μm气溶胶的Aeroneb Lab喷雾器在换气管路中与Bird Mark 7A呼吸机在线使用，用于对2.5ml阿达木单抗(
Figure GPA00001066684000922
50mg/ml)溶液进行喷雾。这个配置与实施例1中所采用的相同，例外的是在没有动物情况下操作。在呼吸机控制的浅和深呼吸方案下(表2)，喷雾的气溶胶通过气泡捕集器用50mM磷酸缓冲盐水(pH 7.4)回收，样品于-70℃下保存以备进行生物测定。
将L929即鼠纤维肉瘤细胞系(#ATCC CCl 1NCTC克隆929)用作抗原中和测定(Aggarwal，B.B.等人.(1985)J.Biol.Chem.260，2345-2354)。将细胞在RPMI和10％胎牛血清中进行培养。将不同数量的经稀释阿达木单抗对照(即不喷雾)或经喷雾阿达木单抗样品与500pg/ml抗原即人肿瘤坏死因子α(hTNFα)混合，在96孔板中37℃下温育30分钟。随后，将50,000个细胞连同作为代谢抑制剂的1μg/ml放线菌素-D一起加到每个孔中。在37℃下温育18小时后，加入50μl的20％SDS并在37℃下温育过夜，将细胞裂解。用96孔板读板器在570和630nm的双波长下，对每个裂解物样品进行光密度(OD)测定。中和性抗体的IC50值是用非线性回归曲线拟合程序(GraphPadSoftware，Inc.，La Jolla，CA)从OD值和阿达木单抗浓度的S形关系(sigmoidal relationship)确定。尽管在细胞裂解前通过MTT(3-{4，5-二甲基噻唑-2-基}2，5-二苯基溴化四唑)方法确保了细胞存活力，然而0.07至0.15的低OD值表明细胞死亡。
如同在许多这个类型的生物测定中，认为IC50值差异小于2倍是在该测定的技术限度内，因此可以断定试验样品的生物活性不被损害。表8显示了从每个阿达木单抗试验样品获得的衍生IC50值。不管是浅呼吸方案还是深呼吸方案(分别为INH-S和INH-D)，通过AeronebLab喷雾器进行气溶胶化的阿达木单抗的生物活性都显示变化不超过2倍。这证明了阿达木单抗通过喷雾以供吸入递送的稳固性。
表8：由L929抗原中和生物测定得出的经喷雾阿达木单抗的IC50值
  对照   浅(INH-S)   深(INH-D)
  16.60   14.98   11.82
  13.76   13.47   7.60
  16.33
通过引用并入本文
在本申请通篇中可能引述到的所有被引述参考资料(包括参考文献、专利、专利申请和网站)的内容，都明确地通过引用为任何目的整体并入本文中，这些参考资料中所引述的参考资料也同样引用。除另有指明的外，本发明的实施将应用到本领域公知的免疫学、分子生物学和细胞生物学常规技术。
等同方案
本领域技术人员会认识到或者仅仅用常规实验就能够确定出本文所述的本发明具体实施方案的许多等同方案。这些等同方案意在被以下权利要求书涵盖。本申请通篇中引述的所有参考文献、专利和公布的专利申请的内容通过引用并入本文。
序列表
<110>Abbott Biotechnology Ltd.et al.
<120>Methods and Compositions for Pulmonary Delivery of a TNFa Inhibitor
<130>BBI-258CPPC
<140>PCT/US2008/008458
<141>2008-10-07
<150>60/959426
<151>2007-13-07
<160>37
<170>FastSEQ for Windows Vers ion 4.0
<210>1
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗轻链可变区
<400>1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>2
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗重链可变区
<400>2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>3
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗轻链可变区CDR3
<221>VARIANT
<222>9
<223>Xaa＝Thr or Ala
<400>3
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa
 1               5
<210>4
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗重链可变区CDR3
<221>VARIANT
<222>12
<223>Xaa＝Tyr or Asn
<400>4
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa
 1               5                  10
<210>5
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗轻链可变区CDR2
<400>5
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
 1               5
<210>6
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗重链可变区CDR2
<400>6
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu
 1               5                  10                  15
Gly
<210>7
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗轻链可变区CDR1
<400>7
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala
 1               5                  10
<210>8
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗重链可变区CDR1
<400>8
Asp Tyr Ala Met His
 1               5
<210>9
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>2SD4轻链可变区
<400>9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
 1               5                  10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
                85                  90                  95
Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>10
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>2SD4重链可变区
<400>10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>11
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>2SD4轻链可变区CDR3
<400>11
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala
 1               5
<210>12
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>EP B12轻链可变区CDR3
<400>12
Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala
 1               5
<210>13
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VL10E4轻链可变区CDR3
<400>13
Gln Lys Tyr Gln Arg Ala Pro Tyr Thr
 1               5
<210>14
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VL100A9轻链可变区CDR3
<400>14
Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr
 1               5
<210>15
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VLL100D2轻链可变区CDR3
<400>15
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr
 1               5
<210>16
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VLL0F4轻链可变区CDR3
<400>16
Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr
 1               5
<210>17
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LOE5轻链可变区CDR3
<400>17
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr
 1               5
<210>18
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VLLOG7轻链可变区CDR3
<400>18
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn
 1               5
<210>19
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VLLOG9轻链可变区CDR3
<400>19
Gln Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr
 1               5
<210>20
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VLLOH1轻链可变区CDR3
<400>20
Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn
 1               5
<210>21
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VLLOH10轻链可变区CDR3
<400>21
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser
 1               5
<210>22
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VL1B7轻链可变区CDR3
<400>22
Gln Gln Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr
 1               5
<210>23
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VL1C1轻链可变区CDR3
<400>23
Gln Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr
 1               5
<210>24
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VL0.1F4轻链可变区CDR3
<400>24
Gln Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Tyr Thr
 1               5
<210>25
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VL0.1H8轻链可变区CDR3
<400>25
Gln Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr
 1               5
<210>26
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>LOE7.A轻链可变区CDR3
<400>26
Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala
 1               5
<210>27
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>2SD4重链可变区CDR3
<400>27
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn
 1               5                  10
<210>28
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1B11重链可变区CDR3
<400>28
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys
 1               5                  10
<210>29
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1D8重链可变区CDR3
<400>29
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr
 1               5                  10
<210>30
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1A11重链可变区CDR3
<400>30
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp
 1               5                  10
<210>31
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1B12重链可变区CDR3
<400>31
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr
 1               5                  10
<210>32
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1E4重链可变区CDR3
<400>32
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr
 1               5                  10
<210>33
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1F6重链可变区CDR3
<400>33
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr
 1               5                  10
<210>34
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>3C-H2重链可变区CDR3
<400>34
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr
 1               5                  10
<210>35
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>VH1-D2.N重链可变区CDR3
<400>35
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn
 1               5                  10
<210>36
<211>321
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗轻链可变区
<400>36
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtagggga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcaagtca gggcatcaga aattacttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctacagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaagg tataaccgtg caccgtatac ttttggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                           321
<210>37
<211>363
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>阿达木单抗重链可变区
<400>37
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ccggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcgg cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggaatg ggtctcagct atcacttgga atagtggtca catagactat 180
gcggactctg tggagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggat acggccgtat attactgtgc gaaagtctcg 300
taccttagca ccgcgtcctc ccttgactat tggggccaag gtaccctggt caccgtctcg 360
agt                                                               363

Claims (68)

1.一种治疗患有其中TNFα活性是有害的疾病的受试者的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂肺部递送给受试者，使得其中TNFα是有害的疾病得到治疗。
2.一种实现TNFα抑制剂在受试者体内系统循环的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂通过吸入给予受试者的中心和外周肺区域，使得实现TNFα抑制剂的系统循环。
3.一种实现TNFα抑制剂在受试者体内系统循环的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂通过吸入给予受试者的外周肺区域，使得实现TNFα抑制剂的系统循环。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述TNFα抑制剂配制在适合吸入的组合物中。
5.权利要求4的方法，其中所述组合物选自可吸入粉末、含抛射剂的气溶胶和不含抛射剂的可吸入溶液剂。
6.权利要求5的方法，其中所述可吸入粉末通过干粉吸入器(DPI)给予受试者。
7.权利要求5的方法，其中所述含有抛射剂的气溶胶通过定量吸入器(MDI)给予受试者。
8.权利要求5的方法，其中所述不含抛射剂的可吸入溶液剂通过喷雾器给予受试者。
9.权利要求1-8中任一项的方法，所述方法进一步包括对TNFα抑制剂实现Tmax小于或等于约4天。
10.权利要求1-8中任一项的方法，其中将所述TNFα抑制剂分配到受试者的中心肺区域，使得实现约0.3的P/C比。
11.权利要求1-8中任一项的方法，其中将所述TNFα抑制剂分配到受试者的外周肺区域，使得实现约1.3的P/C比。
12.权利要求1-8中任一项的方法，其中实现至少约2.3mg/L的TNFα抑制剂的最大血清浓度(Cmax)。
13.权利要求1-8中任一项的方法，其中实现至少约4.2mg/L的TNFα抑制剂Cmax。
14.权利要求1-8中任一项的方法，其中实现至少约5mg/L的TNFα抑制剂Cmax。
15.权利要求1-8中任一项的方法，其中在给予TNFα抑制剂后实现至少一种选自以下的药代动力学特性：Tmax小于或等于约4天、绝对生物利用度(F％)为至少约0.99％，和Cmax为至少约2.3mg/L。
16.权利要求15的方法，其中在给予TNFα抑制剂后实现Tmax为约2至约4天。
17.权利要求15的方法，其中在给予TNFα抑制剂后实现Cmax为约2.3至约5.9mg/L。
18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述受试者是人。
19.权利要求2-17中任一项的方法，其中所述受试者患有其中TNFα活性是有害的疾病。
20.权利要求1或19的方法，其中所述其中TNFα活性是有害的疾病选自自身免疫疾病、脊柱关节病、肠病、皮肤病和肺病。
21.权利要求20的方法，其中所述自身免疫疾病是类风湿性关节炎或青年期类风湿性关节炎。
22.权利要求20的方法，其中所述脊柱关节病是强直性脊椎炎或牛皮癣关节炎。
23.权利要求20的方法，其中所述肠病是节段性回肠炎。
24.权利要求20的方法，其中所述皮肤病是牛皮癣。
25.权利要求20的方法，其中所述肺病是慢性阻塞性肺病或哮喘。
26.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述TNFα抑制剂是TNFα抗体，或其抗原结合部分，或融合蛋白。
27.权利要求26的方法，其中所述融合蛋白是依那西普。
28.权利要求26的方法，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分选自英夫利昔单抗、戈利木单抗和阿达木单抗。
29.权利要求26的方法，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分是选自人源化抗体、嵌合抗体、人抗体和多价抗体的抗体。
30.权利要求29的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分以1x10-8M或更低的Kd和1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Kd和Koff速率常数都通过表面等离振子共振进行测定；和在标准的体外L929测定中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。
31.权利要求29的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分具有以下特性：
a)以1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Koff速率常数通过表面等离振子共振进行测定；
b)具有这样的轻链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成；
c)具有这样的重链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成。
32.权利要求29的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含具有这样的CDR3结构域的轻链可变区(LCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换修饰而成；和包含具有这样的CDR3结构域的重链可变区(HCVR)，所述CDR3结构域包含SEQID NO：4的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换修饰而成。
33.权利要求29的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
34.一种治疗受试者的肺部疾病的方法，所述方法包括将TNFα抑制剂肺部递送给受试者，其中所述肺部给药包括将TNFα抑制剂局部递送到受试者的肺。
35.权利要求34的方法，其中所述肺部疾病是哮喘或慢性阻塞性肺病(COPD)。
36.权利要求34或35的方法，其中所述TNFα抑制剂是TNFα抗体，或其抗原结合部分，或融合蛋白。
37.权利要求36的方法，其中所述融合蛋白是依那西普。
38.权利要求37的方法，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分选自英夫利昔单抗、戈利木单抗和阿达木单抗。
39.权利要求36的方法，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分是选自人源化抗体、嵌合抗体、人抗体和多价抗体的抗体。
40.权利要求39的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分以1x10-8M或更低的Kd和1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Kd和Koff速率常数都通过表面等离振子共振进行测定；和在标准的体外L929测定中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。
41.权利要求39的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分具有以下特性：
a)以1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Koff速率常数通过表面等离振子共振进行测定；
b)具有这样的轻链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成；
c)具有这样的重链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成。
42.权利要求39的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含具有这样的CDR3结构域的轻链可变区(LCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换修饰而成；和包含具有这样的CDR3结构域的重链可变区(HCVR)，所述CDR3结构域包含SEQID NO：4的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换修饰而成。
43.权利要求39的方法，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
44.一种包含TNFα抗体和药物可接受载体的药物组合物，其中所述药物组合物适合于由受试者吸入，且选自可吸入粉末或干粉组合物、含抛射剂的气溶胶和不含抛射剂的可吸入溶液剂或混悬剂。
45.权利要求44的药物组合物，其中所述药物可接受载体包含乳糖粉末或葡萄糖粉末。
46.权利要求44或45的药物组合物，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分是选自人源化抗体、嵌合抗体、人抗体和多价抗体的抗体。
47.权利要求44或45的药物组合物，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分选自英夫利昔单抗、戈利木单抗和阿达木单抗。
48.权利要求46的药物组合物，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分以1x10-8M或更低的Kd和1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Kd和Koff速率常数都通过表面等离振子共振进行测定；和在标准的体外L929测定中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。
49.权利要求46的药物组合物，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分具有以下特性：
a)以1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Koff速率常数通过表面等离振子共振进行测定；
b)具有这样的轻链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成；
c)具有这样的重链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成。
50.权利要求46的药物组合物，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含具有这样的CDR3结构域的轻链可变区(LCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换修饰而成；和包含具有这样的CDR3结构域的重链可变区(HCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换修饰而成。
51.权利要求46的药物组合物，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
52.权利要求48-51中任一项的药物组合物，所述药物组合物包含至少约40mg的TNFα抗体或其抗原结合部分。
53.权利要求48-51中任一项的药物组合物，所述药物组合物包含约40-160mg的TNFα抗体或其抗原结合部分。
54.一种用以将TNFα抑制剂肺部给予受试者的干粉吸入器(DPI)装置，所述DPI装置包括：
装着包含TNFα抑制剂的可吸入粉末或干粉组合物的贮存器，和
用以将可吸入粉末或干粉组合物通过吸入引入到受试者的构件。
55.权利要求54的DPI装置，其中所述DPI装置是单剂量或多剂量吸入器。
56.权利要求54的DPI装置，其中所述DPI装置是预定量的或装置定量的。
57.一种用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的定量吸入器(MDI)装置，所述MDI装置包括：
装着包含TNFα抑制剂的气溶胶和抛射剂的压力罐，和
用于将气溶胶通过吸入引入到受试者的构件。
58.一种与用于将TNFα抑制剂肺部给予受试者的喷雾器装置一起使用的容器，所述容器装着包含TNFα抑制剂的不含抛射剂的可吸入溶液剂或混悬剂。
59.权利要求54-58任一项的装置或容器，其中所述TNFα抑制剂是TNFα抗体，或其抗原结合部分，或融合蛋白。
60.权利要求59的装置或容器，其中所述融合蛋白是依那西普。
61.权利要求59的装置或容器，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分是选自人源化抗体、嵌合抗体、人抗体和多价抗体的抗体。
62.权利要求61的装置或容器，其中所述TNFα抗体或其抗原结合部分选自英夫利昔单抗、戈利木单抗和阿达木单抗。
63.权利要求61的装置或容器，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分以1x10-8M或更低的Kd和1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Kd和Koff速率常数都通过表面等离振子共振进行测定；和在标准的体外L929测定中以1x10-7M或更低的IC50中和人TNFα细胞毒性。
64.权利要求61的装置或容器，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分具有以下特性：
a)以1x10-3s-1或更低的Koff速率常数从人TNFα解离，所述Koff速率常数通过表面等离振子共振进行测定；
b)具有这样的轻链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成；
c)具有这样的重链CDR3结构域：它包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12处的1-5个保守氨基酸置换修饰而成。
65.权利要求61的装置或容器，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含具有这样的CDR3结构域的轻链可变区(LCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：3通过在位置1、4、5、7或8处的单丙氨酸置换修饰而成；和包含具有这样的CDR3结构域的重链可变区(HCVR)，所述CDR3结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列或者从SEQ ID NO：4通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11处的单丙氨酸置换修饰而成。
66.权利要求61的装置或容器，其中所述人TNFα抗体或其抗原结合部分包含有包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
67.权利要求62-66中任一项的装置或容器，所述装置或容器包含至少约40mg的TNFα抗体或其抗原结合部分。
68.权利要求62-66中任一项的装置或容器，所述装置或容器包含约40-160mg的TNFα抗体或其抗原结合部分。
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