CN101113412A - 多用途的复合霉菌的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种多用途复合霉菌的制备方法，以解决生产中对有益霉菌的需要问题，其解决的技术方案是，将食纤维菌、啤酒酵母菌、龟裂链霉菌分别按配比掺入各自的培殖器内的培养基中，在适宜的温度和pH值下培养一定时间，再分别置入三个种子罐内，在一定温度下进行厌氧发酵，发酵后将三种菌体按比例混配在一起，再按比例加入麦麸或米糠进行扩繁，扩繁后进行二次发酵，干燥后成菌种粉，称重包装入库，本发明方法简单，培殖效果好，其霉菌用途广，价值大，有广阔的开发应用前景及巨大的经济效益。

Description

多用途的复合霉菌的制备方法

一、技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是一种多用途的复合霉菌的制备方法。

二、技术背景

目前，发达国家在农业生产中应用微生物技术十分广泛，科技含量很高。如日本的酵素菌、EM、万田发酵三大品牌，这些微生物菌群的特点是：多菌种、多功能，可广泛应用于生产有机肥、微生物农药、饲料、保健品或污水处理。而我国用于微生物肥生产的菌种，种类少，用途少，用量少，效果不明显，如各种品牌的固氮菌、微生物钾、微生物磷，包括最大品牌的阿姆斯，这些有益菌种数量都比较少。因此，研究开发多菌种、多功能、多用途的有益微生物菌群，是我国科技界面临的重大课题。

农业微生物在农作物种植业、畜禽饲养业、水产养殖业、农产品加工、农业环境保护及农业生产技术等领域有广阔的应用前景。目前发达国家在农业生产中应用微生物技术十分广泛，从过去单一菌种的应用发展到复合菌群，可广泛用于生产生物有机肥、生物农药和生物饲料，可用于农产品保鲜或用于环境保护(污水垃圾处理)。我国目前农业微生物库保藏菌种3000多种，而用于生物肥料中的有益微生物2003年统计才80多种，尤其是用于肥料生产的菌种种类少，菌量少。我国利用微生物生产生物有机肥料才开始起步，还很落后，随着科技的发展和生产中的实际需要，截止到2003年末已有300家生物有机肥产品在农业部登记、生产，还有许多正在申报登记，总量超过350万吨，是1995年的8倍。从以上看出农业微生物在有机肥料上的应用发展势头喜人，形势也逼人，大有发展前途，但是，由于种种原因，我国目前有益微生物的繁殖量小，不能满足生产中的实际需要，因此，有益微生物的培养繁殖是正在努力解决的问题。

三、发明内容

针对上述情况，本发明之目的就是提供一种多用途复合霉菌的制备方法，以解决生产中对有益霉菌的需要问题，其解决的技术方案是，将食纤维菌、啤酒酵母菌、龟裂链霉菌分别按配比掺入各自的培殖器内的培养基中，在适宜的温度和PH值下培养一定时间，再分别置入三个种子罐内，在一定温度下进行厌氧发酵，发酵后将三种菌体按比例混配在一起，再按比例加入麦麸或米糠进行扩繁，扩繁后进行二次发酵，干燥后成菌种粉，称重包装入库，本发明方法简单，培殖效果好，其霉菌用途广，价值大，有广阔的开发应用前景及巨大的经济效益。

四、具体实施方式

本发明菌种为市售或从有关中科院所引进的食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌，首先以三种菌作母种，对三种母菌种进行扩殖培养，步骤是，对食纤维菌培养基进行常规灭菌，再将食纤维菌母种置入装有食纤维菌培养基的培殖试管中，菌种加入量按菌种对培养基重量比为1∶100，食纤维菌培养基(固体)每1000g是由牛肉膏4-15g、蛋白胨15-20g、可溶性淀粉1-3g、食盐6-8g、琼脂18-20g和余量为水组成，食纤维菌母种植入培养基后，在恒温26℃、PH值为7.3下培殖84小时，繁殖成试管种，再置入培殖罐内进行厌氧发酵，在18-30℃下厌氧发酵200小时(约8.5天，即8夜9昼)待用；对啤酒酵母菌培养基进行常规灭菌，灭菌后按重量的啤酒酵母菌比啤酒酵母菌培养基为1∶100的比例植入啤酒酵母菌，在26℃恒温下摇瓶培养84小时，繁扩成啤酒酵母菌试管种，所说的啤酒酵母菌培养基是由葡萄糖25-35g、酵母粉15-25g加豆汁调至1000ml组成，扩繁成的啤酒酵母菌试管种再置入培殖罐内在18-30℃下厌氧发酵200小时，成为扩殖的啤酒酵母菌，备用；对龟裂链霉菌培养基进行120℃高压湿热灭菌，再将龟裂链霉菌母种置入装有已灭过菌的龟裂链霉菌培养基的培殖罐内，龟裂链霉菌母种加入量为培养基重量的1/100，即重量比为1∶100，PH值为7.3，恒温26℃下培殖84小时，繁殖成试管种，所说的龟裂链霉菌培养基是每1000ml(液体)的培养基是由可溶性淀粉15-25g、硝酸钾0.5-1.5g、食盐(氯化钠)0.4-0.8g、K₂HPO₄·3H₂O(磷酸氢二钾)0.4-0.8g、MgSO₄·7H₂O(硫酸镁，俗称泻盐)0.4-0.8g、FeSO₄·7H₂O(硫酸亚铁，俗称绿矾)0.005-0.02g、琼脂15-25g和余量为水制成，PH值为7.2-7.4，配制时，先用冷水将可溶性淀粉调成糊状，再倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，充分溶解均匀后，补足水分至1000ml，繁殖成的试管种龟裂链霉菌再置入培殖罐内，在18-30℃的温度下，进行厌氧发酵200小时(约8.5天，即8夜9昼)，培殖成扩殖的龟裂链霉菌，备用；三种经厌氧发酵后扩殖的食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌以重量1∶1∶1比例混配在一起组成混合菌，再置入培养罐内，加入麦麸或米糠进行扩繁，在15-30℃下进行固体扩繁240-300小时，麦麸或米糠与混合菌的重量比为100∶1，固体扩繁后再放入培殖罐，在25℃恒温下发酵200小时，(即约8夜9昼的时间)，干燥脱水后成菌粉，含水量2.5-4％。

本发明还可按以下的具体实施例制备。

首先以三种菌作母种，对三种母菌种进行扩殖培养，步骤是，对食纤维菌培养基进行常规灭菌，将食纤维菌母种置入装有食纤维菌培养基的培殖试管中，每100g食纤维菌培养基中加入1g食纤维菌种，培养基(固体)每1000g是由牛肉膏5g、蛋白胨10g、可溶性淀粉2g、食盐6g、琼脂19g和余量为水组成，食纤维菌母种植入培养基后，在恒温26℃、PH值为7.3下培殖84小时，繁殖成试管种，再置入培殖罐内进行厌氧发酵，在26℃下厌氧发酵200小时待用；对啤酒酵母菌培养基进行常规灭菌，灭菌后的啤酒酵母菌加入酵母菌培养基中，每100ml培养基内加入啤酒酵母菌种1g，在26℃恒温下摇瓶培养84小时，繁扩成啤酒酵母菌试管种，所说的啤酒酵母菌培养基是由葡萄糖30g、酵母粉20g加豆汁调至1000ml组成，扩繁成的啤酒酵母菌试管种再置入培殖罐内在26℃下厌氧发酵200小时，成扩殖的啤酒酵母菌，备用；对龟裂链霉菌培养基进行120℃高压湿热灭菌，将龟裂链霉菌母种置入装有已灭过菌的龟裂链霉菌培养基的培殖罐内，每100ml龟裂链霉菌培养基内加入1g龟裂链霉菌种，即1∶100，PH值为7.3，恒温26℃下培殖84小时，繁殖成试管种，所说的龟裂链霉菌培养基是每1000ml(液体)的培养基是由可溶性淀粉20g、硝酸钾1g、食盐(氯化钠)0.5g、K₂HPO₄·3H₂O(磷酸氢二钾)0.5g、MgSO₄·7H₂O(硫酸镁，俗称泻盐)0.5g、FeSO₄·7H₂O(硫酸亚铁，俗称绿矾)0.01g、琼脂20g和余量为水制成，PH值为7.3，配制时，先用冷水将可溶性淀粉调成糊状，再倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，充分溶解均匀后，补足水分至1000ml，繁殖成的试管种龟裂链霉菌再置入培殖罐内，在18-30℃的温度下，进行厌氧发酵200小时，培殖成扩殖的龟裂链霉菌，备用；三种经厌氧发酵后扩殖的食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌以重量1∶1∶1比例混配在一起组成混合菌，再置入培养罐内，加入麦麸或米糠进行扩繁，在18-28℃下进行固体扩繁240小时，每100g麦麸或米糠中加入混合菌1g，固体扩繁后再放入培殖罐，在25℃恒温下发酵200小时，干燥脱水后成菌粉，含水量3％。

一、本发明培殖的复合霉菌用于生产有机肥不仅含不氮、磷、钾、微量元素，而且还含有多种维生素、氨基酸、糖类化合物、脂类化合物、纤维素、核酸及SOD等多种酶，可疏松土壤，培肥地力，保水保肥，提高土壤CEC值，降低EC值，提高地温2-5度，根系发达，生长茁壮，座果率提高25％以上，提前成熟15天左右；保持土壤适当的PH值，有改良盐碱地的作用；减少病虫害发生，减少化学农药用量和次数；提高作物品质，大大降低农产品硝酸盐含量，糖度提高1-3度，耐储藏；农作物提高产量25％以上，降低成本30％以上。

二、本发明复合霉菌发酵中药，制作农作杀菌剂、杀虫剂。

用本发明复合霉菌发酵中药制作杀菌剂、杀虫毒剂已取得明显效果。微生物发酵中药剂，靠代谢产生的有机酸、醇和酶等物质，溶解中药中的矿元素，分解、转化中药中的植物碱、黄酮类、萜稀类等杀菌成分，提高药效35倍以上，加入代谢产生的几十种抗菌素，能大大提高防治病虫害效果，植物发病率减少50％以上。

中药杀菌剂、杀虫剂，还可以配合化学农药使用，不仅可以减少一半农药用量，还可以增加药效，而且喷施后3天就可以降解农药的作用，大大减少农药在农产品中的残留量。

三、用复合霉菌制作饲料添加剂

增进畜禽食欲、帮助消化，经过发酵的饲料，有良好的甜味和酒香味，可增进食欲。发酵分解的酶和有机酸，能促进各种营养的消化吸收，如蛋白转化率极高，家畜成长快，如猪8-10个月就出栏，供食用。

促进生产，改善肉质。在复合霉菌的次级代谢中，能产生多种刺激动物生长发育的因子，既可促进脂肪的代谢，又可防止由于脂肪过多而发生肉质下降的现象，提高瘦肉率，养猪的料肉比为3∶1或4∶1左右，猪体重日增0.65kg以上。养鸡可延长产蛋期，提高产蛋率15％左右，鸡蛋破损率降到0.3％，软蛋减少到1％。奶牛可提高产奶率20％，平均日增产鲜奶2-4kg。提高畜禽的抗病性，不再使用西方国家禁用抗生素和激素，节省药费，减少投资40％，只进行必要的防疫工作即可。减少粪便恶臭，改善养殖环境。畜禽粪便质量好，用于种值是优良的有机肥，饲料成本降低25％以上，技术好学，容易掌握。

四、环境保护方面

用于污水除臭：把生活垃圾做成有机肥，制作家庭清洁剂。

五、用于人体保健，作饮料，发酵中药用于医疗

健身及治病机理，是发酵转化的中药成份及产生的抗氧化物，如：维生素、抗生素、氨基酸、矿元素、多种酶和核酸，以及去氢表雄酮、染料木素等抗癌物质，让肠胃中的有益菌群占绝对优势，消除体内有害菌和氧自由基的危害，除去疾病和衰老的根源，从而恢复增强免疫功能，使人体各种疾病好转或康复。

六、复合霉菌不仅科技含量高，而且价格低

复合霉菌每克含有益菌≥10亿个，远远超过日本酵素菌每克含菌6亿个，功能多，如固氮能力高于日本酵素菌，比日本多了植物表型基因诱导调控表达技术，可大大提高农作物的抗寒能力。用日本酵素菌发酵1吨肥料需要菌咱20公斤，复合霉菌发酵1吨肥料，只需要4-8公斤，进口1吨日本酵素菌需要25万元人民币，而复合霉菌1吨原菌种的价格仅10万元人民币，成本降低70％以上，且无环境污染，社会与经济效益巨大。

Claims (2)

1.一种多用途的复合霉菌的制备方法，其特征在于，先以食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌作母种，对三种母菌种进行扩殖培养，步骤是，对食纤维菌培养基进行常规灭菌，再将食纤维菌母种置入装有食纤维菌培养基的培殖试管中，菌种加入量按菌种对培养基重量比为1∶100，食纤维菌培养基每1000g是由牛肉膏4-15g、蛋白胨15-20g、可溶性淀粉1-3g、食盐6-8g、琼脂18-20g和余量为水组成，食纤维菌母种植入培养基后，在恒温26℃、PH值为7.3下培殖84小时，繁殖成试管种，再置入培殖罐内进行厌氧发酵，在18-30℃下厌氧发酵200小时待用；对啤酒酵母菌培养基进行常规灭菌，灭菌后按重量的啤酒酵母菌比啤酒酵母菌培养基为1∶100的比例植入啤酒酵母菌，在26℃恒温下摇瓶培养84小时，繁扩成啤酒酵母菌试管种，所说的啤酒酵母菌培养基是由葡萄糖25-35g、酵母粉1 5-25g加豆汁调至1000ml组成，扩繁成的啤酒酵母菌试管种再置入培殖罐内在18-30℃下厌氧发酵200小时，成为扩殖的啤酒酵母菌，备用；对龟裂链霉菌培养基进行120℃高压湿热灭菌，再将龟裂链霉菌母种置入装有已灭过菌的龟裂链霉菌培养基的培殖罐内，龟裂链霉菌母种加入量为培养基重量的1/100，即重量比为1∶100，PH值为7.3，恒温26℃下培殖84小时，繁殖成试管种，所说的龟裂链霉菌培养基是每1000ml的培养基是由可溶性淀粉15-25g、硝酸钾0.5-1.5g、食盐0.4-0.8g、K₂HPO₄·3H₂O 0.4-0.8g、MgSO₄·7H₂O0.4-0.8g、FeSO₄·7H₂O 0.005-0.02g、琼脂15-25g和余量为水制成，PH值为7.2-7.4，配制时，先用冷水将可溶性淀粉调成糊状，再倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，充分溶解均匀后，补足水分至1000ml，繁殖成的试管种龟裂链霉菌再置入培殖罐内，在18-30℃的温度下，进行厌氧发酵200小时，培殖成扩殖的龟裂链霉菌，备用；三种经厌氧发酵后扩殖的食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌以重量1∶1∶1比例混配在一起组成混合菌，再置入培养罐内，加入麦麸或米糠进行扩繁，在15-30℃下进行固体扩繁240-300小时，麦麸或米糠与混合菌的重量比为100∶1，固体扩繁后再放入培殖罐，在25℃恒温下发酵200小时，干燥脱水后成菌粉，含水量2.5-4％。

2.根据权利要求1所述的多用途的复合霉菌的制备方法，其特征在于，首先以食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌作母种，对三种母菌种进行扩殖培养，步骤是，对食纤维菌培养基进行常规灭菌，将食纤维菌母种置入装有食纤维菌培养基的培殖试管中，每100g培养基中加入1g食纤维菌种，食纤维菌培养基每1000g是由牛肉膏5g、蛋白胨10g、可溶性淀粉2g、食盐6g、琼脂19g和余量为水组成，食纤维菌母种植入培养基后，在恒温26℃、PH值为7.3下培殖84小时，繁殖成试管种，再置入培殖罐内进行厌氧发酵，在26℃下厌氧发酵200小时待用；对啤酒酵母菌培养基进行常规灭菌，灭菌后的啤酒酵母菌加入酵母菌培养基中，每100ml培养基内加入啤酒酵母菌种1g，在26℃恒温下摇瓶培养84小时，繁扩成啤酒酵母菌试管种，所说的啤酒酵母菌培养基是由葡萄糖30g、酵母粉20g加豆汁调至1000ml组成，扩繁成的啤酒酵母菌试管种再置入培殖罐内在26℃下厌氧发酵200小时，成扩殖的啤酒酵母菌，备用；对龟裂链霉菌培养基进行120℃高压湿热灭菌，将龟裂链霉菌母种置入装有已灭过菌的龟裂链霉菌培养基的培殖罐内，每100ml龟裂链霉菌培养基内加入1g龟裂链霉菌种，PH值为7.3，恒温26℃下培殖84小时，繁殖成试管种，所说的龟裂链霉菌培养基是每1000ml由可溶性淀粉20g、硝酸钾1g、食盐0.5g、K₂HPO₄·3H₂O 0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、FeSO₄·7H₂O 0.01g、琼脂20g和余量为水制成，PH值为7.3，配制时，先用冷水将可溶性淀粉调成糊状，再倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，充分溶解均匀后，补足水分至1000ml，繁殖成的试管种龟裂链霉菌再置入培殖罐内，在18-30℃的温度下，进行厌氧发酵200小时，培殖成扩殖的龟裂链霉菌，备用；三种经厌氧发酵后扩殖的食纤维菌、啤酒酵母菌和龟裂链霉菌以重量1∶1∶1比例混配在一起组成混合菌，再置入培养罐内，加入麦麸或米糠进行扩繁，在18-28℃下进行固体扩繁240小时，每100g麦麸或米糠中加入混合菌1g，固体扩繁后再放入培殖罐，在25℃恒温下发酵200小时，干燥脱水后成菌粉，含水量3％。