CN101370505A

CN101370505A - 新生血管性眼病如黄斑变性、血管样纹、葡萄膜炎和黄斑水肿的治疗

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Publication number: CN101370505A
Application number: CNA2006800445634A
Authority: CN
Inventors: R·A·布里甘迪; M·莱维克; W·H·米勒
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 2005-11-29
Filing date: 2006-11-29
Publication date: 2009-02-18
Anticipated expiration: 2026-11-29
Also published as: NO20081963L; CY1111047T1; AU2006320535A1; CN101370505B; HK1121386A1; EA200801168A1; ES2392030T3; WO2007064752A3; US20080293691A1; ATE482708T1; JP2009517396A; IL191027A0; EA016227B1; NZ568075A; WO2007064752A2; PL1968594T3; JP5180834B2; MY144750A; ES2350858T3; KR20080071188A

Abstract

本发明涉及通过给用嘧啶衍生物、苯并二氮杂基衍生物、和包含其的药物组合物治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法。本发明包括通过给用5－[[4－[(2，3－二甲基－2H－吲唑－6－基)甲基氨基]－2－嘧啶基]氨基]－2－甲基苯磺酰胺、(S)－3－氧代－8－[3－(吡啶－2－基氨基)－1－丙基氧基]－2－(2，2，2－三氟乙基)－2，3，4，5－四氢－1H－2－苯并氮杂－4－乙酸或其盐或溶剂合物治疗新生血管性眼病的方法。本发明还提供了组合治疗新生血管性眼病的方法。

Description

新生血管性眼病如黄斑变性、血管样纹、葡萄膜炎和黄斑水肿的治疗

技术领域

本发明涉及治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法。该方法包括给予嘧啶衍生物、苯并二氮杂基衍生物，和包含其的药物组合物。

背景技术

新血管形成，还称作血管生成，是形成新血管的过程。新血管形成发生在正常发育期间，并且还在组织损伤后的伤口愈合中起重要作用。然而，新血管形成还被牵扯作为许多病理状态，包括例如癌、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、牛皮癣和眼病的重要病因。

与血管渗漏和/或新血管形成有关的眼病是发达国家中大多数的眼发病和视觉缺失的原因(Campochiaro(2004)Expert Opin.Biol.Ther.4：1395-402)。这种疾病的一个例子是糖尿病性视网膜病，其是罹患糖尿病个体中常见的并发症，并且是新视觉缺失病例的第五位主要原因。促进糖尿病性视网膜病发展的最重要的先决条件是高血糖和血氧不足，其导致血管渗透性增加、内皮细胞增殖和病理学新血管形成(Chorostowska-Wynimko等J.Physiol.Pharmacol.(2005)56 Suppl4：65-70)。这些血管异常引起在斑(macula)中发生液体渗漏，其可导致渐进性视力丧失。

其中新血管形成起作用的另一个眼病是年龄相关性黄斑变性(AMD)，其是老年人中视力严重丧失的主要原因。AMD中的视力丧失是由于脉络膜新血管形成(CNV)。新血管形成起源于脉络膜血管并生长通过布鲁赫膜，通常在多个部位进行，进入视网膜色素上皮下间隔和/或视网膜(例如，参见Campochiaro等(1999)Mol.Vis.5：34)。从这些新血管的渗漏和流血导致视力丧失。

与眼新血管形成有关的眼病是视力丧失和视觉缺失的主要原因。因此，仍然需要治疗新生血管性眼病的新方法。

发明概述

本发明涉及治疗新生血管性眼病的新方法。该方法包括给予嘧啶衍生物、苯并二氮杂

基衍生物、和包含其的药物组合物的步骤。

在一个方面，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，包括对哺乳动物给用式(I)的化合物：

或其盐或溶剂合物。

在另一方面，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，包括对哺乳动物给用式(II)的化合物：

或其盐或溶剂合物。

在另一方面，本发明包括治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，包括对哺乳动物给用式(III)的化合物：

或其盐或溶剂合物。

本发明还涉及式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、或其盐或溶剂合物用于制备可用于治疗新生血管性眼病的药物的用途。

本发明还提供了式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物或其盐或溶剂合物在治疗新生血管性眼病中的用途。

附图说明

图1表示实施例1所述的VEGF受体抑制剂在关于脉络膜新血管形成(CNV)的小鼠的退行模型中的作用。在该退行模型中，使用激光灼烧视网膜后极以诱发小鼠CNV。在激光致损伤后7天，对小鼠开始实施治疗，在该治疗中，对小鼠给用单独的媒介物或在所示剂量下的5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺。在该治疗开始后7天，测定CNV病灶的大小。结果在图1中用图表概括表示。关于其它信息参见实施例一节。

图2表示用实施例1所述的VEGF受体抑制剂、实施例3中所述的玻连蛋白受体拮抗剂、或其组合进行预处理，在CNV预防模型中对小鼠的损伤诱导的CNV的作用。结果在图1中用图表概括表示。关于其它信息参见实施例一节。

发明详述

本发明提供了治疗哺乳动物的新生血管性眼病的新方法。该方法包括对哺乳动物给予嘧啶衍生物、苯并二氮杂

基衍生物、和包含其的药物组合物的步骤。根据一个方面，待给用的化合物是帕左潘尼(pazopanib)((5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺)或其盐或溶剂合物。根据另一个方面，待给用的化合物是(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸或其盐或溶剂合物。本发明人还阐述了在对视网膜激光致损伤后用帕左潘尼处理显示了，与未经处理的小鼠相比，所得脉络膜新生血管性病灶的尺寸缩小。另外，本发明人表明了在对视网膜激光致损伤之前用帕左潘尼、(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸或这些化合物的组合处理，所得的脉络膜新生血管性病灶的尺寸缩小。因此，本发明人表明了帕左潘尼、(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸、及其衍生物、盐和溶剂合物可用作治疗眼中与新血管形成有关的疾病的治疗剂。

或其盐或溶剂合物。

在具体实施方案中，本发明提供治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，包括对哺乳动物给用式(I’)的化合物：

在另一个实施方案中，本发明包括治疗哺乳动物的新生血管性眼病的方法，包括对哺乳动物给用式(I”)的化合物：

或其盐或溶剂合物。

本发明还包括组合治疗。因此，在一些实施方案中，治疗方法包括对哺乳动物给用式(III)的化合物：

或其盐或溶剂合物并组合给用式(I)化合物、式(II)化合物、或其盐或溶剂合物。

或其盐或溶剂合物。

在另一方面，本发明包括式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、或其盐或溶剂合物用于制备可用于治疗新生血管性眼病的药物的用途。

本发明还提供了式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、或其盐或溶剂合物在治疗新生血管性眼病中的用途。

在本发明的一些实施方案中，新生血管性眼病是脉络膜新生血管性疾病或视网膜新生血管性疾病。在具体的实施方案中，新生血管性眼病选自渗出性年龄相关性黄斑变性、血管样纹、葡萄膜炎和黄斑水肿。

本文使用的术语“新生血管性眼病”是指其中在眼中以致病方式生成新血管的疾病。可根据本发明方法治疗的新生血管性眼病包括以血管渗漏为特征的那些疾病。新生血管性眼病可导致视力的部分或完全丧失。在本发明方法中待治疗的新生血管性疾病可发生在眼睛的任何部位，包括，例如角膜、虹膜、视网膜、玻璃体和脉络膜。

本文使用的术语“脉络膜新生血管性疾病”是指以新血管侵入通过布鲁赫膜(脉络膜的最内层)为特征的疾病。

本文使用的术语“视网膜新生血管性疾病”是指与新血管生长有关的疾病，该新血管生长起源于视网膜静脉并且沿着视网膜的玻璃体表面延伸。

可根据本发明方法治疗的眼血管病的非限制性例子包括渗出性年龄相关性黄斑变性(AMD)、血管样纹、病理性近视、眼组织胞浆菌病综合征、布鲁赫膜破裂、黄斑水肿(包括糖尿病性黄斑水肿)、肉状瘤病和葡萄膜炎。可通过本发明公开方法治疗的其它疾病的例子包括萎缩性AMD、圆锥角膜、舍格伦综合征、近视、眼瘤、角膜移植排斥、角膜损伤、新生血管性青光眼、角膜溃疡、角膜划痕、增殖性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜变性、慢性青光眼、视网膜脱离、和镰状细胞视网膜病变。

本发明提供治疗新生血管性眼病的方法。本文使用的“治疗”是指与疾病相关的一种或多种症状可被有利地改变所采用的任何方式。因此，该术语包括治愈、预防或改善疾病的症状或副作用，或降低疾病进展速率。

根据本发明的方法，可通过对要治疗的受试者给用有效量的一种或多种治疗剂来治疗眼血管病。本文使用的术语“有效量”是指治疗剂的足够治疗、预防和/或改善疾病的一种或多种症状的量。

本文使用的术语“溶剂合物”是指由溶质(在本发明中，是指式(I)、(II)、(III)的化合物或其盐)与溶剂形成的化学计量不同的复合物。本发明中使用的溶剂不干扰溶质的生物活性。适当的溶剂的例子包括但不限于水、甲醇、乙醇和乙酸。优选地，使用的溶剂是可药用溶剂。适当的可药用溶剂的例子包括但不限于水、乙醇和乙酸。在具体实施方案中，使用的溶剂是水。

在一个实施方案中，预防或治疗本文公开的新生血管性眼病的方法包括给用式(I)的化合物：

或其盐或溶剂合物。

在某些实施方案中，式(I)化合物的盐是盐酸盐。在具体实施方案中，式(I)化合物的盐是由式(I’)表示的一盐酸盐。式(I)化合物的一盐酸盐的化学名称是5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐：

在另一个实施方案中，式(I)化合物的盐是式(I)化合物的一盐酸盐一水合物溶剂合物。式(I)化合物的一盐酸盐一水合物溶剂合物的化学名称是5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐一水合物，如下式(I”)所示：

本发明还包括预防或治疗本文公开的新生血管性眼病的方法，包括给用式(II)的化合物：

或其盐或溶剂合物。该化合物的化学名称是N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N⁴-甲基-N²-{4-[(甲基磺酰基)甲基]苯基}-2，4-嘧啶二胺。

式(I)或式(II)化合物的游离碱、盐和溶剂合物可根据例如以下的过程制备：于2001年12月19日提交的国际专利申请PCT/US01/49367并于2002年8月1日公开的WO 02/059110中所述过程，和于2003年6月17日提交的国际专利申请PCT/US03/19211并于2003年12月24日公开的WO 03/106416中所述过程，或本文所述方法。式(III)化合物及其衍生物可根据美国专利6,825,188或本文中所述的方法制备。

通常，本发明的盐是可药用盐。包括在术语“可药用盐”范围内的盐是指本发明化合物的无毒盐。本发明化合物的盐可包括得自本发明化合物中取代基上的氮的酸加成盐。示例性的盐包括以下的盐：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰胺苯胂酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸、马来酸盐、苦杏仁酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、马来酸一钾、粘酸盐(mucate)、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺、草酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、钾、水杨酸盐、钠、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物(triethiodide)、三甲基铵和戊酸盐。其它的非可药用的盐可用于制备本发明的化合物，并且它们构成了本发明的另一方面。

本发明方法中使用的化合物可单独被给用，或它们可在药物组合物中被给用。因此，本发明另外提供了药物组合物在本发明治疗方法中的用途。药物组合物包括式(I)、(II)、(III)的化合物及其盐或溶剂合物，以及一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂。载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中的其它组分是相容的，并且对其接受者是无害的。

药物制剂可以以单位剂量形式存在，该单位剂量形式每单位剂量含有预定量的活性成分。该单位可含有例如1μg-1g，如5μg-500μg、10μg-250μg、0.5mg-700mg、2mg-350mg、或5mg-100mg的式(I)、(II)、(III)的化合物、或其盐或溶剂合物，根据治疗的疾病，给药途径，患者的年龄、体重和病况而定，或者，药物制剂可以以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式存在。在某些实施方案中，单位剂量制剂是含有日剂量或亚剂量的(如上文所述的)或其适当的分数的活性成分的那些单位剂量制剂。另外，这些药物制剂可通过药学领域公知方法的任一种制备而成。

式(I)、(II)、(III)的化合物、或其盐或溶剂合物可通过任何适当的途径给用。适当的给药途径包括：经口、直肠、经鼻、局部(包括经颊、舌下和眼)、阴道、和非肠道(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、眼外、眼内(包括例如玻璃体内、视网膜下、巩膜下、脉络膜内、和结膜下)、鞘内和硬膜外))。可理解的是，优选的给药途径可根据例如接受者的病况而定。

本发明的方法还可与其它的治疗新生血管性眼病的方法组合使用。在一些实施方案中，本发明的方法包括组合治疗，其中式(I)、(II)、(III)的化合物或其盐或溶剂合物与一种或多种另外的用于治疗新生血管性疾病的治疗剂组合给用。可用于组合治疗中的另外的治疗剂的非限制性例子包括哌加他尼(pegaptanib)、兰尼单抗(ranibizumab)、PKC412、奈帕芬胺、和整联蛋白受体拮抗剂(包括玻连蛋白受体激动剂)。例如参见Takahashi等(2003)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci 44：409-15，Campochiaro等(2004)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.45：922-31，van Wijngaarden等(2005)JAMA 293：1509-13，授权给Callahan等人的美国专利No.6,825,188，和授权给Manley等人的美国专利6,881,736；每篇文献作为参考并入本文用于关于这些化合物的教导的目的。在具体实施方案中，式(I)或(II)的化合物或其盐或溶剂合物与式(III)的化合物或其盐或溶剂合物组合给用。

当采用组合治疗时，治疗剂可以一起给用或分开给用。对于组合治疗中的多于一种的治疗剂可采用相同的给药方式；或者，组合治疗中的不同治疗剂可通过不同方式给用。当治疗剂分开给用时，它们可以同时地或以任何顺序(在时间上间隔较近或较远)顺序地给用。式(I)、(II)、(III)的化合物和/或其它的一种或多种药学活性剂和给用的相对时间可以为了实现所需的组合疗效而进行选择。

适合于口服给药的药物制剂的存在形式可为离散单元，如胶囊或片剂；粉末剂或颗粒剂；在水性液体或非水性液体中的溶液剂或悬浮剂；可食用的泡沫剂或起泡体(whips)；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。

例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可与无毒的口服用可药用惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。可通过将化合物粉碎到适当的粒度并与以类似方式进行粉碎的药物载体如可食用碳水化物诸如例如淀粉或甘露醇混合制备粉剂。还可存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。

可如上所述制备粉末混合物并装填已成型的明胶外壳制备胶囊。在装填操作之前，可将助流剂和润滑剂如胶体氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、或固体聚乙二醇添加到粉末混合物中。还可添加崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善当胶囊被摄入时的药物的利用度。

另外，当希望或必要时，还可在混合物中引入适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂、和着色剂。适当的粘合剂包括淀粉，明胶，天然糖类如葡萄糖或β-乳糖，玉米甜味剂，天然和合成的树胶如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠，羧甲基纤维素，聚乙二醇，蜡等。这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。可通过制备粉末混合物、造粒或破块(slugging)、添加润滑剂和崩解剂并压片来配制片剂。通过将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质以及任选的粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯基吡咯烷酮、溶解延迟剂如石蜡、再吸收(resorption)促进剂如季盐和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸氢钙混合制备粉末混合物。粉末混合物可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、acadia mucilage或纤维素材料或高分子材料的溶液润湿并冲压过筛进行造粒。作为造粒的另一选择方法，粉末混合物可以穿过压片机，使得成形不完全的小块(slug)被破碎形成颗粒。颗粒可被润滑以防止粘着于压片机机头，通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油进行润滑。然后将经润滑的混合物压成片剂。本发明的化合物还可与自由流动的惰性载体混合并直接压缩成片剂，而无需经历造粒或破块步骤。可提供透明或不透明的保护性包衣，其包括虫胶密封包衣、糖或高分子材料的包衣，和蜡的抛光包衣。可向这些包衣中添加染料以区分不同的单位剂量。

口服液体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可制备在剂量单位形式中，使得其提供的量含有预定量的化合物。可通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中制备糖浆剂，而通过使用无毒的醇媒介物可制备酏剂。可通过将化合物分散在无毒的媒介物中配制悬浮剂。还可添加增溶剂和乳化剂如乙氧基化异十八烷醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、调味添加剂如薄荷油或天然甜味料或糖精或其他的人工甜味料等。

适当时，可将用于口服给药的剂量单位制剂用微囊密封。该制剂还可被制备为延长或持续释放，例如通过将颗粒材料包覆或包埋在聚合物、蜡等中实现。

用于本发明的药剂还可以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体形式。脂质体可以从各种磷脂如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱形成。

用于本发明的药剂还可使用单克隆抗体作为结合了化合物分子的单独的载体被递送。化合物还可与作为可针对靶标的药物载体的可溶性聚合物结合。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚、或被棕榈酰基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。另外，本发明的化合物可与一类用于实现药物控制释放的可生物降解型聚合物结合，所述聚合物为例如聚乳酸、polepsilon己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。

适合于透皮给药的药物制剂可作为离散贴片形式存在，该形式将保持与接受者的表皮密切接触达延长时间段。例如，活性成分可如在Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中概述的通过离子电渗从贴片中被释放。

适合于局部给药的药物制剂可被配制成膏剂、霜剂、悬浮剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

为了治疗眼睛或其它外部组织，例如口和皮肤，可将制剂作为局部膏剂或霜剂的形式施用。当配制成膏剂时，活性成分可与石蜡或水可混溶的软膏基质使用。或者，可将活性成分与水包油型霜剂基质或油包水型基质配制成霜剂。

适合于对眼局部给药的药物制剂包括滴眼剂，其中将活性成分溶解在或悬浮在适当的载体特别是含水溶剂中。要给用到眼的制剂将具有眼科学相容性的pH值和同渗质量摩尔浓度。一种或多种的眼科学可接受的pH调节剂和/或缓冲剂可被包含在本发明的组合物中，其包括酸类，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱类如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、枸橼酸钠、乙酸钠、和乳酸钠；和缓冲剂如柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。这些酸类、碱类和缓冲剂可以保持组合物的pH值在眼科学可接受范围内的量被包含。一种或多种的眼科学可接受的盐可以足够使组合物的同渗质量摩尔浓度落在眼科学可接受范围内的量被包含在组合物中。这些盐包括那些含钠、钾或铵阳离子和盐酸根、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐。

适合于在口中用于局部给药的药物制剂包括菱形片、软锭剂和漱口剂。

其中载体是固体的适合于经鼻给药的药物制剂包括粒度在例如20到500微米范围内的粗粉剂，其通过鼻吸方式被给用，即，从靠近鼻子处保存粉末的容器中通过急速吸入而穿过鼻部通道给药。其中载体是液体的作为鼻喷雾剂或滴鼻剂给用的适当的制剂包括活性成分的含水溶液或油溶液。

适合于通过吸入给用的药物制剂包括细粒的粉或雾，所述粉或雾通过各种型式的计量式剂量给药的喷雾器、雾化吸入器或吹入器产生。

适合于非肠道给药的药物制剂包括水性和非水性的无菌注射液，其可含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预定接受者的血液等渗的溶质；以及水性的和非水性的无菌悬浮液，其可含助悬剂和增稠剂。制剂可存在于单位剂量或多剂量的容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可在冷冻干燥(冻干)条件下储存，仅仅需要在即将使用前添加无菌液体载体例如注射用水。可从无菌的粉剂、颗粒剂和片剂制备临时的注射溶液和悬浮液。

在本发明的一些实施方案中，通过眼内注射或其它用于经眼递送的装置使药物制剂适合于眼内给药。可在本发明方法中使用的经眼装置的例子包括眼周装置或晶状体内装置，隐形眼镜片和脂质体。例如参见美国专利3,416,530；3,828,777；4,014,335；4,300,557；4,327,725；4,853,224；4,946,450；4,997,652；5,147,647；5,164,188；5,178,635；5,300,114；5,322,691；5,403,901；5,443,505；5,466,466；5,476,511；5,516,522；5,632,984；5,679,666；5,710,165；5,725,493；5,743,274；5,766,242；5,766,619；5,770,592；5,773,019；5,824,072；5,824,073；5,830,173；5,836,935；5,869,079，5,902,598；5,904,144；5,916,584；6,001,386；6,074,661；6,110,485；6,126,687；6,146,366；6,251,090；6,299,895；6,331,313；6,416,777；6,649,184；6,719,750；6,660,960；和美国专利公开No.2003/0064088，2004/0247645和2005/0113806；每篇文献以它们关于眼用装置的教导为目的作为参考被并入本文。

眼递送装置可设计用于控制释放一种或多种治疗剂，具有不同的规定的释放速率和维持剂量动力学和渗透性。通过对聚合物基质进行设计(包括不同的选择和性能)以获得控制释放，选择生物可降解/生物易蚀型聚合物(例如聚乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、超水解PVA)、羟烷基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚己内酯、聚乙醇酸、聚乳酸、聚酐，和选择聚合物分子量、聚合物结晶度、共聚物的比、加工条件、表面抛光、几何学、赋形剂添加和聚合物涂层等，将增强药物扩散、侵蚀、溶解和渗透。

用于使用眼用装置递送药物的制剂可合并一种或多种活性剂和适合于指定的给药途径的助剂。例如，活性剂可与任何可药用的赋形剂、乳糖、蔗糖、淀粉粉末、链烷酸纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、阿拉伯胶、明胶、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，被制成用于常规给药的片剂或胶囊。或者，可将化合物溶于聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉子油、芝麻油、黄蓍胶、和/或各种缓冲液。化合物还可与生物可降解型聚合物和生物不可降解型聚合物两种、和可具有延时性质的载体或稀释剂组分混合。生物可降解型组分的示例性例子可包括白蛋白、明胶、淀粉、纤维素、右旋糖酐、多糖、聚(D，L-丙交酯)、D，L-丙交酯-乙交酯共聚物、聚乙交酯、聚羟基丁酸酯、聚碳酸烷基酯、和聚原酸酯及其混合物。生物不可降解型聚合物的示例性例子可包括EVA共聚物、硅橡胶和聚丙烯酸甲酯，及其混合物。

用于经眼递送的药物组合物还包含原地可胶凝的含水组合物。这种组合物包括当接触眼或泪液时有效促进胶凝的浓度的胶凝剂。适当的胶凝剂包括但不限于热固性聚合物。本文中使用的术语“原地可胶凝的”不仅包括当接触眼睛或泪液时形成凝胶的低粘性液体，而且包括粘性更大的液体，如当施用于眼时具有实质上增加的粘性或凝胶硬挺性的半流体和触变性凝胶。例如参见Ludwig(2005)Adv.Drug Deliv.Rev.3；57：1595-639，以其关于在眼睛药物递送中使用的聚合物例子的教导为目的将其作为参考并入本文。

本领域技术人员可理解的是，除了上面特别指出的成分之外，制剂还包括本领域中其它的与所讨论的制剂类型有关的常规试剂。例如，适于口服给用的制剂可包括调味剂。

根据本发明的方法，对哺乳动物给用具体的式(I)、(II)或(III)的化合物。通常，本发明给用的药剂之一的量将根据许多因素而定，所述因素包括，例如，哺乳动物的年龄和体重，需要治疗的明确的病况，病况的严重性，制剂性质和给药途径。最终，该量将由主治医师或兽医自行判断。

一般地，式(I)、(II)、(III)的化合物、或其盐或溶剂合物的给药量为，每天0.1到100毫克/千克的接受者(哺乳动物)体重，通常为每天1到10毫克/千克体重。在具体实施方案中，化合物局部给药(例如对眼给药)，并且化合物的给药总量可为1μg到10mg，例如5μg到500μg，或10μg-250μg。

以下实施例仅用于说明本发明而并不以任何方式限制本发明的范围。

实施例

如文中使用的，在这些过程、路线和实施例中使用的符号和约定与在同时代科学文献，例如，the Journal of the American Chemical Society或the Journal of Biological Chemistry中使用的那些一致。通常使用标准的一字母或三字母缩写指明氨基酸残基，除非另作说明，这些氨基酸被假定为是L-构型。除非另作说明，所有的起始原料得自商业供应商并且未经纯化而使用。具体地说，以下的缩写可用于实施例和整个说明书中：

g(克)； mg(毫克)；

L(升)； mL(毫升)；

μl(微升)； psi(磅/平方英寸)；

M(摩尔)； mM(毫摩尔)；

N(标准的) Kg(千克)

i.v.(静脉内)； Hz(赫兹)；

MHz(兆赫)； mol(摩尔数)；

mmol(毫摩尔)； RT(室温)；

min(分钟)； h(小时数)；

mp(熔点)； TLC(薄层色谱法)；

Tr(保留时间)； RP(反相)；

DCM(二氯甲烷)； DCE(二氯乙烷)；

DMF(N，N-二甲基甲酰胺)； HOAc(乙酸)；

TMSE(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)； TMS(三甲基甲硅烷基)；

TIPS(三异丙基甲硅烷基)； TBS(叔丁基二甲基甲硅烷基)；

HPLC(高压液相色谱)；

THF(四氢呋喃)； DMSO(二甲基亚砜)；

EtOAc(乙酸乙酯)； DME(1，2-二甲氧基乙烷)；

EDTA 乙二胺四乙酸

FBS 胎牛血清

IMDM Iscove改性Dulbecco培养基

PBS 磷酸盐缓冲盐水

RPMI Roswell Park Memorial Institute

RIPA缓冲剂 *

RT 室温

^*150mM NaCl，50mM Tris-HCl，pH 7.5，0.25％(w/v)-脱氧胆酸盐，1％ NP-40，5mM原钒酸钠，2mM氟化钠，和蛋白酶抑制剂鸡尾酒。

除非另有陈述，所有的温度用℃(摄氏度)表示。除非另作说明，所有的反应在室温下在惰性气氛下进行。

以下实施例描述了在式(I)和(II)化合物的合成中特别有用的中间体的合成。

中间体实施例1

2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑的制备

方法1：

在室温向搅拌的18.5g(0.11mol)的3-甲基-6-硝基-1H-吲唑在350ml丙酮中的溶液中添加20g(0.14mol)的四氟硼酸三甲基氧鎓。溶液在氩气下搅拌3小时后，减压除去溶剂。向得到的固体中添加饱和的NaHCO₃水溶液(600mL)和4:1的氯仿-异丙醇的混合物(200ml)，混合物经搅拌并使各层分离。水相用另外的氯仿:异丙醇(4 x 200mL)洗涤，合并的有机相经干燥(Na₂SO₄)。过滤并除去溶剂，得到黄褐色固体。固体用乙醚(200mL)洗涤，得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑，为黄色固体(15.85g，73％)。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 8.51(s，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，4.14(s，3H)，2.67(s，3H).MS(ES+，m/z)192(M+H)。

方法2：在2分钟内将原甲酸三甲酯(11mmol，1.17g)添加到已被冷却到-30℃的三氟化硼乙醚络合物(12.5mmol，1.77g)在二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中。混合物回温到0℃，15分钟，然后被冷却到-70℃。然后将硝基吲唑(10mmol，1.77g)在二氯己烷(30mL)中成淤浆，然后立刻被添加到经冷却的混合物中。混合物在-70℃搅拌15分钟，在室温搅拌17小时。17小时后，混合物变成红色并呈非均相。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)猝灭，并分离有机层。水层用二氯甲烷(30mL)提取。二氯甲烷层经合并，用水(30mL)提取。二氯甲烷层经减压蒸馏，直到剩余～10mL。添加丙醇(10mL)，减压除去剩余的二氯甲烷，得到黄色淤浆。通过过滤分离产物，得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(65％，7mmol，1.25g)，为浅黄色粉末。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 8.51(s，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，4.14(s，3H)，2.67(s，3H).MS(ES+，m/z)192(M+H)

方法3：

在25ml的圆底烧瓶中在搅拌下将3-甲基-6-硝基吲唑(7.27mmol，1.28g)溶于DMSO(4.0mL)，并用浓硫酸(7.27mmol，0.73g)处理，得到浓稠淤浆。该淤浆用硫酸二甲酯(21.1mmol，2.66g)处理。混合物在氮气下在50℃加热72小时。72小时后得到浓稠的黄色淤浆。将该淤浆冷却并慢慢地用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)处理。混合物用二氯甲烷(2 x 20mL)提取。二氯甲烷层经合并，用水(20mL)反提取。二氯甲烷层用丙醇(10mL)处理，减压蒸馏除去二氯甲烷。过滤分离固体，黄色固体用庚烷(5mL)洗涤并进行风干，得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑产物(70％，0.97g)，为浅黄色固体。

方法4：

在250mL的3颈圆底烧瓶中添加3-甲基-6-硝基-1H-吲唑硫酸盐(5.0g，18.2mmol)和二氯甲烷(25mL)。混合物在25℃搅拌并用DMSO(5mL)处理。通过注射器添加硫酸二甲酯(6.7g，5.0mL，53.0mmol)，将反应在70℃浴中加热回流。7小时后HPLC分析显示起始原料为9％。此时停止加热并开始处理。在室温下向反应混合物添加饱和碳酸氢钠溶液(35mL)。使各层分离，水层用二氯甲烷(25mL)提取。二氯甲烷层经合并，用水(2 x 25mL)洗涤。二氯甲烷层减压蒸馏直到除去一半体积。添加丙醇(25mL)，并继续减压蒸馏，直到除去所有的二氯甲烷。得到黄色淤浆，其在25℃搅拌1小时。过滤分离产物，得到的黄色固体用庚烷(10mL)洗涤。得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(70％，2.43g)，为黄色固体。

中间体实施例2

2，3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑的制备：

方法1：

在0℃，在5分钟内，向搅拌的2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(1.13g)在2-甲氧基乙基醚(12ml)的溶液中滴加4.48g的氯化锡(II)在8.9ml的浓盐酸的溶液。添加完毕后，除去冰浴，将溶液搅拌另外的30分钟。向反应中添加约40ml的乙醚，得到沉淀物。得到的沉淀物通过过滤被分离，用乙醚洗涤，得到黄色固体(1.1g，95％)，为2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺的盐酸盐。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 7.77(d，J＝8.9Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.88(m，1H)，4.04(s，3H)，2.61(s，3H).MS(ES+，m/z)162(M+H)。

方法2：

对2L的3颈圆底烧瓶配备氮气入口和出口和机械搅拌。启动中等流速的氮气流，并向反应器中添加10％的Pd/C(50％水，润湿，6.0g)。开动搅拌，向反应器添加甲醇(750mL)和中间体实施例1的产物(50g)。将甲酸铵(82.54g)溶于水(120mL)。以保持反应温度在25℃到30℃范围内的添加速率将甲酸铵的水溶液添加到反应溶液中。反应在25℃继续进行。6小时后，根据HPLC分析判断反应完成。过滤混合物，催化剂用甲醇(50mL)洗涤。甲醇层经合并，减压除去溶剂。将残余物溶于水(200mL)，并用二氯甲烷(3 x 250mL)提取。二氯甲烷层经合并，减压除去溶剂以除去大约一半的溶剂。添加庚烷(400mL)，并继续真空蒸馏直到剩余约300mL的反应产物淤浆。过滤分离产物，并在50℃真空干燥4小时，得到2，3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑，为游离碱(40.76g，96.7％)。

¹HNMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 7.31(d，J＝8.9Hz，1H)，6.45(d，J＝8.9Hz，1H)，6.38(s，1H)，4.95(s，br，2H)，3.85(s，3H)，2.44(s，3H)MS(ES+，m/z)162(M+H)

中间体实施例3

N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺的制备：

方法1：

在室温下，向搅拌的中间体实施例2的产物(2.97g，.015mol)和NaHCO₃(5.05g，.06mol)在THF(15mL)和乙醇(60mL)中的溶液中添加2，4-二氯嘧啶(6.70g，.045mol)。反应在85℃搅拌4小时后，将悬浮液冷却到室温，过滤，并用乙酸乙酯充分洗涤。滤液经减压浓缩，得到的固体与乙酸乙酯一起研磨，得到N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺(89％，3.84g)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 7.28(d，J＝9.0Hz，1H)，6.42(d，J＝8.8Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.18(br s，1H)，3.84(s，3H)，2.43(s，3H).MS(ES+，m/z)274(M+H)

方法2：

向配备有气动机械搅拌器、温度计和氮气入口/出口的1L的3颈烧瓶中添加中间体实施例2的产物(32.89g，0.204mol，1.0当量)在425mL(13体积)的EtOH/THF(4/1)中的溶液，碳酸氢钠(51.42g，0.612mol，3.0当量)，然后添加2，4-二氯嘧啶(45.59g，0.306mol，1.5当量)。将烧瓶内容物加热到75℃并在74-76℃保持6-7小时。通过HPLC监控反应进程(中间体实施例2的产物<2％)。在30分钟内将反应内容物冷却到20-25℃，并在20-25℃保持30分钟。然后在30分钟内将反应内容物进一步冷却到10-12℃，并在该温度保持另外10分钟。过滤内容物，滤饼用EtOAc(2×100mL，3.0体积)、和去离子水(514mL，15.6体积)洗涤。然后将滤饼在真空干燥箱中在35℃干燥过夜，得到所需产物44.75g，为白色固体(80.1％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 7.28(d，J＝9.0Hz，1H)，6.42(d，J＝8.8Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.18(br s，1H)，3.84(s，3H)，2.43(s，3H).MS(ES+，m/z)274(M+H)。

方法3：

向2L的夹套反应器中添加IMS(1000mL)、中间体实施例2的产物(100g，0.620mol，1当量)、碳酸氢钠(107g，1.27mol，2.05当量)和2，4-二氯嘧啶(101g，0.682mol，1.1当量)。搅拌溶液，并在85℃的夹套温度下加热回流8小时。然后将得到的淤浆冷却到50℃，添加水(500mL)，以保持温度在40到50℃之间。然后在内部温度为50℃下搅拌反应1小时，然后冷却到20℃。过滤收集固体产物，用水(750mL×2)洗涤，然后用(450mL×1)洗涤。在60℃真空干燥过夜后，得到135g(80％)的N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺。

中间体实施例4

N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺的制备：

方法1：

在室温下向搅拌的中间体实施例3的产物(7.37g)在DMF(50ml)中的溶液中添加Cs₂CO₃(7.44g，2当量)和碘甲烷(1.84ml，1.1当量)。混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倾入到冰-水浴中，过滤收集沉淀物，并用水洗涤。沉淀物经风干，得到N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺，为灰白色固体(6.43g，83％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 7.94(d，J＝6.0Hz，1H)，7.80(d，J＝7.0Hz，1H)，7.50(d，J＝1.0Hz，1H)，6.88(m，1H)，6.24(d，J＝6.2Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.42(s，3H)，2.62(s，3H).MS(ES+，m/z)288(M+H)

方法2：

在搅拌下，向配备有气动机械搅拌器、温度计、加料漏斗和氮气入口/出口的3L的3颈烧瓶中添加DMF(272mL，5体积)和中间体实施例3的产物(54.4g，0.20mol，1.0当量)。另外对反应混合物添加碳酸铯(194.5g，0.60mol，3.0当量)并同时保持反应温度在20-25℃之间。反应混合物在20-25℃搅拌10分钟。在10分钟内添加碘甲烷(45.1g，0.32mol，1.6当量)并同时保持温度在20-30℃之间。反应混合物在20-30℃搅拌(通常，反应在1-2小时内完成)。在～30分钟内添加去离子水(925mL，17体积)，并同时保持温度在25-40℃。反应混合物在20-25℃搅拌40分钟。过滤分离产物，然后滤饼用H₂O/DMF(6:1，252mL，4.6体积)洗涤。湿滤饼在40-45℃真空干燥，分离出N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺(51.7g，90.4％)，为黄色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 7.94(d，J＝6.0Hz，1H)，7.80(d，J＝7.0Hz，1H)，7.50(d，J＝1.0Hz，1H)，6.88(m，1H)，6.24(d，J＝6.2Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.42(s，3H)，2.62(s，3H).MS(ES+，m/z)288(M+H)。

方法3：

向2L夹套反应器中添加DMF(383mL)、碳酸二甲酯(192mL)、中间体实施例3的产物(115g，0.420mol，1当量)和碳酸钾(174g，1.26mol，3当量)。悬浮液在135℃的夹套温度下搅拌并加热回流6小时。然后将得到的淤浆冷却到60℃，慢慢地添加水(1150mL)，并保持反应温度为50-65℃。然后将反应冷却到20℃，并在内部温度20℃下搅拌2小时，然后冷却到10℃，并过夜，然后过滤。固体用水(230mL X 2)在室温下洗涤，用IMS:水(1:1)的混合物(230mL X 1)漂洗，在60℃真空干燥过夜后，得到101g(83％)的N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺。

中间体实施例5

5-氨基-2-甲基苯磺酰胺的制备：

方法1：

在0℃，在15分钟内，向搅拌的2-甲基-5-硝基苯磺酰胺(4.6g，0.021mol)在2-甲氧基乙基醚(43mL)中的溶液中滴加16.1g的氯化锡(II)在32mL浓盐酸中的溶液。添加完毕后，除去冰浴，溶液搅拌另外30分钟。向反应添加约130mL的乙醚。将混合提取物剧烈搅拌1小时。混合物用NaOH和NaHCO₃的溶液碱化，用乙酸乙酯提取(×3)。合并的乙酸乙酯层用无水MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。粗产物与甲醇一起研磨，得到2.4g的纯的5-氨基-2-甲基苯磺酰胺，为浅褐色固体。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 7.11-7.10(m，3H)，6.95(d，J＝8.1Hz，1H)，6.60(dd，J＝8.1 & 2.4Hz，1H)，5.24(s，2H)，2.36(s，3H).MS(ES+，m/z)187(M+H)。

中间体实施例6

4-[(甲基磺酰基)甲基]苯胺的制备：

方法1：

将4-硝基苄基溴(40g，0.185mol)和甲基亚磺酸钠(19.5g，1当量)在乙醇(460mL，～0.4M)中混合。混合物搅拌并被加热到80℃回流。在3小时后，将反应混合物冷却到室温，并过滤收集灰白色固体。该固体用EtOH洗涤两次，并风干，得到37g的甲基·4-硝基苄基砜。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 8.27(d，J＝8.6Hz，2H)，7.69(d，J＝8.6Hz，2H)，4.71(s，2H)，2.96(s，3H).MS(ES+，m/z)216(M+H)。

将甲基·4-硝基苄基砜(9.5g，0.044mol)和10％ Pd/C(0.95g，0.1w/w)在乙酸乙酯(220mL，～0.2M)中混合。将混合物置于含40psi氢气的Parr振荡器中。～3小时后，将反应混合物倾入到50％的MeOH/EtOAc(400mL)中并剧烈搅拌30分钟。通过硅藻土垫和硅胶过滤混合物。除去滤垫上的黑色物质，并置于80％的MeOH/EtOAc(200mL)中，并剧烈搅拌30分钟。再次使混合物过滤通过硅藻土垫和硅胶。重复该过程两次。合并所有滤液。蒸发并干燥。与乙酸乙酯一起研磨，得到纯4-[(甲基磺酰基)甲基]苯胺。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ7.03(d，J＝8.4Hz，2H)，6.54(d，J＝8.6Hz，2H)，5.20(s，2H)，4.20(s，2H)，2.79(s，3H).MS(ES+，m/z)186(M+H)。

方法2：

向配备有磁力搅拌棒和回流冷凝器的圆底烧瓶(1.0L)中添加4-硝基苄基溴(40g，0.185mol，1.0eq.)、甲基亚磺酸钠(21.7g，0.213mol，1.15eq.)和乙醇(400mL，200标准强度，10vol.)。搅拌并加热混合物到80℃回流2小时。通过快速HPLC监控反应进程(当HPLC显示4-硝基苄基溴<0.5％时认为反应完成)。将混合物冷却到室温。过滤并用乙醇(40mL)洗涤滤饼。湿滤饼(15g，46.2mmol)用于下一步的氢化，无需另外干燥。

向500mL的氢化烧瓶中添加上述的湿滤饼甲基4-硝基苄基砜(15g，46.2mmol，按制得时的样子使用)、10％ Pd/C(0.1g，1％ w/w)和乙醇(120mL，200标准强度)和水(40mL)。用氢气替换反应器中的气体(3次)。在室温下在H₂(65psi)下振摇反应器30分钟，在50℃振摇2小时。通过HPLC监控反应进程(当HPLC显示甲基·4-硝基苄基砜<0.2％时认为反应完成)。将混合物加热到80℃。将热溶液过滤通过硅藻土垫(2.0g)，并用EtOH(10mL)漂洗该硅藻土垫。将滤液转移到结晶用圆底烧瓶(500mL)中。将淤浆在60℃真空(house vacuum)蒸馏，直到剩余60mL的体积。在1小时内将淤浆冷却到0℃。通过真空过滤分离晶体，并用乙醇(10mL)洗涤容器和晶体。在50℃真空(house vacuum)干燥产物至恒重，得到灰白色固体(7.3g)，两步收率为85％，通过HPLC测量的产物纯度为99％。

中间体实施例7

4-[(异丙基磺酰基)甲基]苯基胺的制备：

向1-(溴甲基)-4-硝基苯(3.0g，17.4mmol)在乙醇(50mL)中的溶液中添加2-硫代丙酸钠(2.7g，17.4mmol)。12小时后，减压除去溶剂，剩余的残余物用EtOAc稀释，并经过滤，除去残留的盐。溶剂用MgSO₄干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将硫化物用CH₂Cl₂(50mL)稀释，分份添加间氯过氧苯甲酸(～70％)(6.6g，38.4mmol)。通过TLC判断反应完成，减压除去溶剂。残留的残余物用EtOAc稀释并用1M NaOH(2×100mL)洗涤。溶剂用MgSO₄干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后残余物用甘醇二甲醚(8.0mL)稀释，并滴加SnCl₂(13.8g，69mmol)在盐酸(8.0mL)中的溶液。溶液搅拌2小时，通过TLC判断还原完成。将反应混合物用Et₂O稀释，得到产物沉淀，为盐酸盐形式。收集固体，用Et₂O(2×100mL)洗涤，得到纯的苯胺(～2.4g，65％)。

¹HNMR(300MHz，d₆DMSO+NaHCO₃)δ 7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.21(d，J＝8.4Hz，2H)，4.41(s，2H)，3.18-3.09(m，1H)，1.21(d，J＝6.9Hz，6H)

中间体实施例8

4-[2-(甲基磺酰基)乙基]苯胺的制备：

向1-(溴甲基)-4-硝基苯(3.0g，13.0mmol)在乙醇(70mL)中的溶液中添加硫代甲醇钠(1.0g，14.0mmol)。12小时后，减压除去溶剂，剩余的残余物用EtOAc稀释，并经过滤，除去残留的盐。溶剂用MgSO₄干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将硫化物用CH₂Cl₂(100mL)稀释，分份添加间氯过氧苯甲酸(～70％)(8.2g，48.8mmol)。通过TLC判断反应完成，减压除去溶剂。残留的残余物用EtOAc稀释并用1MNaOH(2 x 100mL)洗涤。溶剂用MgSO₄干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将残余物添加到在Parr振荡器容器中的炭载钯(10mol％)在EtOAc(50mL)中的淤浆中。然后将反应置于40atm的氢气下。溶液振摇2小时，通过TLC判断还原完成。将反应混合物过滤通过硅藻土垫，用EtOAc洗涤，减压除去溶剂，得到粗固体。混合物在热EtOAc中重结晶，得到纯的苯胺(～1.8g，69％)。

¹HNMR(300MHz，d₆DMSO+NaHCO₃)δ 6.93(d，J＝8.2Hz，2H)，6.87(d，J＝8.2Hz，2H)，5.09(bs，2H)，3.31-3.26(m，2H)，2.92(s，3H)，2.84-2.79(m，2H)

中间体实施例9

4-[1-(甲基磺酰基)乙基]苯胺的制备：

向4-硝基苯甲醇(carbonol)(3.0g，17.9mmol)和三乙胺(3.5mL，21.0mmol)在CH₂Cl₂(100mL)的溶液中滴加甲磺酰氯(1.7mL，21.0mmol)。1小时后通过TLC判断反应完成，用饱和NaHCO₃水溶液猝灭反应。反应混合物用EtOAc稀释，分离有机层，用MgSO₄干燥，并减压除去溶剂。将得到的残余物溶于乙醇(100mL)，并分份添加硫代甲醇钠(1.5g，21.0mmol)。12小时后，减压除去溶剂，剩余的残余物用乙酸乙酯稀释并过滤，以除去剩余的盐。溶剂用MgSO₄干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将硫化物用CH₂Cl₂(100mL)稀释，并分份添加间氯过氧苯甲酸(～70％)(10.8g，62mmol)。通过TLC判断反应完成，减压除去溶剂。剩余的残余物用EtOAc稀释，用1M NaOH(2×100mL)洗涤。溶剂用MgSO₄干燥并减压除去，产物直接使用，无需另外纯化。然后将残余物添加到在Parr振荡器容器中的炭载钯(10mol％)在EtOAc(50mL)中的淤浆中。然后将反应置于40atm的氢气下。溶液振摇2小时，通过TLC判断还原完成。将反应混合物过滤通过硅藻土垫，用EtOAc洗涤，减压除去溶剂，得到粗固体。混合物在热EtOAc中重结晶得到纯的苯胺(～2.0g，57％)。

¹HNMR(300MHz，d₆DMSO+NaHCO₃)δ 7.06(d，J＝8.5Hz，2H)，6.53(d，J＝8.5Hz，2H)，5.21(s，2H)，4.23(q，J＝7.1Hz，1H)，2.70(s，3H)，1.21(d，J＝7.1Hz，3H)。

中间体实施例10

4-[1-甲基-1-(甲基磺酰基)乙基]苯胺的制备：

向搅拌的叔丁醇盐(5.76g，0.051mol)在THF中的溶液中添加甲基·4-硝基苄基砜(5g，0.023mol)，然后添加碘甲烷(2.89ml，0.046mol)，混合物在室温搅拌1小时。添加另外的叔丁醇盐(2.9g)和碘甲烷(0.5ml)。混合物在室温搅拌另外1小时。混合物用EtOAc稀释，并用6N HCl酸化。混合物用乙酸乙酯提取(×3)，合并的乙酸乙酯层用无水MgSO₄干燥，过滤和浓缩。固体与乙醇一起研磨，得到纯的1-[1-甲基-1-(甲基磺酰基)乙基]-4-硝基苯。

在0℃，在15分钟内，向搅拌的1-[1-甲基-1-(甲基磺酰基)乙基]-4-硝基苯(3.32g，0.014mol)在2-甲氧基乙基醚(70mL)中的溶液中滴加10.35g的氯化锡(II)在20.5mL的浓盐酸中的溶液。添加完毕后，除去冰浴，溶液搅拌另外30分钟。向反应中添加约70mL的乙醚，混合物剧烈搅拌1小时。形成沉淀物并过滤收集该沉淀物。将固体溶于CH₂Cl₂，并用1N NaOH洗涤。混合物用CH₂Cl₂提取(×3)。合并的CH₂Cl₂层用无水MgSO₄干燥，过滤和蒸发，得到4-[1-甲基-1-(甲基磺酰基)乙基]苯胺，为灰白色固体。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 7.21(d，J＝8.6Hz，2H)，6.55(d，J＝8.6Hz，2H)，5.23(s，2H)，2.58(s，3H)，1.64(s，6H)

实施例1：帕左潘尼(5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺)及其盐和溶剂合物的制备

实施例1a

5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺的制备

方法1：

向中间体实施例4(200mg，0.695mmol)和5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(129.4mg，0.695mmol)在异丙醇(6ml)中的溶液中滴加4滴的浓盐酸。混合物加热回流过夜。将混合物冷却到室温，并用乙醚(6ml)稀释。过滤收集沉淀物，用乙醚洗涤。分离得到5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺的盐酸盐，为灰白色固体。

¹H NMR(400MHz，d₆DMSO+NaHCO₃)δ 9.50(br s，1H)，8.55(brs，1H)，7.81(d，J＝6.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.7Hz，1H)，7.69(m，1H)，7.43(s，1H)，7.23(s，2H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，6.86(m，1H)，5.74(d，J＝6.1Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.48(s，3H)，2.61(s，3H)，2.48(s，3H).MS(ES+，m/z)438(M+H)。

方法2：

在搅拌下，向配备有磁力搅拌棒、温度计、回流冷凝器和氮气入口/出口的250mL的3颈烧瓶中添加乙醇(60mL，10体积)、中间体实施例4的产物(6.00g，20.85mmol，1.0当量)和5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(4.00g，21.48mmol，1.03当量)。将反应混合物加热到70℃。在68-72℃搅拌反应混合物3小时后，在约2分钟内添加在二氧杂环己烷中的4M HCl(0.11mL，0.44mmol，0.02当量)。反应混合物在68-72℃搅拌，直到通过HPLC分析显示起始的中间体实施例4的产物的剩余面积<1.5％(通常，反应在>8小时后完成)。在约30分钟内将反应混合物冷却到20℃，并在20-22℃搅拌40分钟。然后过滤分离产物，滤饼用乙醇(20mL，3.3体积)洗涤。湿滤饼在45-50℃真空干燥。分离得到5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺的一盐酸盐(9.52g，96.4％)，为白色固体。

¹H NMR(400MHz，d₆DMSO+NaHCO₃)δ 9.50(br s，1H)，8.55(br s，1H)，7.81(d，J＝6.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.7Hz，1H)，7.69(m，1H)，7.43(s，1H)，7.23(s，2H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，6.86(m，1H)，5.74(d，J＝6.1Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.48(s，3H)，2.61(s，3H)，2.48(s，3H).MS(ES+，m/z)438(M+H)

方法3：

在室温下向搅拌的中间体实施例4的产物(1.1g，3.8mmol)在14mL的MeOH中的悬浮液中添加5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.78g，4.2mmol，1.1当量)。反应混合物加热回流3小时，然后一次性添加在1，4-二氧杂环己烷中的4M HCl(19μL，0.076mmol)。4小时后，将悬浮液冷却到室温，并过滤。得到的固体用10mL的MeOH洗涤，并真空干燥，得到1.3g(72％)的5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐，为白色固体。

¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.95(s，1H)，8.36(s，1H)，7.86(d，J＝8.8Hz，2H)，7.64-7.59(m，2H)，7.40(m，3H)，6.93(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，5.92(s，1H)，4.08(s，3H)，3.57(s，3H)，2.65(s，3H)，2.56(s，3H)。

方法4：

在室温下向搅拌的中间体实施例4的产物(1.1g，3.7mmol)在10mL的THF中的悬浮液中添加5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.70g，3.8mmol，1.0当量)。反应混合物加热回流3小时，然后一次性添加在1，4-二氧杂环己烷中的4M HCl(18μL，0.072mmol)。5小时后，将悬浮液冷却到室温并过滤。将得到的固体用16mL的THF洗涤，并风干，得到1.6g(92％)的5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐，为浅黄色固体。

方法5：在室温下向搅拌的中间体实施例4的产物(1.0g，3.6mmol)在10mL的CH₃CN中的悬浮液中添加5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.70g，3.8mmol，1.0当量)。反应混合物加热回流3小时，然后一次性添加在1，4-二氧杂环己烷中的4M HCl(18μL，0.076mmol)。20小时后，将悬浮液冷却到室温，并过滤。得到的固体用10mL的CH₃CN洗涤，并风干，得到1.3g(73％)的5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐，为灰白色固体。

方法6：

向2L的夹套反应器中添加MeOH(1005mL)、中间体实施例4的产物(84g，0.292mol，1当量)和5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(60g，0.320mol，1.1当量)。溶液搅拌并加热到50℃，添加在二氧杂环己烷中的4M HCl(1.46mL，2mol％)。然后在85℃夹套温度下搅拌溶液并加热回流10小时。然后将得到的淤浆冷却到20-25℃并过滤。过滤的固体在室温下用乙腈(293mL X 2)洗涤。在60℃真空干燥过夜后，得到116g(81％)的5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐。

实施例1b

5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐一水合物的制备

向圆底烧瓶中添加2.6g的实施例1a方法1的任何形式的一盐酸盐。然后添加39mL的异丙醇(15体积)。将混合物在油浴中加热到75℃，然后添加14mL的0.05N的HCl水溶液(5.4体积)。将透明溶液冷却到65℃，然后用实施例1方法1的一盐酸盐一水合物作为晶种(0.05-0.1wt％)诱导结晶。将混浊的溶液在65℃搅拌60分钟，然后以～0.25-0.5℃/分钟的速率冷却到0℃。得到的白色固体经过滤，在室温下真空干燥至恒重，得到88％收率的5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐一水合物。

实施例1c

无水5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐的制备

向1L的夹套反应器中添加乙腈(563mL)、水(188mL)、实施例1方法6的一盐酸盐(50g，0.105mol)，溶液经搅拌并加热到85℃的夹套温度，得到透明溶液。然后将该溶液冷却到45℃并保持90分钟以诱导水合物的结晶。在保持90分钟后，将溶液冷却到0℃，保持1小时，然后通过过滤器-干燥器过滤。然后将过滤的固体用乙腈(200mL×1)在0℃洗涤。固体用氮气在25℃下在过滤器-干燥器中吹扫直到LOD低于25％。向过滤器-干燥器中的固体添加乙腈(300mL)，在60℃搅拌至少8小时，或者直到通过DATR观察到转化完成，形成无水5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐，将过滤器-干燥器中的内容物冷却到～30℃，并使用氮气压力推出滤液。滤饼用氮气在～60℃在真空下吹扫，直到LOD低于0.5％，将内容物冷却到20℃，得到37.5g(75％)的无水5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺一盐酸盐。

实施例2

N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N⁴-甲基-N²-{4-[(甲基磺酰基)甲基]苯基}嘧啶-2，4-二胺的制备

根据上述实施例1中所述的通用过程，使用中间体实施例4和适当的苯胺制备实施例2。使用与中间体实施例5-10所述的类似过程制备适当的苯胺。

¹H NMR(300MHz，d₆DMSO+NaHCO₃)δ 9.37(bs，1H)，7.88(d，J＝6.1Hz，1H)，7.78(m，3H)，7.47(s，1H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，6.91(dd，J＝8.8，1.5Hz，1H)，5.84(d，J＝6.1Hz，1H)，4.37(s，2H)，4.09(s，3H)，3.51(s，3H)，2.88(s，3H)，2.65(s，3H).MS(ES+，m/z)437(M+H)，435(M-H)。

实施例3：

制法1

(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯的制备

a)3-[N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-溴苯甲醚

在室温下，将40％的甲胺水溶液(49mL，563毫摩尔)迅速添加到4-溴-3-溴甲基苯甲醚(15.76g，56.29毫摩尔)在THF(280mL)中的溶液中2.5小时后，浓缩反应，残余物在Et₂O(560mL)和1.0N NaOH(100mL)之间分配使各层分离，有机层经干燥(MgSO₄)和浓缩，得到黄色油状物：TLC(5％ MeOH/CHCl₃)R_f 0.32。将油状物溶于CHCl₃(280mL)中，添加二碳酸二叔丁基酯(1.29g，56.29毫摩尔)反应在室温搅拌45分钟，然后浓缩硅胶色谱分离(5％ EtOAc/甲苯)，得到标题化合物(16.81g，90％)，为浅黄色油状物：TLC(5％ EtOAc/甲苯)R_f 0.43；¹H NMR(400，CDCl₃)旋转异构体的混合物；

7.42(d，J＝8.7Hz，1H，6.65-6.80(m，2H)，4.40-4.55(m，2H)，3.77(s，3H)，2.81-2.97(m，3H)，1.37-1.60(m，9H)；MS(ES)m/e 352/354(M+Na)⁺。

b)(±)-3-甲酯基-4-[2-[N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯

将3-[N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-溴苯甲醚(4.95g，15mmol)、衣康酸二甲基酯(3.08g，19.5mmol)、乙酸钯(168mg，0.75mmol)、三-邻甲苯基膦(457mg，1.5mol)和二异丙基乙基胺(5.2mL，30mmol)在丙腈(75mL)中的溶液加热回流45分钟，然后旋转蒸发浓缩。残余物用Et₂O(150mL)稀释，混合物通过硅藻土

过滤以除去不溶性物质.滤液经浓缩，残余物从二甲苯中再次浓缩.硅胶色谱分离(梯度：20％EtOAc/己烷，然后是1:1的EtOAc/己烷)除去膦和基线物质；将所有其它的R_f为0.40-0.70的物质收集在一起，并浓缩，得到混浊的黄色油状物：TLC(30％ EtOAc/己烷)R_f 0.41(主要产物)。

将油状物溶于MeOH(75mL)，并小心地添加10％ Pd/C。混合物在氢气(50psi)下振摇2.5小时，然后通过硅藻土

过滤以除去催化剂。滤液经浓缩，残余物重新经历上述反应条件。经过另外2.5小时后，混合物通过硅藻土过滤以除去催化剂，滤液经浓缩，得到浅黄色油状物。将其从CHCl₃/己烷再浓缩，然后进行硅胶色谱分离(梯度：20％ EtOAc/己烷，然后是1:1的EtOAc/己烷)，得到标题化合物(4.53g，74％)，为浅黄色油状物：TLC(30％ EtOAc/甲苯)R_f 0.46；

¹HNMR(400，CDCl₃)旋转异构体的混合物7.03(d，J＝8.2Hz，1H，6.65-6.80(m，2H)，4.46(br s，2H)，3.77(s，3H)，3.64(s，3H)，3.63(s，3H)，2.62-3.12(m，7H)，2.35-2.50(m，1H，1.47(br s，9H)；MS(ES)m/e 432(M+Na)⁺

c)(±)-3-甲酯基-4-[2-(甲基氨基)甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯

在0℃，将TFA(55mL)同时添加到(±)-3-甲酯基-4-[2-[N-(叔丁氧羰基)-N-(甲基氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(4.53g，11.06毫摩尔)在无水CH₂Cl₂(55mL)中的溶液中，反应回温到室温。1小时后，反应经浓缩，残余物从甲苯(2×100mL)再次浓缩，得到标题化合物(11.06毫摩尔，定量)，为浅黄色油状物：MS(ES)m/e 310(M+H)⁺。

d)(±)-8-甲氧基-2-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯

将(±)-3-甲酯基-4-[2-(甲基氨基)甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(11.06毫摩尔)和二异丙基乙基胺(5.8mL，33.18毫摩尔)在甲苯(110mL)中的溶液加热回流25小时，在室温搅拌4天，然后加热回流另外24小时。浓缩和硅胶色谱分离(5％ MeOH，在1:1的EtOAc/CHCl₃中)，得到标题化合物(2.88g，94％)，为浅黄色固体：TLC(5％ MeOH，在1:1的EtOAc/CHCl₃中)R_f 0.63；

¹H NMR(250，CDCl₃)δ 7.02(d，J＝8.4Hz，1H，6.78(dd，J＝8.4，2.7Hz，1H)，6.63(d，J＝2.7Hz，1H)，5.29(d，J＝16.3Hz，1H)，3.50-3.90(m，2H)，3.79(s，3H)，3.71(s，3H)，2.73-3.16(m，3H)，3.04(s，3H)，2.41(dd，J＝16.7，5.4Hz，1H；MS(ES)m/e 300(M+Na)⁺，278(M+H)⁺

e)(±)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯

在0℃，在氩气下，将无水氯化铝(1.35g，10.15毫摩尔)同时添加到(±)-8-甲氧基-2-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯(562mg，2.03毫摩尔)和乙硫醇(0.75mL，10.15毫摩尔)在无水CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中。混合物回温到室温并搅拌4.5小时，然后冷却到0℃。添加冰冷却的H₂O(20mL)，混合物轻快搅拌5分钟，然后用CHCl₃(3×20mL)提取。合并的CHCl₃层经干燥(MgSO₄)和浓缩，得到残余物。将水层进行吸滤，以收集固体沉淀物。该沉淀物以及得自CHCl₃层的残余物在1:1的MeOH/CHCl₃中混合，溶液经浓缩，得到灰白色固体，将其与热MeOH一起研磨，将混合物冷却到室温。吸滤收集固体，并用冷的MeOH和Et₂O顺序地洗涤。在40℃在高真空下干燥，得到标题化合物(467.9mg，88％)，为无色的固体：TLC(5％ MeOH/CHCl₃)R_f 0.17；

¹H NMR(250，DMSO-d₆)δ 9.29(s，1H)，6.89(d，J＝8.1Hz，1H)，6.50-6.70(m，2H)，5.16(d，J＝16.4Hz，1H)，3.84(d，J＝16.4Hz，1H)，3.60-3.85(m，1H)，3.56(s，3H)，2.30-3.00(m，4H)，2.86(s，3H)；MS(ES)m/e 286(M+Na)⁺，264(M+H)⁺

制法2

HPLC分离(±)-8-羟基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯的对映体

a)(R)-(+)-8-羟基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂-4-乙酸甲酯

通过手性HPLC使用以下条件将(±)-8-羟基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯拆分成其对映体：Diacel Chiralpak

柱(21.2×250mm)，EtOH流动相，7mL/min流速，在254nm的UV检测，70mg注射量；(R)-(+)-8-羟基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯的t_R＝21.5分钟；(S)-(-)-8-羟基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯的t_R＝39.1分钟。

制法3

(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸的制备

a)(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯

在氩气下向搅拌的(S)-8-羟基-2-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯(19g，574mmol)在无水THF(400mL)和无水DMF(200mL)中的溶液中添加2-(3-羟基丙基氨基)吡啶N-氧化物(11.6g，69mmol)和三苯基膦(18.0g，69mmol)。所有固体完全溶解后(～30分钟)，在冰浴中将反应冷却到0℃，并通过注射器添加偶氮二甲酸二异丙基酯(14.3mL，69mmol)。将反应慢慢地回温到室温并搅拌18小时。浓缩和硅胶急骤色谱分离(8:2:1 CHCl₃/EtOAc/EtOH)，得到标题化合物(20.83g，75％)，为固体泡沫。通过从上述反应回收起始原料重复利用获得另外的5.73g的产物，得到总共26.56g(96％)的标题化合物：

MS(ES)m/e 482.2(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 8.09(dd，J＝6.5，1.3Hz，1H)，7.29(t，1H)，7.18(t，1H)，7.02(d，J＝9.2Hz，1H)，6.84-6.79(m，3H)，6.59(t，1H)，5.32(d，J＝16.5Hz，1H)，4.28-4.14(m，2H)，4.16(d，J＝16.5Hz，1H)，4.02(t，2H)，3.84(m，1H)，3.58(s，3H)，3.40(dd，2H)，3.01(dd，1H)，2.73(dd，1H)，2.70(dd，1H)，2.52(dd，1H)，2.02(ddd，2H)。

b)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯

向搅拌的(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂-4-乙酸甲酯(26.56g，55mmol)在异丙醇(500mL)中的溶液中添加10％的活性碳载钯(8g，7.5mmol，在氩气中在异丙醇中小心地被预润湿)和环己烯(55.7mL，550mmol)。然后在90℃的油浴中在氩气下将反应加热回流。6小时后，添加额外量的10％的活性碳载钯(8g，7.5mmol，在氩气中在异丙醇中小心地被预润湿)和环己烯(55.7mL，550mmol)。另外18小时后，反应热过滤通过硅藻土

滤垫用1:1的MeOH/CHCl₃(400mL)洗涤。滤液真空浓缩，残余物通过硅胶急骤色谱分离纯化(95:5CHCl₃/MeOH)，得到标题化合物(19.50g，76％)，为白色粘稠泡沫：TLC(硅胶，5％ MeOH，在CHCl₃中)R_f 0.52；

MS(ES)m/e 466.3(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 7.94(dd，1H)，7.34(t，1H)，7.02(d，J＝9.2Hz，1H)，6.81(m，2H)，6.54(t，1H)，6.46(m，2H)，5.31(d，J＝16.5Hz，1H)，4.23-4.13(m，2H)，4.17(d，J＝16.5Hz，1H)，4.02(t，2H)，3.82(m，1H)，3.58(s，3H)，3.36(m，2H)，3.01(dd，1H)，2.72(dd，1H)，2.68(dd，1H)，2.50(dd，1H)，1.96(ddd，2H)。

c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸

向搅拌的(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙基氧基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-4-乙酸甲酯(19.50g，42mmol)在二氧杂环己烷(150mL)中的溶液中添加1N的NaOH水溶液(75mL，75mmol)。混浊的反应在室温搅拌2小时，然后将得到的均相溶液用1N的HCl水溶液(75mL，75mmol)中和。溶液通过旋转蒸发浓缩到接近干燥，以析出产物。倾析掉上清液，将残留的胶状固体再溶于甲醇中。然后通过旋转蒸发再次浓缩透明溶液。残留固体与少量水一起研磨，过滤并真空干燥，得到标题化合物(16.38g，86％)，为白色粉末。HPLC(Hamilton PRP-1

25％ CH₃CN/H₂O，含有0.1％ TFA)

k′＝3.1；[α]_D-112.3°(c，1.0，MeOH)；MS(ES)m/e452.3(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 7.95(dd，1H)，7.34(dt，1H)，7.02(d，J＝9.2Hz，1H)，6.81(m，2H)，6.58(t，1H)，6.47(m，2H)，5.30(d，J＝16.5Hz，1H)，4.27-4.13(m，2H)，4.15(d，J＝16.5Hz，1H)，4.02(t，1H)，3.78(m，1H)，3.37(m，2H)，3.00(dd，1H)，2.69(dd，1H)，2.65(dd，1H)，2.41(dd，1H)，1.96(ddd，2H).Anal.Calcd forC₂₂H₂₄F₃N₃O₄：C，58.53；H，5.36；N，9.31.Found：C，58.37；H，5.42；N，9.20。

生物数据：实施例1和3中所述的化合物在脉络膜新血管形成(CNV)小鼠模型中对CNV的作用。

以下实施例中的小鼠根据关于在眼和视力研究中动物的应用(theUse of Animals in Ophthalmic and Vision Research)的ARVO声明进行处理。

实施例4：CNV的退行模型

将小鼠麻醉并散瞳。对视网膜造成氪激光器光致凝结灼伤。在激光致损伤后7天开始给用实施例1中的化合物。口服单独的媒介物或含有式(I)的化合物(在图1中被称作VEGF R)的媒介物，剂量为4mg/kg、20mg/kg或100mg/kg，每天给用两次，共7天。处理7天后，对小鼠灌注荧光素标记的右旋糖酐，检测脉络膜新血管形成区域。帕左潘尼以剂量特异性方式减小CNV区域。参见图1。

实施例5：CNV的预防模型

在本实验中，根据实施例4所述方法将视网膜烧伤前一天开始对每只小鼠给用实施例1的化合物(在图2中称作VEGF R)，实施例3的化合物(在图2中称作玻连蛋白)或实施例1和3的化合物组合(在图2中称作“两种的组合”)。化合物每天口服给用两次，剂量是，实施例1的化合物为100mg/kg，实施例3的化合物为45mg/kg。视网膜烧伤后14天，如上所述检测CNV区域，结果如图2所示。

尽管已经在本文中说明和详细描述了本发明的具体实施方案，但是本发明不限于这些实施方案。上述的详细描述只是为了示例性地说明本发明的目的而被提供，不认为对本发明构成任何限制。本领域技术人员可显而易见地进行各种修改，并且不脱离本发明精神的所有修改被包括在权利要求的保护范围内。