CN101631777A

CN101631777A - 罗苏伐他汀的三醇形式

Info

Publication number: CN101631777A
Application number: CN200880008162A
Authority: CN
Inventors: V·尼达姆-希尔德谢姆; A·巴拉诺夫; I·韦恩伯格
Original assignee: Teva Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: Teva Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date: 2007-03-13
Filing date: 2008-03-13
Publication date: 2010-01-20

Abstract

本发明提供罗苏伐他汀三醇及其作为分析罗苏伐他汀的参比标准的用途。

Description

罗苏伐他汀的三醇形式

相关申请的交叉参照

本申请要求2007年3月13日提交的美国临时申请号60/906,914和2007年3月15日提交的60/918,466的权益，它们的公开通过引用全文结合于本文中。

发明领域

本发明涉及罗苏伐他汀三醇及其作为分析罗苏伐他汀的参比标准的用途。

发明背景

他汀类药物(Statins)是目前可获得的用于在处于心血管疾病风险的患者中降低血流中低密度脂蛋白(LDL)颗粒浓度的治疗上最有效的药物。因此，采用他汀类药物治疗高胆固醇血症、高脂蛋白血症和动脉粥样硬化。血流中的高水平LDL已涉及阻碍血液流动的冠状动脉病变的形成并可能破坏和促进血栓形成。Goodman和Gilman，治疗学的药理学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)，879页(第9版，1996年)。

他汀类药物通过竞争性抑制3-羟基-3-甲基-戊二酰基-辅酶A(“HMG-CoA”)还原酶，抑制人的胆固醇生物合成。HMG-CoA还原酶促进HMG转化为甲羟戊酸(mevalonate)，这是胆固醇生物合成中决定速度的步骤。胆固醇生成的减少令LDL受体的量增加，从而相应地减少血流中LDL颗粒的浓度。血流中LDL水平的下降降低冠状动脉疾病的风险。J.A.M.A.1984，251，351-74。

目前可用的他汀类药物包括洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀和阿托伐他汀。以内酯形式给予洛伐他汀(公开于美国专利号4,231,938)和辛伐他汀(公开于美国专利号4,444,784)。吸收后，内酯环经化学或酶水解，在肝脏中被打开，并生成活性羟基酸。

作为钠盐给予普伐他汀(公开于美国专利号4,346,227)。也作为钠盐给予的氟伐他汀(公开于美国专利号4,739,073)和西立伐他汀(公开于美国专利号5,006,530和5,177,080)完全是合成的化合物，其部分结构有别于含有六氢萘环的这类真菌衍生物。作为钙盐给予阿托伐他汀和两种新的“超级他汀类”，罗苏伐他汀和匹伐他汀。

Shionogi开发的罗苏伐他汀钙(双(+)7-[4-(4-氟代苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲基磺酰基氨基嘧啶)-5-基]-(3R，5S)-二羟基-(E)-6-庚烯酸)一钙是HMG-CoA还原酶抑制剂，每日口服一次以治疗高脂血症(Ann Rep，Shionogi，1996；直接通信(Direct communications)，Shionogi，1999年2月8日和2000年2月25日)。罗苏伐他汀钙具有以下化学式：

罗苏伐他汀钙以商品名

上市以治疗哺乳动物，例如人。根据

的生产者，其以日剂量约5mg-约40mg给予。针对需要较不急剧降低LDL-C的患者或对肌病具有诱病因素的患者，推荐5mg剂量，而普通患者的推荐剂量为10mg，具有显著高胆固醇血症和显著脂质目标(＞190mg/dL)的患者的剂量为20mg，而对较低剂量不响应的患者的剂量为40mg。

美国专利号5,260,440公开罗苏伐他汀、其钙盐(2∶1)及其内酯形式并对它们提出了权利要求。该‘440专利的方法通过在回流下，在乙腈中，使4-(4-氟代苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲基磺酰基氨基)-5-嘧啶甲醛与(3R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-5-氧代-6-三苯基亚正膦基己酸甲酯反应，制备罗苏伐他汀。再用氟化氢裂解甲硅烷基，随后用四氢呋喃(THF)中的硼氢化钠(NaBH₄)和二乙基甲氧基硼烷还原，得到罗苏伐他汀的甲酯。

然后于室温下，乙醇中，用氢氧化钠(NaOH)水解该酯，随后除去乙醇并加入醚，得到罗苏伐他汀的钠盐。再将钠盐转化为钙盐。使钠盐溶解于水并保持在氮气氛下。然后向该溶液中加入氯化钙，生成罗苏伐他汀钙(2∶1)沉淀。公开于‘440专利的中间体的制备方法通过引用结合于本文中。

反应产物的混合物极少是足以符合药物标准的单一化合物纯。在多数情况下，会存在反应副产品和副产物和用于反应的辅助试剂。在将包含于产物混合物中的罗苏伐他汀加工为活性药物成分(“API”)期间的某些步骤中，必须典型地经HPLC或GC分析，分析罗苏伐他汀的纯度，以确定其是否适于继续加工或最终适于用于药物产品。罗苏伐他汀不必绝对纯。绝对纯度是难以达到的理论上的理想值。为确保不因杂质的存在而降低所制备的API的临床使用的安全性，宁可设定纯度标准。在美国，食品和药品管理规程(Food and Drug Administrationguidelines)推荐，申请人限制某些杂质在0.1％以下。

一般说来，经光谱和其它物理方法鉴别副产品、副产物和辅助试剂(统称为“杂质”)，因而杂质与层析中的峰位置(或TLC板上的斑点)有关。(Strobel 953页)(Strobel，H.A.；Heineman，W.R.，化学仪器：系绕方法，3版.(Wiley & Sons：New York 1989))。之后，可通过层析中的位置鉴别杂质，在注入样品至柱上和经检测器洗脱特定组分之间的称为“保留时间”的数分钟之间常规地测定杂质。根据仪器的条件和其它许多因素，该时间段每日不同。为减少这类变化对准确鉴别杂质的影响，专业人员采用“相对保留时间”(“RRT”)鉴别杂质(Strobel 922页)。杂质的RRT是其保留时间除以某些参比标记的保留时间。理论上，罗苏伐他汀本身可用作参比标记，但作为实用的物质，它以压倒性的比例存在于趋于充满柱的混合物中，产生不能再现的保留时间，即，对应于罗苏伐他汀的最大峰趋于游移(wander)(Strobel 879页的图24.8(b)包含柱过载时所观察到的这种不对称峰的图示)。因此，有时想要选择供选择的化合物，它以明显足够可检测的量和充分低至不充满柱的量加入或存在于混合物中，并用该化合物作为参比标记。

呈相对纯状态的化合物可用作“参比标准”(“参比标记”类似于参比标准，但它用于定性分析)，以量化未知混合物中的化合物的量。当化合物被用作“外标”时，用相同技术分析作为未知混合物的已知浓度的化合物溶液。(Strobel 924页，Snyder 549页)(Snyder，L.R.；Kirkland，J.J.现代液相层析介绍，2版.(John Wiley & Sons：New York 1979))。可通过比较检测器响应的大小确定混合物中的化合物的量。还参见USP6,333,198，通过引用结合于本文中。

如果已经预先确定补偿两种化合物的检测器敏感度的差的“响应因子”，也可采用参比标准化合物量化混合物中另一种化合物的量(Strobel 894页)。为此，可直接将参比标准化合物加至混合物，这种情况下，其被称为“内标”(Strobel 925页，Snyder 552页)。

当未知混合物通过采用称为“标准加入”(其中通过加入已知和不同量的内标制备至少两种样品)的技术含有某些参比标准化合物时，甚至参比标准化合物也可用作内标(Strobel 391-393页，Snyder 571、572页)。可通过外推相对于加至各样品中的参比标准化合物的量至零的检测器响应图，确定源于原先在混合物中的参比标准化合物的检测器响应比(例如，Strobel，392页图11.4)。

本发明提供可用作量化和鉴别存在于各批次罗苏伐他汀的罗苏伐他汀和杂质的参比标准和参比标记的化合物。

发明概述

在一个实施方案中，本发明提供具有以下结构的罗苏伐他汀三醇：

其中的X是氢、C₁-C₄烷基或碱或碱土金属阳离子，前提是，当X是碱土金属时，两分子的罗苏伐他汀出现在一个金属阳离子面前。

在另一个实施方案中，本发明提供的呈酸形式的罗苏伐他汀三醇具有以下结构：

在又一个实施方案中，本发明提供具有以下结构的呈酯形式的罗苏伐他汀三醇：

其中的R是C₁-C₄烷基酯。

在一个实施方案中，本发明提供呈盐形式的具有以下结构的罗苏伐他汀三醇：

其中的M是碱或碱土金属阳离子，前提是，当X是碱土金属时，两分子的罗苏伐他汀出现在一个金属阳离子面前。

在一个实施方案中，本发明提供呈内酯形式的具有以下结构的罗苏伐他汀三醇：

在另一个实施方案中，本发明提供基本不含相应的罗苏伐他汀二醇形式、呈经分离或经纯化形式的各种以上形式的三醇。

在又一个实施方案中，本发明提供制备罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯的方法，其包括使罗苏伐他汀C₁-C₄酯与硼烷二甲硫络合物溶液在适用的有机溶剂中合并，得到反应混合物，使所生成的反应混合物与NaOH水溶液合并，加入过氧化氢(H₂O₂)和回收三醇酯。

在另一个实施方案中，本发明提供制备罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯的方法，其包括氧化罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯，得到在7位上带有羟基的罗苏伐他汀三醇酯。

在另一个实施方案中，本发明提供一种方法，该方法包括使罗苏伐他汀C₁-C₄酯与硼烷在有机溶剂中的溶液合并，得到反应混合物，使得到的反应混合物与无机碱的水溶液合并，和加入过氧化物并回收三醇酯。

在一个实施方案中，本发明提供通过测量在各批次罗苏伐他汀钙中的罗苏伐他汀钙三醇的量，选择具有所需水平的三醇的罗苏伐他汀钙批次，并制备具有经选择的罗苏伐他汀钙批次的药用组合物，减少存在于罗苏伐他汀钙中的杂质量的方法。

在另一个实施方案中，本发明提供减少存在于包含罗苏伐他汀二醇钙和罗苏伐他汀三醇钙的混合物中的罗苏伐他汀三醇钙的量的方法，该方法包括测定各批次罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯中的罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯的量，选择含三醇C₁-C₄酯的罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯的批次和制备含经选择的罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯批次的罗苏伐他汀二醇钙的药用组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供确定罗苏伐他汀酯(优选叔丁基酯)样品中的杂质量的方法，该方法包括通过GC或HPLC测量对应于包含已知量的罗苏伐他汀三醇酯(优选叔丁基酯)的参比标准中的罗苏伐他汀三醇酯的峰下的面积；通过GC或HPLC测量对应于在包含罗苏伐他汀三醇和罗苏伐他汀二醇酯(优选叔丁基酯)的样品中的罗苏伐他汀三醇酯的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积与测试样品的面积，确定样品中的罗苏伐他汀三醇酯的量。

在又一个实施方案中，本发明提供确定罗苏伐他汀钙样品中的杂质量的方法，其包括经GC或HPLC测量在对应于在包含已知量的罗苏伐他汀三醇钙的参比标准中的罗苏伐他汀三醇钙的峰下的面积；经GC或HPLC测量在对应于在包含罗苏伐他汀三醇和罗苏伐他汀二醇钙盐的样品中的罗苏伐他汀三醇钙的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积和测试样品的面积确定样品中的三醇钙的量。

在一个实施方案中，本发明提供确定罗苏伐他汀二醇酯(优选叔丁基酯)样品中的杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇酯的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇酯和罗苏伐他汀三醇酯的测试样品进行GC或HPLC，以得到具有保留时间的GC或HPLC层析；和通过比较参比标记的相对保留时间(RRT)与测试样品的相对保留时间(RRT)，确定样品中的三醇酯的相对保留时间(RRT)。

在另一个实施方案中，本发明提供确定罗苏伐他汀二醇钙样品中的杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇钙的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇和罗苏伐他汀三醇钙盐的测试样品进行GC或HPLC，以得到具有保留时间的GC或HPLC层析；和通过比较参比标记的相对保留时间(RRT)和测试样品的相对保留时间(RRT)，确定样品中的三醇钙的相对保留时间(RRT)。

在一个实施方案中，本发明提供制备具有以下结构的罗苏伐他汀三醇酸的方法：

该方法包括水解以下结构的酯

和用酸使经水解的酯转化，其中的R是C₁-C₄基团。

在一个实施方案中，本发明提供制备具有以下结构的罗苏伐他汀三醇内酯的方法：

该方法包括水解以下结构的酯

和使经水解的酯转化为内酯，其中的R是C₁-C₄酯。

该方法包括水解具有以下结构的内酯

和使经水解的内酯转化为盐，其中的M是碱金属或碱土金属，前提是，如果金属阳离子是碱土金属，对每个阳离子存在两个分子的罗苏伐他汀。

在一个实施方案中，本发明提供制备具有以下结构的罗苏伐他汀三醇盐的方法：

该方法包括用碱接触具有以下结构的酸，

前提是，如果金属阳离子是碱土金属，对每个阳离子存在两个分子的罗苏伐他汀。

图的简述

图1是TBRE(罗苏伐他汀叔丁基酯)三醇的NMR。

图2是说明罗苏伐他汀三醇钙用作参比标准(包括参比标记)的HPLC层析。

发明详述

如本文所用的，术语“二醇”指存在于罗苏伐他汀上的两个羟基。用于本文的二醇罗苏伐他汀与罗苏伐他汀同义。

如本文所用的，术语“基本不含”指基于面积百分比HPLC计，具有少于约30％的相应化合物(例如，二醇或非对映异构体)，更优选少于约20％，甚至更优选少于约10％，和最优选少于约5％。

如本文所用的，术语“三醇内酯”指罗苏伐他汀三醇的内酯。

如本文所用的，术语“参比标准”指既可用于定量分析又可定性分析活性药物成分的化合物。例如，HPLC中的化合物的保留时间涉及设定相对保留时间，从而使定性分析成为可能。在注入HPLC柱之前的溶液中的化合物浓度涉及在HPLC层析中各峰之下的面积的比较，从而使得定量分析成为可能。

在定性分析中采用“参比标记”，根据它们，例如，在层析或在薄层层析(TLC)板上的位置，鉴别混合物的各组分(Strobel页921、922、953)。为此，如果该化合物存在于混合物中，则它并非必要地必需加至混合物中。“参比标记”只用来定性分析，而参比标准可用来定量或定性分析，或二者。因此，参比标记是参比标准的子集，并被包括在参比标准的定义内。

尽管已经就这一点概括地描述了参比标准领域中的那些知识，本领域技术人员仍理解，检测器响应可能是，例如，所得到的层析的峰高度或完整的峰面积，例如，通过UV或折射率检测，得自HPLC系统的洗脱液，或者，例如，火焰电离检测或导热性检测，得自气相层析的洗脱液，或者，其它检测器响应，例如，荧光TLC板上的斑点的UV吸光率。参比标准的位置可用来计算罗苏伐他汀和其它杂质的相对保留时间。

本发明提供具有以下结构的罗苏伐他汀三醇：

其中的X是氢、碱或碱土金属或C₁-C₄烷基。X优选为氢(即，罗苏伐他汀三醇酸)、钙(Ca²⁺)(即，罗苏伐他汀三醇钙)或叔丁基(即，罗苏伐他汀三醇叔丁酯(“TBRE”))。

本发明提供具有以下结构的罗苏伐他汀三醇：

其中的X是氢、碱或碱土金属或C₁-C₄烷基。X优选为氢(即，罗苏伐他汀三醇酸)、钙(Ca²⁺)(即，罗苏伐他汀三醇钙)或叔丁基(即，罗苏伐他汀三醇叔丁酯(“TBRE”))，优选呈其分离的形式。

本发明提供具有以下结构的呈酸形式的罗苏伐他汀三醇：

本发明提供具有以下结构的呈酯形式的罗苏伐他汀三醇

其中R是C₁-C₄烷基。优选地，R是叔丁基或甲基。更优选地，R是叔丁基。

本发明提供具有以下结构的呈盐形式的罗苏伐他汀三醇：

其中的M是碱金属或碱土金属阳离子。优选地，M是钙。本领域的普通技术人员会意识到，当M是碱土金属阳离子，例如钙时，盐将是半钙盐(2∶1比率)：

本发明还提供具有以下结构的呈内酯形式的罗苏伐他汀三醇：

本发明还提供以上各种形式的基本不含相应罗苏伐他汀二醇形式的罗苏伐他汀三醇。因此，本发明提供：

a)基本不含罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯的罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯。还提供基本不含罗苏伐他汀二醇叔丁酯的罗苏伐他汀三醇叔丁酯；

b)基本不含罗苏伐他汀二醇酸的罗苏伐他汀三醇酸；

c)基本不含罗苏伐他汀二醇盐(优选钙盐)的罗苏伐他汀三醇盐(优选钙盐)；和

d)基本不含罗苏伐他汀二醇内酯的罗苏伐他汀三醇内酯。

本发明还提供以上各种形式的呈外消旋的、(7S)和(7R)构型的罗苏伐他汀三醇。(7S)和(7R)构型是非对映异构体。

具体说来，本发明提供：

a)呈外消旋的、(7S)和(7R)形式的罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯，优选叔丁酯。在一个实施方案中，(7S)形式基本不含(7R)形式。在一个实施方案中，(7R)形式基本不含(7S)形式。

b)呈外消旋的、(7S)和(7R)形式的罗苏伐他汀三醇酸。在一个实施方案中，(7S)形式基本不含(7R)形式。在一个实施方案中，(7R)形式基本不含(7S)形式。

c)呈外消旋的、(7S)和(7R)形式的罗苏伐他汀三醇盐(例如钙)。在一个实施方案中，(7S)形式基本不含(7R)形式。在一个实施方案中，(7R)形式基本不含(7S)形式。

d)呈外消旋的、(7S)和(7R)形式的罗苏伐他汀三醇内酯。在一个实施方案中，(7S)形式基本不含(7R)形式。在一个实施方案中，(7R)形式基本不含(7S)形式。

本发明还提供制备罗苏伐他汀三醇酯的方法。可通过氧化罗苏伐他汀C₁-C₄酯，尤其是叔丁酯，制备三醇酯。可通过使罗苏伐他汀C₁-C₄酯，尤其是叔丁酯与硼烷(例如，BH₃，B₂H₆)化合，进行酯的氧化。可采用硼烷以及各种单烷基(C₁-C₈)-和二烷基(C₁-C₈)-硼烷的络合物。优选地，使硼烷二甲硫络合物在适用的有机溶剂中的溶液与酯化合。可搅拌反应混合物。再使无机碱，优选NaOH的水溶液与反应混合物合并，随后加入H₂O₂(优选约30％在水中)。优选逐滴加入H₂O₂。H₂O₂加入期间的温度优选保持低于约50℃。

除H₂O₂之外，还可采用其它氧化试剂。例如，可采用其它任何过氧化物，包括叔丁基氢过氧化物(TBHP)和单过氧苯二甲酸镁六水合物(MMPP)。

无机碱优选碱金属碱，更优选氢氧化物碱，例如NaOH、KOH和LiOH。可采用的另一种碱是NH₄OH。

可分离有机相，并用水和/或盐水洗涤，以除去易混溶于水的副产物，例如硼烷副产物(例如：H₃BO₃)。它也可经亚硫酸钠洗涤，除去过量的过氧化氢。然后，浓缩有机相，得到残余物。可通过将压力降低至低于1个大气压，例如少于约100mmHg，进行浓缩。

反应后，如果需要，可加入沉淀剂，例如氯化铵或另一种盐，以从反应混合物中沉淀出杂质。可用氯化铵除去反应副产物H₃BO₃。代替采用氯化铵，可采用酸，例如乙酸或HCl中和碱性混合物。可经水洗涤除去H₃BO₃。

然后纯化罗苏伐他汀三醇酯并经层析自相应的罗苏伐他汀二醇酯分离。

本发明提供呈其分离的形式的罗苏伐他汀三醇酯。

可再将三醇酯转化为相应的酸、盐或内酯。

可经酯的水解并加入适用的离子源，使三醇酯转化为三醇盐。为得到钙盐，可或者采用氢氧化钠和氯化钙的组合，或者可采用氢氧化钙。

可通过使酯悬浮于混合有机溶剂和水的混合物中，使罗苏伐他汀酯转化为盐，并与碱例如氢氧化钠合并，得到溶液。有机溶剂可为C₁-C₄醇，优选乙醇。然后于减压下蒸发有机溶剂，随后加入氯化钙，产生三醇的钙盐沉淀。可通过常规技术，例如过滤，回收沉淀。

本发明提供呈其分离的形式的罗苏伐他汀三醇盐。

为得到罗苏伐他汀三醇酸，使盐与酸，例如盐酸或硫酸合并。在一个实施方案中，使罗苏伐他汀三醇钙悬浮于有机溶剂，例如二氯甲烷中，向其中加入含水HCl。然后例如通过分离有机相，自反应混合物分离罗苏伐他汀三醇酸，随后，例如，通过减压蒸发除去有机溶剂。

也可通过在酯水解后，酸化反应混合物而不加入氯化钙得到酸。可采用无机酸，例如HCl和H₂SO₄。

本发明提供呈其分离的形式的罗苏伐他汀三醇酸。

然后，在促成内酯化的条件下，可由酸得到罗苏伐他汀内酯。在一个实施方案中，使罗苏伐他汀三醇钙溶解于有机溶剂，例如乙腈中，向其中加入含水HCl。再搅拌反应混合物。例如，可通过在减压下蒸发，除去有机溶剂和水，得到内酯。

如上所述，这些化合物，即罗苏伐他汀三醇酸、盐、内酯和酯可用作参比标记/标准。图2说明本发明化合物可用作参比标准，以量化和鉴定存在于罗苏伐他汀组合物中的杂质的量。在柱上，罗苏伐他汀三醇钙接近罗苏伐他汀二醇钙，却不与罗苏伐他汀的峰重叠。由于这使量化更容易，峰不重叠是理想的。

本发明提供呈其分离的形式的罗苏伐他汀三醇内酯。

本发明提供减少存在于包含罗苏伐他汀钙和罗苏伐他汀三醇钙的混合物中的罗苏伐他汀三醇钙的量的方法，其包括测量在各批次罗苏伐他汀二醇钙中的罗苏伐他汀钙三醇的量，选择具有所需水平的三醇的罗苏伐他汀二醇的批次，和制备具有所选择的罗苏伐他汀二醇批次的药用组合物。通常并非钙的盐也可用于本方法。

本发明提供减少存在于包含罗苏伐他汀二醇钙和罗苏伐他汀三醇钙的混合物中的罗苏伐他汀三醇钙的量的方法，其包括测量在各批次罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯中的罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯的量，选择含有三醇C₁-C₄酯的罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯的批次并制备含有所选择的罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯批次的罗苏伐他汀二醇钙的药用组合物。所述酯优选叔丁基酯。

本发明提供减少存在于包含罗苏伐他汀二醇钙和罗苏伐他汀三醇钙的混合物中的罗苏伐他汀三醇钙的量的方法，其包括测量在各批次罗苏伐他汀二醇内酯中的罗苏伐他汀三醇内酯的量，选择具有所需水平的三醇内酯的罗苏伐他汀二醇内酯的批次和制备具有所选择的罗苏伐他汀二醇内酯批次的罗苏伐他汀二醇钙的药用组合物。

本发明提供减少存在于包含罗苏伐他汀二醇钙和罗苏伐他汀三醇钙的混合物中的罗苏伐他汀三醇钙的量的方法，其包括测量在各批次罗苏伐他汀二醇酸中的罗苏伐他汀三醇酸的量，选择具有所需水平的三醇酸的罗苏伐他汀二醇酸的批次和制备具有所选择的罗苏伐他汀二醇酸批次的罗苏伐他汀二醇钙的药用组合物。

本发明提供确定在罗苏伐他汀二醇酯(优选叔丁酯)样品中的杂质的量的方法，其包括经GC或HPLC测量在对应于在包含已知量的罗苏伐他汀三醇酯(优选叔丁基酯)的参比标准中的罗苏伐他汀三醇酯的峰下的面积；经GC或HPLC测量在对应于在包含罗苏伐他汀三醇和罗苏伐他汀二醇酯(优选叔丁基酯)的测试样品中的罗苏伐他汀三醇酯的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积和测试样品的面积，确定样品中的三醇酯的量。

本发明提供确定罗苏伐他汀钙样品中的杂质的量的方法，其包括经GC或HPLC测量在对应于在包含已知量的罗苏伐他汀三醇钙的参比标准中的罗苏伐他汀三醇钙的峰下的面积；经GC或HPLC测量在对应于在包含罗苏伐他汀三醇和罗苏伐他汀二醇钙盐的测试样品中的罗苏伐他汀三醇钙的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积和测试样品的面积，确定样品中的三醇钙的量。通常并非钙的盐也可用于本方法。

本发明提供确定罗苏伐他汀酸样品中的杂质的量的方法，其包括经GC或HPLC测量在对应于在包含已知量的罗苏伐他汀三醇酸的参比标准中的罗苏伐他汀三醇酸的峰下的面积；经GC或HPLC测量在对应于在包含罗苏伐他汀酸和罗苏伐他汀二醇酸的测试样品中的罗苏伐他汀三醇酸的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积和测试样品的面积，确定样品中的三醇酸的量。

本发明提供确定罗苏伐他汀内酯样品中的杂质的量的方法，其包括经GC或HPLC测量在对应于在包含已知量的罗苏伐他汀三醇内酯的参比标准中的罗苏伐他汀三醇内酯的峰下的面积；经GC或HPLC测量在对应于在包含罗苏伐他汀三醇内酯和罗苏伐他汀二醇内酯的测试样品中的罗苏伐他汀三醇内酯的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积和测试样品的面积，确定样品中的三醇内酯的量。

本发明提供确定罗苏伐他汀二醇酯(优选叔丁基酯)样品中的杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于在参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇酯的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀酯和罗苏伐他汀三醇酯的测试样品进行GC或HPLC，得到具有保留时间的HPLC或GC层析；和通过比较参比标记的相对保留时间(RRT)和测试样品的相对保留时间(RRT)，确定样品中的三醇酯的相对保留时间(RRT)。罗苏伐他汀二醇酯和罗苏伐他汀三醇酯优选叔丁酯。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供确定在罗苏伐他汀二醇钙样品中的杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于在参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇钙的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇和罗苏伐他汀三醇钙盐的测试样品进行GC或HPLC，得到带保留时间的HPLC层析；和通过比较参比标记的相对保留时间(RRT)和测试样品的相对保留时间(RRT)，确定样品中的三醇钙的相对保留时间(RRT)。通常并非钙的盐也可用于本方法。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供确定罗苏伐他汀二醇酸样品中的杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇酸的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇酸和罗苏伐他汀三醇酸的测试样品进行GC或HPLC，得到具有保留时间的HPLC层析；和通过比较参比标记的相对保留时间(RRT)和测试样品的相对保留时间(RRT)，确定样品中的三醇酸的相对保留时间(RRT)。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供确定罗苏伐他汀二醇内酯样品中的杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇内酯的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇酸和罗苏伐他汀三醇酸的测试样品进行GC或HPLC，得到具有保留时间的HPLC层析；和通过比较参比标记的相对保留时间(RRT)和测试样品的相对保留时间(RRT)，确定样品中的三醇酸的相对保留时间(RRT)。

已经参照某些优选的实施方案描述本发明，从对本说明书的思考中，本领域技术人员会明白其它实施方案。通过详细描述本发明的组合物的制备和使用的方法的以下实施例，进一步限定本发明。本领域那些技术人员会明白，在不脱离本发明的范围下可对原料和方法进行许多修饰。

实施例

实施例1：三醇酯的合成

在惰性气氛中，使TBRE(10g)与1M硼烷二甲硫络合物的THF(56ml)溶液混合。20℃下，搅拌混合物3h。缓慢加入NaOH(74g)的水(5ml)溶液。逐滴加入H₂O₂(30％在水中，15ml)，以使混合物的温度保持低于50℃。搅拌混合物0.5h。加入浓氯化铵溶液(150ml)，并过滤出沉淀。分离各相，先用浓亚硫酸钠溶液(40ml)，再用水(100ml)和盐水(100ml)的混合液，最后用盐水(150ml)，洗涤有机相。然后，在减压下除去有机溶剂，得到含有三醇、未反应的TBRE和某些杂质的半固体残余物。

经两次层析分离法分离三醇。首先，采用在水中的从40％至45％EtOH的梯度液，在RP-18柱(

C-18反相柱)上进行分离。采用在CH₂Cl₂中的从0％至1％EtOH的梯度液作为洗脱液，在普通硅胶柱(

正相一次性柱)上进行第二次分离。纯度93％。MS(ES+)：M+H＝556 M+Na+＝578

由Teledyne Isco公司(Nebraska)生产。

实施例2：Rosu-Ca-三醇的合成

使由TBRE和2.85％三醇-酯(3.7mmole羧基)组成的2g原料悬浮于EtOH(10mL)/水(6mL)混合物中。室温下，逐滴加入饱和NaOH溶液(0.35g，4.1mmole)并搅拌混合物2h。真空下浓缩溶液，除去EtOH。40℃下，通过在搅拌下加入CaCl₂(0.41g，3.7mmole)，从该水溶液中沉淀出钙盐。室温下，持续搅拌1h，沉淀经过滤，经水洗涤和干燥。原料含有2.82％Rosu-Ca-三醇和95％Rosu-Ca。

实施例3：罗苏伐他汀三醇酸的合成

使Rosu三醇Ca(0.5g)悬浮于二氯甲烷(5mL)中，并加入HCl(1N在水中，1mL)。搅拌15分钟后，分离各相，真空浓缩有机相，得到主要包含产物的残余物。可经柱层析法(硅胶，二氯甲烷-甲醇混合物作为洗脱液)进一步纯化，得到纯Rosu三醇酸。

实施例4：罗苏伐他汀三醇内酯的合成

使Rosu三醇Ca(4g)溶解于乙腈(40mL)，并加入HCl(1N在水中，40mL)。室温下彻夜搅拌混合物。经减压蒸馏除去乙腈和水。可经快速层析法(硅胶，己烷-乙酸乙酯混合物作为洗脱液)进一步纯化含有产物的残余物，得到纯rosu三醇内酯。

实施例5：罗苏伐他汀三醇钙的合成

使2g纯三醇-酯(3.7mmol)悬浮于EtOH(10mL)/水(6mL)的混合液中。室温下，逐滴加入饱和NaOH溶液(0.35g，4.1mmole)，并搅拌混合物2h。真空浓缩溶液，除去EtOH。通过40℃下，边搅拌边加入CaCl₂(0.41g，3.7mmole)的水溶液，从水溶液中沉淀钙盐。于室温下持续搅拌1h，沉淀经过滤、经水洗涤和干燥，生成Rosu-Ca-三醇。

MS条件

仪器： Bruker Esquir 6000

来源：正/负切换ESI

目标质量： 556Da

化合物稳定性： 50％

阱驱动： 100％

八极(Octopole)RF： 195.3Vpp

毛细管出口： 111.8V

干燥气体流速： 10L/min

雾化器： 60psig

干燥气体温度： 365℃

V Cap： 4000V

TBRE的杂质分布的HPLC方法

柱：C18

流动相：洗脱液A和洗脱液B的梯度

梯度：时间(min) 洗脱液A(％) 洗脱液B(％)

0 100 0

2 84 16

23 84 16

36 10 90

40 10 90

洗脱液A：60％0.005M醋酸铵40％乙腈∶乙醇＝2∶3

洗脱液B：100％乙腈∶乙醇＝1∶4

UV检测：243nm

运行时间：55min

流速：0.6mL/min

注入体积：5μL

柱温：5℃

排放限制：少于0.02％

样品制剂：0.5mg/mL

TBRE的RT：约24.5min

三醇-TBRE杂质的RRT是对应于TBRE主峰的0.6。

ROSU杂质分布的HPLC方法

柱：C18

流动相：洗脱液A、洗脱液B和洗脱液C的梯度

梯度：时间(min) 洗脱液A(％) 洗脱液B(％) 洗脱液C(％)

0 100 0 0

15 0 100 0

20 0 93 7

30 0 78 22

40 0 5 95

45 0 5 95

洗脱液A：含氢氧化铵的60％0.05％冰醋酸pH 3.5 35％乙腈5％乙醇

洗脱液B：含氢氧化铵的55％0.05％冰醋酸pH 3.5 45％乙腈

洗脱液C：100％乙醇

UV检测：243nm

运行时间：45min

流速：0.5mL/min

注入体积：10μL

柱温：20℃

排放限制：小于0.02％

样品制剂：0.2mg/mL

ROSU的RT：约19min

三醇-ROSU杂质的RRT是对应于ROSU主峰的0.7。

Claims

1.一种具有以下结构的罗苏伐他汀三醇：

其中的X是氢、碱或碱土金属或C₁-C₄烷基。

2.权利要求1的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇被分离。

3.权利要求1或2的罗苏伐他汀三醇，其中的罗苏伐他汀三醇基本不含相应的罗苏伐他汀二醇。

4.呈酸形式的权利要求1的罗苏伐他汀三醇，其具有以下结构：

5.权利要求4的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇被分离。

6.权利要求4或5的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇基本不含相应的罗苏伐他汀二醇。

7.呈酯形式的权利要求1的罗苏伐他汀三醇，其具有以下结构：

其中的R表示C_1-4烷基。

8.权利要求7的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇酯被分离。

9.权利要求7或8的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇酯基本不含相应的罗苏伐他汀二醇酯。

10.权利要求7、8或9的罗苏伐他汀三醇，其中的酯是叔丁酯。

11.呈盐形式的权利要求1的罗苏伐他汀三醇，其具有以下结构：

其中的M表示碱或碱土金属阳离子。

12.权利要求11的罗苏伐他汀三醇，其中的金属阳离子是每个阳离子存在两个罗苏伐他汀分子的碱土金属。

13.权利要求12的罗苏伐他汀三醇，其中的金属阳离子是Ca2+。

14.权利要求11、12或13的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇被分离。

15.权利要求11、12、13或14的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇基本不含相应的罗苏伐他汀二醇。

16.呈内酯形式的权利要求1的罗苏伐他汀三醇，其具有以下结构：

17.权利要求16的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇内酯被分离。

18.权利要求16或17的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇内酯基本不含相应的罗苏伐他汀二醇。

19.权利要求1-18中任一项的罗苏伐他汀三醇，其中所述罗苏伐他汀三醇选自：呈(7S)形式的罗苏伐他汀三醇；呈(7R)形式的罗苏伐他汀三醇；和外消旋的罗苏伐他汀三醇。

20.一种制备权利要求7-10或18-19中任一项的三醇的方法，其包括氧化罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯，得到在7位带有羟基的罗苏伐他汀三醇酯。

21.权利要求20的方法，其中所述方法包括使罗苏伐他汀C₁-C₄酯与硼烷在有机溶剂中的溶液合并，得到反应混合物，使得到的反应混合物与无机碱的水溶液合并，并加入过氧化物和回收三醇酯。

22.权利要求20或21的方法，其中所述硼烷是二甲硫的硼烷络合物。

23.权利要求22的方法，其中所述硼烷是单烷基-或二烷基-硼烷。

24.权利要求21或22的方法，其中的过氧化物是H₂O₂。

25.权利要求21或22的方法，其中的过氧化物是叔丁基氢过氧化物(TBHP)或单过氧苯二甲酸镁六水合物(MMPP)。

26.权利要求0的方法，其中的碱是无机碱。

27.权利要求26的方法，其中的无机碱是碱金属碱。

28.权利要求27的方法，其中的碱是氢氧化物碱。

29.权利要求28的方法，其中的氢氧化物碱是NaOH、KOH或LiOH。

30.权利要求21的方法，其中的碱是NH₄OH。

31.权利要求0-30中任一项的方法，其中的有机溶剂是C₃-C₈醚。

32.权利要求31的方法，其中的有机溶剂是四氢呋喃。

33.一种制备权利要求11的三醇盐的方法，其包括使具有下式的三醇酯：

其中的R是C₁-C₄酯，悬浮于水和无机溶剂的混合物中，并使该悬液与碱和离子源合并。

34.权利要求33的方法，其中的有机溶剂是C₁-C₄醇。

35.权利要求33的方法，其中的有机溶剂是乙醇。

36.权利要求33、34或35的方法，其中的离子源是氯化钙。

37.一种制备权利要求4的三醇酸的方法，其包括使具有下式的罗苏伐他汀三醇盐：

与酸接触，其中的M是碱或碱土金属。

38.权利要求37的方法，其中的酸是盐酸或硫酸。

39.权利要求37或38的方法，其中罗苏伐他汀三醇盐与有机溶剂合并。

40.权利要求39的方法，其中的有机溶剂是二氯甲烷。

41.一种制备权利要求4的罗苏伐他汀三醇酸的方法，其包括用酸水解具有下式的酯：

其中的R是C₁-C₄酯。

42.权利要求41的方法，其中的酸是HCl或H₂SO₄。

43.一种制备权利要求16-19中任一项的内酯的方法，其包括水解具有下式的三醇酯：

其中的R是C₁-C₄酯，并使经水解的酯转化为内酯。

44.一种制备具有以下结构的权利要求11-15或18-19中任一项的罗苏伐他汀三醇盐的方法：

其包括水解具有以下结构的内酯

并使经水解的内酯转化为盐，其中的M是碱金属或碱土金属。

45.一种制备具有以下结构的权利要求16-20中任一项的罗苏伐他汀三醇盐的方法：

其包括使具有以下结构的酸

与碱接触。

46.一种减少存在于罗苏伐他汀钙的药用组合物中的杂质的量的方法，其包括测量各批罗苏伐他汀二醇钙中的罗苏伐他汀三醇钙的量，选择具有所需水平的罗苏伐他汀三醇钙的罗苏伐他汀二醇钙的批次，并制备具有所选择的罗苏伐他汀二醇批次的药用组合物。

47.一种减少存在于包含罗苏伐他汀二醇酯和罗苏伐他汀三醇酯的混合物中的罗苏伐他汀三醇酯的量的方法，其包括测量在罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯各批次中的罗苏伐他汀三醇C₁-C₄酯的量，选择含三醇C₁-C₄酯的罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯的批次，和制备含有所选择的罗苏伐他汀二醇C₁-C₄酯批次的罗苏伐他汀二醇钙药用组合物。

48.一种确定罗苏伐他汀二醇酯样品中的杂质量的方法，其包括经GC或HPLC测量在包含已知量的罗苏伐他汀三醇酯的参比标准中的对应于罗苏伐他汀三醇酯的峰下的面积；经HPLC或GC测量对应于在包含罗苏伐他汀三醇和罗苏伐他汀二醇酯的样品中的罗苏伐他汀三醇酯的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积与测试样品的面积确定样品中的三醇酯的量。

49.权利要求48的方法，其中的三醇酯是叔丁酯。

50.一种确定罗苏伐他汀钙样品中的杂质量的方法，其包括经GC或HPLC测量在对应于包含已知量的罗苏伐他汀三醇钙的参比标准中的罗苏伐他汀三醇钙的峰下的面积；经GC或HPLC测量在对应于包含罗苏伐他汀三醇和罗苏伐他汀二醇钙盐的样品中的罗苏伐他汀三醇钙的峰下的面积；和通过比较参比标准的面积和测试样品的面积确定样品中的三醇钙的量。

51.一种确定罗苏伐他汀二醇酯样品中杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于参比标记样品中罗苏伐他汀三醇酯的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇酯和罗苏伐他汀三醇酯的测试样品进行GC或HPLC，得到具有保留时间的GC或HPLC层析；和通过将参比标记的相对保留时间(RRT)与测试样品的相对保留时间(RRT)进行比较，确定样品中三醇酯的相对保留时间(RRT)。

52.权利要求51的方法，其中的三醇酯是叔丁酯。

53.一种确定罗苏伐他汀二醇钙样品中杂质的相对保留时间(RRT)的方法，其包括经GC或HPLC测量对应于参比标记样品中的罗苏伐他汀三醇钙的相对保留时间(RRT)；用包含罗苏伐他汀二醇和罗苏伐他汀三醇钙盐的测试样品进行GC或HPLC，得到具有保留时间的HPLC层析；和通过将参比标记的相对保留时间(RRT)与测试样品的相对保留时间(RRT)进行比较，确定样品中三醇钙的相对保留时间(RRT)。

54.根据权利要求1-19中任一项的化合物作为参比标准或参比标记的用途，其用于确定罗苏伐他汀酸、罗苏伐他汀酯、罗苏伐他汀盐(优选钙盐)和罗苏伐他汀内酯的纯度。